KR20210021004A - 생식 보조 의료용 배지 - Google Patents

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KR20210021004A
KR20210021004A KR1020217000725A KR20217000725A KR20210021004A KR 20210021004 A KR20210021004 A KR 20210021004A KR 1020217000725 A KR1020217000725 A KR 1020217000725A KR 20217000725 A KR20217000725 A KR 20217000725A KR 20210021004 A KR20210021004 A KR 20210021004A
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KR1020217000725A
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다쓰마 야오
유타 아사야마
유이 스기야마
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후소 야쿠힝 고교 가부시끼가이샤
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Abstract

본원은 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는 생식 보조 의료 방법, 그 배지, 및 그 배지에 사용하기 위한 제를 제공한다.

Description

생식 보조 의료용 배지
본원은 생식 보조 의료용 배지 및 그것을 이용한 생식 보조 의료 방법 등에 관한 것이다.
근년, 임신을 생각하는 연령이 상승하고 있는 일도 있어, 불임증으로 고민하는 커플의 수는 해마다 증가하고 있다. 불임증의 치료에 있어서는, 그 상태에 따라서 수정을 보조하는 치료가 행해진다. 일반적으로는, 타이밍법→배란 유발법→인공 수정→체외 수정/현미 수정과 같이, 치료법이 스텝 업된다.
체외 수정은 체외에서 난자와 정자를 수정시키는 방법이다. 난자 및 정자의 전배양, 매정, 및 배(胚)배양 시에 사용하는 배지에는 통상, 무기염, 에너지원, 단백질/고분자, 항생 물질이 포함되고, 단백질/고분자로서는 알부민이 널리 사용되고 있다. 알부민은 혈장 등을 정제하여 얻어지는데, 얻어진 알부민은 중합체를 형성하기 쉬워 불안정하고, 그 안정화에는 지방산의 첨가가 유효하다는 것이 알려져 있다(비특허문헌 1 등). 지방산 중에서도 카프릴산이 알부민의 안정제로서 통상 사용되고 있다(비특허문헌 2 등).
현미 수정은 현미경하, 정자를 난자에 주입하여, 수정에 이르게 하는 방법이다. 체외 수정에 비해 현미 수정에서는 수정률은 향상되지만, 정자와 난자의 각각의 능력만으로 수정한다는 통상의 수정 프로세스의 결여, 물리적인 대미지, 배발생률의 저하, 에피제네틱스 질환의 증가가 의심되는 등의 문제가 지적되고 있다. 현미 수정을 피하기 위해서, 다른 생식 보조 의료에서의 수정률의 향상이 요구되고 있다.
게다가, 양호한 불임 치료 결과를 얻기 위해서, 상기의 어느 수정 방법에 있어서도, 수정률의 향상이 요망되고 있다.
Biochim. Biophys. Acta (2004) 1702(1): 9-17. 미국 약국방 Albumin Human의 항
본원의 과제는 생식 보조 의료에 있어서의 수정률을 향상시키는 방법 및 그 수단의 제공이다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 검토를 행한 바, 카프릴산 첨가 알부민으로부터 카프릴산을 제거한 알부민을 사용하여 조제한 배양액을 사용함으로써, 체외 수정의 수정률이 향상되는 것을 발견하여, 본원 발명에 이르렀다. 게다가, 본 발명자들은 카프릴산을 제거한 알부민에 안정제로서 여러 가지의 지방산(카프릴산은 아니다)을 첨가하여 사용함으로써, 카프릴산 첨가 알부민을 사용하는 경우에 비해 체외 수정의 수정률은 향상되는 것을 발견하여, 본원 발명에 이르렀다. 또, 본 발명자들은, 카프릴산 첨가 알부민을 이온 교환 수지로 정제하는 것에 의해, 카프릴산이 특이적으로 제거되는 것을 발견하여, 본원 발명에 이르렀다.
본원은 하기를 제공한다.
[1] 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제.
[2] 해당 생식 보조 의료가 인공 수정, 체외 수정, 또는 현미 수정을 포함하는, [1]에 기재된 제.
[3] 해당 생식 보조 의료가 체외 수정을 포함하는, [2]에 기재된 제.
[4] 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 추가로 함유하는, [1]∼[3] 중 어느 한 항에 기재된 제.
[5] 해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염이, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 그들의 염, 및 그들의 혼합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, [1]∼[4] 중 어느 한 항에 기재된 제.
[6] 해당 카프릴산 저함유 알부민이, 알부민 1g당 카프릴산을 유리 형태로서 50μmol 이하 포함하는, [1]∼[5] 중 어느 한 항에 기재된 제.
[7] 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제; 및
해당 제를 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하는 것의 설명;
을 포함하는, 생식 보조 의료에 있어서의 배지용 키트.
[8] 생식 보조 의료에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지.
[9] 해당 생식 보조 의료가 인공 수정, 체외 수정, 또는 현미 수정을 포함하는, [8]에 기재된 배지.
[10] 해당 생식 보조 의료가 체외 수정을 포함하는, [9]에 기재된 배지.
[11] 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 추가로 함유하는, [8]∼[10] 중 어느 한 항에 기재된 배지.
[12] 해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염이, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 그들의 염, 및 그들의 혼합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, [8]∼[11] 중 어느 한 항에 기재된 배지.
[13] 해당 카프릴산 저함유 알부민이, 알부민 1g당 카프릴산을 유리 형태로서 50μmol 이하 포함하는, [8]∼[12] 중 어느 한 항에 기재된 제.
[14] 생식 보조 의료에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지; 및
해당 배지를 생식 보조 의료에 사용하는 것의 설명;
을 포함하는, 생식 보조 의료에 있어서의 배지용 키트.
[15] 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는, 생식 보조 의료 방법.
[16] 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는, 인비트로 수정 방법.
[17] 카프릴산 저함유 알부민 및 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염의 존재하에, 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한 제를 제조하는, 해당 제의 제조 방법.
