MX2008015172A - Nanoparticulas biologicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato, procedimientos para su preparacion y composiciones que incorporan las mismas. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato no estequiométrica, que tiene: a) un grado de cristalinidad CD menor que 40%, estando el grado de cristalinidad definido como CD=(1-X/Y) ¿ 100 en la que: Y = altura del máximo de difracción a 2?; = 33º, X = altura del fondo de difracción a 2?; = 33º del patrón de difracción de rayos X de las nanopartículas; b) una longitud L que varía entre 20 y 200 nm y una anchura W que varía entre 5 y 30 nm; y c) una relación de aspecto AR comprendida entre 2 y 40, estando la relación de aspecto definida como AR = L/W. Las nanopartículas biológicamente activas de la invención encuentran un uso preferido en las aplicaciones de higiene oral o dental y se puede formular como composiciones para la higiene oral o dental tal como, por ejemplo, soluciones, suspensiones, aceites, geles u otros productos sólidos. Otros aspectos de la invención incluyen un procedimiento para preparar una suspensión para la higiene oral o dental que incluye las nanopartículas biológicamente activas, un procedimiento para fabricar una pasta de dientes que comprende las nanopartículas, así como un procedimiento de remineralización local de los dientes que comprende poner en contacto los dientes con las nanopartículas.

Description

'NANOPARTÍCULAS BIOLÓGICAMENTE ACTIVAS DE UNA HIDROXIAPATITA SUSTITUIDA POR CARBONATO, PROCEDIMIENTOS PARA SU PREPARACIÓN Y COMPOSICIONES QUE INCORPORAN LAS MISMAS" CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato, a un procedimiento para su preparación y a composiciones que incorporan las mismas. Más específicamente, la invención se refiere a nanopartículas biológicamente activas que encuentran un uso preferido aunque no exclusivo en las aplicaciones de higiene oral o dental así como a composiciones para la higiene dental que incluyen las mismas, tales como, por ejemplo, soluciones, suspensiones, aceites, geles u otros productos sólidos. De acuerdo con otros aspectos, la invención se refiere a un procedimiento para preparar una suspensión para la higiene oral o dental, a un procedimiento para fabricar una pasta de dientes que comprende las nanopartículas biológicamente activas anteriormente mencionadas, así como a un procedimiento de remineralización de los dientes que comprende poner en contacto los dientes con las nanopartículas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se sabe que una alta proporción de la población, estimada por la profesión dental está en la región de 20 a 25% de la población total, padece hipersensibilidad o hiperestesia de los dientes, en otras palabras dolor en respuesta a estímulos mecánicos, químicos y térmicos, sin cualesquiera enfermedades dentales visibles tales como caries que requieren tratamiento dental. La hipersensibilidad de los dientes se produce principalmente en el cuello de los dientes cuando la dentina blanda llega a estar expuesta entre el límite del esmalte y la línea de encía debido al retroceso de las encías. La acción de los lactobacilos que forman ácido láctico o la acción mecánica de los refuerzos (incluso en niños) o las partes de enganche de las dentaduras durante la masticación también pueden dañar el esmalte protector de manera que los pequeños canales de la dentina que después se exponen transmiten cada irritación mecánica, química o térmica como un estímulo del dolor a la pulpa dentaria.

Técnica relacionada Se sabe que el tratamiento repetido con sales inorgánicas, particularmente bicarbonato de sodio, cloruro de sodio o cloruro de estroncio a altas concentraciones en la presencia de glicerina hace insensibles las partes sensibles de los dientes pero que esta falta de sensibilización es reversible de manera que el dolor se siente igual pronto después de que se haya parado la terapia. Con el fin de tratar de una manera más permanente estas afecciones dolorosas en el curso de la rutina normal de la higiene dental de un individuo doliente, se ha propuesto en la técnica proporcionar preparaciones orales o dentales capaces de mejorar el efecto de la desensibilización proporcionando una remineralización de larga duración de los dientes. De este modo, por ejemplo, la patente canadiense CA 999 238 describe una preparación oral o dental que contiene 5 a 90% en peso de hidroxiapatita finamente dividida que tiene un tamaño de partícula de menos de 10 µ??, en particular en la región de aproximadamente 6 a 8 µ?t?. De acuerdo con esta referencia, si la hidroxiapatita finamente dividida se pone en contacto de manera repetida con los dientes sensibles durante un período prolongado de tiempo, por ejemplo durante la limpieza de dientes o cuando se mastica una goma de mascar, una remineralización de larga duración de los dientes se puede lograr gracias a la difusión de hidroxiapatita en los pequeños canales de la dentina en virtud de su muy lenta solubilidad en agua y saliva debido a la hidrólisis. De acuerdo con lo anterior, esta hidroxiapatita ligeramente soluble se llega a depositar en las cavidades microscópicamente finas que quedan en las estructura de hidroxiapatita que se ha formado en la matriz orgánica, de manera que los pequeños canales de la dentina se sellan de manera gradual y se obtiene alivio permanente del dolor. Además del problema identificado anteriormente de hipersensibilidad o hiperestesia de los dientes, también se sabe que muchas personas padecen sangrado crónico de las encías, una consecuencia de la gingivitis, depósitos de secreciones de las hendiduras gingivales y lesiones en la capa de los dientes, que en las fases avanzadas dan como resultado el aflojamiento o la pérdida de de los dientes y en la pérdida de la capa dental. Las bacterias anaerobias de putrefacción que provocan halitosis son capaces de multiplicarse rápidamente en el ambiente protector del tejido inflamado y que deposita secreción de manera que fácilmente dan lugar a inflamación de la membrana de la mucosa bucal e incluso irritación de la cavidad faríngea con en fin de tratar de alguna forma estos dientes y encías y en general para incrementar la higiene oral en el curso de la rutina normal del lavado dental, se ha propuesto en la técnica proporcionar preparaciones orales o dentales capaces de explotar un efecto antibacteriano. De este modo, por ejemplo, la solicitud de patente europea EP 0 539 651 describe un dentífrico (pasta o polvo de dientes) en la que un material antibacteriano (agente metal-ion) es estable y de manera firme lleva o soporta un vehículo como un componente del dentífrico. Más específicamente, esta referencia describe un dentífrico que contiene un compuesto de calcio, tal como hidroxiapatita, en la forma de un polvo que tiene un metal antibacteriano llevado por el compuesto de calcio de una forma altamente estable de manera que se evite la toxicidad debida a la forma de ion del metal mientras que contribuye a un tratamiento médico de los dientes y además que proporciona el dentífrico con una buena capacidad de conservación durante un largo período de tiempo. En los tiempos recientes y basándose en el hecho de que el tejido de los huesos dentales está principalmente constituido por hidroxiapatita no estequiométrica que contiene iones de sustitución específicos tanto en los sitios catiónicos como aniónicos, el uso de las nanopartículas de un compuesto de hidroxiapatita se ha propuesto para el tratamiento de defectos óseos en los campos de cirugía de hueso de reconstrucción, estomatología quirúrgica, traumatología, ortopedia y odontología. De este modo, por ejemplo, la solicitud de patente europea EP 0 664 133 describe una preparación para estimular el crecimiento de tejido basándose en hidroxiapatita, en la que la hidroxiapatita se toma en la forma de una pasta acuosa con una concentración de 18 - 36% en peso con un tamaño de partícula de 15 a 60 µ??. De acuerdo con esta referencia, tal preparación cuando se aplica y se deja que interactúe con el tejido óseo a reparar durante un período largo de tiempo, actúa como un estimulador of de la actividad proliferativa y biosintética de los osteoblastos. La solicitud de patente internacional WO 2005/05815, o por otra parte, describe hidroxiapatita carbonatada que contiene magnesio (MgCHA) adecuada para crear un material del compuesto en la forma de un granulado secado por congelación adecuado para implantes óseos, particularmente en el campo de la odontología, que consta de dicha hidroxiapatita modificada y un polímero orgánico, preferiblemente un alginato. De acuerdo con esta referencia, un material del compuesto, que incluye tal hidroxiapatita modificada es capaz de reparar de manera eficaz los defectos óseos después de la aplicación e interacción con el tejido óseo durante un período largo de tiempo de la cantidad necesaria de producto al nivel de la cavidad existente en el hueso. Los autores de la presente invención han observado que los compuestos y composiciones de hidroxiapatita de la técnica anterior tienen un efecto limitado en el tratamiento de hipersensibilidad de los dientes a lo largo de la rutina normal de la higiene dental. Las operaciones de limpieza de los dientes mediante una pasta de dientes o las operaciones de enjuague y lavado de los dientes mediante enjuagues de dientes o gargarismo, incluso si es prolongado, puede durar un período de tiempo que está completamente limitado y es insuficiente para los compuestos de hidroxiapatita conocidos y para sus componentes adicionales opcionales para ejercer completamente su desensibilización y opcionalmente los efectos antimicrobianos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo con un aspecto de la misma, la presente invención además proporciona un compuesto de biológicamente activo capaz de mejorar de manera eficaz la desensibilización y remineralización, incluso en el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. Las nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato de acuerdo con la invención se definen en la reivindicación 1 anexa. Más específicamente, las nanopartículas biológicamente activas de la invención son nanopartículas de una hidroxiapatita no estequiométrica sustituida por carbonato, que tiene: a) un grado de cristalinidad CD menor de 40%, definiéndose el grado de cristalinidad como CD = (1 - X/Y) · 100 en la que: Y = altura del máximo de difracción a 2 T = 33°, X = altura del fondo de la difracción a 2 T = 33° del patrón de difracción de rayos X de las nanopartículas; b) una longitud L que varía entre 20 y 200 nm una anchura de W que varía entre 5 y 30 nm; y c) una relación de aspecto AR comprendida entre 2 y 40, estando la relación de aspecto definida como AR = LJWV. Los inventores han observado que las nanopartículas de hidroxiapatita sustituida por carbonato que tienen las características anteriormente mencionadas poseen una alta afinidad con los componentes minerales de la dentina y esmalte de los dientes y son capaces de "imitar" la estructura de estos componentes hasta el grado de que las nanopartículas sean capaces de interactuar de manera eficaz con la superficie de la dentina y del esmalte. Los inventores también han observado que las nanopartículas de la hidroxiapatita sustituida por carbonato de la invención logran al mismo tiempo una reactividad potenciada con la superficie de la dentina y del esmalte que se explota de manera eficaz incluso en el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. Aunque los inventores no desean estas sujetos a las limitaciones de ninguna teoría, se cree que esta actividad potenciada se debe a una combinación de factores que imitan a las nanopartículas de hidroxiapatita biogénicas, de manera que una composición no estequiométrica adecuada de la hidroxiapatita, un tamaño extremadamente reducido (nanoescala) y un posterior área de superficie alta del compuesto de hidroxiapatita no estequiométrico, un bajo grado de cristalinidad de la misma y una forma alargada (como se define por su relación de aspecto), que promueven tanto un incremento de solubilidad como una potenciación de la afinidad con los componentes minerales de la dentina y del esmalte.

