JP2928612B2 - 光学活性アミン類の製造方法 - Google Patents
光学活性アミン類の製造方法Info
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- JP2928612B2 JP2928612B2 JP24503490A JP24503490A JP2928612B2 JP 2928612 B2 JP2928612 B2 JP 2928612B2 JP 24503490 A JP24503490 A JP 24503490A JP 24503490 A JP24503490 A JP 24503490A JP 2928612 B2 JP2928612 B2 JP 2928612B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は光学活性アミンの製造方法に関する。さらに
詳しくは、特定の（R,S）−アミンのアシル誘導体（以
下、（R,S）−アシル誘導体ともいう）に、（Ｓ）−ア
ミンのアシル誘導体（以下、（Ｓ）−アシル誘導体とも
いう）のみを不斉加水分解する能力を有する特定の属に
属する微生物またその培養物を作用させ、特定の（Ｓ）
−アミンと特定の（Ｒ）−アミンのアシル誘導体（以
下、（Ｒ）−アシル誘導体ともいう）との混合物にし、
分離して光学活性アミン類を製造する方法に関する。
詳しくは、特定の（R,S）−アミンのアシル誘導体（以
下、（R,S）−アシル誘導体ともいう）に、（Ｓ）−ア
ミンのアシル誘導体（以下、（Ｓ）−アシル誘導体とも
いう）のみを不斉加水分解する能力を有する特定の属に
属する微生物またその培養物を作用させ、特定の（Ｓ）
−アミンと特定の（Ｒ）−アミンのアシル誘導体（以
下、（Ｒ）−アシル誘導体ともいう）との混合物にし、
分離して光学活性アミン類を製造する方法に関する。
これらの光学活性アミン類およびそれらからえられる
光学活性誘導体は、各種の光学活性医薬や活性活性農薬
の中間体となり、実用的に価値が大きい。近年、医薬お
よび農薬で光学活性中心を有する化合物のばあいには、
強い生理活性を示す片方の光学活性体のみが使用される
ことが多く、前記光学活性アミン類などの化合物を利用
することにより、光学活性構造を有する医薬および農薬
に導くことが容易となる。たとえば、本発明によってえ
られる（Ｓ）−または（Ｒ）−１−メチル−３−フェニ
ルプロピルアミンは光学活性医薬および光学活性農薬の
重要な中間体としての利用が期待されている。
光学活性誘導体は、各種の光学活性医薬や活性活性農薬
の中間体となり、実用的に価値が大きい。近年、医薬お
よび農薬で光学活性中心を有する化合物のばあいには、
強い生理活性を示す片方の光学活性体のみが使用される
ことが多く、前記光学活性アミン類などの化合物を利用
することにより、光学活性構造を有する医薬および農薬
に導くことが容易となる。たとえば、本発明によってえ
られる（Ｓ）−または（Ｒ）−１−メチル−３−フェニ
ルプロピルアミンは光学活性医薬および光学活性農薬の
重要な中間体としての利用が期待されている。
［従来の技術・発明が解決しようとする課題］ 従来、一般式（Ｓ）−（II）： または一般式（Ｒ）−（II） （式中、X1、X2はそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、アルキル基、アミノ基、ｎは１〜３の整数、＊は
不斉炭素を表わす）で表わされるアミンまたはその誘導
体をうる方法として、ジアステレオマーにして光学分割
する方法（特開昭59−108749号公報）などが知られてい
る。
酸基、アルキル基、アミノ基、ｎは１〜３の整数、＊は
不斉炭素を表わす）で表わされるアミンまたはその誘導
体をうる方法として、ジアステレオマーにして光学分割
する方法（特開昭59−108749号公報）などが知られてい
る。
しかしながら、このような光学分割法ではジアステレ
オマーを調製するために別の高価な光学活性化合物が必
要となること、また光学純度を高めるためには繰返しの
晶析が必要となることなどの欠点があり、価格的に安価
に、かつ簡便にこれらの光学活性体をうることが困難で
ある。
オマーを調製するために別の高価な光学活性化合物が必
要となること、また光学純度を高めるためには繰返しの
晶析が必要となることなどの欠点があり、価格的に安価
に、かつ簡便にこれらの光学活性体をうることが困難で
ある。
［課題を解決するための手段］ 本発明者らは係る実情に鑑み、微生物の利用により簡