[18] 카프릴산 저함유 알부민 및 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염의 존재하에, 생식 보조 의료에 사용되는 배지를 제조하는, 해당 배지의 제조 방법.
[19] 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 첨가하는 것을 특징으로 하는, 생식 보조 의료에 사용되기 위한 카프릴산 저함유 알부민의 안정화 방법.
[20] 이온 교환 처리를 이용하는 것을 특징으로 하는, 단백질로부터 카프릴산을 제거하는 방법.
[21] 해당 단백질이 알부민인, [20]에 기재된 방법.
본 발명에 의하면, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용함으로써, 생식 보조 의료에 있어서의 수정률은 향상된다.
[도 1] 카프릴산을 제거, 재첨가한 HSA의 체외 수정률. *, *** 비교예와 비교하여 유의차 있음(* p＜0.05, *** p＜0.001, 카이 제곱 검정, Holm법으로 p치 조정).
[도 2] 카프릴산을 제거, 재첨가한 rHA의 체외 수정률. *** 비교예와 비교하여 유의차 있음(*** p＜0.001, 카이 제곱 검정, Holm법으로 p치 조정)
[도 3] 4℃ 보존 및 37℃ 가온 조건하에서의 각종 알부민의 안정성.
[도 4] 각종 유리 지방산을 첨가한 알부민의 수정률. *** 비교예와 비교하여 유의차 있음(*** p＜0.001, 카이 제곱 검정, Holm법으로 p치 조정).
[도 5] 팔미트산 부가 알부민의 배지로의 첨가 농도와 수정률. *** 비교예와 비교하여 유의차 있음(*** p＜0.001, 카이 제곱 검정, Holm법으로 p치 조정).
[도 6] 알부민으로의 팔미트산 부가 농도와 수정률. *** 비교예와 비교하여 유의차 있음(*** p＜0.001, 카이 제곱 검정, Holm법으로 p치 조정).
하나의 태양에 있어서, 본원은, 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제를 제공한다. 본원의 제는, 예를 들면 배지 제조의 원료로서, 혹은, 생식 보조 의료의 기초 배지 등에 적절히 첨가하여 사용되는 서플리먼트로서 사용될 수 있다.
다른 태양에 있어서 본원은, 생식 보조 의료에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 제공한다.
또 다른 태양으로서 본원은, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는, 생식 보조 의료 방법을 제공한다.
본원에 있어서 「배지」란, 배우자/배 등에 적용될 수 있는 것이면, 그 사용 목적은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 본원에 있어서의 배지는, 배우자/배 등을 배양하기 위해서, 배우자/배 등을 세정하기 위해서, 배우자/배 등을 현탁하기 위해서, 및 배우자/배 등을 보존하기 위해서 사용될 수 있다.
본원에 있어서, 생식 보조 의료란, 배우자를 인위적으로 조작하여 수정(인위적 수정)시켜 임신에 이르게 하기 위한 조작을 포함하는 치료 방법을 의미한다. 본원의 생식 보조 의료에 있어서는 인위적 수정이 반드시 행해질 필요는 없고, 인위적 수정의 준비를 위해서 행해지는 조작(예를 들면 채란이나 난자의 동결 보존)도 생식 보조 의료에 포함된다. 인위적 수정의 예로서, 인공 수정, 체외 수정, 현미 수정을 들 수 있다.
본원에 있어서, 생식 보조 의료의 대상은 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 포유동물(인간 및 인간 이외의 포유류(예를 들면 소, 말, 돼지, 개, 고양이, 마우스, 래트, 토끼, 원숭이))이고, 더 바람직하게는 인간이다. 인간 이외의 포유동물이 대상인 경우에는, 생식 보조 의료란, 당해 포유동물의 생산의 향상이나 품종 개량 등의 산업적 목적을 위해서 행해지는 처치를 포함할 수 있다. 게다가, 인간이나 인간 이외의 포유류의 배우자를 이용하는 수정 관련의 시험 연구도 생식 보조 의료에 포함될 수 있다.
본원에 있어서 인공 수정이란, 채취한 정자를 여성 생식기에 인공적으로 주입하는 조작을 의미한다. 채취한 정자는 통상, 주입 전에 세정 및 현탁되지만, 본원의 배지는 이와 같은 세정 및 현탁을 위한 용액으로서도 사용할 수 있다.
본원에 있어서 체외 수정이란, 체외에서 난자에 매정하여 수정시키는 조작을 의미한다. 본원의 배지는 당해 매정 시의 배지로서 사용될 수 있다. 통상, 수정란은 그 후 배양되어 어느 정도까지 분열한 후, 얻어진 배는 자궁 내에 이식되거나, 혹은 동결 보존된다. 본원의 배지는 자궁 내로의 이식 시의 배/수정란 등의 유지액으로서, 혹은 배/수정란 등의 동결 보존액으로서도 사용될 수 있다. 통상, 매정에는 채취한 정자로부터 운동성이 높은 정자가 선별되어 사용된다. 본원의 배지는 채취한 정자의 세정, 선별 등을 위해서 사용될 수 있다. 일반적으로 체외 수정을 포함하는 생식 보조 의료에서는, 채취한 난자 및 정자는 매정 전에 각각 전배양된다. 본원의 배지는 이와 같은 전배양에 사용될 수 있다.
본원에 있어서 현미 수정은 현미경하, 정자를 난자에 주입하여, 수정에 이르게 하는 방법이다. 수정 후는 체외 수정과 마찬가지로 일정 기간 배양되고, 배/수정란 등이 자궁 내에 이식되거나, 혹은 동결 보존된다. 본원의 배지는 이와 같은 조작에 있어서도 사용될 수 있다. 통상, 현미 수정에 있어서도 체외 수정과 마찬가지로 정자의 선별 및 전배양, 난자의 전배양 등이 행해진다. 본원의 배지는 이와 같은 현미 수정의 전후에 부수하는 조작에 있어서도 사용될 수 있다.
