MXPA03001575A - Metodos de tratamiento de un trastorno relacionado con bcl-2 utilizando oligomeros antisentido bcl-2. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se dirige al uso de oligomeros antisentido bc1-2 para tratar y prevenir trastornos relacionados con bc1-2. Estos trastornos incluyen canceres, tumores, carcinomas y trastornos relacionados con celulas proliferativas. En una modalidad de la invencion, un oligomero antisentido bc1-2 se administra en dosis altas. La presente invencion tambien se dirige a un metodo de prevencion o tratamiento de un trastorno relacionado con bc1-2, en particular cancer, que consiste en administrar un oligomero antisentido bc1-2 durante periodos de tiempo cortos. La presente invencion ademas se dirige al uso de los oligomeros antisentido bc1-2 para aumentar la sensibilidad de un individuo a los terapeuticos de cancer. La presente invencion tambien se refiere a las composiciones farmaceuticas que contienen uno o mas oligomeros antisentido bc1-2, las cuales pueden contener uno o mas agentes terapeuticos de cancer.

Description

MÉTODOS DE TRATAMIENTO DE UN TRASTORNO RELACIONADO CON BCL-2 UTILIZANDO OLIGÓMEROS ANTISENTIDO BCL-2 1. INTRODUCCIÓN La presente invención se dirige al uso de los oligómeros antisentido bcl-2 para tratar y prevenir trastornos relacionados con bcl-2. Estos trastornos incluyen cánceres, tumores, carcinomas y trastornos relacionados con la proliferación de células. En una modalidad de la invención, un oligómero antisentido bcl-2 se administra en dosis altas. La presente invención también se dirige a un método para la prevención o tratamiento de un trastorno relacionado con bcl-2, en particular cáncer, que consiste en administrar un oligómero antisentido bcl-2 durante tiempos cortos. La presente invención además se dirige al uso de los oligómeros antisentido bcl-2 para aumentar la sensibilidad de un individuo a terapéuticos de cáncer. La presente invención también se refiere a las composiciones f rmacéuticas que contienen uno o más oligómeros antisentido bcl-2, que pueden contener uno o más agentes terapéuticos de cáncer. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los enfoques tradicionales para el tratamiento contra cáncer adolecen de falta de especificidad. La mayor parte de los medicamentos que se han desarrollado son productos naturales o derivados que bloquean las vías enzimáticas o interactúan aleatoriamente con el DNA. Además, la mayor parte de los medicamentos de tratamiento contra cáncer se acompañan de toxicidades serias que limitan la dosis debido a los bajos índices terapéuticos. Por ejemplo, la mayoría de los medicamentos anticáncer cuando se administran a un paciente matan no solo las células cancerosas sino también las células normales, no cancerosas. Debido a estos efectos deletéreos, son necesarios tratamientos que afecten más específicamente las células cancerosas. Se ha encontrado que una clase de genes, los oncogenes, están involucrados en la transformación de las células, y en el mantenimiento de un estado canceroso. Vale la pena señalar que la disrupción de la transcripción de estos genes, o de otro modo, la inhibición de los efectos de sus productos proteínas, pueden tener un resultado terapéutico favorable. La función de los oncogenes en la etiología de múltiples canceres humanos ha sido revisada por Bishop, 1987, "Cellular Oncogenes and Retroviruses", Science, 235:305-311. En muchos tipos de canceres humanos, un gen denominado bcl-2 ( linfoma/leucemia de células B-2) se sobreexpresa, y esta sobreexpresión puede estar asociada con la tumorigenicidad (Tsujimoto y col., 1985, "Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lymphoma", Science 228:1440-1443) . Se cree que el gen bcl-2 contribuye a la patogénesis del cáncer, asi como a la resistencia al tratamiento, principalmente prolongando la supervivencia celular pref rentemente acelerando la división celular.

El gen bcl-2 humano esta implicado en la etiología de ciertas leucemias, tumores linfoides, linfomas, neuroblastomas y carcinomas nasofaríngeos, de próstata, de mama y de colon (Croce y col., 1987, "Molecular Basis Of Human B y T Cell Neoplasia", en: Advance in Viral Oncology, 7: 35-51, G. Klein (ed.), New York: Raven Press; Reed y col., 1991, "Differential expression of bcl-2 protooncogene in neurolastoma and other human tumor cell lines of neural origin", C ncer Res. 51: 6529-38; Yunis y col., 1989, "Bcl-2 y other genomic alterations in the prognosis of large-cell lymphomas" N. Engl. J. Med. 320: 1047-54; Campos y col., 1993, "High expression of bcl-2 protein in acute myeloid leukemia is associated with poor response to chemotherapy", Blood 81: 3091-6; McDonnell y col., 1992, "Expression of the protooncogene bcl-2 and its association with emergence of androgen-independent prostate cáncer", C ncer Res. 52: 6940-4; Lu y col., 1993, "Bcl-2 Protooncogene expression in Epstein Barr Virus-Associated Nasopharyngeal Carcinoma", Int. J. Cáncer 53: 29-35; Bonner y col., 1993, "bcl-2 protooncogene and the gastrointestinal mucosal epithelial tumor progression model as related to proposed morphologic and molecular sequences", Lab. Invest. 68: 43A) . Se ha encontrado que bcl-2 se sobreexpresa en una variedad de tumores que incluye el linfoma de no-Hodgkin, el cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorectal, cáncer de próstata, cáncer renal y leucemias agudas y crónicas (Reed, 1995, "Regulation of apoptosis by bcl-2 family proteins and its role in cáncer and chemoresistance" Curr. Opin. Oncol. 7: 541-6) .

Los oligonucleótidos, antisentido proporcionan herramientas terapéuticas potenciales para la disrupción especifica de la función del encogen. Estos DNA sintéticos, monocatenarios, cortos (por lo regular menos de 30 bases) tienen una secuencia complementaria a las regiones pre-irtRNA ó mRNA de un gen objetivo, y forman un dúplex híbrido por el apareamiento de bases con uniones hidrógeno. Esta hibridación puede romper la expresión del mRNA objetivo y la proteina que codifica, y así puede interferir con las interacciones corriente abajo y señalización. Ya que una molécula de mRNA da origen a múltiples copias de proteínas, la inhibición del mRNA puede ser más eficaz y más específica que causar la disrupción a nivel de la proteína, por ejemplo, mediante la inhibición de un sitio activo de la enzima.

Los oligodesoxinucleótidos sintéticos, complementarios para mRNA del oncogen c-myc han sido utilizados para inhibir específicamente la producción de la proteína c-myc, deteniendo de este modo el crecimiento de las células leucémicas humanas in vitro (Holt y col., 1988, Mol. Cell Biol. 8:963-73; Wickstrom y col., 1988, Proc. Nati. Acad Sci . USA, 85:1028-32) . También se han empleado oligodesoxinucleótidos como inhibidores específicos de retrovirus, incluido el virus de inmunodeficiencia humana (Zamecnik and Stephenson, 1978, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 75:280-4; Zamecnik y col., 1986, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 83 : 143-6) .

El uso de oligonucleótidos antisentido, con su capacidad para dirigir e inhibir genes individuales relacionados con el cáncer, ha demostrado ser prometedor en modelos de cáncer precllnicos. Estos oligómeros antisentido fós forotioato han mostrado una propiedad para inhibir la expresión de bcl-2 in vitro y erradicar tumores en modelos de ratón con xenoinjertos de linfomas. La resistencia a la quimioterapia de algunos cánceres ha sido vinculada con la expresión del oncogen bcl-2 (Grover y col., 1996, "Bcl-2 expression in malignant melanoma and its prognostic significance", Eur. J. Surg. Oncol. 22(4) : 347-9) . La administración de un oligómero antisentido bcl-2 puede reducir selectivamente los niveles de proteínas bcl-2 en xenoinjertos de tumor en ratones de laboratorio (Jansen y col., 1998, "bcl-2 antisense therapy chemosensitizes human melanoma in SCID mice", Nat . Med. 4(2) :232-4) . Además, la administración de un oligómero antisentido bcl-2 puede hacer más susceptibles a los agentes quimioterapéuticos los xenoinjertos de tumor en ratones de laboratorio (Jansen y col., 1998, "bcl-2 antisense therapy chemosensitizes human melanoma in SCID mice", Nat. Med. 4(2) : 232-4) . En ratones, el tratamiento sistémico con un oligómero antisentido bcl-2 redujo la proteina bcl-2 y mejoró la apoptosis. El tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 solo tuvo modesta actividad antitumoral, pero se observó mejor actividad antitumoral cuando se combinó con DTIC (también conocido como dacarbazina) . En diez de trece animales ningún xenoinjerto de melanoma maligno fue detectable después de la administración del oligómero antisentido bcl-2 en combinación con el tratamiento con DTIC. Sigue habiendo una imperiosa necesidad de prolongar estos tratamientos antitumorales para combatir cánceres en humanos .

El pronóstico de muchos pacientes con cáncer es deficiente a pesar de la creciente disponibilidad de tratamientos biológicos, con medicamentos y combinaciones. Por ejemplo, aunque se utiliza común DTIC para tratar melanoma metastático, algunos pacientes han demostrado mejoramiento a largo plazo. De hecho, una extensa prueba clinica en fase III no demostró mejor supervivencia cuando se utilizó DTIC en combinación con cisplatino, carmustina y tamoxifeno (Chapman y col., 1999, "Phase III multicenter randomized trial of the Dartmouth régimen versus dacarbazine in patients ith metastatic melanoma" J. Clin. Oncol. 17 (9) : 2745-51) . Estos serios inconvenientes en los tratamientos contra cáncer hacen énfasis en la necesidad e nuevos enfoques de tratamiento . 3. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a las composiciones farmacéuticas que contienen oligómeros antisentido bcl-2 y a los métodos para tratar trastornos relacionados con bcl-2. La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de los solicitantes que un oligómero antisentido bcl-2, cuando se administra a pacientes en dosis altas para el tratamiento de un trastorno relacionado con bcl-2, particularmente cáncer, da origen a respuestas terapéuticas importantes, incluida la baja toxicidad, alta tolerancia y supervivencia prolongada. Los solicitantes también descubrieron que los oligómeros antisentido bcl-2, cuando se administraron a pacientes en dosis altas durante un tiempo corto, es decir, menos de 14 dias, también produjo respuestas terapéuticas importantes en el tratamiento de pacientes con cáncer. Estos esquemas de tratamiento además consistieron en administración el oligómero antisentido bcl-2 en dosis elevadas durante el tiempo corto en combinación con uno o más terapéuticos de cáncer. Fue sorprendente que una dosis radica de uno o más terapéuticos de cáncer, cuando se proporcionó en combinación con la administración corta de un oligómero antisentido bcl-2, también demostró respuesta terapéuticas importantes en el tratamiento de pacientes de cáncer. Asi pues los esquemas de tratamiento de la presente invención proporcionan un método terapéutico eficaz para tratar cáncer el cual es de duración y toxicidad reducidas, y de este modo da origen a una tolerancia mejorada.

En una modalidad, la presente invención propone un método para tratar un trastorno relacionado con bcl-2, y una composición farmacéutica en forma unitaria de dosificación que contiene dosis particularmente elevadas de un oligómero antisentido bcl-2, de modo que la cantidad eficaz del oligómero antisentido bcl-2 en la composición farmacéutica es una dosis eficaz para conseguir una dosis de aproximadamente 10 a 50 De conformidad con esta modalidad de la invención, la cantidad eficaz del oligómero antisentido bcl-2 de la composición farmacéutica es una dosis eficaz para conseguir un nivel circulante del oligómero antisentido bcl-2 de un mínimo de 30 nM (nanomolar) . En una modalidad, la concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 es de 1 a 10 µ? (micromolar) . En otra modalidad, la concentración circulante deseada del oligómero antisentido bcl-2 de cuando menos 30 nM se consigue aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 1 , 8, 9 ó 10 horas después de la administración del oligómero antisentido bcl-2. En otra modalidad, la concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 de cuando menos 30 nM se logra en el transcurso de aproximadamente 36 a 48 horas, preferentemente 24 a 35 horas, más preferentemente en 12 a 24 horas; con mucho mayor preferencia en menos de 12 horas.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno relacionado con bcl-2 y una composición farmacéutica que contiene una dosis del oligómero antisentido bcl-2 para ser administrada durante un tiempo corto, es decir, menos de 14 dias, de modo que la cantidad eficaz del oligómero antisentido bcl-2 para ser administrada durante este ciclo de tratamiento corto abarca desde aproximadamente 0.01 a 50 mg/kg/dia. En otra modalidad, la cantidad eficaz del oligómero antisentido bcl-2 para ser suministrada durante este ciclo de tratamiento corto es una dosis eficaz para lograr una concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 de un minimo de 30 nM. En otra modalidad, la concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 es de 1 a 10 uM (micromolar) .

En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar un transtorno relacionado con bcl-2 y una composición farmacéutica que contiene una dosis del oligómero antisentido bcl-2 para ser administrada durante un periodo de tiempo corto, es decir, menos de 14 dias, en combinación con uno o más terapéuticos de cáncer, los terapéuticos de cáncer han de ser administrados antes, después o al mismo tiempo con el oligómero antisentido bcl-2. La cantidad eficaz del oligómero antisentido bcl-2 para ser administrada durante este protocolo de tratamiento corto abarca desde aproximadamente 0.01 hasta 50 mg/kg/dia. La cantidad eficaz de los terapéuticos de cáncer para ser administrados en combinación con un oligómero antisentido bcl-2 puede ser administrada en una dosis normal, o de otro modo, puede ser administrada en una dosis reducida. De conformidad con esta modalidad de la invención, la cantidad eficaz del oligómero antisentido bcl-2 de la composición farmacéutica es una dosis eficaz para lograr una concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 de cuando menos 30 nM. En una modalidad especifica, la concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 se obtiene durante aproximadamente 36 a 48 horas, de preferencia dentro de aproximadamente 24 a 35 horas, más preferentemente menos de aproximadamente 24 horas.

De conformidad con la presente invención, un trastorno relacionado con bcl-2 comprende tumores, cáncer, carcinomas, y trastornos proliferativos de las células .

De conformidad con la presente invención, un periodo de tiempo corto comprende un periodo para administrar el antisentido bcl-2 que es menos que 14 dias, abarcando desde 2 hasta 13 dias; preferentemente abarcando desde 3 hasta 9 dias de 4 a 7 dias o de 5 a 6 dias.

De conformidad con la presente invención, las dosis del oligómero antisentido bcl-2 para ser administrada durante un periodo de tiempo corto abarca desde 0.01 hasta 50 mg/kg/dia; preferentemente a una dosis de 4 a 9 mg/kg/dia, y más preferentemente a una dosis de 5 a 7 mg/kg/di .

La presente invención también comprende las composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad eficaz de uno o más oligómeros antisentido bcl-2 para ser administrada de conformidad con los métodos de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas comprenden una dosis del oligómero antisentido bcl-2 que abarca desde 0.01 hasta 50 mg/kg/dia; preferentemente a una dosis de 4 a 9 mg/kg/dia, y más preferentemente a una dosis de 5 a 7 mg/kg/dia, en combinación con un portador farmacéutico aceptable. En otra modalidad, las composiciones farmacéuticas de la presente invención también comprenden uno o más terapéuticos de cáncer adicionales. Las composiciones farmacéuticas se formulan para ser suministradas como una infusión continua, o en una o más administraciones en bolo, o en una o más administraciones durante un protocolo de tratamiento.

