MXPA05001944A - Procedimiento para elaborar cetocarotenoides en frutos de plantas. - Google Patents

Procedimiento para elaborar cetocarotenoides en frutos de plantas.

Info

Publication number
MXPA05001944A
MXPA05001944A MXPA05001944A MXPA05001944A MXPA05001944A MX PA05001944 A MXPA05001944 A MX PA05001944A MX PA05001944 A MXPA05001944 A MX PA05001944A MX PA05001944 A MXPA05001944 A MX PA05001944A MX PA05001944 A MXPA05001944 A MX PA05001944A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
leu
gly
pro
val
ser
Prior art date
Application number
MXPA05001944A
Other languages
English (en)
Inventor
Martin Klebsattel
Original Assignee
Sungene Gmbh & Co Kgaa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE10238978A external-priority patent/DE10238978A1/de
Priority claimed from DE10238979A external-priority patent/DE10238979A1/de
Priority claimed from DE2002138980 external-priority patent/DE10238980A1/de
Priority claimed from DE2002153112 external-priority patent/DE10253112A1/de
Priority claimed from DE2002158971 external-priority patent/DE10258971A1/de
Application filed by Sungene Gmbh & Co Kgaa filed Critical Sungene Gmbh & Co Kgaa
Publication of MXPA05001944A publication Critical patent/MXPA05001944A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/179—Colouring agents, e.g. pigmenting or dyeing agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/15—Vitamins
    • A23L33/155—Vitamins A or D
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/40—Colouring or decolouring of foods
    • A23L5/42—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
    • A23L5/43—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives
    • A23L5/44—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives using carotenoids or xanthophylls
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B61/00—Dyes of natural origin prepared from natural sources, e.g. vegetable sources
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/825—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving pigment biosynthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
    • Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

La invencion se refiere a un metodo para producir cetocarotinoides mediante el cultivo de plantas geneticamente modificadas que muestran una actividad cetolasa en le fruto de estas.