便かつ経済的に、一般式（R,S）−（II）： （式中、X1、X2、ｎは前記と同じ）で表わされる（R,
S）−アミンの光学分割法を開発すべく鋭意研究を重ね
た結果、微生物またその培養物が一般式（R,S）−
（Ｉ）： （式中、X1、X2、ｎは前記に同じ、ＲはC1〜６のアルキ
ル基を示す）で表わされる（R,S）−アシル誘導体（エ
ナンチオマー混合物）のうち、（Ｓ）−アシル誘導体の
みを選択的に加水分解して一般式（Ｓ）−（II）で表わ
される（Ｓ）−アミンを生成させ、（Ｒ）−アシル誘導
体が残存することを発見し、つづいて両者を分離するこ
とにより効率的に光学分割する方法を確立し、本発明を
完成するに至った。
便かつ経済的に、一般式（R,S）−（II）： （式中、X1、X2、ｎは前記と同じ）で表わされる（R,
S）−アミンの光学分割法を開発すべく鋭意研究を重ね
た結果、微生物またその培養物が一般式（R,S）−
（Ｉ）： （式中、X1、X2、ｎは前記に同じ、ＲはC1〜６のアルキ
ル基を示す）で表わされる（R,S）−アシル誘導体（エ
ナンチオマー混合物）のうち、（Ｓ）−アシル誘導体の
みを選択的に加水分解して一般式（Ｓ）−（II）で表わ
される（Ｓ）−アミンを生成させ、（Ｒ）−アシル誘導
体が残存することを発見し、つづいて両者を分離するこ
とにより効率的に光学分割する方法を確立し、本発明を
完成するに至った。
すなわち、本発明は、 一般式（R,S）−（Ｉ）： （式中、X1、X2はそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、アルキル基、アミノ基、ＲはC1〜６のアルキル
基、ｎは１〜３の整数を表わす）で表わされるアミンの
アシル誘導体（エナンチオマー混合物）に、（Ｓ）−ア
ミンのアシル誘導体のみを不斉加水分解する能力を有す
るアグロバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、セル
ロモナス属またはノカルディア属に属する微生物または
その培養物を作用させ、一般式（Ｓ）−（II）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｓ）−アミンとしたのち、
（Ｓ）−アミンと残存する一般式（Ｒ）−（Ｉ）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｒ）−アミンのアシル誘導体と
を分離することを特徴とする光学活性アミン類の製造方
法 に関する。
酸基、アルキル基、アミノ基、ＲはC1〜６のアルキル
基、ｎは１〜３の整数を表わす）で表わされるアミンの
アシル誘導体（エナンチオマー混合物）に、（Ｓ）−ア
ミンのアシル誘導体のみを不斉加水分解する能力を有す
るアグロバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、セル
ロモナス属またはノカルディア属に属する微生物または
その培養物を作用させ、一般式（Ｓ）−（II）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｓ）−アミンとしたのち、
（Ｓ）−アミンと残存する一般式（Ｒ）−（Ｉ）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｒ）−アミンのアシル誘導体と
を分離することを特徴とする光学活性アミン類の製造方
法 に関する。
［実施例］ 本発明においては、一般式（R,S）−（Ｉ）： で表わされるアミンのアシル誘導体（エナンチオマー混
合物）が特定の属に属する微生物またはその培養物の作
用により、不斉的に加水分解せしめられ、（Ｓ）−アミ
ンと（Ｒ）−アシル誘導体にされる。
合物）が特定の属に属する微生物またはその培養物の作
用により、不斉的に加水分解せしめられ、（Ｓ）−アミ
ンと（Ｒ）−アシル誘導体にされる。
前記一般式（R,S）−（Ｉ）におけるX1、X2はそれぞ
れ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、たとえばC1〜６の
アルキル基、アミノ基を示し、X1とX2は同一であっても
よく、異なっていてもよい。
れ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、たとえばC1〜６の
アルキル基、アミノ基を示し、X1とX2は同一であっても
よく、異なっていてもよい。
X1とX2とは−（CH2）ｎ−基に対してオルト位とパラ
