MX2011005776A - Control efectivo de enfermedades virales de plantas con cepas de pseudomonas oleovorans. - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona al control efectivo de la enfermedad viral de la planta que utiliza cepas de Pseudomonas oleovorans. Los agentes biológicos de la presente invención que incorporan cepas de Pseudomonas oleovorans proporcionan protección excelente contra las infecciones virales de la planta mediante virus de mosaico de tabaco, potyvirus, virus tenuyi, virus de mosaico koo-koo y virus del mosaico bego.

Description

CONTROL EFECTIVO DE ENFERMEDADES VIRALES DE PLANTAS CON CEPAS DE PSEUDOMONAS OLEOVORANS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona a una cepa de Pseudo onas oleovorans que tiene una actividad de control contra enfermedades virales de plantas ; y un agente microbiano para controlar enfermedades virales de plantas que comprende la misma.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El área de cultivo total de los cultivos de jardín se ha incrementado cada año, sin embargo, varias enfermedades virales de plantas se han suscitado en la mayoría de los cultivos de jardín, resultando en un serio daño económico.

Los virus de plantas dañan a los cultivos de jardín incluyendo el virus del mosaico de Pepino (CMV) , virus del mosaico de Tabaco (TMV) y virus Y de la papa (PVY) . Para controlar estos virus, los métodos de control agronómicos tales como aquellos que utilizan semillas libres de enfermedades y la reproducción novedosa de cultivos resistentes a los virus se han desarrollado, aunque los efectos por consiguiente son insignificantes.

Mientras tanto, las plantas transgénicas resistentes a los virus se han desarrollado mediante la introducción de un gen, tal como un gen de proteína de revestimiento, un gen asociado con la replicación, un gen de RNA satelital y un gen antisentido en las plantas, pero esto tomará más tiempo para lograr un éxito industrial (Fitchen, J.H and Beachy, R. N. , Annu. Rev. Microbiol . , 47:739-763, 1993) .

Recientemente, se han realizado muchos estudios para desarrollar agentes microbianos novedosos utilizando microorganismos para controlar los virus de plantas . Especialmente, los agentes microbianos son medios amigables con el ambiente que son capaces de preservar el ecosistema natural y no presentan toxicidad en los mamíferos y, por tanto , incrementa la demanda para agentes microbianos .

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Por consiguiente, es un objeto de la presente invención proporcionar un microorganismo efectivo para controlar enfermedades virales de plantas, y un agente microbiano que comprende el mismo.

De acuerdo con el objeto anterior, la presente invención proporciona Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) que tiene una actividad de control contra las enfermedades virales de plantas; un cultivo del mismo; un polvo seco del cultivo, y un agente microbiano para controlar las enfermedades virales de plantas que comprende la cepa, un cultivo del mismo, o un polvo seco del cultivo como un ingrediente activo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los objetos anteriores y otras características de la presente invención se volverán aparentes a partir de la siguiente descripción de la invención, cuando se tomen junto con los dibujos anexos, en los cuales, se muestran respectivamente : Figura 1: El árbol filogenético de la cepa KBPF- 004; Figura 2 : La actividad de control de la dilución de 1,000 veces de la KBPF-004 25% de polvo humectable (WP) contra el virus del mosaico de tabaco; Figura 3: El efecto de inhibición del KBPF-004 25% de WP contra el virus del mosaico de tabaco confirmado por RT-PCR; Figura 4: El efecto de inhibición del KBPF-004 25% de WP contra la infección simple o múltiple de virus confirmada por RT-PCR (C: pimiento rojo de Chungyang; D: pimiento de Daemyung; M: marcador de tamaño; H: planta saludable; N: grupo sin tratar; y 1, 2: Grupos KBPF-004 tratados) ; Figura 5: La fotografía de las partículas de virus tratadas con KBPF-004 25% de WP confirmada por microscopía electrónica (TMV: Virus del mosaico de tabaco, y PVY: Virus Y de la papa) ; Figura 6 : El efecto de inhibición de la infección de KBPF-004 25% de WP contra el virus del mosaico de tabaco; Figura 7: El efecto de control de KBPF-004 25% de WP contra el virus moteado del pimiento; Figura 8: El efecto de control del KBPF-004 25% de WP contra el virus del rayado del arroz (A: Grupo sin tratar, y B: Diluido 500 veces KBPF-004 25% de WP grupo tratado); Figura 9: El efecto de control del KBPF-004 2.5% de gránulos contra el virus del mosaico de tabaco; y ?^?? Figurá 10: El efecto de control del KBPF-004 70% de suspensiones acuosas (AS) contra el virus del rizado de hoja amarilla del tomate (A: no tratados (grupo tratado con insecticida comercial) ; y B: La dilución de 500 veces de KBPF-004 70% de suspensiones acuosas y el grupo tratado con insecticida comercial).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona Pseudomonas oleovorans de la cepa KBPF-004 (KCTC 10159BP) que tiene una actividad de control contra las enfermedades virales de las plantas .

Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) forman colonias redondas amarillas que tienen tiras pectinadas en el contorno. La cepa se configura como un bastoncillo de 2~3 um de longitud y 0.3~0.5 um de ancho, y tiene un solo flagelo largo.

La cepa inventiva tiene 16S rDNA de 1,479 pb de secuencia de nucleótidos representada por la SEQ ID NO: 1, que tiene 99.05% de homología de secuencia a aquella de las Pseudomonas oleovorans IAM 1508T. La posición taxonómica de la cepa inventiva fue investigada al construir un árbol filogenético (Figura 1) de acuerdo con el método Clustal (Thompson JD et al, Nuc Acid Res. 25: 4876-82, 1997).

La cepa inventiva es diferente de las cepas Pseudomonas oleovorans existentes en términos de sus actividades antivirales específicas.

Por lo tanto, la cepa fue designada como Pseudomonas oleovorans KBPF-004, y depositada el 11 de enero de 2002 en la Colección Coreana para Cultivos Tipo (KCTC) bajo el número de acceso de KCTC 10159BP.

La presente invención también proporciona un cultivo de Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) efectivo para controlar las enfermedades virales de plantas.

El cultivo puede prepararse al inocular las células Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) en un medio y someterlo a una fermentación.

El medio puede comprender ingredientes convencionales de un medio para el cultivo de bacterias gram negativas, sin ninguna limitación. Preferiblemente, el medio puede comprender 1 g a 20 g de glucosa, 1 g a 30 g de extracto de levadura, 0.1 g a 1 g de sulfato de magnesio, 0.5 g a 5 g de fosfato diácido de potasio y 0.5 g a 5 g de fosfato monoácido de potasio basados en un 1 l de agua. Más preferiblemente, el medio puede comprender 7 g a 14 g de glucosa, 15 g a 25 g de extracto de levadura, 0.1 g a 0.2 g de sulfato de magnesio, 1 g a 2 g de fosfato diácido de potasio y 1 g a 2 g de fosfato de monoácido de potasio con base en 1 í de agua.

