KR20180093179A - 천식 또는 알레르기 질환 신속 진단용 키트 - Google Patents

천식 또는 알레르기 질환 신속 진단용 키트 Download PDF

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Abstract

기저부, 상기 기저부 상에 형성되는 제1반응부, 및 상기 제1반응부와 상기 기저부 사이에 형성된 전개막을 포함하는 스트립을 포함하는 천식 진단용 키트이고, 상기 제1반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank))의 하이브리도마 세포주로부터 발현되는 단일클론 항체를 포함하고, 상기 제2반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현된 단일클론 항체를 포함하는, 천식 진단용 키트가 제공된다.

Description

천식 또는 알레르기 질환 신속 진단용 키트{RAPID KIT FOR DIAGNOSING ASTHMA OR ALLERGIC DISEASE}
본 발명은 천식 또는 알레르기 질환 진단용 키트에 관한 것이다. 본 발명은 종래 영유아 또는 소아에서 진단이 용이하지 않았던 천식 또는 알레르기 질환을 신속하게 외부(병원, 외래) 또는 집에서 면역 크로마토그래피 방법을 이용해서 20분이내 신속하게 진단할 수 있는 키트에 관한 것이다.
천식과 알레르기 질환은 전세계적으로 유병률과 중증도가 증가하고 있다. 미국에서는 7%의 소아들이 천식을 앓고 있고, 또한 기관지 천식과 유사한 기도 질환인 만성 비부비동염도 15%에서 호소하고 있다. 이런 질환의 진단은 수월하지 않아 최근까지도 의사의 진단을 돕거나, 질병이 악화되지 않도록 예방하기 위한 간단한 진단법이 없다. 천식이나 알레르기 질환 환자의 기도 내에 만성 기도 염증반응이 일어나고 있다는 것은 일반적으로 알고 있으나 기도 염증반응을 측정할 만한 연구 목적의 몇가지 실험실적 면역측정법 외에 간단한 임상적 진단법이 없는 실정이다.
특히, 기도 염증이 세균감염과 같은 미생물의 감염에 의한 것인지, 아니면 천식과 같은 알레르기 질환에서의 알레르기 면역반응에 의한 것인지 구별하기가 어렵다. 이러한 이유로, 천식이나 알레르기 질환이 있는 환자들이 오랜 기간 항생제를 투여 받는 등의 잘못된 치료를 받는 경우가 많다.
현재 기관지 천식의 진단에 이용되는 폐기능 검사 및 메타콜린 기관지 유발
시험은 여러 가지 이용 상의 어려움을 가지고 있는데, 정확한 결과를 얻기 위하여잘 관리된 장비, 숙달된 검사자, 환자의 적극적인 호응이 필요하며, 이러한 이유로 인해 환자의 호응이 어려운 6세 이하의 영유아 또는 소아, 고령층, 신체장애자, 현재 천식이 많이 악화된 환자 등에서는 검사가 어려운 것이 사실이다.
또한, 체력적으로 많은 소모가 필요하여 환자가 검사에 대한 거부감을 가지
기 쉬워서 반복적으로 검사를 진행하기가 어려운 경우가 많다. 따라서, 과거부터 천식의 진단에 도움이 되는 비침습적인 또는 혈액적인 검사를 개발하고자 하는 시도가 있어 왔는데, 현재 천식 환자에서 보조적으로 이용되고 있는 혈중 호산구수, 혈청 호산구 양이온 단백질(eosinophil cationic protein;ECP) 등이 이에 해당된다. 이들은 정상인, 기타 알레르기 질환, 천식 등에서 모두 개인적인 차이가 큰 것으로 알려져 있어서 진단에 이용되지는 못하고 있다.
따라서, 천식과 알레르기 질환에서 가장 중요한 면역반응인 호산구성 염증반
응을 측정할 수 있는 간단한 진단도구를 개발할 수 있다면, 천식과 같은 질환의 진단과 치료에 획기적인 기여를 할 수 있을 것이다.
