CN1960746A - 稳定性提高的含生物分子配方 - Google Patents

Abstract

一种供治疗用途的悬浮液配方包括一种显示粘性流体特征的非水疏水性载剂、一种包含分散于该载剂中的生物分子的干微粒配方、和一种掺入该载剂和干微粒配方中至少一种中的表面活性剂。一种干微粒配方包括一种干扰素、一种缓冲剂、一种表面活性剂、和一种或多种选自下列组成的一组稳定剂：碳水化合物、抗氧剂、和氨基酸。

Description

稳定性提高的含生物分子配方

                        技术领域

[0001]本发明一般地涉及可经由缓释系统例如可植入药物输送器件和储存式注射输送的配方。

                        背景技术

[0002]干扰素是细胞因应各种刺激例如暴露于病毒、细菌、寄生虫、或其它抗原而产生的一群糖蛋白胞激酶。干扰素有抗病毒活性、免疫调节活性、和抗增生活性。干扰素分类为类型I或类型II。分类为类型I的干扰素结合到称为干扰素类型I的共同受体或α-β受体上，而且是白细胞、成纤维细胞、或淋巴母细胞因应病毒或干扰素诱导物而产生的。干扰素类型I包括干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、和干扰素ω(IFN-ω)，但IFN-ω与人IFN-α(约60％)和人IFN-β(约29％)的同系性有限。分类为类型II的干扰素是由T淋巴细胞产生的。干扰素类型II包括干扰素γ(IFN-γ)。干扰素用于治疗病毒性肝炎、多发性硬化、和某些癌症。IFN-ω尤其已被指出可用于治疗肝炎B&C种群。IFN-ω的可注射形式目前正处于第II阶段临床研究。这种可注射形式是溶液系的，而且不是为缓释输送配制的。

[0003]在一段长时间内以受控方式向患者中输送干扰素而不干预是有益的。例如，IFN-ω的缓释输送可以通过减少或消除与峰值血浆水平有关的多团注射效应、从而潜在地最大限度减少全身性副作用例如疲劳和流感样症状来改善IFN-ω的治疗效果。无干预的有益药剂的缓释输送可以由可植入药物输送器件例如渗透式、机械式、或电子机械式泵植入物、和储存式注射来提供。可植入药物输送器件由于许多理由而引人瞩目。例如，可植入药物输送器件可以设计得能在为期数周、数月、或甚至一年内提供该药物的治疗剂量。储存式注射典型地为期数周内提供治疗剂量。可植入药物输送器件一次插入了为期数周的治疗剂量。一次插入患者体内的可植入药物输送器件不容易由患者操纵。因此，患者顺从一般是有保证的。

[0004]干扰素的缓释输送要求该干扰素容纳于一种在该可植入药物输送器件的运行寿命内，在诸如37℃或更高的高温下实质上稳定的配方内。干扰素是一种生物分子、具体地是一种蛋白质。一般来说，在一段长持续时间例如数周、数月或一年内在高温下稳定的蛋白质配方是难以设计的。蛋白质在水环境中是天然活泼的。因此，将蛋白质配制成水溶液会是方便的。不幸的是，蛋白质在水性配方中在一段长的持续时间内典型地只是边际地稳定的。这一点的一个理由是蛋白质会经由许多机理例如脱酰胺化(通常因水解)、氧化、二硫化物互换、和外消旋化发生降解，而且水在这其中的许多降解途径中是一种反应物。水也充当一种增塑剂，并便利蛋白质分子的变性和/或凝聚。

[0005]水性蛋白质配方可以使用干燥技术例如冷冻干燥(或冻干)、喷雾干燥、和干燥还原成干微粒蛋白质配方。这样的干微粒蛋白质配方会显示在常温、甚至高温下、随时间推移显著增大的稳定性。然而，难以以所希望的流动速率从可植入药物输送器件可控地输送干微粒配方。已经有人提出将该干微粒蛋白质配方悬浮在一种非水可流动载剂中。较好，该悬浮载剂有高粘度例如1kP或更高，使得该微粒在一段所希望的持续时间内实质上均匀地分散于该悬浮液中。进而，该悬浮液配方在该所希望的持续时间内，在贮存和输送条件下应当是稳定的，并在该可植入药物输送器件的运行寿命内保持其可流动性。