La fermentación puede conducirse a una temperatura de 20°C a 40° C, de preferencia, 26°C a 34°C, con un índice de aireación de 50 í/min a 200 1/ min, de preferencia, 100 í/min a 120 í/min y una velocidad de rotación de 100 rpm a 250 rpm, de preferencia 120 rpm a 200 rpm. Con el fin de preparar el agente microbiano inventivo, se prefiere emplear las células de cepa y filtrados de cultivo.

Además, la presente invención proporciona un polvo seco del cultivo.

El polvo seco puede prepararse por las etapas de esterilización, concentración y pulverización ( liofilización y trituración) .

La etapa de esterilización puede conducirse al calentar el cultivo celular, al completar el cultivo, a una temperatura de 80°C a 120°C durante 1 a 20 minutos, de preferencia, de 90°C a 100°C durante 5 a 10 minutos.

La etapa de concentración puede conducirse al concentrar el cultivo esterilizado bajo una presión reducida a una temperatura de 40°C a 80°C durante 12 a 48 horas, de preferencia, de 65°C a 75°C durante 24 a 36 horas.

La etapa de pulverización puede conducirse, pero no limitarse a, al sujetar el cultivo concentrado para el proceso de secado al liofilizar o secado por aspersión, y después triturándolo para preparar un cultivo en polvo.

El proceso de liofilización puede conducirse al secar el cultivo concentrado aumentando secuencialmente a una temperatura de inicio de -80°C durante 48 a 96 horas, de preferencia, de 60 a 80 horas.

El proceso de trituración se conduce al moler los productos liofilizados resultantes utilizando una trituradora de molino de púas que tiene un tamaño de partícula de 2 mm o menor .

Un agente microbiano puede prepararse al formular las células, el cultivo o el polvo seco del cultivo en combinación con tensoactivos , nutrientes, y portadores.

Además, la presente invención proporciona un agente microbiano para controlar las enfermedades virales de plantas que comprenden células Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) , un cultivo de las mismas, o un polvo seco del cultivo como un ingrediente activo.

El agente microbiano para controlar enfermedades virales de plantas exhibe una actividad antiviral que depende de la concentración del ingrediente activo.

El agente microbiano de la presente invención puede comprender 2.5 a 70% en peso de células Pseudomonas oleovorans BPF-004 (KCTC 10159BP) , el cultivo del mismo, o el polvo seco del cultivo; 2 a 30% en peso de un tensoactivo; y una cantidad residual de un portador. De preferencia, el agente microbiano de la presente invención puede comprender 2.5 a 70% en peso de células Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) , el cultivo del mismo, o el polvo seco del cultivo .

Los tensoactivos pueden incluir un tensoactivo aniónico, un tensoactivo no iónico, o una mezcla de los mismos. Los tensoactivos pueden seleccionarse del grupo que consiste de sales de sodio o calcio de los compuestos de sulfonato tales como alquilarilsulfonato de C8-i2, dialquilarilsulfonato de Cs-i2 dialquilsulfosuccinato de C8-i2, sulfonato de lignina, condensados de naftalensulfonato, condensados de naftalensulfonato de formalina, condesados de alquilnaftalensulfonato de formalina de C8-i2 y alquilfenilsulfonato de Cg-i2 de polioxietileno; sales de sodio o calcio o compuestos de sulfato, tal como alquilsulfato de C8_i2, alquilarilsulfato de C8-i2/ alquilsulfato de C8-i2 de polioxietileno y alquilfenilsulfato de C8-i2 de polioxietileno; sales de sodio o calcio o compuestos de succinato tal como polioxialquilensuccinato; tensoactivos aniónicos, tales como benzoato de sodio y carboxilato de alquilo; tensoactivos no iónicos tales como alquiléter de C12-1B de polioxietileno, alquilfeniléter de C8-i2 de polioxietileno, alquilfenilpolímeros de Ca-i2 de polioxietileno y copolímeros de etilenóxido-propilenóxido; policarboxilato ; Tritón® 100, Tween® 80, y mezcla de los mismos, pero sin limitarse a los mismos.

Los portadores pueden seleccionarse del grupo que consiste de bentonita, talco, arcilla, caolín, carbonato de calcio, sílice, piedra pómez, tierra de diatomeas, bolo blanco acídico, zeolita, perlita, carbono blanco, sulfato de amonio, urea, glucosa, dextrina, agua, y una mezcla de los mismos, pero sin limitarse a los mismos.

También, el agente microbiano de la presente invención puede formularse al utilizar los tensoactivos y/o portadores en una forma seleccionada del grupo que consiste de polvos humectables (WP) , gránulos dispersables en agua (WG) , concentrados de suspensión (SC) , gránulos, suspensiones acuosas (AS) , polvos solubles (SP) , gránulos solubles en agua (SG) , cápsulas .

En la presente invención, las células o el cultivo pueden suministrarse en la forma de un agente microbiano para controlar las enfermedades virales de las plantas que comprenden la misma, o en una forma de almacenamiento por separado para un almacenaje a largo plazo y para mezclarla con otros ingredientes antes de su uso. Para el almacenamiento a largo plazo, las células o cultivos pueden almacenarse en una solución de almacenaje de glicerol por debajo de -70°C, o en una forma liofilizada.

El polvo humeetable, una forma del agente microbiano proporcionado en la presente invención, puede prepararse al obtener un polvo seco o el cultivo por un proceso de tratamiento posterior; agregando los tensoactivos , nutrientes y portadores de los mismos; y mezclándolos.

Los gránulos , una forma del agente microbiano proporcionado en la presente invención, pueden prepararse al obtener un polvo seco del cultivo mediante un proceso de tratamiento posterior, agregar los tensoactivos, portadores y agentes desintegrantes del mismo, y mezclarlos. El agente desintegrante útil en la presente invención puede seleccionarse del grupo que consiste de bentonita, talco, dialita, caolín, carbonato de calcio y una mezcla de los mismos.

Los gránulos además pueden comprender un ingrediente seleccionado del grupo que consiste de agentes tensoactivos, portadores inactivos, conservadores, agentes humectantes, agentes que promueven el suministro, agentes de atracción, encapsulantes , aglutinantes, emulsificantes , colorantes, protectores de UV, agentes reguladores o agentes de flujo, además de células microbianas y/o los productos de fermentación (el cultivo del microorganismo) .