본 발명의 배경기술은 한국등록특허 제10-1635381호에 개시되어 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 천식 또는 알레르기 질환을 고 신뢰성으로 신속하게 진단할 수 있는 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 천식 진단 키트는 기저부, 상기 기저부 상에 형성되는 제1반응부, 및 상기 제1반응부와 상기 기저부 사이에 형성된 전개막을 포함하는 스트립을 포함하는 천식 진단용 키트이고, 상기 제1반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank))의 하이브리도마 세포주로부터 발현되는 단일클론 항체를 포함하고, 상기 제2반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현된 단일클론 항체를 포함할 수 있다.
본 발명의 알레르기 진단 키트는 기저부, 상기 기저부 상에 형성되는 제1반응부, 및 상기 제1반응부와 상기 기저부 사이에 형성된 전개막을 포함하는 스트립을 포함하는 천식 진단용 키트이고, 상기 제1반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현되는 단일클론 항체를 포함하고, 상기 제2반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현된 단일클론 항체를 포함할 수 있다.
본 발명은 천식 또는 알레르기 질환을 고신뢰성으로 신속하게 진단할 수 있고, 천식 또는 알레르기 질환의 예후 예측 및 모니터링 키트를 제공하였다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 천식 진단 키트에 포함되는 스트립의 모식도이다.
도 2는 천식 증상 점수와 ELISA 법으로 측정한 EDN, ECP, 및 총 호산구수를 비교 결과이다. 도 2의 a는 EDN, 도 2의 b는 ECP, 도 2의 c는 총 호산구와 천식 증상 점수의 결과이다.
도 3은 본 발명에 따른 천식 진단 키트와 ELISA법에 의한 진단시 상관 관계를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명에 따른 천식 진단 키트와 MBL에 따른 진단의 상관 관계(r=0.8933)를 보여주는 것이다.
도 5는 본 발명에 따른 천식 진단 키트와 BF에 따른 진단의 상관 관계 (r=0.8748)를 보여주는 것이다.
첨부한 도면을 참고하여 실시예에 의해 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 도면에서 본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 동일 또는 유사한 구성 요소에 대해서는 동일한 명칭을 사용하였다.
본 명세서에서 "상부"와 "하부"는 도면을 기준으로 정의한 것으로서, 시 관점에 따라 "상부"가 "하부"로 "하부"가 "상부"로 변경될 수 있고, "위(on)" 또는 "상(on)"으로 지칭되는 것은 바로 위뿐만 아니라 중간에 다른 구조를 개재한 경우도 포함할 수 있다. 반면, "직접 위(directly on)" 또는 "바로 위"로 지칭되는 것은 중간에 다른 구조를 개재하지 않은 것을 나타낸다.
본 발명의 일 실시예에 따른 천식 진단 키트를 도 1을 참고하여 설명한다. 도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 천식 진단 키트에 포함되는 스트립의 모식도이다.
도 1을 참고하면, 본 실시예에 따른 천식 진단을 위한 스트립(100)은 기저부(110), 기저부(110) 상에 형성되고 단일클론 항체를 포함하는 제1반응부(120), 및 제1반응부(120)와 기저부(110) 사이에 형성된 전개막(130)을 포함할 수 있다. 전개막(130)은 제1반응부(120)와 접해 있다. 전개막(130)은 단일클론 항체를 포함하는 제2반응부(140) 및 제2반응부(140)와 소정의 간격으로 이격된 대조부(150)를 포함한다.
본 실시예에 따른 천식 진단 키트는 시료에 포함된 호산구 유발 신경독소(EDN: eosinophil-derived neurotoxin)이 제1반응부(120)에서 단일클론 항체와 결합한 후 전개막(130)을 통해 이동하면서 제2반응부(140)에 도달하면 제2반응부(140)에서 단일클론 항체와 결합하여 검출된다. 제2반응부(140)에서 EDN과 결합된 제1반응부 유래 단일클론 항체와 제 2반응부 유래 단일클론 항체의 결합을 확인함으로써 시료 중 EDN이 있음을 확인할 수 있고 따라서 시료가 채취된 환자가 천식이 있음을 판단할 수 있다. 본 실시예에 따른 천식 진단 키트는 항원 EDN과 단일클론항체 간의 면역 반응을 이용한 면역 크로마토그래피에 의해 천식 또는 알레르기 질환을 진단할 수 있다. EDN은 천식과 알레르기 질환이 있는 환자에서 정상인에 비하여 높다.