[0006]用于经由可植入药物输送器件输送有益药剂的非水悬浮液载剂在文献上已有描述。例如，美国专利No.5,904,935(Eckenhoff等)公开了一些非水悬浮液载剂，包括软化点等于或低于体温的蜡、加氢植物油、硅油、一中链脂肪酸甘油酯、和多醇。这些悬浮液载剂的粘度可以使用增稠剂例如水凝胶、纤维素醚如羟丙基纤维素、和吡咯烷酮等提高到所希望的水平。美国专利No.6,264,990(Knepp等)公开了非水、无水、非质子传递、疏水、非极性的低反应性悬浮液载剂。这样的载剂的实例包括全氟萘烷、甲氧基flurane、和全氟三丁胺。聚合物材料例如聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)也可以用来作为悬浮液载剂。

[0007]美国专利公报No.US-2004-0224903-A1公开了实质上由疏水的非聚合物材料形成的单相、粘性、可流动组合物所构成的悬浮液载剂。用于形成这些悬浮液载剂的非聚合物材料包括但不限于疏水糖材料、有机凝胶、或表现出单相载剂行为的类脂材料。按照该专利公报，可以用于配制悬浮液载剂的糖材料实例包括但不限于在常温或生理学温度下作为流体存在的有取代蔗糖酯，例如乙酸异丁酸蔗糖酯(SAIB)。这些非聚合物材料使得该蛋白质悬浮液配方不仅在常温和生理学温度下稳定而且也能维持蛋白质微粒的实质上均匀分散。

[0008]疏水载剂例如SAIB，尤其当无添加的赋形剂而使用时，在亲水介质存在下会表现得像一种沉积。这意味着悬浮于该载剂中的蛋白质在亲水介质存在下不会自发地从该载剂中释放出来。对于储存注射应用来说，该悬浮液载剂的沉积效应典型地是所希望的。对于植入的输送器件来说，当该悬浮液载剂在该释放介质中表现得像一种沉积时，该悬浮液载剂对释放的控制就累积成该输送器件对释放的控制。该悬浮液载剂对释放的附加控制，因该应用而异，可能是也可能不是所希望的。无论如何，该蛋白质从该悬浮液载剂中的非自发释放，只有当该蛋白质在该释放介质的存在下在该载剂中，在从该悬浮液载剂向该释放介质中过渡期间是稳定的时，才会是可接受的。

[0009]从以上所述得知，可经由缓释输送系统例如可植入药物输送器件或储存式注射输送的、生物分子尤其蛋白质更尤其干扰素的改进稳定配方，仍然是人们所希望的。

                        发明内容

[0010]一方面，本发明涉及一种用于治疗用途的悬浮液配方，该配方包含一种显示出粘性流体特征的非水疏水性载剂、一种包含分散于该载剂中的生物分子的干微粒配方、和一种掺入该疏水载剂和干微粒配方中至少一种中的表面活性剂。

[0011]另一方面，本发明涉及一种干微粒配方，包含一种干扰素、一种缓冲剂、一种表面活性剂、和一种或多种选自碳水化合物、抗氧剂、和氨基酸组成的一组的稳定剂。

[0012]又另一方面，本发明涉及一种可植入输送器件，该器件包含一种悬浮液配方，该配方包含一种显示出粘性流体特征的非水疏水性载剂、一种包含分散于该载剂中的生物分子的干微粒配方、和一种掺入该疏水载剂和干微粒配方中至少一种中的表面活性剂。该可植入输送器件进一步包括一个贮器，该贮器含有该悬浮液配方，其数量足以在至少一个月内在使用环境中以治疗有效剂量提供该干扰素的连续输送。

[0013]另一方面，本发明涉及一种增强干扰素ω在亲水释放速率介质中的释放的方法，包含使干扰素ω的干微粒配方悬浮于一种非聚合物的疏水载剂中，和在该干微粒配方和该疏水载剂中至少一种中掺入一种表面活性剂。

[0014]本发明的其它特色和优点将从以下描述显而易见。

                    附图简要说明

[0015]图1显示按照本发明的一种实施方案的喷雾干燥IFN-ω微粒的扫描电子显微镜(SEM)影像。

[0016]图2显示与Pluronic F68一起喷雾干燥的IFN-ω的SEM影像。

[0017]图3显示在37℃从水相中回收的IFN-ω的分数随时间的变化。

[0018]图4显示在37℃从水相和各固体相中回收的总IFN-ω随时间的变化。

                        具体实施方式

[0019]现在要参照少数几个如附图中所说明的较好实施方案详细地描述本发明。在以下描述中，列举了许多具体细节，以期提供本发明的充分理解。然而，对于业内技术人员来说，显而易见的是，没有这些具体细节中的一部或全部，也可以实施本发明。在其它情况下，并没有详细地描述众所周知的特色和/或方法步骤，以期并非不必要地模糊本发明。参照这些附图和随后的讨论，可以更好地理解本发明的特色和优点。

