EA005424B1 - СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ СВЯЗАННОГО С bcl-2 НАРУШЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ bcl-2-АНТИСМЫСЛОВЫХ ОЛИГОМЕРОВ - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к применению bcl-2-антисмысловых олигомеров для лечения и профилактики нарушений, связанных с bcl-2. Данные нарушения включают рак, опухоли, карциномы и нарушения, связанные с клеточной пролиферацией. В одном из вариантов осуществления изобретения bcl-2-антисмысловой олигомер вводят в больших дозах. Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения нарушения, связанного с bcl-2, в частности рака, включающему введение bcl-2-антисмыслового олигомера в течение кратких периодов времени. Настоящее изобретение, кроме того, относится к применению bcl-2-антисмысловых олигомеров для повышения чувствительности субъекта к противоопухолевой терапии. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим один или более bcl-2-антисмысловых олигомеров, которые могут включать одно или более противоопухолевых терапевтических средств.

Description

1. Введение

Настоящее изобретение относится к применению Ьс1-2-антисмысловых олигомеров для лечения и профилактики нарушений, связанных с Ьс1-2. Данные нарушения включают рак, опухоли, карциномы и нарушения, связанные с клеточной пролиферацией. В одном из вариантов осуществления изобретения в больших дозах вводят Ьс1-2-антисмысловой олигомер. Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения нарушения, связанного с Ьс1-2, в частности злокачественной опухоли, включающему введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера в течение коротких периодов времени. Настоящее изобретение, кроме того, относится к применению Ьс1-2-антисмысловых олигомеров для повышения чувствительности субъекта к противоопухолевой терапии. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим один или более Ьс1-2-антисмысловых олигомеров, которые могут включать одно или более противоопухолевых терапевтических средств.

2. Предпосылки создания изобретения

Традиционные подходы к лечению злокачественных опухолей являются недостаточно специфичными. Большинство разработанных лекарственных средств представляют собой природные продукты или производные, которые блокируют ферментные пути или случайным образом взаимодействуют с ДНК. Более того, применение многих противораковых лекарственных средств сопровождается существенной токсичностью, ограничивающей дозу, вследствие их низких терапевтических индексов. Например, большинство противоопухолевых лекарственных средств при введении пациенту приводят не только к гибели раковых клеток, но и также к гибели нераковых клеток. Из-за наличия таких вредных эффектов возникает необходимость в способах лечения, которые более специфично воздействуют на раковые клетки.

Обнаружено, что класс генов, онкогены, участвуют в трансформации клеток и в поддержании ракового состояния. Примечательно, что нарушение транскрипции данных генов или ингибирование действия их белковых продуктов другим способом может приводить к благоприятному терапевтическому результату. Роль онкогенов в этиологии многих типов рака у человека раскрыта в ВЫюр. 1987, Се11и1аг Опсодепез аий Ке(гоу1гизез, 8с1еисе, 235: 305-311. Во многих типах рака человека сверхэкспрессируется ген, называемый Ьс1-2 (В-клеточная лимфома/лейкоз-2), и такая сверхэкспрессия может быть ассоциирована с опухолеобразованием (Тзирто(о е1 а1., 1985, 1пуо1уешеп( о£ (Не Ьс1-2 депе ίη Нитап 1оШси1аг 1утрНота, 8с1епсе 228: 1440-1443). Считается, что ген Ьс1-2 участвует в патогенезе рака, а также резистентности к лечению, главным образом, путем пролонгирования уровня выживаемости клеток, а не путем ускорения клеточного деления.

Ген Ьс1-2 человека участвует в этиологии некоторых лейкозов, лимфоидных опухолей, лимфом, нейропластом и карцином носоглотки, предстательной железы, молочной железы и толстого кишечника (Сгосе е( а1., 1987, Мо1еси1аг Ваз1з О£ Нитап В апй Т Се11 №ор1аз1а, ίη: Лйуапсе ίη У1га1 Опсо1оду, 7: 3551, С. К1еш (ей.), Иете Уогк: Рауеп Ргезз; Кеей е( а1., 1991, 0|ГГегепЦа1 ехргеззюп о£ Ьс1-2 рго(оопсодепе ш пепгоЫаз(ота апй о(Нег Нитап (итог се11 1шез оГ пеига1 опдш, Сапсег Кез. 51: 6529-38; Уитз е( а1., 1989, Ьс1-2 апй о(Нег депотк а1(ега11оп5 ш (Не ргодпоз1з оГ 1агде-се11 1утрНотаз, N. Епд1. 1. Мей. 320: 1047-54; Сатроз е( а1., 1993, ШдН ехргеззюп оГ Ьс1-2 рго(еш ш аси(е туе1о1й 1еикет1а 1з аззоаа(ей \νί(1ι роог гезропзе (о сНето(Негару, В1оой 81: 3091-6; МсЭоппеН е( а1., 1992, Ехргеззюп оГ (Не рго(оопсодепе Ьс1-2 апй 1(з аззошайоп \νί(1ι етегдепсе оГ апйгодеп-шйерепйеп( ргоз(а(е сапсег, Сапсег Кез. 52: 6940-4; Ьи е( а1., 1993, «Ьс1-2 рго(оопсодепе ехргеззюп ш Ерз(еш Вагг У1гиз-Аззоаа(ей №1зорНагупдеа1 Сагсшота, 1п(. 1. Сапсег 53: 29-35; Воппег е( а1., 1993, Ьс1-2 рго(оопсодепе апй (Не даз(гош(езйпа1 тисоза1 ерйНе11а1 (итог ргодгеззюп тойе1 аз ге1а(ей (о ргорозей тогрНокдк апй то1еси1аг зецпепсез, ЬаЬ. 1пуез(. 68: 43А). Обнаружено, что Ьс1-2 сверхэкспрессируется в различных опухолях, включая неходжкинскую лимфому, рак легких, рак молочной железы, рак ободочной и прямой кишки, рак предстательной железы, рак почки и острые и хронические лейкозы (Кеей, 1995, Кеди1а(юп оГ арор(оз1з Ьу Ьс1-2 Гатйу рго(ешз апй 1(з го1е ш сапсег апй сНетогез1з(апсе, Сигг. Орш. Опсо1. 7: 541-6).

Антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой потенциальные терапевтические средства для специфического нарушения функции онкогена. Данные короткие (обычно длиной менее 30 оснований) одноцепочечные синтетические молекулы ДНК характеризуются последовательностью, комплементарной участкам пре-мРНК или мРНК гена-мишени, и формируют гибридный дуплекс за счет объединения оснований в пары водородными связями. Данная гибридизация может нарушать экспрессию как мРНК-мишени, так и кодируемого ею белка и, таким образом, может препятствовать последующим взаимодействиям и передаче сигнала. Поскольку одна молекула мРНК определяет получение множества копий белка, ингибирование мРНК может быть более эффективным и более специфичным, нежели вызываемое нарушение на белковом уровне, например, осуществляемое путем ингибирования активного центра фермента.

Синтетические олигонуклеотиды, комплементарные мРНК онкогена с-тус применяли для специфического ингибирования продукции белка с-тус, предотвращая таким образом рост клеток лейкоза человека ш уйго (Но1( е( а1., 1988, Мо1. Се11 Вю1. 8: 963-73; \Уккз(гот е( а1., 1988, Ргос. №(1. Асай. 8сг И8А, 85: 1028-32). Олигонуклеотиды также применяли в качестве специфических ингибиторов ретровирусов,

- 1 005424 включая вирус иммунодефицита человека (2атесшк аиб 81ерйеикои, 1978, Ргос. №11. Леаб. 8с1. И8Л, 75: 280-4; 2атеси1к е1 а1., 1986, Ргос. №11. Асаб. 8ск И8А, 83: 4143-6).

Показано, что применение антисмысловых олигонуклеотидов с их способностью нацеливаться на и ингибировать отдельные гены, относящиеся к раку, являются перспективными в преклинических моделях рака. Показано, что данные антисмысловые олигомеры на основе фосфоротиоата способны ингибировать экспрессию Ьс1-2 ίη νίΐτο и подавлять опухоли в мышиных моделях с ксенотрансплантатами лимфомы. Резистентность некоторых злокачественных опухолей к химиотерапии связывают с экспрессией онкогена Ьс1-2 (Сго\^гег е1 а1., 1996, Вс1-2 ехртеккюи ίη тайдиаШ те1аиота аиб йк ргодиокйс йщйПсапсе. Еиг. 1. 8итд. Оисо1. 22 (4): 347-9). Введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера может избирательно снижать уровни белка Ьс1-2 в ксенотрансплантатах опухоли у лабораторных мышей (1аикеи е1 а1., 1998, «Ьс12 аийкеике 1йетару сйетокеикШ/ек йитаи те1аиота ш 8СГО пйсе, №1. Меб. 4 (2): 2324). Более того, введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера лабораторным мышам может приводить к повышению чувствительности ксенотрансплантатов опухоли к химиотерапевтическим средствам (1аикеи е1 а1., 1998, «Ьс1-2 аийкеике 1йетару сйетокеикШхек йитаи те1аиота ш 8СГО пйсе, №1. Меб. 4 (2): 232-4). У мышей системное лечение Ьс1-2-антисмысловым олигомером снижало количество белка Ьс1-2 и усиливало апоптоз. Лечение только Ьс1-2-антисмысловым олигомером характеризовалось умеренной противоопухолевой активностью, однако, повышенная противоопухолевая активность наблюдается при его сочетании с ЭНС (также известным как дакарбазин). У десяти из тринадцати животных после введения Ьс1-2антисмыслового олигомера в сочетании с лечением ΩΤΙΟ не детектировалось злокачественных ксенотрансплантатов меланомы. Остается острая необходимость в расширении таких противоопухолевых способов лечения для борьбы с раком человека.

Для многих пациентов с раком прогноз является неутешительным, несмотря на возрастающую доступность биологической, лекарственной и комбинаторной терапии. Например, несмотря на то, что ΌΤΙΟ обычно используется для лечения метастазирующих меланом, у немногих пациентов развивалось долгосрочное улучшение. Более того расширенные клинические испытания ΙΙΙ фазы не продемонстрировали улучшения выживаемости при использовании ΌΤΙΟ в сочетании с цисплатином, кармустином и тамоксифеном (Сйартаи е1 а1., 1999, Рйаке III тиЙюеШет таибопи/еб 1г1а1 о£ 1йе Оаг1тои1й гещтеи \^гегкик басагйа/ше ш райеи1к \\йй те1ак1айс те1аиота, 1. Сйи. Оисо1. 17 (9): 2745-51). Такие серьезные недостатки при лечении рака подчеркивают необходимость в новых подходах к лечению.

3. Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим Ьс1-2антисмысловые олигомеры, и способам лечения связанных с Ьс1-2 нарушений. Изобретение частично основано на обнаружении авторами изобретения того, что введение пациентам в больших дозах Ьс1-2антисмыслового олигомера для лечения связанного с Ьс1-2 нарушения, в частности рака, приводит к значимым терапевтическим реакциям, включая низкую токсичность, высокую переносимость и улучшение выживаемости. Авторами изобретения также обнаружено, что введение пациентам в больших дозах Ьс12-антисмысловых олигомеров в течение короткого периода времени, т.е. менее 14 дней, также приводит к значимым терапевтическим реакциям при лечении рака у пациентов. Данные терапевтические режимы, дополнительно, включали введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера в больших дозах в короткие промежутки времени в сочетании с одним или более противораковыми лекарственными средствами. Неожиданно введение сниженной дозы одного или более противораковых лекарственных средств в сочетании с краткосрочным введением Ьс1-2-антисмыслового олигомера также демонстрировало значимые терапевтические реакции при лечении пациентов со злокачественными опухолями. Так, терапевтические режимы по настоящему изобретению предоставляют терапевтически эффективный способ лечения рака, характеризующийся сниженной продолжительностью и токсичностью, и, как результат, повышенной переносимостью.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения связанного с Ьс1-2 нарушения и к фармацевтической композиции в форме дозированных единиц, включающей большие дозы Ьс1-2-антисмыслового олигомера, так что эффективным количеством Ьс1-2антисмыслового олигомера в указанной фармацевтической композиции является эффективная доза, примерно равная 10-50 мг/кг/сут. В соответствии с данным осуществлением изобретения эффективным количеством Ьс1-2-антисмыслового олигомера в указанной фармацевтической композиции является доза, эффективная для достижения уровня Ьс1-2-антисмыслового олигомера в кровотоке не менее 30 нМ (наномолей). В одном из вариантов осуществления уровень Ьс1-2-антисмыслового олигомера в кровотоке составляет 1-10 мкМ (микромолей). В другом варианте осуществления требуемый уровень Ьс1-2антисмыслового олигомера в кровотоке, равный по крайней мере 30 нМ, достигается примерно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 ч после введения Ьс1-2-антисмыслового олигомера. В другом варианте осуществления уровень Ьс1-2-антисмыслового олигомера в кровотоке, равный по крайней мере 30 нМ, достигается примерно через 36-48 ч, предпочтительно через 24-35 ч, более предпочтительно через 12-24 ч; наиболее предпочтительно ранее 12 ч.

Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения связанного с Ьс1-2 нарушения и к фармацевтической композиции, включающей дозу Ьс1-2-антисмыслового оли- 2 005424 гомера, подлежащую введению в течение короткого периода времени, т.е. менее 14 дней, так что эффективное количество Ье1-2-антисмыслового олигомера, подлежащего введению в течение такого кратковременного цикла лечения, изменяется примерно от 0,01 до 50 мг/кг/сут. В другом варианте осуществления эффективным количеством Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащим доставке в течение такого кратковременного цикла лечения, является доза, эффективная для достижения уровня Ьс1-2антисмыслового олигомера в кровотоке не менее 30 нМ. В другом варианте осуществления уровень Ьс12-антисмыслового олигомера в кровотоке составляет 1-10 мкМ (микромолей).

Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения связанного с Ьс1-2 нарушения и к фармацевтической композиции, включающей дозу Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащую введению в течение короткого периода времени, т. е. менее 14 дней, в сочетании с одним или более противораковыми лекарственными средствами, причем указанное противораковое лекарственное средство вводят перед, после или одновременно с Ьс1-2-антисмысловым олигомером. Эффективное количество Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащее введению во время осуществления такого краткого протокола лечения изменяется примерно от 0,01 до 50 мг/кг/сут. Эффективное количество противоракового лекарственного средства, подлежащее введению в сочетании с Ьс1-2-антисмысловым олигомером, может вводиться в стандартной дозе, или, альтернативно может вводиться в пониженной дозе. В соответствии с данным вариантом осуществления изобретения эффективным количеством Ьс1-2антисмыслового олигомера в указанной фармацевтической композиции является доза, эффективная для достижения уровня Ьс1-2-антисмыслового олигомера в кровотоке, равного по крайней мере 30 нМ. В конкретном варианте осуществления уровень Ьс1-2-антисмыслового олигомера в кровотоке достигается примерно через 36-48 ч, предпочтительно через 24-35 ч, наиболее предпочтительно примерно через 24 ч.

По настоящему изобретению связанное с Ьс1-2 нарушение включает опухоли, рак, карциномы и нарушения, связанные с пролиферацией клеток.

По настоящему изобретению краткосрочный период включает период времени для введения Ьс1-2антисмыслового олигомера, который составляет менее 14 дней в диапазоне от 2 до 13 дней, предпочтительно в диапазоне от 3 до 9 дней, от 4 до 7 дней или от 5 до 6 дней.

По настоящему изобретению доза Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащая введению в течение краткосрочного периода, изменяется в диапазоне от 0,01 до 50 мг/кг/сутки, предпочтительно составляет от 4 до 9 мг/кг/сутки и более предпочтительно составляет от 5 до 7 мг/кг/сут.

Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, включающие эффективное количество одного или более Ьс1-2-антисмысловых олигомеров, подлежащие введению в соответствии со способами по настоящему изобретению. Указанные фармацевтические композиции включают дозу Ьс1-2антисмыслового олигомера в диапазоне от 0,01 до 50 мг/кг/сутки, предпочтительно составляющую от 4 до 9 мг/кг/сутки и более предпочтительно составляющую от 5 до 7 мг/кг/сут, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. В другом варианте осуществления фармацевтические композиции по настоящему изобретению также включают одно или более дополнительных противораковых лекарственных средств. Указанные фармацевтические композиции составляются для доставки в виде длительной инфузии, или в виде одного или более болюсных введений, или в один или более приемов введения в течение протокола лечения.

Согласно настоящему изобретению фармацевтические композиции по настоящему изобретению, включающие Ьс1-2-антисмысловой олигомер, могут вводиться отдельно от фармацевтических композиций, включающих противораковые лекарственные средства.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут более понятны при ссылке на следующие фигуры и подробное описание.

3.1. Определения

Используемое здесь выражение «связанное с Ьс1-2 нарушение» относится к заболеванию, в котором участвует регуляция гена Ьс1-2, и включает в качестве неограничивающих примеров заболевания с участием клеток, экспрессирующих ген Ьс1-2. Такое нарушение включает заболевания с участием клеток или тканей, которые экспрессируют ген Ьс1-2 или ген, связанный с Ьс1-2, или заболевания с участием клеток или тканей, которые больше не экспрессируют ген Ьс1-2, но в норме делают это. Нарушения, связанные с Ьс1, включают в качестве неограничивающих примеров, заболевания, связанные с пролиферацией клеток, и виды патологии клеток или тканей, находящиеся под влиянием клеток, экспрессирующих ген Ьс1-2 или ген, связанный с Ьс1-2.

Используемый здесь термин «рак» относится к патологическому состоянию, при котором канцерогенный агент или агенты вызывают трансформацию здоровой клетки в аномальную клетку, с последующей инвазией прилегающих тканей данными аномальными клетками, с последующим возможным распространением данных аномальных клеток с током крови и лимфы в региональные лимфатические узлы и/или отдаленные места, т. е. метастазирование.

Используемый здесь термин «опухоль» или «рост» означает повышенную массу ткани, которая включает большие количества клеток в результате ускоренного деления клеток и/или замедленной скорости клеточной гибели. Опухоли могут относиться к злокачественным или не злокачественным типам рака.

- 3 005424

Используемое здесь выражение «лечение рака» означает ингибирование репликации раковых клеток, ингибирование распространения, снижение размера опухоли, уменьшение или снижение числа раковых клеток в организме, или улучшение или смягчение симптомов заболевания, обусловленных раком. Лечение считается терапевтическим, если при нем наблюдается снижение смертности и/или заболеваемости, или снижение проявлений тяжести заболевания за счет уменьшения в организме количества злокачественных клеток.

Используемое здесь выражение «профилактика рака» означает предотвращение возникновения или рецидива патологического состояния, вызванного раком. По существу, лечение, препятствующее, ингибирующее или мешающее метастазированию, опухолевому росту или злокачественной пролиферации, обладает профилактической активностью.

Используемое здесь выражение «антисмысловой олигомер» относится к антисмысловому олигонуклеотиду, или его аналогу, или производному и относится к набору химических веществ, которые распознают полинуклеотидную последовательность-мишень путем водородного связывания согласно Уотсону-Крику с нуклеотидными основаниями последовательностей-мишеней. Последовательности-мишени могут представлять собой РНК или ДНК, и могут являться одноцепочечными или двухцепочечными. Молекулы-мишени включают в качестве неограничивающих примеров пре-мРНК, мРНК и ДНК.

Используемое здесь выражение «экспрессия гена Ье1-2» относится к транскрипции гена Ьс1-2, приводящей к продуцированию пре-мРНК Ьс1-2, мРНК Ьс1-2 и/или белка Ьс1-2.

Используемый здесь термин «производное» относится к любому фармацевтически приемлемому гомологу, аналогу или фрагменту, соответствующему фармацевтической композиции по данному изобретению.

Используемое здесь выражение «лекарственное средство» относится к любым молекулам, соединениям или способам лечения, которые используются при лечении заболевания. По существу, противораковое лекарственное средство представляет собой молекулу, соединение или протокол лечения, которые используются при лечении опухолей или рака. Протокол лечения включает в качестве неограничивающих примеров облучение, диетологическую терапию, физиотерапию и психологическую терапию.

Используемое здесь выражение «химическое средство», или «противораковое средство», или «противоопухолевое средство», или «противораковое лекарственное средство» относится к любой молекуле, соединению или способу лечения, которые используются при лечении опухолей или рака.

Используемое здесь выражение «малая доза» или «сниженная доза» относится к дозе, меньшей обычно вводимого интервала, т.е. меньшей стандартной дозы, рекомендуемой Ρΐινκίαηηκ' Иекк РсГсгспсс. 54^4Ь Εάίΐίοη (2000) или сходным источником. Такая доза может быть достаточной для ингибирования клеточной пролиферации, или оказывает на человека благоприятное воздействие, или демонстрирует эффективность с меньшими побочными эффектами по сравнению со стандартными способами лечения рака. Нормальные интервалы доз, применяемые для конкретных терапевтических средств и стандартных способов лечения рака, используемых для конкретных заболеваний, раскрыты, например, в Рйуиаапк' Иекк КеГсгспсе, 54‘^ь Εάίΐίοη (2000) или в Сапссг: Ргшс1р1ск & Ргасбсс оГ Опсо1оду. ИсУйа, 1г., Нс11тап, апб КокспЬсгд (сбк.) 2пб сбФоп, РЫ1абс1рЫа, РА: ί. В. Ырршсой Со., 1985.

Используемое здесь выражение «сниженная токсичность» относится к сниженным побочным эффектам и видам токсичности, наблюдаемым в связи с введением антисмысловых олигонуклеотидов и противораковых средств с уменьшенной длительностью и/или в меньших дозах по сравнению с другими протоколами лечения и дозированными препаратами, включающими стандартные протоколы лечения и дозированные препараты, описанные в Рйукю1апк' Иекк КеГсгспсе, 541Н ЕбШоп (2000) или в Сапссг: Рппс1р1ск & Ргасйсс оГ Опсо1оду, ИсУйа, 1г., Нс11тап, апб КокспЬсгд (сбк.) 2пб сбйюп, РЫ1абс1рЫа, РА: 1. В. Ырршсой Со., 1985.

Используемое здесь выражение «цикл лечения» или «цикл» относится к периоду, в течение которого вводится одно терапевтическое средство или последовательность терапевтических средств. В одном из осуществлений, включающем применение большой дозы Ьс1-2-антисмыслового олигомера в комбинации со стандартной дозой противоракового терапевтического средства, предпочтительный период времени для одного цикла лечения составляет менее 14 суток. По настоящему изобретению рассматривается по крайней мере один цикл лечения, в основном, предпочтительно более одного цикла. В некоторых случаях требуется один цикл лечения, как, например, в случае достижения значимого терапевтического эффекта после одного цикла лечения.

Используемое здесь выражение «фармацевтически приемлемый носитель» относится к среденосителю, которая не препятствует эффективной биологической активности активного ингредиента. Указанная несущая среда является, по существу, инертной химически и нетоксичной.

Используемое здесь выражение «фармацевтически приемлемый» означает одобренный регулирующим учреждением Федерального правительства или правительства государства, или указанный в Фармакопее США или другой общеизвестной фармакопее для применения у животных, или, более конкретно, для применения у людей.

Используемый здесь термин «носитель» относится к растворителю, адъюванту, наполнителю или носителю, с которым вводят лекарственное средство. Такие носители могут представлять собой стериль

- 4 005424 ные жидкости, такие как солевые растворы в воде, или масла, включая масла нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и тому подобные. Солевой раствор представляет собой предпочтительный носитель, где фармацевтическая композиция вводится внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также могут применяться в качестве жидких носителей, в частности, для растворов для инъекции. Подходящие фармацевтические наполнители включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, глицерина моностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и тому подобное. Если требуется, носитель может также содержать малые количества увлажняющего или эмульгирующего средства или средств, буферных в отношении рН. Данные композиции могут принимать форму растворов, суспензий, эмульсии, таблеток, пилюль, капсул, порошков, препаратов замедленного высвобождения и тому подобного. Композиция может быть составлена в виде суппозитория с традиционными связующими веществами и носителями, такими как триглицериды. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны Е. Майш в Кетшдои'к Рйаттасеибса1 8с1еисе5. Примерами подходящих фармацевтических носителей являются различные катионные липиды, включая в качестве неограничивающих примеров N-(1(2,3-диолеилокси)пропил)-М,М,М-триметиламмония хлорид (ΌΟΤΜΆ) и диолеилфосфатидилэтаноламин (ΌΟΡΕ). Липосомы также являются подходящими носителями для антисмысловых олигомеров по изобретению. Такие композиции должны содержать терапевтически эффективное количество соединения вместе с подходящим количеством носителя, так что образуется форма для надлежащего введения пациенту. Препарат должен удовлетворять требованиям способа введения.

Используемое здесь выражение «фармацевтически приемлемые соли» относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых, по существу, нетоксичных кислот и оснований, включая неорганические и органические кислоты и основания. Фармацевтически приемлемые соли включают те, что образованы свободными аминогруппами, такие как те, что происходят из соляной, фосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислотами и т.д. и те, что образованы свободными карбоксильными группами, такие как те, что происходят из гидроксидов натрия, калия, аммония, кальция, железа, изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т. д.

4. Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - сниженная регуляция Ьс1-2 через 5 дней лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером в биоптатах меланомы пациента № 12;

фиг. 2 - окрашивание ΤϋΝΕΕ опухолевых биоптатов пациента № 12 (правая нога) до лечения (а), после лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером (Ь) и после лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером плюс ЭТ1С;

фиг. 3 - метастазы кожи (а) и изображение компьютерной томографии тазовой области (Ь) пациента № 12 до или после трех циклов лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером плюс ЭТ1С в дозе 6,5 мг/кг/сут.

5. Подобное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к композициям и способам для применения Ьс1-2антисмыслового олигомера для лечения или профилактики нарушений, связанных с Ьс1-2, в особенности рака. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим Ьс1-2антисмысловой олигомер, а также к способам для их использования при профилактическом и терапевтическом лечении, включая доставку лекарственного средства и лечебные режимы.

Изобретение частично основано на открытии того, что краткие циклы лечения Ьс1-2антисмысловым олигомером, одним или в комбинации с другими терапевтическими средствами, оказывали на пациентов, страдающих от заболевания, неожиданно сильные эффекты улучшения. Данный краткий лечебный режим имеет дополнительные преимущества для субъекта - человека, такие как удобство, снижение психологической травмы и большая вероятность согласия с проведением данного протокола лечения. Другие открытия включают (1) краткие циклы лечения и сниженные дозы терапевтических средств при использовании в комбинации с Ьс1-2-антисмысловым олигомером, (2) упрощенные способы доставки фармацевтических композиций, включающих по крайней мере один Ьс1-2-антисмысловой олигомер с другими терапевтическими средствами или без них, и (3) клинически значимые лечебные режимы для многих типов рака. Таким образом, обнаружение авторами того, что Ьс1-2-антисмысловой олигомер при введении в течение краткого цикла лечения может вызывать у пациентов с нарушением, связанным с Ьс1-2, значимые терапевтические реакции, предоставляет улучшенные и подходящие для применения фармацевтические композиции, курсы лечения и способы доставки.

Изобретение также частично основано на открытии того, что большие дозы Ьс1-2-антисмыслового олигомера, одного или в комбинации с другими терапевтическими средствами, обладает сниженной токсичностью, включая неожиданно незначительные эффекты по сравнению с большинством стандартных способов лечения рака, и оказывает на пациентов, страдающих от заболевания, эффекты улучшения. Лечебный режим, включающий введение большой дозы Ьс1-2-антисмыслового олигомера, обнаруживает дополнительные преимущества для субъекта человека, такие как укорочение циклов лечения, меньшее число медикаментов или улучшенная эффективность.

- 5 005424

В одном из осуществлений Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят человеку в течение краткого цикла лечения для профилактики или лечения связанного с Ьс1-2 нарушения. Еще в одном осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят человеку в больших дозах для профилактики или лечения связанного с Ьс1-2 нарушения. В дополнение к воздействию на пораженные ткани Ьс1-2-антисмысловой олигомер может защищать или лечить нормальные ткани, включающие ткани, содержащие клетки, в норме экспрессирующие ген Ьс1-2. Кроме того, Ьс1-2-антисмысловой олигомер может защищать или лечить нормальные ткани, которые, хотя и не экспрессируют ген Ьс1-2, подвергаются опасности за счет пораженных тканей.

В конкретном варианте осуществления данное изобретение, кроме того, относится к применению комбинированного лечения для профилактики и лечения связанного с Ьс1-2 нарушения. Такое лечение включает применение одной или более молекул, соединений или способов лечения, которые способствуют профилактике или лечению заболевания. Примеры предполагаемых терапевтических средств включают биологические средства, химические средства и терапевтические способы лечения (например, лечение облучением).

В другом конкретном варианте осуществления изобретение относится к Ьс1-2-антисмысловому олигомеру, который вводят человеку в комбинации с одним или более противораковыми средствами для профилактики или лечения рака. Такие противораковые средства включают одну и более молекул, соединений или способов лечения, обладающих противораковой активностью. Примеры предполагаемых противораковых средств включают биологические средства, химические средства и терапевтические способы лечения (например, лечение облучением).

Еще в одном конкретном варианте осуществления изобретение относится к Ьс1-2-антисмысловому олигомеру, который вводят человеку в комбинации с одним или более противораковыми средствами в сниженных дозах для профилактики или лечения рака. Такие способы лечения могут включать большие, стандартные или малые дозы одного или более Ьс1-2-антисмысловых олигомеров, причем циклы лечения могут быть большой или малой длительности. В конкретном варианте осуществления данное изобретение относится к особенно большой дозе Ьс1-2-антисмыслового олигомера, который вводят человеку в комбинации с одним или более противораковыми средствами в сильно сниженных дозах в течение укороченных циклов лечения для профилактики или лечения рака.

5.1. Ьс1-2-антисмысловой олигомер

Данное изобретение относится к применению одного или более Ьс1-2-антисмысловых олигомеров или их производных, аналогов, фрагментов, гибридов, миметиков и тому подобного. Используемый здесь термин «производное» относится к любому фармацевтически приемлемому гомологу, аналогу или фрагменту, соответствующему фармацевтической композиции по данному изобретению. Антисмысловые олигомеры, подходящие для применения по изобретению, включают нуклеотидные олигомеры с длиной в диапазоне 5-10, 10-20, 20-50, 50-75 или 75-100 оснований, предпочтительно с длиной 10-40 оснований, более предпочтительно с длиной 15-25 оснований, наиболее предпочтительно длиной 18 оснований. Последовательности-мишени могут представлять собой РНК или ДНК и могут быть одноцепочечными или двухцепочечными. Молекулы-мишени включают в качестве неограничивающих примеров пре-мРНК, мРНК и ДНК. В одном из осуществлений молекулой-мишенью является мРНК. В предпочтительном варианте осуществления молекулой-мишенью является пре-мРНК Ьс1-2 или мРНК Ьс1-2. В конкретном варианте осуществления антисмысловые олигомеры гибридизуются с частью последовательности в любом месте пре-мРНК Ьс1-2 или мРНК Ьс1-2. Антисмысловые олигомеры предпочтительно выбраны из тех олигомеров, которые гибридизуются с сайтом инициации трансляции, донорным сайтом сплайсинга, акцепторным сайтом сплайсинга, сайтами транспортировки или сайтами деградации премРНК или мРНК Ьс1-2.

Некоторые Ьс1-2-антисмысловые олигомеры испытывали ранее с различными результатами (см., например, 8ΕΡ.ΙΩ.ΝΟ8: 1-17 в патенте США № 5831066). Примеры Ьс1-2-антисмысловых олигомеров, которые могут использоваться по настоящему изобретению, подробно описаны в заявке на патент США № 08/217082, ныне патент США № 5734033; в заявке на патент США № 08/465485, ныне патент США № 5831066 и в заявке на патент США № 09/080285, ныне патент США № 6040181, каждая из которых включена сюда полностью в качестве ссылки.