생식 보조 의료에 있어서는, 인위적 수정(인공 수정, 체외 수정, 현미 수정 등)에 더하여, 혹은, 인위적 수정에 대비하여, 난자/정자의 동결 보존, 배의 체외 배양, 배/배반포 이식, 부화 보조법, 배의 동결 보존, 난자의 체외 배양 등의 조작이, 환자의 상태나 증상에 따라 적절히 조합하여 행해진다. 본원의 배지는 이와 같은 인위적 수정의 전후에 부수하는 조작에 있어서도 사용될 수 있다.
본원에 있어서, 난자와 정자가 수정되었는지 여부는, 당해 기술 분야에 있어서의 통상의 기준에 비추어 결정된다. 예를 들면, 제 2 극체 및 자웅 전핵을 관찰할 수 있었던 경우를 수정이라고 판단할 수 있다.
하나의 실시형태에 있어서, 본원의 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지는, 생식 보조 의료에 있어서의 수정 전 및/또는 수정 시에 사용된다.
수정에 적합한 배지와 배발생에 적합한 배지는 일반적으로 상이하기 때문에, 통상 수정 후에는 배지는 교환된다. 본원의 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지는, 수정 전의 전배양 등에, 수정 시, 및 수정 후의 배발생 시에 사용될 수 있지만, 바람직하게는 수정 전 및 수정 시에 사용된다.
하나의 태양으로서 본원은, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는, 인비트로 수정 방법을 제공한다. 본원의 인비트로 수정은 예를 들면, 불임 치료에 있어서, 혹은, 수정 관련의 실험 등에 있어서 행해질 수 있다.
본원에 있어서, 카프릴산 저함유 알부민은, 카프릴산을 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미칠 정도로는 함유하지 않는 알부민을 의미한다. 카프릴산 저함유 알부민에 포함될 수 있는 카프릴산의 양은, 수정률 향상을 위해서 적은 편이 바람직하다.
카프릴산 저함유 알부민에 포함되는 카프릴산의 양은 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미치지 않는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 알부민 1g에 포함되는 카프릴산의 양은 유리 형태로서, 50μmol 이하, 바람직하게는 45μmol 이하, 보다 바람직하게는 40μmol 이하, 더 바람직하게는 30μmol 이하, 또한 더 바람직하게는 20μmol 이하, 또한 보다 더 바람직하게는 15μmol 이하, 더 바람직하게는 10μmol 이하이다. 또, 카프릴산 저함유 알부민의 예로서, 알부민 1g에 대해서 카프릴산(유리 형태로서)을 0.01∼50μmol, 보다 바람직하게는 0.01∼45μmol, 더 바람직하게는 0.01∼40μmol, 보다 더 바람직하게는 0.01∼30μmol, 또한 보다 더 바람직하게는 0.1∼20μmol, 더 바람직하게는 1∼15μmol, 보다 바람직하게는 2∼10μmol 포함하는 알부민을 들 수 있다. 혹은 알부민 1g에 포함되는 카프릴산(유리 형태로서)의 바람직한 범위는, 0.01μmol, 0.1μmol, 1μmol, 2μmol, 및 5μmol로부터 선택되는 하한치; 및 50μmol, 45μmol, 40μmol, 30μmol, 20μmol, 15μmol, 및 10μmol로부터 선택되는 상한치;의 조합에 의해 나타날 수 있다.
알부민의 양의 측정 방법은 특별히 한정되지 않고, 당해 기술 분야에서 통상 이용되는 방법에 의해 측정할 수 있다. 예를 들면 알부민의 양은 단백질량으로서, 예를 들면 브래드포드법에 의해 측정될 수 있다.
카프릴산(유리 형태로서)을 측정하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 당해 기술 분야에서 통상 이용되는 방법에 의해 측정할 수 있다. 예를 들면, 알부민 함유액을 추출하고(예를 들면 Bligh-Dyer 추출에 의해), 얻어진 지질 분획을(바람직하게는 트라이메틸실릴화 후에) 가스 크로마토그래피 질량 분석계에 제공하여 측정할 수 있다.
알부민에 포함되는 카프릴산(유리 형태로서)을 측정하는 바람직한 방법을 이하에 예시한다.
(1) 알부민에, 용매(예를 들면 물)를 가하고(예를 들면, 단백질 농도(예를 들면 브래드포드법에 의한다)로서 5w/v%가 되도록), 적절히 예를 들면 pH 7∼8(바람직하게는 pH 7.4)로 조정한다.
(2) 얻어진 알부민 함유액을 추출(예를 들면 Bligh-Dyer 추출)하고, 얻어진 지질 분획을(예를 들면 트라이메틸실릴화 후에) 가스 크로마토그래피 질량 분석계에 제공하여 유리 카프릴산량을 측정한다.
본원의 카프릴산 저함유 알부민은, 천연 유래(예를 들면 난백 알부민, 돼지 유래 알부민, 소 유래 알부민, 인간 유래 알부민)의 알부민이어도, 소형, 돼지형, 또는 인간형 등의 유전자 재조합체의 알부민이어도 된다. 인간(난자, 정자, 배 등을 포함한다)에 사용되는 경우에는, 바람직하게는 인간 혈청 알부민(HSA)이 사용되고, 더 바람직하게는 감염증 예방의 관점에서, 재조합 인간 알부민(rHSA)이 사용될 수 있다.
본원에 있어서 알부민의 제조 방법은 특별히 한정되지 않고, 통상적 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 알부민은 혈장으로부터 정제되거나, 또는 유전자 재조합 기술을 사용하여 효모 등으로 산생시키고 정제하는 것에 의해 제조된다. 당해 정제 방법으로서는, 예를 들면, 저온 에탄올 분획법, 열처리법, 및 크로마토그래피 정제법을 들 수 있다.
