KR970015744A - 재조합 α-인터페론의 정제방법 - Google Patents

재조합 α-인터페론의 정제방법 Download PDF

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Abstract

대장균에서 발현된 봉입체 형태로 회수된 α-인터페론 봉입체 용액을 활성형으로 재생시키고, 산침전시키고, 양이온 교환 크로마토그라피, 염석, 투석하고, 크로마토 포커싱하고, 겔 여과 크로마토그라피화여 정제된 α-인터페론은 다량의 대장균 숙주세포의 단백질을 비롯하여 올리고머형, 미스폴더형, 슬로우 모노머형 등의 변이체를 제거하며, 특히 등전점 변이체를 제거하여, 활성형의 α-인터페론을 고순도로 정제할 수 있으며, 공정이 간편하고 재사용이 가능하며, 수율 또한 매우 높다.

Description

재조합 α-인터페론의 정제방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 활성화공정이 끝난 α-인터페론 봉입체 용해액을 pH 5.0로 낮추었을 때 상등액에 존재하는 활성형 α-인터페론의 순도를 C8역상고속액체 크로마토그라피로 분석한 크로마토그람이다,
제2도는 크로마토 포커싱 과정중 PBE94에 흡착시킨 후 용출시키는 과정에서 용출액의 흡광도를 파장 280nm에서 측정한 크로마토그람이다,
제3도는 세파덱스 G-75슈퍼파인 컬럼을 통과시켜 최종적으로 정제한 α-인터페론을 C8역상고속액체 크로마토그라피로 분석한 크로마토그람이다,
제4도는 세파덱스 G-75 슈퍼파인 컬럼을 통과시켜 최종적으로 정제한 α-인터페론의 순도를 SDS 폴리아크릴 아미드젤 전기영동으로 확인한 전기영동 사진이다.

Claims (12)

  1. 대장균에서 발현된 봉입체 형태로 회수된 α-인터페론 봉입체 용액의 pH를 상승시켜 α-인터페론을 활성형으로 재생시키는 활성형 재생공정과; 상기한 활성화된 α-인터페론 용액의 pH를 하강시켜 변이체를 침전시키는 산침전공정과; α-인터페론을 포함하는 상기한 산침전 공정의 상등액을 양이온 교환 크로마토그라피로 용출시켜 분리하는 양이온 교환 크로마토그라피 공정과; 상기한 양이온 교환 크로마토그라피 공정에서 α-인터페론의 활성이 높은 분획들을 포함하는 용액 내에 α-인터페론을 침전시키고 투석하는 투석공정과; 상기한 투석공정에서 회수한 α-인터페론을 크로마토 포커싱하는 크로마토 포커싱공정과; 상기한 크로마토 포커싱공정에서 회수한 α-인터페론을 겔 여과 크로마토그라피하는 겔 여과 크로마토그라피공정을; 포함하는 α-인터페론의 정제방법.
  2. 제1항에서, 상기한 산침전공정은 pH을 4.0∼6.0의 범위로 조절하므로써 불활성형의 α-인터페론과 대장균 유래단백질을 침전시켜 제거하는 것인 α-인터페론의 정제방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기한 양이온 크로마토그라피 수지는 SP 세파로스패스트 플로우인 α-인터페론의 정제방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기한 양이온 크로마토그라피의 완충용액은 40mM 인산일나트륨(pH 4.8)인 α-인터페론의 정제방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기한 α-인터페론을 용출시킬 때 용출액은 상기한 인산일나트륨과 염화나트륨 용액이며, 이때 염화나트륨의 농도는 0에서 0.8몰까지 선형농도 구배시킨 것이 α-인터페론의 정제방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기한 투석공정에서 침전은 40중량% 황산암모늄염을 첨가하여 실시하는 것인 α-인터페론의 정제방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기한 크로마토 포커싱 수지는 PBE94인 α-인터페론의 정제방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기한 크로마토 포커싱 공정의 완충용액을 25mM 이미다졸(pH 7.4)인 α-인터페론의 정제방법.
  9. 제7항에 있어서, 상기한 크로마토 포커싱 공정에서 용출액은 증류수로 10배 희석한 후 묽은 염산으로 pH를 5.5로 조절한 PB74 완충용액인 α-인터페론의 정제방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기한 크로마토 포커싱 공정은 pH 6.0인 용출액에 포함된 α-인터페론을 회수하는 것인 α-인터페론의 정제방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기한 pH 6.0인 용출액에 포함된 α-인터페론이 함유된 용출액에 황산암모늄을 L당 313g 가하여 α-인터페론을 침전으로 회수하는 것인 α-인터페론의 정제방법.
  12. 제1항에 있어서, 상기한 겔 여과 크로마토그라피 수지는 세파덱스 G-75 슈퍼파인인 α-인터페론의 정제방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100431609B1 (ko) * 1999-12-21 2004-05-17 주식회사 포스코 코일결속용 고인성 밴드강판 제조방법

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5889196A (ja) * 1981-11-24 1983-05-27 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd インタ−フエロンの精製法
US4828990A (en) * 1984-12-27 1989-05-09 Naoki Higashi Method for purifying an interferon
DE3515336C2 (de) * 1985-04-27 1994-01-20 Boehringer Ingelheim Int Verfahren zur Herstellung und Reinigung von â-Interferon
KR920009503B1 (ko) * 1990-08-30 1992-10-17 주식회사 럭키 재조합 인 알파-인터페론의 정제방법
KR920009504B1 (ko) * 1991-03-05 1992-10-17 재단법인 목암생명공학연구소 형질 전환된 대장균으로 부터 인간 α-인터페론의 정제방법
KR960013393B1 (ko) * 1992-12-28 1996-10-04 주식회사 엘지화학 재조합 효모에서 발현된 알파 인터페론의 정제방법

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100431609B1 (ko) * 1999-12-21 2004-05-17 주식회사 포스코 코일결속용 고인성 밴드강판 제조방법

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