В одном из вариантов осуществления Ьс1-2-антисмысловой олигомер, по существу, комплементарен части пре-мРНК или мРНК Ьс1-2 или части пре-мРНК или мРНК, относящейся к Ьс1-2. В предпочтительном варианте осуществления Ьс1-2-антисмысловой олигомер гибридизуется с частью сайта инициации трансляции кодирующей цепи пре-мРНК. В более предпочтительном осуществлении Ьс1-2антисмысловой олигомер гибридизуется с частью кодирующей цепи пре-мРНК, которая включает сайт инициации трансляции гена Ьс1-2 человека. Более предпочтительно Ьс1-2-антисмысловой олигомер включает последовательность ТАС, комплементарную последовательности инициации АИС пре-мРНК или мРНК Ьс1-2.

В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер гибридизуется с частью донорного сайта сплайсинга кодирующей цепи пре-мРНК гена Ьс1-2 человека. Предпочтительно данный нуклеотид включает последовательность СА, комплементарную донорной последовательности сплайсинга СТ гена Ьс1-2,

- 6 005424 и предпочтительно дополнительно включает фланкирующие части длиной 5-50 оснований, более предпочтительно примерно 10-20 оснований, которые гибридизуются с частями кодирующей цепи гена Ье1-2, фланкирующими указанный донорный участок сплайсинга.

Еще в одном варианте осуществления Ьс1-2-антисмысловой олигомер гибридизуется с частью акцепторного сайта сплайсинга кодирующей цепи пре-мРНК гена Ьс1-2 человека. Предпочтительно данный нуклеотид включает последовательность ТС, комплементарную акцепторной последовательности сплайсинга АС гена Ьс1-2, и предпочтительно дополнительно включает фланкирующие части длиной 5-50 оснований, более предпочтительно примерно 10-20 оснований, которые гибридизуются с частями кодирующей цепи гена Ьс1-2, фланкирующими указанный акцепторный участок сплайсинга. В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер гибридизуется с частями пре-мРНК или мРНК, участвующими в сплайсинге, транспорте или деградации.

Специалист в данной области может определить, что антисмысловые олигомеры, подходящие для использования по изобретению, могут также быть, по существу, комплементарны другим участкам премРНК или мРНК Ьс1-2 и могут образовывать гибриды. Специалисту в данной области также будет понятно, что антисмысловые олигомеры, гибридизующиеся с частью пре-мРНК или мРНК Ьс1-2, последовательность которых не является распространенной в транскриптах неродственных генов, являются предпочтительными, поскольку поддерживают специфичность лечения.

Структура последовательности Ьс1-2-антисмыслового олигомера может также определяться путем эмпирического тестирования и оценки клинической эффективности вне зависимости от присущей ему гомологии по последовательности или гибридизации с геном Ьс1-2, с пре-мРНК Ьс1-2, с мРНК Ьс1-2 или с относящимися к Ьс1-2 нуклеотидными последовательностями. Специалисту в данной области будет понятно, что Ьс1-2-антисымсловые олигомеры, которые характеризуются, например, меньшей гомологией по последовательности, в большей или меньшей степени модифицированными нуклеотидами или большей или меньшей длиной по сравнению с таковыми по предпочтительным осуществлениям, но которые все равно вызывают ответ при клиническом лечении, также находятся в объеме данного изобретения.

Антисмысловые олигомеры могут представлять собой РНК или ДНК или их производные. Конкретная форма антисмыслового олигомера может влиять на такие фармакокинетические параметры олигомера, как биодоступность, метаболизм, период полужизни и т. д. По существу, данное изобретение относится к производным антисмыслового олигомера, обладающим свойствами, усиливающими захват клетками и устойчивость к нуклеазами, улучшающими связывание с последовательностью-мишенью или усиливающими расщепление или деградацию последовательности-мишени.

Антисмысловые олигомеры могут содержать основания, включающие, например, фосфоротиокислоты или метилфосфоновые кислоты. Альтернативно антисмысловые олигомеры могут представлять собой смеси олигомеров, содержащие комбинации нуклеотидов на основе фосфодиэфиров, фосфоротиокислоты и/или метилфосфоновой кислоты среди прочих. Такие олигомеры могут обладать модификациями, включающими в качестве неограничивающих примеров 2-О'-алкильные или 2-О'-галогеновые модификации сахара, модификации остова (например, метилфосфонат, фосфородитиоат, фосфордитиоат, формацеталь, З'-тиоформацеталь, сульфон, сульфамат, соединения с нитроксидным остовом, морфолино производные и производные пептидной нуклеиновой кислоты (ПНК)) или производные, где модифицированы группы оснований (Ед1ю1т. е! а1., 1992, Рерйбе ШсШс Ас1бк (РМА)-Ойдопис1еоббе Апа1одиек \Уйй Ап Асй1га1 Рерйбе ВаскЬопе). В другом варианте осуществления антисмысловые олигомеры включают конъюгаты олигонуклеотидов и их производных (Сообсййб, 1990, Соищда!ек о! о11допис1еойбек апб тобШеб ойдопис1еоббек: а ге\зе\\· о! Ней куп!йек1к апб ргорегйек, Вюсопщд. Сйет. 1(3): 165-87).

Для терапевтического применения ш νί\Ό предпочтительным является производное фосфоротиокислоты Ьс1-2-антисмыслового олигомера, по крайней мере отчасти, по причине высокой устойчивости к деградации. В одном из вариантов осуществления Ьс1-2-антисмысловой олигомер представляет собой гибридный олигомер, содержащий основания - производные фосфоротиокислоты. В другом варианте осуществления Ьс1-2-антисмысловой олигомер содержит по крайней мере одну фосфоротиокислотную связь. В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер содержит по крайней мере три фосфоротиокислотные связи. Еще в одном осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер содержит по крайней мере три смежные фосфоротиокислотные связи. Еще в одном осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер полностью составлен фосфоротиокислотными связями. Способы получения производных олигонуклеотидов хорошо известны в данной области. См., например, 8!еш е! а1., 1988, Ыис1. Ас1бк Век., 16: 3209-21 (фосфоротиокислота); В1аке е! а1., 1985, Вюсйетййу 24: 6132-38 (метилфосфоновая кислота); Могуап е! а1., 1986, Ыис1. Ас1бк Век. 14: 5019-32 (альфа-дезоксинуклеотиды); Моша е! а1., 1993, Еуа1иабоп о! 2'-тобШеб ойдопис1еоббек соп!а1шпд 2'беоху дарк ак апйкепке шЫЬйогк о! депе ехргеккюп, 1. Вю1. Сйет. 268: 14514-22 (2'-О-метилрибонуклеозиды); Аккейпе е! а1., 1984, Ргос. №111. Асаб. 8сг И8А 81: 3297-3301 (акридин); Кпогге е! а1., 1985, Вюсйет1е 67: 783-9; У1аккоу е! а1., 1986, Ыис1. Ас1бк Век. 14: 4065-76 (Ν-2-хлорацетиламин и феназин); \УеЬЬ е! а1., 1986, Ыис1. Ас1бк Век. 14: 7661-74 (5-метил-Н⁴-Н⁴этаноцитозин); ВопЮпп е! а1., 1984, ЕЕВ8 Ье!!егк 172: 43-6 (Ее-этилендиаминтетрауксусная кислота (ΕΌΤΛ) и аналоги); Сй1-Нопд е! а1., 1986, Ргос. №111. Асаб. 8сг И8А 83: 7147-51 (5-глициламидо-1,10-о

- 7 005424 фенантролин); и С1ш с1 а1., 1985, Ргос. Ναΐΐ. Асаб. 8с! И8Л 82: 963-7 (производные диэтилентриаминпентауксусной кислоты (ОТРА)).

Эффективная доза Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащая введению в течение цикла лечения, находится в диапазоне примерно 0,01-0,1, 0,1-1 или 1-10 мг/кг/сутки. Доза Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащая введению, может зависеть от способа введения. Например, внутривенное введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера, вероятно, будет приводить к получению всем организмом большей дозы, чем доза, полученная всем организмом в результате местного применения композиции, содержащей Ьс1-2-антисмысловой олигомер. В одном из осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят подкожно в дозе, составляющей 0,01-10 мг/кг/сутки; более предпочтительно в дозе, составляющей 4-9 мг/кг/сутки; наиболее предпочтительно в дозе, составляющей 5-7 мг/кг/сутки. В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят внутривенно в дозе 0,01-10 мг/кг/сутки; более предпочтительно в дозе 4-9 мг/кг/сутки; наиболее предпочтительно в дозе 5-7 мг/кг/сутки. Еще в одном осуществлении Ьс12-антисмысловой олигомер вводят местно в дозе 0,01-10 мг/кг/сутки; более предпочтительно, в дозе 0,010,1 мг/кг/сутки; наиболее предпочтительно в дозе 1-5 мг/кг/сутки. Специалисту в данной области очевидно, что местное введение может приводить к получению организмом в целом более низких доз. Например, способы местного введения, такие как внутриопухолевое введение, внутриглазное введение или имплантация, могут местно продуцировать высокие концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера, но представлять относительно низкие дозы относительно всей массы тела. Таким образом, в некоторых случаях предполагается, что местное введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера приводит к дозе на целый организм, равной примерно 0,01-5 мг/кг/сутки.

В другом осуществлении в течение цикла лечения вводят особенно большую дозу Ьс1-2антисмыслового олигомера, которая находится в диапазоне примерно 10-20, 20-30 или 30-50 мг/кг/сутки.

Более того, эффективная доза конкретного Ьс1-2-антисмыслового олигомера может зависеть от дополнительных факторов, включая тип рака, состояние заболевания или стадия заболевания, токсичность олигомера, скорость захвата олигомера злокачественными клетками, а также массу тела, возраст и состояние здоровья субъекта, которому предстоит введение антисмыслового олигомера. Из-за наличия ίη νίνο многих факторов, способных препятствовать действию или биологической активности Ьс1-2антисмыслового олигомера, специалист в данной области может понять, что эффективное количество Ьс1-2-антисмыслового олигомера может быть разным для каждого субъекта.

В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер находится в дозе, введение которой приводит к концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме, по крайней мере равной по крайней мере 30 нМ (наномолей). Как понятно специалисту в данной области, предпочтительными могут быть более низкие или более высокие концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме, в зависимости от способа введения. Например, с упоминанием малой части возможных способов, концентрация Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме, равная по крайней мере 30 нМ, может соответствовать внутривенному, подкожному, внутримышечному способам введения, способу введения с контролируемым высвобождением, и пероральному способу введения. В другом примере будут, наоборот, требоваться относительно низкие концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме, например при использовании способов местного введения, таких как, например, внутриопухолевое введение, внутриглазное введение или имплантация, которые тем не менее могут местно приводить к высоким, клинически эффективным концентрациям Ьс1-2-антисмыслового олигомера на местном уровне.

Еще в одном осуществлении концентрация Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме, равная по крайней мере 30 нМ (наномолей), достигается примерно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 ч после введения Ьс1-2-антисмыслового олигомера. Еще в одном осуществлении концентрация Ьс1-2антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме, равная по крайней мере 30 нМ, достигается примерно через 36-48 ч, предпочтительно через 24-35 ч, более предпочтительно через 12-24 ч, наиболее предпочтительно ранее чем через 12 ч.

В конкретном осуществлении доза Ьс1-2-антисмыслового олигомера является большой дозой. В одном из осуществлений концентрация Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме составляет по крайней мере 30 нМ. В другом осуществлении уровень Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркуляции равен 1-10 мкМ. Еще в одном осуществлении уровень Ьс1-2-антисмыслового олигомера в кровотоке составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мкМ. Еще в одном осуществлении уровень Ьс1-2антисмыслового олигомера в кровотоке, равный 1-10 мкМ, достигается примерно через 36-48 ч, предпочтительно через 24-35 ч, более предпочтительно через 12-24 ч, наиболее предпочтительно ранее чем через 12 ч.

Большая доза может достигаться путем нескольких введений за цикл. Альтернативно, большая доза может вводиться в виде одного болюсного введения. Единичное введение большой дозы может приводить к временному увеличению концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме выше 30 нМ. Более того, единичное введение особо больших доз Ьс1-2-антисмыслового олигомера может приводить к концентрациям Ьс1-2-антисмыслового олигомера в циркулирующей плазме, составляющим от 1 до 10 мкМ, по прошествии периода намного меньшего, чем 12 ч, даже меньше, чем через 1 ч.

- 8 005424

Кроме того, доза Ье1-2-антисмыслового олигомера может изменяться в зависимости от конкретного используемого Ьс1-2-антисмыслового олигомера. Применяемая доза, вероятно, отражает уравновешенный набор соображений, среди которых стабильность, локализация, захват клетками и токсичность конкретного Ьс1-2-антисмыслового олигомера. Например, конкретный химически модифицированный Ьс1-2антисмысловой олигомер может проявлять большую устойчивость к деградации, или может проявлять более высокую аффинность в отношении нуклеиновой кислоты-мишени, или может сильнее захватываться клеткой или клеточным ядром; и все эти соображения могут позволять применение малых доз. Еще в одном примере конкретный химически модифицированный Ьс1-2-антисмысловой олигомер может проявлять меньшую токсичность, чем другие антисмысловые олигомеры, и поэтому может применяться в больших дозах. Таким образом, для данного Ьс1-2-антисмыслового олигомера подходящая доза для введения может быть относительно большой или относительно малой. Подходящие дозы могут оцениваться специалистом в данной области и данное изобретение предполагает длительную оценку оптимальной схемы лечения для конкретного вида Ьс1-2-антисмысловых олигомеров. Суточная доза может вводиться путем одного или более приемов лечения.

Другие факторы, которые следует рассматривать при определении эффективной дозы Ьс1-2антисмыслового олигомера, включают то, будет ли олигомер вводиться в комбинации с другими терапевтическими средствами. В таких случаях относительная токсичность другого терапевтического средства может являться показанием к применению Ьс1-2-антисмыслового олигомера в малых дозах. Альтернативно, лечение большими дозами Ьс1-2-антисмыслового олигомера может приводить к использованию комбинированных способов лечения со сниженными дозами терапевтических средств. В конкретном осуществлении лечение особенно большой дозой Ьс1-2-антисмыслового олигомера может приводить к использованию комбинированных способов лечения с сильно сниженными дозами терапевтических средств. Например, лечение пациента 10, 20, 30, 40 или 50 мг/кг/сутки Ьс1-2-антисмыслового олигомера может далее повышать чувствительность субъекта к противораковым средствам. В таких случаях особенно большую дозу Ьс1-2-антисмыслового олигомера комбинируют, например, с сильно укороченной схемой облучения. В другом примере особенно большая доза Ьс1-2-антисмыслового олигомера приводит к значительному усилению действия противораковых терапевтических средств.

Кроме того, особенно большие дозы Ьс1-2-антисмыслового олигомера могут также позволять сокращать период введения терапевтически эффективного количества Ьс1-2-антисмыслового олигомера и/или противоракового средства, так что длительность цикла лечения составляет намного менее 14 суток.

В одном из осуществлений в течение краткого цикла лечения с заданной длительностью менее двух недель вводят Ьс1-2-антисмысловой олигомер на основе фосфоротиокислоты длиной 18 оснований с последовательностью 5'-ТСТСССАСССТСССССАТ-3', который является комплементарным первым шести кодонам мРНК Ьс1-2 и гибридизуется с соответствующими основаниями РНК-мишени.