De conformidad con la presente invención, las composiciones farmacéuticas de la presente invención gue contienen el oligómero antisentido bcl-2 pueden ser administradas por separado de las composiciones farmacéuticas que contienen los agentes terapéuticos de cáncer .

Estos y otros aspectos de la presente invención se apreciarán mejor haciendo referencia a las siguientes figuras y la descripción detallada. 3.1 DEFINICIONES Cuando se utiliza en la presente, la frase "trastorno relacionado con bcl-2" se refiere a una enfermedad que incluye la regulación del gen bcl-2, e incluye, pero no se limita a, enfermedades que involucran células que expresan el gen bcl-2. Un trastorno como este comprende enfermedades que involucran células o tejidos que expresan el gen bcl-2 o un gen relacionado con bcl-2, o enfermedades que involucran células o tejidos que ya no expresan el gen bcl-2, pero normalmente lo hacen. Los trastornos relacionados con bcl-2 incluyen, pero no se limitan a, trastornos proliferativos de las células y patologías de células o tejidos que se afectan por células que expresan el gen bcl-2 o un gen relacionado con bcl-2.

Cuando se utiliza en la presente el término "cáncer" describe un estado de enfermedad en el cual un agente o agentes carcinogénicos causa la transformación de una célula sana en una célula anormal, la cual es seguida por una invasión de tejidos adyacentes por estas células anormales, y que puede ser seguida por dispersión linfática o sanguínea de estas células anormales a los ganglios linfáticos regionales y/o sitios distantes, es decir, la metátesis.

Cuando se utiliza en la presente, el término "tumor" o "crecimiento" significa masa de tejido aumentada, que incluye mayor número de células como resultado de una división celular más rápida y/o velocidades de muerte celular más lentas. Los tumores pueden ser cánceres malignos o no malignos.

Cuando se utiliza en la presente, las frases "tratar cáncer" y "tratamiento de cáncer" significa inhibir la replicación de las células cancerosas, inhibir la dispersión del cáncer, disminuir el tamaño del tumor, reducir o aminorar el número de células cancerosas en el cuerpo o aminorar o aliviar los síntomas de la enfermedad causada por el cáncer. El tratamiento se considera terapéutico si hay una disminución en la mortalidad y/o morbilidad, o una disminución la carga de la enfermedad manifiesta por números reducidos de células malignas en el cuerpo.

Cuando se utiliza en la presente, las frases "prevención de cáncer" y "prevenir el cáncer" significa prevenir la ocurrencia o recurrencia del estado de enfermedad del cáncer. Como tal, un tratamiento que impide, inhibe o interfiere con la metástasis, el crecimiento tumoral o la proliferación del cáncer tiene actividad preventiva.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "oligómero antisentido" significa un oligonucleótido antisentido o un análogo o derivado de este, y se refiere a un intervalo de especies químicas que reconoce las secuencias objetivo pollnucleótidas a través de las interacciones de unión de hidrógeno de Watson y Crack con las bases de nucleótidos de las secuencias objetivo. Las secuencias objetivo pueden ser RNA ó DNA, y pueden ser monocatenarias o bicatenarias . Las moléculas objetivo incluyen, pero no se limitan a, pre-mRNA, mRNA y DNA.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "expresión del gen bcl-2" se refiere a la transcripción del gen bcl-2 que produce bcl-2 pre-mRNA, bcl-2 mRNA y/o bcl-2 proteína.

Cuando se utiliza en la presente, el término "derivado" se refiere a cualquier homólogo, análogo o fragmento farmacéutico aceptable que corresponda a la composición farmacéutica de la invención.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "terapéutico" o "agente terapéutico" se refiere a cualquier molécula, compuesto o tratamiento que ayude en el tratamiento de una enfermedad. Como tal, un terapéutico de cáncer es una molécula, compuesto o protocolo de tratamiento que ayude en el tratamiento de tumores o cáncer. El protocolo de tratamiento incluye, pero no se limita a, terapia de radiación, terapia dietética, terapia fisica y terapia psicológica.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "quimioagente" o "agente anticáncer" o "agente antitumoral" o "terapéutico de cáncer" se refiere a cualquier molécula, compuesto o tratamiento que ayude en el tratamiento de tumores o cáncer.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "dosis baja" o "dosis reducida" se refiere a una dosis por debajo del intervalo normalmente administrado, es decir, por debajo de la dosis normal según la sugiere el Physician s Desk Referente, 54a Edición (2000) o una referencia similar. Una dosis como esta puede ser suficiente para inhibir la proliferación celular o demostrar efectos mej oradores en un humano, o demuestra eficacia con menos efectos colaterales en comparación con los tratamientos de cáncer normales. Los intervalos de dosis normales que se utilizan para los agentes terapéuticos particulares y los tratamientos de cáncer normales que se emplean para las enfermedades especificas se pueden encontrar en the Physician' s Desk Reference, 54a edición (2000) o en Cáncer: Priciples & Practice of Oncology, De Vita, J . , Hellman, and Rosenberg (eds) 2a edición, Philadelphia, PA: J. B. Lippincott Co., 1985.

Como se utiliza en la presente, la frase "toxicidad reducida" se refiere a los efectos colaterales y toxicidades reducidos que se observan en relación con la administración de los oligonucleótidos antisentido y los terapéuticos de cáncer para una duración más corta y/o en menores dosis en comparación con otros protocolos de tratamiento y formulaciones de dosificación, incluidos los protocolos de tratamiento y formulaciones de dosificación normales según esta descrito en the Physicianfs Desk Reference, 54a Edición (2000) o en Cáncer: Priciples & Practice of Oncology, De Vita, Jr., Hellman, and Rosenberg (eds) 2a edición, Philadelphia, PA: J. B. Lippincott Co . , 1985.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "ciclo de tratamiento" o "ciclo" se refiere a un periodo durante el cual se administra un solo terapéutico o una secuencia de terapéuticos. En una modalidad que comprende el uso de una dosis alta del oligómero antisentido bcl-2, en combinación con una dosis normal de un terapéutico de cáncer, la duración de tiempo preferida para un ciclo de tratamiento es menos de 14 dias. La presente invención contempla cuando menos un ciclo de tratamiento, por lo regular preferentemente más de un ciclo de tratamiento. En algunos casos, un ciclo de tratamiento puede ser deseado, como tal, por ejemplo en el caso donde se obtiene un efecto terapéutico importante después de un ciclo de tratamiento.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "portador farmacéutico aceptable" se refiere a un medio portador que no interfiere con la eficacia de la actividad biológica del ingrediente activo. Un medio portador como este es químicamente inerte y no toxico.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "farmacéutico aceptable" significa aprobado por una agencia regulatoria del gobierno federal o un gobierno estatal, o esta mencionado en la Farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, y más específicamente para uso en humanos.

Cuando se utiliza en la presente, el término "portador" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el cual se administra el terapéutico. Portadores como estos pueden ser líquidos estériles, como soluciones salinas en agua, o aceites, incluidos los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético como el aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Una solución salina es un portador preferido cuando la composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. Las soluciones salinas y las soluciones acuosas de dextrosa y glicerol también se pueden emplear como portadores líquidos, en particular para soluciones inyectables . Los excipientes farmacéuticos convenientes incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, gis, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada anhidra, glicerol, propilen glicol, agua, etanol y similares. El portador, si se desea, también puede contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsificadores, o agentes amortiguadores del pH. Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación prolongada y similares. La composición se puede formular como supositorio, con los aglutinantes tradicionales y portadores como triglicéridos . Los ejemplos de los portadores farmacéuticos convenientes están descritos en Remingtonf s Pharmaceutical Sciences de E. W. Martin. Los ejemplos de los portadores farmacéuticos convenientes son una variedad de líquidos cationicos que incluyen, pero no se limitan a cloruro de N- (1 (2, 3-dioleioxi) propil) -N, N, N-trimetilamonio (DOTMA) y diolesilfosfotidiletanolamina (DOPE) . Los liposomas también son portadores convenientes para los oligómeros antisentidos de la invención. Composiciones como estas deben contener una cantidad terapéutica eficaz de compuesto, junto con una cantidad conveniente del portador para proporcionar la forma para la administración adecuada al paciente. La formulación debe coincidir con el modo de administración.

Cuando se utiliza en la presente, la frase "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales que se preparan a partir de ácidos y bases prácticamente no tóxicos, farmacéuticamente aceptables, que incluyen ácidos y bases inorgánicos y orgánicos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las que se forman con grupos amino libres como los provenientes de los ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etcétera y los que se forman con grupos carboxilo libres como los provenientes de hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio, férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procaina, etcétera . 4. DESCRIPCIÓN BREVE DE LAS FIGURAS Figura 1: regulación descendente de bcl-2 después de 5 dias de tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 en biopsias de melanoma del paciente #12.

Figura 2: tinción TUNEL de biopsias de tumor del paciente #12 (perna derecha) antes del tratamiento (a) , después del tratamiento (b) del oligómero antisentido bcl-2 y después del tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 más DTIC.

Figura 3: metástasis de piel (a) y barrido CT de la región pélvica (b) del paciente #12 antes y después de tres de tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 más DTIC en una concentración de 6.5 mg/kg/dia. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona las composiciones y los métodos para el uso de un oligómero antisentido bcl-2 para la prevención o tratamiento de un trastorno relacionado con bcl-2, en particular, cáncer. La invención también propone las composiciones farmacéuticas que contienen el oligómero antisentido bcl-2, asi como los métodos para su uso en tratamientos profilácticos y terapéuticos, incluido el suministro del medicamento y los esquemas terapéuticos.

La invención se basa, en parte, en el descubrimiento que los ciclos de tratamiento cortos de un oligómero antisentido bcl-2, solo y en combinación con otros agentes terapéuticos, inesperadamente tiene efectos mej oradores potentes en pacientes que sufren de enfermedad. Este esquema de tratamiento corto manifiesta otros beneficios al individuo humano como conveniencia, reducción del trauma psicológico y mejor probabilidad de cumplimiento con el protocolo de tratamiento. Otros descubrimientos incluyen: (1) ciclos de tratamiento cortos y dosis reducidas de los agentes terapéuticos cuando se utilizan en combinación con un oligómero antisentido bcl-2. (2) modos simplificados de suministro para las composiciones farmacéuticas que contienen cuando menos un oligómero antisentido bcl-2 con o sin otros agentes terapéuticos, y (3) esquemas de tratamiento clínicamente importantes para muchos tipos de cánceres. Así pues, el descubrimiento de los solicitantes que un oligómero antisentido bcl-2, cuando se administra durante un ciclo de tratamiento corto, puede demostrar respuestas terapéuticas importantes en pacientes que tienen un trastorno relacionado con bcl-2, proporciona composiciones farmacéuticas, cursos de tratamiento y modos de suministro me oradores y útiles.

La invención también se basa, en parte, en el descubrimiento que dosis altas del oligómero antisentido bcl-2, solo y en combinación con otros agentes terapéuticos, ha reducido la toxicidad, incluidos los inesperadamente pocos efectos colaterales en comparación con la mayoría de los tratamientos de cáncer normales, y tiene efectos mejoradores en pacientes que sufren de enfermedad. Un esquema de tratamiento que comprende una dosis alta del oligómero antisentido bcl-2 manifiesta otros beneficios al individuo humano como ciclos de tratamiento más cortos, menos tratamientos o mejor eficacia .

En una modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra a un humano para un ciclo de tratamiento corto para prevenir o tratar un trastorno relacionado con bcl-2. En otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra a un humano en dosis altas para prevenir o tratar un trastorno relacionado con bcl-2. Además de afectar el tejido enfermo, el oligómero antisentido bcl-2 puede proteger o tratar tejidos normales, los cuales incluyen tejidos que contienen células que normalmente expresan el gen bcl-2. Además, el oligómero antisentido bcl-2 puede proteger o tratar tejidos normales que, aunque no expresen el gen bcl-2, están comprometidos por los tejidos enfermos.

En una modalidad especifica, la invención además comprende el uso del tratamiento en combinación para prevenir o tratar un trastorno relacionado con bcl-2. Un tratamiento asi incluye el uso de una o más moléculas, compuestos o tratamientos que ayuden a la prevención o tratamiento de una enfermedad. Los ejemplos de los terapéuticos que se contemplan incluyen sustancias biológicas, químicas y tratamientos terapéuticos (por ejemplo el tratamiento con irradiación) .

En otra modalidad especifica, la invención, proporciona un oligómero antisentido bcl-2 que se administra a un humano en combinación con uno o más agentes terapéuticos de cáncer para prevenir o tratar cáncer. Los terapéuticos de cáncer como estos incluyen una o más moléculas, compuestos o tratamientos que tengan actividad anticancer. Los ejemplos de los terapéuticos de cáncer contemplados incluyen sustancias biológicas, químicas, y tratamientos terapéuticos (como el tratamiento por irradiación) .

En todavía otra modalidad específica, la invención proporciona un oligómero antisentido bcl-2 que se administra a un humano, en combinación con uno o más agentes terapéuticos de cáncer en dosis reducidas, para prevenir o tratar cáncer. Tratamientos como estos pueden incluir dosis altas, normales o bajas de uno o más oligómeros antisentido bcl-2, los ciclos de tratamiento pueden ser de duración corta o larga. En una modalidad específica, la invención propone una dosis particularmente alta del oligómero antisentido bcl-2 que se administra a un humano, en combinación con uno o más agentes terapéuticos de cáncer en dosis grandemente reducidas para ciclos de tratamiento más cortos, para prevenir o tratar cáncer. 5.1 OLIGÓMERO ANTISENTIDO BCL-2 La invención contempla el uso de uno o más oligómeros antisentido bcl-2, o sus derivados, análogos, fragmentos, híbridos, miméticos y congéneres de estos. Cuando se utiliza en la presente el término "derivado" se refiere a cualquier homólogo, análogo o fragmento farmacéuticamente aceptable correspondiente a la composición farmacéuticamente de la invención. Los oligómeros antisentido convenientes para uso en la invención incluyen oligómeros de nucleótidos que abarcan en tamaño desde 5 hasta 10, 10 a 20, 20 a 50, 50 a 75, ó 75 a 100 bases de longitud; preferentemente 10 a 40 bases de longitud; más preferentemente 15 a 25 bases de longitud; más preferentemente 18 bases de longitud. Las secuencias objetivo pueden ser RNA ó DNA, y pueden ser monocatenarios o bicatenarios . Las moléculas objetivo incluyen, pero no se limitan a, pre-mRNA, mRNA y DNA. En una modalidad, la molécula objetivo es mRNA. En una modalidad preferida, la molécula objetivo es pre-mRNA de bcl-2 ó mRNA de bcl-2. En una modalidad especifica, los oligómeros antisentido hibridan a cualquier porción a lo largo del pre-mRNA ó mRNA de bcl-2. Los oligómeros antisentido preferentemente se seleccionan de aquellos oligómeros que hibridan al sitio de inicio de la traducción, al sitio de empalme del donador, el sitio de empalme del aceptor, sitios para la transportación o sitios para la degradación del pre-mRNA ó mRNA de bcl-2.

Algunos oligómeros antisentido bcl-2 ya han sido evaluados con resultados variables (véase, por ejemplo las SEQ ID NOS.: 1-17 en la Patente US No. 5,831,066) . Los ejemplos de los oligómeros antisentido bcl-2 que pueden utilizarse de acuerdo con la presente invención están descritos en detalle en la Solicitud de Patente US serie No. 08/217,082, ahora la Patente US No. 5,734,033; la solicitud de la Patente US serie No. 08/465,485, ahora Patente US No. 5,831,066 y la solicitud de Patente US Serie No. 09/080,285, ahora Patente US No. 6,040,181, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su entereza.