[0020]本发明提供可经由缓释输送系统，尤其可植入药物输送器件和可能地储存式注射输送的、包括生物分子的配方。本文中考虑的生物分子是可以对动物或人类对象提供治疗效益并在配制成非水悬浮液时显示出提高的稳定性的那些。本文中考虑的生物分子一般是在水中可降解的，但在常温和生理学温度下一般作为干微粒是稳定的。生物分子的实例包括但不限于肽、多肽、蛋白质、氨基酸、核苷酸、氨基酸残基或核苷酸残基的聚合物、激素、病毒，天然衍生、合成产生、或重组产生的抗体，共轭蛋白质例如脂蛋白和后转译改性形式如糖基化蛋白质，和有D-氨基酸、呈D-构型或L-构型的改性、衍生或非天然存在氨基酸和/或仿胨单元作为其结构的一部分的蛋白质。

[0021]可以提供治疗效果的生物分子的具体实例包括但不限于巴氯芬、GDNF、神经营养因子、conatonkin G、Ziconotide、可乐定、axokine、anitsense低聚核苷酸、肾上腺皮质素激素、血管紧张素I和II、围鳃钠尿肽、铃蟾肽、血管舒缓激肽、降钙素、小脑肽、强啡肽N、α和β内啡肽、内皮缩血管肽、脑啡肽、表皮生长因子、fertirelin、滤泡促性腺激素释放肽、galanin、胰高血糖素、gonadorelin、促性腺激素、goserelin、生长激素释放肽、histrelin、胰岛素、干扰素、leuprolide、LHRH、胃动素、nafarerlin、神经降压素、催产素、松驰素、生长激素抑制素、物质P、肿瘤坏死因子、triptorelin、后叶加压素、生长激素、神经生长因子、血液凝块因子、核酶、和反义低聚核苷酸。以上所述每一种药剂的类似物、衍生物、拮抗剂、兴奋剂、和医药上可接受盐也可以用于本发明的配方中。

[0022]本发明中特别有益的是干扰素。干扰素可以是能使干扰素类型I受体(α-β受体)或干扰素类型II受体活化的重组体分子。这些重组体分子可以含也可以不含天然人体类型I或类型II干扰素的顺序同系性。按照本发明的实施方案的干扰素可以选自下列组成的一组：有重组体人干扰素、干扰素类似物、干扰素异构重整体、干扰素模仿物、干扰素碎片、混合干扰素蛋白质、融合蛋白质低聚物、和上述的多体物、上述的同系物、上述的糖基化模式变种、上述的突变蛋白、和含有以上列举的少量改性的干扰素分子的生物活性的蛋白质。按照本发明的干扰素不应受到合成或制造方法限制，而且应当包括由重组体(无论从cDNA还是从基因组DNA产生)方法、合成方法、转基团方法、和基因活化方法合成或制造的那些。干扰素的具体实例包括但不限于IFN-α、IFN-β、IFN-ω和IFN-γ。

[0023]本发明的实施方案提供包括生物分子的干微粒配方。本发明的干微粒配方有典型地低于5wt％的低湿含量。按照本发明的一种实施方案，干微粒配方包括如上所述的干扰素。该干微粒干扰素配方也包括稳定剂。在一种实施方案中，该稳定剂包括碳水化合物、抗氧剂和/或氨基酸。该干微粒干扰素配方也包括缓冲剂。该干微粒配方中稳定剂和缓冲剂的数量可以根据该稳定剂和缓冲剂的活性以及该配方的所希望特征以实验方法确定。在一种实施方案中，该配方中碳水化合物的数量决定于聚集关注。一般来说，该碳水化合物水平不应当太高，从而避免在水的存在下由于未与干扰素结合的过量碳水化合物而促进晶体生长。在一种实施方案中，该配方中抗氧剂的数量决定于氧化关注。在一种实施方案中，该配方中氨基酸的数量决定于氧化关注和/或喷雾干燥期间微粒的可形成性。在一种实施方案中，该配方中缓冲剂的数量决定于预加工关注、聚集关注、和喷雾干燥期间微粒的可形成性。该缓冲剂当所有赋形剂都增溶时在加工例如喷雾干燥期间可以使干扰素稳定。一般来说，太多的缓冲剂在水的存在下会产生一种缓冲体系，然后该体系会导致结晶。