В одном из осуществлений С3139 вводят в течение 2-13 суток в дозе, составляющей от 0,01 до 10 мг/мг/сутки. В конкретном осуществлении С3139 вводят в течение 2-3, 4-5, 6-7, 8-9, 10-11 или 12-13 суток в дозе, составляющей 0,01-1, 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7-8, 8-9 или 9-10 мг/мг/сутки; более предпочтительно в дозе 4-9 мг/кг/сутки и наиболее предпочтительно в дозе 5-7 мг/кг/сутки. В другом осуществлении С3139 вводят в указанной дозе в течение 3-9 суток. Еще в одном осуществлении С3139 вводят в указанной дозе в течение 4-7 суток. В предпочтительном осуществлении С3139 вводят в указанной дозе в течение 5-6 суток. В наиболее предпочтительном осуществлении С3139 вводят в дозе 5-7 мг/кг/сутки в течение 5-6 суток. Данное изобретение относится к другим предпочтительным лечебным режимам в зависимости от конкретного Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащего применению, или в зависимости от конкретного способа введения, или в зависимости от того, водят ли Ьс1-2-антисмысловой олигомер как часть комбинированного лечения, например, в комбинации с противораковым терапевтическим средством. Суточная доза может вводиться путем одного или более приемов лечения.

В другом осуществлении С3139 вводят в особенно большой дозе, составляющей примерно 10-50 мг/кг/сут. В конкретном осуществлении 03139 вводят в особенно высокой дозе, составляющей примерно 10-15, 16-20, 21-25, 26-30, 31-35, 36-40, 41-45 или 46-50 мг/кг/сутки. В дальнейшем осуществлении 03139 вводят в указанной дозе в течение периода длительностью от 1 до 10 суток. Еще в одном осуществлении 03139 вводят в указанной дозе в течение периода длительностью от 2 до 7 суток. Еще в одном осуществлении 03139 вводят в указанной дозе в течение периода длительностью от 3 до 4 суток. В предпочтительном осуществлении 03139 вводят в дозе, составляющей 26-30, 31-35, 36-40, 41-45 или 46-50 мг/кг/сутки, как минимум, в течение 1 суток. Данное изобретение относится к другим предпочтительным лечебным режимам в зависимости от конкретного Ьс1-2-антисмыслового олигомера, подлежащего применению, или в зависимости от конкретного способа введения, или в зависимости от того, водят ли Ьс1-2антисмысловой олигомер как часть комбинированного лечения, например, в комбинации с противораковым терапевтическим средством. Суточная доза может вводиться путем одного или более приемов лечения.

5.2. Противораковые терапевтические средства

Описанное здесь изобретение относится к способу профилактики или лечения рака, включающему введение терапевтически эффективного количества Ьс1-2-антисмыслового олигомера, в том числе в каче

- 9 005424 стве неограничивающего примера больших доз данного олигомера, человеку, нуждающемуся в таком лечении. Кроме того, данное изобретение относится к применению краткого периода введения Ьс1-2антисмыслового олигомера. Нормальные, не раковые клетки делятся с частотой, характерной для конкретного клеточного типа. При трансформации клетки в злокачественное состояние происходит неконтролируемая клеточная пролиферация и снижение клеточной гибели, и поэтому признаком ракового типа клеток является беспорядочное деление клеток или клеточный рост. Примеры типов рака включают в качестве неограничивающего списка неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, лейкоз (например, острый лейкоз, такой как острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, множественная миелома), карциному толстого кишечника, карциному прямой кишки, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак яичника, рак предстательной железы, почечно-клеточную карциному, гепатому, карциному желчных протоков, хориокарциному, рак шейки матки, рак яичка, карциному легких, карциному мочевого пузыря, меланому, рак шеи и головы, рак головного мозга, рак с неизвестным местом возникновения, неоплазмы, рак периферической нервной системы, рак центральной нервной системы, опухоли (например, фибросаркома, миксосаркома, липосаркома, хондросаркома, остеогенная саркома, хордома, злокачественная гемангиома, эндотелиома, лимфангиосаркома, лимфангиоэндотелиома, синовиома, мезотелиома, опухоль Юинга, лейомиосаркома, рабдомиосаркома, плоскоклеточная карцинома, базально-клеточная карцинома, аденокарцинома, карцинома потовых желез, карцинома сальных желез, папиллярная карцинома, папиллярные аденокарциномы, цистаденокарцинома, медуллярный рак, бронхогенная карцинома, семинома, эмбриональная карцинома, опухоль Вильмса, мелкоклеточная карцинома легких, эпителиальная карцинома, глиома, астроцитома, медуллобластома, краниофарингиома, эпендимома, пинеалома, ангиобластома, слуховая неврома, олигодендроглиома, менингиома, нейробластома и ретинобластома), болезнь тяжелых цепей, метастазирование или любое заболевание или нарушение, характеризующееся неконтролируемым или аномальным клеточным ростом.

В предпочтительном осуществлении данное изобретение дополнительно относится к применению комбинированной терапии для профилактики или лечения рака. Например, рак предстательной железы можно лечить фармацевтической композицией Ьс1-2-антисмыслового олигомера в комбинации с паклитакселом, доцетакселом, митоксантроном и/или антагонистом андрогенового рецептора (например, флутамидом). Как другой пример, рак молочной железы можно лечить фармацевтической композицией, включающий Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с доцетакселом, паклитакселом, цисплатином, 5-фторурацилом, доксорубицином и/или УР-16 (этопозид). Как другой пример, лейкоз можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с флударабином, цитозин-арабинозидом, гемтузимабом (МУЪОТЛКС), даунорубицином, метотрексатом, винкристином, 6-меркаптопурином, идарубицином, митоксантроном, этопозидом, аспаргиназой, преднизоном и/или циклофосфамидом. Как другой пример, миелому можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с дексаметазоном. Как другой пример, меланому можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с дакарбазином. Как другой пример, рак ободочной и прямой кишки можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с иринотеканом. Как другой пример, рак легких можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2антисмысловой олигомер в комбинации с паклитакселом, доцетакселом, этопозидом и/или цисплатином. Как другой пример, неходжкинскую лимфому можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с циклофосфамидом, СНОР, этопозидом, блеомицином, митоксантроном и/или цисплатином. Как другой пример, рак желудка можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с цисплатином. Как другой пример, рак поджелудочной железы можно лечить фармацевтической композицией, включающей Ьс1-2-антисмысловой олигомер в комбинации с гемцитабином. Данные комбинированные способы лечения также могут использоваться для профилактики рака или рецидива рака.

Комбинированное лечение также включает, в дополнение к введению Ьс1-2-антисмыслового олигомера, применение одной или более молекул, соединений или способов лечения, способствующих профилактике или лечению рака, причем данные молекулы, соединения или способы лечения включают в качестве неограничивающих примеров химические средства, средства иммунотерапии, противораковые вакцины, антиангиогенные средства, цитокины, гормонотерапию, генотерапию и облучение.

В одном из осуществлений раковому больному в дополнение к Ьс1-2-антисмысловому олигомеру вводят одно или более химических средств. Примеры химических средств, относящихся к настоящему изобретению, включают в качестве неограничивающего списка цитозин-арабинозид, таксоиды (например, паклитаксел, доцетаксел), антитубулиновые средства (например, паклитаксел, доцетаксел, эпотилон В или их аналоги), цисплатин, карбоплатин, адриамицин, тенопозид, митозантрон, 2хлордезоксинаденозин, алкилирующие средства (например, циклофосфамид, мехлорэтамин, тиоэпа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (ΒδΝυ), ломустин (ССЫИ), циклотосфамид, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цис-дихлордиаминоплатина (II) (ΌΩΡ). цисплатин, тиотепа), антибиотики (например, дактиномицин (ранее актиномицин), блеомицин, митрамицин, антрамицин), антиметабо

- 10 005424 литы (например, метотрексат, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил, флударабин, гемцитабин, дакарбазин, темозоламид), аспаргиназу, бациллу Кальметта-Герена, дифтерийный токсин, гексаметилмеламин, гидроксимочевину, ΕΥ8ΘΌΚΕΝ®, аналоги нуклеозидов, растительные алкалоиды (например, таксол, паклитаксел, камптотецин, топотекан, иринотекан (САМРТО8АК, СРТ-11), винкристин, алкалоиды барвинка, такие как винбластин), подофиллотоксин (включая производные, такие как эпиподофиллотоксин, УР-16 (этопозид), УМ-26 (тенипозид)), цитохалазин В, грамицидин Ό, этидийбромид, эметин, митомицин, прокарбазин, мехлорэтамин, антрациклины (например, даунорубицин (ранее дауномицин), доксорубицин, липосомальный доксорубицин), дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин Ό, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, антимитотические средства, абрин, рицин А, экзотоксин псевдомонады, фактор роста нервной ткани, тромбоцитарный фактор роста, тканевой активатор плазминогена, алдеслейкин, аллутамин, анастрозл, бикалутамид, биаомицин, бусульфан, капецитабин, карбоплаин, хлорабусил, кладрибин, циларабин, даклиномицин, эстрамустин, флоксуридин (Похипбйс). гамцитабин, гозереин (докегеше), идарубицин, итофосфамид, лейпролида (1аирго11бе) ацетат, левамизоль, ломустин, мехлорэтамин, магестрол, ацетат, меркаптопурин, месна, митоланк, пегаспергазу, пентослатин, пикамицин, ритуксимаб (гшхйтаЬ), кампат-1, страплозоцин, тиогуанин, третиноин, винорелбин или их любые фрагменты, члены их семейств или производные, включая их фармацевтически приемлемые соли. Также к настоящему изобретению относятся композиции, включающие один или более химических средств (например, ТЬАб, СНОР). ТЬАб включает флударабин, цитозин-арабинозид (Ага-С) и 6-С8Т. СНОР включает циклофосфамид, винкристин, доксорубицин и преднизон.

В одном из осуществлений указанным химическим средством является дакарбазин в дозе в диапазоне 200-4000 мг/м²/цикл. В предпочтительном осуществлении указанная доза находится в диапазоне 700-1000 мг/м²/цикл. В другом осуществлении указанным химическим средством является флударабин в дозе в диапазоне 25-50 мг/м²/цикл. В другом осуществлении указанным химическим средством является цитозинарабинозид (Ага-С) в дозе в диапазоне 200-2000 мг/м²/цикл. В другом осуществлении указанным химическим средством является доцетаксел в дозе в диапазоне 1,5-7,5 мг/кг/цикл. В другом осуществлении указанным химическим средством является паклитаксел в дозе в диапазоне 5-15 мг/кг/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является цисплатин в дозе в диапазоне 5-20 мг/кг/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является 5-фторурацил в дозе в диапазоне 5-20 мг/кг/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является доксорубицин в дозе в диапазоне 2-8 мг/кг/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является эпиподофиллотоксин в дозе в диапазоне 40-160 мг/кг/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является циклофосфамид в дозе в диапазоне 50-200 мг/кг/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является иринотекан в дозе в диапазоне 50-75, 75-100, 100-125, или 125-150 мг/м²/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является винбластин в дозе в диапазоне 3,7-5,4, 5,5-7,4, 7,5-11 или 11-18,5 мг/м²/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является винкристин в дозе в диапазоне 0,7-1,4 или 1,5-2 мг/м²/цикл. Еще в одном осуществлении указанным химическим средством является метотрексат в дозе в диапазоне 3,3-5, 5-10, 10-100 или 100-1000 мг/м²/цикл.

В предпочтительном осуществлении данное изобретение дополнительно относится к применению малых доз химического средства при введении его как части лечебного режима с Ьс1-2-антисмысловым олигомером. Например, начальное лечение Ьс1-2-антисмысловым олигомером повышает чувствительность опухоли к последующей обработке дозой химического средства, причем данная доза близка к нижнему пределу дозировок, принятых при введении химического средства в отсутствие Ьс1-2антисмыслового олигомера, или меньше него. В одном из осуществлении раковому больному вводят Ьс12-антисмысловой олигомер и малую дозу (например, от 6 до 60 мг/м²/сутки или ниже) доцетаксела. В другом осуществлении раковому больному вводят Ьс1-2-антисмысловой олигомер и малую дозу (например, от 10 до 135 мг/м²/сутки или ниже) паклитаксела. Еще в одном осуществлении раковому больному вводят Ьс1-2-антисмысловой олигомер и малую дозу (например, от 2,5 до 25 мг/м²/сутки или ниже) флударабина. Еще в одном осуществлении раковому больному вводят Ьс1-2-антисмысловой олигомер и малую дозу (например, от 0,5 до 1,5 г/м²/сутки или ниже) цитозин-арабинозида (Ага-С).

Поэтому данное изобретение относится к применению одного или более Ьс1-2-антисмысловых олигомеров, которые вводят перед, после или одновременно с малыми дозами химических средств для профилактики или лечения рака.

В одном из осуществлений указанным химическим средством является цисплатин, например, РЬАТШОБ или РБАТШОБ Ар (Вп5Ю1 Муега) в дозе в диапазоне 5-10, 10-20, 20-40 или 40-75 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту с раком яичника вводят дозу цисплатина в диапазоне 7,5-75 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту с раком мочевого пузыря вводят дозу цисплатина в диапазоне 5-50 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является карбоплатин, например, РАКАРЬАТШ (Вг151о1 Муега) в дозе в диапазоне 2-4, 4-8, 8-16, 16-35 или 35-75 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту с раком яичника вводят дозу карбоплатина в диапазоне 7,5-75 мг/м²/цикл. В

- 11 005424 другом осуществлении пациенту с раком мочевого пузыря вводят дозу карбоплатина в диапазоне 5-50 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту с раком яичек вводят дозу карбоплатина в диапазоне 2-20 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является циклофосфамид, например, ΟΥΤΟΧΑΝ (Впк1о1 Муегк 8с.|шЬЬ) в дозе в диапазоне 0,25-0,5, 0,5-1, 1-2, 2-5, 5-10, 10-20, 20-40 мг/кг/цикл. В другом осуществлении пациенту со злокачественной опухолью вводят дозу циклофосфамида в диапазоне 4-40 мг/кг/цикл. В другом осуществлении пациенту с доброкачественной опухолью вводят дозу циклофосфамида в диапазоне 0,25-2,5 мг/кг/цикл.

В одном из осуществлений указанным химическим средством является цитарабин, например, 0ΎТО8АК-И (Рйагтас1а & ирщйи) в дозе в диапазоне 0,5-1, 1-4, 4-10, 10-25, 25-50 или 50-100 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту с острым лейкозом вводят дозу цитарабина в диапазоне 10-100 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту с менингеальным лейкозом вводят дозу цитарабина в диапазоне 0,5-5 мг/м²/цикл. В другом осуществлении раковому больному вводят дозу цитарабиновых липосом, например, ΌΕΡΟΟΥΤ (СЫгоп Согр.), в диапазоне 5-50 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является дакарбазин, например, ΩΤΙΟ или ΌΤΙΟ ΌΟΜΕ (Вауег Согр.) в дозе в диапазоне 15-250 мг/м²/цикл или в диапазоне 0,2-2 мг/кг/цикл. В другом осуществлении пациенту с болезнью Ходжкина вводят дозу дакарбазина в диапазоне 15-150 мг/м²/цикл. В другом осуществлении пациенту со злокачественной меланомой вводят дозу дакарбазина в диапазоне 0,2-2 мг/кг/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является топотекан, например, ΗΥΟΑΜΤΙΝ (8тййК1ше Веесйат) в дозе в диапазоне 0,1-0,2, 0,2-0,4, 0,4-0,8 или 0,8-1,5 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является иринотекан, например, ΟΑΜΡΤΟ8ΑΒ (Рйагтас1а & υρίοΙιη). в дозе в диапазоне 5-10, 10-25 или 25-50 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является флударабин, например, ЕЬиΌΑΚΑ (Вег1ех ЬаЬогаЮпек), в дозе в диапазоне 2,5-5, 5-10, 10-15 или 15-25 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является цитозин-арабинозид (Ага-С) в дозе в диапазоне 200-2000 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является доцетаксел, например, ΤΑΧΟΤΕΒΕ (КЕоие Рои1епс Когег), в дозе в диапазоне 6-10, 10-30 или 30-60 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является паклитаксел, например, ΤΑΧΟΕ (ВпкЮ1 Муегк 8с.|шЬЬ), в дозе в диапазоне 10-20, 20-40, 40-70 или 70-135 мг/кг/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является 5-фторурацил в дозе в диапазоне 0,5-5 мг/кг/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является доксорубицин, например ΑΌΒΙΑΜΥΟΙΝ (Рйагтааа & ир)ойп), ΌΟΧΙΕ (Αΐζη), ΚΠΒΕΧ (Впк1о1 Муегк 8цшЬЬ), в дозе в диапазоне 24, 4-8, 8-15, 15-30 или 30-60 мг/кг/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является этопозид, например УБРНЗЮ (РйагтаДа & ир)ойп), в дозе в диапазоне 3,5-7, 7-15, 15-25 или 25-50 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении пациенту с раком яичек вводят дозу этопозида в диапазоне 5-50 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении пациенту с мелкоклеточным раком легких вводят дозу этопозида в диапазоне 3,5-35 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является винбластин, например ΥΕΕΒΑΝ (Εΐί ЬШу), в дозе в диапазоне 0,3-0,5, 0,5-1, 1-2, 2-3 или 3-3,7 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является винкристин, например ΟΝΟΟνΙΝ (Εΐί ЬШу), в дозе, составляющей 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6 или 0,7 мг/м²/цикл.