Más específicamente, se cree que un papel principal en la potenciación de la reactividad de las nanopartículas de la invención está representado por el trastorno de la superficie elevada de su superficie exterior al que la estequiometría de iones de la parte de volumen de las partículas no se mantiene más.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las características y ventajas adicionales de la presente invención serán más fácilmente evidentes mediante los siguientes ejemplos de algunas realizaciones preferidas de los diversos aspectos de la presente invención proporcionados en el presente documento a continuación a modo de ilustración y no como limitación, dichos aspectos se entenderán mejor con referencia a las figuras anexas, en las cuales: La Fig. 1 muestra un patrón de difracción de rayos X de un ejemplo de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención; La Fig. 2 muestra los patrones de difracción de rayos X en un ejemplo de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención (a) y de nanopartículas (b) de apatita naturales (dentina); Las Figs. 3a, 3b, 3c y 3d muestran las imágenes TEM de algunos ejemplos de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención que muestran el tamaño nanométrico de las partículas; La Fig. 4 muestra una representación gráfica nanométrica de un ejemplo de las nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención; La Fig. 5 muestra un espectro de FTIR de un ejemplo de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención; Las Figs. 6a, 6b y 6c muestran las imágenes respectivas de SEM de una dentina radicular de la placa de los dientes de bovinos recientes en una condición desmineralizada (Fig. 6a), después de un minuto de contacto (Fig. 6b) y después de 10 minutos de contacto (Fig. 6c) con una suspensión de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Para los propósitos de la presente descripción y de las reivindicaciones que siguen, el término: nanopartícula, se usa para indicar una partícula que tiene un tamaño de partícula en general por debajo de 1 pm; preferiblemente, las nanopartículas de la invención tienen una forma acicular plana que en la mayoría está adaptada para interactuar con la superficie de la dentina y del esmalte. Para los propósitos de la presente descripción y de las reivindicaciones que siguen, la expresión: biológicamente activo, se usa para indicar la capacidad de una sustancia o composición de interactuar con la dentina de los dientes y / o esmalte y / o encías y / o los otros tejidos orales. Para los propósitos de la presente descripción y de las reivindicaciones que siguen, la expresión grado de cristalinidad, pretende indicar el porcentaje del compuesto de hidroxiapatita presente en el estado cristalino. Para los propósitos de la invención, el grado de cristalinidad se puede medir de acuerdo con procedimientos conocidos, tales como, por ejemplo, mediante el uso de análisis de difracción de rayos X. Dentro de la estructura de la definición proporcionada anteriormente, el grado de cristalinidad CD se mide de acuerdo con el procedimiento descrito en: Landi, E., Tampieri, A., Celotti, G., Sprio, S., "Densif ¡catión behaviour y mechanisms of synthetic hydroxyapatites", J. Eur. Ceram. Soc, 2000, 20, 2377 -2387 (de aquí en adelante de manera abreviada: el procedimiento de Landi et al.). El grado de cristalinidad de las nanopartículas también se puede evaluar de acuerdo con el procedimiento alternativo reseñado por Z. E. Erkmen "The effect of heat treatment on the morphology of D-Gun Sprayed Hydroxyapatite coatings", J. Biomed Mater Res (Appl Biomaterial) 48; 861 - 868, 1999 (de aquí en adelante de manera abreviada: el procedimiento de Erkmen). De acuerdo con este procedimiento alternativo, el grado de cristalinidad CD' se puede definir como CD' = (???) · 100 en la que: Y = área neta de los máximos de difracción + área de fondo, X = área neta de los máximos de difracción del patrón de rayos X de las nanopartículas X. Los valores numéricos del grado de cristalinidad CD' medido de acuerdo tonel procedimiento de Erkmen difieren de los del procedimiento de Landi et al.; en este ejemplo, de hecho, el grado de cristalinidad CD' de las nanopartículas de la invención es menor que 70%. Para los propósitos de la presente descripción y de las reivindicaciones que siguen, la expresión: menor que, como se usa antes en cualquier valor numérico, significa que excluye tal valor numérico y se usa para abarcar solamente un intervalo de valores inferiores. Para los propósitos de la presente descripción y de las reivindicaciones que siguen, el término: longitud L de las nanopartículas, pretende significar la dimensión de la nanopartícula medida a lo largo del eje mayor de la misma, mientras que el término: anchura W de las nanopartículas, pretende significar la dimensión de la nanopartícula medida a lo largo del eje menor de la misma. Para los propósitos de la invención, la longitud L y la anchura W de las nanopartículas se pueden medir de acuerdo con procedimientos conocidos, tales como, por ejemplo, mediante el uso de la microscopía electrónica de transmisión (TEM). Para los propósitos de la presente descripción y de las reivindicaciones que siguen, excepto que se indique de otra manera, todos los valores numéricos que expresan parámetros tales como cantidades, pesos, temperaturas, porcentaje, y así sucesivamente, se han de entender como que están modificadas en todos los casos por el término "aproximadamente". También, todos los intervalos incluyen cualquier combinación de los puntos máximos y mínimos descritos e incluyen cualesquiera intervalos intermedios en ellos, que pueden o no pueden estar enumerados en el presente documento específicamente. Como se ha mencionado anteriormente, las nanopartículas de la invención son nanopartículas de hidroxiapatita no estequiométricas sustituidas por carbonato que incorporan iones carbonato en la estructura de apatita. Esta característica de manera ventajosa potencia la actividad biológica de las nanopartículas, ya que el ion carbonato también se encuentra en la estructura de la hidroxiapatita natural. A este respecto, se ha de observar que el ion carbonato puede estar en dos sitios diferentes en la estructura de hidroxiapatita natural: a saber, puede parcialmente sustituir el ion OH (sitio A) y / o el ion P043" (sitio B). Tanto el contenido de carbonato total (en el intervalo de 3 - 8 % en peso) como en las cantidades relativas de la carbonación de tipo A y tipo B (A/B en el intervalo de 0,7 - 0,9) encontrado en la hidroxiapatita natural sustituida por carbonato depende de la edad del individuo y en la localización biológica del tejido calcificado. En las nanopartículas de la invención, la carbonación preferiblemente tiene lugar en el sitio B, ya que esto da como resultado en una reducción de la cristalinidad y un incremento de la solubilidad de la fase de apatita. En una realización preferida de la invención, las nanopartículas de hidroxiapatita comprenden entre 1 y 15% en peso y, más preferiblemente, entre 1 y 10% en peso basándose en el peso total de las nanopartículas de carbonato sustituido en la estructura de hidroxiapatita. De esta forma, la actividad biológica de las nanopartículas está potenciada de manera ventajosa, ya que su estructura se parece más estrechamente a la estructura de la apatita natural presente en los tejidos de los dientes. De acuerdo con una realización preferida de la invención, la relación A/B entre la sustitución de carbonato en el sitio hidroxilo (A) y la sustitución de carbonato en el sitio de fosfato (B) de la hidroxiapatita está comprendida entre 0,05 y 0,5 y, todavía más preferiblemente, comprendida entre 0,18 y 0,33. De acuerdo con otra realización preferida de la invención, la sustitución de carbonato en el sitio de fosfato (B) de la hidroxiapatita es mayor que o igual a 65% en peso y, todavía más preferiblemente, comprendida entre 90% y 100% en peso, del carbonato total presente en la hidroxiapatita. Estos patrones preferidos de sustitución de carbonato en la estructura de hidroxiapatita permiten de manera ventajosa incrementar la solubilidad de las nanopartículas en un ambiente biológico. De manera adicional, la sustitución de carbonato en el sitio de fosfato (B) de manera ventajosa induce una mayor afinidad de las nanopartículas de hidroxiapatita para lo osteoblatos, incrementando la adhesión celular y producción de colágeno. De acuerdo con una realización preferida de la invención, las nanopartículas tienen un grado de cristalinidad CD comprendido entre 25% y 35% medido de acuerdo con el procedimiento de Landi et al. Que corresponde a un grado de cristalinidad CD' comprendido entre 40% y 60% medido de acuerdo con el procedimiento de Erkmen. De esta manera, la actividad biológica de las nanopartículas puede estar potenciadas de manera ventajosa, ya que su baja cristalinidad ayuda en la promoción tanto de una solubilidad aumentada como una afinidad potenciada para los componentes minerales de la dentina y esmalte de los dientes. De acuerdo con una realización preferida de la invención, las nanopartículas tienen un área de superficie comprendida entre 30 y 60 m2/g. De esta manera la actividad biológica de las nanopartículas in en términos de reactividad con los componentes minerales de dentina y esmalte de los dientes puede estar potenciada de manera ventajosa. Para los propósitos de la invención, el área de la superficie del compuesto de hidroxiapatita se puede medir de acuerdo con procedimientos conocidos, tal como, por ejemplo, mediante el procedimiento BET. En relación con este parámetro, los inventores han observado que los valores medios del área de la superficie de las nanopartículas puede varar dentro del intervalo anteriormente mencionado como una función de la cantidad total de las nanopartículas sintetizadas por cada lote de producción, cuanto más fácilmente se alcanzan los valores más altos menor es la entidad del lote de producción. Como se ha indicado anteriormente, las nanopartículas de la invención tienen un tamaño reducido (una longitud L que varía entre 20 y 200 pm y una anchura W que varía entre 5 y 20 nm) medido por la técnica de TEM, y una forma alargada como se define por una relación de aspecto ratio AR que varía entre 2 y 40. De acuerdo con una realización preferida de la invención, las nanopartículas poseen una forma acicular o de plaqueta que tiene una longitud L comprendida entre 50 y 150 nm y una anchura W comprendida entre 5 y 20 nm. Preferiblemente, además, las nanopartículas tienen un espesor T medido por la técnica TEM que varía entre 2 y 15 nm.