[0024]该干微粒配方中可以包括的碳水化合物的实例包括但不限于单糖例如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、和山梨糖、二糖例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖、多糖例如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、和淀粉，和醛醇(非环状多醇)例如甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇、吡喃糖基山梨糖醇、和肌醇。较好的碳水化合物包括非还原糖例如蔗糖、海藻糖、甘露糖醇、和葡聚糖。

[0025]该干微粒配方中可以包括的抗氧剂的实例包括但不限于甲硫氨酸、抗坏血酸、硫代硫酸钠、过氧化氢酶、铂、乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、半胱氨酸、巯基甘油、巯基乙酸、巯基山梨糖醇、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、棓酸丙酯。

[0026]该干微粒配方中可以包括的氨基酸的实例包括但不限于精氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、组氨酸、丙氨酸、L-亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、L-苏氨酸、2-苯基丙氨酸、缬氨酸、正缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、赖氨酸、和正亮氨酸。较好的氨基酸包括业已氧化的那些，例如半胱氨酸、甲硫氨酸、和色氨酸。

[0027]该干微粒配方中可以包括的缓冲剂的实例包括但不限于柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐、磷酸盐、马来酸盐、Tris(三羟甲基氨基甲烷)、乙酸盐、碳水化合物、和gly-gly。较好的缓冲剂包括柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐，和Tris。

[0028]该干微粒配方可以包括选自诸如表面活性剂、填充剂、和盐的其它赋形剂。表面活性剂的实例包括但不限于Polysorbate 20、Polysorbate 80、Tween 20、Tween 80、Pluronic F68和硫酸十二烷酯钠(SDS)。填充剂的实例包括但不限于甘露糖醇和甘氨酸。盐的实例包括但不限于氯化钠、氯化钙、和氯化镁。将一种表面活性剂掺入该干微粒配方中的可能优点将在本公开文书中进一步讨论。

[0029]以下表1显示按照本发明的一些实施方案的蛋白质微粒配方组合物范围。在一种实施方案中，一种干微粒干扰素配方包括1∶2∶1∶1.5～2.5干扰素∶碳水化合物∶抗氧剂和/或氨基酸∶缓冲剂。干微粒干扰素配方的一个实例是1∶2∶1∶1.5～2.5IFN-ω∶蔗糖∶甲硫氨酸∶柠檬酸盐。在另一个具体实例中，干微粒干扰素配方包括1∶2∶1∶1.5～2.5∶0.06干扰素∶碳水化合物∶抗氧剂和/或氨基酸∶缓冲剂∶表面活性剂。

                                    表1

干微粒配方中的负荷(wt％)	范围	较好范围	最好范围
				蛋白质	0.1～99.9％	1～50％	1～30％
表面活性剂	0.0～10％	0.01～10％	0.01～5％
				填充剂	0～99.9％	0～70％
盐	0～99.9％	0～70％
				稳定剂/蛋白质(重量比)	范围	较好范围	最好范围
碳水化合物	0.1～99.9	＞0.5	＞1
				抗氧剂和/或氨基酸	0.1～99.9	＞0.5
缓冲剂	范围	较好范围	最好范围
				缓冲剂浓度	5mM～50mM	5mM～25mM
缓冲剂pH	5.0～8.0

[0030]按照本发明的实施方案的干微粒配方可以通过喷雾干燥、冻干、或业内用于从多成分混合物形成微粒的其它技术制备。典型的喷雾干燥方法可以包括将一种含有蛋白质和稳定赋形剂的喷雾溶液加进一个样品室中，该样品室可以保持在冷冻温度至室温。冷冻一般有利于蛋白质稳定性。然后，一台进料泵将喷雾溶液喂进一个喷嘴雾化器中。同时，在该喷嘴雾化器出口引导雾化气体(典型地为空气、氮气、或惰性气体)，形成该喷雾溶液的小雾滴。这些小雾滴立即与干燥室中的干燥气体接触。该干燥气体去除该雾滴中的溶剂，并将干微粒带进一个收集室中。

[0031]按照本发明的实施方案的悬浮液配方是通过将按照本发明的实施方案的干微粒配方掺入非水疏水性载剂中制备的。该非水疏水性载剂可以是溶剂、液体或非液体聚合物、液体或非液体非聚合物、和表面活性剂的任何组合。