В другом осуществлении указанным химическим средством является метотрексат в дозе в диапазоне 0,2-0,9, 1-5, 5-10, 10-20.

В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят в комбинации с одним или более иммунотерапевтическими средствами, такими как антитела и иммуномодуляторы, которые включают в качестве неограничивающих примеров ритуксан, ритуксимаб, кампат-1, гемтузумаб или трастузумаб.

В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят в комбинации с одним или более антиангиогенными средствами, которые включают в качестве неограничивающих примеров ангиостатин, талидомид, крингл 5, эндостатин, серпин (ингибитор сериновых протеаз), антитромбин, Ν-концевой протеолитический фрагмент фибронектина массой 29 кДа и С-концевой протеолитический фрагмент фибронектина массой 40 кДа, протеолитический фрагмент пролактина массой 16 кДа, протеолитический фрагмент тромбоцитарного фактора 4 массой 7,8 кДа, пептид длиной 13 аминокислот, соответствующий фрагменту тромбоцитарного фактора 4 (Маюпе е1 а1., 1990, Сапсег Век. 51: 2077-2083), пептид длиной 14 аминокислот, соответствующий фрагменту коллагена Ι (Ш1та е1 а1., 1993, 1. Се11 Вю1. 122: 497-511), пептид длиной 19 аминокислот, соответствующий фрагменту тромбоспондина Ι (Ш1кта е1 а1., 1993, 1. Се11 Вю1. 122: 497-511), пептид длиной 20 аминокислот, соответствующий фрагменту 8ΡΑΚС (8аде е1 а1.,

- 12 005424

1995, 1. Се11. ВюсЬет. 57: 1329-1334), или любые их фрагменты, члены их семейств или их производные, включая их фармацевтически приемлемые соли.

Также описаны другие пептиды, ингибирующие ангиогенез и соответствующие фрагментам ламинина, фибронектина, проколлагена и ЕСЕ (см. обзор Сао, 1998, Ргод. Мо1. 8иЬсе11. Βίο1. 20: 161-176). Показано, что моноклональные антитела и циклические пентапептиды, блокирующие некоторые интегрины, которые связывают РСИ-белки (т.е. белки, содержащие пептидный мотив Агд-С1у-Акр), обладают активностью по подавлению васкуляризации (Вгоокк е1 а1., 1994, 8аепсе 264: 569-571; Наттек е1 а1.,

1996, №1иге Мебюте 2: 529-533). Более того, ингибирование рецептора урокиназного активатора плазминогена рецепторными антагонистами подавляет ангиогенез, опухолевый рост и метастазирование (Μίη е! а1., 1996, Сапсег Рек. 56: 2428-33; С’го\\'1еу е! а1., 1993, Ргос. №111. Асаб. 8ск И8А 90: 5021-25). Применение таких антиангиогенных средств также относится к настоящему изобретению.

В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят в комбинации с режимом облучения.

В другом осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят в комбинации с одним или более цитокинами, которые включают в качестве неограничивающих примеров лимфокины, факторы некроза опухоли, цитокины, подобные факторам некроза опухоли, лимфотоксин-α, лимфотоксин-β, интерферонα, интерферон-β, макрофагальные белки воспаления, гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор, интерлейкины (включая в качестве неограничивающих примеров интерлейкин-1, интерлейкин-2, интерлейкин-6, интерлейкин-12, интерлейкин-15, интерлейкин-18), лиганды ОХ40, СЭ27, ί.Ό30, СЭ40 или СЭ137, Еак-Еак-лиганд, 4-1ВВБ, эндотелиальный белок активации моноцитов или любые их фрагменты, члены их семейств или их производные, включая их фармацевтически приемлемые соли.

Еще в одном осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят в комбинации с противораковой вакциной. Неограничивающие примеры противораковых вакцин включают аутологичные клетки или ткани, неаутологичные клетки или ткани, канцероэмбриональный антиген, альфа-фетопротеин, человеческий хорионический гонадотропин, живую вакцину В СО, белки меланоцитарного ряда (например, др 100, МАРТ-1/Ме1апА, ТРР-1 (др75), тирозиназу, широко распространенные опухолеспецифические антигены (например, ВАСЕ, САСЕ-1, САСЕ-2, МАСЕ-1, МАСЕ-3, Ν-ацетилглюкозаминилтрансферазаV, р15), мутантные антигены, являющиеся опухолеспецифическими (β-катенин, МИМ-1, СИК4), антигены, не относящиеся к меланоме (например, НЕР-2/пеи (карцинома молочной железы и яичника), человеческий папилломавирус-Е6, Е7 (карцинома шейки матки), МИС-1 (карцинома молочной железы, яичника и поджелудочной желудка)). Общую характеристику опухолевых антигенов человека, распознаваемых Т-клетками, см. у РоЬЬтк апб Ка^акатц 1996, Сигг. Орт 1ттипо1. 8: 628-36. Противораковые вакцины могут представлять собой очищенные препараты или могут не являться таковыми.

Еще в одном осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер применяется совместно с гормональным лечением. Гормональные терапевтические способы включают применение агонистов гормонов, антагонистов гормонов (например, флутамид, тамоксифен, лейпролида ацетат (ЬиРРОЦ)) и стероиды (например, дексаметазон, ретиноиды, бетаметазоны, кортизол, кортизон, преднизон, дегидротестостерон, глюкокортикоиды, минералокортикоиды, эстроген, тестостерон, прогестины).

Еще в одном осуществлении Ьс1-2-антисмысловой олигомер применяется при лечении рака совместно с геннотерапевтической программой.

В одном из осуществлений Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят пациенту с раком в комбинации с одним или более противораковыми терапевтическими средствами в течение краткого цикла лечения для лечения рака. В одном из осуществлений длительность указанного цикла лечения лежит в диапазоне 2-13 суток. В другом осуществлении длительность указанного цикла лечения лежит в диапазоне 3-9 суток. В другом осуществлении длительность указанного цикла лечения лежит в диапазоне 4-7 суток. Еще в одном осуществлении длительность указанного цикла лечения лежит в диапазоне 5-6 суток. Длительность лечения противораковым терапевтическим средством может изменяться в зависимости от конкретного применяемого противоракового терапевтического средства. Данное изобретение также относится к введению суточных доз с перерывами, разделяя их на несколько неполных введений. Подходящее время введения конкретного противоракового терапевтического средства будет установлено специалистом в данной области, и данное изобретение предполагает длительное установление оптимальных схем лечения для каждого противоракового терапевтического средства.

Настоящее изобретение относится по крайней мере к одному циклу, предпочтительно к более чем одному циклу, в течение которых вводится одно терапевтическое средство или последовательность терапевтических средств. В предпочтительном осуществлении данный цикл по длительности короче 14 суток. В одном из осуществлений длительность одного цикла составляет 10-13 суток. В предпочтительном осуществлении длительность одного цикла составляет 7-9 суток. В наиболее предпочтительном осуществлении длительность одного цикла составляет 5-6 суток. Подходящий период времени для одного цикла будет установлен специалистом в данной области, как и общее число циклов и интервал между цик

- 13 005424 лами. Данное изобретение относится к длительной оценке оптимальных схем лечения для каждого Ьс1-2антисмыслового олигомера и противоракового терапевтического средства.

5.3. Фармацевтические композиции

Настоящее изобретение дополнительно предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую Ьс1-2-антисмысловой олигомер и фармацевтически приемлемый носитель. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, по существу, химически инертные и нетоксические композиции, не препятствующие эффективному проявлению биологической активности фармацевтической композиции. Примеры подходящих фармацевтических носителей включают в качестве неограниченных примеров растворы солей, растворы глицерина, этанол, №1(2,3-диолеилокси)пропил-й^№триметиламмония хлорид (ΌΟΤΜΆ), диолеилфосфатидилэтаноламин (ΌΟΡΕ) и липосомы. Такие композиции должны содержать терапевтически эффективное количество препарата, вместе с подходящим количеством носителя так, чтобы представлять собой форму для правильного введения пациенту. Состав должен соответствовать способу введения. Например, пероральное введение требует кишечных покрытий для защиты антисмыслового олигомера от деградации в желудочно-кишечном тракте. В другом случае антисмысловой олигомер может быть введен в составе липосом для защиты антисмыслового олигомера от ферментов деградации, облегчения транспорта в систему циркуляции и эффективной доставки через клеточные мембраны во внутриклеточные участки.

В другом осуществлении фармацевтическая композиция включает Ьс1-2-антисмысловой олигомер, одно или более терапевтических средств и фармацевтически приемлемый носитель. В конкретном осуществлении фармацевтическая композиция содержит Ьс1-2-антисмысловой олигомер, одно или более противораковых терапевтических средств и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном из осуществлений фармацевтическая композиция, содержащая Ьс1-2-антисмысловой олигомер, с другими терапевтическими средствами или без них и фармацевтически приемлемый носитель находятся в эффективной дозе.

В одном из осуществлений фармацевтическая композиция содержит Ьс1-2-антисмысловой олигомер в дозах примерно 0,01-0,1, 0,1-1, 1-5 или 6-10 мг/кг/сутки; предпочтительно в дозе 4-9 мг/кг/сутки; более предпочтительно в дозе 5-7 мг/кг/сутки и фармацевтически приемлемый носитель. Действующее количество любого конкретного введенного антисмыслового олигомера может зависеть от нескольких факторов, таких как тип рака, токсичность антисмыслового олигомера для нормальных клеток тела, уровень захвата антисмыслового олигомера клетками опухоли и вес и возраст индивида, которому вводится антисмысловой олигомер. По причине существования ίη νίνο многих факторов, могущих препятствовать действию или проявлению биологической активности антисмыслового олигомера, эффективное количество антисмыслового олигомера может варьироваться для каждого индивида.

В другом осуществлении фармацевтические композиции по изобретению содержат Ьс1-2антисмысловой олигомер в чрезвычайно высокой дозе в диапазонах примерно от 10 до 50 мг/кг/сутки. В особом осуществлении чрезвычайно высокая доза Ьс1-2-антисмыслового олигомера в пределах 11-15, 1620, 21-25, 26-30, 31-35, 36-40, 41-45, 46-50 мг/кг/сутки вводится в течение цикла лечения.

Выбор предпочтительной эффективной дозы может быть определен (например, посредством клинических испытаний) специалистом в данной области, принимая во внимание несколько факторов, известных обычному специалисту в данной области. Такие факторы включают конкретную форму антисмыслового олигомера, фармакокинетические параметры олигомера, такие как биодоступность, метаболизм, период полужизни и т.п., которые устанавливают в течение процессов разработки, обычно применяющихся для получения одобрения фармацевтического состава регулирующим органом. Дополнительные факторы в подборе дозы включают подлежащую лечению болезнь, степень полезности пациенту, которую необходимо достичь, массу тела пациента, иммунный статус пациента, путь введения, рассмотрение того, является ли введение антисмыслового олигомера или комбинационного терапевтического средства однократным или постоянным, сопутствующие лечебные мероприятия и другие факторы, влияющие на эффективность введенного фармацевтического средства, известные специалистам в данной области.

Композиции по изобретению могут быть составлены в нейтральной форме или в виде солей. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные со свободными аминогруппами, такие как соли, полученные из соляной, фосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислот и т. п., и соли, образованные со свободными карбоксильными группами, такие как соли, полученные из гидроксидов натрия, калия, аммиака, кальция, железа, изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т. п.

В предпочтительном осуществлении в соответствии с обычными процедурами композиции составляют как фармацевтические композиции, адаптированные для подкожной инъекции или внутривенного введения человеку. Обычно композиции для подкожной инъекции или внутривенного введения являются растворами в стерильном изотоническом водном буфере. Когда необходимо, композиция может также включать растворяющее средство и местное анестезирующее средство, такое как лидокаин, для облегчения боли в месте инъекции. Вообще, составляющие поставляют отдельно или смешанными вместе в единую дозированную форму, например, такую как сухой обезвоженный порошок или безводный концен

- 14 005424 трат в герметически запаянном контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества активного вещества. Когда композиция вводится путем инфузии, его можно поместить в инфузионные флаконы, баллоны или другом приемлемом контейнере, содержащем стерильную воду фармацевтической степени очистки, солевой раствор или другие приемлемые растворители. Когда композиция вводится путем инъекции, могут быть предоставлены ампулы стерильной воды для инъекций или солевой раствор, так чтобы ингредиенты можно было смешать до введения.

5.4. Способы введения

Введение фармацевтических композиций по изобретению включает в качестве неограниченных примеров оральное, внутривенную инфузию, подкожную инъекцию, внутримышечное, местное, инъекцию депо-препарата, имплантацию, способ длительного высвобождения, внутриполостное, интраназальное, ингаляцию, внутриопухолевое, внутриокулярное и регулируемое высвобождение. Фармацевтические композиции по изобретению также могут быть введены парентерально, через слизистые (например, орально), интраназально, ректально, интравагинально, под язык, через под слизистую или чрезкожно. Предпочтительным является парентеральное введение, например, не через пищеварительный тракт, но лучше какими-либо другими путями, например внутривенным, подкожным, внутримышечным, внутрибрюшинным, интраорбитально, внутрисуставным, интраспинальным, внутригрудинным, внутриартериальным или интрадермальным путем. Специалисты в данной области могут принимать во внимание определенные преимущества и неудобства, рассматриваемые при выборе способа введения. Данное изобретение предполагает множественные способы введения. Например, Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят путем подкожной инъекции, тогда как комбинационное терапевтическое средство вводится путем внутривенной инфузии. Более того, может иметь место одновременное (например, совместное введение) или последовательное введение одного или более видов Ьс1-2-антисмыслового олигомера с терапевтическим средством или без него. Например, Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводится первым для увеличения чувствительности опухоли к последующему введению противоракового терапевтического средства или облучению. В другом осуществлении периоды введения одного или более видов Ьс1-2антисмыслового олигомера с другими терапевтическими средствами или без них могут перекрываться. Например, Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводится 7 суток, а второе терапевтическое средство вводится, начиная с пятых суток лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером, и лечение вторым терапевтическим средством продолжается после 7 суток лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером.

Могут быть предоставлены фармацевтические композиции, адаптированные для орального введения, такие, например, как капсулы или таблетки, порошки или гранулы, растворы, сиропы или суспензии (в водных и неводных жидкостях), съедобные пены или кремы, или эмульсии. Таблетки или твердые желатиновые капсулы могут, например, содержать лактозу, крахмал или его производные, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлозу, карбонат магния, стеариновую кислоту или ее соли. Мягкие желатиновые капсулы могут, например, содержать растительные масла, воски, жиры, полутвердые или жидкие полиолы и т.п. Растворы и сиропы могут, например, содержать воду, полиолы и сахара.