La relación de aspecto AR de las nanopartículas está preferiblemente comprendida entre 2 y 16 y, todavía preferiblemente, entre 5 y 10. De esta forma, la actividad biológica de las nanopartículas puede estar potenciada de manera ventajosa, ya que la combinación de la forma reducida y tamaño alargado ayuda al sellado de manera eficaz de los pequeños canales de la dentina y y logran un alivio permanente eficaz del dolor en el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. De acuerdo con una realización preferida de la misma, la presente invención también proporciona un compuesto de hidroxiapatita biológicamente activo capaz de explotar de manera eficaz también un efecto antibacteriano y, de acuerdo con lo anterior, tratando de manera eficaz los trastornos de dientes y encías e incrementando en general la higiene oral incluso en el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. De acuerdo con esta realización preferida, las nanopartículas además comprenden una cantidad eficaz de un ion antibacteriano. Más preferiblemente, las nanopartículas de la invención comprenden entre 0,1 % y 20% en peso con respecto al contenido total de Ca de un ion de metal M antibacteriano sustituido en la estructura de hidroxiapatita De este manera, el efecto antibacteriano del ion de metal M se puede optimizar de manera optimizada. Preferiblemente, el metal M antibacteriano se selecciona entre el grupo constituido por Zn, Cu, Ag, y las mezclas de los mismos. De la manera más ventajosa, los iones de metal anteriormente mencionados explotan de manera eficaz una actividad antibacteriana capaz de prevenir la generación de enfermedades de caries dental y periodontales tales como blenorrea alveolar y reduciendo los fenómenos de halitosis. Dentro de la estructura de esta realización preferida, las nanopartículas tienen una realización molar (Ca + M)/P mayor que 1 ,7 y, más preferiblemente, comprendida entre 1 ,7 y 1 ,8. De esta forma, se puede asegurar que la sustitución de carbonato en la estructura de hidroxiapatita ha tenido lugar principalmente en el sitio B, ya que una relación molar (Ca + M)/P de las hidroxiapatitas no sustituidas es aproximadamente 1 ,67. Dentro de la estructura de esta realización preferida, las nanopartículas de la invención se pueden representar para propósitos puramente descriptivos mediante la siguiente fórmula: en la que x es un número comprendido entre 0,0055 y 0,6, y es un número comprendido entre 0,065 y 0,9 y z es un número comprendido entre 0 y 0,32. De acuerdo con otro aspecto de la misma, la presente invención se refiere a una composición que comprende las nanopartículas biológicamente activas descritas en el presente documento, en una realización preferida, tal composición está en una forma adecuada para la higiene oral y ventajosamente es capaz de mejorar de manera eficaz la desensibilización y remineralización de los dientes incluso en el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. Si las nanopartículas también incluyen un ion de metal antibacteriano, la composición es capaz también de manera ventajosa de explotar un efecto antibacteriano y, de acuerdo con lo anterior, tratar de manera eficaz trastornos de los dientes y de las encías y en general incrementar la higiene oral incluso el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. En particular, se ha observado que el efecto antibacteriano de los iones de metal se pueden obtener directamente in situ en la superficie de la dentina y del esmalte durante la resolubilización de las nanopartículas depositadas en ella, logrando de esta manera una liberación prolongada de los iones de metal, incluso después de la eliminación del dentífrico. Para los propósitos de la invención, la composición que incluye las nanopartículas de la invención puede estar en cualquier forma física adecuada para la higiene oral tal como suspensión, aceite, gel u otro producto sólido. De acuerdo con una realización preferida de la invención, la composición está en la forma de una suspensión que incluye entre 1 % y 40% en peso, más preferiblemente entre 10% y 20% en peso, de las nanopartículas biológicamente activas. De manera lo más ventajosa, esta suspensión se puede producir mediante un procedimiento bastante simple y económico, como se describirá en más detalle en el presente documento más adelante, y se puede usar directamente, por ejemplo en forma de gargarismo o enjuague bucal, para tratar los dientes y encías o se pueden mezclar con otros ingredientes cuando se formula un producto sólido o líquido tal como pasta de dientes o enjuague bucal. En una realización preferida de la invención, la suspensión tiene un pH comprendido entre 7 y 8 y, más preferiblemente entre 7 y 7,4. de esta forma, la suspensión se puede usar de manera ventajosa directamente como tal o en mezcla con otros ingredientes en la formulación de las composiciones eficaces de higiene oral. En cualquier caso y en una realización preferida, se ha probado que es ventajoso añadir agentes conservantes adecuados, tales como parabenos u otros conservantes oralmente aceptables conocidos por los expertos en la técnica, con el fin de prolongar la vida útil de la suspensión y evitar la posibilidad de contaminación por hongos o bacterias. Los inventores han observado de manera sorprendente que la suspensión de la invención es estable durante un período largo de tiempo incluso si no se añade ningún agente estabilizante a ella. En particular, se ha observado que la suspensión de la invención es estable durante al menos 30 días y, más generalmente, durante aproximadamente tres meses, sin usar ningún agente estabilizante. De acuerdo con una realización preferida alternativa de la invención, la composición puede estar en la forma de pasta de dientes, polvo de dientes, goma de mascar para la higiene oral y dental, pomada para las encías, enjuague bucal y concentrado de baño bucal y gargarismo. De acuerdo con una realización preferida de la invención, la composición puede comprender una combinación de nanopartículas biológicamente activas que comprenden una cantidad eficaz de un ion antibacteriano y nanopartículas biológicamente activas sin dicho ion. De esta forma, la entidad del efecto antibacteriano del ion de metal se lleva a cabo en la superficie de la dentina y del esmalte se puede ajustar de acuerdo con la mayoría de los requerimientos variados. De acuerdo con otra realización preferida, en la composición oral de la invención la cantidad de nanopartículas biológicamente activas en general variarán entre 3% y 30% en peso de la composición. Si la composición oral comprende una combinación de nanopartículas biológicamente activas que comprenden una cantidad eficaz de un ion antibacteriano y nanopartículas biológicamente activas sin dicho ion, la cantidad de cada una de estas dos clases de nanopartículas en general variará entre 1 ,5% y 15% en peso de la composición. Las composiciones orales de esta invención, de hecho, también contendrán otros ingredientes usados y conocidos de manera común. En la técnica para formular tales productos, dependiendo de la forma del producto oral. Por ejemplo, en el caso de un producto oral en la forma de una crema o pasta de dentífrica el producto preferiblemente comprenderá un agente abrasivo en partículas, una fase líquida que contiene humectante y un aglutinante o espesante que actúa para mantener el agente abrasivo en suspensión estable en la fase líquida, También son ingredientes usuales preferidos un tensioactivo y un agente aromatizante de los dentífricos comercialmente disponibles. Para los propósitos de la invención, se puede seleccionar un agente abrasivo en partículas adecuado entre el grupo que comprende: sílice, alúmina, alúmina hidratada, carbonato de calcio, fosfato dicálcico anhidro, fosfato dicálcico dihidrato y metafosfato sódico insoluble en agua. La cantidad de agente abrasivo en partículas en general variará entre 0,5% y 40% en peso de la pasta de dientes. Los humectantes usados de manera común son glicerol y jarabe de sorbitol (que comprende usualmente aproximadamente una solución al 70%). Sin embargo, los expertos en la técnica conocen otros humectantes incluyendo propilenglicol, lactitol, y jarabe de maíz hidrogenado. La cantidad de humectante en general variará entre 10% y 85% en peso de la pasta de dientes. La fase líquida puede ser acuosa o no acuosa. Del mismo modo, se han indicado numerosos agentes de unión o espesantes para uso en dentífricos, siendo los preferidos carboximetilcelulosa de sodio y goma xantano. Otros aglutinantes de goma natural incluyen aglutinantes tales como goma de tragacanto, goma karaya y goma arábiga, alginatos y carrageninas. Los agentes espesantes de sílice incluyen los aerogeles de sílice y diversas sílices precipitadas. Se pueden usar mezclas de aglutinantes. La cantidad de aglutinante incluida en un dentífrico está en general entre 0,1% y 5% en peso. Es usual incluir un tensioactivo en un dentífrico y de Nuevo la bibliografía describe una amplia diversidad de materiales adecuados. Los tensioactivos que han encontrado amplio uso en la práctica son lauril sulfato sódico y lauril sarcosinato de sodio. Se pueden usar otros tensioactivos aniónicos así como otros tipos tales como tensioactivos catiónicos, anfóteros y no iónicos. Los tensioactivos están usualmente presentes en una cantidad comprendida entre 0,5% y 5% en peso del dentífrico. Los aromas que usualmente se usan en dentífricos son los de base oleosa de menta verde y pipermín. Los ejemplos de otros materiales aromatizantes usados son mentol, clavo, gaulteria, eucalipto y anís. Una cantidad comprendida entre 0,1% y 5% en peso es una cantidad adecuada de aroma para incorporar en un dentífrico. Las composiciones orales de la invención pueden incluir una amplia diversidad de otros ingredientes opcionales. En el caso de un producto oral en la forma de una pasta de dientes, estos ingredientes opcionales pueden incluir un agente antiplaca tal como extracto de musgo, un ingrediente antisarro, tal como fosfato condensado, por ejemplo, un pirofosfato de metal alcalino, hexametafosfato o polifosfato; un agente edulcorante, tal como sacarina y sus sales, un agente opacificador, tal como dióxido de titanio, un conservante tal como formalina; un agente colorante, un agente de control de pH, tal como un ácido, base o tampón, tal como ácido cítrico. Las cantidades adecuadas de estos ingredientes opcionales se pueden seleccionar fácilmente por los expertos en la técnica como una función de las características funcionales a impartir a la pasta de dientes.. En el caso de un producto oral en la forma de una goma de mascar, la composición comprenderá además de los ingredientes mencionados anteriormente una base de goma adecuada que se puede seleccionar fácilmente por los expertos en la técnica. En el caso de un producto oral en la forma de enjuague bucal o gargarismo, la composición comprenderá ingredientes adecuados en forma líquida o soluble fácilmente seleccionare por los expertos en la técnica, tales como sorbitol, glicerol, aceites y materiales aromatizantes, agentes solubilizantes tal como aceite de ricino hidrogenado y etoxilado, tensioactivos, tales como lauril sulfato, y lauril sarcosinato de sodio, agentes conservantes, reguladores de viscosidad y otros ingredientes adecuados que se pueden seleccionar fácilmente por los expertos en la técnica. Para una discusión más completa de la formulación de composiciones orales se hace referencia a Harry's Cosmeticology, edición 17a, 1982, editado por J.B. Wilkinson y RJ. Moore. De acuerdo con otro aspecto de la misma, la presente invención se refiere a un procedimiento mejorado para producir una suspensión acuosa que incluye un compuesto de hidroxiapatita biológicamente activo que requiere una inversión y costes de operación bajos. Un procedimiento para preparar una suspensión acuosa que incluye nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato de acuerdo con la invención se identifica en la reivindicación anexa 20.

