KR930004473A - 세균의 지질-함유 캡슐 다당류를 지질-부재 다당류로 전환시키는 방법 - Google Patents

세균의 지질-함유 캡슐 다당류를 지질-부재 다당류로 전환시키는 방법 Download PDF

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에스. 리엔스트라 마크
디. 시트린 로버트
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Abstract

내용 없음.

Description

세균의 지질-함유캡슐 다당류를 지질-부재 다당류로 전환시키는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 지질-PRP의 구조를 도시한 것이며;
제2도는 선택적 알콜 분별법을 사용하여 PRP를 제조하는 방법과 지질 -PRP를 효소에 의해 PRP로 전환시키 후 효소 및 LPS를 제거함으로써 RPR를 제조하는 방법을 비교하여 도시한 것이고;
제3도는 지질-PRP를 지질-부재 PRP로 전환시키고 내생독소를 제거하는 최적 방법을 도시한 것이다.

Claims (14)

  1. 지질-캡슐 다당류로부터 지질을 분리시키고, 유리 지질 및 내생독소 오염물을 제거한 다음, 지질-부재캡슐 다당류를 회수함으로써, 실질적으로 모든 지질-캡슐 다당류를 지질-부재캡슐다당류로 전환시킴을 특징으로 하여, 캡슐 다당류의 실질적인 소실 없이 세균으로부터 유래된 지질-부재 다당류 및 지질-캡슐 다당류 모두를 포함하는 조 또는 정제된 제제로부터 지질 및 내생독소가 없는 캡술 다당류를 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 포스포리파제에 의해 지질이 지질-캡슐 다당류로부터 분리되는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 캡슐 다당류가 해모필러스 인플루엔자(Haemophilusinflu enzae)유형 b, 네이스세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis, meningococcal)그룹 A, B, C, X, Y, W 135 또는 29E, 또는 이. 콜라이(Escherichia coli)K1, K12, K13, K89, K92 또는 K100의 배양액으로부터 유래되는 방법.
  4. 제3항에 있어서,, 캡슐 다당류가 해모필러스 인플루엔자 유형 b의 배양액으로부터 유래된 PRP 및 지질-PRP를 포함하는 혼합물인 방법.
  5. 제4항에 있어서, PRP 및 지질-PRP를 포함하는 혼합물을 효소 활성화제로서 에테르를 포함하는 유기상의 존재하에 포스포리파제 D단독으로 또는 포스포리파제 A2또는 포스포리파제 B의 혼합물로 처리함을 포함하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 유기상이 에틸-에테르, 부틸-에테르 및 메틸-t부틸-에테르로부터 선택된 에테르의 제1성분과 메탄올, 에탄올 및 핵산으로부터 선택된 제2성분의 혼합물(여기서, 제1성분과 제2성분은 약 20:1 내지 5:1의 비율로 존재한다)을 포함하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 포스포리파제가 비-포유류 유기체로부터 유래되는 방법.
  8. 제7항에 있어서, PRP 및 지-PRP를 포함하는 혼합물을 포스포리파제D만을 처리함을 포함하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, PRP 및 지질-PRP를 포함하는 혼합물을 중량을 기준으로 하여 약 0.01내지 10%의 포스포리파제 D와 반응시킴을 포함하는 방법.
  10. 헥산, 에탄올 및 메탄올로부터 선택된 제2유기물과 혼합된, 반응물 용적의 30내지 60%농도로 에테르 : 유기용매(여기서, 유기용매는 디에틸-에테르, 부틸-에테르 및 메틸-t-부틸-에테르로부터 선택된 에테르이다)혼합물을 포함하는 반응 혼합물중에서, 0.1내지 0.4%의 농도로 존재하는 데옥시콜레이트 또는 트리톤 X-100으로부터 선택된 세정제의 존재하에 상술한 시약들과 친화성인 pH약 7.0내지 8.0의 완충액중 약 0.1내지 약10mM의 CaCl2를 가하면 약 20내지 45℃의 온도에서 약 30분 내지 약 4시간 동안 헤모필러스 인플루엔자 유형 b의 배양액으로부터 유래된 다당류의 조 또는 정제 제제중에 존재하는 지질-PRP를 PRP에 대한 포스포리파제 D의 비율을 약 0.3중량%로 하여 포스포리파제D와 반응시킴을 특징으로 하여, 실질적으로 PRP의 손실없이 지질-부재 및 내생독소-부재 포리리보실 리비톨 포스페이트 PRP를 제조하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 에테르: 유기용매 혼합물이 약 9:1의 비율로 존재하는 메틸-t-부틸 에테르 :에탄올 혼합물이고 혼합물의 농도가 반응물 용적의 약 50%인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 가한 포사포리파제 D를 포함하여 단백질성 오염물을 제고하기 위해 PRP를 폐놀로 추출하고, 포스포리파제D로 처리하기 전 또는 후에 유리 지질 및 내생독소를 제거하기 위해 PRP또는 지질-PRP를 흡착하지 않는 소수성 흡착단계에 PRP를 통과시킴을 추가로 포함하는 방법.
  13. a)적당한 배양 배지중에서 해모필러스 인플루엔자 유형 b를 배양하고; b)티메로살 또는 페놀로 해모필러스 인플루엔자 우형 b)를 박멸시키고; c)죽은 해모필러스 인플루엔자 유형 b의 배양 배지를 정화시키고; d)정화된 배양 배지를 농축시켜 처리가능한 용적을 수득하고; e)최종 농도 약 48%의 에탄올을 가하여 배양비지중의 오염물을 침전시켜 PRP를 함유하는 상등액과 폐기될 오염물 펠릿을 수득하고; f)최종 농도 약 61%로 에탄올을 가하여 PRP를 침전시켜 조-PRP 펠릿을 수득하고, g)가용화시키기 위해 물을 PRP펠릿에 가한 후 최종 농도 1.0M로 염화칼슘을 가하고; h)최종 농도 23%로 에탄올을 가하여 오염물의 불용성 펠릿과 PRP 함유 상등액을 수득하고; I)최종 농도 37%로 에탄올을 가하여 PRP를 침전시키고; j)PRP 펠릿을 무수 에탄올로 연마한 후 건조시켜PRP전-페놀 분을 수득하고; k)PRP 분말의 사용화 제제를 페놀로 추출하고; l)0.05M의 CaCl2및 약 67%의 알콜을가하여 PRP를 침전시키고 무수 에탄올로 연마시켜 후 - 페놀 분말을 수득하고; m)소수성 흡착에 의해 후-페놀분말의 가용화 제제로부터 내생독소를 제고하고; n)후속 단계로 진행하기 전에 조-PRP, 전-페놀 분말 또는 후-페놀 분말증의 PRP를 포스포리파제와 반응시키는 단계를 포함함을 특징으로 하여, PRP의 실질적인 손실없이 지질-부재 PRP를 제조하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 포스포리파제가 PRP와 비교하여 약 0.3중량%로 가한 포스포리파제 D이고, 조-PRP, 전-페놀 분말 또는 후-페놀 분말을 10mM트리스, 5mM CaCl2, 45%메틸 t-부틸 에테르, 5%에탄올, 0.3%트리톤 X-100중에 가용화시켜 30분 내지 약 4시간 동안 약 35℃에서 반응시키는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019920014649A 1991-08-16 1992-08-14 세균의 지질-함유 캡슐 다당류를 지질-부재 다당류로 전환시키는 방법 KR930004473A (ko)

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