Description

PROCEDIMIENTO PARA ELABORAR CETOCAROTENOIDES EN FRUTOS DE PLANTAS MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención está relacionada con un procedimiento para elaborar cetocarotenoides mediante el" cultivo de plantas genéticamente modificadas que presentan en los frutos una actividad cetolasa, las plantas genéticamente modificadas, como también su uso como alimentos o forraje y para la elaboración de extractos de cetocarotenoide . Se sintetizan carotenoides de novo en bacterias, algas, hongos y plantas. Los cetocarotenoides, por consi-guíente los carotenoides que contienen por lo menos un grupo ceto, como por ejemplo, astaxantina, cantaxantina, equineno-na, 3-hidroxiequinenona, 3' -hidroxiequinenona, adonirubina o adonixantina son antioxidantes y pigmentos naturales que son producidos por algunas algas y microorganismos como metaboli-tos secundarios. , En virtud de sus propiedades colorantes, se emplean los cetocarotenoides y especialmente la astaxantina como pro-ductos auxiliares de pigmentación en la alimentación animal, en especial en la cria de truchas, salmones, y camarones. La elaboración de astaxantina se realiza en la actualidad en gran parte mediante procedimientos de síntesis química. Actualmente, los cetocarotenoides naturales, como por ejemplo la astaxantina natural, se obtienen en procedimientos biotecnológicos en pequeñas cantidades mediante el cultivo de algas, por ejemplo, Haematococcus pluviali's, o mediante la fermentación de microorganismos optimizados a través de tecnología genética y a continuación mediante el aislamiento . Por lo tanto, un procedimiento biotecnológico rentable para elaborar cetocarotenoides naturales es de gran importancia .' ANTECEDENTES DE LA INVENCION La WO 98/18910 describe la síntesis de cetocarotenoides en nectarios de flores de tabaco mediante la introducción de un gen de cetolasa en el tabaco. La WO 01/20011 describe un constructo de ADN para producir cetocarotenoides, en especial astaxantina, en semillas de plantas de semillas oleaginosas como colza, mirasol, haba de soja y mostaza utilizando un promotor especifico de semillas y una cetolasa de Haematococcus . Por cierto, los procedimientos revelados en el estado de la técnica entregan plantas genéticamente modificadas que presentan en tejidos específicos un contenido de cetoca-rotenoides, pero que también presentan la desventaja de que el nivel del contenido de cetocarotenoides y la pureza, en especial de astaxantina, no son todavía satisfactorios.
DESCRIPCION DE LA INVENCION Por consiguiente, la invención tiene la misión de poner a disposición un procedimiento alternativo para elaborar cetocarotenoides mediante el cultivo de plantas, o bien de poner a disposición otras plantas transgénicas que produzcan cetocarotenoides que presenten propiedades optimizadas, como por ejemplo, un contenido más alto de cetocarotenoides y no presenten la desventaja descrita del estado de la técnica. En consecuencia, se descubrió un procedimiento para la elaboración de cetocarotenoides cultivando plantas genéticamente modificadas que presentan en los frutos una actividad cetolasa.
Por actividad cetolasa se entiende la actividad en-zimática de una cetolasa. Por una cetolasa se entiende una proteina que presenta la actividad enzimática de introducir un grupo ceto en el anillo de ß-ionona, si se da el caso sustituido, de carotenoides . Se entiende especialmente por cetolasa una proteina que presenta la actividad enzimática de transformar ß-caroteno en cantaxantina. Por consiguiente, se entiende por actividad cetolasa la cantidad de cantaxantina formada o bien la cantidad de ß-caroteno transformado por la proteina cetolasa en un determinado tiempo . Con el objetivo de que los frutos de las plantas genéticamente modificadas presenten una actividad cetolasa, eñ una modalidad preferida se emplean plantas genéticamente modificadas que expresan en los frutos una cetolasa. En consecuencia, se utiliza preferentemente en el procedimiento conforme a la invención plantas genéticamente modificadas que contienen en los frutos por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa. No se conocen plantas que presenten como tipo silvestre en los frutos una actividad cetolasa. En especial, las plantas preferidas, descritas a continuación, no plantas preferidas, descritas a continuación, no presentan en los frutos como tipo silvestre actividad cetolasa alguna. Eri la presente invención, se produce la actividad cetolasa en los frutos de plantas genéticamente modificadas mediante el cambio genético de los ortets . La planta genéticamente modificada conforme a la invención presenta, por lo tanto, en comparación con el ortet no genéticamente modificado, una actividad cetolasa en los frutos y, por consiguiente, está preferentemente en condiciones de expresar una cetolasa en los frutos. Por el concepto "ortet" o "tipo silvestre" se entiende preferentemente el ortet respectivo no genéticamente modificado. Por el concepto "planta genéticamente modificada" se entiende, de preferencia, una planta genéticamente modificada en comparación con el ortet . Según el contexto, por el concepto "planta" se entiende el ortet (tipo silvestre) o una planta genéticamente modificada, conforme a la invenció, o ambos. La provocación de la expresión genética de un ácido nucleico, que codifica una cetolasa, en los frutos de las plantas se lleva a cabo preferentemente mediante la introduc-ción de ácidos nucleicos, que codifican las cetolasas, en el ortet . En consecuencia, la invención está relacionada especialmente con el procedimiento antes descrito, el cual se caracteriza porque se emplean plantas genéticamente modificadas en las que se ha introducido a partir de un ortet, por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa. Con este propósito, se puede utilizar principalmente cualquier gen de cetolasa, por consiguiente, cualquier ácido nucleico que codifique una cetolasa. Todos los ácidos nucleicos mencionados en la descripción pueden ser por ejemplo, una secuencia del ARN, ADN o ADNc. En las secuencias genómicas de la cetolasa de fuentes eucarióticas que contienen intrones, hay que emplear preferentemente secuencias de ácido nucleico ya procesadas, como los respectivos. ADNc, en el caso de que el ortet no esté en condiciones o no pueda ser puesto en condiciones de expresar la respectiva cetolasa. Ejemplos de ácidos nucleicos que codifican una cetolasa y las respectivas cetolasas que se pueden emplear en el procedimiento conforme a la invención o bien en las plantas genéticamente modificadas conforme a la invención descritas más adelante, son por ejemplo, secuencias de Haematococcus pluvialis, en especial de Haematococcus pluvialis Flotow em. Wille (Accesión No. X86782 ácido nucleico: SEQ ID No. 3, proteina: SEQ ID No. 4), Haematococcus pluvialis, NIES-144 (Accesión No. D45881; ácido nucleico: SEQ ID No. 3, proteina: SEQ ID No. 4) , Agrobacterium aurantiacum (Accesión No. : D58420; ácido nucleico: SEQ ID No. 5, proteina: SEQ ID No. 6)", Alicaligenes spec. (Accesión No. D58422; ácido nu-cleico: SEQ ID No. 7, proteina: SEQ ID No. 8), Paracoccus marcusii (Accesión No. Y15112; ácido nucleico: SEQ ID No. 9, proteina: SEQ ID No. 10), Synechocystxc sp. Cepa PC6803 (Accesión No. S76617, NP442491); ácido nucleico: SEQ ID No. 11, proteina: SEQ ID No. 12), Bradyrhizobium sp. (Accesión No. AF218415,. BAB 74888; ácido nucleico: SEQ ID No. 13, proteina: SEQ ID No. 14) , Nostoc sp. Cepa PCC7120 (Accesión No. AP003592; ácido nucleico: SEQ ID No. 15, proteina: SEQ ID No. 16), Haematococcus pluvialis (Accesión No.: AF534876, AAN03484; ácido nucleico: SEQ ID No. 37, proteina: SEQ ID No.: 38), Paracoccus sp. MBIC1143 (Accesión No.: D58420, P54972; ácido nucleico: SEQ ID No.: 39, proteina: SEQ ID No. 40) , Brevundinomas aurantiaca (Accesión No.: AY166610, AAN86030; ácido nucleico: SEQ ID No.: 41, proteina: SEQ ID No. 42), Nodularia spumigena NSOR10 (Accesión No.: AY210783, AA064399; ácido nucleico: SEQ ID No.: 43, proteinaí SEQ ID No. 44), Nostoc punctiforme ATCC 29133 (Accesión No.: NZ- AABC01000195, ZP_00111258; ácido nucleico: SEQ ID No.: 45, proteina: SEQ ID No. 46), Nostoc punctiforme ATCC 29133 (Accesión No. : NZ_AABC01000196; ácido nucleico: SEQ ID No.: 47, proteina: SEQ ID No. 48) , Deinococcus radiodurans Rl (Accesión No.: E75561, AE001872; ácido nucleico: SEQ ID No.: 49, proteina: SEQ ID No. 50) Se pueden encontrar fácilmente otros ejemplos naturales de cetolasas y genes de cetolasa que se pueden emplear en el procedimiento conforme a la invención por ejemplo, en diferentes organismos cuya secuencia genómica se conoce, mediante comparaciones de identidad de las secuencias de aminoácido o de las respectivas secuencias retraducidas noácido o de las respectivas secuencias retraducidas del ácido nucleico de bancos de datos con las secuencias antes descritas y especialmente con las secuencias SEQ ID NO. 2 y/o SEQ ID NO. 16 Además, se pueden encontrar fácilmente otros ejemplos naturales de cetolasas y genes de cetolasa a partir de las secuencias antes descritas del ácido nucleico, especialmente a partir de las secuencias SEQ ID. No. 1 y/o SEQ ID No. 15 de diferentes organismos cuya secuencia genómica se desconoce, mediante técnicas de hibridación en forma en si conocida . Se puede realizar la hibridación bajo condiciones moderadas (baja estringencia) o preferentemente bajo condiciones astringentes (alta estringencia) . Se describen dichas condiciones de hibridación por ejemplo en "Molecular Cloning (A Laboratory Manual)" (Clonación molecular, (Manual de Laboratorio)), J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis, 2a edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, Páginas 9.31-9.57 o en "Current Protocols in Molecular Biology" (Protocolos actuales en la biología molecular), John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Por ejemplo, las condiciones durante la etapa de lavado pueden estar seleccionadas del área de condiciones li-mitada por dichas condiciones con baja estringencia (con 2X SSC a 50° C) y dichas condiciones con alta estringencia (con 0,2X SSC a 50° C, preferentemente a 65° C) (20X SSC: citrato sódico 0,3 M, cloruro sódico 3 M, pH 7,0). Además, durante la etapa de lavado, se puede elevar la temperatura de condiciones moderadas a temperatura ambiente, 22° C, hasta condiciones astringentes a 65° C. Se pueden variar en forma simultánea ambos' parámetros: concentración de sal y temperatura. Asimismo, se puede mantener constante uno de los dos parámetros y sólo variar el otro. Durante la hibridación, se pueden ocupar también agentes desnaturalizados como por ejemplo, formamida o SDS. En presencia de formamida 50%, se realiza la hibridación preferentemente a 42° C. Algunos ejemplos de condiciones para la hibridación y la etapa de lavado se entregan a continuación: (1) Condiciones de hibridación con por ejemplo (i) 4X SSC a 65° C, o (ii) 6X SSC a 45° C, o (iii) 6X SSC a 68° C, esperma-ADN de peces desnaturalizado 100 mg/ml, o (iv) 6X SSC, SDS 0,5%, esperma de salmón-ADN fragmentado, desnaturalizado 100 mg/ml a 68° C, o (v) 6XSSC, SDS 0,5%, esperma-ADN de salmón fragmentado, desnaturalizado 100 mg/ml, formamida 50% a 42° C, o (vi) formamida 50%, 4X SSC a 42° C, o (vii) formamida 50% (vol/vol) , albúmina de suero bovino 0,1%, Ficoll 0,1%, polivinilpirrolidona .0, 1%, solución tampón de fosfato sódico 50 mM pH 6,5, NaCl 750 mM, citrato sódico 75 mM a 42° C, o (viii) 2X o 4X SSC a 50° C (condiciones moderadas) , o (ix) formamida 30 a 40%, 2X o 4X SSC a 42° C (condiciones moderadas) . (2) Etapa de lavado durante respectivamente 10 minutos con por ejemplo (i) NaCl 0,015 M/citrato sódico 0,0015 M/SDS 0,1% a 50° C, o (ii) 0,1X SSC a 65° C, o (iii) 0,1X SSC, SDS 0,5% a 68° C, o • (iv) 0,1X SSC, SDS 0,5%, formamida 50% a 42° C, o (v) 0,2X SSC, SDS 0,1% a 42° C, o (vi) 2X SSC a 65° C (condiciones moderadas) . En una modalidad preferida del procedimiento conforme a la invención, se introducen ácidos nucleicos que codifican una proteina, que contienen la secuencia del aminoá-cido SEQ ID NO. 2 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de aminoácidos que presenta una identidad de por lo menos un 20%, preferentemente de al menos un 30%, de preferencia de por lo menos un 40%, preferentemente de al menos un 50%, de preferencia de por lo menos un 60%, preferentemente de al menos un 70%, de preferencia de por lo menos un 80%, con especial preferencia de al menos un 90% a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO. 2 y la propiedad enzimática de una cetolasa. Sin embargo, puede tratarse de una secuencia de cetolasa natural que, como se describió con anterioridad, se puede encontrar mediante una comparación de identidad de las secuencias de otros organismos o se puede tratar de una secuencia de cetolasa artificial que fue transformada a partir de la secuencia SEQ ID NO. 2 mediante variación artificial, por ejemplo mediante sustitución, inserción o deleción de los aminoácidos . En otra modalidad preferida del procedimiento conforme a la invención, se introducen ácidos nucleicos que co-difican una proteina, que contienen la secuencia de aminoácido SEQ ID NO. 16 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de los aminoácidos, que presenta una identidad de por lo menos un 20%, pre-ferentemente de al menos un 30%, de preferencia de por lo menos un 40%, preferentemente de al menos un 50%, de preferencia de por lo menos un 60%, preferentemente de al menos un 70%, de preferencia de por lo menos un 80%, con especial preferencia de al menos un 90% a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO. 16 y la propiedad enzimática de una cetolasa. Sin embargo, puede tratarse de una secuencia de cetolasa natural que, como se describió con anterioridad, se puede encontrar mediante una comparación de identidad de las secuencias de otros organismos o se puede tratar de una secuencia de cetolasa artificial que fue transformada a partir de la secuencia SEQ ID NO. 16 mediante variación artificial, por ejemplo mediante sustitución, inserción o deleción de los aminoácidos . Por el concepto "sustitución" se ha de entender en la descripción el intercambio de uno o varios aminoácidos por uno o varios aminoácidos. Preferentemente, se realizan los denominados intercambios conservadores en los cuales el aminoácido reemplazado tiene una propiedad similar a la del aminoácido original, por ejemplo un intercambio de Glu por Asp, Gln por Asn, Val por lie, Leu por lie, Ser por Thr.
La deleción es la sustitución de un aminoácido por un enlace directo. Las posiciones preferidas para las dele-ciones son los términos del polipéptido y las uniones entre los dominios individuales de la protexna. Las inserciones son. inclusiones de aminoácidos en la cadena polipeptidica, siendo reemplazado formalmente un enlace directo por uno o varios aminoácidos. Por identidad entre dos proteinas se entiende la identidad de los aminoácidos a través del largo total de la protexna, en especial la identidad que se calcula mediante la comparación con la ayuda del software Lasergene de la empresa DNASTAR, Inc. Madison, Wisconsin (E.E.Ü.Ü.) utilizando el método Clustal (Higgins DG, Sharp PM. Fast and sensitive múltiple sequence alxgnments on a microcomputer. Comp. Appl. Bios-ci. 1989 abril; 5(2): 151-1) mediante el ajuste de los siguientes parámetros: Parámetro de alineamientos múltiples (Múltiple alignment parameter) : Penalización (Gap penalty) 10 Penalización por longitud de abertura (Gap length penalty) 10 Parámetro de alineamientos a pares (Pairwise alignment parameter) : K-tuple 1 Penalización (Gap penalty) 3 Ventana (Window) 5 Diagonales guardadas (Diagonals saved) 5 Por una proteina que presenta una identidad de por lo menos un 20% a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO. 2 ó 16, se entiende, en consecuencia, una proteina que presenta una identidad de por lo menos un 20% al momento de comparar su secuencia con la secuencia SEQ ID NO. 2 ó 16, especialmente conforme a la algoritmia del programa antes mencionada con el conjunto de parámetros antes mencionado. Se pueden obtener secuencias adecuadas del ácido nucleico por ejemplo, mediante la retraducción de la secuencia polipeptidica conforme al código genético. Preferentemente, se emplean codones que se ocupan con frecuencia en el uso de codones (codon usage) específicos de plantas. El uso de codones permite determinar fácilmente en virtud de análisis computacionales otros genes importantes de los organismos respectivos. En una modalidad especialmente preferida, se introduce en la planta un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ ID NO. 1.
En otra modalidad especialmente preferida, se introduce en la planta un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ ID NO. 15. Además, todos los genes de cetolasa antes mencionados se pueden elaborar en una forma en si conocida mediante la sintesi-s química de los componentes del nucleótido como por ejemplo, mediante la condensación de fragmentos de componentes complementarios traslapados individuales del ácido nucleico de doble hélice. Se puede realizar la síntesis química de "los oligonucleótidos por ejemplo, en una forma en sí conocida, conforme al método de fosfoamidita (Voet, Voet, 2a edición, iley Press Nueva York, Páginas 896 - 897) . La adición de oligonucleótidos sintéticos y el llenado de vacíos con la ayuda del fragmento Klenow de la ADN polimerasa y reacciones de ligazón como también procedimientos generales de clonación aparecen descritos en "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (Clonación molecular: Manual de laboratorio) , Sambrook y colaboradores (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press. En una modalidad especialmente preferida del procedimiento conforme a la invención, se utilizan plantas genéticamente modificadas que presentan en los frutos la velocidad de expresión más alta de una cetolasa.
Esto se logra preferentemente realizando la expresión genética de la cetolasa bajo el control de un promotor especifico de fruto. Por ejemplo, con este fin se introducen en la planta los ácidos nucleicos antes descritos, según se describe detalladamente a continuación, en un constructo de ácido nucleico, funcionalmente unido con un promotor especifico de fruto. Por plantas se entienden preferentemente conforme a la invención plantas que presentan como tipo silvestre cro-moplastos en los frutos. Otras plantas preferidas presentan en forma adicional como tipo silvestre en los frutos carotenoides, en especial ß-caroteno, zeaxantina, neoxantina, violaxantina o lu-teina . Otras plantas preferidas presentan en forma adicional como tipo silvestre en los frutos una actividad hidroxi-lasa . Por actividad hidroxilasa se entiende la actividad enzimática de una hidroxilasa. Por una hidroxilasa se entiende una proteina que presenta la actividad enzimática de introducir un grupo hidroxi en un anillo de ß-ionona, si se da el caso sustituido, de carotenoides.
En especial se entiende por una hidroxilasa una proteina que presenta la actividad enzimática de transformar ß-caroteno en zeaxantina o cantaxantina en astaxantina. Por consiguiente, se entiende por actividad hidroxilasa la cantidad de zeaxantina formada o bien la cantidad de ß-caroteno transformada por la proteina hidroxilasa en un determinado tiempo. En una modalidad preferida, se cultivan plantas que frente al tipo silvestre presentan en forma adicional una actividad hidroxilasa aumentada y/o una actividad ß-ciclasa aumentada. Por actividad hidroxilasa se entiende la actividad enzimática de una hidroxilasa. Por una hidroxilasa se entiende una proteina que presenta la actividad enzimática de introducir un grupo hidroxi en un anillo de ß-ionona, si se da el caso sustituido, de carotenoides . Por una hidroxilasa se entiende especialmente una proteina que presenta la actividad enzimática de transformar ß-caroteno en zeaxantina o cantaxantina en astaxantina. Por consiguiente, por actividad hidroxilasa se entiende la cantidad de zeaxantina formada o bien la cantidad de ß-caroteno o cantaxantina transformada por la proteína hidroxilasa en un tiempo determinado. En el caso de una actividad hidroxilasa aumentada frente al tipo silvestre, se aumenta, por lo tanto, la cantidad de zeaxantina o astaxantina formada o bien la cantidad de ß-caroteno o cantaxantina transformada por la proteina hidroxilasa en un tiempo determinado en comparación con el tipo silvestre. De preferencia, este aumento de la actividad hidroxilasa es de por lo menos un 5%, con mayor preferencia de al menos un 20%, con mayor preferencia de por lo menos un 50%, con mayor preferencia de al menos un 100%, preferentemente de por lo menos un 300%, con mayor preferencia aún de al menos un 500%, especialmente de por lo menos un 600% de la actividad hidroxilasa del tipo silvestre. Por actividad ß-ciclasa se entiende la actividad enzimática de una ß-ciclasa. Por una ß-ciclasa se entiende una proteína que presenta la actividad enzimática de transformar un resto lineal terminal de licopina en un anillo de ß-ionona. En especial se entiende por una ß-ciclasa una proteína que presenta la actividad enzimática de transformar ?-caroteno en ß-caroteno.
En consecuencia, se entiende por actividad ß-ciclasa la cantidad de ß-caroteno formada o bien la cantidad de ?-caroteno transformada por la proteina ß-ciclasa en un determinado tiempo. En el caso de una actividad aumentada de ß-ciclasa frente al tipo silvestre, se aumenta, por lo tanto, la cantidad de ß-caroteno formada o bien la cantidad de ?-caroteno transformada por la proteina ß-ciclasa en un tiempo "determinado en comparación con el tipo silvestre. De preferencia, este aumento de la actividad ß-ciclasa es de por lo menos un 5%, con mayor preferencia de al menos un 20%, con mayor preferencia de por lo menos un 50%, con mayor preferencia de al menos un 100%, preferentemente de por lo menos un 300%, con mayor preferencia aún de al menos un 500%, especialmente de por lo menos un 600% de la actividad ß-ciclasa del tipo silvestre. Por el concepto "tipo silvestre" se entiende conforme a la invención el ortet respectivo no genéticamente modificado . De preferencia y especialmente en los casos en los cuales no se puede coordinar claramente la planta o el tipo silvestre, se entiende respectivamente por "tipo silvestre" para el aumento de la actividad hidroxilasa, para el aumento de la actividad ß-ciclasa y para el aumento del contenido de cetocarotenoides respectivamente una planta de referencia. Esta planta de referencia es preferentemente Lycopersicon esculentum. La determinación de la actividad hidroxilasa en plantas genéticamente modificadas conforme a la invención y en plantas de tipo silvestre o bien de referencia se realiza preferentemente bajo las siguientes condiciones: Se determina in vitro la actividad de la hidroxilasa conforme a Bouvier y colaboradores (Biochim. Biophys. Acta 1391 (1998), 320-328). Se agregan a una cantidad determinada de extracto de plantas ferredoxina, ferredoxina-NADP oxidore-ductasa, catalasa, NADPH como también beta-caroteno con mono- y digalactosil glicéridos. La determinación de la actividad hidroxilasa se lleva a cabo con especial preferencia bajo las siguientes condiciones conforme a Bouvier, Keller, d'Harlingue y Cámara ("Xanthophyll Biosynthesis; Molecular and Functional Charac-terization of Carotenoid Hydroxilases from Pepper Fruits" (Capsicum annuum L.; Biochim. Biophys. Acta 1391 (1998), 320-328): Se realiza el ensayo in vitro en un volumen de 0,250 mi. La preparación contiene fosfato de potasio 50 mM (pH 1,6), ferredoxina de espinaca 0,025 mg, ferredoxina-NADP+ oxidoreductasa de espinaca 0,5 unidades, NADPH 0,25 mM, beta-caroteno 0,010 mg (en Tween 80 emulsionado 0,1 mg) , 0,05 mM de una mezcla de mono- y digalactosil glicéridos, (1:1), 1 unidad catálisis, 200 mono- y digalactosil glicéridos, (1:1), albúmina de suero bovino 0,2 mg y extracto de plantas en diferente volumen. . Se incuba la mezcla de reacción durante 2 horas a 30° C. Se extraen los productos de reacción* con disolvente orgánico como por ejemplo, acetona o clorofor-mo/metanol (2:1) y se determinan mediante HPLC. Se realiza la determinación de la actividad ß-ciclasa en plantas genéticamente modificadas conforme a la invención y en plantas de tipo silvestre o de referencia preferentemente bajo las siguientes condiciones: Se determina in vitro la actividad de la ß-ciclasa conforme a Fraser y Sandmann (Biochem. Biophys. Res. Comm 185(1) (1992) 9-15). A una determinada cantidad de extracto de plantas se agregan fosfato de potasio como solución tampón (pH 7,6), licopina como sustrato, proteina de estroma de pi-miento, NADP+, NADPH y ATP. La determinación de la actividad hidroxilasa se lleva a cabo con especial preferencia bajo las siguientes condiciones conforme a Bouvier, d'Harlingue y Cámara (Molecu-lar Analysis of Carotenoid Cyclae Inhibition; Arch. Biochem. Biophys. 346(1) (1997) 53-64): Se lleva a cabo el ensayo in vitro en un volumen de 250 81 volumen. La preparación contiene fosfato de potasio 50 mM (pH 7,6), diferentes cantidades de extracto de plantas, licopina 20 nM, 250 ocg de proteina de estroma cromoplastidica de pimiento, NDAP+ 0,2 mM, NADPH 0,2 mM y ATP 1 mM. Se disuelven el NADP/NADPH y el ATP en 10 mi de etanol con 1 mg de Tween 80 inmediatamente antes de la adición al medio de incu-bación. Después de un tiempo de reacción de 60 minutos a 30° C, se termina la reacción mediante la adición de clorofor-mo/metanol (2:1). Se analizan los productos de reacción extraídos en cloroformo mediante HPLC. En Fraser y Sandman (Biochem. Biophys. Res. Comm. 185(1) (1992) 9-15), se describe un ensayo alternativo con sustrato radioactivo. Se puede realizar el aumento de la actividad hidroxilasa y/o de la actividad ß-ciclasa mediante diversas maneras, por ejemplo, mediante la desconexión de los mecanis-mos de regulación inhibidores a nivel de expresión y de proteína o mediante el aumento de la expresión genética de los ácidos nucleicos que codifican una hidroxilasa y/o de los ácidos nucleicos que codifican una ß-ciclasa frente al tipo silvestre . Se pueden llevar a cabo el aumento de la expresión genética de los ácidos nucleicos que codifican una hidroxilasa y/o el aumento de la expresión genética del ácido nucleico que codifica una ß-ciclasa frente al tipo silvestre igualmente mediante maneras diferentes, por ejemplo mediante la inducción del gen de la hidroxilasa y/o del gen de la ß-ciclasa por parte de activadores o mediante la introducción de una o varias copias del gen de la hidroxilasa y/o copias del gen de la ß-ciclasa, por consiguiente mediante la introducción de por lo menos un ácido nucleico que codifica una hidroxilasa y/o por lo menos un ácido nucleico que codifica una e-ciclasa en la planta. Por aumento de la expresión genética de un ácido nucleico que codifica una hidroxilasa y/o una ß-ciclasa, se entiende conforme a la invención también la manipulación de la expresión de la hidroxilasa y/o ß-ciclasa endógenas propias de las plantas. Esto se puede lograr por ejemplo, mediante el cambio de la secuencia de ADN del promotor para las hidroxilasas y/o ß-ciclasas que codifican genes. Un cambio semejante que tiene por consecuencia un aumento de la velocidad de expre-sión del gen, se puede realizar por ejemplo, mediante dele-ción o inserción de las secuencias del ADN. Según se describió con anterioridad, es posible cambiar la expresión de la hidroxilasa y/o ß-ciclasa endógenas mediante la aplicación de estímulos exógenos. Esto se puede llevar a cabo mediante condiciones fisiológicas especiales, en consecuencia mediante la aplicación de sustancias extrañas . Además, se puede lograr un cambio o bien un aumento de la expresión de un gen endógeno de la hidroxilasa y/o ß-ciclasa entrando en interacción una proteína reguladora gue no se encuentra en la planta no transformada con el promotor de este gen. Dicho regulador puede ser una proteína quimera que está compuesta por un dominio de unión al ADN y un dominio activador de la transcripción, según se describe por ejemplo, en WO/06166. En una modalidad preferida, se realizan el aumento de la expresión genética de un ácido nucleico que codifica una hidroxilasa y/o el aumento de la expresión genética de un ácido nucleico que codifica una ß-ciclasa mediante la introducción de por lo menos un ácido nucleico que codifica una hidroxilasa y/o mediante la introducción de por lo menos un ácido nucleico que codifica una ß-ciclasa en la planta. Con este propósito, se puede utilizar principalmente cualquier gen de la hidroxilasa o bien cualquier gen de la ß-ciclasa, por consiguiente cualquier ácido nucleico que codifique una hidroxilasa y cualquier ácido nucleico que codifique una ß-ciclasa. En el caso de secuencias genómicas del á'cido nucleico de la hidroxilasa o bien de la ß-ciclasa de fuentes eucarióticas que contienen intrones, hay que emplear secuencias de ácido nucleico preferentemente ya procesadas, como los respectivos ADNc, en el caso de que la planta anfitriona no esté en condiciones o no pueda ser puesta en condiciones de expresar la respectiva hidroxilasa o bien ß-ciclasa. Ejemplos de los genes de la hidroxilasa son los ácidos nucleicos que codifican una hidroxilasa de Haematococ-cus pluvialis, Accesión No. AX038729, WO 0061764); (ácido nucleico: SEQ ID No. 51, proteina: SEQ ID No. 52), como también genes de hidroxilasa de los siguientes números de accesión: |emb| CAB55626. 1, CAA70427. 1, CAA70888. 1, CAB55625. 1, AF499108_ 1, AF315289_ 1, AF296158_ 1, AAC49443. 1, NP 194300. 1, NP 200070. 1, AAG10430. 1, CAC06712. 1, AAM88619. 1, CAC95130.1, AAL80006. 1, AF162276_ 1, ??053295. 1, AAN85601. 1, CRTZ_ERWHE, CRTZ_PANAN, BAB79605. 1, CRTZ_ALCSP, CRTZ_AGRAU, CAB56060. 1, ZP_00094836. 1, AAC44852. 1, BAC77670. 1, NP_745389. 1, NP_344225. 1, NP_849490. 1, ZP-00087019. 1, NP_503072. 1, NP_852012. 1, NP_115929. 1, ZP_00013255. 1 Además, una hidroxilasa especialmente preferida es la hidroxilasa de tomate (ácido nucleico: SEQ ID N° "55, proteína: SEQ ID N° 56) . Ejemplos de genes de b-ciclasa son ácidos nucleicos que codifican una b-ciclasa de tomate (Accesión X86452) . (Á-cido nucleico: SEQ ID No. 53, proteína: SEQ ID No. 54), como también genes de b-ciclasa de los siguientes número de accesión : S66350 licopeno beta-ciclasa (EC 5.5.1-) - tomate CAA60119 licopeno sintasa [Capsicum annuum] S66349 licopeno beta-ciclasa (EC 5.5.1.-) - tabaco común CAA57386 licopeno ciclasa [Nicotiana tabacum] AAM21152 licopeno beta-ciclasa [Citrus sinensis] AAD38049 licopeno ciclasa [Citrus x paradisi] ???86060 licopeno ciclasa [Citrus unshiu] AAF44700 licopeno beta-ciclasa [Citrus sinensis] AAK07430 licopeno beta-ciclasa [Adonis palaestina] ??T10429 beta ciclasa [Tagetes erecta] 7???81880 licopeno ciclasa AAB53337 licopeno beta ciclasa AAL92175 beta-licopeno ciclasa [Sandersonia aurantiaca] CAA67331 licopeno ciclasa [Narcissus pseudonarcissus] 7?7??45381 beta ciclasa [Tagetes erecta] ??018661 licopeno beta-ciclasa [Zea mays] A&G21133 licopeno beta-ciclasa especifica de crcrmoplasto [Licopersicon esculentum] AAF18989 licopeno beta-ciclasa [Daucus carota] ZP_001140 proteina hipotética [Prochlorococcus marinus str. MIT9313] ZP_001050 proteina hipotética [Prochlorococcus marinus subsp. pastoris str. CCMP1378] ZP_001046 proteina hipotética [Prochlorococcus marinus subsp. pastoris str. CCMP1378] ZP_001134 proteina hipotética [Prochlorococcus marinus str. MIT9313] ZP_001150 proteina hipotética [Sinechococcus sp. H 8102] AAF10377 licopeno ciclasa [Deinococcus radiodurans] BAA29250 proteina hipotética de 393 aa de longitud [Pyrococ-cus horikoshii] B7AC77673 licopeno beta-monociclasa [marine bacterium P99-3] AAL01999 licopeno ciclasa [Xanthobacter sp. Py2] ZP_000190 proteina hipotética [Chloroflexus aurantiacus] ZP_000941 proteina hipotética [Novosphingobium aromaticivo rans] AAF78200 licopeno ciclasa [Bradyrhizobium sp. ORS278] BAB79602 crtY [Pantoea agglomerans pv. milletiae] CAAS4855 licopeno ciclasa [Streptomyces griseus] AAA21262 dicopeno ciclasa [Pantoea agglomerans] C37802 proteina crtY - Erwinia uredovora BAB79602 crtY [Pantoea agglomerans pv. milletiae] AAA64980 licopeno ciclasa [Pantoea agglomerans] AAC44851 licopeno ciclasa BAA09593 licopeno ciclasa [Paracoccus sp. MBIC1143] ZP_000941 proteína hipotética [Novosphingobium aromaticivo rans] CAB56061 licopeno beta-ciclasa [Paracoccus marcusii] BAA20275 licopeno ciclasa [Erythrobacter longus] ZP-000570 proteína hipotética [Thermobifida fusca] ZP_000190 proteína hipotética [Chloroflexus aurantiacus] ???07430 licopeno beta-ciclasa [Adonis palaestina] CAA67331 licopeno ciclasa [Narcissus pseudonarcissus] AAB53337 licopeno beta ciclasa BAC77673 licopeno beta-monociclasa [marine bacterium P99-3] Además, una ß-ciclasa especialmente preferida es la b-ciclasa especifica de cromoplasto del tomate (AAG21133) (ácido nucleico: SEQ ID. No. 57; proteina: SEQ ID: No. 58) . En las plantas transgénicas preferidas conforme a la invención, existe por consiguiente en esta modalidad preferida frente al tipo silvestre por lo menos un gen de la hidroxilasa y/o un gen de la ß-ciclasa. En esta modalidad preferida, - la planta genéticamente modificada presenta por ejemplo, al menos un ácido nucleico exógeno que codifica una hidroxilasa, o por lo menos dos ácidos nucleicos endógenos que codifican una hidroxilasa y/o al menos un ácido nucleico exógeno que codifica una ß-ciclasa o por lo menos dos ácidos nucleicos endógenos que codifican una ß-ciclasa. En la modalidad preferida antes descrita, se emplea preferentemente como genes de la hidroxilasa ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 52 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de los aminoácidos, que presentan una identidad de por lo menos un 30%, preferentemente de al menos un 50%, de preferencia de por lo menos un 70%, con mayor preferencia aún de al menos uri 90%, y con mayor preferencia aún de por lo menos un 95%, a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO. 52 y la aminoácido con la secuencia SEQ ID NO. 52 y la propiedad en-zimática de una hidroxilasa. Se pueden encontrar fácilmente otros ejemplos de hidroxilasas y genes de la hidroxilasa por ejemplo, en diferentes organismos cuya secuencia genómica se conoce, según se describió anteriormente, mediante comparaciones de homología de las secuencias del aminoácido o de las secuencias de ácido nucleico retraducidas respectivas de bancos de datos con la SEQ ID NO: 52. Además, se pueden encontrar fácilmente en una forma en si conocida otros ejemplos de hidroxilasas y genes de la hidroxilasa a partir de la secuencia SEQ ID NO: 51 de diferentes organismos cuya secuencia genómica se desconoce, según se describió anteriormente, mediante técnicas de hibridación y PCR. En una modalidad especialmente preferida, a fin de aumentar la actividad hidroxilasa se introducen en organismos ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácido de la hidroxilasa de la secuencia SEQ ID NO: 52. Se pueden obtener secuencias apropiadas de ácido nucleico por ejemplo, mediante la retraducción de la secuencia polipetídica conforme al código genético.
Con este propósito, se emplean preferentemente dichos codones que se ocupan con frecuencia conforme al uso de codones (codon usage) específicos de plantas. El uso de codones permite determinar fácilmente en virtud de análisis com-putacionales otros genes conocidos de los organismos respectivos . En una modalidad especialmente preferida, se introduce en el organismo un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ ID NO. 51. En la modalidad preferida antes descrita, se utiliza preferentemente como genes de la ß-ciclasa ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 54 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de los aminoácidos, que presentan una identidad de por lo menos un 30%, preferentemente de al menos un 50%, de preferencia de por lo menos un 70%, con mayor preferencia aún de al menos un 90%, y con mayor preferencia aún de por lo menos un 95%, a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO. 54 y la pro-piedad enzimática de una ß-ciclasa. Se pueden encontrar fácilmente otros ejemplos de ß-ciclasas y genes de la ß-ciclasa por ejemplo, en diferentes organismos cuya secuencia genómica se conoce, según se des-cribió anteriormente, mediante comparaciones de homología de las secuencias de aminoácido o de las secuencias de ácido nucleico retraducidas respectivas de bancos de datos con la SEQ ID NO: 54. Además, se pueden encontrar fácilmente en una forma en si conocida otros ejemplos de ß-ciclasas y genes de la ß-ciclasa a partir de la secuencia SEQ ID NO: 53 de diferentes organismos cuya secuencia genómica se desconoce, "mediante técnicas de hibridación y PCR. En otra modalidad especialmente preferida, a fin de aumentar la actividad ß-ciclasa se introducen en organismos ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácido de la ß-ciclasa de la secuencia SEQ ID NO: 54. Se pueden obtener secuencias apropiadas de ácido nucleico por ejemplo, mediante la retraducción de la secuencia polipetídica conforme al código genético. Preferentemente, se emplean con este propósito co-dones que se ocupan con frecuencia conforme al uso de codones específicos de plantas. El uso de codones permite determinar fácilmente en virtud de análisis computacionales otros genes conocidos de los organismos respectivos .
En una modalidad especialmente preferida, se introduce en el organismo un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ ID NO. 53. Además, todos los genes de hidroxilasa o genes de ß-ciclasa antes mencionados se pueden elaborar en una forma en si conocida mediante la síntesis química de los componentes del nucleótido como por ejemplo, mediante la condensación de fragmentos de componentes complementarios traslapados individuales del ácido nucleico de doble hélice. Se puede realizar la síntesis química de los oligonucleótidos por ejemplo, en una forma en sí conocida, conforme al método de fos-foamidita (Voet, Voet, 2a edición, Wiley Press Nueva York, Páginas 896 - 897) . La adición de oligonucleótidos sintéticos y el llenado de vacíos con la ayuda del fragmento lenow de la ADN polimerasa y reacciones de ligazón como también procedimientos generales de clonación aparecen descritos en "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Sambrook y colaboradores (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press. Las plantas especialmente preferidas son plantas seleccionadas de los géneros de plantas Actinophloeus, Aglaeonoma, Ananas, Arbutus, Archontophoenix, Area, Aronia, Asparagus, Attalea, Berberís, Bixia, Brachychilum, Bryonia, Caliptocalix, Capsicum, Carica, Celastrus, Citrulus, Citrus, Convallaria, Cotoneaster, Crataegus, Cucumis, Cucúrbita. Cuscuta, Cycas, Cyphomandra, Dioscorea, Diospyrus, Dura, Elaeag-nus, Elaeis, Erythroxylon, Euonymus, Ficus, Fortunella, Fragaria, Gardenia, Gonocaryum, Gossypium, Guava, Guilielma, Hibiscus, Hippophaea, Iris, Lathyrus, Lonicera, Luffa, Ly-cium, Lycopersicum, Malpighia, Mangifera, Mormodica, Murraya, Musa, enga, Palisota, Pandanus, Passiflora, Persea, Physa-lis, Prunus, Ptychandra, Púnica, Pyracantha, Pyrus", Ribes, Rosa, Rubus, Sabal, Sambucus, Seaforita, Sheferdia, Solarum, Sorbus, Synaspadix, Tabernae, Tamus, Taxus, Trichosanthes, Triphasia, Vaccinium, Viburnum, Vignia o Vitis. Se realiza la determinación de la actividad cetola-sa en plantas genéticamente modificadas conforme a la invención de acuerdo a los métodos de Frazer y colaboradores (J. Biol. Chem. 272(10): 6128 - 6135, 1997). Se determina la actividad cetolasa en extractos vegetales con los substratos beta-caroteno y cantaxantina en presencia de lipido (lecitina de soja) y Detergens (sodiocolato) . Se determinan las relaciones entre sustrato / producto de los ensayos de cetolasa mediante HPLC. En el procedimiento conforme a la invención para elaborar cetocarotenoides, siguen preferentemente a la etapa de cultivo de las plantas genéticamente modificadas, denomi-nadas también a continuación plantas transgénicas, una cosecha de las plantas y un aislamiento de cetocarotenoides de los frutos de las plantas. Se cultivan las plantas transgénicas en una forma en si conocida en suelos nutritivos y se cosechan en forma correspondiente . El aislamiento de los cetocarotenoides de los frutos cosechados se realiza en una forma en si conocida, por ejemplo, mediante el secado y a continuación la extracción y, si se da el caso, otros procesos de purificación quimica o fisica, como por ejemplo, métodos de precipitación, cristalografía, procedimiento de separación térmica, como procedimiento de rectificación o procedimiento de separación fisica, como por ejemplo, cromatografía. El aislamiento de los cetocarotenoides de los frutos se lleva a cabo por ejemplo preferentemente mediante disolventes orgánicos tales como acetona, hexano, éter o tere . -metilbutiléter . Otros procedimientos de aislamiento de cetocarotenoides son descritos por Egger y leinig (Phytochemistry (Fi-toquimica) (1967) 6, 437-440) y por Eger (Phytochemistry (1965) 4, 609 - 618) . De preferencia, los cetocarotenoides están seleccionados del grupo compuesto por astaxantina, cantaxantina, equinenona, 3-hidroxiequinenona, 3' -hidroxiequinenona, adoni-rubina y adonixantina . Un cetocarotenoide especialmente preferido es la astaxantina . La producción de plantas transgénicas se realiza preferentemente mediante la transformación de los ortets, con un constructo de ácido nucleico que contiene por lo menos uno, de preferencia también varios de los ácidos nucleicos antes descritos que están unidos funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en plantas. Estos constructos de ácido nucleico en los cuales las secuencias de ácido nucleico codificadoras están funcionalmente unidas con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y traducción en plantas, se denominan a continuación también casetes de expresión. Las señales de regulación contienen preferentemente uno o varios promotores que garantizan la transcripción y la traducción en plantas. Los casetes de expresión contienen señales de regulación, por consiguiente secuencias de ácido nucleico reguladoras que guian la expresión de la secuencia codificadora en la célula anfitriona. Conforme a una modalidad preferida, un cásete de expresión abarca corriente arriba, es decir, en el extremo 5' de la secuencia codificadora, un promotor y corriente abajo, es decir en el extremo 3', una señal de polia-denilación y, si se da el caso, otros elementos reguladores que están unidos operativamente con la secuencia codificadora que se encuentra en el medio para por lo menos un gen anteriormente descrito. Por unión operativa se entiende la disposición secuencial de promotor, secuencia codificadora*, termi-nador y, si se da el caso, otros elementos reguladores de mo-do que cada uno de los elementos reguladores pueda cumplir conforme a lo prescrito con su función en la expresión de la secuencia codificadora. A continuación, se describen como ejemplos los constructos de ácido nucleico preferidos, los casetes de ex-presión y los vectores para plantas y el procedimiento para producir plantas transgénicas como también las plantas trans-génicas mismas . Las secuencias preferidas para la unión operativa, pero no restringidas a ello, son secuencias de reconocimiento ("targeting") para garantizar la localización subcelular en el apoplasto, en la vacuola, en plástidos, en la mitocondria, en el retículo endoplasmático (ER) , en el núcleo celular, en el corpúsculo de aceite u otros compartimentos e intensifi-cadores de la traducción como la secuencia guía 5' del virus del mosaico del tabaco (Gallie y colaboradores, Nucí. Acids Res. 15 (1987), 8693-8711). Por principio, como promotores del cásete de expresión es apropiado todo promotor que pueda guiar la expresión de genes extraños en las plantas. Promotor "constitutivo" significa aquellos promotores que garantizan una expresión en numerosos, preferentemente todos los, tejidos por un lapso de tiempo más grande del desarrollo de las plantas, de preferencia hasta todos los momentos del desarrollo de las plantas. De preferencia, se utiliza especialmente un promotor vegetal o un promotor que proceda de un virus de planta. Se prefiere en forma especial el promotor del transcripto 35S del CaMV virus del mosaico de la coliflor (Franck y colaboradores (1980) Cell (Célula) 21: 285-294; Odell y colaboradores (1985) Nature (Naturaleza) 313: 810-812; Shewmaker y colaboradores (1985) Virology (Virología) 140: 281-288; Gardner y colaboradores (1986) Plant Mol Biol 6: 221-228) o el promotor CaMV 19S (Estados Unidos N° 5.352.605, WO 84/02913; Ben-fey y colaboradores (1989) EMBO J 8: 2195-2202). Otro promotor constitutivo apropiado es el promotor pds (Pecker y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci USA 89: 4962-4966) o el promotor de la "subunidad pequeña de Ru-bisco" (SSÜ) (Estados Unidos No. 4.962.028), el promotor Le-guminB (GenBank Cuenta No. X03677) , el promotor de la nopali-na sintasa de Agrobacterium, el promotor doble de TR, el pro-motor de la OCS (octopina sintasa) de Agrobacterium, el promotor ubiquitina (S. Holtorf y colaboradores (1995) Plant'Mol Biol 29: 637-649), el promotor ubiquitina 1 (Christensen y colaboradores (1992) Plant Mol Biol 18: 675-689; Bruce y colaboradores (1989) Proc Nati Acad Sci USA 86: 9692-9696), el promotor Smas, el promotor cinamil alcohol deshidrogenasa (Estados Unidos No. 5.683.439), los promotores de las sub-unidades vacuolares de la ATPasa o el promotor de una protei-na rica en prolina del trigo (WO 91/13991) , el promotor Pnit (Y07648. L. Hillebrand y colaboradores (1998), Plant. Mol. Biol. 36, 89-99, Hillebrand y colaboradores (1996), Gene (Genes), 170, 197-200, el promotor de la ferredoxina-NADPH-oxidoreductasa (registro en banco de datos AB011474, Posición 70127 a 69493) , el promotor TPT (WO 03006660) , el "superpro-motor" (Patente de Estados Unidos No. 5955646), el promotor 34S (Patente de Estados Unidos No. 6051753) como también otros promotores de genes cuya expresión constitutiva en las plantas es conocida por los especialistas .
Los casetes de expresión pueden contener también un promotor químicamente inducible (Articulo sinóptico: Gatz y colaboradores (1997) Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 48: 89-108) a través del cual se puede dirigir la expresión del gen de la cetolasa en la planta hasta un momento determinado. Se pueden utilizar igualmente este tipo de promotores, como por ejemplo, el promotor PRP1 (Ward y colaboradores (1993) Plant Mol Biol 22: 361-366), un promotor inducible por ácido salicilico (WO 95/19443), un promotor inducible por benzosulfonamida (EP 0 388 186) , un promotor inducible por tetraciclina (Gatz y colaboradores (1992) Plant J 2: 397-404), un promotor inducible por ácido abscisico (EP 0 335 528) o bien un promotor inducible por etanol o ciclohexanona (WO 93/21334) . Además, se prefieren promotores que son inducidos por estrés biótico o abiótico como por ejemplo, el promotor inducible por patógeno del gen PRP1 (Ward y colaboradores (1993) Plant Mol Biol 22: 361-366), el promotor hsp70 o hsp80 inducible por calor del tomate (Estados Unidos No. 5.187.267), el promotor de la alfa amilasa inducible por frío de la papa (WO 96/12814), el promotor PPDK inducible por luz o el promotor pinll inducido por lesión (EP 375091) .
Los promotores inducibles por patógeno abarcan los de genes que son inducidos debido a un ataque de patógenos como por ejemplo, genes de proteínas PR, proteínas SAR, b-1, 3-glucanasa, quitinasa, etc. (por ejemplo, Redolfi y cola-boradores (1983) Neth J Plant Pathol 89: 245-254; üknes y colaboradores (1992) The Plant Cell 4: 645-656; Val Loon (1985) Plant Mol Viral 4: 111-116; Marineau y colaboradores (1987) Plant Mol Biol 9: 335-342; Matton y colaboradores (G987) Molecular Plant-Microbe Interactions 2: 325-342; Somssich y co-laboradores (1986) Proc Nati Acad Sci USA 83: 2427-2430; Somssich y colaboradores (1988) Mol Gen Genetics 2: 93-98; Chen y colaboradores (1996) Plant J 10: 955-966; Zhang y Sing (1994) Proc Nati Acad Sci ÜSA 91: 2507-2511; Warner y colaboradores (1993) Plant J 3: 191-201; Siebertz y colaboradores (1989) Plant Cell 1: 961-968 (1989). También están abarcados los promotores inducibles por lesión como el promotor del gen pinll (Ryan (1990) Ann Rev Phytopath 28: 425-449; Duan y colaboradores (1996) Nat Biotech 14: 494-498), del gen wunl y wun2 (Estados Unidos N° 5.428.148), del gen winl y win2 (Stanford y colaboradores (1989) Mol Gen Genet 215: 200-208), de la sistemina (McGurl y colaboradores (1992) Science (Ciencia) 225: 1570-1573), del gen WIP1 (Rohmeier y colaboradores (1993) Plant Mol Biol 22: 783-792; Ekelkamp y colaboradores (1993) BEBS Letters 323: 73-76), del gen MPI (Corderok y colaboradores (1994) The Plant J 6(2): 141-150) y similares. Otros promotores apropiados son por ejemplo, promotores específicos de maduración de frutos, como por ejemplo el promotor específico de maduración de frutos del tomate (WO 94/21794, EP 409 625) . Los promotores dependientes del desarrollo incluyen en parte los promotores específicos de tejido, porque la formación de tejidos individuales se realiza según las leyes de la naturaleza en forma dependiente del desarrollo. Además, se prefieren especialmente aquellos promotores que aseguran la expresión en los tejidos o partes de plantas en los cuales tiene lugar por ejemplo, la biosíntesis de los cetocarotenoides o bien sus etapas previas. Se prefieren por ejemplo, los promotores con especificidades para las anteras, ovarios, pétalos, sépalos, flores, hojas, tallos, raíces y frutos y combinaciones de lo mismo. Los promotores específicos de bulbos, raíces nutríferas o raíces son por ejemplo, el promotor de la patatina Clase I (B33) o el promotor del inhibidor de la catepsina D de la papa.
Los promotores específicos de hojas son por ejemplo, el promotor de ' la FBPasa citosólica de la papa (WO 97/05900), el promotor SSU (subunidad pequeña) del Rubisco (ribulosa-1, 5-bifosfato-carboxilasa) o el promotor ST-LSI de la papa (Stockhaus y colaboradores (1989) EMBO J 8: 2445-2451) . Los promotores específicos de flores son por ejemplo, el promotor de la fitoeno sintasa (WO 92/16635) o el promotor del gen P-rr (WO 98/22593) . Los promotores específicos de anteras son por ejemplo, el promotor 5126 (Estados Unidos No. 5.689.049, Estados Unidos No. 5.689.051), el promotor glob-1 o el promotor g-Zein. Los promotores específicos de frutos son por ejem-pío el promotor Pds del tomate (GenBank-Accesión U46919; V. Corona, B. Aracri, G. Kosturkova, G. E. Bartley, L. Pitto, L. Giorgetti, P. A. Scolnik y G. Giuliano, "Regula-tion of a Caretoneoid Biosynthesis Gene Promotor During Plant Development" Plant J 9 (4), 505-512 (1996), SEQ ID NO. 17, el promotor 2A11 del tomate (J. R. Pear, N. Ridge, R. Rasmussen, R. E. Rose y C. M. Houck, "Isolation and Char-acterization of a Fruti-Specific cDNA and the Corresponding Genomic Clone from Tomato" Plant Mol Biol. 13 (6), 639-651 (1989) , SEQ ID NO. 18, el promotor de la cucumisina (H. Yamagata, K. Yo-nesu, A. Hirata e Y . Aizono, "TGTCACA Motif Is a Novel cis-Regulatory Enhancer Element Envolved in Fruti-Specific Ex-pression of the Cucumisin Gene" J. Biol. Chem 277 (13), 11582-11590 (2002), SEQ ID NO. 19, el promotor del gen de la endogalacturonasa" (J. Redondo-Nevado, N. Medina-Escobar, J. L. Caballero-Repullo y J. Munoz-Blanco, "A 1 Fruit-specific and Developmentally Regulated Endo-Polygalacturoronase Gene from Stra berry (Fragaria x ananassa c.v. Chandler) J. Experimental Botany 52 (362) 1941-1945 (2001), SEQ ID NO. 20, el protomor de la poligalacturonasa del tomate (F.
J. Nicholas, C. J. Smith, W. Schuch, C. R. Bird y D. Grier-son, "High Levéis of Ripening-Specific Repórter Gene Expres-sion Directed by Tomato Fruit Polygalacturonase Gene-flanking Regions", Plant Mol. Biol. 28 (3), 423-435 (1995)), SEQ ID NO. 21, los promotores TMF7 y TMF9 (Estados Unidos N° 5608150) , el promotor E4 (S. Cordes, J. Deikman, L. J. Mar-gossian, R. L. Fischer, "Interaction of a Developmentally Regulated DNA-Binding Factor with Sites Flanking Two Differ-ent Fruit-Ripening Genes from Tomato" (1989), Plant Cell 1, 1025-1034) y el promotor E8 (Deikman y Fisher, "Interaction of a DNA Binding Factor with the 5' -Flanking Región of an Ethyl-ene-Responsive Fruit Ripening Gene from Tomato" (198?3) , EMBO J. 7, 3315-3320) . Se describen otros promotores apropiados para la expresión en plantas (Rogers y colaboradores (1987) Meth in Enzymol 153: 253-277; Schardl y colaboradores (1987) Gene (Genes) 6: 1-11; Berger y colaboradores (1989) Proc Nati Acad Sci USA 86: 8402-8406) . Todos los promotores descritos en la presente soli-citud hacen posible, por lo general, la expresión de la ceto-lasa en los frutos de las plantas conforme a la invención. En el procedimiento conforme · a la invención, se prefieren en forma especial los promotores constitutivos como también en forma particular los promotores específicos de fruto. Por consiguiente, la presente invención está relacionada especialmente con un constructo de ácido nucleico, que contiene en forma funcionalmente unida un promotor específico de fruto, con especial preferencia, un cífico de fruto, con especial preferencia, un promotor especifico de fruto antes descrito, y un ácido nucleico que codifica una cetolasa. La elaboración de un cásete de expresión se realiza preferentemente mediante la fusión de un promotor apropiado con un ácido nucleico antes descrito que codifica una cetolasa y, de preferencia, con un ácido nucleico insertado entre la secuencia de ácido nucleico y el promotor, que codifica para un péptido de tránsito especifico de plástidos, como también con una señal de poliadenilación conforme a técnicas corrientes de recombinación y clonación, como se describen por ejemplo en "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", T. Maniatis, E. F. Fritsch y J. Sambrook, Cold Spring Harbor Laboratory, -Cold Spring Harbor, NY (1989) como también en "Ex-periments ith Gene Fusions" (Experimentos con fusiones de genes), T. J. Silhavy, M. L. Berman y L. W. Enquist, Cold Spring Harbor, NY (1984) y en "Current Protocols in Molecular Biology" (Protocolos actuales en biología molecular) , F. M. Ausubel y colaboradores, Greene Publishing Assoc. y Wiley-Interscience (1987) . Los ácidos nucleicos preferentemente insertados, que codifican un péptido de tránsito plastídico, garantizan la localización en plástidos y en especial en cromoplastos .
Se pueden emplear también casetes de expresión cuya secuencia de ácido nucleico codifica para una proteina de fusión cetolasa, siendo una parte de la proteina de fusión un péptido de tránsito que dirige la translocación del polipép-tido. Se prefieren para los cromoplastos péptidos de tránsito específicos que son desdoblados enzimáticamente después de la translocación de la cetolasa en los cromoplastos de la parte cetolasa. Se prefiere en forma especial el péptido de tránsi-to que está derivado de la transcetolasa plastídica de Nico-tiana tabacum u otro péptido de tránsito (por ejemplo, el péptido de tránsito de la subunidad pequeña del Rubisco (rbcS) o de ,1a ferredoxina NADP oxidoreductasa como también de la isopentilpirofosfato isomerasa-2) o su equivalente fun-cional. Se prefieren en forma especial las secuencias de ácido nucleico de tres casetes del péptido de tránsito-plástidos de la transcetolasa plastídica del tabaco en tres ásteres de lectura como fragmentos Kpnl/BamHI con un codón ATG en el sitio de corte Ncol: pTP09 KpnI_GGTACCATGGCGTCTTCTTCTTCTCTCACTCTCTCTCAAGCTATCCTCTCTCGTTC TGTCCCTCGCCATGGCTCTGCCTCTTCTTCTCAACTTTCCCCTTCTTCTCTCACTTTTTCC GGCCTTAAATCCAATCCCAATATCACCACCTCCCGCCGCCGTACTCCTTCCTCCGCCGCCG CCGCCGCCGTCGTAAGGTCACCGGCGATTCGTGCCTCAGCTGCAACCGAAACCATAGAGAA AACTGAGACTGCGGGA TCC_BamHI pTPlO KpnI_GGTACCATGGCGTCTTCTTCTTCTCTCACTCTCTCTCAAGCTATCCTCTCTCGTTC TGTCCCTCGCCATGGCTCTGCCTCTTCTTCTCAACTTTCCCCTTCTTCTCTCACTTTTTCC GGCCTTAAATCCAATCCCAATATCACCACCTCCCGCCGCCGTACTCCTTCCTCCGCCGCCG CCGCCGCCGTCGTAAGGTCACCGGCGATTCGTGCCTCAGCTGCAACCGAAACCATAGAGAA AACTGAGACTGCGCTG GATCC_BamHI pTPll KpnI_GGTACCATGGCGTCTTCTTCTTCTCTCACTCTCTCTCAAGCTATCCTCTCTCGTTC TGTCCCTCGCCATGGCTCTGCCTCTTCTTCTCAACTTTCCCCTTCTTCTCTCACTTTTTCC GGCCTTAAATCCAATCCCAATATCACCACCTCCCGCCGCCGTACTCCTTCCTCCGCCGCCG CCGCCGCCGTCGTAAGGTCACCGGCGATTCGTGCCTCAGCTGCAACCGAAACCATAGAGAA AACTGAGACTGCGGGG ATCC_BamHI Otros ejemplos para un péptido de tránsito plasti-dico son el péptido de tránsito de la isopentenil-pirofosfato isomerasa-2 plastidica (IPP-2) de Arabidopsis thaliana y el péptido de tránsito de la subunidad pequeña de la ribulosa bifostato carboxilasa (rbcS) de la arveja (F. Guerineau, S. oolston, L. Brooks, P. Mullineaux (1988) wAn Expression Cassette For Targeting Foreign Proteins into the Chloroplasts" . Nucí. Acids. Res. 16: 11380). Se pueden elaborar los ácidos nucleicos conforme a la invención en forma sintética o se pueden obtener en forma natural o dichos ácidos nucleicos pueden contener una mezcla de componentes de ácido nucleico sintéticos y naturales, como también pueden estar compuestos por diferentes segmentos de gen heterólogos de diferentes organismos. Se prefieren, como se describió anteriormente, secuencias de nucleótido sintéticas con codones que son preferidos por plantas. Se pueden determinar estos codones preferidos por plantas a partir de codones con la frecuencia de proteínas más alta que se expresan en la mayoría de las especies interesantes de plantas. En la preparación de un cásete de expresión, se pueden manipular diferentes fragmentos de ADN con el objetivo de obtener una secuencia de nucleótido que por conveniencia se dirige en la dirección correcta y que está equipada con un áster de lectura correcto. Para la unión de los fragmentos de ADN entre sí, se pueden emplear en los fragmentos adaptadores o "linkers".