Las suspensiones acuosas, una forma del agente microbiano proporcionado en la presente invención, pueden prepararse al concentrar en forma estéril el cultivo por un proceso de tratamiento posterior; agregar un ingrediente seleccionado del grupo que consiste de tensoactivos , conservadores, agentes humectantes, agentes que promueven el suministro, agentes de atracción, protectores de UV y agentes reguladores de los mismos; y mezclas de los mismos.

El agente microbiano de la presente invención es efectivo para controlar la mayoría de las enfermedades virales de las plantas causadas por grupos de virus patogénicos, tales como Allexivirus, Alfamovirus, Ampelovirus, Bymovirus, Begomovirus, Capillovirus , Carlavirus, Carmovirus, Caulimovirus , Closterovirus , Comovirus, Cucumovirus , Crinivirus , Cytorhabdovirus , Fabavirus, Flexiviridae, Foveavirus, Furovirus, Geminivirus, Hordeivirus, Ilarvirus, Luteovirus, aculavirus, Nepovirus, Potexvirus, Potyvirus, Phytoreovirus , Polerovirus, Pomovirus, Sadwavirus, Taastrupvirus , Tenuivirus, Tobamovirus , Tobravirus, Tombusvirus , Tospovirus, Trichovirus, y una combinación de los mismos. Especialmente, el agente microbiano inventivo es muy efectivo para controlar los grupos Tobamovirus , Potyvirus y Tenuivirus compuestos en forma de barra (en forma roscada) RNA de una sola hebra, grupos Cucumovirus compuestos de RNA de una sola hebra circular y grupo Begomovirus compuesto de DNA de una sola hebra circular.

Más específicamente, el agente microbiano de la presente invención presenta un efecto de control excelente en virus moteado del Pimiento (PepMoV) , el virus moteado suave del Pimiento (PMMoV) , el virus del mosaico del Pepino (CMV) , el virus del rizado de hoja amarilla del tomate (TYLCV) , el virus del mosaico moteado verde del Pepino (CGMMV) , el virus Y de la papa (PVY) , el virus del mosaico amarillo del calabacín (ZYMV) , el virus del mosaico del nabo (TuMV) , o virus del rayado del arroz (RSV) y similares.

Los siguientes ejemplos se pretenden para ilustrar adicionalmente la presente invención sin limitar su alcance.

Ejemplo 1: Aislamiento e identificación de KBPF-004 <!-!> Aislamiento de cepa KBPF-004 Las muestras de suelo comprenden raíces de plantas de tabaco que se recolectan a partir de los campos de tabaco ubicados en eumsung-gun de chungcheongbuk-do . La muestra de suelo recolectada se diluyó con agua destilada estéril y la dilución se esparció en el medio agar TSA (Difco, Detroit, MI) suplementado con 100 ppm de ciclohexamida y se incubó a 27 °C para aislar un cultivo puro de una cepa. <l-2> Identificación de la cepa KBPF-004 Las cepas se aislaron en el ejemplo <1-1> se incubó en un medio Mueller Hinton que comprende 2.0 g de extracto de res, 17.5 g de caseína, 1.5 g de almidón y 17.5 g de agar a 30°C durante 24 horas.

Las colonias redondas amarillas de la cepa aislada se formaron, lo cual tenía bandas pectinatadas en la línea base. La cepa se formó como un bastoncillo de 2~3 µp? en longitud y 0.3-0.5 µp? en anchura y tuvo un único flagelo largo. Para identificar las características bioquímicas de la cepa, el análisis de la composición de ácido graso, el análisis de microplaqueta Biolog GN y análisis API20NE se condujeron, y los resultados se muestran en las Tablas 1 a 3, respectivamente . <Tabla 1> Composición de ácidos Contenido (%) grasos Ci0:0 3-OH 2.19 Cl2:0 5.14 C12:0 2-OH 2.70 Cl2:0 3-OH 3.79 Cl6:l W7c/i5:0 ÍSO 2-OH 18.74 Cl6:0 20.45 Cl8:l 7C 45.88 <Tabla 2> Agua OÍ- Detrina glucógeno Tween 40 Tween ciclodextrina 80 + + + + i-eritritol D-fructuosa L-fucosa D-galactosa gentiobiosa D- glucosa + D-melibiosa ß-metil-D D-psicosa D-rafinosa L-ramnosa D- glucósido sorbito 1 + + + + Ácido Acético Ácido Cis- Ácido Ácido Ácido D- Ácido aconítico Cítrico Fornico galactónico D- lactona galactu rónico V + + Ácido p- Ácido ácido OÍ- Acido - ácido - ácido hidroxi itacónico ceto ceto ceto D, L- fenilacético butírico glutárico valérico láctico + V + Ácido bromo Ácido Glucuron Alaninamida D-alanina L- succínico succinámico amida alanina + L-histidina Hidroxi L- L-leucina L-ornitina L-fenil L- prolina alanina prolina V Ácido Inosina Uridina Timidina Fenil Putresc urocánico etilamina ina + + N-acetil-D- N-acetil-D- Adonitol L-arabinosa D-arabitol Celobio galactosamina glucosamina sa + + + m-inositol D-lactosa Lactulosa Maltosa Manitol D- amnnosa + + + Sacarosa D-trehalosa Turanosa Xilitol Metil Mono- piruvato metil succina to + + + + Ácido D- Ácido D- Ácido D- Ácido - Ácido ß- Ácido glucónico glucosamínico glucurónic hidroxi- hidroxi- 7- o butírico butírico hidroxi butíric 0 V + + + Ácido Ácido Ácido Ácido D- Ácido Ácido malónico propiónico quínico saccharicen sebacico succíni ilo co + + L-alanil- L-asparagina Ácido L- Ácido L- Ácido Ácido gliceno aspártico glutámico glicil-L- glicil- asparático L- glutámi co + + V Ácido L- D-serina L-serina L-treonina D, L- Ácido piroglutámico cami ina ?-amino gutíric o + 2-amino 2 , 3-butandiol Glicerol D,L- Glucosa-1- Glucosa etanol glicerol fosfato -6- fosfato fosfato Grado de reacción +: por lo menos 80%; -: más 20%; v: 21-79% <Tabla 3> También, la cepa inventiva se identificó basada en secuencia de nucleótidos 16S rDNA. La cepa aislada tuvo 16s rDNA de 1479 pb de la secuencia de nucleotido (SEQ ID NO: 1) que mostró 99.05% de homología de secuencia en esa de la cepas Pseudomonas oleovorans IAM 1508T. La posición taxonómica de la cepa inventiva se determinó mediante la construcción de un árbol filogenético (Figura 1) de acuerdo al método Clustal (Thompson JD et al, Nuc Acid Res. 25: 4876-82, 1997) .

