KR20220025704A - Kit- 및 pdgfra 매개성 질환을 치료하기 위한 피롤로트리아진 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 돌연변이 KIT 및 PDGFRα와 관련된 질환 및 병태를 치료하는데 유용하고, 유리하게 돌연변이 KIT 및 PDGFRα와 관련된 질환 및 병태를 치료하기 위한 비-뇌 침투제 프로파일을 제시하는 화학식 I의 화합물, 이의 약제학적 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 제공한다. 또한, 본 발명은 위창자 간질 종양 및 전신 비만세포증을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

KIT- 및 PDGFRA 매개성 질환을 치료하기 위한 피롤로트리아진 유도체

본 출원은 2019년 4월 12일에 제출된 미국 가출원 62/833,529; 2019년 10월 4일자로 제출된 미국 가출원 62/911,016; 및 2019년 11월 4일에 제출된 미국 가출원 62/930,240로부터의 우선권을 주장한다. 상기 언급된 출원 각각의 전문이 본원에 참고문헌으로 통합된다.

본 발명은 신규한 피롤로트리아진 화합물 및 활성화된 KIT 및 PDGFRα 돌연변이 단백질 키나제의 선택적 저해제로서의 이의 용도에 관한 것이다. 본원에 개시된 화합물은 예로 만성 장애의 치료를 위한 것과 같은 약제학적 조성물에 유용하다. KIT 수용체는 구조적으로 관련된 단백질 PDGFRα도 포함하는 클래스 Ⅲ 수용체 티로신 키나제 패밀리에 속한다. 일반적으로, 줄기세포 인자는 이량체화 및 자가인산화를 유도함으로써 KIT에 결합하고, 이를 활성화하며, 이는 하류 신호전달의 개시를 유도한다. 그러나, 여러 종양 유형에서 KIT의 체세포 활성화 돌연변이는 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 정액종 및 위창자 간질 종양과 같은 종양 유형을 포함하여 리간드 비의존성 구성발현적 종양원 활성을 촉발시킨다. 돌연변이 KIT는 비만세포 활성화에서 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있으며, 이는 보편적이고, 유지 관리에 필요할 수 있다. 비만세포 활성화의 장애는 비만세포가 병리학적으로 과생산될 때, 또는 이들의 활성화가 항상성에 대한 위협 인지에 비례하지 않는 경우 발생한다. 비만세포 활성화 증후군은 비만세포 매개인자 방출의 결과로서 일시적 다기관 증상을 나타내는 다양한 원인을 갖는 일군의 장애를 말한다. 비만세포증은 비만세포 활성화 증후군의 일 유형이다. 세계보건기구 (WHO)는 비만세포증을 7가지 카테고리, 피부 비만세포증, 무통성 전신 비만세포증 (ISM), 화상성 전신 비만세포증 (SSM), 관련 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신 비만세포증 (ASM), 비만세포 백혈병 (MCL) 및 비만세포 육종으로 분류하고 있다.

전신 비만세포증은 피부, 골수, 비장, 간, 위장관 및 기타 장기에서 종양성 비만세포의 국소 및/또는 확산 침윤물과 함께 비만세포 부하 증가 및 비만세포 매개인자의 방출 증가를 특징으로 하는 비만세포의 클론성 장애이다. SM은 5가지 아형의 비만세포증, 무통성 SM (ISM), 화상 SM (SSM), 비-MC 계열의 관련 혈액학적 신생물이 있는 SM (SM-AHN), 공격성 SM (ASM) 및 MC 백혈병 (MCL)을 포함한다. 후자의 3가지 하위분류는 전반적인 생존 감소와 관련이 있으며, 상급 SM (Adv SM)으로서 그룹화된다. ISM은 정상 또는 정상에 가까운 기대 수명과 관련된 만성 장애이며, SSM의 예후는 중급이다. ISM 및 SSM은 진행되지 않은 SM (비-Adv SM)으로서 다함께 그룹화된다.

SM의 모든 아형에서 및 질환에 걸린 대다수의 환자에서, 종양 비만세포는 KIT의 엑손 17번의 D816 위치에서 돌연변이를 나타내며, 이는 KIT 키나제 활성의 리간드와 무관한 활성화를 초래한다. 야생형 비만세포는 분화 및 생존을 위해 KIT 활성을 요구하므로, D816V 돌연변이를 통한 KIT의 구성발현적 활성화는 SM의 병원성 촉발인자로 생각된다. 구체적으로, KIT D816V 돌연변이는 SM에 걸린 환자의 90 내지 98%에서 발견되며, 희귀한 KIT D816Y, D816F 및 D816H 변이체가 확인된다. 이러한 연구를 기초로 하여, KIT D816V는 SM에서 주요 치료제 표적으로 고려된다.

만성 장애 무통성 SM 및 SSM은 가려움, 홍조, GI 경련, 설사, 아나필락시스, 뼈 통증 및 골다공증을 포함한 심각한 증상을 특징으로 한다. 이러한 증상은 삶의 질에 부정적인 영향을 미치면서, 심각하게 쇠약해질 수 있다. ISM 또는 SSM에 대해 승인된 요법은 여전히 없다. 따라서, ISM 또는 SSM을 표적으로 하는 새로운 치료법의 발견이 유용할 것이다.

돌연변이 KIT 및 PDGFRα 저해 활성을 갖는 피롤로트리아진 화합물은 국제특허출원 WO2015/057873에서 보고되었다. 구체적으로, N-알킬 피라졸을 보유하는 특정 화합물은 국제특허출원 WO2015/057873에 예시되어 있으며, 돌연변이 KIT 및 PDGFRα 저해 활성을 갖고, 예로 N-에틸 피라졸을 갖는 화합물 63이다. 국제특허출원 WO2015/057873에 예시된 이러한 N-알킬 피라졸 화합물의 화학적 구조는 본 발명의 화합물의 화학적 구조와 상이하다.

또한, 돌연변이 KIT 및 PDGFRα 저해 활성을 갖는 피롤로트리아진 화합물은 국제특허출원 WO2015/057873에 개시되어 있지만, 이들 화합물의 성질은 본 발명의 화합물의 성질과 매우 상이하다.

본 발명의 목적은 ISM 및 SSM과 같은 만성 질환, 뿐만 아니라 돌연변이 KIT 또는 PDGFRα에 의해 매개되는 기타 질환의 안전하고 효과적인 치료를 위해 돌연변이 KIT 및 PDGFRα 키나제에 대해 매우 선택적이고 강력한 활성을 갖는 신규한 화합물을 제공하는 것이다. 이러한 장애, 특히 ISM 및 SSM과 같은 만성 장애를 치료할 때, 새로운 요법이라면 내약성이 우수해야 한다. 구체적으로, 돌연변이 KIT 및 PDGFRα 키나제를 표적으로 하고, 다른 알려진 피롤로트리아진 화합물과 관련된 바람직하지 않은 CNS 부작용 수준이 감소된 새로운 화합물이 필요하다.

본 발명자들은 돌연변이 KIT 및 PDGFRα 키나제에 대해 높은 선택성 및 효능을 갖으면서, 동시에 예로 CNS 내로의 침투가 거의 또는 전혀 없음, 뇌에서 낮은 미결합 농도, 및 뇌 외부로 높은 수준의 또는 활발한 운반, 즉 CNS로부터의 높은 유출 비율과 같은 추가적인 바람직한 성질을 소유하는 신규한 화합물을 발견하였다. 이러한 특성의 바람직한 균형의 견지에서, 본 발명의 화합물은 구체적으로 말단의 치료, 특히 말단의 만성 치료에 적합한 반면, CNS에서 부작용을 감소시키거나 최소화한다.

따라서, 본 발명의 화합물은 KIT- 및 PDGFRA 매개성 질환의 치료를 위한 바람직한 효능, 안전성 및 약제학적 성질을 갖는 치료를 제공하는 것을 목적으로 한다. 보다 구체적으로, 본 발명의 화합물은 돌연변이 KIT 및 PDGFRα 저해 활성을 갖는 공지된 피롤로트리아진 화합물과 비교하여 효능 및 기타 바람직한 약제학적 성질을 유지하면서, 뇌 침투의 수준 감소를 포함하는 많은 유익한 성질을 나타낸다.

약어 및 정의

다음의 약어 및 용어는 전체에 걸쳐 표시된 의미를 갖는다.

용어 "KIT"는 비만/줄기 세포 성장인자 수용체 (SCFR), 전구-종양원유전자 c-KIT, 티로신 단백질 키나제 Kit 또는 CD117로서 지칭될 수 있는 인간 티로신 키나제를 말한다. 본원에 사용된 용어 "KIT 뉴클레오티드"는 KIT 유전자, KIT mRNA, KIT cDNA, 및 이들의 증폭 산물, 돌연변이, 변이 및 단편을 포함한다. "KIT 유전자"는 예로 서열이 기준 인간 게놈 hg19의 염색체 4번의 뉴클레오티드 55,524,085번 및 55,606,881번 사이에 위치하는 KIT 키나제 활성을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자를 말하는데 사용된다. "KIT 전사체"는 KIT 유전자의 전사 산물을 말하며, 하나의 예는 NCBI 기준 서열 NM_000222.2의 서열을 갖는다. 용어 "KIT 단백질"은 KIT 뉴클레오티드 또는 이의 일부의 번역에 의해 생성되는 폴리펩티드 서열을 말한다.

용어 "PDGFRA"는 혈소판 유래 성장인자 알파로 지칭될 수 있는 인간 티로신 키나제를 말한다. 본원에 사용된 용어 "PDGFRA 뉴클레오티드"는 PDGFRA 유전자, PDGFRA mRNA, KIT cDNA, 및 이들의 증폭 산물, 돌연변이, 변이 및 단편을 포함한다. "PDGFRA 유전자"는 예로 기준 호모 사피엔스 표기 공개 109, GRCh38.p12의 염색체 4번의 뉴클레오티드 54,229,089번 및 54,298,247번 사이에 서열이 위치한 PDGFRA 키나제 활성을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자를 말하는데 사용된다. "PDGFRA 전사체"는 PDGFRA 유전자의 전사 산물을 말하며, 이의 하나의 예는 NCBI 기준 서열 NM_006206.6의 서열을 갖는다. 용어 "PDGFRA 단백질" 또는 "PDGFRα"는 PDGFRA 뉴클레오타이드 또는 이의 일부의 번역에 의해 생성되는 폴리펩티드 서열을 말한다.

본원에 사용된 "악성 종양 질환"은 비정상적인 세포가 통제되지 않고 분열하여 주변 조직을 침범할 수 있는 질환을 말한다. 악성 종양 세포는 또한 혈액 또는 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 전파될 수 있다. 악성 종양 질환의 비-제한적인 예는 암종, 육종, 백혈병 및 림프종이다. 암은 악성 종양 질환의 비-제한적인 예이다. 일부 구현예에서, 전신 비만세포증은 악성 종양 질환의 비-제한적 예이다.

암의 비-제한적 예는 위창자 간질 종양 (GIST), AML (급성 골수성 백혈병), 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양 및 종격동 B 세포 림프종을 포함한다.

본원에 사용된 "호산구성 장애"는 호산구가 신체의 다양한 부분에서 정상보다 높은 양으로 발견되는 곳 및/또는 저밀도 대 정상 밀도 호산구의 비율이 정상보다 높을 때 (예로, 30% 초과) 장애를 말한다. 본원에 기술된 호산구성 장애는 호산구 과잉 (호산구 증가증)을 특징으로 한다. 호산구의 수 증가는 조직에 염증을 일으키고, 장기 손상을 유발한다. 심장, 폐, 피부 및 신경계가 가장 흔히 영향을 받지만, 모든 기관이 손상될 수 있다.

호산구성 장애는 호산구 수준이 상승한 위치에 따라 진단된다:

호산구성 폐렴 (폐)

호산구성 심근병증 (심장)

호산구성 식도염 (식도 - EoE)

호산구성 위염 (위 - EG)

호산구성 위창자염 (위 및 소장 - EGE)

호산구성 장염 (소장)

호산구성 대장염 (대장 - EC)

과호산구성 증후군 (혈액 및 임의의 장기 - HES).

본원에 사용된 용어 "대상체" 또는 "환자"는 본 발명의 방법에 의해 치료될 유기체를 말한다. 이러한 유기체는 포유동물 (예로, 마우스, 유인원, 말, 소, 돼지, 개 및 고양이 등), 및 일부 구현예에서 인간을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본원에 사용된 문구 "치료적 유효량"은 유익하거나 원하는 결과에 효과를 발휘하기에 충분한 활성 제제의 양을 말한다. 치료적 유효량은 1회 이상의 투여, 적용 또는 용량으로 투여될 수 있으며, 특정한 제형물 또는 투여 경로에 한정하도록 의도되지 않는다.

본원에 사용된 바, 특정한 화합물과 관련한 문구 "이의 약제학적으로허용가능한 염의 중량 당량"은 화합물 및 회합된 염의 중량을 모두 포함한다.

본원에 사용된 문구 "이의 약제학적으로 허용가능한 염"은 염 형태로 분포된 활성 제제와 관련하여 사용되는 경우 활성 제제의 임의의 약제학적으로 허용가능한 염 형태를 말한다.

본원에 사용된 용어 "치료하는"은 병태, 질환 및 장애 등의 개선을 유도하는 임의의 효과, 예를 들어 경감, 감소, 조절, 개선 또는 제거 또는 이의 증상을 개선하는 효과를 포함한다.

활성 제제가 단독으로 투여되는 것이 가능한 한편, 일부 구현예에서 활성 제제는 활성　제제가 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체와 조합되는 약제학적 제형물로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 활성 제제는 인간 또는 수의 의약에서 사용되는 임의의 편리한 방식으로 투여를 위해 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 약제학적 제조물에 포함된 화합물은 자체로 활성이 있을 수 있거나, 예로 생리학적 환경에서 활성 화합물로 전환될 수 있는 전구약물일 수 있다.

문구 "약제학적으로 허용가능한"은 본원에서 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없이 합리적인 유익/위험 비율에 상응하여, 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 용량 형태를 말하는데 사용된다.

본원에 사용된 "알킬"은 포화된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소의 1가 라디칼, 예컨대 C₁-C₁₂ 알킬, C₁-C₁₀ 알킬 및 C₁-C₆ 알킬로서 각각 본원에 지칭되는 1개 내지 12개, 1개 내지 10개 또는 1개 내지 6개의 탄소 원자의 직쇄 또는 분지쇄 기를 말한다. 예를 들어, C₁ 알킬은 메틸이다.

본원에 사용된 "할로"는 임의의 할로겐, 예로 -F, -Cl, -Br, 또는 -I의 라디칼을 말한다.

본원에 사용된 "할로알킬" 및 "할로알콕시"는 하나 이상의 할로 기 또는 이들의 조합으로 치환된 알킬 및 알콕시 구조를 말한다. 예를 들어, 용어 "플루오로알킬" 및 "플루오로알콕시"는 할로가 불소인 할로알킬 및 할로알콕시 기를 각각 포함한다. "할로알킬렌"은 하나 이상의 수소 원자가 할로로 대체된 2가 알킬, 예로

-CH₂-, -CH₂CH₂- 및 -CH₂CH₂CH₂-를 말하고, 모든 수소가 할로로 대체된 알킬 모이어티를 포함한다.

본원에 사용된 "시클로알킬"은 3개 내지 12개의 탄소를 갖는 고리상, 이중고리상 또는 다중고리상 비-방향족 탄화수소 기를 말한다. 임의의 치환가능한 고리 원자는 (예로, 하나 이상의 치환기에 의해) 치환될 수 있다. 시클로알킬기는 융합 또는 나선 고리를 포함할 수 있다. 융합 고리는 공통 탄소 원자를 공유하는 고리이다. 시클로알킬 모이어티의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 및 시클로헥실을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본원에 사용된 "헤테로시클릴"은 헤테로고리상 고리 시스템의 1가 라디칼을 말한다. 헤테로시클릴의 예는 모든 고리가 비-방향족이고, 적어도 하나의 고리가 헤테로원자를 포함하는 고리 시스템, 예로 옥세타닐, 테트라히드로퓨라닐 및 테트라히드로피라닐을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다.

본원에서 사용되는 각각의 표현, 예로 알킬, m, n 등의 정의는 임의의 구조에서 한번 이상 나올 때, 동일한 구조의 다른 곳에서의 정의와 독립적인 것으로 의도된다.

본 발명의 특정 화합물은 특정한 기하적 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 시스 - 및 트랜스- 이성질체, R- 및 S-광학이성질체, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 이들의 라세미 혼합물 및 이들의 기타 혼합물을 포함하는 이러한 모든 화합물을 본 발명의 범주에 속하는 것으로서 고려한다. 추가적인 비대칭 탄소 원자는 예로 알킬 기와 같은 치환기에 존재할 수 있다. 이러한 모든 이성질체, 뿐만 아니라 이들의 혼합물은 본 발명에 포함하도록 의도된다.

예를 들어, 본 발명의 화합물의 특정한 광학이성질체가 필요한 경우, 비대칭 합성에 의해, 또는 키랄 보조제를 사용한 유도체화에 의해 제조될 수 있으며, 여기서 생성된 부분입체 이성질체 혼합물은 분리되고, 보조기는 절단되어 순수한 원하는 입체 이성질체를 제공한다. 대안적으로, 분자가 예로 아미노와 같은 염기성 작용기, 또는 예로 카르복실과 같은 산성 작용기를 포함하는 곳에서, 부분입체 이성질체 염은 적절한 광학적 활성 산 또는 염기를 사용하여 형성되고, 이어서 당업계에 널리 공지된 분획 결정화 또는 크로마토그래피 수단에 의해 형성된 부분입체 이성질체의 분리 및 후속으로 순수한 광학이성질체의 회수가 진행된다.

달리 표시되지 않는 한, 개시된 화합물이 입체화학을 명시하지 않고, 구조에 의해 명명되거나 도시되며, 하나 이상의 키랄 중심을 갖을 때, 화합물의 모든 가능한 입체이성질체, 뿐만 아니라 이의 광학이성질체 혼합물을 나타내는 것으로 이해된다.