位に結合していてもよく、オルト位とオルト位に結合し
ていてもよい。
位に結合していてもよく、オルト位とオルト位に結合し
ていてもよい。
前記ＲはC1〜６のアルキル基であるが、これらのうち
でもC1〜４のアルキル基であるのが反応速度などの点か
ら好ましい。
でもC1〜４のアルキル基であるのが反応速度などの点か
ら好ましい。
前記一般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミンのア
シル誘導体の具体例としては、たとえば（R,S）−１−
メチル−３−フェニルプロピルアセトアミドなどがあげ
られる。
シル誘導体の具体例としては、たとえば（R,S）−１−
メチル−３−フェニルプロピルアセトアミドなどがあげ
られる。
前記微生物としては、アグロバクテリウム（Agrobact
erium）属、ブレビバクテリウム（Brevibacterium）
属、ノカルディア（Nocardia）属に属する微生物があげ
られ、その具体例として、たとえばアグロバクテリウム
ツメフェイシエンス（Agrobacterium tumefaciens）I
FO 13263、ブレビバクテリウム アンモニアゲネス（B
revibacterium ammoniagenes）IFO 12071、ノカルディ
ア アステロイデス（Nocardia asteroides）IFO 3384
などがあげられる。なお、本発明に用いられる微生物に
は含まれないが、セルロモナス属に含まれる微生物、具
体例としてはたとえばセルロモナス フイミ（Cellulom
onas fimi）IAM 12107も前記微生物と同様に使用する
ことができる。前記IFO番号の付された微生物は（財）
醗酵研究所に寄託された微生物のタイプカルチャー番号
であり、IAM番号の付された微生物は東京大学応用微生
物研究所に寄託された微生物のタイプカルチャー番号で
あり、これらの微生物は寄託した各々の機関から入手す
ることが可能である。
erium）属、ブレビバクテリウム（Brevibacterium）
属、ノカルディア（Nocardia）属に属する微生物があげ
られ、その具体例として、たとえばアグロバクテリウム
ツメフェイシエンス（Agrobacterium tumefaciens）I
FO 13263、ブレビバクテリウム アンモニアゲネス（B
revibacterium ammoniagenes）IFO 12071、ノカルディ
ア アステロイデス（Nocardia asteroides）IFO 3384
などがあげられる。なお、本発明に用いられる微生物に
は含まれないが、セルロモナス属に含まれる微生物、具
体例としてはたとえばセルロモナス フイミ（Cellulom
onas fimi）IAM 12107も前記微生物と同様に使用する
ことができる。前記IFO番号の付された微生物は（財）
醗酵研究所に寄託された微生物のタイプカルチャー番号
であり、IAM番号の付された微生物は東京大学応用微生
物研究所に寄託された微生物のタイプカルチャー番号で
あり、これらの微生物は寄託した各々の機関から入手す
ることが可能である。
なお、これらの微生物は、本発明者らが数多くの微生
物について、アシル誘導体の不斉加水分解活性を調べス
クリーニングを行なうことにより選択されたものであ
る。
物について、アシル誘導体の不斉加水分解活性を調べス
クリーニングを行なうことにより選択されたものであ
る。
スクリーニングの方法としては、（R,S）−アミンの
アシル誘導体を含有する培地（濃度0.05〜0.3W/V％）を
調製し、これに各微生物（菌体）を植菌し、28℃にて２
〜４日間振盪し培養後、TLC分析にてアミン生成が認め
られた菌体につき１〜5W/V％の（R,S）−アミンのアシ
ル誘導体を含む培養培地に植菌し、菌体反応を行なわ
せ、アシル誘導体の光学活性を確認する方法により行な
った。
アシル誘導体を含有する培地（濃度0.05〜0.3W/V％）を
調製し、これに各微生物（菌体）を植菌し、28℃にて２
〜４日間振盪し培養後、TLC分析にてアミン生成が認め
られた菌体につき１〜5W/V％の（R,S）−アミンのアシ
ル誘導体を含む培養培地に植菌し、菌体反応を行なわ
せ、アシル誘導体の光学活性を確認する方法により行な
った。
前記微生物の培養物とは、前記微生物を培地を用いて
培養したもののことであり、培養に用いる培地にはとく
に制限はなく、微生物が増殖しうる栄養源を含む培地で
あればよい。
培養したもののことであり、培養に用いる培地にはとく
