CN116354322B - 一种羟基磷酸钙及其对raw264.7细胞吞噬活性功能增强的应用 - Google Patents
一种羟基磷酸钙及其对raw264.7细胞吞噬活性功能增强的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116354322B CN116354322B CN202310344060.4A CN202310344060A CN116354322B CN 116354322 B CN116354322 B CN 116354322B CN 202310344060 A CN202310344060 A CN 202310344060A CN 116354322 B CN116354322 B CN 116354322B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- calcium
- phosphate
- hydroxy phosphate
- phosphorus
- calcium hydroxy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- CADZRPOVAQTAME-UHFFFAOYSA-L calcium;hydroxy phosphate Chemical compound [Ca+2].OOP([O-])([O-])=O CADZRPOVAQTAME-UHFFFAOYSA-L 0.000 title claims abstract description 83
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 title abstract description 32
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 53
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 41
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 18
- RRQYJINTUHWNHW-UHFFFAOYSA-N 1-ethoxy-2-(2-ethoxyethoxy)ethane Chemical compound CCOCCOCCOCC RRQYJINTUHWNHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- 229940019778 diethylene glycol diethyl ether Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 61
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 60
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 48
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 48
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 42
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 38
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 21
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 10
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims description 9
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 claims description 7
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 claims description 5
- MLIKYFGFHUYZAL-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydron;phosphonato phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O MLIKYFGFHUYZAL-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 claims description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- JUNWLZAGQLJVLR-UHFFFAOYSA-J calcium diphosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O JUNWLZAGQLJVLR-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 2
- 229940043256 calcium pyrophosphate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019821 dicalcium diphosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940005740 hexametaphosphate Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 claims description 2
- 235000007686 potassium Nutrition 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 2
- 235000019982 sodium hexametaphosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 2
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 claims description 2