La cepa se designó como Pseudomonas oleovorans KBPF-004, y se depositó el 11 de enero del 2002 en la Colección Coreana para los Cultivos Tipo (KCTC) bajo el número de acceso de KCTC 10159BP. <l-3> Especificidad de cepa KBPF-004 que tiene actividades antivirales La cepa KBPF-004 y la Pseudomonas oleovorans ATCC 8062 como un tipo de cepa de la misma se cultivaron en el medio Mueller Hinton con agitación a 30°C durante 24 horas. El cultivo obtenido se diluyó 20 veces y las actividades antivirales de las mismas se examinaron de acuerdo a un método de media hoja de tabaco (Kim et al, Plant Pathol J. 20 (4) : 293-296, 2004) .

El método de media hoja de tabaco es un método que emplea un fenómeno que es Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc como una planta huésped de lesión local que forma puntos negros debido a la necrosis celular alrededor de las regiones infectadas por el virus del mosaico de Tabaco mediante el gen de resistencia del virus del mosaico de Tabaco. Específicamente, un material de prueba para la actividad antiviral de examinacion se esparció en medias hojas de las 3a y 4a hojas de la planta huésped de lesión local en etapas de la hoja de 7 follajes. Entonces, carborundo (abrasivo) se aplico suavemente en la 3a y 46 hojas y una dilución del virus del mosaico de tabaco se aplicó al mismo para la examinacion de la actividad antiviral del material de prueba. El carborundo aplicado indujo a rayaduras en las hojas del tabaco y el virus del mosaico de tabaco pasó en las plantas huésped a través de las rayaduras . Después de 3-4 días de la inoculación, los puntos negros se encontraron en las hojas infectadas.

Los valores de control de los materiales de prueba se calcularon por la siguiente fórmula y los resultados se muestran en la Tabla 4.

Valor de control (%) = [1- (Número de puntos negros en las medias hojas tratadas con cepa/Número de puntos negro en las medias hojas no tratadas) ] X 100 <Tabla 4> Cepa Actividad Antiviral Tipo de cepa Pseudomonas oleovorans ATCC 19.7% 8062 Cepa KBPF-004 Pseudomonas oleovorans KCTC 96.0% 10159BP Como se muestra en la Tabla 4 , la cepa KBPF- 004 tuvo una actividad antiviral específicamente alta, que demostró que la cepa KBPF- 004 es una cepa específica que tiene una actividad antiviral diferente comparada con las cepas Pseudomonas oleovorans existentes. <l-4> Especificidad de los materiales activos antivirales de KBPF- 004 Se sabe que las especies Pseudomonas oleovorans producen polihidroxialcanoato (PHA) como un polímero biodegradable. Para identificar si la actividad antiviral específica de la cepa KBPF-004 se indujo por PHA o no, la actividad antiviral de PHA (sigma) y un cultivo de cepa KBPF-004 se determinó respectivamente de acuerdo al método de media hoja de tabaco, y los resultados se muestran en la Tabla 5 . <Tabla 5> Como se muestra en la Tabla 5 , PHA muestra actividad no antiviral, mientras el cultivo de cepa KBPF- 004 muestra una actividad antiviral elevada. Estos resultados promueven que los materiales activos antivirales producidos por la cepa KBPF- 004 sean diferentes de PHA.

Además, para identificar si los materiales activos antivirales producidos por la cepa KBPF-004 mostraron también un efecto antibiótico o no, el análisis de disco de papel se condujo utilizando siete hongos patogénicos de plantas y cuatro cepas supersensibles antibióticas para verificar la formulación de círculos de inhibición. Los resultados se muestran en la Tabla 6. <Tabla 6> Como se muestra en la Tabla 6, tanto el hongo patogénico de la planta como las cepas supersensibles antibióticas crecieron sin inhibición mediante el cultivo de cepa KBPF-004. Esto demostró que los materiales activos antivirales producidos por la cepa KBPF-004 son diferentes a partir de los materiales antibióticos existentes.

Ejemplo 2: Preparación del medio optimizado para la producción de materiales activos antivirales Para determinar una condición de medio para la producción de los materiales activos antivirales superiores al medio Mueller Hinton, una variedad de fuentes de carbono y nitrógeno se emplearon para la preparación de un medio optimizado .

Específicamente, la cepa se sometió a cultivo de agitación a 30°C durante 24 horas mediante la utilización de dextrina, glucosa, glicerol, sacarosa o almidón soluble en agua como una fuente de carbón, y peptona, extracto de levadura, caseína, extracto de salvado de trigo, fosfato de diácido de amonio o sulfato de amonio como una fuente de nitrógeno. La densidad óptica (OD) del cultivo obtenido se midió a 600 nm, y la actividad antiviral se determinó por el método de media hoja de tabaco. Los resultados se muestran en la Tabla 7. <Tabla 7> Medio Actividad Densidad óptica antiviral (660 nm) (dilución 1/40) Medio Mueller Hinton 57% 9.2 Medio optimizado 92% 23.2 Como se muestra en la Tabla 7 , el medio optimizado suplementado con 1 a 5% en peso de glucosa como una fuente de carbono y 1 a 5% en peso del extracto de levadura como una fuente de nitrógeno presentó un crecimiento de cepa significativamente mejorada y actividad antiviral comparada con el medio Mueller Hinton.

Ejemplo 3: Preparación de un cultivo y un polvo seco de cepa KBPF-004 <3-l> Preparación de un cultivo de cepa KBPF- 004 Para preparar un cultivo de cepa KBPF- 004 en una escala amplia, un medio suplementado con 10 g de glucosa, 20 g de extracto de levadura, 0 . 2 g de sulfato de magnesio, 2 g de fosfato de hidrógeno de potasio y 2 g de fosfato de ácido de potasio basado en un 1 t de agua se empleó.

Un proceso de fermentación para la producción en una escala amplia se condujo al emplear un termentador de escala piloto. Se fermentó el cultivo de cepa de 30 l en un termentador de 50 i y el cultivo resultante se transportó a un termentador de 500 t en la terminación del cultivo. A lo largo de las mismas líneas, 3 , 000 t de cultivo de cepa se fermentó en un termentador de 5000 t . El proceso de fermentación se condujo a una temperatura de 30D , con una proporción de aireación de 1 WM (volumen de aire agregada al volumen por minuto de líquido) , y una rotación de velocidad de 200 rpm (50 f del fermentador) , 150 rpm (500 i del termentador) u 80 rpm (5,000 i del fermentador) para un día para preparar el cultivo de cepa KBPF-004. <3-2> Preparación de un polvo seco de cultivo de cepa KBPF-004 Para preparar un polvo seco del cultivo de cepa KBPF-004, se condujo el proceso de tratamiento posterior que comprende una esterilización de cepa, concentración, liofilizar y moliendas.

