MXPA06001167A

MXPA06001167A - Lactobacilo novedoso, preparacion del lactobacilo activante para un cuerpo vivo y agente preventivo o terapeutico para la infeccion de un cuerpo v

Info

Publication number: MXPA06001167A
Authority: MX
Inventors: Tadayo Hata; Hitoshi Toshimori; Toshiyuki Maruoka
Original assignee: Bhph Company Ltd
Priority date: 2003-07-30
Filing date: 2006-01-30
Publication date: 2006-10-30
Also published as: WO2005012503A1; CN1842588B; EP1661982A4; JPWO2005012503A1; KR100763257B1; ZA200600866B; HK1095605A1; UA88271C2; BRPI0413008B8; RU2340669C2; IN2006MU00214A; HRP20090583T1; JP4661593B2; BRPI0413008B1; ES2332411T3; EP1661982A1; RU2006106279A; CA2534013C; BRPI0413008A; US7863033B2

Abstract

Ha habido un esfuerzo para desarrollar un lactobacilo que seríaútil como un probiótico, y para desarrollar un lactobacilo que colonizaría y proliferaría en lesiones de infección, eliminado las bacterias causales. Este problema se resolviódesarrollando una especie Lactobacillus casei que tiene las propiedades dominantes siguientes. (1) La especie se puede crecer en presencia de cualquiera de uno a cuatro aminoácidos como una fuente de nitrógeno necesaria para el crecimiento. (2) Cuando un medio de cultivo promotor del crecimiento se inocula con la especie y Escherichia coli en la misma cantidad y se somete a cultivo mixto anaerobio a 37°C, la cuenta final de lactobacilos es de 50%o más de la cuenta de coliforme. (3) En la cultivación en un medio de cultivo apropiado, el valor de pH final es 4.0 o menor, y la acidez mas alta es 1.5%o mayor. (4) La especie es resistente a sales de bilis al 5%. (5) La especie es resistente a sales de bilis al 5%. (5) La especie produce un antibióti

Description

DZ, EC, EE, EG, ES, El, GB, GD, GE, Gil, GM, i IR, III), CU, CY, CZ, DE, DK, EE, OS, El, ER, GB, GR, 11U, IE, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, IT, LU, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR), O?PI (BE LT, LU, LV, M?, M , MG, MK, MN, MW, MX. MZ, N?, BJ, CE CG, Cl, CM, G?, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN! NI, NO. NZ, OM, PG, PII, PL. IT, RO, RU, SC, SD. SE, TD, TG). SG, SK, SL, SY, TJ, TM, TN, TR, TI', TZ, U?, IIG. VS, UZ, VC. VN, YU, Z?, ZM, ZW. ji5Jtt' H#! (84) íi^ti(d*©íEL^Ey, ±t<Dm <D&® m.tft? $£): ?RIPO (BW, Gil, GM, KE, LS, MW, MZ, N?, SD, 2ÍÍ-1- & tib?BSfglC- l tii, ••gfflUÍT?ft-S SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW), =L— 7 7 (AM. ?Z, BY, &l>CrJSi!y r-© ^l ílÍ££*lT I -d T — ¿S§|g KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), 3— O /i (?T, BE, BG, (D X $^> .J — j £ ü„ LACTOBACILO NOVEDOSO, PREPARACIÓN DEL LACTOBACILO ACTIVANTE PARA UN CUERPO VIVO Y AGENTE PREVENTIVO O TERAPÉUTICO PARA LA INFECCIÓN DE UN CUERPO VIVO CAMPO TÉCNICO La actual invención se refiere a una especie de Lactobacillus casei que tiene propiedades excelentes no proporcionadas por las bacterias conocidas convencionalmente, a una preparación del lactobacilo activante del cuerpo vivo que tiene esta bacteria como un componente principal el cual es extremadamente útil para restaurar, mantener y promover la salud y para mejorar el crecimiento y calidad de plantas y animales, y a una preparación del lactobacilo la cual es altamente eficaz en la prevención y el tratamiento de infecciones de animales y plantas. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Una infección ocurre cuando las bacterias invaden y se multiplican en el interior de un cuerpo vivo y el cuerpo exhibe síntomas de enfermedad, y una vez que las bacterias comienzan a multiplicarse en el cuerpo, el cuerpo reacciona en una variedad de formas, y aparecen varios síntomas tales como enrojecimiento e hinchazón. El uso de medicamentos tales como antibióticos es apropiado en este momento, además ayuda a curar la infección. Sin embargo, la reducción o el retiro del patógeno se impide y en última instancia el tratamiento es insatisfactorio en muchos casos cuando es demasiado tarde utilizar los antibióticos, o cuando su uso es inadecuado, o cuando el uso se interrumpe en el curso de la terapia, o cuando gran parte del medicamento no puede llegar a la infección. Además, han surgido recientemente problemas afectando tanto la bacteria como a sus huéspedes, que complican circunstancias de modo que las infecciones duran más tiempo o son más severas y difíciles de tratar. La primera victoria para los humanos en la guerra contra las enfermedades infecciosas ocurrió a mediados del siglo veinte con el advenimiento de los antibióticos, comenzando con la penicilina. A diferencia de los medicamentos anteriores, este medicamento fue granizado como una "bala mágica" por sus efectos dramáticos: parecía que la infección había sido combatida, y que el término "enfermedad infecciosa" pronto sería obsoleta. Las bacterias no se combatieron fácilmente, sin embargo, el uso excesivo de los antibióticos condujo a la aparición y difusión de bacterias resistentes a los medicamentos. Las bacterias están al ataque de nuevo una vez que sobreviven y se reagrupan. Las bacterias que han adquirido resistencia tienen éxito en transmitir esta resistencia a través de las fronteras de especies por la conjugación de fragmentos de ADN (genes de resistencia) especiales llamados R-plásmidos. Consecuentemente, la medicina parece estar verdaderamente cerca de fracasar debido al predominio y difusión de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM) , una causa importante de infecciones hospitalarias, y otras bacterias resistentes a múltiples medicamentos incluyendo Enterococcus resistente a vancomicina (ERV) , Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium tuberculosis, Shigella flexneri y similares . Por ejemplo, 80% de los adultos se dicen sufrir de la enfermedad del periodonto, en la cual los tejidos circundantes que soportan los dientes incluyendo las encías, cemento, ligamentos periodontales, hueso alveolar y similares, se inflaman y se destruyen gradualmente. Esto es causado por las bacterias que se colonizan y forman placa preferentemente en el tejido periodontal, particularmente los surcos en la parte cervical en el límite entre los dientes y las encías . Las encías se inflaman localmente debido a toxinas y enzimas producidas por estas bacterias, dando por resultado gingivitis, y como desarrolla bolsas en las encías formadas donde la placa se acumula, dando por resultado periodontitis. Según los síntomas progresan las bolsas profundizan y se ensanchan, la inflamación se expande y destruye gradualmente las raíces de los dientes, los cuales finalmente se caen. Específicamente, en las etapas iniciales de la enfermedad periodontal las encías de la parte cervical a la cual la placa se ha unido llegan a ser rojas e hinchadas, perdiendo su elasticidad y sangrando durante el cepillado. Si se no hace caso a esto, la placa crece y forma gradualmente el cálculo (o sarro) , expandiéndose sobre el área cervical para formar bolsas periodontales. El cálculo forma una barrera la cual evita el cepillar la placa subyacente, de modo que las bacterias ganen fuerza y sus toxinas ocasionen que las bolsas se agranden, y la inflamación se difunda de las encías al ligamento periodontal y hueso alveolar, causando sangrado y pus con halitosis mientras que al mismo tiempo la infección se dispersa a los dientes circundantes uno por uno. Si la inflamación de las bolsas se vuelve crónica, el hueso alveolar que soporta las raíces de los dientes comienza a disolverse de la superficie, acompañado por edema de las encías, los dientes tiemblan y se sienten flojos porque no se soportan correctamente, y la fuerte halitosis ocurre junto con dolor cuando el paciente muerde fuerte. Según la enfermedad progresa gran parte del hueso alveolar se pierde, las raíces de los dientes quedan expuestas, los dientes están flojos de modo que el paciente no puede más comer alimentos duros, y finalmente los dientes se caen uno por uno. Por lo tanto, los expertos reconocen la enfermedad periodontal como un modelo clásico de enfermedad infecciosa crónica que aún es difícil de curar. Otro problema se refiere a los medicamentos en sí: los medicamentos son extraños al cuerpo y producen efectos secundarios en mayor o menor grado, y los expertos precisan que cuanto más eficaz el medicamento, mayores son los efectos secundarios. En general se dice que los efectos de los medicamentos se reducen a la mitad mientras que los efectos secundarios se duplican en los ancianos —un hecho que no se puede ignorar considerando el envejecimiento de la sociedad. Las demandas cada vez más fuertes por seguridad de la sociedad en su totalidad también no pueden ser ignoradas. Las muertes accidentales por efectos secundarios continúan ocurriendo. Los antibióticos no son la excepción, de hecho producen una toxicidad en la sangre mucho más fuerte que otros medicamentos incluyendo la reacción alérgica llamada "conmoción por penicilina" así como leucopenia, anemia y similares, además las instituciones públicas han reconocido la pérdida resultante de fuerza inmune. Debido a que los antibióticos son tan útiles, sin embargo, estos no han sido mucho el problema excepto en casos reales de enfermedad severa o muerte . Los antibióticos tienen otro efecto secundario el cual no es inmediatamente obvio: atacan la flora intestinal, la cual es algunas veces llamada órgano vital, causando la substitución microbiana. Es decir, la función inmune es además reducida por el efecto sinérgico de la toxicidad de la sangre combinado con una disminución de las bacterias intestinales benignas que son altamente sensibles a los antibióticos, que promueven infecciones crónicas y que conducen a nuevas enfermedades virales y otras infecciones . De hecho, las bacterias que causan infecciones crónicas típicas tales como la enfermedad periodontal, sinusitis, hemorroides y similares son a menudo resistentes a antibióticos, y los efectos secundarios se acumulan mientras que el medicamento es ineficaz. Incluso sin la resistencia, cuanto más antibiótico se utiliza, mayor es el riesgo de mutación a cepas resistentes. A nivel individual, la exposición continua a toxinas de bacterias patógenas puede ser fatal cuando se combina con la función inmune disminuida, mientras que en una bacteria resistente a nivel social se han cruzado límites nacionales causando daño inesperado por todo el mundo. Considerando los Estados Unidos de América y Europa, la idea de crear cuerpos que no se enfermen en lugar de tratarse cuando se enferman (medicina preventiva) ha estado en vigor por más de una década, un medio efectivo para esto una vez que se agepte debido a su seguridad son los "probióticos" , los cuales prestan ayuda de bacterias benignas . La investigación del Lactobacillus se inició en Francia por Pasteur, el padre de la microbiología moderna, lo que condujo a la teoría de la "prolongación de la vida" del ruso Metchinikoff y a muchas aplicaciones clínicas subsecuentes, pero aún no se puso en uso práctico verdaderamente . Esto se debió a que los resultados de estudios epidemiológicos no coincidían con los resultados de la investigación experimental. Sin embargo, los avances en bacteriología intestinal recientemente han demostrado que el Lactobacillus tiene los siguientes papeles importantes . (1) Normalización de la función inmune: Normaliza y aumenta la función inmune, la cual es indispensable para mantener la vida (2) Limpieza intestinal: Balancea la flora intestinal, suprime la proliferación de bacterias dañinas, y suprime la fermentación anormal y producción de bacterias dañinas en los intestinos (3) Limpieza de la sangre: limpia la sangre como una extensión de la función de limpieza intestinal (4) Promoción de la utilización del alimento: Promueve la síntesis de vitaminas y aminoácidos; ayuda la absorción de nutrientes a través de las paredes intestinales (5) Prevención de infecciones por bacterias dañinas: previene la proliferación e infección en el intestino incluso si las bacterias dañinas invaden del exterior (6) Normalización de células: Promueve la normalización de las funciones de las células También en Japón, según la sociedad envejece y los costos del control de la salud se convierten en una preocupación nacional, la importancia de la prevención de la enfermedad se está reconociendo y la sociedad en su totalidad se está volviendo más preocupada por la salud.

Consecuentemente, el número de productos que contienen Lactobacillus como un ingrediente aumenta rápidamente, y más y más productos llamados "yogur funcional" se están desarrollando. Sin embargo, la verdad es que si estos productos se consumen intermitentemente, los efectos tales como ésos antes mencionados en (1) a (6) y otros efectos definitivos de la enfermedad serán contados, mientras que la eficacia real contra la infección parecería ser una esperanza tonta. Bajo estas circunstancias, los inventores proponen que un bacilo de ácido láctico que tiene propiedades únicas el cual fue aislado y seleccionado por los inventores en mayo de 2000 se utilice contra infecciones con el propósito de corregir los efectos negativos de los antibióticos convencionales tales como bacterias resistentes a medicamentos, alergias a los medicamentos, efectos secundarios y problemas que afectan la flora bacteriana ordinaria, y se ingresó una solicitud de patente para una "bacteria de ácido láctico nueva eficaz en la enfermedad infecciosa y la preparación del lactobacilo que comprende la bacteria de ácido láctico como ingrediente principal" (Solicitud en trámite de patente de Japón No. 2001-333766) .

Esta solicitud se refiere a un bacilo de ácido láctico el cual es una especie del Lactobacillus casei que no solo actúa para inhibir el crecimiento de bacterias .patógenas sino también produce "sustancias bioactivas novedosas" las cuáles tienen la propiedad de debilitar la toxicidad de bacterias patógenas, y a una preparación del Lactobacillus para infecciones agudas y crónicas la cual tiene esta bacteria como un componente principal. En detalle, del Lactobacillus casei recolectado de la naturaleza se seleccionó sólo esas cepas que producen un antibiótico de espectro amplio, y entonces se sometió a revisión por mutaciones hemolíticas y S-R, con confirmación a través de pruebas en animales, para determinar si ese antibiótico debilitó la toxicidad de bacterias patógenas, y finalmente tres cepas del Lactobacillus casei las cuales cumplen los criterios, FERM BP-6771, FERM BP-6772 y FERM BP-6773, se aplicaron a las infecciones. Éstas también presentaron resistencia a antibióticos ampliamente utilizados de modo que pudieran ser utilizadas conjuntamente con esos antibióticos. En los casos de infecciones agudas tales como colitis aguda, cistitis aguda, bronquitis aguda y similares, efectos más rápidos del tratamiento se lograron a través del uso de estos Lactobacilli conjuntamente con la administración de antibiótico que se logró con los antibióticos convencionales solos, incluyendo (i) la dosis reducida de antibióticos, (ii) un mejoramiento más rápido de síntomas y una recuperación más rápida con menos efectos secundarios, y (iii) menos disturbio de la flora intestinal, y los efectos perjudiciales del medicamento se redujeron. Sin embargo, los efectos tomaron tiempo para aparecer y una curación completa no se alcanzó en el caso de infecciones crónicas tales como gingivitis, sinusitis, bronquitis y hemorroides. Según lo discutido antes, el problema es cultivar un Lactobacillus casei capaz de colonizar y multiplicarse en las lesiones de una infección crónica que resiste el tratamiento, y de proporcionar una acción de limpieza fuerte mientras que elimina las bacterias causales. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Como resultado de la investigación exhaustiva dirigida a resolver el ya mencionado problema, los inventores tuvieron éxito para lograr esta meta de pistas obtenidas observando el sistema de limpieza vaginal, el cual mantiene un ambiente limpio incluso cuando se expone constantemente a contaminación bacteriana.