Por conveniencia, se pueden proporcionan las regiones de promotor y terminador en la dirección de transcripción con un linker o polilinker que contiene uno o varios sitios de restricción para la inserción de esta secuencia. Por lo general, el linker tiene 1 a 10, la mayoría de las veces 1 a 8, preferentemente 2 a 6 sitios de restricción. En general, el linker tiene dentro del área reguladora un tamaño de menos de 100 pb, con frecuencia menos de 60 pb, aunque por "lo menos 5 pb. El promotor puede ser tanto nativo o bien homólogo como también extraño o heterólogo para la planta anfitriona. El cásete de expresión contiene preferentemente en la dirección 5' -3' de transcripción el promotor, una secuencia de ácido nucleico codificadora o un constructo de ácido nucleico y una región para la terminación transcripcional . Diferentes áreas de terminación son intercambiables entre sí a discreción. Un ejemplo de un terminador es el terminador 35S (Guerineau y colaboradores (1998) Nucí Acids Res. 16: 11380), el terminador nos (A. Depicker, S. Stachel, P. Dhaese, P. Zambryski, H. M. Goodman, "Nopaline Synthase: Transcript Map-ping and DNA Sequence" J. Mol Appl Genet. 1982; 1 (6): 561-73) o el terminador oes (J. Gielen, M. de Beuckeleer, J. Seurinck, H. Debroek, H. de Greve, M. Lemmers, M. van Mon-tagu, J. Schell (1984) "The Complete Sequence of the TL-DNA of the Agrobacterium tumefaciens Plasmid pTiAch5" EMBO J. 3: 835-846) . Además, se pueden emplear manipulaciones que proporcionan los sitios de corte de restricción adecuados o apartan los sitios de corte de restricción o ADN sobrante. Donde se consideren inserciones, deleciones o sustituciones como por ejemplo, transiciones y transversiones, se pueden utilizar mutagénesis in vitro, "primer-repair", restricción o ligazón. En el caso de manipulaciones apropiadas, como por ejemplo, restricción, "chewing-back" o llenado de espacios para "blutends" (extremos romos) , se pueden poner a disposición extremos complementarios de los fragmentos para la ligazón. Las señales de poliadenilacion preferidas son señales de poliadenilacion vegetales, preferentemente aquellas que corresponden esencialmente a señales de T-ADN-poliadenilación de Agrobacterium tumefaciens, en especial del gen 3 del T-ADN (octopina sintasa) del plásmido Ti pTiACH5 (Gielen y colaboradores, EMBO J. 3 (1984), 835 y páginas siguientes) o equivalentes funcionales. La transferencia de genes extraños al genoma de una planta se denomina transformación.
Con este propósito, se pueden utilizar métodos en si conocidos para la transformación y la regeneración de plantas a partir de tejidos de plantas o células de plantas para la transformación transiente o estable. Métodos apropiados para la transformación de plantas son la transformación de protoplastos mediante la absorción del ADN inducida por polietilenglicol, el procedimiento biolistico con el "cañón de genes" - el asi llamado método de bombardeo de partículas, la electroporación, la incubación de embriones secos en solución que contiene ADN, la microinyec-ción y la transferencia de genes mediada por Agrobacterium, antes descrita. Los métodos mencionados se encuentran descritos por ejemplo en "Techniques for Gene Transfer" (Técnicas para la transferencia de genes) , B. Jenes y colaboradores, en "Transgenic Plants" (Plantas transgénicas) , Vol 1, Enginee-ring and ütilization, publicado por S. D. Kung y R. Wu, Aca-demic Press (1993) , 128-143 como también en Potrykus, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991), 205-225). De preferencia, se clona el constructo que se ha de expresar en un vector que es apropiado para transformar Agrobacterium tumefaciens, por ejemplo pBinl9 (Bevan y colaboradores, Nucí. Acids Res. 12 (1984), 8711) o con especial preferencia pSUN2, pSUN3, pSUN4 o pSUN5 (WO 02/00900) .
Se pueden utilizar agrobacterias transformadas con un plásmido de expresión en forma en si conocida para la transformación de plantas, por ejemplo, bañando hojas o trozos de hojas lesionadas en una solución de agrobacterias y cultivándolas a continuación en medios apropiados . Para la producción preferida de plantas genéticamente modificadas, denominadas también a continuación plantas transgénicas, se clona el cásete de expresión fusionado que expresa una cetolasa, en un vector, por ejemplo, pBinl9 o es-pecialmente pSüN2 que es apropiado para ser transformado en Agrobacterium tumefaciens . Se pueden emplear entonces en forma en si conocida agrobacterias transformadas con dicho vector para la transformación de plantas, en especial de plantas de cultivo, ba-ñando por ejemplo hojas o trozos de hojas lesionadas en una solución de agrobacterias y cultivándolas a continuación en medios apropiados. La transformación de plantas mediante agrobacterias se da a conocer entre otras cosas en "Vectors for Gene Trans-fer in Higher Plants", F. F. White; en Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, publicado por S. D. Kung y R. Wu, Academic Press, 1993, páginas 15-38. A partir de las células transformadas de las hojas o bien trozos de hojas le-sionadas se pueden regenerar en forma en si conocida plantas transgénicas que contienen un gen integrado en el cásete de expresión para la expresión de un ácido nucleico que codifica una cetolasa. Para la transformación de una planta anfitriona con un ácido nucleico que codifica una cetolasa, se incorpora un cásete de expresión como inserción en un vector recombinante cuyo vector ADN contiene señales de regulación funcionales adicionales, por ejemplo, secuencias para replicación o inte-gración. Los vectores apropiados se encuentran descritos entre otros en "Methods in Plant Molecular Biology and Biotech-nology" (Métodos en biología molecular de plantas y biotecnología) (CRC Press), Cap. 6/7, páginas 71-119 (1993). Mediante el uso de técnicas de recombinación y clo-nación antes citadas, se pueden clonar los casetes de expresión en vectores apropiados que hacen posible su multiplicación por ejemplo, en E. coli. Vectores de clonación apropiados son entre otros pJITH7 (Guerineau y colaboradores (1988) Nucí. Acids. Res. 16: 11380), pBR332, pUC series, M13mp se-ries, pACYC184, pMC1210, pMcl 210 y pCL1920. Se prefieren en forma especial los vectores binarios que pueden replicarse tanto en E. coli como también en agrobacterias .
En ello, según sea la elección del promotor, se puede realizar la expresión en forma constitutiva o de preferencia, en forma especifica en los frutos. Por consiguiente, la invención está relacionada también con un procedimiento para producir plantas genéticamente modificadas, caracterizado porque se introduce un cons-tructo de ácido nucleico que contiene en forma funcionalmente unida un promotor especifico de fruto y ácidos nucle'icos que codifican una cetolasa en el genoma del ortet. Además, la invención está relacionada con las plantas genéticamente modificadas que presentan en los frutos una actividad cetolasa en comparación con los ortets. En una modalidad preferida, se logra la actividad cetolasa expresando la planta genéticamente modificada una cetolasa en los frutos . Por lo tanto, las plantas genéticamente modificadas preferidas contienen en los frutos por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa. En otra modalidad preferida, se realiza, como se detalló anteriormente, la provocación de la expresión genética de un ácido nucleico que codifica una cetolasa mediante la introducción de ácidos nucleicos que codifican una cetolasa en el ortet .
En consecuencia, la invención está relacionada con especial preferencia con una planta genéticamente modificada antes descrita, caracterizada porque se ha introducido en la planta a partir de un ortet por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa. La invención está relacionada especialmente con plantas genéticamente modificadas, seleccionadas de los géneros de plantas Actinophloeus, Aglaeonema, Ananas, "Arbutus, Archontophoenix, Area, Aronia, Asparagus, Attalea, Berberís, Bixia, Brachychilum, Bryonia, Caliptocalix, Capsicum, Carica, Celastrus, Citrulus, Citrus, Convallaria, Cotoneaster, Cra-taegus, Cucumis, Cucúrbita, Cuscuta, Cycas, Cyphomandra, Dioscorea, Diospyrus, Dura, Elaeagnus, Elaeis, Erythroxylon, Euonymus, Ficus, Fortunella, Fragaria, Gardinia, Gonocaryum, Gossypium, Guava, Guilielma, Hibiscus, Hippophaea, Iris, Lat-hyrus, Lonicera, Luffa, Lycium, Lycopersicum, Malpighia, an-gifera, Mormodica, Murraya, Musa, enga, Palisota, Pandanus, Passiflora, Persea, Physalis, Prunus, Ptychandra, Púnica, Py-racantha, Pyrus, Ribes, Rosa, Rubus, Sabal, Sambucus, Seafo-rita, Shepherdia, Solanum, Sorbus, Synaspadix, Tabernae, Taimas, Taxus, Trichosanthes, , Triphasia, Vaccinium, Viburnum, Vignia o Vitis, que contienen por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
Géneros de plantas que gozan totalmente de una preferencia especial son Ananas, Asparagus, Capsicum, Citrus, Cucumis, Cucúrbita, Citrullus, Lycopersicum, Passiflora, Prunus, Physalis, Solanum, Vaccinium y Vitis, que contienen por lo menos un ácido nucleico transgénico que codifica una cetolasa. Como ya se mencionó anteriormente, en las plantas transgénicas preferidas que expresan la cetolasa en -los frutos, lo que más se prefiere en forma especial es la expresión de la cetolasa en los frutos. Las plantas genéticamente modificadas, especialmente preferidas, presentan, como se mencionó anteriormente, en forma adicional una actividad hidroxilasa y/o actividad ß-ciclasa aumentada frente a una planta silvestre. Otras modalidades preferidas se describieron con anterioridad en el procedimiento conforme a la invención. Las plantas transgénicas cuyo producto de multiplicación como también sus células, tejidos o partes vegetales, en especial sus frutos constituyen otro objetivo de la presente invención. Se pueden emplear las plantas genéticamente modificadas, según se describió con anterioridad, para elaborar ce-tocarotenoides , en especial astaxantina.
Se pueden utilizar las plantas genéticamente modificadas, conforme a la invención consumibles por los hombres y los animales, con un contenido elevado de cetocarotenoides también por ejemplo de manera directa o conforme a un procesamiento en si conocido como alimentos o forraje o como suplementos de alimentos y forraje. Además, se pueden emplear las plantas genéticamente modificadas para elaborar extractos de plantas que contienen cetocarotenoides y/o para "producir suplementos de forraje y alimentos. Las plantas genéticamente modificadas presentan, en comparación con el tipo silvestre, un contenido elevado de cetocarotenoides. En general, por un contenido elevado de cetocarotenoides se entiende un contenido elevado de cetocarotenoide total. Sin embargo, por un contenido elevado de cetocarotenoides se entiende también en especial un contenido modificado de cetocarotenoide preferido sin que forzosamente el contenido de carotenoide total deba ser elevado. En una modalidad especialmente preferida, las plantas genéticamente modificadas conforme a la invención presentan, en comparación con el tipo silvestre, un contenido elevado de astaxantina.
En este caso, por un contenido elevado se entiende especialmente un contenido provocado de cetocarotenoides o bien astaxantina. Se explica la invención a través de los siguientes ejemplos, pero la invención no está limitada a dichos ejemplos : Condiciones experimentales generales Análisis de secuencia del ADN recombinante La secuenciación de las moléculas de ADN recombi-nante se realiza con un secuenciador de ADN con fluorescencia inducida por láser de la empresa Licor (distribución a través de MWG Biotech, Ebersbach) conforme al método de San-ger (Sanger y colaboradores, Proc. Nati Acad. Sci. Estados Unidos 74 (1977), 5463-5467) . Ejemplo 1: Amplificación de un ADNc que codifica la secuencia primaria total de la cetolasa de Haematococcus pluviales Flotow em. Wille Se amplificó el ADNc que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvlalis mediante PCR del cultivo en sus-pensión de Haematococcus pluvlalis (Cepa 192.80 de la "Colección de cultivos de algas de la Universidad de Góttingen") . Para la preparación del ARN total de un cultivo en suspensión de Haematococcus pluvialis (Cepa 192.80) que se había realizado durante 2 semanas con luz natural indirecta a temperatura ambiente en medio de Haematococcus (acetato sódico 1,2 g/1, extracto de levadura 2 g/1, gC12x6H20 0,2 g/1, CaC112x2H2o 0,02; pH 6,8; después del sometimiento a autocla-ve, adición de L-asparagina 400 mg/1, FeS04xH20 10 mg/1) , se cosecharon las células, se congelaron en nitrógeno líquido y se pulverizaron en mortero. A continuación, se trasladaron 100 mg de las células de algas pulverizadas congeladas a un recipiente de reacción y se absorbieron en 0,8 mi de solu-ción tampón Trizol (Life Technologies) . Se extrajo la suspensión con 0,2 mi de cloroformo. Después de una centrifugación de 15 minutos a 12.000 g, se quitó el exceso acuoso y se trasladó a un nuevo recipiente de reacción y se extrajo con un volumen de etanol. Se hizo precipitar el ARN con un volu-men de isopropanol, se lavó con etanol 75% y se disolvió el pellet en agua DEPC (durante la noche incubación del agua con 1/1000 volumen de dietilpirocarbonato a temperatura ambiente, a continuación se sometió a autoclave) . Se determinó la concentración del ARN fotométricamente. Para la síntesis del ADNc, se desnaturalizaron 2,5 µg de ARN total durante 10 minutos a 60° C, se enfriaron durante 2 minutos sobre hielo y se circunscribieron mediante un kit de ADNc (ready-to-go-you-prime-beads, Pharmacia Biotech) en el ADNc conforme a los datos del fabricante utilizándose para ello un partidor especifico antisentido (PR1 SEQ ID No. 29) . Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Haematococcus pluvialis (Cepa 192.80) mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de Haematococcus pluvialis empleándose para ello un partidor especifico en sentido (PR2 SEQ ID No. 30) y un partidor especifico antisentido (PR1 SEQ ID No. 29) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes : La PCR para la amplificación del ADNc que codifica para una proteina cetolasa compuesta por la secuencia primaria total, se realizó en una preparación de reacción de 50 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 4 µ? de un ADNc de Haematococcus pluvialis (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 mM - PR1 (SEQ ID No. 29) 0,2 mM - PR2 (SEQ ID No. 30) 0,2 mM - 10X PCR solución tampón (TARARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TARARA) 0,25 µ? - agua destilada 25,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 53° C 2 minutos 72° C 3 minutos IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 29 'y SEQ ID No. 30 dio como resultado un fragmento 1.155 Pb que codifica para una proteína compuesta por la secuencia primaria total (SEQ ID No. 22) . Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pGEM-Teasy (Promega) y se obtuvo el clon pGKET02. La secuenciación del clon pGKET02 con el partidor T7 y el partidor SP6 confirmó una secuencia que se diferencia únicamente en los tres codones 73, 114 y 119 en una base de la secuencia publicada X86782. Se reprodujeron tales intercambios de nucleótidos en un experimento de amplificación independiente y dichos intercambios representaron, por lo tanto, la secuencia de nucleótido en la cepa 192.80 de Haemato-coccus pluvialis (Figuras 3 y 4, comparaciones de secuencia) . Por consiguiente, se empleó este clon para la clonación en el vector de expresión pJIT117 (Guerineau y colabo-radores 1988, Nucí Acids Res. 16: 11380). Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento SpHI de 1.027 Pb de pGKET02 y la ligazón en el vector pJIT117 cortado por SpHI. El clon que contiene el gen de la cetolasa de Haematococcus pluvialis en la orientación correcta como fusión traslacional N-terminal con la secuencia de péptido de tránsito rbcs, se llama pJKET02.
Ejemplo 2: Amplificación de un ADNc que codifica la cetolasa de Haematococcus pluvialis Flotow em. Wille con un N-término acortado en 14 aminoácidos Se amplificó el ADNc que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis (Cepa 192.80) con un N-término acortado en 14 aminoácidos, mediante PCR de un cultivo en suspensión de Haematococcus pluvialis (Cepa 192.80 de la "Colección de cultivos de algas de la Universidad de Góttin-gen") . Se realizó la preparación del ARN total de un cultivo en suspensión de Haematococcus pluvialis (Cepa 192.80) tal como se describe en el Ejemplo 1. Se llevó a cabo la síntesis del ADNc tal como se describe en el Ejemplo 1.
Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Haematococcus pluvíalis (Cepa 192.80) con un N-término acortado en 14 aminoácidos mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de Haematococcus pluvíalis empleándose para ello un partidor especifico en sentido (PR3 SEQ ID No. 31) y un partidor especifico antisentido (PR1 SEQ ID No. 29) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: La PCR para la amplificación del ADNc que codifica para una proteina cetolasa con un N-término acortado en 14 aminoácidos, se realizó en una preparación de reacción de 50 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 4 µ? de un ADNc de Haematococcus pluvíalis (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 m - PR1 (SEQ ID No. 29) 0,2 M - PR3 (SEQ ID No. 31) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (TAKARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 µ? - agua destilada 25,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 53° C 2 minutos 72° C 3 minutos IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 29 y SEQ ID No. 31 dio como resultado un fragmento de 1.111 Pb que codifica para una proteina cetolasa, donde los aminoácidos N-terminales (posición 2-16) están reemplazados por ün único aminoácido (leucina) . Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pGEM-Teasy (promega) y se obtuvo el clon pGKET02. Las secuenciaciones con el partidor T7 y el partidor SP6 confirmaron una secuencia idéntica a la secuencia SEQ ID No. 22, reemplazándose la región 5' (posición 1-53) de la SEQ ID No. 22 en el amplificado SEQ ID No. 24 por una secuencia de nonámero que se desvia en la secuencia. Por consiguiente, se empleó este clon para la clonación en el vector de expresión pJIT117 (Guerineau y colaboradores 1988, Nucí Acids Res. 16: 11380) . Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento SpHI de 985 Pb de pGKET03 y la ligazón con el vector pJIT117 cortado por SpHI. El clon que contiene la cetolasa de Haematococcus pluvialis con un N-término acortado en 14 aminoácidos en la orientación correcta como fusión translacional N-terminal con el péptido de tránsito rbcs, se llama JKET03.
Ejemplo 3: Amplificación de un ADNc que codifica la cetolasa de Haematococcus pluvialis Flotow em. Wille (cepa 192.80.de la "Colección de cultivos de algas de la Universidad de Góttingen") compuesta por la secuencia primaria total y myc-Tag C-terminal fusionado Se elaboró el ADNc que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis (cepa 192.80) compuesta por la secuencia primaria total y myc-Tag C-terminal fusionado, mediante PCR utilizándose para ello el plásmido pGKET02 (descrito en el Ejemplo 1) y el partidor PR15 (SEQ ID No. 32) . El partidor PR15 está compuesto por una región 3' especifica antisentido (Nucleótidos 40-59) y una región 5' que codifica myc-Tag (Nucleótidos 1-39) . La desnaturalización (5 minutos a 95° C) y el alineamiento ("annealing") (enfriamiento lento a temperatura ara-biente a 40° C) del pGKET02 y del PR15 se llevaron a cabo en una preparación de reacción de 11,5 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - pGKET02 plásmido ADN 1 µg - PR15 (SEQ ID No. 32) 0,1 ]ig El llenado de los extremos 3' (30 minutos a 30° C) se efectúa en una preparación de reacción de 20 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - pGKET02/PR15- reacción de alineamiento 11,5 µ? (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 50 µ? - IX solución tampón Klenow 2 µ? - enzima Klenow 2U Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Haematococcus pluvíalis (cepa 192.80) compuesta por la secuencia primaria total y myc-Tag C-terminal fusionado mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de Haematococcus pluvialis empleándose para ello un partidor especifico en sentido (PR2 SEQ ID No. 30) y un partidor especifico antisentido (PR15 SEQ ID No. 32) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: La PCR para la amplificación del ADNc que codifica para una proteina cetolasa con myc-Tag C-terminal fusionado, se realizó en una preparación de reacción de 50 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 1 µ? de una reacción de alineamiento (elaborada según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 mM - PR15 (SEQ ID No. 32) 0,2 µ - PR2 (SEQ ID No. 30) 0,2 µ - 10X solución tampón para PCR (TARARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TARARA) 0,25 µ? - agua destilada 28,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 53° C 1 minuto 72° C 1 minuto IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 32 y SEQ ID No. 30 dio como resultado un fragmento de 1.032 Pb que codifica para una proteina, compuesta por la secuencia primaria total de la cetolasa de Haematococcus pluvialis como fusión translacional doble con el péptido de tránsito rbsc en el N-término y el myc-Tag en el C-término. Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pGEM-Teasy (Promega) y se obtuvo el clon pGRET02. Las secuenciaciones con el partidor T7 y el partidor SP6 confirmaron una secuencia idéntica a la secuencia SEQ ID No. 22, reemplazándose la región 3' (posición 993-1155) de la SEQ ID No. 22 en el amplificado SEQ ID No. 26 por una en la secuencia gue se desvia de 29 Pb. Por consiguiente, se empleó este clon para la clonación en el vector de expresión pJITH7 (Guerineau y colaboradores 1988, Nucí. Acids Res. 16: 11380).' Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento EcoRI-SpHI de 1.038 Pb de pGKET04 y 'la ligazón con el vector pJIT117 cortado por EcoRI-SpHI. Mediante la ligazón se produjo una fusión translacional entre el C-término de la secuencia de péptido de tránsito rbsc y el N-término de la secuencia de la cetolasa. El clon que contiene la cetolasa de Haematococcus pluvialis con myc-Tag C-terminal fusionado en la orientación correcta como fusión translacional N-terminal con el péptido de tránsito rbcs, se llama pJKET4.
Ejemplo 4: Elaboración de vectores de expresión para la expresión constitutiva de la cetolasa de Haematococcus pluvialis en Licopersicon esculentum Se llevó a cabo la expresión de la cetolasa de Haematococcus pluvialis en L. esculentum bajo el control del promotor constitutivo d35S de CaMV (Franck y colaboradores 1980, Cell 21: 285-294) . Se efectuó la expresión con el pép-tido.de tránsito rbcS de la arveja (Anderson y colaboradores 1986, Biochem J. 240: 709-715) . La elaboración de un plásmido de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium de la cetolasa de Haematococcus pluvialis en L. esculentum se llevó a cabo empleándose para ello el vector binario pSUN3 ( O 02/00900) . - Para la elaboración del vector de expresión pS3KET02f se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 2.8 Kb de pJKET02 con el vector pSÜN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 5, mapa del constructo) . En la Figura 5, el fragmento d35S contiene el promotor 35S duplicado (747 pb) , el fragmento rbcS, el pépti-do de tránsito rbcS de la arveja (204 pb) , el fragmento KET02 (1.027 pb) , la secuencia primaria total que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis, el fragmento term (761 pb) , la señal de poliadenilación de Ca V. Para la elaboración del vector de expresión pS3KET03f se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 2.7 Kb pb de pJKET03 con el vector pSÜN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 6, mapa del constructo) . En la Figura 6, el fragmento d35S contiene el promotor 35S duplicado (747 pb) , el fragmento rbcS, el péptido de tránsito rbcS de la arveja (204 pb) , el fragmento KET03 (987 pb) , la secuencia primaria total acortada en 14 aminoácidos N-terminales que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis, el fragmento term (761 pb) , la señal de poliadenilación de CaMV. Para la elaboración del vector de expresión pS3KET04, se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 2.8 Kb de pJKET04 con el vector pSÜN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 7, mapa del constructo) . En la Figura 7, el fragmento d35S contiene el promotor 35S duplicado (747 pb) , el fragmento rbcS, él pépti-do de tránsito rbcS de la arveja (204 pb) , el fragmento KET04 (1.038 pb) , la secuencia primaria total que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis con myc-Tag C-terminal, el fragmento term (761 pb) , la señal de poliadenilación de CaMV.
Ejemplo 5: Elaboración del vector de expresión para la expresión de la cetolasa de Haematococcus pluvialis en Lycopersicon esculentum. Se realizó la expresión de la cetolasa de Haematococcus pluvialis con el péptido de tránsito rbcS de la arveja (Anderson y colaboradores 1986, Biochem J. 240: 709-715) . Se llevó a cabo la expresión bajo el control de una versión modificada AP3P del promotor AP3 de Arabidopsis thaliana (AL132971: Región de nucleótido 9298-10200; Hill y (AL132971: Región de nucleótido 9298-10200; Hill y colaboradores (1998) Development 125: 1711-1121). Se elaboró el fragmento de ADN que contiene la región AP3 -902 a +15 de Arabidopsis thaliana, mediante PCR em-pleándose para ello ADN genómico (aislado conforme a métodos estándares de Arabidopsis thaliana) y también el partidor PR7 (SEQ ID No. 33) y el partidor PR10 (SEQ ID No. 36) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes : Se efectuó la PCR para la amplificación del ADN que contiene el fragmento de promotor ??3 (-902 a +15) en una preparación de reacción de 50 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 100 ng de ADN genómico de A. thaliana - dNTPs 0,25 mM - PR7 (SEQ ID No. 33) 0,2 mM - PR10 (SEQ ID No. 36) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (Stratagene) 5 µ? - Pfu polimerasa (Stratagene) 0,25 µ? - agua destilada 28,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 50° C 1 minuto 72° C 1 minuto IX 72° C 10 minutos Empleándose métodos estándares, se clonó el ampli-ficado de 922 Pb en el vector de clonación por PCR pCR 2.1 (Invitrogen) y se obtuvo el plásmido pTAP3. La secuenciación del clon pTAP3 confirmó una secuencia que se diferencia únicamente por una inserción (un G en posición 9765 de la secuencia AL132971) y un intercambio de bases (un G en lugar de un A en posición 9726 de la secuencia AL132971) de la secuencia AP3 publicada (AL132971, región de nucleótido 9298-10200) . Se reprodujeron estas diferencias de nucleótido en un experimento de amplificación independiente y dichas diferencias representaron, por consi-guíente, la secuencia de nucleótido real en las plantas Ara-bidopsis thaliana empleadas. Se elaboró la versión modificada AP3P mediante PCR recombinante empleándose para ello el plásmido pTAP3. Se amplificó la región 10200-9771 con los partidores PR7 (SEQ ID No. 33) y los partidores PR9 (SEQ ID No. 35) (amplificado A7/9); se amplificó la región 9526-9285 con el PR8 (SEQ ID No. 34) y el PR10 (SEQ ID No. 36) (amplificado A8/10) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Las reacciones de PCR para la amplificación de los fragmentos de ADN que contienen las regiones región 10200-9771 y región 9526-9285 del promotor AP3, se llevaron a cabo en preparaciones de reacción de 50 µ?, en las cuales estaba contenido lo siguiente: - AP3 amplificado (antes descrito) 100 ng - dNTPs 0,25 mM - partidor en sentido (PR7 SEQ ID No. 33 o 'bien PR8 SEQ ID No. 35) 0,2 mM - partidor antisentido (PR9 SEQ ID No. 35 o bien PR10 SEQ ID No. 36) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (Stratagene) 5 µ? - Pfu Taq polimerasa (Stratagene) 0,25 µ? - Aq. Dest. 28,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 50° C 1 minuto 72° C 1 minuto IX 72° C 10 minutos La PCR recombinante contiene alineamiento de los amplificados A7/9 y A8/10 que se traslapan a través de una secuencia de 25 nucleótidos, completamiento hasta una doble cadena y a continuación amplificación. A través de ello, se produce una versión modificada del promotor AP3, AP3P, en el cual las posiciones- 9670-9526 están borradas. La desnaturalización (5 minutos a 95° C) y el alineamiento (enfriamiento lento a temperatura ambiente a 40° C) de ambos amplificados A7/9 y A8/10 se realizaron en una preparación de reacción de 17,6 81, en la cual estaba contenido lo siguiente: - A7/9 amplificado 0,5 \iq - A8/10 amplificado 0,25 ig El llenado de los extremos 3' (30 minutos a 30° C) se efectuó en una preparación de reacción 20 ce 1, en la cual estaba contenido lo siguiente: - reacción de alineamiento A7/9 y A8/10 (elaborada según se describió anteriormente) 17,6 µ? - dNTPs 50 µ? - IX solución tampón Klenow 2 µ? - enzima Klenow 2ü Se amplificó el ácido nucleico que codifica para la versión de promotor modificada AP3P, mediante PCR empleándose para ello un partidor especifico en sentido (PR7 SEQ ID No. 28) y un partidor específico antisentido (PR10 SEQ ID No. 36) .
Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Se llevó a cabo la PCR para la amplificación del fragmento ??3? en una preparación de reacción de 50 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - reacción de alineamiento (elaborada según se describió anteriormente) 1 µ? - dNTPs 0,25 n - PR7 (SEQ ID No. 33) 0,2 mM - PR10 (SEQ ID No. 36) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (Stratagene) 5 µ? - Pfu Taq polimerasa (Stratagene) 0,25 µ? - Aq. Dest. 28,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 50° C 1 minuto 72° C 1 minuto -IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 33 y SEQ ID No. 36 dio como resultado un fragmento de 778 Pb que codifica para la versión de promotor modificada AP3P. Se clonó el amplificado en el vector de clonación pCR2.1 (Invitrogen) y se obtuvo el clon pTAP3P. Las secuenciaciones con los obtuvo el clon pTAP3P. Las secuenciaciones con los partidores T7 y M13 confirmaron una secuencia idéntica a la secuencia AL132971, región 10200-9298, borrándose la región interna 9285-9526. Por lo tanto, se utilizó este clon para la clona-ción en el vector de expresión pJIT117 (Guerineau y colaboradores 1988, Nucí. Acids Res. 16: 11380). Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento SacI-HindIII de 771 Pb de pTAP3P y "la ligazón en el vector pJIT117 cortado por SacI-HindIII . El clon, que contiene el promotor AP3P en vez del promotor original d35S, se llama pJAP3P. Para la elaboración de un cásete de expresión pJAP3PKET02, se clonó el fragmento SpHI de 1.027 Pb KET02 (descrito en el ejemplo 1) en el vector pJAP3P cortado por SpHI . El clon, que contiene el fragmento KET02 en la orientación correcta como fusión N-terminal con el péptido de tránsito rbcS, se llama pJAP3P ET02. Para la elaboración de un cásete de expresión pJAP3PKET04, se clonó el fragmento SpHI-EcoRI de 1.032 Pb KE-T04 (descrito en el ejemplo 3) en el vector pJAP3P cortado por SpHI-EcoRI. El clon, que contiene el fragmento KET04 en la orientación correcta como fusión N-terminal con el péptido de tránsito rbcS, se llama pJAP3PKET04.
Se llevó a cabo la elaboración de un -vector de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium de la cetolasa controlada con AP3P de Haematococcus pluvialis en L. esculentum empleándose para ello el vector binario pSUN3 (WO 02/00900) . Para la elaboración del vector de expresión pS3AP3PKET02, se ligó el fragmento SaCI_XhoI de 2.8 KB pb de pJAP3KET02 con el vector pSUN3 cortado por Sacl-Xhor (Figura 8, mapa del constructo) . En la figura 8, el fragmento AP3P contiene el promotor AP3P modificado (771 pb) r el fragmento rbcS, el péptido de tránsito rbcS de la arve a (204 pb) , el fragmento KET02 (1.027 pb) , la secuencia primaria total que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis, el fragmento term (761 Pb) la señal de poliadenilación de CaMV. - Para la elaboración del vector pS3AP3PKET04 , se ligó el fragmento SacI_XhoI de 2.8 KB de pJAP3KET04 con el vector pSUN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 9, mapa del constructo) . En la figura 9, el fragmento ??3? contiene el promotor AP3P modificado (771 pb) , el fragmento rbcS, el péptido de tránsito rbcS de la arveja (204 pb) , el fragmento ???04 (1.038 pb) , la secuencia primaria total que codifica para la cetolasa de Haematococcus pluvialis con myc-Tag C-terminal, el fragmento term (761 Pb) , la señal de poliadenilación de CaMV.
Ejemplo 6: Producción de plantas transgénicas Lyco-persicon esculentum La transformación y la regeneración de las plantas de tomate se llevaron a cabo conforme al método publicado de Ling y colaboradores (Plant Cell Reports (1998), 17: 843-847) . Para la variedad, se seleccionó Microtom con una con-centración más alta de canamicina (100 mg/1) . Como explante inicial para la transformación, sirvieron cotiledones e hipocótilos de embriones de siete a diez días' de la linea Microtom. Para la germinación, se empleó el medio de cultivo conforme a Murashige y Show (1962: Murashige y Skoóg, 1962, Physiol. Plant 15, 473-) con sacarosa 2%, pH 6,1. La germinación se produjo a 21° C con poca luz (20 a 100 uE) . Después de siete a diez días, se dividieron transversalmente los cotiledones y se cortaron los hipocótilos en segmentos de aproximadamente 5 a 10 mm de largo y se colocaron en el medio MSBN (MS, pH 6,1, sacarosa 3% + BAP 1 mg/1, ??? 0,1 mg/1) que fue cargado el dia anterior con células de tabaco cultivadas en suspensión. Las células de tabaco fueren cubiertas sin burbujas con papel de filtro estéril. Se realizó el cultivo previo de explantes en zó el cultivo' previo de explantes en el medio descrito durante tres a cinco dias . Se transformaron las células de la cepa Agrobacterium tumefaciens LBA4404 en forma individual con los plásmidos pS3KET02, pS3KET03 o bien ps3AP3KET02. De las cepas individuales de Agrobakterium transformadas con los vectores binarios psS3 ET02, pS3 ET03 o bien pS3KET02 se cultivó respectivamente un cultivo durante la noche en medio YEB con ca-namicina (20 mg/l) a 28 grados Celsius y se centrifugaron las células. Se volvió a suspender el pellet de bacterias con me-dio MS líquido (sacarosa 3%, pH 6,1) y se ajustó a una densidad óptica de 0,3 (a 600 nm) . Se trasladaron los explantes previamente cultivados a la suspensión y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente agitándose levemente. A continuación, se secaron los explantes con papel de filtro estéril y se volvieron a colocar para el co-cultivo de tres días (21° C) en su medio de cultivo previo. Después del co-cultivo, se transfirieron los explantes al medio MSZ2 (MS pH 6,1 + sacarosa 3%, zeatina 2 mg/l, canamicina 100 mg/l, timentina 160 mg/l) y se conserva-ron para la regeneración selectiva a 21 °C bajo condiciones de luz débil (20 a 100 ocE, ritmo de luz 16 h/ 9 h) . Cada dos a tres semanas, se efectuó la transferencia de los explantes hasta que se formaron brotes. Se pudieron separar pequeños brotes del explante y se hizo que echaran raices en MS (pH 6,1, + sacarosa 3%), timentina 160 mg/1, canamicina 30 mg/1, IAA 0,1 mg/1. Se trasladaron las plantas radicadas a un invernadero . Conforme a los métodos de transformación antes descritos, se obtuvieron las siguientes lineas con los siguientes constructos de expresión: Con pS3KET02, se obtuvo: csl3-24, csl3-30, csl3-40. Con pS3KET03, se obtuvo: csl4-2, csl4-3, csl4-9, csl4-19. Con pS3i¾P3KET02 se obtuvo: csl6-15, csl6-34, csl6-35, csl6-40.
Ejemplo 8: Caracterización de los frutos transgéni-eos Se pasó por un mortero el material de fruto de las plantas transgénicas en nitrógeno liquido y se extrajo el polvo (aproximadamente 250 a 500 mg) con acetona 100% (tres veces cada una con 500 ul) . Se evaporó el disolvente y se volvió a suspender el carotenoide en 100 ul de acetona. Mediante una columna de fase reversa C30, se pudo diferenciar entre monoésteres y diésteres de los carotenoi-des . Se modificaron las condiciones de funcionamiento de la HPLC conforme a un método publicado (Frazer y colaboradores (2000), Plant Journal 24(4): 551-558). Se ajustaron las siguientes condiciones de HPLC. Columna de separación: Columna C30 de prontosil, 250 x 4,6 mm (Bischoff, Leonberg, Alemania) Velocidad de flujo: 1,0 ml/min Eluyentes: Eluyente A - metanol 100% Eluyente B - metanol 80%, acetato amónico 0>2% Eluyente C - t-butil-metiléter 100% Perfil de gradientes: Tiempo Velocidad de % eluyente A % eluyente B % eluyente C flujo 1,00 1,0 95, 0 5,0 0 12, 00 1,0 95,0 5,0 0 12,10 1,0 80,0 5,0 15,0 22,00 1,0 76,0 5,0 19,0 22,10 1,0 66,5 5,0 28,5 38,00 1,0 15,0 5,0 80,0 45,00 1,0 95,0 5,0 0 46,0 1,0 95,0 5,0 0 Detección: 300 - 530 nm Se determinaron los espectros mediante el uso de un detector de red de fotodiodos. Se identificaron los carote-noides a través de sus espectros de absorción y sus tiempos de retención en comparación con muestras estándares . La Tabla 1 muestra el perfil de carotenoide en frutos de tomates de los tomates transgénicos y plantas de tomate de control producidos conforme a los ejemplos antes descritos. En comparación con la planta de control no genéticamente modificada, las plantas genéticamente modificadas presentan un contenido de cetocarotenoides y especialmente un contenido de astaxan-tina .
Tabla 1 + significa carotenoide comprobable - significa carotenoide no detectado (+) significa concentración de carotenoide en el limite de comprobación .
La Tabla 2a muestra las cantidades de carotenoide en frutos maduros de tomates transgénicos y plantas de control. Los datos son valores medios de diferentes lininas y están indicados en porcentaje del contenido total de carotenoide.
La Tabla 2b muestra las cantidades de carotenoide en frutos que maduran de tomates transgénicos y plantas de control. Los datos son valores medios de diferentes lininas y están indicados en porcentaje del contenido total de carotenoide .
Promotor Licopeno Beta- Luteina Cantaxantina Adonirubina Astaxantina Zeaxan-usado caroteno tina Plantas 59 28, 4 9 0,3 de control CS16 61 22, 3 5,2 1,6 3,1 3,9 2,5 CS13 52 19,5 5,4 1,2 4,7 6,1 Ejemplo 9: Amplificación de un ADN que codifica la secuencia primaria total de la NPl96-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133 Se amplificó el ADN que codifica para la NP1 6-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133, mediante PCR de Nostoc punctiforme ATCC 29133 (cepa de la "Colección de cultivo tipo americano") . Para la preparación del ADN genómico de un cultivo en suspensión de Nostoc Punctiforme ATCC 29133 que habla sido cultivado durante 1 semana con luz permanente y agitación constante (150 rpm) a 25° C en medio BG 11 (NaN03 1,5 g/l, 2P04x3H20 0, 04 g/l, MgS0xH20 0,075 g/l, CaCl2x2H20 0,036 g/l, ácido cítrico 0,006 g/l, citrato amónico férrico 0,006 g/l, magnesio de disodio EDTA 0,001 g/l, Na2C03 0,04 g/l, mezcla de metal traza "A5+Co" 1 mi (¾B03 2, 86 g/1, MnCl2x4H20 1,81 g/1, ZnS04x7H20 0,222 g/1, NaMo04X2H20 0,39 g/1, CuS04x5H20 0,079 g/1, Co (N03) 2x6H20 0, 0494 g/1), se cosecharon las células mediante centrifugación, se congelaron en nitrógeno liquido y se pulverizaron en mortero. Protocolo para el aislamiento del ADN de Nostoc Punctiforme ATCC 29133: De un cultivo liquido de 10 mi se peletizaron las células de las bacterias mediante centrifugación durante 10 minutos a 8.000 rpm. A continuación, se trituraron y molieron las células de las bacterias en nitrógeno liquido con un mortero. Se volvió a suspender el material celular en Tris-HCl 1 mi 10 mM (pH 7,5) y se trasladó a un recipiente de reacción Eppendorf (2 mi de volumen) . Después de la adición de 100 µ? de proteinasa K (Concentración: 20 mg/1) , se incubó la suspensión de células durante 3 horas a 37° C. Acto seguido, se extrajo la suspensión con 500 µ? de fenol. Después de una centrifugación de 5 minutos a 13.000 upm, se trasladó la fase acuosa superior a un nuevo recipiente de reacción Eppendorf de 2 mi. Se repitió la extracción con fenol 3 veces. Se hizo precipitar el ADN mediante la adición de 1/10 volumen de acetato sódico 3 M (pH 5,2) y 0,6 volumen de isopropanol y a continuación, se lavó con etanol 70%. Se secó el pellet de ADN a temperatura ambiente, se absorbió en 25 µ? de agua y se disolvió bajo calentamiento a 65° C. Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 28133, mediante "reacción en cadena de la polimerasa" (PCR) de Nostoc punctiforme ATCC 29133 empleándose para ello un partidor especifico en sentido (NP196-1, SEQ ID No. 59) y un partidor especifico antisentido (NP196-2 SEQ ID: No. 60). Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Se llevó a cabo la PCR para la amplificación del ADN que codifica para una proteina cetolasa compuesta por la secuencia primaria total, en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 1 ul de un ADN de Nostoc punctiforme ATCC 29133 (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 mM - NP196-1 (SEQ ID No. 59) 0,2 mM - NP196-2 (SEQ ID No. 60) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (TAKARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 µ? - agua destilada 25,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 55° C 1 minuto 72° C 3 minutos IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 59 y SEQ ID No. 60 dio como resultado un fragmento de 792 Pb que codifica para una proteina compuesta por la secuencia primaria total (NP196, SEQ ID No. 61) . Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pCR 2.1 (Invitrogen) y se obtuvo el clon pNP196. La secuenciación del clon pNP196 con el partidor M13F y el partidor M13R confirmó una secuencia que es idéntica a la secuencia de ADN de 140.571-139.810 del registro del banco de datos N7 AABC1000196 (orientada en forma inversa con respecto al registro del banco de datos publicado) con la excepción de que G fue reemplazado en la posición 140.571 por A para producir un codón de arranque estándar ATG. Se reprodujo esta secuencia de nucleótido en un experimento de amplifica-ción independiente y dicha secuencia representó, por lo tanto, la secuencia de nucleótido en la Nostoc punctiforme ATCC 29133 empleada.
Por lo tanto, se empleó este clon pNP196 para la clonación en el vector de expresión pJAP3P (descrito en el ejemplo 5) . Se modificó PJAP3P reemplazándose el terminador 35S por el terminador OCS (octopina sintasa) del plásmido Ti pTil5955 de Agrobacterium tumefaciens (registro del banco de datos X00493 de posición 12,541-12,350, Gielen y colaboradores (1984) EMBO J. 3 835-846) . Se elaboró el fragmento de ADN que contiene la región del terminador OCS, mediante PCR empleándose para ello el plásmido pHELLSGATE (registro del banco de datos AJ311874, Wesley y colaboradores (2001) Plant J. 27 581-590, aislado conforme a métodos estándares de E. coli) y también el partidor OCS-1 (SEQ ID: No. 63) y OCS_2 (SEQ ID No. 64) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Se llevó a cabo la PCR para la amplificación del ADN que contiene la región del terminador (SEQ ID 65) de la octopina sintasa (OCS), en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual estaba -contenido lo siguiente: - ADN del plásmido pHELLSGATE 1-00 ng - dNTPs 0,25 mM - OCS-1 (SEQ ID No. 63) 0,2 mM - OCS-2 (SEQ ID No. 64) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (Stratagene) 5 µ? - Pfu polimerasa (Stratagene) 0,25 µ? - agua destilada 28,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 50° C 1 minuto 72° C 1 minuto IX 72° C 10 minutos Se clonó el amplificado de 210 pb empleándose para ello métodos estándares en el vector de clonación por PCR 2.1 (Invitrogen) y se obtuvo el plásmido pOCS. La secuenciación del clon pOCS confirmó una secuen-cia que concuerda con un segmento de secuencia en el plásmido Ti pTil5955 de Agrobacterium tumefaciens (registro en banco de datos X00493) de posición 12.541 a 12.350. Se efectuó la clonación mediante el aislamiento del fragmento Sall-Xhol de 210 pb de pOCS y la ligazón en el vector pJAP3P cortado por Sall-Xhol. Este clon se llama pJOAP y se empleó, en consecuencia, para la clonación en el vector de expresión pJOAP:NP196.
Se realizó la clonación mediante el aislamiento del fragmento Sphl-Sphl de 782 pb de pNP196 y la ligazón en el vector pJOAP cortado por Sphl . El clon que contiene la NP196-cetolasa de Nostoc punctiforme en la orientación correcta co-mo fusión translacional N-terminal con el péptido de tránsito rbcS, se llama pJOAP:NP196.
Ejemplo 10: Elaboración de los vectores de expresión para la sobreexpresión especifica de fruto de la NP196-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133 (cepa de la "Colección de Cultivo de tipo americano") en Lycopersicon esculentum Se llevó a cabo la expresión de la NP196-cetolasa de Nostoc punctiforme en L. esculentum con el péptido de tránsito rbcS de la arveja (Anderson y colaboradores 1986, Biochem. J 240: 709-715). Se realizó la expresión bajo el control del promotor AP3P de Arabidopsis thaliana (descrita en el ejemplo 5) . Se efectuó la elaboración de un vector de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium de la NP196-cetolasa controlada por AP3P de Nostoc punctiforme ATCC 29133 en L. esculentum empleándose para ello el vector binario pSÜN3 (WO 02/00900) .
Para la elaboración del vector de expresión MSP120, se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 1.958 KB de pJOAP:NP196 con el vector pSUN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 10, mapa del constructo) . En la Figura 10, el fragmento ??3? PROM contiene el promotor AP3P (765 pb) , el fragmento rbcS TP FRAGMENT, el péptido de tránsito rbcS de la arveja (194 pb) , el fragmento NP196 KETO CDS (761 pb) , que codifica para la NP196-cetolasa de Nostoc punctiforme, el fragmento Terminador OCS (192 pb) , la señal de poliadenilación de la octopina-sintasa .
E emplo 11: Amplificación de un ADN que codifica la secuencia primaria total de la NOST-cetolasa de Nostoc spp. PCC 7120 Se amplificó el ADN que codifica para la NOST-cetolasa de Nostoc punctiforme PCC 1120, mediante PCR de Nostoc PCC 7120 (cepa de la "Colección de cultivo Pasteur de Cyanobacterium") . Para la preparación del ADN genómico de un cultivo en suspensión de Nostoc- spp. PCC 7120 que habia sido cultivado durante 1 semana con luz permanente y agitación constante (150 rpm) a 25° C en medio BG 11 (NaN03 1,5 g/1, K2P04x3H20 0,04 g/1, MgS0 xH20 0,075 g/1, CaCl2x2H20 0, 036 g/1, ácido ci-trico 0,006 g/1, citrato amónico férrico 0,006 g/1, magnesio de disodio EDTA 0,001 g/1, Na2C03 0, 04 g/1, mezcla de metal traza "A5+Co" 1 mi (H3B03 2, 86 g/1, MnCl2x4H20 1,81 g/1, ZnS04x7H20 0,222 g/1, NaMo0X2H20 0,39 g/1, CuS04x5H20 0,079 g/1, Co (N03) 2x6H20 0, 0494 g/1), se cosecharon las células mediante centrifugación, se congelaron en nitrógeno liquido y se pulverizaron en mortero. Protocolo para el aislamiento del ADN de Nostoc. spp. PCC 7120: De un cultivo liquido de 10 mi, se peletizaron las células de bacterias mediante una centrifugación de 10 minutos a 8.000 rpm. A continuación, se trituraron y molieron las células de bacterias en nitrógeno liquido con un mortero. Se volvió a suspender el material celular en Tris-HCl 1 mi 10 mM (pH 7,5) y se trasladó a un recipiente de reacción Eppendorf (2ml de volumen) . Después de la adición de 100 µ? de protei-nasa (concentración: 20 mg/1) , se incubó la suspensión de células durante 3 horas a 37° C. Acto seguido, se extrajo la suspensión con 500 µ? de fenol. Después de una centrifugación -de 5 minutos a 13.000 upm, se trasladó la fase acuosa superior a un nuevo recipiente de reacción Eppendorf de 2 mi. Se repitió la extracción con fenol 3 veces. Se hizo precipitar el ADN mediante la adición de 1/10 volumen de acetato sódico 3 M ( H 5,2) y 0,6 volumen de isopropanol y a continuación, se lavó con etanol 70%. Se secó el pellet de ADN a temperatura ambiente, se absorbió en 25 µ? de agua y se disolvió bajo calentamiento a 65° C. Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Nostoc PCC 1120, mediante "reacción en cadena de la polimerasa" (PCR) de Nostoc PCC 7120 empleándose para ello un partidor específico en sentido (NOST-1, SEQ ID No. 66) y un partidor especifico antisentido (NOST-2 SEQ ID: No. 67). Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Se llevó a cabo la PCR para la amplificación del ADN que codifica para una proteína cetolasa compuesta por la secuencia primaria total, en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 1 ul de un ADN de Nostoc PCC 7120 (elaborado según se describió en el ejemplo S) - dNTPs 0,25 mM - NOST-1 (SEQ ID No. 66) 0,2 mM - NOST-2 (SEQ ID No. 67) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (TAKARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 µ? - agua destilada 25,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 55° C 1 minuto 72° C 3 minutos IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 66 y SEQ ID No. 67 dio como resultado un fragmento de 809 Pb que codifica para una proteina compuesta por la secuencia primaria total (SEQ ID No. 68). Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pGE -T ( Prome-ga) y se obtuvo el clon pNOST. La secuenciación del clon pNOST con el partidor M13F y el partidor 13R confirmó una secuencia que es idéntica a la secuencia de 7ADN del registro del banco de datos AP003592. Se reprodujo esta secuencia de nucleótido en un experimento de amplificación independiente y dicha secuencia representó, por lo tanto, la secuencia de nucleótido en la Nostoc PCC 7120 empleada. Por lo tanto, se empleó este clon pNOST para la clonación en el vector de expresión pJOAP (descrito en el ejemplo 9) .
Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento Sphl de 799 pb de pNOST y la ligazón en el vector pJOAP cortado por Sphl. El clon que contiene la NOST-cetolasa de Nostoc PCC7120 en la orientación correcta como fusión translacional N-terminal con el péptido de tránsito rbcS, se llama pJ0AP:NOST.
Ejemplo 12: Elaboración de los vectores de expresión para la sobreexpresión especifica de fruto de la NOST-cetolasa de Nostoc spp. PCC 7120 en Lycopersicon esculentum Se efectuó la expresión de la NOST-cetolasa de Nostoc spp. PCC 7120 en L. esculentum con el péptido de tránsito rbcS de la arveja (Anderson y colaboradores 1986, Biochem. J 240: 709-715). Se realizó la expresión bajo el control del promotor AP3P de Arabidopsls thallana (descrito en el ejemplo 5) . Se efectuó la elaboración de un vector de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium de la NOST-cetolasa controlada por AP3P de Nostoc spp. PCC 2170 en L. esculentum empleándose para ello el vector binario pSUN3 (WO 02/00900) .
Para la elaboración del vector de expresión MSP121, se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 1.958 KB de pJOAP:NOST con el vector pSÜN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 11, mapa del constructo) . En la Figura 11, el fragmento ??3? PROM contiene el promotor AP3P (765 pb) , el fragmento rbcS TP FRAGMENT, el péptido de tránsito rbcS de la arveja (194 pb) , el fragmento NOST KETO CDS (744 pb) , gue codifica para la NOST-cetolasa de Nostoc spp. PCC 1120, el fragmento Terminador OCS (192 pb) , la señal de poliadenilación de la octopina-sintasa .
Ejemplo 13: Amplificación de un ADN gue codifica la secuencia primaria total de la NPl95-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133 Se amplificó el ADN que codifica para la NP195-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133, mediante PCR de Nostoc punctiforme ATCC 29133 (cepa de la "Colección de cultivo tipo americano") . Se describió la preparación del ADN genómico de un cultivo en suspensión de Nostoc punctiforme ATCC 29133 en el ejemplo 9. Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133, mediante "reacción en cadena de la polimerasa" (PCR) de Nostoc punctiforme ATCC 21133 empleándose para ello un partidor específico en sentido (NP195-1, SEQ ID No. 70) y un partidor específico antisentido (NP195-2 SEQ ID: No. 71) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Se llevó a cabo la PCR para la amplificación del ADN que codifica para una proteína cetolasa compuesta por la secuencia primaria total, en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 1 ul de un ADN de Nostoc punctiforme ATCC 29133 (elaborado según se describió en el ejemplo 9) - dNTPs 0,25 mM - NP195-1 (SEQ ID No. 70) 0,2 mM - NP195-2 (SEQ ID No. 71) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (TAKARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 µ? - agua destilada 25,8 ul Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto- 55° C 1 minuto 72° C 3 minutos IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 70 y SEQ ID No. 71 dio como resultado un fragmento de 819 Pb que codifica para una proteina compuesta por la secuencia primaria total (SEQ ID No. 7268). Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pGEM-T (Pro-mega) y se obtuvo el clon pNP195. La secuenciación del clon pNP195 con el partidor M13F y el partidor M13R confirmó una secuencia que es idéntica a la secuencia de ADN de 55.604.56.392 del registro del banco de datos NZ_AABCO10001965 con la excepción de que se reemplazó T en la posición 55.604 por A con el objetivo de producir un codón de arranque estándar ATG. Se reprodujo esta secuencia de nucleótido en un experimento de amplificación independiente y dicha secuencia representó, por lo tanto, la secuencia de nucleótido en la Nostoc punctiforme ATCC 29133 empleada . En consecuencia, se empleó este clon pNP195 para la clonación en el vector de expresión pJOAP (descrito en el ejemplo 9) . Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento Sphl de 799 pb de pNPl95 y la ligazón en el vector pJOAP cortado por Sphl. El clon que contiene la NP195-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133 en la orientación correcta como fusión translacional N-terminal con el péptido de tránsito rbcS, se llama pJOAP:NP195.
Ejemplo 14: Elaboración de los vectores de expresión para la sobreexpresión especifica de fruto de la NP195-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133 en Lycopersicon esculentum Se llevó a cabo la expresión de la NPl95-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133 (cepa de la "Colección de cultivo de tipo americano") en L. esculentum con el péptido de tránsito rbcS de la arveja (Anderson y colaboradores 1986, Biochem. J 240: 709-715). Se realizó la expresión bajo el control del promotor AP3P de Arabidopsis thaliana (descrito en el ejemplo 5) . Se efectuó la elaboración de un vector de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium de la NP195-cetolasa controlada por AP3P de Nostoc punctiforme ATCC 29133 en L. esculentum empleándose para ello el vector binario pSÜN3 (WO 02/00900) . Para la elaboración del vector de expresión MSP122, se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 1.992 KB de pJOAP:NP195 con el vector pSUN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 12, mapa del constructo) . En la Figura 12, el fragmento AP3P PROM contiene el promotor AP3P (765 pb) , el fragmento rbcS TP FRAGMENT, el péptido de tránsito rbcS de la arveja (194 pb) , el fragmento NP135 KETO CDS (789 pb) , que codifica para la NP195-cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC 29133, el fragmento Terminador OCS (192 pb) , la señal de poliadenilación de la octopina-sintasa .
Ejemplo 15: Amplificación de un ADN que codifica la secuencia primaria total de la NODK-cetolasa de Nodularia spumlgnea NSORIO. Se amplificó el ADN que codifica para la cetolasa de Nodularia spumlgnea NSORIO, mediante PCR de Nodularia spumlgnea NSORIO. Para la preparación del ADN genómico de un cultivo en suspensión de Nodularia spumignea NSORIO que había sido cultivado durante 1 semana con luz permanente y agitación constante (150 rpm) a 25° C en medio BG 11 (NaN03 1,5 g/1, K2P04x3H20 0, 04 g/1, MgS04xH20 0,075 g/1, CaCl2x2H20 0, 036 g/1, ácido cítrico 0,006 g/1, citrato amónico férrico 0,006 g/1, magnesio de disodio EDTA 0,001 g/1, Na2C03 0,04 g/1, mezcla de metal traza "A5+Co" 1 mi (¾B03 2,86 g/1, MnCl2x4H20 1,81 g/1, ZnS04x7H20 0,222 g/1, Na o04X2¾0 0,39 g/1, CuS04x5H20 0,079 g/1, Co (NO3) 2x6H20 0,0494 g/1), se cosecharon las células me-diante centrifugación, se congelaron en nitrógeno liquido y se pulverizaron en mortero. Protocolo para el aislamiento del ADN de Nodularia spumignea NSOR10: De un cultivo liquido de 10 mlr se peletizaron las células de bacterias mediante una centrifugación de 10 minutos a 8.000 rpm. A continuación, se trituraron y molieron las células de bacterias en nitrógeno liquido con un mortero. Se volvió a suspender el material celular en Tris-HCl 1 mi 10 mM (pH 7,5) y se trasladó a un recipiente de reacción Eppendorf (2ml de volumen) . Después de la adición de 100 µ? de protei-nasa K (concentración: 20 mg/1) , se incubó la suspensión de células durante 3 horas a 37° C. Acto seguido, se extrajo la suspensión con 500 µ? de fenol. Después de una centrifugación de 5 minutos a 13.000 upm, se trasladó la fase acuosa superior a un nuevo recipiente de reacción Eppendorf de 2 mi. Se repitió la extracción con fenol 3 veces. Se hizo precipitar el ADN mediante la adición de 1/10 volumen de acetato sódico 3 M (pH 5,2) y 0,6 volumen de isopropanol y a continuación, se lavó con etanol 70%. Se secó el pellet de ADN a temperatura ambiente, se absorbió én 25 µ? de agua y se disolvió bajo calentamiento a 65° C.
Se amplificó el ácido nucleico que codifica una cetolasa de Nodularia spumignea NSOR10, mediante "reacción en cadena de la polimerasa" (PCR) de Nodularia spumignea NSOR10 empleándose para ello un partidor especifico en sentido (NODK-1, SEQ ID No. 74) y un partidor especifico antisentido (NODK-2 SEQ ID: No. 75) . Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Se llevó a cabo la PCR para la amplificación del ADN que codifica para una proteina cetolasa compuesta por la secuencia primaria total, en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 1 ul de un ADN de Nodularia spumignea NSOR10 (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 m - NODK-1 (SEQ ID No. 74) 0,2 mM - NODK-2 (SEQ ID No. 75) 0,2 mM - 10X solución tampón para PCR (TARARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 µ? - agua destilada 25,8 µ? Se llevó a cabo la PCR bajo las siguientes condiciones de ciclo: IX 94° C 2 minutos 35X 94° C 1 minuto 55° C 1 minuto 72° C 3 minutos IX 72° C 10 minutos La amplificación por PCR con SEQ ID No. 74 y SEQ ID No. 75 dio como resultado un fragmento de 720 Pb que codifica para una proteina compuesta por la secuencia primaria total (NODK, SEQ ID No. 76) . Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pCR 2.1 (Invitrogen) y se obtuvo el clon pNODK. La secuenciación del clon pNODK con el partidor M13F y el partidor M13R confirmó una secuencia que es idéntica a la secuencia de ADN de 2130-2819 del registro del banco de datos ??210783 (de orientación inversa con respecto al registro del banco de datos publicado) . Se reprodujo esta se-cuencia de nucleótido en un experimento de amplificación independiente y dicha secuencia representó, por lo tanto, la secuencia de nucleótido en la Nodularia spumignea NSOR10 empleada . Por lo tanto, se empleó este clon pNODK para la clonación en el vector de expresión pJOAP (descrito en el ejemplo 9) . Se llevó a cabo la clonación mediante el aislamiento del fragmento Sphl de 710 Pb de pNODK y la ligazón en el vector pJOAP cortado por Sp l . El clon que contiene la NODK-cetolasa de Nodularia spumignea NSOR10 en la orientación correcta como fusión translacional N-terminal con el péptido de tránsito rbcS, se llama pJOAP:NODK.
Ejemplo 16: Elaboración de los vectores de expresión para la sobreexpresión especifica de fruto de la NODK-cetolasa de Nodularia spumignea NSOR10 en Lycopersicon esculentum Se llevó a cabo la expresión de la NODK-cetolasa de Nodularia spumignea NSOR10 en L. esculentum con el péptido de tránsito rbcS de la arveja (Anderson y colaboradores 1986, Biochem. J 240: 709-715) . Se realizó la expresión bajo el control del promotor ??3? de Arabidopsis thaliana (descrito en el ejemplo 5) . Se efectuó la elaboración de un vector de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium de la NP195-cetolasa -controlada por AP3P de Nostoc punctiforme ATCC 29133 en L. esculentum empleándose para ello el vector binario pSÜN3 (WO 02/00900) .