Действующее средство, предназначенное для орального введения, может быть покрыто или смешано с веществом (например, глицерил моностеарат или глицерил дистеарат), задерживающим разрушение или влияющим на абсорбцию действующего средства в желудочно-кишечном тракте. Так, например, замедленное высвобождение действующего средства может быть достигнуто на протяжении многих часов и, если необходимо, действующее средство может быть защищено от деградации в желудочнокишечном тракте. Воспользовавшись различным рН и ферментативными условиями вдоль по желудочно-кишечному тракту, фармацевтические композиции для орального введения могут быть разработаны так, чтобы способствовать высвобождению действующего средства в конкретном месте желудочнокишечного тракта.

Фармацевтические композиции, адаптированные для парентерального введения, включают в качестве неограничивающих примеров водные и неводные стерильные растворы или суспензии для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические компоненты и растворенные вещества, по существу, приводящие композиции в изотоническое состояние по отношению к крови предполагаемого реципиента. Другие компоненты, которые могут присутствовать в таких композициях, включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин и растительные масла. Композиции, адаптированные для парентерального введения, могут быть предоставлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, например, герметичных ампулах и флаконах, и могут храниться в условиях высушивания вымораживанием (лиофилизированных), требуя добавления жидкого стерильного носителя, например стерильного солевого раствора для инъекций, непосредственно перед использованием. Растворы или суспензии для немедленных инъекций могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток. Такие композиции должны содержать терапевтически эффективные количества Ьс1-2антисмыслового олигомера или другого терапевтического средства, вместе с подходящим количеством носителя так, чтобы обеспечить форму для правильного введения пациенту. Лекарственная форма должна соответствовать способу введения.

Фармацевтические композиции, адаптированные для трансдермального введения, могут быть предоставлены как отдельные пластыри, предназначенные для сохранения тесного контакта с эпидермисом

- 15 005424 продолжительный период времени. Фармацевтические композиции, адаптированные для местного введения, могут быть предоставлены, например, как мази, кремы, суспензии, лосьоны, порошки, растворы, пасты, гели, спреи, аэрозоли или масла. Мазь или крем для местного введения предпочтительно применяется для местного введения на кожу, рот, глаза или другие наружные ткани. Когда активные ингредиенты составляются в мази, может быть применена парафиновая или смешивающаяся с водой мазевая основа. Альтернативно активные компоненты могут быть составлены в кремы на основе масло-в-воде или вода-в-масле.

Фармацевтические композиции, адаптированные для местного введения в глаза, включают, например, глазные капли или инъецируемые композиции. В этих композициях активные компоненты могут быть растворены или суспендированы в подходящем носителе, который включает, например, водный растворитель с карбоксиметилцеллюлозой или без нее. Фармацевтические композиции, адаптированные для местного введения в рот, включают, например, лепешки, пастилки и средства для полоскания рта.

Фармацевтические композиции, адаптированные для назального введения, могут содержать твердые носители, такие как порошки (предпочтительно обладающие размером частиц в диапазоне от 20 до 500 мкМ). Порошки могут быть введены способом, основанном на вдыхании через нос, например, путем быстрого вдыхания в нос из контейнера, содержащего порошок. Альтернативно, композиции адаптированные для назального введения, могут содержать жидкие носители, такие как, например, назальные спреи или назальные капли. Такие композиции могут содержать водные или масляные растворы активных компонентов. Композиции для введения посредством ингаляции могут содержаться в специально адаптированных приспособлениях, включающих в качестве неограничивающих примеров находящиеся под давлением аэрозоли, распылители или ингаляторы, которые могут быть сконструированы так, чтобы предоставить предопределенное дозирование активных компонентов.

Фармацевтические композиции, адаптированные для ректального введения, могут быть предоставлены как суппозитории или клизмы. Фармацевтические композиции, адаптированные для вагинального введения, могут быть предоставлены, например, как маточные кольца, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или спреи.

В одном из осуществлений фармацевтические композиции по изобретению доставляются посредством систем с контролируемым высвобождением. Например, фармацевтические композиции могут быть введены с применением внутривенной инфузии, вживляемого осмотического насоса, трансдермального пластыря, липосом или других способов введения. В одном из осуществлений может быть использован насос (см., например, Ьапдег, 1990, 8с1епсе 249: 1527-33; 8еГ!оп, 1987, СКС Сп!. КеГ. Вютеб. Епд. 14: 201; Вискга1б е! а1., 1980, 8игдегу 88 : 507; 8аибек е! а1., 1989, N. Епд1. 1. Меб. 321: 574).

В другом осуществлении, состав может быть доставлен в везикуле, в частности в липосоме (см., например, Ьапдег, 8с1еисе 249: 1527-33 (1990); Тгеа! е! а1., 1989, в Ырокошк ίη !ке Ткегару оГ 1пГескоик Όίκеаке апб Сапсег, Ьорех-Вегек!еш апб Е1б1ег (ебк.), Ыкк, №\ν Уогк, рр. 353-65; Ьорех-Вегек!еш, 1Ыб., рр.31727 1п!ета1юпа1 Ра!еп! Рикксакоп № УО 91/04014; патент США №4704355).

В другом осуществлении, могут применяться полимерные материалы (см., например, Меб1са1 Аррксакопк оГ Соп1го11еб Ке1еаке, Ьапдег апб У1ке (ебк.), СКС Ргекк: Воса Ка!оп, Иопба, 1974; Соп1го11еб Эгид ВюауабаЫШу, Эгид Ргобис! Иещдп апб РегГогшапсе, 8шо1еп апб Ва11 (ебк.), У11еу: №\ν Уогк (1984); Капдег апб Реррак, 1953, 1. Масгото1. 8ск Кеу. Масгото1. Скет. 23: 61; Ьеуу е! а1., 1985, 8с1епсе 228: 190; Ьигтд е! а1., 1989, Апп. №иго1. 25: 351; Но\гагб е! а1., 1989, 1. №игокигд. 71: 105).

В еще одном из осуществлений система с контролируемым высвобождением может быть помещена в непосредственной близости от цели. Например, микронасос может доставлять контролируемые дозы прямо в мозг, требуя, таким образом, только часть системной дозы (см., например, Сообкоп, 1984, в Меб1са1 Аррксабопк оГ Соп1го11еб Ке1еаке, уо1. 2, рр. 115-138).

В одном из осуществлений может быть желательным ввести фармацевтическую композицию по изобретению локально в область, нуждающуюся в лечении; это может быть достигнуто, в качестве неограничивающих примеров, локальной инфузией в течение хирургической операции, местным нанесением (например, в сочетании с раневой повязкой после хирургической операции), инъекцией, посредством катетеров, суппозиториев или имплантантов. Имплантат может быть пористым, непористым или гелеобразным материалом, включающим мембраны, такие как сиаластовые мембраны или волокна.

Суппозитории обычно содержат активные компоненты в диапазоне от 0,5 до 10 мас.%. Оральные лекарственные формы содержат от 10 до 95 мас.% активных компонентов.

Вс1-2-антисмысловой олигомер может быть введен до, в течение и/или после введения одного или более терапевтических средств. В одном из осуществлений кс1-2-антисмысловой олигомер может быть введен первым для уменьшения экспрессии кс1-2, которая увеличивает чувствительность опухоли к последующему введению противоракового терапевтического средства. В другом осуществлении кс1-2антисмысловой олигомер может вводиться после введения противоракового терапевтического средства для уменьшения экспрессии кс1-2, которая может способствовать опухолевой резистентности и, таким образом, для предотвращения рецидива или снижения ответа на противораковое терапевтическое средство. В еще одном осуществлении может существовать период перекрывания между введением кс1-2антисмыслового олигомера и одного или более терапевтических средств.

- 16 005424

Дополнительно данное изобретение предоставляет фармацевтический набор, содержащий эффективное количество Ье1-2-олигомера в комбинации с противораковым терапевтическим средством, для защиты от связанного с Ьс1-2 нарушения или его лечения. В одном из осуществлений эффективное количество Ьс1-2-олигомера и фармацевтически приемлемого носителя могут быть упакованы в однодозовый флакон или другой контейнер. В особом осуществлении Ьс1-2-олигомер содержит 03139 (8Е0, ΙΌ. N0:17). Набор может содержать один или более контейнеров, заполненных одним или более компонентами фармацевтических композиций по изобретению. К такому контейнеру(ам) факультативно может быть присоединено уведомление в форме установленной правительственным агентством, регулирующим производство, использование или реализацию фармацевтических или биологических продуктов, которое отражает одобрение агентством производства, использования или реализацию для введения человеку.

Настоящее изобретение может быть лучше понято при рассмотрении последующих неограничивающих примеров, которые предоставлены только в качестве иллюстраций изобретения. Последующие примеры представлены для более полной иллюстрации предпочтительных осуществлений изобретения. Однако они никоим образом не должны рассматриваться как ограничение более широкого объема изобретения.

6. Пример 1. Лечение Ьс1-2-антисмысловым олигонуклеотидом приводит к чувствительности злокачественной меланомы к химиотерапии

Данный пример демонстрирует успешное применение Ьс1-2-антисмыслового олигомера для лечения пациентов с прогрессирующей злокачественной меланомой. В данном исследовании шестерым пациентам, лечившимся Ьс1-2-антисмысловым олигомером, системно вводили олигомер в дозе от 5,3 до 6,5 мг/кг/сутки в течение 7 суток в комбинации с химическим средством. Факты, предоставленные в данном примере, демонстрируют, что когда Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводят в высоких дозах в течение короткого периода времени, лечение вызывает низкую токсичность при оценке по общим критериям токсичности, уменьшает количество Ьс1-2 в опухоли, содействует апоптозу, ведет к значимому ответу опухоли и пролонгирует выживаемость пациента. В число реагирующих на лечение были включены несколько пациентов с «резистентной к лечению злокачественной опухолью», у которых во время лечения стандартными противораковыми средствами наблюдалось прогрессирование заболевания, где лечение стандартными средствами, такими как дакарбазин, приводит к минимальному или нулевому эффекту. В противоположность этому, комбинированное лечение Ьс1-2-антисмысловым олигомером и дакарбазином вело к неожиданно стойким ответам и улучшало выживаемость. Более того, последующее исследование, в котором применялись более высокие дозы для более коротких периодов у пяти пациентов, показало достаточную переносимость, когда Ьс1-2-антисмысловой олигомер был системно введен в дозе от 7 мг/кг/сутки в течение 5 суток. Так данные результаты показывают, что введение Ьс1-2-антисмыслового олигомера в больших дозах в короткие промежутки времени является надежным и эффективным лечением меланомы. Подход, описанный в данном исследовании, предоставляет широко применимую стратегию для лечения других типов рака.

6.1. Материалы и способы

Четырнадцать пациентов с ΐν-й стадией метастазирующей меланомы были пригодными для этого исследования фазы Ι/ΙΙ с увеличением дозы, если у них было подлежащее оценке заболевание, если кожные метастазы были доступны для биопсии и являлись изначально позитивными на экспрессию Ьс1-2 путем вестерн-блоттинга. Пациенты должны были обладать нормальными почечными, печеночными и гематопоэтическими функциями и не должны были подвергаться химио- или иммунотерапии за четыре недели до включения в исследования.

Ьс1-2-антисмысловой олигомер (последовательность 5'-ТСТСССА6С6Т6С0ССАТ-3') вводился путем непрерывной внутривенной инфузии (СШ) 14 суток амбулаторным инфузионным насосом (81т§ Эсксс 1пс., 8ΐ. Раи1, ΜΝ, И8А) через центральную венозную линию. Используя отдельную линию периферической вены, был введен ЭТ1С в дозах 200 мг/м²/сутки путем одночасовой инфузии в течение 5 суток с 5 по 9 сутки лечения длительностью 14 суток Ьс1-2-антисмысловым олигомером. Циклы лечения повторялись ежемесячно. Увеличение дозы началось с 0,6 мг/кг/сутки и продолжалось с 1,3, 1,7, 2,1, 3,1

4,1, 5,3 и 6,5 мг/кг/сутки Ьс1-2 А80. Как только устанавливалась безопасность в группе по крайней мере из 3 пациентов, в испытание вводили новые группы пациентов с введением дозы более высокой концентрации (\Уа1сг5 с1 а1., 2000, 1. С1ш. Опсо1. 18 (9): 1812-23). Повторение циклов продолжительностью 28 суток и увеличение дозы, вводимой одному пациенту, разрешалось у стабильных или реагирующих пациентов после двухнедельного периода наблюдения.

Для получения клинических данных с другим путем и графиком группе из шести пациентов в первом цикле вводили Ьс1-2-антисмысловой олигомер внутривенным вливанием, а в последующих циклах подкожным (8С) введением в дозе 5,3-6,5 мг/кг/сутки. Данные пациенты, которых лечили путем подкожного введения, получали одинаковую суммарную суточную дозу, вводимую путем двух подкожных инъекций в сутки в дни 1-7 в комбинации с 800 мг/м² ЭТЮ получаемого одночасовой инфузией на день 5.

Противоопухолевый эффект оценивали после каждого цикла лечения, применяя измерение циркулем и детальную фотодокументацию пациентов с кожными метастазами; висцеральные метастазы документировали и отслеживали путем томографического сканирования. Для классификации ответа опухоли

- 17 005424 применяли критерии \УНО. требующие последовательной документации, длящейся как минимум 4 недели. Полный ответ определяли как исчезновение детектируемых метастазов. Частичный ответ определяли как 50%-ое и более уменьшение измеряемых метастазов. Когда у пациентов обнаруживали множественные метастазы в одном органе, документировали как основу максимум 5 целевых повреждений, за ними следили для определения ответа. Увеличение участков метастазирования в подлежащем оценке заболевании больше чем на 25% или возникновение новых участков было определено как прогрессирующее заболевание. В дополнение, положение, когда диаметры повреждений-мишеней уменьшались менее чем на 50%, но более чем на 25%, были обозначены как малый ответ. Все другие ситуации были определены как стабильное заболевание. Выживаемость была оценена от времени первого лечения по данному протоколу.

Токсичность определяли по общим критериям токсичности и контролировали ежедневно в течение введения лекарственного средства, затем еженедельно между циклами. Любая связанная с лечением токсичность III или IV степени, которая не проходила за две недели между циклами лечения рассматривалась как лимитирующая дозу токсичность. Образцы плазмы для определения фармакокинетики Ьс1-2антисмыслового олигомера собирали со времени 0 до лечения, затем в дни 2, 3, 5, 6, 10 и 14 у пациентов, получавших двухнедельную внутривенную инфузию Ьс1-2 А8О; у пациентов, получавших Ьс1-2антисмысловой олигомер путем болюсной инъекции в область живота, был определен 12-часовой профиль фармакокинетики. Концентрация Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме была определена по Рйагтаиа1у!, Вабеп, Аийпа, с применением НРЬС (С1еп е! а1., 1997, 1. С1гота!одг. В. Вютеб. 8сг Арр1. 692: 43-51).

Экспрессия Ьс1-2 и степень апоптоза метастазов меланомы оценивали вестерн-блоттингом и способом ΤυΝΕΕ, соответственно (Тиъеп е! а1., 1998, №11. Меб. 4 (2): 232-4). Уменьшение Ьс1-2 менее чем на 20% в сравнении с исходным уровнем, рассматривалось как незначимое, вследствие технических ограничений. Опухоли, подвергавшиеся биопсии, выбирали, основываясь на размере, местоположении и клинических свойствах подобно повреждениям-мишеням, использовавшихся для измерения ответа. Вырезание биопсий метастазов кожной меланомы проводили на исходном уровне и на 5 сутки каждой концентрации дозы Ьс1-2-антисмыслового олигомера до введения ЭПС; дополнительные биопсии проводили до дня 14 цикла для документирования эффектов комбинированного лечения Ьс1-2-антисмысловым олигомером и ЭТЮ Суммарно было исследовано 2-4 биопсии опухоли у каждого пациента при каждой концентрации дозы. Часть биопсии опухоли, используемой для вестерн-блоттов и анализа ΤυΝΕΕ, была также охарактеризована с помощью обычной гистопатологии, для гарантии соответствующего содержания опухолевых клеток и ограничения эффектов смешения неопухолевых клеток в образце биопсии.

