JP2928613B2 - 光学活性アミン類の製造方法 - Google Patents
光学活性アミン類の製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は光学活性アミンの製造方法に関する。さらに
詳しくは、特定の（R,S）−アミンのアシル誘導体（以
下、（R,S）−アシル誘導体ともいう）に、（Ｒ）−ア
ミンのアシル誘導体（以下、（Ｒ）−アシル誘導体とも
いう）のみを不斉加水分解する能力を有するシュードモ
ナス（Pseudomonas）属に属する微生物またはその培養
物を作用させ、特定の（Ｒ）−アミンと特定の（Ｓ）−
アミンのアシル誘導体（以下、（Ｓ）−アシル誘導体と
もいう）との混合物にし、分離して光学活性アミン類を
製造する方法に関する。
詳しくは、特定の（R,S）−アミンのアシル誘導体（以
下、（R,S）−アシル誘導体ともいう）に、（Ｒ）−ア
ミンのアシル誘導体（以下、（Ｒ）−アシル誘導体とも
いう）のみを不斉加水分解する能力を有するシュードモ
ナス（Pseudomonas）属に属する微生物またはその培養
物を作用させ、特定の（Ｒ）−アミンと特定の（Ｓ）−
アミンのアシル誘導体（以下、（Ｓ）−アシル誘導体と
もいう）との混合物にし、分離して光学活性アミン類を
製造する方法に関する。
これらの光学活性アミン類およびそれらからえられる
光学活性誘導体は、各種の光学活性医薬や活性活性農薬
の中間体となり、実用的に価値が大きい。近年、医薬お
よび農薬で光学活性中心を有する化合物のばあいには、
強い生理活性を示す片方の光学活性体のみが使用される
ことが多く、前記光学活性アミン類などの化合物を利用
することにより、光学活性構造を有する医薬および農薬
に導くことが容易となる。たとえば、本発明によってえ
られる（Ｒ）または（Ｓ）−１−メチル−３−フェニル
プロピルアミンは光学活性医薬および光学活性農薬の重
要な中間体としての利用が期待されている。
光学活性誘導体は、各種の光学活性医薬や活性活性農薬
の中間体となり、実用的に価値が大きい。近年、医薬お
よび農薬で光学活性中心を有する化合物のばあいには、
強い生理活性を示す片方の光学活性体のみが使用される
ことが多く、前記光学活性アミン類などの化合物を利用
することにより、光学活性構造を有する医薬および農薬
に導くことが容易となる。たとえば、本発明によってえ
られる（Ｒ）または（Ｓ）−１−メチル−３−フェニル
プロピルアミンは光学活性医薬および光学活性農薬の重
要な中間体としての利用が期待されている。
［従来の技術・発明が解決しようとする課題］ 従来、一般式（Ｒ）−（II）： または一般式（Ｓ）−（II）： （式中、X1、X2はそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、アルキル基、アミノ基、ｎは１〜３の整数、＊は
不斉炭素を表わす）で表わされるアミンまたはその誘導
体をうる方法として、ジアステレオマーにして光学分割
する方法（特開昭59−108749号公報）などが知られてい
る。
酸基、アルキル基、アミノ基、ｎは１〜３の整数、＊は
不斉炭素を表わす）で表わされるアミンまたはその誘導
体をうる方法として、ジアステレオマーにして光学分割
する方法（特開昭59−108749号公報）などが知られてい
る。
しかしながら、このような光学分割法ではジアステレ
オマーを調製するために別の高価な光学活性化合物が必
要となること、また光学純度を高めるためには繰返しの
晶析が必要となることなどの欠点があり、価格的に安価
に、かつ簡便にこれらの光学活性体をうることが困難で
ある。
オマーを調製するために別の高価な光学活性化合物が必
要となること、また光学純度を高めるためには繰返しの
晶析が必要となることなどの欠点があり、価格的に安価
に、かつ簡便にこれらの光学活性体をうることが困難で
ある。
［課題を解決するための手段］ 本発明者らは係る実情に鑑み、微生物の利用により簡
便かつ経済的に、一般式（R,S）−（II）： （式中、X1、X2、ｎは前記と同じ）で表わされる（R,
S）−アミンの光学分割法を開発すべく鋭意研究を重ね
た結果、シュードモナス属に属する微生物またはその培
養物が一般式（R,S）−（Ｉ）： （式中、X1、X2、ｎは前記に同じ、ＲはC1〜６のアルキ
ル基を示す）で表わされる（R,S）−アシル誘導体（エ
ナンチオマー混合物）のうち、（Ｒ）−アシル誘導体の
みを選択的に加水分解して一般式（Ｒ）−（II）で表わ
される（Ｒ）−アミンを生成させ、（Ｓ）−アシル誘導
体が残存することを発見し、つづいて両者を分離するこ
とにより効率的に光学分割する方法を確立し、本発明を
完成するに至った。
便かつ経済的に、一般式（R,S）−（II）： （式中、X1、X2、ｎは前記と同じ）で表わされる（R,
S）−アミンの光学分割法を開発すべく鋭意研究を重ね
た結果、シュードモナス属に属する微生物またはその培