Para la elaboración del vector de expresión MSP123, se ligó el fragmento Sacl-Xhol de 1.893 KB de pJOAP:NODK con el vector pSUN3 cortado por Sacl-Xhol (Figura 13, mapa del constructo) . En la Figura 13, el fragmento AP3P PROM contiene el promotor AP3P (765 pb) , el fragmento rbcS TP FRAGMENT, el péptido de tránsito rbcS de la arveja (194 pb) , el fragmento NODK KETO CDS (690 pb) , que codifica para la NODK-cetolasa de Nodularia spumignea NSOR10r el fragmento Terminador OCS (192 pb) , la señal de poliadenilación de la octopina-sintasa .
Ejemplo 17: Elaboración de una cásete de expresión para la sobreexpresión especifica de fruto de la b-hidroxilasa especifica de cromoplasto de Lycopersicon esculentum Se llevó a cabo la expresión de la ß-hidroxilasa especifica de cromoplasto de Lycopersicon esculentum en tomate bajo el control del promotor especifico de fruto AP3P de Arabidopsis (ejemplo 2) . Como elemento terminador, se empleó LB3 (registro del banco de datos AX696005) de Vicia faba. Se elaboró la secuencia de la- ß-hidroxilasa especifica de cromoplasto (registro del banco de datos Y14810 y BE354440) mediante el aislamiento del ARN, la transcripción reversa y la PCR.
Se aisló el fragmento del ADN que contiene la región del terminador LB3, mediante PCR. Se aisló el ADN genómico de tejido de Vicia faba conforme a métodos estándares y se empleó mediante PCR genó-mica utilizándose para ello el partidor PR206 (SEQ ID N° 78) y PR207 (SEQ ID No. 79) . Se llevó la PCR para la amplificación de este fragmento del ADN de LB3 en una preparación de reacción de 50 ulr en la cual está contenido lo siguiente: 1 ul de un ADN genómico (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 mM - PR206 (SEQ ID No. 78) 0,2 uM - PR207 (SEQ ID No. 79) 0,2 uM - 10X solución tampón para PCR (TAKARA) 5 ul - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 ul - agua destilada 28,8 ul La amplificación por PCR con SEQ ID No. 78 y SEQ ID No. 79 dio como resultado un fragmento de 307 Pb (SEQ ID No. 80) que contiene el terminador LB. Empleándose métodos estándares, se clonó el amplificado en el vector de clonación por PCR pCR 2.1 (Invitrogen) y se obtuvo el clon pLB3. La se-cuenciación del clon pLB3 con el partidor M13F y el partidor M13R confirmó una secuencia que es idéntica a la secuencia de ADN de 3-298 del registro del banco de datos AX696005. Este clon se llama pLB3 y se utiliza, por lo tanto, para la clonación en el vector pJAP3P (véase el ejemplo 5) . Se modificó el cásete de expresión pJAP3P, reempla-zándose el terminador 35S por el terminador LB3 de la leguminosa de Vicia faba (registro del banco de datos AX696005; WO 03/008596) (véase a continuación) . , Para la elaboración de la secuencia de ß-hidroxilasa, se prepara el ARN total a partir del tomate. Con este propósito, se trasladan 100 mg de las flores pulverizadas congeladas a un recipiente de reacción y se absorben en 0,8 mi de solución tampón Trizol (LifeTechnologies) . Se extrae la suspensión con 0,2 mi de cloroformo. Después de una centrifugación de 15 minutos con 12.000 g, se quita el exceso acuoso y se traslada a un nuevo recipiente de reacción y se extrae con un volumen de etanol. Se hace precipitar el ARN con un volumen de isopropanol, se lava con etanol 75% y se disuelve el pellet en DEPC agua (incubación durante la noche de agua con 1/1000 volumen de dietilpirocarbonato a tempera-tura ambiente, a continuación se somete a autoclave) . Se determina la concentración de ARN fotométricamente . Para la síntesis de ADNc, se desnaturalizan 2,5 ug de ARN total durante 10 minutos a 60° C, se enfrian sobre hielo por 2 minu-tos y se circunscriben en el ADNc mediante un kit de ADNc (Ready-to-go-you-prime-beads , Pharmacia Biotech) conforme a los datos del fabricante empleándose para ello un partidor especifico antisentido (PR215 SEQ ID No. 56) . Las condiciones de las reacciones de PCR que tienen lugar a continuación son las siguientes: Se amplificó el ácido nucleico que codifica la ß-hidroxilasa, mediante "reacción en cadena de la polimerasa" (PCR) del tomate empleándose para ello un partidor especifico en sentido (VPR204, SEQ ID No. 81) y un partidor especifico antisentido (PR215 SEQ ID No. 82). La PCR para la amplificación del ADN que codifica para una proteina ß-hidroxilasa compuesta por la secuencia primaria total, se realizó en una preparación de reacción de 50 µ?, en la cual estaba contenido lo siguiente: - 1 µ? de un ADNc (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,25 mM - VPR204 (SEQ ID No. 81) 0,2 uM - PR215 (SEQ ID No. 82) 0,2 uM - 10X solución tampón para PCR (TARARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TARARA) 0,25 µ? - agua destilada 28,8 µ? La amplificación por PCR con VPR204 y PR215 da como resultado un fragmento 1.040 Pb (SEQ ID No. 83) que codifica para la b-hidroxilasa Se emplea el amplificado en el vector de clonación por PCR pCR 2.1 (Invitrogen) . Este clon se llama pCrtR-b2. Las secuenciaciones del clon pCrtR-b2 con los partidores 13-R y M13-R confirmaron una secuencia que es idéntica a la secuencia del ADN de 33-558 del registro del banco de datos BE354440 y que es idéntica a la secuencia del ADN de 1-1009 del registro del banco de datos Y14810. Por consiguiente, se emplea el clon pCrtR-b2 para la clonación en el vector pCSP02 (véase a continuación) . Se lleva a cabo la primera etapa de clonación mediante el aislamiento del fragmento HindIII-EcoRI de 1.034 pb de pCrtR-b2, derivado del vector de clonación pCR-2.1 (Invitrogen) , y la ligazón con el vector pJAP3P cortado por HindIII-EcoRI (véase ejemplo 5) . El clon que contiene e-1 fragmento de b-hidroxilasa CrtR-b2, se llama pCSP02. Se realiza la segunda etapa de clonación mediante el aislamiento del fragmento EcoRI-Xhol de 301 pb de pLB3, derivado del vector de clonación pCR-2.1 (Invitrogen), y la ligazón con el vector pCSP02 cortado por EcoRI-Xhol. El clon que contiene el terminador LB3 de 296 pb, se llama pCSP03.
Mediante la ligazón se produce una fusión transcripcional entre el terminador LB3 y el fragmento de b-hidroxilasa CrtR-b2. Con este propósito, se produce una fusión transcripcional entre el promotor AP3P y el fragmento de b-hidroxilasa.
Ejemplo 18: Elaboración de una cásete de expresión para la sobreexpresión especifica de fruto del gen B de iyco-persicon esculent m Se lleva a cabo la expresión del gen B de Lycoper-sicon esculentum en tomate (licopeno-b-ciclasa; registro del banco de datos AF254793) bajo el control del promotor especifico de fruto PDS (fitoneo desaturasa: registro del banco de datos U4691 ) de Lycopersicon esculentum. Como elemento terminador, se emplea 35S de CaMV. Se elaboró la secuencia del gen B mediante PCR del ADN genómico de Lycopersicon esculentum. Para el aislamiento del gen B mediante PCR con el ADN genómico de Lycopersicon esculentum, se emplearon los partidores de oligonucleótido BGEN-1 (SEQ ID No. 85) y BGEN-2 (SEQ ID: No. 86) . Se aisló el ADN genómico de Lycopersicon esculentum tal como se ha descrito (M. Galbiati y colaboradores Funct. Integr. Genomics 2000, 20 1: 25-34).
Se realizó la amplificación por PCR como se señala a continuación: 80 ng de ADN genómico Ix solución tampón para PCR Expand Long Témplate MgC12 2,5 mM DaTP, dCTP, dG P, dTTp cada uno 350 µ? BGEN-1 [SEQ ID No. 85) 0,3 uM BGEN-2 (SEQ ID No. 86) 0,3 uM 2,5 unidades de polimerasa Expand Long Témplate en un volumen final de 25 µ? Se utilizó el siguiente programa de temperatura: 1 ciclo con 120 segundos a 94° C 35 ciclos con 94° C durante 10 minutos, 48° C du rante 30 segundos y 68° C por 3 minutos 1 ciclo con 68° C durante 10 minutos La amplificación por PCR con BGEN-1 y BGEN-2 da como resultado un fragmento de 1.505 pb (SEQ ID No. 87) que codifica para la b-hidroxilasa. Se clona el amplificado en el vector de clonación por PCR pCR-2.1 (Invitrogen) . Este clon se llama pBGEN. Las secuenciaciones del clon pBGEN-1 con los partidores M13-R y M13-F confirmaron una secuencia que es idéntica a la secuencia del ADN de 1-1497 del registro del banco de datos AF254793. Por consiguiente, se emplea el clon datos AF254793. Por consiguiente, se emplea el clon pCrtR-b2 para la clonación en el vector pCSP02 (véase a continuación) . Para la elaboración de la secuencia del promotor PDS de Lycopersicon esculentum, se aisla el ADN genómico de tejido de Licopersicon esculentum conforme a métodos estándares y se emplea mediante PCR genómica utilizándose para ello el partidor PDS-1 y PDS-2. Se lleva a cabo la PCR para la amplificación de este fragmento del promotor PDS en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual está contenido lo siguiente : - 1 ul de ADN genómico (elaborado según se describió anteriormente) - dNTPs 0,3 mM - PDS-1 (SEQ ID No. 89) 0,2 uM - PDS-2 (SEQ ID No. 90) 0,2 uM - 10X Pfu-Turbo polimerasa (Stratagene) 5 µ? - Pfu-Turbo polimerasa (Stratagene) 1 µ? - agua destilada 28,8 ul Se empleó el siguiente programa de temperatura: 1 ciclo con 120 segundos a 94° C 36 ciclos con 94° C durante 60 segundos, 55° C durante 120 segundos y 72° C por 4 minutos 1 ciclo con 72° C durante 10 minutos La amplificación por PCR con PDS-1 y PDS-2 da como resultado un fragmento que contiene la secuencia para el promotor PDS. Se clona el amplificado en el pCR-4-BLÜNT (Invi-trogen) . Este clon se llama pPDS. Las secuenciaciones con los partidores M13-R y M13-F confirman una secuencia idéntica a la secuencia SEQ ID No. 91. Este clon se llama pPDS y se emplea, por consiguiente, para la clonación en el vector pJBGEN (véase a continuación) . Se lleva a cabo la primera etapa de clonación mediante el aislamiento del fragmento NcoI/EcoRI de 1.499 pb de pBGEN, derivado del vector de clonación pCR-2.1 (Invitrogen) . En primer lugar, se corta pBGEN con BamHI, se llenan los extremos 3' conforme a métodos estándares (30 minutos a 30° C) (llenado lenow) y posteriormente, se realiza una digestión parcial con Ncol, en lo cual se aisla el fragmento de 1.4999 kb que se produce. A continuación, se clonó este fragmento en el pCSP02, el cual está cortado previamente con EcoRI, se llenaron los extremos 3' conforme a métodos estándares (30 minutos 30° C) (llenado Klenow) y posteriormente, se corta con Ncol. El clon que contiene el fragmento del gen B BGEB de U497 pb, se llama pJAP:BGEN. Mediante la ligazón, se produce una fusión transcripcional entre el terminador 35S y el gen B.
Se realiza la segunda etapa de clonación mediante el aislamiento del fragmento PDS PROM de 2.078 pb de pPDS. En primer lugar, se corta el pPDS con Smal y luego se realiza una digestión parcial con SacI, aislándose el fragmento de 2.088 pb que se produce. A continuación, se clonó este fragmento en el pJAP:BGEN, que fue cortado previamente con BamHI, se llenaron los extremos 3' conforme a métodos estándares (30 minutos a 30° C) (llenado Klenow) y posteriormente, se corta con SacI. Mediante la ligazón, se produce una fusión transcripcional entre el promotor PDS y el gen B. El clon que contiene los promotores PDS de 2.078 pb, se llama pJPDS:BGEN.
Ejemplo 19: Elaboración de un vector de expresión triple para la sobreexpresión del gen B, para la expresión de la cetolas'a NP196 de Nostoc punctiforme, como también para la sobreexpresión de la b-hidroxilasa especifica de cromoplasto de Lycopersicon esculentum en forma especifica de fruto en Lycopersicon esculentum En primer lugar, se realiza la elaboración de un constructo doble que contiene casetes de expresión para la sobreexpresión de la cetolasa NP196 de Nostoc punctiforme ATCC 29133 como también para la sobreexpresión de la b-hidroxilasa. Primeramente, se aisla el fragmento de AP3P:b-hidroxilasa:LB3 que contiene el cásete de expresión de b-hidroxilasa, como fragmento EcI136lI-XhoI de 2.104 pb de pCSP03 (descrito en el ejemplo 18) . Se efectúa el llenado de los extremos 3' (30 minutos a 30° C) conforme a métodos es-tándares (llenado Klenow) . ? continuación, se cortó este fragmento en el vector MSP120 (descrito en el ejemplo 10) con EcI136II y EcoRI, se llenaron los extremos 3' conforme a métodos estándares (30 minutos a 30° C) (llenado Klenow) . Mediante la ligazón, se produce un T-ADN que contiene dos case-tes de expresión: en primer lugar un cásete para la sobreexpresión especifica de cromoplasto de la B-hidroxilasa de Ly-copersicon esculentum y en segundo lugar un cásete para la sobreexpresión de la cetolasa NP196 de Nostoc punctiforme. Se puede ligar el c sete de regulación negativa de b-hidroxilasa en dos orientaciones en el vector. De preferencia, se emplea la versión en la cual ambos casetes de expresión concuerdan en su orientación (véase Figura 14) . Se puede identificar esta versión mediante PCR como se describió anteriormente. Se efectúa la PCR para la amplificación del frag-mentó del plásmido PR206-PR010 que contiene la unión del ter-minador LB3 del cásete de b-hidroxilasa y del promotor AP3P del cásete de cetolasa, en una preparación de reacción de 50 ul, en la cual está contenido lo siguiente: - 1 ul de ADN de plásmido (elaborado según métodos estándares) - dNTPs 0,25 mM - PR010 (SEQ ID No. 92) 0,2 uM - PR206 (SEQ ID No. 93) 0,2 uM - 10X solución tampón para PCR (TAKARA) 5 µ? - R Taq polimerasa (TAKARA) 0,25 ul - agua destilada 28,8 ul La amplificación por PCR con PR010 y PR206 da como resultado un fragmento de 1.080 pb que indica la existencia de la unión antes descrita del terminador LB3 y el promotor AP3P y, por consiguiente, la orientación preferida de ambos casetes de expresión. Este clon se llama pBHYX:NP196. La clonación de este cásete de sobreexpresión del B-gen en los vectores de expresión para la transformación mediada por Agrobacterium del tomate se realiza mediante el aislamiento del fragmento EcoRV-Xhol de 4.362 Pb de pJPDS:BGEN (véase ejemplo 19) y la ligazón en el vector pBHYX:NP196 cortado por Smal-Xhol (antes descrito) . Mediante la ligazón, se produjo un T-ADN que contiene tres casetes de expresión: en primer lugar un cásete para la sobreexpresión del gen B, en segundo lugar, un cásete para la sobreexpresión de la cetolasa NP196-1 de Nostoc punctíforme y, en tercer lu-gar, un cásete para la sobreexpresión especifica de cromo-plasto de la B-hidroxilasa de Lycopersicon esculentum (Figura 14, mapa del constructo) . Este se llama MSP124. En la Figura 14, el fragmento AP3P Prom (765 pb) contiene el promotor ??3?, el fragmento BHYX b2 CDS (2 pb) , la B-hidroxilasa CrtRb2, el fragmento LB3 TERM (296), el terminador LB3. Además, el fragmento AP3P PROM (765 pb) contiene el promotor AP3P, el fragmento rbcS TP FRAGMENT (194 pb) , el péptido de tránsito del gen rbcS de la arveja, NP196 KETO CDS (761 pb) , la cetolasa de Nostoc punctiforme ATCC2913, y OCS TERM (192 pb) , la señal de poliadenilación del gen de octopi-na-sintasa . Además, el fragmento PDS PROM (2.078 pb) contiene el promotor PDS, el fragmento BGEN CDS (1.497 pb) , la secuen-cia del gen B, y el fragmento 35S TERM (746 pb) , el terminador 35S.
Ejemplo 20: Producción de plantas transgénicas Lycopersicon esculentum Se describieron la transformación y la regeneración de plantas de tomate en el ejemplo 6.
Conforme a los métodos de transformación descritos se obtuvieron las siguientes lineas con los siguientes cons tructos de expresión: Con MSP120 se obtuvo: MSP120-1, MSP120-2, MSP120-3. Con MSP121 se obtuvo: MSP121-1, MSP121-2, MSP121-3. Con MSP122 se obtuvo: MSP122-1, SP122-2, MSP122-3. Con MSP123 se obtuvo: MSP123-1, MSP123-2, SP123-3. Con MSP124 se obtuvo: MSP124-1, MSP124-2-, MSP124 DESCRI CIÓN DETALLADA DE LAS FIGURAS FIGURA 1: Esquema de biosíntesis de los carotenoides en frutos de tomate Isoprenoide Fitoeno Licopina e-ciclasa ß-ciclasa ß-???1??33ß a-caroteno ß-caroteno Luteina Zeaxantina Violaxantina · FIGURA 2: Esquema de biosíntesis de la astaxantina en frutos de tomate genéticamente modificados Isoprenoide Fitoeno Licopina e-ciclasa ß-ciclasa ß-ciclasa a-caroteno ß-caroteno Cantaxantina Luteina Zeaxantina Astaxantina Violaxantina FIGURA. 3 : Comparación de la secuencia de nucleótido FIGURA 4 : Comparación de la secuencia de proteina FIGURA 5: Constructo para la sobreexpresion de la proteina ß-C-4-oxigenasa de H. pluvialis con péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor d35S (constructo de transformación de tomates) FIGURA 6: Constructo para la sobreexpresion de la proteina cetolasa acortada N-terminal ( -C-4-oxigenasa) de H. pluvia-lis con el péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor d35S.
FIGURA 7 : Constructo para la sobreexpresion de la proteina cetolasa ( p-C-4~oxigenasa) de H. pluvialis con el péptido de tránsito rbcS de la arveja y myc-Tag C-terminal bajo el control del promotor d35S.
FIGURA 8: Constructo para la sobreexpresion de la proteina ß-C-4-oxigenasa de H. pluvialis con el péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor AP3P (constructo de transformación de tomates) .
FIGURA 9: Constructo para la sobreexpresión de la proteína cetolasa (p-C-4-oxigenasa) de H. pluvialis con el péptido de tránsito rbcS de la arveja y myc-Tag C-terminal bajo el con-trol del promotor ??3?.
FIGURA 10: Constructo de pSUN3 para la expresión de la proteína -C-4-oxigenasa NP196 de Nostoc punctiforme ATCC 29133 con el péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor AP3P (constructo de transformación de tomates) .
FIGURA 11: Constructo de pSUN3 para la expresión de la proteína ß-C-4-o igenas NOST1 de Nostoc spp. pCC7120 con el péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor ??3? (constructo de transformación de tomates) .
FIGURA 12: Constructo de pSUN3 para la expresión de la proteína -C-4-oxigenasa NP195 de Nostoc punctiforme ATCC 29133 con el péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor AP3P (constructo de transformación de tomates) .
FIGURA 13: Constructo de pSUN3 para la expresión de la proteína ß-C-4-oxigenasa NODK de Nodularia spumignea NSOR10 con el péptido de tránsito rbcS de la arveja bajo el control del promotor AP3P (constructo de transformación de tomates) .
FIGURA 14 : Constructo de pSÜN3 para la sobreexpresion del gen B de Lycopersicom esculentum, para la sobreexpresion de la cetolasa NP196-1 de Nostoc puncti'forme y para la sobreexpresion especifica de cromoplasto de la B-hidroxilasa de Lyco-persicon esculentum (constructo de transformación de tomates) LISTADO DE SECUENCIAS <110> SunGene GmbH Co. KGaA <120> Procedimiento para elaborar cetocarotenoid.es en frutos de plantas <130> NAE 365/02 <160> 93 <170> Patentln versión 3.1 <210> 1 <211> 1771 <212> ADN <213> Haematococcus pluvialis <220> <221> CDS <222> (166) .. (1155) <223> <400> 1 ggcacgagct tgcacgcaag tcagcgcgcg caagtcaaca cctgccggtc cacagcctca 60 aataataaag agctcaagcg tttgtgcgcc tcgacgtggc cagtctgcac tgccttgaac 120 ccgcgagtct cccgccgcac tgactgccat agcacagcta gacga atg cag cta gca 177 * Met Gln Leu Ala 1 gcg aca gta atg ttg gag cag ctt acc gga age gct gag gca etc aag 225 Ala Thr Val Met Leu Glu Gln Leu Thr Gly Ser Ala Glu Ala Leu Lys 5 10 15 20 gag aag gag aag gag gtt gca ggc age tet gac gtg ttg cgt aca tgg 273 Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser Asp Val Leu Arg Thr Trp 25 30 35 gcg acc cag tac teg ctt ceg tea gaa gag tea gac gcg gcc cgc ceg 321 Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu Ser Asp Ala Ala Arg Pro 40 45 50 gga ctg aag aat gcc tac aag cca cca cct tcc gac aca aag ggc atc 369 Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro Ser Asp Thr Lys Gly lie 55 60 65 aca atg gcg cta cgt gtc atc ggc tcc tgg gcc gca gtg ttc etc cae 417 Thr Met Ala Leu Arg Val lie Gly Ser Trp Ala Ala Val Phe Leu His 70 75 80 gcc att ttt caa atc aag ctt ccg acc tcc ttg gac cag ctg cac tgg 465 Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser Leu Asp Gln Leu His Trp 85 90 95 100 ctg ccc gtg tea gat gcc acá gct cag ctg gtt age ggc acg age age 513 Leu Pro Val Ser As Ala Thr Ala Gln Leu Val Ser Gly Thr Ser Ser 105" 110 115 ctg etc gac atc gtc gta gta ttc ttt gtc ctg gag ttc ctg tac acá 561 Leu Leu Asp lie Val Val Val Phe Phe Val Leu Glu Phe Leu Tyr Thr 120 125 130 ggc ctt ttt atc acc acg cat gat gct atg cat ggc acc atc gcc atg 609 Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met His Gly Thr lie Ala Met 135 ¦ 140 145 aga aac agg cag ctt aat gac ttc ttg ggc aga gta tgc atc tcc ttg 657 Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe "Leu Gly Arg Val Cys lie Ser Leu 150 155 160 tac gcc tgg ttt gat tac aac atg ctg cac cgc aag cat tgg gag cac 705 Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His Arg Lys His Trp Glu His 165 170 175 180 cac aac cac act ggc gag gtg ggc aag gac ect -gac ttc cac agg gga 753 His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp Pro Asp Phe His Arg Gly 185 190 195 aac ect ggc att gtg ccc tgg ttt gcc age ttc atg tcc age tac atg 801 Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser Phe Met Ser Ser Tyr Met 200 205 210 teg atg tgg cag ttt gcg cgc etc gca tgg tgg acg gtg gtc atg cag 849 Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp Trp Thr Val Val Met Gln 215 220 225 ctg ctg ggt gcg cea atg gcg aac ctg ctg gtg ttc atg gcg gcc gcg 897 Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu Val Phe Met Ala Ala Ala 230 235 240 ccc atc ctg tcc gcc ttc cgc ttg ttc tac ttt ggc acg tac atg ccc 945 Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Tyr Met Pro 245 250 255 260 cac aag ect gag ect ggc gcc gcg tea ggc tet tea cea gcc gtc atg 993 His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly Ser Ser Pro Ala Val Met 265 270 · 275 aac tgg tgg aag teg cgc act age cag gcg tcc gac ctg gtc age ttt 1041 Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala Ser Asp Leu Val Ser Phe 280 285 290 ctg acc tgc tac cac ttc gac ctg cac tgg gag cac cac cgc tgg ccc 1089 Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp Glu His His Arg Trp Pro 295 300 305 ttc gcc ccc tgg tgg gag ctg ccc aac tgc cgc cgc ctg tct ggc cga 1137 Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys Arg Arg Leu Ser Gly Arg 310 315 320 ggt ctg gtt cct gcc tag ctggacacac tgcagtgggc cctgctgcca 1185 Gly Leu Val Pro Ala 325 gctgggcatg caggttgtgg caggactggg tgaggtgaaa agctgcaggc gctgctgccg 1245 gacacgctgc atgggctacc ctgtgtagct gccgccacta ggggaggggg tttgtagctg 1305 tcgagcttgc cccatggatg aagctgtgta gtggtgcagg gagtacaccc acaggccaac 1365 acccttgcag gagatgtctt gcgtcgggag gagtgttggg cagtgtagat gctatgattg 1425 tatcttaatg ctgaagcctt taggggagcg acacttagtg ctgggcaggc aacgccctgc 1485 aaggtgcagg cacaagctag gctggacgag gactcggtgg caggcaggtg aagaggtgcg 1545 ggagggtggt gccacaccca ctgggcaaga ccatgctgca atgctggcgg tgtggcagtg 1605 agagctgcgt gattaactgg gctatggatt gtttgagcag tctcacttat tctttgatat 1665 agatactggt caggcaggtc aggagagtga gtatgaacaa gttgagaggt ggtgcgctgc 1725 ccctgcgctt atgaagctgt aacaataaag tggttcaaaa aaaaaa 1771 <210> 2 <211> 329 <212> PRT <213> Haematococcus pluvialis <400> 2 Met Gln Leu Ala Ala Thr Val et Leu Glu Gln Leu Thr Gly Ser Ala 1 5 10 15 Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser Asp Val 20 25 30 Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu Ser Asp 35 40 45 Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro Ser Asp 50 " 55 60 Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Arg Val lie Gly Ser Trp Ala Ala 65 70 ' 75 80 Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser Leu Asp 85 90 95 Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln Leu Val 100 105 110 Gly Thr Ser Ser Leu Leu Asp lie Val Val Val Phe Phe Val Leu Glu 115 120 125 Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met His Gly 130 135 140 Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu Gly Arg Val 145 150 155 ' 160 Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His Arg Lys 165 170 175 His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp Pro Asp 180 185 190 Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser Phe Met 195 200 205 Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp Trp Thr 210 215 220 Val Val Met Gln Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu Val Phe 225 230 235 240 Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr Phe Gly -2.45 250 255 Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly Ser Ser 260 265 270 Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala Ser Asp 275 280 285 Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp Glu His 290 295 300 > His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys Arg Arg 305 310 315 320 Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala 325 <210> 3 <211> 1662 <212> ADN <213> Haematococcus pluvialis <220> <221> CDS <222> (168) .. (1130) <223> <400> 3 cggggcaact caagaaattc aacagctgca agcgcgcccc agcctcacag cgccaagtga 60 gctatcgacg tggttgtgag cgctcgacgt ggtccactga cgggcctgtg agcctctgcg 120 ctccgtcctc tgccaaatct cgcgtcgggg cctgcctaag tcgaaga atg cac gtc 176 Met His Val 1 gca tcg gca cta atg gtc gag cag aaa ggc agt gag gca gct gct tcc 224 Ala Ser Ala Leu Met Val Glu Gln Lys Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ser 5 10 15 age cea gac gtc ttg aga gcg tgg gcg acá cag tat cac atg cea tcc 272 Ser Pro Asp Val Leu Arg Ala Trp Ala Thr Gln Tyr His Met Pro Ser 20 25 30 35 gag tcg tea gac gca gct cgt ect gcg cta aag cac gee tac aaa ect 320 Glu Ser Ser Asp Ala Ala Arg Pro Ala Leu Lys His Ala Tyr Lys Pro 40 45 50 cea gca tet gac gee aag ggc ate acg atg gcg ctg acc ate att ggc 368 Pro Ala Ser Asp Ala Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Thr lie lie Gly 55 60 65 acc tgg acc gca gtg ttt tta cac gca ata ttt caá ate agg cta ceg 416 Thr Trp Thr Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Arg Leu Pro 70 75 80 acá tcc atg gac cag ctt cac tgg ttg ect gtg tcc gaa gee acá gee 464 Thr Ser Met Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Glu Ala Thr Ala 85 90 95 cag ctt ttg ggc gga age age age cta ctg cac ate gct gca gtc ttc 512 Gln Leu Leu Gly Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Ala Ala Val Phe 100 105 110 115 att gta ctt gag ttc ctg tac act ggt cta ttc ate acc acá cat gac 560 lie Val Leu Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp 120 125 130 gca atg cat ggc acc ata gct ttg agg cac agg cag etc aat gat etc 608 Ala Met His Gly Thr lie Ala Leu Arg His Arg Gln Leu Asn Asp Leu 135 140 145 ctt ggc aac ate tgc ata tea ctg tac gee tgg ttt gac tac age atg 656 Leu Gly Asn lie Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Ser Met 150 155 160 ctg cat cgc aag cac tgg gag cac cac aac cat act ggc gaa gtg ggg 704 Leu His Arg Lys His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly 165 170 175 aaa gac ect gac ttc cac aag gga aat ecc ggc ctt gtc ecc tgg ttc 752 Lys Asp Pro Asp Phe His Lys Gly Asn Pro Gly Leu Val Pro Trp Phe 180 185 190 195 gee age ttc atg tcc age tac atg tcc ctg tgg cag ttt gee cgg ctg 800 Ala Ser Phe Met Ser Ser Tyr Met Ser Leu Trp Gln Phe Ala Arg Leu 200 205 210 gca tgg tgg gca gtg gtg atg caa atg ctg ggg gcg ccc atg gca aat 848 Ala Trp Trp Ala Val Val et Gln Met Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn 215 220 225 ctc cta gtc ttc atg gct gca gcc cea ate ttg tea gca ttc cgc ctc 896 Leu Leu Val Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu 230 235 240 ttc tac ttc ggc act tac ctg cea cae aag ect gag cea ggc ect gca 944 Phe Tyr Phe Gly Thr Tyr Leu Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Pro Ala 245 250 255 gca ggc tet cag gtg atg gcc tgg ttc agg gcc aag acá agt gag gca 992 Ala Gly Ser Gln Val Met Ala Trp Phe Arg Ala Lys Thr Ser Glu Ala 260 265 270 275 tet gat gtg atg agt ttc ctg acá tgc tac cae ttt gac ctg cae tgg 1040 Ser Asp Val Met Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp 280 285 290 gag cae cae agg tgg ccc ttt gcc ccc tgg tgg cag ctg ccc cae tgc 1088 Glu His His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Gln Leu Pro His Cys 295 300 305 cgc cgc ctg tec ggg cgt ggc ctg gtg ect gcc ttg gca tga 1130 Arg Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala Leu Ala 310 315 320 cctggtccct ccgctggtga cccagcgtct gcacaagagt gtcatgetac agggtgctgc 1190 ggccagtggc agcgcagtgc actctcagcc tgtatggggc taccgctgtg ccactgagca 1250 ctgggcatgc cactgagcac tgggcgtgct actgagcaat gggcgtgcta ctgagcaatg 1310 ggcgtgctac tgacaatggg cgtgctactg gggtctggca gtggctagga tggagtttga 1370 tgcattcagt agcggtggcc aacgtcatgt ggatggtgga agtgctgagg ggtttaggca 1430 gccggcattt gagagggcta agttataaat cgcatgctgc tcatgcgcac atatctgcac 1490 acagccaggg aaatcccttc gagagtgatt atgggacact tgtattggtt tcgtgctatt 1550 gttttattca gcagcagtac ttagtgaggg tgagagcagg gtggtgagag tggagtgagt 1610 gagtatgaac ctggtcagcg aggtgaacag cctgtaatga atgactctgt ct 1662 <210> 4 <211> 320 <212> PRT <213> Haematococcus pluvialis <400> 4 Met His Val Ala Ser Ala Leu Met Val Glu Gln Lys Gly Ser Glu Ala 1 5 10 15 Ala Ala Ser Ser Pro Asp Val Leu Arg Ala Trp Ala Thr Gln Tyr His 20 25 30 Met Pro Ser Glu Ser Ser Asp Ala Ala Arg Pro Ala Leu Lys His Ala 35 40 45 Tyr Lys Pro Pro Ala Ser Asp Ala Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Thr 50 55 60 lie lie Gly Thr Trp Thr Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie 65 70 75 80 Arg Leu Pro Thr Ser Met Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Glu 85 90 95 Ala Thr Ala Gln Leu Leu Gly Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Ala 100 105 110 Ala Val Phe lie Val Leu Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr 115 120 125 Thr His Asp Ala Met His Gly Thr lie Ala Leu Arg His Arg Gln Leu 130 135 140 Asn Asp Leu Leu Gly Asn lie Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp 145 150 155 160 Tyr Ser Met Leu His Arg Lys His Trp Glu His His Asn His Thr Gly 165 170 175 Glu Val Gly Lys Asp Pro Asp Phe His Lys Gly Asn Pro Gly Leu Val 180 185 190 Pro Trp Phe Ala Ser Phe Met Ser Ser Tyr Met Ser Leu Trp Gln Phe 195 200 205 Ala Arg Leu Ala Trp Trp Ala Val Val Met Gln Met Leu Gly Ala Pro 210 215 220 Met Ala Asn Leu Leu Val Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala 225 230 235 - 240 Phe Arg Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Tyr Leu Pro His Lys Pro Glu Pro 245 250 255 Gly Pro Ala Ala Gly Ser Gln Val Met Ala Trp Phe Arg Ala Lys Thr 260 265 - 270 Ser Glu Ala Ser Asp Val Met Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp 275 280 285 Leu His Trp Glu His His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Gln Leu 290 295 300 Pro His Cys Arg Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala Leu Ala 305 310 315 320 <210> 5 <211> 729 <212> ADN <213> Agrobacterium 'aurantiacum <220> <221> CDS <222> (1) .. (729) <223> <400> 5 atg age gca cat gcc ctg ccc aag gca gat ctg acc gcc acc agc ctg 48 Met Ser Ala His Ala Leu Pro Lys Ala Asp Leu Thr Ala Thr Ser Leu 1 5 10 15 ate gtc teg ggc ggc ate ate gcc gct tgg ctg gcc ctg cat gtg cat 96 lie Val Ser Gly Gly lie lie Ala Ala Trp Leu Ala Leu His Val His 20 25 30 gcg ctg tgg ttt ctg gac gca gcg gcg cat ccc ate ctg gcg ate gca 144 Ala Leu Trp Phe Leu Asp Ala Ala Ala His Pro lie Leu Ala lie Ala 35 40 45 aat ttc ctg ggg ctg acc tgg ctg teg gtc gga ttg ttc ate ate gcg 192 Asn Phe Leu Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 60 cat gac gcg atg cae ggg teg gtg gtg ceg ggg cgt ceg cgc gcc aat 240 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 80 gcg gcg atg ggc cag ctt gtc ctg tgg ctg tat gcc gga ttt teg tgg 288 Ala Ala Met Gly Gln Leu Val Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 cgc aag atg ate gtc aag cae atg gcc cat cae cgc cat gcc gga acc 336 Arg Lys Met lie Val Lys His Met Ala His His Arg His Ala Gly Thr 100 105 110 gac gac gac ccc gat ttc gac cat ggc ggc ceg gtc cgc tgg tac gcc 384 Asp Asp Asp Pro Asp Phe Asp His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Ala 115 120 125 cgc ttc ate ggc acc tat ttc ggc tgg cgc gag ggg ctg ctg ctg ccc 432 Arg Phe lie Gly Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 gtc ate gtg acg gtc tat gcg ctg ate ctt ggg gat cgc tgg atg tac 480 Val lie Val Thr Val Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg' Trp Met Tyr 145 150 155 160 gtg gtc ttc tgg ccc ctg ceg teg ate ctg gcg teg ate cag ctg ttc 528 Val Val Phe Trp Pro Leu Pro Ser lie Leu Ala Ser lie Gln Leu Phe 165 170 175 gtg ttc ggc acc tgg ctg ceg cae cgc ecc ggc cae gac gcg ttc ceg 576 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Ala Phe Pro 180 185 190 gac cgc cae aat gcg cgg teg teg cgg ate age gac ecc gtg teg ctg 624 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Ser Arg lie Ser Asp Pro Val Ser Leu 195 200 205 ctg acc tgc ttt cae ttt ggc ggt tat cat cae gaa cae cae ctg cae 672 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 ceg acg gtg ceg tgg tgg cgc ctg ecc age acc cgc acc aag ggg gac 720 Pro Thr Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Ser Thr Arg Thr Lys Gly Asp 225 230 235 240 acc gca tga 729 Thr Ala <210> 6 <211> 242 <212> PRT <213> Agrobacterium aurantiacum <400> 6 Met Ser Ala His Ala Leu Pro Lys Ala Asp Leu Thr Ala Thr Ser Leu 1 5 10 15 lie Val Ser Gly Gly lie lie Ala Ala Trp Leu Ala Leu His Val His 20 25 30 Ala Leu Trp Phe Leu Asp Ala Ala Ala His Pro lie Leu Ala lie Ala 35 40 45 Asn Phe Leu Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 60 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 80 Ala Ala Met Gly Gln Leu Val Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 Arg Lys Met lie Val Lys His Met Ala His His Arg His Ala Gly Thr 100 105 · 110 Asp Asp Asp Pro Asp Phe Asp His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Ala 115 120 125 Arg Phe lie Gly Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 Val lie Val Thr Val Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr 145 150 155 160 Val Val Phe Trp Pro Leu Pro Ser lie Leu Ala Ser lie Gln Leu Phe 165 170 175 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Ala Phe Pro 180 185 190 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Ser Arg lie Ser Asp Pro Val Ser Leu 195 200 205 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 Pro Thr Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Ser Thr Arg Thr Lys Gly Asp 225 230 235 240 Thr Ala <210> 7 <211> 1631 <212> ADN <213> Alcaligenes sp. <220> <221> CDS <222> (99) .. (827) <223> <400> 7 ctgcaggccg ggcccggtgg ccaatggtcg caaccggcag gactggaaca ggacggcggg 60 ccggtctagg ctgtcgccct acgcagcagg agtttcgg atg tcc gga cgg aag cct 116 Met Ser Gly Arg Lys Pro 1 5 ggc acá act ggc gac acg ate gtc aat etc ggt ctg acc gee gcg ate 164 Gly Thr Thr Gly Asp Thr lie Val Asn Leu Gly Leu Thr Ala Ala lie 10 15 20 ctg ctg tgc tgg ctg gtc ctg cae gee ttt acg cta tgg ttg cta gat 212 Leu Leu Cys Trp Leu Val Leu His Ala Phe Thr Leu Trp Leu Leu Asp 25 30 35 gcg gee gcg cat ceg ctg ctt gee gtg ctg tgc ctg gct ggg ctg acc 260 Ala Ala Ala His Pro Leu Leu Ala Val Leu Cys Leu Ala Gly Leu Thr 40 45 50 tgg ctg teg gtc ggg ctg ttc ate ate gcg cat gac gca atg cae ggg 308 Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala His Asp Ala Met His Gly 55 60 65 70 tcc gtg gtg ceg ggg cgg ceg cgc gee aat gcg gcg ate ggg caá ctg 356 Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn Ala Ala lie Gly Gln Leu 75 80 85 gcg ctg tgg ctc tat gcg ggg ttc tcg tgg ccc aag ctg atc gcc aag 404 Ala Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp Pro Lys Leu lie Ala Lys 90 95 100 cae atg acg cat cae cgg cac gcc ggc acc gac aac gat ccc gat ttc 452 His et Thr His His Arg His Ala Gly Thr Asp Asn Asp Pro Asp Phe 105 110 115 ggt cae gga ggg ccc gtg cgc tgg tac ggc age ttc gtc tec acc tat 500 Gly His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Gly Ser Phe Val Ser Thr Tyr 120 125 130 ttc ggc tgg cga gag gga ctg ctg cta ceg gtg atc gtc acc acc tat 548 Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro Val lie Val Thr Thr Tyr 135 140 145 150 gcg ctg atc ctg ggc gat cgc tgg atg tat gtc atc ttc tgg ceg gtc 596 Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr Val lie Phe Trp Pro Val 155 160 165 ceg gcc gtt ctg gcg tcg atc cag att ttc gtc ttc gga act tgg ctg 644 Pro Ala Val Leu Ala Ser lie Gln lie Phe Val Phe Gly Thr Trp Leu 170 175 180 ccc cac cgc ceg gga cat gac gat ttt ccc gac cgg cac aac gcg agg 692 Pro His Arg Pro Gly His Asp Asp Phe Pro Asp Arg His Asn Ala Arg 185 190 195 tcg acc ggc atc ggc gac ceg ttg tea cta ctg acc tgc ttc cat ttc 740 Ser Thr Gly lie Gly Asp Pro Leu Ser Leu Leu Thr Cys Phe His Phe 200 205 . 210 ggc ggc tat cac cac gaa cat cac ctg cat ceg cat gtg ceg tgg tgg 788 Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His Pro His Val Pro Trp Trp 215 220 225 > 230 cgc ctg ect cgt acá cgc aag acc gga ggc cgc gca tga ngcaattcct 837 Arg Leu Pro Arg Thr Arg Lys Thr Gly Gly Arg Ala 235 240 cattgtcgtg gcgacagtcc tcgtgatgga gctgaccgcc tattccgtcc accgctggat 897 tatgcacggc cccctaggct ggggctggca caagtcccat cacgaagagc acgaccacgc 957 gttggagaag aacgacctct acggcgtcgt cttcgcggtg ctggcgacga tcctcttcac 1017 cgtgggcgcc tattggtggc cggtgctgtg gtggatcgcc ctgggcatga cggtctatgg 1077 gttgatctat ttcatcctgc acgacgggct tgtgcatcaa cgctggccgt ttcggtatat 1137 tccgcggcgg ggctatttcc gcaggctcta ccaagctcat cgcctgcacc acgcggtcga 1197 ggggcgggac cactgcgtca gcttcggctt catctatgcc ccacccgtgg acaagctgaa 1257 gcaggatctg aagcggtcgg gtgtcctgcg cccccaggac gagcgtccgt cgtgatctct 1317 gatcccggcg tggccgcatg aaatccgacg tgctgctggc aggggccggc cttgccaacg 1377 gactgatcgc gctggcgatc cgcaaggcgc ggcccgacct tcgcgtgctg ctgctggacc 1437 gtgcggcggg cgcctcggac gggcatactt ggtcctgcca cgacaccgat ttggcgccgc 1497 actggctgga ccgcctgaag ccgatcaggc gtggcgactg gcccgatcag gaggtgcggt 1557 tcccagacca ttcgcgaagg ctccgggccg gatatggctc gatcgacggg cgggggctga 1617 tgcgtgcggt gacc 1631 <210> 8 <211> 242 <212> PRT <213> Alcaligenes sp. <400> 8 Met Ser Gly Arg Lys Pro Gly Thr Thr Gly Asp Thr lie Val Asn Leu 1 5 10 15 Gly Leu Thr Ala Ala lie Leu Leu Cys Trp Leu Val Leu His Ala Phe 20 . 25 30 Thr Leu Trp Leu Leu Asp Ala Ala Ala His Pro Leu Leu Ala Val Leu 35 40 45 Cys Leu Ala Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 · 60 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 80 Ala Ala lie Gly Gln Leu Ala Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 Pro Lys Leu lie Ala Lys His Met Thr His His Arg His Ala Gly Thr 100 105 110 Asp Asn Asp Pro Asp Phe Gly His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Gly 115 120 125 Ser Phe Val Ser Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 Val lie Val Thr Thr Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr 145 150 155 160 Val lie Phe Trp Pro Val Pro Ala Val Leu Ala Ser lie Gln lie Phe 165 170 175 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Asp Phe Pro 180 185 190 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Thr Gly lie Gly Asp Pro Leu Ser Leu 195 200 205 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 Pro His Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Arg Thr Arg Lys Thr Gly Gly 225 230 235 240 Arg Ala <210> 9 <211> 729 <212> ADN <213> Paracoccus marcusii <220> <221> CDS <222> (I).. (729) <223> <400> 9 atg age gca cat gcc ctg ecc aag gca gat ctg acc gcc acá age ctg 48 Met Ser Ala His Ala Leu Pro Lys Ala Asp Leu Thr Ala Thr Ser Leu 1 5 10 15 ate gtc tcg ggc ggc ate ate gcc gca tgg ctg gcc ctg cat gtg cat 96 lie Val Ser Gly Gly lie lie Ala Ala Trp Leu Ala Leu His Val His 20 25 30 gcg ctg tgg ttt ctg gac gcg gcg gcc cat ecc ate ctg gcg gtc gcg 144 Ala Leu Trp Phe Leu Asp Ala Ala Ala His Pro lie Leu Ala Val Ala 35 40 .45 aat ttc ctg ggg ctg acc tgg ctg tcg gtc gga ttg ttc ate ate gcg 192 Asn Phe Leu Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 60 1 cat gac gcg atg cae ggg tcg gtc gtg ceg ggg cgt ceg cgc gcc aat 240 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 80 gcg gcg atg ggc cag ctt gtc ctg tgg ctg tat gcc gga ttt tcg tgg 288 Ala Ala Met Gly Gln Leu Val Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 cgc aag atg ate gtc aag cae atg gcc cat cae cgc cat gcc gga acc 336 Arg Lys Met lie Val Lys His Met Ala His His Arg His Ala Gly Thr ?00 105 · 110 gac gac gac cea gat ttc gac cat ggc ggc ceg gtc cgc tgg tac gcc 384 Asp Asp Asp Pro Asp Phe Asp His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Ala 115 120 125 cgc ttc ate ggc acc tat ttc ggc tgg cgc gag ggg ctg ctg ctg ecc 432 Arg Phe lie Gly Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 gtc ate gtg acg gtc tat gcg ctg ate ctg ggg gat cgc tgg atg tac 480 Val lie Val Thr Val Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr 145 150 155 160 gtg gtc ttc tgg ceg ttg ceg teg ate ctg gcg teg ate cag ctg ttc 528 Val Val Phe Trp Pro Leu Pro Ser lie Leu Ala Ser lie Gln Leu Phe 165 170 175 gtg ttc ggc act tgg ctg ceg cae cgc ecc ggc cae gac gcg ttc ceg 576 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Ala Phe Pro 180 185 190 gac cgc cat aat gcg cgg teg teg cgg ate age gac ect gtg teg ctg 624 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Ser Arg lie Ser Asp Pro Val Ser Leu 195 200 205 ctg acc tgc ttt cat ttt ggc ggt tat cat cae gaa cae cae ctg cae 6/2 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 ceg acg gtg ceg tgg tgg cgc ctg ecc age acc cgc acc aag ggg gac 720 Pro Thr Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Ser Thr Arg Thr Lys Gly Asp 225 230 235 240 acc gca tga 729 Thr Ala <210> 10 <211> 242 <212> PRT <213> Paracoccus marcusii <400> 10 Met Ser Ala His Ala Leu Pro Lys Ala Asp Leu Thr Ala Thr Ser Leu 1 5 10 15 lie Val Ser Gly Gly lie lie Ala Ala Trp Leu Ala Leu His Val His 20 25 30 Ala Leu Trp Phe Leu Asp Ala Ala Ala His Pro lie Leu Ala Val Ala 35 40 45 Asn Phe Leu Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 60 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 . B0 Ala Ala Met Gly Gln Leu Val Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 Arg Lys Met lie Val Lys His Met Ala His His Arg His Ala Gly Thr 100 105 110 Asp Asp Asp Pro Asp Phe Asp His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Ala 115 120 125 Arg Phe lie Gly Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 Val lie Val Thr Val Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr 145 150 155 160 Val Val Phe Trp Pro Leu Pro Ser lie Leu Ala Ser lie Gln Leu Phe 165 170 175 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Ala Phe Pro 180 185 190 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Ser Arg lie Ser Asp Pro Val Ser Leu 195 200 205 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 Pro Thr Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Ser Thr Arg Thr Lys Gly Asp 225 230 235 240 Thr Ala <210> 11 <211> 1629 <212> ADN <213> Synechococcus sp. <220> <221> CDS <222> (1) .. (1629) <223> <400> 11 ¾ atg ate acc acc gat gtt gtc att att ggg gcg ggg cac aat ggc tta 48 Met lie Thr Thr Asp Val Val lie lie Gly Ala Gly His Asn Gly Leu 1 5 10 15 gtc tgt gca gcc tat ttg etc caá cgg ggc ttg ggg gtg acg tta cta 96 Val Cys Ala Ala Tyr Leu Leu Gln Arg Gly Leu Gly Val Thr Leu Leu 20 25 30 gaa aag cgg gaa gta cea ggg ggg gcg gcc acc acá gaa gct etc atg 144 Glu Lys Arg Glu Val Pro Gly Gly Ala Ala Thr Thr Glu Ala Leu Met 35 40 45 ccg gag cta tcc ccc cag ttt cgc ttt aac cgc tgt gcc att gac cac 192 Pro Glu Leu Ser Pro Gln Phe Arg Phe Asn Arg Cys Ala lie Asp His 50 55 60 gaa ttt ate ttt ctg ggg ccg gtg ttg cag gag cta aat tta gcc cag 240 Glu Phe. lie Phe Leu Gly Pro Val Leu Gln Glu Leu Asn Leu Ala Gln 65 70 75 80 tat ggt ttg gaa tat tta ttt tgt gac ccc agt gtt ttt tgt ccg ggg 288 Tyr Gly Leu Glu Tyr Leu Phe Cys Asp Pro Ser Val Phe Cys Pro Gly 85 90 95 ctg gat ggc caá gct ttt atg age tac cgt tec cta gaa aaa acc tgt 336 Leu Asp Gly Gln Ala Phe Met Ser Tyr Arg Ser Leu Glu Lys Thr Cys 100 105 110 gee cae att gee acc tat age ccc cga gat gcg gaa aaa tat cgg caá 384 Ala His lie Ala Thr Tyr Ser Pro Arg Asp Ala Glu Lys Tyr Arg Gln 115 120 125 ttt gtc aat tat tgg acg gat ttg etc aac gct gtc cag ect gct ttt 432 Phe Val Asn Tyr Trp Thr Asp Leu Leu Asn Ala Val Gln Pro Ala Phe 130 135 140 aat gct ccg ccc cag gct tta cta gat tta gee ctg aac tat ggt tgg 480 Asn Ala Pro Pro Gln Ala Leu Leu Asp Leu Ala Leu Asn Tyr Gly Trp 145 150 155 160 gaa aac tta aaa tec gtg ctg gcg ate gee ggg teg aaa acc aag gcg 528 Glu Asn Leu Lys Ser Val Leu Ala lie Ala Gly Ser Lys Thr Lys Ala 165 170 175 ttg gat ttt ate cgc act atg ate ggc tec ccg gaa gat gtg etc aat 576 Leu Asp Phe lie Arg Thr Met lie Gly Ser Pro Glu Asp Val Leu Asn 180 185 190 gaa tgg ttc gac age gaa cgg gtt aaa gct ect tta gct aga cta tgt 624 Glu Trp Phe Asp Ser Glu Arg Val Lys Ala Pro Leu Ala Arg Leu Cys 195 200 205 teg gaa att ggc gct ccc cea tec caá aag ggt agt age tec ggc atg 672 Ser Glu lie Gly Ala Pro Pro Ser Gln Lys Gly Ser Ser Ser Gly Met 210 215 220 > atg atg gtg gee atg cgg cat ttg gag gga att gee aga cea aaa gga 720 Met Met Val Ala Met Arg His Leu Glu Gly lie Ala Arg Pro Lys Gly 225 230 235 240 ggc act gga gee etc acá gaa gee ttg gtg aag tta gtg caá gee caá 768 Gly Thr Gly Ala Leu Thr Glu Ala Leu Val Lys Leu Val .Gln Ala Gln 245 250 255 ggg a aaa ate etc act gac caá acc gtc aaa cgg gta ttg gtg gaa 816 Gly Gly Lys lie Leu Thr Asp Gln Thr Val Lys Arg Val Leu Val Glu 260 265 · 270 aac aac cag gcg ate ggg gtg gag gta gct aac gga gaa cag tac cgg 864 Asn Asn Gln Ala lie Gly Val Glu Val Ala Asn Gly Glu Gln Tyr Arg 275 280 285 gee aaa aaa ggc gtg att tet aac ate gat gee cgc cgt tta ttt ttg 912 Ala Lys Lys Gly Val lie Ser Asn lie Asp Ala Arg Arg Leu Phe Leu 290 295 300 caá ttg gtg gaa ccg ggg gcc cta gcc aag gtg aat caá aac cta ggg 960 Gln Leu Val Glu Pro Gly Ala Leu Ala Lys Val Asn Gln Asn Leu Gly 305 310 315 320 gaa cga ctg gaa cgg cgc act gtg aac aat aac gaa gcc att tta aaa 1008 Glu Arg Leu Glu Arg Arg Thr Val Asn Asn Asn Glu Ala He Leu Lys 325 330 335 ate gat tgr gcc ctc tcc ggt tta ccc cae ttc act gcc atg gcc ggg 1056 He Asp Cys Ala Leu Ser Gly Leu Pro His Phe Thr Ala Met Ala Gly 340 345 350 ccg gag gat cta acg gga act att ttg att gcc gac teg gta cgc cat 1104 Pro Glu Asp Leu Thr Gly Thr He Leu He Ala Asp Ser Val Arg His 355 360 365 gtc gag gaa gcc cae gcc ctc att gcc ttg ggg caá att ccc gat gct 1152 Val Glu Glu Ala His Ala Leu He Ala Leu Gly Gln He Pro Asp Ala 370 375 380 aat ccg tet tta tat ttg gat att ccc act gta ttg gac ccc acc atg 1200 Asn Pro Ser Leu Tyr Leu Asp He Pro Thr Val Leu Asp Pro Thr Met 385 390 395 400 gcc ccc ect ggg cag cae acc ctc tgg ate gaa ttt ttt gcc ccc tac 1248 Ala Pro Pro Gly Gln His Thr Leu Trp He Glu Phe Phe Ala Pro Tyr 405 410 415 cgc ate gcc ggg ttg gaa ggg acá ggg tta atg ggc acá ggt tgg acc 1296 Arg He Ala Gly Leu Glu Gly Thr Gly Leu Met Gly Thr Gly Trp Thr 420 425 430 gat gag tta aag gaa aaa gtg gcg gat cgg gtg att gat aaa tta acg 1344 Asp Glu Leu Lys Glu Lys Val Ala Asp Arg Val He Asp Lys Leu Thr 435 " 440 445 gac tat gcc ect aac cta aaa tet ctg ate att ggt cgc cga gtg gaa 1392 Asp Tyr Ala Pro Asn Leu Lys Ser Leu He He Gly Arg Arg Val Glu 450 455 460 agt ccc gcc gaa ctg gcc caá cgg ctg gga agt tac aac ggc aat gtc 144.0 Ser Pro Ala Glu Leu Ala Gln Arg Leu Gly Ser Tyr Asn Gly Asn Val 465 470 " 475 80^ tat cat ctg gat atg agt ttg gac caá atg atg ttc ctc cgg ect cta 1488 Tyr His Leu Asp Met Ser Leu Asp Gln Met Met Phe Leu Arg Pro Leu 485 490 · 495 ccg gaa att gcc aac tac caá acc ccc ate aaa aat ctt tac tta acá 1536 Pro Glu He Ala Asn Tyr Gln Thr Pro He Lys Asn Leu Tyr Leu Thr 500 505 510 ggg gcg ggt acc cat ccc ggt ggc tcc ata tea ggt atg ccc ggt aga 1584 Gly Ala Gly Thr His Pro Gly Gly Ser He Ser Gly Met Pro Gly Arg 515 520 525 aat tgc gct cgg gtc ttt tta aaa caa caa cgt cgt ttt tgg taa 1629 Asn Cys Ala Arg Val Phe Leu Lys Gln Gln Arg Arg Phe Trp 530 535 540 <210> 12 <211> 542 <212> PRT <213> Synechococcus sp. <400> 12 Met lie Thr Thr Asp Val Val lie lie Gly Ala Gly His Asn Gly Leu 1 5 10 15 Val Cys Ala Ala Tyr Leu Leu Gln Arg Gly Leu Gly Val Thr Leu Leu 20 25 30 Glu Lys Arg Glu Val Pro Gly Gly Ala Ala Thr Thr Glu Ala Leu Met 35 40 45 Pro Glu Leu Ser Pro Gln Phe Arg Phe Asn Arg Cys Ala lie Asp His 50 55 60 Glu Phe lie Phe Leu Gly Pro Val Leu Gln Glu Leu Asn Leu Ala Gln 65 70 75 80 Tyr Gly Leu Glu Tyr Leu Phe Cys Asp Pro Ser Val Phe Cys Pro Gly 85 90 95 Leu Asp Gly Gln Ala Phe Met Ser Tyr Arg Ser Leu Glu Lys Thr Cys 100 105 110 Ala His lie Ala Thr Tyr Ser Pro Arg Asp Ala Glu Lys Tyr Arg Gln 115 120 125 Phe Val Asn Tyr Trp Thr Asp Leu Leu Asn Ala Val Gln Pro Ala Phe 130 135 140 Asn Ala Pro Pro Gln Ala Leu Leu Asp Leu Ala Leu Asn Tyr Gly Trp 145 150 155 160 Glu Asn Leu Lys Ser Val Leu Ala lie Ala Gly Ser Lys Thr Lys Ala 165 170 175 Leu Asp Phe lie Arg Thr Met lie Gly Ser Pro Glu Asp Val Leu Asn 180 185 190 Glu Trp Phe Asp 3er Glu Arg Val Lys Ala Pro Leu Ala Arg Leu Cys 195 200 205 Ser Glu lie Gly Ala Pro Pro Ser Gln Lys Gly Ser Ser Ser Gly Met 210 215 220 Met Met Val Ala Met Arg His Leu Glu Gly lie Ala Arg Pro Lys Gly 225 230 235 240 Gly Thr Gly Ala Leu Thr Glu Ala Leu Val Lys Leu Val Gln Ala Gln 245 250 255 Gly Gly Lys lie Leu Thr Asp Gln Thr Val Lys Arg Val Leu Val Glu 260 265 270 Asn Asn Gln Ala lie Gly Val Glu Val Ala Asn Gly Glu Gln Tyr Arg 275 280 285 Ala Lys Lys Gly Val lie Ser Asn lie Asp Ala Arg Arg Leu Phe Leu 290 , 295 300 Gln Leu Val Glu Pro Gly Ala Leu Ala Lys Val Asn Gln Asn Leu Gly 305 310 315 320 Glu Arg Leu Glu Arg Arg Thr Val Asn Asn Asn Glu Ala lie Leu Lys 325 330 335 lie Asp Cys Ala Leu Ser Gly Leu Pro His Phe Thr Ala Met Ala Gly 340 345 350 Pro Glu Asp Leu Thr Gly Thr lie Leu lie Ala Asp Ser Val Arg His 355 360 365 Val Glu Glu Ala His Ala Leu lie Ala Leu Gly Gln lie Pro Asp Ala 370 375 380 Asn Pro Ser Leu Tyr Leu Asp lie Pro Thr Val Leu Asp Pro Thr Met 385 390 395 400 Ala Pro Pro Gly Gln His Thr Leu Trp lie Glu Phe Phe Ala Pro Tyr 405 410 415 Arg lie Ala Gly Leu Glu Gly Thr Gly Leu Met Gly Thr Gly Trp Thr 420 425 1 430 Asp Glu Leu Lys Glu Lys Val Ala Asp Arg Val lie Asp Lys Leu Thr 435 440 445 Asp Tyr Ala Pro Asn Leu Lys Ser Leu lie lie Gly Arg Arg Val Glu 450 455 460 Ser Pro Ala Glu Leu Ala Gln Arg Leu Gly Ser Tyr Asn Gly Asn Val 465 470 475 480 Tyr His Leu Asp Met Ser Leu Asp Gln Met Met Phe Leu Arg Pro Leu 485 490 · 495 Pro Glu lie Ala Asn Tyr Gln Thr Pro lie Lys Asn Leu Tyr Leu Thr 500 505 510 Gly Ala Gly Thr His Pro Gly Gly Ser lie Ser Gly Met Pro Gly Arg 515 520 525 Asn Cys Ala Arg Val Phe Leu Lys Gln Gln Arg Arg Phe Trp 530 535 540 <210> 13 <211> 776. <212> ADN <213> Bradyrhizobium <220> <221> CDS <222> (1) - · (774) <223> <400> 13 atg cat gca gca acc gcc aag gct act gag ttc ggg gcc tct cgg cgc 48 Met His Ala Ala Thr Ala Lys Ala Thr Glu Phe Gly Ala Ser Arg Arg 1 5 10 15 gac gat gcg agg cag cgc cgc gtc ggt ctc acg ctg gcc gcg gtc ate 96 Asp Asp Ala Arg Gln Arg Arg Val Gly Leu Thr Leu Ala Ala Val lie 20 25 30 ate gcc gcc tgg ctg gtg ctg cat gtc ggt ctg atg ttc ttc tgg ccg 144 lie Ala Ala Trp Leu Val Leu His Val Gly Leu Met Phe Phe Trp Pro 35 40 45 ctg acc ctt cac age ctg ctg ccg gct ttg ect ctg gtg gtg ctg cag 192 Leu Thr Leu His Ser Leu Leu Pro Ala Leu Pro Leu Val Val Leu Gln 50 55 60 acc tgg ctc tat gta ggc ctg ttc ate ate gcg cat gac tgc atg cac 240 Thr Trp Leu Tyr Val Gly Leu Phe lie lie Ala His Asp Cys Met His 65 70 75 80 ggc teg ctg gtg ccg ttc aag ccg cag gtc aac cgc cgt ate gga cag 288 Gly Ser Leu Val Pro Phe Lys Pro Gln Val Asn Arg Arg lie Gly Gln 85 90 95 ctc tgc ctg ttc ctc tat gcc ggg ttc tec ttc gac gct ctc aat gtc 336 Leu Cys Leu Phe Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Phe Asp Ala Leu Asn Val 100 105 110 gag cae cac aag cat cac cgc cat ecc ggc acg gcc gag gat ecc gat 384 Glu His His Lys His His Arg His Pro Gly Thr Ala Glu Asp Pro Asp 115 120 125 ttc gac gag gtg ccg ccg cac ggc ttc tgg cac tgg ttc gcc age ttt 432 Phe Asp Glu Val Pro Pro His Gly Phe Trp His Trp Phe Ala Ser Phe 130 135 140 ttc ctg cac tat ttc ggc tgg aag cag gtc gcg ate ate gca gcc gtc 480 Phe Leu His Tyr Phe Gly Trp Lys Gln Val Ala lie . lie Ala Ala Val 145 150 155 160 teg ctg gtt tat cag ctc gtc ttc gcc gtt ecc ttg cag aac ate ctg 528 Ser Leu Val Tyr Gln Leu Val Phe Ala Val Pro Leu Gln Asn lie Leu 165 170 175 ctg ttc tgg gcg ctg ccc ggg ctg ctg tcg gcg ctg cag ctg ttc' acc 576 Leu Phe Trp Ala Leu Pro Gly Leu Leu Ser Ala Leu Gln Leu Phe Thr 180 185 190 ttc ggc acc tat ctg ccg cae aag ceg gee acg cag ccc ttc gee gat 624 Phe Gly Thr Tyr Leu Pro His Lys Pro Ala Thr Gln Pro Phe Ala Asp 195 200 205 cgc cae aac gcg cgg acg age gaa ttt ccc gcg tgg ctg tcg ctg ctg 672 Arg His Asn Ala Arg Thr Ser Glu Phe Pro Ala Trp Leu Ser Leu Leu 210 215 220 acc tgc ttc cae ttc ggc ttt cat cae gag cat cat ctg cat ccc gat 720 Thr Cys Phe His Phe Gly Phe His His Glu His His Leu His Pro Asp 225 230 235 240 gcg ccg tgg tgg cgg ctg ccg gag ate aag cgg cgg gee ctg gaa agg 768 Ala Pro Trp Trp Arg Leu Pro Glu lie Lys Arg Arg Ala Leu Glu Arg 245 250 255 cgt gac ta 776 Arg Asp <210> 14 <211> 258-<212> PRT <213> Bradyrhizobium sp. <400> 14 Met His Ala Ala Thr Ala Lys Ala Thr Glu Phe Gly.Ala Ser Arg Arg 1 5 10 15 Asp Asp Ala Arg Gln Arg Arg Val Gly Leu Thr Leu Ala Ala Val lie 20 25 ' 30 lie Ala Ala Trp Leu Val Leu His Val Gly Leu Met Phe Phe Trp Pro 35 40 45 Leu Thr Leu His Ser Leu Leu Pro Ala Leu Pro Leu Val Val Leu Gln 50 55 60 Thr Trp Leu Tyr Val Gly Leu Phe lie lie Ala His Asp Cys Met His 65 70 75 80 Gly Ser Leu Val Pro Phe Lys Pro Gln Val Asn Arg Arg lie Gly Gln 85 90 · 95 Leu Cys Leu Phe Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Phe Asp Ala Leu Asn Val ' 100 105 110 Glu His His Lys His His Arg His Pro Gly Thr Ala Glu Asp Pro Asp 115 120 125 Phe Asp Glu Val Pro Pro His Gly Phe Trp His Trp Phe Ala Ser Phe 130 · 135 140 Phe Leu His Tyr Phe Gly Trp Lys Gln Val Ala lie lie Ala Ala Val 145 150 155 160 Ser Leu Val Tyr Gln Leu Val Phe Ala Val Pro Leu Gln Asn lie Leu 165 170 175 Leu Phe Trp Ala Leu Pro Gly Leu Leu Ser Ala Leu Gln Leu Phe Thr 180 185 190 Phe Gly Thr Tyr Leu Pro His Lys Pro Ala Thr Gln Pro Phe Ala Asp 195 200 205 Arg His Asn Ala Arg Thr Ser Glu Phe Pro Ala Leu Ser Leu Leu 210 215 Thr Cys Phe His Phe Gly Phe His His Glu His His Leu His Pro Asp 225 230 235 240 Ala Pro Trp Trp Arg Leu Pro Glu lie Lys Arg Arg Ala Leu Glu Arg 245 250 255 Arg Asp <210> 15 <211> 777 <212> ADN <213> Nostoc sp. <220> <221> CDS <222> (1) · . (777) <223> <400> 15 atg gtt cag tgt caá cea tea tet ctg cat tea gaa aaa ctg gtg tta 48 Met Val Gln Cys Gln Pro Ser Ser Leu His Ser Glu Lys Leu Val Leu 1 - 5 10 15 ttg tea teg acá ate aga gat gat aaa aat att aat aag ggt ata ttt 96 Leu Ser Ser Thr lie Arg Asp Asp Lys Asn lie Asn Lys Gly lie Phe 20 25 30 att gee tgc ttt ate tta ttt tta tgg gca att agt tta ate tta tta 144 lie Ala Cys Phe lie Leu Phe Leu Trp Ala lie Ser Leu lie Leu Leu 35 40 45 etc tea ata gat acá tce ata att cat aag age tta tta ggt ata gee 192 Leu Ser lie Asp Thr Ser lie lie His Lys Ser Leu Leu Gly lie Ala 50 55 60 atg ctt tgg cag acc ttc tta tat acá ggt tta ttt att act gct cat 240 Met Leu Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His 65 70 75 80 gat gcc atg cae ggc gta gtt tat ccc aaa aat ccc aga ata aat aat 288 Asp Ala Met His Gly Val Val Tyr Pro Lys Asn Pro Arg lie Asn Asn 85 90 95 ttt ata ggt aag ere act cta ate ttg tat gga cta etc ect tat aaa 336 Phe lie Gly Lys Leu Thr Leu lie Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Lys 100 105 110 gat tta ttg aaa aaa cat tgg tta cae cae gga cat ect ggt act gat Asp Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His Gly His Pro Gly Thr Asp 115 " 120 125 tta gac ect gat tat tac aat ggt cat ccc caá aac ttc ttt ctt tgg Leu Asp Pro Asp Tyr Tyr Asn Gly His Pro Gln Asn Phe Phe Leu Trp 130 135 140 tat cta cat ttt atg aag tet tat tgg cga rgg acg caá att ttc gga 480 Tyr Leu His Phe Met Lys Ser Tyr Trp Arg Trp Thr Gln l e Phe Gly 145 150 155 160 tta gtg atg att ttt cat gga ctt aaa aat ctg gtg cat ata cea gaa 528 Leu Val Met lie Phe His Gly Leu Lys Asn Leu Val His lie Pro Glu 165 170 175 aat aat tta att ata ttt tgg atg ata ect tet att tta agt tea gta 576 Asn Asn Leu lie lie Phe Trp Met lie Pro Ser lie Leu Ser Ser Val 180 185 190 caá cta ttt tat ttt ggt acá ttt ttg ect cat aaa aag cta gaa ggt 624 Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Lys Lys Leu Glu Gly 195 200 205 ggt tat act aac ccc cat tgt gcg cgc agt ate cea tta ect ctt ttt 672 Gly Tyr Thr Asn Pro His Cys Ala Arg Ser lie Pro Leu Pro Leu Phe 210 215 220 * tgg tet ttt yLl act tgt tat cae ttc ggc tac cae aag gaa cat cae 720 Trp Ser Phe Val Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Lys Glu His His 225 230 235 240 gaa tac ect caá ctt ect tgg tgg aaa tta ect gaa gct cae aaa ata 76.8 Glu Tyr Pro Gln Leu Pro Trp Trp Lys Leu Pro Glu Ala His Lys lie 245 250 255 tet tta taa 777 Ser Leu <210> 16 <211> 258 <212> PRT <213> Nostoc sp. <400> 16 Met Val Gln Cys Gln Pro Ser Ser Leu His Ser Glu Lys Leu Val Leu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Thr lie Arg Asp Asp Lys Asn lie Asn Lys Gly lie Phe 20 25 30 lie Ala Cys Phe lie Leu Phe Leu Trp Ala lie Ser Leu lie Leu Leu 35 40 45 Leu Ser lie Asp Thr Ser lie lie His Lys Ser Leu Leu Gly lie Ala 50 55 60 Met Leu Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His 65 · 70 75 80 Asp Ala Met' His Gly Val Val Tyr Pro Lys Asn Pro Arg lie Asn Asn 85 90 95 Phe lie Gly Lys Leu Thr Leu lie Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Lys 100 105 110 Asp Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His Gly His Pro Gly Thr Asp 115 120 125 Leu Asp Pro Asp Tyr Tyr Asn Gly His Pro Gln Asn Phe Phe Leu Trp 130 135 140 Tyr Leu His Phe Met Lys Ser Tyr Trp Arg Trp Thr Gln lie Phe Gly 145 150 155 160 Leu Val Met lie Phe His Gly Leu Lys Asn Leu Val His lie Pro Glu 165 170 175 Asn Asn Leu lie lie Phe Trp Met lie Pro Ser lie Leu Ser Ser Val 180 185 190 Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Lys Lys Leu Glu Gly 195 200 205 Gly Tyr Thr Asn Pro His Cys Ala Arg Ser lie Pro Leu Pro Leu Phe 210 215 220 Trp Ser Phe Val Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Lys Glu His His 225 230 235 240 Glu Tyr Pro Gln Leu Pro Trp Trp Lys Leu Pro Glu Ala His Lys lie 245 250 255 Ser Leu <210> 17 <211> 2093 <212> ADN <213> Tomate <220> <221> promotor <222> (1) .. (2093) <223> <400> 17 tttgccagta ttacaacagc ttatatgttg agcaggtaaa agcttcaatg ccctattctt 60 tctacagtta tcaatgttgc tcgtctaata tctggtgttc ttctcgaaat gtcaattggc 120 ttgcagcaca ttgtcctcta atatccattc aagcttctta gatgatgaaa catttgtcaa 180 atttattaat ttcatagtgt tcagtctcaa ttctttagct ggttcctcat agtaaagttg 240 tctaatatga aatgaaaatg ttctgtgtgt tgtactaata ccttttcatg gttgtctata 300 gaacgtcgat gaagagccaa acagaaacta ttttgggctg cgatttctga taccattgta 360 tctgaatgct gggtgggagc tcatcagaag ctttacaatg ggtcacatat atggagccgg 420 tatgaggaat gctgggaatc agttgcgttt cgcgtgctag gacttttcct tcctggtatt 480 tctgcccaca gcccagttga ttacgtgaac tccgtcagac ttggaaagga gagaagtacc 540 caaatgtcgt ctttttagaa atacttttgt cacaaaatag cggggtttac agctacagaa 600 gatcatgcag aaggcgtcca gtttagtttt tgaaggttgt ttggagttta tttatctaaa 660 gtaaacttaa atcagctttt tgtttatgag ttcagtgaac tatatgttca aataagactt 720 ccctttgtag atatgtgttt tttttgttgt tgagcacttt gtgtgcattg gataaacccc 730 caacgtgtaa tagctaccat acaagagaag taactcgcac tgtccatgtc ttatgtggct 840 cgactcagaa agcattcagg gggattgata accaccctcc aaaccaactg aaccattgtg 900 aataaccacc cttcaaatca accgagtcct cgtgaaggac aaatatgtgg ttttatatac 960 attaaatttt gtttttacat gcttcctctt acttctttag ttttcttgac catatcttgc 1020 gtttttccct tctgtaattg acacttttct tcaaaccatc cagcaatgtg gaagcttgac 1080 gattttcctt cagagtagaa attgaaaaga atcaactaaa aaggatagtc cttcgatttg 1140 atttccggct taaaaataaa ctaataagaa tgagagagcg aataatagaa tattttgaaa 1200 ttttaaagat attcaactat gttaaattgc gttataaatt tcttaaatta gtagcaccta 1260 atagtttagt tctcaaaagt caaaactact acataatgtg ctcatttttc acattaaaat 1320 gcctacatga tgtaaaagta aaactcgtag cattctacgt gttttactca actcaaacat 1380 cctgttcatt ttaataaacg tacgatgagc ttctctctcc aattttcttt tctttttttt 1440 ttttaaaaaa atattttttt ttatatcaat ccaaatgggc tccaatttat cataaattag 1500 gtagaaactt agatattaaa gaaagaaaag ggtttatctc gcaagtgtgg ctatggtggg 1560 acgtgtcaaa ttttggattg tagccaaaca tgagatttga tttaaaggga attggccaaa 1620 tcaccgaaag caggcatctt catcataaat tagtttgttt atttatacag aattatacgc 1680 ttttactagt tatagcattc ggtatctttt tctgggtaac tgccaaacca ccacaaattt 1740 caagtttcca tttaactctt caacttcaac ccaaccaaat ttatttgctt aattgtgcag 1800 aaccactccc tatatcttct aggtgctttc attcgttccg aggtaagaaa agatttttgt 1860 ttctttgaat gctttatgcc actcgtttaa cttctgaggt ttgtggatct tttaggcgac 1920 tttttttttt tttgtatgta aaatttgttt cataaatgct tctcaacata aatcttgaca 1980 aagagaagga attttaccaa gtatttaggt tcagaaatgg ataattttct tactgtgaaa 2040 tatccttatg gcaggtttta ctgttatttt tcagtaaaat gcctcaaatt gga 2093 <210> 18 <211> 4760 <212> ADN <213> Tomate <220> <221> promotor <222> (1) .. (4760) <223> <400> 18 tctagattga aataaacctt attgcattta gtatatgaga atgcatctat aaaataatgt 60 ctatttttgg tggaaaatat ttgtgcgcca aagcacggtt tgtattttat attttacaat 120 atttttgcac ggtaatatag ttgcaaggtt ttacaaacga attatctctt gaactttaaa 180 ttaagttcac agtttattcc aaaaataatg ttcaacttct aatcatatct ccccctattg 240 ctagaaaaat ataacattta cgcccaactt catttaggat ccatttttat gcatggtgga 300 gcaattggat catatactac atattttttt aaaaaaaata gatagaaatt atttaatctt 360 gattccgaat caattgtgat gggaaaacct tattagtttg atgtgtacat ataatgtttt 420 atgtcaaata aatttatttt atactaaatt ttatttgaaa gtatttttct cataacaaat 480 aatttaacta tattggagac atgaaaattc tacaaaacca acttgcatta tcaacataat 540 tttatagttt gaaattgtgc tcttaattaa acaattcaag ataacaatct ggtaaaatta 600 aaattacaag ttgataacaa acatatacat atgtacatct catagatgca ttcattaaat 660 catataatag taaatgcttc acaatagaag ggtctatatt catttttttt ttatgtgtca 720 aacaattttg aggaattcaa tttcatcttt aactggtaca ataatcattt tatcatgaaa 780 ataagcagct caagagaatt tttgaagaat cttttatttc tttaacattt aaccacatga 840 atttttaatt tttttttgca atacatttaa accgaaatgg tcaaacgatc aaccaactga 900 tctttattct aataaacttc tagtttacat ttgcatgtga gtgcatcatc attatcatat 960 ttgtacacaa caaacaagaa aaaaatataa acaatatttt atttaaatat ttatattcca 1020 ctttgactgt agatattaaa tcttgtcatc atttatagtc tcaatattat aattttttta 1080 ttttttcaaa attcaaaagt ttacaattat ttttttgaac tataatatta tccaagatga 1140 acatctcaag aagaaaatta ttaatattgt tatggttaaa attttacata caatacttgt 1200 tttttgcttt acttttatct taccgtagat acacaatcga cgataactta gtgatcacac 1260 aataataatt attttgttca tgacacaata tttataagaa atacttattt ctttctttta 1320 tccttcagta gttcataata aaaacatacc ataatatttg tgatgcattc atagtacgta 1380 atgaaatgac aatttatgtc aaattatttt cttttatact ctcaaacctc ccgtaaaggt 1440 gagatgagtc atttatccaa ttatacataa atatgtcttt attcatgctc tttatcacat 1500 tctgacacat tcacttaatt tcaagagtaa gcaagcatga taactgaaac tatttatgcg 1560 tatcttacct tgatatttga cacattacat gacacacctc aacatcactt tcaaagatta 1620 agcgcaccac catattatct ttcttttttt ttttatgaag gttttataaa attattaaat 1680 taggtccaaa aaattgtttg tcaaataacc ttttatacta gattgatgac aaaaattacc 1740 tttacgtttt gaaagaccat tttaagacct aatctatcag tgactcctta aagttggcac 1800 aatatttcac ttagacaccc taattgaatg atgttcattt taaacaccca atgtagggtt 1860 ccgctatatc attttgacac atttcttaac atcaacaaaa atatataatg agtatgtgat 1920 atactcgcga atgacgtgaa aaatgaagac atttgttatt tgtatcaaag tagttactaa 1980 ataattaatt ttgaataaaa ataaaagctg accagtaaat caataacaca taatattttc 2040 cacctaataa ttaaaatata aaataaaaaa gagccatctc agggtcatct gcccaccatt 2100 gctatttcaa agaaatttgt acgttagttt atagaaattg atgttaaaat tctttcaaga 2160 aaaatttatg aatgaattta ttctctaatt taaaaatatt ttctgttatt tttgttgaaa 2220 gaaatttaac ttggataaaa tggtggttaa aactggaaag aagaaaagag aaaaaataat 2280 taaaaatcat ttcacgctct aatcaatgag cgtatcacat tcattatgtt atataagcaa 2340 aagtgacaaa acgaaaataa tatattacat gaaatgtcta aaataaatat cgtctaatta 2400 aaatatctaa gtaacatatt gtgcctaact ttagagggat catcaataag ttaaacccca 2460 ttttaataac tcataattgt cctttttatt taatattgtc acaaatcaca atgataatta 2520 acattaattt gtcctttgtg acgtccatat tcatgcattt aaccaatcat cttcatttgg 2580 acttattatc acaattatcc cactttcctc acaaaatgga gcattcaagt ggaatagact 2640 acacgatttt taatttcatc aaaaacatct ttttgcttta ttcattatta tattgtcgct 2700 attgttgaat tttatttgcc ctaaatttct taccataaat agatttttct tttagaaaaa 2760 ggagattgac taattctttt cttgtaggaa aaggtttagg actctataaa tagagacata 2820 ttccttctaa cttaatcaac atttacaatg tagtcttaaa gactttgaaa gtttttggtt 2880 agggggagaa attgtgggtc acaagcttga tacgttatca attgtgtaaa cctcccatgt 2940 attctgagtg aatttggttg aggttgtttc cctctgtatt ttgtactctc atatttatag 3000 tggattgttc atctctttcg tggacgtagg tcgattgacc gtcgattgac cgaaccacgt 3060 taaatctttg tattttttga tatatttctc attatcttct tactcgtgat ctttcaaggt 3120 ttgcattgct atcttccgcg ttacaccaac ttatttacga tcctaacagc tatggtgtgg 3180 aaacataaat caaacatttt actgatataa acacatcttt gattataaca tgatagaaat 3240 ttgagcccaa ctttttatca tcattatata caaaaagttc taaatttttt ttttgatgta 3300 gtaaaactta aatccatagt cttgccccta aaccaatgac ataatatata acccaaaata 3360 tactagtttt cgccctcgag ccctttaaaa agtatagtca atatttacgg tgaccgtgaa 3420 tttcttaatt atgatatata atttaaaaga aatcatgatc acattctact gatgagaaca 3480 tgtgctaatc aagggaaaac atggatgtga aaaatacttt ttgttaaaag taaaaaaaaa 3540 tgtgaaattt tgttagttat ttactaccta tacattattt gagcatgtgc aaactttaca 3600 aatacctaat agaagatttt cacctgcctg tatatatgta aattaattat aatgaacact 3660 ctcacataaa ataattatca gtatatacat taatacttgc cctccacaat gaattaaata 3720 aaatgtagaa catgatctac acttcaataa aactaagacc ataaagaata atttcaaaat 3780 atacacatgt caacaataaa ttatttgcat attatattaa cttactaaac aatctttact 3840 tttgaaatat aaaaataatc aagttataag tctgctcaaa gtaaagcact tgttagactc 3900 atctgatttt gagaaggtaa gcaaattgat ggtgcataat agtcacaagt aaaatataaa 3960 atagatttca ttagtaaaat tgttttttac tttctttata tataattatc aatatccttc 4020 aatggtaggt taattatatt gttaacttct tgttgaatta aagcaataag acaagaatat 4080 taaagataaa agaacaataa aaatagaaag actaagagat aagagttttc ttattcttct 4140 ttcaataagt atcatcaagt gtatacaata taaatttttg tatttttgat ctatctattt 4200 ataatgttat atataagcat acaaaagatc agtcataaat atgactttaa tcatgaaaat 4260 aatgaaagag attatgaagg cgtaaggtta ctagaataat agtcattaaa aaaaggggtt 4320 atctttataa ttgaataatt gatgaagtaa tggagataat tagtgagcat aaattttttt 4380 aaaaaaatgg acatttacac tataatattt tataacactt tcccttaaac atctaggtat 4440 aaataatgag tcttgtcaaa atcttagtag gaaaaattct gtgaaatttt tttagtgaaa 4500 acaaatgata taaatatctt gaatactcat tatttgttgt ctcattaaaa atcttatctg 4560 acctataaaa taaattattt gctcaactca aaatagtttt tcattctaaa attagtataa 4620 ttattagtga atatttaatt aacataattg tatactaagg ggcctataaa ttggattctt 4680 ctcaaagaaa aataaaatca ccacacaact ttcttcttct gctcatcaat tagcaattaa 4740 tccaaaacca ttatggctgc 4760 <210> 19 <211> 1229 <212> ADN <213> Tomate <220> <221> promotor <222> (1)..