Es decir, esta es una especie Lactobacillus casei que tiene las propiedades descritas en (1) , (2) , (3) , (4) y (5) de abajo, la cual es preferiblemente la especie Lactobacillus casei FERM BP-10059 (FERM P-19443) : (1) La especie se puede hacer crecer en presencia de cualquiera de uno a cuatro aminoácidos como una fuente de nitrógeno necesaria para el crecimiento; (2) Cuando un medio de cultivo promotor del crecimiento se inocula con la especie y Escherichia coli en igual número y se somete a cultivo anaerobio mixto a 37°C, el conteo final de lactobacilos es 50% o más del conteo de coliforme; (3) En la cultivación en un medio de cultivo apropiado, el valor de pH final es 4.0 o menor, y la acidez más alta es 1.5% o más; (4) La especie es resistente a sales de bilis al 5%; (5) La especie produce un antibiótico. En segundo lugar, la actual invención es una especie del Lactobacillus casei que tiene por lo menos una de las siguientes propiedades adicionales a las propiedades enumeradas arriba, y esta especie del Lactobacillus casei es FERM BP-10059 (FERM P-19443) : (a) Tiene resistencia a los antibióticos ampliamente utilizados; (b) Tiene capacidad amilolítica; (c) Promueve el crecimiento de clorella; (d) Crece a temperaturas en el rango de 5°C a 45°C; (e) Crece en los valores de pH en el rango de pH 4.0 a pH 10.0; (f) Puede también crecer bajo cualquier presión de oxígeno . En tercer lugar, la actual invención es una preparación del lactobacilo activante del cuerpo vivo que tiene la especie Lactobacillus casei descrita arriba como un ingrediente activo primario, en donde la especie del Lactobacillus casei ya mencionada es FERM BP-10059 (FERM P-19443) . En cuarto lugar, la actual invención es un agente preventivo o terapéutico para la infección del cuerpo vivo que tiene la especie Lactobacillus casei descrita arriba como un principal ingrediente primario, que contiene preferentemente un antibiótico, y que se aplica preferentemente en el tratamiento a un área afectada de la enfermedad periodontal después de que el área afectada se desinfecte con un desinfectante bactericida, en donde el desinfectante bactericida contiene preferentemente 500 a 1,500 ppm de iones férricos, 500 a 2.000 ppm de ácido L-ascórbico y 200 a 2,000 ppm de uno o por lo menos dos de ácido sórbico, ácido benzoico y éster del ácido paraoxibenzoico como componentes principales, y la especie Lactobacillus casei es preferentemente FERM BP-10059 (FERM P-19443) . Actualmente, la sociedad en su totalidad valora la seguridad por encima de todo, en salud y medicina el concepto de "probióticos" es centro de atención en el oeste en particular. "Probióticos" se refiere al uso de bacterias y otros microorganismos los cuales son organismos simbióticos que viven en los intestinos y son benignos al cuerpo, y a métodos de prevención agresivamente y tratamiento de enfermedades usando tales bacterias, especialmente el uso interno de lactobacilos incluyendo el Lactobacillus bifidus y similares. Los inventores en este caso hicieron uso rápidamente de esto para desarrollar la preparación del lactobacilo de la actual invención, que consiste en una especie Lactobacillus casei que tiene propiedades únicas. En la vanguardia de probióticos, esta preparación tiene no solamente efectos muy claros en restaurar, mantener y promover de salud, sino también tiene éxito en proveer efectos terapéuticos no provistos por productos convencionales del mismo tipo con respecto a casos crónicos de infección que son difíciles de tratar incluso por la medicina moderna. Por otra parte, debido a que el lactobacilo de la actual invención es resistente a los antibióticos, un tratamiento más rápido se puede lograr conjuntamente con los antibióticos. En este caso, la dosis mínima del antibiótico es suficiente, y los varios efectos perjudiciales intrínsecos del medicamento tales como efectos secundarios y difusión de bacterias resistentes a medicamentos se pueden reducir. Además, en el contexto de aumentos en las enfermedades degenerativas de una sociedad que envejece y aumentos en infecciones crónicas debido al envejecimiento, junto con el aumento inevitable de costos médicos, el papel de la preparación del lactobacilo de la actual invención como un medio para resolver estos problemas será cada vez más importante en el futuro. Antes del advenimiento de los antibióticos, muy pocos esfuerzos se hicieron en el mundo para tratar la enfermedad periodontal . Las bacterias dentro de las lesiones de la enfermedad periodontal se consideraban también una causa de la enfermedad cardiaca y otras enfermedades fatales, y debido a los daños percibidos, dientes con malas cavidades o enfermedad periodontal se sacaban sin vacilación. Debido a esta teoría, la odontología consistió largo tiempo no de tratar la enfermedad sino de sacar el diente y de ocuparse de los efectos de retirar el diente a través de dentaduras . Esta situación comenzó a mejorar con el advenimiento de antibióticos, y en las investigaciones en los 80' s sobre patógenos de la enfermedad periodontal permitió el progreso de un mejor entendimiento de la enfermedad. Esto condujo a la terapia fundamental para remover la placa y cálculo, con el resultado que la inflamación se redujo, las bolsas periodontales se volvieron poco profundas, los dientes flojos se fueron alineando y ya no temblaban, y cuando esto no era exitoso se realizaba cirugía en las encías. De esta manera, las estrategias terapéuticas se fueron desarrollando para conservar los dientes. Por otra parte, la intratabilidad de la enfermedad periodontal se reevaluó cuando se encontró que las bacterias ocultas dentro de las encías forman estructuras colectivas especiales y barreras, que reducen los efectos farmacéuticos de medicamentos anti-bacterianos y bactericidas, y que los hábitos de la forma de vida de los pacientes, las condiciones sistémicas y los factores genéticos también están implicados en la ocurrencia y progreso de la enfermedad. Quizás fuera de un sentido de inutilidad, ha habido poco progreso en la última década en el estudio básico y tratamiento de la enfermedad periodontal . Con la llegada de una sociedad duradera, los expertos han divulgado gradualmente una asociación cercana entre los dientes y la salud física, al darse cuenta que los dientes no solo tienen una función de masticación sino también son centrales en la vida, y la sociedad se ha dado cuenta que para prevenir la demencia, el cáncer, la apoplejía, la enfermedad cardiaca y similares es importante tratar los dientes para poner en evidencia los poderes curativos naturales del cuerpo y realzar las funciones sistémicas. Es decir, se tomó en cuenta que los dientes son órganos irreemplazables, y que por medio de los dientes es posible mejorar funciones físicas y psicológicas, evitar el envejecimiento y mejorar la felicidad humana. La pérdida del diente y las cavidades y la implantación de dientes artificiales imperfectos para reemplazarlos pueden conducir a reacciones de estrés continuas y acumulativas en el cuerpo vivo. Con el enfoque actual en efectos secundarios y problemas del medicamento, el desarrollo del agente preventivo seguro y agente terapéutico de la actual invención, el cual pone poca carga física, psicológica o financiera en doctor o paciente, mantiene una gran promesa para revolucionar el tratamiento de la enfermedad periodontal, el cual se ridiculiza a menudo como el tratamiento "mop-up", y se une a ser buena noticia para la raza humana como se espera en una sociedad en la que es natural mantener sus dientes . En lugar de los desinfectantes y antibióticos que se han utilizado extensamente en el proceso del tratamiento, la preparación del lactobacilo de la actual invención, la cual tiene propiedades únicas y alta afinidad por las membranas mucosas, en combinación con un desinfectante bactericida (Patente de los Estados Unidos de América No. 6296881 Bl) desarrollado por los inventores el cual es suave a las membranas mucosas pero tiene efectos severos en bacterias patógenas, es un excelente agente preventivo y agente terapéutico para la enfermedad periodontal, capaz de efectuar una curación casi completa en casos de enfermedad periodontal de las primeras etapas a las últimas etapas sin importar las capacidades técnicas del dentista mientras todavía haya hueso alveolar para soportar los dientes . Además, el agente terapéutico para la enfermedad periodontal de la actual invención se puede administrar adicionalmente a los tratamientos convencionales para la enfermedad periodontal . Además, el crecimiento de animales se puede promover por la administración de la preparación del lactobacilo de la actual invención durante la crianza de cerdos, pollos, caballa, insectos y otros animales, que contribuyen a mejorar la calidad y prevención de enfermedades, y exhibe efectos terapéuticos fuertes contra una variedad de enfermedades incluyendo la infección por Saproglenia y la enfermedad de .úlcera en peces dorados. Además, el crecimiento se puede promover y obtenerse más alta calidad aplicando la preparación del lactobacilo de la actual invención a plantas incluyendo las fresas, la espinaca y otros vegetales y hierbas. Además de prevenir la ocurrencia de la enfermedad es también eficaz para tratar enfermedades de las plantas tales como oídio y moho (mildiú) en pepinos. La aparición de la preparación del lactobacilo de la actual invención respira aire fresco en el concepto establecido convencional de tratamiento de infecciones con antibióticos o productos químicos agrícolas, y está unido para contribuir grandemente al reconocimiento futuro y desarrollo de "probióticos".

Los lactobacilos están generalmente presentes en la naturaleza, desde los intestinos, cavidad bucal y otras partes del cuerpo vivo hasta las hojas de los árboles, hierba, cosechas, frutas, suelo y aguas residuales, y se encuentran abundantemente en todos los lugares con actividad viviente. Consecuentemente, se han utilizado como un asunto ordinario en procesamiento y preservación de alimentos desde las épocas antiguas cuando la gente aún no estaba incluso consciente de su existencia, mientras hoy en día el papel de los lactobacilos se aprecia desde una perspectiva científica y han ganado la atención como probióticos . Los inventores han ido un paso más lejos para desarrollar un lactobacilo que tiene alta afinidad por el cuerpo vivo y capacidades de limpieza excelentes que no eran hasta ahora disponibles. Se ha demostrado que esta bacteria no es solamente eficaz en prevenir y tratar la enfermedad, sino también contribuye grandemente a mejorar el crecimiento y calidad de animales y plantas. Por lo tanto, su aplicación industrial se piensa extender no solamente a la industria primaria sino también a la industria de la salud en su totalidad en el sentido general y a la industria cosmética como extensión de la industria de la salud, y se puede utilizar y aplicar extensamente en el sector alimenticio o en general en todos los ambientes requeridos para la vida humana.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la regeneración de la piel de ratón después de la separación. La figura 2 muestra la proliferación de la cepa de la célula del riñon del mono V-l. La figura 3 muestra la proliferación de la cepa de la célula mastocitoma del ratón P815. La figura 4 muestra la proliferación de linfocitos CEA del ratón. La figura 5 muestra la proliferación de clorella.

MEJOR MODO PARA REALIZAR LA INVENCIÓN La especie Lactobacillus casei de la actual invención puede estar en la forma de cuerpos de célula obtenidos por cultivo, un líquido de cultivo o un filtrado de cultivo descontaminado, mientras la preparación que contiene un Lactobacillus casei novedoso puede ser una preparación que contiene solamente el Lactobacillus casei de la actual invención o una preparación que contiene el Lactobacillus casei de la actual invención junto con un antibiótico. La especie Lactobacillus casei de la actual invención se desarrolló referente a la existencia de los lactobacilos normalmente presentes en la vagina. Es decir, el bacilo de Doederlein, el cual está normalmente presente en la vagina, desglosa los glicógenos exudando de la pared vaginal, que produce ácido láctico el cual mantiene la acidez y evita la proliferación de las bacterias putrefactas que invaden del exterior, y así juega un papel vital para mantener la limpieza. Esta bacteria es muy similar al Lactobacillus acidophilus, y cuando su crecimiento se suprime por los antibióticos o Levaduras similares y otras bacterias se conocen para proliferar y pueden causar varias inflamaciones. Es decir, un sistema de prevención de infección se construye el apoyo principal del cual es un lactobacilo el cual puede establecerse y proliferar con una pequeña cantidad de nutrición en la vagina. Este sistema de limpieza parece ser básico y común que considera que la hemorroides intratables se curan naturalmente si la flora intestinal consiste principalmente de bacterias benignas. De acuerdo con estos resultados, los inventores perfeccionaron la actual invención recolectando tantas ayudas digestivas del lactobacilo y productos de lactobacilo comerciales como fue posible y estudiando las cepas en ellos, cuando se descubrieron que solamente esas cepas bacterianas que cumplen con ciertas condiciones tenían 100% de sus capacidades evidentes originales o latentes y que podrían activar fundamentalmente los cuerpos vivos de animales y plantas, con efectos económicos en su crecimiento y calidad, así como el aumento del sistema inmune (capacidad curativa natural) contra la enfermedad mientras que al mismo tiempo se excluyen fuertemente bacterias causales en casos de infección. De las condiciones a satisfacer por el Lactobacillus casei de la actual invención, la primera condición esencial es que (1) la demanda de nutriente sea mucho menor a esa del conocido Lactobacillus casei convencional. Es decir, esto significa que la especie se puede cultivar en presencia de cualesquiera de uno, dos, tres o cuatro aminoácidos como una fuente de nitrógeno nutriente. (2) la proliferación es rápida en el ambiente de crecimiento. Esto significa que cuando un medio de cultivo promotor de crecimiento se inocula con la especie y Escherichia coli en la misma cantidad y se someten a cultivo anaerobio mixto a 37° C, el conteo final de lactobacilos es el 50% o más de la cuenta de coliforme. (3) la capacidad de producción del ácido láctico es alta. Esto significa que sobre la cultivación en un medio de cultivo apropiado, el valor final de pH es 4.0 o menor, y la acidez más alta es de 1.5% o más. (4) La especie tiene alta resistencia a los ácidos de bilis. Esto significa que la especie es resistente a sales de bilis del 5%. (5) La especie produce un antibiótico y puede inhibir la proliferación de otras bacterias. Preferenteemente, la especie (a) tiene resistencia a los antibióticos ampliamente utilizados; (b) tiene capacidad amilolítica; (c) promueve el crecimiento de clorella; (d) tiene un amplio rango de temperaturas para el crecimiento (crece en las temperaturas en el rango de 5°C a 45°C) ; (e) tiene un amplio rango de valores de pH para el crecimiento (crece a valores de pH en el rango de pH 4.0 a pH 10.0); y (f) tiene un amplio rango de presión de oxígeno en el cual puede crecer (es decir, puede crecer bajo cualquier presión de oxígeno) . Por lo tanto, los inventores aclimataron la especie Lactobacillus casei FERM BP-6971, FERM BP-6972 y FERM BP-6973 (bajo esto, la especie Lactobacillus casei "original"), para la cual una solicitud de patente ya se ha ingresado, y después de mucho esfuerzo dedicado para conferir las propiedades ya mencionadas, se tuvo éxito en producir una cepa bacteriana que cumple con las condiciones de la actual invención de FERM BP-6971 por el proceso descrito abajo. Para tener un efecto en un cuerpo vivo, una bacteria debe adaptarse a su ambiente, prevalecer en competición de crecimiento con las bacterias patógenas y reproducirse adecuadamente . Una condición necesaria para esto es la producción de un antibiótico que suprima el crecimiento de otras bacterias, y antes que el potencial básico o en otras palabras la potencia proliferativa de las bacterias debe ser fuerte. En general, los lactobacilos tienen altas demandas de nutrientes, y por ejemplo el medio MRS usado extensamente para el crecimiento bacteriano se compone de 10 g de extracto de carne, 5 g de extracto de Levadura, 10 g de peptona, 0.2 g de MgS0-7H20, 0.5 g de MgS04-5H20, 5 g de acetato de sodio, 2 g de citrato de diamonio, 2 g de KH2P04 y 20 g de glucosa por litro. El Lactobacillus casei de la presente invención no es una excepción, pero puesto que es un Lactobacillus casei aislado de la naturaleza sus demandas de nutrientes originales son moderadas, y puede proliferar con concentraciones apropiadas de aminoácidos, vitaminas, azúcares utilizables y sales inorgánicas, tal como por ejemplo un medio que consiste del medio S- más 1 g de casaminoácidos y 0.1 g de vitamina. El medio S-W en sí contiene 1 g de KH2P04, 0.7 g de MgS04-7H20, 1 g de NaCl, 4 g de (NH4)2HP04, 0.03 g de FeS04-7H20 y 5 g de glucosa por litro. El medio de la placa se preparó con esta composición, y la especie Lactobacillus casei original dispersada en la solución esterilizada de cloruro de sodio se aplicó a esto y se cultivó anaerobicamente por 48 a 72 horas a 37°C. Las colonias resultantes más grandes se seleccionaron, cosecharon, y cultivaron de nuevo por los mismos procedimientos como arriba, y la operación de seleccionar y cosechar las colonias según crecían se repitió para obtener la cepa con el crecimiento y proliferación más rápida en esta composición del medio. Después, una cepa con buen crecimiento se seleccionó repitiendo la misma operación con la concentración de nutriente a 1/2 en el medio, después de lo cual las colonias que crecieron en el medio con la concentración de nutriente reducido gradualmente a 1/4, 1/8 y 1/16 se identificaron para obtener una cepa con la capacidad de crecer y de proliferar rápidamente en ambientes con nutrición extremadamente baja.