El proceso de esterilización de cepa se condujo mediante el calentamiento del fermentador a 80°C durante 20 minutos después del cultivo para eliminar las células. El proceso de concentración se condujo mediante concentración del cultivo resultante bajo una presión reducida a 65 °C durante 32 horas. El proceso de liofilizar se condujo mediante el calentamiento del cultivo concentrado con elevación gradual de la temperatura iniciando de -80 SC durante 52 horas. El proceso de molienda se condujo mediante molido de productos liofilizados utilizando una trituradora de molino de púas para preparar un polvo seco que tiene un tamaño de partícula por debajo de 2 mm.

Ejemplo 4: Preparación de los agentes microbianos utilizando productos de cultivo de cepa KBPF-004.

Los agentes microbianos de cepa KBPF-004, tales como polvos humectables (WP) , granulos dispersables por agua (WG) , concentrados de suspensión (SC) y gránulos se prepararon utilizando un polvo seco de cultivo de cepa KBPF-004, y suspensiones acuosas (AS) se prepararon utilizando el cultivo de cepa KBPF-004 acuoso. <4-l> Preparación de un polvo humectable utilizando polvo seco del cultivo de cepa KBPF-004 Para formular un polvo humectable desde el polvo seco del cultivo de cepa KBPF-004, 25% en peso de polvo seco del cultivo de cepa KBPF-004 obtenido en <3-2> se mezclaron con 3% en peso del octilfenilsulfato de polioxietileno, 3% en peso del sulfonato de lignina de sodio, 2% en peso de laurilsulfato de sodio, 5% en peso de carbono blanco y una cantidad residual de caolín, y la mezcla creció utilizando una máquina de molienda tipo secado. El tamaño de partícula promedio de la mezcla de crecimiento fue 6.47 um. El polvo humectable se obtuvo de esta manera, se sometió a análisis fisicoquímico y biológico y los resultados se muestran en <4-6> siguiente. <4-2> Preparación del gránulo dispersable en agua utilizando polvo seco del cultivo de cepa KBPF-004 Para formular los gránulos dispersables en agua partir de polvo seco, el cultivo de cepa KBPF- 004 , 25% en peso del polvo seco del cultivo de cepa KBPF- 004 obtenido en <3 -2> se mezcló con 6% en peso del condensado de formalin de sulfonato naftalen de sodio, 2% en peso de laurilsulfato de sodio, 2% en peso de sulfonato de lignina de sodio, 5% en peso de la tierra de diatomeas, y una cantidad residual del carbonato de calcio, y la mezcla creció utilizando una máquina de molienda tipo secado. El tamaño de partícula promedio de la mezcla de molienda fue 6 . 08 um. Entonces, 10% en peso de agua basada en la mezcla se agregó a la mezcla, y la mezcla resultante se sometió a amasamiento y el proceso de molienda utilizando una máquina de granulación y se secó durante 30 minutos en un secador de lecho fluidizado para obtener los gránulos dispersables en agua. Los gránulos dispersables en agua obtenidos de esa manera se sometieron a análisis fisicoquímico y biológico, y los resultados se muestran en <4 - 6> siguiente. <4-3 > Preparación de un concentrado de suspensión que utiliza polvo seco del cultivo de cepa KBPF- 004 Para formular un concentrado de suspensión a partir del polvo seco el cultivo de cepa KBPF- 004 , se mezcló un 25% en peso del polvo seco del cultivo de cepa KBPF- 004 obtenido en <3 -2> con 3 % en peso de polioxietilen octifeniléter, 2 % en peso de copolímero de etilenóxido-propilenóxido, 2 % en peso de dioctilsulfosuccinato de sodio, 10% en peso de propilenglicol y 55 , 5% en peso de agua destilada y la mezcla resultante se molió utilizando una máquina de molienda en húmedo. El tamaño de partícula promedio de la mezcla de crecimiento fue de 2 . 45 um micrones . Entonces, 2 . 5% en peso de 2 % de goma de xantano acuosa preparada mediante etapas de agitación y mezclado se agregó a la mezcla, y la mezcla resultante se agitó y mezcló mediante un mezclador para obtener un concentrado de suspensión en la forma de una suspensión acuosa. El concentrado de suspensión entonces obtenido se sometió a análisis físico-químico y biológico, y los resultados se muestran en <4 -6> siguiente. <4-4> Preparación de gránulos utilizando polvo seco del cultivo de cepa KBPF-004 Para examinar el efecto controlado de la cepa KBPF-004 cuando se aplica a los suelos, 2 . 5% en peso del polvo seco del cultivo de cepa KBPF- 004 obtenido en <3 -2 > se mezcló con 0 . 5% en peso del sulfonato de lignina de calcio y 1 . 5% en peso de caolín y la mezcla se molió utilizando una máquina de molienda tipo secado para preparar una mezcla de molienda que tiene un tamaño de partícula promedio de 6 . 25 um. 1% en peso de polivinilalcohol y 0 . 5% en peso de dextrina se disolvieron en 1 . 5% en peso de agua para preparar una solución aglutinante. La solución aglutinante se aplicó a 94% en peso de arena, y la mezcla preparada en lo anterior, se recubrió en la misma. Los gránulos resultantes se secaron en un secador de lecho fluidizado durante 30 minutos. Los gránulos de este modo obtenidos se sometieron a análisis fisicoquímico y biológico, y los resultados se muestran en <4 - 6> siguiente. <4- 5> Preparación de suspensión acuosa utilizando el cultivo de cepa KBPF-004 Para formular las suspensiones acuosas a partir del cultivo de cepa KBPF- 004 acuosa, el cultivo de cepa KBPF- 004 acuosa obtenida en <3-l> se sometió al proceso de posttratamiento que comprende la aniquilación de la cepa y la concentración y 70% en peso del cultivo de cepa de este modo obtenido se mezcla con 5% en peso de polioxietilen octilfeniléter 5% en peso de dioctilsulfosuccinato de sodio, 10% en peso de propilenglicol y 10% en peso de etanol . La mezcla resultante se agitó y mezcló para obtener las suspensiones acuosas. Las suspensiones acuosas de este modo obtenidas fueron sometidas a análisis fisicoquímico y biológico, y los resultados se muestran en <4- 6> siguiente. <4 - 6> Prueba de las propiedades de formulación y efecto antiviral contra virus de mosaico de tabaco Las propiedades (forma de formulación, apariencia, humeetabilidad, finura y estabilidad de almacenaje) y los valores de control de acuerdo al método de media hoja de tabaco de las formulaciones obtenidas en <4-l> a <4-5> se determinaron y los resultados se muestran en la Tabla 8 (Método de prueba y químicos de agricultura notificados por Korean Rural development administration) . <Tabla 8> Como resultado, las cinco formulaciones mostraron propiedades físicas adecuadas y efecto antiviral de acuerdo a la norma de revisión de los químicos de agricultura por regulaciones de aplicación de la ley de administración agroquímica Coreana. Entre las formulaciones, el 25% de polvo humectable obtenido en <4-l> mostró el efecto antivirales más excelente, por lo tanto, el KBPF-004 25% de polvo humectable, 2.5% de granulo y 70% AS se emplearon en las siguientes pruebas. <4-7> Prueba para estabilidad de envejecimiento de 25% de polvo humectable Para probar la estabilidad de enve ecimiento del polvo humectable de 25% obtenido en <4-l>, el grado de pérdida de actividad antiviral del polvo humectable se determinó por el método de media hoja de tabaco cada semana mientras se almacena a 54°C durante al menos 6 semanas, y los resultados se muestran en la Figura 2. Como se muestra en la Figura 2, el polvo humectable inventivo mostró la actividad antiviral en el virus de mosaico de tabaco a 54°C durante al menos 6 semanas. Por lo tanto, una garantía de tres años de la eficacia se estableció para el polvo humectable inventivo de acuerdo a las guías de prueba de registro y los métodos químicos de agricultura notificados por la administración de desarrollo Rural de Corea.