養物が一般式（R,S）−（Ｉ）： （式中、X1、X2、ｎは前記に同じ、ＲはC1〜６のアルキ
ル基を示す）で表わされる（R,S）−アシル誘導体（エ
ナンチオマー混合物）のうち、（Ｒ）−アシル誘導体の
みを選択的に加水分解して一般式（Ｒ）−（II）で表わ
される（Ｒ）−アミンを生成させ、（Ｓ）−アシル誘導
体が残存することを発見し、つづいて両者を分離するこ
とにより効率的に光学分割する方法を確立し、本発明を
完成するに至った。
すなわち、本発明は、 一般式（R,S）−（Ｉ）： （式中、X1、X2はそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、アルキル基、アミノ基、ＲはC1〜６のアルキル
基、ｎは１〜３の整数を表わす）で表わされるアミンの
アシル誘導体（エナンチオマー混合物）に、（Ｒ）−ア
ミンのアシル誘導体のみを不斉加水分解する能力を有す
るシュードモナス属に属する微生物またはその培養物を
作用させ、一般式（Ｒ）−（II）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｒ）−アミンとしたのち、
（Ｒ）−アミンと残存する一般式（Ｓ）−（Ｉ）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｓ）−アミンのアシル誘導体と
を分離することを特徴とする光学活性アミン類の製造方
法 に関する。
酸基、アルキル基、アミノ基、ＲはC1〜６のアルキル
基、ｎは１〜３の整数を表わす）で表わされるアミンの
アシル誘導体（エナンチオマー混合物）に、（Ｒ）−ア
ミンのアシル誘導体のみを不斉加水分解する能力を有す
るシュードモナス属に属する微生物またはその培養物を
作用させ、一般式（Ｒ）−（II）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｒ）−アミンとしたのち、
（Ｒ）−アミンと残存する一般式（Ｓ）−（Ｉ）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｓ）−アミンのアシル誘導体と
を分離することを特徴とする光学活性アミン類の製造方
法 に関する。
［実施例］ 本発明においては、一般式（R,S）−（Ｉ）： で表わされるアミンのアシル誘導体（エナンチオマー混
合物）がシュードモナス属に属する微生物またはその培
養物の作用により、不斉的に加水分解せしめられ、
（Ｒ）−アミンと（Ｓ）−アシル誘導体にされる。
合物）がシュードモナス属に属する微生物またはその培
養物の作用により、不斉的に加水分解せしめられ、
（Ｒ）−アミンと（Ｓ）−アシル誘導体にされる。
これらの（R,S）−アミンのアシル誘導体の（Ｒ）体
のみを不斉加水分解する能力を有する微生物のスクリー
ニングの方法としてたとえば、（R,S）−アミンのアシ
ル誘導体を含有する培地（濃度0.05〜0.3W/V％）を調製
し、これに各微生物（菌体）を植菌し、28℃にて２〜４
日間振盪し培養後、TLC分析にてアミン生成が認められ
た菌体につき１〜5W/V％の（R,S）−アミンのアシル誘
導体を含む培養培地に植菌し、菌体反応を行なわせ、ア
シル誘導体の光学活性を確認する方法などをあげること
ができる。
のみを不斉加水分解する能力を有する微生物のスクリー
ニングの方法としてたとえば、（R,S）−アミンのアシ
ル誘導体を含有する培地（濃度0.05〜0.3W/V％）を調製
し、これに各微生物（菌体）を植菌し、28℃にて２〜４
日間振盪し培養後、TLC分析にてアミン生成が認められ
た菌体につき１〜5W/V％の（R,S）−アミンのアシル誘
導体を含む培養培地に植菌し、菌体反応を行なわせ、ア
シル誘導体の光学活性を確認する方法などをあげること
ができる。
本発明において使用できる微生物としては、土壌から
分離したシュードモナス属に属する微生物、たとえばシ
ュードモナス プチダ（Pseudomonas petida）Sc2（FER
M P−11602）、シュードモナス プチダ（Pseudomonas
petida）Pc3（FERM P−11603）などがあげることができ
る。なお、これらの微生物は工業技術院微生物工業技術
研究所に平成２年７月13日付で寄託されている。
分離したシュードモナス属に属する微生物、たとえばシ
ュードモナス プチダ（Pseudomonas petida）Sc2（FER
M P−11602）、シュードモナス プチダ（Pseudomonas
petida）Pc3（FERM P−11603）などがあげることができ
る。なお、これらの微生物は工業技術院微生物工業技術
研究所に平成２年７月13日付で寄託されている。
またこれらの微生物の菌学的性質を形態的性質、生理
的性質および炭素源の資化性について調べた。それぞれ
の結果を第１表、第２表および第３表に示す。
的性質および炭素源の資化性について調べた。それぞれ