[0032]在一种实施方案中，本发明的悬浮液配方中使用的非水疏水性载剂是可生物降解的，即它在一段因应生物环境的时间内崩解或破坏。这种破坏可以经由一种或多种物理的或化学的过程例如经由酶作用、氧化、还原、水解(例如蛋白水解)、置换、或者因增溶、乳状液或胶束形成而溶解进行。在一种实施方案中，该载剂的各成分选择得使该载剂的粘度在1kP～1000kP、较好5kP～250kP、更好5kP～30kP范围内。在一种实施方案中，为了保持该生物分子在诸如37℃或更高的高温下在一段时间内的稳定性，该载剂的各成分选择得使该载剂不与该生物分子反应。该载剂的各成分可以选择得使该载剂对所选择的生物分子和微粒赋形剂有微不足道的溶解性或无溶解性，从而维持所选择的生物分子和赋形剂作为干微粒，因而达到所选择生物分子的稳定性。

[0033]在另一种实施方案中，该悬浮液配方是通过将按照本发明的一种实施方案的一种干微粒配方悬浮于一种非水、单相、包括非聚合物的疏水性载剂中制造的。适合于使用的非聚合物材料的实例包括但不限于疏水性糖材料、有机凝胶、或表现出单相载剂行为的脂质材料例如脂凝胶如二油基磷脂酰胆碱(DOPC)。糖材料实例包括但不限于在常温或生理学温度下作为流体存在的蔗糖酯，例如乙酸异丁酸蔗糖酯(SAIB)。该载剂可以包括也可以不包括一种或多种溶剂。例如，SAIB-一种液体非聚合物-可以作为“净相”使用，即不添加其它赋形剂。用于产生脂凝胶载剂(有DOPC)的溶剂的实例包括但不限于正甲基丙醇、棉子油、芝麻油、大豆油、维生素E、蓖麻油、Polysorbate80、N-二甲基乙酰胺。

[0034]以上所述的非水、单相、疏水性载剂也可以包括表面活性剂、防腐剂、和稳定剂等赋形剂。表面活性剂可以包括在该载剂中，以便利一旦该配方输送到使用环境中该载剂中生物分子的释放或有助于当该生物分子悬浮于该载剂中时保持该生物分子的稳定性。当包括时，表面活性剂典型地占该载剂的＜20wt％、较好＜10wt％、更好＜5wt％。一般来说，防腐剂只以足以达到所希望的防腐效果的数量包括在该载剂中。该载剂中可以使用的表面活性剂的实例包括但不限于Tweens、Pluronics、Span 20、Span 40、Span 60、Span 80、辛酸甘油酯、月桂酸甘油酯、PEG-8辛酸癸酸甘油酯、聚甘油-6油酸酯、磺基琥珀酸二辛酯钠、和维生素E TPGS。该载剂中可以使用的防腐剂包括例如抗氧剂和抗微生物剂。潜在可用的抗氧剂的实例包括但不限于生育酚(维生素E)、抗坏血酸、棕榈酸抗坏血酯、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、和棓酸丙酯。

[0035]在一种实施方案中，按照本发明的一种实施方案的一种悬浮液配方包括悬浮于一种非水疏水性载剂中的一种如上所述干微粒干扰素配方。可以将数量不同的该干微粒干扰素配方包括到该载剂中，以提供一种使得该干扰素能在所选择的时段内以所希望的速率给药的配方。该悬浮液配方可以包括0.1～40wt％、较好0.1～20wt％干扰素。该悬浮液配方可以包括＞60wt％、较好＞80wt％该悬浮液载剂。

[0036]按照本发明的实施方案的悬浮液配方可以配制得能从一种可植入药物输送器件输送或能用来作为一种储存式注射。该可植入药物输送器件可以由任何一种能在植入实验对象体内之后在一段缓释期内以受控速率输送一种可流动配方的此类器件实施。适用的可植入药物输送器件的一个实例是一种渗透泵植入物，例如，可在DUROS植入物这一商品名下购得。也可以使用非渗透泵植入物。该悬浮液配方可以配制得能以可高达5ml/日的流动速率输送，这取决于要输送的生物分子和用来输送该悬浮液配方的可植入药物输送器件。在从一种为提供低流动速率而设计的渗透泵植入物输送该生物分子的情况下，该配方较好配制得能输送0.5～5μL/日，约1.5μL/日和1.0μL/日的流动速率是特别好的。在一种实施方案中，按照本发明的一种实施方案的一种悬浮液配方配制得能在1月内、较好3月内、更好1年内以1ng/日～600μg/日的范围从一种植入的器件输送干扰素。

