JP2004507480A - ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを用いてｂｃｌ−２障害を治療する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、ｂｃｌ−２関連障害を治療および予防するためのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの使用に関する。これらの障害には、癌、腫瘍、癌腫および細胞増殖関連障害が含まれる。本発明の１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを高用量で投与する。また、本発明は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを短期間投与することからなる、ｂｃｌ−２関連障害、特に癌を予防または治療する方法に関する。さらに、本発明は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを被験者の癌治療に対する感受性を増大させるために使用することに関する。また、本発明は、１以上のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなり、１以上の癌治療薬を含んでいてもよい医薬組成物に関する。

Description

【０００１】
１． 　はじめに
本発明は、ｂｃｌ−２関連障害を治療および予防するためのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの使用に関する。これらの障害には、癌、腫瘍、癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ）および細胞増殖関連障害が含まれる。本発明の１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを高用量で投与する。また、本発明は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを短期間投与することを含む、ｂｃｌ−２関連障害、特に癌を予防または治療する方法に関する。さらに、本発明は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを患者の癌治療に対する感受性を増大させるために使用することに関する。また、本発明は、１以上のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含み、１以上の癌治療薬を含んでいてもよい医薬組成物に関する。
【０００２】
２． 　発明の背景
伝統的な癌治療の方法は、特異性に欠けるという問題点を有する。開発されたほとんどの医薬品は、酵素経路を遮断するか、またはランダムにＤＮＡと相互作用する天然の産物または誘導体である。さらに、ほとんどの癌治療薬は、治療係数が低いために投与量を制限する重大な毒性を伴う。たとえば、大部分の抗癌剤は患者に投与された場合、癌細胞ばかりでなく正常な非癌細胞をも殺す。これらの有害な作用のため、より特異的に癌細胞に作用する治療法が必要とされている。
【０００３】
遺伝子の１つのクラスである癌遺伝子が、細胞のトランスフォーメーションおよび癌の状態の維持に関与していることが見いだされている。これらの遺伝子の転写の遮断、または他の方法によるこれらのタンパク質産物の効果の阻害により、好ましい治療結果を得ることができることは注目に値する。多くのヒトの癌の病因における癌遺伝子の役割については、Ｂｉｓｈｏｐ、１９８７、「細胞の癌遺伝子およびレトロウイルス（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２３５：３０５−３１１に総論が記載されている。多くのタイプのヒトの癌において、ｂｃｌ−２（Ｂ細胞リンパ腫／白血病−２）と呼ばれる遺伝子が過剰に発現され、そしてこの過剰な発現が腫瘍原性と関連している可能性がある（Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏら、１９８５， 「ヒト濾胞性リンパ腫におけるｂｃｌ−２遺伝子の関与（Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｂｃｌ−２ ｇｅｎｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｍａ）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１４４０−１４４３）。ｂｃｌ−２遺伝子は、細胞分裂の促進によるよりも主として細胞の生存を延長することにより、癌の発病および治療への耐性に寄与していると考えられている。
【０００４】
ヒトｂｃｌ−２遺伝子は、ある種の白血病、リンパ系腫瘍、リンパ腫、神経芽腫、および鼻咽頭癌、前立腺癌、乳癌、ならびに結腸癌の病因に関与している（Ｃｒｏｃｅら、１９８７， 「ヒトＢおよびＴ細胞新形成の分子的基礎」（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｂ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｏｐｌａｓｉａ）」、Ａｄｖａｎｃｅ ｉｎ Ｖｉｒａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ７：３５−５１， Ｇ． Ｋｌｅｉｎ （編），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ； Ｒｅｅｄら、１９９１， 「神経芽腫および他の神経起源のヒト腫瘍細胞系におけるｂｃｌ−２癌原遺伝子の特異な発現（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂｃｌ−２ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｉｎ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｎｅｕｒａｌ ｏｒｉｇｉｎ）」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５１：６５２９−３８； Ｙｕｎｉｓら、１９８９， 「大細胞リンパ腫の予後におけるｂｃｌ−２および他のゲノムの改変（Ｂｃｌ−２ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｇｅｎｏｍｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ）」、Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２０：１０４７−５４； Ｃａｍｐｏｓら、１９９３， 「急性骨髄球性白血病におけるｂｃｌ−２タンパク質の高い発現は化学療法に対する乏しい反応と関連する（Ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂｃｌ−２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）」、Ｂｌｏｏｄ ８１：３０９１−６； ＭｃＤｏｎｎｅｌら、１９９２， 「癌原遺伝子ｂｃｌ−２の発現およびそのアンドロゲン依存性前立腺癌の発生との関連（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｂｃｌ−２ ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ）」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５２：６９４０−４； Ｌｕら、１９９３， 「エプスタインバーウイルス関連鼻咽頭癌におけるｂｃｌ−２癌原遺伝子の発現（Ｂｃｌ−２ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ）」、Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ５３：２９−３５； Ｂｏｎｎｅｒら、１９９３， 「 ｂｃｌ−２癌原遺伝子および提案された形態学および分子配列に関する胃腸粘膜上皮腫瘍進行モデル（ｂｃｌ−２ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）」、Ｌａｂ． Ｉｎｖｅｓｔ． ６８：４３Ａ）。ｂｃｌ−２は、非ホジキンリンパ腫、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、および急性ならびに慢性白血病を含むさまざまな腫瘍において過剰に発現されることが見いだされている（Ｒｅｅｄ， １９９５， 「ｂｃｌ−２ファミリーのタンパク質によるアポトーシスの調節およびその癌および化学耐性における役割（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｂｙ ｂｃｌ−２ ｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）」、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ７：５４１−６）。
【０００５】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは癌遺伝子の機能の特異的遮断のための治療手段を提供する可能性がある。これらの短い（通常３０塩基未満）一本鎖合成ＤＮＡは、標的遺伝子のｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ領域に相補的な配列を有し、水素結合塩基対合によりハイブリッド二本鎖を形成する。このハイブリダイゼーションは、標的のｍＲＮＡおよびそれがコードするタンパク質の両方の発現を遮断することができ、それにより下流の相互作用およびシグナル伝達を妨げることができる。１つのｍＲＮＡ分子は多数のタンパク質のコピーを生成するので、ｍＲＮＡの阻害は、たとえば酵素の活性部位の阻害によりタンパク質のレベルで遮断をおこなうよりも、より効率的であり、また特異的である。
【０００６】
ｃ−ｍｙｃ癌遺伝子のｍＲＮＡに相補的な合成オリゴデオキシヌクレオチドは、ｃ−ｍｙｃタンパク質の生産を特異的に阻害することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト白血病細胞の増殖を抑えるために用いられた（Ｈｏｌｔら、１９８８， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ８：９６３−７３； Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍら、１９８８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８５：１０２８−３２）。オリゴデオキシヌクレオチドはまた、ヒト免疫不全ウイルスを含むレトロウイルスの特異的阻害剤としても用いられた（ＺａｍｅｃｎｉｋおよびＳｔｅｐｈｅｎｓｏｎ， １９７８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ７５：２８０−４； Ｚａｍｅｃｎｉｋら、１９８６， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８３：４１４３−６）。
【０００７】
個々の癌関連遺伝子を標的とし、阻害する能力を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用は、前臨床癌モデルにおいて有望であることが示された。これらのホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ）アンチセンスオリゴマーは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでｂｃｌ−２の発現を阻害する能力、およびリンパ腫異種移植片を有するマウスモデルの腫瘍を根絶させる能力を示した。いくつかの癌の化学療法に対する耐性はｂｃｌ−２癌遺伝子の発現と関連していた（Ｇｒｏｖｅｒら、１９９６， 「悪性メラノーマにおけるｂｃｌ−２の発現およびその予後における重要性（Ｂｃｌ−２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）」、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｓｕｒｇ． Ｏｎｃｏｌ． ２２（４）：３４７−９）。ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを投与すると、実験用マウスの腫瘍異種移植片におけるｂｃｌ−２タンパク質レベルを選択的に減少させることができる（Ｊａｎｓｅｎら、１９９８， 「ｂｃｌ−２アンチセンス治療はＳＣＩＤマウス中のヒトメラノーマを化学的感受性にする（ｂｃｌ−２ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｎ ＳＣＩＤ ｍｉｃｅ）」。Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ４（２）：２３２−４）。さらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを投与すると、実験用マウスの腫瘍異種移植片の化学療法剤に対する感受性を増大させることができる（Ｊａｎｓｅｎら、１９９８， 「ｂｃｌ−２アンチセンス治療はＳＣＩＤマウス中のヒトメラノーマを化学的感受性にする（ｂｃｌ−２ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｎ ＳＣＩＤ ｍｉｃｅ）」、Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ４（２）：２３２−４）。マウスにおける、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる全身治療は、ｂｃｌ−２タンパク質を減少させ、アポトーシスを増大させる。ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー単独による治療は並の抗腫瘍活性を有したが、ＤＴＩＣ（ダカルバジンとしても知られている）と併用した場合に抗腫瘍活性が増大することが観察された。１３匹の動物中１０匹において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーをＤＴＩＣ治療と併用して投与した
後に悪性メラノーマ異種移植片は検出されなかった。そこで、これらの抗腫瘍治療をヒトにおける癌との戦いにまで広げることがどうしても必要である。
【０００８】
多くの癌患者の予後は、生物療法、医薬品、および併用療法の利用可能性が増大したにも関わらず満足のいくものではない。たとえば、ＤＴＩＣは一般的に転移メラノーマを治療するために用いられるが、長期間の改善を示した患者はほとんどいない。事実、広範な第ＩＩＩ相臨床試験によれば、ＤＴＩＣをシスプラチン、カルムスチン、およびタモキシフェンと併用した場合に生存の改善は示されなかった（Ｃｈａｐｍａｎら、１９９９， 「 転移性メラノーマを有する患者におけるＤａｒｔｍｏｕｔｈ法対ダカルバジンの第ＩＩＩ相多中心ランダム化試験（Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｄａｒｔｍｏｕｔｈ ｒｅｇｉｍｅｎ ｖｅｒｓｕｓ ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ）」、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １７（９）：２７４５−５１）。癌治療におけるこれらの重大な欠点は、治療への新しいアプローチの必要性を強調するものである。
【０００９】
３．　発明の概要
本発明は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなる医薬組成物およびｂｃｌ−２関連障害を治療する方法に関する。本発明は、１つには、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを、ｂｃｌ−２関連障害、特に癌を治療するために患者に高用量で投与した場合、低い毒性、高い耐性、延命を含む、顕著な治療上の応答が得られるという出願人らの発見に基づいている。出願人はまた、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを高用量で短期間、すなわち、１４日未満患者に投与した場合にも、癌患者の治療において顕著な治療上の応答が得られることを発見した。これらの治療法はさらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを高用量で短期間、１以上の癌治療薬と併用して投与することも包含する。驚くべきことに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの短期間の投与と併用した場合、１以上のより少ない用量の癌治療薬でも、癌患者の治療において顕著な治療上の応答を示した。上記のように、本発明の治療法は、期間および毒性を減少させ、それにより改善された耐性を有するような癌を治療するための治療上有効な方法を提供する。
【００１０】
１つの実施形態において、本発明はｂｃｌ−２関連障害を治療する方法、および特に高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなる一回服用量剤形の医薬組成物で、上記の医薬組成物中の有効量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーが、約１０から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量を達成するのに有効な用量であるものを提供する。本発明のこの実施形態に従えば、上記の医薬組成物中のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効量は、最低３０ｎＭ（ナノモル）のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルを達成するのに有効な用量である。１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルは、１から１０μＭ（マイクロモル）である。別の実施形態において、少なくとも３０ｎＭのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの望ましい循環レベルは、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの投与の約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０時間後に達成される。別の実施形態において、少なくとも３０ｎＭのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルは、約３６から４８時間の間、好ましくは２４から３５時間の間、より好ましくは１２から２４時間の間、最も好ましくは１２時間以内に達成される。
【００１１】
別の実施形態において、本発明はｂｃｌ−２関連障害を治療する方法、および短期間、すなわち１４日未満に投与されるためのある用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなる医薬組成物であって、この短い治療サイクルの期間に投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効量が、約０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であるものを提供する。別の実施形態において、この短い治療サイクルの期間に送達されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効量は、最低３０ｎＭのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルを達成するのに有効な用量である。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルは１から１０μＭ（マイクロモル）である。
【００１２】