Más específicamente, el procedimiento de la invención comprende las etapas de: a) preparar una solución o suspensión acuosa que comprende un compuesto de Ca; b) formar nanopartículas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato mediante la adición de iones P043- a la solución o suspensión acuosa de la etapa a) mientras se agita de manera simultánea la misma durante un período comprendido entre 30 minutos y 8 horas mientras se mantiene dicha solución o suspensión a una temperatura menor que o igual a 60°C; c) agitar la suspensión obtenida en la etapa b) durante un tiempo de al menos dos horas a una temperatura menor que o igual a 60°C. Lo más ventajosamente, este procedimiento permite preparar de una forma medianamente rápida y económica una suspensión de nanopartículas biológicamente activas que se pueden usar fácilmente como tal composición para la higiene oral o usarse en mezcla con otros ingredientes para producir las composiciones para la higiene oral. Lo más ventajosamente, este procedimiento permite preparar de una forma medianamente rápida y económica una suspensión de nanopartículas biológicamente activas que es estable durante un período largo de tiempo incluso si no se añaden agentes estabilizantes a la misma. Como se ha indicado anteriormente, se ha observado que la suspensión así preparada es estable durante al menos 30 días y, más generalmente, durante aproximadamente dos - tres meses, sin usar cualquier agente estabilizante. Para los propósitos de la invención, la etapa anteriormente mencionada a) de preparación de una solución o suspensión acuosa que comprende un compuesto de Ca se puede llevar a cabo de cualquier manera convencional, tal como mediante la disolución o suspensión del compuesto de Ca en agua. De acuerdo con una realización preferida de la invención, el compuesto de Ca es una sal de calcio seleccionado entre el grupo que comprende hidróxido de calcio, carbonato de calcio, acetato de calcio, oxalato de calcio, nitrato de calcio, y las mezclas de los mismos. De esta forma, el coste del procedimiento se puede de manera ventajosa reducir ya que estos compuestos de Ca son mercancías disponibles fácilmente en el mercado a muy bajo coste. De manera adicional, estos compuestos de Ca se pueden elaborar y almacenar fácilmente y con la ventaja de las operaciones de fabricación. En el procedimiento de la invención, la etapa a) se lleva a cabo preferiblemente con el fin de lograr una suspensión de nanopartículas que tienen un pH básico. Preferiblemente, la solución o suspensión acuosa de la etapa a) tiene un pH comprendido entre 8 y 12. De acuerdo con una realización preferida de la invención, la etapa a anteriormente mencionada) se lleva a cabo en ausencia sustancial o aniones no aceptables por vía oral. De esta forma, una suspensión de nanopartículas se puede producir para que no requiera ningún tratamiento adicional para retirar las sustancias no deseadas y que se puede usar directamente como tal, excepto para un ajuste de pH opcional mediante un agente adecuado, tal como ácido cítrico. En el procedimiento de la invención, las nanopartículas de hidroxiapatita sustituida por carbonato se forman en la etapa b) mediante la adición de iones P043" a la solución o suspensión acuosa de la etapa a) y mediante la agitación de manera simultánea de esta solución o suspensión con el fin de capturar el dióxido de carbono presente en la atmósfera y lograr la sustitución de carbonato deseada en el sitio de fosfato (B) del compuesto de la hidroxiapatita que se está formando. De esta forma, la sustitución de carbonato se puede llevar a cabo de manera ventajosa agitando la solución o suspensión por ejemplo mediante un agitador mecánico. En una realización alternativa, la agitación requerida de la solución o suspensión se puede lograr hacienda burbujear aire, un gas que contiene C02 o una mezcal de los mismos en la fase líquida o mediante combinación de una agitación mecánica con un burbujeo de gas. Para los propósitos de la invención, los iones P043- se añaden a la solución o suspensión acuosa de la etapa a) durante un tiempo que en general depende de la cantidad de la solución fosfórica usada con respecto a la cantidad de la solución o suspensión básica de calcio, y que se puede seleccionar por los expertos en la técnica. Preferiblemente, la etapa b) se lleva a cabo durante un tiempo comprendido entre 30 minutos y 2 horas con el fin de mantener el tiempo de reacción y los costes de operación tan bajos como sea posible. De acuerdo con la invención, la etapa b) se lleva a cabo mientras se mantiene dicha solución o suspensión a una temperatura menor que o igual a 60°C. Los inventores han observado que de esta forma el grado de cristalinidad CD de las nanopartículas se puede mantener por debajo del valor máximo anteriormente mencionado 40% (70% en el caso de CD'). En una realización preferida de la invención, la etapa b) se lleva a cabo mientras se mantiene dicha solución o suspensión a una temperatura menor que o igual a 40°C y más preferiblemente comprendida entre 25° y 40°C. De esta forma, el grado de cristalinidad CD de las nanopartículas se puede mantener dentro del intervalo de valores preferido anteriormente mencionado (CD = 25 - 35%; CD' = 40 - 60%). De acuerdo con una realización preferida de la invención, la etapa b) se lleva a cabo mediante la adición, preferiblemente gota a gota, de una solución acuosa que incluyen iones P043" a la solución o suspensión acuosa de la etapa a). De acuerdo con una realización alternativa preferida de la invención, la solución acuosa que incluye los iones P043" añadidos en la etapa b) pueden además comprender iones HCO3" , de esta forma, puede ser posible ajustar hasta el grado apropiado la sustitución de carbonato deseado en el sitio de fosfato (B) del compuesto de hidroxiapatita que se está formando. Dentro de la estructura de esta realización preferida, la solución acuosa anteriormente mencionada que incluye iones HCO3" y P043" se puede preparar haciendo burbujear aire, C02 o una mezcla de los mismos a través de agua para obtener una solución de ácido carbónico y después añadir H3P04 a ella. De acuerdo con otra realización preferida alternativa de la invención, la etapa b) se puede llevar a cabo mediante la adición simultánea primero de una solución que contiene iones C032" y una segunda solución que contiene iones P043" a una solución o suspensión acuosa de la etapa a), en una realización preferida de la invención, el procedimiento se lleva a cabo de manera que la suspensión de las nanopartículas obtenidas de la etapa c) tiene un pH comprendido entre 7 y 8 y, más preferiblemente, entre 7 y 7,4. De esta forma y como ya se ha indicado anteriormente, el procedimiento de la invención permite producir una suspensión que se puede de manera ventajosa usar directamente como tal o mezclada con otros ingredientes en la formulación de las composiciones de la higiene oral eficaz con una simplificación notable de las operaciones de fabricación de las composiciones y una reducción de coste notable.