[0037]如前面所讨论的，非水疏水性载剂当释放到一种亲水介质中时会表现得像一种沉积。这种沉积效应可能是也可能不是所希望的，因应用而异。然而，在该沉积效应是所希望的或可接受的情况下，重要的是，悬浮于该疏水性载剂中的生物分子在亲水介质的存在下和在从该疏水性载剂向该亲水介质中释放期间在该疏水性载剂中依然稳定。

[0038]本发明者们已经发现，少量表面活性剂直接添加到本发明的干微粒配方中和/或添加到掺入本发明的干微粒配方的疏水性载剂中，能在该干微粒配方从该疏水性载剂向该亲水性介质中释放时提高该干微粒配方中该生物分子的稳定性。虽然不想受理论约束，但本发明者们相信，少量表面活性剂直接添加到本发明的干微粒配方或悬浮液载剂中可以改进该生物分子在该干微粒配方中的界面行为，导致在该生物分子从该疏水性载剂向该亲水性介质过渡时该生物分子的变性和凝聚减少。具体地说，该表面活性剂可能有助于形成更疏水性的赋形剂在外侧而更亲水性的赋形剂在内侧的微粒。这种生物分子分布可以在从该疏水性载剂向该亲水性介质中释放期间在生物分子稳定性方面发挥重要作用。

[0039]按照本发明的实施方案的干微粒配方和/或悬浮液载剂中可以掺入的表面活性剂可以是离子型的或非离子型的。表面活性剂的一些实例包括但不限于Polysorbate 20、Polysorbate 80、Tweens、Pluronic F68、硫酸十二烷酯钠(SDS)、Span20、Span40、Span60、Span80、维生素E TPGS、辛酸甘油酯、月桂酸甘油酯、PEG-8辛酸癸酸甘油酯、聚甘油-6油酸酯、Pluronics、和磺基琥珀酸二辛酯钠。以下表2显示按照本发明的一些实施方案的干微粒配方和悬浮液载剂的表面活性剂加入量。

                            表2

	悬浮液配方		表面活性剂加入量
						悬浮液载剂	干微粒配方	干微粒配方	载剂
范围	＞60wt％	0.1～40wt％	0.01～10wt％	0.01～20wt％
					较好范围	＞80wt％	0.1～20wt％	0.01～5wt％

[0040]进行了一项研究，以评价表面活性剂对按照本发明的实施方案的干微粒干扰素配方从疏水性载剂向亲水性释放速率介质中释放的影响。在该研究中，该疏水性载剂是SAIB，该亲水性释放速率介质是磷酸盐缓冲剂溶液。SAIB是一种粘度高、水溶性有限的疏水性液体。其粘度在37℃为大约3.2kP。SAIB是由天然糖(蔗糖)用乙酸酐和异丁酸酐的受控酯化产生的。用于该研究的材料列于以下表3中。

                            表3

材料	来源
		Pluronic F68	BASF公司
Span 40	Aldrich公司
		喷雾干燥IFN-ω∶蔗糖∶甲硫氨酸∶柠檬酸盐(1∶2∶1∶2.15，25mM柠檬酸盐缓冲剂)
喷雾干燥IFN-ω∶蔗糖∶甲硫氨酸∶柠檬酸盐∶1％Pluronic F68(1∶2∶1∶2.15∶0.06，25mM柠檬酸盐缓冲剂)
		SAIB	Eastman化学公司
有0.2％叠氮化钠的磷酸盐缓冲剂溶液(PBS)

                            实施例1

[0041]ω干扰素的固体微粒是这样得到的：使来自25mM柠檬酸盐溶液的IFN-ω与蔗糖和甲硫氨酸一起喷雾干燥，溶液浓度分别含有3.3、6.6、3.3和7.1mg/mL IFN-ω、蔗糖、甲硫氨酸和柠檬酸盐，给出1∶2∶1∶2.15(IFN-ω∶蔗糖∶甲硫氨酸∶柠檬酸盐)的最终组成。这种微粒的SEM影像显示于图1中。平均粒度为6.51μm。