El Lactobacillus casei convencional conocido que incluye la especie LactoJbacillus casei original requiere una variedad de aminoácidos como fuentes de nitrógeno para el crecimiento, pero la especie Lactobacillus casei de la actual invención puede crecer con un aminoácido o con 2 , 3 o 4 aminoácidos como una fuente de nitrógeno. Un ejemplo sería sales inorgánicas más azúcar más vitaminas más hidrocloruro de L(+) -lisina más ácido L-glutámico. Cuando crecen junto con Escherichia coli , una bacteria la cual como Lactobacillus casei es una bacteria familiar que crece por todas partes en la naturaleza y que se conoce como una especie indicadora de contaminación ambiental, la especie Lactobacillus casei de la actual invención no fue inferior a Escherichia coli en términos del grado y velocidad del crecimiento en las etapas iniciales y medias, y el conteo final de lactobacilos era del 50% o más de la cuenta de coliformes. Cuando este cociente de las bacterias es del 30% o menos, una cepa bacteriana puede tener poco efecto en un cuerpo vivo a pesar de sus grandes capacidades . Después, otra propiedad importante necesaria para prevalecer en la competición del crecimiento con otras bacterias es la capacidad de suprimir el crecimiento de otras bacterias en un ambiente de pH reducido. Esto significa una cepa bacteriana con fuerte capacidad de producción de ácido láctico. En particular, el ácido láctico producido en el sistema digestivo protege el cuerpo contra la invasión y proliferación de varias bacterias patógenas del exterior, y segundamente fomenta el peristaltismo en los intestinos, promoviendo la excreción de los residuos de los intestinos y suprimiendo la producción de productos de putrefacción. Se ha demostrado experimentalmente que un pH final de 4.0 o menor y una acidez máxima de 1.5% o mayor es una condición importante • para aumentar las funciones de los lactobacilos. Sin embargo, en la caso de la mayoría de los Lactobacillus casei conocidos el pH final no llega a 4.2 o menos y la acidez más alta es menor de 1.5%. Un ejemplo de un método a la alza para aumentar la productividad del ácido láctico es cultivar las bacterias anaerobioamenté por 48 a 72 horas a 37°C en un medio opaco que consiste de 3 g de CaC03 agregado al medio descrito arriba el cuál contiene 10 g de extracto de carne, 5 g de extracto de Levadura, 10 g de peptona, 0.2 g de MgS04-7H20, 0.5 g de MnS04 -5H20, 5 g de acetato de sodio, 2 g de citrato de diamonio, 2 g de KH2P04 y 20 g de glucosa por litro, que unen a las colonias, y que seleccionan repetidamente ésos con los anillos transparentes más anchos alrededor de ellos . Esto hace uso del hecho de que cuando el ácido láctico se produce, carbonato de calcio opago se une al ácido láctico y se transforman en lactato de calcio. El tubo digestivo se conecta al exterior vía un solo tubo, y una razón por la que las bacterias que viven en el ambiente áspero del mundo exterior no se establecen y no proliferan en el ambiente rico de alimento, ambiente suave de los intestinos tiene que hacer con la presencia de los ácidos de bilis secretados por la vesícula biliar. Por lo tanto, la mayoría de los medios de aislamiento y de selección para las bacterias intestinales tienen ácidos de bilis agregados a la composición para suprimir el crecimiento de otras bacterias. Según los resultados de los inventores, cuando la concentración de los ácidos de bilis tal como deoxicolato de sodio alcanza 0.1%, las bacterias intestinales continúan creciendo pero la mayoría de las bacterias que no viven en los intestinos no crecen. La especie Lactobacillus casei original fue capaz de crecer hasta una concentración de ácido de bilis de 0.2%, pero la conclusión se logró en parte por las razones siguientes que la actividad en el cuerpo requirió crecimiento en una concentración del ácido de bilis de 0.5%. Por lo tanto, una cepa bacteriana se desarrolló por el método ordinario por resistencia a las sales de bilis. Es decir, se comenzó agregando ácido de bilis al 0.2% al medio rico en nutrientes tal que el medio LBS de selección de ácido láctico y medio MRS de proliferación, y se aumentó la concentración del ácido de bilis en etapas a 0.5% según las bacterias crecieron. Una vez que una capa resistente se obtuvo se demostró para mantener su resistencia sin importar el tipo de medio, y también se demostró por primera vez en estos experimentos que la resistencia del ácido de bilis se correlaciona con la afinidad de la membrana mucosa. Es decir, según los aumentos de la resistencia del ácido de bilis o en otras palabras según la afinidad por los ácidos de bilis aumenta las bacterias se vuelven cada vez más capaces de colonizar las membranas mucosas fuera de los intestinos, tales como la cavidad bucal, la membrana mucosa nasal, la vagina y similares. La capacidad de producir antibióticos que impidan la supervivencia de otras bacterias es también importante. El Lactobacillus casei original produce un antibiótico de amplio espectro que no sólo impide el crecimiento de otras bacterias sino también se ha reportado por debilitar la toxicidad de bacterias patógenas, y el Lactobacillus casei de la presente invención conserva esta capacidad. Además, el Lactobacillus casei de la presente invención necesita ser resistente a los antibióticos extensamente usados, pero el Lactobacillus casei original es resistente a antibióticos, y el Lactobacillus casei de la presente invención conserva esta capacidad. La capacidad de utilizar los almidones presentes abundantemente en todo el mundo natural como fuentes de energía es deseable para la colonización, la supervivencia y la proliferación en cuerpos vivos. Sin embargo, la mayoría del Lactobacillus casei no son amilolíticos, o solo débilmente. La especie Lactobacillus casei original no es excepción y carece de capacidad amilolítica, pero por el proceso de aclimatación fue posible conferir alta capacidad amilolítica sin afectar la capacidad para descomponer la glucosa y lactosa, dando por resultado el Lactobacillus casei de la actual invención. Un ejemplo de un método a la alza para realzar la capacidad amilolítica es agregar 4.5 g de glucosa y 0.5 g de almidón (almidón con 10% de azúcares) a un medio nutriente de medio a bajo con un pH de 7.4 que consiste en 1 g de extracto de carne, 1 g de extracto de Levadura, 3 g de peptona, 1 g de NaCl, 0.5 g de K2HP04, 0.5 g MgS04 -7H20, 0.05 g de MnS04 -5H20, 1 g de acetato de sodio, 0.5 g de citrato de diamonio y 12 ml de BTB al 0.2% por litro, y entonces se cultiva anaeróbicamente por 48 horas a 37°C. El subcultivado entonces se repite en el medio de la misma composición, y si incluso una pequeña amilosis se confirma el porcentaje de almidón entonces se sube hasta el 20%. De esta manera, el porcentaje de almidón de los azúcares se elevan hasta el 100% conforme el subcultivo se repite, y la capacidad para descomponer el almidón se adquiere rápidamente de la misma manera como para la glucosa. En cualquier medio, el pH disminuye conforme los azúcares se descomponen para producir ácidos, y el color del medio cambia de azul a amarillo. Es importante seguir subcultivando hasta que la profundidad del amarillo del medio con el almidón agregado es igual que con glucosa al 100%. Afortunadamente, la mayoría de las bacterias que causan infecciones crónicas son incapaces de obtener energía de la ruptura del almidón, dando a la especie Lactobacillus casei esta capacidad particularmente eficaz como medida contra las infecciones . La clorella es una planta unicelular con fuerte vitalidad que continúa fotosintetizando y produciendo generaciones por división celular repetida por más de mil millones de años en este planeta, y se considera como el antepasado de una variedad de plantas vivientes. Es decir, se puede decir que la clorella es la forma original y la fuente de vida en la tierra. Si un lactobacilo promueve el crecimiento y proliferación de la clorella, significa que las sustancias producidas por este lactobacilo activan y que tienen un efecto restaurativo en las células vivas, así obviamente deben también ser eficaces para los cuerpos vivos que son acumulaciones de células. Se ha sabido por décadas que los productos metabólicos de la clorella promueven la proliferación de lactobacilos, pero no se ha reportado hasta ahora que inversamente, los productos metabólicos de lactobacilos estimulan la proliferación de la clorella. Por lo tanto, como ejemplo de un método a la alza para aumentar la capacidad de promover el crecimiento de la clorella, un medio con un pH de 6.8 que consiste en 5 g de peptona, 2 g de extracto de carne, 5 g de glucosa, 5 g de extracto de Levadura, 2 g de KN03, 2 g de K2HP04, 0.1 g de MgS04-7H20, 0.1 g de CaCl2 -2H20, 0.1 g de NaCl, 0.01 g de MnS04-5H20, 0.05 g de ZnS04-5H20, 3 g de CaC03 y 15 g de agar por litro se esterilizaron bajo alta presión por 15 minutos a 120 °C y se enfriaron a alrededor de 50 °C después de la esterilización, una cantidad conveniente de clorella cultivada pura se agregó y se mezcló uniformemente, y la mezcla se vertió a los cajas de petri. Después de 48 a 72 horas de precultivo en una incubadora encendida a 28° C, la especie Lactobacillus casei original dispersa en la solución salina esterilizada se aplicó al medio y se subcultivó aerobia y anaerobicamente (un pegueño % de C02) de 28°C a 32°C con luz. Esto se observó cada 24 horas para determinar si la clorella alrededor de las colonias de proliferación del Lactobacillus casei prolifera más densamente que en otras áreas . Las colonias que exhiben incluso la más ligera de tal tendencia se cosecharon repetidamente para preparar la especie Lactobacillus casei de la actual invención la cual promueve el crecimiento de la clorella. Un amplio rango de presiones de oxígeno, temperaturas y valores de pH posibles para el crecimiento es también una condición deseable para adaptarse y competir con éxito en ambientes ásperos, y esto se puede alcanzar por un método ordinario de aclimatación con la selección de un medio apropiado. Las diferencias entre los conocidos, Lactobacillus casei convencional, la especie Lactobacilo casei original y la especie Lactobacillus casei de la actual invención se demuestran en la tabla 1. Según lo demostrado en la tabla 1, porque la especie Lactobacillus casei de la actual invención la cual se sometió a revisión por selección y aclimatación tiene propiedades únicas no presentes en el Lactobacillus casei conocido o en la especie Lactojbacilo casei original, cuando se utiliza en un cuerpo vivo la especie Lactobacillus casei de la actual invención puede no proporcionar solamente los efectos dramáticos no obtenidos de los varios productos del ácido láctico empujándose entre sí en estantes de alimento y estantes de alimento natural, pero puede actuar claramente para restaurar, mantener y aumentar la salud y para producir efectos económicos tales como la mejora de calidad y similares cuando se utiliza en plantas y animales, y puede ser muy eficaz contra las infecciones. La preparación del lactobacilo de la actual invención se puede así llamar una preparación del lactobacilo activante del cuerpo vivo o un agente preventivo o terapéutico contra la infección en animales y plantas.

[Tabla 1] Comparación de las propiedades de diversas especies de lactobacillus casei Continuación Tabla 1 La placa que es la causa de la enfermedad periodontal se dice ser una acumulación de cerca de 400 tipos de bacterias, de las cuales las más patógenas para la enfermedad periodontal se han demostrado ser Poryphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia y Actinobacillus actinomycetemcomi tans, con Walinella recta, Bacteroides forsythus, Eikenella corrodens, Fusobacteria, Treponema y similares que son implicadas como accesorios. La especificidad de la enfermedad periodontal es el factor mayor que hace difícil el curar esta enfermedad. Porque los dientes están conectados directamente con el interior del cuerpo, cuando una reacción inflamatoria es severa el cuerpo no intenta curar la enfermedad periodontal sino que en cambio forma surcos profundos en los límites entre los dientes y las encías, destruyendo el tejido que soporta los dientes y que sacrifica los dientes por proteger al cuerpo como una lagartija que vive con su cola cortada. Es decir, no es un enemigo externo que destruye el tej ido que soporta los dientes sino la inflamación en sí, la cual es un medio para proteger al cuerpo contra el enemigo externo. Las raíces de los dientes las cuales son contaminadas y penetradas por toxinas bacterianas y enzimas no son reconocidas como una misma por el cuerpo, que actúa para excluirlas como factores causativos junto con el tejido circundante. Es decir, una reacción curativa agrava realmente la enfermedad periodontal. Por lo tanto, una vez que todos los dientes afectados con la enfermedad periodontal se caen, la enfermedad se cura totalmente. Otros factores incluyen (1) el hecho de que la cavidad bucal es un ambiente conveniente para el crecimiento y la proliferación de bacterias, y es difícil de mantener limpia, y en particular las bacterias con patogenicidad periodontal fuerte se adhieren fuertemente a los dientes y las encías produciendo glucanos pegajosos, fructanos y otros polisacáridos insolubles, sustancias que también sirven como barrera para proteger los patógenos periodontales, (2) el hecho de que puesto que las toxinas y las enzimas que producen penetran inadvertidamente en el tejido periodontal, la enfermedad progresa con pocos síntomas subjetivos, y la aparición de síntomas no es uniforme sino implica una variedad de factores incluyendo manchas alrededor de los dientes, inflamación, contracción de la encía, envejecimiento y similares, mientras que una vez que las bolsas de la encía se han formado no se cierran generalmente lo cual en combinación con (1) arriba conduce a la re-ocurrencia repetida, (3) el hecho de que pocos dentistas emprenden terapia usando medicamentos apropiados en cooperación con los especialistas en bacteriología, (4) el hecho de que los doctores y los pacientes asumen que en el peor caso los dientes se pueden retirar, y (5) el hecho de que la enfermedad periodontal no es un problema local sino una enfermedad sistémica que implica a menudo por ejemplo la diabetes y otros desórdenes endocrinos, desórdenes genéticos, estrés, osteoporosis, desórdenes circulatorios y similares, y no puede ser curada totalmente simplemente por terapia sintomática. La enfermedad periodontal implica muchos factores perjudiciales, y se considera incurable a menos que el tratamiento se comience en etapas tempranas . Actualmente, la forma primaria de terapia temprana es el tratamiento tal que la planificación de escalamiento y de la raíz para remover la placa y cálculo, los cuales son semilleros de la enfermedad periodontal . El cálculo supragingival que se adhiere a las superficies de los dientes por encima la línea de la encía es relativamente fácil de remover, pero el cálculo subgingival que se adhiere a las superficies (raíces) de los dientes por debajo de la línea de la encía es denso y duro, de color negruzco-verde y fuertemente adhesivo, y las bacterias y sus toxinas no pueden removerse fácilmente simplemente por el cepillo. Por lo tanto, métodos se han adoptado recientemente para destruirlo eficientemente con ultrasonido o lásers o disolviéndolo con productos químicos especiales. Después de eso, un desinfectante o un antibiótico se inyecta y se fija en la bolsa periodontal hasta que la inflamación se cure. Sin embargo, cuando el sitio de la inflamación es profundo y la terapia ya mencionada no produce resultados favorables, el sitio de la inflamación o daños se elimina por cirugía. Posteriormente, las encías se suturan o se reconstruyen con material artificial. Técnicas más recientes incluyen cirugía según para métodos GTR (regeneración de tejido dirigida) y aplicación de un tipo de proteína llamada Emdogain como un adjunto a la cirugía para reconstruir un ambiente similar al proceso de la regeneración del diente y promover la regeneración del tejido periodontal, pero éstas no son eficaces contra todos los casos avanzados de la enfermedad periodontal, y su aplicación es limitada. En cualquier caso, actualmente el tratamiento básico para la enfermedad periodontal se dirige al control de la inflamación de las encías, a frenar el progreso de la enfermedad periodontal, a la regeneración del tejido periodontal perdido, a la mejora de la apariencia externa y mantenimiento de tejido nuevamente regenerado, pero como se mencionó arriba la enfermedad periodontal también implica factores de riesgo sistémicos, y desafortunadamente no hay terapia actualmente que sea bastante eficaz para ser un favorito, y muchos dentistas están contentos si pueden mantener la situación de volverse peor.

El desinfectante bactericida discutido en la actual invención (a continuación, "este desinfectante bactericida") es un desinfectante bactericida que contiene de 500 ppm a 1,500 ppm de iones férricos, 500 ppm a 2,000 ppm de ácido L-ascórbico y 200 ppm a 2,000 ppm de uno o dos de ácido sórbico, ácido benzoico y éster de ácido paraoxibenzoico como componentes principales . Se ha concedido ya una patente de los Estados Unidos de América (6296881B1) , y sus componentes se reconocen en Japón como aditivos alimenticios. Actualmente, los desinfectantes usados extensamente por las instituciones médicas incluyen los alcoholes, fenoles, compuestos de halógenos, sales de amonio cuaternario, compuestos biguanida, aldehidos y similares, pero ninguno cumple todas las condiciones de acción bactericida excelente, seguridad y baja toxicidad, sostenibilidad excelente y bajo costo. Por ejemplo, el compuesto biguanida que tiene el nombre comercial "Hibitane" es un desinfectante excelente cuya baja toxicidad y alta eficacia lo ha hecho un más vendido mundialmente por décadas, pero tiene poco efecto sobre los hongos y ningún efecto en los bacilos y esporas tuberculosas . Algunas bacterias comunes también han desarrollado resistencia, y son una causa de las infecciones hospitalarias. Por otra parte, "este desinfectante bactericida, " el cual se desarrolló para completar las lagunas del tratamiento convencional, mata a la mayoría de las bacterias y los hongos en solamente 10 segundos, y es capaz de destruir incluso las esporas en 1 a 120 minutos. A pesar de sus excelentes propiedades bactericidas, sin embargo, su toxicidad es más baja que la de cualquier otro desinfectante existente según lo demostrado abajo. (1) Efectos en la piel: Ninguna anormalidad aparece por la aplicación en los talones (talonera) de ratones dos veces al día por 6 meses. (2) Efectos de la administración oral: lml/ratón se administró pero no se observó ninguna toxicidad. Esta dosis corresponde a 1.8 L para un ser humano. La DL50 (dosis letal) estimada es 10 ml/ratón, la cual corresponde a 18 L para un ser humano. (3) Efectos de la administración intraperitoneal: La DL50 es cerca de 1 ml/ratón (4) Efectos en las células (animales) cultivadas: Una dilución de 103x de la concentración para el uso no inhibieron la proliferación de la célula. Esta es cerca de 1/10 de la toxicidad de Hibitane. (5) Efectos en los seres humanos: a) Desinfección de manos y dedos: No se observaron ninguna anormalidad incluso después de 7 años de uso diario, aparte de un enrojecimiento leve de la piel. b) Gárgaras: No se observó ninguna anormalidad de las membranas mucosas después de 7 años de hacer gárgaras cada mañana y noche, y ningún efecto secundario o toxicidad aparecieron. Además, ninguna cavidad ocurrió durante ese período y no era necesario consultar a un dentista. Los siguientes son los resultados de varias pruebas de "este desinfectante bactericida" con respecto a la enfermedad periodontal . "Este desinfectante bactericida" se preparó preparando una solución acuosa de hexahidrato de cloruro férrico a 3,000 ppm (FeCl3 • 6H20) como Fe3+, una solución acuosa de ácido L-ascórbico con una concentración de 3,000 ppm y una solución acuosa de sorbato de potasio con una concentración de 1,500 ppm, y mezclando cantidades iguales de estas soluciones acuosas. (Ejemplo de prueba 1) Una suspensión (solución salina de 1 x 109 células/ml) de la bacteria a prueba se preparó, y 2% en peso de "este desinfectante bactericida" se gotearon a este líquido celular. Las células se cosecharon sobre tiempo con un lazo de platino, se sembraron en el medio de crecimiento bacteriano y se cultivaron en un ambiente óptimo, y los efectos bactericidas se observaron de acuerdo a la presencia o ausencia de la proliferación bacteriana. El desinfectante bactericida usado en la prueba se fijó a la concentración comúnmente usada. Los resultados después de 10 a 60 segundos de contacto y los resultados después de 1 a 120 minutos de contacto se muestran en la tabla 2. Como es claro de la tabla 2, "este desinfectante bactericida" mató a la mayoría de la especie bacteriana en sus formas activas en aproximadamente 10 segundos. El fuerte patógeno periodontal P. gingivalis, P. intermedia y A. actimomycetemconi tans no fueron la excepción. Sin embargo, matar a las esporas de bacterias de esporulación tomó de 1 a 120 minutos dependiendo de la etapa de formación. De acuerdo a la estadística, el tiempo que toma lavarse las manos y hacer enjuagues a los trabajadores médicos y otros es de 10 a 15 segundos, y en este contexto "este desinfectante bactericida" es altamente eficaz. Cuando la misma prueba se realizó usando el compuesto biguanida Hibitane, solución de peróxido de hidrógeno al 3% y Acrinol, los cuales son los desinfectantes utilizados extensamente en hospitales y consultorios de dentistas, se requirió de 30 a 60 segundos, y según lo mencionado antes Hibitane fue ineficaz contra la micobacteria y las esporas, mientras que la solución de peróxido de hidrógeno del 3% fue también ineficaz contra las esporas y tomó 1 minuto o más matar la micobacteria. Los resultados para el acrinol fueron similares a ésos para la solución de peróxido de hidrógeno al 3%.

