KR880011339A - 인간 Mn-과산화 물분자 변위 보효소(hMn-SOD) - Google Patents

인간 Mn-과산화 물분자 변위 보효소(hMn-SOD) Download PDF

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Abstract

내용없음

Description

인간 Mn-과산화물분자 변위 보효소(hMn-SOD)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 클론 BS8의 EcoR1 단편 서열.
제2도는 플라스미드 HSOD4의 작제 전략 개략도.
제3도는 플라스미드 HSOD2 와 HSOD3에 의해 작제된 플라스미드 HSOD4의 제한지도.

Claims (39)

  1. 인간 망간 과산화물 분자변위 보 효소(hMn-SOD)의 효소적, 생화학적 및 면역학적 성질을 갖는 효소의 유전정보를 일부 또는 전부 암호화한 DNA 서열.
  2. 미토콘드리아내로 도입되어 정확하게 프로쎄싱되어 hMn-SOD의 효소적, 생화학적 및 면역학적 성질을 갖는 활성 성체 효소로 전환될 수 있는 미성체 hMn-SOD 효소를 암호화한 DNA 서열.
  3. 제2항에 있어서, hMn-SOD의 유전정보 및 아미노-말단 리더 또는 시그널 서열로 이루어지는 DNA 서열.
  4. 제3항에 있어서, hMn-SOD의 유전정보가 미토콘드리아 리더 또는 시그널 서열의 DNA 서열에 직접 후행되는 DNA 서열.
  5. 제4항에 있어서,미토콘트리아 리더 또는 시그널 서열이 효모로부터 기원하는 DNA 서열.
  6. 제1항 내지 5항중의 어느 한항에 있어서, 해독 출발 시그널(ATG), 미토콘드리아 리더 도는 시그널 서열, hMn-SOD의 DNA 서열 및 적어도 하나의 정지코돈의 순서로 조성된 DNA 서열.
  7. 제1항 내지 6항중의 어느 한항에 있어서, 염기 서열(Ia),(Ib),(Ⅱ), (Ⅲa), (Ⅲb), (Va), (Vb), (VIa), (VIb), (Ⅷ), (Ⅸ), (Ⅹ), (XI)의 뉴클레오타이드 서열에 상응하는 DNA 서열.
  8. 엄격한 조건하에서 제1항 내지 7항중의 어느 한항에 따른 DNA 서열과 하이브리드화하며, 합성, 반합성 또는 천연 DNA 서열이고, 따라서 제1항 내지 7항중의 어느 한항에 따른 DNA 서열 및 이의 모든 종류의 돌연변이와 관련이 있으며, hMn-SOD의 효소적, 생호학적 및 면역학적 성질을 갖는 효소를 암호화한 DNA 서열.
  9. 제1항 내지 8항중의 어느 한항에 따른 DNA 서열을 포함함을 특징으로 하는, 적어도 한 개의 동정표 식자를 갖고/갖거나 복제원 및 기타 필수 유전자 영역 외부에, 가능하게는 동정표식자 내부에 적어도 한 개의 제한 효소를 위한 인지부위를 갖는 복제 벡터.
  10. 제9항에 있어서, 바이러스, 바람직하게는 람다 파아지, 더욱 특히 入g±10 또는 M13 파아지로부터 유래되는 복제 벡터.
  11. 제9항에 있어서, 플라스미드로부터 유래되는 복제 벡터.
  12. 제1항 내지 8항중의 어느 한항에 따른 DNA 서열을 포함하는 발현 카세트를 가지며, 안정한 방법으로 진핵 및 원핵숙주세포를 형질전환시킬 수 있고, 이들 숙주 세포중 하나에서 복제할 수 있으며, 포함된 hMn-SOD의 유전정보가 정확하게 전사되고 해독됨을 특징으로 하는, 언급된 DNA 서열을 포함하는 플라스미드.
  13. 제12항에 있어서, YEp 12, pJDB207, pEAS102, YIPS 5인 플라스미드.
  14. 제12항에 있어서, pUC 플라스미드, 바람직하게는 pUC 18인 플라스미드.
  15. 제12항 내지 14항중의 어느 한항에 있어서, 판독방향에 대하여 모두 정방향으로 위치한 프로모터 요소, 개시코돈, 미토콘드리아 리더 또는 시그널 서열, hMn-SOD 구조 유전자, 정지코돈, 터미네이터를 갖는 발현 카세트가 그 내부에 위치하는 플라스미드.
  16. 제15항에 있어서, 플라스미드 내에 포함된 발현 카세트의 프로모터가 대략 1500bp의 완전한 ADHI 프로모터 또는 대략 400bp의 단축된 ADHIK 프로모터이고, 언급된 발현카세트 내의 터미네이트가 ADHII 터미네이트인 플라스미드.
  17. 플라스미드 pUS 490 A, pUS 491 A, pUS 550 A, pUS 371 A, pUS 372 A, pUS 373 A, PEO24-AB, PEO 25-AC, PEO 26-AD.
  18. hMn-SOD의 암호화 유전정보를 함유한 형질전환된 숙주세포.
  19. 제18항에 있어서, 제9항 내지 11항중 어느 한항에 따른 복제벡터, 특히 제12항 내지 17항중의 어느 한항에 따른 플라스미드를 함유하고, 이들 플라스미드를 복제시키고 발현시키며, 합성된 hMn-SOD를 숙주자체의 미토콘드리아 내로 도입시키고 이를 프로쎄싱하며 세포내에 축적하는 형질전환된 숙주세포.