別の実施形態において、本発明はｂｃｌ−２関連障害を治療する方法、ならびに、短期間、すなわち１４日未満で投与されるある用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよびこれと併用する１以上の癌治療薬からなる医薬組成物であって、上記癌治療薬が、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの前、後、または同時に投与されるものを提供する。この短い治療プロトコールの期間に投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効量は、約０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーと併用して投与される有効量の癌治療薬はその標準的な用量で投与されてもよいし、あるいは、より少ない用量で投与されてもよい。本発明のこの実施形態に従えば、上記医薬組成物中のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効量は、少なくとも３０ｎＭのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルを達成するのに有効な用量である。特定の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルは約３６から４８時間の間、好ましくは約２４から３５時間の間、最も好ましくは約２４時間以内に達成される。
【００１３】
本発明によれば、ｂｃｌ−２関連障害には、腫瘍、癌、癌腫、および細胞増殖性障害が包含される。
【００１４】
本発明によれば、短期間とは、 １４日未満で、２から１３日の範囲であり、好ましくは３から９日、４から７日、または５から６日の範囲のｂｃｌ−２アンチセンスを投与する期間を包含する。
【００１５】
本発明によれば、短期間に投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの用量は、０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、好ましくは４から９ｍｇ／ｋｇ／日の用量、より好ましくは５から７ｍｇ／ｋｇ／日の用量である。
【００１６】
本発明はまた、本発明の方法に従って投与されるための、有効量の１以上のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなる医薬組成物を包含する。上記の医薬組成物は、０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量の、好ましくは４から９ｍｇ／ｋｇ／日の用量の、より好ましくは５から７ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー、および製薬上許容される担体を含む。別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、１以上の別の癌治療薬をも含む。上記医薬組成物は、連続注入により、または１回以上のボーラス投与により、または治療プロトコールの期間中の１回以上の投与により送達されるように製剤される。
【００１７】
本発明によれば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなる本発明の医薬組成物は、癌治療薬からなる医薬組成物と別に投与されてもよい。
【００１８】
本発明の以上のおよび他の態様は、以下の図および詳細な説明を参照してよりよく理解されるであろう。
【００１９】
３．１．　定義
本明細書において、「ｂｃｌ−２関連障害」とは、ｂｃｌ−２遺伝子の調節に関係する疾病を指し、ｂｃｌ−２遺伝子を発現する細胞に関係する疾病を含むが、これらに限定されない。このような障害はｂｃｌ−２遺伝子またはｂｃｌ−２関連遺伝子を発現する細胞または組織に関係する疾病、または現在はもはやｂｃｌ−２遺伝子を発現しないが正常な状態では発現する細胞または組織に関係する疾病を包含する。ｂｃｌ−２関連障害には、細胞増殖性障害およびｂｃｌ−２遺伝子またはｂｃｌ−２関連遺伝子を発現する細胞の影響を受けた細胞または組織の病理を含むが、これらに限定されない。
【００２０】
本明細書において、「癌」という用語は、１種または複数種の発ガン性物質が健康な細胞の異常な細胞へのトランスフォーメーションを起こし、次いでこれらの異常な細胞が隣接する組織に侵入し、次いでこれらの異常な細胞がリンパまたは血液により運ばれて近くのリンパ節および／または離れた部位への拡散、すなわち、転移を起こすこともある疾病の状態を表現する。
【００２１】
本明細書において、「腫瘍」または「増殖」という用語は、より速い細胞分裂および／またはより遅い速度の細胞の死の結果としての、より大きい細胞数を含む増大した組織の塊を意味する。腫瘍は悪性または非悪性の癌である場合もある。
【００２２】
本明細書において、「癌を治療する」および「癌の治療」という語句は、癌細胞の複製を阻害すること、癌の拡散を阻害すること、腫瘍の大きさを小さくすること、体の中の癌細胞の数を減少させること、または癌により引き起こされる疾病の症状を改善または軽減することを意味する。治療は、死亡率および／または罹患率の減少、または体の中の悪性細胞の数の減少による疾病の負担の発現の減少がある場合、治療効果がある（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）とみなされる。
【００２３】
本明細書において、「癌を予防する」および「癌の予防」という語句は、癌の疾病の状態の発生または再発を予防することを意味する。転移、腫瘍の増殖または癌の増殖を遅らせる、阻害する、または妨害する治療は予防的活性を有する。
【００２４】
本明細書において、「アンチセンスオリゴマー」という語句は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその類似体若しくは誘導体を意味し、標的配列のヌクレオチド塩基とのワトソン−クリック型水素結合による相互作用によりポリヌクレオチド標的配列を認識する化学種の範囲を指す。標的配列はＲＮＡまたはＤＮＡであってよく、また、一本鎖または二本鎖であってよい。標的分子には、ｍＲＮＡ前駆体、ｍＲＮＡ、およびＤＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
【００２５】
本明細書において、「ｂｃｌ−２遺伝子の発現」という語句は、ｂｃｌ−２ｍＲＮＡ前駆体、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡおよび／またはｂｃｌ−２タンパク質を生産するｂｃｌ−２遺伝子の転写を指す。
【００２６】
本明細書において、「誘導体」という用語は、本発明の医薬組成物に対応する製薬上許容される相同体、類似体、または断片を指す。
【００２７】
本明細書において、「療法」または「治療薬」という語句は、疾病の治療を補助する分子、化合物、または処理を指す。そこで、癌治療薬は、腫瘍または癌の治療を補助する分子、化合物、または処理プロトコールである。処理プロトコールには、放射線療法、食餌療法、物理療法、および心理療法が含まれるが、これらに限定されない。
【００２８】
本明細書において、「化学薬剤」または「抗癌剤」または「抗腫瘍剤」または「癌治療薬」の語句は、腫瘍または癌の治療を補助する分子、化合物または処理を指す。
【００２９】
本明細書において、「低用量」または「低減された用量」の語句は、通常投与される範囲よりも低い、すなわち「医師用添付文書集（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」第５４版 （２０００） または同様の参照文献に提示されている標準的な用量よりも低い用量を指す。このような用量は、細胞の増殖を阻害するのに十分であるか、またはヒトにおいて改善効果を示すか、または、標準的な癌治療と比べてより少ない副作用で有効性を示す。特定の治療薬に用いられる正常な用量の範囲および特定の疾病に用いられる標準的な癌治療については、「医師用添付文書集（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」第５４版 （２０００） または「癌：腫瘍学の原理および実践 （Ｃａｎｃｅｒ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）」、ＤｅＶｉｔａ， Ｊｒ．， Ｈｅｌｌｍａｎ， およびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ（編）第２版、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡ： Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．， １９８５に記載されている。
【００３０】
本明細書において、「低減された毒性」の語句は、他の治療プロトコールおよび製剤、たとえば、「医師用添付文書集（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」第５４版 （２０００） または「癌：腫瘍学の原理および実践 （Ｃａｎｃｅｒ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）」、ＤｅＶｉｔａ， Ｊｒ．， Ｈｅｌｌｍａｎ， およびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ（編）第２版、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡ： Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．， １９８５に記載されるような標準的な治療プロトコールおよび製剤と比較して、より短い期間および／またはより低用量でアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび癌治療薬を投与したことに関連して観察される減少した副作用および毒性を指す。
【００３１】
本明細書において、「治療サイクル」または「サイクル」の語句は、１つの治療または一連の治療を適用する期間を指す。高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの標準的な用量の癌治療薬との併用を含む１つの実施形態において、１つの治療サイクルの好ましい期間は１４日未満である。本発明は少なくとも１治療サイクル、通常好ましくは２サイクル以上を意図している。場合によっては、たとえば、１治療サイクルの後に顕著な治療効果が得られた場合には、１治療サイクルが望ましい。
【００３２】
本明細書において、「製薬上許容される担体」という語句は、活性成分の生物活性の有効性を妨害しない担体を指す。上記の担体は本質的に化学的に不活性で毒性がない。
【００３３】
本明細書において、「製薬上許容される」という語句は、連邦政府もしくは州政府の監督官庁により認可されること、または米国薬局方もしくは他の一般的に認められた薬局方に動物への使用、より特定的にはヒトへの使用ができるものとして掲載されていることを意味する。
【００３４】
本明細書において、「担体」という用語は、治療薬が共に投与される希釈剤、アジュバント、添加物、または賦形剤を指す。このような担体は、無菌の液体、たとえば、塩類の水溶液、または石油、動物、植物若しくは合成由来のものを含む油、たとえばピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油等であってよい。生理食塩水は、医薬組成物を静脈内投与する場合に好ましい担体である。生理食塩水、およびデキストロースおよびグリセリン水溶液もまた、特に注射用溶液の液体の担体として用いることができる。好ましい医薬品添加物には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プリピレングリコール、水、エタノール等が含まれる。担体は、必要ならば、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでいてもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末、徐放性製剤等の剤形であってよい。組成物は、トリグリセリドのような伝統的な結合剤および担体を用いて坐剤として製剤することもできる。好ましい製剤用担体の例は、Ｅ．Ｗ． Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎの薬学」に記載されている。好ましい製剤用担体の例は、さまざまなカチオン性脂質であり、これには、塩化Ｎ−（１（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）およびジオレシルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）が含まれるが、これらに限定されない。リポソームもまた、本発明のアンチセンスオリゴマーに対する好ましい担体である。このような組成物は治療上有効な量の化合物を、患者に適切に投与するための剤形を提供するために適当な量の担体と共に含んでいなければならない。製剤は投与の方式に適合していなければならない。
【００３５】
本明細書において、「製薬上許容される塩」という語句は、無機および有機の酸および塩基を含む、製薬上許容される、本質的に毒性のない酸および塩基から調製される塩を指す。製薬上許容される塩には、遊離のアミノ基と塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等から形成されるもの、遊離のカルボキシル基とナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から形成されるものが含まれる。
【００３６】
４． 　図面の簡単な説明
（図面の説明については下記参照）
５． 　発明の詳細な説明
本発明は、ｂｃｌ−２関連障害、特に癌を予防または治療するためにｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを使用する組成物および方法を提供する。本発明はまた、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなる医薬組成物、ならびに、薬物送達および治療法を含む予防および治療の処理にそれらを使用する方法を提供する。
【００３７】
本発明は、１つには、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを短い治療サイクルで投与すると、単独および他の治療薬との併用のいずれにおいても、疾病を患っている患者に対して予想外の強い改善効果を有するという発見に基づいている。この短い治療法はヒトの被験者に、利便性、心理的外傷の減少、および治療プロトコールが遵守されやすくなることのような付加的な利益をももたらす。他の発見には、（１） 治療薬をｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーと併用した場合の短い治療サイクルおよび低減された用量、（２） 少なくとも１つのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーからなり、他の治療薬を含んでも含まなくてもよい医薬組成物の単純化された送達方式、および（３） 多くのタイプの癌に対する臨床上意義のある治療法が含まれる。このように、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーが、短い治療サイクルで投与された場合にｂｃｌ−２関連障害を有する患者に顕著な治療応答を示すことができるという出願人らの発見は、改善された有用な医薬組成物、治療過程、および送達方式を提供する。
【００３８】
本発明はまた、１つには、高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、単独および他の治療薬との併用のいずれにおいても、ほとんどの標準的な癌治療薬と比較して副作用が予想外に少ないことをはじめとして毒性が減少し、また、疾病に侵された患者に対して改善効果を有するという発見に基づいている。高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを包含する治療法は、ヒトの被験者に、より短い治療サイクル、より少ない治療、または改善された有効性のような付加的な利益をもたらす。
【００３９】
１つの実施形態において、 ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーはｂｃｌ−２関連障害を予防または治療するためにヒトに短い治療サイクルで投与される。別の実施形態において、 ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ｂｃｌ−２関連障害を予防または治療するためにヒトに高用量で投与される。疾病に侵された組織に作用するだけでなく、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、正常な状態でｂｃｌ−２遺伝子を発現する細胞を有する組織を含む正常な組織を保護または治療することができる。さらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ｂｃｌ−２遺伝子を発現しないが、病気の組織により傷つけられた正常な組織を保護または治療することができる。
【００４０】
特定の実施形態において、本発明はさらに、ｂｃｌ−２関連障害を予防または治療するための併用療法の使用を包含する。このような療法には、病気の予防または治療を補助する１以上の分子、化合物または処理の使用が含まれる。意図される療法の例には、生物学的なもの、化学物質、および治療的処理（たとえば、放射線療法）が含まれる。
【００４１】
別の特定の実施形態において、本発明は、癌を予防または治療するために１以上の癌治療薬と併用してヒトに投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを提供する。このような癌治療薬には、抗癌活性を有する１以上の分子、化合物または処理が含まれる。意図される癌治療薬の例には、生物学的なもの、化学物質、および治療的処理（たとえば、放射線治療）が含まれる。
【００４２】
さらに別の特定の実施形態において、本発明は、癌を予防または治療するために、低減された用量の１以上の癌治療薬と併用してヒトに投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを提供する。このような治療は、高い、標準的な、または低い用量の１以上のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含んでよく、治療サイクルは長い期間であっても、または短い期間であってよい。特定の実施形態において、本発明は、癌を予防または治療するために、非常に低減された用量の１以上の癌治療薬と併用して短縮した治療サイクルでヒトに投与される、特に高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを提供する。
【００４３】
５．１ ＢＣＬ−２ アンチセンスオリゴマー
本発明は１以上のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーまたはその誘導体、類似体、断片、ハイブリッド、模倣物（ｍｉｍｅｔｉｃ）、および同種のものの使用を意図する。本明細書において用いる場合、「誘導体」という用語は、本発明の医薬組成物に対応する製薬上許容される相同体、類似体または断片のいずれかを指す。本発明で使用するのに好適なアンチセンスオリゴマーには、ヌクレオチドオリゴマーであって、その大きさが、５〜１０、１０〜２０、２０〜５０、５０〜７５、または７５〜１００塩基の範囲の長さであるもの、好ましくは１０〜４０塩基の長さ、より好ましくは１５〜２５塩基の長さ、最も好ましくは１８塩基の長さのものが含まれる。標的配列はＲＮＡまたはＤＮＡであってよく、一本鎖または二本鎖であってよい。標的分子には、ｍＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ−ｍＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、およびＤＮＡが含まれるがこれらに限定されない。１つの実施形態において、標的分子はｍＲＮＡである。好ましい実施形態において、標的分子はｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはｂｃｌ−２ ｍＲＮＡである。特定の実施形態において、アンチセンスオリゴマーはｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ上のいずれかの部分にハイブリダイズする。好ましくは、アンチセンスオリゴマーは、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡの翻訳開始部位、供与スプライシング部位、受容スプライシング部位、輸送のための部位、または分解のための部位にハイブリダイズするオリゴマーから選択される。