Como se ha indicado anteriormente, la suspensión de nanopartículas producida de esta forma también muestra características de estabilidad notables y tiene una vida útil de al menos 30 días, y más generalmente, de aproximadamente dos - tres meses, incluso si no se añaden a la misma agentes estabilizantes. De acuerdo con una realización preferida de la invención, la solución o suspensión acuosa de la etapa a) puede además comprender un óxido o una sal de un metal M antibacteriano. Preferiblemente, el metal M antibacteriano se selecciona entre el grupo que comprende Zn, Cu, Ag, y las mezclas de los mismos. De esta forma, una suspensión de nanopartículas se puede producir para que también muestre un efecto antibacteriano que potencia las características de la higiene oral de la suspensión o de los otros productos (líquido o sólido) en el que la suspensión está incorporada. En una realización preferida, la sal de metal anteriormente mencionada es una sal orgánica o inorgánica aceptable por vía oral seleccionada entre el grupo que comprende: lactatos, gluconatos, citratos, acetatos e hidróxido. De esta forma, una suspensión de nanopartículas se puede producir para que no requiera ningún tratamiento adicional para eliminar las sustancias no deseadas y que se pueden usar directamente como se ha indicado anteriormente. En una realización preferida, la etapa b) se lleva a cabo de manera que la relación de los iones Ca y M contenidos en la solución o suspensión de la etapa a) y los iones P043" añadidos a la misma es mayor que 1 ,7. De esta manera, se puede asegurar que la sustitución de carbonato en la estructura de hidroxiapatita ha tenido lugar principalmente en el sitio de fosfato B y una suspensión de nanopartículas se puede producir Para que de manera ventajosa explote una actividad antibacteriana capaz de prevenir la generación de dientes con caries y enfermedades periodontales tal como blenorrea alveolar y reduciendo el fenómeno de halitosis. En el procedimiento de la invención, el crecimiento de las nanopartículas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato se lleva a cabo en la etapa c) mediante agitación de la suspensión obtenida en la etapa b) (durante la que principalmente tiene lugar una nucleación de las nanopartículas) durante un tiempo de al menos dos horas a una temperatura menor que o igual a 60°C. Preferiblemente, la etapa c) se lleva a cabo durante un tiempo comprendido entre 2 y 24 horas y más preferiblemente entre 2 y 12 horas, como se requiere por las circunstancias con el fin de que tenga un tiempo de crecimiento de las nanopartículas suficiente para que alcance el tamaño deseado y con el fin de obtener una fase individual. En una realización preferida de la invención, la etapa c) se lleva a cabo mientras se mantiene la suspensión de nanopartículas a una temperatura comprendida entre 25° y 40°C.

En una realización preferida de la invención, la etapa c) se lleva a cabo mientras se mantiene la suspensión de nanopartículas a la misma temperatura de la etapa b). De esta forma, el procedimiento se puede llevar a cabo de manera ventajosa con un control más simple y a un coste inferior. De acuerdo con otro aspecto de la misma, la presente invención se refiere a un procedimiento mejorado para preparar un compuesto de hidroxiapatita biológicamente activo que requiere bajos costes de inversión y operativos. Un procedimiento para preparar las nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato de acuerdo con la invención se define en la reivindicación anexa 35. Más específicamente, el procedimiento de la invención comprende las etapas de: a) preparar una suspensión acuosa que incluye dichas nanopartículas por medio de un procedimiento como se describe en el presente documento; b) separar las nanopartículas sólidas de la suspensión obtenida de la etapa a); c) secar las nanopartículas sólidas húmedas así obtenidas. En una realización preferida, la etapa b de separación) se lleva a cabo mediante decantación, centrifugación o filtración que usan aparatos y técnicas bien conocidos por los expertos en la técnica. En una realización preferida, la etapa c de secado) se lleva a cabo mediante congelación de las nanopartículas sólidas húmedas a una temperatura menor que 0°C hasta que alcance un peso constante. Dentro de la estructura de esta realización preferida, la etapa c de secado) preferiblemente se lleva a cabo mediante secado por congelación de las nanopartículas sólidas húmedas a una temperatura comprendida entre -20° y -50°C, lo más preferiblemente a aproximadamente -40°C. En una realización preferida, el procedimiento también puede comprender la etapa d adicional) de lavado de las nanopartículas sólidas separadas con agua o una solución básica antes de efectuar la etapa c de secado). De manera ventajosa, esta etapa d de lavado adicional) sirve para la función útil de eliminación de cualesquiera residuos de ácido posiblemente absorbidos o atrapados por las nanopartículas. De acuerdo con otro aspecto de la misma, la presente invención se refiere a un procedimiento para fabricar una pasta de dientes que comprende un compuesto de hidroxiapatita biológicamente activo que requiere una inversión y costes operativos bajos. Un primer procedimiento para fabricar una pasta de dientes que comprende nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato de acuerdo con la invención se define en la reivindicación anexa 39 y comprende las etapas de: a) preparar una suspensión acuosa que incluye dichas nanopartículas por medio de un procedimiento como se describe en el presente documento; b) mezclar dicha suspensión acuosa con otros ingredientes de la pasta de dientes. Como ya se ha indicado anteriormente, este procedimiento de manera ventajosa permite incorporar de manera fácil las nanopartículas en la pasta de dientes de una manera completamente simple y conveniente que explota las propiedades útiles, en particular características de estabilidad y de pH, de la suspensión de nanopartículas producidas de acuerdo con la invención. De manera completamente ventajosa, el procedimiento para fabricar una pasta de dientes de la invención no requiere ninguna separación o secado de las nanopartículas, con una reducción notable de la complejidad de la planta, de los costes de inversión y operativos relacionados, de las pérdidas de producto durante la fabricación y de los rechazos de productos. Además, la etapa de mezclado de la suspensión acuosa de las nanopartículas con otros ingredientes de la pasta de dientes se puede llevar a cabo con un mejor control de temperatura ya que la suspensión acuosa reduce la fricción y ayuda a la eliminación del calor generado en el aparato de mezcla. Un segundo procedimiento alternativo para fabricar una pasta de dientes que comprende nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato de acuerdo con la invención se define en la reivindicación anexa 40 y comprende las etapas de: a) preparar dichas nanopartículas sólidas mediante un procedimiento como se describe en el presente documento; b) mezclar las nanopartículas sólidas con otros ingredientes de la pasta de dientes. Este procedimiento alternativo permite fabricar una pasta de dientes en aquellos casos en los que el uso de la suspensión de nanopartículas anteriormente descrita puede no ser deseable por razones logísticas u otras. En una realización preferida de los procedimientos de fabricación descritos anteriormente, la etapa b de mezcla b) se lleva a cabo en un aparato de mezcla que se mantiene en un grado de vacío predeterminado, que se puede seleccionar fácilmente por los expertos en la técnica con el fin de obtener una mezcla uniforme de ingredientes, que se alcanza mediante el uso de bombas de vacío convencionales. En una realización preferida del primer procedimiento de fabricación, la etapa b de mezcla) se lleva a cabo mediante b1) mezclar la suspensión acuosa de la etapa a) con otros ingredientes de la pasta de dientes excepto para cualquier tensioactivo; b2) incorporar al menos un tensioactivo en la mezcla así obtenida. De esta forma, la formación de espuma durante la operación de mezcla se puede minimizar. Dentro de la estructura de esta realización, la etapa b2 de incorporación) se lleva a cabo preferiblemente en vacío usando un equipo convencional con el fin de minimizar la formación no deseada de espuma. De acuerdo con otro aspecto de la misma, la presente invención se refiere a un procedimiento de remineralización de manera local de los dientes que comprende poner en contacto los dientes con una composición que comprende nanopartículas biológicamente activas como se describe en el presente documento. De manera lo más ventajosa y gracias a las características de las nanopartículas descritas anteriormente, tal procedimiento permite que los dientes se remineralicen de manera eficaz incluso en el tiempo limitado disponible durante la rutina normal de la higiene dental. La etapa de contacto del procedimiento de remineralización se puede llevar a cabo de numerosas formas dependiendo de la forma de la composición que contiene las nanopartículas. Por ejemplo, si la composición es una pasta de dientes, la etapa de contacto se puede llevar acabo de manera simple mediante lavado de los dientes, mientras si la composición en un enjuague bucal, la etapa de contacto se lleva a cabo manteniendo el enjuague bucal en la cavidad oral durante un tiempo adecuado, por ejemplo durante unos pocos minutos. De acuerdo con la invención y como se mostrará en más detalle a continuación, de hecho, las nanopartículas de la invención poseen tal alta capacidad de remineralización que su efecto se pueden detectar incluso poniendo en contacto las nanopartículas con los dientes durante un período de tiempo limitado. En los siguientes Ejemplos, los porcentajes y partes están en peso salvo que se indique de otra manera.