정제 후(특히 저온 에탄올 분획법 및 열처리법에 의한 정제 후)의 알부민은 중합화되기 쉬워 불안정하기 때문에, 카프릴산(유리 형태 또는 염 형태)이 첨가될 수 있다. 카프릴산이 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미칠 정도로 첨가되어 있는 경우에는, 카프릴산을 제거함으로써, 본원의 카프릴산 저함유 알부민을 얻을 수 있다.
하나의 실시태양에 있어서, 본원에 이용되는 카프릴산 저함유 알부민으로서는, 저온 에탄올 분획법(예를 들면 콘의 Fraction V) 또는 열처리법, 바람직하게는 저온 에탄올 분획법으로 정제되고, 또한 카프릴산(유리 형태 또는 염 형태)이 첨가된 알부민으로부터, 카프릴산이 제거된 알부민이 사용될 수 있다.
상업적으로 입수 가능한 알부민의 예에는 하기의 것을 들 수 있고, 적절히 카프릴산을 제거하여, 본원의 카프릴산 저함유 알부민으로서 이용할 수 있다.
재조합 인간 알부민: CellPrime rAlbumin AF-s(Merck)
인간 혈장 유래 알부민: Human Serum Albumin Solution(Irvine Scientific), HUMAN SERUM ALBUMIN(InVitroCare)
카프릴산을 제거하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 지방산의 제거에 통상 이용되는 방법(예를 들면 활성탄을 이용하는 방법)을 사용할 수 있다. 혹은 하기에 기재하는 이온 교환 처리를 이용한 카프릴산 제거 방법을 이용하여, 인위적으로 첨가된 카프릴산을 제거함으로써 본원의 카프릴산 저함유 알부민을 얻을 수 있다.
하나의 태양으로서, 본원은 이온 교환 처리를 이용하여 단백질(예를 들면 알부민)로부터 카프릴산을 특이적으로 제거하는 방법을 제공한다. 예를 들면 생체로부터 채취 또는 발효에 의해 얻어진 생체 유래의 단백질에는 정제 후에도 지방산이 잔존하는 경우가 있어, 본원의 방법은 생체 유래의 단백질로부터 카프릴산을 제거하기 위해서 사용될 수 있다. 본원의 방법은 인위적으로 카프릴산(유리 형태 또는 염 형태)이 첨가된 단백질로부터 카프릴산을 제거하기 위해서도 사용될 수 있다.
본원의 카프릴산 제거 방법에서 사용하는 이온 교환 처리의 방법은 특별히 한정되지 않지만, 양이온 교환 처리 및 음이온 교환 처리의 양방이 행해지는 것이 바람직하다.
양이온 교환 처리는, 약산성 양이온 교환 처리(예를 들면 카복실산기를 교환기로서 이용한다)여도, 강산성 양이온 교환 처리(예를 들면 설폰산기를 교환기로서 이용한다)여도 되지만, 강산성 양이온 교환 처리(예를 들면 설폰산기를 교환기로서 이용한다)인 것이 바람직하다. 교환기의 이온 형태는 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 수소, 나트륨염, 칼륨염 등을 들 수 있고, 바람직하게는 수소가 이용된다. 양이온 교환 처리는 예를 들면 양이온 교환 수지(예를 들면 약산성 양이온 교환 수지, 강산성 양이온 교환 수지)를 이용하여, 통상의 방법에 따라서 행할 수 있다.
음이온 교환 처리는, 약염기성 음이온 교환 처리(예를 들면 1∼3급 아미노기를 교환기로서 이용한다)여도, 강염기성 음이온 교환 처리(예를 들면 4급 암모늄을 교환기로서 이용한다)여도 되지만, 강염기성 음이온 교환 처리인 것이 바람직하다. 4급 암모늄의 예로서는, 트라이메틸암모늄기 및 다이메틸에탄올암모늄기를 들 수 있고, 바람직하게는 트라이메틸암모늄기가 이용된다. 교환기의 이온 형태는 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 염화물, 수산화물, 아세트산염, 폼산염을 들 수 있고, 바람직하게는 수산화물이 사용된다. 음이온 교환 처리는 예를 들면 음이온 교환 수지(예를 들면 약염기성 음이온 교환 수지, 강염기성 음이온 교환 수지)를 이용하여, 통상의 방법에 따라서 행할 수 있다.
이온 교환 수지의 모체는 특별히 한정되지 않고, 통상 이온 교환 수지의 모체로서 사용되는 것(예를 들면 스타이렌 다이바이닐벤젠)을 이용할 수 있다.
바람직한 이온 교환 수지로서는, 작업성의 관점에서, 양이온 교환 수지와 음이온 교환 수지를 양방 포함하는 혼상 수지(예를 들면, AG 501-X8(D)(BIO-RAD), 및 AG 501-X8(BIO-RAD)을 이용하는 것이 바람직하다.
본원의 카프릴산 제거 방법은, 예를 들면, 이온 교환 수지와 카프릴산을 함유할 수 있는 단백질(알부민)을 적당한 용매(예를 들면 물)하에서 혼합(바람직하게는, 저온(예를 들면 1∼10℃, 바람직하게는 2∼6도)·차광하, 예를 들면 1∼48시간, 바람직하게는 3∼36시간, 더 바람직하게는 5∼30시간)하는 것에 의해 행할 수 있다.
얻어진 단백질 함유액은 그대로, 혹은 pH의 조정, 안정제의 첨가 등, 당해 기술 분야에서 알려진 단백질의 안정화 기술을 적절히 행하여, 카프릴산 저함유 단백질 함유제로서 사용할 수 있다.
혹은, 얻어진 단백질 함유액은 동결 건조나 한외 여과 등에 의해 농축되어도 된다. 또한 여과에 의해 바이러스·세균 등의 제거를 행해도 된다. 이 경우에도 당해 기술 분야에서 알려진 단백질의 다른 안정화 기술이 적절히 실시되어도 된다.