- RYCLIXPGLDDLTM-UHFFFAOYSA-J tetrapotassium;phosphonato phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O RYCLIXPGLDDLTM-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 2
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I triphosphate(5-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 44
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 abstract description 25
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 4
- 229920000855 Fucoidan Polymers 0.000 description 25
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- VDIQGOWLVYFDOU-UHFFFAOYSA-H [Ca+]O.[Ca+]O.[Ca+]O.[O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [Ca+]O.[Ca+]O.[Ca+]O.[O-]P([O-])([O-])=O VDIQGOWLVYFDOU-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 8
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 235000019738 Limestone Nutrition 0.000 description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000006028 limestone Substances 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000002893 slag Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 3
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 3
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical group [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 2
- RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N arsenic atom Chemical compound [As] RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000031942 natural killer cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010557 suspension polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- HGUFODBRKLSHSI-UHFFFAOYSA-N 2,3,7,8-tetrachloro-dibenzo-p-dioxin Chemical compound O1C2=CC(Cl)=C(Cl)C=C2OC2=C1C=C(Cl)C(Cl)=C2 HGUFODBRKLSHSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229910014497 Ca10(PO4)6(OH)2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100298998 Caenorhabditis elegans pbs-3 gene Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000227647 Fucus vesiculosus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000031361 Hiccup Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 1
- 238000003723 Smelting Methods 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001261506 Undaria pinnatifida Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- CPGKMLVTFNUAHL-UHFFFAOYSA-N [Ca].[Ca] Chemical compound [Ca].[Ca] CPGKMLVTFNUAHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 238000000498 ball milling Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009388 chemical precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005474 detonation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940095686 granule product Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002366 mineral element Substances 0.000 description 1
- 238000005065 mining Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940085991 phosphate ion Drugs 0.000 description 1