조성물의 "광학이성질체 과잉" 또는 "광학이성질체 과잉%"는 하기에 나타낸 공식을 사용하여 계산할 수 있다. 하기에 나타낸 예에서, 조성물은 90%의 하나의 광학이성질체, 예로 S 광학이성질체 및 10%의 다른 광학이성질체, 즉 R 광학이성질체를 함유한다.

ee = (90 - 10) / 100 = 80%.

따라서, 90%의 하나의 광학이성질체와 10%의 다른 광학이성질체를 함유하는 조성물은 80%의 광학이성질체 과잉을 갖는 것으로 한다.

본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 화합물의 하나의 형태, 예를 들어 S 광학이성질체의 적어도 50%, 75%, 90%, 95% 또는 99%의 광학이성질체 과잉을 함유할 수 있다. 다시 말하면, 이러한 화합물 또는 조성물은 R 광학이성질체와 비교하여 S 광학이성질체 의 광학이성질체 과잉을 포함한다.

또한, 본원에 기재된 화합물은 이러한 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에서 비-천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 방사성 동위원소, 예컨대 중수소(²H), 삼중수소 (³H), 탄소-13 (¹³C), 또는 탄소-14 (¹⁴C)로 방사성 표지될 수있다. 본원에 개시된 화합물의 모든 동위원소 변형은 방사성 여부와 상관 없이 본 발명의 범주 내에 포괄하도록 의도된다. 추가적으로, 본원에 기재된 화합물의 모든 호변체 형태는 본 발명의 범주 내인 것으로 의도된다.

본원에 개시된 화합물은 유리 염기의 형태로 또는 염으로서 유용할 수 있다. 대표적인 염은 브롬화수소산염, 염산염, 설페이트, 바이설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 아세테이트, 발레레이트, 올레이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레에이트, 퓨마레이트, 숙신에이트, 타르트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토비오네이트 및 라우릴설포네이트 염 등을 포함한다. (예로, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19 참조)

본원에 개시된 특정 화합물은 수화된 형태를 포함하는 용매화된 형태, 뿐만 아니라 비-용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "수화물" 또는 "수화된"은 모체 화합물과 물의 결합에 의해 형성된 화합물을 말한다.

일반적으로, 용매화된 형태는 비-용매화된 형태와 동등하며, 본 발명의 범주 내에 포괄된다. 본원에 개시된 특정 화합물은 다중 결정질 또는 무정형 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명에 의해 고려되는 용도에 대해 동등하고, 본 발명의 범주 내인 것으로 의도된다.

본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 약제학적으로허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 제공한다. 본 발명의 비-제한적인 구현예는 다음을 포함한다:

구현예 1. 화학식 I의 화합물

,

이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물:

식 중 A는

이고,

R₁은 수소 및 메틸로부터 선택되고;

R₂는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,

R₁ 및 R₂는 함께 시클로프로필을 형성하고;

R₃은 수소 및 메틸로부터 선택되고;

R₄는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,

R₃ 및 R₄는 함께 시클로프로필을 형성하고;

R₅는 수소 및 메틸로부터 선택되고;

R₆은 수소 및 메틸로부터 선택되거나,

R₅ 및 R₆은 함께 시클로프로필을 형성하거나,

R₂ 또는 R₄ 중 하나는 R₆와 함께 시클로부틸을 형성하고;

R₇은 수소이거나, R₂, R₄ 또는 R₆ 중 하나는 R₇과 함께 옥세탄, 테트라히드로퓨란 및 테트라히드로피란으로부터 선택된 고리를 형성하고, 상기 테트라히드로퓨란 또는 테트라히드로피란은 히드록실기로 선택적으로 치환되고;

m은 0 또는 1이고;

n은 0 또는 1이다.

구현예 1의 일부 구현예에서, m이 0일 때, R₁ 및 R₂는 존재하지 않는다. 구현예 1의 일부 구현예에서, n이 0일 때, R₃ 및 R₄는 존재하지 않는다. 구현예 1의 일부 구현예에서, m + n = 1 또는 m 및 n이 둘 다 0일 수 없다.

본 발명에서, 임의의 2개의 R 기 (예로, R₁ 및 R₂)가 함께 고리 구조 (예로, 시클로프로필)를 형성할 때, 개재하는 탄소 원자 및/또는 산소 원자를 동일한 고리 구조에 포함하도록 의도된다.

구현예 2. 구현예 1의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물:

식 중 A는

이고;

R₃은 수R₃은 수소 및 메틸로부터 선택되고;

R₄는 수소 및 메틸로부터 선택되거나, R₃ 및 R₄는 함께 시클로프로필을 형성하고;

R₅는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,

R₄ 및 R₆은 함께 시클로부틸을 형성하거나,

R₅ 및 R₆은 함께 시클로프로필을 형성하고;

R₇은 수소이다.

구현예 3. 구현예 2의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물:

식 중 A는

이고;

R₃은 수소 및 메틸로부터 선택되고;

R₄는 수소 및 메틸로부터 선택되거나, R₃ 및 R₄는 함께 시클로프로필을 형성하고;

R₅는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,

R₅ 및 R₆은 함께 시클로프로필을 형성하고;

R₇은 수소이다.

구현예 4. 구현예 1의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물:

식 중 A는

이고;

w는 1 또는 2이고;

t는 1 또는 2이고;

s는 0 또는 1이다.

구현예 5. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, K_p < 0.39를 갖는, 화합물.

구현예 5의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, K_p < 0.39를 갖는다. 구현예 5의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21 및 22로부터 선택된다.

구현예 6. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, K_p ≤ 0.20을 갖는, 화합물.

구현예 6의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, K_p ≤ 0.20을 갖는다. 구현예 6의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 3, 4, 5, 6, 9, 11, 13, 17, 18, 19, 20, 21 및 22로부터 선택된다.

구현예 7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트 뇌 균질화물에서 K_p,uu ≤ 0.2를 갖는, 화합물.

구현예 7의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트 뇌 균질화물에서 K_p,uu ≤ 0.2를 갖는다. 구현예 7의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 19, 20 및 22로부터 선택된다.

구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트 뇌 균질화물에서 K_p,uu < 0.1을 갖는, 화합물.

구현예 8의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트 뇌 균질화물에서 K_p,uu < 0.1을 갖는다. 구현예 8의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11, 12, 17, 18, 19, 20 및 22로부터 선택된다.

구현예 9. 구현예 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트 뇌 균질화물에서 K_p,uu ≤ 0.05를 갖는, 화합물.

구현예 9의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트 뇌 균질화물에서 K_p,uu ≤ 0.05를 갖는다. 구현예 9의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 3, 4, 5, 6, 9, 17, 19, 20 및 22로부터 선택된다.

구현예 10. 구현예 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트 뇌 절편에서 K_{p uu} ≤ 0.1을 갖는, 화합물.

구현예 10의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트 뇌 절편에서 K_p,uu ≤ 0.1을 갖는다. 구현예 10의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 21 및 22로부터 선택된다.

구현예 11. 구현예 1 내지 10 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트 뇌 절편에서 K_{p uu} ≤ 0.05를 갖는, 화합물.

구현예 11의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트 뇌 절편에서 K_p,uu ≤ 0.05를 갖는다. 구현예 11의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 20 및 22로부터 선택된다.

구현예 12. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트에서 < 900 mL/분/kg의 미결합 제거 (Cl_u)를 갖는, 화합물.

구현예 12의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트에서 < 900 mL/분/kg의 Cl_u를 갖는다. 구현예 12의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 3, 4, 7 및 9로부터 선택된다.

구현예 13. 구현예 1 내지 12 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 래트에서 < 750 mL/분/kg의 미결합 제거 (Cl_u)를 갖는, 화합물.

구현예 13의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 4에 기재된 절차에 따라 측정된 바, 래트에서 < 750 mL/분/kg의 Cl_u를 갖는다. 구현예 13의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 4, 7 및 9로부터 선택된다.

구현예 14. 구현예 1 내지 12 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, CYP3A4에 대한 < 10 mM의 IC₅₀을 갖는, 화합물.

구현예 14의 일부 구현예에서, 상기 화합물은 실시예 5에 기재된 절차에 따라 측정된 바, CYP3A4에 대한 < 10 mM의 IC₅₀을 갖는다. 구현예 14의 일부 구현예에서, 상기 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물은 화합물 4이다.

구현예 15. 구현예 1의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 15-1. 구현예 1의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 16. 구현예 1의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 16-1. 구현예 1의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 17. 구현예 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 18. 구현예 1 내지 3 또는 5 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 19. 구현예 1 내지 3 또는 5 및 6 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 20. 구현예 1 내지 3 또는 5 내지 7 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, A는

로부터 선택되는, 화합물.

구현예 21. 구현예 1 내지 13 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 화합물 4, 7 및 9로부터 선택되는, 화합물.

구현예 22. 구현예 1 내지 13 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 화합물 4 및 9로부터 선택되는, 화합물.

구현예 23. 구현예 1 내지 13 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 상기 화합물은

인, 화합물.

구현예 24. 구현예 1 내지 13 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 상기 화합물은

인, 화합물.

구현예 25. 구현예 1 내지 13 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 상기 화합물은

인, 화합물.

구현예 26. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물; 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.

구현예 27. 질환 또는 병태를 필요가 있는 환자에서 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증, 위창자 간질 종양, 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 어윙 육종, 확산성 거대 B 세포 림프종, 이상배아종, 골수이형성 증후군, 비강 NK/T 세포 림프종, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 뇌암으로부터 선택되는, 방법.

구현예 28. 돌연변이 KIT 또는 PDGFRα에 의해 매개된 질환 또는 병태를 필요가 있는 환자에서 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.

구현예 29. 구현예 28에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증, 위창자 간질 종양, 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 어윙 육종, 확산성 거대 B 세포 림프종, 이상배아종, 골수이형성 증후군, 비강 NK/T 세포 림프종, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 뇌암으로부터 선택되는, 방법.

구현예 30. 질환 또는 병태를 필요가 있는 환자에서 치료하는데 약제로서 사용되는, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증, 위창자 간질 종양, 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 어윙 육종, 확산성 거대 B 세포 림프종, 이상배아종, 골수이형성 증후군, 비강 NK/T 세포 림프종, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 뇌암으로부터 선택되는, 화합물.

구현예 31. 돌연변이 KIT 또는 PDGFRA에 의해 매개된 질환 또는 병태를 치료하는데 약제로서 사용되는, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 화합물.

구현예 32. 구현예 31에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증, 위창자 간질 종양, 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 어윙 육종, 확산성 거대 B 세포 림프종, 이상배아종, 골수이형성 증후군, 비강 NK/T 세포 림프종, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 뇌암으로부터 선택되는, 화합물.

구현예 33. 호산구성 장애를 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.

구현예 34. 구현예 33에 있어서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군, 호산구 증가증, 호산구성 위창자염, 호산구성 백혈병, 호산구성 육아종 및 키무라병으로부터 선택되는, 방법.

구현예 35. 구현예 33에 있어서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군인, 방법.

구현예 36. 구현예 33에 있어서, 호산구성 장애는 호산구성 백혈병인, 방법.

구현예 37. 구현예 36에 있어서, 호산구성 장애는 만성 호산구성 백혈병인, 방법.

구현예 38. 구현예 33 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 호산구성 장애는 이마티닙, 수니티닙 및/또는 레고라페닙으로의 치료에 대해 불응성인, 방법.

구현예 39. 호산구성 장애를 치료하는데 약제로서 사용되는, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물.

구현예 40. 구현예 39에 있어서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군, 호산구 증가증, 호산구성 위창자염, 호산구성 백혈병, 호산구성 육아종 및 키무라병으로부터 선택되는, 화합물.

구현예 41. 구현예 39에 있어서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군인, 화합물.

구현예 42. 구현예 39에 있어서, 호산구성 장애는 호산구성 백혈병인, 화합물.

구현예 43. 구현예 42에 있어서, 호산구성 장애는 만성 호산구성 백혈병인, 화합물.

구현예 44. 구현예 39 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 호산구성 장애는 이마티닙, 수니티닙 및/또는 레고라페닙으로의 치료에 대해 불응성인, 방법.

구현예 45. 비만세포 장애를 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.

구현예 46. 구현예 45에 있어서, 비만세포 장애는 돌연변이 KIT 또는 PDGFRα에 의해 매개되는, 방법.

구현예 46-1. 구현예 45에 있어서, 비만세포 장애는 야생형 KIT 또는 PDGFRα에 의해 매개되는, 방법.

구현예 47. 구현예 46에 있어서, 비만세포 장애가 비만세포 활성화 증후군 (MCAS) 및 유전성 알파 트립타제혈증 (HAT)으로부터 선택되는, 방법.

구현예 48. 구현예 47에 있어서, MCAS는 단일클론성 비만세포 활성화 증후군 (MMAS), 이차 MCAS 및 특발성 MCAS로부터 선택되는, 방법.

구현예 48-1. 구현예 27에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증인, 방법.

구현예 49. 구현예 48에 있어서, 전신 비만세포증은 무통성 전신 비만세포증 및 화상성 전신 비만세포증으로부터 선택되는, 방법.

표 1은 본원에 기술된 합성 방법에 의해 제조된 화합물을 열거한다.

본 발명의 화합물은 선택적인 KIT 저해제이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 선택적인 D816V KIT 저해제이다. 본 발명의 화합물은 선택적인 PDGFRα 저해제이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 선택적인 PDGFRα 엑손 18번 저해제이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 선택적 PDGFRα D842V 저해제이다. 본원에 사용된 "선택적 KIT 저해제" 또는 "선택적 PDGFRα 저해제"는 다른 단백질 키나제에 비해 KIT 단백질 키나제 또는 PDGFRα 단백질 키나제를 선택적으로 억제하고, 다른 키나제에 비해 KIT 단백질 키나제 또는 PDGFRα 단백질 키나제에 대해 적어도 2배의 선택도를 나타내는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 말한다. 예를 들어, 선택적 KIT 저해제 또는 선택적 PDGFRA 저해제는 다른 키나제에 비해 KIT 단백질 키나제 또는 PDGFRα 단백질 키나제에 대해 적어도 9배의 선택도, 10배의 선택도, 적어도 15배의 선택도, 적어도 20배의 선택도, 적어도 30배의 선택도, 적어도 40배의 선택도, 적어도 50배의 선택도, 적어도 60배의 선택도, 적어도 70배의 선택도, 적어도 80배의 선택도, 적어도 90배의 선택도, 적어도 100배의 선택도, 적어도 125배의 선택도, 적어도 150배의 선택도, 적어도 175배의 선택도 또는 적어도 200배의 선택도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 선택적 KIT 저해제 또는 선택적 PDGFRα 저해제는 또 다른 키나제, 예로 VEGFR2 (혈관 내피 성장인자 수용체 2), SRC (비-수용체 단백질 티로신 키나제) 및 FLT3 (Fms-유사 티로신 키나아제 3)에 비해 적어도 150배의 선택도을 나타낸다. 일부 구현예에서, 선택적 KIT 또는 선택적 PDGFRα 저해제는 PDGRFb, CSF1R (콜로니 자극인자 수용체 1) 및 FLT3에 비해 선택도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 선택적 KIT 또는 선택적 PDGFRα 저해제는 LCK (림프구 특이적 단백질 키나제), ABL (핵 단백질 티로신 키나제), NMA (체세포분열 제거 유전자 A) 관련 키나제 5 (NEK5) 및 ROCK1 (rho 관련 코일-코일 유지하는 단백질 키나제-1)에 비해 선택도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 다른 키나제에 비해 KIT 단백질 키나제 또는 PDGFRα 단백질 키나제의 선택도는 세포 검정법 (예로, 세포 검정법)으로 측정된다. 일부 구현예에서, 다른 키나제에 비해 KIT 단백질 키나제 또는 PDGFRα 단백질 키나제의 선택도는 생화학적 검정법 (예로, 생화학적 검정법)으로 측정된다.

본 발명의 화합물은 이온 통로에 대해 선택적이다. 일부 구현예에서, 선택적 KIT 또는 선택적 PDGFRα 저해제는 인간 전압-개폐 소듐 통로 (hNav 1.2)를 억제하는 제한된 잠재력을 갖는다.

본 발명의 화합물은 야생형 KIT에 비해 돌연변이 KIT에 대해 선택적이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 야생형 KIT에 비해 엑손 17번 돌연변이 KIT에 대해 선택적이다.