に制限はなく、微生物が増殖しうる栄養源を含む培地で
あればよい。
このような培地の具体例としては、たとえば炭素源と
して、グリセロール、グルコース、シュークロースなど
の糖類、チッ素源として酵母エキス、肉エキス、ポリペ
プトンなど、無機塩として燐酸カリウム、硫酸マグネシ
ウムなどを含有せしめたpH4.0〜10.0の培地があげられ
る。
して、グリセロール、グルコース、シュークロースなど
の糖類、チッ素源として酵母エキス、肉エキス、ポリペ
プトンなど、無機塩として燐酸カリウム、硫酸マグネシ
ウムなどを含有せしめたpH4.0〜10.0の培地があげられ
る。
培養方法としては、前記のごとき培地を使用し、培養
温度10〜40℃にて第１次種母培養、ついで第２次本培養
を各々２〜３日間行なう方法が、具体的な方法としてあ
げられる。
温度10〜40℃にて第１次種母培養、ついで第２次本培養
を各々２〜３日間行なう方法が、具体的な方法としてあ
げられる。
前記培養に際し、培地に誘導物質として、たとえば一
般式（R,S）−（II）で表わされるアミンのアシル誘導
体、好ましくは炭素原子数が１〜４のノルマルまたはイ
ソタイプのアルキル基を有するアシル基であるアシル誘
導体、その（Ｒ）体である（Ｒ）−アシル誘導体、
（Ｓ）体である（Ｓ）−アシル誘導体、それらの加水分
解物である（R,S）−アミン、（Ｒ）−アミン、（Ｓ）
−アミン、さらにはベンジルアセトンなどの一般式（R,
S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導体に近似
した構造を有する化合物を培地に対し0.005〜0.5W/V
％、好ましくは0.05〜0.3W/V％添加して培養することに
より、著しく不斉加水分解活性の高い培養物がえられ
る。
般式（R,S）−（II）で表わされるアミンのアシル誘導
体、好ましくは炭素原子数が１〜４のノルマルまたはイ
ソタイプのアルキル基を有するアシル基であるアシル誘
導体、その（Ｒ）体である（Ｒ）−アシル誘導体、
（Ｓ）体である（Ｓ）−アシル誘導体、それらの加水分
解物である（R,S）−アミン、（Ｒ）−アミン、（Ｓ）
−アミン、さらにはベンジルアセトンなどの一般式（R,
S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導体に近似
した構造を有する化合物を培地に対し0.005〜0.5W/V
％、好ましくは0.05〜0.3W/V％添加して培養することに
より、著しく不斉加水分解活性の高い培養物がえられ
る。
このようにして培養された高活性の培養物を用いるこ
とにより、高濃度の（R,S）−アシル誘導体の不斉加水
分解が可能となる。
とにより、高濃度の（R,S）−アシル誘導体の不斉加水
分解が可能となる。
つぎの不斉加水分解反応には前記培養物をそのまま使
用してもよく、また微生物（菌体）を遠心分離法などに
より濃縮・集菌して使用してもよく、また集菌した微生
物を凍結乾燥などの乾燥操作を行ない使用してもよい。
用してもよく、また微生物（菌体）を遠心分離法などに
より濃縮・集菌して使用してもよく、また集菌した微生
物を凍結乾燥などの乾燥操作を行ない使用してもよい。
一般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル
誘導体を、前記微生物またはその培養物の作用により不
斉的に加水分解させる際の条件としては、たとえば（R,
S）−アシル誘導体を親水性の高いアルコールなどの親
水性溶剤もしくはSolvon T80（ツィーン80）などの界面
活性剤に溶解ないし懸濁させ、10〜60W/V％濃度液と
し、この一部ないしは全部に対して前記の微生物または
濃度・集菌した微生物をリン酸緩衝液中に懸濁させたの
ちに添加し、反応液中の（R,S）−アシル誘導体の濃度
が１〜30W/V％となるようにし、反応条件としては15〜6
0℃、好ましくは25〜40℃の温度で充分に攪拌もしくは
振盪しながら１〜５日間、好ましくは２〜４日間反応さ
せるというような条件を採用することができる。
誘導体を、前記微生物またはその培養物の作用により不
斉的に加水分解させる際の条件としては、たとえば（R,
S）−アシル誘導体を親水性の高いアルコールなどの親
水性溶剤もしくはSolvon T80（ツィーン80）などの界面
活性剤に溶解ないし懸濁させ、10〜60W/V％濃度液と
し、この一部ないしは全部に対して前記の微生物または
濃度・集菌した微生物をリン酸緩衝液中に懸濁させたの