- 150000003071 polychlorinated biphenyls Chemical group 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011164 primary particle Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002910 solid waste Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/42—Phosphorus; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01B—NON-METALLIC ELEMENTS; COMPOUNDS THEREOF; METALLOIDS OR COMPOUNDS THEREOF NOT COVERED BY SUBCLASS C01C
- C01B25/00—Phosphorus; Compounds thereof
- C01B25/16—Oxyacids of phosphorus; Salts thereof
- C01B25/26—Phosphates
- C01B25/32—Phosphates of magnesium, calcium, strontium, or barium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
- C01P2002/70—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data
- C01P2002/72—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data by d-values or two theta-values, e.g. as X-ray diagram
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/01—Particle morphology depicted by an image
- C01P2004/03—Particle morphology depicted by an image obtained by SEM
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/60—Particles characterised by their size
- C01P2004/62—Submicrometer sized, i.e. from 0.1-1 micrometer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2006/00—Physical properties of inorganic compounds
- C01P2006/16—Pore diameter
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2006/00—Physical properties of inorganic compounds
- C01P2006/80—Compositional purity
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种羟基磷酸钙及其对RAW264.7细胞吞噬活性功能增强的应用，制备羟基磷酸钙时，在高压反应时，加入二乙二醇乙醚醋酸酯，所制备羟基磷酸钙呈现出球状堆积结构，得到的羟基磷酸钙粒子间相互连接堆积为环状结构，呈现出发达的孔隙，1次粒子粒径为100‑150nm，孔径范围在120‑350nm，孔隙率为50‑60％，堆积变得越来越有序；得到的羟基磷酸钙，呈现出介孔和大孔结构，这类孔隙的存在将极大地增加羟基磷酸钙的比表面积，在应用到RAW264.7细胞中，可以改变RAW264.7细胞的生长微环境，刺激并激活RAW264.7细胞的吞噬活性功能，从而增强巨噬细胞免疫反应和吞噬能力。
Description
技术领域
本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种羟基磷酸钙及其对RAW264.7细胞吞噬活性功能增强的应用。
背景技术
巨噬细胞(Macrophages)是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，通过吞噬自体受损细胞或外源病原体在机体发育、免疫、炎症反应和多种疾病发生中发挥重要作用。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞属于吞噬细胞，在机体免疫功能中发挥着重要的角色。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。已有的研究表明，生物机体内的巨噬细胞可以随着微环境的变化而改变它们的表型和免疫功能，不断根据自身受到的刺激来改变自己的生理状态和免疫活性，从而更好的保证生物体机体和组织的健康。不同的刺激物质包括机体自身蛋白分子、小分子物质、真菌和细菌的提取物等能够刺激并激活巨噬细胞，从而增强巨噬细胞免疫反应和吞噬能力。这也就是说，几乎每一种人类疾病都涉及巨噬细胞，巨噬细胞也是主要治疗目标，因为巨噬细胞的功能可以被加强或抑制，以改变疾病的结果。因此，提高巨噬细胞的吞噬活性有助于机体免疫水平的提高和多种疾病的治疗。
钙(calcium)是生物体内含量最丰富的矿物元素，足量钙摄入对维持动物正常的骨矿物含量、骨密度，达到高骨量峰值至关重要。此外，钙离子还参与生物体内多种生理功能，如血液凝固，维持心脏、肌肉、神经正常兴奋性，信号传导，以及膜的通透性等。
羟基磷酸钙(Ca10(PO4)6(OH)2)(HAP),由于具有优良的生物相容性，生物活性以及高的化学稳定性和力学性能，在生物材料、陶瓷材料和悬浮分散材料等方面都有较广泛的应用。例如在生物材料领域其可作为生物相容性能好的人体骨修复材料、具有能刺激骨细胞生长并自行同步降解等特点。羟基磷酸钙，具有优良的生物相容性和生物活性，是牙齿中比较坚硬的物质，也是骨骼的主要组成成分。在石化行业悬浮聚合中，羟基活性磷酸钙因其具有使聚合树脂粒度分布集中，反应温度、压力平稳，物料不易粘反应釜壁和搅拌器，可延长清釜周期，而且容易清洗，聚合工艺稳定，可提高产品的外观质量和透明度，明显提高了产品档次，是当今悬浮聚合所用的重要无机分散剂材料。