の結果を第１表、第２表および第３表に示す。
これらの結果よりPc3およびSc2はいずれもジュードモ
ナス属に属する微生物であることが確認された。
ナス属に属する微生物であることが確認された。
前記微生物の培養物とは、該微生物を培地を用いて培
養したもののことであり、培養に用いる培地にはとくに
制限はなく、微生物が増殖しうる栄養源を含む培地であ
ればよい。
養したもののことであり、培養に用いる培地にはとくに
制限はなく、微生物が増殖しうる栄養源を含む培地であ
ればよい。
このような培地の具体例としては、たとえば炭素源と
して、グリセロール、グルコース、シュークロースなど
の糖類、チッ素源として酵母エキス、肉エキス、ポリペ
プトンなど、無機塩として燐酸カリウム、硫酸マグネシ
ウムなどを含有せしめたpH4.0〜10.0の培地があげられ
る。
して、グリセロール、グルコース、シュークロースなど
の糖類、チッ素源として酵母エキス、肉エキス、ポリペ
プトンなど、無機塩として燐酸カリウム、硫酸マグネシ
ウムなどを含有せしめたpH4.0〜10.0の培地があげられ
る。
培養方法としては、前記のごとき培地を使用し、培養
温度10〜40℃にて第１次種母培養、ついで第２次本培養
を各々２〜３日間行なう方法が、具体的な方法としてあ
げられる。
温度10〜40℃にて第１次種母培養、ついで第２次本培養
を各々２〜３日間行なう方法が、具体的な方法としてあ
げられる。
前記培養に際し、培地に誘導物質として、たとえば一
般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導
体、好ましくは炭素原子数が１〜４のノルマルまたはイ
ソタイプのアルキル基を有するアシル基であるアシル誘
導体、その（Ｓ）体である（Ｓ）−アシル誘導体、
（Ｒ）体である（Ｒ）−アシル誘導体、それらの加水分
解物である（R,S）−アミン、（Ｓ）−アミン、（Ｒ）
−アミン、さらにはベンジルアセトンなどの一般式（R,
S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導体に近似
した構造を有する化合物を培地に対し0.005〜0.5W/V
％、好ましくは0.05〜0.3W/V％添加して培養することに
より、著しく不斉加水分解活性の高い培養物がえられ
る。
般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導
体、好ましくは炭素原子数が１〜４のノルマルまたはイ
ソタイプのアルキル基を有するアシル基であるアシル誘
導体、その（Ｓ）体である（Ｓ）−アシル誘導体、
（Ｒ）体である（Ｒ）−アシル誘導体、それらの加水分
解物である（R,S）−アミン、（Ｓ）−アミン、（Ｒ）
−アミン、さらにはベンジルアセトンなどの一般式（R,
S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導体に近似
した構造を有する化合物を培地に対し0.005〜0.5W/V
％、好ましくは0.05〜0.3W/V％添加して培養することに
より、著しく不斉加水分解活性の高い培養物がえられ
る。
このようにして培養された高活性の培養物を用いるこ
とにより、高濃度の（R,S）−アシル誘導体の不斉加水
分解が可能となる。
とにより、高濃度の（R,S）−アシル誘導体の不斉加水
分解が可能となる。
本発明において使用されるアミンのアシル誘導体とし
ては、 があげられるが、ここでX1、X2はそれぞれ水素原子、ハ
ロゲン原子、水酸基、たとえばC1〜６のアルキル基、ア
ミノ基を示し、X1とX2は同一であってもよく、異なって
いてもよい。
ては、 があげられるが、ここでX1、X2はそれぞれ水素原子、ハ
ロゲン原子、水酸基、たとえばC1〜６のアルキル基、ア
ミノ基を示し、X1とX2は同一であってもよく、異なって
いてもよい。
前記ＲはC1〜６のアルキル基であるが、これらのうち
でもC1〜４のアルキル基であるのが反応速度などの点か
ら好ましい。
でもC1〜４のアルキル基であるのが反応速度などの点か
ら好ましい。
前記一般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミンのア
シル誘導体の具体例としては、たとえば（R,S）−１−
メチル−３−フェニルプロピルアセトアミドなどがあげ
られる。
シル誘導体の具体例としては、たとえば（R,S）−１−
メチル−３−フェニルプロピルアセトアミドなどがあげ
られる。
つぎに不斉加水分解反応には前記培養物をそのまま使
用してもよく、また微生物（菌体）を遠心分離法などに
より濃縮・集菌して使用してもよく、また集菌した微生
物を凍結乾燥などの乾燥操作を行ない使用してもよい。
さらに、微生物が産生する酵素が（Ｒ）−アシル誘導体
の不斉加水分解に対して高い活性を有するばあいには、
単離した酵素または凍結乾燥した酵素を使用してもよ
い。
用してもよく、また微生物（菌体）を遠心分離法などに