ちに添加し、反応液中の（R,S）−アシル誘導体の濃度
が１〜30W/V％となるようにし、反応条件としては15〜6
0℃、好ましくは25〜40℃の温度で充分に攪拌もしくは
振盪しながら１〜５日間、好ましくは２〜４日間反応さ
せるというような条件を採用することができる。
前記不斉加水分解反応に際して、（R,S）−アシル誘
導体を有機溶剤に部分的に可溶化させながらまたは界面
活性剤の作用で溶剤への分散効率を高めた状態で反応を
行なうと、これらの処理を行なわない方法とくらべて著
しく反応率を高めることができる。
導体を有機溶剤に部分的に可溶化させながらまたは界面
活性剤の作用で溶剤への分散効率を高めた状態で反応を
行なうと、これらの処理を行なわない方法とくらべて著
しく反応率を高めることができる。
とくに前記有機溶媒が水に不溶もしくは難溶の有機溶
剤であって、水との２相系において不斉加水分解反応を
行なうばあいには、基質と微生物との接触が増大するな
どの点から好ましい。
剤であって、水との２相系において不斉加水分解反応を
行なうばあいには、基質と微生物との接触が増大するな
どの点から好ましい。
前記反応率を高める効果のある有機溶剤としては、た
とえばｎ−ヘキサン、イソペンタン、ｎ−オクタン、ｎ
−デカン、ｎ−ドデカン、ｎ−テトラデカンのようなア
ルカン系、イソプロピルエーテルのようなエーテル系、
エタノール、ｎ−プロパノールのようなアルコール系の
溶剤があげられる。前記アルカン系、エーテル系の溶剤
は水に不溶もしくは難溶と有機溶剤の代表例である。
とえばｎ−ヘキサン、イソペンタン、ｎ−オクタン、ｎ
−デカン、ｎ−ドデカン、ｎ−テトラデカンのようなア
ルカン系、イソプロピルエーテルのようなエーテル系、
エタノール、ｎ−プロパノールのようなアルコール系の
溶剤があげられる。前記アルカン系、エーテル系の溶剤
は水に不溶もしくは難溶と有機溶剤の代表例である。
また、前記界面活性剤としては、たとえばポリオキシ
エチレンソルビタンモノオレートのようなツィーン系界
面活性剤があげられる。界面活性剤の使用量としては水
に対して約１〜20重量％が通常である。
エチレンソルビタンモノオレートのようなツィーン系界
面活性剤があげられる。界面活性剤の使用量としては水
に対して約１〜20重量％が通常である。
前記有機溶剤などを溶媒菌体を含む水相に対し50〜15
0W/V％使用することにより、とくに基質である（R,S）
−アシル誘導体の5W/V％以上の高濃度における反応率が
著しく増加する。なお、使用する有機溶剤などの使用量
は基質濃度により決定されるものであり、必ずしも前記
の範囲に限定されるものではない。また、不斉加水分解
反応に際して分割添加する方が一括添加するよりも反応
に好ましいばあいもあるから、（R,S）−アシル誘導体
を加水分解度合に応じて分割して添加してもよい。
0W/V％使用することにより、とくに基質である（R,S）
−アシル誘導体の5W/V％以上の高濃度における反応率が
著しく増加する。なお、使用する有機溶剤などの使用量
は基質濃度により決定されるものであり、必ずしも前記
の範囲に限定されるものではない。また、不斉加水分解
反応に際して分割添加する方が一括添加するよりも反応
に好ましいばあいもあるから、（R,S）−アシル誘導体
を加水分解度合に応じて分割して添加してもよい。
不斉加水分解後の（Ｓ）−アミンと残存する（Ｒ）−
アシル誘導体の分離には、非親水性の有機溶剤による抽
出操作が好適に採用されうるが、このばあいの有機溶剤
としては、酢酸メチル、酢酸エチルのようなエステル系
溶剤が好ましい。この抽出操作により（Ｓ）−アミンと
（Ｒ）−アシル誘導体を分離することができる。分離
後、水相からベンゼンなどによる抽出操作で、また
（Ｒ）−アシル誘導体はｎ−ヘキサン中で結晶化させる
ことにより、効率よく各々を採取することができる。
アシル誘導体の分離には、非親水性の有機溶剤による抽
出操作が好適に採用されうるが、このばあいの有機溶剤
としては、酢酸メチル、酢酸エチルのようなエステル系
溶剤が好ましい。この抽出操作により（Ｓ）−アミンと
（Ｒ）−アシル誘導体を分離することができる。分離
後、水相からベンゼンなどによる抽出操作で、また
（Ｒ）−アシル誘導体はｎ−ヘキサン中で結晶化させる
ことにより、効率よく各々を採取することができる。
このようにしてえられた（Ｓ）−アミンおよび（Ｒ）
−アシル誘導体の光学純度は各々99％以上とすることが
可能である。
−アシル誘導体の光学純度は各々99％以上とすることが