본원의 카프릴산 저함유 알부민은, 인위적으로 카프릴산이 첨가되어 있지 않은 알부민이어도 된다. 예를 들면, 카프릴산 저함유 알부민은 저온 에탄올 분획법(예를 들면 콘의 Fraction V) 또는 열처리법, 바람직하게는 저온 에탄올 분획법으로 정제된 알부민으로서, 카프릴산이 인위적으로 첨가되어 있지 않은 알부민을 들 수 있다. 이들 정제법으로 정제된 알부민은 불안정할 수 있기 때문에, 적절히 안정화 기술을 실시하여 사용하는 것이 바람직하다.
알부민은, 여러 가지의 물질과 결합하는 능력이 높은 단백질이고, 예를 들면 혈청 유래의 알부민은 혈청 중에 포함되는 여러 가지의 물질과 결합하고 있다. 그 때문에 인위적으로 카프릴산이 첨가되어 있지 않더라도 알부민은 생체 유래의 카프릴산을 담지하는 경우가 있지만, 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미치지 않는 양이면 포함되어 있어도 된다. 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미칠 수 있는 양이 포함되어 있는 경우에는, 본원의 이온 교환 처리를 이용하는 카프릴산 제거 방법 또는 활성탄을 이용하는 방법 등의 종래 방법에 의해 카프릴산을 제거하고, 적절히 안정화 기술을 실시하여 사용할 수 있다.
본원에 있어서, 배지에 포함되는 카프릴산 저함유 알부민의 양은, 특별히 한정되지 않고, 생식 보조 의료에 있어서의 그 배지의 사용 목적에 따라서, 통상 사용되는 범위에 있어서 적절히 선택될 수 있다. 예를 들면, 배지에 포함되는 카프릴산 저함유 알부민의 농도는 0.001∼5w/v%, 바람직하게는 0.01∼3w/v%, 보다 바람직하게는 0.05∼2w/v%, 보다 더 바람직하게는 0.1∼1w/v%일 수 있다. 혹은, 배지에 포함되는 카프릴산 저함유 알부민의 양의 바람직한 범위는, 0.001w/v%, 0.01w/v%, 0.05w/v%, 및 0.1w/v%로부터 선택되는 하한치; 및 5w/v%, 3w/v%, 2w/v%, 및 1w/v%로부터 선택되는 상한치;의 조합에 의해 나타날 수 있다.
본원의 하나의 실시형태에 있어서, 본원의 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제, 및 본원의 생식 보조 의료에 사용하기 위한 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지는, 각각, 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 추가로 함유하고 있어도 된다. 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 함유함으로써, 카프릴산 첨가 알부민을 사용하는 경우와 비교하여 생식 보조 의료의 효과(예를 들면 수정률)는 개선되면서, 알부민을 안정화(예를 들면 중합체의 형성 방지)할 수 있다. 당해 제 또는 배지의 제조에 있어서, 효율적인 알부민의 안정화가 초래되도록, 카프릴산 저함유 알부민과 당해 지방산 또는 그의 염은 밀접하게 혼합되는 것이 바람직하고, 다른 임의의 성분과 혼합되기 전에, 카프릴산 저함유 알부민과 당해 지방산 또는 그의 염이 혼합되는 것이 바람직하다.
하나의 태양으로서, 본원은 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 첨가하는 것을 특징으로 하는, 생식 보조 의료에 사용되기 위한 카프릴산 저함유 알부민의 안정화 방법을 제공한다. 당해 방법을 사용함으로써, 카프릴산 첨가 알부민을 사용하는 경우와 비교하여 생식 보조 의료의 효과(예를 들면 수정률)를 향상시키면서, 알부민을 안정화(예를 들면 중합체의 형성 방지)할 수 있다. 당해 방법에 있어서, 생식 보조 의료 시에, 당해 지방산 또는 그의 염과 카프릴산 저함유 알부민을 포함하는 혼합물이 형성되어 있으면 된다. 즉, 해당 지방산 또는 그의 염과 카프릴산 저함유 알부민이 생식 보조 의료에 앞서 혼합되어 있어도 되고, 생식 보조 의료 시에 해당 지방산과 카프릴산 저함유 알부민이 혼합되어도 된다. 알부민은 조기에 안정화되는 것이 바람직하고, 카프릴산 저함유 알부민의 제조 후에는 신속하게 해당 지방산 또는 그의 염이 첨가되는 것이 바람직하다.
해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염은, 카프릴산 첨가 알부민을 사용하는 경우와 비교하여 생식 보조 의료의 효과(예를 들면 수정률)가 개선되고, 알부민을 안정화(예를 들면 중합체의 형성 방지)할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않는다. 해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염은 단일의 지방산 및/또는 그의 염이어도, 복수의 지방산 및/또는 그의 염의 혼합이어도 된다. 당해 지방산 또는 그의 염의 바람직한 예로서, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 그들의 염, 및 그들의 혼합을 들 수 있고, 당해 혼합에는 적어도 팔미트산 또는 그의 염이 포함되는 것이 보다 바람직하다. 더 바람직한 예로서, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 그들의 염, 및 그들의 혼합을 들 수 있다. 특히 바람직한 예로서, 팔미트산 및 그의 염을 들 수 있다.
해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산의 염은, 생리학적으로 허용되는 염, 예를 들면, 나트륨염이나 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 칼슘염, 마그네슘염 및 바륨염 등의 알칼리 토류 금속염; 아르기닌이나 라이신 등의 염기성 아미노산염; 암모늄염이나 트라이사이클로헥실암모늄염 등의 암모늄염; 모노에탄올아민염, 다이에탄올아민염, 트라이에탄올아민염, 모노아이소프로판올아민염, 다이아이소프로판올아민염 및 트라이아이소프로판올아민 등의 각종의 알칸올아민염인 것이 바람직하다.
본 발명의 보다 바람직한 당해 지방산의 염의 예로서는, 알칼리 금속염, 알칼리 토류 금속염, 및 그의 혼합을 들 수 있다.