En una modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 es prácticamente complementario a una porción de un pre-mRNA ó mRNA de bcl-2 o una porción de un pre-mRNA ó mRNA que este relacionado con bcl-2. En una modalidad preferida, el oligómero antisentido bcl-2 híbrida a una porción del sitio de inicio de la traducción de la hebra que codifica pre-mRNA. En una modalidad más preferida, el oligómero antisentido bcl-2 híbrida a una porción de la hebra que codifica pre-mRNA que contiene el sitio de inicio de la traducción del gen bcl-2 humano. Más preferentemente, el oligómero antisentido bcl-2 contiene una secuencia TAC complementaria a la secuencia de inicio AUG de pre-mRNA ó mRNA de bcl-2.

En otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 híbrida a una porción del sitio donador del empalme de la hebra que codifica pre-mRNA para el gen bcl-2 humano. Preferentemente, este nucleótido comprende una secuencia CA, que es complementaria a la secuencia donadora del empalme GT en el gen bcl-2, y preferentemente además contiene porciones flanqueadoras de 5 a 50 bases, más preferentemente desde aproximadamente 10 a 20 bases, que híbrida a porciones de la hebra que codifica el gen bcl-2 que flanquea el sitio donador del empalme.

En todavía otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 híbrida a una porción del sitio aceptor del empalme de la hebra que codifica pre-mRNA para el gen bcl-2 humano. Preferentemente, este nucleótido comprende una secuencia TC, que es complementaria a la secuencia aceptora del empalme AG del gen bcl-2, y preferentemente además comprende porciones flanqueadoras de 5 a 50 bases, más preferentemente desde aproximadamente 10 a 20 bases, el cual híbrida a porciones de la hebra codificante del gen bcl-2 que flanquea el sitio aceptor del empalme. En otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 híbrida a porciones del pre-mRNA ó mRNA involucrados en el empalme, transporte o degradación.

Una persona con conocimientos ordinarios en la técnica puede darse cuenta que los oligómeros antisentido convenientes para uso en la invención también pueden ser substancialmente complementarios a otros sitios a lo largo del pre-mRNA ó mRNA de bcl-2, y pueden formar híbridos. El experto también apreciará que los oligómeros antisentido, que hibridan a una porción del pre-mRNA ó mRNA de bcl-2 cuya secuencia no ocurre comúnmente en transcritos de genes no relacionados son preferibles para mantener especificidad del tratamiento.

El diseño de la secuencia de un oligómero antisentido bcl-2 también se puede determinar mediante pruebas empíricas y evaluación de la eficacia clínica, sin tomar en cuenta su grado de homología de secuencias para, o la hibridación con, el gen bcl-2, el pre-mRNA de bcl-2, el mRNA de bcl-2 o las secuencias de nucleótidos relacionados con bcl-2. Una persona con conocimientos ordinarios en la técnica apreciará que los oligómeros antisentido bcl-2 que tengan, por ejemplo, menos homología de secuencias, más o menos nucleótidos modificados o longitudes más cortas o más largas, en comparación con los de las modalidades preferidas, pero que no obstante demuestren respuestas en los tratamientos clínicos, también están dentro del alcance de la invención .

Los oligómeros antisentido pueden ser RNA ó DNA, o derivados de estos, la forma particular del oligómero antisentido puede afectar los parámetros farmacocinéticos del oligómero como la biodisponibilidad, metabolismo, vida media, etc. Como tal, la invención contempla derivados del oligómero antisentido que tengan propiedades que mejoren la captación celular, que mejoren la resistencia a la nucleasa, que mejoren la unión a la secuencia objetivo o que aumenten la disociación o degradación de al secuencia objetivo. Los oligómeros antisentido pueden contener bases que comprendan, por ejemplo, fósforotioatos o metilfosfonatos . Los oligómeros antisentido en cambio, pueden ser oligómeros mixtos que contengan combinaciones de nucleótidos fosfodiésteres , fósforotioato y/o metilfosfonato, entre otros. Oligómeros como estos pueden presentar modificaciones que comprenden, pero no se limitan a, modificaciones 2-0'-alquil ó 2-0' -halo azúcar, modificaciones del esqueleto (por ejemplo el esqueleto metilfosfonato, fósforoditioato, fósforditioato [sic], formacetal, 3'-tioformacetal, sulfona, sulfamato, nitróxido, derivados morfolino y derivados del ácido péptido nucleico (PNA) ) , o derivados en donde las porciones base han sido modificadas (Egholm, y col., 1992, Peptide Nucleic Acids (PNA) -Olignucleotide Analogues With An Achiral Peptide BacJcbone ) . En otra modalidad, los oligómeros antisentido comprenden conjugados de los oligonucleótidos y derivados de estos (Goodchild, 1990, "Conjugates of oligonucleotides and modified oligonucleotides : a review of their synthesis and properties" Bioconjug. Chem. 1 (3) : 165-87) .

Para el uso terapéutico in vivo, es preferible un derivado fósforotioato del oligómero antisentido bcl-27 cuando menos en parte por la mayor resistencia a la degradación. En una modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 es un oligómero híbrido que contiene bases fós orotioato . En otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 contiene cuando menos un enlace fósforotioato . En otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 contiene cuando menos tres enlaces fósforotioato . En todavía otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 contiene cuando menos tres enlaces fósforotioato consecutivos. En todavía otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 esta compuesto completamente de enlaces fósforotioato . Los métodos para la preparación de los derivados oligonucleótidos son conocidos en al técnica. Véase, por ejemplo, Stein y col., 1988, Nucí. Acids. Res., 16: 3209-21 (fósforotioato) ; Blake y col., 1985, Biochemistry 24: 6132-38 (metilfosfonato) ; Morvan y col., 1986, Nucí. Acids. Res. 14: 5019-32 (alfadeoxincleótidos) ; Monia y col., 1993, "Evaluation of 2 ' -modified oligonucleotides containing 2' deoxi gaps as antisense inhibitors of gene expression", J. Biol. Chem. 268: 14514-22 (2' -O-metil-ribonucleósidos ) ; Asseline y col., 1984, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 81: 3297-3301 (acridine) ; Knorre y col., 1985, Biochemie 67: 783-9; Vlassov y col., 1986, Nucí. Acids. Res. 14: 4065-76 (N-2-clorocetilamina y fenazina) ; ebb y col., 1986, Nucí. Acids. Res. 14: 7661-74 ( 5-metil-NJ-N4-etanocitosina) / Boutorin y col., 1984, FEBS Letters 172: 43-6 ácido (Fe-etilendiamina tetraacético (EDTA) y análogos) ; Chi-Hong y col., 1986, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83: 7147-51 (5-glicilamido-1, 10-o-fenantrolina) ; y Chu y col., 1985, Proc. Nati. Acad, Sci. USA 82: 963-7 (ácido (dietilentriamina-pentaacético (DTPA) derivados) .

La dosis eficaz del oligómero antisentido bcl-2 que ha de ser administrada durante un ciclo de tratamiento abarca desde aproximadamente 0.01 hasta 0.1, 0.1 a 1 ó 1 a 10 mg/kg/día. La dosis del oligómero antisentido bcl-2 para ser administrada puede depender del modo de administración. Por ejemplo, la administración intravenosa de un oligómero antisentido bcl-2 probablemente conduciría a una dosis corporal completa significativamente mayor en comparación con una dosis corporal completa resultante de un implante local que contenga una composición farmacéutica con el oligómero antisentido bcl-2. En una modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 se administra por via subcutánea en una dosis de 0.01 a 10 mg/kg/día; más preferentemente en una dosis de 4 a 9 mg/kg/día; más preferentemente en una dosis de 5 a 7 mg/kg/día. En otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra por vía intravenosa en una dosis de 0.01 a 10 mg/kg/día; más preferentemente en una dosis de 4 a 9 mg/kg/día; más preferentemente en una dosis de 5 a 7 mg/kg/día. En todavía otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra en forma local en una dosis de 0.01 a 10 mg/kg/día; preferentemente en una dosis de 0.01 a 0.1; más preferentemente en una dosis de 1 a 5 mg/kg/día. Será evidente para un experto en la técnica que las administraciones locales pueden originar menores dosis corporales totales. Por ejemplo, los métodos para la administración local, como administración intratumoral, inyección intraocular o implante, pueden producir concentraciones localmente altas del oligómero antisentido bcl-2, pero representan una dosis relativamente baja con respecto al peso corporal total. Asi pues, en casos como estos, la administración oral de un oligómero antisentido bcl-2 se contempla para obtener una dosis corporal total de aproximadamente 0.01 a 5 mg/kg/dia .

En otra modalidad, durante un ciclo de tratamiento se administra una dosis particularmente alta del oligómero antisentido bcl-2, la cual puede abarcar desde aproximadamente 10 hasta 20, 20 a 30 ó 30 a 50 mg/kg/di .

Más aún, la dosis eficaz del oligómero antisentido bcl-2 particular puede depender de otros factores que incluyen el tipo de cáncer, el estado de enfermedad o etapa de la enfermedad, la toxicidad del oligómero, la velocidad de captación del oligómero por las células cancerosas, asi como el peso, edad y salud del individuo a quién se administra el oligómero antisentido. Debido a los múltiples factores presentes in vivo que pueden interferir con la acción o actividad biológica de un oligómero antisentido bcl-2, una persona con los conocimientos ordinarios en la técnica puede apreciar que una cantidad eficaz de un oligómero antisentido bcl-2 puede variar para cada individuo.

En otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra en una dosis que de origen a concentraciones circulantes en plasma del oligómero antisentido bcl-2 que sea cuando menos 30 nM (nanomolar) . Como será evidente para el experto, concentraciones menores o mayores en plasma del oligómero antisentido bcl-2 pueden preferirse dependiendo del modo de administración. Por ejemplo, las concentraciones en plasma del oligómero antisentido bcl-2 de cuando menos 30 nM pueden ser adecuadas en relación con los métodos de administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, de liberación controlada y oral, por mencionar solo algunos. En otro ejemplo, pueden ser deseables concentraciones circulantes en plasma relativamente bajas del oligómero antisentido bcl-2, no obstante, cuando se utilizan métodos de administración local como puede ser administración intratumoral, administración intraocular o implante, los cuales no obstante pueden producir concentraciones clínicas eficaces localmente altas del oligómero antisentido bcl-2.

En todavía otra modalidad, la concentración circulante en plasma de cuando menos 30 nM (nanomolar) del oligómero antisentido bcl-2 se obtiene aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 horas después de la administración del oligómero antisentido bcl-2. En todavía otra modalidad, la concentración circulante en plasma de cuando menos 30 nM del oligómero antisentido bcl-2 se logra en aproximadamente 36 a 48 horas, preferentemente 24 a 35 horas, más preferentemente en 12 a 24 horas; más preferentemente en menos de 12 horas .

En una modalidad específica, la dosis del oligómero antisentido bcl-2 es una dosis alta. En una modalidad, la concentración circulante en plasma del oligómero antisentido bcl-2 es cuando menos 30 nM. En otra modalidad, la concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 es 1 uM a 10 uM. En todavía otra modalidad, la concentración del oligómero antisentido bcl-2 es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 uM. En todavía otra modalidad, la concentración circulante del oligómero antisentido bcl-2 de 1 uM a 10 uM se logra en aproximadamente 36 a 48 horas, preferentemente 24 a 35 horas, más preferentemente en 12 a 24 horas; más preferentemente en menos de 12 horas.

La dosis alta se puede lograr por varias administraciones por ciclo. De otro modo, la dosis alta se puede administrar en una sola administración en bolo.

Una sola administración de una dosis alta puede originar concentraciones circulantes en plasma del oligómero antisentido bcl-2 que son transitoriamente mucho mayores que 30 nM. Además, las administraciones individuales de las dosis particularmente altas de un oligómero antisentido bcl-2 pueden ocasionar concentraciones circulantes en plasma del oligómero antisentido bcl-2 de 1 µ? a 10 uM en mucho menos que 12 horas, incluso en menos de una hora.

Además, la dosis de un oligómero antisentido bcl-2 puede variar conforme con el oligómero antisentido bcl-2 especifico que se utilice. La dosis que se emplee probablemente reflejará una consideración de varios factores entre los cuales están la estabilidad, localización, captación celular y toxicidad del oligómero antisentido bcl-2 especifico. Por ejemplo, un oligómero antisentido bcl-2 químicamente modificado puede mostrar mayor resistencia a la degradación, o puede presentar mayor afinidad para el ácido nucleico objetivo, o puede mostrar mayor captación por la célula o núcleo celular; todos los cuales pueden permitir el uso de dosis bajas. En todavía otro ejemplo, un oligómero antisentido bcl-2 químicamente modificado particular puede mostrar mayor toxicidad que otros oligómeros antisentido, y por tanto puede utilizarse en dosis altas. Asi pues, para un oligómero antisentido bcl-2 determinado, una dosis adecuada para su administración puede ser relativamente alta o relativamente baja. Las dosis adecuadas serian determinadas por el experto, y la invención contempla la evaluación continua de los esquemas de tratamientos óptimos para las especies particulares de oligómeros antisentido bcl-2. La dosis diaria puede administrarse en uno o más tratamientos .

Otros factores que han de considerarse para determinar una dosis eficaz de un oligómero antisentido bcl-2 incluyen si el oligómero será administrado en combinación con otros terapéuticos. En estos casos, la toxicidad relativa de otros terapéuticos puede indicar el uso del oligómero antisentido bcl-2 en dosis bajas. De otro modo, el tratamiento con una dosis alta del oligómero antisentido bcl-2 puede originar terapias en combinación con dosis reducidas de los terapéuticos. En una modalidad especifica, el tratamiento con una dosis particularmente alta del oligómero antisentido bcl-2 puede dar origen a tratamientos en combinación con dosis grandemente reducidas de los terapéuticos de cáncer. Por ejemplo, el tratamiento de un paciente con 10, 20, 30, 40 ó 50 mg/kg/dia de un oligómero antisentido bcl-2 además puede aumentar la sensibilidad de un individuo a los terapéuticos de cáncer. En casos como estos, la dosis particularmente alta del oligómero antisentido bcl-2 se combina con, por ejemplo, un programa de tratamiento por radiación por un periodo mucho más corto. En otro ejemplo, la dosis particularmente alta del oligómero antisentido bcl-2 produce mejoramiento importante de la potencia de los agentes terapéuticos de cáncer.

Además, las dosis particularmente altas del oligómero antisentido bcl-2 puede acortar el periodo de administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del oligómero antisentido bcl-2 y/o en terapéutico de cáncer, de modo que la duración del ciclo de tratamiento sea mucho más corta que 14 días.

En una modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 fósforotioato de 18 bases de la secuencia 5'-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3' , que es complementario con los primeros 6 codones del mRNA de bcl-2 e híbrida a las bases de RNA objetivo respectivas, se administra durante un ciclo de tratamiento corto, definido como menos de 2 semanas .