본 발명의 화합물은 인간 또는 비-인간에서 돌연변이 KIT 또는 돌연변이 PDGFRA 활성과 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 약제로서 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 요법에 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 약제의 제조에 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 비만세포증 (SM), GIST (위창자 간질 종양), AML (급성 골수성 백혈병), 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양 및/또는 종격동 B 세포 림프종을 포함하는 KIT 유도성 악성 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 추가적으로, KIT의 돌연변이는 어윙 육종, DLBCL (확산성 거대 B 세포 림프종), 배아세포 이상종, MDS (골수이형성 증후군), NKTCL (비강 NK/T 세포 림프종), CMML (만성 골수단핵구성 백혈병) 및 뇌암과 관련되어 왔다. 일부 구현예에서, 본 발명은 어윙 육종, DLBCL, 배아세포 이상종, MDS, NKTCL, CMML 및/또는 뇌암을 치료하는 방법을 제공한다. 또한, KIT 돌연변이는 갑상샘암, 결장직장암, 자궁내막암, 방광암, NSCLC 및 유방암에서 발견되었다 (AACR 프로젝트 GENIE). 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 비만세포 활성화 증후군 (MCAS)을 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 전신 비만세포증을 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 상급 전신 비만세포증을 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 무통성 SM 및 화상성 SM을 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 GIST를 치료하는데 유용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 KIT 유전자 서열의 엑손 9번, 엑손 11번, 엑손 14번, 엑손 17번 및/또는 엑손 18번의 KIT 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 PDGFRA 유전자 서열의 엑손 12번, 엑손 14번 및/또는 엑손 18번의 PDGFRA 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서는 KIT 유전자 서열의 엑손 9번, 엑손 11번, 엑손 14번, 엑손 17번 및/또는 엑손 18번에서 적어도 하나의 KIT 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에서는 PDGFRA 유전자 서열의 엑손 12번, 엑손 14번 및/또는 엑손 18번에서 적어도 하나의 PDGFRA 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 KIT 유전자 서열의 엑손 17번에 돌연변이가 있는 하나 이상의 KIT 단백질 키나제에 대해 활성적이고 (예로, KIT 단백질 돌연변이D816V, D816Y, D816F, D816K, D816H, D816A, D816G, D816E, D816I, D816F, D820A, D820E, D820G, D820Y, N822K, N822H, V560G, Y823D 및 A829P), 야생형 KIT 단백질 키나제에 대해 훨씬 덜 활성적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서는 적어도 하나의 KIT 돌연변이, 예컨대 D816V, D816Y, D816F, D816K, D816H, D816A, D816G, D816E, D816I, D816F, D820A, D820E, D820G, D820Y, N822K, N822H, V560G, Y823D 및 A829P로부터 선택된 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에서는 적어도 하나의 KIT 돌연변이, 예컨대 C809, C809G, D816H, D820A, D820G, N822H, N822K 및 Y823D로부터 선택된 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 KIT 유전자 서열의 엑손 11번에 돌연변이가 있는 하나 이상의 KIT 단백질 키나제에 대해 활성적일 수 있다 (예로, KIT 단백질 돌연변이del557-559insF, V559G/D). 일부 구현예에서, 본원에서는 적어도 하나의 KIT 돌연변이, 예컨대 L576P, V559D, V560D, V560G, W557G, Del 554-558EVQWK, del557-559insF, Del EVQWK554-558, Del EVQWKVVEEINGNNYVYI554-571, Del KPMYEVQWK550-558, Del KPMYEVQW550-557FL, Del KV558-559, Del KV558-559N, Del MYEVQW552-557, Del PMYE551-554, Del VV559-560, Del WKVVE557-561, Del WK557-558, Del WKVV557-560C, Del WKVV557-560F, DelYEVQWK553-558 및 삽입 K558NP로부터 선택된 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 KIT 유전자 서열의 엑손 11번/13번에 돌연변이가 있는 하나 이상의 KIT 단백질 키나제에 대해 활성적일 수 있다 (예로, KIT 단백질 돌연변이V559D/V654A, V560G/D816V 및 V560G/822K). 일부 구현예에서, 본원에서는 엑손 11번/13번에서 하나 이상의 KIT 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 KIT 유전자 서열의 엑손 9번에 돌연변이가 있는 하나 이상의 KIT 단백질 키나제에 대해 활성적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서는 엑손 9번에서 하나 이상의 KIT 돌연변이와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 돌연변이 V654A, N655T, T670I 및/또는 N680이 있는 KIT 단백질 키나제에 대해 활성적이지 않다.

본 발명의 화합물은 돌연변이가 있는 하나 이상의 PDGFRα 단백질 키나제에 대해 활성적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서는 PDGFRA 유전자 서열의 엑손 12번에서 적어도 하나의 PDGFRA 돌연변이, 예컨대 PDGFRα 단백질 돌연변이 V561D, Del RV560-561, Del RVIES560-564, Ins ER561-562, SPDGHE566-571R, SPDGHE566-571K 또는 Ins YDSRW582-586와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에서는 PDGFRA 유전자 서열의 엑손 14번에서 적어도 하나의 PDGFRA 돌연변이, 예컨대 PDGFRa 단백질 돌연변이 N659K와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에서는 PDGFRA 유전자 서열의 엑손 18번에서 적어도 하나의 PDGFRA 돌연변이, 예컨대 PDGFRα 단백질 돌연변이 D842V, D842Y, D842I, DI842-843IM, D846Y, Y849C, Del D842, Del I843, Del RD841-842, Del DIM842-845, Del DIMH842-845, Del IMHD843-846, Del MHDS844-847, RD841-842KI, DIMH842-845A, DIMH842-845V, DIMHD842-846E, DIMHD842-846S, DIMHD842-846N, DIMHD842-846G, IMHDS843-847T, IMHDS8843-847M 또는 HDSN845-848P와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 PDGFRA 유전자 서열의 엑손 18번에서 돌연변이 (예로, 단백질 돌연변이 PDGFRα D842V, PDGFRα D842I 또는 PDGFRα D842Y)가 있는 하나 이상의 PDGFRα 단백질 키나제에 대해 활성적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서는 엑손 18번에서 적어도 하나의 PDGFRA 돌연변이, 예컨대 단백질 돌연변이 PDGFRα D842V와 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물은 호산구성 장애를 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 호산구성 장애는 돌연변이 KIT 또는 PDGFRα에 의해 매개된다. 일부 구현예에서, 호산구성 장애는 야생형 KIT 또는 PDGFRα에 의해 매개된다. 일부 구현예에서, 본원에서는 호산구성 장애를 치료하는 방법으로서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군, 호산구 증가증, 호산구성 위창자염, 호산구성 백혈병, 호산구성 육아종 및 키무라병으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군, 호산구성, 호산구성 장위염, 호산구성 백혈병, 호산구성 육아종 및 키무라병으로부터 선택된다. 기타 호산구성 장애는 호산구성 식도염, 호산구성 위창자염, 호산구성 근막염 및 처그-스트라우스 증후군을 포함한다.

일 구현예에서, 호산구성 장애는 과호산구성 증후군이다. 상세한 구현예에서, 과호산구성 증후군은 특발성 과호산구성 증후군이다. 일 구현예에서, 호산구성 장애는 호산구성 백혈병이다. 상세한 구현예에서, 호산구성 백혈병은 만성 호산구성 백혈병이다. 또 다른 구현예에서, 호산구성 장애는 이마티닙, 수니티닙 및/또는 레고라페닙으로의 치료에 대해 불응성이다. 상세한 구현예에서, 호산구성 장애는 이마티닙으로의 치료에 대해 불응성이다.

본 발명의 화합물은 이를 필요로 하는 대상체에서 호산구의 수를 감소시키는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서는 이를 필요로 하는 대상체에서 호산구의 수를 감소시키는 방법으로서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법이 제공된다.

일 구현예에서, 개시된 방법은 혈액, 골수, 위장관 (예로, 식도, 위, 소장 및 결장) 또는 폐에서 호산구의 수를 감소시킨다. 또 다른 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 혈액 호산구의 수를 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 폐 호산구의 수를 감소시킨다. 또 다른 추가의 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 호산구 전구체 세포의 수를 감소시킨다.

또 다른 구현예에서, 개시된 방법은 호산구의 수를 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%로 (투여 이후) 감소시킨다. 상세한 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 검출 한계 미만으로 호산구의 수를 감소시킨다.

또 다른 구현예에서, 개시된 방법은 호산구 전구체의 수를 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%로 (투여 이후) 감소시킨다. 상세한 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 검출 한계 미만으로 호산구 전구체의 수를 감소시킨다.

본 발명의 화합물은 비만세포 장애를 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 비만세포증을 치료하는데 유용할 수 있다. 비만세포증은 두 가지 장애군으로 다시 구분된다: (1) 피부 비만세포증 (CM)은 피부에 국한된 형태를 설명하고; (2) 전신 비만세포증 (SM)은 비만세포가 피부 침범 여부와 관계없이 피부외 장기에 침윤하는 형태를 설명한다. SM은 5가지 형태, 무통성 (ISM); 화상성 (SSM); 공격성(ASM); 관련 혈액학적 비-비만세포 계열 질환을 갖는 SM (SM-AHNMD); 및 비만세포 백혈병(MCL)로 다시 세분화된다.

SM의 진단은 부분적으로 비-비만세포 마커 (CD25 및/또는 CD2)를 빈번하게 비정상적으로 발현하는 자주 비정형 형태의 비만세포에 의한 침윤을 나타내는 골수의 조직학적 및 세포학적 연구를 기초로 한다. SM의 진단은 골수 비만세포 침윤이 다음 중 하나와 관련하여 발생할 때 검증된다: (1) 비정상적인 비만세포 형태 (방추형 세포); (2) 20 ng/ｍＬ을 초과하는 혈청 트립타제의 수준 상승; 또는 (3) 활성화 KIT 단백질 돌연변이, 예컨대 D816V와 같은 D816 돌연변이와 같은 엑손 17번 돌연변이의 존재.

D816 위치의 활성화 돌연변이는 대부분의 비만세포증 (90% 내지 98%)에서 발견되며, 가장 공통적인 돌연변이는 D816V, D816H 및 D816Y이다. D816V 돌연변이는 단백질 키나제 도메인의 활성화 루프에서 발견되며, KIT 키나제의 구성발현적 활성화를 유도한다.

전신 비만세포증, ISM 또는 SSM의 진행되지 않은 형태에 대해 승인된 약물은 없다. 이러한 만성 질환의 관리에 대한 현재 접근법은 다양한 정도의 효능을 갖고, MC 부하에 영향을 미치지 않는 비-특이적 증상 지향적 요법을 포함한다. 클라드리빈 및 인터페론 알파와 같은 세포감소 요법은 때로 난치성 증상에 사용된다. 현재의 치료 환경에 기초하여, 이용가능한 증상 지향적 요법으로 적절하게 관리할 수 없는 중등도 내지 중증 증상이 있는 ISM 및 SSM 환자에서 충족되지 않은 의학적 요구가 남아 있다.

본 발명의 화합물은 ISM 또는 SSM을 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, ISM 또는 SSM에 걸린 환자는 대증 치료에 의해 부적절하게 조절되는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개의 증상을 갖는다. 증상은 환자 보고 결과 (PRO) 도구, 예로 무통성 전신 비만세포증 - 증상 평가 형식(ISM-SAF) (ISPOR 유럽 2019, 덴마크 코펜하겐, 2019년 11월 2-6일)을 사용하여 평가할 수 있다. 본 발명의 화합물은 ISM 또는 SSM과 관련된 증상을 개선하는데, 예로 가려움, 홍조, 두통 및/또는 GI 사건, 예컨대 구토, 설사 및 복통을 감소 또는 제거하는데 유용할 수 있다. ISM-SAF를 사용하여 증상의 개선을 평가할 수 있다.

본 발명의 화합물은 기타 비만세포 장애, 예컨대 비만세포 활성화 증후군 (MCAS) 및 유전성 알파 트립타제혈증 (HAT)을 치료하는데 유용할 수 있다 (Picard Clin. Ther. 2013, May 35(5): 548; Akin J.Allergy Clin. Immuno. 140(2): 349-62). 본 발명의 화합물은 KIT 및 PDGFRα 돌연변이와 관련된 비만세포 장애를 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 야생형 KIT 및 PDGFRα와 관련된 비만세포 질환을 치료하는데 유용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 비만세포가 화학적 매개인자를 부적절하고 과도하게 방출하여 때로 아나필락시스 또는 아나필락시스에 가까운 발작을 포함하는 다양한 만성 증상을 유발하는 면역학적 병태인 비만세포 활성화 증후군 (MCAS)을 치료하는데 유용할 수 있다. 환자의 비만세포 수가 비정상적으로 증가하는 비만세포증과 달리, MCAS에 걸린 환자는 제대로 기능하지 않고, "과민 반응"으로 정의되는 비만세포의 정상적인 수를 갖는다. MCAS의 유형은 원발성 MCAS (단일클론성 비만세포 활성화 증후군 (MMAS)), 이차 MCAS (또 다른 질환으로부터 발생하는 MCAS) 및 특발성 MCAS (원발성 또는 이차 MCAS를 제외한 MCAS)를 포함한다.

본 발명의 화합물은 유전성 알파 트립타제혈증 (HAT) (트립타제 상승을 유발하는 TPSAB1의 과발현)을 치료하는데 유용할 수 있다.

기타 비만세포 질환은 비만세포 매개성 천식, 아나필락시스 (특발성, Ig-E 및 비-Ig-E 매개성을 포함함), 두드러기(특발성 및 만성 포함), 아토피성 피부염, 부종 (혈관부종), 과민성 대장 증후군, 비만세포 위창자염, 비만세포성 장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전으로 인한 소양증 및 비만세포와 관련된 심장, 혈관, 창자, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 뼈 및 피부 병태를 포함한다. 일부 구현예에서, 비만세포 질환은 돌연변이 KIT 또는 돌연변이 PDGFRα와 관련되지 않는다.

KIT 및 PDGFRA 돌연변이는 GIST에서 활발하게 연구되어 왔다. 본 발명의 화합물은 KIT 돌연변이와 관련된 GIST를 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 절제불가능 또는 전이성 GIST를 치료하는데 유용할 수 있다. 전이성 GIST의 거의 80%는 KIT 유전자 서열의 세포외 영역 (엑손 9번) 또는 막인접 (JM) 도메인(엑손 11번)에서 일차 활성화 돌연변이를 갖는다. 많은 돌연변이 KIT 종양은 BCR-ABL, KIT 및 PDGFRA 단백질을 특이적으로 억제하는 선택적 티로신 키나제 저해제인 이마티닙과 같은 표적화 요법으로의 치료에 반응한다. 그러나, 대부분의 GIST 환자는 이마티닙의 결합 친화도를 현저하게 감소시키는 KIT의 이차 돌연변이로 인해 결국 재발한다. 이러한 저항성 돌연변이는 변함없이 키나제 유전자의 아데노신 5-트리포스페이트 (ATP) 결합 포켓 (엑손 13번 및 14번) 또는 활성화 루프 (엑손 17번 및 18번) 내에서 발생한다. 현재까지 GIST에 대한 승인된 약제 중 선택적인 표적화 제제는 없다. 이마티닙은 현재 GIST의 치료에 대해 승인되어 있으며, 멀티키나제 저해제가 이마티닙에 이어서 사용된다. 많은 경우에, 이러한 멀티키나제 저해제, 예컨대, 수니티닙, 레고라페닙 및 미도스타우린은 이마티닙 저항성 돌연변이체를 단지 약하게 억제하고/거나, 멀티키나제 저해제는 보다 복잡한 안전성 프로파일 및 좁은 치료 범위에 의해 제한된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 이마티닙으로 치료되었던 환자에서 GIST를 치료하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 1차 (1L), 2차 (2L), 3차 (3L) 또는 4차 (4L) 요법으로서 GIST를 치료하는데 유용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 KIT에서 특정한 돌연변이가 부재 또는 존재할 때 GIST를 치료하는데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 KIT의 특정한 돌연변이가 부재할 때 GIST를 치료할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 화합물은 KIT의 특정한 돌연변이가 존재할 때 GIST를 치료할 수 없다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 KIT ATP 결합 포켓 돌연변이 (KIT 단백질 돌연변이 V654A, N655T 및/또는 T670I)를 보유하는 환자에서 임상적 이점을 제공하지 않는다.

본 발명의 화합물은 PDGFRA 돌연변이와 관련된 GIST를 치료하는 데 유용할 수 있다. 절제불가능한 전이성 GIST 환자의 5% 내지 6%에서는, PDGFRA 유전자 서열의 엑손 18번의 단백질 아미노산 842번에서 활성화 루프 돌연변이가 일차 돌연변이로서 발생한다.

또한, 본 발명의 화합물은 AML을 치료하는데 유용할 수 있다. 또한, AML 환자는 KIT 돌연변이를 갖고 있으며, 이러한 돌연변이의 대부분은 KIT 단백질의 D816 위치에 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 약제학적 제형물로서 투여되고, 상기 화합물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체와 조합된다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에서는 화학식 I의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로부터 선택되는 적어도 하나의 실체를 포함하고, 선택적으로 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 조성물이 개시된다.

본 발명의 화합물은 인간 또는 수의 의약에 사용하기 위한 임의의 편리한 방식으로 투여를 위해 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물에 포함된 화합물은 자체로 활성이 있을 수 있거나, 예로 생리학적 환경에서 활성 화합물로 전환될 수 있는 전구약물일 수 있다.

문구 "약제학적으로 허용가능한"은 본원에서 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없이 합리적인 유익/위험 비율에 상응하여, 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 용량 형태를 말하는데 사용된다.

약제학적으로 허용가능한 담체의 예는 (1) 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스 및 이의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 트라가칸트 분말; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 탈크; (8) 부형제, 예컨대 코코아버터 및 좌약 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 무균 물; (17) 등장 식염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알코올; (20) 포스페이트 완충 용액; (21) 시클로덱스트린, 예컨대 캡티졸®; 및 (22) 약제학적 제형물에 사용되는 기타 무독성 호환가능한 물질을 포함한다.

약제학적으로 허용가능한 항산화제의 예는 (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 염산염, 소듐 바이설페이트, 소듐바이설파이트 및 소듐 설파이트 등; (2) 지용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트 및 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이틴제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산 및 인산 등을 포함한다.

고체 용량 형태 (예로, 캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말 및 과립 등)는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 예컨대 소듐 시트레이트 또는 이칼슘 포스페이트 및/또는 임의의 하기의 것을 포함할 수 있다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 슈크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 슈크로스 및/또는 아카시아; (3) 보습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨; (5) 용액 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 가속제, 예컨데 4차 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예컨대 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 설페이트 및 이들의 혼합물; 및 (10) 착색제.

액체 용량 형태는 약제학적으로 허용가능한 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함할 수 있다. 활성 성분에 추가하여, 액체 용량 형태는 물 또는 기타 용매, 가용화제 및 유화제와 같은 당업계에 보편적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (예를 들어, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유 및 참기름), 글리세롤, 테트라히드로퓨릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

현탁액은 활성 화합물에 추가하여 현탁제, 예컨대 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메타수산화물, 벤토나이트, 한천, 트라가칸트 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.

연고, 페이스트, 크림 및 젤은 활성 화합물에 추가하여 예로 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탈크, 산화아연, 또는 이들의 혼합물과 같은 부형제를 함유할 수 있다.