본원에 있어서 사용되는 해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염의 양은, 카프릴산 첨가 알부민을 사용하는 경우와 비교하여 생식 보조 의료의 효과(예를 들면 수정률)가 개선되고, 알부민을 안정화(예를 들면 중합체의 형성 방지)할 수 있는 양이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 알부민 1g에 대해서 당해 지방산 또는 그의 염이, 유리 형태로서 10∼100μmol, 바람직하게는 20∼80μmol, 더 바람직하게는 30∼50μmol 포함된다. 혹은, 알부민 1g에 대한 해당 지방산 또는 그의 염의 양의 바람직한 범위는, 유리 형태로서, 5μmol∼100μmol의 범위, 예를 들면, 5μmol, 10μmol, 20μmol, 및 30μmol로부터 선택되는 하한치; 및 100μmol, 90μmol, 80μmol, 70μmol, 60μmol, 및 50μmol로부터 선택되는 상한치;의 조합에 의해 나타날 수 있다.
본원의 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제의 형상은 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 적당한 용매(예를 들면, 물, 완충액) 등과 혼합된 액체(적절히 바람직한 pH(예를 들면 pH 7∼8)로 조제된다), 동결 건조 등이 된 고체일 수 있다. 본원의 제에는, 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미치지 않는 한, 배지 구성 성분으로서 공지된 첨가물을 포함하고 있어도 된다. 예를 들면, 이들로 한정되지 않지만, 무기염(NaCl, KCl, MgSO4, KH2PO4, CaCl2, NaHCO3 등), 당류(예를 들면 글루코스 등), 유기산(예를 들면 피루브산, 락트산 등), 아미노산(예를 들면 L-글루타민 등), 비타민류(예를 들면 아스코르브산 등), 항생 물질(예를 들면 겐타마이신 등) 등을 들 수 있다. 또한, 종래부터 생식 보조 의료에 있어서의 배양 등에 이용되어 온 다른 첨가물도 적절히 포함할 수 있다. 첨가물은, 수정이나 제품의 안정성 등에 악영향을 미치지 않는 한에 있어서, 각각 공지된 농도 범위 내에서 포함되는 것이 바람직하다.
본원의 생식 보조 의료에 사용하기 위한 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지에는 카프릴산 저함유 알부민 이외에는 카프릴산에 공급할 수 있는 성분은 함유되지 않는 것이 바람직하다. 당해 배지 중에 포함될 수 있는 카프릴산의 양은 생식 보조 의료(예를 들면 수정)에 악영향을 미치지 않는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 배지 1000g당에 포함되는 카프릴산의 양은 유리 형태로서, 2500μmol 이하, 바람직하게는 2200μmol 이하, 보다 바람직하게는 2000μmol 이하, 더 바람직하게는 1800μmol 이하, 또한 더 바람직하게는 1500μmol 이하, 또한 보다 더 바람직하게는 1400μmol 이하, 더 바람직하게는 1300μmol 이하이다. 더욱이, 배지 1000g에 포함되는 카프릴산(유리 형태로서)량의 예로서, 0.01∼2500μmol, 바람직하게는 0.1∼2200μmol, 더 바람직하게는 0.5∼2000μmol, 보다 더 바람직하게는 1∼1800μmol, 또한 보다 더 바람직하게는 2∼1500μmol, 더 바람직하게는 3∼1400μmol, 보다 바람직하게는 5∼1300μmol을 들 수 있다. 혹은 배지 1000g에 포함되는 카프릴산(유리 형태로서)의 양의 바람직한 범위는, 0.01μmol, 0.1μmol, 0.5μmol, 1μmol, 2μmol, 3μmol, 4μmol, 및 5μmol로부터 선택되는 하한치; 및 2500μmol, 2000μmol, 1800μmol, 1500μmol, 1400μmol, 1300μmol, 1200μmol, 1100μmol, 및 1000μmol로부터 선택되는 상한치;의 조합에 의해 나타날 수 있다.
본원의 생식 보조 의료에 사용하기 위한 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지의 형상은 특별히 한정되지 않고, 고체 배지(한천 배지 등), 액체 배지 등, 분말 배지(예를 들면 물에 녹여 액체 배지로서 사용된다) 등, 생식 보조 의료에 있어서의 배지의 사용 목적에 따라서 적절히 선택되고, 통상적 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 본원 배지는, 상기의 본원의 제와 마찬가지로, 수정에 악영향을 미치지 않는 한, 배지 구성 성분으로서 공지된 첨가물을 공지된 농도 범위로 포함하고 있어도 된다. 예를 들면, 본원의 생식 보조 의료에 사용하기 위한 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지는 생식 보조 의료용으로서 알려진 기지의 배지(예를 들면, HTF 배지, KSOMAA 배지, HFF99 배지, HiGROW IVF 배지)에 카프릴산 저함유 알부민을 첨가하는 것에 의해 제조할 수 있다.
본원의 다른 태양에 있어서, 본원의 제 또는 배지, 및 이들이 생식 보조 의료에 있어서 사용되는 것의 설명을 포함하는, 키트가 제공된다. 해당 설명은, 그 형태는 특별히 한정되지 않고, 사용 설명서여도, 당해 설명의 내용을 인터넷상에서 열람하기 위한 액세스 정보(URL, QR 코드 등)가 기재되어 있어도 된다.
실시예
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 설명하지만, 본 발명은 이들로 한정되는 것은 아니다.
시험예 1. 이온 교환 처리에 의한 카프릴산 제거
1.1 카프릴산 제거 처리
미리 초순수로 세정한 이온 교환 수지(AG 501-X8(D), BIO-RAD)와 인간 혈청 알부민(HSA, Irvine Scientific) 또는 10% 유전자 재조합 인간 알부민(rHA, Merck)을 혼합 후, 로테이터(RT50, TAITEC)를 이용하여 4℃ 차광하에서 24시간 온화하게 교반했다. 처리 후의 알부민 용액을 회수하고, 브래드포드법에 의해 단백질 농도를 정량하여, 5w/v%(pH 7.4)가 되도록 초순수와 2mol/L NaOH로 조제했다.