可能である。
また、（Ｒ）−アシル誘導体は常法により化学的に分
解することにより（Ｒ）−アミンにすることができる。
解することにより（Ｒ）−アミンにすることができる。
以下に実施例をあげて本発明の方法を具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
実施例１〜３および参考例１〜２ （R,S）−１−メチル−３−フェニルプロピルアセト
アミド（MPAC）を不斉加水分解し、（Ｓ）−１−メチル
−３−フェニルプロピルアミンを産生する微生物をスク
リーニングするために下記の組成でpH7.0の培地を調製
した。
アミド（MPAC）を不斉加水分解し、（Ｓ）−１−メチル
−３−フェニルプロピルアミンを産生する微生物をスク
リーニングするために下記の組成でpH7.0の培地を調製
した。
培地組成 （W/V％） MPAC 0.15 KH2PO4 0.1 K2HPO4 0.1 MgSO4・7H2O 0.03 イーストエキス 0.3 肉エキス 0.3 グリセロール 1.0 ポリペルトン 0.2 水 この培地1mlに菌体を植菌後、28℃の培養温度で２日
間培養した。培養後菌体を遠心分離法により集菌した濃
縮菌体をMPAC 1W/V％を含む0.1Mリン酸バッファー液0.1
ml中に添加し、30℃にて２日間振盪攪拌させて反応させ
た。反応後の上清液を用いてHPLC分析による化学純度測
定および光学純度測定を行なった。
間培養した。培養後菌体を遠心分離法により集菌した濃
縮菌体をMPAC 1W/V％を含む0.1Mリン酸バッファー液0.1
ml中に添加し、30℃にて２日間振盪攪拌させて反応させ
た。反応後の上清液を用いてHPLC分析による化学純度測
定および光学純度測定を行なった。
光学純度測定に使用したカラムは5C18（4.6×100mm）
であり、光学純度測定においては、試料とGITC（テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−グルコシルイソチオシアネー
ト）とを付加反応させたのみ、カラム 10C18（4.6×250
mm）を使用して行なった。
であり、光学純度測定においては、試料とGITC（テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−グルコシルイソチオシアネー
ト）とを付加反応させたのみ、カラム 10C18（4.6×250
mm）を使用して行なった。
基質であるMPACの不斉加水分解により（Ｓ）−１−メ
チル−３−フェニルプロピルアミン（Ｓ−MPPA）を生成
した菌体の種類および不斉加水分解の結果を第１表に示
す。
チル−３−フェニルプロピルアミン（Ｓ−MPPA）を生成
した菌体の種類および不斉加水分解の結果を第１表に示
す。
参考例３ 不斉加水分解活性の高い培養菌体をうるため種々の誘
導物質の効果を調べた。
導物質の効果を調べた。
参考例１記載の培地のうちのMPACを第２表記載の誘導
物質・濃度に置換した培地にかえて、参考例１に記載の
条件と同一の条件でセルロモナスフイミ IAM 12107菌
体を培養した。
物質・濃度に置換した培地にかえて、参考例１に記載の
条件と同一の条件でセルロモナスフイミ IAM 12107菌
体を培養した。
培養後の培養菌体を遠心分離で集菌後、リン酸バッフ
ァーを含む水相中にMPACが5W/V％となるように調整した
ものに加え、さらにｎ−ヘキサンを水相と等量になるよ
うに加えたのち、28℃で２日間振盪攪拌させて反応させ
た。反応後の上清液を用いて参考例１と同様にして化学
純度測定および光学純度測定を行なった。これらの結果
を第２表に示す。
ァーを含む水相中にMPACが5W/V％となるように調整した
ものに加え、さらにｎ−ヘキサンを水相と等量になるよ
うに加えたのち、28℃で２日間振盪攪拌させて反応させ
た。反応後の上清液を用いて参考例１と同様にして化学
純度測定および光学純度測定を行なった。これらの結果
を第２表に示す。
なお、前記誘導物質を添加しない培地を使用したばあ
い、菌体の不斉加水分解活性は１％以下と低かった。
い、菌体の不斉加水分解活性は１％以下と低かった。
参考例４ 非水性有機溶剤添加による２相系反応および親水性有
機溶剤添加の効果を調べるために下記に示す反応条件で
反応させた。
機溶剤添加の効果を調べるために下記に示す反応条件で
反応させた。
（１） ２相系反応例 培養菌体1mlより遠心分離法にて菌体を集菌し、0.15M
のリン酸バッファー（pH7.0）0.9ml中に添加した。エタ
ノール中にMPACを50W/V％濃度とした溶液0.1mlを添加し
た。さらに、第３表に記載の有機溶剤1mlを加え、28℃
にて２日間振盪攪拌した。
のリン酸バッファー（pH7.0）0.9ml中に添加した。エタ
ノール中にMPACを50W/V％濃度とした溶液0.1mlを添加し
た。さらに、第３表に記載の有機溶剤1mlを加え、28℃
にて２日間振盪攪拌した。
（２） 親水性溶剤使用反応例 MPACを50W/V％の親水性溶剤にかえて反応を行なっ
た。
た。
反応の結果を第３表に示す。
参考例５ セルロモナス フイミIAM12107によるMPACの不斉加水
分解反応後Ｓ−MPPAとＲ−MPACの分離精製を行ない、各
々を採取した。
分解反応後Ｓ−MPPAとＲ−MPACの分離精製を行ない、各
々を採取した。
参考例１記載の培地5mlを含む試験管に植菌し、28℃
にて２日間振盪培養を行なった。同じ培地100mlを含む5
00mlの坂口フラスコ中に前記培養菌体を注入し、28℃に
て２日間振盪培養を行なった。培養後、遠心分離法によ
り菌体を集菌し、えられた菌体を50mlの0.1Mリン酸バッ
ファー液（pH7）に懸濁させた。MPAC50gを100mlのSolvo
n T80に溶かしこんだ溶液5mlを前記菌体に添加し、さら
に３日間30℃にて振盪攪拌した。（なお、反応液中のMP
AC濃度は約5W/V％となっていた。）遠心分離法にて菌体
を除去した上清液約50mlをえた。上清液中のＳ−MPPAお
よびＲ−MPACの濃度および光学純度を第４表に示す。
にて２日間振盪培養を行なった。同じ培地100mlを含む5
00mlの坂口フラスコ中に前記培養菌体を注入し、28℃に
て２日間振盪培養を行なった。培養後、遠心分離法によ
り菌体を集菌し、えられた菌体を50mlの0.1Mリン酸バッ
ファー液（pH7）に懸濁させた。MPAC50gを100mlのSolvo
n T80に溶かしこんだ溶液5mlを前記菌体に添加し、さら
に３日間30℃にて振盪攪拌した。（なお、反応液中のMP
AC濃度は約5W/V％となっていた。）遠心分離法にて菌体
を除去した上清液約50mlをえた。上清液中のＳ−MPPAお
よびＲ−MPACの濃度および光学純度を第４表に示す。
前記上清液を硫酸にてpH3としたのち約50mlの酢酸メ
チルにより３回抽出を行なった。
チルにより３回抽出を行なった。
水層を当容量のベンゼンで２回抽出したのちベンゼン
を溜去して濃縮することにより油状物質0.6g（Ｓ−MPP
A）をえた。えられた油状物質の分析値は化学純度99
％、化学純度98.5％ee以上であった。
を溜去して濃縮することにより油状物質0.6g（Ｓ−MPP
A）をえた。えられた油状物質の分析値は化学純度99
％、化学純度98.5％ee以上であった。
つぎに酢酸メチル層より酢酸メチルを溜去して油状と
したのちｎ−ヘキサン30ml中に滴下してＲ−MPACを結晶
化させた。結晶を濾別・乾燥して白色結晶1.05gをえ
た。えられた白色結晶の分析値は化学純度99％、化学純
度96％eeであった。
したのちｎ−ヘキサン30ml中に滴下してＲ−MPACを結晶
化させた。結晶を濾別・乾燥して白色結晶1.05gをえ
た。えられた白色結晶の分析値は化学純度99％、化学純
度96％eeであった。
［発明の効果］ 本発明は、従来から知られているジアステレオマーに
誘導したのちの光学分割法に基づく光学活性アミンの製
法とは異った微生物の光学分割能を利用したものであ
り、本発明によると容易に高純度の光学活性（Ｓ）アミ
ンおよび（Ｒ）アシル誘導体を取得することができる。
誘導したのちの光学分割法に基づく光学活性アミンの製
法とは異った微生物の光学分割能を利用したものであ
り、本発明によると容易に高純度の光学活性（Ｓ）アミ
ンおよび（Ｒ）アシル誘導体を取得することができる。
本発明における前記３種の属に属する光学分割能を有
する微生物の発見、該微生物の培養に際し誘導物質の添
加により菌体の不斉加水分解能を著しく向上させうるこ
と、不斉加水分解反応に際し基質と菌体との接触率を高
める効果がある有機溶剤などの使用で反応率を著しく高
めうることなどは、きわめて実用的に重要な意味を持
ち、工業的な光学活性アミンの製造技術としての価値の
大きいものである。
する微生物の発見、該微生物の培養に際し誘導物質の添
加により菌体の不斉加水分解能を著しく向上させうるこ
と、不斉加水分解反応に際し基質と菌体との接触率を高
める効果がある有機溶剤などの使用で反応率を著しく高
めうることなどは、きわめて実用的に重要な意味を持
ち、工業的な光学活性アミンの製造技術としての価値の
大きいものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:06） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:15）
Claims (7)
- 【請求項１】一般式（R,S）−（Ｉ）： （式中、X1、X2はそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、アルキル基、アミノ基、ＲはC1〜６のアルキル
基、ｎは１〜３の整数を表わす）で表わされるアミンの
アシル誘導体（エナンチオマー混合物）に、（Ｓ）−ア
ミンのアシル誘導体のみを不斉加水分解する能力を有す
るアグロバクテリウム属、ブレビバクテリウム属または
ノカルディア属に属する微生物またはその培養物を作用
させ、一般式（Ｓ）−（II）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｓ）−アミンとしたのち、
（Ｓ）−アミンと残存する一般式（Ｒ）−（Ｉ）： （式中、X1、X2およびｎは前記と同じ、＊は不斉炭素を
表わす）で表わされる（Ｒ）−アミンのアシル誘導体と
を分離することを特徴とする光学活性アミン類の製造方
法。 - 【請求項２】ＲがC1〜４のアルキル基である請求項１記
載の製造方法。 - 【請求項３】一般式（R,S）−（Ｉ）で表わされるアミ
ンのアシル誘導体が（R,S）−１−メチル−３−フェニ
ルプロピルアセトアミドであり、一般式（Ｓ）−（II）
で表わされる（Ｓ）−アミンが（Ｓ）−１−メチル−３
−フェニルプロピルアミンである請求項１記載の製造方
法。 - 【請求項４】前記微生物またはその培養物が、アシル誘
導体を分解する酵素を誘導する物質（誘導物質）の存在
下で培養、調製した微生物またはその培養物である請求
項１記載の製造方法。 - 【請求項５】前記誘導物質が、一般式（R,S）−（Ｉ）
で表わされるアミンのアシル誘導体に対応する（R,S）
−アミン、一般式（Ｓ）−（II）で表わされる（Ｓ）−
アミン、前記（Ｓ）−アミンの鏡像異性体である（Ｒ）
−アミンまたはこれらのアシル誘導体である請求項４記
載の製造方法。 - 【請求項６】水と水に不溶もしくは難溶の有機溶剤との
２相系で反応を行なう請求項１記載の製造方法。 - 【請求項７】親水性溶剤または界面活性剤に一般式（R,
S）−（Ｉ）で表わされるアミンのアシル誘導体を溶解
させたものを用いて反応させる請求項６記載の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24503490A JP2928612B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | 光学活性アミン類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24503490A JP2928612B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | 光学活性アミン類の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04126096A JPH04126096A (ja) | 1992-04-27 |
| JP2928612B2 true JP2928612B2 (ja) | 1999-08-03 |
Family
ID=17127600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24503490A Expired - Fee Related JP2928612B2 (ja) | 1990-09-14 | 1990-09-14 | 光学活性アミン類の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2928612B2 (ja) |
-
1990
- 1990-09-14 JP JP24503490A patent/JP2928612B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04126096A (ja) | 1992-04-27 |
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