【００４４】
以前にいくつかのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーについて評価がおこなわれ、さまざまな結果が得られた（たとえば、米国特許第５，８３１，０６６号の配列番号１〜１７を参照されたい）。本発明に従って使用することができるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの例は、米国特許出願第０８／２１７，０８２号で、現在米国特許第５，７３４，０３３号となっているもの；米国特許出願第０８／４６５，４８５号で、現在米国特許第５，８３１，０６６号となっているもの；および米国特許出願第０９／０８０，２８５号で、現在米国特許第６，０４０，１８１号となっているものに詳細に記載されている。上記の米国特許出願および米国特許のそれぞれを全体として参照により本明細書に組み入れる。
【００４５】
１つの実施形態において、 ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーはｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡの一部分、またはｂｃｌ−２に関係するｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡの一部分に実質的に相補的である。好ましい実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ｍＲＮＡ前駆体コーディング鎖の翻訳開始部位の一部分にハイブリダイズする。より好ましい実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ヒトｂｃｌ−２遺伝子の翻訳開始部位を含むｍＲＮＡ前駆体コーディング鎖の一部分にハイブリダイズする。より好ましくは、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはＲＮＡのＡＵＧ開始配列に相補的なＴＡＣ配列を含む。
【００４６】
別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ヒトｂｃｌ−２遺伝子のｍＲＮＡ前駆体コーディング鎖のスプライス供与部位の一部分にハイブリダイズする。好ましくは、このヌクレオチドはｂｃｌ−２遺伝子のＧＴスプライス供与配列に相補的なＣＡ配列を含み、好ましくはさらに、上記のスプライス供与部位に隣接するｂｃｌ−２遺伝子コーディング鎖の部分にハイブリダイズする５〜５０塩基、より好ましくは約１０〜２０塩基の隣接する部分を含む。
【００４７】
さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ヒトｂｃｌ−２遺伝子のｍＲＮＡ前駆体コーディング鎖のスプライス受容部位の一部分にハイブリダイズする。好ましくは、このヌクレオチドは、ｂｃｌ−２遺伝子のＡＧスプライス受容配列に相補的なＴＣ配列を含み、好ましくはさらに、上記のスプライス受容部位に隣接するｂｃｌ−２遺伝子コーディング鎖の部分にハイブリダイズする５〜５０塩基、より好ましくは約１０〜２０塩基の隣接する部分を含む。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡの、スプライシング、輸送または分解に関与する部分にハイブリダイズする。
【００４８】
当業者には、本発明で使用するのに好適なアンチセンスオリゴマーはまた、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ上の別の部位に実質的に相補的であって、ハイブリッドを形成することができるものであってもよいことが理解できるであろう。また、当業者は、無関係な遺伝子からの転写物には通常生じない配列を有するｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡの部分にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーは、治療の特異性を維持するために好ましいことを理解するであろう。
【００４９】
ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの配列の設計はまた、そのｂｃｌ−２遺伝子、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ前駆体、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡ、またはｂｃｌ−２関連ヌクレオチド配列との配列相同性、またはこれらとのハイブリダイゼーションの程度に関係なく、実験による試験および臨床上の有効性の評価により決定することができる。当業者は、たとえば、好ましい実施形態のものと比較してより小さい配列相同性、より大きいもしくはより小さい改変したヌクレオチド、またはより長いもしくはより短い長さを有するにも関わらず、臨床的な治療において応答を示すようなｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーもまた本発明の範囲に含まれることを理解するであろう。
【００５０】
アンチセンスオリゴマーはＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはその誘導体であってよい。アンチセンスオリゴマーの個々の形態は、バイオアベイラビリティー、代謝、半減期等のオリゴマーの薬物動態パラメーターに影響を与え得る。そこで、本発明は細胞への取り込みを改善し、ヌクレアーゼ耐性を増強させ、標的配列への結合を改善し、または標的配列の開裂もしくは分解を増大させる特性を有するアンチセンスオリゴマー誘導体を意図する。アンチセンスオリゴマーは、たとえば、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートを含む塩基を含んでいてよい。アンチセンスオリゴマーは、代わりに、とりわけホスホジエステル、ホスホロチオエート、および／またはメチルホスホネートヌクレオチドの組合せを含む混合オリゴマーであってもよい。このようなオリゴマーは、２−Ｏ’−アルキルまたは２−Ｏ’−ハロの糖修飾、骨格修飾（たとえば、メチルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホルジチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｄｉｔｈｉｏａｔｅ）、ホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、スルホン、スルファメート、ニトロオキシド骨格、モルフォリノ誘導体およびペプチド核酸（ＰＮＡ）誘導体）、または塩基部分が修飾された誘導体（Ｅｇｈｏｌｍら、１９９２， 「アキラルペプチド骨格を有するペプチド核酸（ＰＮＡ）−オリゴヌクレオチド類似体（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ （ＰＮＡ）−Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｗｉｔｈ Ａｎ Ａｃｈｉｒａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂａｃｋｂｏｎｅ）」）を含むが、これらに限定されない修飾を有しうる。別の実施形態において、アンチセンスオリゴマーはオリゴヌクレオチドとその誘導体のコンジュゲートを含む（Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ， １９９０， 「オリゴヌクレオチドと修飾されたオリゴヌクレオチドのコンジュゲート：それらの合成および特性の概説（Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ： ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． １（３）：１６５−８７）。
【００５１】
ｉｎ ｖｉｖｏの治療への使用には、分解に対する耐性がより大きいために、少なくとも部分的には、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーのホスホロチオエート誘導体が好ましい。１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーはホスホロチオエート塩基を含むハイブリッドオリゴマーである。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは少なくとも１個のホスホロチオエート結合を含む。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは少なくとも３個のホスホロチオエート結合を含む。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは少なくとも３個の連続したホスホロチオエート結合を含む。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは全体がホスホロチオエート結合からなる。オリゴヌクレオチド誘導体を調製する方法は当技術分野において公知である。たとえば、Ｓｔｅｉｎら， １９８８， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １６：３２０９−２１ （ホスホロチオエート）；Ｂｌａｋｅら， １９８５， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４：６１３２−３８（メチルホスホネート）；Ｍｏｒｖａｎら， １９８６， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：５０１９−３２（アルファデオキシヌクレオチド）；Ｍｏｎｉａら， １９９３， 「２’デオキシギャップを含む２’−修飾オリゴヌクレオチドの遺伝子発現のアンチセンス阻害剤としての評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ２’−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２’ ｄｅｏｘｙ ｇａｐｓ ａｓ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８：１４５１４−２２（２’−Ｏ−メチル−リボヌクレオシド）；Ａｓｓｅｌｉｎｅら， １９８４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１：３２９７−３３０１（アクリジン）；Ｋｎｏｒｒｅら， １９８５， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ ６７：７８３−９； Ｖｌａｓｓｏｖら， １９８６， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：４０６５−７６（Ｎ−２−クロロセチルアミンおよびフェナジン）；Ｗｅｂｂら， １９８６， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：７６６１−７４（５−メチル−Ｎ^４−Ｎ^４−エタノシトシン）；Ｂｏｕｔｏｒｉｎら， １９８４， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７２：４３−６（Ｆｅ−エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）および類似体）；Ｃｈｉ−Ｈｏｎｇら， １９８６， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８３：７１４７−５１（５−グリシルアミド−１，１０−ｏ−フェナントロリン）；およびＣｈｕら， １９８５， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：９６３−７（ジエチレントリアミン−五酢酸（ＤＴＰＡ）誘導体）を参照されたい。
【００５２】
治療サイクルの期間中に投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効用量は、約０．０１〜０．１、０．１〜１、または１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。投与されるｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの用量は投与の方式に依存しうる。たとえば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの静脈内投与は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物を含む局所インプラントにより得られる全身用量よりもはるかに高い全身用量を与えるであろう。１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、より好ましくは４〜９ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、最も好ましくは５〜７ｍｇ／ｋｇ／日の用量で皮下投与される。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、より好ましくは４〜９ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、最も好ましくは５〜７ｍｇ／ｋｇ／日の用量で静脈内投与される。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、好ましくは０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、より好ましくは１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で局所投与される。局所投与がより低い全身用量をもたらしうることは当業者には明白であろう。たとえば、腫瘍内投与、眼内投与、または埋め込みのような局所投与法は、局所的に高いｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー濃度を生じることができるが、全体重を考慮すると比較的低い用量となる。したがってそのような場合には、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの局所投与は、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の全身用量を与えるように意図する。
【００５３】
別の実施形態において、約１０〜２０、２０〜３０、または３０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の、特に高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを１治療サイクルの間に投与する。
【００５４】
さらに、特定のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効用量は、癌のタイプ、疾病の状態または疾病の段階、オリゴマーの毒性、オリゴマーの癌細胞による取り込みの速度、ならびに、アンチセンスオリゴマーが投与される個体の体重、年齢、および健康状態を含む、付加的な要因に依存しうる。ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの作用または生物活性を妨げる可能性のある多くの要因がｉｎ ｖｉｖｏに存在するので、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効量は各個体により異なりうることは当業者に理解されうるであろう。
【００５５】
別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環血漿濃度が少なくとも３０ｎＭ（ナノモル）となるような用量とする。当業者には明白なように、投与の方式に応じて、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーのより低いまたはより高い血漿濃度が好ましい場合もある。たとえば、少なくとも３０ｎＭのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの血漿濃度は、少数の例を挙げると、静脈内、皮下、筋内、制御放出、および経口投与法に関して適当でありうる。けれども、別の例では、たとえば、腫瘍内投与、眼内投与、または埋め込みのような局所投与法を用いる場合には、局所的に高い、臨床的に有効なｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの濃度を生じることができるので、比較的低いｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環血漿レベルが望まれうる。
【００５６】
さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの少なくとも３０ｎＭ（ナノモル）の循環血漿濃度は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの投与の約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０時間後に達成される。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの少なくとも３０ｎＭの循環血漿濃度は、約３６〜４８時間の間、好ましくは２４〜３５時間、より好ましくは１２〜２４時間の間、最も好ましくは１２時間以内に達成される。
【００５７】
特定の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの用量は高用量である。１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環血漿濃度は少なくとも３０ｎＭである。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルは１μＭ〜１０μＭである。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環レベルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０μＭである。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの１μＭ〜１０μＭの循環レベルは、約３６〜４８時間の間、好ましくは２４〜３５時間、より好ましくは１２〜２４時間の間、最も好ましくは１２時間以内に達成される。
【００５８】
高用量は１サイクルあたり数回の投与をおこなうことにより達成してもよい。あるいは、高用量は１回のボーラス投与により投与されてもよい。高用量の１回の投与は、一時的に３０ｎＭよりもはるかに高いｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環血漿レベルをもたらしうる。さらに、特に高い用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの１回の投与により、１２時間よりもはるかに短い時間で、場合によっては１時間未満で、 ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの循環血漿濃度が１μＭ〜１０μＭに達する場合がある。
【００５９】
さらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの用量は、用いられる特定のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによって変わりうる。用いられる用量には、とりわけ、特定のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの安定性、局在化、細胞への取り込み、および毒性についての考慮のバランスが反映されると考えられる。たとえば、特定の化学的に修飾されたｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは分解に対してより高い耐性を示す場合があり、または標的の核酸により高い親和性を示す場合があり、または細胞もしくは細胞核による取り込みの増大を示す場合があり、これらは全て低い用量の使用を可能にしうる。さらに別の例において、特定の化学的に修飾されたｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、他のアンチセンスオリゴマーよりも低い毒性を示す場合があり、そのため、高い用量で使用することができる。このように、与えられたｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーについて、投与するのに適当な用量は、比較的高いまたは比較的低い場合があり得る。適当な用量は当業者には理解されるであろう。また、本発明は、特定の種のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーに対する最適な治療計画を継続して評価を行うことを意図している。１日分の用量は１回以上の処置で投与することができる。
【００６０】
ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの有効用量を決定するために考慮すべき他の要因には、オリゴマーを他の治療薬と併用して投与するか否かという点が含まれる。このような場合には、他の治療薬の相対的な毒性が、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを低用量で使用すべきことを示すかもしれない。あるいは、高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる治療が、低減した用量の治療薬との併用療法をもたらす場合もある。特定の実施形態において、特に高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる治療が、非常に低減した用量の癌治療薬との併用療法をもたらしうる。たとえば、患者を１０、２０、３０、４０、または５０ｍｇ／ｋｇ／日のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーにより治療すると、被験者の癌治療薬に対する感受性をさらに増大させることができる。このような場合、特に高い用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを、たとえば、非常に短縮した放射線療法計画と併用する。別の例において、特に高い用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーにより癌治療薬の効力が顕著に増強される。
【００６１】
さらに、特に高い用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、治療上有効な量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび／または癌治療薬の投与期間をさらに短縮して、治療サイクルの長さを１４日よりもずっと短くすることができる。
【００６２】
１つの実施形態において、５’−ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ−３’の配列で、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡの最初の６コドンと相補的で、それぞれの標的ＲＮＡ塩基にハイブリダイズする１８−塩基ホスホロチオエートｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを、２週間未満として規定される短い治療サイクルで投与する。
【００６３】
１つの実施形態において、Ｇ３１３９を２〜１３日間、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与する。特定の実施形態において、Ｇ３１３９を２〜３、４〜５、６〜７、８〜９、１０〜１１、または１２〜１３日間、０．０１〜１、１〜２、３〜４、５〜６、６〜７、７〜８、または９〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、より好ましくは４〜９ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、最も好ましくは５〜７ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与する。別の実施形態において、Ｇ３１３９を上記の用量で３〜９日間投与する。さらに別の実施形態において、Ｇ３１３９を上記の用量で４〜７日間投与する。好ましい実施形態において、Ｇ３１３９を上記の用量で５〜６日間投与する。最も好ましい実施形態において、Ｇ３１３９を５〜７ｍｇ／ｋｇ／日の用量で５〜６日間投与する。本発明は、使用される特定のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーに応じて、または特定の投与の方式に応じて、またはｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーが併用療法の一部として、たとえば、癌治療薬と併用して投与されるのか否かに応じて、他の好ましい治療処方計画を意図する。１日分の用量は１回以上の処置で投与することができる。
【００６４】
別の実施形態において、Ｇ３１３９を約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の特に高い用量で投与する。特定の実施形態において、Ｇ３１３９を約１０〜１５、１６〜２０、２１〜２５、２６〜３０、３１〜３５、３６〜４０、４１〜４５、または４６〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の特に高い用量で投与する。さらなる実施形態において、Ｇ３１３９を上記の用量で１〜１０日間投与する。さらに別の実施形態において、Ｇ３１３９を上記の用量で２〜７日間投与する。さらに別の実施形態において、Ｇ３１３９を上記の用量で３〜４日間投与する。好ましい実施形態において、Ｇ３１３９を２６〜３０、３１〜３５、３６〜４０、４１〜４５、または４６〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で最低１日投与する。本発明は、使用する特定のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーに応じて、または特定の投与の方式に応じて、またはｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーが併用療法の一部として、たとえば、癌治療薬と併用して投与されるか否かに応じて、他の好ましい治療処方計画を意図する。１日分の用量は１回以上の処置で投与することができる。
【００６５】
５．２ 癌治療
本明細書に記載される本発明は、そのような治療を必要とするヒトに、治療上有効な量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー（高用量のオリゴマーを含むがこれに限定されない）を投与することを含む癌を予防または治療する方法を包含する。本発明はさらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを短期間投与するという使用を包含する。正常な、非癌細胞は、特定の細胞タイプに特徴的な頻度で分裂する。細胞が癌性の状態にトランスフォームすると、制御されない細胞増殖および細胞死の減少が起こり、そのため、無秩序な細胞分裂または細胞増殖が癌細胞タイプの特色となっている。癌のタイプの例には、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病（たとえば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病のような急性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫）、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、子宮頸癌、睾丸癌、肺癌、膀胱癌、メラノーマ、頭頚部癌、脳癌、原発部位の不明な癌、新生物、末梢神経系の癌、中枢神経系の癌、腫瘍（たとえば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、小細胞肺癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽腫、および網膜芽腫）、Ｈ鎖病、転移、または制御されないもしくは異常な細胞増殖を特徴とする任意の疾病または障害が含まれるが、これらに限定されない。
【００６６】
好ましい実施形態において、本発明はさらに、癌を予防または治療するための併用療法の使用を包含する。たとえば、前立腺癌は、 パクリタキセル、ドセタキセル、ミトキサントロン、および／またはアンドロゲン受容体アンタゴニスト（たとえば、フルタミド）と併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、乳癌は、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、および／またはＶＰ−１６（エトポシド）と併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、白血病は、フルダラビン、シトシンアラビノシド、ゲムツズマブ（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）（ＭＹＬＯＴＡＲＧ）、ダウノルビシン、メトトレキサート、ビンクリスチン、６−メルカプトプリン、イダルビシン、ミトキサントロン、エトポシド、アスパラギナーゼ、プレドニゾン、および／またはシクロホスファミドと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、骨髄腫はデキサメタゾンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、メラノーマはダカルバジンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、結腸直腸癌は、イリノテカンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、肺癌は、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、および／またはシスプラチンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、非ホジキンリンパ腫は、シクロホスファミド、ＣＨＯＰ、エトポシド、ブレオマイシン、ミトキサントロン、および／またはシスプラチンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、胃癌はシスプラチンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。別の例として、膵臓癌は、ゲムシタビンと併用したｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物により治療することができる。これらの併用療法は癌または癌の再発を予防するためにも使用することができる。
【００６７】
併用療法はまた、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの投与に加えて、癌の予防または治療を助ける１以上の分子、化合物または処置を使用することを含む。これらの分子、化合物または処置には、化学薬（ｃｈｅｍｏａｇｅｎｔ）、免疫療法、癌ワクチン、抗血管形成薬、サイトカイン、ホルモン療法、遺伝子治療、および放射線療法が含まれるが、これらに限定されない。
【００６８】
１つの実施形態において、癌患者を治療するために、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーに加えて１以上の化学薬を投与する。本発明により意図される化学薬の例には、シトシンアラビノシド、タキソイド類（たとえば、パクリタキセル、ドセタキセル）、抗チューブリン薬（たとえば、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロンＢ、またはその類似体）、シスプラチン、カルボプラチン、アドリアマイシン、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｚａｎｔｒｏｎ）、２−クロロデオキシアデノシン、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ミトマイシンＣ、およびｃｉｓ−ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ） （ＤＤＰ）シスプラチン、チオテパ）、抗生物質（たとえば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン）、代謝拮抗薬（たとえば、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、ダカルバジン、テモゾラミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ））、アスパラギナーゼ、カルメット−ゲラン杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ ａｎｄ Ｇｕｅｒｉｎ）、ジフテリア毒素、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、ＬＹＳＯＤＲＥＮ（登録商標）、ヌクレオシド類似体、植物アルカロイド（たとえば、タキソール、パクリタキセル、カンプトセシン、トポテカン、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ， ＣＰＴ−１１）、ビンクリスチン、ビンブラスチンのようなビンカアルカロイド（ｖｉｎｃａ ａｌｋｙｌｏｉｄ））、ポドフィロトキシン（エピポドフィロトキシン、ＶＰ−１６（エトポシド）、ＶＭ−２６（テニポシド）のような誘導体を含む））、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、ミトマイシン、プロカルバジン、メクロレタミン、アントラサイクリン、（たとえば、ダウノルビシン（以前は、ダウノマイシン）、ドキソルビシン、ドキソルビシンリポソーマル）、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、プロマイシン、抗有糸分裂剤、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン活性化因子、アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）、アルタミン（ａｌｌｕｔａｍｉｎｅ）、アナストロズル（ａｎａｓｔｒｏｚｌｅ）、ビカルタミド、ビアオマイシン（ｂｉａｏｍｙｃｉｎ）、ブスルファン、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルボプレーン（ｃａｒｂｏｐｌａｉｎ）、クロラブシル（ｃｈｌｏｒａｂｕｓｉｌ）、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、シララビン（ｃｙｌａｒａｂｉｎｅ）、ダクリノマイシン（ｄａｃｌｉｎｏｍｙｃｉｎ）、エストラムシン（ｅｓｔｒａｍｕｓｉｎｅ）、フロキスリデ（ｆｌｏｘｕｒｉｄｈｅ）、ガムシタビン（ｇａｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ゴセレイン（ｇｏｓｅｒｅｉｎｅ）、イダルビシン、イトスファミド（ｉｔｏｓｆａｍｉｄｅ）、酢酸ラウプロリド（ｌａｕｐｒｏｌｉｄｅ ａｃｅｔａｔｅ）、レバミゾール、ロムスリン（ｌｏｍｕｓｌｉｎｅ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、マゲストロール（ｍａｇｅｓｔｒｏｌ）、酢酸塩、メルカプトプリン、メスナ（ｍｅｓｎａ）、ミトランク（ｍｉｔｏｌａｎｃ）、ペガスペルガーゼ（ｐｅｇａｓｐｅｒｇａｓｅ）、ペントスラチン（ｐｅｎｔｏｓｌａｔｉｎ）、ピカマイシン（ｐｉｃａｍｙｃｉｎ）、リウキスルマブ（ｒｉｕｘｌｍａｂ）、カムパス−１（ｃａｍｐａｔｈ−１）、ストラプロゾシン（ｓｔｒａｐｌｏｚｏｃｉｎ）、チオグアニン、トレチノイン、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、またはこれらの断片、ファミリーのメンバー、もしくは誘導体、または製薬上許容される塩が含まれるがこれらに限定されない。１以上の化学薬を含む組成物（たとえば、ＦＬＡＧ、ＣＨＯＰ）もまた本発明の意図するところである。ＦＬＡＧはフルダラビン、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）およびＧ−ＣＳＦを含む。ＣＨＯＰはシクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシンおよびプレドニゾンを含む。
【００６９】
１つの実施形態において、上記の化学薬は、２００〜４０００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のダカルバジンである。好ましい実施形態において、上記の用量は７００〜１０００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲である。別の実施形態において、上記の化学薬は、２５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のフルダラビンである。別の実施形態において、上記の化学薬は、２００〜２０００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）である。別の実施形態において、上記の化学薬は、１．５〜７．５ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のドセタキセルである。別の実施形態において、上記の化学薬は、５〜１５ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のパクリタキセルである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、５〜２０ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のシスプラチンである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、５〜２０ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量の５−フルオロウラシルである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、２〜８ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のドキソルビシンである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、４０〜１６０ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のエピポドフィロトキシンである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、５０〜２００ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のシクロホスファミドである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１２５、または１２５〜１５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のイリノテカンである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、３．７〜５．４、５．５〜７．４、７．５〜１１、または１１〜１８．５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のビンブラスチンである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は、０．７〜１．４、または１．５〜２ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のビンクリスチンである。さらに別の実施形態において、上記の化学薬は３．３〜５、５〜１０、１０〜１００、または１００〜１０００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のメトトレキセートである。