1.2 유리 지방산 측정
처리 전의 HSA(비교예 1)와 rHA(비교예 2), 처리 후의 HSA(실시예 1)와 rHA(실시예 2)를 각각 Bligh-Dyer 추출하고, 얻어진 지질 분획을 트라이메틸실릴화 후 가스 크로마토그래피 질량 분석계(7890A GC & 5975C GC/MSD, Agilent)에 제공하여 유리 지방산 농도를 측정했다. 얻어진 결과를 표 1에 나타낸다.
표 1. 이온 교환 처리 전후의 5w/v% 알부민 용액 중의 유리 지방산 농도(μmol/L)
Figure pct00001
표 1에 나타내는 바와 같이, 이온 교환 처리를 행함으로써, 알부민 용액에 포함되어 있는 유리 지방산 중, 카프릴산을 특이적으로 제거할 수 있었다.
시험예 2. 카프릴산의 수정 저해능
2.1 배지의 조제
상기 표 1에서 나타낸 4종의 알부민 용액, 및 실시예 1에 4,000μmol/L의 카프릴산 나트륨을 첨가한 알부민 용액(실시예 1+4000 카프릴산), 또는 실시예 2에 2,000μmol/L, 4,000μmol/L의 카프릴산 나트륨을 첨가한 알부민 용액(실시예 2+2000 카프릴산, 실시예 2+4000 카프릴산)을 제작하고, HTF 배지에 0.5w/v%가 되도록 첨가했다. 이들 배지 200μL에 미네랄 오일을 중층하고, 37℃, 6v/v% CO2 조건하에서 하룻밤 평형화한 것을 정자의 전배양과 체외 수정에 사용했다.
2.2 정자의 회수
C57BL/6N계 웅성 마우스(일본 SLC)를 도살 후, 정소 상체 미부를 잘라냈다. 그 정소 상체 미부 중앙의 정소 상체관을 절개하여 얻어진 정자괴(塊)를, 미네랄 오일하에 제작한 0.1w/v% 폴리바이닐 알코올(PVA) 함유 HTF 배지 200μL 중에 채취했다. 채취한 정자괴를 37℃, 6v/v% CO2 조건하에서 10분간 배양하고 정자를 균일하게 분산시켰다.
2.3 정자의 전배양
2.1에서 조제한 배지에 2.2에서 회수한 정자를 2×106마리/mL가 되도록 도입하고, 체외 수정까지 37℃, 6v/v% CO2 조건하에서 1시간 전배양했다.
2.4 난자의 회수
C57BL/6N계 자성 마우스(일본 SLC)에, PMSG(임마 혈청성 성선 자극 호르몬, 아스카 제약, 세로트로핀(상표))을 7.5 국제단위 복강 내에 투여하고, 48시간 후에 hCG(인간 융모성 성선 자극 호르몬, 아스카 제약, 고나트로핀(상표))를 7.5 국제단위 복강 내에 투여했다. hCG 투여 15시간 후에 당해 마우스를 도살하고, 곧바로 난관을 잘라냈다. 난관 팽대부로부터 난자-난구세포 집합체를, 2.1에서 조제한 배지에 회수했다. 회수한 난자-난구세포 집합체는, 체외 수정까지 37℃, 6v/v% CO2 조건하에서 배양했다.
2.5 체외 수정
2.4에서 준비한 난자-난구세포 집합체가 들어 있는 배지에 2.3에서 준비한 정자를 100마리/μL가 되도록 가했다. 37℃, 6v/v% CO2 조건하에서 6시간 매정한 후, 제 2 극체 및 자웅 전핵을 관찰할 수 있었던 알을 수정란으로 판정하고, 이하의 식에 적용시켜 수정률을 산출했다.
수정률(%) = 수정란/정상적인 형태의 난자수×100
얻어진 결과를 도 1, 도 2에 나타낸다.
도 1, 2에 나타내는 바와 같이, 이온 교환 처리에 의해 카프릴산을 제거하면 수정률은 향상되고, 4,000μmol/L의 카프릴산을 재첨가하면 다시 수정률은 저하되었다. 한편으로, 2,000μmol/L의 카프릴산은 수정률에 악영향을 미치지 않았다. 이 결과는, 이온 교환 처리를 행한 실시예 1, 2의 알부민이, 비교예 1, 2의 알부민보다 수정률 향상 작용을 초래할 수 있는 점에서 우수한 것, 및 그 효과에는 카프릴산이 관여하고 있는 것을 나타낸다.
시험예 3. 카프릴산을 제거한 알부민의 안정화
카프릴산을 제거한 알부민은 체외 수정률의 향상에 유효했지만, 그 반면, 불안정하여 가온에 의해 용이하게 중합화된다. 그래서, 카프릴산 이외의 지방산을 실시예 2에 가하고, 가온 조건하에서 중합체화를 억제할 수 있는 농도를 검토했다.
3.1 알부민으로의 유리 지방산의 부가
팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산을 에탄올로 1mg/mL로 조제하고, 팔미트산 19.2μL, 스테아르산 21.3μL, 올레산 21.2μL, 리놀레산 21.0μL를 용기에 취하고, 질소 가스를 분출하여 건조 고화시켰다. 거기에 실시예 2의 알부민을 100μL 가하고 37℃에서 2시간 교반하는 것에 의해 총농도 3000μmol/L의 4종 혼합 유리 지방산(FFA MIX)을 부가한 알부민을 제작했다. 0.2μm의 시린지 필터로 여과 멸균하고, 사용 시까지 4℃ 차광하에서 보존했다. 마찬가지의 방법으로, 표 2에 나타내는 농도의 FFA MIX를 실시예 2의 알부민에 부가하고 시험에 제공했다.