[Tabla 2] Efectos bactericidas del desinfectante bactericida Efecto bactericida (presencia o ausencia de crecimiento bacteriano) Tiempo de contacto Segundos Minutos 10 20 30 60 1 30 60 120 BACTERIAS Gram- ositi a Estafilococo áureo S. Aureus (SARM) S. Pyogenes (estreptococo beta- emolítico del grupo A) Pneumoniae Enterococo faecalis Corynebacterium diphtheriae Listeria monocytogenes BACTERIAS Gram-negativa Gonorreas de Neisseria Efecto bactericida (presencia o ausencia de crecimiento (Ejemplo de Prueba 2) En general, se sabe que los efectos de los desinfectantes se reducen por la contaminación con materia orgánica, particularmente con proteínas, así los efectos bactericidas en presencia de materia orgánica se investigaron. Primero, el extracto de leche desnatada y de Levadura se agregaron cada uno a "este desinfectante bactericida" en cantidades de 1 ppm, 50 ppm y 100 ppm, mientras que al mismo tiempo 2% en peso de una solución salina fisiológica de 1 x 109 células/ml de SARM o E. coli 0-157 como la bacteria de prueba se goteó en estas soluciones acuosas . El tiempo de contacto entre la bacteria de prueba y "este desinfectante bactericida" fue de 10 segundos a 5 minutos, y 10 µl de muestras del líquido de la bacteria de prueba mezclada se recolectó sobre tiempo, se sembró en el medio apropiado y se cultivó a 37°C para evaluar los efectos bactericidas de acuerdo a la presencia o ausencia de crecimiento bacteriano. Los resultados son como se muestran en la tabla 3. La presencia de materia orgánica no tuvo ningún efecto cuando la concentración de la materia orgánica era de 1 ppm, pero cuando la concentración de la materia orgánica fue de 50 ppm o más tuvo un efecto leve. La misma prueba también se realizó con la especie bacteriana aparte de los dos mencionados arriba, con resultados similares. La misma prueba también se realizó usando los desinfectantes usados comúnmente en los consultorios de los dentistas, pero a concentraciones encima de 50 ppm las bacterias no murieron después de 1 minuto de contacto con Hibitane, y sobrevivieron a 5 minutos de contacto en algunos casos dependiendo del tipo y cantidad de materia orgánica. Los resultados obtenidos con la solución de peróxido de hidrógeno al 3% y acrinol fueron similares a ésos para Hibitane. [Tabla 3] Efectos bactericidas en presencia de orgánica 100 PPM + Extracto de Levadura 1 PPM 50 PPM + 100 PPM + (Ejemplo de Prueba 3) Se investigó si en el proceso de putrefacción después de la preparación del alimento, rociar "este desinfectante bactericida" en el alimento detendría el progreso de la putrefacción, y cuál sería la magnitud de ese efecto bactericida. Los desinfectantes no se aplican normalmente al alimento después de la preparación, pero las sobras del alimento a menudo se abren camino a las bolsas periodontales, proporcionando una fuente de nutrición para las bacterias, y puesto que los ingredientes en "este desinfectante bactericida" son los compuestos que se reconocen como aditivos alimenticios, es importante determinar estos efectos. "Arroz cocido", "tofu", "espinaca con sésamo", y "carne y verduras fritas" inmediatamente después de prepararse se machacaron como las muestras, se homogeneizaron, y se dejaron a 28 °C. Después de 5 horas, se tomó parte de cada muestra para contar las bacterias vivas, mientras que en el resto de cada muestra se roció a fondo con el desinfectante. Las células vivas se contaron 1 hora, 2 horas y 24 horas después del rociado. Se roció agua sola como medio de control . Después de que cada una de las muestras se dejó por 24 horas, se tomó una parte para contar las células vivas mientras que el resto de cada muestra se roció a fondo con cada desinfectante. Como cuando las muestras se dejaron por 5 horas, las células vivas se contaron 1 hora, 2 horas y 24 horas después del rociado. Se roció solamente agua como medio de control. Se contaron las células vivas por el método de vertido en placa usando 5 g de cada muestra, la cual se tomó y diluyó por métodos ordinarios . El grado de putrefacción difiere naturalmente según el método de preparación, material de alimento y ambiente. En caso de estas muestras, la cuenta de células vivas en el arroz cocido fue de 2 x 10 células/g de la muestra inmediatamente después de la preparación, 1 x 103 células/g de la muestra después de 5 horas, 5 x 105 células/g de la muestra después de 24 horas, y 7 x 106 células/g de la muestra después de 48 horas. En caso del tofu la cuenta de células vivas inicial fue de 2 x 104 células/g de la muestra, pero ésta se elevó a 8 x 105 células/g de muestra después de 5 horas, 9 x 107 células/g de la muestra después de 24 horas y 1 x 109 células/g de la muestra después de 48 horas, con un nivel más alto de putrefacción. En el caso de la espinaca con sésamo, la cuenta fue 2 x 103 células/g de la muestra inmediatamente después de la preparación, elevándose a 5 x 104 células/g de la muestra después de 5 horas, 3 x 107 células/g de la muestra después de 24 horas y 2 x 108 células/g de la muestra después de 48 horas. En el caso de la carne y verduras fritas, la cuenta fue 5 x 10 células/g de la muestra inmediatamente después de la preparación, elevándose a 2 x 103 células/g de la muestra después de 5 horas, 2 x 108 células/g de la muestra después de 24 horas, en cuyo punto aparece un olor leve de la putrefacción, y de 3 x 109 células/g de la muestra después de 48 horas, por cuyo punto la putrefacción ha progresado a un nivel más alto. Los resultados de la prueba se demuestran en la tabla 4. Cinco horas después de la preparación cuando las bacterias no han proliferado mucho, el rociado del desinfectante redujo inmediatamente cuentas de células de 1/100 a 1/200, con algunas diferencias dependiendo del tipo de alimento preparado. Después de 1 hora esto disminuyó de 1/1000 a 1/5000 del conteo original, y después de 2 horas las células han muerto, con cuentas de 10 células/g de la muestra o menos . Las bacterias sobrevivientes no proliferaron incluso después de 24 horas. En la carne y otros alimentos ricos en proteínas, 7 x 102 células/g de la muestra (cerca de 1%) sobrevivieron 2 horas después de rociar el desinfectante. 24 horas después de la preparación las cuentas de células eran del orden de 107 a 108, pero éstas cayeron de 1/1000 a 1/10,000 inmediatamente después de rociar el desinfectante, de 1/10,000 a 1/500,000 después de 1 hora y de 1/300,000 a 1/2,000,000 después de 2 horas. La cuenta de células en este punto fue de cerca de 102 células/g de la muestra. Después de 24 horas la cuenta de células fue ligeramente más alta que después de 2 horas, pero ésta no se consideró reflejar tanto la proliferación de las bacterias sobrevivientes como las bacterias que se precipitaban del aire. Por lo tanto, el bactericida se logró en general aunque no fue una erradicación completa. Es decir, hay un efecto bactericida y un efecto de supresión en el crecimiento de bacterias putrefactas en el alimento. La misma prueba se realizó usando desinfectantes usados extensamente en los consultorios de dentistas además de "este desinfectante bactericida, " con los resultados mostrados en la tabla 4. Cuando Hibitane se roció, la razón de disminución de la cuenta de células inmediatamente después de rociar fue menor que lo logrado con "este desinfectante bactericida, " aunque la tendencia fue la misma. Sin embargo, este efecto se debilitó sobre tiempo y las bacterias comenzaron a proliferar de nuevo. Es decir, aunque el crecimiento de bacterias putrefactas en alimento se suprimió hasta cierto punto, no hubo un efecto bactericida verdadero. Además, la mayoría de las bacterias sobrevivieron inmediatamente después de rociar una solución de peróxido de hidrógeno al 3%, y después de 24 horas el alimento estaba en el punto de putrefacción.

[Tabla 4] Aumentos y disminuciones de desinfectantes inducidos en las cuentas de células en alimentos preparados Los datos para "este desinfectante bactericida" en los ejemplos de prueba 1 a 3 sugieren el potencial para un efecto bactericida fuerte contra los patógenos periodontales ocultados en bolsas periodontales. Por el contrario, los desinfectantes usados ampliamente en odontología son algo eficaces cuando los patógenos periodontales no tienen una barrera, pero cuando se forma placa o cálculo y cuando hay una fuente alimenticia tal como materia orgánica o residuo de alimento, sus efectos son mucho menores . De acuerdo con los resultados de pruebas anteriores, se probó la eficacia de cada desinfectante bactericida usando como material de prueba placa, la cual se considera como la causa del origen de la enfermedad periodontal . (Ejemplo de Prueba 4) La placa que se adhiere al cálculo supragingival se recolectó, corte de las secciones a un grueso de 200 µm y la capa de placa pulverizada a un tamaño de grano de 10 µm se empapó en 1 ml de "este desinfectante bactericida, " y los números de células vivas contenidas en esto se midieron sobre tiempo por métodos ordinarios. Los resultados se muestran en la tabla 5. La cuenta de células vivas de 4xl09 células contenidas en 20 mg de secciones de placa se redujo por 3/4 después de 1 minuto de inmersión, bajando a 1/5,000 del conteo celular original después de 5 minutos, y después de 10 minutos todas las bacterias murieron. Todas las bacterias en la placa pulverizada se eliminaron en menos de 3 minutos. Es decir, se demostró que "este desinfectante bactericida" rompe a través de la barrera, penetrando el interior de la placa y tiene un efecto bactericida en bacterias en esto. En el caso de Hibitane (gel de Hibitane) , la solución de peróxido de hidrógeno al 3% y acrinol, los cuales se utilizan ampliamente en el campo dental, las bacterias en la superficie de la placa se eliminan principalmente en menos de 3 minutos, pero las bacterias dentro de la placa soportaron incluso 60 minutos de inmersión, con la mitad de las células que sobrevivieron. Esto significa que no se podrían dañar definitivamente la placa, la cual es una agregación de bacterias. Cuando la misma prueba se realizó usando la placa que se adhiere al cálculo subgingival (denso y duro) , todas las bacterias se eliminaron en aproximadamente 15 minutos en el caso de la placa en forma de placa y en menos de 3 minutos en el caso del polvo. Por el contrario, cuando Hibitane y similares se utilizaron las bacterias dentro de la placa aguantaron 60 minutos de inmersión y sobrevivieron según lo descrito arriba. [Tabla 5] Cambios inducidos por el tratamiento desinfectante bactericida en el conteo de células vivas en placa Después, considerando los casos en los cuales la materia orgánica adicional se adhiere o contamina la placa que se adhiere al cálculo, se mezcló 20 mg de placa con 20 mg de extracto de Levadura y se realizó una prueba por los métodos descritos arriba. Los resultados se muestran en la tabla 6. Hubo poco efecto de la materia orgánica, con el conteo celular bajando a aproximadamente 1/2,000 de la cuenta original después de 5 minutos de inmersión y todas las bacterias que se eliminaron después de 10 minutos de inmersión en el caso de la placa en forma de placa. En el caso de la placa pulverizada, todas las bacterias se eliminaron después de 3 minutos de inmersión. Por el contrario, con la desinfección con desinfectantes usados comúnmente de la superficie de la placa tomó 10 minutos debido a la presencia de materia orgánica, y la mayoría de las bacterias internas sobrevivieron. Es decir, se demostró que a menos que la placa esté totalmente eliminada en el tratamiento, no obstante una mejora temporal se observe el problema ocurrirá de nuevo repetidamente . [Tabla 6] Cambios inducidos por en el tratamiento desinfectante bactericida en el conteo de células vivas en placa y materia orgánica Como es claro de los varios resultados de pruebas obtenidos en los ejemplos de prueba 1 a 4 de arriba, "este desinfectante bactericida" causa daño severo en las bacterias sobrevivientes en forma activa en varios ambientes . Los patógenos periodontales de la enfermedad que viven en bolsas periodontales y que se ocultan en la placa difícil de remover no son ninguna excepción, y se ha demostrado que la inyección de "este desinfectante bactericida" en estos casos destruye las bacterias dentro de segundos a cerca de 10 minutos, con algunas diferencias dependiendo de la etapa de crecimiento y del tipo de placa. Además, se debe mencionar que en las pruebas en animales y los experimentos en humanos tales como ésos descritos arriba, "este desinfectante bactericida" demostró tener efecto perjudicial muy pequeño en las células y tejido, y promover la regeneración del tejido. (Ejemplo de Prueba 5) Aproximadamente 1 cm2 de piel de ratón se peló y varios desinfectantes bactericidas a concentraciones ordinarias se aplicaron a las heridas usando algodón absorbente cada mañana y noche. Se aplicó agua como medio de control. Los resultados se muestran en la tabla 7. En el caso del ratón de control tomó 5 días para que se regenerara una piel fina sobre la herida, 12 días para que la piel recuperara su grueso original, y 35 días para que el pelo creciera de nuevo, mientras que con el uso de "este bactericida desinfectante" tomó 4 días para la herida cerrara, 10 días para que la piel recuperara su grueso original y solamente 30 días para que el pelo creciera de nuevo. Estos resultados concuerdan con ésos obtenidos con el tinte de yodo, significando que tanto "este desinfectante bactericida" y el tinte de yodo promueven la regeneración del tejido. Por el contrario, con el uso de gel de Hibitane, solución de peróxido de hidrógeno al 3% y acrinol, los cuales se utilizan extensamente en odontología, llevó 5 días para que se formara una piel fina, 12 a 15 días para que la piel recuperara su grueso original y 40 días para que el pelo creciera de nuevo. Es decir, estos desinfectantes actúan como venenos que suprimen la regeneración del tejido fino. [Tabla 7] Recuperación bactericida de desinfectante inducido de las heridas de la piel (Ejemplo de Prueba 6) Cuando las diluciones de "este desinfectante bactericida" se agregaron al medio, como se muestra en la tabla 8, estimularon el crecimiento del bacilo del ácido láctico usado en la actual invención. Es bien sabido que el crecimiento de lactobacilos se promueve por la adición de ácido acético, pero es sorprendente que un desinfectante bactericida con acción bactericida deba tener un efecto promotor del crecimiento incluso en la dilución. Sin embargo, como se muestra en la tabla 9, patógenos periodontales de la enfermedad y otras bacterias patógenas no se afectan de esta manera. Esto significa que si "este desinfectante bactericida" primero se inyecta en una bolsa periodontal la cual después se lava con agua y se llena con la especie Lactobacillus casei novedosa (a continuación, "lactobacilo novedoso") de la actual invención la cual tiene capacidades únicas según lo descrito abajo, el crecimiento del "lactobacilo novedoso" se estimulará, realzando los efectos terapéuticos contra la enfermedad periodontal. Por el contrario, cuando desinfectantes ampliamente utilizados se agregan al medio en diversas concentraciones, el crecimiento bacteriano se suprime a veces pero nunca se estimula. Por otra parte, el componente principal Fe3+ de "este desinfectante bactericida" se absorbe en las superficies del diente y sirve como barrera para protegerlos contra la re-adhesión de patógenos periodontales. Además, debido a que tiene un efecto astringente, la secreción de líquido del surco periodontal que proporciona una fuente nutriente para los patógenos periodontales se reduce temporalmente, así suprime el crecimiento y la proliferación cortando parte de la fuente nutriente para los patógenos periodontales ocultos dentro de los surcos . [Tabla 8] Efecto de este desinfectante bactericida en el crecimiento de los bacilos del ácido láctico Dilución normal de la concentración de este desinfectante bactericida contenido en el medio 1/10 1/30 1/50 1/100 1/200 1/300 1/500 "Lactobacilo ± novedoso" (L. casei) + ++ + + ± Otro L. casei - ± + + ± ± L. acidophilus - + + + ± ± L . Pluntarum - + + + ± ± L. Burgaricus - ± + + + ± L. Salivarius - + + + ± ± L . Fermentum - ± + + ± + Crecimiento suprimido + Crecimiento ni suprimido ni promovido + Crecimiento promovido [Tabla 9] Efecto de este desinfectante bactericida en el crecimiento de bacterias patógenas Dilución normal de la concentración de este desinfectante bactericida contenido en el medio 1/10 1/30 1/50 1/100 1 /200 1/300 1/500 P. gingivalis - ± + ± ± ± P . intermedia - ± ± ± ± ± A. actinomycetem - ± + + S . aureus - ± ± ± ± ± S . pyogenes - ± ± ± ± ± E. coli 0-157 - ± ± ± ± ± S. enteritidis - ± ± ± ± ± Ps . Aeruginosa - ± + ± ± ± V. parahaemoliticus - ± + ± ± ± Crecimiento suprimido + Crecimiento ni suprimido ni promovido + Crecimiento promovido Ejemplos La actual invención se explica detalladamente abajo basada en ejemplos, pero la esencia de la actual invención +1 no se limita a éstos . Los procesos de fabricación se pueden cambiar, y cualquier número de células se puede obtener por +1 supuesto usando un suplemento o excipiente conocido. La preparación se puede formular de cualquier manera junto con excipientes apropiados, como por ejemplo polvos, granulos, cápsulas o similares.

(Ejemplo de Fabricación 1) El lactobacilo casei (FERM BP-10059, FERM P-19443) de la actual invención se sembró en 10 L del medio de pH 7.2 que contiene 10 g de peptona, 5 g de extracto de carne, 5 g de extracto de Levadura, 10 g de lactosa, 2 g de K2HP04, 0.1 g de MgS04-7H20, 1 g de NaCl, 2 g de citrato de diamonio, 5 g de acetato de sodio, 3 g de CaC03, 0.3 g de MnS04-5H20, 0.03 g de FeS04-7H20 y 1 g de L-cisteína por litro, y se cultivó anaeróbicamente por 72 horas a 37°C. Después de la terminación del cultivo, el líquido del cultivo se filtró con papel filtro para remover el CaC03, y 3 L del líquido filtrado se refrigeraron mientras que el líquido restante se centrifugó para obtener un sobrenadante y una masa bacteriana de 8.4 g. Esto entonces se lavó en 420 ml de solución salina fisiológica, y se centrifugó dos veces. La masa bacteriana purificada resultante se puso en una solución que consistía en 70 g de leche desnatada, 20 g de almidón soluble, 0.5 g de glutamato de sodio, y 1000 ml de agua purificada, se agitaron, y se liofilizaron al vacío por medios ordinarios para obtener 101 g de la preparación bacteriana. Cuando se midieron, el conteo celular de esta preparación bacteriana fue de 2.5xl010 células/g. La preparación resultante consistió en 101 g de células bacterianas liofilizadas (incluyendo preservativo) , 3000 ml de líquido del cultivo y 6700 ml de filtrado del cultivo (líquido desinfectado) . (Ejemplo de Fabricación 2) El lactobacilo casei (FERM BP-10059, FERM P-19443) de la actual invención se sembró en 10 L del medio de pH 6.8 que contiene 3 g de casaminoácidos , 2 g de extracto de Levadura, 50 ml de jugo de tomate, 2 g de glucosa, 1 g de NaCl, 1 g de KH2P04, 0.7 g de MgS04-7H20, 1 g de CaCl2-2H20, 0.5 ml de Tween 80 y 0.5 g de almidón soluble por litro, y se cultivaron en un cultivo anaerobio facultativo por 96 horas a 30°C. Después de la terminación del cultivo, 3 L del líguido del cultivo se refrigeraron mientras que los 7 L restantes se centrifugaron para obtener un sobrenadante y una masa bacteriana de 5.6 g. Esto entonces se lavó en 280 ml de solución salina fisiológica, y se centrifugó otra vez. 2.6 g de la masa bacteriana purificada resultante se mezclaron bien con 10.4 g de almidón de papa, y se refrigeraron. Los 3 g de masa bacteriana purificada restantes se colocaron en una solución que consistía en 15 g de leche desnatada, 15 g de almidón soluble, 5 g de trehalosa, 0.2 g de cisteína y 500 ml de agua purificada, se agitaron, y se liofilizaron al vacío por medios ordinarios para obtener 39 g de la preparación bacteriana.