【００７０】
好ましい実施形態において、本発明はさらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる治療処方計画の一部として投与される場合に、低用量の化学薬を使用することを包含する。たとえば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる最初の治療により、それに続く、化学薬をｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーなしで投与する場合の投与量の下限範囲と同程度またはそれよりも低い用量の化学薬によるチャレンジに対する腫瘍の感受性が増大する。１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび低用量（たとえば、６〜６０ｍｇ／ｍ^２／日以下）のドセタキセルを癌患者に投与する。別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび低用量（たとえば、１０〜１３５ｍｇ／ｍ^２／日以下）のパクリタキセルを癌患者に投与する。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび低用量（たとえば、２．５〜２５ｍｇ／ｍ^２／日以下）のフルダラビンを癌患者に投与する。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび低用量（たとえば、０．５〜１．５ｇ／ｍ^２／日以下）のシトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）を癌患者に投与する。
【００７１】
そこで、本発明は、癌を予防または治療するために、低用量の化学薬の前、後、または同時に投与される１以上のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの使用を意図する。
【００７２】
１つの実施形態において、上記の化学薬は、５〜１０、１０〜２０、２０〜４０、または４０〜７５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシスプラチン、たとえば、ＰＬＡＴＩＮＯＬまたはＰＬＡＴＩＮＯＬ−ＡＱ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ）である。別の実施形態において、７．５〜７５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシスプラチンを卵巣癌の患者に投与する。別の実施形態において、５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシスプラチンを膀胱癌の患者に投与する。
【００７３】
別の実施形態において、上記の化学薬は、２〜４、４〜８、８〜１６、１６〜３５、または３５〜７５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のカルボプラチン、たとえば、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ （Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ）である。別の実施形態において、７．５〜７５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のカルボプラチンを卵巣癌の患者に投与する。別の実施形態において、５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のカルボプラチンを膀胱癌の患者に投与する。別の実施形態において、２〜２０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のカルボプラチンを睾丸癌の患者に投与する。
【００７４】
別の実施形態において、上記の化学薬は、０．２５〜０．５、０．５〜１、１〜２、２〜５、５〜１０、１０〜２０、２０〜４０ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のシクロホスファミド、たとえば、ＣＹＴＯＸＡＮ （Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ） である。別の実施形態において、４〜４０ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のシクロホスファミドを悪性癌の患者に投与する。別の実施形態において、０．２５〜２．５ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のシクロホスファミドを非悪性癌の患者に投与する。
【００７５】
１つの実施形態において、上記の化学薬は、０．５〜１、１〜４、４〜１０、１０〜２５、２５〜５０、または５０〜１００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシタラビン、たとえば、ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ Ｕｐｊｏｈｎ） である。別の実施形態において、１０〜１００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシタラビンを急性白血病の患者に投与する。別の実施形態において、０．５〜５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシタラビンを髄膜白血病の患者に投与する。別の実施形態において、５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシタラビンリポソーム、たとえば、ＤＥＰＯＣＹＴ （Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．） を癌の患者に投与する。
【００７６】
別の実施形態において、上記の化学薬は、１５〜２５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲、または０．２〜２ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のダカルバジン、たとえば、ＤＴＩＣまたはＤＴＩＣ−ＤＯＭＥ （Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐ．） である。別の実施形態において、１５〜１５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のダカルバジンをホジキン病の患者に投与する。別の実施形態において、０．２〜２ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のダカルバジンを悪性メラノーマの患者に投与する。
【００７７】
別の実施形態において、上記の化学薬は、０．１〜０．２、０．２〜０．４、０．４〜０．８、または０．８〜１．５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のトポテカン、たとえば、ＨＹＣＡＭＴＩＮ （ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ） である。
【００７８】
別の実施形態において、上記の化学薬は、５〜１０、１０〜２５、または２５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のイリノテカン、たとえば、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ Ｕｐｊｏｈｎ） である。
【００７９】
別の実施形態において、上記の化学薬は、２．５〜５、５〜１０、１０〜１５、または１５〜２５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のフルダラビン、たとえば、ＦＬＵＤＡＲＡ （Ｂｅｒｌｅｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ） である。
【００８０】
別の実施形態において、上記の化学薬は、２００〜２０００ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のシトシンアラビノシド （Ａｒａ−Ｃ） である。
【００８１】
別の実施形態において、上記の化学薬は、６〜１０、１０〜３０、または３０〜６０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のドセタキセル、たとえば、ＴＡＸＯＴＥＲＥ （Ｒｈｏｎｅ Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ） である。
【００８２】
別の実施形態において、上記の化学薬は、１０〜２０、２０〜４０、４０〜７０、または７０〜１３５ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のパクリタキセル、たとえば、ＴＡＸＯＬ （Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ） である。
【００８３】
別の実施形態において、上記の化学薬は、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量の５−フルオロウラシルである。
【００８４】
別の実施形態において、上記の化学薬は、２〜４、４〜８、８〜１５、１５〜３０、または３０〜６０ｍｇ／ｋｇ／サイクルの範囲の用量のドキソルビシン、たとえば、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ Ｕｐｊｏｈｎ） 、ＤＯＸＩＬ （Ａｌｚａ） 、ＲＵＢＥＸ （Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ） である。
【００８５】
別の実施形態において、上記の化学薬は、３．５〜７、７〜１５、１５〜２５、または２５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のエトポシド、たとえば、ＶＥＰＥＳＩＤ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ Ｕｐｊｏｈｎ）である。別の実施形態において、５〜５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のエトポシドを睾丸癌の患者に投与する。別の実施形態において、３．５〜３５ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のエトポシドを小細胞肺癌の患者に投与する。
【００８６】
別の実施形態において、上記の化学薬は０．３〜０．５、０．５〜１、１〜２、２〜３、または３〜３．７ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のビンブラスチン、たとえば、ＶＥＬＢＡＮ （Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）である。
【００８７】
別の実施形態において、上記の化学薬は、０，１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６または０．７ｍｇ／ｍ^２／サイクルの範囲の用量のビンクリスチン、たとえば、ＯＮＣＯＶＩＮ （Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ） である。
【００８８】
別の実施形態において、上記の化学薬は、０．２〜０．９、１〜５、５〜１０、１０〜２０の範囲の用量のメトトレキセートである。
【００８９】
別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、抗体および免疫調節薬のような１以上の免疫治療薬と併用して投与される。上記免疫治療薬には、リタキサン（ｒｉｔｕｘａｎ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、カムパス−１ （ｃａｍｐａｔｈ−１）、ゲムツズマブ、またはトラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）が含まれるがこれらに限定されない。
【００９０】
別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、１以上の抗血管形成薬と併用して投与される。上記抗血管形成薬には、アンギオスタチン、サリドマイド、クリングル５（ｋｒｉｎｇｌｅ ５）、エンドスタチン、セルピン（セリンプロテアーゼ阻害剤）、抗トロンビン、フィブロネクチンの２９ｋＤａ Ｎ−末端および４０ｋＤａ Ｃ−末端タンパク質分解断片、プロラクチンの１６ｋＤａタンパク質分解断片、血小板因子−４の７．８ｋＤａタンパク質分解断片、血小板因子−４の断片に相当する１３アミノ酸ペプチド（Ｍａｉｏｎｅら， １９９０， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５１：２０７７−２０８３）、コラーゲンＩの断片に相当する１４アミノ酸ペプチド（Ｔｏｌｍａら， １９９３， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １２２：４９７−５１１）、トロンボスポンジンＩの断片に相当する１９アミノ酸ペプチド（Ｔｏｌｓｍａら， １９９３， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １２２：４９７−５１１）、ＳＰＡＲＣの断片に相当する２０アミノ酸ペプチド（Ｓａｇｅら， １９９５， Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ５７：１３２９−１３３４）、またはこれらの断片、ファミリーのメンバーもしくは誘導体、またはこれらの製薬上許容される塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００９１】
血管形成を阻害し、ラミニン、フィブロネクチン、プロコラーゲン、およびＥＧＦの断片に相当する他のペプチドもまた記載されている（Ｃａｏ， １９９８， Ｐｒｏｇ． Ｍｏｌ． Ｓｕｂｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ２０：１６１−１７６の概説を参照されたい）。ＲＧＤタンパク質（すなわち、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐのペプチドモチーフを有する）に結合する特定のインテグリンを遮断するモノクローナル抗体および環状ペンタペプチドが抗血管新生活性を有することが示されている（Ｂｒｏｏｋｓら， １９９４， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：５６９−５７１； Ｈａｍｍｅｓら， １９９６， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：５２９−５３３）。さらに、受容体アンタゴニストによるウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター受容体の阻害が、血管形成、腫瘍の増殖および転移を阻害する（Ｍｉｎら， １９９６， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６：２４２８−３３； Ｃｒｏｗｌｅｙら， １９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：５０２１−２５）。このような抗血管形成薬の使用もまた本発明の意図するところである。
【００９２】
別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、放射線の処方計画と併用して投与される。
【００９３】
別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは１以上のサイトカインと併用して投与される。上記サイトカインには、リンホカイン、腫瘍壊死因子、腫瘍壊死因子様サイトカイン、リンホトキシン−α、リンホトキシン−β、インターフェロン−α、インターフェロン−β、マクロファージ炎症性タンパク質、顆粒球単球コロニー刺激因子、インターロイキン（インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−６、インターロイキン−１２、インターロイキン−１５、インターロイキン−１８を含むが、これらに限定されない）、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０またはＣＤ１３７リガンド、Ｆａｓ−Ｆａｓリガンド、４−１ＢＢＬ、内皮単球活性化タンパク質、またはこれらの断片、ファミリーのメンバーもしくは誘導体、またはこれらの製薬上許容される塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、癌ワクチンと併用して投与される。癌ワクチンの例には、自己由来の細胞もしくは組織、非自己由来の細胞もしくは組織、癌胎児性抗原、α−フェトプロテイン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＢＣＧ生ワクチン、メラノサイト系統（ｌｉｎｅａｇｅ）タンパク質（たとえば、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ−１／ＭｅｌａｎＡ、ＴＲＰ−１（ｇｐ７５）、チロシナーゼ、広く共有される腫瘍特異的抗原（たとえば、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、ｐ１５）、腫瘍特異的な突然変異した抗原（β−カテニン、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４）、非メラノーマ抗原（たとえば、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（乳癌および卵巣癌）、ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ６、Ｅ７（子宮頸癌）、ＭＵＣ−１（乳癌、卵巣癌および膵臓癌））が含まれるが、これらに限定されない。Ｔ細胞により認識されるヒト腫瘍抗原については、一般的にはＲｏｂｂｉｎｓおよびＫａｗａｋａｍｉ， １９９６， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ８：６２８−３６を参照されたい。癌ワクチンは精製調製物であっても、または精製調製物でなくてもよい。
【００９５】
さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、ホルモン療法と併用して使用される。ホルモン療法による治療は、ホルモンアゴニスト、ホルモンアンタゴニスト（たとえば、フルタミド、タモキシフェン、酢酸ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ）、およびステロイド類（たとえば、デキサメタゾン、レチノイド類、ベタメタゾン、コルチゾール、コルチゾン、プレドニゾン、デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド類、鉱質コルチコイド類、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン類）を含む。
【００９６】
さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、癌の治療において遺伝子治療プログラムと併用して使用される。
【００９７】