目前，羟基磷酸钙粉体的合成方法主要可分为液相法和高温固相法两大类。由于高温固相法烧结温度高，球磨能耗大，且很大达到微观层次的混合，所以在羟基磷酸钙的制备中应用相对较小；而液相法，包括热反应法、水解法、化学沉淀法、溶胶凝胶法、气溶胶分解法、以及微乳液法和中和反应法等是合成羟基磷酸钙的主要方法。在液相法合成羟基磷酸钙过程中，常用的钙源反应物主要有硝酸钙，石灰石、氧化钙、氢氧化钙、磷酸氢钙、氯化钙等，故在羟基磷酸钙的制造过程中会消耗大量的含钙天然矿物或高品质含钙试剂，其大量的开采和消耗不仅会造成资源枯竭同时也会造成山体和植被的破坏，且成本高，另外制备羟基磷酸钙粉体颗粒组成和大小不均匀。常用的无机钙有石灰石粉、贝壳粉等。石灰石粉又称石粉，为天然碳酸钙(CaCO3)。天然的石灰石中，因为矿床伴生问题，铅、汞、砷、氟的含量容易超标，且石粉遇到胃酸会生产二氧化碳，容易引起打嗝反胃等。贝壳粉是各种贝类外壳(蚌壳、牡蛎壳、哈蜊壳、螺蛳壳等)经加工粉碎而成的粉状或粒状产品，多呈灰白色、灰色、灰褐色。贝壳粉内常掺杂砂石和泥土等杂质，使用时应注意检查。另外若贝肉未除尽，加之贮存不当，堆积日久易出现发霉、腐臭等情况，且贝壳粉受产地影响，运到内地的费用较高，加上需要清理再粉碎，相比石粉，贝壳粉的成本要高上不少。有机钙虽然生物利用率比无机钙高，但价格昂贵。微量元素钙的生物利用率大小与其存在的形态密切相关。传统无机微量元素钙的生物利用率一般较低，大部分不是专门生产用于饲料中，因此需要特别注意其含有的铅、砷、镉、二噁英、多氯联苯等必须严格控制在国家许可的范围内。
在大多数脊椎动物细胞中，吞噬作用是保护机体处于健康状态的措施而非摄食的手段，吞噬作用的强弱是表现巨噬细胞免疫功能强弱及活性的重要标志，通过免疫细胞的吞噬作用，可以直接研究免疫学中巨噬细胞的相关作用，并深入揭示细胞吞噬这一动态过程。目前，没有羟基磷酸钙在增强巨噬细胞吞噬活性的报道。
发明内容
针对现有技术中对巨噬细胞产生刺激物质比较局限，对于巨噬细胞吞噬能力的增强效果有待提高的问题，本发明提供了一种羟基磷酸钙及其对RAW264.7细胞吞噬活性功能增强的应用，制备得到一种羟基磷酸钙，应用到RAW264.7细胞中，可以增强RAW264.7细胞吞噬活性功能的增强。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
一种羟基磷酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将钙源、含磷固体原料和去离子水混合于密闭容器中，再加入相当于去离子水质量2.0-3.0％的二乙二醇乙醚醋酸酯，进行高压反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为(11-13):6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:(8-10)；高压反应的压力控制在0.5-0.8MPa，反应温度控制在160-200℃，反应时间为1.0-2.0h；
所述的钙源，选自氢氧化钙、氧化钙、氯化钙中的一种或几种，混合时为任意比例；
所述的含磷固体原料，选自磷酸氢钾、磷酸二氢钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸钠、焦磷酸钾、三聚磷酸钾、焦磷酸钠、三聚磷酸钠、焦磷酸一氢三钠、焦磷酸钙、六偏磷酸钾或六偏磷酸钠中的一种或几种，混合时为任意比例；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，得到羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，羟基磷酸钙的孔径范围在120-350nm。
本发明中：
步骤1)所述的钙源，选自氢氧化钙或氧化钙。
步骤1)所述的含磷固体原料，选自磷酸氢钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸钠、焦磷酸一氢三钠中的一种或几种，混合时为任意比例。
步骤1)所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为(12-13):6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:(8-9)。
步骤1)中所述高压反应的压力控制在0.5-0.8MPa，控制适当的压力提高反应速度，同时，有利于容器中的水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，压力太低，蒸汽不能顺利进入颗粒内部，压力太高，不利于形成颗粒，产物颗粒的粒径减少，降低了产物的性能，优选地，压力控制在0.6、0.7或0.8MPa。
步骤2)中所述将高压反应的密闭容器瞬间卸压，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到高活性，如果卸压时间太长，颗粒中蒸汽不能瞬间溢出，随着反应容器中压力和温度缓慢降低，颗粒中孔洞结构坍塌，得不到高孔隙率。
步骤3)所述的真空干燥，真空度为0.04-0.08MPa，温度为80-120℃，真空干燥时间为1-2h。
本发明还涉及采用上述羟基磷酸钙的制备方法得到的羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，孔径范围在120-350nm，孔隙率为50-60％。
同时，本发明还涉及上述羟基磷酸钙对RAW264.7细胞吞噬活性功能增强的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、现有技术中羟基磷酸钙的制备方法多采用磷酸与钙反应制备得到的羟基磷酸钙，但市售85％的磷酸为无色透明或略带浅色、稠状液体，运输、储备比较麻烦，需要专用的储罐，磷酸加入水中很容易引起爆沸溅出液体，安全性不高；当采用其他含磷固体原料作为原料时，反应产生的物料是稠状液体，流速较慢，容易粘壁，投料计量没有办法精确控制，粘壁后的管道清理也比较麻烦，本发明所述的羟基磷酸钙的制备方法，在高压反应时，加入二乙二醇乙醚醋酸酯，其为无色透明的环保溶剂，和其他原料混合后，反应时可以加快物料的流速、减少挂壁，利于反应的进行。