                            实施例2

[0042]有1％Pluronic F68表面活性剂的IFN-ω的固体微粒是这样得到的：使来自25mM柠檬酸盐溶液的IFN-ω和蔗糖、甲硫氨酸与Pluronic F68(聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物)一起喷雾干燥，溶液浓度分别含有3.3、6.6、3.3、7.1和0.2mg/mL IFN-ω、蔗糖、甲硫氨酸、柠檬酸盐、和Pluronic F68，给出1∶2∶1∶2.15∶0.06(IFN-ω∶蔗糖∶甲硫氨酸∶柠檬酸盐∶Pluronic F68)的最终组成。向该IFN-ω/赋形剂溶液中添加1％Pluronic F68成功地进行喷雾干燥，产率为大约49％，批量规模为55mL(1.1g固体)。该微粒的SEM影像显示于图2中。该微粒有光滑的球形。平均粒度为4.03μm。

                        实施例3

[0043]4种悬浮液(A、B、C和D)是在干燥箱中制备的，且列于表4中。称取适量SAIB，并添加到振荡的玻璃管形瓶中。当有规定时间向相同管形瓶中添加适量表面活性剂。将管形瓶加热到50℃、用刮铲手动混合。称取适量IFN-ω微粒(如实施例1或2中所制备的)并添加到该管形瓶中。将管形瓶加热到40℃或更低温度。该悬浮液用刮铲混合。

                            表4

	重量，％	重量，mg	合计，g
				A：悬浮液(无表面活性剂)IFN-ω微粒SAIB	1090	1501350	1.5
B：有5％Pluronic F68的悬浮液IFN-ω微粒Pluronic F-68SAIB	10585	10050850	1
				C：有5％Span-40的悬浮液IFN-ω微粒失水山梨糖醇-棕榈酸酯(Span-40)SAIB	10585	10050850	1
D：有1％Pluronic F68的微粒SAIBIFN-ω微粒+1％Pluronic F68SAIB	1090	100900	1

[0044]PBS中IFN-ω/SAIB悬浮液的稳定性样品是这样得到的：将大约8mg IFN-ω/SAIB悬浮液称取到5mL Vacutainer玻璃管中，并向该管中添加2mL PBS。这些样品在37℃贮存，进行稳定性试验。在每一个稳定性时间点上，将样品从稳定性室中取出。将液体滗到一支HPLC(高性能液体色谱)管形瓶中，用快速RP-HPLC(逆相高性能液体色谱)方法直接分析。对于SAIB凝胶来说，向该管中添加有0.1％SDS的50％ACN 0.5mL，使该凝胶溶解60min，然后向该管中添加2mLPBS。将浑浊的溶液离心，将液体层转移到该HPLC管形瓶中进行快速RP-HPLC分析。计算液相和固相的蛋白质回收率和总回收率。

[0045]可植入器件贮池中的IFN-ω/SAIB悬浮液在PBS中的稳定性样品如同表5中那样建立。在初始，3天和7天分析这些样品。

                                表5

配方(见表4)	稳定性样品制备		快速RP-HPLC试验样品制备
						悬浮液(mg)	PBS(mL)	液体	固体(凝胶)
	50％ACN+0.1％SDS	PBS(mL)
			A	8	0					0.5	4
A	8	2				直接分析	0.5	2
			B	8	2				直接分析	0.5	2
C	8	2				直接分析	0.5	2
			D	8	2				直接分析	0.5	2

[0046]在悬浮液中蛋白质释放期间，蛋白质并非全部自发地释放到释放速率介质中，因为SAIB并非水溶性的。在37℃在选择的稳定性时间点期间水相中蛋白质的回收率显示于图3中。对配方A(IFN-ω/SAIB)而言，7天后回收的蛋白质分数是约53％。对配方B(IFN-ω/SAIB+Pluronic F68)而言，7天后回收的蛋白质分数是约73％。对配方C(IFN-ω/SAIB+Span-40)而言，7天后回收的蛋白质分数是约80％。对配方D(IFN-ω+Pluronic F68/SAIB)而言，7天后回收的蛋白质分数是约69％。这些结果显示，SAIB载剂或干微粒IFN-ω配方中表面活性剂的添加增强了7天后的IFN-ω向水相中的释放。

[0047]从水相和SAIB固体(凝胶)相两相中回收的总IFN-ω显示于图4中。对配方A(无表面活性剂)而言，总回收率随时间推移而降低，观察到在37℃在PBS中3天后平均降低大约10％、7天后平均降低25％。悬浮液载剂或干微粒配方(配方B-D)中表面活性剂的添加导致约7天后大约90～100％总回收率。该研究显示，可以将表面活性剂添加到干微粒IFN-ω配方或悬浮液载剂中，以增强IFN-ω从悬浮液载剂向释放速率介质中的释放。

[0048]虽然本发明已经参照数目有限的实施方案进行描述，但有益于本公开文书的业内技术人员会知道，可以设想出不背离本文中所公开的本发明范围的其它实施方案。因此，本发明的范围只应受到所附权利要求书限定。

Claims (28)

1.一种供治疗用途用悬浮液配方，包含：

一种显示出粘性流体特征的非水疏水性载剂；

一种包含分散于该载剂中的生物分子的干微粒配方；和

一种掺入该载剂和干微粒配方中至少一种中的表面活性剂。

2.权利要求1的悬浮液配方，其中该疏水性载剂是非聚合物的。

3.权利要求2的悬浮液配方，其中该疏水性载剂实质性包含乙酸异丁酸蔗糖酯。

4.权利要求1的悬浮液配方，其中该生物分子是一种干扰素。

5.权利要求4的悬浮液配方，该配方用至少一个月时间以1ng/日～600μg/日从一种可植入药物输送器件输送该干扰素。

6.权利要求1的悬浮液配方，其中该生物分子是干扰素ω。

7.权利要求1的悬浮液配方，其中该生物分子是与该表面活性剂一起喷雾干燥的。

8.权利要求1的悬浮液配方，其中该干微粒配方进一步包含一种或多种稳定剂和一种缓冲剂。

9.权利要求8的悬浮液配方，其中该稳定剂选自碳水化合物、抗氧剂、和氨基酸组成的一组。

10.权利要求1的悬浮液配方，其中该疏水性载剂的存在量＞60wt％。

11.权利要求1的悬浮液配方，其中该干微粒配方是以0.01～40wt％的范围存在的。

12.权利要求1的悬浮液配方，其中该干微粒配方中表面活性剂加入量在0～10wt％范围内。

13.权利要求1的悬浮液配方，其中该载剂中表面活性剂加入量在0～20wt％范围内。

14.一种干微粒配方，包含：

一种干扰素，一种缓冲剂，一种表面活性剂，和一种或多种选自碳水化合物、抗氧剂、和氨基酸组成的一组的稳定剂。

15.权利要求14的干微粒配方，该配方是喷雾干燥的。

16.权利要求14的干微粒配方，其中该干扰素是干扰素ω。

17.权利要求14的干微粒配方，其中该干扰素的存在量范围为0.1～99.9wt％。

18.权利要求17的干微粒配方，其中每一种稳定剂与该干扰素的重量比范围为0.1～99.9。

19.权利要求18的干微粒配方，其中每一种稳定剂与该干扰素的重量比＞0.5。

20.权利要求19的干微粒配方，其中该碳水化合物与该干扰素的重量比＞1.0。

21.权利要求14的干微粒配方，其中该缓冲剂的浓度在5mM～50mM范围内。

22.权利要求14的干微粒配方，其中该缓冲剂的pH在5.0～8.0范围内。

23.权利要求14的干微粒配方，其中干扰素、碳水化合物、抗氧剂和/或氨基酸、缓冲剂、和表面活性剂是以1∶2∶1∶1.5～2.5∶0.06的比例存在的。

24.权利要求14的干微粒配方，其中该干扰素是干扰素ω、该碳水化合物是蔗糖、该抗氧剂和/或氨基酸是甲硫氨酸、且该缓冲剂是柠檬酸盐。

25.权利要求14的干微粒配方，其中该表面活性剂的存在范围为0.01～10wt％。

26.权利要求14的干微粒配方，其中该表面活性剂的存在范围为0.01～5wt％。

27.一种可植入输送器件，包含：

一种悬浮液配方，包含一种显示出粘性流体特征的非水疏水性载剂、一种包含分散于该载剂中的干扰素的干微粒配方、和一种掺入该载剂和干微粒配方中至少一种中的表面活性剂；和

一种含有该悬浮液配方的储器，其含量足以在至少一个月内在使用环境中以治疗有效剂量提供该干扰素的连续输送。

28.一种增强干扰素ω在亲水释放速率介质中的释放的方法，包含：

使干扰素ω的一种干微粒配方悬浮于一种非聚合物的疏水性载剂中；和

将一种表面活性剂掺入该干微粒配方和该疏水性载剂中至少一种中。

Images