En una modalidad, el G3139 se administra durante 2 a 13 dias en una dosis de 0.01 a 10 mg/kg/día. En una modalidad específica, el G3139 se administra durante 2 a 3, 4 a 5, 6 a 7, 8 a 9, 10 a 11 ó 12 a 13 días en una dosis de 0.01 a l, l a 2, 3 a 4, 5 a 6, 6 a 7, 7 a 8 ó 9 a 10 mg/kg/día; más preferentemente en una dosis de 4 a 9 mg/kg/día, y más preferentemente en una dosis de 5 a 7 mg/kg/día. En otra modalidad, el G3139 se administra en la dosis durante 3 a 9 días. En todavía otra modalidad, el G3139 se administra a la dosis durante 4 a 7 días. En una modalidad preferida, el G3139 se administra a la dosis durante 5 a 6 días. En una modalidad más preferida, el G3139 se administra en una dosis de 5 a 7 mg/kg/día durante 5 a 6 días. La invención contempla otros esquemas de tratamiento preferidos dependiendo del oligómero antisentido bcl-2 particular que se utilice, o dependiendo del modo de administración específico, o dependiendo de si se administra el oligómero antisentido bcl-2 como parte de un tratamiento en combinación, por ejemplo, en combinación con un agente terapéutico de cáncer. La dosis diaria se puede administrar en uno o más tratamientos .

En otra modalidad, el G3139 se administra en una dosis particularmente alta de aproximadamente 10 a 50 mg/kg/día. En una modalidad especifica, el G3139 se administra en una dosis particularmente alta de aproximadamente 10 a 15, 16 a 20, 21 a 25, 26 a 30, 31 a 35, 36 a 40, 41 a 45 6 46 a 50 mg/kg/día. En otra modalidad, el G3139 se administra a la dosis durante 1 a 10 dias. En todavía otra modalidad, el G3139 se administra a la dosis durante 2 a 7 días. En todavía otra modalidad, el G3139 se administra a la dosis durante 3 a 4 días. En una modalidad preferida, el G3139 se administra en una dosis de 26 a 30, 31 a 35, 36 a 40, 41 a 45 ó 46 a 50 mg/kg/día durante un mínimo de un día. La invención contempla otros esquemas de tratamiento preferidos dependiendo del oligómero antisentido bcl-2 específico que se utilice, o dependiendo del modo de administración específico, o dependiendo de si se administra el oligómero antisentido bcl-2 como parte de un tratamiento en combinación, por ejemplo en combinación con un agente terapéutico de cáncer. La dosis diaria se puede administrar en uno o más tratamientos. 5.2 TERAPÉUTICOS DE CÁNCER La invención descrita en la presente comprende un método para la prevención o tratamiento de cáncer gue consiste en una cantidad terapéuticamente eficaz de un oligómero antisentido bcl-2, que incluye pero no se limita a, dosis altas del oligómero, a un humano en necesidad de un tratamiento como este. La invención además comprende el uso de un periodo corto de administración de un oligómero antisentido bcl-2. Las células normales, no cancerosas se dividen con una frecuencia característica para el tipo de célula especifico. Cuando una célula se ha transformado en un estado canceroso, resulta una proliferación celular no controlada y muerte celular reducida, y por tanto, división celular confusa o el crecimiento celular es una marca contrastante de un tipo de células cancerosas. Los ejemplos de los tipos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, linfoma de no-Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemia (por ejemplo leucemia aguda como la leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocítica crónica, mieloma múltiple) , carcinoma de colon, carcinoma rectal, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer prostético, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma de los ductos biliares, coriocarcinoma, cáncer cervical, cáncer testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de vejiga, melanoma, cáncer de cabeza y cuello, cáncer cerebral, cánceres del sitio primario desconocido, neoplasmas, cánceres del sistema nervioso periférico, cánceres del sistema nervioso central, tumores (por ejemplo fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma/ angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linf ngioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomisarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células básales, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, seminoma, carcinoma embrional, tumor de Wilms, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneof ringeoma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, neuroblastoma, y retinoblastoma) , enfermedad de cadenas pesadas, metástasis o cualquier enfermedad o trastorno caracterizado por crecimiento celular no controlado o anormal .

En una modalidad preferida, la invención además comprende el uso de tratamiento en combinación para prevenir o tratar cáncer. Por ejemplo, el cáncer de próstata puede ser tratado con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con paclitaxel, docetaxel, mitoxantrona, y/o un antagonista de los receptores para andrógenos (por ejemplo flutamida) . Como otro ejemplo, el cáncer de mama se puede tratar con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con docetaxel, paclitaxel, cisplatino, 5-fluorouracilo, doxorubicina y/o VP-16 (etopósido) . Como otro ejemplo, la leucemia puede ser tratada con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con fludarabina, arabinósido de citosina, gemtuzumab (MYLOTARG) , daunorubicina, metotrexato, vincristina, 6-mercaptopurina, idarubicina, mitoxantrona, etopósido, asparaginasa, prednisona y/o ciclofosfamida . Como otro ejemplo, el mieloma se puede tratar con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con dexametasona . Como otro ejemplo, el melanoma se puede tratar con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con dacarbazina. Como otro ejemplo, el cáncer colorectal puede ser tratado con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con irinotecano. Como otro ejemplo, el cáncer de pulmón se puede tratar con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con paclitaxel, docetaxel, etopósido y/o cisplatino. Como otro ejemplo, el linfoma de no-hodgkin puede tratarse con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con ciclofosfamida, CHOP, etopósido, bleomicina, mitoxantrona y/o cisplatino. Como otro ejemplo, el cáncer gástrico puede ser tratado con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con cisplatino. Como otro ejemplo, el cáncer pancreático puede ser tratado con una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con gemcitabina. Estos tratamientos en combinación también se pueden utilizar para prevenir cáncer o la recurrencia del cáncer.

El tratamiento en combinación también incluye, además de la administración de un oligómero antisentido bcl-2, el uso de una o más moléculas, compuestos o tratamientos que ayuden en la prevención o tratamiento de cáncer, cuyas moléculas, compuestos o tratamientos incluyen, pero no se limitan a, agentes químicos, inmunoterapeúticos , vacunas contra cáncer, agentes anti-angiogénicos, citocinas, tratamientos hormonales, tratamientos génicos y radioterapia.

En una modalidad, uno o más agentes químicos, además de un oligómero antisentido bcl-2, se administran para tratar a un paciente de cáncer. Los ejemplos de los agentes químicos contemplados por la presente invención incluyen, pero no se limitan a, citosina arabinósido, taxoides (por ejemplo paclitaxel, docetaxel) , agentes anti-tubulina (por ejemplo paclitaxel, docetaxel, epotilona B o sus análogos) , cisplatino, carboplatino, adriamicina, tenopósido, mitozantrona, 2-clorodesoxiadenosina, agentes alquilantes (por ejemplo ciclofosfamida, necloretamina, tioepa, clorambucil, melfalan, carmustina (BSNU) , lomustina (CC U) , ciclotosfamida [sic], busulfan, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C y cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatino, tio-tepa) , los antiobióticos (por ejemplo dactinomicina (anteriormente actinomicina) , bleomicina, mitramicina, antramicinas ) , antimetabolitos (por ejemplo metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracilo, fludarabina, gemcitabina, dacarbazina, temozolamida) , asparaginasa, la toxina diftérica Bacillus Calmette and Guerin, hexametilmelamina, hidroxiurea, LYSODREN®, análogos nucleósidos, alcaloides de plantas (por ejemplo taxol, paclitaxel, camptotecina, topotecano, irinotecano (CAMPTOSAR, CPT-11), vincristina, alcaloides vinca como vinblastina) , podofilotoxina (incluidos los derivados como epipodofilotoxina, VP-16 (etopósido) , V -26 (tenipósido) ) , citochalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, procarbarazina, mecloretamina, antraciclinas, (por ejemplo daunorubicina (anteriormente daunomicina) , doxorubicina, doxorubicina liposomal) , dihidroxiantracindiona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, procaina, tetracaina, lidocaina, propranolol, puromicina, agentes antimitóticos, abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, factor de crecimiento del nervio, factor de crecimiento proveniente de plaquetas, el activador del plasminógeno de tejido, aldesleucina, alutamina, anastrozol, bicalutamida, biaomicina, busulfan, capecitabina, carboplain, clorabusil, cladribina, cilarabina, daclinomicina, estramusina, floxuride, gamcitabina, gosereina, idarubicina, itosfamida, acetato de lauprólido, levamisol, lomusline, mecloretamina, magestrol, acetato, mercaptopurino, mesna, mitolanc, pegaspergase, pentoslatin, picamicin, riuxlmab, campath-1, estraplozocina, tioguanina, tretinoina, vinorelbina, y cualquiera de los fragmentos, miembros de la familia o derivados de estos, incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de estos. Las composiciones que contienen uno o más agentes químicos (por ejemplo FLAG, CHOP) también están contempladas en la presente invención. El FLAG consiste en fludarabina, arabinósido de citosina (Ara-C) y G-CSF. El CHOP consiste en ciclofosfamida, vincristina, doxorubicina y prednisona.

En una modalidad, el agente químico es dacarbazina en una dosis que abarca desde 200 hasta 4000 mg/m /ciclo. En una modalidad preferida, la dosis abarca desde 700 hasta 1000 mg/m2/ciclo. En otra modalidad, el agente químico es fludarabina en una dosis que abarca desde 25 hasta 50 mg/m /ciclo. En otra modalidad, el agente químico es un arabinósido de citosina (Ara-C) en una dosis que abarca desde 200 hasta 2000 mg/m /ciclo. En una modalidad preferida, el agente químico es docetaxel en una dosis que abarca desde 1.5 hasta 7.5 mg/kg/ciclo. En otra modalidad, el agente químico es paclitaxel en una dosis que abarca desde 5 hasta 15 mg/kg/ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es cisplatino en una dosis en el intervalo desde 5 hasta 20 mg/kg/ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es 5-fluorouracilo en una dosis que abarca desde 5 hasta 20 mg/kg/ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es doxorubicina en una dosis que abarca desde 2 hasta 8 mg/kg/ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es epipodofilotoxina en una dosis que abarca desde 40 hasta 160 mg/kg/ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es ciclofosfamida en una dosis que abarca desde 50 hasta 200 mg/kg/ciclo. En todavía otra modalidad/ el agente químico es irinotecan en una dosis que abarca desde 50 hasta 75, 75 a 100, 100 a 125 ó 125 a 150 mg/m /ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es vinblastina en una dosis que abarca desde 3.7 hasta 5.4, 5.5 a 7.4, 7.5 a 11 u 11 a 18.5 mg/m /ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es vincristina en una dosis en el intervalo desde 0.7 hasta 1.4 ó 1.5 a 2 mg/m2/ciclo. En todavía otra modalidad, el agente químico es metotrexato en una dosis que abarca desde 3.3 a 5, 5 a 10, 10 a 100 ó 100 a 1000 mg/m2/ciclo.

En una modalidad preferida, la invención además comprende el uso de dosis bajas de los agentes químicos cuando se administran como parte de un esquema de tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2. Por ejemplo, el tratamiento inicial con un oligómero antisentido bcl-2 aumenta la sensibilidad de un tumor al desafío ulterior con una dosis del agente químico, cuya dosis es cercana o por debajo al intervalo inferior de la dosis cuando el agente químico se administra con un oligómero antisentido bcl-2. En una modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 y una dosis baja (por ejemplo 6 a 60 mg/m /día o menos) de docetaxel se administra a un paciente de cáncer. En otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 y una dosis baja (por ejemplo 10 a 135 mg/m /día o menos) de paclitaxel se administran a un paciente de cáncer. En todavía otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 y una dosis baja (por ejemplo 2.5 a 25 mg/m2/día o menos) de fludarabina se administran a un paciente de cáncer. En todavía otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 y una dosis baja (por ejemplo 2 0.5 a 1.5 mg/m /día o menos) del arabinósido de citosina (Ara-C) se administran a un paciente de cáncer.

Por tanto, la invención contempla el uso de uno o más oligómeros antisentido bcl-2 los cuales se administran antes, después o al mismo tiempo con las dosis bajas de los agentes químicos, para la prevención o tratamiento de cáncer.

En una modalidad, el agente químico es cisplatino, por ejemplo, PLATINOL ó PLATINOL-AQ (Bristol myers), en una dosis en el intervalo desde 5 hasta 10, 10 a 20, 20 a 40 ó 40 a 75 mg/m /ciclo. En otra modalidad, una dosis de 2 cisplatino en el intervalo de 7.5 a 75 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer ovárico. En otra modalidad, una dosis de cisplatino en el intervalo desde 5 hasta 50 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer de vejiga.

En otra modalidad, el agente químico es carboplatino, por ejemplo PARAPLATIN (Bristol Myers) , en una dosis en el intervalo desde 2 hasta 4, de 4 a 8, 8 a 16, 16 a 35 ó 35 a 75 mg/m /ciclo . En otra modalidad, una dosis de carboplatino en el intervalo desde 7.5 a 75 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer ovárico. En otra modalidad, una dosis de carboplatino en el intervalo desde 5 hasta 50 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer de vejiga. En otra modalidad, una dosis de cisplatino en el intervalo desde 2 hasta 20 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer testicular.

En otra modalidad, el agente químico es ciclofosfamida, por ejemplo CITOXAN (Brisol Myers Squibb), en una dosis en el intervalo desde 0.25 hasta 0.5, 0.5 a 1, 1 a 2, 2 a 5, 5 a 10, 10 a 20, 20 a 40 mg/m /ciclo. En otra modalidad, una dosis de ciclofosfamida en el intervalo desde 4 a 40 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer maligno. En otra modalidad, una dosis de ciclofos famida, en el intervalo desde 0.25 a 2.5 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer no maligno.

En una modalidad, el agente químico es citarabina, por ejemplo CYTOSAR-U (Pharmacia & Upjohn) , en una dosis en el intervalo desde 0.5 hasta 1, 1 a 4, 4 a 10, 10 a 25, 25 a 50 ó 50 a 100 mg/m /ciclo. En otra modalidad, una dosis de citarabina en el intervalo desde 10 hasta 100 mg/m /ciclo se administra a un paciente con leucemia aguda. En otra modalidad, una dosis de citarabina en el intervalo desde 0.5 a 5 mg/m /ciclo se administra a un paciente con leucemia meningeal. En otra modalidad, una dosis de liposoma con citarabina, por ejemplo, DEPOCYT (Chiron Corp.) en el intervalo desde 5 hasta 50 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer.

En otra modalidad, el agente químico es dacarbazina, por ejemplo DITC o DTIC-DOME (Bayer Corp.) en una dosis en el intervalo desde 15 hasta 250 mg/m /ciclo o en el intervalo desde 0.2 hasta 2 mg/kg/ciclo. En otra modalidad, una dosis de dacarbazina en el intervalo desde 15 hasta 150 mg/m /ciclo se administra a un paciente con enfermedad de Hodgkin. En otra modalidad, una dosis de dacarbazina en el intervalo desde 0.2 a 12 mg/kg/ciclo se administra a un paciente con melanoma maligno.

En otra modalidad, el agente químico es topotecán por ejemplo, HYCAMTIN (SmithKline Beecham) , en una dosis que abarca desde 0.1 hasta 0.2, 0.2 a 0.4, 0.4 a 0.8 ó 2 0.8 a 1.5 mg/m /ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es irinotecan por ejemplo, CAMPTOSAR (Pharmacia & Upjohn) , en una dosis que abarca desde 5 hasta 10, 10 a 25 ó 25 a 50 mg/m /ciclo. En otra modalidad, el agente químico es fludarabina, por ejemplo, FLUDARA (Berlex laboratorios), en un intervalo de dosis desde 2.5 hasta 5, 5 a 10, 10 a 15 ó 15 a 25 mg/m /ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es arabinósido de citosina (Ara-C) en un intervalo de dosis desde 200 hasta 2000 mg/m /ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es docetaxel, por ejemplo, TAXOTERE (Rhone Poulenc Rorer) en un intervalo de dosis desde 6 hasta 10, 10 a 30 6 30 a 60 mg/m /ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es paclitaxel, por ejemplo, TAXOL (Bristol Myers Squibb), en un intervalo de dosis desde 10 hasta 20, 20 a 40, 40 a 70 ó 70 a 135 mg/kg/ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es 5-fluorouracilo en un intervalo de dosis desde 0.5 a 5 mg/kg/ciclo .