2、本发明所述的羟基磷酸钙的制备方法，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到高孔隙率，如果卸压时间太长，颗粒中蒸汽不能瞬间溢出，随着反应容器中压力和温度缓慢降低，颗粒中孔洞结构坍塌，得不到高孔隙率。
3、现有采用结晶生产羟基磷酸钙的方法，将钙源加入水中时，一般控制钙源与含磷固体总质量和水的质量比为1:(3-6)，加水量太少，含磷固体原料溶解速度较低，甚至不溶解，会导致反应速率降低，此外，含磷固体原料加入到水中会放热，水量太少不易控制反应温度；加水量太多，由于氢氧化钙在水中的溶解度较小，对反应速率的正向影响不大，反而因浓度问题使反应逆向进行，不利于后续的结晶析出产品。本发明所述的羟基磷酸钙的制备方法，高压反应后，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，可以保证钙源中的钙与含磷固体原料中的磷的充分反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为(11-13):6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:(8-10)比较合适。
4、本发明所述的羟基磷酸钙对RAW264.7细胞吞噬活性功能增强的应用，制备羟基磷酸钙时，在高压反应时，加入二乙二醇乙醚醋酸酯，所制备羟基磷酸钙呈现出球状堆积结构，得到的羟基磷酸钙粒子间相互连接堆积为环状结构，呈现出发达的孔隙，1次粒子粒径为100-150nm，孔径范围在120-350nm，孔隙率为50-60％，相比没有加入二乙二醇乙醚醋酸酯得到的羟基磷酸钙，球体的体积减小，团聚现象减弱，并且堆积变得越来越有序；得到的羟基磷酸钙，呈现出介孔和大孔结构，这类孔隙的存在将极大地增加羟基磷酸钙的比表面积，在应用到RAW264.7细胞中，可以改变RAW264.7细胞的生长微环境，刺激并激活RAW264.7细胞的吞噬活性功能，从而增强巨噬细胞免疫反应和吞噬能力。
附图说明
图1是本发明实施例1制备得到的羟基磷酸钙颗粒的XRD的图；
图2是本发明实施例1制备得到的羟基磷酸钙颗粒表面的SEM照片的图。
具体实施方式
以下通过实施例进一步详细描述本发明，但这些实施例不应认为是对本发明的限制。
实施例1：
一种羟基磷酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将钙源、含磷固体原料和去离子水混合于密闭容器中，再加入相当于去离子水质量2.5％的二乙二醇乙醚醋酸酯，进行高压反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为12:6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:9；高压反应的压力控制在0.8MPa，反应温度控制在200℃，反应时间为1.0h；
所述的钙源，选自氢氧化钙；
所述的含磷固体原料，选自磷酸氢钾；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.08MPa，温度为80℃，真空干燥时间为2h，得到羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，羟基磷酸钙的孔径范围在120-350nm。
实施例1得到的目标产物羟基磷酸钙经检测，其中磷酸根离子含量为54.2％，钙含量为38.0％，氢氧根含量为3.2％，105℃下易挥发性物质含量为0.7％，该检测结果与羟基磷酸钙分子式(Ca10(PO4)6(OH)2)相符。产品纯度为99.5％，产品收率为97.4％。经XRD检测，产品的XRD图谱(参见图1)中产品图谱与标准图谱相一致。
图1是实施例1制备得到的羟基磷酸钙颗粒的XRD的图；
图2是实施例1制备得到的羟基磷酸钙颗粒表面的SEM照片的图。
实施例2：
一种羟基磷酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将钙源、含磷固体原料和去离子水混合于密闭容器中，再加入相当于去离子水质量2.0％的二乙二醇乙醚醋酸酯，进行高压反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为13:6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:8；高压反应的压力控制在0.5MPa，反应温度控制在160℃，反应时间为2.0h；
所述的钙源，选自氧化钙；
所述的含磷固体原料，选自磷酸二氢钾；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.04MPa，温度为120℃，真空干燥时间为1h，得到羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，羟基磷酸钙的孔径范围在120-350nm。
实施例2得到的目标产物羟基磷酸钙经检测，产品纯度为98.6％，产品收率为96.1％。
实施例3：
一种羟基磷酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将钙源、含磷固体原料和去离子水混合于密闭容器中，再加入相当于去离子水质量3.0％的二乙二醇乙醚醋酸酯，进行高压反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为11:6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:10；高压反应的压力控制在0.6MPa，反应温度控制在180℃，反应时间为1.5h；
所述的钙源，选自氯化钙；
所述的含磷固体原料，选自焦磷酸一氢三钠；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.06MPa，温度为100℃，真空干燥时间为1.5h，得到羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，羟基磷酸钙的孔径范围在120-350nm。
实施例3得到的目标产物羟基磷酸钙经检测，产品纯度为98.5％，产品收率为96.8％。
实施例4：