より濃縮・集菌して使用してもよく、また集菌した微生
物を凍結乾燥などの乾燥操作を行ない使用してもよい。
さらに、微生物が産生する酵素が（Ｒ）−アシル誘導体
の不斉加水分解に対して高い活性を有するばあいには、
単離した酵素または凍結乾燥した酵素を使用してもよ
い。
本培養菌体から生成される不斉加水分解酵素は培養時
間が40時間を超える時点から菌体外に徐々に移行する現
象が見られるので、本菌体の利用に対してはこの点を考
慮していく必要がある。したがってつぎの不斉加水分解
反応には培養時間が40時間以内であれば菌体をそのまま
使用してもよくまたは集菌した菌体を使用し活性能を上
げることもできる。一方、２日以上の長時間培養を行な
ったばあいは酵素が菌体外の培養ろ液または遠心上清液
中に存在しているため培養ろ液または遠心上清液の使用
による不斉加水分解を行なうことができる。
間が40時間を超える時点から菌体外に徐々に移行する現
象が見られるので、本菌体の利用に対してはこの点を考
慮していく必要がある。したがってつぎの不斉加水分解
反応には培養時間が40時間以内であれば菌体をそのまま
使用してもよくまたは集菌した菌体を使用し活性能を上
げることもできる。一方、２日以上の長時間培養を行な
ったばあいは酵素が菌体外の培養ろ液または遠心上清液
中に存在しているため培養ろ液または遠心上清液の使用
による不斉加水分解を行なうことができる。
一般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル
誘導体を、前記微生物またはその培養物の作用により不
斉的に加水分解させる際の条件としては、たとえば（R,
S）−アシル誘導体を親水性の高いアルコールなどの親
水性溶剤もしくはSolvon T80（ツィーン80）などの界面
活性剤に溶解ないし懸濁させ、10〜60W/V％濃度液と
し、この一部ないしは全部に対して前記の微生物または
濃縮・集菌した微生物をリン酸緩衝液中に懸濁させたの
ちに添加し、反応液中の（R,S）−アシル誘導体の濃度
が１〜30W/V％となるようにし、反応条件としては15〜6
0℃、好ましくは25〜40℃の温度で充分に攪拌もしくは
振盪しながら１〜５日間、好ましくは２〜４日間反応さ
せるというような条件を採用することができる。
誘導体を、前記微生物またはその培養物の作用により不
斉的に加水分解させる際の条件としては、たとえば（R,
S）−アシル誘導体を親水性の高いアルコールなどの親
水性溶剤もしくはSolvon T80（ツィーン80）などの界面
活性剤に溶解ないし懸濁させ、10〜60W/V％濃度液と
し、この一部ないしは全部に対して前記の微生物または
濃縮・集菌した微生物をリン酸緩衝液中に懸濁させたの
ちに添加し、反応液中の（R,S）−アシル誘導体の濃度
が１〜30W/V％となるようにし、反応条件としては15〜6
0℃、好ましくは25〜40℃の温度で充分に攪拌もしくは
振盪しながら１〜５日間、好ましくは２〜４日間反応さ
せるというような条件を採用することができる。
前記不斉加水分解反応に際して、（R,S）−アシル誘
導体を有機溶剤に部分的に可溶化させながらまたは界面
活性剤の作用で溶剤への分散効率を高めた状態で反応を
行なうと、これらの処理を行なわない方法とくらべて著
しく反応率を高めることができる。
導体を有機溶剤に部分的に可溶化させながらまたは界面
活性剤の作用で溶剤への分散効率を高めた状態で反応を
行なうと、これらの処理を行なわない方法とくらべて著
しく反応率を高めることができる。
とくに前記有機溶媒が水に不溶もしくは難溶の有機溶
剤であって、水との２相系において不斉加水分解反応を
行なうばあいには、基質と微生物との接触が増大するな
どの点から好ましい。
剤であって、水との２相系において不斉加水分解反応を
行なうばあいには、基質と微生物との接触が増大するな
どの点から好ましい。
前記反応率を高める効果のある有機溶剤としては、た
とえばｎ−ヘキサン、イソペンタン、ｎ−オクタン、ｎ
−デカン、ｎ−ドデカン、ｎ−テトラデカンのようなア
ルカン系、イソプロピルエーテルのようなエーテル系、
エタノール、ｎ−プロパノールのようなアルコール系の
溶剤があげられる。前記アルカン系、エーテル系の溶剤
は水に不溶もしくは難溶の有機溶剤の代表例である。
とえばｎ−ヘキサン、イソペンタン、ｎ−オクタン、ｎ
−デカン、ｎ−ドデカン、ｎ−テトラデカンのようなア
ルカン系、イソプロピルエーテルのようなエーテル系、
エタノール、ｎ−プロパノールのようなアルコール系の
溶剤があげられる。前記アルカン系、エーテル系の溶剤
は水に不溶もしくは難溶の有機溶剤の代表例である。
また、前記界面活性剤としては、たとえばポリオキシ
エチレンソルビタンモノオレートのようなツィーン系界
面活性剤があげられる。界面活性剤の使用量としては水
に対して約１〜20重量％が通常である。
エチレンソルビタンモノオレートのようなツィーン系界