Cuando se evaluó, el conteo celular de esta preparación bacteriana fue de 2 x 1010 células/g. La preparación resultante consistió en 39 g de células bacterianas liofilizadas (incluyendo preservativo) , 13 g de células bacterianas húmedas (que incluyen preservativo) , 3000 ml de líquido del cultivo y 6700 ml de filtrado del cultivo (líquido desinfectado) . (Ejemplo de Fabricación 3) El lactobacilo casei (FERM BP-10059, FERM P-19443) de la actual invención se sembró en 5 L del medio que contiene 100 g de leche desnatada y 1 g de trehalosa por litro el cual se ha ajustado a pH de 6.8, y se cultivó en un cultivo anaerobio facultativo por 72 horas a 37°C. Después, 75 g de trehalosa se agregaron a este líquido del cultivo (yogur) , que se agitó bien y se liofilizó al vacío por métodos ordinarios para obtener 590 g de la preparación bacteriana. Cuando se contaron, el conteo celular de esta preparación bacteriana fue de 5 x 109 células/g. La preparación bacteriana resultante contuvo células bacterianas y productos de la fermentación de la leche desnatada. (Ejemplo de fabricación 4) Para preparar la preparación del lactobacilo novedoso (FERM BP-10059, FERM P-l9443) de la actual invención, el lactobacilo novedoso resistente a antibióticos (FERM BP-10059, FERM P-19443) de la actual invención se sembró en 10 L del medio de pH 7.2 que contiene 5 g de peptona, 3 g de extracto de carne, 2 g de extracto de Levadura, 1 g de CGF, 5 g de almidón, 1 g de lactosa, 2 g de citrato de diamonio, 3 g de acetato de sodio, 0.2 g de MgS0-7H20, 0.03 g de FeS0-7H20 y 1 g de L-cisteína por litro, y se cultivó anaeróbicamente por 3 días a 37°C. Después de la terminación del cultivo, el líquido del cultivo se filtró con papel filtro para remover el CaC03 y entonces se centrifugó, y 7.8 g de las células bacterianas resultantes se dispersaron en 370 ml de solución salina fisiológica y se centrifugaron de nuevo dos veces. La masa celular purificada resultante se dispersó en 450 ml de solución de almidón al 5% previamente esterilizada, y se liofilizó al vacío por métodos ordinarios para obtener 30 g de la preparación del lactobacilo novedoso. El contenido de célula viva de esta preparación bacteriana fue de 1 x 1011 células/g. (Ejemplo de Fabricación 5) Los cuerpos purificados de células fabricados en el ejemplo de fabricación 4 se mezclaron con 15.7 ml de aceite de oliva para fabricar una preparación de aceite. El contenido de células vivas de esta preparación bacteriana fue de 2 x 1011 células/g. 10 g de esta preparación de aceite se mezclaron con 10 g de ungüento hidrofílico para fabricar una crema del lactobacilo. Después, 400 mg de amoxicilina (AMPC) , 100 mg de eritromicina (EM) , 100 mg de fradiomicina (FRM) y 100 mg de cefaclor (CCL) como antibióticos se mezclaron con la crema del lactobacilo para fabricar una crema del lactobacilo que contiene antibiótico. (Ejemplo 1) La velocidad y el porcentaje de las mutaciones S-R en E. coli 0-157 debido a los efectos de antibióticos que debilitan a las toxinas producidos por el Lactobacillus casei cuando tanto E. coli 0-157 y Lactobacillus casei estaban presentes se investigaron por medio de un cultivo mixto de E. coli 0-157 y la especie Lactobacilo casei original (FERM BP-6971) y un cultivo mixto de E. coli O-157 y la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) . El medio se compuso de 5 g de extracto de carne, 1 g de extracto de Levadura, 5 g de peptona, 2 g de NaCl, 1 g de CaC03 y 2 g glucosa o almidón por litro, con el pH ajustado a 7.2. El cultivo era anaerobio a 37°C, con subcultivos cada 72 horas los cuales se diluyeron y aplicaron cada vez al medio de la placa. Se observaron las colonias resultantes, y los números de los tipos S (originales) y tipos R (debilitados en toxinas) se contaron y se compararon los porcentajes. Los resultados se muestran en la tabla 10 y la tabla 11. Como se muestra en la tabla 10, cuando la glucosa se utiliza según las cuentas de células de azúcar fluctúan grandemente con subcultivar cuando E. coli 0-157 se subcultivó junto con el Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) . De alrededor del 5o subcultivo el tipo R apareció (30%) y el porcentaje del tipo R aumentó conforme continuó el subcultivo, de modo que todas las bacterias fueron del tipo R por el subcultivo 18°. El tipo S no reapareció con el subcultivo subsiguiente. Por el contrario, ~ cuando el E. coli se subcultivó junto con la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) , el tipo R apareció por el tercer subcultivo en una razón de 5%, alcanzando el 50% por el subcultivo 5o, y por el subcultivo 12° todo el E. coli 0-157 era del tipo R. Es decir, E. coli 0-157 se afectó más por la especie Lactobacillus casei de la actual invención que por la especie Lactobacillus casei original. Esto se atribuye a la diferencia en la potencia de proliferación entre las dos especies de Lactobacillus casei . [Tabla 10] Resultados del cultivo mixto de E. coli 0-157 con la especie Lactobacillus casei original y la especie lactobacilo casei de la actual invención con glucosa como el azúcar Como se muestra en la tabla 11, cuando el almidón se utiliza como el azúcar, la potencia proliferativa de E. coli 0-157 declinó, pero la proliferación de la especie Lactobacillus casei original declinó aún más, y el conteo celular final fue menor a 5 x 108 células. Debido a esta reducción en eficacia el E. coli 0-157 mutó más lentamente al tipo R, con un porcentaje del 10% en la generación 7 y el 50% en la generación 20. El porcentaje del tipo R nunca excedió el 70% con subcultivo continuo. Sin embargo, la potencia proliferativa de la especie Lactobacillus casei de la actual invención no fue diferente que con glucosa, y en este caso la potencia proliferativa del E. coli 0-157 declinó con cada subcultivo, con el porcentaje del tipo R alcanzando el 15% en la generación 3 y 100% en la generación 7.

[Tabla 11] Resultados del cultivo mixto de E. coli 0-157 con la especie Lactobacillus casei original y la especie Lactobacillus casei de la actual invención con almidón como el azúcar Además del E. coli 0-157, pruebas similares se realizaron usando Salmonella enteri tidis y Shigella flexneri , pero como en el caso de E. coli 0-157 la mutación a el tipo R fue mucho más rápida con la especie Lactobacillus casei de la actual invención que con la especie Lactobacillus casei original según lo demostrado en la tabla 12. Cuando una cepa del patógeno que ha mutado al tipo R se le administró oral e intraperitonealmente a los ratones en la dosis mortal para el tipo S, la razón de fatalidad fue 0 y el pelo y comportamiento no fueron diferentes a aquellos ratones no tratados, confirmando que la patogenicidad se eliminó principalmente. [Tabla 12] índices de la aparición de patógenos tipo R en cultivo mixto (Ejemplo 2) Ya se ha hecho una prueba en la cual la ingestión diaria de 2 g de células bacterianas liofilizadas (5 x 108 células/g) fabricadas en el ejemplo de fabricación 1 y que consiste del Lactobacillus casei original causó un aumento en lactobacilo y Bifidobacterium, los cuales se conocen como componentes benignos de la flora intestinal, e inversamente una disminución en Clostridium y Veillonella, los cuales se conocen como bacterias dañinas . En este ejemplo los resultados de la ingestión de la especie Lactobacillus casei de la presente invención por 10 sujetos sanos se cuantifico y comparó sobre tiempo por 3 meses. Los resultados se muestran en la tabla 13. Cuando el Lactobacillus casei original (FERM Bp-6971) se injiere Bifidobacterium incrementó cerca del 90% en 3 meses y el Lactobacillus casei aumentó 150%, mientras que el clostridium disminuyó 50% y Veillonella disminuyó 25%. Sin embargo, cuando el Lactobacillus casei de la presente invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) se injirió Bifidobacterium aumentó 133% en 3 meses y el Lactobacillus casei incrementó 300%, mientras que el Clostridium disminuyó 96% y Veillonella disminuyó 98.4%. Es decir, los efectos sobre las bacterias benignas y dañinas que componen la flora intestinal son mucho mayores con el Lactobacillus casei de la actual invención. La capacidad para reducir bacterias dañinas es particularmente destacada.

[Tabla 13] Cambios en la flora intestinal en sujetos sanos (Ejemplo 3) Después, 2 g de células bacterianas liofilizadas fabricadas en el ejemplol de fabricación del Lactobacillus casei ya mencionado se administraron a 10 inválidos, y las bacterias se midieron y compararon sobre tiempo por 3 meses. Los resultados se muestran en la tabla 14. Según lo demostrado en las tablas 13 y 14, antes de la administración el sujeto sano tenía cerca de 2 veces el número de bacterias beneficiosas en su flora intestinal al igual que los inválidos, y solo cerca de 1/3 de los números de bacterias dañinas . Esto demuestra que el estado de la flora intestinal refleja el estado actual de la salud. En respuesta a un examen, todos los sujetos sanos que participaron en la prueba se sentían estar más sanos, mientras que los inválidos se reportaron con más confianza en su salud. Respuestas específicas incluyeron reportes que (1) la fatiga disminuyó, (2) el color mejoró, (3) las anormalidades de deposiciones desparecieron, (4) la piel recuperó tensión y belleza, (5) obesidad mejorada, (6) la alta tensión arterial volvió a la normalidad y (7) la atopia mejoró considerablemente, y la proporción de tales respuestas fue mucho mayor entre los que injirieron el Lactobacillus casei de la actual invención.

[Tabla 14] Cambios en la flora intestinal de inválidos (Ejemplo 4) Tres plantadoras de 600 mm (ancho) x 200 mm (largo) x 150 mm (alto) se prepararon, y cada una se llenó con suelo de campo normal mezclado con 100 g de estiércol vegetal maduro y 12 g de fertilizante químico (fertilizante de Nippon Godo Fertilizer Co. Green Map, N: 8%, P: 5%, K: 5%) y se dispersó con 10 g de cal del magnesio (NAC Co., mejorador de suelo que consiste de óxido de magnesio de 5 al 7% mezclado con la cal apagada) . Después, los surcos se hicieron a una profundidad de 5 a 8 mm, y se plantaron a mano con las semillas de rábano. La germinación ocurrió en el quinto día, y en el siguiente día 2 g de la masa bacteriana centrifugada que consiste del Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) que se cultivó en el medio descrito en el ejemplo de fabricación 2 se agregó a 200 ml, se agitó bien y se aplicó al grupo de control. Mientras tanto, 2 g de masa bacteriana centrifugada que consistía en el Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) que se cultivó en el medio descrito en el ejemplo de fabricación 2 se agregó a 200 ml de agua, se agitó bien y se aplicó al grupo de la prueba. Se aplicó agua sola al grupo no tratado. Alrededor del día 10 después de la aparición de hojas éstos se seleccionaron en intervalos de cerca de 5 cm, dejando 30 plantas de rábano en cada plantador. Las suspensiones de las masas celulares centrifugadas respectivas se aplicaron al grupo de control y al grupo de prueba junto con 150 ml de una dilución en 500 veces del fertilizante, mientras que solamente 150 ml de una dilución en 500 veces del fertilizante se aplicó al grupo no tratado. Los rábanos entonces se regaron según fue necesario para evitar que se secaran y se cosecharan el día 28. Los resultados son según lo demostrado en la tabla 15. Los rábanos cosechados del grupo de prueba que se trató con el Lactobacillus casei de la presente invención fueron superiores no solamente a los rábanos no tratados sino también a las plantas en el grupo de control que se trataron con el Lacto acillus casei original en términos de todas las medidas de calidad incluyendo peso, lustre, olor, pulpa, sabor y frescura.

[Tabla 15] Resultados del Crecimiento del rábano (Ejemplo 5) Una prueba de crecimiento se realizó con los grupos de prueba como en el ejemplo 4 por la cultivación hidropónica de semillas de brote de rábano blanco. La esponja se dispersó en el fondo de una caja de polietileno de 100 (ancho) x 100 (largo) x 180 (alto) mm, empapada con agua, y sembrado sobretodo con las semillas de brote de rábano blanco. Con la temperatura establecida a 22 °C éstos se cubrieron con un paño negro por 5 días para bloquear la luz, después de lo cual el paño se quitó y crecieron en luz natural. Para el grupo de control, 1 g de células bacterianas liofilizadas de la especie Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) se agregaron a 100 ml de agua, se agitaron bien, y se aplicó por vaporización en los días 3 y 5. Para el grupo de prueba, 1 g de células bacterianas liofilizadas del Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricado en el ejemplo de fabricación 1 se agregaron a 100 ml de agua, bien agitado, y se aplicó por vaporización en los días 3 y 5. Se aplicó sólo agua al grupo no tratado. Según lo demostrado por los resultados del crecimiento en la tabla 16, el uso del Lactobacillus casei de la presente invención resultó en mejores brotes de rábano blanco que en el grupo no tratado o el grupo de control .

[Tabla 16] Resultados del crecimiento para brotes de rábano blanco Como es claro de los ejemplos 1 a 5, la especie Lactobacillus casei de la actual invención, la cual ha adquirido varias propiedades a través de la aclimatación mientras que conserva las propiedades de la especie Lactobacillus casei original, se ha confirmado para mejorar la vitalidad a un grado incalculable en la vida del cuerpo, y es fundamentalmente una cepa diferente de la especie Lactobacillus casei original . (Ejemplo 6) Con respecto a la toxicidad de P. gingivalis y P. intermedia, se ha demostrado que de la calidad y cantidad de las toxinas producidas se pueden estimar de los resultados de las pruebas de animales observando el color y olor de colonias negras crecidas en las placas de sangre y la fuerza de la adherencia en la placa, mientras que en la caso de A . actino ycetemcomi tans, la calidad y cantidad de toxinas producidas se pueden estimar observando la adherencia y fuerza hemolítica. Por lo tanto se cultivaron los patógenos periodontales principales ya mencionados junto con el "lactobacilo novedoso" para investigar qué tendencias y reacciones se exhibirían por los patógenos periodontales. Usando el caldo GAM modificado de Nissui como el medio, las bacterias se cultivaron anaeróbicamente a 37°C con subcultivos cada 72 horas, en cuyo momento el cultivo se diluyó y se aplicó por métodos ordinarios al medio de la placa de sangre, y los conteos celulares y las condiciones de las colonias resultantes se observaron sobre tiempo. Los resultados se muestran en las tablas 17, 18 y 19. Como es claro de la tabla 17, la cuenta de células de P. gingivalis bajó gradualmente con cada subcultivo, desapareciendo por el subcultivo 25. Durante este tiempo la toxicidad se debilitó gradualmente comenzando con el subcultivo 5, y mientras que una cierta toxicidad leve todavía estaba presente por el subcultivo 15, por el 20 desapareció virtualmente . Se confirmó que los ratones infectados periodontal ente con estas bacterias no desarrollaron periodontitis. Como es claro de la tabla 18, la cuenta de células de P. intermedia declinó gradualmente con el subcultivo, y las bacterias desaparecieron por el subcultivo 15. La patogenicidad también declinó consecuentemente, desapareciendo por el subcultivo 12. Como es claro de la tabla 19, la cuenta de células de A. actinomycetemcomi tans declinó con cada subcultivo, pero no tan rápidamente como lo hicieron P. gingivalis y P. intermedia. Sin embargo, pasado cierto punto, A. actinomycetemcomi tans declinó rápidamente, desapareciendo por el subcultivo 18. En pruebas de ratones, la patogenicidad desapareció totalmente por el cultivo 12. Pruebas similares de co-cultivos se realizaron usando otras bacterias implicadas en la enfermedad periodontal, tal como F. nucleatum, B. forsythus, L. buccalis, E. corrodens y también el estreptococo, los cuales son comunes en la cavidad bucal, pero todos éstos fueron superados por la potencia proliferativa y las sustancias bioactivas del lactobacilo de la actual invención, y las cuentas celulares y la toxicidad mostraron declinar con cada subcultivo.

[Tabla 17] Resultados del co-cultivo de P. gingivalis y FERM BP-10059 [Tabla 18] Resultados del co-cultivo de P. intermedia y FERM BP-10059 [Tabla 19] Resultados del co-cultivo de A. actinoiüycetemcamitans y FERM BP-10059 (Ejemplo 7) Cuando el "lactobacilo novedoso" (F?RM BP-10059, FERM P-19443) se cultiva linealmente anaeróbicamente por 72 horas a 37°C en el centro de una placa con 90 mm de diámetro, y varios patógenos periodontales se cultivan linealmente al borde de esa, el desarrollo de los patógenos periodontales se frena cerca de las áreas ocupadas por FERM BP-10059 (FERM P-19443) por el efecto de sustancias bioactivas como antibióticos producidas por FERM BP-10059 (FERM P-19443) . Por tanto se observó cómo el rango del crecimiento cambia cuando los patógenos periodontales que crecen en el borde donde el desarrollo se frena se sacaban repetidamente y se cultivaron linealmente en las placas de crecimiento de FERM BP-10059 (FERM P-19443) . En este ejemplo, FERM BP-10059 (FERM P-19443) no se mezcló con los patógenos periodontales como en el Ejemplo 5. El medio GAM modificado se utilizó en las placas. Los resultados se muestran en la tabla 20. El rango de detención debido a FERM BP-10059 (FERM P-19443) era casi igual como en el cultivo inicial después de varios subcultivos, pasado cierto punto el rango de detención creció rápidamente, y por los subcultivos 13 a 15 los patógenos fueron eliminados de la caja de petri. La toxicidad declinó gradualmente al mismo tiempo y finalmente desapareció. [Tabla 20] Tabla 20. Efectos del lactobacilo novedoso (FERM BP-10059) en las bacterias que causan la enfermedad periodontal 43> Frotis cultivado pero no creció En una prueba de sensibilidad usando los antibióticos existentes, el rango de la detención se contrajo gradualmente en todos los casos con cada paso, y finalmente se presentó resistencia. Es decir, cepas resistentes a antibióticos aparecieron, y las toxinas bacterianas no cambiaron o crecieron más fuertes a menudo . La aparición y la extensión de SARM, VRE, y M. tuberculosis resistente a muchos medicamentos, Ps . aeruginosa y similares es bien conocido ser un problema serio mundial. Los ejemplos 6 y 7 de arriba son evidencia de que los patógenos periodontales no desarrollan resistencia debido a los fuertes efectos de FERM BP-10059 (FERM P-19443) si entran en contacto directamente o no, más bien su capacidad de crecer y de proliferar se suprime en un cierto plazo y la toxicidad se elimina totalmente. (Ejemplo 8) Para medir la adherencia del "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) en bolsas periodontales, una solución de células (2 x l?"/ml) suspendida en suero fisiológico se inyectó en bolsas de profundidad equivalente, suero fisiológico estéril se inyectó en las bolsas al día siguiente, y después de 5 minutos el suero inyectado se aspiró de las bolsas y el crecimiento y la declinación de FERM BP-10059 (FERM P-19443) se observó cada día por una semana. Un mucílago de L . acidophilus, el cual coloniza las membranas mucosas, se preparó como un control, y éste y el B . natto altamente adhesivo se inyectó por separado en el mismo número y se observó el progreso. Los resultados se muestran en la tabla 21. Cuando 2 x l?"/ml de FERM BP-10059 (FERM P-19443) se inyectó, la mayoría (90% a 95%) se lavaron, pero las bacterias restantes persistieron por alrededor de una semana, y la razón de colonización fue mayor tanto más profundas las bolsas. Esto significa que FERM BP-10059 (FERM P-19443) es capaz de crecer usando el líquido del surco periodontal como su fuente nutriente principal, y puede ser más activo en una enfermedad periodontal más avanzada. Por el contrario, ningún L. acidophilus se observó el cuarto día y ningún B . natto el tercer día. Es decir, estas bacterias no podían establecerse y proliferar en bolsas periodontales.

[Tabla 21] Crecimiento y declinación de las bacterias inyectadas en las bolsas periodontales (Ejemplo 9) El crecimiento y la declinación en números de células se observaron cuando el "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) se inyectó en las bolsas periodontales en días sucesivos y cuando se inyectó cada dos días . Según lo demostrado en la tabla 22, cuando las bacterias se inyectan cada día las cuentas de células en las bolsas se elevaron gradualmente, con la colonización y proliferación que es mejor cuanto más profundas la bolsa, mientras que cuando se inyectó cada dos día la colonización y la proliferación de las bacterias fue algo más lenta que la inyección diaria, pero los números de células se elevó gradualmente en general . Esto sugiere que es suficiente inyectar las bacterias en días alternados .