Ejemplo 5: Prueba para inhibir el efecto de KBPF-004 25% de polvo humectable en virus de planta <5-l> efecto de inhibición dependiente de la concentración en la infección de virus del mosaico de tabaco Para examinar el efecto de inhibición de KBPF-004 25% de polvo humectable en la infección de virus de mosaico de tabaco de acuerdo a sus concentraciones, RT-PCR (reacción de cadena de transcriptasa-polimerasa inversa) se realizó en las hojas de tabaco utilizando cebadores que reconocen una secuencia de nucleótido específica de RNA genómico de virus (región de recubrimiento de proteína) (Choi et al, Plant Pathol J.f 14 : 7 -12 , 1998 ; . Yoon, Doctoral Thesis, Seoul omen's Univ., Seoul 166 , 2003 ) y los resultados se muestran en la Figura 3 .

Como se muestra en la Figura 3 , ningún virus de mosaico de tabaco se detectó cuando las hojas de tabaco se trataron con KBPF- 004 25% de polvo humectable en una cantidad que varía de 0 . 005 g/ml a 0 . 02 g/ml . Este resultado mostró que las cepa KBPF-004 efectivamente inhiben la infección del virus de mosaico de tabaco. <5 -2> Efecto de control en infección viral de planta Para examinar el efecto de control de KBPF- 004 25% de polvo humectable en la infección sencilla y compleja del virus de planta, la dilución de 1 , 000 veces de KBPF- 004 25% de polvo humectable obtenido en <4-l> se esparció en pimienta roja Chungyang utilizando un aspersor. Entonces, el virus moteado de pimienta (PepMoV) , virus es moteado suave de pimienta (PMMoV) y virus de mosaico de pepino (CMV) se inocularon en el mismo, respectivamente, o en combinación, y RT-PCR se condujeron para identificar si los productos RT-PCR se detectaron o no. Los resultados se muestran en la Figura Como se muestra en la Figura 4, los pimientos rojos Chungyang inoculados con PepMoV sólo mostraron ningún virus hasta 30-40 días con respecto a sus especies, y los pimientos rojos Chungyang inoculados con el virus moteado de pimienta + virus de mosaico de pepino no mostraron ningún virus hasta 30 días .

También, las muestras de virus moteada de Pimienta, virus moteado de Pimienta + virus moteado suave de Pimienta, y virus moteado de Pimienta + virus de mosaico de Pepino a los cuales la actividades antivirales se confirmaron o en el análisis RT-PCR se analizaron utilizando ELISA (ensayo inmunoabsorbente unido a enzima) (Clark, et al, J". Gen Virol 34: 475-483, 1977) y los resultados se muestran en la Tabla <Tabla 9> Los días Absorbencia Virus infectado Antisuero después de Grupo Grupo no Planta la tratado tratados saludable inoculación KBPF-004 PepMoV PepMoV 10 0.202 0.981 0.232 ( infectado 30 0.210 1.900 — sencillo) PepMov + PMMoV PepMoV 10 0.173 1.200 0.243 ( infectado 30 0.788 1.876 - complejo) PepMoV 10 0.836 - 0.243 30 1.504 1.366 - PepMoV+C V PepMoV 10 0.310 - 0.187 ( infectado 30 0.286 - - complejo) CMV 10 0.457 1.964 0.187 30 0.382 - - Como se muestra en la Tabla 9, los efectos controlados de la cepa KBPF-004 inventiva fueron significativamente mostrados en los niveles moleculares y antisuero. <5-3> Efecto de inhibición de infección en RNA genoma virus Para examinar el efecto de inhibición de KBPF-004 25% de polvo humectable en la infección por el virus moteado suave de Pimienta (PM oV) RNA genómico, la dilución de 1,000 veces de KBPF-004 25% de polvo humectable obtenido en <4-l> se esparció en las plantas de tabaco (Nicotiana glutinosa) .

Entonces, el genoma RNA del virus moteado suave de pimienta se inoculó en las plantas, y los efectos que inhiben la infección se determinaron y los resultados se mostraron en la Tabla 10. <Tabla 10> Como se muestra en la Tabla 10, el KBPF-004 25% de polvo humeetable del grupo tratado mostró no infección de virus, mientras el grupo no tratado mostró infección PMMoV, que sugirió la cepa KBPF-004 directamente influenciada en el genoma RNA del virus . <5-4> Efecto de inducción de resistencia Para examinar el efecto de inducción de resistencia de KBPF-004 25% de polvo humectable, dilución 1,000 veces de KBPF-004 25% de polvo humectable se esparció en las hojas inferiores de las dos especies de tabaco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc y Nicotiana glutinosa) . Después de 10 días, el virus moteado suave de Pimienta se inoculó en el mismo. Los valores de control se calcularon y los resultados que se muestran en la Tabla 11. <Tabla 11> Tratamiento Planta huésped Número de lesiones (valor de control) Hoja tratada Hoja Ia Hoja 2a. (hoja superior superior inferior) KBPF-004 Nicotiana 51 (71.0%) 96 (55.9%) 78 tabacum cv. (57.3%) xanthi nc Nicotiana 83 (74.8%) 118 (45.8%) 169 glutinosa (46.6%) Grupo no Nicotina 176 218 183 tratado tabacum cv.