En otra modalidad, el agente químico es doxorubicina, por ejemplo, ADRIAMYCIN (Pharmacia & Upjohn), DOXIL (Alza), RUBEX (Brisol Myers Squibb), en un intervalo de dosis desde 2 hasta 4, de 4 a 8, 8 a 15, 15 a 30 ó 30 a 60 mg/kg/ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es etopósido, por ejemplo, VEPESID (Pharmacia & Upjohn) , en un intervalo de dosis desde 3.5 a 7, 7 a 15, 15 a 25 ó 25 a 50 mg/m /ciclo. En otra modalidad, una dosis del etopósido que abarca desde 5 a 50 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer testicular. En otra modalidad, una dosis del etopósido en el intervalo desde 3.5 a 35 mg/m /ciclo se administra a un paciente con cáncer de pulmón de células pequeñas.

En otra modalidad, el agente químico es vinblastina, por ejemplo VELBAN (Eli Lilly), en un intervalo de dosis desde 0.3 hasta 0.5, 0.5 a l, l a 2, 2 a 3 ó 3 a 3.7 mg/m /ciclo .

En otra modalidad, el agente químico es vincristina, por ejemplo ONCOVIN (Eli Lilly) , en un intervalo de dosis desde 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6 ó 0.7 mg/m2/ciclo.

En otra modalidad, el agente químico es metotrexato en una dosis que abarca desde 0.2 a 0.9, 1 a 5, 5 a 10, 10 a 20 [sic] .

En otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 se administra en combinación con uno o más agentes inmunoterapéuticos como anticuerpos e inmunomoduladores, que incluye, pero no se limitan a, rituxan, rituximab, campth-1, gemtuzumab, o trastuzumab.

En otra modalidad, se administra un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con uno o más agentes antiangiogénicos que incluyen, pero no se limitan a, angiostatina, talidomida, kringle 5, endostatina, Serpin (inhibidor de la serina proteasa) , antitrombina, fragmentos proteoliticos N-terminales de 29 kDa y C-terminales de 40 kDa de fibronectina, el fragmento proteolitico de 16 kDa de prolactina, el fragmento proteolitico de 7.8 kDa del factor de plaquetas 4, un péptido de 13 aminoácidos correspondientes a un fragmento del factor de plaquetas 4 (Maione y col., 1990, Cáncer Res. 51: 2077-2083), un péptido de 14 aminoácidos correspondiente a un fragmento de colágena I (Tolma y col., 1993, J. Cell. Biol. 122: 497-511), un péptido de 19 aminoácidos correspondiente a un fragmento de trombospondina I (Tolsma y col., 1993, J. Cell. Biol. 122: 497-511), un péptido de 20 aminoácidos correspondiente a un fragmento de SPARC (Sage y col., 1995, J. Cell. Biochem. 57: 1329-1334), o cualquiera de los fragmentos, miembros de familia o derivados de estos, incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de estos .

Otros péptidos que inhiben la angiogénesis y corresponden a los fragmentos de laminina, fibronectina, procolágena y EGF también han sido descritos (véase la revisión de Cao, 1998, Prog. Mol. Subcell. Biol. 20: 161-176) . Los anticuerpos monoclonales y los pentapéptidos cíclicos que bloquean ciertas integrinas que se unen a las proteínas RGD (es decir, posee el motivo péptido Arg-Gly-Asp) , según se ha demostrado tienen actividades antivascularización (Brooks y col., 1994, Science 264: 569-571; Hammes y col., 1996, Nature Medicine 2: 529-533) . Más aún, la inhibición del receptor para el activador plasminógeno urocinasa por antagonistas del receptor inhibe la angiogénesis, el crecimiento tumoral y la metástasis (Min y col., 1996, Cáncer res. 56: 2428-33; Crowley y col., 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 5021-25) . El uso de agentes antiangiogénicos como estos también esta contemplado por la presente invención.

En otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra en combinación con un esquema de radiación.

En otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra en combinación con una o más citocinas que incluyen, pero no se limitan a, linfocinas, factores de necrosis tumoral, citocinas tipo factor de necrosis tumoral, linfotoxina-a, linfotoxina-ß, interferón-a, interferón-ß, proteínas inflamatorias de macrofagos, factor estimulador de colonias de granulocitos y monocitos, interleucinas (que incluye, pero no se limita a, interleucina-1 , interleucina-2, interleucina-6, interleucina-12 , interleucina-15, interleucina-18) , los ligandos OX40, CD27, CD30, CD40 ó CD137, o ligando Fas-Fas, 4-1BBL, la proteina activadora de monocitos endoteliales o cualquiera de los fragmentos, miembros de la familia o derivados de estos, incluidas las sales farmacéuticamente aceptables de estos . todavía otra modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 se administra en combinación con una vacuna contra cáncer. Los ejemplos de las vacunas contra el cáncer incluyen, pero no se limitan a, células o tejidos autólogos, células o tejidos no autólogos, antigeno carcinoembriónico, alfa-fetoproteina, gonadotropina, coriónica humana, vacuna BCG viva, proteínas del linaje de melanocitos (por ejemplo, gplOO, ART-1 / elanA, TRP-1 (gp75) , tirosinasa, antígenos específicos de tumor ampliamente compartidos (por ejemplo BAGE, GAGE-1, GAGE2, AGE1, MAGE-3, N-acetilglucosaminiltransf rasa-V, pl5) , antígenos mutados que sean específicos del tumor (ß-catenina, MUM-1, CDK4) , antígenos no de melanoma (por ejemplo HER-2/neu (carcinoma de mama y de ovario) , papilomavirus humano~E6, E7 (carcinoma cervical) , MUC-1 (carcinoma de mama, ovárico y pancreático) ) . Para los antígenos de tumor humano reconocidos por las células T, véase en general, Robbins y awakami, 1996, Curr. Opin. Immunol 8:628-36. Las vacunas contra el cáncer pueden o no se preparaciones purificadas.

En todavía otra modalidad, el oligómero antisentido bcl-2 se utiliza en asociación con un tratamiento hormonal. Los tratamientos terapéuticos hormonales comprenden los agonistas hormonales, antagonistas hormonales (por ejemplo flutamida, tamoxifeno, acetato de leuprólido (LUPRON ) ) , y esteroides (por ejemplo dexametasona, retinoides, betametasona, cortisol, cortisona, prednisona, dehidrotestosterona, glucocorticoides, mineralocorticoides, estrógeno, testosterona, progestinas) . En todavía otra modalidad, se utiliza un oligómero antisentido bcl-2 en asociación con un programa de tratamiento génico en el tratamiento de cáncer.

En una modalidad, se administra un oligómero antisentido bcl-2 en combinación con cuando menos un agente terapéutico de cáncer, durante un ciclo de tratamiento corto a un paciente de cáncer para tratar el cáncer. En una modalidad, el ciclo de tratamiento abarca desde 2 hasta 13 días. En otra modalidad, el ciclo de tratamiento abarca desde 3 hasta 9 días. En otra modalidad, el ciclo de tratamiento abarca desde 4 hasta 7 días. En todavía otra modalidad, el ciclo de tratamiento abarca desde 5 hasta 6 días. La duración del tratamiento con el agente terapéutico de cáncer puede variar dependiendo del agente terapéutico de cáncer específico que se utilice. La invención también contempla la administración discontinua o las dosis diarias divididas en varias administraciones parciales. El trabajador experto determinaré un tiempo de tratamiento adecuado para un agente terapéutico de cáncer específico, y la invención contempla la evaluación continua de los programas de tratamiento óptimos para cada agente terapéutico de cáncer.

La presente invención contempla cuando menos un ciclo, preferentemente más de un ciclo durante el cual se administre un solo terapéutico o una secuencia de terapéuticos. En una modalidad preferida, el ciclo es más corto que 14 días. En una modalidad, la duración de un ciclo es de 10-13 días. En una modalidad preferida, la duración de un ciclo es de 7-9 días. En una modalidad más preferida, la duración de un ciclo es 5-6 días. Un periodo de tiempo adecuado para un ciclo será determinado por el trabajador experto, como lo será el número total de ciclos, y el intervalo entre ciclos. La invención contempla la evaluación continua de los programas de tratamiento óptimos para cada oligómero antisentido bcl-2 y agente terapéutico de cáncer. 5.3 COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS La presente invención además propone una composición farmacéutica que contiene un oligómero antisentido bcl-2 y un portador aceptable para uso farmacéutico. Los portadores aceptables para uso farmacéutico convenientes incluyen prácticamente las composiciones químicas inertes y no tóxicas que no interfieran con la eficacia de la actividad biológica de la composición farmacéutica. Los ejemplos de los portadores farmacéuticos convenientes incluyen, pero no se limitan a, soluciones salinas, soluciones de glicerol, etanol, cloruro de N- (1(2,3-dioleiloxi) propil) -N, , N-trimetilamonio (DOTMA) , diolesilfosfotidiletanolamina (DOPE) y liposomas. Composiciones como estas deben contener una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto, junto con una cantidad conveniente del portador para ofrecer la forma para la administración adecuada al paciente. La formulación debe corresponder con el modo de administración. Por ejemplo, la administración oral requiere recubrimientos entéricos para proteger el oligómero antisentido contra la degradación dentro del tracto gastrointestinal. En otro ejemplo, el oligómero antisentido puede ser administrado en una formulación liposomal para proteger el oligómero antisentido de las enzimas degradativas , facilitar el transporte al sistema circulatorio y efectuar el suministro a través de las membranas celulares hacia los sitios intracelulares .

En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un oligómero antisentido bcl-2 y uno o más agentes terapéuticos y un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad particular, la composición farmacéutica contiene un oligómero antisentido bcl-2 y uno o más agentes terapéuticos de cáncer y un portador farmacéuticamente aceptable.

En una modalidad, una composición farmacéutica que contenga un oligómero antisentido bcl-2, con o sin otros agentes terapéuticos, y un portador farmacéuticamente aceptable, está en una dosis eficaz. En una modalidad, la composición farmacéutica contiene un oligómero antisentido bcl-2 en una dosis desde aproximadamente 0.01 a 0.1, 0.1 a 1, 1 a 5 ó 6 a 10 mg/kg/dia; preferentemente en una dosis de 4 a 9 mg/kg/dia; más preferentemente en una dosis de 5 a 7 mg/kg/dia; y un portador aceptable para uso farmacéutico. La cantidad real de cualquier oligómero antisentido especifico que se administre puede depender de varios factores como el tipo de cáncer, la toxicidad del oligómero antisentido para las células normales del cuerpo, la velocidad de captación del oligómero antisentido por las células tumorales y el peso y edad del individuo a quien se administre el oligómero antisentido. Debido a los múltiples factores presentes in vivo que pueden interferir con la acción o la actividad biológica del oligómero antisentido, una cantidad eficaz del oligómero antisentido puede variar para cada individuo.

En otra modalidad, las composiciones farmacéuticas de la invención contienen un oligómero antisentido bcl-2 en una dosis particularmente alta que abarca desde aproximadamente 10 a 50 mg/kg/dia. En una modalidad especifica, durante un ciclo de tratamiento se administra una dosis particularmente alta del oligómero antisentido bcl-2 que abarca desde 11 a 15, 16 a 20, 21 a 25, 26 a 30, 31 a 35, 36 a 40, 41 a 45 ó 46 a 50 mg/kg/dia.

La selección de la dosis eficaz preferida se puede determinar (por ejmplo, a través de pruebas clínicas) por un experto con base en la consideración de algunos factores que serán conocidos para el trabajador experto. Tales factores incluyen la forma especifica del oligómero antisentido, parámetros farmacocinéticas del oligómero como biodisponibilidad, metabolismo, vida media, etcétera, que se establecen durante los procedimientos de desarrollo normalmente empleados para obtener la aprobación regulatoria de un compuesto farmacéutico. Otros factores a considerar para la dosis incluyen la enfermedad que ha de ser tratada, el beneficio que obtendrá el paciente, la masa corporal del paciente, el estado inmune del paciente, la via de administración, y la administración del oligómero antisentido o el agente terapéutico en combinación es aguda o crónica, las modificaciones concurrentes y otros factores conocidos por el experto que pueden afectar la eficacia de los agentes farmacéuticos que se administran.

Las composiciones de la invención se pueden formular como formas neutras o sales . Las sales aceptables para uso farmacéutico incluyen las formadas con grupos amino libres como las provenientes del ácido clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y aquellas formadas con grupos carboxilo libres como las obtenidas de los hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio, férrico, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaina, etcétera.

En una modalidad preferida, la composición se formula de conformidad con los procedimientos habituales como una composición farmacéutica adaptada para inyección subcutánea o administración intravenosa a humanos. Por lo regular, las composiciones para inyección subcutánea o administración intravenosa son soluciones en amortiguadores acuosos isotónicos, estériles. Según sea necesario, la composición también puede incluir un agente solubilizador y un anestésico local como lidocaína para aliviar el dolor en el sitio de inyección. En general, los ingredientes se suministran cada uno por separado o se mezclan entre sí en una forma de dosificación unitaria,- por ejemplo, como un polvo liofilizado anhidro o concentrado sin agua en un recipiente hermético como puede ser una ampolleta o sachet indicando la cantidad del agente activo. Cuando la composición se va a administrar por infusión, puede ser dosificada con una botella para infusión, bolsa u otro recipiente adecuado, que contenga el agua grado farmacéutico estéril, salina u otros diluyentes aceptables. Cuando la composición se administra por inyección se puede proporcionar una ampolleta de agua estéril para inyección o salina para mezclar los ingredientes antes de la administración. 5.4 MODOS DE ADMINISTRACIÓN La administración de las composiciones farmacéuticas de la invención incluye, pero no se limita a, oral, infusión intravenosa, inyección subcutánea, inyección intramuscular, administración tópica, inyección depo, implante, modo de liberación prolongada, intracavitaria, intranasal, por inhalación, intratumoral, intraocular y de liberación sostenida. Las composiciones farmacéuticas de la invención también se pueden introducir por via parenteral, transmucosa (por ejemplo oral) , nasal, rectal, intravaginal , sublingual, submucosa o transdérmica . De preferencia, la administración es parenteral, es decir, no a través del canal alimentario sino más bien a través de algunas otras vias, por ejemplo la administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intraorbital, intracapsular, intraespinal, intraesternal, intra-arterial o intradérmica . El trabajador experto puede apreciar las ventajas y desventajas especificas que han de ser consideradas durante la elección de un modo de administración. Múltiples modos de administración están comprendidos por la invención. Por ejemplo, un oligómero antisentido bcl-2 se administra por inyección subcutánea, mientras que un agente terapéutico para combinación se administra por infusión intravenosa. Más aún, la administración de una o más especies de oligómero antisentido bcl-2, con o sin otros agentes terapéuticos, puede acontecer al mismo tiempo (es decir, la coadministración) o en sucesión. Por ejemplo, primero se administra un oligómero antisentido bcl-2 para aumentar la sensibilidad de un tumor a la administración ulterior de un agente terapéutico de cáncer o terapia de radiación. En otra modalidad, los periodos de administración de una o más especies de oligómero antisentido bcl-2, con o sin otros agentes terapéuticos se pueden superponer. Por ejemplo, un oligómero antisentido bcl-2 se administra durante 7 dias, un segundo agente terapéutico se introduce comenzando el quinto día del tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2, y el tratamiento con el segundo agente terapéutico continúa más allá del tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 de 7 días.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral pueden proporcionarse, por ejemplo, como cápsulas o tabletas; como polvos o gránulos; como soluciones, jarabes o suspensiones (en líquidos acuosos o no acuosos) ; como espumas comestibles u obleas; o como emulsiones. Las tabletas o cápsulas de gelatina dura pueden contener, por ejemplo, lactosa, almidón o derivados de este, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa, carbonato de magnesio, ácido esteárico o sales de estos. Las cápsulas de gelatina blanda pueden contener, por ejemplo, aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semisólidos o líquidos, etc. Las soluciones y jarabes pueden contener, por ejemplo, agua, polioles y azúcares .