상기 시료는 피검체로부터 채취되는 것으로 예를 들면 전혈, 혈청, 혈장, 비강세척액, 기관지폐포 세척액, 객담, 림프액 또는 세포간액을 포함할 수 있다. 피검체 즉 검사 대상은 특별히 제한되지 않지만, 영유아 또는 소아가 될 수 있다.
본 실시예에 따른 진단 키트는 EDN에 결합하는 제1반응부 유래 단일클론 항체와 제2반응부 유래 단일클론 항체를 통해 2 단계로 천식을 진단함으로써 천식을 보다 정확하고 신속하게 진단할 수 있다.
제1반응부 유래 단일클론 항체는 EDN 중 epitope 부위가 항체 보체결정부[complement determining region(CDR)]의 idiotype에 붙는다. 단일클론 항체로서, 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 제조될 수 있다. 하이브리도마 세포주는 당업자에게 알려진 통상의 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들면, EDN 항원을 접종시킨 마우스의 비장 세포와 마우스 유래 골수종 세포를 융합하여 제조될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 하이브리도마 세포주로부터 단일클론 항체를 얻는 방법은 당업자에게 알려진 통상의 방법에 의한다.
제2반응부 유래 단일클론 항체는 EDN 중 epitope 부위가 항체 보체결정부[complement determining region(CDR)]의 idiotype에 붙는다. 단일클론 항체로서, 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현될 수 있다. 제2반응부 유래 단일클론항체는 단일클론 항체에 효소를 결합시켜 제조될 수 있다. 상기 효소는 HRP(horseradish peroxidase), 염기성 탈인산화효소(alkaline phosphtase) 등이 될 수 있다. 항체에 효소를 결합시키는 방법은 당업자에게 알려진 통상의 방법에 의한다.
본 발명에 따른 면역 크로마토그래피 방법을 이용한 천식 또는 알레르기 질환 응급 진단용 스트립을 이용하면, 천식과 알레르기 질환 환자에서 높은 수치로 나타나는 EDN을 손쉽고 경제적으로 검사하여 종래 영유아 또는 소아에서 진단이 용이하지 않았던 천식 또는 알레르기 질환을 신속하게 외부나 집에서 진단할 수 있다.
이하, 본 발명의 일 실시예에 따른 천식 진단 키트에 대해 보다 상세히 설명한다.
기저부(110)는 제1반응부, 전개막을 지지하는 것으로, 당업자에게 통상적으로 알려진 재질로 제조될 수 있다. 예를 들면, 기저부(110)는 플라스틱, 금속 재질, 나이트로셀룰로스 막으로 형성될 수 있다.
제1반응부(120)는 단일클론 항체를 포함할 수 있다. 제1반응부(120)는 단일클론 항체 자체를 포함할 수도 있으나, 단일클론 항체에 금이 결합됨으로써 전개막 중 발색 효과를 얻을 수도 있다. 금이 결합된 단일클론 항체는 분홍색을 나타낼 수 있다. 단일클론 항체에 금을 결합시키는 방법은 단일클론 항체와 금 이온 함유 화합물(예: 콜로이드 골드)을 혼합한 후 금 이온을 환원시킴으로써 금 입자가 단일클론 항체에 결합되도록 할 수 있다. 금 입자의 평균 입경은 10nm 내지 100nm가 될 수 있다. 상기 범위에서, 더 탁월한 검출 효과가 있을 수 있다.
제1반응부(120)는 시료 주입부와 연결되어 환자로부터 채취된 시료를 받을 수 있다. 도 1에서 도시되지 않았지만, 제1반응부(120)에는 필터 패드가 연결되어 환자로부터 채취된 시료가 제1반응부(120)로 주입되기 전에 필터 패드를 거침으로써 불순물 등을 제거하여 주입되도록 하여 천식 진단 신뢰성을 더 높일 수 있다.
제1반응부(120)는 폴리에스테르 섬유, 유리 섬유 또는 식물 섬유로 형성된 결합 패드에 형성됨으로써, 제1단일클론 항체를 안정적으로 포함시킬 수 있다. 예를 들면, 결합 패드는 셀룰로스 패드일 수 있다.