6.2. Результаты

Всего Ьс1-2-антисмысловым олигомером (от 0,6 до 6,5 мг/кг/сутки) в комбинации с ЭПС лечили 14 пациентов в соответствии с 2 схемами лечения (IV. или 8.С.), описанными выше.

Стационарные концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме наблюдались после первых суток непрерывной внутривенной инфузии и линейно увеличивались с вводимой дозой. Введение доз Ьс1-2-антисмыслового олигомера >1,7 мг/кг/сутки приводило к поддержанию его стойкой стационарной концентрации в плазме, составляющей свыше 1 мкг/мкл, причем определяемая концентрация в плазме была биологически активна на экспериментальных животных (Ваупаиб е! а1., 1997, 1. Рйагтасо1. Ехр. Тйег. 281: 420-7). При 6,5 мг/кг/сутки средняя стационарная концентрация в плазме 6,47 мкг/мл±8Э=2,51 мкг/мл была достигнута за 24 ч. Концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме при подкожной болюсной инъекции, вводимой дважды в сутки, были колоколообразными около 12 ч. Пик концентрации

8,6 мкг/мл±8Э=1,26 мкг/мл наблюдался через 3-4 ч после инъекции при подкожной дозе 3,25 мг/кг, введенной с 12-часовыми интервалами. Более чем 90% 12-часового периода в промежутке между подкожными введениями концентрации в плазме превосходили предписанную концентрацию в плазме, ассоциированную с биологической активностью, равную 1 мг/мл. Не наблюдалось изменений фармакокинетических свойств у пациентов, проходивших множественные циклы лечения; конкурирующее лечение ЭПС не влияло на стационарные концентрации Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме.

На исходном уровне экспрессия белка Ьс1-2 метастазами кожной меланомы (8е1хег е! а1., 1998,8 (3): 197-203; Сеггош е! а1., 1995, Ат. 1. Оегта1ора11ю1. 17: 7-11) была подтверждена вестерн-блоттингом у всех 14 пациентов, отобранных для данного исследования; серийные биопсии сопоставимых повреждений показали уменьшение концентраций белка Ьс1-2 в течение введения Ьс1-2-антисмыслового олигомера (табл. 1). У пациента 10 серийные образцы опухоли не оценивались вестерн-блоттингом ввиду отсутствия клеток меланомы в биопсии ткани. Максимальное уменьшение концентрации белка Ьс1-2 у пациентов, проходивших лечение непрерывной инфузией Ьс1-2-антисмыслового олигомера продолжительностью 14 суток, обычно наблюдалось на 5 сутки без дальнейшего уменьшения до 14 суток. 83% поддающихся оценке пациентов с концентрациями Ьс1-2-антисмыслового олигомера в плазме, превосходящими 1 мкг/мл (10 из 12 пациентов), показали четкое уменьшение экспрессии Ьс1-2 (табл. 1). Циклы лечения с дозами Ьс1-2-антисмыслового олигомера >1,7 мг/кг/сутки показали среднее уменьшение концентрации белка Ьс1-2 на 40% на 5 сутки.

- 18 005424

Увеличение апоптотических клеток в образцах опухоли после 5 суток лечения Ьс1-2антисмысловым олигомером определяли окрашиванием ΤϋΝΕΕ (увеличение от исходного уровня 0,85%, ±8Ό=0,47% до 3,17%, ±8Ό=1,16%) (фиг. 2В). Однако в биопсиях, взятых после апоптотических стимуляций (ЭТ1С), можно было наблюдать существенное увеличение апоптотической гибели клеток (фиг. 2С, 19,4% ±8Ό=4,2%). Комбинированное лечение Ьс1-2-антисмысловым олигомером и ЭТ1С хорошо переносилось до количества Ьс1-2-антисмыслового олигомера, равного 6,5 мг/кг/сутки включительно, без ограничивающей дозу токсичности (табл. 2).

Гематологические аномалии были слабыми или умеренными (степень Ι-ΙΙΙ, табл. 2) и следовали профилю значений низших пределов между циклами лечения, типичному для одного средства ΌΤΙΟ Ни один из пациентов не испытал фебрильной нейтропении или других основных видов гематологической токсичности. Анемия ΙΙ-ΙΙΙ степени, требующая переливания крови, наблюдалась в течение исследования у двух пациентов, но анемия у данных пациентов была представлена уже на исходном уровне, возможно вследствие предыдущего лечения. Лимфопения ΙΙ-ΙΙΙ степени наблюдалась в большинстве случаев, но без клинических последствий, таких как необычные вирусные или грибковые инфекции или другие клинические свидетельства иммуносупрессии, несмотря на повторение циклов, длящиеся у некоторых пациентов более одного года. Транзиторное увеличение частичного времени тромбопластина ΙΙ-ΙΙΙ степени наблюдалось у трех пациентов без клинических кровотечений.

Негематологические побочные эффекты перечислены в нижней части табл. 2. Дозы Ьс1-2антисмыслового олигомера выше 4,1 мг/кг/сутки были ассоциированы с транзиторной лихорадкой у большинства пациентов. Лихорадка обычно достигала 38°С на 2-3 сутки лечения и разрешалась или самостоятельно или введением ацетаминофена и продолжающимся введением антисмыслового олигомера. При концентрациях доз в диапазоне от 4,1 до 6,5 мг/кг/сутки у 4 пациентов наблюдали транзиторные повышения уровня трансаминазы и/или билирубина ΙΙ-ΙΙΙ степени; однако, причинной связи с Ьс1-2антисмысловым олигомером не установлено у всех пациентов, хотя двое пациентов страдали гепатитом и алкоголизмом, соответственно, и транзиторные аномалии функции печени наблюдались после ЭТЮ который также может вести к таким лабораторным изменениям. Аномалии функции печени обычно исчезали в течение 1 недели между циклами лечения и не рассматривались как клинически значимые или лимитирующие дозу. Дерматологические побочные эффекты включали транзиторные сыпи и крапивницы Ι степени у всех, кроме одного пациента, испытавшего крапивницу ΙΙ степени; эти дерматологические реакции реагировали на антигистаминные препараты и не препятствовали дальнейшему лечению. Накопляющейся токсичности не наблюдалось. Некоторые пациенты проходили до 10 циклов терапии без необходимости модификации планируемой схемы лечения.

Даже если токсичность была основной границей увеличения дозы данного испытания, противоопухолевая активность была выражена у 6 из 14 пациентов (43%, табл. 1) в ГУ стадии меланомы, включая ответы, наблюдавшиеся среди 12 пациентов, включенных в исследование после безуспешного системного лечения меланомы разными способами. Отмечены 1 СК, 2 РК и 2 МК с пролонгированной стабилизацией болезни длящейся более 1 года (табл. 1). У двух дополнительных пациентов также наблюдалась клиническая противоопухолевая активность со стабилизацией заболевания, отчетливо прогрессирующего до включения в исследование. Пациент 12 с большим метастатическим поражением в тазовых лимфатических узлах и в участке предшествующего кожного трансплантата размером более 5 см от исходного уровня показал быстрый ответ после 2 циклов и полный ответ после 4 циклов (табл. 1, фиг. 3). После 4 циклов лечения биопсия кожной области, которая была ранее позитивна на новообразование, показала только фиброз без меланомы (патологически полный ответ). Пациенты 2 и 3 характеризовались частичным ответом повреждений-мишеней и выживаемостью с отсутствием прогрессии в течение более одного года. В начале данного исследования у пациентов 2 и 3 наблюдалось прогрессирующее метастазирование, несмотря на предшествующее лечение карбоплатином с интерфероном (пациент 2) и ЭТК.' с ΙΕ-2 (пациент 3). Оба пациента 5 и 9 вступили в исследование с прогрессирующим метастатическим поражением, несмотря на системное лечение ЭТК.' с интерфероном или одним интерфероном, и у них развился малый ответ после лечения Ьс1-2 антисмысловым олигонуклеотидом с ЭТК.'. Ожидаемая средняя выживаемость превосходит как минимум один год у всех пациентов.

6.3. Заключение

Данный отчет демонстрирует безопасность и осуществимость лечения пациентов с раком антисмысловым лекарственным средством в сочетании с химиотерапией. Лечение Ьс1-2-антисмысловым олигомером хорошо переносилось, снижало содержание целевого белка в опухоли, содействовало апоптозу и вело к объективному ответу опухоли с пролонгируемой выживаемостью даже у пациентов, которые вступили в исследование после неудачного лечения другими видами терапии (табл. 1).

Основная цель настоящего исследования состояла в определении токсичности лечения Ьс1-2антисмысловым олигомером в сочетании с ЭТЮ Что касается негематологических побочных эффектов (табл. 2), то до уровня доз Ьс1-2-антисмыслового олигомера, равных 3,1 мг/кг/сутки, включая указанную дозу, в данном исследовании не отмечено никаких побочных эффектов, кроме описанных для лечения одним средством ЭТК.'. При дозах Ьс1-2-антисмыслового олигомера 4,1 мг/кг/сутки и выше в сочетании с

- 19 005424

БТ1С, наблюдалось транзиторное увеличение уровня трансаминазы и/или билирубина 11-111 степени (табл. 2). В данном исследовании аномалии функции печени ни лимитировали дозу, ни ассоциировались с побочными клиническими эффектами. Отмечены не лимитирующие дозу изменения аРТТ при дозах Ьс1-2-антисмыслового олигомера, составляющих от 5,3 мг/кг и выше.

Лимфопения также была самым частым побочным эффектом, наблюдаемым в данном исследовании. Лимфопения была клинически не значима, а также не было необычных инфекций у пациентов, лечащихся с помощью циклической терапии и наблюдавшихся более одного года. Напротив, наблюдали некоторый уровень тромбоцитопении при использовании различных лекарственных средств на основе фосфоротиокислоты, и данная токсичность лимитировала дозу в исследовании Ьс1-2-антисмыслового олигомера у пациентов с ΝΗΕ (\Уа1сг5 с1 а1., 2000, б. С1ш. Опсо1. 18 (9): 1812-23). Даже если данное исследование, сочетающее применение Ьс1-2-антисмыслового олигомера с химиотерапией, приводило к транзиторной миелосупрессии после введения БТ1С, и стационарные концентрации в плазме превышали те, что сообщали в исследовании ΝΗΕ, настоящие заявители не наблюдали лимитирующую дозу тромбоцитопению. В итоге, в данной популяции пациентов не наблюдались ни перекрывающиеся, ни кумулятивные ограничивающие дозу виды токсичности между БТ1С и Ьс1-2-антисмысловым олигомером.

Представленные данные демонстрируют, что биологически значимые стационарные концентрации в плазме (>1 мкг/мл) могут быть легко достигнуты при дозах Ьс1-2-антисмыслового олигомера от примерно 2 мг/кг/сутки до максимально переносимой дозы, которая не достигается при сочетании с химиотерапией ЭТК.’.

В недавнем осуществлении лечебных режимов, исследованных в данном испытании, Ьс1-2антисмысловой олигомер вводили внутривенно путем инфузии (7 мг/кг/сутки) в течение 5 суток расширенной группе (5 пациентов) перед введением 1000 мг/м² БТ1С в каждом цикле длительностью 21 сутки, и это характеризовалось удовлетворительной переносимостью.

Таким образом, данные результаты означают, что Ьс1-2-антисмысловой олигомер может безопасно вводиться в комбинации с противораковым лекарственным средством для лечения рака в клинических условиях. Результаты отличаются от ранее опубликованных данных, описывающих биологическую активность и клинический ответ при инфузии в течение 14 суток только путем непрерывной подкожной инфузии (\Уа1сг5 с1 а1., 2000, б. С11п. Опсо1. 18 (9): 1812-23), так как описанные здесь результаты показывают, что множественные способы введения (внутривенная инфузия, многодневная подкожная инъекция) и более короткие программы введения из 5-7 суток могут также приводить к биологической активности С3139 и клиническому ответу. У реагирующих пациентов вскоре наблюдалась начальная противоопухолевая активность в течение 2-3 циклов. Большинство пациентов вступили в исследование с прогрессирующим метастатическим поражением после неудачного лечения содержащими БТ1С схемами или после стандартного лечения метастазирующей меланомы. Тем не менее, противоопухолевые ответы были отмечены у 6 из 14 пациентов (43%) и у двух дополнительных пациентов наблюдали стабилизацию заболевания. Ожидаемая средняя выживаемость всех пациентов превышает 12 месяцев. Данные начальные результаты благоприятно отличаются от незначительных степеней ответа и средних времен выживаемости, приблизительно 4-5 месяцев, наблюдаемых у пациентов с развитой меланомой после неудачного лечения первоочередной системной терапией.

Таблица 1

Краткий обзор исследования
№ пациента	Возраст/ Пол	Дата первого диагноза	Метастазы меланомы	Стадия опухоли	Первичное лечение	ВСЬ-2 АЗО (мг/кг/сутк и)	Мах. % снижения ВСЬ-2	Ответ	Выживание (месяцы)
1	49/Ж	8/95	ίΝΝ,кожа	IV	БТ1С,ΙΓ,ΚΤ,Η ЕР	0, 6	0	РБ	6, 6
2*	41/Ж	3/95	Кожа	IV	ср, ΙΓΝ-α, КТ,ΗΕΡ	0,6-6,5	40	РК	20, 5
3*	69/М	6/94	ΣΝΝ,кожа	IV	БТ1С,1Ь-2, ом-сзг	0, 6-6,5	40	РК	23,3+
4	52/М	5/98	ΣΝΝ,кожа	IV	БТ1С,ΙΓΝ-α	0,6-4,1	35	мк	13, 7
5	63/Ж	1/92	Кожа	IV	БТ1С,ΙΓΝ-α	3,1-4,1	20	мк	5, 1
6	56/М	8/96	Легкие, кожа	IV	БТ1С,ΙΓΝ-α	3,1-5,3	60	РБ	2,4
7	61/Ж	5/97	Легкие, печень, кожа	IV	БТ1С,ГОТ	4,1	20	РБ	7,1
8*	60/Ж	3/95	Кожа	IV	ΙΓΝ-α,кт	5,3-6, 5	60	Стойкий	15,3 +
9*	75/Ж	6/98	ΕΝΝ,кожа	IV	ΙΓΝ-α	5,3-6,5	60	МК	15,3+
10	44/Ж	4/86	1ΝΝ,кожа	IV	ΙΓΝ-α	6,5	Ν.Α.	РБ	14,4 +
11	63/М	4/97	Легкие, кожа	IV	ΙΓΝ-α, СР,С13	6, 5	0	РБ	12,5 +
12*	90/Ж	7/94	ίΝΝ,кожа	IV	НЕТ	6,5	70	СК	12,5 +
13*	67/М	6/96	Легкие, кожа	IV	НЕТ	6, 5	0	РБ	1,1
14	76/М	4/99	Легкие, кожа	IV	ΙΓΝ-α	6,5	40	Стойкий	7,8
СР=карбоплатин, С13=цисплатин, ГОТ=фотемустин, НЕР=гипертермическая экстремальная перфузия, ΙΓΝа=интерферон α, ΝΑ=ηθ применялось, КТ=облучение. Было проведено суммарное число из 47 циклов ВСЬ-2 АЗО плюс БТ1С. * Пациенты, получившие также ВСЬ-2 АЗО подкожно в дозах от 5,3 до 6,5 мг/кг/сутки, введенные после начальных внутривенных циклов лечения. + Период наблюдения продолжается.

