KR880701242A - 화학적으로 명명되고 재생이 가능한 폴리디옥시리보누클레오티드의 제조 방법 - Google Patents

화학적으로 명명되고 재생이 가능한 폴리디옥시리보누클레오티드의 제조 방법

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Abstract

내용 없음

Description

화학적으로 명명되고 재생이 가능한 폴리디옥시리보누클레오티드의 제조 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 각 단계에서의 유기체로부터 추출하고 다음에 단백질 분해로 소화된 조핵산의 변화를 도식적으로 나타낸다.

Claims (37)

  1. 조핵산의 용액으로부터 폴리디옥시리보누클레오티드 디피브로티드를 제조하는 방법에 있어서, 전술한 용액이 최소한 실질적으로 다당류와 단백질을 포함치 않으며, 전술한 방법이 (1)만일 필요하면 이 용액을 최소한 1몰의 예정한 이온력으로 조정하고 최고의 가역성 고발색성에 도달할때까지 용액의 pH를 조정하여 조핵산의 응집을 안정화시켜 고도로 중합된 니크된 폴리디옥시리보누클레오티드를 형성시키고, (2)수득한 용액을 전술한 폴리디옥시리보누클레오티드를 위한 해중합온도까지 이 용액을 전술한 가역성 고발생성 값을 얻을 때까지 해중합 온도에서 유지시켜서, 천연의 DNA에서의 %로서 측정하여, 이 용액의 가역성 고발색성이 h=15±5의 값이 될때까지 폴리이옥시리보누클레오티드를 해중합시키고, (3)그 후에 해중합 반응을 중합시키고, 해중합된 용액중의 어떤 이중의 필라멘트 단편에 있는 수소결합을 제거하고, 그리고 (4)그후에 이 해중합 반응물이 수소결합 개질되는 것을 방지하는 온도와 더 높은 pH에서 수득한 용액을 가열하여 수득되는 폴리디옥시보누클레오티드의 단일 필라멘트 단편을 안정화시키는 것을 포함하는 폴리디옥시리보누클레오티드 디피브로티드의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 조핵산의 전술한 용액을 유기체 조직과 포유동물세포에서 수득하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 단계를 전술한 조핵산의 불용성염의 현탁액에 알칼리금속의 수용성 염을 첨가하여 핵산을 안정화시키고, 수득되는 현탁에서 불용성 양이온을 제거하고, 최소한 1몰의 조핵산의 식염수용액을 얻을 때 까지 수용성염의 첨가를 계속하여 실시하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 수용성염의 첨가를 조핵산의 전술한 식염수용액이 최소한 3몰이 될때까지 계속하는 방법.
  5. 제3항에 있어서, 알칼리금속의 수용성염을 할로겐화물 및 초산염을 포함하는 그룹에서 선택하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 전술한 염이 염화나트륨인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 전술한 염이 염화나트륨의 3M용액인 방법.
  8. 제3항에 있어서, 불용성 양이온의 제거를 식염수를 계속 첨가하면서 일정한 용적에서 막을 접선방향으로 통과시키는 투과여과로 실시하는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 전술한 막이 100,000보다 높지 않는 커트-오프를 가지는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 단계 1의 pH조정을 사용한 용해화염의 음이온에 상응하는 산으로서 실시하여 예정한 이온력의 식염수용액을 수득하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 전술한 산이 염산인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 염산을 이 용액이 3-5의 pH에 상응하는 수소이온 농도를 가질때까진 첨가하는 방법.
  13. 제1항에 있어서, 단계 2의 해중합 반응을 약 70℃ 내지 75℃의 온도에서 가열하여 실시하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 해중합을 천연의 DNA의 %로서 표시하여 가역성 고발색성 값이 15±5의가 될때까지 이 값을 측정하면서 조절하는 방법.
  15. 제1항에 있어서, 단계 3에서 용액을 냉각시켜 해중합의 정지 하는 방법.
  16. 제1항에 있어서, 단계 3의 이중의 필라멘트 단편에 있는 수소 결합의 제거를 용액의 pH 7이상으로 조정하여 실시하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 용액을 8이상의 pH로 만드는 방법.
  18. 제16항에 있어서, pH를 알킬리금속 수산화물을 첨가하여 조정하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 전술한 알칼리금속 수산화물이 수산화나트륨인 방법.