(1229) <223> <400> 19 gatcttactt taccataatg gtgaaaagga tagagaccca catggttttt acttcgttat 60 agagacaaga tgaaaacaaa tctaaaattt aatattatag atggatagat gatggacaac 120 aaaaagagaa aagaagatac tggtcattgg tccaaaacag ccacccgaat caatatatga 180 ccgaaaaaca aaagctacag aatcatatct gtgcaacggt gccacagtgc tataggatag 240 cacaaccaca ctgtcacata aaaaagagga ttttgcactc gttttagatg gagtttcgta 300 attttcgggt ctttcaagct taaatatata cttcattaaa gcttcgaatt ttgtaatgtt 360 caattctacc tctttgatgt tcgataccta taaaataatt aaataaacgt atagacgtag 420 gaacaattaa gcggagttag atagtgcatt tatgattcta cctgtgagtg caatggtaaa 480 atggacatta taaaagagta ggggcaaaga gggaagtgaa aaattctccc cacttagcca 540 tgtttaatat agtagggata ggaatatgta ataagtagtg ttttttctat ttaattttct 600 gtatacttct tccatctcct ttaattatta aaaggttttc ctctctttac tctttctctc 660 taaattacta ttctgaagta tattttcttt tataaaaaga gtaataaact ttatttccat 720 taaaagaaca aacaacaaga aatgataatc aaatacacat tcatattttt aaaaaaaaag 780 ttaaacaaga tatagaaata gttatcaaat atatttatgt tgtcattcct tgtatacaat 840 ggcattcctt tagctttgtt tatgtatttc ctgagcttct cttagtgtac tatatccttt 900 aatattaatg catctttcga tcttgctaag atatgataaa aatagacgac acgtgtcaca 960 acctaattga gatatttcga tgtactttct atccgtctta gcttgtaatt aattattgtt 1020 aaaaaagaat actcaattaa ctagaaacaa gaaataagaa acgaaaacat tacaaaacgg 1080 agttgaagcg tgcaaatttg tggaaatgat tgttatcatg aaccagaaaa cattaaataa 1140 ctcttcctat aaaaggccct tattcttcac tttctcaaat cacgtcctaa agatatcaaa 1200 gatttcaact gatagcaaaa agcactact 1229 <210> 20 <211> 845 <212> ADN <213> Tomate <220> <221> promotor <222> (1)..(845) <223> <400> 20 ctgttattga atttctataa aatgttataa tattgatttc ttaatgatca gttaactacg 60 tgattatttg atatgttttt aatctaaaat gtgatatgta aaatatagaa gaaaaaaaat 120 taaaaagaac tttaagaaaa aaatttcaac ccaccccaac ctaaaatcct aggtccgcca 180 tggtaattat agatatatga tgatgaaggg caaatattgg tctatgagaa tttcggtgat 240 actaccgctt gaagagcaat aatggttttg ggactccgat gagggaaaca ttcaaatatg 300 atggattttg gtgatactat gtttacccga gctagctatc acagaataat ctacatccca 360 caaatgaaat atgttatagg ctaccaatta ggaagtagtg gaattatgaa gaagtaggga 420 tgtgcaaata taagagaaaa tttgaaaatt atgattgaaa caagttatgt ttttttaact 480 agatgaatta aatggtttaa agatttgtag atttataatc aaacaattac cgctactcta 540 tcggtgacta ccaattccat cattgtaaat aacaaataac agattcgttg ctggatgtct 600 tagtgccgtg aagcctacaa atcacactat aaactgctta gctctcgagc gttactaatt 660 tggtgattac caattccaac attgcgactt cttctactag tagtactaaa atagcaagta 720 atatgcattt gtggtaagat gtttggtgtt aacctttcct aaccagacta taaatgacct 780 caacactata gtggagtttc atcgatcatc attctaaacg aaaaacttga agtgaaagca 840 tcaag 845 <210> 21 <211> 3417 <212> ADN <213> Tomate <220> <221> promotor <222> (1). . (3417) <223> <400> 21 aagcttggct gcaggtcgac ctgcaggtca acggatcaat gccttgttaa taatatgaaa 60 ataagacgta aaagaagtct tgcatatgca ccataatatt agacttatgg acaaaagtaa 120 gttggttcaa attacgcttt tatttatcca catagcaaga aaataatact caaaatccaa 180 cggtatcggt tattttatat tttactctac atgtatatat gtagtataat ggacataaat 240 tctgtcgtaa ttatacatat attaataatg aggattgtaa aataatatgc aaaaacgtcg 300 tatttgacat actaatagct aaaatactac ctactatcat atataattag ttaactatgt 360 gccttttaag aaaaattacg tgaaataaca aatatttaga gcatattatg taatatagct 420 gtagttttat tattttttgt taatggctac aatttcgcaa aattttccta ttttgtttct 480 taatcgtata aatccaaatt ttgtataatt atgaccttaa ttgtttaatt cagatttcgt 540 ataaaattcg atttttgatt ttataaatta aaatttatac ttactttagc tacttgttta 600 tgatttatca aaaaattcat attaatctat ttgtatatgg acaagcaaaa tatacaaatg 660 gagttctgaa aatttctaaa tgcatatact taatatcttt gatggtcact caactatcaa 720 ctttttccat aaaaagtcac ttaacattga ttttcaactc gaaáatcact caactatgaa 780 atctttgtat agaaagtcac tcaacctatt taattatttt tttccattat atctgttgtc 840 acgaaatatt atttctaact aatattctaa gaataaacat acatccattt aaatcattta 900 ataaacccgc ccacttgacc taacccacat aatattaaca cttttgtttt acttttattc 960 tccaaaatta ttttcttggt ttcccattct ttctcctttg cttttttttt cttcttctca 1020 atttcagcct ttttcttcct ttttttagta aacctcagtc aaataggaat tagattgtga 1080 ttaaaatatt attagaagga tgcagggttg tacaaagaga gtttattaag agataatcta 1140 taaaaaaaaa aaagtcagat aatgcatatt cagattcaga gatcattaaa tgatgacttt 1200 tttcgtaata ggttttcttt aaatcctttc gccttcatac gacgactctc gataataaca 1260 tcgtttaaag ctaataatgc taatgaacaa taatcaaaat aaaaaagaat tcggatacaa 1320 gagaaaatga tttagtgaga gaaaaaattg agatattcct tattcctaac taaacgaagg 1380 aagaagaggc taaaattgag attcagttaa aaaaaaaaaa caaagaaaaa cgcaatggag 1440 atgagagaaa gtaattttga aaaataaaaa taaattaaga gggtaaatat tttattttta 1500 gcgagttggg ttaagtggtg ccggtcatta aatggatata tgtttatttc ttaaaatttt 1560 agttagaaat acaaatttca aatcaacaaa ttttaatgaa aaaataatta aataggttga 1620 gtggctttct atgcaaagat ctcatagttg agtgattttt gagtagaaaa tcatagttaa 1680 gtgagtttct gtgaaaaaaa attgatagtt gagtgactat caaagatatt aactctagac 1740 ttgtcatatt cgtatactta catacgaaat atacaaacct ctgcctccat gacaagcaaa 1800 aaactataac tatgaaacaa tattttcgaa atcatagcta taaagtctta ttatatctaa 1860 tatctttact atttttaaaa atttcacata attttaatac ataaataatt tacttttaac 1920 taacgaaaaa ggacattttt atgtcacctg agagcccatc ggtagattca tcacattttt 1980 tcgtttcttg taataaactg tacacatata aggagaaatt aaattagaga ttatttttcc 2040 attttgagga gattaataaa tttaaaatgt aacttaacat gtaaactgct ataaaggtaa 2100 caaaacacgt aaactgctat aaaggtaatt ctatttaaaa gataaataaa tgcttaaaag 2160 aagtgccaaa aaaacacaaa caaacaaatg aaactaaacc tacttcaagg gaagttcttg 2220 tagtataaaa .ataaataaag tcaacttatt cacgacattt ctttttggtt ttcttttggc 2280 tacgtattca tatttaagtc tgactaattt agattctcgc tatatataaa agattcaggg 2340 gtggctcaac gcaattggag gcctagagca aaatttcaat tcgcggccta atatattata 2400 tactttatat acctatttat tcaaaattta ttttttttac actatttaga tggaaattat 2460 tagtacttaa tattgttttt tcagttatta gttttaggta aaattttatt aatacaacat 2520 tgaaaaacat cctttaagtg agacaattat tatatgtatt gttaacatag tgctataagt 2580 aataagtaaa taaatattaa ataaaaataa gagtaagaac catagaattt gacacaagaa 2640 gttgatgact tggtatacct cattttaaca tgcttgtact ttagtaatgc ttgaatctaa 2700 aatttaaaaa gaaataaaaa agaatttgta atccactttt tccaacactt ttcactgtta 2760 attcttattt ttaacatagt acaaaaaata ttaaaatgga taaaataatt tattttataa 2820 aagattatat atatattttt ttatcatata taactaattt ttctataaaa atttaaacac 2880 ataatttaat tttaaaaaaa atttggggct ttggggccta agacaaaggc cttaaaggac 2940 aaaacataga gccgcccctg aaaagatctc attcgaaaga aaatatgcat taccaatgat 3000 ttttcgtacc cagagctcaa aatcaaaatt gtactgttat ttttttaaaa aatttcatct 3060 cagactaaat ggaatttttt tctttggtta acctgtttga tcaatctttt ggaatcagtt 3120 aattttgaaa aataaattaa tgagaaataa tttgtatttg tccagcttat ttaagaatta 3180 tttttgagca acaatttata tttagtcacg cttttaagtg tattttttaa aataaaatta 3240 aggtattatt tgaaaaaatt acttttaaaa aaattgaatt aaattctgtt actcttatta 3300 tatactccta tataatttga ttgccaaaaa tatcaaacgt ttaatatttg aagttgatgt 3360 gagggattac ttcttgatta aattgtacta caatgtaata ttatcaaatt aaagctt 3417 <210> 22 <211> 1155 <212> ADN <213> Haematococcus pluvialis <220> <221> CDS <222> (6).. (995) <223> <400> 22 gaagc atg cag cta gca gcg acá gta atg ttg gag cag ctt acc gga age 50 Met. Gln Leu Ala Ala Thr Val Met Leu Glu Gln Leu Thr Gly Ser 1 5 10 15 gct gag gca ctc aag gag aag gag aag gag gtt gca ggc age tet gac 98 Ala Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser Asp 20 25 30 gtg ttg cgt acá tgg gcg acc cag tac teg ctt ccg tea gag gag tea 146 Val Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu Ser 35 40 45 gac gcg gcc cgc ccg gga ctg aag aat gcc tac aag cea cea ect tcc 194 Asp Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro Ser 50 55 60 gac ac aag ggc atc acá atg gcg cta gct gtc atc ggc tcc tgg gcc 242 Asp Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Ala Val lie Gly Ser Trp Ala 65 70 75 gca gtg ttc ctc cac gcc att ttt caa atc aag ctt ccg acc tcc ttg 290 Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser Leu 80 85 90 95 gac cag ctg cac tgg ctg ecc gtg tea gat gcc acá gct cag ctg gtt 338 Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln Leu Val 100 105 110 age ggc age age age ctg ctg cac atc gtc gta gta ttc ttt gtc ctg 386 Ser Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Val Val Val Phe Phe Val Leu 115 120 125 gag ttc ctg tac acá ggc ctt ttt atc acc acg cat gat gct atg cat 434 Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met His 130 135 140 ggc acc atc gcc atg aga aac agg cag ctt aat gac ttc ttg ggc aga 482 Gly Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu Gly Arg 145 150 155 gta tgc ate tcc ttg tac gcc tgg ttt gat tac aac atg ctg cac cgc 530 Val Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His Arg 160 165 170 175 aag cat tgg gag cac cac aac cac act ggc gag gtg ggc aag gac cct 578 Lys His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp Pro 180 185 190 gac ttc cac agg gga aac cct ggc att gtg ecc tgg ttt gcc age ttc 626 Asp Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser Phe 195 200 205 atg tcc age tac atg teg atg tgg cag ttt gcg cgc etc gca tgg tgg 674 Met Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp Trp 210 215 220 acg gtg gtc atg cag ctg ctg ggt gcg cea atg gcg aac ctg ctg gtg 722 Thr Val Val Met Gln Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu Val 225 230 235 ttc atg gcg gcc gcg ecc ate ctg tcc gcc ttc cgc ttg ttc tac ttt 770 Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr Phe 240 245 250 255 ggc acg tac atg ecc cac aag cct gag cct ggc gcc gcg tea ggc tct 818 Gly Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly Ser 260 265 270 tea cea gcc gtc atg aac tgg tgg aag teg cgc act age cag gcg tcc 866 Ser Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala Ser 275 280 285 gac ctg gtc age ttt ctg acc tgc tac cac ttc gac ctg cac tgg gag 914 Asp Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp Glu 290 295 300 cac cac cgc tgg ecc ttt gcc ecc tgg tgg gag ctg ecc aac tgc cgc 962 His His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys Arg 305 310 315 ' cgc ctg tct ggc cga ggt ctg gtt cct gcc tag ctggacacac tgcagtgggc 1015 Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala 320 325 cctgctgcca gctgggcatg caggttgtgg caggactggg tgaggtgaaa agctgcaggc 1075 gctgctgccg gacacgctgc atgggctacc ctgtgtagct gcegccacta ggggaggggg 1135 tttgtagctg tcgagcttgc 1155 <210> 23 <211> 329 <212> PRT <213> Haematococcus pluvialis <400> 23 Met Gln Leu Ala Ala Thr Val Met Leu Glu Gln Leu Thr Gly Ser Ala 1 5 10 15 Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser Asp Val 20 25 30 Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu Ser Asp 35 40 45 Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro Ser Asp 50 55 60 Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Ala Val lie Gly Ser Trp Ala Ala 65 70 75 80 Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser Leu Asp 85 90 95 Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln Leu Val Ser 100 105 110 Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Val Val Val Phe Phe Val Leu Glu 115 120 125 Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met His Gly 130 135 140 Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu Gly Arg Val 145 150 155 160 Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His Arg Lys 165 170 175 His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp Pro Asp 180 185 190 Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser Phe Met 195 200 205 Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp Trp Thr 210 215 220 Val Val Met Gln Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu Val Phe 225 230 235 240 Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr Phe Gly 245 250 255 Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly Ser Ser 260 265 270 Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala Ser Asp 275 280 285 Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp Glu His 290 295 300 His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys Arg Arg 305 310 , ~ 315 320 Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala 325 <210> 24 <211> 1111 <212> ADN <213> Haematococcus pluv-ialis <220> <221> CDS <222> (4) .. (951) <223> <400> 24 tgc atg cta gag gca ctc aag gag aag gag aag gag gtt gca ggc age 48 Met Leu Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser 1 5 10 15 tet gac gtg ttg cgt acá tgg gcg acc cag tac teg ctt ceg tea gaa Ser Asp Val Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu 20 25 30 gag tea gac gcg gee cgc ceg gga ctg aag aat gee tac aag cea cea 144 Glu Ser Asp Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro 35 40 45 ect tec gac acá aag ggc ate acá atg gcg cta gct gtc ate ggc tec 192 Pro Ser Asp Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Ala Val lie Gly Ser 50 55 60 tgg gee gca gtg ttc ctc cae gee att ttt caá ate aag ctt ceg acc 240 Trp Ala Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr 65 70 75 tec ttg gac cag ctg cae tgg ctg ecc gtg tea gat gee ac gct cag 288 Ser Leu Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln 80 85 90 95 ctg gtt age ggc age age age ctg ctg cae ate gtc gta gta ttc ttt 336 Leu Val Ser Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Val Val Val Phe Phe 100 105 110 gtc ctg gag ttc ctg tac acá ggc ctt ttt ate acc acg cat gat gct 384 Val Leu Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr Hi.s Asp Ala 115 120 " 125 atg cat ggc acc ate gee atg aga aac agg cag ctt aat gac ttc ttg 432 Met His Gly Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu 130 135 140 ggc aga gta tgc ate tec ttg tac gee tgg ttt gat tac aac atg ctg 480 Gly Arg Val Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu 145 150 155 cae cgc aag cat tgg gag cae cae aac cae act ggc gag gtg ggc aag 528 His Arg Lys His Trp Glu His His Asn His T r Gly Glu Val Gly Lys 160 165 170 175 gac ect gac ttc cae agg gga aac ect ggc att gtg ecc tgg ttt gee 576 Asp Pro Asp Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala 180 185 190 age ttc atg tec age tac atg teg atg tgg cag ttt gcg cgc etc gca 624 Ser Phe Met Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala 195 200 205 tgg tgg acg gtg gtc atg cag ctg ctg ggt gcg cea atg gcg aac ctg 672 Trp Trp Thr Val Val Met Gln Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu 210 215 220 ctg gtg ttc atg gcg gee gcg ecc ate ctg tec gee ttc cgc ttg ttc 720 Leu Val Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe 225 230 235 tac ttt ggc acg tac atg ecc cae aag ect gag ect ggc gee gcg tea 768 Tyr Phe Gly Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser 240 245 250 255 ggc tet tea cea gee gtc atg aac tgg tgg aag teg cgc act age cag 816 Gly Ser Ser Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln 260 265 270 gcg tec gac ctg gtc age ttt ctg acc tgc tac cae ttc gac ctg cae 864 Ala Ser Asp Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His 275 280 285 tgg gag cae cae cgc tgg ecc ttc gee ecc tgg tgg gag ctg ecc aac 912 Trp Glu His His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn 290 295 300 tgc cgc cgc ctg tet ggc cga ggt ctg gtt ect gee tag ctggacacac 961 Cys Arg Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala 305 310 315 tgcagtgggc cctgctgcca gctgggcatg caggttgtgg caggactggg tgaggtgaaa 1021 agctgcaggc gctgctgccg gacacgttgc atgggctacc ctgtgtagct gccgccacta 1081 '3'3<39?<3<39<39 tttgtagctg tcgagcttgc 1111 <210> 25 <211> 315 <212> PRT <213> Haematococcus pluvialis <400> 25 Met Leu Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser 1 5 10 15 Asp Val Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu 20 25 30 Ser Asp Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro 35 40 45 Ser Asp Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Ala Val lie Gly Ser Trp 50 55 60 Ala Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser 65 70 75 80 Leu Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln Leu 85 90 95 Val Ser Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Val Val Val Phe Phe Val 100 105 110 Leu Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met 115 120 125 His Gly Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu Gly 130 135 140 Arg Val Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His 145 150 155 160 Arg Lys His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp 165 170 175 Pro Asp Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser 180 185 190 Phe Met Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp 195 200 205 Trp Thr Val Val Met Gln Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu 210 215 220 Val Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr 225 230 235 240 Phe Gly Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly 245 250 255 Ser Ser Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala 260 265 · 270 Ser Asp Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp 275 280 285 Glu His His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys 290 295 300 Arg Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala 305 310 315 <210> 26 <211> 1031 <212> ADN <213> Haematococcus pluvialis <220> <221> CDS <222> (6) .. (1031) <223> <400> 26 gaagc atg cag cta gca gcg acá gta atg ttg gag cag ctt acc gga agc 50 Met Gln Leu Ala Ala Thr Val Met Leu Glu Gln Leu Thr Gly Ser 1 5 10 15 gct gag gca ctc aag gag aag gag aag gag gtt gca ggc age tet gac 98 Ala Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser Asp 20 25 30 gtg ttg cgt acá tgg gcg acc cag tac teg ctt ccg tea gag gag tea 146 Val Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu Ser 35 40 45 gac gcg gcc cgc ccg gga ctg aag aat gcc tac aag cca cca cct tcc 194 Asp Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro Ser 50 55 60 gac acá aag ggc atc acá atg gcg cta gct gtc atc ggc tcc tgg gct 242 Asp Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Ala Val lie Gly Ser Trp Ala 65 70 75 gca gtg ttc ctc cac gcc att ttt caa atc aag ctt ccg acc tcc ttg 290 Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser Leu 80 85 90 95 gac cag ctg cac tgg ctg ecc gtg tea gat gcc acá gct cag ctg gtt 338 Asp Gln Leu His Tr Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln Leu Val 100 105 110 age ggc age age age ctg ctg cac atc gtc gta gta ttc ttt gtc ctg 386 Ser Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Val Val Val Phe Phe Val Leu 115 120 125 gag ttc ctg tac acá ggc ctt ttt atc acc acg cat gat get atg cat 434 Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met His 135 140 ggc acc atc gcc atg aga aac agg cag ctt aat gac ttc ttg ggc aga 482 Gly Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu Gly Arg 145 150 155 gta tgc atc tcc ttg tac gcc tgg ttt gat tac aac atg ctg cac cgc 530 Val Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His Arg 160 165 170 175 aag cat tgg gag cae cae aac cac act ggc gag gtg ggc aag gac cct 578 Lys His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp Pro 180 185 190 gac ttc cac agg gga aac cct ggc att gtg ccc tgg ttt gcc age ttc 626 Asp Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser Phe 195 200 205 atg tec age tac atg teg atg tgg cag ttt gcg cgc etc gca tgg tgg 674 Met Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp Trp 210 215 220 acg gtg gtc atg cag ctg ctg ggt gcg cea atg gcg aac ctg ctg gtg 722 Thr Val Val Met Gln Leu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu Val 225 230 235 ttc atg gcg gcc gcg ccc ate ctg tec gcc ttc cgc ttg ttc tac ttt 770 Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr Phe 240 245 250 255 ggc acg tac atg ccc cac aag cct gag cct ggc gcc gcg tea ggc tet 818 Gly Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly Ser 260 265 270 tea cea gcc gtc atg aac tgg tgg aag teg cgc act age cag gcg tec 866 Ser Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala Ser 275 280 285 gac ctg gtc age ttt ctg acc tgc tac cac ttc gac ctg cac tgg gag 914 Asp Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp Glu 290 295 300 cac cac cgc tgg ccc ttt gcc ccc tgg tgg gag ctg ccc aac tgc cgc 962 His His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys Arg 305 310 315 i cgc ctg tet ggc cga ggt ctg gtt cct gcc gag caá aaa etc ate tea 1010 Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala Glu Gln Lys Leu lie Ser 320 325 330 335 gaa gag gat ctg aat age tag 1031 Glu Glu Asp Leu Asn Ser 340 <210> 27 <211> 341 <212> PRT <213> Haentatococcus pluvialis <400> 27 Met Gln Leu Ala Ala Thr Val Met Leu Glu Gln Leu Thr Gly Ser Ala 1 , 5 10 15 Glu Ala Leu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Val Ala Gly Ser Ser Asp Val 20 25 30 Leu Arg Thr Trp Ala Thr Gln Tyr Ser Leu Pro Ser Glu Glu Ser Asp 35 40 45 Ala Ala Arg Pro Gly Leu Lys Asn Ala Tyr Lys Pro Pro Pro Ser Asp 50 55 60 Thr Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Ala Val lie Gly Ser Trp Ala Ala 65 70 75 80 Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie Lys Leu Pro Thr Ser Leu Asp 85 90 95 Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Asp Ala Thr Ala Gln Leu Val Ser 100 105 110 Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Val Val Val Phe Phe Val Leu Glu 115 120 125 Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Thr His Asp Ala Met His Gly 130 135 140 Thr lie Ala Met Arg Asn Arg Gln Leu Asn Asp Phe Leu Gly Arg Val 145 150 155 160 Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp Tyr Asn Met Leu His Arg Lys 165 170 175 His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys Asp Pro Asp 180 185 190 Phe His Arg Gly Asn Pro Gly lie Val Pro Trp Phe Ala Ser Phe Met 195 200 205 Ser Ser Tyr Met Ser Met Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala Trp Trp Thr 210 215 220 > Val Val Met Gln T.eu Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu Leu Val Phe 225 230 235 240 Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe Tyr Phe Gly 245 250 255 Thr Tyr Met Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Ala Ala Ser Gly Ser Ser 260 265 270 Pro Ala Val Met Asn Trp Trp Lys Ser Arg Thr Ser Gln Ala Ser Asp 275 280 . 285 Leu Val Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu His Trp Glu His 290 295 300 His Arg Trp Pro Phe Ala Pro Trp Trp Glu Leu Pro Asn Cys Arg Arg 305 310 315 320 Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val Pro Ala Glu Gln Lys Leu lie Ser Glu 325 330 335 Glu Asp Leu Asn Ser 340 <210> 28 <211> 777 <212> ADN <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> promotor <222> (1)..(777) <;223> <400> 28 gagctcactc actgatttcc attgcttgaa aattgatgat gaactaagat caatccatgt 60 tagtttcaaa acaacagtaa ctgtggccaa cttagttttg aaacaacact aactggtcga 120 agcaaaaaga aaaaagagtt tcatcatata tctgatttga tggactgttt ggagttagga 180 ccaaacatta tctacaaaca aagacttttc tcctaacttg tgattccttc ttaaacccra 240 ggggtaatat tctattttcc aaggatcttt agttaaaggc aaatccggga aattattgta 300 atcatttggg gaaacatata aaagatttga gttagatgga agtgacgatt aatccaaaca 360 tatatatctc tttcttctta tttcccaaat taacagacaa aagtagaata ttggctttta 420 acaccaatat aaaaacttgc ttcacaccta aacacttttg tttactttag ggtaagtgca 480 aaaagccaac caaatccacc tgcactgatt tgacgtttac aaacgccgtt aagtcgatgt 540 ccgttgattt aaacagtgtc ttgtaattaa aaaaatcagt ttacataaat ggaaaattta 600 tcacttagtt ttcatcaact tctgaactta cctttcatgg attaggcaat actttccatt 660 tttagtaact caagtggacc ctttacttct tcaactccat ctctctcttt ctatttcact 720 tctttcttct cattatatct cttgtcctct ccaccaaatc tcttcaacaa aaagctt 777 <210> 29 . <211> 22 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer_unión <222> (1)..(22) <223> <400> 29 gcaagctcga cagctacaaa ce 22 <210> 30 <211> 24 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer_unión <222> (1)..(24) <223> <400> 30 gaagcatgca gctagcagcg <210> 31 <211> 30 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer_unión <222> (1)..(30) <223> <400> 31 tgcatgctag aggcactcaa ggagaaggag <210> 32 <211> 59 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer unión <222> (1) · · (59) <223> <400> 32 ctagctattc agatcctctt ctgagatgag tttttgctcg gcaggaacca gacctcggc <210> 33 <211> 28 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer_unión <222> (1) .. (28) <223> <400> 33 gagctcactc actgatttcc attgcttg <210> 34 <211> 37 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer_unión <222> (1)..(37) <223> <400> 34 cgccgttaag tcgatgtccg ttgatttaaa cagtgtc <210> 35 <211> 34 <212> ADN <213> artificial <220> <221> primer_unión <222> (1) .. (34) <223> <400> 35 atcaacggac atcgacttaa cggcgtttgt 34 <210> 36 <211> 25 <212> ADN <213> artificial <220> <221> priraer_unión <222> (1)..(25) <223> <400> 36 taagcttttt gttgaagaga tttgg <210> 37 <211> 831 <212> ADN <213> Haematococcus pluvialis <220> <221> CDS <222> (1)..(831) <223> <400> 37 atg cea tcc gag tcg tea gac gca gct cgt cct gtg ttg aag cae gee Met Pro Ser Glu Ser Ser Asp Ala Ala Arg Pro Val Leu Lys His Ala 1 5 10 15 tat aaa cct cea gca tet gac gcc aag ggc ate act atg gcg ctg acc 96 Tyr Lys Pro Pro Ala Ser Asp Ala Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Thr 20 25 30 ate att ggc acc tgg acc gca gtg ttt tta cae gca ata ttc caá ate 144 lie lie Gly Thr Trp Thr Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie 35 40 45 agg cta ccg aca tec atg gac cag ctt cae tgg ttg cct gtg tec gaa 192 Arg Leu Pro Thr Ser Met Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Glu 50 55 60 gcc aca gcc cag ctg ttg ggc gga age age age cta ttg cae ate gcc 240 Ala Thr Ala Gln Leu Leu Gly Gly Ser Ser Ser Leu Leu His lie Ala 65 70 75 80 gca gtc ttc att gta ctt gag ttt ctg tac act ggt cta ttc ate acc 288 Ala Val Phe lie Val Leu Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr 85 90 95 acg cat gat gca atg cat ggc acc ata gct ttg agg aac agg cag ctc 336 Thr His Asp Ala Met His Gly Thr lie Ala Leu Arg Asn Arg Gln Leu 100 105 110 aat gat ctc ctt ggc aac ate tgc ata tea ctg tac gcc tgg ttt gac 384 Asn Asp Leu Leu Gly Asn lie Cy3 lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp 115 120 125 tac age atg cae tgg gag cae cae aac cat act ggc gaa gtg ggg aaa 432 Tyr Ser Met His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys 130 135 140 gac cct gac ttc cae aaa gga aat cct ggc ctt gtc ecc tgg ttc gcc 480 Asp Pro Asp Phe His Lys Gly Asn Pro Gly Leu Val Pro Trp Phe Ala 145 150 155 160 age ttc atg tec age tac atg tec ctg tgg cag ttt gcc cgg ctg gca 528 Ser Phe Met Ser Ser Tyr Met Ser Leu Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala 165 170 175 tgg tgg gca gtg gtg atg caá acg ttg ggg gcc ecc atg gcg aat ctc 576 Trp Trp Ala Val Val Met Gln Thr Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu 180 185 190 cta gtc ttc atg gct gca gcc cea ate ttg tea gca ttc cgc ctc ttc 624 Leu Val Phe- Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe 195 200 . 205 tac ttc ggc act tac ctg cea cae aag cct gag cea ggc cct gca gca 672 Tyr Phe Gly Thr Tyr Leu Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Pro Ala Ala 210 215 220 ggc tet cag gtc atg tet tgg ttc agg gcc aag aca agt gag gca tet 720 Gly Ser Gln Val Met Ser Trp Phe Arg Ala Lys Thr Ser Glu Ala Ser 225 230 235 240 gat gtg atg age ttc ctg acá tgc tac cae ttt gac ctg ttt gcc ccc 768 Asp Val Met Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu Phe Ala Pro 245 250 255 tgg tgg cag ctg ccc cae tgc cgc cgc ctg tet ggg cgt ggc ctg gtg 816 Trp Trp Gln Leu Pro His Cys Arg Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val 260 265 270 ect gcc ttg gca tga 831 Pro Ala Leu Ala 275 <210> 38 <211> 276 <212> PRT <213> Haematococcus pluvialis <400> 38 Met Pro Ser Glu Ser Ser Asp Ala Ala Arg Pro Val Leu Lys His Ala 1 5 10 15 Tyr Lys Pro Pro Ala Ser Asp Ala Lys Gly lie Thr Met Ala Leu Thr 20 25 30 lie lie Gly Thr Trp Thr Ala Val Phe Leu His Ala lie Phe Gln lie 35 40 45 Arg Leu Pro Thr Ser Met Asp Gln Leu His Trp Leu Pro Val Ser Glu 50 55 60 Ala Thr Ala Gln Leu Leu Gly Gly Ser Ser Ser Leu 'Leu His lie Ala 65 70 75 80 Ala Val Phe lie Val Leu Glu Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr 85 90 95 Thr His Asp Ala Met His Gly Thr lie Ala Leu Arg Asn Arg Gln Leu 100 105 110 Asn Asp Leu Leu Gly Asn lie Cys lie Ser Leu Tyr Ala Trp Phe Asp 115 120 125 Tyr Ser Met His Trp Glu His His Asn His Thr Gly Glu Val Gly Lys 130 135 140 Asp Pro Asp Phe His Lys Gly Asn Pro Gly Leu Val Pro Trp Phe Ala 145 150 155 160 Ser Phe Met Ser Ser Tyr Met Ser Leu Trp Gln Phe Ala Arg Leu Ala 165 170 175 Trp Trp Ala Val Val Met Gln Thr Leu Gly Ala Pro Met Ala Asn Leu 180 185 190 Leu Val Phe Met Ala Ala Ala Pro lie Leu Ser Ala Phe Arg Leu Phe 195 200 205 Tyr Phe Gly Thr Tyr Leu Pro His Lys Pro Glu Pro Gly Pro Ala Ala 210 215 220 Gly Ser Gln Val Met Ser Trp Phe Arg Ala Lys Thr Ser Glu Ala Ser 225 230 235 240 Asp Val Met Ser Phe Leu Thr Cys Tyr His Phe Asp Leu Phe Ala Pro 245 250 255 Trp Trp Gln Leu Pro His Cys Arg Arg Leu Ser Gly Arg Gly Leu Val 260 265 270 Pro Ala Leu Ala 275 <210> 39 <211> 729 <212> ADN <213> Paracoccus sp. MBIC1143 <220> <221> CDS <222> (1) .. (729) <223> <400> 39 atg age gca cat gee ctg ecc aag gca gat ctg acc gee acc age ctg 48 Met Ser Ala His Ala Leu Pro Lys Ala Asp Leu Thr Ala Thr Ser Leu 1 5 10 15 ate gtc teg ggc ggc ate ate gee gct tgg ctg gee ctg cat gtg cat 96 lie Val Ser Gly Gly lie lie Ala Ala Trp Leu Ala Leu His Val His 20 25 30 i gcg ctg tgg ttt ctg gac gca gcg gcg cat ecc ate ctg gcg ate gca 144 Ala Leu Trp Phe Leu Asp Ala Ala Ala His Pro lie Leu Ala lie Ala 35 40 45 aat ttc ctg ggg ctg acc tgg ctg teg gtc gga ttg ttc ate ate gcg 192 Asn Phe Leu Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 60 cat gac gcg atg cae ggg teg gtg gtg ceg ggg cgt ceg cgc gee aat 240 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 80 gcg gcg atg ggc cag ctt gtc ctg tgg ctg tat gee gga ttt teg tgg 288 Ala Ala Met Gly Gln Leu Val Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 cgc aag atg ate gtc aag cae atg gee cat cae cgc cat gee gga acc 336 Arg Lys Met lie Val Lys His Met Ala His His Arg His Ala Gly Thr 100 105 110 gac gac gac ccc gat ttc gac cat ggc ggc ccg gtc cgc tgg tac gcc 384 Asp Asp Asp Pro Asp Phe Asp His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Ala 115 120 125 cgc ttc ate ggc acc tat ttc ggc tgg cgc gag ggg ctg ctg ctg ccc 432 Arg Phe lie Gly Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 gtc ate gtg acg gtc tat gcg ctg ate ctt ggg gat cgc tgg atg tac 480 Val lie Val Thr Val Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr 145 150 155 150 gtg gtc ttc tgg ccg ctg ccg teg ate ctg gcg teg ate cag ctg ttc 528 Val Val Phe Trp Pro Leu Pro Ser lie Leu Ala Ser lie Gln Leu Phe 165 170 175 gtg ttc ggc acc tgg ctg ccg cae cgc ccc ggc cae gac gcg ttc ccg 576 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Ala Phe Pro 180 185 190 gac cgc cae aat gcg cgg teg teg cgg ate age gac ccc gtg teg ctg 624 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Ser Arg lie Ser Asp Pro Val Ser Leu 195 200 205 ctg acc tgc ttt cae ttt ggc ggt tat cat cae gaa cae cae ctg cae 672 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 ccg acg gtg ccg tgg tgg cgc ctg ccc age acc cgc acc aag ggg gac 720 Pro Thr Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Ser Thr Arg Thr Lys Gly Asp 225 230 235 240 acc gca tga Thr Ala <210> 40 <211> 242 <212> PRT <213> Paracoccus sp. MBIC1143 <400> 40 Met Ser Ala His Ala Leu Pro Lys Ala Asp Leu Thr Ala Thr Ser Leu 1 5 10 15 lie Val Ser Gly Gly lie lie Ala Ala Trp Leu Ala Leu His Val His 20 25 . 30 Ala Leu Trp Phe Leu Asp Ala Ala Ala His Pro lie Leu Ala lie Ala 35 40 45 Asn Phe Leu Gly Leu Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu Phe lie lie Ala 50 55 60 His Asp Ala Met His Gly Ser Val Val Pro Gly Arg Pro Arg Ala Asn 65 70 75 80 Ala Ala Met Gly Gln Leu Val Leu Trp Leu Tyr Ala Gly Phe Ser Trp 85 90 95 Arg Lys Met lie Val Lys His Met Ala His His Arg His Ala Gly Thr 100 105 110 Asp Asp Asp Pro Asp Phe Asp His Gly Gly Pro Val Arg Trp Tyr Ala 115 120 125 Arg Phe lie Gly Thr Tyr Phe Gly Trp Arg Glu Gly Leu Leu Leu Pro 130 135 140 Val lie Val Thr Val Tyr Ala Leu lie Leu Gly Asp Arg Trp Met Tyr 145 150 155 160 Val Val Phe Trp Pro Leu Pro Ser lie Leu Ala Ser lie Gln Leu Phe 165 170 175 Val Phe Gly Thr Trp Leu Pro His Arg Pro Gly His Asp Ala Phe Pro 180 185 190 Asp Arg His Asn Ala Arg Ser Ser Arg lie Ser Asp Pro Val Ser Leu 195 200 205 Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Gly Tyr His His Glu His His Leu His 210 215 220 Pro Thr Val Pro Trp Trp Arg Leu Pro Ser Thr Arg Thr Lys Gly Asp 225 230 235 240 Thr Ala <210> 41 <211> 735 * <212> AD <213> Brevundimonas aurantiaca <220> <221> CDS <222> (1)..(735) <223> <400> 41 atg acc gcc gcc gtc gcc gag cea cgc acc gtc ceg cgc cag acc tgg 48 Met Thr Ala Ala Val Ala Glu Pro Arg Thr Val Pro Arg Gln Thr Trp 1 5 10 . 15 ate ggt ctg acc ctg gcg gga atg ate gtg gcg gga tgg gcg gtt ctg 96 lie Gly Leu Thr Leu Ala Gly Met lie Val Ala Gly Trp Ala Val Leu 20 25 30 cat gtc tac ggc gtc tat ttt cae cga tgg ggg ceg ttg acc ctg gtg 144 His Val Tyr Gly Val Tyr Phe His Arg Trp Gly Pro Leu Thr Leu Val 35 40 45 ate gee ceg gcg ate gtg gcg gtc cag acc tgg ttg teg gtc ggc ctt 192 lie Ala Pro Ala lie Val Ala Val Gln Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu 50 55 60 ttc ate gtc gee cat gac gee atg tac ggc tec ctg gcg ceg gga cgg 240 Phe lie Val Ala His Asp Ala Met Tyr Gly Ser Leu Ala Pro Gly Arg 65 70 75 80 ceg cgg ctg aac gee gca gtc ggc cgg ctg acc ctg ggg etc tat gcg 288 Pro Arg Leu Asn Ala Ala Val Gly Arg Leu Thr Leu Gly Leu Tyr Ala 85 90 95 ggc ttc cgc ttc gat cgg ctg aag acg gcg cae cae gee cae cae gee 336 Gly Phe Arg Phe Asp Arg Leu Lys Thr Ala His His Ala His His Ala 100 105 110 gcg ecc ggc acg gee gac gac ceg gat ttt cae gee ceg gcg ecc cgc 384 Ala Pro Gly Thr Ala Asp Asp Pro Asp Phe His Ala Pro Ala Pro Arg 115 120 125 gee ttc ctt ecc tgg ttc ctg aac ttc ttt cgc acc tat ttc ggc tgg 432 Ala Phe Leu Pro Trp Phe Leu Asn Phe Phe Arg Thr Tyr Phe Gly Trp 130 135 140 cgc gag atg gcg gtc ctg acc gee ctg gtc ctg ate gee etc ttc ggc 480 Arg Glu Met Ala Val Leu Thr Ala Leu Val Leu lie Ala Leu Phe Gly 145 150 155 160 ctg ggg gcg cgg ceg gee aat etc ctg acc ttc tgg gee gcg ceg gee 528 Leu Gly Ala Arg Pro Ala Asn Leu Leu Thr Phe Trp Ala Ala Pro Ala 165 170 175 ctg ctt tea gcg ctt cag etc ttc acc ttc ggc acc tgg ctg ceg cae 576 Leu Leu Ser Ala Leu Gln Leu Phe Thr Phe Gly Thr Trp Leu Pro His 180 185 > 190 cgc cae acc gac cag ceg ttc gee gac gcg cae cae gee cgc age age 624 Arg His Thr Asp Gln Pro Phe Ala Asp Ala His His Ala Arg Ser Ser 195 200 205 ggc tac ggc ecc gtg ctt tec ctg etc acc tgt ttc cae ttc ggc cgc 672 Gly Tyr Gly Pro Val Leu Ser Leu Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Arg 210 215 220 cae cae gaa cae cat ctg age ecc tgg cgg ecc tgg tgg cgt ctg tgg 720 His His Glu His His Leu Ser Pro Trp Arg Pro Trp Trp Arg Leu Trp 225 230 235 · 240 cgc ggc gag tet tga 735 Arg Gly Glu Ser <210> 42 <211> 244 <212> PRT <213> Brevundimonas aurantiaca <400> 42 Met Thr Ala Ala Val Ala Glu Pro Arg Thr Val Pro Arg Gln Thr Trp 1 5 10 15 lie Gly Leu Thr Leu Ala Gly Met lie Val Ala Gly Trp Ala Val Leu 20 25 30 His Val Tyr Gly Val Tyr Phe His Arg Trp Gly Pro Leu Thr Leu Val 35 40 45 lie Ala Pro Ala lie Val Ala Val Gln Thr Trp Leu Ser Val Gly Leu 50 55 60 Phe lie Val Ala His Asp Ala Met Tyr Gly Ser Leu Ala Pro Gly Arg 65 70 75 80 Pro Arg Leu Asn Ala Ala Val Gly Arg Leu Thr Leu Gly Leu Tyr Ala 85 90 95 Gly Phe Arg Phe Asp Arg Leu Lys Thr Ala His His Ala His His Ala 100 105 110 Ala Pro Gly Thr Ala Asp Asp Pro Asp Phe His Ala Pro Ala Pro Arg 115 120 125 Ala Phe Leu Pro Trp Phe Leu Asn Phe Phe Arg Thr Tyr Phe Gly Trp 130 ¦ 135 140 Arg Glu Met Ala Val Leu Thr Ala Leu Val Leu lie Ala Leu Phe Gly 145 150 155 160 Leu Gly Ala Arg Pro Ala Asn Leu Leu Thr Phe Trp Ala Ala Pro Ala 165 170 175 Leu Leu Ser Ala Leu Gln Leu Phe Thr Phe Gly Thr Trp Leu Pro His 180 185 190 Arg His Thr Asp Gln Pro Phe Ala Asp Ala His His Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Gly Tyr Gly Pro Val Leu Ser Leu Leu Thr Cys Phe His Phe Gly Arg 210 215 220 His His Glu His His Leu Ser Pro Trp Arg Pro Trp Trp Arg Leu Trp 225 230 235 240 Arg Gly Glu Ser <210> 43 <211> 690 <212> ADN <213> Nodularia spumigena NSOR10 <220> <221> CDS <222> (1) .. (690) <223> <400> 43 atg gcg ate gcc att att agt ata tgg gct ate age cta ggt ttg tta 48 Met Ala lie Ala lie lie Ser lie Trp Ala lie Ser Leu Gly Leu Leu 1 5 10 15 ctt tat att gat ata tcc caá ttc aag ttt tgg atg ttg tta ccg ctc 96 Leu Tyr lie Asp lie Ser Gln Phe Lys Phe Trp Met Leu Leu Pro Leu 20 25 30 ata ttt tgg ca acá ttt tta tat acg gga tta ttt att acá gct cat 144 lie Phe Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His 35 40 45 gat gcc atg cat ggg gta gtt ttt ecc aaa aat ecc aaa ate aac cat 192 Asp Ala Met His Gly Val Val Phe Pro Lys Asn Pro Lys lie Asn His 50 55 60 ttc att ggc tea ttg tgc ctg ttt ctt tat ggt ctt tta ect tat caá 240 Phe lie Gly Ser Leu Cys Leu Phe Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Gln 65 70 75 80 aaa ctt tta aaa aag cat tgg cta cat cae cat aat cea gcc agt gaa 288 Lys Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His His Asn Pro Ala Ser Glu 85 90 95 acá gat cea gat ttt cae aac ggg aag cag aaa aac ttt ttt gct tgg 336 Thr Asp Pro Asp Phe His Asn Gly Lys Gln Lys Asn Phe Phe Ala Trp 100 105 110 tat tta tat ttt atg aag cgt tac tgg agt tgg tta caá att ate acá 384 Tyr Leu Tyr Phe Met Lys Arg Tyr Trp Ser Trp Leu Gln lie lie Thr 115 120 125 tta atg att att tat aac tta cta aaa tat ata tgg cat ttt cea gag 432 Leu Met lie lie Tyr Asn Leu Leu Lys Tyr lie Trp His Phe Pro Glu 130 135 140 gat aat atg act tat ttt tgg gta gtt ecc tea att tta agt tet tta 48.0 Asp Asn Met Thr Tyr Phe Trp Val Val Pro Ser lie Leu Ser Ser Leu 145 150 155 160 caá tta ttt tat ttt gga act ttt cta ecc cae agt gag ect gta gaa 528 Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser Glu Pro Val Glu 165 170 ¦ 175 ggt tat aaa gag ect cat cgt tcc caá act att age cgt ecc att tgg 576 Gly Tyr Lys Glu Pro His Arg Ser Gln Thr lie Ser Arg Pro lie Trp 180 185 190 tgg tea ttt ata act tgt tac cat ttt ggt tat cat tac gaa cat cat 624 Trp Ser Phe lie Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Tyr Glu His His 195 200 205 gaa tac ccc cat gtt cct tgg tgg caa tta cca gaa att tat aaa atg 672 Glu Tyr Pro His Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Glu lie Tyr Lys Met 210 215 220 tct aaa tea aat ttg tga 690 Ser Lys Ser Asn Leu 225 <210> 44 <211> 229 <212> PRT <213> Nodularia spumigena NSOR10 <400> 44 Met Ala lie Ala lie lie Ser lie Trp Ala lie Ser Leu Gly Leu Leu 1 5 10 15 Leu Tyr lie Asp lie Ser Gln Phe Lys Phe Trp Met Leu Leu Pro Leu 20 25 30 lie Phe Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His 35 40 45 Asp Ala Met His Gly Val Val Phe Pro Lys Asn Pro Lys lie Asn His 50 55 60 Phe lie Gly Ser Leu Cys Leu Phe Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Gln 65 70 75 80 Lys Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His His Asn Pro Ala Ser Glu 85 90 95 Thr Asp Pro Asp Phe His Asn Gly Lys Gln Lys Asn Phe Phe Ala Trp 100 ' 105 ^ 110 Tyr Leu Tyr Phe Met Lys Arg Tyr Trp Ser Trp Leu Gln lie lie Thr 115 120 125 Leu Met lie lie Tyr Asn Leu Leu Lys Tyr lie Trp His Phe Pro Glu 130 135 140 Asp Asn Met Thr Tyr Phe Trp Val Val Pro Ser lie Leu Ser Ser Leu 145 150 155 160 Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser Glu Pro Val Glu 165 170 ¦ 175 Gly Tyr Lys Glu Pro His Arg Ser Gln Thr lie Ser Arg Pro lie Trp 180 185 190 Trp Ser Phe lie Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Tyr Glu His His 195 200 205 Glu Tyr Pro His Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Glu lie Tyr Lys Met 210 215 220 Lys Ser Asn Leu <210> 45 <211> 789 <212> ADN <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <220> <221> CDS <222> (1)..{789) <223> <400> 45 ttg aat ttt tgt gat aaa cca gtt age tat tat gtt gca ata gag caa 48 Leu Asn Phe Cys Asp Lys Pro Val Ser Tyr Tyr Val Ala lie Glu Gln 1 5 10 15 tta agt gct aaa gaa gat act gtt tgg ggg ctg gtg att gtc ata gta 96 Leu Ser Ala Lys Glu Asp Thr Val Trp Gly Leu Val lie Val lie Val 20 25 30 att att agt ctt tgg gta gct agt ttg gct ttt tta cta gct att aat 144 lie lie Ser Leu Trp Val Ala Ser Leu Ala Phe Leu Leu Ala lie Asn 35 40 45 tat gcc aaa gtc cca att tgg ttg ata cct att gca ata gtt tgg caa 192 Tyr Ala Lys Val Pro lie Trp Leu lie Pro lie Ala lie Val Trp Gln 50 55 60 atg ttc ctt tat acá ggg cta ttt att act gca cat gat gct atg cat 240 Met Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His Asp Ala Met .His 65 70 75 80 ggg tea gtt tat cgt aaa aat ecc aaa att aat aat ttt ate ggt tea 288 Gly Ser Val Tyr Arg Lys Asn Pro Lys lie Asn Asn Phe lie Gly Ser 85 90 95 cta gct gta gcg ctt tac gct gtg ttt cca tat caa cag atg tta aag 336 Leu Ala Val Ala Leu Tyr Ala Val Phe Pro Tyr Gln Gln Met Leu Lys 100 105 110 aat cat tgc tta cat cat cgt cat cct gct age gaa gtt gac cca gat 384 Asn His Cys Leu His His Arg His Pro Ala Ser Glu Val Asp Pro Asp 115 120 125 ttt cat gat ggt aag aga acá aac gct att ttc tgg tat etc cat ttc 432 Phe His Asp Gly Lys Arg Thr Asn Ala lie Phe Trp Tyr Leu His Phe 130 135 140 atg ata gaa tac tec agt tgg caa cag tta ata gta cta act ate cta 480 Met lie Glu Tyr Ser Ser Trp Gln Gln Leu lie Val Leu Thr lie Leu 145 150 155 160 ttt aat tta gct aaa tac gtt ttg cae ate cat caá ata aat ctc atc 528 Phe Asn Leu Ala Lys Tyr Val Leu His lie His Gln lie Asn Leu lie 165 170 175 tta ttt tgg agt att cct cea att tta agt tec att caá ctg ttt tat 576 Leu Phe Trp Ser lie Pro Pro lie Leu Ser Ser lie Gln Leu Phe Tyr 180 185 190 ttc gga acá ttt ttg cct cat cga gaa ecc aag aaa gga tat gtt tat 624 Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Arg Glu Pro Lys Lys Gly Tyr Val Tyr 195 200 205 ecc cat tgc age caá acá ata aaa ttg cea act ttt ttg tea ttt atc 672 Pro His Cys Ser Gln Thr lie Lys Leu Pro Thr Phe Leu Ser Phe lie 210 215 220 gct tgc tac cae ttt ggt tat cat gaa gaa cat cat gag tat ecc cat 720 Ala Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His His Glu Tyr Pro His 225 230 235 240 gta cct tgg tgg caá ctt cea tet gta tat aag cag aga gta ttc aac 768 Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Ser Val Tyr Lys Gln Arg Val Phe Asn 245 250 255 aat tea gta acc aat teg taa 789 Asn Ser Val Thr Asn Ser 260 <210> 46 <211> 262 <212> PRT <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <400> 46 Leu Asn Phe Cys Asp Lys Pro Val Ser Tyr Tyr Val Ala lie Glu Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Lys Glu Asp Thr Val Trp Gly Leu Val lie Val lie Val 20 25 30 lie lie Ser Leu Trp Val Ala Ser Leu Ala Phe Leu Leu Ala lie Asn 35 40 45 Tyr Ala Lys Val Pro lie Trp Leu lie Pro lie Ala lie Val Trp Gln 50 55 60 Met Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His Asp Ala Met His 65 70 75 80 Gly Ser Val Tyr Arg Lys Asn Pro Lys lie Asn Asn Phe lie Gly Ser 85 90 95 Leu Ala Val Ala Leu Tyr Ala Val Phe Pro Tyr Gln Gln Met Leu Lys 100 105 110 Asn His Cys Leu His His Arg His Pro Ala Ser Glu Val Asp Pro Asp 115 120 125 Phe His Asp Gly Lys Arg Thr Asn Ala lie Phe Trp Tyr Leu His Phe 130 135 140 Met lie Glu Tyr Ser Ser Trp Gln Gln Leu lie Val Leu Thr lie Leu 145 150 155 160 Phe Asn Leu Ala Lys Tyr Val Leu His lie His Gln lie Asn Leu lie 165 170 175 Leu Phe Trp Ser lie Pro Pro lie Leu Ser Ser lie Gln Leu Phe Tyr 180 185 190 Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Arg Glu Pro Lys Lys Gly Tyr Val Tyr 195 200 205 Pro His Cys Ser Gln Thr lie Lys Leu Pro Thr Phe Leu Ser Phe lie 210 215 220 Ala Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His His Glu Tyr Pro His 225 230 235 240 Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Ser Val Tyr Lys Gln Arg Val Phe Asn 245 250 255 Asn Ser Val Thr Asn Ser 260 <210> 47 <211> 762 <212> ADN <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 > <220> <221> CDS <222> (1) .. (762) <223> <400> 47 gtg ate cag tta gaa caá cea etc agt cat caá gca aaa ctg act cea 48 Val lie Gln Leu Glu Gln Pro Leu Ser His Gln Ala Lys Leu Thr Pro 1 5 10 15 gta ctg aga agt aaa tct cag ttt aag ggg ctt ttc att gct att gtc 96 Val Leu Arg Ser Lys Ser Gln Phe Lys Gly Leu Phe lie Ala lie Val 20 25 30 att gtt age gca tgg gtc att age ctg agt tta tta ctt tec ctt gac 144 lie Val Ser Ala Trp Val lie Ser Leu Ser Leu Leu Leu Ser Leu Asp 35 40 45 ate tea aag cta aaa ttt tgg atg tta ttg ect gtt ata cta tgg caá 192 lie Ser Lys Leu Lys Phe Trp Met Leu Leu Pro Val lie Leu Trp Gln 50 55 60 acá ttt tta tat acg gga tta ttt att acá tct cat gat gcc atg cat Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ser His Asp Ala Met His 65 70 75 80 ggc gta gta ttt ccc caá' aac acc aag att aat cat ttg att gga acá Gly Val Val Phe Pro Gln Asn Thr Lys lie Asn His Leu lie Gly Thr 85 90 95 ttg acc cta tcc ctt tat ggt ctt tta cea tat caá aaa cta ttg aaa Leu Thr Leu Ser Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Gln Lys Leu Leu Lys 100 105 110 aaa cat tgg tta cae cae cae aat cea gca age tea ata gac ceg gat Lys His Trp Leu His His His Asn Pro Ala Ser Ser lie Asp Pro Asp 115 120 125 ttt cae aat ggt aaa cae caá agt ttc ttt gct tgg tat ttt cat ttt Phe His Asn Gly Lys His Gln Ser Phe Phe Ala Trp Tyr Phe His Phe 130 135 140 atg aaa ggt tac tgg agt tgg ggg caá ata att gcg ttg act att att Met Lys Gly Tyr Trp Ser Trp Gly Gln lie lie Ala Leu Thr lie lie 145 150 155 160 tat aac ttt gct aaa tac ata etc cat ate cea agt gat aat cta act Tyr Asn Phe Ala Lys Tyr lie Leu His lie Pro Ser Asp Asn Leu Thr 165 170 175 tac ttt tgg gtg cta ccc teg ctt tta agt tea tta caá tta ttc tat Tyr Phe Trp Val Leu Pro Ser Leu Leu Ser Ser Leu Gln Leu Phe Tyr 180 185 190 ttt ggt act ttt tta ccc cat agt gaa cea ata ggg ggt tat gtt cag Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser Glu Pro lie Gly Gly Tyr Val Gln 195 200 205 ect cat tgt gcc caá acá att age egt ect att tgg tgg tea ttt ate Pro His Cys Ala Gln Thr lie Ser Arg Pro lie Trp Trp Ser Phe lie 210 215 220 acg tgc tat cat ttt ggc tac cae gag gaa cat cae gaa tat ect cat Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His His Glu Tyr Pro His 225 230 235 240 att tct tgg tgg cag tta cea gaa att tac aaa gca aaa tag lie Ser Trp Trp Gln Leu Pro Glu lie Tyr Lys Ala Lys 245 250 <210> 48 <211> 253 <212> PRT <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <400> 48 Val lie Gln Leu Glu Gln Pro Leu Ser His Gln Ala Lys Leu Thr Pro 1 5 10 15 Val Leu Arg Ser Lys Ser Gln Phe Lys Gly Leu Phe lie Ala lie Val 20 25 30 lie Val Ser Ala Trp Val lie Ser Leu Ser Leu Leu Leu Ser Leu Asp 35 40 45 lie Ser Lys Leu Lys Phe Trp Met Leu Leu Pro Val lie Leu Trp Gln 50 55 60 Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ser His Asp Ala Met His 65 70 75 80 Gly Val Val Phe Pro Gln Asn Thr Lys lie Asn His Leu lie Gly Thr 85 90 95 Leu Thr Leu Ser Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Gln Lys Leu Leu Lys 100 105 110 Lys His Trp Leu His His His Asn Pro Ala Ser Ser lie Asp Pro Asp 115 120 125 Phe His Asn Gly Lys His Gln Ser Phe Phe Ala Trp Tyr Phe His Phe 130 135 140 Met Lys Gly Tyr Trp Ser Trp Gly Gln lie lie Ala Leu Thr lie lie 145 150 155 160 Tyr Asn Phe Ala Lys Tyr lie Leu His lie Pro Ser Asp Asn Leu Thr 165 170 175 Tyr Phe Trp Val Leu Pro Ser Leu Leu Ser Ser Leu Gln Leu Phe Tyr 180 185 190 Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser Glu Pro lie Gly Gly Tyr Val Gln 195 200 205 Pro His Cys Ala Gln Thr lie Ser Arg Pro lie Trp Trp Ser Phe lie 210 215 220 Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His His Glu Tyr Pro His 225 230 235 240 lie Ser Trp Trp Gln Leu Pro G1TI lie Tyr Lys Ala Lys 245 250 <210> 49 <211> 1536 <212> ADN <213> Deinococcus radiodurans Rl <220> <221> CDS <222> (1).. (1536) <223> <400> 49 atg ccg gat tac gac ctg ate gtc atg ggc gcg ggc cac aac gcg ctg 48 Met Pro Asp Tyr Asp Leu lie Val Met Gly Ala Gly His Asn Ala Leu 1 5 10 15 gtg act gct gcc tac gcc gcc cgg gcg ggc ctg aaa gtc ggc gtg ttc 96 Val Thr Ala Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Gly Leu Lys Val Gly Val Phe 20 25 30 gag cgg cgg cac ctc gtc ggc ggg gcg gtc age acc gag gag gtc gtg 144 Glu Arg Arg His Leu Val Gly Gly Ala Val Ser Thr Glu Glu Val Val 35 40 45 ecc ggt tac cgc ttc gac tac ggc ggc age gcc cac ate ctg att cgg 192 Pro Gly Tyr Arg Phe Asp Tyr Gly Gly Ser Ala His lie Leu lie Arg 50 55 60 atg acg ecc ate gtg cgc gaa ctc gaa ctc acg cgg cac ggg ctg cat 240 Met Thr Pro lie Val Arg Glu Leu Glu Leu Thr Arg His Gly Leu His 65 70 75 80 tac ctc gaa gtg gac ect atg ttt cac gct tec gac ggt gaa acg ecc 288 Tyr Leu Glu Val Asp Pro Met Phe His Ala Ser Asp Gly Glu Thr Pro 85 90 95 tgg ttc att cac cgc gac gcc ggg cgg acc ate cgc gaa ctg gac gaa 336 Trp Phe lie His Arg Asp Ala Gly Arg Thr lie Arg Glu Leu Asp Glu 100 105 110 aag ttt ecc ggg cag ggc gac gcc tac ggg cgc ttt ctc gac gat tgg 384 Lys Phe Pro Gly Gln Gly Asp Ala Tyr Gly Arg Phe Leu Asp Asp Trp 115 120 125 acá ecc ttc gcg cgc gcc gtg gcc gac ctg ttc aac teg gcg ccg ggg 432 Thr Pro Phe Ala Arg Ala Val Ala Asp Leu Phe Asn Ser Ala Pro Gly 130 135 140 ccg ctc gac ctg ggc aaa atg gtg atg cgc age ggc cag ggc aag gac 480 Pro Leu Asp Leu Gly Lys Met Val Met Arg Ser Gly Gln Gly Lys Asp 145 150 155 160 tgg aac gag cag ctc ccg cgc ate ctg cgg ecc tac ggc gac gtg gcg 528 Trp Asn Glu Gln Leu Pro Arg lie Leu Arg Pro Tyr Gly Asp Val Ala 165 170 175 cgc gag tac ttc age gag gag cgc gtg cgg gct ecc ctg acc tgg atg 576 Arg Glu Tyr Phe Ser Glu Glu Arg Val Arg Ala Pro Leu Thr Trp Met 180 185 190 gcg gcc cag age ggc ecc cea ecc teg gac ccg ctg age gcg ecc ttt 624 Ala Ala Gln Ser Gly Pro Pro Pro Ser Asp Pro Leu Ser Ala Pro Phe 195 200 205 ttg ctg tgg cac ccg ctc tac cac gaa ggc ggc gtg gcg cgg ecc aaa 672 Leu Leu Trp His Pro Leu Tyr His Glu Gly Gly Val Ala Arg Pro Lys 210 215 220 ggc ggc age ggc ggc ctg acc aaa gcc ctg cgc cgg gcc acc gag gcc 720 Gly Gly Ser Gly Gly Leu Thr Lys Ala Leu Arg Arg Ala Thr Glu Ala 225 230 235 240 gaa ggc ggc gag gtc ttc acc gac gcg ceg gtc aag gaa att ctg gtc 768 Glu Gly Gly Glu Val Phe Thr Asp Ala Pro Val Lys Glu lie Leu Val 245 250 255 aag gac ggc aag gcg cag ggc ate cgg ctg gaa age ggc gag acg tac 816 Lys Asp Gly Lys Ala Gln Gly lie Arg Leu Glu Ser Gly Glu Thr Tyr 260 265 270 acc gcc cgc gcc gtc gtg teg ggc gtc cae ate ctg acc act gcg aat 864 Thr Ala Arg Ala Val Val Ser Gly Val His lie Leu Thr Thr Ala Asn 275 280 285 gcc ctg ecc gcc gaa tat gtc ect age gcc gcc agg aat gtg cgc gtg 912 Ala Leu Pro Ala Glu Tyr Val Pro Ser Ala Ala Arg Asn Val Arg Val 290 295 300 ggc aac ggc ttc ggc atg att ttg cgc etc gcc etc agt gaa aaa gtc 960 Gly Asn Gly Phe Gly Met lie Leu Arg Leu Ala Leu Ser Glu Lys Val 305 310 315 320 aaa tac cgt cae cae acc gag ecc gac tea cgc ate ggc ctg gga ttg 1008 Lys Tyr Arg His His Thr Glu Pro Asp Ser Arg lie Gly Leu Gly Leu 325 330 335 ctg ate aaa aac gag cgg caá ate atg cag ggc tac ggc gaa tac etc 1056 Leu lie Lys Asn Glu Arg Gln lie Met Gln Gly Tyr Gly Glu Tyr Leu 340 345 350 gcc ggg cag ecc acc acc gac ceg ecc etc gtc gcc atg age ttc age 1104 Ala Gly Gln Pro Thr Thr Asp Pro Pro Leu Val Ala Met Ser Phe Ser 355 360 365 gcg gtg gac gac teg etc gcc cea ceg aac ggc gac gtg ttg tgg ctg 1152 Ala Val Asp Asp Ser Leu Ala Pro Pro Asn Gly Asp Val Leu Trp Leu 370 375 380 tgg gcg cag tac tac ecc ttc gag etc gcc acc ggg age tgg gaa acg 120.0 Trp Ala Gln Tyr Tyr Pro Phe Glu Leu Ala Thr Gly Ser Trp Glu Thr 385 390 395 400 cgc acc gcc gaa gcg cgg gag aac ate ctg cgg gcc ttt gag cae tac 1248 Arg Thr Ala Glu Ala Arg Glu Asn lie Leu Arg Ala Phe Glu His Tyr 405 410 · 415 gcg ceg ggc acc cgc gac acg att gtg ggc gaa etc gtg cag acg ceg 1296 Ala Pro Gly Thr Arg Asp Thr lie Val Gly Glu Leu Val Gln Thr Pro 420 425 430 cag tgg ctg gaa acc aac etc ggc ctg cae cgg ggc aac gtg atg cae 1344 Gln Trp Leu Glu Thr Asn Leu Gly Leu His Arg Gly Asn Val Met His 435 440 445 ctg gaa atg tec ttc gac cag atg ttc tec ttc cgc ccc tgg ctg aaa 1392 Leu Glu Met Ser Phe Asp Gln Met Phe Ser Phe Arg Pro Trp Leu Lys 450 455 460 gcg age cag tac cgc tgg ceg ggc gtg cag ggg ctg tac etc acc ggc 1440 Ala Ser Gln Tyr Arg Trp Pro Gly Val Gln Gly Leu Tyr Leu Thr Gly 465 470 475 480 gcc age acc cae ccc ggc gga ggc ate atg ggc gcc tcg gga cgc aac 1488 Ala Ser Thr His Pro Gly Gly Gly lie Met Gly Ala Ser Gly Arg Asn 485 490 495 gcg gcg cgg gtc ate gtg aag gac ctg acg cgg agg cgc tgg aaa tga 1536 Ala Ala Arg Val lie Val Lys Asp Leu Thr Arg Arg Arg Trp Lys 500 505 510 <210> 50 <211> 511 <212> PRT <213> Deinococcus radiodurans Rl <400> 50 Met Pro Asp Tyr Asp Leu lie Val Met Gly Ala Gly His Asn Ala Leu 1 ' 5 10 15 Val Thr Ala Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Gly Leu Lys Val Gly Val Phe 20 25 30 Glu Arg Arg His Leu Val Gly Gly Ala Val Ser Thr Glu Glu Val Val 35 40 45 Pro Gly Tyr Arg Phe Asp Tyr Gly Gly Ser Ala His lie Leu lie Arg 50 55 60 Met Thr Pro lie Val Arg Glu Leu Glu Leu Thr Arg His Gly Leu His 65 70 75 80 Tyr Leu Glu Val Asp Pro Met Phe His Ala Ser Asp Gly Glu Thr Pro 85 90 95 Trp Phe lie His Arg Asp Ala Gly Arg Thr lie Arg Glu Leu Asp Glu 100 105 110 Lys Phe Pro Gly Gln Gly Asp Ala Tyr Gly Arg Phe Leu Asp Asp Trp 115 120 125 Thr Pro Phe Ala Arg Ala Val Ala Asp Leu Phe Asn Ser Ala Pro Gly 130 135 140 Pro Leu Asp Leu Gly Lys Met Val Met Arg Ser