  20. 제19항에 있어서, 원핵세포, 특히 엔테로 박테리아 속(Enterobacteriaceae), 바실러스 속(Bacillaceae), 비병원성 마이크로코커스 속(Micrococcaceae), 바람직하게는 이.콜라이, 더욱 특히 이.콜라이 C600 또는 이.콜라이 JM101인 형질전환된 숙주세포.
  21. 제19항에 있어서, 진핵세포, 바람직하게는 효모인 형질전환된 숙주세포.
  22. 제19항에 있어서, 포유동물 세포인 형질저환된 숙주세포.
  23. a. mRNA를 인간조직, 바람직하게는 태반조직으로부터 분리하고 폴리(A)+RNA를 제조하며,
    b.이 폴리(A)+RNA로부터 이중-본쇄 cDNA를 합성하고,이로부터 cDNA 유전자 뱅크를 작제하며,
    c. 언급된 cDNA 뱅크로부터 hMn-SOD를 암호화 하는 전체 또는 일부의 DNA 서열을 hMn-SOD의 아미노산 서열로부터 유도된 DNA 탐침, 바람직하게는 염기서열(Va) 및 (Vb)에 상응하는 탐침을 이용하여 동정하고 분리하며,
    d. 이 DNA 서열을 출발 또는 정지코돈까지 임의로 완성시키고.
    e. 바람직하게는 염기서열(X)에 상응하는 미토콘드리아 리더 또는 시그널 DNA 서열이 hMn-SOD 유전자의 출발코돈(ATG) 바로 뒤 및 hMn-SOD의 암호화 1번 코돈(Lys) 바로 앞에 위치케 하며,
    f. 리더 또는 시그널 펩타이드가 연결된, hMn-SOD를 암호화 하는 완전함 DNA 서열로 프로모터, 개시 시그널, 리더 또한 시그널 서열을 갖는 hMn-SOD 유전자, 정지코돈 및 터미네이터로 이루어진 적합한 발현카세트를 숙주 세포에 따라 작제하고,
    g. 이 발현카세트를 진핵세포에 적합한 발현플라스미드, 바람직하게는 효모 벡터내에 삽입시키며,
    h. 리더 또는 시그널 서열이 연결된 hMn-SOD 유전자를 포함하는 상기의발현 플라스미드르 사용하여 바람직하게는 진핵 숙주 세포, 특히 효모세포를 형질 전환시키고,
    I. 이 형질전환된 숙주에 의해 합성되고 정확히 프로쎄싱된 hMn-SOD를 미토콘트리아로부터 추출한 다음 정제함을 특징으로 하며, hMn-SOD를 제조하는 방법.
  24. 제 23항에 있어서, 사용되는 DNA 서열이 제1항 내지 8항에서 정의된 것인 방법.
  25. 제23항에 있어서, 사용되는 벡터 및 플라스미드가 제9항 내지 11항 및 제12항 내지 17항에서 정의된것인 방법.
  26. 제23항에 있어서, 사용되는 숙주세포가 제18항 내지 22항에서 정의된 것인 방법.
  27. 제23항 내지 26항중의 어느 한항에 있어서, 표준 hMn-SOD의 공지된 효소적, 생화학적 및 면역학적 성질을 갖는, 정확히 프로쎄싱된 hMn-SOD가 본 방법에 의해 직접 제조될 수 있는 방법.
  28. 제23항 내지 27항중의 어느 한항에 있어서, 아미노산 서열(IVa) 또는 (IVb)에 따른 아미노산 서열에 상응하는 정확히 프로쎄싱된 hMn-SOD가 본 방법에 의해 직접 제조될 수 있는 방법.
  29. hMn-SOD의 공지된 효소적, 생화학적 및 면역학적 성질을 갖는 실지리적으로 순수한 형태의 폴리펩타이드(아미노산 서열(IVa) 또는 (IVb)와 비교하여 29 위치에 Lys 및 42, 88, 109, 129 위치에 Gln 모두를 가지며, 124, 125 위치에 Gly 및 Trp를 함유하지 않는 폴리펩타이드는 제외함.)
  30. 천연 당화 되지 않았거나, 당화된 형태로 존지하는, hMn-SOD의 공지된 효소적, 생화학적 및 면역학적 성질을 갖는 폴리펩타이드.
  31. 제29항 또는 30항에 있어서, N-말단의 1번 아미노산 앞에 아미노산 메티오닌을 포함하는 폴리 펩타이드.
  32. 제29항 내지 31항중의 어느 한항에 있어서, hMn-SOD의 1번 아미노산(Lys) 앞에 위치하는 미토콘드리아 리더 펩타이드가 추가로 연결된 폴리 펩타이드.
  33. 제29항 내지 32항중의 어느 한항에 있어서, 정확히 프로쎄싱된 형태로 존재하는 폴리펩타이드.
  34. 제29항 내지 32항중의 어느 한항에 있어서, 염기 서열(IVa) 또는 (IVb)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
  35. 제34항에 있어서, 성체 hMn-SOD의 N-말단의 1본 아미노산 앞에 아미노산 메티오닌을 포함하는 폴리펩타이드.
  36. 제34항 또는 35항에 있어서, hMn-SOD의 1번 아미노산(라이신)과 출발코돈에 의해 암호화된 메티오닌 사이에 위치하는 미토콘드리아 리더 펩타이드를 포함하느 폴리펩타이드.
  37. 제23항 내지 28항중의 어느 한항에 따라 제조될 수 있는 폴리펩타디드.
  38. 약제를 제조하기 위한 제29항 내지 37항중의 어느 한항에 따른 폴리펩타이드의 용도.
  39. 제29항 내지 37항에 따른 폴리펩타이드의 유효량을 약제학적으로 불활성인 담체와 함께 함유하는 인간치료용 약제.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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