一种羟基磷酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将钙源、含磷固体原料和去离子水混合于密闭容器中，再加入相当于去离子水质量2.5％的二乙二醇乙醚醋酸酯，进行高压反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为12:6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:9；高压反应的压力控制在0.7MPa，反应温度控制在200℃，反应时间为1.0h；
所述的钙源，选自氢氧化钙、氧化钙的等摩尔比混合；
所述的含磷固体原料，选自磷酸氢钾、磷酸二氢钾、磷酸氢钠的等摩尔比混合；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.05MPa，温度为100℃，真空干燥时间为1.5h，得到羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，羟基磷酸钙的孔径范围在120-350nm。
实施例4得到的目标产物羟基磷酸钙经检测，产品纯度为98.3％，产品收率为97.2％。
对比例1：
现有一种羟基磷酸钙的制备方法，包括以下步骤：
将纯度均为98％的561g的氯化钙和378g的氢氧化钙加入到5.1L水中升温，搅拌下加入纯度为98％的751g的无水三聚磷酸钠并于90℃下恒温反应0.5h，反应结束后降至室温结晶30min，离心过滤后于105℃烘箱中干燥粉碎后，再添加1.2％食用明胶制粒过100目筛，得到羟基磷酸钙965g。
对比例2：
和实施例1相比，步骤1)中没有加入二乙二醇乙醚醋酸酯，其他同实施例1。
对比例2：
和实施例1相比，步骤1)中没有加入二乙二醇乙醚醋酸酯，而是加入回转窑渣；
所述的回转窑渣，是指以钢铁厂含锌烟尘、渣灰、瓦斯灰、锌湿法冶炼浸出渣等含锌固废为原料，经回转窑火法挥发富集制备次氧化锌的工艺流程中而产生的，通过除杂处理、吸附处理、干燥后，主要成分检测如下所示：Cu 5.6％、Fe<0.1，余量为C；
其他同实施例1。
对比例3：
和实施例1相比，步骤1)中没有加入二乙二醇乙醚醋酸酯，而是加入甘油硬脂酸酯；
其他同实施例1。
实验例：
羟基磷酸钙对RAW264.7细胞吞噬活性的影响。
1、原料制备
褐藻多糖：取200mg褐藻多糖于2ml热水中，超声10min，充分溶解，过0.22μm滤膜，制成100mg/ml褐藻多糖储备液，置5℃冰箱备用。
文献报道，褐藻多糖主要来自于海带、裙带菜、巨藻、马尾藻、泡叶藻、墨角藻等褐藻，其与一般的多糖类物质不同，褐藻糖胶的部分羟基被硫酸酯化，褐藻多糖与“硫酸基”中间用“酯键”连接，因此，也被称作为“褐藻多糖硫酸酯”。现有研究表明，褐藻多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗凝血、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒等；研究发现，褐藻多糖具有免疫调节作用，能够增强巨噬细胞的吞噬活性、降低脂多糖(LPS)诱导细胞分泌一氧化氮(NO)。
2、细胞培养：
巨噬细胞RAW264.7的培养
(1)细胞生长特性：半贴壁/贴壁，生长快；
(2)培养基：90％DMEM(高糖，含双抗)+10～12％FBS；
(3)复苏：37℃水浴，含15％胎牛血清的培养基(配制方法：85％DMEM(高糖，含双抗)+15％FBS)；
(4)换液：1天一次；
(5)传代：0.25％胰酶(含EDTA)，消化3～5分钟，传代比例1:4～6；
(6)冻存：50％完全培养基+40％血清+10％DMSO或者90％血清+10％DMSO。
3、RAW264.7细胞增殖率测定
(1)复苏、培养RAW264.7细胞。
(2)将2.0～3.0×105/ml细胞密度接种到96孔板中，培养24h。
(3)用培养基稀释各个原料，制成含不同浓度原料的样品溶液。
(4)培养结束，弃去细胞上清液，将浓度分别为0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml和1000μg/ml的褐藻多糖样品溶液加入各个孔中，每孔100μl，每个浓度4个复孔，同时设置正常对照，同样设4个复孔，每孔加100μl培养基，培养24h。
(5)配制CCK8孵育液，按照碧云天试剂盒说明书，1ml培养基加100μl CCK8溶液，混匀，培养结束，弃去上清液，加PBS清洗一遍，每孔加110μl CCK8孵育液，孵育2h。
(6)孵育结束，测OD450，按下列公式计算细胞增殖率。
细胞增值率(％)＝[(样品孔OD值-正常孔OD值)/正常孔OD值]×100％。
实验结果表明，在0-1mg/ml范围内，褐藻多糖对RAW264.7细胞增殖活性无影响。
4、中性红法检测RAW264.7细胞吞噬活性
(1)复苏、培养RAW264.7细胞。
(2)将2.0～3.0×105/ml细胞密度接种到96孔板中，培养2h，细胞贴壁。
(3)贴壁后弃去上清，分组，空白组(只含培养基)、正常对照组(细胞+培养基)、脂多糖对照组(细胞+含1μg/ml脂多糖的培养基)、样品组(细胞+样品溶液)，各组设4个复孔，给药后，于培养箱培养24h。
(4)弃上清，各孔用PBS洗一遍后，加入碧云天的中性红溶液50μl/孔，避光孵育10min后，弃中性红，用PBS洗3遍，每次200μl/孔，加入已配好的细胞裂解液(醋酸：无水乙醇＝1:1)100μl/孔，继续避光孵育30min。
(5)孵育结束后，立即于570nm处测得OD值，样品组吞噬活性计算公式如下：
相对吞噬活性(％)＝[(样品孔OD值-空白孔OD值)/(正常孔OD值-空白孔OD值)-1]×100％。
4.1将褐藻多糖分别和不同实施例、对比例得到的羟基磷酸钙以1:1的质量比例作为样品组研究对RAW264.7细胞吞噬活性的影响，以褐藻多糖单组分作为比较，褐藻多糖单组分和混合物(羟基磷酸钙以1:1的质量比例)总质量浓度均是1mg/ml，实验结果如表1所示：
表1：不同制备方法的羟基磷酸钙对RAW264.7细胞的相对吞噬活性百分值(％，mean±SD)
| 自然杀伤活性，％ | |
| 对照组(褐藻多糖) | 136.78±2.56 |
| 实验组1(褐藻多糖:实施例1＝1:1) | 168.33±2.48 |
| 实验组2(褐藻多糖:实施例2＝1:1) | 172.56±2.74 |
| 实验组3(褐藻多糖:实施例3＝1:1) | 173.27±3.12 |
| 实验组4(褐藻多糖:实施例4＝1:1) | 165.44±4.03 |
| 对比组1(褐藻多糖:对比例1＝1:1) | 137.29±3.38 |
| 对比组2(褐藻多糖:对比例2＝1:1) | 140.61±4.99 |
| 对比组3(褐藻多糖:对比例3＝1:1) | 145.74±5.32 |