Xanthi nc Nicotiana 330 249 317 glutinosa Como se muestra en la Tabla 11, en el grupo tratado por polvo humectable KBPF-004 25%, el efecto de control en el virus moteado suave de Pimienta se mostró en la lfl y 2a hojas superiores, así como las hojas tratadas (hojas inferiores). Por lo tanto, se muestra que el polvo humectable KBPF-004 25% tiene una resistencia que induce al efecto así como los efectos de inhibición directos en la infección de virus y reproducción . <5-5> Efecto de inhibición de virus confirmado por una microscopía de electrón Para confirmar el efecto de inhibición de virus directo del agente microbiano inventivo, el efecto de la cepa KBPF-004 en las partículas de virus o la proteína de recubrimiento viral se analizaron mediante una microscopía de electrón.

El virus de mosaico de tabaco (TMV) y virus de Y de Papa (PVY) se inocularon respectivamente en la planta huésped por proliferación (Nicotiana bentha iana) . Después de 2 semanas, 50 g de las hojas sistémicamente infectadas se colectaron y purificaron por las partículas de virus, respectivamente. Entonces, las partículas de virus purificadas se mezclaron con 1/100 dilución del KBPF-004 25% de polvo humectable (1,000 ppm) en la proporción de 1:1 (v/v) , y la mezcla resultante se analizó mediante una microscopía de electrón. Los resultados se muestran en la Figura 5.

Como se muestra en la Figura 5, se encuentra que la longitud de las partículas de virus fue corta en KBPF-004 25% del grupo tratado con polvo humeetable, que sugiere que las partículas de TMV y PVY se segmenten por la cepa KBPF-004.

Además, las muestras de partículas de virus segmentadas obtenidas en lo anterior se sometieron al método de media hoja de tabaco para examinar si la actividad viral se mantiene o no, y los resultados se muestran en la Figura 6. Como resultado, el número de partículas de virus segmentadas se incrementó dependiendo en el tiempo tratado por cepas, y el número de lesiones infectadas de la planta huésped se disminuyó rápidamente.

Ejemplo 6: Eficacia de cepa KBPF-004 en las enfermedades virales de planta principal <6-l> La eficacia de tamización Para evaluar la eficacia del agente microbiano de cepa KBPF-004 en los virus de plantas principal, una tamización de eficacia se condujo en una variedad de plantas en macetas de invernadero .

La tamización se condujo en plántulas (plantas jóvenes) y plantas adultas, si es necesario, de acuerdo a un método común para tamizar a enfermedades virales de planta.

Para la tamización de eficacia, el grupo Tobamovirus tal como virus de mosaico de Tabaco, virus de mosaico moteado verde de Pepino y virus moteado suave de Pimienta; grupo Potyvirus tal como virus moteado de Pimienta, virus del mosaico amarillo Calabacín, virus Y de Papa y virus de mosaico de Sandía; el grupo Cucumovirus tal como virus de mosaico de Pepino se emplearon como virus de planta y tabaco, pimienta, Calabacín, pepino, sandía, calabaza, col y melón se emplearon como plantas huésped.

Específicamente, diluciones de 250-, 500- y 1,000 veces del polvo humectable KBPF-004 25% obtenidos en <4-l> se dispersaron en las plantas huésped en una cantidad de 20L/1,000 m2, respectivamente, y diluciones de 1,000 veces del virus de la planta respectiva se inocularon al mismo. La eficacia del agente microbiano se evaluó por el resultado del método de media hoja de tabaco para el virus de mosaico de Tabaco y por los valores control calculados utilizando la proporción de planta enferma (%) de acuerdo a la siguiente fórmula para otros virus (©: Excelente; O: buena; ?: insuficiente; y X: mala) . Los resultados se muestran en la Tabla 12.

Proporción de planta enferma (%) = (Número de plantas enfermas /Número de plantas de prueba) X 100 Valor control (%) = [1- (Proporción de planta enferma de las plantas tratadas /proporción de planta Enferma de las plantas no tratadas] X 100) <Tabla 12> <6-2> Evaluación de eficacia en el campo de virus de mosaico de Tabaco En la prueba de eficacia de control en el virus moteado de Pimienta en <6-l>, se calculó el valor control de KBPF-004 de polvo humectable 25% después de 4 semanas a partir de la inoculación del virus de mosaico de Tabaco, y los resultados se muestran en la Tabla 13. Como un resultado, el valor control de diluciones de 500 veces y 1,000 veces fue 90,8% y 76.8%, respectivamente, que fue mucho mayor que la leche descremada como un control. Por lo tanto, los materiales activos antivirales de la cepa KBPF-004 mostraron un efecto control en una forma dependiente de concentración. <Tabla 13> <6-3> Evaluación de eficacia en el campo en el virus moteado de Pimienta En la prueba de eficacia de control en el virus moteado de Pimienta en <6-l>, se calculó el valor control del polvo humectable KBPF-004 25% y los resultados se muestran en la Tabla 14 y Figura 7. Los índices de inhibición la infección de diluciones de 500 veces y 1,000 veces contra el virus moteado de Pimienta fueron del 100%. Además, en el grupo no tratado, la proporción de infección por el virus moteado de pimienta fue 5.4% antes del tratamiento e incrementó a 11.8% después del tratamiento. Sin embargo, en el grupo tratado por polvo humectable KBPF-004 25%, la porción de infección por el virus moteado de pimienta se disminuyó después del tratamiento y el virus no se transmitió a nadie más . <Tabla 14> <6-4> Evaluación de eficacia de cepa KBPF-004 en virus del rayado del arroz en un invernadero En la prueba de eficacia de controlar en el virus del rayado del arroz en <6-l>, la dilución de 500 veces y 1,000 veces del polvo humectable KBPF-004 25% se dispersó, respectivamente, en los cultivos de arroz 1 día antes de la inoculación de los insectos virulíferos, (Laodelphax striatllus F) . Después de 14 días desde la inoculación de los insectos virulíferos, el valor control se calculó. Como puede verse a partir de los resultados mostrados en la Tabla 15 y Figura 8, la dilución de 500 veces mostró excelente eficacia de control comparada con el grupo no tratado . <Tabla 15> Además, la dilución de 500 veces del polvo humectable KBPF-004 25% se esparció directamente en los insectos virulíferos (Laodelphax striatllus F) y después de un día del mismo, los insectos se inocularon en las plántulas de arroz. El valor control se determinó como en lo anterior. Como se muestra en la Tabla 16, el índice de transmisión del virus del rayado del arroz se disminuyó significativamente. <Tabla 16> <6-5> Evaluación de eficacia de los gránulos KBPF-004 en el virus de mosaico de Tabaco Para examinar la eficacia de control de los gránulos KBPF-004 2.5% obtenido en el ejemplo <l-4> cuando se trató en los suelos, una planta de tabaco infectada por virus de mosaico de Tabaco se liofilizó y se colocó a tierra para preparar una fuente infectada. Se mezcló 1 g de la fuente infectada de este modo obtenido con 100 g de los suelos de lecho para preparar suelos enfermos. Entonces, 1 g de los gránulos KBPF-004 2.5% se mezclaron bien con 100 g de los suelos enfermos, y la planta huésped de lesión local, tabaco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc) de las tres etapas de hoja de follaje se trasplantó al mismo y cultivó en un invernadero durante 3 semanas .