전개막(130)은 제1반응부(120)와 접해 있어서, 제1반응부(120)로부터 모세관 현상을 통해 이동한 시료 중 EDN과 단일클론 항체의 결합물이 제2반응부(140) 및 대조부(150)를 통해 이동하도록 할 수 있다.
제2반응부(140)에는 단일클론 항체가 포함되어 있어서 EDN과 결합할 수 있다. EDN과 제1반응부 유래 단일클론 항체 및 제2반응부 유래 단일클론 항체의 결합 결과는 발색을 통해 확인할 수 있다. 발색 결과 제2반응부는 분홍색이 될 수 있다. 발색은 상술한 바와 같이 제1반응부 유래 단일클론 항체에 금 입자를 부착시킬 수도 있으나, 그 외에 통상적인 방법으로 HRP(horseradish peroxidase), 염기성 탈인산화효소(alkaline phosphtase), 형광 물질(fluorescein), 및 색소 등의 표지체가 사용될 수 있다. 발색을 유도하기 위한 발색 기질은 발색 반응을 하는 표지체에 따라 사용하는 것이 바람직하며, TMB(3,3',5,5'-tetramethyl benzidine), ABTS[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)] 및 OPD(o-phenylenediamine) 등을 사용할 수 있다.
전개막(130)에는 대조부(150)가 형성되어, 진단 키트가 정상적으로 작동되어 진단 검사가 완료되었는지 판별하게 해준다.
대조부(150)는 시료가 EDN을 포함하는지 여부에 관계없이, 시료가 제1반응부와 제2반응부를 이동하여 검사가 완료되었음을 알려준다. 대조부(150)에는 토끼 유래 항 마우스 면역글로블린(IgG) 항체가 포함되어 있어, 제1반응부에 포함된 단일클론 항체 중 EDN과 결합하지 않은 것이 전개막을 통해 이동하면서 대조부에 도달하면 항 마우스 면역글로블린 항체와 반응하여 검사 종료를 알 수 있다. 토끼 유래 항 마우스 면역글로불린 결합된 단일클론 항체는 분홍색을 나타내어, 대조부에 분홍색이 나타나면 진단이 완료되었음을 의미한다.
전개막(130)은 다공성의 박막형 필름으로서, 시료가 제2반응부(140)와 대조부(150)에 전개되도록 나일론, 폴리에스테르, 셀룰로스, 폴리설폰, 폴리비닐리덴플루오라이드, 셀룰로스 아세테이트, 폴리우레탄, 유리섬유, 니트로셀룰로스 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 전개 시약은 인산염 완충액, 식염수, 트리스-HCl, 물 등을 이용하는 것이 바람직하다.
도 1에서 도시된 바와 같이, 스트립(100)은 흡수 패드(160)을 포함할 수 있다. 흡수 패드는 대조부(150)를 통과한 시료, 항체 잔여물들이 흡수되도록 할 수 있다.
도 1에서 도시되지 않았지만, 본 실시예에 따른 천식 진단 키트는 스트립(100)을 고정하고, 제1반응부, 제2반응부 및 대조부의 외부 접촉과 오염을 방지하기 위해 하우징(housing)을 스트립 상에 포함할 수 있다. 하우징은 어떠한 시약과도 반응하지 않은 소재로 형성되는데, 예를 들면 유리나 플라스틱으로 형성될 수 있다.
또한, 본 발명의 진단 키트는 단일클론항체에 의하여 EDN을 정량화할 수도 있어서, 종래 사용되던 TEC나 ECP에 비하여 우수하게 천식 또는 알레르기 질환을 진단할 수 있고, 중증도별 차이를 반영할 수 있다.
이상, 본 발명의 일 실시예에 따른 천식 진단 키트를 설명하였으나, EDN이 알레르기 질환에서도 유효한 항원인 만큼, 알레르기 질환 진단에도 사용될 수 있다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 통해 본 발명의 구성 및 작용을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 다만, 이는 본 발명의 바람직한 예시로 제시된 것이며 어떠한 의미로도 이에 의해 본 발명이 제한되는 것으로 해석될 수는 없다.