[Tabla 22] Crecimiento y declinación en FERM BP-10059 en bolsas periodontales El "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) es no solamente eficaz contra todas las clases de infecciones agudas y crónicas, sino también es eficaz en mejorar las condiciones crónicas sistémicas tales como diabetes las cuales son factores asociadas a la enfermedad periodontal. Es decir, la administración del lactobacilo novedoso de la presente invención aumenta poder curativo natural del cuerpo, el cual se traduce en vitalidad. La vitalidad es la capacidad del cuerpo de promover el crecimiento y regeneración del tejido. (Ejemplo 10) 45 peces dorados (Wakin) con una longitud media de 4.2 cm que exhiben síntomas iniciales de la enfermedad de Saproglenia se dividieron en tres grupos, un grupo no tratado, un grupo de control y un grupo de pruebas, y se observó por 2 meses en un total de 9 tanques con agua con las temperaturas del agua para cada grupo fijadas a 15°C, 2Q°C y 25°C. Cinco peces dorados se criaron en 5 litros de agua en cada tanque. Se administró 1 g de células bacterianas liofilizadas (5 x 106 células/ml de agua del tanque) de la especie Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) al grupo de control. Se administró 1 g de células bacterianas liofilizadas (5 x 106 células/ml de agua del tanque) de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 1 al grupo de pruebas. Los peces dorados en el grupo no tratado se criaron sin ningún tratamiento. Los resultados se muestran en la tabla 23. Según lo demostrado en la tabla 23, en el grupo no tratado todos los peces dorados murieron en menos de un mes sin importar la temperatura del agua, con un tiempo de supervivencia promedio de 18 días. En el grupo de control que recibe la especie Lactobacillus casei original, todos los peces doraron murieron en menos de un mes en el tanque a 25°C, con un tiempo de supervivencia promedio de 23 días, pero en los tanques fijados a 15 °C y 25°C la Saproglenia creció más lentamente y los peces dorados sobrevivieron por más tiempo, con 2 que murieron después de un mes y otros 2 muriendo después de 2 meses a 15°C, con un índice de mortalidad del 80%. A 20°C, 2 murieron después de un mes y todos después de 2 meses, con un índice de mortalidad del 100%. Por el contrario, usando la especie Lactobacillus casei de la actual invención 1 pez dorado murió en el día 45 de la crianza en el tanque a 20°C, mientras que en el tanque a 25°C 1 pez dorado murió en el día 25 y 1 pez dorado murió en el día 50, pero los otros peces dorados eran sanos y el Saproglenia que se adhería a sus superficies del cuerpo declinó hasta que era casi imperceptible. La razón de crecimiento fue igual a la del pez dorado sano. Esto indica que la especie Lactobacillus casei de la actual invención, la cual se ha aclimatado a las bajas temperaturas, es eficaz incluso a una temperatura baja de 15°C. [Tabla 23] Resultados experimentales contra la enfermedad de Saproglenia en peces dorados (Ejemplo 11) Una prueba de alimentación se realizó en los tanques fijados a las mismas condiciones que en el ejemplo 10 usando grupos de 5 peces dorados (Wakin) que sufrían de la enfermedad de la úlcera del pez dorado, en la cual Aeromonas invade a través de una herida y disuelve la carne circundante, haciendo que los órganos internos se expongan en casos severos. Los síntomas de la enfermedad de la úlcera del pez dorado oscilan de leve a moderado, y los peces dorados se criaron por 2 meses con los síntomas balanceados entre los tanques . Los resultados se muestran en la tabla 24. Según lo demostrado en la tabla 24, los síntomas del pez dorado en el grupo no tratado progresaron sin importar la temperatura del agua, y en menos de 2 meses se expusieron los órganos y todos los peces murieron. En el grupo de control que recibe la especie Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) , los peces con síntomas leves mantuvieron su estado en la temperatura del agua más baja, pero cuando la temperatura del agua era alta los síntomas progresaron lentamente y en última instancia del 60% al 80% de los peces murieron en menos de 2 meses . Por el contrario, en el grupo de pruebas que recibe las especies Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) esos peces con síntomas leves se curaron sobre todo sin importar la temperatura del agua. Incluso en el caso de síntomas moderados las heridas se curaron gradualmente, y ningún pez murió incluso después de 2 meses . [Tabla 24] Resultados experimentales para la enfermedad de la úlcera del pez dorado (Ejemplo 12) Cerca de 1 cm2 de piel de ratón se peló, después de lo cual el agua se aplicó dos veces en la mañana y noche al grupo no tratado, mientras que las células centrifugadas de la cepa estándar del ATCC 393 del L. casei y el "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) se aplicaron a los grupos de tratamiento bacteriano, y se observó el progreso. Según lo demostrado en el figura 1, cuando FERM BP-10059 (FERM P-19443) se aplicó tomó solamente 3 días cubrir la superficie entera de la herida con una película delgada, de 8 días para que la piel se recuperara completamente, y de 22 días para que el pelo creciera de nuevo totalmente. Por el contrario, esto tomó 4 días, 10 días y 28 días usando el ATCC 393 y 5 días, 12 días y 35 días usando agua. Esta prueba también demuestra los notables efectos de restauración del tejido del "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) . (Ejemplo 13) Para investigar el aumento de células con las células animales y las células de plantas, la cepa estándar del ATCC 393 del L. casei y el "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) se sembraron en el medio de pH 7.2 que contiene 3 g de peptona, 2 g de triptona, 3 g de extracto de carne, 1 g de CGF, 1 g de extracto de Levadura, 3 g de almidón, 1 g de trehalosa, 1.5 g de KH2P04, 0.7 g de MgS04-7H20, 1 g de NaCl, 1 g de citrato de diamonio, 1 g de (NH4)2HP04, 2 g de acetato de sodio, 2 g de CaC03, 0.2 g de MnS04.xH20, 0.03 g de FeS04 -7H20, 0.01 g de ZnS0 , 0.2 g de L-cisteína y 1 g de taurina por litro, y se cultivó anaerobioamenté por 72 horas a 37°C, células del riñon de mono (V-l) , células de mastocitoma de ratón P815 y linfocitos de ratón CEA se mezclaron 2 x 105 células/ml con el líquido de cultivo que consiste de el medio GIT de la compañía farmacéutica Japonesa (Japan Pharmaceutical Co.) para el cultivo animal al cual sobrenadante centrifugado al 5% de los cultivos del lactobacilo se habían agregado o no, y las células vivas se contaron después de 48 horas. Los resultados se muestran en los figuras 2 , 3 y 4. Según lo demostrado en estas figuras, cuando el filtrado del cultivo del lactobacilo al 5% se agregó a su líquido del cultivo de células las células animales se volvieron más prolíficas, con un aumento del 10 al 15% usando la cepa estándar ATCC393 y un aumento del 40 al 50% utilizando FERM BP-10059 (FERM P-19443) . Esto indica que las sustancias producidas por los lactobacilos (sustancias bioactivas) estimulan y promueven la proliferación (división celular) , y el aumento en la proliferación del linfocito sugiere una contribución para fortalecer el sistema inmune. Además, según lo demostrado en el figura 5 , en una prueba similar que usa las células de la planta de clorella la razón de la proliferación también se aumentó aunque no tanto como con las células animales . Los patógenos periodontales tienen una variedad de factores patógenos que infligen daño directo o indirecto en el tejido periodontal, que incluyen factores relacionados a la adherencia, proteinazas y toxinas, sustancias que actúan como toxinas, productos metabólicos y similares. Los ejemplos específicos incluyen las endotoxinas (LPSI) , colagenasas, enzimas como tripsina, enzimas que suprimen fibroblastos y otras enzimas destructivas, toxina de leucocito, estreptolisina, sulfuro de hidrógeno, ácidos grasos y otras toxinas de células así como la adhesión física por medio de cilios largos al epitelio mucoso, glóbulos rojos y otras bacterias. Las endotoxinas en particular tienen numerosos efectos que incluyen los osteoclastos activantes (que promueven la absorción del hueso alveolar) , los fibroblastos perjudiciales y las reacciones imunopatológicas promotoras (que dañan la circulación del tejido periodontal) . El "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) no sólo bloquea la proliferación de patógenos periodontales y actúa para debilitar su patogenicidad, sino también los convierte y desintoxica algunas de las toxinas producidas por los patógenos periodontales . (Ejemplo 14) Las células de patógenos periodontales se cultivaron por 120 horas anaeróbicamente a 37°C en el caldo GAM modificado, se recolectaron por centrifugación, se hicieron flotar en suero fisiológico y se lavaron tres veces por centrifugación. Entonces se hicieron flotar uniformemente en cinco veces la cantidad de agua y se enfriaron a 0°C, y la misma cantidad de una solución acuosa enfriada con hielo de ácido tricloroacético 0.5 N se agregó e se dejó reposar por 3 horas a 0°C. El residuo del cuerpo de la célula entonces se removió por centrifugación, dos equivalentes en volumen de etanol enfriado se agregó al sobrenadante, y el precipitado se centrifugó. El precipitado se lavó con una cantidad pequeña de etanol y después con éter, dando por resultado una endotoxina en la forma de un polvo blanco. Un disco se impregnó con 5 mg de esta endotoxina y se secó para preparar un disco de sensibilidad. Después la cepa de L. casei estándar ATCC393 y el "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) se aplicaron al medio de la placa BCP que contiene 2.5 g de extracto de Levadura, 5 g de peptona, 1 g de glucosa, 0.1 g de L-cisteína, 1 g de Polisorbato 80 y 0.06 g de BCP por litro, el disco de sensibilidad preparado arriba se colocó en el centro del medio, y las bacterias se cultivaron anaeróbicamente por 48 horas a 37°C. Consecuentemente, el crecimiento de ATCC393 se bloqueó 12 mm del borde del disco, mientras que el FERM BP-10059 (FERM P-19443) creció prolíficamente en el borde del disco. Esto indica que FERM BP-10059 (FERM P-19443) incorporaba estas endotoxinas en sus células como factores del crecimiento como las vitaminas. Además, el "lactobacilo novedoso" (FERM BP-10059, FERM P-19443) tiene la capacidad de abatir con agresividad compuestos de sulfuro odorífero tales como ácidos grasos y sulfuro de hidrógeno, y se estimula su proliferación por adición de estas sustancias. (Ejemplo 15) Tres grupos de 15 pacientes que sufrían respectivamente de colitis aguda, de cistitis aguda y de conjuntivitis, enfermedades causadas por bacterias similares y que tienen síntomas similares, se subdividieron cada uno en 3 subgrupos de 5 pacientes cada uno. En cada grupo, el subgrupo A se trató por 5 días solamente con 1000 mg/día de antibióticos, el subgrupo B se trató por 5 días con 500 mg/día de antibióticos y por 10 días con 2 g/día (5 x 1010 células/día) de células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei resistente a antibióticos de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada por los métodos del ejemplo de fabricación 1, y el subgrupo C primero se trató solamente con 1000 mg/día de antibióticos, y una vez que los síntomas agudos se disminuyeron se detuvo el antibiótico (normalmente por 2 a 3 días) y entonces se trató el grupo como el subgrupo B por 7 días con 2 g/día de células bacterianas liofilizadas. Los efectos promedio del tratamiento para cada grupo sobre 10 días se muestran en la tabla 25. Como es claro de la tabla 25, el uso de la preparación del lactobacilo de la actual invención conjuntamente con la administración antibiótica convencional para el tratamiento de la infección aguda o la administración de la preparación del lactobacilo de la actual invención después de que la administración de antibióticos ofrece grandes ventajas, especialmente en problemas ligeros de resistencia al medicamento encontrados en la terapia convencional usando solamente los antibióticos, que incluyen (a) permitir que se reduzca la dosis antibiótica a la mitad, (b) permitir que la carga en los pacientes se reduzca grandemente acortando el tiempo requerido para reducir, mejorar y eliminar síntomas virtualmente sin efectos secundarios, y (c) evitar tales problemas como el disturbio de la flora intestinal y la substitución microbiana. Para las infecciones agudas, los resultados son similares (con algunas diferencias en patógenos y síntomas) a los resultados terapéuticos alcanzados con la especie Lactobacillus casei original en el ejemplo comparativo 1 de abajo. [Tabla 25] Efectos terapéuticos de la especie Lactobacillus casei de la actual invención contra la infección aguda 1) ++ Descenso drástico en números totales de bacterias intestinales, temporal pero significativa interrupción en balance competitivo entre bacterias que forman la flora intestinal + Disminución considerable en flora intestinal, cierta interrupción temporal en equilibrio competitivo entre las bacterias que forman la flora intestinal ± Cierto cambio pero no gran efecto - Ningún cambio particular (Ejemplo Comparativo 1) Como en el ejemplo 15, tres grupos de 15 pacientes que sufrían respectivamente de colitis aguda, cistitis aguda y conjuntivitis, enfermedades causadas por bacterias similares y que tienen síntomas similares, se subdividieron cada uno en 3 subgrupos de 5 pacientes cada uno. En cada grupo, el subgrupo A se trató por 5 días solamente con 1000 mg/día de antibióticos, el subgrupo B se trató por 5 días con 500 mg/día de antibióticos y por 10 días con 2 g/día (5 x 109 células/día) de células liofilizadas de FERM BP-6972, una de las especies de Lactobacillus casei original resistente a antibióticos, la cual se fabricó por los métodos del ejemplo de fabricación 1, y el subgrupo C primero se trató solamente con 1000 mg/día de antibióticos, y una vez que se redujeron los síntomas agudos el antibiótico se detuvo (normalmente por 2 a 3 días) y entonces el grupo se trató como el subgrupo B por 7 días con 2 g/día de células bacterianas liofilizadas. Los efectos del tratamiento promedios para cada grupo sobre 10 días se muestran en la tabla 26. Este ejemplo comparativo corresponde al ejemplo de prueba 1 (tabla 6) de la solicitud de patente de Japón abierta No. 2001-333766.

[Tabla 26] Efectos terapéuticos de la especie Lactobacillus casei original contra la infección aguda 1) ++ Descenso drástico en números totales de bacterias intestinales, temporal pero interrupción significativa en balance competitivo entre las bacterias que forman la flora intestinal + Disminución considerable en flora intestinal, una cierta interrupción temporal en equilibrio competitivo entre bacterias que forman la flora intestinal ± Cierto cambio sin gran efecto Ningún cambio particular Hay muchas teorías con respecto al mecanismo de ocurrencia de la enfermedad periodontal, pero el consenso es que ocurre como una condición inflamatoria crónica causada por una acumulación de placa. La placa es una agregación de muchos tipos de bacterias que producen toxinas las cuales causan la inflamación de las encías, y si esto progresa las bolsas periodontales entre los dientes y las encías se obligan a abrirse, ocurre halitosis, y el tejido que soporta los dientes que incluye el ligamento periodontal y hueso alveolar se destruye. 80% de los adultos sufren hasta cierto grado de la enfermedad periodontal, la cual se puede extender a los dientes circundantes y resultar en pérdida del diente si se deja sin tratar, y es reconocido como un modelo típico de una enfermedad que sigue siendo difícil de curar. Los patógenos principales incluyen Poryphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomi tans, Provoutel intermedia, Prevotella Intermedia y similares, que no producen toxinas como bacterias de intoxicación alimenticia de modo que la enfermedad progresa con pocos síntomas subjetivos y en muchos casos es muy tarde para el tratamiento una vez que se diagnostica. Además, la cavidad bucal está siendo contaminada constantemente por las bacterias y proporciona un ambiente conveniente para su proliferación, de modo que el problema continúa repitiéndose, y desafortunadamente hay pocos dentistas que pueden tratar confiablemente la enfermedad periodontal . Los síntomas que ocurren cuando las lesiones se desarrollan profundamente en las encías y escurrimiento continuo de pus son similares a esos de hemorroides, que sugiere una cierta clase de asociación profunda en la ocurrencia de infecciones intratables a la entrada y salida del tubo digestivo. La prevención y el tratamiento de la enfermedad periodontal consisten básicamente en el siguiente. (1) Tanto como sea posible remover la placa y cálculo (residuo de la placa) por el cepillado, o más recientemente se destruye y remueve eficientemente con ultrasonido y lásers o se disuelven con productos químicos especiales (retiro de la cama bacteriana) . (2) Un desinfectante, antibiótico o preparación enzimática anti-inflamatoria se administra por inyección en la bolsa periodontal hasta que el área inflamada mejora, en un esfuerzo por suprimir la inflamación. (3) Sin embargo, cuando el sitio de la inflamación es profundo y los tratamientos (1) y (2) de arriba no producen resultados favorables por sí mismos, el sitio de la inflamación o el daños se elimina por la cirugía. (4) Posteriormente, las encías se cosen o se reconstruyen con el material artificial . Los intentos recientes se han hecho para promover la regeneración del tejido periodontal inyectando medicamentos que tengan proteínas que forman esmalte como sus componentes principales. (5) Cuando todos los tratamientos son ineficaces, los dientes se extraen y se reconstruyen. Es decir, la meta es controlar la inflamación de las encías, detener el progreso de la enfermedad periodontal, regenerar el tejido periodontal perdido, mejorar el aspecto externo y mantener el tejido nuevamente recuperado. (Ejemplo 16) Se dividieron 20 pacientes con la enfermedad periodontal en 4 grupos (A a D) con cinco personas en cada grupo, y una vez que se removió tanta placa y tártaro como fue posible de todos los pacientes por remoción de sarro y planificación de raíz, las bolsas periodontales se llenaron de un ungüento antibiótico o de células bacterianas liofilizadas de la actual invención hecha en un gel con una cantidad pequeña de agua. En el grupo A, un antibiótico se utilizó solo o junto con una preparación enzimática anti-inflamatoria según fue necesario. En el grupo B, una preparación que consiste de una mezcla de cantidades iguales de células bacterianas liofilizadas resistentes a antibióticos fabricadas en el ejemplo de fabricación 1 y la preparación bacteriana resistente a antibióticos fabricada en el ejemplo de fabricación 3 se administró junto con un antibiótico. En el grupo C, un antibiótico o una preparación enzimática anti-inflamatoria se administró inicialmente, seguido por la preparación bacteriana ya mencionada. En el grupo D, no se utilizó ningún antibiótico desde el principio, y solamente la preparación bacteriana se administró. Para los propósitos del tratamiento las bacterias causativas principales se aislaron y examinaron por sensibilidad al medicamento, y el antibiótico apropiado se seleccionó en cada caso basado en los resultados. Los resultados se muestran en las tablas 27 y 28. Como se puede ver de las tablas 27 y 28, la administración de la preparación del lactobacilo de la actual invención sola o junto con un antibiótico resultó en la eliminación del bacteriano causativo en menos de medio mes aún en los casos de enfermedad periodontal para los cuales se esperaba que antibióticos o enzimas anti-inflamatorias solos tuvieran muy poco efecto, y con 1 a 2 meses de administración continua se alcanzaron efectos que nunca se habrían podido alcanzar con terapia convencional, incluyendo la eliminación del mal aliento y mejoras en la condición de la encía, el interior de las bolsas periodontales y dientes flojos, aunque con diferencias individuales. Así, los efectos terapéuticos de la cepa del Lactobacillus casei original según lo descrito en el ejemplo comparativo 2 de abajo se ha mejorado además a fondo, y los efectos dramáticos en el espesor y firmeza del tejido de la encía de las bolsas periodontales valen la pena notarse.