面活性剤があげられる。界面活性剤の使用量としては水
に対して約１〜20重量％が通常である。
前記有機溶剤などを溶媒菌体を含む水相に対し50〜15
0W/V％使用することにより、とくに基質である（R,S）
−アシル誘導体の5W/V％以上の高濃度における反応率が
著しく増加する。なお、使用する有機溶剤などの使用量
は基質濃度により決定されるものであり、必ずしも前記
の範囲に限定されるものではない。また、不斉加水分解
反応に際して分割添加する方が一括添加するよりも反応
に好ましいばあいもあるから、（R,S）−アシル誘導体
を段階に添加してもよい。
0W/V％使用することにより、とくに基質である（R,S）
−アシル誘導体の5W/V％以上の高濃度における反応率が
著しく増加する。なお、使用する有機溶剤などの使用量
は基質濃度により決定されるものであり、必ずしも前記
の範囲に限定されるものではない。また、不斉加水分解
反応に際して分割添加する方が一括添加するよりも反応
に好ましいばあいもあるから、（R,S）−アシル誘導体
を段階に添加してもよい。
不斉加水分解後の（Ｒ）−アミンと残存する（Ｓ）−
アシル誘導体の分離には、非親水性の有機溶剤による抽
出操作が好適に採用されうるが、このばあいの有機溶剤
としては、酢酸メチル、酢酸エチルのようなエステル系
溶剤が好ましい。この抽出操作により（Ｒ）−アミンと
（Ｓ）−アシル誘導体を分離することができる。分離
後、水相からベンゼンなどによる抽出操作で、また
（Ｓ）−アシル誘導体はｎ−ヘキサン中で結晶化させる
ことにより、効率よく各々を採取することができる。
アシル誘導体の分離には、非親水性の有機溶剤による抽
出操作が好適に採用されうるが、このばあいの有機溶剤
としては、酢酸メチル、酢酸エチルのようなエステル系
溶剤が好ましい。この抽出操作により（Ｒ）−アミンと
（Ｓ）−アシル誘導体を分離することができる。分離
後、水相からベンゼンなどによる抽出操作で、また
（Ｓ）−アシル誘導体はｎ−ヘキサン中で結晶化させる
ことにより、効率よく各々を採取することができる。
このようにしてえられた（Ｒ）−アミンおよび（Ｓ）
−アシル誘導体の光学純度は各々99％以上とすることが
可能である。
−アシル誘導体の光学純度は各々99％以上とすることが
可能である。
また、（Ｓ）−アシル誘導体は常法により化学的に分
解することにより（Ｒ）−アミンにすることができる。
解することにより（Ｒ）−アミンにすることができる。
以下に実施例をあげて本発明の方法を具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
実施例１ （R,S）−１−メチル−３−フェニルプロピルアセト
アミド（MPAC）を不斉加水分解し、（Ｒ）−１−メチル
−３−フェニルプロピルアミンを産生する微生物、シュ
ードモナス プチダ Sc2 FERM P 11602およびシュー
ドモナス プチダ Pc3 FERM P 11603をスクリーニン
グするために下記の組成でpH7.0の培地を調製した。
アミド（MPAC）を不斉加水分解し、（Ｒ）−１−メチル
−３−フェニルプロピルアミンを産生する微生物、シュ
ードモナス プチダ Sc2 FERM P 11602およびシュー
ドモナス プチダ Pc3 FERM P 11603をスクリーニン
グするために下記の組成でpH7.0の培地を調製した。
培地組成 （W/V％） （Ｒ）−MPAC 0.15 KH2PO4 0.1 K2HPO4 0.1 NH4Cl 0.1 MgSO4・7H2O 0.03 イーストエキス 0.01 この培地5mlを含む試験管にシュードモナス プチダ
Sc2 FERM P 11602およびPc3 FERM P 11603を植菌
後、28℃の培養温度で２日間振盪培養した。同じ培地10
0mlを含む500mlの坂口フラスコ中に前記培養菌体を注入
し、28℃の培養温度で２日間振盪培養した。（R,S）−M
PAC 25gを100mlのエタノールに溶解した溶液を各々の培
養菌体中に添加し、（R,S）−MPACの濃度が1W/V％、2W/
V％および3W/V％となるようにしたのちさらに30℃にて
２日間振盪させた。遠心分離法により菌体を除去した上
清液を用いてHPLC分析による化学純度測定および化学純
度測定を行なった。
Sc2 FERM P 11602およびPc3 FERM P 11603を植菌
後、28℃の培養温度で２日間振盪培養した。同じ培地10
0mlを含む500mlの坂口フラスコ中に前記培養菌体を注入
し、28℃の培養温度で２日間振盪培養した。（R,S）−M
PAC 25gを100mlのエタノールに溶解した溶液を各々の培
養菌体中に添加し、（R,S）−MPACの濃度が1W/V％、2W/
V％および3W/V％となるようにしたのちさらに30℃にて
２日間振盪させた。遠心分離法により菌体を除去した上
清液を用いてHPLC分析による化学純度測定および化学純