Gly Gln Gly Lys Asp 145 150 155 160 Trp Asn Glu Gln Leu Pro Arg lie Leu Arg Pro Tyr Gly Asp Val Ala 165 170 175 Arg Glu Tyr Phe Ser Glu Glu Arg Val Arg Ala Pro Leu Thr Trp Met 180 185 190 Ala Ala Gln Ser Gly Pro Pro Pro Ser Asp Pro Leu Ser Ala Pro Phe 195 200 205 Leu Leu Trp His Pro Leu Tyr His Glu Gly Gly Val Ala Arg Pro Lys 210 215 220 Gly Gly Ser Gly Gly Leu Thr Lys Ala Leu Arg Arg Ala Thr Glu Ala 225 230 235 240 Glu Gly Gly Glu Val Phe Thr Asp Ala Pro Val Lys Glu lie Leu Val 245 250 255 Lys Asp Gly Lys Ala Gln Gly lie Arg Leu Glu Ser Gly Glu Thr Tyr 260 265 270 Thr Ala Arg Ala Val Val Ser Gly Val His lie Leu Thr Thr Ala Asn 275 280 285 Ala Leu Pro Ala Glu Tyr Val Pro Ser Ala Ala Arg Asn Val Arg Val 290 295 300 Gly Asn Gly Phe Gly Met lie Leu Arg Leu Ala Leu Ser Glu Lys Val 305 310 315 320 Lys Tyr Arg His His Thr Glu Pro Asp Ser Arg lie Gly Leu Gly Leu 325 330 335 Leu lie Lys Asn Glu Arg Gln lie Met Gln Gly Tyr Gly Glu Tyr Leu 340 345 350 Ala Gly Gln Pro Thr Thr Asp Pro Pro Leu Val Ala Met Ser Phe Ser 355 360 365 Ala Val Asp Asp Ser Leu Ala Pro Pro Asn Gly Asp Val Leu Trp Leu 370 375 380 Trp Ala Gln Tyr Tyr Pro Phe Glu Leu Ala Thr Gly Ser Trp Glu Thr 385 390 395 400 Arg Thr Ala Glu Ala Arg Glu Asn lie Leu Arg Ala Phe Glu His Tyr 405 410 415 Ala Pro Gly Thr Arg Asp Thr lie Val Gly Glu Leu Val Gln Thr Pro 420 425 · 430 Gln Trp Leu Glu Thr Asn Leu Gly Leu His Arg Gly Asn Val Met His 435 ' 440 445 Leu Glu Met Ser Phe Asp Gln Met Phe Ser Phe Arg Pro Trp Leu Lys 450 455 460 Ala Ser Gln Tyr Arg Trp Pro Gly Val Gln Gly Leu Tyr Leu Thr Gly 465 470 475 480 Ala Ser Thr His Pro Gly Gly Gly lie Met Gly Ala Ser Gly Arg Asn 485 490 495 Ala Ala Arg Val lie Val Lys Asp Leu Thr Arg Arg Arg Trp Lys 500 505 510 <210> 51 <211> 1608 <212> ADN <213> Haematococcus pluvialis <220> <221> CDS <222> (3) .. (971) <223> <400> 51 ct acá ttt cac aag ccc gtg age ggt gca age gct ctg ecc cac ate 47 Thr Phe His Lys Pro Val Ser Gly Ala Ser Ala Leu Pro His lie 1 5 10 15 ggc cea ect ect cat etc cat cgg tea ttt gct gct acc acg atg ctg 95 Gly Pro Pro Pro His Leu His Arg Ser Phe Ala Ala Thr Thr Met Leu 20 25 30 teg aag ctg cag tea ate age gtc aag gcc cgc cgc gtt gaa cta gcc 143 Ser Lys Leu Gln Ser lie Ser Val Lys Ala Arg Arg Val Glu Leu Ala 35 40 45 cgc gac ate acg cgg ccc aaa gtc tgc ctg cat gct cag cgg tgc teg 191 Arg Asp lie Thr Arg Pro Lys Val Cys Leu His Ala Gln Arg Cys Ser 50 55 60 tta gtt cgg ctg cga gtg gca gca cea cag acá gag gag gcg ctg gga 239 Leu Val Arg Leu Arg Val Ala Ala Pro Gln Thr Glu Glu Ala Leu Gly G5 70 75 acc gtg cag gct gcc ggc gcg ggc gat gag cac age gcc gat gta gca 287 Thr Val Gln Ala Ala Gly Ala Gly Asp Glu His Ser Ala Asp Val Ala 80 85 90 95 etc cag cag ctt gac cgg gct ate gca gag cgt cgt gcc cgg cgc aaa 335 Leu Gln Gln Leu Asp Arg Ala lie Ala Glu Arg Arg Ala Arg Arg Lys 100 105 110 cgg gag cag ctg tea tac cag gct gcc gcc att gca gca tea att ggc 383 Arg Glu Gln Leu Ser Tyr Gln Ala Ala Ala lie Ala Ala Ser lie Gly 115 120 125 gtg tea ggc att gcc ate ttc gcc acc tac ctg aga ttt gcc atg cac 431 Val Ser Gly lie Ala lie Phe Ala Thr Tyr Leu Arg Phe Ala Met His 130 135 140 atg acc gtg ggc ggc gca gtg cea tgg ggt gaa gtg gct ggc act etc 479 Met Thr Val Gly Gly Ala Val Pro Trp Gly Glu Val Ala Gly Thr Leu 145 150 155 ctc ttg gtg gtt ggt ggc gcg ctc ggc atg gag atg tat gcc cgc tat 527 Leu Leu Val Val Gly Gly Ala Leu Gly Met Glu Met Tyr Ala Arg Tyr 160 165 170 175 gca cae aaa gcc ate tgg cat gag teg ect ctg ggc tgg ctg ctg cae 575 Ala His Lys Ala lie Trp His Glu Ser Pro Leu Gly Trp Leu Leu His 180 185 190 aag age cae cae acá ect cgc act gga ecc ttt gaa gcc aac gac ttg 623 Lys Ser His His Thr Pro Arg Thr Gly Pro Phe Glu Ala Asn Asp Leu 195 200 205 ttt gca ate ate aat gga ctg ecc gcc atg ctc ctg tgt acc ttt ggc 671 Phe Ala lie lie Asn Gly Leu Pro Ala Met Leu Leu Cys Thr Phe Gly 210 215 220 ttc tgg ctg ecc aac gtc ctg ggg gcg gcc tgc ttt gga gcg ggg ctg 719 Phe Trp Leu Pro Asn Val Leu Gly Ala Ala Cys Phe Gly Ala Gly Leu 225 230 235 ggc ate acg cta tac ggc atg gca tat atg ttt gta cae gat ggc ctg 767 Gly lie Thr Leu Tyr Gly Met Ala Tyr Met Phe Val His Asp Gly Leu 240 245 250 255 gtg cae agg cgc ttt ecc acc ggg ecc ate gct ggc ctg ecc tac atg 815 Val His Arg Arg Phe Pro Thr Gly Pro lie Ala Gly Leu Pro Tyr Met 260 265 270 aag cgc ctg acá gtg gcc cae cag cta cae cae age ggc aag tac ggt 863 Lys Arg Leu Thr Val Ala His Gln Leu His His Ser Gly Lys Tyr Gly 275 280 285 ggc gcg ecc tgg ggt atg ttc ttg ggt cea cag gag ctg cag cae att 911 Gly Ala Pro Trp Gly Met Phe Leu Gly Pro Gln Glu Leu Gln His lie 290 295 300 cea ggt gcg gcg gag gag gtg gag cga ctg gtc ctg gaa ctg gac tgg 959 Pro Gly Ala Ala Glu Glu Val Glu Arg Leu Val Leu Glu Leu Asp Trp 305 310 315 tec aag cgg tag ggtgcggaac caggcacgct ggtttcacac ctcatgcctg 1011 Ser Lys Arg 320 ' tgataaggtg tggctagagc gatgcgtgtg agacgggtat gtcacggtcg actggtctga 1071 tggccaatgg catcggccat gtctggtcat cacgggctgg ttgcctgggt gaaggtgatg 1131 cacatcatca tgtgcggttg gaggggctgg cacagtgtgg gctgaactgg agcagttgtc 1191 caggctggcg ttgaatcagt gagggtttgt gattggcggt tgtgaagcaa tgactccgcc 1251 catattetat ttgtgggagc tgagatgatg gcatgcttgg gatgtgcatg gatcatggta 1311 gtgcagcaaa etatatteac ctagggctgt tggtaggatc aggtgaggcc ttgcacattg 1371 catgatgtac tcgtcatggt gtgttggtga gaggatggat gtggatggat gtgtattctc agacgtagac cttgactgga ggcttgatcg agagagtggg ccgtattctt tgagagggga 1491 ggctcgtgcc agaaatggtg agtggatgac tgtgacgctg tacattgcag gcaggtgaga 1551 tgcactgtct cgattgtaaa atacattcag atgcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 1608 <210> 52 <211> 322 <212> PRT <213> Haematococcus pluvialis <400> 52 Thr Phe His Lys Pro Val Ser Gly Ala Ser Ala Leu Pro His lie Gly 1 5 10 15 Pro Pro Pro His Leu His Arg Ser Phe Ala Ala Thr Thr Met Leu Ser 20 25 30 Lys Leu Gln Ser lie Ser Val Lys Ala Arg Arg Val Glu Leu Ala Arg 35 40 45 Asp lie Thr Arg Pro Lys Val Cys Leu His Ala Gln Arg Cys Ser Leu 50 55 60 Val Arg Leu Arg Val Ala Ala Pro Gln Th-r Glu Glu Ala Leu Gly Thr 65 70 75 80 Val Gln Ala Ala Gly Ala Gly Asp Glu His Ser Ala Asp Val Ala Leu 85 90 95 Gln Gln Leu Asp Arg Ala lie Ala Glu Arg Arg Ala Arg Arg Lys Arg 100 105 110 Glu Gln Leu Ser Tyr Gln Ala Ala Ala lie Ala Ala Ser lie Gly Val 115 120 125 Ser Gly lie Ala lie Phe Ala Thr Tyr Leu Arg Phe Ala Met His Met 130 135 140 Thr Val Gly Gly Ala Val Pro Trp Gly Glu Val Ala Gly Thr Leu Leu 145 150 155 160 Leu Val Val Gly Gly Ala Leu Gly Met Glu Met Tyr Ala Arg Tyr Ala 165 170 175 His Lys Ala lie Trp His Glu Ser Pro Leu Gly Trp Leu Leu His Lys 180 185 190 Ser His His Thr Pro Arg Thr Gly Pro Phe Glu Ala Asn Asp Leu Phe 195 200 205 Ala lie lie Asn Gly Leu Pro Ala Met Leu Leu Cys Thr Phe Gly Phe 210 215 220 Trp Leu Pro Asn Val Leu Gly Ala Ala Cys Phe Gly Ala Gly Leu Gly 225 230 235 240 lie Thr Leu Tyr Gly Met Ala Tyr Met Phe Val His Asp Gly Leu Val 245 250 255 His Arg Arg Phe Pro Thr Gly Pro lie Ala Gly Leu Pro Tyr Met Lys 260 265 270 Arg Leu Thr Val Ala His Gln Leu His His Ser Gly Lys Tyr Gly Gly 275 280 285 Ala Pro Trp Gly Met Phe Leu Gly Pro Gln Glu Leu Gln His lie Pro 290 295 300 Gly Ala Ala Glu Glu Val Glu Arg Leu Val Leu Glu Leu Asp Trp Ser 305 310 315 320 Lys Arg <210> 53 <211> 1503 <212> ADN <213> Tomate <220> <221> CDS <222> (1) .. (1503) <223> <400> 53 atg gat act ttg ttg aaa acc cea aat aac ctt gaa ttt ctg aac cea 48 Met Asp Thr Leu Leu Lys Thr Pro Asn Asn Leu Glu Phe Leu Asn Pro 1 5 10 15 cat cat ggt ttt gct gtt aaa g t agt acc ttt aga tct gag aag cat 96 His His Gly Phe Ala Val Lys Ala Ser Thr Phe Arg Ser Glu Lys His 20 25 30 cat aat ttt ggt tct agg aag ttt tgt gaa act ttg ggt aga agt gtt 144 His Asn Phe Gly Ser Arg Lys Phe Cys Glu Thr Leu Gly Arg Ser Val 35 40 45 tgt gtt aag ggt agt agt agt gct ctt tta gag ctt gta ect gag acc 192 Cys Val Lys Gly Ser Ser Ser Ala Leu Leu Glu Leu Val Pro Glu Thr 50 55 60 aaa aag gag aat ctt gat ttt gag ctt ect atg tat gac ect tea aaa 240 Lys Lys Glu Asn Leu Asp Phe Glu Leu Pro Met Tyr Asp Pro Ser Lys 65 70 75 80 ggg gtt gtt gtg gat ctt gct gtg gtt ggt ggt ggc ect gca gga ctt 288 Gly Val Val Val Asp Leu Ala Val Val Gly Gly Gly Pro Ala Gly Leu 85 90 95 gct gtt gca cag caá gtt tct gaa gca gga etc tct gtt tgt tea att 336 Ala Val Ala Gln Gln Val Ser Glu Ala Gly Leu Ser Val Cys Ser lie 100 105 110 gat ccg aat cct aaa ttg ata tgg cct aat aac tat ggt gtt tgg gtg 384 Asp Pro Asn Pro lys Leu lie Trp Pro Asn Asn Tyr Gly Val Trp Val 115 120 125 gat gaa ttt gag gct atg gac ttg tta gat tgt cta gat gct acc tgg 432 Asp Glu Phe Glu Ala Met Asp Leu Leu Asp Cys Leu Asp Ala Thr Trp 130 135 140 tct ggt gca gca gtg tac att gat gat aat acg gct aaa gat ctt cat 480 Ser Gly Ala Ala Val Tyr lie Asp Asp Asn Thr Ala Lys Asp Leu His 145 150 155 160 aga cct tat gga agg gtt aac cgg aaa cag ctg aaa tcg aaa atg atg 528 Arg Pro Tyr Gly Arg Val Asn Arg Lys Gln Leu Lys Ser Lys Met Met 165 170 175 cag aaa tgt ata atg aat ggt gtt aaa ttc cae caá gee aaa gtt ata 576 Gln Lys Cys lie Met Asn Gly Val Lys Phe His Gln Ala Lys Val lie 180 185 190 aag gtg att cat gag gaa tcg aaa tec atg ttg ata tgc aat gat ggt 624 Lys Val lie His Glu Glu Ser Lys Ser Met Leu lie Cys Asn Asp Gly 195 200 205 att act att cag gca acg gtg gtg etc gat gca act ggc ttc tct aga 672 lie Thr lie Gln Ala Thr Val Val Leu Asp Ala Thr Gly Phe Ser Arg 210 215 220 tct ctt gtt cag tat gat aag cct tat aac ecc ggg tat caá gtt gct 720 Ser Leu Val Gln Tyr Asp Lys Pro Tyr Asn Pro Gly Tyr Gln Val Ala 225 230 235 240 tat ggc att ttg gct gaa gtg gaa gag cae ecc ttt gat gta aac aag 768 Tyr Gly lie Leu Ala Glu Val Glu Glu His Pro Phe Asp Val Asn Lys 245 250 i 255 atg gLL ttc atg gat tgg cga gat tct cat ttg aag aac aat act gat 816 Met Val Phe Met Asp Trp Arg Asp Ser His Leu Lys Asn Asn Thr Asp 260 265 270 etc aag gag aga aat agt aga ata cea act ttt ctt tat gca atg cea 864 Leu Lys Glu Arg Asn Ser Arg lie Pro Thr Phe Leu Tyr Ala Met Pro 275 280 285 ttt tea tec aac agg ata ttt ctt gaa gaa acá tea etc gta gct cgt 912 Phe Ser Ser Asn Arg lie Phe Leu Glu Glu Thr Ser Leu Val Ala Arg 290 295 300 cct ggc ttg cgt ata gat gat att caá gaa cga atg gtg gct cgt tta 960 Pro Gly Leu Arg lie Asp Asp lie Gln Glu Arg Met Val Ala Arg Leu 305 310 315 320 aac cat ttg ggg ata aaa gtg aag age att gaa gaa gat gaa cat tgt 1008 Asn His Leu Gly lie Lys Val Lys Ser lie Glu Glu Asp Glu His Cys 325 330 335 cta ata cca atg ggt ggt cca ctt cca gta tta cct cag aga gtc gtt 1056 Leu lie Pro Met Gly Gly Pro Leu Pro Val Leu Pro Gln Arg Val Val 340 345 350 gga atc ggt ggt aca gct ggc atg gtt cat cca tcc acc ggt tat atg 1104 Gly lie Gly Gly Thr Ala Gly Met Val His Pro Ser Thr Gly Tyr Met 355 360 365 gtg gca agg aca cta gct gcg gct cct gtt gtt gcc aat gcc ata att 1152 Val Ala Arg Thr Leu Ala Ala Ala Pro Val Val Ala Asn Ala lie lie 370 375 380 caá tac ctc ggt tct gaa aga agt cat tcg ggt aat gaa tta tcc aca 1200 Gln Tyr Leu Gly Ser Glu Arg Ser His Ser Gly Asn Glu Leu Ser Thr 385 390 395 400 gct gtt tgg aaa gat ttg tgg cct ata gag agg aga cgt caá aga gag 1248 Ala Val Trp Lys Asp Leu Trp Pro lie Glu Arg Arg Arg Gln Arg Glu 405 410 415 ttc ttc tgc ttc ggt atg gat att ctt ctg aag ctt gat tta cct gct 1236 Phe Phe Cys Phe Gly Met Asp lie Leu Leu Lys Leu Asp Leu Pro Ala 420 425 430 aca aga agg-ttc ttt gat gca ttc ttt gac tta gaa cct cgt tat tgg 1344 Thr Arg Arg Phe Phe Asp Ala Phe Phe Asp Leu Glu Pro Arg Tyr Trp 435 440 445 cat ggc ttc tta tcg tct cga ttg ttt cta cct gaa ctc ata gtt ttt 1392 His Gly Phe Leu Ser Ser Arg Leu Phe Leu Pro Glu Leu lie Val Phe 450 455 460 ggg ctg tct cta ttc tct cat gct tea aat act tct aga ttt gag ata 1440 Gly Leu Ser Leu Phe Ser His Ala Ser Asn Thr Ser Arg Phe Glu lie 465 470 475 > 480 atg aca aag gga act gtt cca tta gta aat atg atc aac aat ttg tta 1488 Met Thr Lys Gly Thr Val Pro Leu Val Asn Met lie Asn Asn Leu Leu 485 490 495 cag gat aaa gaa tga 1503 Gln Asp Lys Glu 500 <210> 54 <211> 500 <212> PRT <213> Tomate <400> 54 Met Asp Thr Leu Leu Lys Thr Pro Asn Asn Leu Glu Phe Leu Asn Pro 1 5 10 15 His His Gly Phe Ala Val Lys Ala Ser Thr Phe Arg Ser Glu Lys His 20 25 30 His Asn Phe Gly Ser Arg Lys Phe Cys Glu Thr Leu Gly Arg Ser Val 35 40 45 Cys Val Lys Gly Ser Ser Ser Ala Leu Leu Glu Leu Val Pro Glu Thr 50 55 60 Lys Lys Glu Asn Leu Asp Phe Glu Leu Pro Met Tyr Asp Pro Ser Lys 65 70 75 80 Gly Val Val Val Asp Leu Ala Val Val Gly Gly Gly Pro Ala Gly Leu 85 90 95 Ala Val Ala Gln Gln Val Ser Glu Ala Gly Leu Ser Val Cys Ser lie 100 105 110 Asp Pro Asn Pro Lys Leu lie Trp Pro Asn Asn Tyr Gly Val Trp Val 115 120 125 Asp Glu Phe Glu Ala Met Asp Leu Leu Asp Cys Leu Asp Ala Thr Trp 130 135 140 Ser Gly Ala Ala Val Tyr lie Asp Asp Asn Thr Ala Lys Asp Leu His 145 150 155 160 Arg Pro Tyr Gly Arg Val Asn Arg Lys Gln Leu Lys Ser Lys Met Met 165 170 175 Gln Lys Cys lie Met Asn Gly Val Lys Phe His Gln Ala Lys Val lie 180 185 190 Lys Val lie His Glu Glu Ser Lys Ser Met Leu lie Cys Asn Asp Gly 195 200 205 lie Thr lie Gln Ala Thr Val Val Leu Asp Ala Thr Gly Phe Ser Arg 210 215 220 i Ser Leu Val Gln Tyr Asp Lys Pro Tyr Asn Pro Gly Tyr Gln Val Ala 225 230 235 240 Tyr Gly lie Leu Ala Glu Val Glu Glu His Pro Phe Asp Val Asn Lys 245 250 255 Met Val Phe Met Asp Trp Arg Asp Ser His Leu Lys Asn Asn Thr Asp 260 265 270 Leu Lys Glu Arg Asn Ser Arg lie Pro Thr Phe Leu Tyr Ala Met Pro 275 280 . 285 Phe Ser Ser Asn Arg lie Phe Leu Glu Glu Thr Ser Leu Val Ala Arg 290 295 300 Pro Gly Leu Arg lie Asp Asp lie Gln Glu Arg Met Val Ala Arg Leu 305 310 315 320 Asn His Leu Gly lie Lys Val Lys Ser lie Glu Glu Asp Glu His Cys 325 330 335 Leu lie Pro Met Gly Gly Pro Leu Pro Val Leu Pro Gln Arg Val Val 340 345 350 Gly lie Gly Gly Thr Ala Gly Met Val His Pro Ser Thr Gly Tyr Met 355 360 365 Val Ala Arg Thr Leu Ala Ala Ala Pro Val Val Ala Asn Ala lie lie 370 375 380 Gln Tyr Leu Gly Ser Glu Arg Ser His Ser Gly Asn Glu Leu Ser Thr 385 390 395 400 Ala Val Trp Lys Asp Leu Trp Pro lie Glu Arg Arg Arg Gln Arg Glu 405 410 415 Phe Phe Cys Phe Gly Met Asp lie Leu Leu Lys Leu Asp Leu Pro Ala 420 425 430 Thr Arg Arg Phe Phe Asp Ala Phe Phe Asp Leu Glu Pro Arg Tyr Trp . 435 440 445 His Gly Phe Leu Ser Ser Arg Leu Phe Leu Pro Glu Leu lie Val Phe 450 455 460 Gly Leu Ser Leu Phe Ser His Ala Ser Asn Thr Ser Arg Phe Glu lie 465 470 475 480 Met Thr Lys Gly Thr Val Pro Leu Val Asn Met lie Asn Asn Leu Leu 485 490 495 Gln Asp Lys Glu 500 <210> 55 \ <211> 1125 <212> ADN <213> Lycopersicon esculentum <220> <221> CDS <222> (20) .. (946) <223> <400> 55 ttggtcatct ccacaatca atg gct gcc gcc gcc aga atc tcc gcc tcc tct 52 Met Ala Ala Ala Ala Arg lie Ser Ala Ser Ser 1 5 10 acc tea cga act ttt tat ttc cgt cat tea ceg ttt ctt ggc cea aaa 100 Thr Ser Arg Thr Phe Tyr Phe Arg His Ser Pro Phe Leu Gly Pro Lys 15 20 25 ect act teg acá acc tea cat gtt tct cea atc tct ect ttt tct ctt 14S Pro Thr Ser Thr Thr Ser His Val Ser Pro lie Ser Pro Phe Ser Leu 30 35 40 aat cta ggc cea att ttg agg tct aga aga aaa ccc agt ttc act gtt 196 Asn Leu Gly Pro lie Leu Arg Ser Arg Arg Lys Pro Ser Phe Thr Val 45 50 55 tgc ttt gtt etc gag gat gag aag ctg aaa. ect caá ttt gac gat gag 244 Cys Phe Val Leu Glu Asp Glu Lys Leu Lys Pro Gln Phe Asp Asp Glu 60 65 70 75 gct gag gat ttt gaa aag aag att gag gaa cag ate tta gct act cgc 292 Ala Glu Asp Phe Glu Lys Lys lie Glu Glu Gln lie Leu Ala Thr Arg 80 85 90 ttg gcg gag aaa ctg gct agg aag aaa teg gag agg ttt act tat ctt 340 Leu Ala Glu Lys Leu Ala Arg Lys Lys Ser Glu Arg Phe Thr Tyr Leu 95 100 105 gtg gct gct ata atg tct agt ttt ggg att act tct atg gct gtt atg 388 Val Ala Ala lie Met Ser Ser Phe Gly lie Thr Ser Met Ala Val Met 110 115 120 gct gtt tat tac aga ttt teg tgg caá atg gag gga gga gaa gtt ect 436 Ala Val Tyr Tyr Arg Phe Ser Trp Gln Met Glu Gly Gly Glu Val Pro 125 130 135 gta acc gaa atg ttg ggt acá ttt gct etc tct gtt ggt gct gct gta 434 Val Thr Glu Met Leu Gly Thr Phe Ala Leu Ser Val Gly Ala Ala Val 140 145 150 155 gga atg gag ttt tgg gcg aga tgg gca cae aaa gca ctg tgg cat gct 532 Gly Met Glu Phe Trp Ala Arg Trp Ala His Lys Ala Leu Trp His Ala 160 165 170 tea cta tgg cae atg cat gag tea cae cae aaa cea aga gaa gga ect Ser Leu Trp His Met His Glu Ser His His Lys Pro Arg Glu Gly Pro 175 180 i 185 ttt gag ctg aac gac gtt ttc gee ata acá aac gct gtt cea gca ata Phe Glu Leu Asn Asp Val Phe Ala lie Thr Asn Ala Val Pro Ala lie 190 195 200 gee etc etc aac tat ggt ttc ttc cat aaa ggc etc att gee gga cta Ala Leu Leu Asn Tyr Gly Phe Phe His Lys Gly Leu lie Ala Gly Leu 205 210 215 tgc ttc ggt gct ¦ ggg cta ggg ate acá gta ttt gga atg gca tac atg Cys Phe Gly Ala Gly Leu Gly lie Thr Val Phe Gly Met Ala Tyr Met 220 225 230 . 235 ttt gtt cae gat ggt ttg gtt cae aag aga ttc cea gtt gga ect gta Phe Val His Asp Gly Leu Val His Lys Arg Phe Pro Val Gly Pro Val 240 245 250 gee aat gta ect tat ctt agg aag gtg gct gct gct cat teg ctt cat Ala Asn Val Pro Tyr Leu Arg Lys Val Ala Ala Ala His Ser Leu His 255 260 265 cae tea gag aag ttc aat ggt gtc cea tat ggc ttg ttc ttc gga ect 868 His Ser Glu Lys Phe Asn Gly Val Pro Tyr Gly Leu Phe Phe Gly Pro 270 275 280 aag gaa ctg gaa gaa gta gga ggg acg gaa gag ttg gaa aag gaa gtg 916 Lys Glu Leu Glu Glu Val Gly Gly Thr Glu Glu Leu Glu Lys Glu Val 285 290 295 ata cga agg acg aga ctt teg aaa gga tea tgaacgattg ttcataaaca 966 lie Arg Arg Thr Arg Leu Ser Lys Gly Ser 300 305 tagaatgtca ttttacactt cttatcaatg aggaagggtg atttttgatg tatttgatag 1026 tagagaaaaa tgtagctctc ttgatgaaat gaatttgtat ttatgtaggc tcttcttatt 1086 cagtaagatt ttttcttttt tttgatctcg tgccgaatt 1125 <210> 56 <211> 309 <212> PRT <213> Lycopersicon esculentum <400> 56 Met Ala Ala Ala Ala Arg lie Ser Ala Ser Ser Thr Ser Arg Thr Phe 1 5 10 15 Tyr Phe Arg His Ser Pro Phe Leu Gly Pro Lys Pro Thr Ser Thr Thr 20 25 30 Ser His Val Ser Pro lie Ser Pro Phe Ser Leu Asn' Leu Gly Pro lie 35 40 45 Leu Arg Ser Arg Arg Lys Pro Ser Phe Thr Val Cys Phe Val Leu Glu 50 55 60 Asp Glu Lys Leu Lys Pro Gln Phe Asp Asp Glu Ala Glu Asp Phe Glu 65 70 75 80 Lys Lys lie Glu Glu Gln lie Leu Ala Thr Arg Leu Ala Glu Lys Leu 85 90 95 Ala Arg Lys Lys Ser Glu Arg Phe Thr Tyr Leu Val Ala Ala lie Met 100 105 110 Ser Ser Phe Gly lie Thr Ser Met Ala Val Met Ala Val Tyr Tyr Arg 115 120 125 Phe Ser Trp Gln Met Glu Gly Gly Glu Val Pro Val Thr Glu Met Leu 130 135 140 Gly Thr Phe Ala Leu Ser Val Gly Ala Ala Val Gly Met Glu Phe Trp 145 150 155 160 Ala Arg Trp Ala His Lys Ala Leu Trp His Ala Ser Leu Trp His Met 165 170 175 His Glu Ser His Lys Pro Arg Glu Gly Pro Phe Glu Leu Asn Asp 185 190 Val Phe Ala lie Thr Asn Ala Pro Ala lie Ala Leu Leu Asn Tyr 195 205 Gly Phe Phe His Lys Gly Leu lie Ala Gly Leu Cys Phe Gly Ala Gly 210 215 220 Leu Gly lie Thr Val Phe Gly Met Ala Tyr Met Phe Val His Asp Gly 225 230 235 240 Leu Val His Lys Arg Phe Pro Val Gly Pro Val Ala Asn Val Pro Tyr 245 250 255 Leu Arg Lys Val Ala Ala Ala His Ser Leu His His Ser Glu Lys Phe 260 265 270 Asn Gly Val Pro Tyr Gly Leu Phe Phe Gly Pro Lys Glu Leu Glu Glu 275 280 285 Val Gly Gly Thr Glu Glu Leu Glu Lys Glu Val lie Arg Arg Thr Arg 290 295 300 Leu Ser Lys Gly Ser 305 <210> 57 <211> 1666 <212> ADN <213> Lycopersicon esculentum <220> <221> CDS <222> (1) .. (1494) <223> <400> 57 atg gaa gct ctt ctc aag cct ttt cea tet ctt tta ctt tec tet ect 48 Met Glu Ala Leu Leu Lys Pro Phe Pro Ser Leu Leu Leu Ser Ser Pro 1 5 10 15 acá ecc cat agg tet att ttc caá caá aat ecc tet ttt cta agt ecc 96 Thr Pro His Arg Ser lie Phe Gln Gln Asn Pro Ser Phe Leu Ser Pro 20 25 30 acc acc aaa aaa aaa tea aga aaa tgt ctt ctt aga aac aaa agt agt 144 Thr Thr Lys Lys Lys Ser Arg Lys Cys Leu Leu Arg Asn Lys Ser Ser 35 40 45 aaa ctt ttt tgt age ttt ctt gat tta gca ecc acá tea aag cea gag 192 Lys Leu Phe Cys Ser Phe Leu Asp Leu Ala Pro Thr Ser Lys Pro Glu 50 55 60 tct tta gat gtt aac ate tca tgg gtt gat cct aat tcg aat cgg gct 240 Ser Leu Asp Val Asn lie Ser Trp Val Asp Pro Asn Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 caá ttc gac gtg ate att ate gga gct ggc cct gct ggg etc agg cta 288 Gln Phe Asp Val lie lie lie Gly Ala Gly Pro Ala Gly Leu Arg Leu 85 90 95 gct gaa caá gtt tct aaa tat ggt att aag gta tgt tgt gtt gac cct 336 Ala Glu Gln Val Ser Lys Tyr Gly lie Lys Val Cys Cys Val Asp Pro 100 105 110 tca cea etc tec atg tgg cea aat aat tat ggt gtt tgg gtt gat gag 384 Ser Pro Leu Ser Met Trp Pro Asn Asn Tyr Gly Val Trp Val Asp Glu 115 120 125 ttt gag aat tta gga ctg gaa aat tgt tta gat cat aaa tgg cct atg 432 Phe Glu Asn Leu Gly Leu Glu Asn Cys Leu Asp His Lys Trp Pro Met 130 135 140 act tgt gtg cat ata aat gat aac aaa act aag tat ttg gga aga cea 480 Thr Cys Val His lie Asn Asp Asn Lys Thr Lys Tyr Leu Gly Arg Pro 145 150 155 160 tat ggt aga gtt agt aga aag aag ctg aag ttg aaa ttg ttg aat agt 528 Tyr Gly Arg Val Ser Arg Lys Lys Leu Lys Leu Lys Leu Leu Asn Ser 165 170 175 tgt gtt gag aac aga gtg aag ttt tat aaa gct aag gtt tgg aaa gtg 576 Cys Val Glu Asn Arg Val Lys Phe Tyr Lys Ala Lys Val Trp Lys Val 180 185 190 gaa cat gaa gaa ttt gag tct tca att gtt tgt gat gat ggt aag aag 624 Glu His Glu Glu Phe Glu Ser Ser lie Val Cys Asp Asp Gly Lys Lys 195 200 205 ata aga ggt agt ttg gtt gtg gat gca agt ggt ttt gct agt gat ttt 672 lie Arg Gly Ser Leu Val Val Asp Ala Ser Gly Phe Ala Ser Asp Phe 210 215 220 ata gag tat gac agg cea aga aac cat ggt tat caá att gct cat ggg 720 lie Glu Tyr Asp Arg Pro Arg Asn His Gly Tyr Gln lie Ala His Gly 225 230 235 240 gtt tta gta gaa gtt gat aat cat cea ttt gat ttg gat aaa atg gtg 768 Val Leu Val Glu Val Asp Asn His Pro Phe Asp Leu Asp Lys Met Val 245 250 · 255 ctt atg gat tgg agg gat tct cat ttg ggt aat gag cea tat tta agg 816 Leu Met Asp Trp Arg Asp Ser His Leu Gly Asn Glu Pro Tyr Leu Arg 260 265 270 gtg aat aat gct aaa gaa cea ac ttc ttg tat gca atg cea ttt gat 864 Val Asn Asn Ala Lys Glu Pro Thr Phe Leu Tyr Ala Met Pro Phe Asp 275 280 285 aga gat ttg gtt ttc ttg gaa gag act tct ttg gtg agt cgt ect gtt 912 Arg Asp Leu Val Phe Leu Glu Glu Thr Ser Leu Val Ser Arg Pro Val 290 295 300 tta tcg tat atg gaa gta aaa aga agg atg gtg gca aga tta agg cat 960 Leu Ser Tyx Met Glu Val Lys Arg Arg Met Val Ala Arg Leu Arg His 305 310 315 320 ttg ggg ate aaa gtg aaa agt gtt att gag gaa gag aaa tgt gtg ate 1008 Leu Gly lie Lys Val Lys Ser Val lie Glu Glu Glu Lys Cys Val lie 325 330 335 ect atg gga gga cea ctt ceg cgg att ect caá aat gtt atg gct att 1056 Pro Met Gly Gly Pro Leu Pro Arg lie Pro Gln Asn Val Met Ala lie 340 345 350 ggt ggg aat tca ggg ata gtt cat cea tca acá ggg tac atg gtg gct 1104 Gly Gly Asn Ser Gly lie Val His Pro Ser Thr Gly Tyr Met Val Ala 355 360 365 agg age atg gct tta gca cea gta cta gct gaa gee ate gtc gag ggg 1152 Arg Ser Met Ala Leu Ala Pro Val Leu Ala Glu Ala lie Val Glu Gly 370 375 380 ctt ggc tca acá aga atg ata aga ggg tct caá ctt tac cat aga gtt 1200 Leu Gly Ser Thr Arg Met lie Arg Gly Ser Gln Leu Tyr His Arg Val 385 390 395 400 tgg aat ggt ttg tgg ect ttg gat aga aga tgt gtt aga gaa tgt tat 1248 Trp Asn Gly Leu Trp Pro Leu Asp Arg Arg Cys Val Arg Glu Cys Tyr 405 410 415 tca ttt ggg atg gag acá ttg ttg aag ctt gat ttg aaa ggg act agg 1296 Ser Phe Gly Met Glu Thr Leu Leu Lys Leu Asp Leu Lys Gly Thr Arg 420 425 1 430 aga ttg ttt gac gct ttc tLL yat ctt gat ect aaa tac tgg caá ggg 1344 Arg Leu Phe Asp Ala Phe Phe Asp Leu Asp Pro Lys Tyr Trp Gln Gly 435 440 445 ttc ctt tct tca aga ttg tct gtc aaa gaa ctt ggt tta ctc age ttg 1392 Phe Leu Ser Ser Arg Leu Ser Val Lys Glu Leu Gly Leu Leu Ser Leu 450 455 460 tgt ctt ttc gga cat ggc tea aac atg act agg ttg gat att gtt acá 1440 Cys Leu Phe Gly His Gly Ser Asn Met Thr Arg Leu Asp lie Val Thr 465 470 " 475 ¦ 480 aaa tgt ect ctt ect ttg gtt aga ctg att ggc aat cta gca ata gag 1488 Lys Cys Pro Leu Pro Leu Val Arg Leu lie Gly Asn Leu Ala lie Glu 485 490 495 age ctt tgaatgtgaa aagtttgaat cattttcttc attttaattt ctttgattat 1544 Ser Leu tttcatattt tctcaattgc aaaagtgaga taagagctac atactgtcaa caaataaact 1604 actattggaa agttaaaata tgtgtttgtt gtatgttatt ctaatggaat ggattttgta 1664 aa 1666 <210> 58 <211> 498 <212> PRT <213> Lycopersicon esculentum <400> 58 Met Glu Ala Leu Leu Lys Pro Phe Pro Ser Leu Leu Leu Ser Ser Pro 1 5 10 15 Thr Pro His Arg Ser lie Phe Gln Gln Asn Pro Ser Phe Leu Ser Pro 20 25 30 Thr Thr Lys Lys Lys Ser Arg Lys Cys Leu Leu Arg Asn Lys Ser Ser 35 40 45 Lys Leu Phe Cys Ser Phe Leu Asp Leu Ala Pro Thr Ser Lys Pro Glu 50 55 60 Ser Leu Asp Val Asn lie Ser Trp Val Asp Pro Asn Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 Gln Phe Asp Val lie lie lie Gly Ala Gly Pro Ala Gly Leu Arg Leu 85 90 95 Ala Glu Gln Val Ser Lys Tyr Gly lie Lys Val Cys Cys Val Asp Pro 100 105 110 Ser Pro Leu Ser Met Trp Pro Asn Asn Tyr Gly Val Trp Val Asp Glu 115 120 125 Phe Glu Asn Leu Gly Leu Glu Asn Cys Leu Asp His Lys Trp Pro Met 130 135 140 Thr Cys Val His lie Asn Asp Asn Lys Thr Lys Tyr Leu Gly Arg Pro 145 150 155 160 Tyr Gly Arg Val Ser Arg Lys Lys Leu Lys Leu Lys Leu Leu Asn Ser 165 170 175 Cys Val Glu Asn Arg Val Lys Phe Tyr Lys Ala Lys Val Trp Lys Val 180 ¦ 185 190 Glu His Glu Glu Phe Glu Ser Ser lie Val Cys Asp Asp Gly Lys Lys 195 200 205 lie Arg Gly Ser Leu Val Val Asp Ala Ser Gly Phe Ala Ser Asp Phe 210 215 220 lie Glu Tyr Asp Arg Pro Arg Asn His Gly Tyr Gln lie Ala His Gly 225 230 235 240 Val Leu Val Glu Val Asp Asn His Pro Phe Asp Leu Asp Lys Met Val 245 250 255 Leu Met Asp Trp Arg Asp Ser His Leu Gly Asn Glu Pro Tyr Leu Arg 260 265 270 Val Asn Asn Ala Lys Glu Pro Thr Phe Leu Tyr Ala Met Pro Phe Asp 275 280 285 Arg Asp Leu Val Phe Leu Glu Glu Thr Ser Leu Val Ser Arg Pro Val 290 295 300 Leu Ser Tyr Met Glu Val Lys Arg Arg Met Val Ala Arg Leu Arg His 305 310 315 320 Leu Gly lie Lys Val Lys Ser Val lie Glu Glu Glu Lys Cys Val lie 325 330 335 Pro Met Gly Gly Pro Leu Pro Arg lie Pro Gln Asn Val Met Ala lie 340 345 350 Gly Gly Asn Ser Gly lie Val His Pro Ser Thr Gly Tyr Met Val Ala 355 360 365 Arg Ser Met Ala Leu Ala Pro Val Leu Ala Glu Ala lie Val Glu Gly 370 375 380 Leu Gly Ser Thr Arg Met lie Arg Gly Ser Gln Le Tyr His Arg Val 385 390 395 400 Trp Asn Gly Leu Trp Pro Leu Asp Arg Arg Cys Val Arg Glu Cys Tyr 405 410 15 Ser Phe Gly Met Glu Thr Leu Leu Lys Leu Asp Leu Lys Gly Thr Arg 420 425 ¾ 430 Arg Leu Phe Asp Ala Phe Phe Asp Leu Asp Pro Lys Tyr Trp Gln Gly 435 440 445 Phe Leu Ser Ser Arg Leu Ser Val Lys Glu Leu Gly Leu Leu Ser Leu 450 455 460 Cys Leu Phe Gly His Gly Ser Asn Met Thr Arg Leu Asp lie Val Thr 465 470 475 480 Lys Cys Pro Leu Pro Leu Val Arg Leu lie Gly Asn Leu Ala lie Glu 485 490 ¦ 495 Ser Leu <210> 59 <211> 37 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) .. (37) <223> <400> 59 gcgcatgcat ctagaaatga tccagttaga acaacca 37 <210> 60 <211> 37 <212> ADN <2I3> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1)..(37) <223> <400> 60 gcgcatgctc tagactattt tgctttgtaa atttctg 37 <210> 61 <211> 792 <212> ADN <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <220> <221> CDS <222> (5)..(775) <223> <400> 61 gcgc atg cat cta gaa atg atc cag tta gaa caa cea1 ctc agt cat caa 49 Met His Leu Glu Met lie Gln Leu Glu Gln Pro Leu Ser His Gln 1 5 10 15 gca aaa ctg act cea gta ctg aga agt aaa tet cag ttt aag ggg ctt 97 Ala Lys Leu Thr Pro Val Leu Arg Ser Lys Ser Gln Phe Lys Gly Leu 20 25 30 ttc att gct att gtc att gtt age gca tgg gtc att age ctg agt tta 145 Phe lie Ala lie Val lie Val Ser Ala Trp Val lie Ser Leu Ser Leu 35 40 45 tta ctt tcc ctt gac atc tea aag cta aaa ttt tgg atg tta ttg ect 193 Leu Leu Ser Leu Asp lie Ser Lys Leu Lys Phe Trp Met Leu Leu Pro 50 55 60 gtt ata cta tgg caa acá ttt tta tat acg gga tta ttt att acá tet 241 Val lie Leu Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ser 65 70 75 cat gat gee atg cat ggc gta gta ttt ecc caa aac acc aag att aat 289 His Asp Ala Met His Gly Val Val Phe Pro Gln Asn Thr Lys lie Asn 80 85 90 95 cat ttg att gga acá ttg acc cta tec ctt tat ggt ctt tta cea tat 337 His Leu lie Gly Thr Leu Thr Leu Ser Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr 100 105 110 caá aaa cta ttg aaa aaa cat tgg tta cae cae cae aat cea gca age 385 Gln Lys Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His His Asn Pro Ala Ser 115 120 125 tea ata gac ccg gat ttt cae aat ggt aaa cae caá agt ttc ttt gct 433 Ser lie Asp Pro Asp Phe His Asn Gly Lys His Gln Ser Phe Phe Ala 130 135 140 tgg tat ttt cat ttt atg aaa ggt tac tgg agt tgg ggg caá ata att 481 Trp Tyr Phe His Phe Met Lys Gly Tyr Trp Ser Trp Gly Gln lie lie 145 150 155 gcg ttg act att att tat aac ttt gct aaa tac ata etc cat ate cea 529 Ala Leu Thr lie lie Tyr Asn Phe Ala Lys Tyr lie Leu His lie Pro 160 165 170 175 agt gat aat cta act tac ttt tgg gtg cta ecc teg ctt tta agt tea 577 Ser Asp Asn Leu Thr Tyr Phe Trp Val Leu Pro Ser Leu Leu Ser Ser 180 185 190 tta caá tta ttc tat ttt ggt act ttt tta ecc cat agt gaa cea ata 625 Leu Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser Glu Pro lie 195 200 205 ggg ggt tat gtt cag ect cat tgt gee caá acá att age cgt ect att 673 Gly Gly Tyr Val Gln Pro His Cys Ala Gln Thr lie Ser Arg Pro lie 210 215 220 tgg tgg tea ttt ate acg tgc tat cat ttt ggc tac cae gag gaa cat 721 Trp Trp Ser Phe lie Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His 225 230 235 cae gaa tat ect cat att tet tgg tgg cag tta cea gaa att tac aaa 769 His Glu Tyr Pro His lie Ser- Trp Trp Gln Leu Pro Glu lie Tyr Lys 240 245 250 255 gca aaa tagtctagag catgege 792 Ala Lys <210> 62 <211> 257 <212> PRT <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <400> 62 Met His Leu Glu Met lie Gln Leu Glu Gln Pro Leu Ser His Gln Ala 1 5 10 15 Lys Leu Thr Pro Val Leu Arg Ser Lys Ser Gln Phe Lys Gly Leu Phe 20 25 30 lie Ala lie Val lie Val Ser Ala Trp Val lie Ser Leu Ser Leu Leu 35 40 45 Leu Ser Leu Asp lie Ser Lys Leu Lys Phe Trp Met Leu Leu Pro Val 50 55 60 lie Leu Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ser His 65 70 75 80 Asp Ala Met His Gly Val Val Phe Pro Gln Asn Thr Lys lie Asn His 85 90 95 Leu lie Gly Thr Leu Thr Leu Ser Leu Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Gln 100 105 110 Lys Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His His Asn Pro Ala Ser Ser 115 120 125 lie Asp Pro Asp Phe His Asn Gly Lys His Gln Ser Phe Phe Ala Trp 130 135 140 Tyr Phe His Phe Met Lys Gly Tyr Trp Ser Trp Gly Gln lie lie Ala 145 150 155 160 Leu Thr lie lie Tyr Asn Phe Ala Lys Tyr lie Leu His lie Pro Ser 165 170 175 Asp Asn Leu Thr Tyr Phe Trp Val Leu Pro Ser Leu Leu Ser Ser Leu 180 185 190 Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser Glu Pro lie Gly 195 200 205 Gly Tyr Val Gln Pro His Cys Ala Gln Thr lie Ser Arg Pro lie Trp 210 215 220 ¾ Trp Ser Phe lie Thr Cys Tyr 225 230 235 240 Glu Tyr Pro His lie Ser Trp 245 250 255 Lys <210> 63 <211> 26 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) - - (26) <223> <400> 63 gtcgaccctg ctttaatgag atatgc 26 <210> 64 <211> 27 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1)..(27) <223> <400> 64 ctcgagcttg gacaatcagt aaattga <210> 65 <211> 210 <212> ADN <213> Agrobacteriuia tumefaciens <220> <221> Terminador <222> (1) .. (210) <223> <400> 65 gtcgaccctg ctttaatgag atatgcgaga cgcctatgat cgcatgatat ttgctttcaa 60 ttctgttgtg cacgttgtaa aaaacctgag catgtgtagc tcagatcctt accgccggtt 120 tcggttcatt ctaatgaata tatcacccgt tactatcgta tttttatgaa taatattctc 180 cgttcaattt actgattgtc caagctcgag 210 <210> 66 ¾ <211> 35 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1)..(35) <223> <400> 66 gcgcatgcat ctagaaatgg ttcagtgtca accat 35 <210> 67 <211> 35 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1)..{35) <223> <400> 67 gcgcatgctc tagaccttat aaagatattt tgtga <210> 68 <211> 809 <212> ADN <213> Nostoc PCC 7120 <220> <221> CDS <222> (5) .. (790) <223> <400> 68 gcgc atg cat cta gaa atg gtt cag tgt caá cea tea tct ctg cat tca 49 Met His Leu Glu Met Val Gln Cys Gln Pro Ser Ser Leu His Ser 1 5 10 15 gaa aaa ctg gtg tta ttg tca tcg acá ate aga gat gat aaa aat att 97 Glu Lys Leu Val Leu Leu Ser Ser Thr lie Arg Asp Asp Lys Asn lie 20 25 " 30 aat aag ggt ata ttt att gcc tgc ttt ate tta ttt tta tgg gca att 145 Asn Lys Gly lie Phe lie Ala Cys Phe lie Leu Phe Leu Trp Ala lie 35 40 45 agt tta ate tta tta etc tca ata gat acá tec ata att cat aag age 193 Ser Leu lie Leu Leu Leu Ser lie Asp Thr Ser lie lie His Lys Ser 50 55 60 tta tta ggt ata gcc atg ctt tgg cag acc ttc tta tat acá ggt tta 241 Leu Leu Gly lie Ala Met Leu Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu 65 70 75 ttt att act gct cat gat gcc atg cac ggc gta gtt tat ccc aaa aat 289 Phe lie Thr Ala His Asp Ala Met His Gly Val Val Tyr Pro Lys Asn 80 85 90 95 ccc aga ata aat aat ttt ata ggt aag etc act cta ate ttg tat gga 337 Pro Arg lie Asn Asn Phe lie Gly Lys Leu Thr Leu lie Leu Tyr Gly 100 105 110 cta etc ect tat aaa gat tta ttg aaa aaa cat tgg tta cac cac gga 385 Leu Leu Pro Tyr Lys Asp Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His Gly 115 120 125 cat ect ggt act gat tta gac ect gat tat tac aat ggt cat ccc caá 433 His Pro Gly Thr Asp Leu Asp Pro Asp Tyr Tyr Asn Gly His Pro Gln 130 135 140 aac ttc ttt ctt tgg tat cta cat ttt atg aag tct tat tgg cga tgg 481 Asn Phe Phe Leu Trp Tyr Leu His Phe Met Lys Ser Tyr Trp Arg Trp 145 150 155 acg caa att ttc gga tta gtg atg att ttt cat gga ctt aaa aat ctg 529 Thr Gln lie Phe Gly Leu Val Met lie Phe His Gly Leu Lys Asn Leu 160 165 170 175 gtg cat ata cea gaa aat aat tta att ata ttt tgg atg ata ect tet 577 Val His lie Pro Glu Asn Asn Leu lie lie Phe Trp Met lie Pro Ser 180 185 190 att tta agt tea gta caa cta ttt tat ttt ggt acá ttt ttg ect cat 625 lie Leu Ser Ser Val Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His 195 200 205 aaa aag cta gaa ggt ggt tat act aac ecc cat tgt gcg cgc agt ate 673 Lys Lys Leu Glu Gly Gly Tyr Thr Asn Pro His Cys Ala Arg Ser lie 210 215 220 cea tta ect ctt ttt tgg tet ttt gtt act tgt tat cae ttc ggc tac 721 Pro Leu Pro Leu Phe Trp Ser Phe Val Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr 225 230 235 cae aag gaa cat cae gaa tac ect caa ctt ect tgg tgg aaa tta ect 769 His Lys Glu His His Glu Tyr Pro Gln Leu Pro Trp Trp Lys Leu Pro 240 245 250 255 gaa gct cae aaa ata tet tta taaggtctag ageatgege 809 Glu Ala His Lys lie Ser Leu 260 <210> 69 <211> 262 <212> PRT <213> Nostoc PCC 7120 <400> 69 v Met His Leu Glu Met Val Gln Cys Gln Pro Ser Ser Leu His Ser Glu 1 5 10 15 Lys Leu Val Leu Leu Ser Ser Thr lie Arg Asp Asp Lys Asn lie Asn 20 25 30 Lys Gly lie Phe lie Ala Cys Phe lie Leu Phe Leu Trp Ala lie Ser 35 40_ 45 Leu lie Leu Leu Leu Ser lie Asp Thr Ser lie lie His Lys Ser Leu 50 55 60 Leu Gly lie Ala Met Leu Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe 65 70 75 80 lie Thr Ala His Asp Ala Met His Gly Val Val Tyr Pro Lys Asn Pro 85 90 95 Arg lie Asn Asn Phe lie Gly Lys Leu Thr Leu lie Leu Tyr Gly Leu 100 105 110 Leu Pro Tyr Lys Asp Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His Gly Hi 115 120 125 Pro Gly Thr Asp Leu Asp Pro Asp Tyr Tyr Asn Gly His Pro Gln As 130 135 140 Phe Phe Leu Trp Tyr Leu His Phe Met Lys Ser Tyr Trp Arg Trp Thr 145 150 155 160 Gln lie Phe Gly Leu Val Met lie Phe His Gly Leu Lys Asn Leu Val 165 170 175 His lie Pro Glu Asn Asn Leu lie lie Phe Trp Met lie Pro Ser lie 180 185 190 Leu Ser Ser Val Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Lys 195 200 205 Lys Leu Glu Gly Gly Tyr Thr Asn Pro His Cys Ala Arg Ser lie Pro 210 215 220 Leu Pro Leu Phe Trp Ser Phe Val Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His 225 230 235 240 Lys Glu His His Glu Tyr Pro Gln Leu Pro Trp Trp Lys Leu Pro Glu 245 250 255 Ala His Lys lie Ser Leu 260 <210> 70 <211> 39 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) · - (39) <223> <400> 70 gcgcatgcat ctagaaatga atttttgtga taaaccagt 39 <210> 71 <211> 37 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) .. (37) <223> <400> 71 gcgcatgctc tagattacga attggttact gaattgt 37 <211> 819 <212> ADN <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <220> <221> CDS <222> (5) .. (802) <223> <400> 72 gcgc atg cat cta gaa atg aat ttt tgt gat aaa cea gtt age tat tat Met His Leu Glu Met Asn Phe Cys Asp Lys Pro Val Ser Tyr Tyr 1 5 10 15 gtt gca ata gag caá tta agt gct aaa gaa gat act gtt tgg ggg ctg Val Ala lie Glu Gln Leu Ser Ala Lys Glu Asp Thr Val Trp Gly Leu 20 25 - 30 gtg att gtc ata gta att att agt ctt tgg gta gct agt ttg gct ttt Val lie Val lie Val lie lie Ser Leu Trp Val Ala Ser Leu Ala Phe 35 40 45 tta cta gct att aat tat gcc aaa gtc cca att tgg ttg ata cct att Leu Leu Ala lie Asn Tyr Ala Lys Val Pro lie Trp Leu lie Pro lie 50 55 60 gca ata gtt tgg caá atg ttc ctt tat acá ggg cta ttt att act gca Ala lie Val Trp Gln Met Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala 65 70 75 cat gat gct atg cat ggg tea gtt tat cgt aaa aat ecc aaa att aat His Asp Ala Met His Gly Ser Val Tyr Arg Lys Asn Pro Lys lie Asn 80 85 90 95 aat ttt ate ggt tea cta gct gta gcg ctt tac gct gtg ttt cca tat Asn Phe lie Gly Ser Leu Ala Val Ala Leu Tyr Ala Val Phe Pro Tyr 100 105 110 caá cag atg tta aag aat cat tgc tta cat cat cgt cat cct gct age Gln Gln Met Leu Lys Asn His Cys Leu His His Arg His Pro Ala Ser 115 120 125 gaa gtt gac cca gat ttt cat gat ggt aag aga acá aac gct att ttc Glu Val Asp Pro Asp Phe His Asp Gly Lys Arg Thr Asn Ala lie Phe 130 135 140 tgg tat etc cat ttc atg ata gaa tac tec agt tgg caá cag tta ata Trp Tyr Leu His Phe Met lie Glu Tyr Ser Ser Trp Gln Gln Leu lie 145 150 155 gta cta act ate cta ttt aat tta gct aaa tac gtt ttg cae ate cat Val Leu Thr lie Leu Phe Asn Leu Ala Lys Tyr Val Leu His lie His 160 165 170 175 caá ata aat ctc ate tta ttt tgg agt att cct cea att tta agt tec 577 Gln lie Asn Leu lie Leu Phe Trp Ser lie Pro Pro lie Leu Ser Ser 180 185 190 att caá ctg ttt tat ttc gga ac ttt ttg cct cat cga gaa ccc aag 625 lie Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Arg Glu Pro Lys 195 200 205 aaa gga tat gtt tat ccc cat tgc age caá acá ata aaa ttg cea act 673 Lys Gly Tyr Val Tyr Pro His Cys Ser Gln Thr lie Lys Leu Pro Thr 210 215 220 ttt ttg tea ttt ate gct tgc tac cae ttt ggt tat cat gaa gaa cat 721 Phe Leu Ser Phe lie Ala Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His 225 230 235 cat gag tat ccc cat gta cct tgg tgg caá ctt cea tct gta tat aag 769 His Glu Tyr Pro His Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Ser Val Tyr Lys 240 245 250 255 cag aga gta ttc aac aat tea gta acc aat teg taatctagag catgege 819 Gln Arg Val Phe Asn Asn Ser Val Thr Asn Ser 260 265 <210> 73 <211> 266 <212> PRT <213> Nostoc punctiforme ATCC 29133 <400> 73 Met His Leu Glu Met Asn Phe Cys Asp Lys Pro Val Ser Tyr Tyr Val 1 5 10 15 Ala lie Glu Gln Leu Ser Ala Lys Glu Asp Thr Val Trp Gly Leu Val 20 25 30 lie Val lie Val lie lie Ser Leu Trp Val Ala Ser Leu Ala Phe Leu 35 40 45 Leu Ala lie Asn Tyr Ala Lys Val Pro lie Trp Leu lie Pro lie Ala 50 55 60 . . lie Val Trp Gln Met Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe lie Thr Ala His 65 70 75 80 Asp Ala Met His Gly Ser Val Tyr Arg Lys Asn Pro Lys lie Asn Asn 85 90 95 Phe lie Gly Ser Leu Ala Val Ala Leu Tyr Ala Val Phe Pro Tyr Gln 100 105 110 Gln Met Leu Lys Asn His Cys Leu His His Arg His Pro Ala Ser Glu 115 120 125 Val Asp Pro Asp Phe His Asp Gly Lys Arg Thr Asn Ala lie Phe Trp 130 135 140 Tyr Leu His Phe et lie Glu Tyr Ser Ser Trp Gln Gln Leu lie Val 145 150 155 160 Leu Thr lie Leu Phe Asn Leu Ala Lys Tyr Val Leu His lie His Gln 165 170 175 lie Asn Leu lie Leu Phe Trp Ser lie Pro Pro lie Leu Ser Ser lie 180 185 190 Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Arg Glu Pro Lys Lys 195 200 205 Gly Tyr Val Tyr Pro His Cys Ser Gln Thr lie Lys Leu Pro Thr Phe 210 215 220 Leu Ser Phe lie Ala Cys Tyr His Phe Gly Tyr His Glu Glu His His 225 230 235 240 Glu Tyr Pro His Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Ser Val Tyr Lys Gln 245 250 255 Arg Val Phe Asn Asn Ser Val Thr Asn Ser 260 265 <210> 74 <211> 33 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) .. (33) <223> <400> 74 gcgcatgcat ctagaaatgg cgatcgccat tat <210> 75 <211> 32 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1)..(32) <223> <400> 75 gcgcatgctc tagatcacaa atttgattta ga 32 <210> 76 <211> 720 <212> ADN <213> Nodularia spumigena NSOR10 <220> <221> CDS <222> (5).. (703) <223> <400> 76 gcgc atg cat cta gaa atg gcg ate gcc att azt agt ata tgg gct atc 49 Met His Leu Glu Met Ala lie Ala lie lie Ser lie Trp Ala lie 1 5 10 15 age cta ggt ttg tta ctt tat att gat ata tec caa ttc aag ttt tgg 97 Ser Leu Gly Leu Leu Leu Tyr lie Asp lie Ser Gln Phe Lys Phe Trp 20 25 30 atg ttg tta ceg etc ata ttt tgg caa aca ttt tta tat acg gga tta 145 Met Leu Leu Pro Leu lie Phe Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu 35 40 45 ttt att aca gct cat gat gcc atg cat ggg gta gtt ttt ecc aaa aat 193 Phe lie Thr Ala His Asp Ala Met His Gly Val Val Phe Pro Lys Asn 50 55 60 ecc aaa atc aac cat ttc att ggc tea ttg tgc ctg ttt ctt tat ggt 241 Pro Lys lie Asn His Phe lie Gly Ser Leu Cys Leu Phe Leu Tyr Gly 65 70 75 ctt tta cct tat caa aaa ctt tta aaa aag cat tgg cta cat cae cat 289 Leu Leu Pro Tyr Gln Lys Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His His 80 85 90 95 aat cea gcc agt gaa aca gat cea gat ttt cae aac ggg aag cag aaa 337 Asn Pro Ala Ser Glu Thr Asp Pro Asp Phe His Asn Gly Lys Gln Lys 100 105 1 110 aac ttt ttt gct tgg tat tta tat ttt atg aag cgt tac tgg agt tgg 305 Asn Phe Phe Ala Trp Tyr Leu Tyr Phe Met Lys Arg Tyr Trp Ser Trp 115 120 125 tta caa att atc aca tta atg att att tat aac tta cta aaa tat ata 433 Leu Gln lie lie Thr Leu Met lie lie Tyr Asn Leu Leu Lys Tyr lie 130 135 140 tgg cat ttt cea gag gat aat atg act tat ttt tgg gta gtt ecc tea 481 Trp His Phe Pro Glu Asp Asn Met Thr Tyr Phe Trp Val Val Pro Ser 145 150 155 att tta agt tet tta caa tta ttt tat ttt gga act ttt cta ecc cae 529 lie Leu Ser Ser Leu Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His 160 165 170 175 agt gag cct gta gaa ggt tat aaa gag cct cat cgt tec caa act att 577 Ser Glu Pro Val Glu Gly Tyr Lys Glu Pro His Arg Ser Gln Thr lie 180 185 190 age cgt ecc att tgg tgg tea ttt ata act tgt tac cat ttt ggt tat 625 Ser Arg Pro lie Trp Trp Ser Phe lie Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr 195 200 205 cat tac gaa cat cat gaa tac ecc cat gtt ect tgg tgg caá tta cea 673 His Tyr Glu His His Glu Tyr Pro His Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro 210 215 220 gaa att tat aaa atg tet aaa tea aat ttg tgatctagag catgege 720 Glu lie Tyr Lys Met Ser Lys Ser Asn Leu 225 230 <210> 77 <211> 233 <212> PRT <213> Nodularia spumigena NSOR10 <400> 77 Met His Leu Glu Met Ala lie Ala lie lie Ser lie Trp Ala lie Ser 1 5 10 15 Leu Gly Leu Leu Leu Tyr lie Asp lie Ser Gln Phe Lys Phe Trp Met 20 25 30 Leu Leu Pro Leu lie Phe Trp Gln Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Leu Phe 35 40 45 lie Thr Ala His Asp Ala Met His Gly Val Val Phe Pro Lys Asn Pro 50 55 60 Lys lie Asn His Phe lie Gly Ser Leu Cys Leu Phe Leu Tyr Gly Leu 65 70 ' 75 80 Leu Pro Tyr Gln Lys Leu Leu Lys Lys His Trp Leu His His His Asn 85 90 95 Pro Ala Ser Glu Thr Asp Pro Asp Phe His Asn Gly Lys Gln Lys Asn 100 105 110 Phe Phe Ala Trp Tyr Leu Tyr Phe Met Lys Arg Tyr Trp Ser Trp Leu 115 120 125 Gln lie lie Thr Leu Met lie lie Tyr Asn Leu Leu Lys Tyr lie Trp 130 135 140 His Phe Pro Glu Asp Asn Met Thr Tyr Phe Trp Val Val Pro Ser lie 145 . 150 155 160 Leu Ser Ser Leu Gln Leu Phe Tyr Phe Gly Thr Phe Leu Pro His Ser 165 170 175 Glu Pro Val Glu Gly Tyr Lys Glu Pro His Arg Ser Gln Thr lie Ser 180 185 190 Arg Pro lie Trp · Trp Ser Phe lie Thr Cys Tyr His Phe Gly Tyr His 195 200 205 Tyr Glu His His Glu Tyr Pro His Val Pro Trp Trp Gln Leu Pro Glu 210 215 220 lie Tyr Lys Met Ser Lys Ser Asn Leu 225 230 <210> 78 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) · · (24) <223> <400> 78 gaattcctgc aatagaatgt tgag 24 <210> 79 <211> 25 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) · · (25) <223> <400> 79 ctcgagctta cgagcatttt ctaag 25 <210> 80 <211> 307 <212> ADN <213> Vicia faba <220> <221> Terminador <222> (1) · · (307) <223> <400> 80 gaattcctgc aatagaatgt tgaggtgacc actttctgta ataaaataat tataaaataa 60 atttagaatt gctgtagtca agaacatcag ttctaaaata ttaataaagt tatggccttt 120 tgacatatgt gtttcgataa aaaaatcaaa ataaattgag atttattcga aatacaatga 180 aagtttgcag atatgagata tgtttctaca aaataataac ttaaaactca actatatgct 240. aatgtttttc ttggtgtgtt tcatagaaaa ttgtatccgt ttcttagaaa atgctcgtaa 300 gctcgag 307 <210> 81 <211> 26 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) .. (26) <223> <400> 81 aagcttgaat ttggatccgc caccgt 26 <210> 82 <211> 25 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1)..(25) <223> <400> 82 gaattcccaa taataatcta cagcc <210> 83 <211> 1040 <212> ADN <213> Lycopersicon esculentum <220> <221> CDS <222> (29) . <223> <400> 83 aagcttgaat ttggatccgc caccgtcc atg gcg gcc gga att tca gcc tcc 52 Met Ala Ala Gly lie Ser Ala Ser 1 5 gct agt tcc cga acc att cgc .ctc cgt cat aac ccg ttt ctc agt cea 100 Ala Ser Ser Arg Thr lie Arg Leu Arg His Asn Pro Phe Leu Ser Pro · 10 15 20 aaa tcc gcc tca acc gcc ccg ccg gtt ctg ttc ttc tct ccg tta act 148 Lys Ser Ala Ser Thr Ala Pro Pro Val Leu Phe Phe Ser Pro Leu Thr 25 30 35 40 cgc aat ttt ggc gca att ttg ctg tct aga aga aag ccg aga ttg gcg 196 Arg Asn Phe Gly Ala lie Leu Leu Ser Arg Arg Lys Pro Arg Leu Ala 45 50 55 gtt tgt ttt gtg ctg gag aat gag aaa ttg aat agt act ate gaa agt 244 Val Cys Phe Val Leu Glu Asn Glu Lys Leu Asn Ser Thr lie Glu Ser 60 65 70 gag agt gaa gta ata gag gat cgg ata caá gta gag att aat gag gag 292 Glu Ser Glu Val lie Glu Asp Arg lie Gln Val Glu lie Asn Glu Glu 75 80 85 aag agt tta gct gee agt tgg ctg gcg gag aaa ttg gcg agg aag aaa 340 Lys Ser Leu Ala Ala Ser Trp Leu Ala Glu Lys Leu Ala Arg Lys Lys 90 95 100 tcg gag agg ttt act tat ctt gtg gca gct gtg atg tct agt ttg ggg 388 Ser Glu Arg Phe Thr Tyr Leu Val Ala Ala Val Met Ser Ser Leu Gly 105 110 115 120 att act tct atg gcg att ttg gcg gtt tat tac aga ttt tea tgg caá 436 lie Thr Ser Met Ala lie Leu Ala Val Tyr Tyr Arg Phe Ser Trp Gln 125 130 135 atg gag ggt gga gaa gtg ect ttt tct gaa atg tta gct acá ttc act 484 Met Glu Gly Gly Glu Val Pro Phe Ser Glu Met Leu Ala Thr Phe Thr 140 145 150 etc tcg ttt ggc gct gee gta gga atg gag tac tgg gcg aga tgg gct 532 Leu Ser Phe Gly Ala Ala Val Gly Met Glu Tyr Tr Ala Arg Trp Ala 155 160 165 cat aga gca cta tgg cat gct tct tta tgg cae atg cae gag tcg cae 580 His Arg Ala Leu Trp His Ala Ser Leu Trp His Met His Glu Ser His 170 175 180. cat aga cea aga gaa gga ect ttt gag atg aac gac gtt ttc gee ata 628 His Arg Pro Arg Glu Gly Pro Phe Glu Met Asn Asp Val Phe Ala lie 185 190 195 1 200 acá aat gct gtt cea gct ata ggt ctt ctt tec tac ggt ttc ttc cat 676 Thr Asn Ala Val Pro Ala lie Gly Leu Leu Ser Tyr Gly Phe Phe His 205 210 215 aaa ggg ate gtc ect ggc etc tgt ttc ggc gct gga ttg ggg ate acá 724 Lys Gly lie Val Pro Gly Leu Cys Phe Gly Ala Gly Leu Gly lie Thr 220 225 230 gta ttt ggg atg gct tac atg ttc gtt cae gat gga ctg gtt cat aag 772 Val Phe Gly Met Ala Tyr Met Phe Val His Asp Gly Leu Val His Lys 235 240 ' 245 aga ttt ecc gta ggg ect att gee aac gtg ect tac ttt cgg agg gta 820 Arg Phe Pro Val Gly Pro lie Ala Asn Val Pro Tyr Phe Arg Arg Val 250 255 260 gct gca gca cat cag ctt cat cae tcg gac aaa ttt gat ggt gtc cea 868 Ala Ala Ala His Gln Leu His His Ser Asp Lys Phe Asp Gly Val Pro 265 270 275 280 tat ggc ttg ttt cta gga cct aag gaa ttg gaa gaa gta gga gga ctt 916 Tyr Gly Leu Phe Leu Gly Pro Lys Glu Leu Glu Glu Val Gly Gly Leu 285 290 295 gaa gag tta gaa aag gaa gtc aac cga agg att aaa att tct aag gga 964 Glu Glu Leu Glu Lys Glu Val Asn Arg Arg lie Lys lie Ser Lys Gly 300 305 310 tta tta tgatcaaaag atacgtctga taataataaa atgcgattgt atttaggctg 1020 Leu Leu tagattatta ttgggaattc 1040 <210> 84 <211> 314 <212> P T <213> Lycopersicon esculentum <400> 84 Met Ala Ala Gly lie Ser Ala Ser Ala Ser Ser Arg Thr lie Arg Leu 1 5 10 15 Arg His Asn Pro Phe Leu Ser Pro Lys Ser Ala Ser Thr Ala Pro Pro 20 25 30 Val Leu Phe Phe Ser Pro Leu Thr Arg Asn Phe Gly Ala lie Leu Leu 35 40 45 Ser Arg Arg Lys Pro Arg Leu Ala Val Cys Phe Val Leu Glu Asn Glu 50 55 60 Lys Leu Asn Ser Thr lie Glu Ser Glu Ser Glu Val lie Glu Asp Arg 65 70 75 1 80 lie Gln Val Glu lie Asn Glu Glu Lys Ser Leu Ala Ala Ser Trp Leu 85 90 95 Ala Glu Lys Leu Ala Arg Lys Lys Ser Glu Arg Phe Thr Tyr Leu Val 100 105 110 Ala Ala Val Met Ser Ser Leu Gly lie Thr Ser Met Ala lie Leu Ala 115 120 125 Val Tyr Tyr Arg Phe Ser Trp Gln Met Glu Gly Gly Glu Val Pro Phe 130 135 140 Ser Glu Met Leu Ala Thr Phe Thr Leu Ser Phe Gly Ala Ala Val Gly 145 150 155 160 Met Glu Tyr Trp Ala Arg Trp Ala His Arg Ala Leu Trp His Ala Ser 165 170 175 Leu Trp His Met His Glu Ser His His Arg Pro Arg Glu Gly Pro Phe 180 185 190 Glu Met Asn Asp Val Phe Ala lie Thr Asn Ala Val Pro Ala lie Gly 195 200 205 Leu Leu Ser Tyr Gly Phe Phe His Lys Gly lie Val Pro Gly Leu Cys 210 215 220 Phe Gly Ala Gly Leu Gly lie Thr Val Phe Gly Met Ala Tyr Met Phe 225 230 235 240 Val His Asp Gly Leu Val His Lys Arg Phe Pro Val Gly Pro lie Ala 245 250 255 Asn Val Pro Tyr Phe Arg Arg Val Ala Ala Ala His Gln Leu His His 260 265 270 Ser Asp Lys Phe Asp Gly Val Pro Tyr Gly Leu Phe Leu Gly Pro Lys 275 280 285 Glu Leu Glu Glu Val Gly Gly Leu Glu Glu Leu Glu Lys Glu Val Asn 290 295 300 Arg Arg lie Lys lie Ser Lys Gly Leu Leu 305 310 <210> 85 <211> 34 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) . - (34) <223> <400> 85 ccatyyaagc tcttctcaag ccttttccat 34 <210> 86 <211> 34 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) · • (34) <223> <400> 86 ggatcctcaa aggctctcta ttgctagatt 34 <210> 87 <211> 1505 <212> ADN <213> Lycopersicon esculentum <220> <221> CDS <222> (3) .. (1505) <223> <400> 87 ce atg gaa gct ctt ctc aag cct ttt cca tct ctt tta ctt tcc tct 47 Met Glu Ala Leu Leu Lys Pro Phe Pro Ser Leu Leu Leu Ser Ser 1 5 10 15 cct acá ccc cat agg tct att ttc caá caá aat ccc tct ttt cta agt 95 Pro Thr Pro His Arg Ser lie Phe Gln Gln Asn Pro Ser Phe Leu Ser 20 25 30 ccc acc acc aaa aaa aaa tea aga aaa tgt ctt ctt aga aac aaa agt 143 Pro Thr Thr Lys Lys Lys Ser Arg Lys Cys Leu Leu Arg Asn Lys Ser 35 40 45 agt aaa ctt ttt tgt age ttt ctt gat tta gca ccc acá tea aag cca 191 Ser Lys Leu Phe Cys Ser Phe Leu Asp Leu Ala Pro Thr Ser Lys Pro 50 55 60 gag tct tta gat gtt aac ate tea tgg gtt gat cct aat teg aat cgg 239 Glu Ser Leu Asp Val Asn lie Ser Trp Val Asp Pro Asn Ser Asn Arg 65 70 75 gct caá ttc gac gtg ate att ate gga gct ggc cct gct ggg ctc agg 287 Ala Gln Phe Asp Val lie lie lie Gly Ala Gly Pro Ala Gly Leu Arg 80 85 90 95 cta gct gaa caá gtt tct aaa tat ggt att aag gta tgt tgt gtt gac 335 Leu Ala Glu Gln Val Ser Lys Tyr Gly lie Lys Val Cys Cys Val Asp 100 105 > 110 cct tea cca ctc tcc atg tgg cca aat aat tat ggt gtt tgg gtt gat 383 Pro Ser Pro Leu Ser Met Trp Pro Asn Asn Tyr Gly Val Trp Val Asp 115 120 125 gag ttt gag aat tta gga ctg gaa aat tgt tta gat cat aaa tgg cct 43.1 Glu Phe Glu Asn Leu Gly Leu Glu Asn Cys' Leu Asp His Lys Trp Pro 130 135 140 atg act tgt gtg cat ata aat gat aac aaa act aag tat ttg gga aga 479 Met Thr Cys Val His lie Asn Asp Asn Lys Thr Lys Tyr Leu Gly Arg 145 150 155 cca tat ggt aga gtt agt aga aag aag ctg aag ttg aaa ttg ttg aat 527 Pro Tyr Gly Arg Val Ser Arg Lys Lys Leu Lys Leu Lys Leu Leu Asn 160 165 170 175 agt tgt gtt gag aac aga gtg aag ttt tat aaa gct aag gtt tgg aaa 575 Ser Cys Val Glu Asn Arg Val Lys Phe Tyr Lys Ala Lys Val Trp Lys 180 185 190 gtg gaa cat gaa gaa ttt gag tct tca att gtt tgt gat gat ggt aag 623 Val Glu His Glu Glu Phe Glu Ser Ser lie Val Cys Asp Asp Gly Lys 195 200 205 aag ata aga ggt agt ttg gtt gtg gat gca agt ggt ttt gct agt gat 671 Lys lie Arg Gly Ser Leu Val Val Asp Ala Ser Gly Phe Ala Ser Asp 210 215 220 ttt ata gag tat gac agg cea aga aac cat ggt tat caá att gct cat 719 Phe lie Glu Tyr Asp Arg Pro Arg Asn His Gly Tyr Gln lie Ala His 225 230 235 ggg gtt tta gta gaa gtt gat aat cat cea ttt gat ttg gat aaa atg 767 Gly Val Leu Val Glu Val Asp Asn His Pro Phe Asp Leu Asp Lys Met 240 245 250 255 gtg ctt atg gat tgg agg gat tct cat ttg ggt aat gag cea tat tta 815 Val Leu Met Asp Trp Arg Asp Ser His Leu Gly Asn Glu Pro Tyr Leu 260 265 270 agg gtg aat aat gct aaa gaa cea acá ttc ttg tat gca atg cea ttt 863 Arg Val Asn Asn Ala Lys Glu Pro Thr Phe Leu Tyr Ala Met Pro Phe 275 280 285 gat aga gat ttg gtt ttc ttg gaa gag act tct ttg gtg agt cgt ect 911 Asp Arg Asp Leu Val Phe Leu Glu Glu Thr Ser Leu Val Ser Arg Pro 290 295 300 gtt tta teg tat atg gaa gta aaa aga agg atg gtg gca aga tta agg 959 Val Leu Ser Tyr Met Glu Val Lys Arg Arg Met Val Ala Arg Leu Arg 305 310 315 cat ttg ggg ate aaa gtg aaa agt gtt att gag gaa gag aaa tgt gtg 1007 His Leu Gly lie Lys Val Lys Ser Val lie Glu Glu Glu Lys Cys Val 320 325 330 > 335 ate ect atg gga gga cea ctt ceg cgg att ect caá aat gtt atg gct 1055 lie Pro Met Gly Gly Pro Leu Pro Arg lie Pro Gln Asn Val Met Ala 340 345 350 att ggt ggg aat tca ggg ata gtt cat cea tca acá ggg tac atg gtg 1103 lie Gly Gly Asn Ser Gly lie Val His Pro Ser Thr Gly Tyr Met Val 355 360 365 gct agg age atg gct tta gca cea gta cta gct gaa gee ate gtc gag 1151 Ala Arg Ser Met Ala Leu Ala Pro Val Leu Ala Glu Ala lie Val Glu 370 375 · 380 ggg ctt ggc tca acá aga atg ata aga ggg tct caá ctt tac cat aga 1199 Gly Leu Gly Ser Thr Arg Met lie Arg Gly Ser Gln Leu Tyr His Arg 385 390 395 gtt tgg aat ggt ttg tgg ect ttg gat aga aga tgt gtt aga gaa tgt 1247 Val Trp Asn Gly Leu Trp Pro Leu Asp Arg Arg Cys Val Arg Glu Cys 400 405 410 415 tat tea ttt ggg atg gag acá ttg ttg aag ctt gat ttg aaa ggg act 1295 Tyr Ser Phe Gly Met Glu Thr Leu Leu Lys Leu Asp Leu Lys Gly Thr 420 425 430 agg aga ttg ttt gac gct ttc ttt gat ctt gat ect aaa tac tgg caá 1343 Arg Arg Leu Phe Asp Ala Phe Phe Asp Leu Asp Pro Lys Tyr Trp Gln 435 440 445 ggg ttc ctt tet tea aga ttg tet gtc aaa gaa ctt ggt tta etc age 1391 Gly Phe Leu Ser Ser Arg Leu Ser Val Lys Glu Leu Gly Leu Leu Ser 450 455 460 ttg tgt ctt ttc gga cat ggc tea aac atg act agg ttg gat att gtt 1439 Leu Cys Leu Phe Gly His Gly Ser Asn Met Thr Arg Leu Asp lie Val 465 470 475 acá aaa tgt ect ctt ect ttg gtt aga ctg att ggc aat cta gca ata 1487 Thr Lys Cys Pro Leu Pro Leu Val Arg Leu lie Gly Asn Leu Ala lie 480 4,85 490 495 gag age ctt tga gga tec 1505 Glu Ser Leu Gly Ser 500 <210> 88 <211> 498 <212> PRT <213> Lycopersicon esculentum <400> 88 Met Glu Ala Leu Leu Lys Pro Phe Pro Ser Leu Leu Leu Ser Ser Pro 1 5 10 15 Thr Pro His Arg Ser lie Phe Gln Gln Asn Pro Ser Phe Leu Ser Pro 20 25 30 Thr Thr Lys Lys Lys Ser Arg Lys Cys Leu Leu Arg Asn Lys Ser Ser 35 40 45 Lys Leu Phe Cys Ser Phe Leu Asp Leu Ala Pro Thr Ser Lys Pro Glu 50 55 60 Ser Leu Asp Val Asn lie Ser Trp Val Asp Pro Asn Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 Gln Phe Asp Val lie lie lie Gly Ala Gly Pro Ala Gly Leu Arg Leu 85 90 95 Ala Glu Gln Val Ser Lys Tyr Gly lie Lys Val Cys Cys Val Asp Pro 100 105 110 Ser Pro Leu Ser Met Trp Pro Asn Asn Tyr Gly Val Trp Val Asp Glu 115 120 125 Phe Glu Asn Leu Gly Leu Glu Asn Cys Leu Asp His Lys Trp Pro Met 130 135 140 Thr Cys Val His lie Asn Asp Asn Lys Thr Lys Tyr Leu Gly Arg Pro 145 150 155 160 Tyr Gly Arg Val Ser Arg Lys Lys Leu Lys Leu Lys Leu Leu Asn Ser 165 170 175 Cys Val Glu Asn Arg Val Lys Phe Tyr Lys Ala Lys Val Trp Lys Val 180 185 190 Glu His Glu Glu Phe Glu Ser Ser lie Val Cys Asp Asp Gly Lys Lys 195 200 205 lie Arg Gly Ser Leu Val Val Asp Ala Ser Gly Phe Ala Ser Asp Phe 210 215 220 lie Glu Tyr Asp Arg Pro Arg Asn His Gly Tyr Gln lie Ala His Gly 225 230 235 240 Val Leu Val Glu Val Asp Asn His Pro Phe Asp Leu Asp Lys Met Val 245 250 255 Leu Met Asp Trp Arg Asp Ser His Leu Gly Asn Glu Pro Tyr Leu Arg 260 265 270 Val Asn Asn Ala Lys Glu Pro Thr Phe Leu Tyr Ala Met Pro Phe Asp 275 280 285 Arg Asp Leu Val Phe Leu Glu Glu Thr Ser Leu Val Ser Arg Pro Val 290 295 300 Leu Ser Tyr Met Glu Val Lys Arg Arg Met Val Ala Arg Leu Arg His 305 310 315 320 Leu Gly lie Lys Val Lys Ser Val lie Glu Glu Glu Lys Cys Val lie 325 330 ·> 335 Pro Met Gly Gly Pro Leu Pro Arg lie Pro Gln Asn Val Met Ala Ilc 340 345 350 Gly Gly Asn Ser Gly lie Val His Pro Ser Thr Gly Tyr Met Val Ala 355 360 365 Arg Ser Met Ala Leu Ala Pro Val Leu Ala Glu Ala lie Val Glu Gly 370 375 380 Leu Gly Ser Thr Arg Met lie Arg Gly Ser Gln Leu Tyr His Arg Val 385 390 395 · 400 Trp Asn Gly Leu Trp Pro Leu Asp Arg Arg Cys Val Arg Glu Cys Tyr 405 410 415 Ser Phe Gly Met Glu Thr Leu Leu Lys Leu Asp Leu Lys Gly Thr Arg 420 425 430 Arg Leu Phe Asp Ala Phe Phe Asp Leu Asp Pro Lys Tyr Trp Gln Gly 435 440 445 Phe Leu Ser Arg Leu Ser Val Lys Glu Leu Gly Leu Leu Ser Leu 450 455 460 Cys Leu Phe Gly His Gly Ser Asn Met Thr Arg Leu Asp lie Val Thr 465 470 475 480 Lys Cys Pro Leu Pro Leu Val Arg Leu lie Gly Asn Leu Ala lie Glu 485 490 495 Ser Leu <210> 89 <211> 37 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) . · (37) <223> <400> 89 gagctcgata tctttgccag tattacaaca gcttata 37 <210> 90 <211> 31 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) · · (31) <223> <400> 90 cccgggttta ctgaaaaata acagtaaaac c 31 <210> 91 <211> 2096 <212> ADN <213> Lycopersicon esculentum <220> <221> Promotor <222> (1) .. (2096) <223> <400> 91 gagctcgata tctttgccag tattacaaca gcttatatgt tgagcaggta aaagcttcaa 60 tgccctattc tttctacagt tatcaatgtt gctcgtctaa tatctggtgt tcttctcgaa 120 atgtcaattg gcttgcagca cattgtcctc taatatccat tcaagcttct tagatgatga aacatttgtc aaatttatta atttcatagt gttcagtctc aattctttag ctgtttcctc 240 atagtaaagt tgtctaatat gaaatgaaaa tgttctgtgt gttgtactaa taccttttca 300 tggttgtcta tagaacgtcg atgaagagcc aaacagaaac tattttgggc tgcgatttct 360 gataccattg tatctgaatg ctgggtggga gctcatcaga agctttacaa tgggtcacat 420 atatggagcc gagtatgagg aatgctggga atcagttgtg cttcgcgtgc taggactttt 480 ccttcctggt atttctgccc acagcccagt tgattacgtg aactccgtca gacttggaaa 540 ggagagaagt acccaaatgt cgtcttttta gaaatacttt tgtcacaaaa tagcggggtt 600 tacagctaca gaagatcatg cagaaggcgt ccagtttagt ttttgaaggt tgtttggagt 660 ttatttatct aaagtaaact taaatcagct ttttgtttat gagttcagtg aactatatgt 720 tcaaataaga cttccctttg tagaatatgt gttttttttt gttgttgagc actttgtgtg 780 cattggataa acccccaacg tgtaatagct accatacaag agaagtaact cgcactgtcc 840 atgtcttatg tggctcgact cagaaagcat tcagggggat tgataaccac cctccaaacc 900 aactgaacca ttgtgaataa ccacccttca aatcaaccga gtcctcgtga aggacaaata 360 tgtggtttta tatacattaa attttgtttt tacatgcttc ctcttacttc tttagttttc 1020 ttgaccatat cttctttttc ccttctgtaa ttgacatttt cttcaaácca tccagcaatg 1080 tggaagcttg acgattttcc ttcagagtag aaattgaaaa gaatcaacta aaaaggatag 1140 tccttcgatt tgatttccgg cttaaaaata aactaataag aatgagagag cgaataatag 1200 aatattttga aattttaaag atattcaact atgttaaatt gcgtfcataaa tttcttaaat 1260 tágtagcacc taatagttta gttctcaaaa gtcaaaacta ctacataatg tgctcatttt 1320 tcacattaaa atgcctacat gatgtaaaag taaaactcgt agcattctac gtgttttact 1380 caactcaaac atcctgttca ttttaataaa cgtacgatga gcttctctct ccaattttct 1440 tttctttttt ttttttaaaa aaatattttt ttttatatca atccaaatgg gctccaattt 1500 atcataaatt aggtagaaac ttagatatta aagaaagaaa agggtttatc tcgcaagtgt 1560 ggctatggtg ggacgtgtca aattttggat tgtagccaaa catgagattt gatttaaagg 1620 gaattggcca aatcaccgaa agcaggcatc ttcatc'ataa attagtttgt ttatttatac 1680 agaattatac gcttttacta gttatagcat tcggtatctt tttctgggta actgccaaac 1740 caccacaaat ttcaagtttc catttaactc ttcaacttca acccaaccaa atttatttgc 1800 ttaattgtgc agaaccactc cctatatctt ctaggtgctt tcattcgttc cgaggtaaga 1860 aaagattttt gtttctttga atgctttatg ccactcgttt aacttctgag gtttgtggat 1920 cttttaggcg actttttttt tttttgtatg taaaatttgt ttcataaatg cttctcaaca 1980 taaatcttga caaagagaag gaattttacc aagtatttag gttcagaaat ggataatttt 2040 cttactgtga aatatcctta tggcaggttt tactgttatt tttcagtaaa cccggg 2096 <210> 92 <211> 25 <212>- ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer o cebador <222> (1) - - (25; <223> <400> 92 taagcttttt gttgsagaga tttgg <210> 93 . .. <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <221> Primer c rebarior <222> (1) . - (24! <223> <400> 93 gaatucctgc aatacaatgt tgag 24