EJEMPL0 1 (Preparación de una suspensión acuosa de nanopartículas) Se prepararon 2184 g de una suspensión acuosa de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención de acuerdo con el siguiente procedimiento. En una primera etapa, una suspensión acuosa que comprende 356,2 g de Ca(OH)2 , 48,8 g de ZnO y 45 g de Ca(C03) en 1060 g de H20 se preparó en un recipiente de reacción convencional mientras se agitaban los ingredientes con un agitador mecánico. Durante esta etapa, la suspensión resultante se llevó hasta una temperatura de 40°± 2 °C mediante una resistencia eléctrica o mediante cualquier otro elemento de calentamiento adecuado tal como ejemplo una camisa con termostato en la que el fluido de calor, tal como aceite o vapor, se hace circular. Una vez que la temperatura deseada se ha alcanzado las nanopartículas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato se formaron mediante la adición gota a gota de iones de P043" a la suspensión acuosa de la etapa precedente se mantenía la misma agitación de manera simultánea, en este caso, se añadieron 674 g de una solución de ácido constituida por una mezcla 70/30 de H3P04 (75%)/H20, a una velocidad de goteo de 22 g /min (0,4 g /s), mientras se mantenía la agitación de manera continua y se mantenía constante la temperatura del recipiente de reacción. Después de aproximadamente 30' y 30" se obtuvo una suspensión de nanopartículas que se agitó posteriormente durante un período de tiempo de aproximadamente dos horas a una temperatura de 40°+ 2°C, después de lo cual se obtuvo una suspensión que tiene aproximadamente 30 - 31% en peso de nanopartículas y que tiene un pH de aproximadamente 7 ± 0,2. La suspensión de nanopartículas se podía fácilmente usar como tal o como un ingrediente activo para la preparación posterior de una pasta de dientes, enjuague bucal u otra composición oral o dental de acuerdo con la invención.

EJEMPLO 2 (Preparación de nanopartículas sólidas) Se prepararon 670 g de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención primero preparando 2184 g de una suspensión acuosa de acuerdo con el procedimiento y usando los mismos ingredientes del Ejemplo 1 precedente y después llevando a cabo las siguientes etapas adicionales. En primer lugar, las nanopartículas sólidas se separaron del líquido mediante filtración sobre un papel Millipore con un diámetro de poro de 45 pm y después se lavaron de manera repetida con una solución acuosa diluida de CaC03 para eliminar cualquier residuo ácido. Las nanopartículas sólidas húmedas así obtenidas se secaron por congelación a -40°C hasta que alcanzaron un peso constante, se tamizaron a (0 = 120 - 20 micrómetros) y se almacenaron a una temperatura de 0 - 4°C. Las nanopartículas así obtenidas, que tenían un aspecto de polvo de color blanco, se caracterizaron después como sigue. 1 ) Difracción de rayos X (XRD) Se recogieron los patrones en polvo de rayos X usando un difractómetro de polvo Philips PW 1710 equipado con un monocromador secundario de grafito usando radiación Cu Ka generada a 40 kV y 40 mA. Se configura el instrumento con una divergencia de 1 ° y 0,2 mm de las rendijas de recepción. Se prepararon las muestras usando la carga frontal de los soportes de muestras de aluminio que tienen 1 mm de profundidad, 20 mm de altura y 15 mm de anchura. El intervalo 2 T estaba entre 5o y 60° con un tamaño de incremento (2 T) de 0,05° y un tiempo de recuento (s) de 3. En la Fig. 1 se muestra el patrón de XRD de las nanopartículas, que permite determinar el grado de cristalinidad de las nanopartículas. E la Fig. 1 , la intensidad de la línea se relaciona con su porcentaje de (unidades arbitrarias), considerando la línea más alta igual a 100. El grado de cristalinidad, se evaluó de acuerdo con el procedimiento de Landi et al. y el procedimiento Erkmen anteriormente mencionado. De acuerdo con el procedimiento de Landi et al., el grado de cristalinidad de las nanopartículas evaluado a partir del patrón de XRD reseñado en la Fig 1 era de aproximadamente 30%. De acuerdo con el procedimiento de Erkmen, el grado de cristalinidad de las nanopartículas evaluado a partir del patrón de XRD reseñado en la Fig 1 era de aproximadamente 52%. De acuerdo con la naturaleza de las nanopartículas de hidroxiapatita sustituida por carbonato y como también se puede deducir de los patrones reseñados en la Fig. 2, en la que la curva es el patrón de las nanopartículas de hidroxiapatita biológicamente activas de acuerdo con la invención y la curva b es el patrón de las nanopartículas de hidroxiapatita naturales, se puede observar la similitud entre nanopartículas de hidroxiapatita naturales (dentina) y las nanopartículas de hidroxiapatita de acuerdo con la invención. 2) Caracterización morfológica mediante Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM) Las observaciones de microscopía Electrónica de Transmisión (TEM) se llevaron a cabo usando un Philips CM 100. Las muestras en polvo se dispersaron de manera ultrasónica en agua ultrapura y después unas pocas gotitas se hicieron gotear sobre láminas de carbono agujereadas apoyadas sobre micromallas de cobre convencionales. Las imágenes de TEM de las nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención se reseñan en las Figuras 3a, 3b, 3c y 3d respectivamente donde es posible apreciar la forma alargada de la nanopartícula con morfología en forma acicular y de plaqueta muy cerca de las observadas para los cristales con estructura de apatita para los cristales con estructura de apatita. Las nanopartículas tenían una longitud media L de aproximadamente 100 nm, una anchura media W de aproximadamente 10 nm y una media de espesor T de aproximadamente 5 nm. La relación de aspecto media A/R era 10. 3) Análisis térmico (TGA-DSC) Las investigaciones termogravimétricas se llevaron a cabo sobre las nanopartículas usando un Thermal Analysis SDT Q 600. El calentamiento se realizó en un flujo de nitrógeno (100 ml/min) usando un soporte de muestra de alúmina a una velocidad de 10°C/min hasta 1000°C. El peso de las muestras estaba alrededor de 10 mg. La Fig. 4 reseña los resultados de un análisis termogravimétrico de las nanopartículas que muestran que el peso disminuye con relación a la descomposición de la fase inorgánica. La línea a corresponde a una pérdida en porcentaje en peso como una función de la temperatura del tratamiento y la línea b representa el derivado de la pérdida en porcentaje en peso con respecto a la temperatura. La línea c corresponde al flujo de calor implicado en transición de las fases que no están presentes en las muestras de las nanopartículas. La línea b muestra un amplio máximo entre 150°C y 300°C debido a la pérdida del agua físicamente absorbida (pérdida de peso de 2,2 ± 0,5%), un amplio máximo entre 400°C y 600°C debido tanto a la pérdida de agua absorbida químicamente como al procedimiento de descarbonatacíón (pérdida de peso 0,7 ± 0,3%). El máximo entre 800°C y 1000°C se puede atribuir al procedimiento de deshidroxilación (pérdida de peso de 1 ,5 ± 0,5%). La amplitud el máximo se debe en parte al bajo grado de cristalinidad de las nanopartículas. 4) Análisis de área de superficie (BET) El área de superficie específico de las nanopartículas se evaluó mediante el procedimiento Brunauer, Emmet, Teller [S. Brunauer, P. H. Emmet, E. Teller, Adsorption of gases in multimolecular layers. J. Am. Chem. Soc. 60 (1938) 309 - 319], [ S.J; Greg, K.S. Sing (Eds.), Adsorption, Surface Area y Porosity, Academic Press, 1997 O. Gauthir, J.M. Boiler, E. Aguado, P. Piletand, G. Daculsi] se llevó a cabo mediante un instrumento CarióErba Sorpty 1750 y usando N2 como gas de adsorción. Los análisis se realizaron sobre 300 mg de muestras. Antes de la adsorción de gas, las muestras se secaron a vacío (2 mbar (0,200 kPa)) mientras se incrementaba la temperatura, a una velocidad de 10°C/min, desde 25°C a 100°C. La adsorción de N2 se llevó después a cabo manteniendo la muestra en N2 líquido. Cada medición de área de superficie suministrada por el instrumento corresponde a la media de tres valores. El área de la superficie media de las nanopartículas era de aproximadamente 30 m /g.