１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、癌を治療するために、短い治療サイクルで、少なくとも１つの癌治療薬と併用して癌患者に投与される。１つの実施形態において、上記の治療サイクルは２〜１３日の範囲である。別の実施形態において、上記の治療サイクルは３〜９日の範囲である。別の実施形態において、上記の治療サイクルは４〜７日の範囲である。さらに別の実施形態において、上記の治療サイクルは５〜６日の範囲である。癌治療薬による治療の期間は使用される特定の癌治療薬によって変化し得る。本発明はまた、断続的な投与、または１日分の用量を数回に分けて投与することをも意図する。特定の癌治療薬のための適切な治療時間は当業者には理解されるであろう。また、本発明は、それぞれの癌治療薬に対する最適な治療計画を継続して評価を行うことを意図する。
【００９８】
本発明は、少なくとも１サイクル、好ましくは２サイクル以上の期間、１つの治療薬または一連の治療薬が投与されることを意図している。好ましい実施形態において、サイクルは１４日よりも短い。１つの実施形態において、１サイクルの長さは１０〜１３日である。好ましい実施形態において、１サイクルの長さは７〜９日である。最も好ましい実施形態において、１サイクルの長さは５〜６日である。１サイクルの適当な期間は、サイクルの全回数、およびサイクルの間の間隔と同様に、当業者には理解されるであろう。本発明はそれぞれのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび癌治療薬に対する最適な治療計画を継続して評価を行うことを意図している。
【００９９】
５．３ 医薬組成物
本発明はさらに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび製薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物を提供する。好適な製薬上許容される担体には、医薬組成物の生物活性の有効性を妨害しない、本質的に化学的に不活性で毒性のない組成物が包含される。好適な製薬用の担体の例には、生理食塩水、グリセロール溶液、エタノール、Ｎ−（１（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、ジオレシルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、およびリポソームが含まれるが、これらに限定されない。このような組成物は、治療上有効な量の化合物と共に、患者に適切な投与をするための剤形を提供するために適した量の担体を含むはずである。製剤は投与方式に適していなければならない。たとえば、経口投与は、胃腸管の中での分解からアンチセンスオリゴマーを保護する腸溶コーティングを必要とする。別の例において、アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーを分解酵素から保護し、循環系における輸送を促進し、さらに細胞膜を通過して細胞内部位に送達する作用をもたらすために、リポソーム製剤として投与される。
【０１００】
別の実施形態において、医薬組成物はｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび１以上の治療薬および製薬上許容される担体を含んでなる。特定の実施形態において、医薬組成物はｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび１以上の癌治療薬および製薬上許容される担体を含んでなる。
【０１０１】
１つの実施形態において、他の治療薬を加えたかまたは加えないｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー、および製薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物は、有効用量である。
【０１０２】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、約０．０１〜０．１、０．１〜１、１〜５、または６〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量の、好ましくは４〜９ｍｇ／ｋｇ／日の用量の、より好ましくは５〜７ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー、および製薬上許容される担体を含んでなる。投与される個々の任意のアンチセンスオリゴマーの実際の量は、癌のタイプ、体の正常な細胞に対するアンチセンスオリゴマーの毒性、腫瘍細胞によるアンチセンスオリゴマーの取り込み率、およびアンチセンスオリゴマーを投与される個体の体重および年齢のようないくつかのファクターに依存する。 ｉｎ ｖｉｖｏにはアンチセンスオリゴマーの作用または生物活性を妨害する可能性のある多くのファクターが存在するので、アンチセンスオリゴマーの有効量は個体毎に異なる。
【０１０３】
別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の特に高い用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを含有する。特定の実施形態において、１１〜１５、１６〜２０、２１〜２５、２６〜３０、３１〜３５、３６〜４０、４１〜４５、または４６〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の、特に高い用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを治療サイクルの期間に投与する。
【０１０４】
好ましい有効用量の選択は、当業者に公知であろういくつかのファクターを考慮した上で、当業者が（たとえば臨床的な試行を通して）決定することができる。このようなファクターには、アンチセンスオリゴマーの特定の形態、および医薬化合物の認可を得るために典型的におこなわれる開発過程の間に確立される、バイオアベイラビリティー、代謝、半減期等のようなオリゴマーの薬物動態パラメーターが含まれる。その用量を決定する上でのさらなるファクターには、治療されるべき疾病、患者において達成されるべき利益、患者の体重、患者の免疫状態、投与経路、アンチセンスオリゴマーまたは併用する治療薬の投与が急性か慢性か、同時におこなう投薬、および投与された医薬品の有効性に影響を与えることが当業者に公知の他のファクターが含まれる。
【０１０５】
本発明の組成物は、中性または塩の形態で製剤化することができる。製薬上許容される塩には、遊離のアミノ基と形成される塩（例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等から得られる塩）、および遊離のカルボキシル基と形成される塩（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から得られる塩）が含まれる。
【０１０６】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ヒトへの皮下注射または静脈内投与に適した医薬組成物として、通常の工程に従って製剤化される。通常は、皮下注射または静脈内投与用の組成物は、無菌の等張緩衝水溶液中の溶液である。必要ならば、前記組成物はさらに、可溶化剤、および注射の部位の痛みを緩和するためにリドカインのような局所麻酔薬を含有してもよい。一般的に、成分は別々にまたは単位剤形として一緒に混合して、供給される。たとえば、凍結乾燥粉末もしくは活性薬剤の量を表示したアンプルまたは一回分袋のような密封容器に入れた水不含濃縮物として供給される。前記組成物を注入により投与する場合には、無菌の製薬等級の水、生理食塩水、または他の許容される希釈剤の入った注入ビン、バッグまたは他の許容される容器を用いて該組成物が分配される。前記組成物を注射により投与する場合には、成分を投与の前に混合するように、無菌の注射用水または生理食塩水のアンプルを提供してもよい。
【０１０７】
５．４ 投与方式
本発明の医薬組成物の投与法には、経口、静脈内注入、皮下注射、筋内、局所、デポ注射、植え込み、持続放出方式、腔内、鼻内、吸入、腫瘍内、眼内、および制御放出が含まれるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物はまた、非経口、経粘膜（たとえば、経口）、鼻内、経直腸、腟内、舌下、粘膜下、または経皮により導入してもよい。好ましくは投与は、非経口経路、すなわち消化管を通さずに何らかの他の経路を通じて、たとえば、静脈内、皮下、筋内、腹腔内、眼窩内、関節包内、脊髄内、胸骨内、動脈内、または皮内投与により、行なわれる。当業者は、投与方式を選択するにあたって考慮すべき特定の利点および欠点を理解できるであろう。本発明には複数の投与方式が包含される。たとえば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを皮下注射により投与する一方、併用する治療薬を静脈内注入により投与する。さらに、１以上の種類のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび他の治療薬（加えても加えなくてもよい）の投与を、同時におこなってもよいし（すなわち、共投与）、連続的に行ってもよい。たとえば、最初にｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを投与することによって、後に投与する癌治療薬または放射線療法に対する腫瘍の感受性を増大させる。別の実施形態において、１以上の種類のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび他の治療薬（加えても加えなくてもよい）の投与の期間は重なってもよい。たとえば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを７日間投与し、第２の治療薬の導入をｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー治療の第５日目に開始し、第２の治療薬による治療をｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー治療の７日後まで続ける。
【０１０８】
経口投与に適した医薬組成物は、たとえば、カプセル剤または錠剤として、粉剤または顆粒剤として、液剤、シロップ剤または懸濁剤として（水性または非水性の液体中）、食用泡剤またはホイップ剤として、または乳剤として提供される。錠剤または硬ゼラチンカプセル剤は、たとえば、ラクトース、デンプンまたはその誘導体、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、ステアリン酸またはその塩を含有する。軟ゼラチンカプセル剤は、たとえば、植物油、ろう、脂肪、半固体または液体のポリオール等を含有する。液剤およびシロップ剤は、たとえば、水、ポリオールおよび糖を含有する。
【０１０９】
経口投与される活性薬剤は、胃腸管における活性薬剤の分解を遅らせるかまたは吸収に影響を与える材料（たとえば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル）により被覆またはそれと混合される。これにより、たとえば、何時間にも渡る活性薬剤の徐放が達成され、また必要ならば、活性薬剤を胃腸管内での分解から保護することができる。胃腸管に沿ったさまざまなｐＨおよび酵素的条件の変化をうまく利用して、経口投与用の医薬組成物を、胃腸管の特定の位置で活性薬剤の放出を促進するように製剤化することができる。
【０１１０】
非経口投与に適した医薬組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、および組成物を想定される受容者の血液と実質的に等張にするための溶質を含んでいてもよい、水性または非水性の無菌の注射用液剤または懸濁剤が含まれるが、これらに限定されない。このような組成物中に存在してもよい他の成分には、たとえば、水、アルコール、ポリオール、グリセリンおよび植物油が含まれる。非経口投与に適した組成物は、たとえば密閉されたアンプルまたはバイアルのような単回用量または複数回用量の容器に入れて提供してもよいし、使用の直前に無菌の液体担体、たとえば、注射用無菌生理食塩水の添加を必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存しておいてもよい。即時注射液剤および懸濁剤は、無菌の粉剤、顆粒剤および錠剤から調製してもよい。このような組成物は、治療上有効な量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーまたは他の治療薬を、患者に適切な投与ができるような剤形を提供するのに適した量の担体とともに含有するはずである。製剤は投与方式に適していなければならない。
【０１１１】
経皮投与に適した医薬組成物は、長期間に渡って表皮との密着を維持するように作られた分離パッチとして提供されうる。局所投与に適した医薬組成物は、たとえば、軟膏、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、粉剤、液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアロゾル剤または油剤として提供される。皮膚、口、目または他の外部組織への局所投与には、好ましくは局所用軟膏またはクリーム剤が用いられる。軟膏に製剤する場合には、活性成分をパラフィン軟膏基剤または水混和性の軟膏基剤のいずれかと共に用いる。あるいは、活性成分は水中油型基剤または油中水型基剤を用いたクリーム剤に製剤される。
【０１１２】
目への局所投与に適した医薬組成物には、たとえば、点眼薬または注射用組成物が含まれる。これらの組成物において、活性成分は、たとえば、カルボキシメチルセルロースを含むかまたは含まない水性溶媒を含む、適当な担体に溶解または懸濁すればよい。口内への局所投与に適した医薬組成物には、たとえば、トローチ、香錠および口内洗浄剤が含まれる。
【０１１３】
鼻内投与に適した医薬組成物は、粉末（好ましくは２０〜５００ミクロンの範囲の粒子経を有する）のような固体担体を含んでもよい。粉末は、かぎタバコを吸う方法、すなわち、鼻に近づけて持った粉末の容器から鼻を通してすばやく吸入することにより、投与することができる。あるいは、鼻内投与に適した組成物は、たとえば鼻内スプレーまたは点鼻薬のような液体担体を含んでもよい。これらの組成物は活性成分の水溶液または油溶液を含みうる。吸入による投与のための組成物は、特別に適合させた装置に入れて供給することができる。そのような装置は、あらかじめ決められた用量の活性成分を供給するように構成された、加圧エアロゾル、ネブライザーまたは吹入器を含むが、これらに限定されない。
【０１１４】
直腸投与に適した医薬組成物は、坐剤または浣腸剤として提供されうる。腟内投与に適した医薬組成物は、たとえば、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡剤またはスプレー製剤として提供される。
【０１１５】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は制御放出システムにより送達される。たとえば、医薬組成物は、静脈内注入、植え込み可能な浸透ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与方式を用いて投与される。１つの実施形態において、ポンプが使用される（たとえば、Ｌａｎｇｅｒ， １９９０， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−３３； Ｓｅｆｔｏｎ， １９８７， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４：２０１； Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０， Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７； Ｓａｕｄｅｋら、１９８９， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２１：５７４を参照されたい）。別の実施形態において、化合物を小胞、特にリポソームに入れて送達することができる（たとえば、Ｌａｎｇｅｒ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−３３（１９９０）； Ｔｒｅａｔら、１９８９， 「感染性疾患および癌の治療におけるリポソーム（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ）」、Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ および Ｆｉｄｌｅｒ（編）、Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｔｏｒｋ， ｐｐ３５３−６５； Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ， 同書、ｐｐ３１７−２７； 国際特許公開第ＷＯ９１／０４０１４号；米国特許第４，７０４，３５５号を参照されたい）。別の実施形態において、高分子材料を使用することができる（たとえば、「制御放出の医学的応用（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ）」、Ｌａｎｇｅｒ および Ｗｉｓｅ（編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ： Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ， １９７４； 「制御された薬物バイオアベイラビリティー、薬品設計および性能（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ， Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）」、Ｓｍｏｌｅｎ およびＢａｌｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８４）； ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，１９５３， Ｊ． Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｓｃｉ． Ｒｅｖ． Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２３：６１； Ｌｅｖｙら、１９８５， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０； Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９， Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２５：３５１； Ｈｏｗａｒｄら、１９８９， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ． ７１：１０５を参照されたい）。
【０１１６】
さらに別の実施形態において、制御放出システムを標的に近接して置くことができる。たとえば、マイクロポンプが制御された用量を脳中で直接送達することにより、全身投与用量の一部のみしか必要でなくなる（たとえば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， １９８４，「制御放出の医学的応用（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ）」第２巻、ｐｐ． １１５−１３８を参照されたい）。
【０１１７】
１つの実施形態において、本発明の医薬組成物を治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、たとえば、手術の際の局所的注入、局所適用（たとえば、手術後の創傷用包帯に付けて）、注射、カテーテルを用いて、坐剤を用いて、またはインプラントを用いて達成されるが、これらに限定されない。インプラントは多孔性、無孔性、またはゼラチン材料、たとえば、シラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のような膜、もしくは繊維からなるものであってよい。
【０１１８】
坐剤は一般的に活性成分を重量で０．５％〜１０％の範囲で含む。経口用製剤は好ましくは重量で１０％〜９５％の活性成分を含む。