분말 및 스프레이는 활성 화합물에 추가하여, 예로 락토스, 탈크, 규산, 수산화알루미늄, 칼슘 실리케이트 및 폴리아미드 분말, 또는 이러한 물질의 혼합물과 같은 부형제를 함유할 수 있다. 스프레이는 추가적으로, 예로 클로로플루오로탄화수소 및 부탄 및 프로판과 같은 휘발성 치환되지 않은 탄화수소와 같은 통상적인 추진제를 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여를 위한 용량 형태의 비-제한적인 예는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에 약제학적으로 허용가능한 담체 및 필요할 수 있는 임의의 방부제, 완충액 또는 추진제와 혼합될 수 있다.

본 발명의 화합물이 인간 및 동물에게 약제로서 투여될 때, 화합물은 자체로 또는 예를 들어 0.1% 내지 99.5% (예컨대, 0.5% 내지 90%)의 활성 성분을 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 함유하는 약제학적 조성물로서 제공될 수 있다.

제형물은 국소, 경구, 경피, 직장, 질, 비경구, 비강내, 폐내, 안내, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 피막내, 피부내, 복강내, 피하, 각질하 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다.

추가적으로, 본 발명의 화합물은 단독으로 또는 기타 KIT- 또는 PDGFRα 조절하는 화합물 또는 기타 치료제를 포함한 다른 화합물과 조합하여 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 리프레티닙과 조합하여 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 본원에 개시된 질환 또는 상태를 치료하기 위해 이마티닙, 수니티닙, 레고라페닙, 카보잔티닙, 크레놀라닙, 미도스타우린, 브렌툭시맙 베도틴 및 마스티티닙으로부터 선택된 하나 이상의 화합물과 조합하여 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또 다른 화합물 또는 화합물들로 사전 치료를 받은 적이 있는 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 1차 (1L), 2차 (2L), 3차 (3L) 또는 4차 (4L) 요법으로서 유용할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 이마티닙으로의 사전 치료 후에 투여된다.

본 발명의 화합물은 미도스타우린으로의 사전 치료를 받은 적이 없는 환자에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 미도스타우린으로의 사전 치료를 받은 적이 있는 환자에게 투여될 수 있다.

실시예

일반 합성 방법 및 중간물

정의

C 섭씨

Cs₂CO₃ 세슘 카보네이트

DCM 디클로로메탄

DIPEA 디이소프로필아민

DMF 디메틸 포름아미드

DMSO 디메틸설폭사이드

EA 에틸 아세테이트

EDCI 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드

시간 시간

H₂ 수소 가스

H₂O 물

HCl 염산

HOAc 아세트산

HOBT 히드록시벤조트리아졸

HPLC 고성능 액체 크로마토 그래피

IC₅₀ 저해 농도 50%

IPA 이소프로필 알코올

K₂CO₃ 포타슘 카보네이트

KOAc 포타슘 아세테이트

LCMS 액체 크로마토그래피 질량 분광광도법

LiAlH₄ 리튬 알루미늄 수소화물

분 분

MsCl 메실 염화물

MTBE 메틸 터르-부틸 에테르

MeOH 메탄올

N₂ 질소 가스

NaOH 수산화나트륨

Na₂SO₄ 소듐 설페이트

NH₄HCO₃ 암모늄 포르메이트

NMP N-메틸피롤리디논

PD/C 탄소 상의 팔라듐

Pd(dppf)Cl₂ [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(Ⅱ)

PE 석유 에테르

RT 실온

TEA 트리에틸아민

THF 테트라히드로퓨란

TsCl 토실 염화물

본 발명의 화합물의 제조 방법은 유기 합성 분야의 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있는 적합한 용매 중에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 반응이 수행되는 온도, 예를 들어 용매의 동결 온도 내지 용매의 비등 온도 범위일 수 있는 온도에서 출발 물질 (반응물), 중간물 또는 생성물과 실질적으로 반응하지 않을 수 있다. 주어진 반응은 하나의 용매 또는 하나 이상의 용매의 혼합물에서 수행될 수 있다. 구체적인 반응 단계에 따라, 특정 반응 단계에 적합한 용매는 당업자에 의해 선택될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조는 다양한 화학기의 보호 및 탈보호가 관여할 수 있다. 보호 및 탈보호의 필요성 및 적절한 보호기의 선택은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 보호기의 화학은 예를 들어 Wuts and Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 제 5판, John Wiley & Sons: New Jersey, (2014)에서 찾아볼 수 있으며, 이의 전문이 본원에 참고문헌으로 통합된다.

반응은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 생성물 형성은 핵자기 공명 (NMR) 분광분석법 (예로, ¹H 또는 ¹³C), 적외선(IR) 분광분석법, 분광광도법 (예로, UV-가시광선), 질량 분광분석법(MS)과 같은 분광 수단에 의해, 또는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 또는 박층 크로마토그래피 (TLC)와 같은 크로마토그래피 방법에 의해 모니터링될 수 있다.

화합물 특성화를 위한 분석 기기 및 방법:

LC-MS: 달리 명시되지 않는 한, 모든 액체 크로마토그래피-질량 분광분석법 (LC-MS) 데이터 (순도 및 동일성에 대해 분석된 시료)는 22.4℃에서 애질런트 포로쉘 120 (EC-C18, 2.7 μm 입자 크기, 3.0 × 50 mm 치수) 역상 컬럼이 장착된 ES-API 이온화를 이용하는 애질런트 모델 6120 질량 분광분석기를 사용하여 애질런트 모델 1260 LC 시스템으로 획득되었다. 이동상은 H₂O 중 용매 0.1% 포름산 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산의 혼합물로 구성되었다. 95% 수용성/5% 유기 이동상부터 5% 수용성/95% 유기 이동상으로 일정한 구배를 4분 과정 동안 사용하였다. 유속은 1 mL/분으로 일정하였다.

제조용 LC-MS: 제조용 HPLC는 Luna 5μ C18(2) 100A, AXIA 패킹, 250 × 21.2 mm 역상 컬럼이 장착된 쉬마주 디스커버리 VP® 제조용 시스템 상에서 22.4℃로 수행하였다. 이동상은 H₂O 중 용매 0.1% 포름산 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산의 혼합물로 구성되었다. 95% 수용성/5% 유기 이동상부터 5% 수용성/95% 유기 이동상으로 일정한 구배를 25분 과정 동안 사용하였다. 유속은 20 mL/분으로 일정하였다. 전자레인지에서 수행된 반응은 바이오타지 개시제 전자레인지 유닛에서 수행하였다.

실리카겔 크로마토그래피: 실리카겔 크로마토그래피는 텔레다인 이스코 콤비플래쉬® Rf 장치 또는 바이오타지® 이솔레라 포 유닛에서 수행되었다.

양성자 NMR: 달리 명시되지 않는 한, 모든 ¹H NMR 스펙트럼은 배리언 400MHz 유니티 이노바 400MHz NMR 기기로 획득하였다 (획득 시간 = 3.5초, 1초 지연, 16회 내지 64회 스캔). 특성화되어 있는 경우, 모든 양성자는 DMSO-d6 용매에서 잔류 DMSO (2.50 ppm)와 관련하여 백만분율 (ppm)로 보고하였다.

당업자라면 구배, 컬럼 길이 및 유속의 변경이 가능하고, 일부 조건은 분석되는 화학종에 따라 다른 조건보다 화합물 특성화에 더 적합할 수 있음을 인식할 것이다.

실시예 1: 합성적 제조

중간물의 제조

제조 1: (S)-1-(2-(4-(6-브로모피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-1-(4-플루오로페닐)에탄-1-아민 (I-1)

단계 1: 에틸 2-(4-(터르-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)피리미딘-5-카르복실레이트 (ii)의 합성: 디옥산 (80 mL) 중 터르-부틸 피페라진-1-카르복실레이트(i) (10.0 g, 53.7 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (23.4 mL, 134.25 mmol)의 용액에 에틸 2-클로로피리미딘-5-카르복실레이트 (10 g, 53.7 mmoL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료된 것을 보여주었다. 반응 혼합물을 농축하여 표제 화합물 (ii) (17 g, 미정제)을 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ES+) C₁₆H₂₄N₄O₄는 관찰값 336을 요구하고, 측정값 237, 281 [M -56+H]⁺이다.

단계 2: 2-(4-(터르-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)피리미딘-5-카르복실산 (iii)의 합성: THF/MeOH/H₂ O (300 mL) 중 에틸 2-(4-(터르-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)피리미딘-5-카르복실레이트 (ii) (17 g, 미정제)의 용액에 수산화나트륨 (4.3 g, 107.5 mmol)을 첨가하고, 반응을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료된 것을 보여주었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 1 M HCl을 사용하여 pH ≒ 5 내지 6으로 산성화하여 여과하였다. 고체를 수집하고 건조하여 표제 화합물 (iii)(16 g, 96%)을 백색 고체로서 얻었고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS (ES+) C₁₄H₂₀N₄O₄는 관찰값 308, 측정값 253 [M 56+H]⁺을 요구한다.

단계 3: 터르-부틸 4-(5-(메톡시(메틸)카르바모일)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (iv)의 합성: DCM (200 mL) 중 2-(4-(터르-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)피리미딘-5-카르복실산 (iii)(13.8 g, 44.8 mmol), EDCI (12.8 g, 67.2 mmol) 및 HOBT (7.2 g, 53.7 mmol)의 현탁액에 TEA (25 mL, 179.2 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, N,O-디메틸히드록실아민 (5 g, 53.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료된 것을 보여주었다. 반응 혼합물을 H₂O (100 mL)로 세척하고 유기층을 건조시키고, 여과하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)로 정제하여 표제 화합물(iv)(11.2 g, 67%)을 백색 고체로 얻었다. MS (ES+) C₁₆H₂₅N₅O₄는 관찰값 351, 측정값 296 [M -56+ H]⁺을 요구한다.

단계 4: 터르-부틸 4-(5-(4-플루오로벤조일)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(v)의 합성: 건조 THF (50 mL) 중 터르-부틸 4-(5-(메톡시(메틸)카르바모일)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (iv) (7.8 g, 22.22 mmol)의 용액에 C₆H₅MgFBr (THF 중 1 M, 50 mL)를 0℃에서 질소 하에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료된 것을 보여주었다. 반응 혼합물을 1 M HCl로 켄칭하고, EA로 추출하였다. 합친 유기층을 H₂O 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르:EA = 5:1)로 정제하여 표제 화합물(v)(7.2 g, 84%)을 황색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₂₀H₂₃FN₄O₃는 관찰값 386, 측정값 331 [M- 56 + H]⁺을 요구한다.

단계 5: 터르-부틸 (S,Z)-4-(5-(((터르-부틸설피닐)이미노)(4-플루오로페닐)메틸)-피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (vi)의 합성: 터르-부틸 4-(5-(4-플루오로벤조일)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (v) (20.0 g, 1.0 당량), (S)-(-)-2-메틸-2-프로판설핀아미드 (9.43 g, 1.5당량) 및 LiOH (0.64 g, 0.5당량)를 톨루엔 (160 mL)과 함께 반응 용기에 첨가하였다. 이러한 혼합물에 티타늄 (Ⅳ) 이소프로폭시드 (18.42 g, 1.25 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 50 내지 60℃에서 진탕하였다. 다음으로, 반응 혼합물을 40 내지 60℃에서 증류하여 80 mL을 제거하면서, 추가로 톨루엔 (80 mL)으로 충전하였다 반응 혼합물은 20 내지 30℃로 냉각시키고, 모노소듐 시트레이트 용액 (80 mL, 30%-w/w 시트르산, pH 3 내지 4)에 첨가하였다. 혼합물을 45 내지 55℃에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 상을 분리하였다. 유기상을 중탄산칼륨 (40 mL, 25%-w/w 수용성)으로 세척하고, 유기상을 증류하여 40 mL을 제거하였다. (vi)의 생성물 용액을 THF (30 mL)로 희석한 이후 다음 단계에서 용액 (대략 15% w/w)으로서 직접 사용하였다.

단계 6: 터르-부틸 4-(5-((S)-1-(((S)-터르-부틸설피닐)아미노)-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (vii)의 합성: 톨루엔/THF (120 g, 단계 5에서 제조됨) 중 터르-부틸 (S,Z)-4-(5-(((터르-부틸설피닐)이미노)(4-플루오로페닐)메틸)-피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (vi)의 용액에 메틸 마그네슘 염화물 (27.8 g, 22% -w/w THF, 2.0당량)을 10℃에서 2 내지 3시간에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반하여 반응 완료에 도달하도록 하였다. 반응 혼합물을 메탄올 (40 mL)에 이어서 H₂O (10 mL)를 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 증류하여 100 내지 110 mL을 제거한 다음 염화암모늄 (80 mL, H₂O 중 20%-w/w)으로 세척하였다. 유기상을 H₂O (80 mL)로 세척하고, 톨루엔 (60 mL)으로 희석하며, 증류하여 60 내지 80 mL을 제거하였다. 50 내지 60℃의 용액에 n-헵탄 (80 mL)을 충전한 다음 42℃로 냉각시키고, 이 때 접종액을 첨가하였다 (25 내지 50 mg). 용액을 30분 동안 유지한 다음 0 내지 10℃로 30분 동안 냉각시켰다. 고체를 여과에 의해 단리하고, n-헵탄 및 톨루엔 혼합물(1:1, 30 mL)에 이어 n-헵탄 (30 mL)으로 세척하였다. 생성물을 건조시켜 9 g의 조 생성물 96.4 내지 97.2% de (vii)를 얻었다.

단계 6a: 미정제 터르-부틸 4-(5-((S)-1-(((S)-터르-부틸설피닐)아미노)-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트의 결정화: 터르-부틸 4-(5-((S)-1-(((S)-터르-부틸설피닐)아미노)-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (10.0 g)를 이소프로판올 (100 mL)에 용해시키고, 40 내지 60℃로 가열한 다음, 이소프로판올 (20 mL)로 세척/헹구면서 정화 필터를 통과시켰다. 생성된 용액을 40 내지 60℃에서 진공 증류하여 60 내지 70 mL을 제거하였다. 혼합물을 50 내지 60℃에서 물 (45 mL)로 희석한 다음, 40℃로 냉각시키고, 이때 25 내지 50 mg을 접종하였다. 혼합물을 20 내지 25℃로 추가로 냉각시키고, 물 (20 mL)을 첨가하였다. 고체를 여과에 의해 단리하고, 이소프로판올/물 혼합물(1:1, 20 mL)로 세척한 다음, 이소프로판올/물 (1:2, 30 mL)로 슬러리를 세척하였다. 건조하여 8.5g의 생성물 > 99.8% de (vii)를 얻었다.

단계 7: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄-1-아민 염산염 (viii)의 합성: 터르-부틸-4-(5 -((S)-1-(((S)-터르-부틸설피닐)아미노)-1-(4-플루오로페닐)-에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (vii) (50 g, 1 당량)를 에탄올 (7.5 부피) 및 진한 염산 (11.2 M, 5.6 당량)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 환류 온도로 가열하였다. LCMS에 의해 반응이 완결된 이후, 혼합물을 대기압 하에 5 부피로 농축하였다. H₂O 함량 ≤ 3%가 될 때까지 5 부피를 유지하도록 에탄올을 첨가하면서 농축을 계속하였다. 최종적으로 2 부피에서 농축을 중단한 이후 30분에 걸쳐 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 여과 후 진공 하에 건조하여 (viii)의 표제 생성물을 얻었다 (92% 수율).

단계 8: (S)-1-(2-(4-(6-브로모피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-1-(4-플루오로페닐)에탄아민 (I-1)의 합성: 시판되는 6-브로모-4-클로로피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진 (4.00 g, 17.2 mmol)(예로, 시그마 알드리치사), (S)-1-(4- 디옥산 (50 mL) 중 플루오로페닐)-1-(2-(피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 염산염 (viii) (5.81 g, 17.2 mmol) 및 트리에틸아민 (7.20 mL, 51.6 mmol)을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축한 다음, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 20/1)로 정제하여 표제 화합물 (I-1)(8.0 g, 94% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₂H₂₂BrFN₈는 관찰값 496, 측정값: 497, 499 [M+H]⁺를 요구한다.

제조 2: (S)-1-(2-(4-(6-(1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)-1-(4-플루오로페닐)에탄아민 (I-2)

DMF/H₂O (40 mL/10 mL) 중 I-1 (3.0 g, 6.05 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (1.17 g, 6.05 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (494 mg, 605 μmol) 및 K₂CO₃ (2.50 g, 18.2 mmol)의 혼합물을 N₂ (g)로 10분 동안 퍼지하고, 70℃에서 16시간 동안 N₂ 하에 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (I-2)(2.0 g, 68% 수율)을 노란색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₅H₂₅FN₁₀는 관찰값 484, 측정값 485 [M+H]⁺를 요구한다.

제조 3: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피롤로[2, 1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 (I-3)

1,4-디옥산 (30 mL) 중 I-1 (1.0 g, 2.02 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-디옥사보롤란) (768 mg, 3.12 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (165 mg, 202 μmol), dppf (167 mg, 303 μmol) 및 KOAc (395 mg, 4.04 mmol)의 혼합물을 N₂ (g)로 10분 동안 퍼지하고, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 15/1)로 정제하여 표제 화합물 (I-3) (700 mg)을 회색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₈H₃₄BFN₈O₂는 관찰값 544, 측정값 545 [M+H]⁺를 요구한다.

화합물의 제조

실시예 1: (S)-1-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-2-올 (1)

NMP (5 mL) 중 I-2 (제조 2에 따라 제조됨)(200 mg, 0.412 mmol), Cs₂CO₃ (269 mg, 0.83 mmol) 및 2,2-디메틸옥시란(89.3 mg, 1.24 mmol)의 혼합물을 120℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 위에서 건조시켰다. 유기층을 진공에서 농축하고, 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (1)(74.5 mg, 32% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₃FN₁₀O는 관찰값 556, 측정값 557 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.03 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.13-7.08 (m, 2H), 4.76 (s, 1H), 4.12-4.07 (m, 4H), 4.02 (s, 2H), 3.93-3.90 (m, 4H), 2.44 (s, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.10 (s, 6H).