Como se muestra en la Tabla 17 y Figura 9, las plántulas de tabaco manchadas en el grupo no tratado, pero cultivadas bien como las plantas saludables en el grupo tratados con gránulos KBPF-004 2.5 tratados. <Tabla 17> <6-6> Evaluación de eficacia en el campo del virus esencialmente de hoja amarilla del Tomate Se obtuvo dilución de 500 veces de KBPF-004 70% de AS en el ejemplo <4-5> se mezcló con los insecticidas convencionales, tal como Dinotefuran® P, Dinotefuran® WG, S iromesifen® SC, Dichlorvos® CE y Amitraz+buprofezin EC, y la mezcla se dispersó en las plantas de tomate. El valor control resultante fue 99.9%. En contraste, cuando Spinosad WG, Acetamiprid P, Dinotefuran WG, Spiromesifen SC, y benzoato de Emamectina EC se disperso alternativamente en las plantas a intervalos de 7 días, el índice de la planta enferma calculado fue del 80.2%. <Tabla 18> Mientras la invención se ha descrito con respecto a las modalidades específicas anterior, se reconocerá que varias modificaciones y cambios pueden hacerse a la invención para aquellos expertos en la técnica lo cual también cae dentro de la invención como se define por las reivindicaciones anexas .

TRATADO DE BUDAPEST SOBRE EL RECONOCIMIENTO INTERNACIONAL DEL DEPÓSITO DE MICROORGANISMOS PARA LOS PROPÓSITOS DE PROCEDIMIENTO DE PATENTE FORMATO INTERNACIONAL RECIBO EN EL CASO DE UN DEPÓSITO ORIGINAL emitido de acuerdo con la Regla 7.1 Para: LEE, Byung Man #1337-4, Seocho-dong, Seocho-gu, Seoul 137-070, República de Corea I . IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO Referencia de identificación dada Número de acceso dado por la por el DEPOSITANTE: AUTORIDAD DEPOSITARIA INTERNACIONAL Pseudomonas ole ovorane KCTC 10159BP (KBPF-004) DESCRIPCIÓN CIENTÍFICA Y/O DESIGNACIÓN TAXONÓMICA PROPUESTA El microorganismo identificado en I anterior se acompañó por: [ x ] una descripción científica [ ] un designación taxonómica propuesta (Marque con una cruz donde sea aplicable) III. RECIBO Y ADMISION Esta Autoridad Depositaría Internacional acepta el microorganismo identificado en I anterior, el cual se recibió por ella el 11 de enero de 2002.

IV. RECIBO DE PETICION PARA CONVERSION El microorganismo identificado en I anterior se recibió por esta Autoridad Depositaría Internacional el y una petición para convertir el depósito original a un depósito bajo el Tratado de Budapest se recibió por ella el V. AUTORIDAD DEPOSITARIA INTERNACIONAL Nombre: Korean Collection for Type Firma (s) de la persona (s) que tiene el Cultures poder para representar a la Autoridad Depositaría Internacional de Dirección: Korea Research Institute funcionario (s) autorizado (s ) : of Bioscience and Biotechnology (KRIBB) ( F i r m a ) #52, Oun-dong, Yusong- BAE, Kyung Sook, Director ku, Taejon 305-333, Fecha: 15 de enero de 2002 República de Corea

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Una cepa Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) que tiene una actividad de control contra las enfermedades virales de la planta.

2. Un cultivo de la cepa Pseudomonas oleovorans de la reivindicación 1.

3. El polvo seco del cultivo de la reivindicación 2.

4. El polvo seco de la reivindicación 3 , en donde el polvo seco se preparó por liofilización o secado con aspersión.

5. Un agente microbiano para controlar las enfermedades virales de la planta que comprende cepa Pseudomonas oleovorans KBPF-004 (KCTC 10159BP) , un cultivo del mismo, o un polvo seco de los cultivos como un ingrediente activo.

6. El agente microbiano de la reivindicación 5, que comprende desde 2.5 hasta 70% en peso de la cepa Pseudomonas oleovorans, un cultivo del mismo, o un polvo seco del cultivo; 2 a 30% en peso de un tensoactivo, y una cantidad residual del portador.

7. El agente microbiano de la reivindicación 6, en donde el tensoactivo es un tensoactivo aniónico, tensoactivo no iónico, o una mezcla de los mismos.

8. El agente microbiano de la reivindicación 6, en donde el transportista se selecciona del grupo que consiste de la bentonita, talco, arcilla, caolín, carbonato de calcio, sílice, piedra pómez, tierra diatomesia, bolo blando acídico, zeolita, perlita, carbono blanco, sulfato de amonio, urea, glucosa, dextrina, agua, y una mezcla de los mismos.

9. El agente microbiano de la reivindicación 5, que está en forma seleccionada del grupo que consiste de polvos humectables (WP) , gránulos dispersables en agua (WG) , concentrados de suspensión (SC) , gránulos, suspensiones acuosas (AS) , polvos solubles (SP) , gránulos solubles de agua (SG) y cápsulas.

10. El agente microbiano de la reivindicación 5, en donde la enfermedad viral de la planta se provoca por un grupo de virus seleccionado del grupo que consiste de Allexivirus, Alfamovirus, Ampelovirus, Bymovirus, Begomovirus, Capillovirus , Carlavirus, Carmovirus, Caulimovirus , Closterovirus , Comovirus, Cucumovirus, Crinivirus, Cytorhabdovirus , Fabavirus, Flexiviridae, Foveavirus, Furovirus, Geminivirus, Hordeivirus, Ilarvirus, Luteovirus, Maculavirus, Nepovirus, Potexvirus, Potyvirus, Phytoreovirus , Polerovirus, Pomovirus, Sadwavirus, Taastrupvirus , Tenuivirus, Tobamovirus, Tobravirus, Tombusvirus, Tospovirus, Trichovirus , y una combinación de los mismos . RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona al control efectivo de la enfermedad viral de la planta que utiliza cepas de Pseudomonas oleovorans . Los agentes biológicos de la presente invención que incorporan cepas de Pseudomonas oleovorans proporcionan protección excelente contra las infecciones virales de la planta mediante virus de mosaico de tabaco, potyvirus, virus tenuyi , virus de mosaico koo-koo y virus del mosaico bego.