  20. 제1항에 있어서, 단계 3에서 수득한 용액을 단일 필라멘트 단면을 안정화시키기 위하여 해중합 반응의 온도보다 5℃높은 온도까지 가열하는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 가열단계를 최소한 30분간 실시하는 방법.
  22. 제1항에 있어서, 단계 4의 안정화 가열단계에서 수득한 용액을 아직도 여과하고 다음에 이 용액에 존재하는 어떤염을 고온의 상태에서 제거하는 방법.
  23. 제22항에 있어서, 전술한 염을 제거한 후에 이 용액을 농축시키는 방법.
  24. 제22항에 있어서, 고온여과 단계로부터의 여액을 막에 접선방향으로 통과시키는 투석 처리하는 방법.
  25. 제1항에 있어서, 단계1을 이 시스템의 최고 가역성 고발색성에 상응하는 소요의 최종 pH를 얻는 것과 같은 물농도를 가지는 초산염 완충액으로 실시하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 단일 필라멘트 단편의 가열의 안정화에서 수득하는 용액을 여과하고 최종 생성물을 알코올성 용매를 첨가하여 침전시키는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 전술한 용매가 에탄올인 방법.
  28. 제1항에 있어서, 조핵산의 전술한 식염수용액을 분해질을 분쇄하고 고온 단백질분해식 소화, 여과 및 농축 시키고 다음에 인산염을 침전시킬 수 있는 양이온의 염을 첨가하고 이 침전물 현탁액의 일정한 용적에서 여과하여 제조하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 단백질 분해의 분해질의 여과를 막의 접선 방향 통과를 실시하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 전술한 막을 50,000-100,000의 커트오프를 가지도록 선택하는 방법.
  31. 제28항에 있어서, 일정용적의 여과를 막에 접선방향통과와 물의 계속적 보충으로 실시하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 전술한 막이 0.45μ 이하의 다공크기를 가지는 방법.
  33. 제28항에 있어서, 출발물질을 양, 돼지, 말 및 소의 폐, 장기, 간 및 점막을 포함하는 그룹에서 선택하는 방법.
  34. 제28항에 있어서, 출발물질을 백색소체 또는 이들 배양물의잔사, 정충, 정충세포 또는 포유동물의 생식세포를 포함하는 그룹에서 선택하는 방법.
  35. 제28항에 있어서, 출발물질이 헤파린,단백질분해질 또는 유기체 추출물을 수득하는 공정에서의 동물유기체와 조직의 처리에서 발생하는 모액인 방법.
  36. 아래의 무작위 배열순서의 일반식에 상응하여 디피브로티드(Defbrotide)로서 알려진 폴리디옥시리보누클레오티드: P1-5' (dAp)12-24' (dGp)10-20' (dTp)13-26' (dCp)10-20이식에서, P-인산라디칼 dAp=디옥시아데닐 단위체 dGp=디옥시구아닐 단위체 dTp=디옥시티미딜 단위체 dCp=디옥시시티딜 단위체이고 더우기 아래의 물리-화학적 성질을 나타낸다:
    -전기영동작용=균질성의 양극 가동성; -흡광 계수,±1㎚=220±10. -흡광반응, E230/E260=0.45±0.04; -분자의 흡광계수)인에 대한); ε(p)=7.750±500; -회전력; -천연의 DNA에는 %로 나타낸 가역성 고발색성, h=15±5.
  37. 최소한 다당류와 단백질이 실질적으로 없는 조핵산의 용액에서 디피브로티드를 제조하는 방법에 있어서, 전술한 방법이: (1)조핵산의 응집을 인정화하고, 만일 필요하면 조핵산 용액을 최소한 1분자의 예정된 이온력으로 조절하고 그리고 최고의 가역성 고발색성에 도달할 때까지 전술한 용액의 ph를 조정하여 고도로중합되고 니크된 폴리디옥시리보누클레오티드를 형성하고, (2) 그후에 전술한 폴리디옥시리보누클레오티드의 해중합온도 즉 약60 내지 약 80℃까지 수득되는 용액을 가열하고, 전술한 가역성 고발색 성에 도달할때까지 해중합 온도에서 이 용액을 유지하여, 이 용액의 가역성 고발색성의 천연의 dna에든 %로 표시하며 h=15±5로 측정된 값이 될때까지 폴리디옥시리보누클레오티드를 해중합시키고, (3) 그후에 이 용액을 15내지30℃의 온도까지 냉각하여 해중합 반응을 정지시키고, 이 용액을 ph값을 7이상으로 조정하여 해중합된 용액의 어떤 이중 필라멘트 단편에든 수소결합을 제기하여 단일의 필라멘트 폴리디옥시리보누클레오티드 단편을 형성하며, 그리고 (4) 그다음에 해중합 반응이 ph보다 최소한 0.2높은 ph에서 해중합 반응의 온도 보다 최소한 5℃높은 온도로 수득물을 가열하여 폴리디옥시리보누클레오티드의 수득되는 필라멘트 단편을 안정화시켜 수소결합의 개질을 방지하는 것을 포함하는 디피브로티드의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019870701176A 1986-04-17 1987-04-10 화학적으로 명명되고 재생이 가능한 폴리디옥시리보누클레오티드의 제조 방법 KR880701242A (ko)

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