실시예 2: (S)-2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-1-올 (2)

단계 1: 메틸 2-메틸-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트 (xii)의 합성: NMP (20 mL) 중 메틸 2-브로모-2-메틸프로파노에이트 (x)(3.0 g, 16.7 mmol) 및 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (3.23 g, 16.7 mmol)의 용액 (xi)에 탄산세슘 (16.2 g, 50 mmol) 및 요오드화나트륨 (3.1 g, 16.7 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, H₂O 및 염수로 순서대로 세척하였다. 유기층을 진공에서 농축하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5/1)로 정제하여 표제 화합물 (xii) (1.5 g, 30% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 2: 메틸 (S)-2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로파노에이트 (xiii)의 합성: DMF/H₂O (8 mL/2 mL) 중 메틸 2-메틸-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트 (xii) (178 mg, 0.6 mmol), I-1 (300 mg, 0.6 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (99 mg, 0.12 mmol) 및 K₂CO₃ (251 mg, 1.8 mmol)의 혼합물을 70℃에서 N₂ (g) 하에 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 DCM로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (xiii)(240 mg g, 68% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₃₀H₃₃FN₁₀O₂는 관찰값 584, 측정값 585 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (S)-2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-1-올 (2)의 합성: THF(20 mL) 중 (S)-메틸 2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로파노에이트 (xiii) (200 mg, 0.34 mmol)의 용액에 LiAlH₄ (100 mg, 3.4 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O (100 mL) 및 10% NaOH H₂O (300 mL)로 켄칭한 다음 EA로 추출하였다. 유기층을 진공에서 농축하고, 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (2) (90.5 mg, 47% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₃FN₁₀O는 관찰값 556, 측정값 557 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.18 (s, 1H), 8.01 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.87 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.52-7.43 (m, 2H), 7.26 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.16-7.07 (m, 2H), 4.99 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 4.17-4.04 (m, 4H), 3.98-3.87 (m, 4H), 3.60 (d, 2H, J =5.6 Hz), 2.47 (s, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.50 (s, 6H).

실시예 3: (R)1-{4-[4-(4-{5-[(S)-1-아미노-1-(4-플루오로-페닐)-에틸]-피리미딘-2-일}-피페라진-1-일)-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-피라졸-1-일}-프로판-2-올 (3)

NMP (3.0 mL) 중 I-2 (제조 2에 따라 제조됨) (200 mg, 412 μmol) 및 (2R)-2-메틸옥시란 (xiv) (71.4 mg, 1.23 mmol)의 용액에 Cs₂CO₃ (400 mg, 1.23 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (3) (90.0 mg, 40% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₈H₃₁FN₁₀O는 관찰값 542, 측정값 543 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.80 (d, 1H, J = 1.6Hz), 7.87 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.46 (dd, 2H, J = 8.8, 5.6 Hz), 7.24 (s, 1H), 7.10 (t, 2H, J = 8.8 Hz), 4.96 (d, 1H, J = 4.8Hz), 4.11-4.08 (m, 4H), 4.02-3.95 (m, 3H), 3.92-3.89 (m, 4H), 2.45 (s, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.05 (d, 3H, J = 5.6 Hz).

실시예 4: (S)-2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)에탄올 (4)

디옥산/ H₂O (20 mL/2 mL) 중 I-1 (제조1에 따라 제조됨) (500 mg, 1.00 mmol), 시판되는 2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)에탄올 (xv) (285 mg, 1.20 mmol)(예로, 아스트라테크사), Pd(dppf)Cl₂ (219 mg, 300 μmol) 및 Na₂CO₃ (317 mg, 3.00 mmol)의 반응 혼합물을 100℃에서 N₂ (g) 하에 밤새 교반하였다. 층을 분리하고, 유기층을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 15/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (4) (154.0 mg, 29% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₇H₂₉FN₁₀O는 관찰값 528, 측정값 529 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.40 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.49-7.44 (m, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.14-7.06 (m, 2H), 4.93 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 4.17-4.13 (m, 2H), 4.12-4.07 (m, 4H), 3.94-3.88 (m, 4H), 3.89-3.71 (m, 2H), 2.45 (br. S., 2H), 1.73(s, 3H).

실시예 4A: (S)-2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)에탄올 염산염

MeOH (5 mL) 중 (S)-2-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)에탄올 (30 mg, 0.057 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (0.05 mL, 4.0 M)을 실온에서 첨가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 생성물을 동결건조하여 수분 민감성인 백색 고체로서 표제 화합물 (36.0 mg, 100% 수율)을 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 528, 측정값 529 [M+H]⁺를 요구한다. 1H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 9.47 (s, 3H, br), 8.45 (s, 2H), 8.14 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.53-7.50 (m, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.31-7.28 (m, 2H), 4.16-4.14 (m, 6H), 4.00-3.89 (m, 4H), 3.76-3.74 (m, 2H), 2.03 (s, 3H).

실시예 5: (R)-2-(4-(4-(4-(5-((S)-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (5)

단계 1: (S)-1-(벤질옥시)프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트 (xvii)의 합성: DCM (80 mL) 중 (S)-1-(벤질옥시)프로판-2-올 (xvi) (5.0 g, 30.12 mmol) 및 TEA (9.17 g, 90.36 mmol)의 용액에 TsCl (6.30 g, 33.13 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용액을 DCM으로 희석하고, H₂O로 세척하고, 염수로 세척하였다. 유기층을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 표제 화합물 (xvii)(4.0 g, 42% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₇H₂₀O₄S는 관찰값 320, 측정값 338 [M+18]⁺를 요구한다.

단계 2: (R)-1-(1-(벤질옥시)프로판-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xviii)의 합성: NMP(12 mL) 중 (S)-1-(벤질옥시)프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트(xvii)(2.0g, 6.25mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(xi)(1.22 g, 6.25 mmol) 및 Cs₂CO₃ (4.08 mg, 12.5 mmol)의 혼합물을 전자레인지로 110℃에서 0.5시간 동안 광조사하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O로 세척하고, 염수로 세척하였다. 유기층을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE/EA = 4/1)로 정제하여 표제 화합물 (xviii)(1.6 g, 75% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₉H₂₇BN₂O₃는 관찰값 342, 측정값 343 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (R)-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (xix)의 합성: MeOH(20mL) 중 (R)-1-(1-(벤질옥시)프로판-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xviii)(800 mg, 2.34 mmol) 용액에 Pd/C (800 mg) 및 HOAc (0.2 mL)를 첨가하고, 용액을 H₂ (g)로 5분 동안 퍼징한 다음 H₂ (g) 하에 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 혼합물을 여과하고 여과물을 농축하여 표제 화합물을 무색 오일 (xix)로서 얻었다(300 mg, 51% 수율). MS (ES+) C₁₂H₂₁BN₂O₃는 관찰값 252, 측정값 253 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 4: (R)-2-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (5)의 합성: DMF/H₂O (4 mL /1 mL) 중 ((R)-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (xix) (150 mg, 595 μmol), I-1 (295 mg, 595 μmol), Pd(dppf)Cl₂ (49 mg, 60 μmol) 및 K₂CO₃ (250 mg, 1.79 mmol)의 혼합물을 N₂ (g)로 10분 동안 퍼지하고, N₂ (g) 하에 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 합친 유기 추출물을 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (5) (148.1 mg, 46% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₈H₃₁FN₁₀O는 관찰값 542, 측정값 543 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.14-7.08 (m, 2H), 4.98 (t, 1H, J = 5.2 Hz), 4.36-4.32 (m, 1H), 4.10-4.08 (m, 4H), 3.92-3.90 (m, 4H), 3.69-3.61 (m, 2H), 2.45 (s, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.41 (d, 3H, J = 6.8 Hz).

실시예 6: (S)-2-(4-(4-(4-(5-((S)-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (6)

단계 1: (R)-1-(벤질옥시)프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트 (xxiii)의 합성: DCM (30 mL) 중 (R)-1-(벤질옥시)프로판-2-올 (xxii)(3.0 g, 18 mmol) 및 TEA (5.48 g, 54.2 mmol)의 용액에 TsCl (4.13 g, 21.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 다음으로, 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1)로 정제하여 다음과 같은 표제 화합물 (xxiii)(2.30 g, 39% 수율)을 노란색 오일오서 수득하였다. MS (ES+) C₁₇H₂₀O₄S는 관찰값 320, 측정값 338 [M+18]⁺를 요구한다.

단계 2: (S)-1-(1-(벤질옥시)프로판-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxiv)의 합성: NMP (50 mL) 중 (R)-1-(벤질옥시)프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트 (xxiii)(2.20 g, 6.87 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xi) (2.00 g, 10.3 mmol) 및 Cs₂CO₃ (2.24 g, 6.87 mmol)의 혼합물을 전자레인지로 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 내지 4/1)로 정제하여 표제 화합물 (xxiv)(1.80 g, 39% 수율)을 노란색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₉H₂₇BN₂O₃는 관찰값 342, 측정값 343[M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (S)-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (xxv)의 합성: MeOH (20 mL) 중 (S)-1-(1-(벤질옥시)프로판-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxiv)(0.90 g, 2.6 mmol)의 혼합물에 Pd/C (800mg) 및 HOAc (0.2mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물 을 5분 동안 H₂ (g)로 퍼징한 다음, 실온에서 H₂ (g) 하에 16시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 여과하여 농축하고, 표제 화합물 (xxv)을 노란색 오일로서 수득하였다 (500 mg, 75% 수율). MS (ES+) C₁₂H₂₁BN₂O₃는 관찰값 252, 측정값 253 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 4: (S)-2-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)의 합성 피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (6)의 합성: DMF/H₂O (5 mL/1 mL) 중 (S)-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (xxv) (98 mg, 392 μmol), I-1 (130 mg, 261 μmol), K₂CO₃ (200 mg, 227 μmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (20 mg, 27 μmol)의 혼합물을 N₂ (g) 하에 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (6) (40.7 mg, 28% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₂₈H₃₁FN₁₀O는 관찰값 542, 측정값 543 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.10 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.47 (dd, 2H, J = 8.8, 5.6 Hz), 7.24 (s, 1H), 7.11 (t, 2H, J = 8.8 Hz), 4.96 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 4.38-4.35 (m, 1H), 4.11-4.08 (m, 4H), 3.92-3.90 (m, 4H), 3.70-3.60 (m, 2H), 2.43 (s, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.41 (d, 3H, J = 6.8 Hz).

실시예 7: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄-1-아민 (7)

DMF/H₂O (16 mL/4 mL) 중 1-(옥세탄-3-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxvi)(600 mg, 2.4 mmol), I-1 (1.19 g, 2.4 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (391 mg, 0.48 mmol) 및 K₂CO₃ (994 mg, 7.2 mmol)의 혼합물을 N₂로 10분 동안 퍼지하고, N₂ (g) 하에 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 혼합물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (7) (236.3 mg, 18% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₈H₂₉FN₁₀O는 관찰값 540, 측정값 541 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.32 (s, 1H), 8.03 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.99 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.29 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.16-7.07 (m, 2H), 5.64-5.52 (m, 1H), 4.99-4.94 (m, 2H), 4.93-4.89 (m, 2H), 4.12-4.06 (m, 4H), 3.97-3.87 (m, 4H), 2.50 (br. s., 2H), 1.74 (s, 3H).

실시예 8: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-(옥세탄-3-일메틸)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄-1-아민 (8)

단계 1: 옥세탄-3-일메틸 메탄설포네이트 (xxviii)의 합성: DCM (10 mL) 중 옥세탄-3-일메탄올 (xxvii) (300 mg, 3.40 mmol) 및 TEA (1.03 g, 10.2 mmol)의 용액에 MsCl (429 mg, 3.75 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, DCM으로 희석하고, 포화 Na₂CO₃ 용액으로 세척하여 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 용매를 진공에서 증발시켜 표제 화합물 (xxviii)(280 mg, 49% 수율)을 노란색 오일로서 수득하였다.

단계 2: 1-(옥세탄-3-일메틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxix)의 합성: DMF (20 mL) 중 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xi)(280 mg, 1.44 mmol), 옥세탄-3-일메틸 메탄설포네이트(xxviii) (275 mg, 1.66 mmol) 및 Cs₂CO₃ (1.41 g, 4.33 mmol)의 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반한 다음 DCM으로 희석하여 염수로 세척하였다. 유기층을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (xxix) (320 mg, 71% 수율)을 수득하였다. MS (ES+) C₁₃H₂₁BN₂O₃는 관찰값 264, 측정값 265 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-(옥세탄-3-일메틸)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄-1-아민 (8)의 합성: DMF/H₂O (10 mL/2 mL) 중 I-1 (300 mg, 392 μmol), 1-(옥세탄-3-일메틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxix) (239 mg, 904 μmol), K₂CO₃ (250 mg, 1.81 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (30 mg, 41 μmol)의 혼합물을 N₂ (g) 하에 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (8) (40.2 mg, 12% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.47 (dd, 2H, J = 8.8, 5.6 Hz), 7.22 (s, 1H), 7.11 (t, 2H, J = 8.8 Hz), 4.69-4.65 (m, 2H), 4.45-4.41 (m, 4H), 4.10-4.08 (m, 4H), 3.92-3.89 (m, 4H), 3.46-3.41 (m, 1H), 2.45 (s, 2H), 1.73 (s, 3H).

실시예 9: (S)-1-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸-피리미딘-2-일}-피페라진-1-일)-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-피라졸-1-일}-프로판-2-올 (9)

NMP (2 mL) 중 I-2(220 mg, 455 μmol), (S)-2-메틸옥시란 (xxx)(79 mg, 1.37 mmol) 및 Cs₂CO₃ (445 mg, 1.37 mmol)의 혼합물. 혼합물을 전자레인지로 120℃에서 1시간 동안 광조사하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (9) (108 mg, 44% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₂₈H₃₁FN₁₀O는 관찰값 542, 측정값 543 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.14-7.08 (m, 2H), 4.96 (d, 1H, J = 4.4 Hz), 4.10-4.08 (m, 4H), 4.02-3.98 (m, 3H), 3.92-3.90 (m, 4H), 2.44 (s, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.06 (d, 3H, J = 5.6 Hz).

실시예 10: 시스-3-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올 (10)

단계 1: 트랜스-3-(벤질옥시)시클로부틸 4-메틸벤젠설포네이트 (xxxii)의 합성: DCM (20 mL) 중 트랜스-3-(벤질옥시)시클로부탄올 (xxxi)(300 mg, 1.7 mmol)의 용액에 TsCl (389 mg, 2.0 mmol) 및 TEA (343 mg, 3.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 DCM로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척한 다음 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 5/1)로 정제하여 표제 화합물 (xxxii) (315 mg, 56% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₈H₂₀O₄S는 관찰값 332, 측정값 350 [M+18]⁺를 요구한다.

단계 2: 시스-3-(벤질옥시)시클로부틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxxiii)의 합성: NMP (5 mL) 중 트랜스-3-(벤질옥시)시클로부틸 4-메틸벤젠설포네이트 (xxxii)(315 mg, 0.95 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H- 피라졸 (xi) (185 mg, 0.95 mmol) 및 Cs₂CO₃ (619 mg, 1.9 mmol)의 혼합물을 전자레인지로 110℃에서 0.5시간 동안 광조사하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하였다. 유기층을 진공에서 농축하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE/EA = 4/1)로 정제하여 표제 화합물 (xxxiii)(190 mg, 56% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₀H₂₇BN₂O₃는 관찰값 354, 측정값 355 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: 시스-3-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올 (xxxiv)의 합성: MeOH (5 mL) 중 시스-3-(벤질옥시)시클로부틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxxiii)(190 mg, 0.54 mmol)의 용액에 Pd/C (200 mg) 및 HOAc (5 방울)를 첨가하고, 용액을 H₂ (g)로 5분 동안 퍼지하고, H₂ (g) 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공에서 증발 건조시켜 표제 화합물 (xxxiv)을 무색 오일로서 수득하였다 (85 mg, 60% 수율). MS (ES+) C₁₃H₂₁BN₂O₃는 관찰값 264, 측정값 265[M+H]⁺를 요구한다.

단계 4: (시스-3-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올 (10)의 합성: DMF/H₂O (4 mL/1 mL) 중 시스-3-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올 (xxxiv)(55 mg, 0.21 mmol), I-1 (104 mg, 0.21 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (18 mg, 0.021 μmol) 및 K₂CO₃ (87 mg, 0.63)의 혼합물을 N₂로 10분 동안 퍼지하고, N₂ (g) 하에 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 8/1)로 직접 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (10) (14.6 mg, 13% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.17 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.87-7.86 (m, 2H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.19-7.13 (m, 2H), 5.33 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 4.38-4.31 (m, 1H), 4.13-4.06 (m, 4H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.94-3.88 (m, 4H), 2.79-2.71 (m, 2H), 2.34-2.31 (m, 2H), 1.73 (s, 3H).

실시예 11: 트랜스-3-{4-[4-(4-{5-[1-아미노-1-(4-플루오로-페닐)-에틸]-피리미딘-2-일}-피페라진-1-일)-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-피라졸-1-일}-시클로부탄올 (11)

단계 1: 시스-톨루엔-4-설폰산 3-벤질옥시-시클로부틸 에스테르 (xxxvi)의 합성: DCM (10 mL) 중 시스-3-벤질옥시-시클로부탄올 (xxxv)(500 mg, 2.81 mmol) 및 TEA (851 mg, 8.43 mmol)의 용액에 4-메틸-벤젠설포닐 염화물 (640 mg, 3.37 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 염수로 희석하고 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (PE/EA = 11/1)에 의해 직접 정제하여 표제 화합물 (xxxvi)(490 mg, 53% 수율)을 노란색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₈H₂₀O₄S는 관찰값 332, 측정값 350 [M+18]⁺를 요구한다.