) Análisis de composición química: Plasma acoplado de manera inductiva: espectrometría de Emisión Óptica aCP-OES) La cantidad de calcio, cinc y fósforo en las muestras de nanopartículas se obtuvo usando una técnica de Plasma acoplado de manera inductiva - Espectrometría de Emisión Óptica (ICP- OES). Las mediciones de ICP-OES se llevaron a cabo con un instrumento Perkin Elmer Optima 4200 DV. Las muestras se han disuelto previamente en ácido nítrico ultrapuro al 1 % para obtener una concentración de los elementos entre 1 y 8 ppm. Las nanopartículas mostraban una relación molar de volumen (Ca+M)/P de aproximadamente 1 ,98 y un contenido en Cinc de aproximadamente 18% en peso con respecto al contenido total de Ca. 6) Caracterización espectroscópica mediante análisis de Infrarrojos de la Transformada de Fourier (TTIR*) Los espectros infrarrojos se registraron entre 4000 y 400 cm 1 a 2 cm"1 de resolución usando un espectrómetro Bruker EFS 66v/S. Se obtuvieron los sedimentos (KBr) a vacío mediante el uso de muestras en polvo (1 mg) mezclados cuidadosamente con KBr de calidad infrarroja (200 mg). El espectro FTER de las nanopartículas se muestra en la fig. 5. El espectro muestra las señales relacionadas con los grupos P043" (1037 cm"1), HP0 2" (955 cm"1), OH" (3444 cm"1 y 1630 cm"1), C032" (870 cm"1). Una comparación entre el área máxima a 870 cm'1 de las nanopartículas y el área máxima a 870 cm"1 de un patrón de referencia de CaC03 que permite evaluar una cantidad de C032" de aproximadamente 3% en peso basándose en el peso total de las nanopartículas. La banda a 870 cm"1 proporciona información sobre el tipo de carbonación de apatita.

El perfil de desconvolución del máximo de carbonato a 870 cm"1 permite deducir que la carbonación de hidroxiapatita es predominantemente del tipo B (A/B relación de aproximadamente 0,05). Los datos de caracterización revelante de las nanopartículas se resumen en la siguiente Tabla 1 EJEMPLO 3 Se prepararon 2124 g de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención primero preparando 1449,5 g de una suspensión acuosa de acuerdo con el procedimiento y usando los mismos ingredientes del Ejemplo 1 precedente excepto por el hecho de que la cantidad de agua de aproximadamente 1000 g, la cantidad de ZnO era de 4,5 g, la cantidad de CaC03 era de 22,5 g, la cantidad de Ca(OH)2 era 422,5 g. Durante esta etapa, la suspensión resultante se llevó a cabo a una temperatura de 3 40° ± 2 °C mediante el mismo procedimiento del Ejemplo 1 precedente. Una vez que se alcanzó la temperatura deseada, se formaron las nanopartículas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato mediante la adición gota a gota de iones P043" de la misma manera y en las mismas cantidades como se describe en el Ejemplo 1 precedente.

Después de aproximadamente 30' y 30" se obtuvo una suspensión de nanopartículas que se trató posteriormente de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 precedente. Las nanopartículas se separaron después de la suspensión acuosa así obtenida de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 2 precedente. Las nanopartículas así obtenidas después se caracterizaron de acuerdo con los procedimientos y métodos descritos en el Ejemplo 2. Los datos de caracterización de las nanopartículas se reseñan en la siguiente Tabla 1.

EJEMPLO 4 Se prepararon 2184 g de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención primero preparando 1510 g de una suspensión acuosa de acuerdo con el procedimiento y usando los mismos ingredientes del Ejemplo 1 precedente excepto por el hecho que la cantidad de Ca(OH)2 era de aproximadamente 405 g y que no añadió ningún ingrediente de ion metálico no a la suspensión. Durante esta etapa, la suspensión resultante se llevó a cabo a una temperatura de 40°± 2 °C mediante el mismo procedimiento del Ejemplo 1 precedente. Una vez que se alcanzó la temperatura deseada, se formaron nanopartículas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato mediante la adición gota a gota de iones P043' de la misma forma y en las mismas cantidades como se describe en el Ejemplo 1 precedente. Después de aproximadamente 30' y 30" se obtuvo una suspensión de nanopartículas que posteriormente se trató de la misma manera que se ha descrito en el Ejemplo 1 precedente. Las nanopartículas después se separaron de la suspensión acuosa así obtenida de acuerdo con el procedimiento de separación en el Ejemplo 2 precedente. Las nanopartículas así obtenidas se caracterizaron después de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 2. Los datos de caracterización relevantes de las nanopartículas se reseñan en la siguiente Tabla 1.

TABLA 1 * = % en peso con respecto al contenido total de Ca. ** = % en peso con respecto al peso total de las nanopartículas. *** = en este caso solamente Ca estaba presente EJEMPLO 5 (Evaluación de la actividad de remineralización de la suspensión acuosa de nanopartículas) Con el fin de evaluar la actividad de remineralización de la suspensión acuosa de las nanopartículas preparadas de acuerdo con el Ejemplo 1 precedente, se llevó a cabo el siguiente ensayo Se obtuvieron dientes de bovinos recientes y se obtuvo una placa de dentina radicular mediante el corte con una sierra de diamantes. El ligamento periodontal se retiró usando una legra metálica y se retiró el cemento de la raíz usando un taladro dental de diamante con enfriamiento con agua. La dentina se lixivió con ácido ortofosfórico durante 1 minuto con el fin de retirar la capa de manchas y exponer los túmulos de la dentina. Se retiró por lavado el ácido con una pulverización con agua durante 1 minuto y las muestras se dejaron humedecer. Después una alícuota de la suspensión de nanopartículas de acuerdo con el Ejemplo 1 precedente se aplicó sobre las placas de dentina usando un cepillo. Las placas se dejaron humedecer en una cámara reincubación a 37° C durante un tiempo de aplicación de aproximadamente 1 minuto después de ese tiempo las muestras se enjuagaron con pulverización de aire - agua durante 1 minuto y se procesaron para Microscopís Electrónica de Barrido (SEM). Las Figs. 6a, 6b y 6c muestran las características de la dentina al comienzo (Fig. 6a-desmineralizada) y de muestras remineralizadas después de la aplicación de las nanopartículas durante 1 minuto (Fig. 6b) y durante 10 minutos (Fig. 6c). La Fig. 6b muestra una formación de cristales notable y la obliteración posterior de los túmulos de la dentina patentes incluso con un contacto durante un tiempo muy limitado (1 minuto ) entre la dentina y la suspensión de nanopartículas. La Fig. 6c una deposición potenciada de la nanopartícula sobre el sustrato de dentina en función del tiempo de contacto.

EJEMPLO 6 (Pasta de dientes) Se preparó una pasta de dientes que incluye nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención de acuerdo con el siguiente procedimiento y a partir de los siguientes ingredientes. En una primera etapa, una suspensión acuosa que incluye nanopartículas biológicamente activas (contenido total de sólidos: 30% en peso) se preparó de esta manera y usando los mismos ingredientes y cantidades descritas en el Ejemplo 1. La suspensión acuosa así obtenida, después se mezcló con los otros ingredientes de la pasta de dientes como se muestra en la tabla a continuación excepto para el tensioactivo.

La mezcla se llevó a cabo en un aparato de mezcla conveniente a un grado de vacío adecuado seleccionado entre los valores usuales conocidos los expertos en la técnica. Una vez que se obtuvo una mezcla homogénea, el tensioactivo se incorporó en el aparato de mezcla mientras se mantenía un grado de vacío predeterminado seleccionado entre los valores usuales conocidos por los expertos en la técnica. De esta forma, se obtuvo una pasta de dientes que tiene la composición reseñada en la siguiente Tabla 2.

TABLA 2 * = Nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato que incluye iones Zn preparadas de acuerdo con el Ejemplo 1.

** = Nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato preparadas de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 excepto por el hecho que no se utilizaron iones Zn.

EJEMPLO 7 (Enjuague bucal) Se preparó un enjuague bucal que incluye nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención mezclando una suspensión producida de acuerdo con el Ejemplo 1 precedente de una manera convencional con ingredientes convencionales. Se obtuvo un enjuague bucal que tiene la composición reseñada en la siguiente Tabla TABLA 3 EJEMPLO 8 (Goma de mascar para limpieza de dientes) Una goma de mascar que incluye nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la invención se preparó mezclando nanopartículas sólidas secas producidas de acuerdo con el Ejemplo 2 precedente de una manera convencional con ingredientes convencionales. Se obtuvo una goma de mascar que tiene reseñada en la siguiente Tabla 4.