Claims (35)

  1. RE I V I N D I C A C I O N E S 1. Procedimiento, CARACTERIZADO porque sirve para la elaboración de cetocaroteoides mediante el cultivo de plantas genéticamente modificadas que presentan en los frutos una actividad cetolasa.
  2. 2. Procedimiento conforme a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque se emplean plantas genéticamente modificadas que expresan en los frutos una cetolasa.
  3. 3. Procedimiento conforme a la -reivindicación 1 ó 2, CARACTERIZADO porque se emplean plantas genéticamente modificadas que contienen en los frutos por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
  4. 4. Procedimiento conforme a la reivindicación 3, CARACTERI ADO porque se emplean plantas genéticamente modificadas en las que se ha introducido¾ a partir de un ortet por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
  5. 5. Procedimiento conforme a la reivindicación 4, CARACTERIZADO porque se introducen ácidos nucleicos que codifican una proteina, que contienen la secuencia de aminoácido SEQ ID No. 2 o una .secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presenta una identidad de por lo menos un 20% a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID No. 2 y la propiedad enzimática de una cetolasa.
  6. 6. Procedimiento conforme a la reivindicación 4, CARACTERIZADO porque se introduce ácidos nucleicos que contienen la secuencia SEQ ID No. 1.
  7. 7. Procedimiento conforme a la reivindicación 4, CARACTERIZADO porque se introducen ácidos nucleicos que codifican una proteina que contienen la secuencia de aminoácido SEQ ID No. 16 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presenta una identidad de por lo menos un 20% a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID No. 16 y la propiedad enzimática de una cetolasa.
  8. 8. Procedimiento conforme a la reivindicación 6, CARACTERIZADO porque se introducen ácidos nucleicos que contienen la secuencia SEQ ID No. 15.
  9. 9. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 a 8, CARACTERIZADO^ porque se emplean plantas genéticamente modificadas que presentan en los frutos la velocidad de expresión más alta de una cetolasa.
  10. 10. Procedimiento conforme a la reivindicación '9, CARACTERIZADO porque se realiza la expresión genética de la cetolasa bajo el control de un promotor especifico de fruto.
  11. 11. Procedimiento conformé a una de las reivindicaciones 1 a 10, CARACTERIZADO porque las plantas presentan en forma adicional frente al tipo silvestre una actividad aumentada de por lo menos una de las actividades, seleccionadas del grupo de actividad idroxilasa y actividad ß-ciclasa.
  12. 12. Procedimiento conforme a la reivindicación 11, CARACTERIZADO porque para el aumento adicional de por lo menos una de las actividades, sé aumenta la expresión genética de al menos un ácido nucleico seleccionado del grupo de ácidos nucleicos que codifican una hidroxilasa y ácidos nucleicos que codifican una ß-ciclasa frente al tipo silvestre .
  13. 13. Procedimiento conforme a la reivindicación 12, CARACTERIZADO porque se introduce en la-, planta por lo menos un ácido nucleico del grupo de ácidos nucleicos que codifican una hidroxilasa y. ácidos nucleicos que codifican una ß-ciclasa para aumentar la expresión genética de por lo menos uno de los ácidos nucleicos.
  14. 14. Procedimiento conforme a la reivindicación 13, CARACTERIZADO porque se introduce como ácido nucleico que codifica una hidroxilasa ácidos nucleicos que codifican una hidroxilasa que contienen la secuencia de aminoácido SEQ 'ID NO: 52 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presenta una identidad de por lo menos un 20% a "nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO: 52.
  15. 15. Procedimiento conforme a la reivindicación 14, CARACTERIZADO porque se introducen ácidos nucleicos que contienen la secuencia SEQ ID NO: 51.
  16. 16. Procedimiento conforme a la reivindicación 13, CARACTERIZADO porque se introducen como ácido nucleico que codifica una ß-ciclasa ácidos nucleicos que codifican una ß-ciclasa, que contienen la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 54 o una secuencia derivada de esta secuencia mediante sustitución, inserción o deleción, que presenta una identidad de por lo menos un 20% a nivel de aminoácido con la secuencia SEQ ID NO: 54.
  17. 17. Procedimiento conforme a la reivindicación 16, CARACTERIZADO porque se introducen ácidos nucleicos que contienen la secuencia SEQ ID NO: 53-.
  18. 18. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 11 a 7, CARACTERIZADO porque se emplean plantas genéticamente modificadas que presentan en las flores la velocidad de expresión más alta de una hidroxilasa y/o ß-ciclasa.
  19. 19. Procedimiento conforme a la reivindicación 18, CARACTERIZADO porque se realiza la expresión genética de la hidroxilasa y/o ß-ciclasa bajo el control de un promotor especifico de flores.
  20. 20. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 a 10, CARACTERIZADO porque se emplea como planta una planta que presenta cromoplastos en los frutos.
  21. 21. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 a 20, CARACTERIZADO porque se emplea como planta una planta seleccionada de Actinophloeus , Aglaeonema, Ananas, Arbutus, Archontophoenix, Area, Aronia, Asparagus, Attalea, Berberís, Bixia, .¡.Brachychilum, Bryonia, Caliptocalix, Capsicum, Carica, Celástrus, Citrulus, Citrus, Convallaria, Cotoneaster, Crataegus, Cucumis, Cucúrbita, Cuscuta, Cycas, Cyphomandra, .Dioscorea, Diospyrus, Dura, Elaeagnus, Elaeis, Erythroxylon, Euonymus, Ficus, Fortunella, Fragaria, Gardinia, Gonocaryum, Gossypium, Guava, Guilielma, Hibiscus, Hippophaea, Iris, Lathyrus, Lonicera, Luffa, Lycium, Lycopersicum, Malpighia, Mangifera, Mormodica, urraya, Musa, Ñenga, Palisota, Pandanus, Passiflora, Persea, Physalis, Prunus, Ptychandra, Púnica, Pyracantha, Pyrus, Ribes, Rosa, Rubus, Sabal, Sambucus, Seaforita, Shepherdia, Solanum, Sorbus, Synaspadix, Tabernae, Tamus, Taxus, Trichosanthes, Triphasia, Vaccinium, iburnum, Vignia o Vitis.
  22. 22. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 a 21, CARACTERIZADO porque se cosecha después del cultivo las plantas genéticamente modificadas y a continuación, se aislan los cetocarotenoides de los frutos de las plantas.
  23. 23. Procedimiento conforme a las reivindicaciones 1 a 22, CARACTERIZADO porque se seleccionan los cetocarotenoides del grupo compuesto por astaxantina, cantaxantina, equinenona, 3-hidroxiequinenona, 3'-hidroxiequinenona, adonirubina y adonixantina .
  24. 24. Constructo de ácido nucleico, CARACTERIZADO porque contiene en forma funcionalmente unida un promotor especifico de fruto y un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
  25. 25. Planta genéticamente modificada, CARACTERIZADA porque presenta una actividad cetolasa en los frutos.
  26. 26. Planta genéticamente modificada conforme a la reivindicación 25, CARACTERIZADA porque la planta genéticamente modificada expresa una cetolasa en los frutos .
  27. 27. Planta genéticamente modificada conforme a la reivindicación 25 ó 26, CARACTERIZADA porque contiene en los frutos por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
  28. 28. Planta genéticamente modificada conforme a una de las reivindicaciones 25 a 27, CARACTERIZADA porque se ha introducido en la planta a partir de un ortet por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
  29. 29. Planta genéticamente modificada conforme a una de las reivindicaciones 25 a 28, CARACTERIZADA porque el cambio genético aumenta en forma adicional por lo menos una de las actividades, seleccionadas del grupo compuesto por actividad hidroxilasa y actividad ß-ciclasa, frente a una planta de tipo silvestre.
  30. 30. Planta genéticamente modificada, seleccionada de los géneros de plantas Actinophloeus, Aglaeonema, Ananas, Arbutus, Archontophoenix, Area, Aronia, Asparagus, Attalea, Berberís, Bixia, Brachychilum, Bryonia, Caliptocalix, Capsicum, Carica, Celastrus, Citruliis, Citrus, Convallaria, Cotoneaster, Crataegus, Cucumis, Cucúrbita, Cuscuta, Cycas, Cyphomandra, Dioscorea, Diospyrus, Dura, Elaeagnus, Elaeis, Erythroxylon, Euonymus, Ficus, Fortunella, Fragaria, Gardinia, Gonocaryum, Gossypium, Guava, Guilielma, Hibiscus, Hippophaea, Iris, Lathyrus, Lonicera, Luffa, Lycium, Lycopersicum, Malpíghia, Mangifera, Mormodica, Murraya, Musa, enga, Palisota, Pandanus, Passiflora, Persea, Physalis, Prunus, Ptychandra, Púnica, Pyracantha, Pyrus, Ribes, Rosa, Rubus, Sabal, Sambucus, Seaforita, Shepherdia, Solanum, Sorbus, Synaspadix, Tabernae, Tamus, Taxus, Trichosanthes , Triphasia, Vaccinium, Viburnum, Vignia o^Vitis, que contienen por lo menos un ácido nucleico que codifica una cetolasa.
  31. 31. Planta genéticamente modificada conforme a la reivindicación 30, CARACTERIZADA porque se expresa la cetolasa en los frutos.
  32. 32. Planta genéticamente modificada conforme a una de las reivindicaciones 25 a 31, CARACTERIZ DA porque la velocidad de expresión de una cetolasa es la más alta en los frutos.
  33. 33. Uso de las plantas genéticamente modificadas conforme a una de las reivindicaciones 25 a 32, CARACTERIZADO porque se utiliza como forraje o alimentos.
  34. 34. Uso de los frutos de las plantas genéticamente modificadas conforme a una de las reivindicaciones 25 a 32, CARACTERIZADO porque sirve para la 'elaboración de extractos que contienen cetocarotenoide o' para la elaboración de suplementos de forraje o alimentos.
  35. 35. Procedimiento para la elaboración de plantas genéticamente modificadas conforme a la reivindicación 32, CARACTERIZADO porque se introduce en el genoma del ortet un constructo de ácido nucleico que .contiene en forma funcionalmente unida un promotor especifico de fruto y ácidos nucleicos que codifican una cetolasa.
MXPA05001944A 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para elaborar cetocarotenoides en frutos de plantas. MXPA05001944A (es)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10238978A DE10238978A1 (de) 2002-08-20 2002-08-20 Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden in Früchten von Pflanzen
DE10238979A DE10238979A1 (de) 2002-08-20 2002-08-20 Verfahren zur Herstellung von Zeaxanthin und/oder dessen biosynthetischen Zwischen- und/oder Folgeprodukten
DE2002138980 DE10238980A1 (de) 2002-08-20 2002-08-20 Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden in Blütenblättern von Pflanzen
DE2002153112 DE10253112A1 (de) 2002-11-13 2002-11-13 Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden in genetisch veränderten Organismen
DE2002158971 DE10258971A1 (de) 2002-12-16 2002-12-16 Verwendung von astaxanthinhaltigen Pflanzen oder Pflanzenteilen der Gattung Tagetes als Futtermittel
PCT/EP2003/009107 WO2004018695A2 (de) 2002-08-20 2003-08-18 Verfahren zur herstellung von ketocarotinoiden in früchten von pflanzen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA05001944A true MXPA05001944A (es) 2005-06-22