Un agente activo propuesto para administración oral puede ser recubierto con o mezclado con un material (por ejemplo, monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo) que retrase la desintegración ó afecte la absorción del ingrediente activo en el aparato gastrointestinal. Asi pues, por ejemplo, la liberación sostenida de un agente activo puede lograrse durante muchas horas y, si es necesario, el agente activo puede ser protegido de la degradación en el aparato gastrointestinal. Aprovechando la ventaja de las diferentes condiciones de pH y enzimáticas a lo largo del aparato gastrointestinal, las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden ser formuladas para facilitar la liberación del agente activo en un lugar gastrointestinal especifico.

Las composiciones f rmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen, pero no se limitan a, soluciones o suspensiones inyectables, estériles, acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos que tornen a las composiciones substancialmente isotónicas con la sangre de un receptor propuesto. Otros componentes que pueden estar presentes en estas composiciones incluyen agua, alcoholes, polioles, glicerina y aceites vegetales por ejemplo. Las composiciones adaptadas para administración parenteral pueden ser presentadas en recipientes con dosis individual o dosis múltiples, por ejemplo ampolletas y viales sellados, y pueden ser almacenadas en un estado secado por congelamiento (liofilizado) demandando la adición de un portador liquido estéril, por ejemplo solución salina estéril para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyección, extemporáneas, se pueden preparar de polvos estériles, gránulos y tabletas. Tales composiciones deben contener una cantidad terapéutica eficaz de un oligómero antisentido bcl-2 u otro agente terapéutico, junto con una cantidad conveniente de portador para proporcionar la forma de administración adecuada para el paciente.

La formulación debe corresponder con el modo de administración.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración transdérmica pueden proporcionarse como parches pequeños propuestos para permanecer en contacto intimo con la epidermis durante un tiempo prolongado. Las composiciones f rmacéuticas adaptadas para administración tópica se pueden proporcionar, por ejemplo, como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, roclos, aerosoles o aceites. El ungüento o crema tópico preferentemente se utiliza para administración tópica para la piel, boca, ojos y otros tejidos externos. Cuando se formula en un ungüento, el ingrediente activo puede emplearse con una base para ungüento parafinica o miscible en agua. De otro modo, el ingrediente activo puede formularse en una crema con una base aceite en agua o una base agua en aceite.

Las composiciones farmacéuticas propuestas para administración tópica al ojo incluyen, por ejemplo gotas oftálmicas o composiciones inyectables. En estas composiciones, el ingrediente activo puede estar disuelto o suspendido en un portador conveniente que incluye, por ejemplo, un solvente acuoso con o sin carboximetilcelulosa. Las composiciones farmacéuticas propuestas para administración tópica en la boca incluyen, por ejemplo, pildoras, pastillas y lavados bucales .

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración nasal pueden contener portadores sólidos como polvos (preferentemente con un tamaño de partícula en el intervalo desde 20 hasta 500 mieras) . Los polvos se pueden administrar en la forma de aspiración, es decir, por inhalación rápida a través de la nariz desde un recipiente del polvo que se mantenga cerca de la nariz. De otro modo, las composiciones adaptadas para administración nasal pueden contener portadores líquidos, por ejemplo roclos nasales o gotas nasales. Estas composiciones pueden consistir en soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo. Las composiciones para administración por inhalación pueden ser suministradas en dispositivos especialmente adaptados que incluyen, pero no se limitan a, aerosoles presurizados , nebulizadores o insufladores , que pueden construirse para proporcionar dosificaciones predeterminadas del ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración rectal se pueden proporcionar como supositorios o enemas. Las composiciones farmacéuticas propuestas para administración vaginal se pueden suministrar, por ejemplo, como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol .

En una modalidad, una composición farmacéutica de la invención se suministra por un sistema de liberación controlada. Por ejemplo, la composición farmacéutica se puede administrar utilizando infusión intravenosa, una bomba osmótica implantable, parche transdérmico, liposomas u otros modos de administración. En una modalidad, se puede utilizar una bomba (véase por ejemplo Langer, 1990, Science 249: 1527-33; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201; Buchwald y col., 1980, Surgery 88: 507; Saudek y col., 1989, N. Engl . J. Med. 321: 574) . En otra modalidad, el compuesto se puede suministrar en una vesícula, en particular un liposoma (véase por ejemplo, Langer, Science 249: 1527-33 (1990); Treat y col., 1989, en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cáncer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-65; Lopez-Berestein, ibid, pp. 317-27 Publicación de la Patente Internacional No. O 91/04014; Patente Estadounidense No. 4,704,355) . En otra modalidad, se pueden utilizar materiales poliméricos (Véase por ejemplo Medical Applications of Controlled Reléase, Langer and Wise (eds.), CRC Press: Boca Ratón, Florida, 1974; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley: New York (1984); Ranger y Peppas, 1953, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol . Chem. 23: 61; Levy y col., 1985, Science 228: 190; During y col., 1989, Ann. Neurol. 25: 351; Howard y col., 1989, J. Neuruosurg. 71: 105).

En todavía otra modalidad, es posible colocar un sistema de liberación controlada en proximidad con el objetivo. Por ejemplo, una microbomba puede suministrar dosis controladas directamente en el cerebro, requiriendo por este medio solo una fracción de la dosis sistémica (véase por ejemplo, Goodson, 1984, en Medical Applications of Controlled Reléase, vol . 2, pp. 115-138).

En una modalidad, puede ser deseable administrar la composición farmacéutica de la invención en forma local en el área en necesidad de tratamiento; esto se puede lograr, y no como limitación, por infusión local durante cirugía, aplicación tópica (por ejemplo junto con un vendaje para heridas después de la cirugía) , inyección, por medio de un catéter, por medio de un supositorio o por medio de un implante. Un implante puede ser de material poroso, no poroso o gelatinoso, incluidas membranas como las membranas sialastic o fibras.

Los supositorios por lo regular contienen ingredientes activos en el intervalo de 0.5% a 10% en peso. Las formulaciones orales preferentemente contienen 10% a 95% del ingrediente activo en peso.

Un oligómero antisentido bcl-2 se puede administrar antes, durante y/o después de la administración de uno o más agentes terapéuticos. En una modalidad, un oligómero antisentido bcl-2 primero se puede administrar para reducir la expresión de bcl-2, la cual aumenta la sensibilidad del tumor al desafio ulterior con un agente terapéutico de cáncer. En otra modalidad, es posible administrar un oligómero antisentido bcl-2 después de la administración de un agente terapéutico de cáncer para reducir la expresión de bcl-2 del tumor, y por este medio prevenir la recurrencia o la reducción de la respuesta al agente terapéutico de cáncer. En todavía otra modalidad, puede haber un periodo de traslape entre la administración del oligómero antisentido bcl-2 y uno o más agentes terapéuticos.

La invención además proporciona un kit farmacéutico que contiene una cantidad eficaz de un oligómero bcl-2, en combinación con un agente terapéutico de cáncer, para proteger de o tratar un trastorno relacionado con bcl-2. En una modalidad, la cantidad eficaz de un oligómero bcl-2 y un portador aceptable para uso farmacéutico se pueden envasar en un vial para una sola dosis u otro recipiente.

En una modalidad específica, el oligómero bcl-2 consiste en G3139 (SEQ ID NO: 17) . El kit puede contener uno o más recipientes llenados con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la invención. Como una opción, asociada con estos recipientes puede estar un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regule la fabricación, uso o venta de los productos farmacéuticos o biológicos, cuyo aviso manifieste la aprobación por parte de la agencia de la fabricación, uso o venta para la administración humana.

La presente invención se puede comprender mejor haciendo referencia a los siguientes ejemplos no limitantes que se proponen solo como ejemplares de la invención. Los siguientes ejemplos se presentan para ilustrar con mayor detalle las modalidades preferidas de la invención. Sin embargo no deben ser considerados como limitantes del amplio alcance de la invención. 6. EJEMPLO 1: LA TERAPIA CON EL OLIGÓMERO ANTISENTIDO BCL-2 QUIMIOSENBILIZA EL MELANOMA MALIGNO Este ejemplo demuestra el uso conveniente de un oligómero antisentido bcl-2 para el tratamiento de pacientes con melanoma maligno avanzado. En este estudio 6 de los pacientes que fueron tratados con el oligómero antisentido bcl-2 recibieron administraciones sistémicas del oligómero en concentraciones de 5.3 ó 6.5 mg/kg/día durante 7 días, en combinación con un agente químico. Los hallazgos reportados en este ejemplo demuestran que, cuando se administra un oligómero antisentido bcl-2 en dosis altas durante periodos cortos, el tratamiento muestra baja toxicidad de acuerdo con los criterios de toxicidad comunes, reduce bcl-2 dentro del tumor, facilita la apoptosis y da origen a respuestas objetivas del tumor y supervivencia prolongada del paciente. Incluidos entre los pacientes con respuesta hubo algunos con "cáncer resistente al tratamiento" quienes habían experimentado enfermedad progresiva durante el tratamiento con agentes anticáncer normales, en los que el tratamiento con agentes normales como dacarbazina utilizada sola tendría un beneficio mínimo o no esperado. Por el contrario, el tratamiento en combinación con el antisentido bcl-2 y dacarbazina dio origen a respuestas inesperadas durables y supervivencia prolongada. Además, el estudio del seguimiento, el cual utilizó mayores dosis durante periodos más cortos en cinco pacientes demostró tolerancia satisfactoria cuando el oligómero antisentido bcl-2 se administró sistémicamente en una concentración de 7 mg/kg/día durante 7 dias. Asi pues, los resultados indican que la administración de un oligómero antisentido bcl-2 en dosis altas durante un periodo corto es un tratamiento seguro y eficaz para melanoma. La aproximación bosquejada en este estudio proporciona una estrategia ampliamente aplicable para el tratamiento de otros tipos de cánceres . 6.1 MATERIALES Y MÉTODOS Catorce pacientes con melanoma metastásico en la etapa IV fueron elegibles para este estudio de escalación de la dosis en fase I/II si tenían enfermedades medibles, y si las metástasis cutáneas eran accesibles por biopsia e inicialmente positivas para la expresión de bcl-2 por el método de estern blot (Tabla 1) . Se requería que los pacientes tuvieran función renal, hepática y hematopoyética normales y sin quimio o inmunoterapia durante cuatro semanas antes de la inclusión en el estudio.

El oligómero antisentido bcl-2 (secuencia 5'-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3' ) se administró como una infusión intravenosa continua (CIV) durante 14 días con una bomba de infusión ambulatoria (Sims Deltec Inc., St. Paul MN, EUA) a través de una línea venosa central. Mediante el uso de una línea intravenosa periférica separada, se administró DTIC en dosis de 200 mg/m2/día proporcionada por infusiones de una hora durante 5 días en los días 5 a 9 del tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 de 14 días. Los ciclos de tratamiento se repitieron mensualmente . La escalación de la dosis se comenzó con 0.6 mg/kg/día y se continuó con 1.3, 1.7, 2.1, 3.1, 4.1, 5.3 y 6.5 mg/kg/día del ASO bcl-2. Una vez que se estableció la seguridad en un grupo cohorte de cuando menos 3 pacientes en un nivel de dosis determinado, se introdujeron nuevos cohortes de pacientes en la concentración de la dosis próxima superior (Waters y col., 2000, J. Clin. Oncol. 18(9) : 1812-23) . Los ciclos repetidos de 28 días y escalación de las dosis intrapacientes fueron permitidos en pacientes estables y con respuesta después de un periodo de observación de dos semanas .

Con el fin de obtener experiencia clínica con una guía y programa alternativo, seis pacientes en los cohortes tratados con 5.3 ó 6.5 mg/kg/día recibieron su primer ciclo por infusión intravenosa y entonces fueron cambiados a la administración subcutánea (SC) del oligómero antisentido bcl-2 en ciclos ulteriores. Estos pacientes tratados por la vía SC recibieron la misma dosis diaria total, administrada por inyecciones SC dos veces al día en los días 1 a 7, combinada con DTIC 800 mg/m' administrada como una infusión de una hora en el día 5. Los efectos antitumorales fueron evaluados después de cada ciclo de tratamiento utilizando mediciones con un compás y documentación fotográfica detallada de los pacientes con metástasis de piel; las metástasis viscerales fueron documentadas y seguidas por barridos tomográficos computarizados. Se utilizaron criterios de 1 WHO para la clasificación de la respuesta tumoral, requiriendo documentación seriada con duración de cuando menos cuatro semanas. La respuesta completa fue definida como desaparición de las metástasis detectables. Se definió una respuesta parcial como una reducción del 50% o mayor de las metástasis medibles . Cuando los pacientes demostraron numerosas metástasis en un órgano, un máximo de 5 lesiones objetivo fueron documentadas en la línea base y luego seguidas para determinar la respuesta. Un aumento en la enfermedad medible de más de 25%, o la aparición de nuevas lesiones metastásicas, fueron definidas como enfermedad progresiva. Además, una situación donde los diámetros de las lesiones objetivo regresaron en menos de 50% pero más de 25% fueron denominadas como respuesta menor. Las demás situaciones fueron definidas como enfermedad estable. La supervivencia fue evaluada desde el momento del primer tratamiento en este protocolo.

Se registró la toxicidad por los criterios de toxicidad comunes y se supervisó diario durante la administración del fármaco, después semanalmente entre ciclos. Cualquier toxicidad grado III ó IV relacionada con el tratamiento que no se resolviera en las dos semanas entre los ciclos de tratamiento fue considerada toxicidad limitante de la dosis. La muestra de plasma para determinar la farmacocinética del oligómero antisentido bcl-2 fueron recolectadas en el momento cero antes del tratamiento, después en los días 2, 3, 5, 6, 10 y 14 en pacientes que recibían la infusión intravenosa de dos semanas del ASO bcl-2; se determinaron los perfiles farmacocinéticos durante 12 horas en pacientes que recibían el oligómero antisentido bcl-2 como inyecciones subcutáneas en bolo en el sitio abdominal. Las concentraciones plasmáticas del oligómero antisentido bcl-2 fueron ensayadas por Pharmanalyt, Badén, Austria, utilizando HPLC (Chen y col., 1997 J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. 692: 43-51).