度測定を行なった。
光学純度測定に使用したカラムは5C18（4.6×100mm）
であり、光学純度測定においては、試料とGITC（テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−グルコシルイソチオシアネー
ト）とを付加反応させたのち、カラム 10C18（4.6×250
mm）を使用して行なった。菌体の種類および不斉加水分
解の結果を第４表に示す。
であり、光学純度測定においては、試料とGITC（テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−グルコシルイソチオシアネー
ト）とを付加反応させたのち、カラム 10C18（4.6×250
mm）を使用して行なった。菌体の種類および不斉加水分
解の結果を第４表に示す。
つぎに培養時間が約40時間を超える頃から酵素は菌体
内から培養液中に移行するため菌体を濾別した上清液を
使用し不斉加水分解を行なった。
内から培養液中に移行するため菌体を濾別した上清液を
使用し不斉加水分解を行なった。
前記液体培地100mlを含む500mlの坂口フラスコ中にあ
らかじめ培養を行なったシュードモナス プチダ Sc2
FERM P 11602およびPc3 FERM P 11603の種培養液を
それぞれ4ml添加し、28℃の培養温度で７日間振盪培養
した。培養後遠心分離法により菌体を分離したのち上清
液をそれぞれ約100mえた。（Ｒ−Ｓ）−MPAC25gを100ml
エタノールに溶解した溶液を各々の上清液10mlに添加
し、（Ｒ−Ｓ）−MPACの濃度が1W/V％、2W/V％および3W
/V％となるようにしたのちさらに30℃にて２日間反応を
行なった。菌体の種類および不斉加水分解の結果を第５
表に示す。
らかじめ培養を行なったシュードモナス プチダ Sc2
FERM P 11602およびPc3 FERM P 11603の種培養液を
それぞれ4ml添加し、28℃の培養温度で７日間振盪培養
した。培養後遠心分離法により菌体を分離したのち上清
液をそれぞれ約100mえた。（Ｒ−Ｓ）−MPAC25gを100ml
エタノールに溶解した溶液を各々の上清液10mlに添加
し、（Ｒ−Ｓ）−MPACの濃度が1W/V％、2W/V％および3W
/V％となるようにしたのちさらに30℃にて２日間反応を
行なった。菌体の種類および不斉加水分解の結果を第５
表に示す。
実施例２ 種々の誘導物質の効果を調べるために種々の誘導物質
を添加し不斉加水分解活性を求めた。
を添加し不斉加水分解活性を求めた。
実施例１に記載の培地のうちの（Ｒ）−MPACのかわり
に第６表記載の誘導物質（濃度0.15W/V％）に置換した
液体培地に、シュードモナス プチダ Pc3 FERM P 116
03菌体を接種し28℃の培養温度で２日間振盪培養した。
に第６表記載の誘導物質（濃度0.15W/V％）に置換した
液体培地に、シュードモナス プチダ Pc3 FERM P 116
03菌体を接種し28℃の培養温度で２日間振盪培養した。
この培養ブロス中にSolvon T80（ツィーン80）溶液に
50W/V％のMPACを溶解した溶液を添加し、反応液中にMPA
Cが5W/V％となるようにして28℃にて２日間振盪し不斉
加水分解を行なった。これらの結果を第６表に示す。
50W/V％のMPACを溶解した溶液を添加し、反応液中にMPA
Cが5W/V％となるようにして28℃にて２日間振盪し不斉
加水分解を行なった。これらの結果を第６表に示す。
実施例３ MPAC基質の高濃度における不斉加水分解性を調べた。
実施例１に記載した液体培地100mlを含む500mlの坂口フ
ラスコ中にあらかじめ培養を行なったシュードモナス
プチダ Pc3 FERM P 11603種培養液4mlを添加し、28℃
の培養温度で４日間振盪培養した。培養後遠心分離法に
より菌体を分離した上清液を限外濾過により約10倍（10
ml）に濃縮し、これにSolvon T80（ツィーン80）溶液に
50W/V％のMPACを溶解した溶液および20mMのトリス塩酸
バッファー液を反応液の全量が20mlになるように、また
反応液中のMPACの濃度が5W/V％、10W/V％および15W/V％
となるように添加したのち28℃にて４日間振盪培養を行
なった。不斉加水分解の結果を第７表に示す。
実施例１に記載した液体培地100mlを含む500mlの坂口フ
ラスコ中にあらかじめ培養を行なったシュードモナス
プチダ Pc3 FERM P 11603種培養液4mlを添加し、28℃
の培養温度で４日間振盪培養した。培養後遠心分離法に
より菌体を分離した上清液を限外濾過により約10倍（10
ml）に濃縮し、これにSolvon T80（ツィーン80）溶液に
50W/V％のMPACを溶解した溶液および20mMのトリス塩酸
バッファー液を反応液の全量が20mlになるように、また
反応液中のMPACの濃度が5W/V％、10W/V％および15W/V％