【０１１９】
ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは、１以上の治療薬の投与の前、投与時、および／または投与後に投与することができる。１つの実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーをまず投与してｂｃｌ−２の発現を減少させることにより、次におこなう癌治療薬による攻撃に対する腫瘍の感受性を増大させる。別の実施形態においては、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを癌治療薬の投与後に投与して、腫瘍のｂｃｌ−２発現を減少させることにより腫瘍の抵抗性を抑制し、これにより再発または癌治療薬への応答の最小化を防ぐ。さらに別の実施形態において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび１以上の治療薬の投与の間に重なる期間があってもよい。
【０１２０】
本発明はさらに、ｂｃｌ−２関連障害からの保護またはこれの治療のための、癌治療薬と組み合わせた有効量のｂｃｌ−２オリゴマーを含む医薬キットを提供する。１つの実施形態において、有効量のｂｃｌ−２オリゴマーおよび製薬上許容される担体を単回用量バイアルまたは他の容器中に充填する。特定の実施形態において、ｂｃｌ−２オリゴマーはＧ３１３９（配列番号１７）からなる。キットは、本発明の医薬組成物の１以上の成分を満たした１以上の容器を含んでいてよい。必要に応じて、そのような容器には、医薬または生物学的産物の製造、使用または販売を監督する政府当局により定められた型式の能書を添付することができる。該能書は、ヒトへの投与に関する製造、使用または販売に対する当局による認可を踏まえたものである。
【０１２１】
本発明は下記の非限定的な実施例を参照することにより、より良く理解されるであろうが、それらの実施例は、本発明の典型例としてのみ提供されるものである。下記の実施例は本発明の好ましい実施形態をより十分に説明するために提示される。しかしながら、これらを本発明のより広い範囲を限定するものとして解釈するべきではない。
【０１２２】
６． 実施例１： ｂｃｌ−２ アンチセンス治療は悪性メラノーマを化学増感させる
この実施例は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーが、進行した悪性メラノーマの患者の治療のために有効に使用できることを示す。この研究において、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる治療を受けた６人の患者には、化学薬と併用して、５．３または６．５ｍｇ／ｋｇ／日のオリゴマーを７日間全身投与した。この実施例において報告された知見は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを短期間にわたり高用量で投与した場合、この治療は共通毒性基準による判定で低い毒性を示し、腫瘍内のＢｃｌ−２を減少させ、アポトーシスを促進し、目的の腫瘍応答および患者の延命をもたらすことを示している。反応した患者の中には、ダカルバジンのような標準的な薬物を単独で用いる治療が期待した効果を最小限しか、または全く示さないような、標準的な抗癌剤による治療の間に進行性疾病を経験した「治療抵抗性癌」の患者が何人か含まれていた。これに対して、ｂｃｌ−２アンチセンスおよびダカルバジンによる併用療法は予想外の持続性応答および延命をもたらした。さらに、より短い期間に、より高用量を用いた５人の患者による追加の研究により、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを７ｍｇ／ｋｇ／日で５日間全身投与した場合に良好な耐容性が証明された。このように、上記の結果は、短期間での高用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの投与が、メラノーマに対する安全で有効な治療であることを示している。この研究において概要を示した手法は、他のタイプの癌を治療するために広く適用できる方法論を提供する。
【０１２３】
６．１ 材料および方法
測定可能な疾病を有しているかどうか、および皮膚転移が生検取得可能であり、かつ最初にウエスタンブロット法によりＢＣＬ−２発現についてもともと陽性であるかどうかという観点から、第ＩＶ期転移メラノーマを有する１４人の患者が、この第Ｉ／ＩＩ相用量漸増試験に適格であった（表１）。患者は正常な腎臓、肝臓、および造血機能を有し、試験に加わる前４週間は化学または免疫治療を受けていないことが要求された。
【０１２４】
ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー（配列５’−ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ−３’）を、携帯型注入ポンプ（Ｓｉｍｓ Ｄｅｌｔｅｃ Ｉｎｃ．， Ｓｔ． Ｐａｕｌ， ＭＮ， ＵＳＡ）を用いて、中心静脈線を通して連続静脈内注入（ＣＩＶ）により１４日間投与した。別の末梢静脈線を用いて、ＤＴＩＣを２００ｍｇ／ｍ^２／日の用量で、１４日間のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー治療の第５日目から第９日目までの５日間、１時間の注入により投与した。治療サイクルを毎月繰り返した。用量の漸増は、ＢＣＬ−２ ＡＳＯについて０．６ｍｇ／ｋｇ／日から始めて、１．３、１．７、２．１、３．１、４．１、５．３、および６．５ｍｇ／ｋｇ／日となるように続けた。ある用量レベルで少なくとも３人の患者コホートにおいて安全性が確立された後、新しい患者コホートにその次に高い用量レベルを投与した（Ｗａｔｅｒｓら、２０００， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １８（９）：１８１２−２３）。２８日のサイクルの繰り返しおよび同一の患者における用量の漸増は、２週間の観察期間の後に安定しているかまたは応答性の患者にについて許可した。
【０１２５】
別の経路およびスケジュールによる臨床実績を得るために、５．３または６．５ｍｇ／ｋｇ／日により治療されたコホート中の６人の患者に、静脈内注入による最初のサイクルを与え、続いて次のサイクルでＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの皮下（ＳＣ）投与に切り替えた。ＳＣ経路により治療されるこれらの患者は、第５日に１時間の注入による８００ｍｇ／ｍ^２のＤＴＩＣの投与と併用して、第１日より第７日まで１日２回のＳＣ注射により、１日分総用量として同量を投与した。
【０１２６】
抗腫瘍効果は、治療の各サイクルの後に、皮膚転移を有する患者のカリパス測定および詳細な写真記録を用いて評価した。内臓転移は、記録した後、コンピュータ断層撮影スキャンを行なった。腫瘍応答の分類には、少なくとも４週間継続した連続記録を必要とするＷＨＯの判定基準を用いた。完全応答とは、検出できる転移の消失であると定義された。部分応答とは、測定できる転移の５０％以上の減少であると定義された。患者が１つの器官中で多数の転移を示す場合には、最大５つの標的病変をベースラインとして記録した後、追跡して応答を判定した。測定可能な疾病の２５％を超える増大、または新しい転移性病変の出現は、進行性疾病と定義された。さらに、標的病変の直径が２５％を超え５０％未満減少した場合は、マイナー応答であると呼ばれた。その他の全ての場合は安定疾病と定義された。生存期間はこのプロトコールによる最初の治療の時点から評価した。
【０１２７】
毒性は共通毒性基準により記録し、薬物投与の期間は毎日、次いでサイクルとサイクルの間は週ごとにモニターした。治療サイクルの間の２週間に消失しなかったグレードＩＩＩまたはＩＶの治療関連毒性は、用量制限毒性であるとみなした。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの薬物動態を決定するために、治療前の時間０、次いで患者が２週間のＢＣＬ−２ ＡＳＯの静脈注入を受けている間の第２、３、５、６、１０、および１４日に血漿サンプルを採取した。腹部に皮下ボーラス注射としてＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーを投与されている患者において、１２時間の薬物動態プロファイルを測定した。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー血漿レベルを、ＨＰＬＣを用いてＰｈａｒｍａｎａｌｙｔ， Ｂａｄｅｎ， Ａｕｓｔｒｉａによりアッセイした（Ｃｈｅｎら、１９９７， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ． Ｂ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｓｃｉ． Ａｐｐｌ． ６９２：４３−５１）。
【０１２８】
ＢＣＬ−２発現およびメラノーマ転移のアポトーシス率は、それぞれウエスタンブロット法およびＴＵＮＥＬ法により評価した（Ｊａｎｓｅｎら、１９９８， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ４（２）：２３２−４）。技術的な限界のため、ベースラインレベルと比較して２０％未満のＢＣＬ−２の減少は有意とはみなさなかった。生検される腫瘍は、応答の測定に用いた標的病変と同様に、大きさ、位置、および臨床的特徴に基づいて選択された。皮膚のメラノーマ転移の切除生検はベースラインの時点で、およびそれぞれのＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー用量レベルについてＤＴＩＣ投与の５日前におこなった。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーおよびＤＴＩＣ治療を併用した効果を記録するために、追加の生検をサイクルの第１４日に取得した。患者１人について用量レベル毎に全部で２−４の腫瘍生検を調査した。ウエスタンブロットおよびＴＵＮＥＬアッセイに用いた腫瘍生検の一部についてはまた、一貫した腫瘍細胞含量を確保し、生検サンプル中の非腫瘍細胞の効果の混同を抑制するために、一般的な組織病理学による評価をもおこなった。
【０１２９】
６．２ 結果
１４人の患者の全員に対して、上に概略を示した２つの治療計画（Ｉ．Ｖ．またはＳ．Ｃ．）に従って、ＤＴＩＣと併用したＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー（０．６から６．５ｍｇ／ｋｇ／日）により治療を行なった。
【０１３０】
ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの安定状態の血漿レベルは、連続静脈内注入の１日後に観察したところ、投与用量とともに線形的に増加した。１．７ｍｇ／ｋｇ／日よりも高用量のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーにより、動物モデルで生理活性を有すると決定された血漿レベル（Ｒａｙｎａｕｄら、１９９７， Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ． ２８１：４２０−７）である１μｇ／μｌを上回る、一定した安定状態の血漿レベルが得られた。６．５ｍｇ／ｋｇ／日では、２４時間までに６．４７μｇ／ｍｌ（＋／− ＳＤ ＝ ２．５１μｇ／ｍｌ）の安定状態の平均血漿レベルに達した。１日２回投与されたＳＣボーラス注射のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー血漿レベルは、１２時間にわたりベル型で推移した。８．６μｇ／ｍｌ（＋／− ＳＤ ＝ １．２６μｇ／ｍｌ）のピーク濃度は、１２時間の間隔で投与された３．２５ｍｇ／ｋｇの用量のＳＣ注射後の、３〜４時間後に観察された。皮下注射の間の１２時間の９０％を上回る期間において、血漿レベルは、生物活性と関連する１ｍｇ／ｍｌの目標血漿レベルを超えた。複数サイクルの治療を受けた患者において薬物動態特性の変化は観察されなかった。同時におこなうＤＴＩＣ治療は、安定状態のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの血漿レベルに影響を与えなかった。
【０１３１】
ベースラインにおいて、皮膚メラノーマ転移のＢＣＬ−２タンパク質発現（Ｓｅｌｚｅｒら、１９９８， ８（３）：１９７−２０３； Ｃｅｒｒｏｎｉら、１９９５， Ａｍ． Ｊ． Ｄｅｒｍａｔｏｐａｔｈｏｌ． １７：７−１１）が、この研究においてスクリーニングした１４人の患者の全てにおいてウエスタンブロットにより確認された。比較可能な病変の連続生検により、ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー投与の間のＢＣＬ−２タンパク質レベルの減少が示された（表１）。患者１０においては、生検組織中にメラノーマ細胞が存在しなかったため、ウエスタンブロットにおいて連続腫瘍検体の評価ができなかった。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの１４日間の連続注入により治療した患者におけるＢＣＬ−２タンパク質の最大減少は、典型的には第５日までに観察され、第１４日にはそれ以上の減少はなかった。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー血漿レベルが１μｇ／ｍｌを越えた評価可能な患者の８３％（患者１２人中１０人）が、ＢＣＬ−２発現の明らかな減少を示した（表１）。１．７ｍｇ／ｋｇ／日より高用量のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーを用いた治療サイクルは、第５日までにＢＣＬ−２タンパク質の４０％減少というメジアン減少を示した。
【０１３２】
ＴＵＮＥＬ染色により、５日間のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー治療後の腫瘍検体においてアポトーシスをおこした細胞の増加が観察された（ベースラインからの増加は、０．８５％（＋／− ＳＤ ＝ ０．４７％） 〜 ３．１７％（＋／− ＳＤ ＝ １．１６％））（図２Ｂ）。けれども、アポトーシス刺激（ＤＴＩＣ）を加えた後におこなわれた生検において、アポトーシス細胞死のさらなる劇的な増加を観察することができた（図２Ｃ、１９．４％（＋／− ＳＤ ＝ ４．２％））。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーとＤＴＩＣの併用療法は、６．５ｍｇ／ｋｇ／日以下のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーまで、用量制限毒性を示さずに、良好な耐容性を示した（表２）。
【０１３３】
血液学的異常は軽度または中程度であり（グレードＩ〜ＩＩＩ、表２）、その後、ＤＴＩＣ薬剤の単独投与に典型的な、治療サイクル間の底値パターンを示した。熱性好中球減少または他の主要な臨床的血液毒性を経験した患者はいなかった。研究の間に、輸血を必要とするグレードＩＩ〜ＩＩＩの貧血が２人の患者に観察されたが、貧血はベースラインにおいてこれらの同一の患者に存在し、これ以前の治療に原因があると考えられる。グレードＩＩ〜ＩＩＩのリンパ球減少が広く観察されたが、何人かの患者においてサイクルを１年以上繰り返したにも関わらず、異常なウイルス感染もしくは真菌感染、または他の免疫抑制の臨床的な証拠などの臨床的な続発症はなかった。３人の患者において、一時的なグレードＩＩ〜ＩＩＩの部分トロンボプラスチン時間延長が観察されたが、臨床的な出血はなかった。
【０１３４】
非血液学的有害事象を表２の下の方に挙げた。４．１ｍｇ／ｋｇ／日より高用量のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーは、ほとんどの患者において一時的な発熱を伴った。この熱は通常、治療の第２日〜第３日に３８℃に達し、自然に下がるか、アンチセンスオリゴマーの投与を続けながらアセトアミノフェンを投与することにより下がるかのいずれかであった。４．１〜６．５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量レベルにおいて、４人の患者において、一時的なグレードＩＩ〜ＩＩＩのトランスアミナーゼおよび／またはビリルビンの上昇が観察された。しかしながら、そのうち二人の患者はそれぞれ肝炎およびアルコール中毒を有しており、また一時的な肝機能の異常は、同様の実験的変化をもたらすこともあるＤＴＩＣの後に観察されるので、これとＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの因果関係が全ての患者において確立されたわけではなかった。肝機能の異常は通常は治療サイクル間の１週間のうちに解消したので、臨床的に重大または用量制限性のものであるとはみなされなかった。皮膚科的な有害事象には、一時的な発疹およびじんま疹が含まれ、１人の患者以外は全員がグレードＩであったが、この１人の患者は一時的にグレードＩＩのじんま疹を経験した。これらの皮膚科的反応は抗ヒスタミン薬に対して応答したものであり、次の治療を妨げなかった。累積的な毒性は観察されなかった。何人かの患者には、計画した治療計画を変更する必要なく１０回の治療サイクルまで治療をおこなった。
【０１３５】
毒性はこの用量漸増試験の主な終了点であったが、第ＩＶ期のメラノーマを有する１４人の患者のうち６人（４３％、表１）において抗腫瘍活性が明らかになった。この中には、全身性メラノーマ治療の失敗の後に本研究に参加した１２人の患者に見られた反応が含まれる。１年以上続く疾病の長期安定化が得られた１ＣＲ、２ＰＲ、および２ＭＲを記録した（表１）。また、研究に参加する前には明らかに進行性であった疾病の安定化が得られた別の２人の患者において、臨床的抗腫瘍活性が観察された。ベースラインにおいて骨盤のリンパ節および以前の皮膚移植の部位に、５ｃｍを上回る測定値を示す大きな転移疾病を有していた患者１２は、２サイクルの後に迅速な応答を示し、４サイクルの後に完全応答を示した（表１、図３）。４サイクルの治療の後、以前には新生物について陽性であった皮膚領域の生検で、メラノーマを示さず線維症のみを示した（病理学的な完全応答）。患者２および３は標的病変の部分応答を示し、進行せずに１年以上続く生存期間を有した。この研究に参加した時点では、患者２および３は、カルボプラチンとインターフェロン（患者２）、およびＤＴＩＣとＩＬ−２（患者３）による先行治療にも関わらず、進行性の転移を有していた。ＤＴＩＣ ＋ インターフェロンまたはインターフェロン単独を用いた全身治療にも関わらず進行性の転移性疾病を有する患者５および９はどちらも、本研究に参加して、ＢＣＬ−２アンチセンス ＋ ＤＴＩＣによる治療でマイナー応答を示した。算出された生存期間のメジアンは、全ての患者において少なくとも１年を超える。
【０１３６】
６．３ 結論
この報告は、癌患者における、化学療法と併用したアンチセンス薬による治療の安全性および実現可能性を証明するものである。ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー治療は良好な耐容性を有し、腫瘍内の標的タンパク質を減少させ、アポトーシスを促進し、他の治療が失敗した後に本研究に参加した患者においても生存期間の延長を伴う目的の腫瘍応答をもたらした（表１）。
【０１３７】
本研究の第１の目的は、ＤＴＩＣ治療と併用したＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの毒性を決定することであった。非血液学的副作用に関しては（表２）、ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの３．１ｍｇ／ｋｇ／日以下の用量レベルでは、ＤＴＩＣ剤単独による治療において報告されているもの以外にはこの研究において副作用は観察されなかった。ＤＴＩＣと併用した４．１ｍｇ／ｋｇ／日以上のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー用量では、一時的なグレードＩＩ〜ＩＩＩのトランスアミナーゼおよび／またはビリルビンの上昇が観察された（表２）。この研究において、肝機能の異常は、用量制限性でも有害な臨床的な続発症を伴うものでもなかった。１日あたり５．３ｍｇ／ｋｇ以上のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマー用量で、αＰＴＴの非用量制限性の変化が観察された。
【０１３８】