La expresión de bcl-2 y la velocidad apoptósica de las metástasis de melanoma fueron evaluadas por análisis western blot y el método TUNEL, respectivamente (Cansen y col., 1998, Nat. Med. 4 (2): 232-4). Las reducciones de bcl-2 menores que 20% en comparación con las concentraciones en la linea base no fueron consideradas como significativas por las limitaciones técnicas. Los tumores sometidos a biopsia fueron seleccionados con base en el tamaño, ubicación y características clinicas, similares a las lesiones objetivo que se utilizaron para la medición de la respuesta. Las biopsias por escisión de las metástasis de melanoma cutáneo fueron realizadas en la linea base y durante el dia 5 de cada nivel de dosis del oligómero antisentido bcl-2 antes de la administración de DTIC; otras biopsias fueron obtenidas hasta el dia 14 del ciclo para documentar los efectos del tratamiento combinado oligómero antisentido bcl-2 y DTIC. Se investigó un total de 2-4 biopsias de tumor por paciente y por nivel de dosis. La porción de la biopsia tumoral que se utilizó para los análisis western blot y TUNEL también fue evaluada por histopatologia de rutina para garantizar el contenido consistente de la célula tumoral y para limitar los efectos confusos de las células no tumorales en la muestra de la biopsia. 6.2 RESULTADOS Un total de 14 pacientes fueron tratados con el oligómero antisentido bcl-2 (0.6 a 6.5 mg/kg/dia) combinado con DTIC conforme con los dos esquemas de tratamiento (I. V. ó S. C.) antes mencionado.

Las concentraciones plasmáticas del oligómero antisentido bcl-2 en el estado estacionario se observaron después de un dia de infusión intravenosa continua y un aumento lineal con la dosis administrada. Las dosis > 1.7 mg/kg/dia del oligómero antisentido bcl-2 dieron origen a concentraciones plasmáticas en estado estacionario consistentes de más o menos 1 µg/µL, un nivel plasmático determinado como bioactivo en modelos animales (Raynaud y col., 1997, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281: 420-7). Con 6.5 mg/kg/dia se llegó en 24 horas a un nivel plasmático promedio en el estado estacionario de 6.47 µg/mL +/- DE = 2.51 g/mL. Las concentraciones plasmáticas del oligómero antisentido bcl-2 de las inyecciones SC en bolo administradas dos veces al dia fueron en forma de campana durante 12 horas. Una concentración máxima de 8.6 µg/mL +/- DE = 1.26 µg/mL se observó 3 a 4 horas después de la inyección de la dosis SC de 3.25 mg/kg administrada en intervalos de 12 horas. Más del 90% del periodo de 12 horas entre inyecciones subcutáneas, las concentraciones plasmáticas excedieron la concentración plasmática objetivo de 1 mg/mL, asociada con la actividad biológica. No se observaron cambios en las propiedades faritiacocinéticas en pacientes que recibían múltiples ciclos de tratamiento; el tratamiento DTIC concurrente no afectó las concentraciones plasmáticas del oligómero antisentido bcl-2 en el estado estacionario.

En la línea base, la expresión de la proteína bcl-2 de las metástasis de melanoma cutáneo (Selzer y col., 1998, 8(3) : 197-203; Cerroni y col., 1995, Am. J. Dermatopathol . 17: 7-11), se confirmó por análisis western blot en los 14 pacientes sometidos a escrutinio para este estudio; las biopsias en serie de las lesiones comparables demostraron reducciones en las concentraciones de proteína bcl-2 durante la administración del oligómero antisentido bcl-2 (Tabla 1) . En el paciente 10, los ejemplares en serie de tumor no pudieron ser evaluados por western blot debido a la falta de células de melanoma en el tejido de la biopsia. La reducción máxima de la proteína bcl-2 en pacientes tratados por infusión continua durante 14 días del oligómero antisentido bcl-2 por lo regular se observó por el día 5 sin más disminución para el día 14. 83% de los pacientes evaluables con las concentraciones plasmáticas del oligómero antisentido bcl-2 en exceso de 1 µ?/?t? (10 de 12 pacientes) demostraron una clara reducción en la expresión de bcl-2 (Tabla 1) . Los ciclos de tratamiento con la dosis > 1.7 mg/kg/día del oligómero antisentido bcl-2 demostraron una reducción media de la reducción de la proteína bcl-2 de 40% por el día 5.

Por el método de tinción TUNEL se observó un aumento de células apoptósicas en el ejemplar de tumor después de 5 días del tratamiento del oligómero antisentido bcl-2 (aumento a partir de la línea base 0.85%), +/- DE = 0.47%; a 3.17%, +/- DE = 1.16%) (Figura 2B) . No obstante, en las biopsias tomadas después de adicionar el estímulo apoptósico (DTIC) , se pudo observar un mejoramiento drástico adicional en la muerte de células apoptósicas (Figura 2C, 19.4% +/- DE = 4.2%). El tratamiento en combinación del oligómero antisentido bcl-2 y DTIC fue bien tolerado hasta e incluyendo 6.5 mg/kg/día del oligómero antisentido bcl-2 sin toxicidad limitadora de la dosis (Tabla 2) .

Las anomalías hematológicas fueron leves o moderadas (grado I-III, Tabla 2) , y siguieron el patrón de los valores nadir entre los ciclos de tratamiento comunes para el único agente DTIC. Ninguno de los pacientes experimentó neutropenia febril ni ninguna otra toxicidad hematológica clinica importante. Anemia grado II-III que requirió de transfusión se observó en dos pacientes durante el estudio, pero la anemia estuvo presente en la linea base en estos mismos pacientes, tal vez causada por tratamientos anteriores. Por lo regular se observó linfopenia grado II-III, pero sin secuelas clínicas como las infecciones virales o micóticas poco comunes, u otra evidencia clinica para la inmunosupresión a pesar de los ciclos repetidos que duraban más o menos un año en algunos pacientes. La prolongación transitoria grado II-III del tiempo de tromboplastina parcial se observó en tres pacientes sin sangrado clinico.

Los episodios adversos no hematológicos se recogen en la parte inferior de la Tabla 2. Las dosis del oligómero antisentido bcl-2 de más o menos 4.1 mg/kg/dia fueron asociadas con fiebre transitoria en la mayoria de los pacientes. La fiebre llegó por lo regular a 38°C durante los dias 2-3 del tratamiento y se resolvió espontáneamente o con la administración de acetaminofén y se continuó la administración del oligómero antisentido. En las concentraciones de dosis que abarcan desde 4.1 hasta 6.5 mg/kg/dia, en 4 pacientes se observó elevaciones transitorias grado II-III de transaminasa y/o bilirrubina; no obstante, la relación causal con el oligómero antisentido bcl-2 no se estableció en todos los pacientes, ya que dos pacientes tenían hepatitis y alcoholismo, respectivamente, y las anomalías transitorias de la función hepática fueron observadas después de DTIC, que también dio origen a tales cambios en el laboratorio. Las anomalías en la función hepática por lo regular se resolvieron en una semana entre ciclos de tratamiento, y no fueron consideradas clínicamente importantes o limitadoras de la dosis. Los episodios dermatológicos adversos incluyeron exantemas y urticaria transitorias, grado I en todos menos un paciente que experimentó urticaria transitoria grado II; estas reacciones dermatológicas respondieron a los antihistamínicos y no impidieron el tratamiento ulterior. No se observaron toxicidades acumulativas. Algunos pacientes fueron tratados con hasta 10 ciclos de tratamiento sin necesidad de modificaciones de los programas de tratamiento planeados.

Aunque la toxicidad fue el punto final principal de este estudio de escalación de la dosis, la actividad antitumoral fue evidente en 6 de 14 pacientes (43%, Tabla 1) con melanoma etapa IV, incluidas las respuestas observadas entre los 12 pacientes que se enlistaron en el estudio después de falla del tratamiento de terapias sistémicas de melanoma. Se observó 1 CR, 2 PR y 2 MR con estabilización prolongada de la enfermedad con duración de aproximadamente un año (Tabla 1). La actividad antitumoral clinica también se observó en otros dos pacientes con estabilización de la enfermedad que progresaba claramente antes de la introducción en el estudio. El paciente 12 que presentaba enfermedad metastásica generalizada con medidas de más o menos 5 cm en la linea base en los ganglios linfáticos pélvicos y en el sitio de un injerto de piel anterior, demostró rápida respuesta después de dos ciclos y respuesta completa después de 4 ciclos (Tabla 1, Figura 3) . Después de 4 ciclos de tratamiento, una biopsia del área cutánea que habla sido ya positiva para neoplasma mostró solo fibrosis sin melanoma (respuesta patológica completa) . Los pacientes 2 y 3 demostraron respuesta parcial de lesiones objetivo con supervivencia sin progreso con duración de un año. Cuando entraron a este estudio, los pacientes 2 y 3 tenían metástasis progresiva a pesar de tratamientos anteriores con carboplatino más interferón (paciente 2) y DTIC más IL-2 (paciente 3). Los pacientes 5 y 9 entraron en el estudio con enfermedad metastásica progresiva a pesar del tratamiento sistémico con DTIC más interferón o solo interferón, y desarrollaron respuestas menores con el tratamiento antisentido bcl-2 m DTIC. La supervivencia promedio estimada excede cuando menos un año en todos los pacientes. 6.3 CONCLUSIONES Este informe demuestra la seguridad y factibilidad del tratamiento con un fármaco antisentido combinado con quimioterapia en pacientes de cáncer. El tratamiento con el oligómero antisentido bcl-2 fue bien tolerado, redujo la proteina objetivo dentro del tumor, facilitó la apoptosis y dio origen a respuestas objetivas del tumor con supervivencia prolongada también en pacientes que entraron en el estudio después de alguna falla del tratamiento de otras terapias (Tabla 1) .

El objetivo primordial del presente estudio fue determinar la toxicidad del oligómero antisentido bcl-2 combinado con terapia DTIC. En lo que se refiere a los efectos secundarios no hematológicos (Tabla 2) , hasta e incluyendo las concentraciones de dosis de 3.1 mg/kg/dia del oligómero antisentido bcl-2, en este estudio no se observaron efectos secundarios diferentes de los reportados para el tratamiento con el agente DTIC individual. Con las dosis del oligómero antisentido bcl-2 en y por encima de 4.1 mg/kg/dia en combinación con DTIC, se observaron elevaciones transitorias grado II-III de la transaminasa y/o bilirrubina (Tabla 2) . En este estudio, las anomalías de la función hepática no fueron limitadoras de la dosis ni estuvieron asociadas con secuelas clínicas adversas. Cambios no limitadores de la dosis de aPTT fueron observados en y por encima de las dosis diarias del oligómero antisentido bcl-2 de 5.3 mg/kg .

La linfopenia fue también el efecto secundario hematológico que se observó con mayor frecuencia en este estudio. La linfopenia no fue de importancia clínica, y no hubo infecciones poco comunes en pacientes tratados con terapia cíclica y seguida durante un año. Por el contrario, algunos niveles de tromocitopenia han sido observados con múltiples fármacos antisentido fósforotioato, y esta toxicidad fue limitadora de la dosis en el estudio del oligómero antisentido bcl-2 en pacientes con NHL ( aters y col., 2000, J. Clin. Oncol. 18 (9) : 1812-23) . Aunque este estudio combinó el oligómero antisentido bcl-2 y quimioterapia, dando origen a una mielosupresión transitoria después de DTIC, y las concentraciones plasmáticas en el estado estacionario excedieron las reportadas en el estudio de NHL, no observamos tromocitopenia limitadora de la dosis. En resumen, en esta población de pacientes no se observaron toxicidades traslapantes o acumulativas que limitaran la dosis entre DTIC y el oligómero antisentido bcl-2. Nuestros datos demuestran que las concentraciones plasmáticas en el estado estacionario biológicamente pertinentes (> 1 ug/mL) se pueden lograr fácilmente con las dosis del oligómero antisentido bcl-2 de alrededor de 2 mg/kg/dia, y no se ha llegado a la dosis máxima tolerada en combinación con quimioterapia DTIC.

En un seguimiento reciente a los esquemas de tratamiento investigados en este estudio, el oligómero antisentido bcl-2 administrado por via intravenosa por infusión (7 mg/kg/día) durante 5 dias ha sido administrado a un cohorte extendido (5 pacientes) antes de 1000 mg/m2 de DTIC en cada ciclo de 21 dias, y demostró tolerancia satisfactoria.

Por tanto, los resultados indican que el oligómero antisentido bcl-2 se puede administrar en forma segura en combinación con un fármaco anticáncer para tratar cáncer en el consultorio clínico. Los resultados difieren de los datos antes publicados mostrando actividad biológica y respuestas clínicas con una infusión de 14 días dada solo por una infusión subcutánea continua (Waters y col., 2000, J. Clin. Oncol. 18(9) : 1812-23), dado que los resultados descritos en la presente demuestran que múltiples vías (infusión intravenosa, múltiples inyecciones subcutáneas diarias) y programas de administración más cortos de 5-7 días también pueden dar origen a la actividad biológica de G3139 y respuestas clínicas. En los pacientes con respuesta, la actividad antitumoral inicial se observó rápidamente durante 2-3 ciclos. La mayor parte de los pacientes entró en el estudio con enfermedad metastásica progresiva después de falla de tratamiento de esquemas que contenían DTIC o después de otros tratamientos comunes para melanoma metastásico. No obstante, respuestas antitumorales fueron observadas en 6 de 14 pacientes (43%), y en otros dos pacientes se observó una estabilización de la enfermedad. La supervivencia media calculada de todos los pacientes excede 12 meses. Estos resultados iniciales se comparan favorablemente a las tasas de respuesta insignificantes y los tiempos de supervivencia medios de aproximadamente 4 a 5 meses observados en pacientes con melanoma avanzado después de falla del tratamiento de terapia sistémica de primera línea.

Tabla 1 : Sinopsis del estudio CP = carboplatino; CIS = cisplatino; FOT = f otemustina ; HEP = perfusión hipertérmica de extremidades; IFN-a = Ínte ferón-a; KA = no aplicable; RT = terapia de radiación. Se administró un número total de 47 ciclos de ASO bcl-2 más DTIC. * Los pacientes que también recibieron ASO bcl-2 por vía subcutánea con dosis de 5.3 a 6.5 mg/kg/díaf administrado después de los ciclos de tratamiento intravenosos iniciales. + El periodo de observación continúa.