단계 2: 트랜스-1-(3-벤질옥시-시클로부틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(xxxvii)의 합성: NMP (15 mL) 중 시스-톨루엔-4-설폰산 3-벤질옥시-시클로부틸 에스테르(xxxvi)(500 mg, 1.51 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-피리딘-2-일)-1H-피라졸 (xi) (430 mg, 2.22 mmol) 및 Cs₂CO₃ (1.47 g, 4.51 mmol)의 혼합물을 전자레인지로 120℃에서 2시간 동안 광조사하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (PE/EA = 1/1)로 정제하여 표제 화합물 (xxxvii)(227 mg, 42% 수율)을 노란색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₀H₂₇BN₂O₃는 관찰값 354, 측정값 355 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: 트랜스-3-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-피라졸-1-일]-시클로부탄올 (xxxviii)의 합성: MeOH (10 mL) 중 트랜스-1-(3-벤질옥시-시클로부틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xxxvii) (420 mg, 1.18 mmol)에 Pd/C (200 mg) 및 진한 HCl (0.5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂ (g) 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축하여 표제 화합물 (xxxviii)(250 mg, 80% 수율)을 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₃H₂₁BN₂O₃는 관찰값 264, 측정값 265 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 4: 트랜스-3-{4-[4-(4-{5-[1-아미노-1-(4-플루오로-페닐)-에틸]-피리미딘-2-일}-피페라진-1-일)-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-피라졸-1-일}-시클로부탄올 (11)의 합성: 디옥산/H₂O (4 mL/1 mL) 중 트랜스-3-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-피라졸-1-일]-시클로부탄올 (xxxviii)(200 mg, 0.76 mmol), I-1 (376 mg, 0.76 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (61.8 mg, 0.076 mmol) 및 K₂CO₃ (313 mg, 2.27 mmol)의 혼합물을 N₂ (g)로 10분 동안 퍼지하고, N₂ (g) 하에 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (11) (27.2 mg, 6% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.99 (d, 1H, J = 1.2 Hz), 7.87-7.85 (m, 2H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.15-7.08 (m, 2H), 5.24 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 4.92-4.89 (m, 1H,), 4.50-4.43 (m, 1H), 4.17-4.10 (m, 4H), 3.96-3.90 (m, 4H), 2.67-2.61 (m, 2H), 2.44 (s, 2H), 2.42-2.37 (m, 2H), 1.73 (s, 3H).

실시예 12: (S)-1-((4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)시클로프로판-1-올 (12)

단계 1: 에틸 2-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)아세테이트 (xl)의 합성: 에틸 2-클로로아세테이트 (25 mL) 중 4-브로모-1H-피라졸 (xxxix) (8.0 g, 55 mmol) 및 K₂CO₃ (15.2 g, 110 mmol)의 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EA로 희석하고, H₂O로 세척하였다. 유기층을 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1)로 정제하여 표제 화합물 (xl)(8.5g, 66% 수율)을 연노란색 오일로서 얻었다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O₂는 관찰값 232, 측정값 233 [M+H]⁺을 요구한다.

단계 2: 에틸 1-((4-브로모-1H-피라졸-1-일)메틸)시클로프로판-1-올 (xli)의 합성: 무수 THF (60 mL) 중 에틸 2-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)아세테이트 (xl)(7.0 g, 30 mmol) 및 티타늄 테트라이소프로판올레이트 (4.26 g, 15 mmol)의 용액에 에틸 마그네슘 브롬화물 (헥산 중 3 M, 30 mL, 90 mmol)을 60℃에서 2시간에 걸쳐 적가하였다. 동일한 온도에서 2시간 동안 교반한 이후, 반응 혼합물을 EA로 희석하고, 후속으로 수용성 1 N HCl 및 H₂O으로 세척하였다. 유기층을 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20:1 내지 3:1)로 정제하여 표제 화합물 (xli)(1.3 g, 20% 수율)을 노란색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O는 관찰값 216, 측정값 217 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: 4-브로모-1-[1-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-시클로프로필메틸]-1H-피라졸 (xlii)의 합성: DCM (8 mL) 중 1-[(4-브로모-1H-피라졸-1-일)메틸]시클로프로판-1-올 (xli)(300 mg, 1.38 mmol) 및 3,4-디히드로-2H-피란 (348 mg, 4.14 mmol)의 용액에 피리디늄 파라-톨루엔 설포네이트 (346 mg, 1.38 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 교반한 다음, 염수로 희석하여 DCM으로 세척하였다. 유기층을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EA = 10:1)로 정제하여 표제 화합물 (xlii)(200 mg, 48% 수율)을 백색 고체로서 획득하였다. MS (ES+) C₁₂H₁₇BrN₂O₂는 관찰값 300, 측정값 217 [M-THP+H]⁺를 요구한다.

단계 4: 1-(4-플루오로-페닐)-1-{2-[4-(6-{1-[1-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-시클로프로필메틸]-1H-피라졸-4-일}-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)-피페라진-1-일]-피리미딘-5-일}-에틸아민 (xliii)의 합성: 1,4-디옥산 (3 ml), H₂O (1 mL) 및 DMF (0.5 mL)의 혼합물 중 4-브로모-1-{[1-(옥산-2-일옥시)시클로프로필]메틸}-1H-피라졸(xlii)(160 mg, 0.531 mmol), I-3 (577 mg, 1.06 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (77.5 mg, 106 μmol) 및 Na₂CO₃ (168 mg, 1.59 mmol)의 혼합물을 N₂ (g) 하에서 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/메탄올 = 4:1)로 정제하여 표제 화합물 (270 mg, 50% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₃₄H₃₉FN₁₀O₂는 관찰값 621, 측정값 622 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 5: 1-{4-[4-(4-{5-[1-아미노-1-(4-플루오로-페닐)-에틸]-피리미딘-2-일}-피페라진-1-일)-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-피라졸-1-일메틸}-시클로프로판올 (12)의 합성: MeOH(4 mL) 중 1-(4-플루오로-페닐)-1-{2-[4-(6-{1-[1-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-시클로프로필메틸]-1H-피라졸-4-일}-피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)-피페라진-1-일]-피리미딘-5-일}-에틸아민 (xliii) (200 mg, 0.32 mmol)의 용액에 p-톨루엔설폰산 (180 mg, 1.04 mmol)을 실온에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (10 mM NH₄HCO₃ 및 0.025% NH₃·H₂O), B = 아세토니트릴; 구배: 7분 내에 51% 내지 56% B, 15분에서 정지; 컬럼: 아젤라 듀라쉘 C18(L) 21.2 × 250 mm, 10 μm, 150Å)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (12)(56 mg, 31% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 2H), 8.10 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.13-7.08 (m, 2H), 5.57 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 4.13-4.05 (m, 4H), 3.95-3.85 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 0.69-0.66 (m, 4H).

실시예 13: (S)-(1-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로프로필)메탄올 (13)

단계 1: 메틸 1-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로프로판카복실레이트 (xiv)의 합성: THF (50 mL) 중 4-브로모-1H-피라졸 (xxxix)(2.0 g, 13.70 mmol)의 용액에 NaH (1.20 g, 30.14 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 메틸 2,4-디브로모부타노에이트 (xliv)(3.53 g, 13.70 mmol)를 용액에 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 교반한 다음, EA로 희석하였다. 유기층을 H₂O로 세척하고, 염수로 세척하여 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1)로 정제하여 표제 화합물 (xiv) (570 mg, 17% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₈H₉BrN₂O₂는 관찰값 244, 측정값 245 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 2: (1-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로프로필)메탄올 (xlvii)의 합성: MeOH (15 mL) 중 메틸 1-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로프로판카르복실레이트 (xiv) (550 mg, 2.25 mmol)의 용액에 NaBH₄ (257 mg, 6.75 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, H₂O 및 염수로 순서대로 세척하고, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 1/1)로 정제하여 표제 화합물 (xlvii) (300 mg, 62% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O는 관찰값 216, 측정값 217 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (S)-(1-(4-(4-(4-(5-(1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로프로필)메탄올 (13)의 합성: THF/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (1-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로프로필)메탄올 (xlvii)(100 mg, 463 μmol), I-3 (제조 3에 기재된 바와 같이 제조됨)(380 mg, 695 μmol), Pd(t-Bu₃P)₂ (47 mg, 93 μmol) 및 Cs₂CO₃ (452 mg, 1.39 mmol)의 혼합물을 N₂ (g)로 10분 동안 퍼지하고, N₂ (g) 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (13) (57.3 mg, 22% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.00 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.87 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.27 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.14-7.08 (m, 2H), 5.00 (t, 1H, J = 5.6 Hz), 4.10-4.08 (m, 4H), 3.92-3.90 (m, 4H), 3.66 (d, 2H, J = 5.6 Hz), 2.43 (s, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.13-1.11 (m, 2H), 1.05-1.02 (m, 2H).

실시예 14: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-((R)-테트라히드로퓨란-3-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 (14)

단계 1: (S)-테트라히드로퓨란-3-일 메탄설포네이트 (xlix)의 합성: DCM (20 mL) 중 테트라히드로-퓨란-3-올 (xlviii)(2.0 g, 22.7 mmol) 및 TEA (4.6 g, 45.4 mmol)의 용액에 MsCl (4.7 g, 25.0 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 다음으로, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, H₂O 및 염수로 순서대로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 위에서 건조시키고, 농축 건조하여 표제 화합물 (xlix)(2.0 g, 미정제)을 노란색 오일로서 수득하였다.

단계 2: (R)-1-(테트라히드로퓨란-3-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (l)의 합성: NMP (50 mL) 중 (S)-테트라히드로퓨란-3-일 메탄설포네이트 (xlviii)(1.9 g, 11.4 mmol)의 용액에 4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (xi) (3.3 g, 17.2 mmol) 및 Cs₂CO₃ (11.2 g, 34.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 순서대로 세척하고, 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 4/1)로 정제하여 표제 화합물 (l)(2.3g, 76% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₃H₂₁BN₂O₃는 관찰값 264, 측정값 265 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-((R))-테트라히드로퓨란-3-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 (14)의 합성: DMF (2 mL) 및 H₂O (0.5 mL) 중 (R)-1-(테트라히드로-퓨란-3-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (l) (80 mg, 0.3 mmol), I-1 (150 mg, 0.3 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (50 mg, 0.06 mmol) 및 K₂CO₃ (125 mg, 0.9 mmol)의 혼합물을 N₂ (g) 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 16/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 후속으로 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (14) (65 mg, 38% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.16 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.87 (s, 2H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.26(s, 1H), 7.14-7.08 (m, 2H), 5.05-4.99 (m, 1H), 4.10-4.04 (m, 4H), 4.02-3.98 (m, 2H), 3.94-3.82 (m, 6H), 2.44-2.28 (m, 4H), 1.73 (s, 3H).

실시예 15: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-((S)-테트라히드로퓨란-3-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 (15)

단계 1: (R)-테트라히드로퓨란-3-일 메탄설포네이트 (lii)의 합성: DCM(20 mL) 중 (R)-테트라히드로퓨란-3-올 (li)(1.0 g, 11.4 mmol) 및 TEA (2.3 g, 23 mmol)의 용액에 MsCl (1.43 g, 12.5 mmol)을 실온에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, H₂O 및 염수로 순서대로 세척하고, 농축하여 무색 오일로서 표제 화합물 (lii) (1.4 g, 미정제)을 수득하였다.

단계 2: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-((S)-테트라히드로퓨란-3-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 (15)의 합성: NMP (10 mL) 중 I-2 (300 mg, 0.62 mmol), (R)-테트라히드로퓨란-3-일 메탄설포네이트 (lii) (155 mg, 0.93 mmol) 및 Cs₂CO₃ (600 mg, 1.89 mmol)의 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 직접 정제하여 표제 화합물 (15) (133.5 mg, 39% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555[M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.17 (s, 1H), 8.02 (d, 1H, J = 0.8 Hz), 7.88 (s, 2H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.11 (t, 2H, J = 17.6 Hz), 5.08-4.99 (m, 1H), 4.16-4.05 (m, 4H), 4.04-3.97 (m, 2H), 3.96-3.88 (m, 5H), 3.87-3.80 (m, 1H), 2.48-2.43 (m, 2H), 2.43-2.36 (m, 1H), 2.32-2.25 (m, 1H), 1.74 (s, 3H).

실시예 16: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄-1-아민(16)

단계 1: 테트라히드로-2H-피란-4-일 메탄설포네이트 (liv)의 합성: DCM (100 mL) 중 테트라히드로-2H-피란-4-올 (iii)(3.20g, 31.3mmol) 및 TEA(9.51 g, 94.0 mmol)의 용액에 MsCl (5.38g, 47.0mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 DCM으로 희석하고, 수용성 포화 Na₂CO₃ 용액으로 세척하여 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 용매를 제거하여 표제 화합물 (liv)(3.2g, 미정제)을 노란색 오일로서 수득하였다.

단계 2: 1-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (lv)의 합성: NMP (50 mL) 중 테트라히드로-2H-피란-4-일 메탄설포네이트 (liv) (3.20 g, 17.7 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)- 1H-피라졸 (4.13g, 21.3mmol) 및 Cs₂CO₃ (8.68 g, 26.6 mmol)의 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 5/1)로 정제하여 표제 화합물 (lv) (1.2 g, 24% 수율)을 수득하였다. MS (ES+) C₁₄H₂₃BN₂O₃는 관찰값 278, 측정값 279 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2-(4-(6-(1-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄-1-아민 (16)의 합성: DMF/H₂O (10 mL/2 ml) 중 I-1 (300 mg, 603 μmol), 1-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2)-1H-피라졸 (lv) (210 mg, 754 μmol), K₂CO₃ (104 mg, 754 μmol), and Pd(dppf)Cl₂ (30 mg, 41 μmol)의 혼합물을 70℃에서 N₂ (g) 하에 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 15% 내지 95%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 정제하여 표제 화합물 (16) (40.2 mg, 6% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS (ES+) C₃₀H₃₃FN₁₀O는 관찰값 568, 측정값 569 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.19 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.48-7.45 (m, 2H,), 7.24 (s, 1H), 7.13-7.09 (m, 2H), 4.42-4.37 (m, 1H), 4.12-4.40 (m, 4H), 3.99-3.96 (m, 2H), 3.92-3.90 (m, 4H), 3.52-3.46 (m, 2H), 2.43 (s, 2H), 2.05-1.92 (m, 4H), 1.73 (s, 3H).

실시예 17: (3R,4R)-4-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (17)

단계 1: rac-트랜스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (lvii)의 합성: NMP (100 mL) 중 3,6-디옥사비시클로[3.1.0]헥산 (lvi) (5.2 g, 60.5 mmol), 4-브로모-1H-피라졸 (xxxix) (8.8 g, 60.5 mmol) 및 Cs₂CO₃ (39.3 g, 121 mmol)의 용액을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 냉각하여 DCM으로 희석한 다음, H₂O 및 염수로 세척하였다. 유기층을 농축하고, 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 3/1)로 정제하여 표제 화합물 (lvii)(10 g, 71% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O₂는 관찰값 232, 측정값 233 [M+18]⁺을 요구한다.

단계 2: rac-시스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-일 4-니트로벤조에이트 (lviii)의 합성: THF(50 mL) 중 rac-트랜스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (lvii)(2.7 g, 11.6 mmol), 4-니트로벤조산 (1.95g, 11.6mmol), 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (3.53 mg, 17.4 mmol) 및 트리페닐포스핀 (4.57 g, 17.4 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하였다. 유기층을 농축하고, 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (PE/EA = 3/1)로 정제하여 표제 화합물 (lviii)(4g, 90% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₄H₁₂BrN₃O₅는 관찰값 381, 측정값 382 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 3: (3S,4S)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (lx)(피크 1) 및 (3R,4R)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (lxi)(피크 2)의 합성: MeOH/THF/H₂O (30 mL/30 mL/30 mL) 중 rac-시스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-일 4-니트로벤조에이트 (lvii)(4 g, 10.5 mmol) 및 수산화리튬 (2.2 g, 52.5 mmol)의 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (PE/EA = 3/1= 3/1)로 정제하여 rac-시스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (1.3 g, 53% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O₂는 관찰값 232, 측정값 233 [M+H]⁺을 요구한다. 이 물질은 SFC (컬럼: AD 20 × 250 mm, 10 μm (다이셀사); 이동상: CO₂/MeOH (메탄올 중 0.2% 암모니아) = 60/40; 유속: 80 g/분)을 통한 키랄성 분리를 시행하여 피크 1 (lx) (500 mg) 및 피크 2 (lxi) (500 mg)를 수득하였다. 피크 1은 (3S,4S)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올로 임의로 지정하였으며, 피크 2는 (3R,4R)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올로 임의로 지정하였다.

단계 4: (3R,4R)-4-(4-(4-(4-(5-((S)-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (17)의 합성: 디옥산/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (3R,4R)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (lxi) (70 mg, 0.3 mmol) (단계 3의 피크 2), I-3 (328.3 mg, 0.6 mmol), Pd[(t-Bu)₃P]₂ (31 mg, 0.06 mmol) 및 Na₂CO₃ (96 mg, 0.9 mmol)를 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (17)(106.3 mg, 62% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O₂는 관찰값 570, 측정값 571, 554 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.52-7.42 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.17-7.10 (m, 2H), 5.33 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 4.92-4.83 (m, 1H), 4.46-4.38 (m, 1H), 4.21-4.05 (m, 6H), 4.01 (m, 1H), 3.95-3.85 (m, 4H), 3.73 (m, 1H), 2.45 (s, 2H), 1.73 (s, 3H).

실시예 18: (3R,4S)-4-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (18)

단계 1: rac-트랜스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올(lvii)의 키랄성 분리: rac-트랜스-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (1.1g)(실시예 17의 단계 1로부터 나옴)을 SFC (컬럼: AD 20 × 250 mm, 10 μm (다이셀사); 이동상: CO₂/MeOH (MeOH 중 0.2% 암모니아) = 80/20; 유속: 80 g/분)을 통한 키랄성 분리를 시행하여 피크 1 (lx) (400 mg) 및 피크 2 (lxi) (500 mg)를 수득하였다. 피크 1은 (3R,4S)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올로 임의로 지정하였으며, 피크 2는 (3S,4R)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올로 임의로 지정하였다.