リンパ球減少もまた、この研究で最も頻繁に観察された血液学的副作用であった。リンパ球減少は臨床的に顕著ではなく、サイクル治療をおこない、これを１年以上続けた患者において異常な感染は起こらなかった。これに対して、複数種類のホスホロチオエートアンチセンス薬により相当レベルの血小板減少が観察されており、この毒性はＮＨＬを有する患者におけるＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの研究において用量制限性であった（Ｗａｔｅｒｓら、２０００， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １８（９）：１８１２−２３）。この研究は、ＤＴＩＣ投与後の一時的な骨髄抑制をもたらす化学療法と、ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーを併用するものであり、また、安定状態における血漿レベルはＮＨＬの研究において報告されたものを上回っていたにも関わらず、我々は用量制限性の血小板減少を観察しなかった。まとめると、この患者の群においては、ＤＴＩＣとＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの間には重複するかまたは累積する用量制限毒性はいずれも観察されなかった。
【０１３９】
我々のデータは、生物学的に適切な安定状態の血漿レベル（＞１μｇ／ｍｌ）は、約２ｍｇ／ｋｇ／日のＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーの用量により容易に達成できること、およびＤＴＩＣ化学療法との併用しても最大耐容量には達しなかったことを示している。
【０１４０】
この試験において研究された治療計画についての最近の追加試験において、拡張したコホート（５人の患者）に対して、ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーを５日間にわたり注入により静脈内投与（７ｍｇ／ｋｇ／日）した後に１０００ｍｇ／ｍ^２のＤＴＩＣを投与することを、２１日毎のサイクルで行なったところ、良好な耐容性が示された。
【０１４１】
したがって、本試験の結果は、ＢＣＬ−２アンチセンスオリゴマーは、臨床状況において癌を治療するために抗癌薬と併用して安全に投与することができることを示している。上記の結果は、連続的皮下注入のみによって実施した１４日間の注入による生物活性および臨床応答を示している先に公表されたデータ（Ｗａｔｅｒｓら、２０００， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １８（９）：１８１２−２３）とは異なっている。というのも、本明細書に記載された結果は、複数の経路（静脈内注入、１日に複数回の皮下注射）および５〜７日間のより短い投与計画によってもＧ３１３９の生物活性および臨床応答をもたらすことができることを示しているからである。応答患者において、最初の抗腫瘍活性が２〜３サイクルのうちに迅速に見られた。大部分の患者は、ＤＴＩＣを含む治療計画の失敗の後に、または転移メラノーマの他の標準的な治療の後に、進行性の転移性疾病を有している状態で研究に参加した。それにも関わらず、１４人の患者のうち６人に抗腫瘍応答が見られ（４３％）、さらに別の２人の患者では疾病の安定化が観察された。算出された全ての患者における生存期間のメジアンは１２か月を超えた。これらの最初の結果は、第一選択される全身治療の失敗の後に進行したメラノーマを有する患者に観察されるごくわずかな応答率および約４〜５か月という生存期間のメジアンと比較して好ましいものである。
【０１４２】
【表１】

【０１４３】
【表２】

【０１４４】
７． 実施例２：ホルモン抵抗性前立腺癌の患者における Ｇ３１３９ （ ｂｃｌ−２ アンチセンスオリゴヌクレオチド）およびドセタキセルの第 Ｉ 相試験、薬物動態および生物相関研究
この実施例は、アンドロゲン除去療法および細胞傷害性化学療法に抵抗性であるホルモン抵抗性前立腺癌の患者の治療のための、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの成功裡の使用を示す。ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーは５〜７ｍｇ／ｋｇ／日で５日間、化学薬と組み合わせて全身投与した。この研究の結果として、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーと化学薬により治療された２人の患者が、その治療に応答を示したことを報告する。この実施例において報告された知見は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーが高用量で短期間投与された場合、この治療が目的の臨床応答を示す一方で、低い毒性を示すことを示している。この研究において概要を示した手法は、他のタイプの癌を治療するために広く適用できる方法論を提供する。
【０１４５】
７．１ 材料および方法
この研究において、治療サイクルあたり５日間、該サイクルの第１日〜第６日に連続静脈内注入によりＧ３１３９を投与した後、第６日にドセタキセルを静脈内投与した。このコースを２１日ごとに繰り返した。ホルモン抵抗性前立腺癌を有する１１人の患者が、５ｍｇ／ｋｇ／日のＧ３１３９とともに６０ｍｇ／ｍ^２のドセタキセル 〜 ７ｍｇ／ｋｇ／日のＧ３１３９の後に７５ｍｇ／ｍ^２のドセタキセルの範囲の、３つの用量レベルで治療を受けた。
【０１４６】
７．２ 結果
主な毒性はドセタキセル単独の場合と同様であった。たくさんの先行治療を受けていた１人の患者が、長引いた（＞５日）合併症のないグレード４の好中球減少をおこした。他の毒性としては、３人の患者におけるグレード１の口内炎、および１人の患者の第２コースにおける熱性好中球減少が含まれる。予備的な薬物動態試験の結果（ＨＰＬＣ）は、安定状態のＧ３１３９平均血漿濃度は５ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで３．０９μｇ／ｍｌであることを示す。予備的なフローサイトメトリーおよびウエスタンブロット分析は、ドセタキセル治療の前に、末梢血単核細胞において第６日までに５０％を上回るＢｃｌ−２タンパク質のダウンレギュレーションを示した。前立腺特異的抗原の１／９への減少がサイクルよりも長期にわたって続くことを含む、前立腺特異的抗原および症候性応答が、評価可能なタキサン未経験の患者３人のうち２人において観察された。
【０１４７】
７．３ 結論
Ｇ３１３９はドセタキセルと併用して安全に投与することができ、これらの結果が示すように、この併用は癌の治療に顕著な治療効果を有する。この結果は、連続的な皮下注入のみによって実施した１４日間の注入による生物活性および臨床応答を示している先に公表されたデータ（Ｗａｔｅｒｓら、２０００， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １８（９）：１８１２−２３）とは異なっている。というのも、本明細書に記載された結果は、別の経路（静脈内）により実施した短い投与スケジュール（５日間）もまたＧ３１３９の生物活性および臨床応答をもたらすことができることを示しているからである。Ｇ３１３９治療は、末梢血単核細胞におけるＢｃｌ−２タンパク質の効果的なダウンレギュレーションにより証明されるように、５日以内の投与で生物学的活性を示し、ホルモン抵抗性前立腺癌の患者において希望を与える予備的な抗腫瘍活性を有する。
【０１４８】
８． 実施例３：難治性または再発急性白血病における、 ｂｃｌ−２ アンチセンス、 ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ ^ＴＭ （Ｇ３１３９） の第 Ｉ 相試験
この実施例は、急性白血病の患者の治療のためのｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーの成功裡の使用を示す。ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを４ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間、２種の化学薬と併用して全身投与した。この研究は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよび化学薬により治療された１０人の患者のうち５人がこの治療に対する応答を示したことを報告する。さらに、応答は、フルダラビンおよびシトシンアラビノシドを白血病または他の癌の治療のために通常使用される標準的な用量よりも低い用量で投与された患者にも観察された。この実施例において報告される知見は、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーを短期間投与した場合に目的の臨床応答を得ることができることを示している。
【０１４９】
８．１． 材料および方法
Ｇ３１３９ （４ｍｇ／ｋｇ／日）を治療サイクルの第１日〜第１０日まで患者（総計１０人）に与える一方、フルダラビン（１５ｍｇ／ｍ^２の低減した用量から開始）、シトシンアラビノシド （Ａｒａ−Ｃ）（１０００ｍｇ／ｍ^２の低減した用量から開始）およびＧ−ＣＳＦ （ＦＬＡＧ） を治療サイクルの第６日〜第１０日に与え、その後連続的コホートにおいて用量を増加させた。通常のＦＬＡＧ併用療法は、この試験に用いられた用量よりも２倍高い用量のフルダラビンおよびＡｒａ−Ｃを含む。
【０１５０】
【表３】

【０１５１】
８．２． 結果
治療に関連した熱、悪心、嘔吐、低カルシウム血症、低リン酸血症、および体液うっ滞は用量制限性ではなかった。血液毒性は予想されたものであった。適切な目標レベル（１μｇ／ｍｌ）を超える安定状態のＧ３１３９血漿レベルが２４時間後に達成された。３人の患者が完全応答を達成し、治療の第２コースを受けた。２人は治療を継続し、第５３日および第１１１日には疾病の徴候がない状態であった。２人の患者は、第５２日および第５５日に、疾病の徴候はなかったが、持続的な好中球減少／血小板減少がみとめられた。このうち１人は治療を継続し、第７６日には疾病の徴候がない状態であった。５人の応答患者のうち３人は、高用量Ａｒａ−Ｃによる先行治療を受けているので、この研究において記載された別のＡｒａ−Ｃ併用プログラム、特に先行治療の治療計画で用いられたものよりも低い用量を用いたプログラムに対して際立った応答が示されたことは予想外であった。
【０１５２】
８．３． 結論
上記の結果は、Ｇ３１３９が、急性白血病のための複数サイクル誘導治療計画に対して付加するのに好適であることを示している。このＧ３１３９を含めた治療計画は、本研究において、難治性急性白血病を有する患者および高用量Ａｒａ−Ｃによる先行治療を含めて、５０％の応答率を示した。際立った応答が、ｂｃｌ−２アンチセンス治療計画と併用した場合に、通常よりも低い用量レベルのフルダラビンおよびＡｒａ−Ｃを用いても観察された。
【０１５３】
本明細書において引用した全ての参照文献を特に、本明細書に完全に記載されているものと同様に、参照により本明細書に組み入れる。
【０１５４】
上に開示した本発明の実施形態の例示をもって、当業者はこの開示が単なる例であって、さまざまな代替形態、適合、および改変は本発明の範囲内にあり、出願人の意図するところであることを理解するであろう。したがって、本発明は上に記載した特定の実施形態に限定されず、特許請求の範囲によって定義されるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
患者＃１２のメラノーマ生検における、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーによる５日間の治療の後のｂｃｌ−２ダウンレギュレーション。
【図２】
治療前（ａ）、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマー治療後（ｂ）、およびｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよびＤＴＩＣ治療の後の、患者＃１２（右足）の腫瘍生検のＴＵＮＥＬ染色。
【図３】
３サイクルの６．５ｍｇ／ｋｇ／日のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴマーおよびＤＴＩＣ治療の前および後の、患者＃１２の皮膚転移（ａ）および骨盤領域のＣＴ−スキャン（ｂ）。

Claims (33)

1. 癌の治療または予防が望まれるヒトに、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドを、０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、２から１３日からなる期間の治療サイクルで１サイクル以上投与すること含む、ヒトの癌を治療または予防する方法。
2. ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドが３から９日からなる期間投与される、請求項１記載の方法。
3. ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドが４から７日からなる期間投与される、請求項１記載の方法。
4. ４から９ｍｇ／ｋｇ／日のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与すること含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. ５から７ｍｇ／ｋｇ／日のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与すること含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
6. さらに１以上の癌治療薬を投与すること含む、請求項１記載の方法。
7. 癌治療薬の投与が、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の後におこなわれる、請求項６記載の方法。
8. 癌治療薬の投与が、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の前におこなわれる、請求項６記載の方法。
9. 癌治療薬がｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドと同時に投与される、請求項６記載の方法。
10. 上記の癌治療薬が化学薬剤剤、放射線療法、免疫療法、癌ワクチン、抗血管新成薬、サイトカイン、遺伝子治療、またはホルモン剤である、請求項６記載の方法。
11. 上記の癌治療薬が化学薬剤剤であって、上記の化学薬剤がダカルバジン、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、フルダラビン、イリノテカンまたはシトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）である、請求項１０記載の方法。
12. 上記の癌治療薬が軽減された用量で投与される、請求項６または請求項１０記載の方法。
13. 上記の投与が、経口、静脈内注入、皮下注射、筋内注射、局所、デポ注射、植え込み、時間放出方式、空洞内、鼻内、吸入、腫瘍内または眼内投与によるものである、請求項１〜３および６のいずれか１項に記載の方法。
14. 上記の癌が、造血系、皮膚、骨および軟組織、生殖系、尿生殖器系、乳、内分泌系、脳、中枢神経系、末梢神経系、腎臓、肺、呼吸器系、胸郭、胃腸および消化管、リンパ管、膵臓、肝胆管系の癌、または原発部位が不明の癌である、請求項１〜３および６のいずれか１項記載の方法。
15. 上記の癌が、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、子宮頚癌、睾丸癌、肺癌、膀胱癌、メラノーマ、頭頚部癌または脳腫瘍である、請求項１−３または６のいずれか１項記載の方法。
16. アンチセンスオリゴヌクレオチドが１０から３５塩基であり、ｂｃｌ−２遺伝子をコードするｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡに相補的である、請求項１〜３および６のいずれか１項記載の方法。
17. アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも２つのホスホロチオエート結合含む、請求項１６記載の方法。
18. アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ（配列番号１７） 含む、請求項１７記載の方法。
19. 癌の治療または予防が望まれるヒトに、１以上の化学薬剤および０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドを、１サイクル以上の治療サイクルで投与することからなり、上記の化学薬剤がダカルバジン、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、フルダラビン、イリノテカンまたはシトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）であって、化学薬剤が軽減された用量で投与される、ヒトの癌を治療または予防する方法。
20. 上記の癌治療薬がパクリタキセルであって、上記の用量が１０から１３５ｍｇ／ｍ^２／サイクルである、請求項１９記載の方法。
21. 上記の癌治療薬がドセタキセルであって、上記の用量が６から６０ｍｇ／ｍ^２／サイクルである、請求項１９記載の方法。
22. 上記の癌治療薬がフルダラビンであって、上記の用量が２．５から２５ｍｇ／ｍ^２／サイクルである、請求項１９記載の方法。
23. 上記の癌治療薬がイリノテカンであって、上記の用量が５から５０ｍｇ／ｍ^２／サイクルである、請求項１９記載の方法。
24. ０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド、および製薬上許容される担体含む医薬組成物。
25. １０から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド、および製薬上許容される担体含む医薬組成物。
26. アンチセンスオリゴヌクレオチドが、１０から３５塩基であり、ｂｃｌ−２遺伝子をコードするｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡに相補的である、請求項２４または請求項２５記載の医薬組成物。
27. アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも２つのホスホロチオエート結合含む、請求項２６記載の医薬組成物。
28. アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ（配列番号１７）含む、請求項２７記載の医薬組成物。
29. ０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド、これと併用する軽減した用量の癌治療薬、および製薬上許容される担体を含み、上記の癌治療薬がダカルバジン、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、フルダラビン、イリノテカンまたはシトシンアラビノシド （Ａｒａ−Ｃ） である医薬組成物。
30. １０から５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド、これと併用する軽減した用量の癌治療薬、および製薬上許容される担体を含み、上記の癌治療薬がダカルバジン、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、エトポシド、シクロホスファミド、フルダラビン、イリノテカンまたはシトシンアラビノシド （Ａｒａ−Ｃ） である医薬組成物。
31. アンチセンスオリゴヌクレオチドが、１０から３５塩基であり、ｂｃｌ−２遺伝子をコードするｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡに相補的である、請求項２９または請求項３０記載の医薬組成物。
32. アンチセンスオリゴヌクレオチドが少なくとも２つのホスホロチオエート結合含む、請求項３１記載の医薬組成物。
33. アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ（配列番号１７）含む、請求項３２記載の医薬組成物。

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