[Tabla 27] Resultados terapéuticos para la enfermedad periodontal usando la especie Lactobacillus casei de la actual invención Leve mejora al inicio en día 3 de administración, halitosis eliminada por día 3, color de Baja Cefaclor 30 A. I 58 Ps.gingiv encía e hinchazón mejor por día F L2 L3 alis (CCL) días 15; por día 30 bolsa periodontal cerrada en gran parte, recuperación completa esperada con tratamiento adicional Síntomas comenzaron a mejorar el Sta.aureu día 7, drenaje y sangrado Media Minoparado; bolsa periodontal algo H.T. s 52 M cycline 30 contraída pero no totalmente; f4 rs Fuso.nucl (MINO) días eatum sin embargo, encías estaban B apretadas, paciente podía masticar alimentos duros Patógeno desapareció por el día 5, síntomas eliminados comenzando alrededor del día 7, drenaje día 10 y sangrado paró y Ps.gingiv mal aliento mejorado; Hinchazón Grave alis Mino30 M.H. retrocedió gradualmente 64 M A.actinom cycline 3j Sj comenzando día 15, color ycetemcom (MINO) días mejorado, interior del bolsillo ituns levemente rosado, encías también más apretadas; Curación esperada con el tratamiento continuado sin extracción [Tabla 28] Resultados terapéuticos para la enfermedad periodontal usando la especie Lactobacillus casei de la actual invención (Ejemplo Comparativo 2) Se dividieron en 4 grupos de A a D 8 pacientes de la enfermedad periodontal, 2 pacientes por grupo, y se dio al Grupo A antibióticos solamente o junto con una preparación enzimática anti-inflamatoria dependiendo de los síntomas. En el Grupo B, una preparación que consiste de una mezcla de cantidades iguales de células bacterianas liofilizadas de la especie Lactobacillus casei original fabricadas por los métodos del ejemplo de fabricación 1 y una preparación bacteriana fabricada por los métodos del ejemplo de fabricación 3 (ambos resistentes a antibióticos) se administró junto con un antibiótico. En el Grupo C, un antibiótico o una preparación enzimática anti-inflamatoria se administró inicialmente, seguido por la preparación bacteriana ya mencionada. En el Grupo D, no se utilizó ningún antibiótico del principio, y solamente la preparación bacteriana se administró. Este ejemplo comparativo corresponde al ejemplo de prueba 2 usando pacientes periodontales (pacientes que sufren absceso alveolar y gingivitis) en la solicitud de patente de Japón No. 2001-333766, y de los resultados se dan en la tabla 29 (que corresponde a la parte de tablas 7 a 10 en la solicitud de patente de Japón No. 2001-333766) .

[Tabla 29] Resultados terapéuticos para la enfermedad periodontal usando la especie Lactobacillus casei original (Ejemplo 17) Una prueba del tratamiento se realizó para la sinusitis crónica, infecciones crónicas, bronquitis crónica y escaras. Se dio al Grupo A antibióticos solamente o junto con una preparación enzimática anti-inflamatoria dependiendo de los síntomas. En casos de sinusitis crónica, los senos fueron lavados generalmente con una solución acuosa de una preparación antibiótica suspendida, mientras que en casos de escaras se aplicó una preparación antibiótica al área afectada después de la limpieza. Los resultados del tratamiento se muestran en la tabla 30. En el Grupo B, una preparación que consiste en una mezcla de cantidades iguales de las células bacterianas liofilizadas (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricadas en el ejemplo de fabricación 1 y la preparación del lactobacilo (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 3 se administró junto con un antibiótico. En casos de sinusitis crónica, el método básico para administrar la preparación del lactobacilo fue por lavado nasal usando una suspensión de 2 g de células bacterianas liofilizadas en 1 litro de agua caliente. En casos de escaras, las células liofilizadas se limpiaron o dispersaron en las llagas. Los resultados del tratamiento se muestran en la tabla 31. En el Grupo C, un antibiótico se administró inicialmente, ya sea solo o junto con una preparación enzimática anti-inflamatoria, seguida por la preparación ya mencionada del lactobacilo. Los resultados del tratamiento se muestran en la tabla 32. En el Grupo D, no se utilizó ningún antibiótico desde el principio, y solamente la preparación del lactobacilo se administró. Los resultados del tratamiento se muestran en la tabla 33. Para los propósitos del tratamiento las bacterias principales que causan las infecciones crónicas se aislaron y examinaron por sensibilidad al medicamento, y se seleccionó el antibiótico apropiado en cada caso basado en los resultados. Como puede ser visto de las tablas 30 a 33, los efectos terapéuticos fuertes se obtuvieron usando la preparación del lactobacilo de la actual invención para las infecciones crónicas que son difíciles de curar con los antibióticos. El uso combinado de un antibiótico con la preparación del lactobacilo de la actual invención, que tiene resistencia antibiótica, fue particularmente eficaz. Los resultados fueron incluso mejores que ésos obtenidos con la especie Lactobacillus casei original según lo descrito abajo.

[Tabla 30] Resultados terapéuticos para las infecciones crónicas usando la especie Lactobacillus casei de la actual invención [Tabla 31] Resultados terapéuticos para las infecciones crónicas usando los antibióticos y la especie Lactobacillus casei de la actual invención [Tabla 32] Resultados de tratamiento para las infecciones crónicas usando Lactobacillus casei de la actual invención [Tabla 33] Resultados de tratamiento para las infecciones crónicas usando LactsJbacíllus casei de la actual invención (Ejemplo Comparativo 3) Se dividieron 8 pacientes con sinusitis crónica y 8 pacientes con bronquitis crónica cada uno en 4 grupos de A a D, dos personas por grupo, y se dio al Grupo A un antibiótico solamente o junto con una preparación enzimática anti-inflamatoria dependiendo de los síntomas. En el Grupo B, una preparación que consiste en una mezcla de cantidades iguales de células bacterianas liofilizadas de la especie Lactobacillus casei original fabricada por los métodos del ejemplo de fabricación 1 y una preparación del lactobacilo fabricada por los métodos del ejemplo de fabricación 3 se administró junto con un antibiótico. En el Grupo C, un antibiótico se administró inicialmente solamente o junto con una preparación enzimática anti-inflamatoria, seguida por la preparación ya mencionada del lactobacilo. En el Grupo D, no se utilizó ningún antibiótico del principio, y solamente la preparación del lactobacilo se administró. Este ejemplo comparativo corresponde al ejemplo de prueba 2 para la sinusitis crónica y la bronquitis crónica en la solicitud de patente de Japón No. 2001-333766, y los resultados se dan en las tablas 34 y 35 (correspondiendo a la parte de las tablas 7 a 10 en la solicitud de patente de Japón No. 2001-333766) .

[Tabla 34] Efectos del tratamiento para las infecciones crónicas usando la especie LactoJbacillus casei original [Tabla 35] Resultados de tratamiento para las infecciones crónicas usando especies de Lactobacillus casei original (Ejemplo 18) 20 g de una preparación de la célula liofilizada bacteriana (FERM BP-6971) fabricada por los métodos del ejemplo de fabricación 2 mezclado con 100 g de lactosa se administró 2 g por día a los pacientes que sufren de condiciones crónicas que no fueron infecciones, incluyendo el estreñimiento, diarrea, diabetes, un desorden no infeccioso, fatiga crónica, dermatitis atópica, hipotensión, neurosis e hipertensión. La dosis administrada de bacterias fue de 2g/día a 1 x 1010 células/g. En una prueba del tratamiento de la preparación del lactobacilo de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) , la preparación se administró 2 meses a 10 pacientes cada uno sufriendo de los mismo síntomas o similares, y la mejora promedio se muestra en la tabla 36. Aproximadamente el 15% de los pacientes no exhibieron ninguna mejora en síntomas incluso después de recibir la preparación del lactobacilo de la actual invención, pero en ningún caso los síntomas empeoraron. La eficacia también se demostró en varios grados para muchas condiciones crónicas con excepción de ésas demostradas en la tabla 36, incluyendo arteriesclerosis, gota, obesidad y hepatitis crónica. Como es claro de la tabla 36, si los efectos de la preparación del lactobacilo se alcanzaron al 100% sin interferencia, el poder curativo natural del cuerpo se aumenta, y se restaura la vitalidad. Por ejemplo, si los intestinos son limpiados por la administración interna, la sangre se limpia naturalmente de modo que hormonas, enzimas, anticuerpos, sustancias inmunes y otras sustancias esenciales se llevan libremente a través del cuerpo, que suavizan el metabolismo, mejoran las funciones sistémicas y permiten una vida sin problemas por enfermedad. En verdad, la tesis de la "prolongación de la vida" de Metchinikoff finalmente se ha notado después de un siglo.

[Tabla 36] Progreso de condiciones crónicas 1) Resultados del tratamiento ® Gran mejora, salud restaurada o casi restaurada O Salud restaurada no totalmente, pero condición mejorada, curación completa esperada con la administración continuada de la preparación ? Una cierta mejora, el otro tratamiento más eficaz se necesitó Según lo mostrado en el ejemplo 16, los buenos efectos se alcanzan a través de la administración conveniente de este lactobacilo en el tratamiento de la enfermedad periodontal, pero desafortunadamente esto no se podría llamar una curación dependiendo del progreso de la enfermedad periodontal. Por lo tanto, los inventores mostraron como resultado de una investigación exhaustiva que los efectos podrían mejorarse con la aplicación de las características del desinfectante bactericida como pre-tratamiento, con los resultados explicados abajo.

(Ejemplo 19) Se lavaron las áreas afectadas de 5 pacientes que sufrían de enfermedad periodontal leve con "este desinfectante bactericida, " y después se trataron por la inyección de la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4 en el área afectada. Los resultados se muestran en la tabla 37.

[Tabla 37] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal leve por una combinación de desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo 20) Se trataron cinco pacientes que sufrían de enfermedad periodontal leve primero desinfectando las áreas afectadas con el "desinfectante bactericida, " y entonces inyectando una "preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricado según el ejemplo de fabricación 5 en las áreas afectadas . Los resultados se muestran en la tabla 38.

[Tabla 38] Tabla 38. Resultados del tratamiento de enfermedad periodontal leve por una combinación de desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo Comparativo 4) Como una comparación, se trataron 5 pacientes cada uno sufría de la enfermedad periodontal con "este desinfectante bactericida, " con la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4, con la "preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricados en el ejemplo de fabricación 5 y con terapia convencional . Los resultados se muestran en la tabla 39.

[Tabla 39] Resultados del tratamiento para la enfermedad periodontal leve usando terapia convencional Hinchazón se calmó por día 15 de terapia, pero hinchazón y elasticidad todavía Terapia insatisfactorio; bolsas algo más convencional superficiales por día 30, pero no se cerraron con el tratamiento adicional; sin embargo, color de encía y elasticidad recuperada "Preparación Mejorado gradualmente después de varios días del de la administración, color de encía, lactobacilo novedoso que elasticidad, hinchazón recuperados contiene los generalmente por día 10; bolsas de encía más antibióticos" superficiales por día 21, encías crecieron solo por día 30, cerrado principalmente por día 45 Cuando la enfermedad periodontal fue leve, el color de encía, hinchazón y elasticidad se recuperaron en el plazo de 2 a 3 semanas con terapia convencional y las bolsas crecieron más superficiales pero nunca cerraron. Por el contrario, cuando la desinfección con "este desinfectante bactericida" se combinó con la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención, la mejora fue rápida al principio del tratamiento, la hinchazón se calmó rápidamente, color de la encía y la elasticidad se recuperaron grandemente en cerca de 2 semanas y las bolsas crecieron gradualmente más superficiales, cerrándose en aproximadamente un mes para una curación completa.

(Ejemplo 21) Se trataron cinco pacientes que sufrían de enfermedad periodontal intermedia primero desinfectando las áreas afectadas con "este desinfectante bactericida" y en seguida inyectando la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4. Los resultados se muestran en la tabla 40.

[Tabla 40] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal intermedia por una combinación de la desinfección con "este desinfectante bactericida" y "la preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo 22) Se trataron cinco pacientes que sufrían de enfermedad periodontal intermedia primero desinfectando las áreas afectadas con "este desinfectante bactericida, " y entonces inyectando la "preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricado en el ejemplo de fabricación 5. Los resultados se muestran en la tabla 41.

[Tabla 41] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal intermedia por una combinación de la desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo Comparativo 5) Como una comparación, 5 pacientes cada uno con enfermedad periodontal intermedia se trataron con "este desinfectante bactericida, " la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4, la "preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricados en el ejemplo de fabricación 5 y terapia convencional . Los resultados se muestran en la tabla 42.

[Tabla 42] Resultados de tratamiento para la enfermedad periodontal intermedia usando terapia convencional Cuando la enfermedad periodontal fue intermedia, la hinchazón disminuyó pero el color y la elasticidad seguían siendo insatisfactorios con terapia convencional, y mientras que las bolsas crecieron algo más superficiales y estrechas, el cambio no fue grande. Por el contrario, cuando la desinfección con "este desinfectante bactericida" se combinó con la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención, aunque el progreso hacia una curación fue más lento que en el caso de la enfermedad periodontal leve, hubo mejora definida y casi una curación completa en el plazo de 2 a 3 meses.

(Ejemplo 23) Se trataron cinco pacientes que sufrían de enfermedad periodontal profunda primero desinfectando las áreas afectadas con "este desinfectante bactericida" y entonces inyectando la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4. Los resultados se muestran en la tabla 43.

[Tabla 43] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal profunda por una combinación de la desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso" usado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo 24) Cinco pacientes que sufren de la enfermedad periodontal profunda se trataron primero desinfectando las áreas afectadas con "este desinfectante bactericida, " y después inyectando la "preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricado en el ejemplo de fabricación 5. Los resultados se muestran en la Tabla 44.

[Tabla 44] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal profunda por una combinación de la desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo Comparativo 6) Como una comparación, se trataron 5 pacientes cada uno con enfermedad periodontal profunda con "este desinfectante bactericida, " la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4, la "preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricados en el ejemplo . de fabricación 5 y terapia convencional. Los resultados se' muestran en la tabla 45.

[Tabla 45] : Resultados de tratamiento para la enfermedad periodontal profunda usando terapia convencional Poca mejora, el estado apenas se mantuvo; Terapia sin embargo, la hinchazón de encía y la convencional elasticidad se recuperaron levemente, halitosis también mejor "Preparación Patógeno ido por día 5 de la administración, del con síntomas mejorados, sangrado, drenaje lactobacilo novedoso que eliminados; condición de encía mejorada a contiene los partir del día 15, recuperada principalmente por día 25; bolsas crecieron gradualmente antibióticos" más superficial pero no desaparecieron solamente Cuando la inflamación fue profunda, la hinchazón, color, elasticidad y otros síntomas de la encía se recuperaron levemente con terapia convencional, pero las bolsas estuvieron virtualmente sin cambios, y el estado apenas se mantuvo. Por el contrario, cuando la desinfección con "este desinfectante bactericida" se combinó con la " preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención, las encías comenzaron a mejorar después de cerca de 2 semanas de la terapia con diferencias individuales, y la salud se restauró principalmente en cerca de 2 meses . Las bolsas se contrajeron lentamente pero constantemente, a algunos milímetros en cerca de 3 meses. Algunos pacientes permanecieron en la misma condición, mientras que en otros casos las bolsas se cerraron eventualmente para una curación completa.

(Ejemplo 25) Se trataron cinco pacientes que sufrían de enfermedad periodontal de la última etapa primero desinfectando las áreas afectadas con "este bactericida desinfectante" y después inyectando la "preparación del lactobacilo novedoso" fabricado en el ejemplo de fabricación 4. Los resultados se muestran en la tabla 46.

[Tabla 46] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal de la última etapa por una combinación de la desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo 26) Se trataron cinco pacientes que sufrían de enfermedad periodontal de la etapa final primero desinfectando las áreas afectadas con "este desinfectante bactericida " y en seguida inyectando "la preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" fabricado en el ejemplo de fabricación 5. Los resultados se muestran en la tabla 47.

[Tabla 47] Resultados del tratamiento de la enfermedad periodontal de la etapa final por una combinación de la desinfección con "este desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención ("preparación del lactobacilo novedoso que contiene los antibióticos" utilizado como preparación del lactobacilo) (Ejemplo Comparativo 7) Cinco pacientes con la enfermedad periodontal de la etapa final se trataron con la regeneración de tejido dirigida usando Emdogain, el cual ha atraído interés como terapia existente de punta. Los resultados se muestran en la tabla 48.

[Tabla 48] Resultados de tratamiento para la enfermedad periodontal de la etapa final usando la regeneración del tejido dirigida Cuando la enfermedad periodontal estaba en la etapa final, parecía ser demasiado tarde para la terapia convencional, y finalmente los dientes tuvieron que ser extraídos. Aunque los dientes podrían apoyarse quirúrgicamente sin ser sacados, la enfermedad después ocurrió de nuevo, y en muchos casos la extracción solamente se retrasó. Por el contrario, con una combinación del "desinfectante bactericida" y la "preparación del lactobacilo novedoso" de la actual invención era posible eliminar los patógenos y remover los factores causativos, que producen un efecto sinérgico el cual conduce a la regeneración del tejido de modo que en 70 a 80% de los casos la extracción fue innecesaria y los dientes se salvaron incluso si una curación completa no se alcanzó.

(Ejemplo 27) Cerditos Landrace de dos meses de edad con un peso medio de 18 Kg se dividieron en 3 grupos de 10 cerditos machos y 10 hembras por grupo, y se criaron en casas individuales, sin ventanas ventiladas por ventiladores. La alimentación era alimentación estándar para cerdo (Nosan Corporation) , provista siempre de alimentación disponible en el compartimiento de alimentación, y el agua se proporcionó automáticamente a través de una taza de agua. Al grupo de control se dio alimentos preparados con el Lactobacilo casei original (FERM BP-6971) mientras que al grupo de prueba se dio alimentos preparados con el Lactobacillus casei de la actual invención fabricado en el ejemplo de fabricación 3 (FERM BP-10059, FERM P-19443) , 1 x 106 células húmedas/g de la alimentación en cada caso, y no se dio lactobacilos al grupo no tratado. Después de criarse por 1 mes bajo estas condiciones de crianza, como se muestra en la tabla 49 los cerditos en el grupo de prueba que recibían el Lactobacillus casei de la actual invención tenían mejor piel que aquellos en el grupo no tratado, y eran un promedio de 4.8 Kg más pesados, indicando un efecto obvio de promoción del crecimiento. No había muestras de diarrea u otros síntomas comunes en cerditos, y no mostraron ninguna señal de enfermedad después de la prueba. También había menos olor fecal . Los buenos resultados también se obtuvieron en el grupo de control, el cual se trató con la especie Lactobacillus casei original, pero en menor grado que en el grupo de pruebas . En una prueba de textura de la carne por un especialista la calidad en el grupo de pruebas se evaluó como extremadamente buena, con una cantidad grande de carne roja y una textura elástica.