단계 2: (3R,4S)-4-(4-(4-(4-(5-((S)-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (18)의 합성: 디옥산/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (3R,4S)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (70 mg, 0.3 mmol) (lxiii)(단계 1로부터의 피크 1), I-3 (328.3 mg, 0.6 mmol), Pd[(t-Bu)₃P]₂ (31 mg, 0.06 mmol) 및 Na₂CO₃ (96 mg, 0.9 mmol)의 혼합물을 N₂로 탈기하고, 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 DCM로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (18)(55.6 mg, 33% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O₂는 관찰값 570, 측정값571, 554 [M+H]⁺, [M+H-NH₃]⁺을 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.51-7.43 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.16-7.07 (m, 2H), 5.66 (d, 1H, J = 4 Hz), 4.75-4.67 (m, 1H), 4.51-4.42 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.15-3.99 (m, 6H), 3.96-3.85 (m, 4H), 3.63 (m, 1H), 2.47 (s, 2H), 1.73 (s, 3H).

실시예 19: (3S,4R)-4-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (19)

디옥산/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (3S,4R)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (70 mg, 0.3 mmol) (lxiv) (실시예 22의 단계 1로부터의 피크 2), I-3 (328.3 mg, 0.6 mmol), Pd[(t-Bu)₃P]₂ (31 mg, 0.06 mmol) 및 Na₂CO₃ (96 mg, 0.9 mmol)의 혼합물을 N₂로 탈기하고, 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (19) (51.9 mg, 31% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O₂는 관찰값 570, 측정값 571, 554 [M+H]⁺ 및 [M+H-NH₃]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.52-7.43 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.19-7.06 (m, 2H), 5.66 (d, 1H, J = 4.4 Hz), 4.75-4.66 (m, 1H), 4.51-4.41 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.16-3.99 (m, 6H), 3.97-3.83 (m, 4H), 3.63 (dd, 1H, J = 9.6 Hz, J = 2.8 Hz), 2.54 (s, 2H), 1.73 (s, 3H).

실시예 20: (3S,4S)-4-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (20)

디옥산/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (3S,4S)-4-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)테트라히드로퓨란-3-올 (lxiii) (50 mg, 0.22 mmol) (실시예 21의 단계 3의 피크 1), I-3 (234.5 mg, 0.44 mmol), Pd[(t-Bu)₃P]₂ (22 mg, 0.044 mmol) 및 Na₂CO₃ (68 mg, 0.66 mmol)의 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (20) (74.6 mg, 61% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O₂는 관찰값 570, 측정값 571, 554 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.03 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.88 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.51-7.44 (m, 2H), 7.28 (d, 1H, J = 1.2 Hz), 7.17-7.10 (m, 2H), 5.33 (d, 1H, J = 5.6 Hz), 4.93-4.83 (m, 1H), 4.47-4.38 (m, 1H), 4.20-4.06 (m, 6H), 4.01 (m, 1H), 3.95-3.88 (m, 4H), 2.45 (s, 2H), 3.73 (m, 1H), 1.76 (s, 3H).

실시예 21: (1S,2S)-2-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올 (21)

단계 1: 트랜스-2-(벤질옥시)시클로부탄올 및 시스-2-(벤질옥시)시클로부탄올의 합성: MeOH (20 mL) 중 2-(벤질옥시)시클로부타논(1.0 g, 5.7 mmol)의 용액에 NaBH₄ (432 mg, 11.4 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 다음으로, 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물 및 염수로 세척한 다음, 유기층을 농축하고, 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)로 정제하여 400 mg의 피크 1 (시스-2-(벤질옥시)시클로부탄올로 임의로 지정됨)을 무색 오일로서, 400 mg의 피크 2 (트랜스-2-(벤질옥시)시클로부탄올로 임의로 지정됨)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₁H₁₄O₂는 관찰값 178, 측정값 179 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 2: 시스-2-(벤질옥시)시클로부틸 메탄설포네이트의 합성: DCM (10 mL) 중 시스-2-(벤질옥시)시클로부탄올 (270 mg, 1.52 mmol)의 용액에 메실 염화물 (259 mg, 2.28 mmol) 및 트리에틸아민 (459 mg, 4.56 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 DCM으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 위에서 건조시키고, 농축하여 표제 화합물 (300 mg, 77% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₂H₁₆O₄S는 관찰값 256, 측정값 274 [M+18]⁺를 요구한다.

단계 3: 트랜스-2-(벤질옥시)시클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸의 합성: DMF (8 mL) 중 시스-2-(벤질옥시)시클로부틸 메탄설포네이트 (300 mg, 1.17 mmol), 4-브로모-1H-피라졸 (171 mg, 1.17 mmol) 및 Cs₂CO₃ (1.15 g, 3.51 mmol) 의 혼합물을 100^℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 위에서 건조시켜 농축하고, 플래시 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 5/1)로 정제하여 표제 화합물 (170 mg, 47 % 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ES+) C₁₄H₁₅BrN₂O는 관찰값 306, 측정값 307 [M+H]⁺를 요구한다. 트랜스-2-(벤질옥시)시클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸의 키랄성 분리: 트랜스-2-(벤질옥시)시클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸 (600 mg)은 SFC (컬럼: IG 20 × 250 mm, 10 μm (다이셀사); 이동상: CO₂/MeOH (메탄올 중 0.2% 암모니아) = 75/25; 유속: 4 g/분)을 통한 키랄성 분리를 시행하여 피크 1 (250 mg) 및 피크 2 (250 mg)를 수득하였다. 피크 1은 1-((1S,2S)-2-(벤질옥시)시클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸로 임의로 지정하였으며, 피크 2는 1-((1R,2R)-2-(벤질옥시)시클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸로 임의로 지정하였다.

단계 4: (1S,2S)-2-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올의 합성: TFA (2 mL) 중 1-((1S,2S)-2-(벤질옥시)사이클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸 (250 mg, 820 μmol)의 용액을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 농축하고, 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 표제 화합물 (120 mg, 68% 수율)을 백색 고체로 수득하였다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O는 관찰값 216, 측정값 217 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 5: (1S,2S)-2-(4-(4-(4-(5-((S)-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올의 합성: 디옥산/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (1S,2S)-2-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올(120 mg, 556 μmol), I-3 (362 mg, 667 μmol), Pd(t-Bu₃P)₂ (50 mg, 99 μmol) 및 Cs₂CO₃ (362 mg, 1.12 mmol)의 혼합물을 N₂로 10분 동안 퍼지하고, N₂ 하에 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 DCM로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 32% 내지 62%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (52.6 mg, 17% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.19 (s, 1H), 8.00 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.88 (s, 2H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.26 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.14-7.08 (m, 2H), 5.67 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 4.46-4.39 (m, 1H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.10-4.06 (m, 4H), 3.92-3.90 (m, 4H), 2.44 (s, 2H), 2.16-2.10 (m, 2H), 1.89-1.79 (m, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.62-1.52 (m, 1H).

실시예 22: (1R,2R)-2-(4-(4-(4-(5-((S))-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올 (22)

단계 1: (1R,2R)-2-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올의 합성: TFA (2 mL) 중 1-((1R,2R)-2-(벤질옥시)시클로부틸)-4-브로모-1H-피라졸 (250 mg, 820 μmol) (실시예 21의 단계 3의 피크 2로부터 나옴)의 용액을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 농축하고, 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 표제 화합물 (120 mg, 68% 수율)을 백색 고체로 수득하였다. MS (ES+) C₇H₉BrN₂O는 관찰값 216, 측정값 217 [M+H]⁺를 요구한다.

단계 2: (1R,2R)-2-(4-(4-(4-(5-((S)-1-아미노-1-(4-플루오로페닐)에틸)피리미딘-2-일)피페라진-1-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올의 합성: 디옥산/H₂O (8 mL/2 mL) 중 (1R,2R)-2-(4-브로모-1H-피라졸-1-일)시클로부탄올(120 mg, 556 μmol), (S)-1-(4-플루오로페닐)-1-(2- (4-(6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-4-일)피페라진-1-일)피리미딘-5-일)에탄아민 (362 mg, 667 μmol), Pd(t-Bu₃P)₂ (50 mg, 99 μmol) 및 Cs₂CO₃ (362 mg, 1.12 mmol)의 혼합물을 N₂ (g)로 10분 동안 퍼지하고, 90℃에서 N2 (g) 하에 4시간 동안 교반하였다. 이후, 용액을 EA로 희석하고, H₂O 및 염수로 세척하여 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하였다. 생성된 물질을 제조용 HPLC (이동상: A = H₂O (0.1% NH₄HCO₃), B = 아세토니트릴; 구배: B = 18분에 30% 내지 60%; 컬럼: Xtimate^TM 10 μm 150A 21.2 × 250 mm)에 이어서 동결건조에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (51.5 mg, 17% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ES+) C₂₉H₃₁FN₁₀O는 관찰값 554, 측정값 555 [M+H]⁺를 요구한다. ¹H-NMR (400 MHz, 6d-DMSO) δ ppm 8.41 (s, 2H), 8.19 (s, 1H), 8.00 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.88 (s, 2H), 7.48-7.44 (m, 2H), 7.26 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 7.14-7.08 (m, 2H), 5.67 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 4.46-4.39 (m, 1H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.10-4.06 (m, 4H), 3.92-3.90 (m, 4H), 2.44 (s, 2H), 2.16-2.10 (m, 2H), 1.89-1.79 (m, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.62-1.52 (m, 1H).

실시예 2: 생화학적 효소 활성 검정법

PDGFRα 퍼킨엘머 전기영동 이동성 변동 기술 플랫폼인 EZ 판독기 2를 사용하여 KIT 효소적 활성을 모니터링하였다. 형광 표지된 기질 펩티드를 키나제 및 ATP의 존재 하에 및 테스트 화합물의 존재 하에 배양하여, 테스트 화합물의 각 용량이 인산화될 펩티드의 반영 비율을 생성하였다.

키나제 효소 반응의 선형의 안정기 내에서 인산화된 (생성물) 및 인산화되지 않은 (기질) 펩티드의 혼합 풀이 인가된 전위차 하에 퍼킨엘머 EZ 판독기 2의 미세유체 시스템을 통과하였다. 생성물 펩티드 상의 포스페이트 기의 존재는 기질 펩티드의 질량 및 전하 사이의 차이를 제공하여, 시료에서 기질과 생성물 풀을 분리시켰다 (Perrin et al., Expert Opin Drug Discovery 2010년 1월, 5(1): 51-63).

생성물과 기질 펩티드 혼합물이 기기 내에서 레이저를 통과할 때, 이러한 풀이 검출되고 (λ_ex = 488 nm, λ_em = 568 nm), 별도의 피크로서 구별된다. 이러한 피크 사이의 비율은 해당 조건 하에 해당 웰에서 해당 농도의 화합물의 활성을 반영한다.

KIT(D816V) PDGFRα (D842V) 돌연변이체의 생화학적 효소 활성의 억제

모든 테스트 항목을 10 mM의 스톡 농도로 100% DMSO에 용해시켰다. 모든 테스트 화합물의 100X, 10개 지점, 4배 일련 희석은 적절한 농도, 보통 1 mM에서 시작하여 100% DMSO에서 생성되었다. 각 농도의 0.130 mL 부피를 TTP랩테크 모스키토 나노리터 디스펜서를 사용하여 384-웰 검정 플레이트 (Greiner 781 201)의 해당 웰로 옮겼다. 다음으로 멀티드롭기를 사용하여, 반응의 나머지 구성 요소를 0.130 mL의 화합물에 다음과 같이 첨가하였다.

ATP에 대한 외관상의 마이클리스-멘텐 상수 (APPKM)에서 PDGFRα D842V 검정법: 384-웰 검정 플레이트의 각 웰에는, 7 nM의 처리되지 않은 효소를 1 mM CSKtide (5-FAM-AHA-KKKKDDIYFFFG-NH2) 및 25 mM ATP를 갖는 총 13 mL의 완충액 (100 mM HEPES pH 7.5, 0.015% 브리즈 35, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT)에서 일련의 용량 농도의 화합물이 있거나 없이 (1% DMSO 최종 농도) 25℃에서 90분 동안 배양하였다. 반응은 70 ml의 정지 완충액 (100 mM HEPES pH 7.5, 0.015% 브리즈 35, 35 mM EDTA 및 0.2%의 코팅 시약 3, 캘리퍼 라이프사이언스사)의 첨가에 의해 종결하였다. 플레이트를 캘리퍼 EZ 판독기 2로 판독하였다.

ATP에 대한 APPKM에서의 KIT D816V 검정법: 384-웰 검정 플레이트의 각 웰에는, 0.3 nM의 처리되지 않은 효소를 1 mM SRCtide (5-FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH2) 및 20 mM ATP를 갖는 총 13 mL의 완충액 (100 mM HEPES pH 7.5, 0.015% 브리즈 35, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT)에서 일련의 용량 농도의 화합물이 있거나 없이 (1% DMSO 최종 농도) 25℃에서 60분 동안 배양하였다. 반응은 70 ml의 정지 완충액 (100 mM HEPES pH 7.5, 0.015% 브리즈 35, 35 mM EDTA 및 0.2%의 코팅 시약 3, 캘리퍼 라이프사이언스사)의 첨가에 의해 종결하였다. 플레이트를 캘리퍼 EZ 판독기 2로 판독하였다. 실시예에 따라 제조된 화합물에 대한 이러한 실험에서 획득된 결과는 하기 표 2에 요약되어 있다. 생화학적 D816V 및 D842V 활성의 경우, 다음의 표기를 사용한다: ≤ 0.30 nM = A; ≥ 0.31 및 < 1 nM = B; 및 ND = 결정되지 않음. HMC1.2 세포주의 세포 활성의 경우, 다음의 표기를 사용한다: A는 < 4.5 nM을 의미하고; B는 ≥ 4.6 및 < 10 nM을 의미하고, ND 결정되지 않음이다.

참고로, 국제특허출원 WO2015/057873에서 실시예 63의 화합물의 화학적 구조는 다음과 같다.

실시예 3: HMC1.2 자가인산화 검정법

10,000개의 HMC1.2 세포를 384-웰 플레이트의 각 웰에서 22 mL 배양 배지 (페놀-레드 없는 IMDM, 무혈청)로 조직 배양 배양기 (5% CO₂, 37℃)에서 배양하고, 혈청을 밤새 굶겼다. 일련의 10개 지점 용량 농도의 화합물 (2.5 mM 내지 9.54 pM)을 3.1 mL 부피로 각 웰로 세포에 첨가하였다 (0.25% DMSO 최종 농도). 90분 후, 프로테아제 및 포스파타제 저해제 칵테일 (셀 시그널링 테크놀로지사)이 보충된 6 mL의 5× AlphaLISA 용해 완충액 (퍼킨엘머사)을 각 웰에 첨가하고 4℃에서 15분 동안 450 rpm으로 진탕하였다. 10 mL의 포스포-Y719 c-KIT 및 총 c-KIT 항체 (15 nM 최종 농도, 셀 시그널링 테크놀로지사) 및 50 mg/mL AlphaLISA 토끼 수용체 비드 (퍼킨엘머사)를 각 웰에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 300 rpm으로 진탕하였다. 10 mL의 100 mg/mL 스트렙타비딘 공여체 비드 (퍼킨엘머사)를 각 웰에 첨가하고, 고체 흑색 접착제로 빛을 차단하고, 실온에서 2시간 동안 300 rpm으로 진탕하였다. 형광 신호는 알파스크린 384 웰 HTS 프로토콜에 의해 엔비전 (퍼킨엘머사) 상에서 획득하였다. 데이터는 0% 및 100% 억제 대조군으로 정규화하고, IC₅₀를 4개 매개변수 로지스틱 IC₅₀ 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다.

표는 비만세포 백혈병 세포주인 HMC 1.2에서 화합물의 활성을 나타낸다. 이러한 세포주는 키나제의 구성발현적 활성화를 유도하는 위치 V560G 및 D816V에서 돌연변이된 KIT를 포함한다. 다음의 화합물은 KIT 단백질 상의 티로신 719번에서 KIT 자가인산화를 검정함으로써 KIT D816V 키나제 활성의 직접적인 억제를 측정하는 검정법으로 테스트하였다. 실시예에 따라 제조된 화합물에 대한 이러한 실험의 결과는 표 2에 요약되어 있다.

실시예 4: 래트의 뇌 대 혈장 비율에서 뇌 침투의 평가 (뇌 Kp)

뇌 침투를 이해하기 위해, 스프라그-달리 (SD) 래트에서 화합물의 뇌 대 혈장 비율을 획득하였다. 래트와 같은 전임상 종에서 혈액과 뇌 사이의 생체내 평형 분포는 뇌 침투를 평가하도록 공통적적으로 사용되는 매개변수이다. 뇌 K_p는 뇌와 혈액 내의 농도 비율 (C_뇌/C_혈장)이다. 화합물의 수동적 확산 특징, 혈액-뇌 장벽 (BBB)에서 막 운반체에 대한 친화도 및 혈장 단백질과 뇌 조직 사이의 상대적인 약물 결합 친화도 차이가 뇌 K_p에 영향을 미친다. 0.1 미만의 뇌 K_p를 갖는 화합물은 CNS에 대한 접근이 제한되는 반면, 0.3 내지 0.5 초과의 뇌 K_p를 갖는 화합물은 뇌 침투가 양호한 것으로 고려되며, 1 초과의 뇌 K_p를 갖는 화합물은 BBB를 자유롭게 통과한다 (Expert Opin. Drug Delivery (2016) 13 (01): 85-92).

4 및 63의 뇌 침투가 스프라그-달리 래트 (3/화합물)에서 측정되었다. 동물은 경정맥 관삽입을 통해 24시간에 걸쳐 화합물의 1 mg/kg/시간의 Ⅳ 주입을 받았다. 24시간에 꼬리 정맥 출혈 또는 심장 천자 (마취 하에)를 통해 혈액을 수집하고, 원심분리하여 혈장 시료을 획득하였다. 뇌 조직을 수집하고, 인산 완충 식염수 (PBS)로 균질화하였다. 화합물의 농도를 LC-MS/MS 분석에 의해 혈장 및 뇌 균질물에서 획득하였다. 하기 표 3A는 본원에 기재된 실시예에 따라 제조된 화합물 4 및 국제특허출원 WO2015/057873의 화합물 63에 대한 혈장 및 뇌 농도, 뿐만 아니라 뇌 K_p의 결과를 나타낸다.