TABLA 4 Ingrediente Cantidad [%] Base de goma de mascar 91 ,65 nanopartículas HA-Zn * 2 nanopartículas HA ** 2 Glicerina 3 Sacarina sódica 0,025 Extracto de musgo hidroglicólico valorado en 2% de ácido úsnico 0,1 Aroma de menta 1

Claims (46)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1. Nanopartículas biológicamente activas de una hidroxiapatita no estequiométrica sustituida por carbonato, que tiene: a) un grado de cristalinidad CD menor que 40%, estando definido el grado de cristalinidad como CD = (1-X/Y) · 100 en la que: Y = altura del máximo de difracción a 2 T = 33°, X = altura del fondo de difracción a 2 T = 33° del patrón de difracción de las nanopartículas de rayos X; b) una longitud L que varía entre 20 y 200 nm y una anchura de W que varía entre 5 y 30 nm; y c) una relación de aspecto AR comprendida entre 2 y 40, estando definida la relación de aspecto como AR = LA/V.
2. 2. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 , que comprende entre 1% y 15% en peso de carbonato sustituido en la estructura de hidroxiapatita.
3. 3. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 , en la que una relación A/B entre una sustitución de carbonato en el sitio hidroxilo (A) una sustitución de carbonato en el sitio de fosfato (B) de la hidroxiapatita está comprendida entre 0,05 y 0,5.
4. 4. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 ó 3, en las que la sustitución de carbonato en el sitio de fosfato (B) de la hidroxiapatita es mayor que o igual a 65% en peso del carbonato total presente en la hidroxiapatita.
5. 5. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 , que tiene un grado de cristalinidad CD comprendido entre 25% y 35%.
6. 6. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 , que tiene un área de superficie comprendida entre 30 y 60 m2 /g.
7. 7. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 , que tiene una forma sustancialmente acicular o de placa que tiene una longitud L comprendida entre 50 y 150 nm y una anchura W comprendida entre 5 y 20 nm.
8. 8. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que comprende además una cantidad eficaz de un ion antibacteriano.
9. 9. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende entre 0,1 y 20% en peso con respecto al contenido total de Ca de un ion de metal M antibacteriano sustituido en la estructura de hidroxiapatita.
10. 10. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 9, en las que dicho metal M se selecciona entre el grupo que comprende Zn, Cu, Ag, y sus mezclas.
11. 11. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 9, que tiene una relación molar (Ca + M)/P mayor que 1 ,7.
12. 12. Nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 9, que tiene la fórmula: Ca10.x Mx (P04)6-y(C03)y+z(OH)2.z en la que x es un número comprendido entre 0,0055 y 0,6, y es un número comprendido entre 0,065 y 0,9 y z es un número comprendido entre 0 y 0,32.
13. 13. Una composición que comprende nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones.
14. 14. Una composición de acuerdo a la reivindicación 13, en una forma adecuada para la higiene oral.
15. 15. Una composición de acuerdo a la reivindicación 13 ó 14, en la forma de una suspensión, aceite, gel o sólido.
16. 16. Una composición de acuerdo a la reivindicación 15, la forma de una suspensión que incluye entre 1% y 40% en peso de nanopartículas biológicamente activas.
17. 17. Una composición de acuerdo a la reivindicación 15, que tiene un pH comprendido entre 7 y 8.
18. 18. Una composición de acuerdo con la reivindicación 15, en la forma de pasta de dientes, polvo de dientes, goma de mascar para la higiene oral y dental, pomada para las encías, enjuague bucal y concentrado de baño bucal y gargarismo.
19. 19. Una composición de acuerdo a la reivindicación 14, que comprende una combinación de nanopartículas biológicamente activas que comprende una cantidad eficaz de un ion antibacteriano y nanopartículas biológicamente activas sin dicho ion.
20. 20. Un procedimiento para preparar una suspensión acuosa que incluye nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1 , que comprende las etapas de: a) preparar una solución o suspensión acuosa que comprende un compuesto de Ca; b) formar nanopartículas de una hidroxiapatita sustituida por carbonato mediante la adición de iones P043" a la solución o suspensión acuosa de la etapa a) mientras se agita de manera simultánea la misma durante un tiempo comprendido entre 30 minutos y 8 horas mientras se mantiene dicha solución o suspensión a una temperatura menor que o igual a 60°C; c) agitar la suspensión de nanopartículas obtenida de la etapa b) durante un tiempo de al menos dos horas a una temperatura menor que o igual a 60°C.
21. 21. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que dicho compuesto de Ca es una sal de calcio seleccionada entre el grupo que comprende: hidróxido de calcio, carbonato de calcio, acetato de calcio, oxalato de calcio, nitrato de calcio, y las mezclas de los mismos.
22. 22. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la etapa a) se lleva a cabo en la ausencia sustancial de aniones no aceptables por vía oral.
23. 23. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la etapa b) se lleva a cabo mientras se burbujea aire, un gas que contiene C02 o una mezcla de los mismos a través de la solución o suspensión acuosa de la etapa a).
24. 24. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la etapa b) se lleva a cabo mediante la adición de una solución acuosa que incluye iones P043" a la solución o suspensión acuosa de la etapa a).
25. 25. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 24, en el que dicha solución acuosa que incluye iones P043" comprende además iones HC03-.
26. 26. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 25, en el que dicha solución acuosa que incluye iones HC03" y P043" se prepara haciendo burbujear aire, C02 o una mezcla de los mismos a través de agua para obtener una solución de ácido carbónico y después añadir a la misma H3P0 .
27. 27. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 24, en el que la etapa b) se lleva a cabo mediante la adición simultánea de una primera solución que incluye iones C032" y una segunda solución que contiene iones P043" a la solución o suspensión acuosa de la etapa a).
28. 28. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la solución o suspensión acuosa de la etapa a) tiene un pH comprendido entre 8 y 12.
29. 29. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la etapa b) se lleva a cabo mientras se mantiene dicha solución o suspensión a una temperatura comprendida entre 25°C y 40°C.
30. 30. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la suspensión obtenida de la etapa c) tiene pH comprendido entre 7 y 8.
31. 31. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la etapa c) se lleva a cabo mientras se mantiene la suspensión de nanopartículas a la misma temperatura de la etapa b).
32. 32. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 20-31 , en el que la solución o suspensión de la etapa a) comprende además un óxido o una sal de un metal M antibacteriano.
33. 33. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 32, en el que dicha sal de metal es una sal orgánica o inorgánica aceptable por vía oral seleccionada entre el grupo que comprende: lactatos, gluconatos, citratos, acetatos e hidróxidos.
34. 34. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 32 ó 33, en el que la etapa b) se lleva a cabo de manera que la relación de los iones de metal M contenidos en la solución o suspensión de la etapa a) y los iones P043" añadidos a ella es mayor que 1 ,7.
35. 35. Un procedimiento para preparar nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12, que comprende las etapas de: a) preparar una suspensión acuosa que incluye dichas nanopartículas mediante un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 20 - 34; b) separar dichas nanopartículas sólidas de la suspensión obtenida de la etapa a); c) secar las nanopartículas sólidas húmedas así obtenidas.
36. 36. A procedimiento de acuerdo con la reivindicación 35, en el que dicha etapa b) de separación se lleva a cabo mediante decantación, centrifugación o filtración.
37. 37. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 35, en el que dicha etapa c) de secado se lleva a cabo mediante secado por congelación de las nanopartículas sólidas húmedas a una temperatura menor que 0°C hasta alcanzar un peso constante.
38. 38. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 35, que comprende además de la etapa de d) lavar las nanopartículas sólidas separadas con agua o una solución básica antes de efectuar dicha etapa c) de secado.
39. 39. Un procedimiento para fabricar una pasta de dientes que comprende nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12, que comprende las etapas de: a) preparar una suspensión acuosa que incluye dichas nanopartículas mediante un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 20 - 34; b) mezclar dicha suspensión acuosa con otros ingredientes de la pasta de dientes.
40. 40. Un procedimiento para fabricar una pasta de dientes que comprende nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12, que comprende las etapas de: a) preparar nanopartículas sólidas mediante un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 - 38; b) mezclar las nanopartículas sólidas con otros ingredientes de la pasta de dientes.
41. 41. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 39 ó 40, en el que la etapa b) de mezcla se lleva a cabo en un aparato de mezcla mantenido a un grado de vacío predeterminado.
42. 42. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 39, en el que la etapa b) de mezcla se lleva a cabo mediante b1) mezclar la suspensión acuosa de la etapa a) con otros ingredientes de la pasta de dientes excepto para cualquier tensioactivo; b2) incorporar la menos un tensioactivo en la mezcla así obtenida.
43. 43. Un procedimiento de remineralización local de los dientes que comprende poner en contacto los dientes con una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 - 19.
44. 44. Un agregado que comprende una pluralidad de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1.
45. 45. Una composición que comprende agregados de nanopartículas biológicamente activas de acuerdo con la reivindicación 1.
46. 46. Una composición de acuerdo con la reivindicación 45, en la forma de pasta de dientes, polvo de dientes, goma de mascar para la higiene oral y dental, pomada para las encías, enjuague bucal y concentrado de baño bucal boca y gargarismo.