表1说明：
1、将褐藻多糖分别和实施例1-4得到的羟基磷酸钙以1:1的质量比例作为样品组研究对RAW264.7细胞吞噬活性的影响，实施例1-4得到的羟基磷酸钙能增强褐藻多糖对RAW264.7细胞吞噬活性。说明采用高压处理，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到高孔隙率，得到的羟基磷酸钙能对NK92细胞自然杀伤活性有提高。
2、将褐藻多糖和对比例1得到的羟基磷酸钙以1:1的质量比例作为样品组研究对RAW264.7细胞吞噬活性的影响，对比例1得到的羟基磷酸钙不能增强褐藻多糖对RAW264.7细胞吞噬活性。对比例1没有采用高压处理，缺少瞬间泄压，得到的羟基磷酸钙对RAW264.7细胞吞噬活性无影响。
3、将褐藻多糖分别和对比例2、对比例3得到的羟基磷酸钙以1:1的质量比例作为样品组研究对RAW264.7细胞吞噬活性的影响，对比例2、对比例3得到的羟基磷酸钙能增强褐藻多糖对RAW264.7细胞吞噬活性，但是对比例2、对比例3的效果和实施例1-4有明显差距。分析是因为实施例1-4在制备羟基磷酸钙时，在高压反应时，加入二乙二醇乙醚醋酸酯，所制备羟基磷酸钙呈现出球状堆积结构，所制备羟基磷酸钙呈现出球状堆积结构，得到的羟基磷酸钙粒子间相互连接堆积为环状结构，呈现出发达的孔隙，1次粒子粒径为100-150nm，孔径范围在120-350nm，孔隙率为50-60％，相比没有加入二乙二醇乙醚醋酸酯得到的羟基磷酸钙，球体的体积减小，团聚现象减弱，并且堆积变得越来越有序；得到的羟基磷酸钙，呈现出介孔和大孔结构，这类孔隙的存在将极大地增加羟基磷酸钙的比表面积，在应用到RAW264.7细胞中，可以改变RAW264.7细胞的生长微环境，刺激并激活RAW264.7细胞的吞噬活性功能，从而增强巨噬细胞免疫反应和吞噬能力。
通过实施例和对比例的基本性能的比较，说明实施例的制备方法明显优于对比例。
Claims (6)
1.一种羟基磷酸钙的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)将钙源、含磷固体原料和去离子水混合于密闭容器中，再加入相当于去离子水质量2.0-3.0％的二乙二醇乙醚醋酸酯，进行高压反应，所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为(11-13):6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:(8-10)；高压反应的压力控制在0.5-0.8MPa，反应温度控制在160-200℃，反应时间为1.0-2.0h；
所述的钙源，选自氢氧化钙、氧化钙、氯化钙中的一种或几种，混合时为任意比例；
所述的含磷固体原料，选自磷酸氢钾、磷酸二氢钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸钠、焦磷酸钾、三聚磷酸钾、焦磷酸钠、三聚磷酸钠、焦磷酸一氢三钠、焦磷酸钙、六偏磷酸钾或六偏磷酸钠中的一种或几种，混合时为任意比例；
2)上述步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上述步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，得到羟基磷酸钙，羟基磷酸钙的1次粒子粒径为100-150nm，羟基磷酸钙的孔径范围在120-350nm，孔隙率为50-60％。
2.根据权利要求1所述的羟基磷酸钙的制备方法，其特征在于：步骤1)所述的钙源，选自氢氧化钙或氧化钙。
3.根据权利要求1所述的羟基磷酸钙的制备方法，其特征在于：步骤1)所述的含磷固体原料，选自磷酸氢钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸钠、焦磷酸一氢三钠中的一种或几种，混合时为任意比例。
4.根据权利要求1所述的羟基磷酸钙的制备方法，其特征在于：步骤1)所述钙源中的钙与所述含磷固体原料中的磷的摩尔比控制为(12-13):6，所述的钙源与含磷固体原料的总质量和去离子水的质量比为1:(8-9)。
5.根据权利要求1所述的羟基磷酸钙的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述高压反应，压力控制在0.6、0.7或0.8MPa。
6.根据权利要求1所述的羟基磷酸钙的制备方法，其特征在于：步骤3)所述的真空干燥，真空度为0.04-0.08MPa，温度为80-120℃，真空干燥时间为1-2h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310344060.4A CN116354322B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种羟基磷酸钙及其对raw264.7细胞吞噬活性功能增强的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310344060.4A CN116354322B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种羟基磷酸钙及其对raw264.7细胞吞噬活性功能增强的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116354322A CN116354322A (zh) | 2023-06-30 |
| CN116354322B true CN116354322B (zh) | 2024-02-23 |
Family
ID=86937676
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310344060.4A Active CN116354322B (zh) | 2023-04-03 | 2023-04-03 | 一种羟基磷酸钙及其对raw264.7细胞吞噬活性功能增强的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116354322B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4481175A (en) * | 1982-12-14 | 1984-11-06 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Process for preparing apatite |