となるように添加したのち28℃にて４日間振盪培養を行
なった。不斉加水分解の結果を第７表に示す。
実施例４ シュードモナス プチダ Pc3 FERM P 11603によるMP
ACの不斉加水分解反応後（Ｒ）−MPPAと（Ｓ）−MPACの
分離精製を行ない、各々を採取した。
ACの不斉加水分解反応後（Ｒ）−MPPAと（Ｓ）−MPACの
分離精製を行ない、各々を採取した。
実施例１に記載の培地5mlを含む試験管に植菌し、28
℃の培養温度が２日間振盪培養を行なった。同じ培地10
0mlを含む500mlの坂口フラスコ中に前記培養菌体を注入
し、28℃の培養温度で２日間振盪培養を行なった。別に
MPAC25gを100mlのエタノールに溶解した溶液8mlを前記
菌体に添加し、さらに28℃で３日間振盪した。
℃の培養温度が２日間振盪培養を行なった。同じ培地10
0mlを含む500mlの坂口フラスコ中に前記培養菌体を注入
し、28℃の培養温度で２日間振盪培養を行なった。別に
MPAC25gを100mlのエタノールに溶解した溶液8mlを前記
菌体に添加し、さらに28℃で３日間振盪した。
つぎに遠心分離法により菌体を除去し、上清液約100m
lをえた。この上清液中の（Ｒ）−MPPAおよび（Ｓ）−M
PACの濃度ならびに光学純度を第８表に示す。
lをえた。この上清液中の（Ｒ）−MPPAおよび（Ｓ）−M
PACの濃度ならびに光学純度を第８表に示す。
前記上清液を硫酸にてpH3としたのち約50mlの酢酸メ
チルにより３回抽出を行なった。
チルにより３回抽出を行なった。
水層を当容量のベンゼンで２回抽出したのちベンゼン
を溜去して濃縮することにより油状物質0.5g（（Ｒ）−
MPPA）をえた。えられた油状物質の分析値は化学純度99
％、化学純度99.5％ee以上であった。
を溜去して濃縮することにより油状物質0.5g（（Ｒ）−
MPPA）をえた。えられた油状物質の分析値は化学純度99
％、化学純度99.5％ee以上であった。
つぎに酢酸メチル層より酢酸メチルを溜去して油状と
したのちｎ−ヘキサン30ml中に滴下して（Ｓ）−MPACを
結晶化させた。結晶を濾別・乾燥して白色結晶0.73gを
えた。えられた白色結晶の分析値は化学純度99％、化学
純度97％eeであった。
したのちｎ−ヘキサン30ml中に滴下して（Ｓ）−MPACを
結晶化させた。結晶を濾別・乾燥して白色結晶0.73gを
えた。えられた白色結晶の分析値は化学純度99％、化学
純度97％eeであった。
実施例５ 非水性有機溶剤添加による２相系反応の効果を調べる
ために下記に示す反応条件により反応を行なった。
ために下記に示す反応条件により反応を行なった。
シュードモナス プチダ Pc3 FERM P 11603の培養菌
体1mlより遠心分離法にて菌体を集菌し、0.15Mのリン酸
バッファー（pH7.0）0.9ml中に添加した。エタノール中
にMPACを50W/V％濃度とした溶液0.1mlを添加した。さら
に、第９表に記載の有機溶剤1mlを加え、28℃にて４日
間振盪攪拌した。反応の結果を第９表に示す。
体1mlより遠心分離法にて菌体を集菌し、0.15Mのリン酸
バッファー（pH7.0）0.9ml中に添加した。エタノール中
にMPACを50W/V％濃度とした溶液0.1mlを添加した。さら
に、第９表に記載の有機溶剤1mlを加え、28℃にて４日
間振盪攪拌した。反応の結果を第９表に示す。
［発明の効果］ 本発明は、従来から知られているジアステレオマーに
誘導したのちの光学分割法に基づく光学活性アミンの製
法とは異った微生物の光学分割能を利用したものであ
り、本発明によると容易に高純度の光学活性（Ｒ）−ア
ミンおよび（Ｓ）−アシル誘導体を取得することができ
る。
誘導したのちの光学分割法に基づく光学活性アミンの製
法とは異った微生物の光学分割能を利用したものであ
り、本発明によると容易に高純度の光学活性（Ｒ）−ア
ミンおよび（Ｓ）−アシル誘導体を取得することができ
る。
本発明におけるシュードモナス属に属する光学分割能
を有する微生物の発見、該微生物の培養に際し誘導物質
の添加により菌体の不斉加水分解能を著しく向上させう
ること、不斉加水分解反応に際し基質と菌体酵素との接
触率を高める効果がある有機溶剤などの使用で反応率を
著しく高めうることなどは、きわめて実用的に重要な意
味を持ち、工業的な光学活性アミンの製造技術としての
価値の大きいものである。
を有する微生物の発見、該微生物の培養に際し誘導物質
の添加により菌体の不斉加水分解能を著しく向上させう
ること、不斉加水分解反応に際し基質と菌体酵素との接
触率を高める効果がある有機溶剤などの使用で反応率を
著しく高めうることなどは、きわめて実用的に重要な意
味を持ち、工業的な光学活性アミンの製造技術としての
価値の大きいものである。
Claims (7)