Family

ID=31950810

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA05001948A MXPA05001948A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Uso de plantas que contienen astaxantina o partes de plantas del genero tagetes como alimento para animales.
MXPA05001944A MXPA05001944A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para elaborar cetocarotenoides en frutos de plantas.
MXPA05001811A MXPA05001811A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para la elaboracion de cetocarotenoides en petalos de plantas.
MXPA05001899A MXPA05001899A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para preparar cetocarotinoides en organismos modificados geneticamente.
MXPA05001659A MXPA05001659A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para elaborar zeaxantina y/o sus productos intermedios y/o degradacion biosinteticos.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA05001948A MXPA05001948A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Uso de plantas que contienen astaxantina o partes de plantas del genero tagetes como alimento para animales.

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA05001811A MXPA05001811A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para la elaboracion de cetocarotenoides en petalos de plantas.
MXPA05001899A MXPA05001899A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para preparar cetocarotinoides en organismos modificados geneticamente.
MXPA05001659A MXPA05001659A (es) 2002-08-20 2003-08-18 Procedimiento para elaborar zeaxantina y/o sus productos intermedios y/o degradacion biosinteticos.

Country Status (12)

Country Link
US (5) US20070094749A1 (es)
EP (5) EP1542945A2 (es)
CN (1) CN1675367A (es)
AT (1) ATE484198T1 (es)
AU (5) AU2003253416A1 (es)
CA (5) CA2495878A1 (es)
DE (1) DE50313184D1 (es)
IL (4) IL166507A0 (es)
MX (5) MXPA05001948A (es)
NO (5) NO20050598L (es)
WO (5) WO2004018693A2 (es)
ZA (1) ZA200602230B (es)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003250193A1 (en) * 2002-08-20 2004-04-08 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Transgenic expression cassettes for the expression of nucleic acids in plant blooms
US20070094749A1 (en) * 2002-08-20 2007-04-26 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Method for producing ketocarotinoids in plant fruit
EP1532256A1 (de) * 2002-08-20 2005-05-25 Sungene GmbH & Co. KGaA VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG VON &bgr;-CAROTINOIDEN
EP1554388A1 (de) * 2002-10-11 2005-07-20 Sungene GmbH & Co. KGaA Transgene expressionskassetten zur expression von nukleinsäuren in der pflanzlichen blüte
DE10300649A1 (de) * 2003-01-09 2004-07-22 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden durch Kultivierung von genetisch veränderten Organismen
EP1780281B1 (en) * 2004-06-04 2013-12-11 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha Method of producing astaxanthin or metabolic product thereof by using carotenoid ketolase and carotenoid hydroxylase genes
EP1866428A2 (en) 2005-03-18 2007-12-19 Microbia, Inc. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
AU2006269823B2 (en) * 2005-07-11 2012-08-02 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Wheat pigment
US8691555B2 (en) 2006-09-28 2014-04-08 Dsm Ip Assests B.V. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
CN101617039A (zh) * 2006-10-20 2009-12-30 代表亚利桑那大学的亚利桑那校董会 经修饰的蓝细菌
PE20090446A1 (es) * 2007-07-19 2009-05-06 Biosigma Sa Plasmidos para transformar una bacteria del genero acidithiobacillus spp. y metodo de transformacion
US20090093015A1 (en) * 2007-10-09 2009-04-09 Kemin Foods, L.C. Beta-cryptoxanthin production using a novel lycopene beta-monocyclase gene
US20120156718A1 (en) * 2008-12-17 2012-06-21 Basf Plant Science Gmbh Production of Ketocarotenoids in Plants
EP2199399A1 (en) * 2008-12-17 2010-06-23 BASF Plant Science GmbH Production of ketocarotenoids in plants
RU2676730C2 (ru) * 2011-08-08 2019-01-10 Эвольва Са. Способы и вещества для основанного на рекомбинации получения соединений шафрана
AU2012346056B2 (en) 2011-11-29 2018-02-22 Proclara Biosciences, Inc. Use of P3 of bacteriophage as amyloid binding agents
ES2558953B1 (es) * 2015-11-23 2016-11-18 Universitat De Lleida Maíz enriquecido en antioxidantes para mejorar la calidad nutricional del huevo
JP2019165635A (ja) * 2016-08-10 2019-10-03 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
US10004253B1 (en) * 2017-09-05 2018-06-26 Jose-Odon Torres-Quiroga Method for increasing the health condition of crustaceans in aquaculture, survival rate and pigmentation
CN112458103B (zh) * 2021-01-28 2022-09-30 青岛农业大学 一种调控辣椒红素积累的基因CaBBX20及其应用

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9016012D0 (en) 1990-07-20 1990-09-05 Unilever Plc Pigments
WO1995018220A1 (fr) * 1993-12-27 1995-07-06 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Chaine d'adn utilisee pour la synthese de xanthophylles, synthese et procede de preparation de xanthophylles
US5916791A (en) * 1995-11-24 1999-06-29 Hirschberg; Joseph Polynucleotide molecule from Haematococcus pluvialis encoding a polypeptide having a β--C--4--oxygenase activity for biotechnological production of (3S,3S)astaxanthin
US6429356B1 (en) 1996-08-09 2002-08-06 Calgene Llc Methods for producing carotenoid compounds, and specialty oils in plant seeds
BR9713462A (pt) * 1996-08-09 2000-03-28 Calgene Inc Métodos para produção de compostos carotenóides e óleos especiais em sementes de plantas.
US5876782A (en) * 1997-05-14 1999-03-02 Kemin Industries, Inc. Method for the conversion of xanthophylls in plant material
US6221417B1 (en) * 1997-05-14 2001-04-24 Kemin Industries, Inc. Conversion of xanthophylls in plant material for use as a food colorant
JP2002516117A (ja) * 1998-05-22 2002-06-04 ユニバーシティ オブ メリーランド カロチノイド・ケトラーゼ遺伝子及び遺伝子生成物、ケトカロチノイドの生成及び遺伝子を用いてカロチノイドを変成する方法
AU4410999A (en) * 1998-06-02 1999-12-20 University Of Maryland Genes of carotenoid biosynthesis and metabolism and methods of use thereof
US6232530B1 (en) * 1998-11-30 2001-05-15 University Of Nevada Marigold DNA encoding beta-cyclase
DE19916140A1 (de) * 1999-04-09 2000-10-12 Basf Ag Carotinhydroxylase und Verfahren zur Herstellung von Xanthophyllderivaten
SE9903336D0 (sv) 1999-09-17 1999-09-17 Astacarotene Ab DNA construct and its use
US20050003474A1 (en) * 2001-01-26 2005-01-06 Desouza Mervyn L. Carotenoid biosynthesis
DE10201458A1 (de) * 2001-04-11 2002-10-17 Adelbert Bacher Intermediate und Enzyme des Mevalonat-unabhängigen Isoprenoidbiosyntheseweg
US6784351B2 (en) * 2001-06-29 2004-08-31 Ball Horticultural Company Targetes erecta marigolds with altered carotenoid compositions and ratios
US7575766B2 (en) * 2001-06-29 2009-08-18 Ball Horticultural Company Tagetes erecta with altered carotenoid compositions and ratios
US6372946B1 (en) * 2001-09-13 2002-04-16 Prodemex, S.A. De C.V. Preparation of 4,4′-diketo-β-carotene derivatives
ES2394880T3 (es) 2002-03-11 2013-02-06 Dsm Ip Assets B.V. Tasas de alimentación y crecimiento mejoradas de animales acuáticos alimentados con un producto astaxantina dereivado de extracto de caléndula
US7223909B2 (en) 2002-03-21 2007-05-29 Ball Horticultural 4-ketocarotenoids in flower petals
US20070094749A1 (en) * 2002-08-20 2007-04-26 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Method for producing ketocarotinoids in plant fruit
DE10300649A1 (de) * 2003-01-09 2004-07-22 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden durch Kultivierung von genetisch veränderten Organismen
DE102004007623A1 (de) * 2004-02-17 2005-08-25 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Promotoren zur Expression von Genen in Tagetes

Also Published As

Publication number Publication date
US20060253927A1 (en) 2006-11-09
MXPA05001659A (es) 2005-07-22
ZA200602230B (en) 2007-05-30
WO2004017749A2 (de) 2004-03-04
AU2003264062B2 (en) 2008-01-03
IL166767A0 (en) 2006-01-15
NO20050704L (no) 2005-05-13
IL166507A0 (en) 2006-01-15
WO2004018694A3 (de) 2004-09-10
CA2495235A1 (en) 2004-03-04
AU2003253416A1 (en) 2004-03-11
EP1542945A2 (de) 2005-06-22
IL166771A0 (en) 2006-01-15
AU2003260423A1 (en) 2004-03-11
MXPA05001899A (es) 2005-08-29
US7381541B2 (en) 2008-06-03
WO2004018695A3 (de) 2004-10-14
CN1675367A (zh) 2005-09-28
NO20050755L (no) 2005-05-19
CA2495444A1 (en) 2004-03-04
WO2004018693A2 (de) 2004-03-04
CA2496207A1 (en) 2004-03-04
EP1531683B1 (de) 2010-10-13
EP1532265A2 (de) 2005-05-25
US7385123B2 (en) 2008-06-10
NO20050598L (no) 2005-04-07
AU2003258623A1 (en) 2004-03-11
IL166770A0 (en) 2006-01-15
WO2004018694A2 (de) 2004-03-04
US20060031963A1 (en) 2006-02-09
EP1532264A2 (de) 2005-05-25
EP1531683A2 (de) 2005-05-25
WO2004017749A3 (de) 2004-10-14
WO2004018385A3 (de) 2004-10-21
AU2003260424A1 (en) 2004-03-11
EP1532266A2 (de) 2005-05-25
MXPA05001811A (es) 2005-10-19
NO20050705L (no) 2005-05-18
ATE484198T1 (de) 2010-10-15
NO20050703L (no) 2005-05-09
WO2004018693A3 (de) 2004-12-09
MXPA05001948A (es) 2005-09-08
WO2004018385A2 (de) 2004-03-04
AU2003264062A1 (en) 2004-03-11
WO2004018695A2 (de) 2004-03-04
CA2496133A1 (en) 2004-03-04
US20070094749A1 (en) 2007-04-26
US20050281909A1 (en) 2005-12-22
US20060112451A1 (en) 2006-05-25
CA2495878A1 (en) 2004-03-04
DE50313184D1 (de) 2010-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MXPA05001944A (es) Procedimiento para elaborar cetocarotenoides en frutos de plantas.
US20060053513A1 (en) Method for producing ketocarotenoids by cultivating genetically modified organisms
US20060194274A1 (en) Method for producing ketocarotinoids in genetically modified, non-human organisms
DE10238980A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden in Blütenblättern von Pflanzen
CN100364438C (zh) 含虾青素的万寿菊属植物或植物部分作为饲料的用途
US20080060096A1 (en) Novel Ketolases and Method for Producing Ketocarotinoids
US20060059584A1 (en) Method for the production of $g(b)-carotinoids
DE10258971A1 (de) Verwendung von astaxanthinhaltigen Pflanzen oder Pflanzenteilen der Gattung Tagetes als Futtermittel
DE10253112A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden in genetisch veränderten Organismen
DE10238979A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Zeaxanthin und/oder dessen biosynthetischen Zwischen- und/oder Folgeprodukten

Legal Events

Date Code Title Description
FA Abandonment or withdrawal