| EP2029480A1 (en) * | 2006-05-30 | 2009-03-04 | Coswell S.p.A. | Biologicallly active nanoparticles of a carbonate-substituted hydroxyapatite, process for their preparation and compositions incorporating the same |
| CN109198193A (zh) * | 2018-10-31 | 2019-01-15 | 长沙兴嘉生物工程股份有限公司 | 一种羟基磷酸钙的制备方法及其应用 |
-
2023
- 2023-04-03 CN CN202310344060.4A patent/CN116354322B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4481175A (en) * | 1982-12-14 | 1984-11-06 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Process for preparing apatite |
| EP2029480A1 (en) * | 2006-05-30 | 2009-03-04 | Coswell S.p.A. | Biologicallly active nanoparticles of a carbonate-substituted hydroxyapatite, process for their preparation and compositions incorporating the same |
| CN109198193A (zh) * | 2018-10-31 | 2019-01-15 | 长沙兴嘉生物工程股份有限公司 | 一种羟基磷酸钙的制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| "The observed difference of RAW264.7 macrophage phenotype on mineralized collagen and hydroxyapatite";Xiudi Shi et al;《Biomedical Materials》;第13卷(第4期);第1-14页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116354322A (zh) | 2023-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0115216B1 (en) | Health promotion composition | |
| CN103329994B (zh) | 一种富含有机硒的益生菌活性乳饮料的生产方法 | |
| AU2003204836A1 (en) | Dietary supplements for improving kidney function | |
| CN105130531A (zh) | 一种复混生物有机硒肥及其制备方法和用途 | |
| AU2004318169B2 (en) | Low sodium salt of botanic origin | |
| CN116354322B (zh) | 一种羟基磷酸钙及其对raw264.7细胞吞噬活性功能增强的应用 | |
| KR100692969B1 (ko) | 기능성 유기질 액체 비료 제조방법 | |
| Laksono et al. | Study on antibacterial of chitosan/hydroxyapatite doped magnesium composite as a material for bone graft applications | |
| CN106744766A (zh) | 一种镁掺杂羟基磷灰石除氟滤料的生产方法 | |
| CN101643255A (zh) | 一种微电解类活水材料及其制备方法 | |
| CN105559068A (zh) | 一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物及其制备方法 | |
| WO2010096382A1 (en) | Processes for the production of proteins containing selenium using yeast cells | |
| CN111588039A (zh) | 聚球藻源富铁纳米多聚磷酸体补铁剂及其制备方法 | |
| KR100993571B1 (ko) | 미네랄 함유수의 제조방법 및 이에 의해 제조된 미네랄 함유수 | |
| CN103435713A (zh) | 一种高含量虫草多糖精粉及其副产品的综合利用生产工艺 | |
| US4804536A (en) | Dietary fibres of seaweed having ion-exchange ability | |
| CN114058515B (zh) | 一种利用海水微拟球藻生产蜂王浆主效成分24-亚甲基胆固醇的方法 | |
| KR20200078965A (ko) | 고 순도 규소를 이용한 수용성 알칼리염과 그에 의해 제조된 미네랄 알칼리수의 제조방법 | |
| CN110272032A (zh) | 一种镁掺杂羟基磷灰石载药微球的制备方法 | |
| CN1115410C (zh) | 富镁螺旋藻的生产方法 | |
| US20050281839A1 (en) | Spirulina composition and antiallergic food | |
| CN116443937B (zh) | 一种碱式氯化锰及其在nk92细胞对肝癌细胞的自然杀伤活性增强上的应用 | |
| WO2023082217A1 (zh) | 纳米硒蛹虫草水提物在减少放疗损伤中的应用及其保护剂 | |
| CN108272818B (zh) | 一种抗肿瘤无机含硒纳米颗粒及其制备方法和应用 | |
| TW201118165A (en) | Culture medium |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |