KR890016166A - B형 간염 표면 항원의 정제방법 - Google Patents

B형 간염 표면 항원의 정제방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

B형 간염 표면 항원의 정제방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (22)

  1. a) 완충시킨 카오트로픽(chaotropic)염의 존재하에 피치아 파스토리스(pichia pastoris)효모 세포를 용해시키고 상기 용해된 세포로부터 B형 간염 표면 항원-함유 상등액을 분리시키고 ; b) a)단계에서 얻어진 B형 간염 표면항원 함유 상등액을, 상기 상등액에서 지방 및 오염 단백질을 침전시키기에 적합한 조건하에 놓고 ; c) b)단계에서 얻어진 B형 간염 표면 항원 함유 상등액을 다이아 여과(diafiltration)시키고 ; d) c)단계에서 얻어진 B형 간염 표면 항원 함유 보유액을 살리카와 접촉시키고 ; e) 결과생성된 실리카-흡착된 B형 간염 표면 항원으로부터의 오염 단백질을 pH 6-8의완충 용액을 사용하여 세척하고 ; f) 실리카로부터의 B형 간염 표면 항원을 0.5-8몰 농도의 요소를 함유하는 pH 9.5-11.0의 완충용출액으로 용출시키고 ; g) f)단계에서 얻어진 B형 간염 표면 항원 함유분류물을 오염 단백질로부터 B형 간염 표면 항원을 분리시키기에 적합한 겔 여과 단계에 놓고 ; h) g)단계에서 얻어진 B형 간염 표면 항원 함유 분류물을 오염 단백질로부터 상기 B형 간염 표면 항원을 분리시키기에 적합한 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 거치게 하는 것을 포함하는, 피치아 파스토리스 세로포부터 B형 간염 표면 항원을 회수하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 효모 세포가 유기 비이드(beadg) 분쇄에 의해 용해되는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 카오트로픽 염이 티오시안산나트륨, 티오시안산칼륨, 요오드화 나트륨, 요오드화 칼륨, 차아염소산 나트륨, 염화 리튬, 브롬화 리튬, 염산 구아니디늄, 티오시안산 구아니디늄, 요소로 이루어진 군으로부터 선택된 방법.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 카오트로픽 염이 약 1몰 -약 8몰 농도로 존재하는 방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 카오트로픽 염이 약 6- 약 8의 pH를 갖는 완충 시스템에 의해 완충되는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한항에 있어서, 상기 액체 및 오염 단백질의 침전이, 10-30분 동안 45-55℃의 온도 범위로 B형 간염 표면 항원-함유 상등액을 가열시킴으로써 수행되는 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한항에 있어서, 상기 액체 및 오열 단백질의 침전이 상기 B형 간염 표면 항원-함유 용액을 4-30℃의 온도범위로 가열시키고 상기 상등액의 pH를 4.5-5.5 범위로 낮추기 위해 충분한 양의 산을 첨가시킴으로써 수행되는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 산이 염산, 황산, 인산, 아세트산, 옥실산, 질산, 과염소산 및 포름산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  9. 제 7 항에 있어서, 상기 침전후에, B형 간염 표면 항원-함유 상등액의 pH를 6-8의 범위로 올리기 위해 충분한 염기가 첨가되는 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한항에 있어서, 상기 다이아 여과가 5,00-500,000의 분자량 배제 제한(exclusion limit)을 갖는 막을 사용하여 수행되는 방법.
  11. 제 1 항에 있어서, 상기 실리카가 1002/gm-500m2/gm 범위의영향받기쉬운 표면적을 갖는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 초기 입자 농도가 용해된 세포 추출물로부터의 총 추출 가능한 단백질의 1% 이상인 경우, 상기 B형 간염 표면 항원-함유 상등액에 존재하는 매 1mg의 B형 간염 표면 항원의 활성에 대해 50-100mg의 실리카가 사용되는 방법.
  13. 제11항에 있어서,초기 입자 농도가 용해된 세포 추출물로부터의 총 추출 가능한 단백질의 1%보다 작은경우, 상기 B형 간염 표면 항원-함유 상등액안에 존재하는 매 1mg의 B형 간염 표면 항원 활성에 대해, 1% 당 50-100mg의실리카의 염기로부터 실리카의 상응하는 비율로 비례적인 증가가 사용되는 방법.
  14. 제11항에 있어서, 상기 실라카가 40-60중량%의 실리카를 함유하는 실리카 슬러리로서 존재하는 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 5항중 어느 한항에 있어서, 상기 B형 간염 표면 항원-함유 분류물을 아가로스 겔, 덱스트란 겔, 및 폴리아크릴아미드 겔로 이루어진 군으로부터 선택된 극성 매트릭스 상에서 겔 여과시키는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 극성 매트릭스가 적어도 1백만의 분자량 배제를 갖는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 6-9의 pH를 갖는 완충액을 사용하여 상기 극성 매트릭스를 통해 상기 B형 간염 표면 항원이 용출되는 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한항에 있어서, 상기 이온교환 크로마토그래피가 디에틸 아미노 에틸 양이온을 사용하여, 음이온-교환 수지로 수행되는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 6-9 범위의 pH 및 0몰-0.3몰의 전해질 농도의 갖는 완충 액을 사용하여 상기 B형 간염표면 항원이 상기 음이온 교환수지로부터 용출되는 방법.
  20. 제 1 항에 있어서, (a) 약 7.5의 pH를 갖는 인산염 완충액 및 약 3몰의 티오시안산 칼륨 농도의 존재하에 상기 효모 세포를 용해시키고 ; (b) pH를 5.0으로 낮추는데 충분한 농도를 갖는 인산의 존재하에 약20℃의 온도에서 상기 침전을 수행하고 ; (c) 상기 침전후에, 상기 B형 간염 표면 항원-함유용액의 pH를 약 6.5로 올리기 위해 충분한 수산화 나트륨을 첨가시키고 ; (d) 약 7.5의 pH를 갖는 인산염 완충액의 존재하에 100,000의 분자량 배제 제한을 갖는 막위에서 상기 B형 간염 표면 항원-함유 상등액을 다이아 여과시키고 ; (e) 상기 B형 간염 표면 항원-함유 상등액을 충분한 양의 약 50중량%의 실리카 슬러리와 접촉시켜 상기 상등액에 존재하는 매 1mg의 형 간염 표면 항원 활성에 대해 60mg의 실리카를 사용하고, (f) 약 7의 pH를 갖고, 0.15M NaCl을 함유하는 인산염으로 완충시킨 염수 완충 시스템을 사용하여 상기 실리카로부터 상기 오염 단백질을 세척하고, (g) 약 10.1의 pH 및 약 1몰 농도의 요소농도를 갖는 탄산염-중탄산염 완충액으로 상기 실리카로부터 상기 B형 간염 표면 항원을 용출시키고, (h) 약 8의 pH를 갖는 트리스(TRIS)-염화물 완충액의 존재하에, 100,000의 분자량 배제 제한을 갖는 막에서 단계(g)에서 얻어진 상기 B형 간염 표면 항원-함유 분류물을 여과시키고, (i) 20×106의 분자량 배제를 갖는 아가로스 겔 위에서 상기 겔 여과를 수행하고 약 8의 pH를 갖는 트리스-염화물 완충액으로 상기 B형 간염 표면 항원을 상기 아가로스 겔을 통해 용출시키고, (j) 상기 이온 교환 크로마토 그래피를 디에틸 아미노 에틸 양이온을 사용하여 수행하고 상기 B형 간염 표면 항원을 0-0.3몰 범위의 염화나트륨 농도를 갖는 트리스-염화물 완충액을 사용하여 상기 양이온으로부터 용출시키는 방법.
  21. 제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한항에 있어서, 상기 효모세포가 PBSAGI5I(NRRLB-18021)로 형질 전환된 피치아 파스토리스 GS115(NRRL Y-15851)인 방법.
  22. 제 1 항의 방법에 의해 제조된 정제시킨 B형 간염 표면 항원 입자.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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