Tabla 2 : Episodios adversos durante el tratamiento Los sucesos se mencionan independientemente de la relación causal con el tratamiento ASO bcl-2. 7. EJEMPLO 2: Estudio de la correlación farmacocinética y biológica, fase I, de G3139 (oligonucleótido antisentido bcl-2) y docetaxel en pacientes con cáncer de próstata refractario para hormonas Este ejemplo demuestra el uso con buenos resultados de un oligómero antisentido bcl-2 para el tratamiento de pacientes con cáncer de próstata refractario a las hormonas, que es resistente a la terapia de ablación con andrógenos y quimioterapia citotóxica. El oligómero antisentido bcl-2 fue administrado sistémicamente en una dosis de 5 a 7 mg/kg/día durante 5 días, en combinación con un agente químico. Este estudio informa que dos pacientes, que fueron tratados con el oligómero antisentido bcl-2 y un agente químico, mostraron respuestas al tratamiento. Los hallazgos reportados en este ejemplo demuestran que, cuando se administra un oligómero antisentido bcl-2 en dosis altas durante periodos cortos, el tratamiento muestra baja toxicidad demostrando al mismo tiempo respuestas clínicas objetivas. El enfoque mencionado en este estudio proporciona una estrategia ampliamente aplicable para tratar otros tipos de cáncer. 7.1 MATERIALES Y MÉTODOS En este estudio se administró G3139 como infusión intravenosa continua durante 5 dias por ciclo durante los dias 1-6 del ciclo de tratamiento/ seguido por docetaxel administrado por via intravenosa durante el día 6. Los cursos fueron repetidos cada 21 dias. Once pacientes con cáncer de próstata refractario a las hormonas recibieron tratamiento en tres concentraciones de dosis en los intervalos de G3139 a 5 mg/kg/día con 60 mg/m de docetaxel hasta G3139 a 7 mg/kg/dia seguido por 75 mg/m de docetaxel . 7.2 RESULTADOS Toxicidades importantes fueron similares a docetaxel solo. Un paciente con intenso tratamiento previo presentó neutropenia grado 4 prolongada (>5 dias) no complicada. Otras toxicidades incluyen estomatitis grado 1 en tres pacientes y neutropenia febril durante el curso 2 en un paciente. Los resultados farmacocinéticas preliminares (HPLC) demuestran concentraciones plasmáticas promedio de G3139 en el estado estacionario de 3.09 µg/mL en la concentración de la dosis de 5 mg/kg/dia. La citometria de flujo preliminar y el análisis western blot indicaron >50% de regulación descendente de la proteína bcl-2 por el día 6 en las células mononucleares de sangre periférica antes del tratamiento con docetaxel. Se observaron respuestas de antígeno específico de la próstata y sintomáticas en 2 de 3 pacientes que no habían sido tratados con taxanos, evaluables, incluida una reducción de 9 veces en el antígeno específico de próstata durable durante más de [lacuna] ciclos. 7 . 3 CONCLUSIÓN El G3139 se puede administrar en forma segura en combinación con docetaxel, y como demuestran estos resultados, la combinación tiene efectos terapéuticos importantes en el tratamiento de cáncer. Los resultados difieren de los dados antes publicados que muestran actividad biológica y respuestas clínicas con una infusión de 14 días dada solo por una infusión subcutánea continua (Waters y col., 2000, J. Clin. Oncol . 18(9): 1812-23) , dado que los resultados descritos en la presente demuestran que programas de administración más cortos (5 días) dados por una vía alternativa (intravenosa) también pueden dar origen a actividad biológica de G3139 y respuestas clínicas. El tratamiento con G3139 es biológicamente activo en el transcurso de los 5 días de administración, demostrado por la regulación descendente eficaz de la proteína bcl-2 en células mononucleares de sangre periférica, y ha estimulado la actividad antitumoral preliminar en pacientes de cáncer de próstata refractario a las hormonas . 8. EJEMPLO 3: PRUEBA EN FASE I DE GENASENSE™ (G3139) , UN ANTISENTIDO BCL-2, EN LEUCEMIA AGUDA REFRACTARIA O RECURRENTE Este ejemplo demuestra el uso con buenos resultados de un oligómero antisentido bcl-2 para el tratamiento de pacientes con leucemia aguda. El oligómero antisentido bcl-2 se administró sistémicamente en una concentración de 4 mg/kg/día durante 10 días, en combinación con dos agentes químicos. Este estudio informa que 5 de 10 pacientes que fueron tratados con el oligómero antisentido bcl-2 y un agente químico, demostraron respuestas al tratamiento. Además, las respuestas también fueron observadas en pacientes que recibieron fludarabina y arabinósido de citosina en dosis menores que las dosis normales que se utilizan para el tratamiento de leucemia u otros cánceres. Los hallazgos que se reportan en este ejemplo demuestran que es posible obtener respuestas químicas objetivas cuando se administra un oligómero antisentido bcl-2 durante un tiempo corto.

MATERIALES Y MÉTODOS Se administró a pacientes (10 pacientes en total) G3139 (4 mg/kg/dia) durante los dias 1-10, mientras que fludarabina (comenzando con una dosis reducida de 15 mg/m ) , arabinósido de citosina (Ara-C) (comenzando con una dosis reducida de 1000 mg/m2) y G-CSF (FLAG) se dieron durante los dias 6-10 del ciclo de tratamiento, y se escaló en cohortes sucesivos. El esquema de combinación FLAG normal incluye dosis dos veces mayores de fludarabina y Ara-C en comparación con las dosis que se utilizan en este estudio. (m) meses a partir de la CR; dosis alta de Ara-C; (d) dias a 4 5 partir del inicio de G3139; NA, no aplicable; CR, respuesta completa, 6 PR, respuesta parcial; ' NR, sin respuesta; NED, sin evidencia de la enfermedad; REF, refractario; REL, recurrencia. 8 . 2 RESULTADOS La fiebre relacionada con el tratamiento, náusea, emesis, hipocalcemia, hipofosfatemia y retención de líquidos no fueron limitadores de la dosis. Las toxicidades hematológicas fueron como se esperaba. Las concentraciones plasmáticas de G3139 en el estado estacionario excedentes del nivel objetivo relevante (1 ?/???) se alcanzaron después de 24 horas. Tres pacientes lograron respuesta completa y recibieron un segundo curso de tratamiento; dos continuaron sin evidencia de la enfermedad hasta el dia 53 y el dia 111. Dos pacientes no tuvieron evidencia de enfermedad sino neutropenia/troiabocitopenia persistentes el día 52 y el día 55; uno de ellos continúa sin evidencia de la enfermedad hasta el día 76. Tres de los 5 pacientes con respuesta tuvieron tratamiento previo con dosis elevadas de Ara-C, y por tanto, fue inesperada la documentación de una mayor respuesta a otro programa en combinación con Ara-C, como se describe en este estudio, en especial utilizando dosis menores que las utilizadas en los esquemas de los tratamientos anteriores . 8. CONCLUSIÓN Los resultados indican que G3139 es factible para adición a los esquemas de inducción de múltiples ciclos para leucemia aguda, que en este estudio demostró 50% de tasa de respuesta, incluidos los pacientes con leucemia aguda refractaria y tratamiento previo con dosis altas de Ara-C. También se observaron respuestas importantes utilizando concentraciones de dosis menores que las normales de fludarabina y Ara-C cuando se combinaron con un esquema del antisentido bcl-2.

Todas las referencias mencionadas en la presente se incorporan específicamente como referencia como se establecen en la presente.

Habiendo descrito en lo anterior las modalidades ejemplares de la presente invención, los expertos en la técnica se darán cuenta que esta descripción solo es ejemplar, de modo que las diferentes alternativas, adaptaciones y modificaciones están dentro del alcance de la invención, y están contempladas por los solicitantes. Por consiguiente, la presente invención no se limita a las modalidades especificas como se ilustra en lo anterior, sino se define por las siguientes reivindicaciones.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Warrel, Raymond lem, Robert Fingert, Howard <120> MÉTODOS DE TRATAMIENTO DE UN TRANSTORNO RELACIONADO CON BCL-2 UTILIZANDO OLIGÓMEROS ANTISENTIDO BCL-2 <130> 10412-003-328 <140> 2001-08-24 <150> 09/709,170 <151> 2000-09-29 <160> 29 <170> Patentln versión 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 1 cagcgtgcgc catccttccc 20 <210> 2 <211> 35 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 2 cttttcctct gggaaggatg gcgcacgctg ggaga 35 <210> 3 <211> 20 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 3 gatgcaccta cccagcctcc 20 <210> 4 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 4 acggggtacg gaggctgggt aggtgcatct ggt 33 <210> 5 <211> 20 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 5 acaaaggcat cctgcagttg 20 <210> 6 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 6 cccccaactg caggatgcct ttgtggaact gtacgg 36 <210> 7 <211> 20 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 7 gggaaggatg gcgcacgctg 20 <210> 8 <211> 17 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 8 cgcgtgcgac cctcttg 17 <210> 9 <211> 17 <212> ADN <213> 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gggaggattg tggccttctt tgagttcggt 1920 ggggtcatgrt gtgtggagag cgtcaaccgg gagatgtcgc ccctggtgga caacatcgcc 1980 ctgtggatga ctgagtacct gaaccggcac ctgcacacct ggatccagga taacggaggc 2040 tgggatgcct ttgtggaaet gtacggccoc agcatgcggc ctctgtttga tttcbcctgg 2100 atgtctctga agaatctgct cagtttggoc ctggtgggag cttgcatcac cctgggtgcc 2160 tatctgagcc acaagtgaag tcaacatgcc tgccccaaac aaatatgcaa aaggttcact 2220 aaagcagtag aaataatatg cattgtcagt gatgtaccat gaaacaaagc tgcaggctgt 2280 taagaaaaa ataacaoaca tataaacatc acacacaoag acagacacae anacacacaa 2340 caattaacag tcttcaggca aaacgtcgaa tcagctattt actgccaaag ggaaa tca 2400 tttatttttt acattattaa gaaaaaagat ttatttattt aagacagtcc catcaaaact 2460 ccgtctttgg aaatcogaco aataattgcc aaacaccgct tcgtgtggct ccacctggat 2520 gttctgtgcc tgtaaacata gattcgcttt ccatgttgtt ggccggatca ccatctgaag 3580 agcagacgga tggaaaAagg acctgataat tggggaagct ggctttctgg ctgctggagg 2640 t<3gggag*¾ ggtgttcatt cacttgcatt ta ttgcect gggggcgtga tattaacaga 2700 gggagggttc ccgtgggggg aagtccatga 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Claims (33)

REIVI DICACIONES

1. Un método de tratamiento o prevención de cáncer en un humano, el cual consiste en administrar al humano en el que se desea un tratamiento o prevención como estos, un oligonucleótido antisentido bcl-2 en uno o más ciclos de tratamiento en una dosis de 0.01 a 50 mg/kg/dia durante un periodo consistente en 2 a 13 dias.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el oligonucleótido antisentido bcl-2 se administra durante un periodo que consiste en 3 a 9 dias.

3. El método de la reivindicación 1, en donde el oligonucleótido antisentido bcl-2 se administra durante un periodo que consiste en 4 a 7 dias.

4. El método como en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 el cual consiste en administrar 4 a 9 mg/kg/dia de un oligonucleótido antisentido bcl-2.

5. El método como en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 el cual consiste en administrar 5 a 7 mg/kg/dia de un oligonucleótido antisentido bcl-2.

6. El método de la reivindicación 1, que comprende además administrar uno o más terapéuticos de cáncer.

7. El método de la reivindicación 6 en donde la administración del terapéutico de cáncer sigue a la administración del oligonucleótido antisentido bcl-2.

8. El método de la reivindicación 6, en donde la administración del terapéutico de cáncer precede a la administración del oligonucleótido antisentido bcl-2.

9. El método de la reivindicación 6, en donde el terapéutico de cáncer se administra al mismo tiempo con el oligonucleótido antisentido bcl-2.

10. El método de la reivindicación 6, en donde el terapéutico de cáncer es un agente químico, radioterapéutico, inmunoterapéutico, vacuna contra cáncer, agente anti-angiogénico, citocina, terapéutico génico o agente hormonal.

11. El método de la reivindicación 10, en donde el terapéutico de cáncer es un agente químico, y en donde el agente químico es dacarbazina, docetaxel, paclitaxel, cisplatino, 5-fluorouracilo, doxorubicina, etopósido, ciclofosfamida, fludarabina, irinotecan ó arabinósido de citosina (Ara-C) .

12. El método de la reivindicación 6 ó la reivindicación 10, en donde el terapéutico de cáncer se administra en una dosis reducida.

13. El método como en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 ó 6, en donde la administración es por administración oral, infusión intravenosa, inyección subcutánea, inyección intramuscular, tópica, inyección depo, implante, modo de liberación con el tiempo, intracavitaria, intranasal, por inhalación, intratumoral o intraocular.

14. El método como en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 ó 6, en donde el cáncer es un cáncer del sistema hematopoyético, de la piel, hueso y tejido blando, del sistema reproductor, del sistema genito urinario, de mama, del sistema endocrino, de cerebro, del sistema nervioso central, del sistema nervioso periférico, de riñon, pulmón, del sistema respiratorio, del tórax, gastrointestinal y del canal alimentario, de los ganglios linfáticos, del páncreas del sistema hepatobiliar o cáncer de sitio primario desconocido.

15. El método como en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 ó 6, en donde el cáncer es linfoma no-Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemia, carcinoma de colon, carcinoma rectal, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma de los ductos biliares, coriocarcinoma, cáncer cervical, cáncer testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de la vejiga, melanoma, cáncer de cabeza y cuello o cáncer de cerebro.

16. El método como en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 ó 6, en donde el oligonucleótido antisentido es de 10 a 35 bases y es complementario al pre-mRNA ó mRNA que codifica el gen bcl-2.

17. El método de la reivindicación 16, en donde el oligonucleótido antisentido comprende cuando menos dos enlaces fósforotioato .

18. El método de la reivindicación 17, en donde el oligonucleótido antisentido comprende la secuencia TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO: 17) .

19. Un método de tratamiento o prevención de cáncer en un humano que consiste en la administración a un humano en el que se desea tal tratamiento o prevención, de uno o más agentes químicos y un oligonucleótido antisentido bcl-2 en uno o más ciclos de tratamiento en una dosis de 0.01 a 50 mg/kg/dia, en donde el agente químico es dacarbazina, docetaxel, paclitaxel, cisplatino, 5-fluorouracilo, doxorubicina, etopósido, ciclofosfamida, fludarabina, irinotecan o arabinósido de citosina (Ara-C) , y en donde el agente químico se administra en una dosis reducida.

20. El método de la reivindicación 19, en donde el terapéutico de cáncer es paclitaxel y la dosis es 10 a 135 mg/ir /ciclo.

21. El método de la reivindicación 19, en donde el terapéutico de cáncer es docetaxel y la dosis es 6 a 60 mg/mVciclo.

22. El método de la reivindicación 19, en donde el terapéutico de cáncer es fludarabina y la dosis es 2.5 a 25 mg/m2/ciclo.

23. El método de la reivindicación 19, en donde el terapéutico de cáncer es irinotecan y la dosis es 5 a 50 mg/m2/ciclo.

24. Una composición farmacéutica que contiene un oligonucleótido antisentido bcl-2 en una dosis de 0.01 a 50 mg/kg/dia; y un portador aceptable para uso farmacéutico.

25. Una composición farmacéutica que contiene un oligonucleótido antisentido bcl-2 en una dosis de 10 a 50 mg/kg/dia; y un portador aceptable para uso farmacéutico.

26. La composición farmacéutica de la reivindicación 24 ó la reivindicación 25, en donde el oligonucleótido antisentido es de 10 a 35 bases y es complementario al pre-mRNA ó mRNA que codifica el gen bcl-2.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 26, en donde el oligonucleótido antisentido comprende cuando menos dos enlaces fósforotioato .

28. La composición farmacéutica de la reivindicación 27, en donde el oligonucleótido antisetido comprende la secuencia TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO: 17) .

29. Una composición farmacéutica que contiene un oligonucleótico antisentido bcl-2 en una dosis de 0.01 a 50 mg/kg/dia; en combinación con una dosis reducida de un agente terapéutico de cáncer, en donde el agente es dacarbazina, docetaxel, paclitaxel, cisplatino, 5-fluorouracilo, doxorubicina, etopósido, ciclofosfamida, fludarabina, irinotecan o arabinósido de citosina (Ara-C) ; y un portador aceptable para uso farmacéutico.

30. Una composición farmacéutica que contiene un oligonucleótico antisentido bcl-2 en una dosis de 10 a 50 mg/kg/día; en combinación con una dosis reducida de un agente terapéutico de cáncer, en donde el agente es dacarbazina, docetaxel, paclitaxel/ cisplatino, 5-fluorouracilo, doxorubicina, etopósido, ciclofosfamida, fludarabina, irinotecan o arabinósido de citosina (Ara-C) ; y un portador aceptable para uso farmacéutico.

31. La composición farmacéutica de la reivindicación 29 ó la reivindicación 30, en donde el oligonucleótido antisentido es de 10 a 35 bases y es complementario al pre-mRNA ó mRNA que codifica el gen bcl-2.

32. La composición farmacéutica de la reivindicación 31, en donde el oligonucleótido antisentido comprende cuando menos dos enlaces fósforotioato .

33. La composición farmacéutica de la reivindicación 32, en donde el oligonucleótido antisentido comprende la secuencia TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO: 17) .