표 2. 실시예 2에 부가한 유리 지방산의 종류와 농도
Figure pct00002
3.2 알부민의 안정성 평가
표 2의 (1)-(8)을 37℃에서 7일간 보관하고, 0.5w/v%로 희석 후, 9μL를 비변성 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(Native PAGE)용 sample buffer 3μL와 혼합하고, 7.5w/v% 겔에 10μL씩 어플라이하여, Native PAGE를 행했다. 쿠마시 브릴리언트 블루로 단백질을 염색하여, 알부민의 중합의 유무를 평가했다. 결과를 도 3에 나타낸다.
도 3에 나타내는 바와 같이, 알부민에 유리 지방산을 가하면 폭넓은 농도 범위에서 중합체화를 억제할 수 있었다.
시험예 4. 각종 유리 지방산을 부가한 알부민의 수정률
2000μmol/L의 각종 유리 지방산을 실시예 2의 5w/v% 알부민에 시험예 3과 마찬가지의 방법으로 부가하고(표 3), HTF 배지에 0.5w/v% 알부민이 되도록 첨가 후, 시험예 2에 기재된 체외 수정 실험과 마찬가지의 조건에서 검토를 행했다. 얻어진 결과를 도 4에 나타낸다.
표 3. 검토에 이용한 유리 지방산과 그 농도
Figure pct00003
도 4와 같이, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산을 부가한 알부민, 및 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산의 4종을 혼합한 유리 지방산을 각각 부가한 알부민을 이용한 경우, 비교예 2의 카프릴산 함유 알부민보다 수정률 향상 작용을 초래할 수 있는 점에서 우수한 것을 나타낸다.
시험예 5. 팔미트산 부가 알부민의 배지로의 첨가 농도
시험예 4에 있어서 가장 수정률이 높았던 실시예 6의 팔미트산 부가 알부민을, 0.5w/v%(10배 희석, 실시예 6), 0.25w/v%(20배 희석, 실시예 13), 0.125w/v%(40배 희석, 실시예 14), 0.0625w/v%(80배 희석, 실시예 15), 0.03125w/v%(160배 희석, 실시예 16)로 HTF 배지에 첨가하고, 시험예 2에 기재된 체외 수정 실험과 마찬가지의 조건에서 검토를 행했다. 비교예 2의 알부민을 0.5w/v%로 HTF 배지에 첨가한 경우와 비교한 결과를 도 5에 나타낸다. 한편, 0.5w/v%(10배 희석, 실시예 6)의 결과는 도 4에 나타내는 대로이다.
도 4 및 도 5와 같이, 이온 교환 처리 후에 2000μmol/L의 팔미트산을 부가한 실시예 6의 알부민은, 모든 배지 중 농도(0.03125w/v%-0.5w/v%(10배-160배 희석))에서, 비교예 2의 알부민보다 수정률 향상 작용을 초래했다.
시험예 6. 알부민으로의 팔미트산의 부가 농도
실시예 6의 배량(4000μmol/L)의 팔미트산을 실시예 2에 부가하고, 0.5w/v%(10배 희석, 실시예 17), 0.25w/v%(20배 희석, 실시예 18), 0.125w/v%(40배 희석, 실시예 19)로 HTF 배지에 첨가 후, 시험예 2에 기재된 체외 수정 실험과 마찬가지의 조건에서 검토를 행했다. 비교예 2의 알부민을 0.5w/v%로 HTF 배지에 첨가한 경우와 비교한 결과를 도 6에 나타낸다.
도 6과 같이, 이온 교환 처리 후에 4000μmol/L의 팔미트산을 부가한 실시예 17의 알부민은, 모든 배지 중 농도(0.125w/v%-0.5w/v%(10배-40배 희석))에서, 비교예 2의 알부민보다 수정률 향상 작용을 초래했다.
본원의 제 또는 배지를 이용하면 수정률을 향상시킬 수 있다.

Claims (19)

  1. 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제.
  2. 제 1 항에 있어서,
    해당 생식 보조 의료가 인공 수정, 체외 수정, 또는 현미 수정을 포함하는, 제.
  3. 제 2 항에 있어서,
    해당 생식 보조 의료가 체외 수정을 포함하는, 제.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 추가로 함유하는, 제.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염이, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 그들의 염, 및 그들의 혼합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 제.
  6. 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 제; 및
    해당 제를 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하는 것의 설명;
    을 포함하는, 생식 보조 의료에 있어서의 배지용 키트.
  7. 생식 보조 의료에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지.
  8. 제 7 항에 있어서,
    해당 생식 보조 의료가 인공 수정, 체외 수정, 또는 현미 수정을 포함하는, 배지.
  9. 제 8 항에 있어서,
    해당 생식 보조 의료가 체외 수정을 포함하는, 배지.
  10. 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 추가로 함유하는, 배지.
  11. 제 7 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    해당 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염이, 라우르산, 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 팔미톨레산, 마가르산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 그들의 염, 및 그들의 혼합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 배지.
  12. 생식 보조 의료에 사용하기 위한, 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지; 및
    해당 배지를 생식 보조 의료에 사용하는 것의 설명;
    을 포함하는, 생식 보조 의료에 있어서의 배지용 키트.
  13. 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는, 생식 보조 의료 방법.
  14. 카프릴산 저함유 알부민을 함유하는 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는, 인비트로 수정 방법.
  15. 카프릴산 저함유 알부민 및 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염의 존재하에, 생식 보조 의료에 사용되는 배지에 사용하기 위한 제를 제조하는, 해당 제의 제조 방법.
  16. 카프릴산 저함유 알부민 및 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염의 존재하에, 생식 보조 의료에 사용되는 배지를 제조하는, 해당 배지의 제조 방법.
  17. 탄소수 10∼20의 포화 또는 불포화 지방산 또는 그의 염을 첨가하는 것을 특징으로 하는, 생식 보조 의료에 사용되기 위한 카프릴산 저함유 알부민의 안정화 방법.
  18. 이온 교환 처리를 이용하는 것을 특징으로 하는, 단백질로부터 카프릴산을 제거하는 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    해당 단백질이 알부민인, 방법.
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