[Tabla 49] Resultados de la prueba de alimentación de los cerditos (Ejemplo 28) 30 pollitos recién nacidos machos y 30 hembras (peso promedio de 43 g) de una variedad especializada de pollo para asar (Arbor Acre) se pre-criaron por 3 días y dividieron en tres grupos con números iguales de machos y hembras en cada grupo, y allí se confirmó haber ninguna variación en el peso corporal con un peso promedio de 50 g en cada grupo. Éstos se alimentaron con un iniciador de alimentación estándar para engorde de pollos para asar (Kyodo Shiryo, Golden G) por 4 semanas. La crianza fue en cajones hasta 4 semanas de edad (temperatura aislada de 35°C ± 2°C) . Se dio al grupo de control las células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) y al grupo de pruebas las células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei de la actual invención fabricada en el ejemplo de fabricación 3 (FERM BP-10059, FERM P-19443) mezclado con la alimentación estándar a 2 x 107 células/g de la alimentación en cada caso. No se dieron lactobacilos al grupo no tratado. El agua se proporcionó libremente a través de un alimentador de agua, mientras que la alimentación se proporcionó continuamente con alimentación siempre disponible en el compartimiento de alimentación. Los resultados se muestran en la tabla 50, y se muestra claramente que como resultado de la crianza por 4 semanas el grupo de control exhibió cerca de 15% mayor aumento de peso y el grupo de pruebas cerca de 27% que el grupo no tratado. Ninguna enfermedad ocurrió en el grupo de pruebas durante el período de crianza, sin síntomas de diarrea y una reducción en olor fecal . Esto es evidencia adicional de que los efectos de una preparación del lactobacilo usando las especies de Lactobacillus casei de la actual invención son mucho mejores que los de una preparación del lactobacilo usando la especie Lactobacillus casei original .

[Tabla 50] Resultados de la prueba de alimentación de pollos (Ejemplo 29) Usando 4 criaderos de peces de malla pequeña lleno con 100 caballas jóvenes con un peso promedio de 65 g, tres criaderos de peces se asignaron a los grupos de pruebas y 1 al grupo no tratado. Se les dio a los peces granulos húmedos que consisten en una mezcla de 1:1 de sardinas picaditas y alimento de fórmula de cola amarilla comercial ("Itomate" de Nisshin Feed) . En el grupo de prueba 1, la alimentación se mezcló a 1 x 1 109 células/g de la alimentación con la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 2, y se dio inmediatamente. En el grupo de prueba 2, 0.02 ml/g de una solución del cultivo de la misma especie Lactobacillus casei (FERM BP-10059, FERM P-19443) de la actual invención fabricada en el ejemplo de fabricación 2 se agregó a la alimentación. En el grupo de prueba 3, 0.02 ml/g del filtrado del cultivo de la misma especie Lactobacillus casei (FERM BP-10059, FERM P-19443) de la actual invención fabricada en el ejemplo de fabricación 2 se agregó a la alimentación. La temperatura del agua durante el período de prueba era de 20°C a 22°C. Los resultados se muestran en la tabla 51. Como se puede ver de la tabla 51, la caballa en los grupos de pruebas creció mejor que ésas en el grupo no tratado, con menos mortalidad durante el período de prueba. De los grupos de pruebas, los resultados fueron mejores para el grupo de prueba 2, los cuales recibieron una solución del cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención.

[Tabla 51] Resultados de la prueba de alimentación de la caballa con la preparación del lactobacilo de la actual invención (Ejemplo Comparativo 8) La misma prueba como en el ejemplo 29 se realizó usando la especie Lactobacillus casei original (FERM BP- 6971), con los resultados mostrados en la tabla 52. Según lo mostrado en la tabla 52, los resultados no fueron tan buenos como ésos obtenidos con la especie Lactobacillus casei de la actual invención.

[Tabla 52] Resultados de la prueba de alimentación de la caballa con la preparación del lactobacilo de la especie Lactobacillus casei original (Ejemplo 30) Una prueba de alimentación se realizó usando gusanos rojos, los cuales son valiosos como alimento de pájaro y carnada de pesca. Se prepararon y llenaron cuatro cajas de madera de 600 mm (ancho) x 400 mm (largo) x 150 mm (alto) hasta el 80% con una mezcla de 1 kg de moho de hoja mezclado con 0.5 kg de levadura cruda de pan, después de lo cual 100 gusanos rojos jóvenes con una longitud promedio de 10 mm y un peso promedio de 40 mg se colocaron en cada caja. Estos se criaron en un cuarto fijado a temperatura ambiente de 25°C, con 10 lux de iluminación en el día y sin luz en la noche. El grupo de prueba 1 se roció con 0.01 g de cuerpos de la célula húmeda de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, F?RM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 2, el grupo de prueba 2 se roció con 200 ml de una solución del cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 2 diluida a lOOx con agua, y el grupo de prueba 3 se roció con 200 ml de filtrado de cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricado en el ejemplo de fabricación 2. Esta operación se realizó una vez cada 10 días, y al grupo no tratado se roció con agua. Cada caja de crianza se roció con una cantidad conveniente de agua cada dos días de modo que el suelo no se secara. Se dio a los gusanos la levadura seca y clorella como alimentación una vez por semana, 1 g a cada uno al principio de la crianza aumentando un 20% cada semana. Los resultados de la crianza después de 3 meses se muestran en la tabla 53. Según lo mostrado en la tabla 53 , la producción fue mejor en los grupos de prueba 1 y 2 que en el grupo no tratado, y los pesos corporales eran mayores de cerca de 20%. Los resultados para el grupo de prueba 3 fueron intermedios .

[Tabla 53] Resultados de prueba de alimentación del gusano rojo Cuando las pruebas de alimentación también se realizaron con escarabajos jóvenes, gusanos de seda y similares así como gusanos rojos, ésos en los grupos de prueba crecieron más rápido y más grandes. Además, los capullos y los adultos eran también más grandes . También se obtuvieron buenos resultados cuando las pruebas ya mencionadas se realizaron usando la especie Lactobacillus casei original, pero las velocidades de crecimiento y los rendimientos eran de 5 a 10% más bajos que con la especie Lactobacillus casei de la actual invención.

(Ejemplo 31) Se utilizaron pepinos para probar la prevención y tratamiento de oídio y mildiú, los cuales son problemas comunes en la cultivación de invernadero. En la enfermedad de oídio el hongo invade la superficie de las hojas y los tallos, primero formando puntos blancos, pero según los síntomas progresan las superficies de las hojas parecen como si estuvieran espolvoreadas con un polvo blanco, volviéndose gradualmente gris. El crecimiento de la hoja para, y en el caso de los pepinos solamente pequeños, se cosechan los pepinos duros finos . En la enfermedad de mildiú, puntos grisáceo-blancos como moho primero aparecen en la parte inferior de las hojas, formando gradualmente marcas irregulares sucias que continúan dispersándose en la superficie de las hojas. Las hojas finalmente se convierten en amarillo-marrones y pegajosas y putrefacción de modo que no se puede esperar ninguna cosecha. Una sección de un invernadero de pepinos se dividió totalmente, y 1 g de células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 1 mezclado con 1 litro de agua (2 x 107 células/ml) se roció completamente en las hojas y tallos antes de florecer. Una semana después, las esporas del mildiú y (Sphaeratheca fuliginea) y del oídio (Pseudoperonospora cubensis) se aplicaron en cantidades suficientes para causar las enfermedades, pero en lugar de enfermarse las plantas florecieron y los pepinos resultantes eran mejores de lo normal . Las plantas de pepino a las cuales las esporas se aplicaron sin el uso previo del lactobacilo de la actual invención, todas desarrollaron las enfermedades. Algunas plantas de pepino (10 al 20% total) rociadas con los cuerpos de células liofilizadas obtenidos de la especie Lactobacillus casei original (FERM Bp-6971) desarrollaron la enfermedad, y en este caso los pepinos no se podían cosechar. Cuando las plantas de pepino infectadas según lo descrito arriba se rociaron completamente en la primera etapa de la infección con una solución (1 x 108 células/ml) de 5 g de células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 1 suspendidas en 1 litro de agua, y después se rociaron con la misma cantidad otra vez una semana después, las lesiones desaparecieron gradualmente, el florecimiento era normal, y los pepinos finos se obtuvieron. Cuando la especie Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) se aplicó de la misma manera, cerca del 50% de las plantas mejoraron, pero en el otro 50% progresaron las enfermedades y los pepinos no se pudieron cosechar. Los ensayos similares se realizaron usando cosechas diferentes a los pepinos incluyendo papas, pimientas, calabazas y similares, y en todos los casos el uso de las células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei de la actual invención se demostró ser eficaz. Por ejemplo, se obtuvieron buenos resultados cuando el uso de productos químicos agrícolas tales como tiofanato-metil al 3% (Nippon Soda, Topsin-M) y quinoxalino (Yashima Chemical, Morestan) se redujo hasta 1/2 a 1/3, y entonces se aplicó una cantidad conveniente de la preparación del lactobacilo de la actual invención.

(Ejemplo 32) Se prepararon cuatro plantadoras de 600 mm (ancho) x 400 mm (largo) x 150 mm (alto) , 20 g de fertilizante químico (NAC Co . # 38, N: 8%, P: 5%, K: 5%) y 5 g de fosfato de magnesio fundido se mezcló con la capa inferior de suelo en cada uno, y el suelo que consistía en 10 g de cal del magnesio (NAC Co., mejoramiento del suelo que consiste en óxido de magnesio al 5 a 7% mezclado con cal apagada) agregados a 10 1 de una mezcla de suelo de campo normal con moho de hoja al 30% se puso en la cima a una profundidad de cerca del 80%. A mediados de agosto, se plantaron 6 plantas de semillero de fresa de Aliso en cada plantador, y comenzado dos semanas después hasta mediados de diciembre, se dieron a todas las plantas de fresa en el plantador del grupo de prueba 1 fertilizante líquido cada semana y al mismo tiempo se rociaron completamente con las células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei de la actual invención fabricadas en el ejemplo de fabricación 1 (FERM BP-10059, FERM P-19443) suspendidas a 1 x 107 células/ml en agua. Una dilución 200x en agua del líguido del cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención fabricado en el ejemplo de fabricación 1 (FERM BP-10059, FERM P-19443) se aplicó al grupo de prueba 2. Una dilución 200x en agua del líquido filtrado del cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención fabricado en el ejemplo de fabricación 1 (FERM BP-10059, FERM P-19443) se aplicó al grupo de prueba 3. Agua sola se aplicó al plantador no tratado. En marzo del año siguiente, una vez que los brotes desarrollaron el fertilizante líquido y la preparación del lactobacilo ya mencionada se aplicó una vez por semana. Las fresas rojas maduras se cosecharon gradualmente de 1 a 2 meses después de florecer. Los resultados se muestran en la tabla 54. Según lo mostrado en la tabla 54, las fresas en los grupos de prueba 1 y 2, las cuales recibieron la preparación del lactobacilo de la actual invención, crecieron no sólo más rápidamente, sino que 200 g de fresas se cosecharon por la planta. Además, todos se encontraron ser de primera calidad en términos del olor, color, sabor y tamaño. Por el contrario, pocas fresas se cosecharon en el grupo no tratado, y eran de calidad media, inferior a la alta calidad de las fresas en los grupos de pruebas .

[Tabla 54] Resultados de la prueba del crecimiento de la fresa (Ejemplo 33) Se prepararon ocho plantadores de 600 mm (ancho) x 400 mm (largo) x 150 mm (alto) , el suelo de campo normal se mezcló con moho de hoja al 30%, y para la planta acuática (género Ceratophyllum) 8 g de cal de magnesio (NAC Co., mejoramiento del suelo que consiste en óxido de magnesio al 5 a 7% mezclado con cal apagada) se agregó a 10 litros de esto, y la capa inferior del suelo en 3 plantadores se fertilizó con 20 g de fertilizante químico (NAC Co. # 38, N: 8%, P: 5%, K: 5%) 1 semana después. Para la espinaca, 20 g de cal de magnesio se mezcló bien con 20 g de fertilizante químico (NAC Co. # 38, N: 8%, P: 5%, K: 5%) y se agregaron a 3 plantadores. Entonces, las semillas se plantaron a finales de septiembre en los plantadores respectivos. Cuando la planta acuática (género Ceratophyllum) y la espinaca brotaron se enrarecieron de modo que las hojas no se traslaparan, y una vez que las hojas principales comenzaron a desarrollarse se fertilizaron una vez por semana con el fertilizante líquido y se regaron de modo que el suelo no se secara. Cuando el fertilizante líquido se aplicó las plantas en el grupo 1 se rociaron cabalmente al mismo tiempo con las células liofilizadas de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 2 suspendidas a 1 x 107 células/ml en agua. Las plantas en el grupo de prueba 2 se rociaron de la misma manera con una dilución 300x de un líquido del cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricado en el ejemplo de fabricación 2. Las plantas en el grupo de prueba 3 se rociaron con una dilución 300x del filtrado del cultivo de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) fabricada en el ejemplo de fabricación 2. Agua sola se roció en el grupo no tratado. Los resultados para la planta acuática (género Ceratophyllum) se muestran en la tabla 55. Según lo mostrado en la tabla 55, las plantas en los grupos de pruebas 1 y 2 las cuales se trataron con la especie Lactobacillus casei de la actual invención crecieren rápidamente, con hojas anchas, gruesas y suaves, y olían mucho mejor que la planta acuática (género Ceratophyllum) comercial crecida hidropónicamenté. La planta acuática (género Ceratophyllum) de calidad intermedia se cosechó del grupo de prueba 3.

[Tabla 55] Resultados de la prueba del crecimiento de planta acuática (género Ceratophyllum) Los resultados para la espinaca se muestran en la tabla 56. Según lo mostrado en la tabla 56, en los grupos de pruebas las raíces eran más rojas y más firmes que en el grupo no tratado, y verde profundo de alta calidad las hojas se produjeron las cuales eran grandes, densas y brillantes, que emiten un dulzor único. Algunas de las plantas en el grupo no tratado desarrollaron la enfermedad del punto de la hoja (en qué manchas marrones aparecen en las hojas, moho marrón negruzco se desarrolla en los puntos y las plantas se marchitan) , pero esto no ocurrió en los grupos de tratamiento. Las pruebas comparativas también se realizaron usando verduras tales como col, perejil y apio, frutas tales como uvas y naranjas, basidiomicetos tales como setas, plantas ornamentales tales como pothos y flores tales como claveles, y en todos los casos una cosecha de mayor calidad se cosechó más rápidamente que en el grupo no tratado, con muy pequeña ocurrencia de la enfermedad.

[Tabla 56] Resultados de la prueba del crecimiento de la espinaca (Ejemplo 34) Las plantas de semillero de hierbabuena (con 6 hojas) se compraron, suelo del campo se mezclaron con el moho de hoja al 50%, grupos de prueba 1, 2 y 3 y a un grupo no tratado se establecieron como en los ejemplos 15 y 16 de arriba, y la preparación del lactobacilo de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) se roció una vez por semana. Las plantas se fertilizaron por separado una vez al mes. Consecuentemente, la hierbabuena en los grupos de pruebas 1, 2 y 3 tenían hojas más densas que en el grupo no tratado, con un olor dulce fuerte característico. Las pruebas también se realizaron usando otras hierbas incluyendo manzanilla, salvia, lavanda y bálsamo de limón, pero los olores característicos de las hierbas parecían más fuertes como en el caso de la hierbabuena. Las pruebas ya mencionadas con verduras y hierbas también se realizaron usando la especie Lactobacillus casei original (FERM BP-6971) , la cual se utilizó en la solicitud de patente de Japón No. 2001-333766, pero mientras que los resultados eran buenos, evaluando generalmente de la producción, calidad, olor, ocurrencia de la enfermedad y similares no igualaron los resultados obtenidos del uso de la especie Lactobacillus casei de la actual invención (FERM BP-10059, FERM P-19443) .

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una especie Lactobacillus casei que tiene las propiedades descritas en (1) , (2) , (3) , (4) y (5) de abajo: (1) La especie se puede crecer en presencia de cualquiera de uno a cuatro aminoácidos como una fuente de nitrógeno necesaria para el crecimiento; (2) Cuando un medio de cultivo promotor del crecimiento se inocula con la especie y Escherichia coli en la misma cuenta y se somete a cultivo mixto anaerobio a 37°C, el conteo final de lactobacilos es de 50% o más de la cuenta de coliforme; (3) En la cultivación en un medio de cultivo apropiado, el valor de pH final es 4.0 o menor, y la acidez más alta es 1.5% o más; (4) La especie es resistente a sales de bilis al 5%; (5) La especie produce un antibiótico.
2. Una especie Lactobacillus casei que tiene por lo menos una de las propiedades siguientes además de las propiedades enumeradas en la reivindicación 1 : (a) Tiene resistencia a antibióticos ampliamente utilizados; (b) Tiene capacidad amilolítica; (c) Promueve el crecimiento de clorella; (d) Crece a temperaturas en el rango de 5°C a 45°C; (e) Crece a valores de pH en el rango de pH 4.0 a pH 10.0; (f) también puede crecer bajo cualquier presión de oxígeno .
3. La especie Lactobacillus casei de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque la especie Lactobacillus casei es FERM BP-10059 (FERM P-19443) .
4. Una preparación del lactobacilo activante del cuerpo vivo que contiene una especie Lactobacillus casei de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como un ingrediente activo primario.
5. Un agente preventivo o terapéutico contra las infecciones en seres humanos, animales y plantas que tiene una especie Lactobacillus casei de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como un ingrediente activo primario .
6. El agente preventivo o terapéutico contra las infecciones en seres humanos, animales y plantas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el agente preventivo o terapéutico contra las infecciones en los seres humanos, animales y plantas conforme a la reivindicación 5 contiene un antibiótico.
7. El agente preventivo o terapéutico contra las infecciones en seres humanos, animales y plantas de conformidad con las reivindicaciones 5 ó 6, el cual se aplica a un área afectada en el tratamiento de la enfermedad periodontal después de que el área afectada se desinfecta con un desinfectante bactericida.
8. El agente preventivo o terapéutico contra las infecciones en seres humanos, animales y plantas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el desinfectante bactericida es un desinfectante bactericida que contiene de 500 a 1,500 ppm de iones férricos, 500 a 2,000 ppm de ácido L-ascórbico y 200 a 2,000 ppm de uno o dos de ácido sórbico, ácido benzoico y de éster de ácido paraoxibenzoico como componentes principales.
9. La preparación del lactobacilo activante del cuerpo vivo o el agente preventivo o terapéutico contra las infecciones en seres humanos, animales y plantas de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en donde la especie Lactobacilo casei es FERM BP-10059 (FERM P-19443) .