화합물 4는 63 (평균=1.8)과 비교하여 매우 낮은 뇌 K_p (평균=0.17)를 제시한다.

4 및 63의 래트 혈장 단백질 결합을 평형 투석 방법을 사용하여 시험관내에서 평가하였다. 화합물 4 (10 μM)는 100% 혈장에서 투석 블록으로 37℃에서 5시간 동안 평가하였다. 공여자 및 수여자 측으로부터의 시료를 LC-MS/MS로 분석하였다. 혈장 단백질 결합 및 미결합 분율을 다음의 공식을 사용하여 계산하였다.

결합 분율 (fb)^*(%) = 100 × ([공여자]_5h - [수여자]_5h)/[공여자]_5h (공식 1)

미결합 분율 (fu), p^*(%) = 100 - 결합%^* (공식 2)

여기서 [공여자]_5h는 5시간째 측정된 공여자 농도이다. [수여자]_5h 는 5시간째 측정된 수여자 농도이다. fb*는 혈장으로부터 측정된 결합 분율이다. fu, p^*는 혈장에 대한 계산된 미결합 분율이다. 와파린과 퀴니딘을 양성 대조군으로서 사용하였다.

4 및 63의 fb는 각각 97.92% 및 99.8%이었다. 따라서, 4 및 63 의 fu, p는 각각 2.08% 및 0.2%이었다.

유사하게, 4 및 63의 래트 뇌 단백질 결합도 평형 투석 방법을 사용하여 시험관내에서 평가하였다. 1 μM의 화합물을 뇌 균질물에서 투석 블록으로 37℃에서 5시간 동안 평가하였다. 공여자 및 수여자 측으로부터의 시료를 LC-MS/MS로 분석하였다. 상기 언급한 공식 (공식 1 및 공식 2)을 사용하여 뇌 단백질 결합 및 미결합 분율을 계산하였다. 광범위한 단백질 결합으로 인해, 4는 뇌 균질물 측정을 위해 4배 더 희석하였다. 4 및 63의 뇌 fu는 각각 0.29% 및 0.1%이었다.

미결합 뇌 대 혈장 비율 (뇌 K _puu )

상기 획득된 뇌 및 혈장 농도 (표 3A) 및 상기 획득한 뇌 fu 값을 기초으로 하여, 미결합 뇌 대 혈장 비율 (뇌 K_puu)을 4 및 63에 대해 다음과 같이 계산하였다.

화합물 4는 63 (평균=0.84)과 비교하여 매우 월등한 낮은 뇌 K_p,uu (평균=0.024)를 제시한다. 조직에서 결합되지 않은 약물 농도는 조직 구획에서 약리학적 효과를 발휘하도록 사용가능한 자유 약물이다. 4는 63과 비교하여 뇌 K_p,uu가 매우 낮기 때문에, 뇌에서 약리학적 효과를 발휘하도록 사용가능한 4의 양이 63과 비교하여 매우 낮음을 의미한다.

대안적으로, 화합물 4 및 63의 래트 뇌 단백질 결합은 배양 접시에서 300 μm 두께의 래트 뇌 절편 (선조체 영역)를 사용하여 시험관내에서 평가하였다. 이 방법에 의한 화합물 4 및 63의 뇌 fu는 각각 0.329% 및 0.057%이었다. 이 경우에, 4 및 63의 뇌 K_p,uu는 각각 0.028과 0.044이다.

실시예에 따라 제조된 본 발명의 추가적인 화합물에 대한 K_p, K_p,uu (뇌 균질물) 및 K_p,uu (뇌 절편) 결과는 표 3B에 열거되어 있다. 표 3B의 결과는 상기 기술된 방법에 따라 획득하였다.

P-당단백질의 잠재적 기질로서 화합물의 평가

실시예에 따라 제조된 화합물이 인간 P-당단백질 (P-gp)의 기질이 될 가능성을 시험관내 에서 투과성 지지체에서 성장한, P-gp를 과발현하는 다중약물 저항성 돌연변이 1-마르딘-다비 개 신장 (MDR1-MDCK)) (마르딘-다비 개 신장) 세포 단일층 상에서 평가하였다. 엘라크리다 (Elacridar)를 P-gp 매개성 퀴니딘 운반의 양성 대조군 저해제로서 사용하였다. P-gp의 더 높은 유출 비율은 화합물이 운반체에 의해 뇌 조직 밖으로 밀려남을 의미한다.

래트에 단일 정맥내 및 경구 투여 이후 약동학 평가: 3마리의 스프라그-달리 래트를 각 투여 경로 (정맥내 또는 경구)에 대해 각 화합물에 사용하였다. 정맥내 투여의 경우, 각 화합물의 1 mg/kg (용량 부피 = 5 mL/kg)을 음식 등쪽 정맥 주사를 통한 정맥내 경로에 의해 투여한 반면, 경구 경로의 경우 2.5 mg/kg (용량 부피 = 5 mL/kg)을 경구 위영양관을 통해 투여하였다. 투여 전, 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4 및 8시간째 혈액 시료를 꼬리 정맥을 통해 획득하였다. 추가적으로, 말단 출혈을 위해 24시간째 심장 천자를 통해 (이소플루란으로 마취 하에) 혈액 시료를 획득하였다. 모든 혈액 시료를 LC/MS-MS를 통해 약물 농도에 대해 분석하였다. C_max, T_max, AUC_last, AUC_inf, MRT_last, MRT_inf, T_1/2, V_ss 및 CL과 같은 약동학적 매개변수를 비구획 분석 (NCA)에 의해 획득하였다. 또한, 미결합 제거율 (CLu)를 다음과 같이 획득하였다.

Cl_u = Cl / f_{u, 혈장}.

F%는 다음과 같이 계산하였다.

F% = [AUC_inf (경구)/용량]/[AUC_inf (정맥내)/용량] × 100

(Zhivkova & Doytchinova, Molecular Pharmaceuticals 10: 3758-68 (2013)).

실시예 5: CYP 저해 데이터

인간 간 마이크로좀의 시험관내 연구는 표준 방법에 따라 전개되었다. 요약하면, 7가지 다른 농도의 테스트 항목 또는 단일 농도의 양성 대조군을 5분 내지 10분 동안 인간 간 마이크로좀 풀에서 각각의 CYP450 효소에 대한 단일 농도의 프로브 기질과 공동배양한 다음, 반응을 아세토니트릴 중 0.1% 포름산을 첨가하여 종결시켰다. 다음으로, 반응 이후 남은 프로브 기질의 정량화를 위해 시료를 LC-MS/MS로 분석하고, IC₅₀ 값을 비선형 회귀 분석으로 결정하였다. CYP2C9, CYP2D6, CYP3A4의 기질은 각각 디클로페낙, 덱스트로메토르판 및 미다졸람/테스토스테론이었다. 표 4의 데이터는 CYP2C9, CYP2D6 및 CYP3A4에 대한 실시예에 따라 제조된 화합물의 CYP 저해의 IC₅₀을 나타낸다.

실시예 6: 정맥내 주입을 사용한 원숭이 혈장 단백질 결합, 원숭이 K _p , 원숭이 K _p,uu (균질물/뇌 절편)

단일 Ⅳ 볼루스 용량에 이어서 화합물의 2시간 정맥내 주입을 원숭이에게 투여하였다 (3마리 원숭이/화합물). 볼루스 투여 직후 및 주입 종료 시점에 사전 투약된 대퇴 정맥으로부터 혈액을 수집하였다. 주입 이후 원숭이를 안락사시키고, 뇌 조직을 수집하였다. 혈장 (혈액의 원심분리에 의해 획득됨) 및 뇌 (완충액으로 균질화됨)의 독성역학 평가를 수행하여 화합물의 뇌 대 혈장 비율 (K_p)을 획득하였다. Kpuu는 상기에 논의한 바와 같이 혈장 fu 및 뇌 fu를 고려하여 계산하였다.

실시예 7: 야생형 KIT에 대한 생화학적 활성 검정법

야생형 KIT 활성의 척도로서 SCF 자극 검정법을 사용한 UT-7 세포 증식

UT-7 세포는 과립구 대식세포 콜로니 자극인자 (GM-CSF) 또는 줄기세포 인자 (SCF)에 의존하여 배양물에서 성장할 수 있는 인간 거대핵모세포 백혈병 세포주이다. UT-7 세포는 KIT 수용체 티로신 키나제의 활성화 그리고 세포 성장 및 증식을 지원할 수 있는 후속 하류 신호전달에 의해 SCF 자극에 반응한다 (Kuriu et al., 1999; Komatsu et al., 1991; Sasaki et al., 1995). 테스트 화합물은 UT-7 세포의 SCF 자극성 증식을 억제하는 능력에 대해 검정하였다.

SCF로 자극된 UT-7 세포 증식의 억제는 존재하는 아데노신 트리포스페이트 (ATP)의 양을 정량화하는 셀타이터-글로 검정법을 사용하여 평가되었으며, 이는 대사적 활성 세포의 판독값이며, 배양액에서 생존 세포의 수에 정비례한다. SCF-자극된 UT-7 세포 증식을 억제하는 테스트 화합물의 능력은 테스트 화합물의 25 μM 내지 95.4 pM 범위의 10개 지점 용량 곡선을 사용하여 결정하였다.

UT-7 세포는 10% FBS, 5 ng/mL GM-CSF 및 100 유닛/mL 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 IMDM에서 유지되었고, 37℃ 가습 조직 배양 배양기에서 성장하였다. UT-7 세포를 무혈청, GM-CSF가 없는 IMDM으로 1회 세척하였다. 다음으로 세포를 4% FBS 및 50 ng/mL SCF를 포함하는 IMDM에 재현탁하고, 384-웰 마이크로플레이트에서 22 μL 부피로 웰 당 2,500개 세포로 접종하였다. 다음으로 테스트 화합물의 10개 지점 일련의 용량 농도 (25.0 μM 내지 95.4 pM)를 각 웰 (0.25% DMSO 최종 농도)에 3.1 μL 부피로 세포에 첨가하고, 조직 배양 배양기 (5% CO₂, 37℃)에 72시간 동안 두었다. 테스트 화합물과 함께 3일 후, 셀타이터-글로 시약을 신선하게 준비하고, 25 μL의 시약을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 플레이트 진탕기로 300 rpm에서 10분 동안 실온에서 진탕함으로써 혼합하였다. 384-웰 플레이트에 대한 초민감성 발광 프로토콜을 사용하여 엔비전 플레이트 판독기로 플레이트를 판독하였다. 데이터는 0% 및 100% 억제 대조군으로 정규화하고, IC₅₀를 4개 매개변수 로지스틱 IC₅₀ 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다.

야생형 KIT 검정법

Kd 측정. 야생형 KIT 키나제를 포함하는 대부분의 검정법의 경우, 키나제 태그화 T7 파지 균주를 BL21 균주로부터 유래한 대장균 숙주에서 제조하였다. 대장균을 로그기로 성장시키고, T7 파지로 감염시키고, 용해될 때까지 32℃에서 진탕하면서 배양하였다. 스트렙타비딘으로 코팅된 자성 비드를 실온에서 30분 동안 바이오틴화된 소분자 리간드로 처리하여 키나제 검정법을 위한 친화성 수지를 생성하였다. 리간드화된 비드를 과량의 비오틴으로 차단시키고, 차단 완충액 (SeaBlock (피어스사), 1% BSA, 0.05% 트윈 20, 1 mM DTT)으로 세척하여 결합되지 않은 리간드를 제거하고, 비특이적 결합을 감소시켰다. 결합 반응을 1× 결합 완충액 (20% 씨블록, 0.17× PBS, 0.05% 트윈 20, 6 mM DTT)에서 키나제, 리간드화된 친화성 비드 및 테스트 화합물을 조합함으로써 조립하였다. 테스트 화합물은 100% DMSO에서 111× 스톡으로서 준비하였다. Kd를 3개의 DMSO 대조군 지점과 함께 11개 지점 3배 일련 화합물 희석을 사용하여 결정하였다. Kd 측정을 위한 모든 화합물은 100% DMSO에서 음파 전달 (비접촉 분배)에 의해 배분되었다. 다음으로, 화합물을 검정법 내에서 DMSO의 최종 농도가 0.9%가 되도록 직접 희석하였다. 모든 반응을 폴리프로필렌 384-웰 플레이트에서 수행하였다. 각각은 0.02 mL의 최종 부피였다. 검정 플레이트를 실온에서 1시간 동안 진탕하면서 배양하고, 친화성 비드를 세척 완충액 (1× PBS, 0.05% 트윈 20)으로 세척하였다. 다음으로, 비드를 용리 완충액 (1× PBS, 0.05% 트윈 20, 0.5 μM 비오틴화 친화성 리간드)에 재현탁하고, 30분 동안 진탕하면서 실온에서 배양하였다. 용리액의 키나제 농도를 qPCR로 측정하였다.

결합 상수 (Kd). 결합 상수 (Kd)를 힐 공식을 사용하여 표준 용량-반응 곡선으로 계산하였다. 반응 = 배경 + 신호 - 배경 1 + (Kd 힐 기울기 / 용량 힐 기울기). 힐 기울기를 -1로 설정하였다. 곡선을 레벤버그-마쿠아르트 알고리즘과 함께 비선형 최소 제곱 적합도를 사용하여 피팅하였다.

실시예에 따라 제조된 화합물에 대한 이러한 WT KIT 실험으로 획득된 결과는 하기 표 7에 요약되어 있다. 야생형 KIT 결합의 경우, 다음의 표기를 사용한다: < 10.0 nM = A; ≥ 10.1 nM 및 < 15 nM = B; ≥ 15.1 nM 및 < 20 nM = C. 증식 억제의 경우, 다음의 표기를 사용한다: < 90.0 nM = A; ≥ 90.1 nM 및 < 150 nM = B; ≥ 150.1 nM 및 < 200 nM = C.

Claims (20)

1. 화학식 I의 화합물
   

   

   
   이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물:
   식 중 A는
   

   

   이고;
   R₁은 수소 및 메틸로부터 선택되고;
   R₂는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,
   R₁ 및 R₂는 함께 시클로프로필을 형성하고;
   R₃은 수소 및 메틸로부터 선택되고;
   R₄는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,
   R₃ 및 R₄는 함께 시클로프로필을 형성하고;
   R₅는 수소 및 메틸로부터 선택되고;
   R₆은 수소 및 메틸로부터 선택되거나,
   R₅ 및 R₆은 함께 시클로프로필을 형성하거나,
   R₂ 또는 R₄ 중 하나는 R₆와 함께 시클로부틸을 형성하고;
   R₇은 수소이거나, R₂, R₄ 또는 R₆ 중 하나는 R₇과 함께 옥세탄, 테트라히드로퓨란 및 테트라히드로피란으로부터 선택된 고리를 형성하고, 상기 테트라히드로퓨란 또는 테트라히드로피란은 히드록실기로 선택적으로 치환되고;
   m은 0 또는 1이고;
   n은 0 또는 1이다.
2. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   이고;
   R₃은 수소 및 메틸로부터 선택되고;
   R₄는 수소 및 메틸로부터 선택되거나, R₃ 및 R₄는 함께 시클로프로필을 형성하고;
   R₅는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,
   R₄ 및 R₆은 함께 시클로부틸을 형성하거나,
   R₅ 및 R₆은 함께 시클로프로필을 형성하고;
   R₇은 수소인, 화합물.
3. 제 2항에 있어서,
   A는
   

   

   이고;
   R₃은 수소 및 메틸로부터 선택되고;
   R₄는 수소 및 메틸로부터 선택되거나, R₃ 및 R₄는 함께 시클로프로필을 형성하고;
   R₅는 수소 및 메틸로부터 선택되거나,
   R₅ 및 R₆은 함께 시클로프로필을 형성하고;
   R₇은 수소인, 화합물.
4. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   이고;
   w는 1 또는 2이고;
   t는 1 또는 2이고;
   s는 0 또는 1인, 화합물.
5. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   
   로부터 선택되는, 화합물.
6. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   
   로부터 선택되는, 화합물.
7. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   
   로부터 선택되는, 화합물.
8. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   
   로부터 선택되는, 화합물.
9. 제 1항에 있어서,
   A는
   

   

   
   로부터 선택되는, 화합물.
10. 하기 화합물
    

    

    
    또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물.
11. 제 10항에 있어서,
    

    

    인, 화합물.
12. 하기 화합물
    

    

    
    또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물.
13. 제 12항에 있어서,
    

    

    인, 화합물.
14. 하기 화합물
    

    

    
    또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물.
15. 제 14항에 있어서,
    

    

    인, 화합물.
16. 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항의 화합물, 이의 약제학적으로　허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물; 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
17. 질환 또는 병태를 필요가 있는 환자에서 치료하는 방법으로서, 제 1항 내지 제 15항 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증, 위창자 간질 종양, 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 어윙 육종, 확산성 거대 B 세포 림프종, 이상배아종, 골수이형성 증후군, 비강 NK/T 세포 림프종, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 뇌암으로부터 선택되는, 방법.
18. 제 17항에 있어서,
    상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증인, 방법.
19. 제 18항에 있어서,
    상기 전신 비만세포증은 무통성 전신 비만세포증 및 화상성 전신 비만세포증으로부터 선택되는, 방법.
20. 질환 또는 병태를 필요가 있는 환자에서 치료하는데 약제로서 사용되는, 제 1항 내지 제 15항 중 어느 하나에 따른 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 임의의 전술한 것의 용매화물로서, 상기 질환 또는 병태는 전신 비만세포증, 위창자 간질 종양, 급성 골수성 백혈병, 흑색종, 정액종, 두개간 배아세포 종양, 종격동 B 세포 림프종, 어윙 육종, 확산성 거대 B 세포 림프종, 이상배아종, 골수이형성 증후군, 비강 NK/T 세포 림프종, 만성 골수단핵구성 백혈병 및 뇌암으로부터 선택되는, 화합물.