- 20 005424

Таблица 2

Побочные эффекты во время лечения

Обычная шкала критериев токсичности
	Число пациентов
	0	1	2	3	4
Гематологические проявления
Анемия	12			2
Лейкопения	7	2	3	2
Нейтропения	10	2	2
Лимфопения	1	1	7	5
Тромбоцитопения	8	4	2
Коагуляция	3	8	2	1
Негематологические проявления
Сердечно-сосудистые	14
Легочные	14
Почечные	14
Желудочно-кишечные	9	5
Печеночные (ЗСОТ, билирубин)	1	7	2	4
Неврологические (Головная боль)	11	3
Дерматологические	9	4	1
Лихорадка	7	1	6

Проявления приведены вне зависимости от взаимосвязи с терапией Ьс1-2А8О.

7. Пример 2. Корреляционное исследование фазы I, фармакокинетики и биологических зависимостей применения С3139 (Ьс1-2-антисмыслового олигомера) и доцетаксела у пациентов с невосприимчивым к гормонам раком предстательной железы

Данный пример демонстрирует успешное применение Ьс1-2-антисмыслового олигомера для лечения пациентов с невосприимчивым к гормонам раком предстательной железы, который устойчив к антиандрогенному лечению и цитотоксической химиотерапии, Ьс1-2-антисмысловой олигомер был системно введен в дозе 5-7 мг/кг/сутки пять суток в сочетании с химическим средством. Данное исследование предоставляет данные о двух пациентах, которых лечили Ьс1-2-антисмысловым олигомером и химическим средством, отвечавших на лечение. Полученные данные, описываемые в данном примере, демонстрируют, что когда Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводится в высоких дозах короткий период времени, лечение проявляет низкую токсичность, хотя демонстрирует объективные клинические реакции. Подход, описанный в данном исследовании, предоставляет широко применимую стратегию для лечения других типов рака.

7.1. Материалы и способы

В данном исследовании 03139 вводили путем непрерывной внутривенной инфузии пять суток на цикл при цикле лечения в 1-6 сутки с последующим внутривенным введением доцетаксела на 6 сутки. Курсы повторяли каждые 21 сутки. Одиннадцать пациентов с невосприимчивым к гормонам раком предстательной железы получили до трех концентраций доз в диапазоне от 5 мг/кг/сутки 03139 с 60 мг/м² доцетаксела до 7 мг/кг/сутки 03139 с последующими 75 мг/м² доцетаксела.

7.2. Результаты

Основные виды токсичности были сходны с таковыми при применении только доцетаксела. Один пациент, подвергавшийся интенсивному предварительному лечению, испытывал продолжительную (>5 суток) неосложненную нейтропению 4-й степени. Другие виды токсичности включают 1 степень стоматита у трех пациентов и фебрильную нейтропению в течение 2 курса у одного пациента. Предварительные результаты фармакокинетики (ИРЬС) показывают средние стационарные концентрации в плазме 3,09 мкг/мл при концентрации дозы 5 мг/кг/сутки. Предварительные анализы проточной цитометрии и вестерн-блотта показали >50% понижающую регуляцию Ьс1-2-антисмыслового олигомера на 6 сутки в мононуклеарных клетках периферической крови до лечения доцетакселом. Антиген, специфичный для предстательной железы, и симптоматические реакции, включающие девятикратное уменьшение антигена, специфичного для предстательной железы, длящиеся дольше, чем больший из циклов, наблюдались у 2 из 3 поддающихся оценке пациентов, не принимавших ранее таксан.

- 21 005424

7.3. Заключение

03139 можно безопасно вводить в сочетании с доцетакселом и, как показывают данные результаты, сочетание обладает значимыми терапевтическими эффектами при лечении рака. Результаты отличаются от опубликованных ранее данных, показывающих биологическую активность и клинические реакции при инфузии в течение 14 суток, вводимой путем непрерывной подкожной инфузии (Аа1сгк с! а1., 2000, I. С1т. Опсо1. 18 (9): 1812-23), так как описанные здесь результаты показывают, что более короткие программы введения (5 суток) могут также вести к биологической активности 03139 и клиническим реакциям. Лечение 03139 является биологически активным в течение 5 суток введения, что показывается эффективной понижающей регуляцией белка Ьс1-2 в мононуклеарных клетках периферической крови, и имело у пациентов с невосприимчивым к гормонам раком предстательной железы поддерживающую предварительную противоопухолевую активность.

8. Пример 3. Фаза I испытания ΟΕΝΑ8ΕΝ8Ε™ (03139), Ье1-2-антисмыслового олигонуклеотида, при устойчивом или рецидивирующем остром лейкозе

Данный пример показывает успешность применения Ьс1-2-антисмыслового олигомера для лечения пациентов с острым лейкозом. Ьс1-2-антисмысловой олигомер вводили системно в дозе 4 мг/кг/сутки в сочетании с двумя химическими средствами в течение 10 суток. В соответствии с данным исследованием пять из десяти пациентов, прошедших лечение Ьс1-2-антисмысловым олигомером и химическим средством, отвечали на лечение. Более того, ответы были также отмечены у пациентов, которым вводили флударабин и цитозин-арабинозид в дозах меньших, чем нормальные стандартные дозы, применяющиеся в лечении лейкоза и других видов рака. Факты, изложенные в данном примере, показывают объективные клинические ответы, получаемые при введении Ьс1-2-антисмыслового олигомера в короткий период времени.

8.1. Материалы и способы

03139 (4 мг/кг/сутки) вводили пациентам (всего 10 пациентов) на 1-10 сутки, тогда как флударабин (начиная с уменьшенной дозы 15 мг/м²), арабинозид цитозина (Ага-С) (начиная с уменьшенной дозы 1000 мг/м²) и О-С8Б (ББАО) вводили на 6-10 сутки цикла лечения и увеличивали в успешной группе. Нормальная схема комбинации ББАО включает в 2 раза большие дозы флударабина и Ага-С, чем дозы, применявшиеся в данном исследовании.

Пациенты Возраст/ пол	Ох&Статус Рге-63139	Время до ВЕЬ (м)1	Предыдущая схема	Предшествующие ΗϋΑΟ2	Ответ	Статус заболевания (сут)3
69/Ж	Первичная КЕЕ АЬЬ	ΝΑ4	1	Нет	СК5	ΝΕϋ8 (53)
55/Ж	Первичная КЕЕ АМЬ	ΝΑ	3	Да	СВ	ВЕЬ (142)
57/Ж	2 ВЕЬ АМЬ	12	2	Да	СВ	ΝΕϋ (111)
23/М	1 ВЕЬ АМЬ	3	1	Да	РКб	ВЕЬ (83)
61/Ж	1 ВЕЬ АМЬ	7	1	Нет	РВ	ΝΕϋ (76)
54/М	Первичная КЕЕ АМЬ	ΝΑ	1	Нет	ΝΒ7	ВЕЕ
61/Ж	1 ВЕЬ АМЬ	6	2	Нет	ΝΒ	ВЕЕ
73/Ж	2 ВЕЬ АМЬ	8	2	Да	ΝΒ	ВЕЕ
39/М	2 ВЕЬ АМЬ	3	2	Да	ΝΒ	ВЕЕ
55/Ж	2 ВЕЬ АМЬ	6	3	Да	ΝΒ	ВЕЕ

¹ (м), месяцы после СК;

² высокие дозы Ага-С;

³ (сут), сутки после начала применения 03139;

⁴ ХА, не применимо;

⁵ СК, полный ответ;

⁶ РК, частичный ответ;

⁷ ХК, отсутствие ответа;

⁸ ΝΕΏ, нет признаков заболевания; КЕР, устойчивость; КЕБ, рецидив.

8.2. Результаты

Связанная с лечением лихорадка, тошнота, рвота, гипокальцинемия, гипофосфатемия и задержка жидкости не лимитировали дозу. Гематологические виды токсичности соответствовали ожидаемым. Стационарные концентрации 03139 в плазме, превосходившие релевантную концентрацию-мишень (1 мкг/мл), достигались через 24 ч. У трех пациентов имел место полный ответ, и они получили второй курс лечения; у двоих не наблюдалось признаков заболевания на 53 и 111 сутки. У двух пациентов отсутствовали признаки заболевания, но наблюдалась устойчивая нейтропения/тромбоцитопения на 52 и 55 сутки;

- 22 005424 у одного из них не наблюдали признаков заболевания без признаков заболевания на 76 сутки. Три из пяти отвечающих пациентов проходили лечение высокими дозами Ага-С, и поэтому то, что был отмечен мощный ответ на применение другой комбинированной программы с Ага-С, описанной в данном исследовании, особенно с использованием меньших доз, чем в предыдущих лечебных режимах, было неожиданным.

8.3. Заключение

Результаты указывают, что 03139, продемонстрировавший в данном исследовании 50%-ную степень ответа, включая пациентов с устойчивым острым лейкозом, ранее проходивших лечение высокими дозами Ага-С, подходит для добавления к схемам многоцикловой индукции для острого лейкоза. Сильные реакции также наблюдались при применении доз с более низкими, чем обычно концентрациями флударабина и Ага-С в схемах комбинирования с Ьс1-2-антисмысловым олигомером.

Все цитируемые здесь ссылки особо включены сюда в качестве ссылок так, как если бы были приведены здесь полностью.

Располагая описанными здесь выше типовыми осуществлениями, специалисты в данной области отдают себе отчет в том, что данное описание является лишь примером, поскольку в объем изобретения входят его различные альтернативы, адаптации и модификации, предполагаемые настоящими заявителями. Соответственно, настоящее изобретение не ограничено конкретными, проиллюстрированными выше осуществлениями, но определено следующей формулой изобретения.

Claims (33)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения или профилактики рака у человека, включающий введение указанному человеку, которому требуется такое лечение или профилактика, Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида в дозе, составляющей 0,01-50 мг/кг ежедневно в одном или более циклах лечения, каждый из которых составляет 2-13 дней.
2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что каждый цикл лечения составляет 3-9 дней.
3. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что каждый цикл лечения составляет 4-7 дней.
4. 4. Способ по любому из пп.1-3, включающий введение 4-9 мг/кг в день Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида.
5. 5. Способ по любому из пп. 1-3, включающий введение 5-7 мг/кг в день Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида.
6. 6. Способ по п.1, включающий дополнительное введение одного или более противораковых терапевтических средств.
7. 7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что введение противоракового терапевтического средства следует после введения Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида.
8. 8. Способ по п.6, отличающийся тем, что введение противоракового терапевтического средства предшествует введению Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида.
9. 9. Способ по п.6, отличающийся тем, что противораковое терапевтическое средство вводят одновременно с Ьс1-2-антисмысловым олигонуклеотидом.
10. 10. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанное противораковое терапевтическое средство представляет собой химическое средство, средство радиационной терапии, средство иммунотерапии, противораковую вакцину, антиангиогенное средство, цитокин, средство гемотерапии, или гормональное средство.
11. 11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанное химическое средство представляет собой дакарбазин, доцетаксел, паклитаксел, цисплатин, 5-фторурацил, доксорубицин, этопозид, циклофосфамид, флударабин, иринотекан или цитозин-арабинозид (Ага-С).
12. 12. Способ по п.6 или 10, отличающийся тем, что указанное противораковое терапевтическое средство вводят в сниженной дозе.
13. 13. Способ по любому из пп.1-3 или 6, отличающийся тем, что указанное введение осуществляется перорально, путем внутривенной инфузии, подкожной инъекции, внутримышечной инъекции, местно, путем инъекции депо препарата, путем имплантации, способом с замедленным высвобождением, путем внутриполостного, интраназального, ингаляционного, внутриопухолевого или внутриглазного введения.
14. 14. Способ по любому из пп.1-3 или 6, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой рак кроветворной системы, кожи, костной ткани и мягких тканей, репродуктивной системы, мочеполовой системы, молочной железы, эндокринной системы, мозга, центральной нервной системы, периферической нервной системы, почек, легких, дыхательной системы, грудной клетки, желудочно-кишечного и пищеварительного тракта, лимфатических узлов, поджелудочной железы, гепатобилиарной системы или рак неизвестного места первичного образования.
15. 15. Способ по любому из пп.1-3 или 6, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, лейкоз, карциному толстого кишечника, карциному прямой кишки, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак яичника, рак предстательной железы, почечно-клеточную карциному, гепатому, карциному желчных протоков, хориокарциному, рак шейки матки, рак яичка, карциному легких, карциному мочевого пузыря, меланому, рак шеи и головы или мозга.
16. 16. Способ по любому из пп.1-3 или 6, отличающийся тем, что Ьс1-2-антисмысловой олигонуклеотид состоит из 10-35 оснований и комплементарен пре-мРНК или мРНК, кодирующей ген Ьс1-2.
17. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что антисмысловой олигонуклеотид включает по крайней мере две связи на основе фосфоротиокислоты.
18. 18. Способ по п.17, отличающийся тем, что антисмысловой олигонуклеотид включает последовательность ТСТСССА6С6Т6С6ССАТ (8ΕΟ Ш ^:17).
19. 19. Способ лечения или профилактики рака у человека, включающий введение указанному человеку, которому требуется такое лечение или профилактика, одного или более химических средств и Ьс1-2антисмыслового олигонуклеотида, который вводят в дозе, составляющей 0,01-50 мг/кг ежедневно в одном или более циклах лечения, каждый из которых составляет 2-13 дней, при этом химическое средство представляет собой дакарбазин, доцетаксел, паклитаксел, цисплатин, 5-фторурацил, доксорубицин, этопозид, циклофосфамид, флударабин, иринотекан или цитозин-арабинозид (Ага-С).
20. 20. Способ по п.19, отличающийся тем, что химическое средство вводят в дозе ниже эффективной дозы, когда химическое средство вводят без Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида.
21. 21. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанное химическое средство представляет собой паклитаксел в дозе, составляющей 10-135 мг/м²/цикл.
22. 22. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанное химическое средство представляет собой доцетаксел в дозе, составляющей 6-60 мг/м²/цикл.
23. 23. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанное химическое средство представляет собой флударабин в дозе, составляющей 2,5-25 мг/м²/цикл.
24. 24. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанное химическое средство представляет собой иринотекан в дозе, составляющей 5-50 мг/м²/цикл.
25. 25. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики рака у человека, включающая Ьс1-2-антисмысловой олигонуклеотид и фармацевтически приемлемый носитель, при этом композицию

    - 30 005424 используют для обеспечения Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида в дозе, составляющей 0,01-50 мг/кг ежедневно в одном или более циклах лечения, каждый из которых составляет 2-13 дней.
26. 26. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики рака у человека, включающая Ьс1-2-антисмысловой олигонуклеотид и фармацевтически приемлемый носитель, при этом композицию используют для обеспечения Ьс1-2-антисмыслового олигонуклеотида в дозе, составляющей 10-50 мг/кг ежедневно в одном или более циклах лечения, каждый из которых составляет 2-13 дней.
27. 27. Фармацевтическая композиция по п.25 или 26, отличающаяся тем, что антисмысловой олигонуклеотид состоит из 10-35 оснований и комплементарен пре-мРНК или мРНК Ьс1-2.
28. 28. Фармацевтическая композиция по п.27, отличающаяся тем, что антисмысловой олигонуклеотид включает по крайней мере две связи на основе фосфоротиокислоты.
29. 29. Фармацевтическая композиция по п.28, отличающаяся тем, что антисмысловой олигонуклеотид включает последовательность ТСТСССАСССТСССССАТ (8Ер ГО N0:17).
30. 30. Фармацевтическая композиция по п.25 или 26, дополнительно включающая одно или более противораковых терапевтических средств.
31. 31. Фармацевтическая композиция по п.30, отличающаяся тем, что антисмысловой олигонуклеотид состоит из 10-35 оснований и комплементарен пре-мРНК или мРНК Ьс1-2.
32. 32. Фармацевтическая композиция по п.31, отличающаяся тем, что антисмысловой олигонуклеотид включает по крайней мере две связи на основе фосфоротиокислоты.
33. 33. Фармацевтическая композиция по п.32, отличающаяся тем, что антисмысловой олигонуклеотид включает последовательность ТСТСССАССОТСССССАТ (8Ер ГО N0:17).