- 【請求項１】一般式（R,S）−（Ｉ）： （式中、X1、X2はそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、アルキル基、アミノ基、ＲはC1〜６のアルキル
基、ｎは１〜３の整数を表わす）で表わされるアミンの
アシル誘導体（エナンチオマー混合物）に、（Ｒ）−ア
ミンのアシル誘導体のみを不斉加水分解する能力を有す
るシュードモナス属に属する微生物またはその培養物を
作用させ、一般式（Ｒ）−（II）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｒ）−アミンとしたのち、
（Ｒ）−アミンと残存する一般式（Ｓ）−（Ｉ）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｓ）−アミンのアシル誘導体と
を分離することを特徴とする光学活性アミン類の製造方
法。 - 【請求項２】ＲがC1〜４のアルキル基である請求項１記
載の製造方法。 - 【請求項３】一般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミ
ンのアシル誘導体が（R,S）−１−メチル−３−フェニ
ルプロピルアセトアミドであり、一般式（Ｒ）−（II）
で表わされる（Ｒ）−アミンが（Ｒ）−１−メチル−３
−フェニルプロピルアミンである請求項１記載の製造方
法。 - 【請求項４】前記微生物またはその培養物が、アシル誘
導体を分解する酵素を誘導する物質（誘導物質）の存在
下で培養、調製した微生物またはその培養物である請求
項１記載の製造方法。 - 【請求項５】前記誘導物質が、一般式（R,S）−（Ｉ）
で表わされるアミンのアシル誘導体に対応する（R,S）
−アミン、一般式（Ｒ）−（II）で表わされる（Ｒ）−
アミン、前記（Ｒ）−アミンの鏡像異性体である（Ｓ）
−アミンまたはこれらのアシル誘導体である請求項４記
載の製造方法。 - 【請求項６】水と水に不溶もしくは難溶の有機溶剤との
２相系で反応を行なう請求項１記載の製造方法。 - 【請求項７】親水性溶剤または界面活性剤に一般式（R,
S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導体を溶解
させたものを用いて反応させる請求項６記載の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24503590A JP2928613B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | 光学活性アミン類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24503590A JP2928613B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | 光学活性アミン類の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04126097A JPH04126097A (ja) | 1992-04-27 |
| JP2928613B2 true JP2928613B2 (ja) | 1999-08-03 |
Family
ID=17127617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24503590A Expired - Fee Related JP2928613B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | 光学活性アミン類の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2928613B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008182986A (ja) * | 2007-01-31 | 2008-08-14 | Sumitomo Chemical Co Ltd | アミノアシラーゼ遺伝子 |
-
1990
- 1990-09-14 JP JP24503590A patent/JP2928613B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008182986A (ja) * | 2007-01-31 | 2008-08-14 | Sumitomo Chemical Co Ltd | アミノアシラーゼ遺伝子 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04126097A (ja) | 1992-04-27 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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