실시예 1: 하이브리도마 세포주의 제조
프룬드 컴플리트 아쥬반트(Freund's complete adjuvant)에 용해시킨 천연 EDN 항원 50 내지 100마이크로그램을 암컷 BALB/c 마우스(6 내지 8주령)에 정맥 주사하였다. PBS 또는 인컴플리트 아쥬반트에 용해시킨 EDN 항원 50 내지 100 마이크로그램을 2주 내지 3주 간격으로 주사하였다. EDN 항원을 최종 주사한 후에, 항체 형성을 마우스 눈에서의 출혈로 확인하였다. 항체 형성이 일단 확인되면 100 내지 200 마이크로그램의 항체를 3일 내지 4일 연속적으로 주입하였다. 마우스를 절개하고 70% 알코올에 넣어 멸균하였다. 비장을 제거하고, 비장 세포를 세척한 후, 원심분리하여 얻고 무혈청 배지에 현탁시켰다.
비장 세포를 P3X63Ag8.653 마우스 세포주로부터 얻은 골수종 세포와 1.5:1.1의 비율로 융합하였다. 이로부터 하이브리도마 세포주를 선택하였다. 제조한 하이브리도마 세포주를 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank)에 2017년 1월 9일자로 기탁하여, 수탁번호 KCLRF-BP-00389을 받았다.
실시예 2: 단일클론항체 제조
실시예의 하이브리도마 세포주를 조직배양 플라스크에서 배양하여 단일클론항체를 생산하였다. 구체적으로, 75cm2조직배양 플라스크에 DMEM(Gibco BRL, U.S.A.) 25ml에 5 x 106개 세포를 첨가한 다음 37 세포배양기에서 4~5일간 과다 증식시킨 다음, 세포배양액을 수거하였다. 수거된 세포배양액은 1500rpm에서 15분간 원심분리를 실시하여 세포성분을 제거하하고 세포상층액만을 회수함으로서 단일클론항체 생산을 완료하였다. 생산된 단일클론항체는 시험에 사용할 때까지 4℃ 또는 -20℃에 보관하였다.
단일클론항체에 금 콜로이드를 결합시켰다. 즉, 염화금을 시트르산 나트륨 용액으로 환원시켜 플레인 골드(plain gold)를 제조한 후, 제조한 단일클론항체를 첨가하면서 40nm 크기의 항체가 결합된 금 입자를 파장 532nm에서 흡광도가 10±1이 되도록 제조하였다. 금 입자에 결합된 항체를 안정화시키기 위하여 폴리에틸렌글리콜(PEG) 용액으로 처리하였다. 이를 통해 단일클론항체를 제조하였다.
실시예 3: 단일클론항체 제조
상기 단일클론항체 제조시 금 콜로이드를 결합시키지 않은 것을 제외하고는 동일한 방법으로 제조하였다.
실시예 4: 진단 키트의 제조
상기 실시예 2에서 제조한 금 입자와 단일클론 항체가 결합된 금 접합체를 스트립 1개당 8.3마이크로리터/스트립을 혼합하고, 폴리에스테르 섬유 또는 유리 섬유에 적시고 건조시켜, 제1반응부를 포함하는 결합 패드를 제조하였다.
상가 실시예 3에서 제조한 단일클론 항체를 스트립 1개 당 0.75 마이크로그램/스트립의 농도로 PBS로 희석하고 니트로셀룰로스 전개막 상에서 제2반응부의 위치에 코팅시켜 제2반응부를 형성하였다. 전개막 중 대조부의 위치에는 토기 항 마우스 항체를 0.75 마이크로그램/스트립의 농도로 코팅시켜 대조부를 형성하였다.
상기 제조한 전개막에 상기 제조한 결합 패드를 중첩되게 높은 후 4.45mm/스트립의 크기로 절단한 후, 플라스틱 하우징에 장착하여, 천식 또는 알레르기 질환 진단 키트를 제조하였다.
실험예 1: 천식 또는 알레르기 질환 신속 진단용 바이오마커 선별
천식 또는 알레르기 진단을 위하여 기존에 사용되던 총호산구수(total eosinophil count' TEC)나 ECP(eosinophil cationic protein)에 비하여 본 발명에서 천식 진단에 사용하는 EDN이 우수함을 입증하기 위하여, 천식 증상 점수와 ELISA 법으로 측정한 EDN, ECP, 및 총 호산구수를 비교하였다. 그 결과, 도 2에서와 같이 EDN이 TEC나 ECP에 비하여, 각 천식 증상 점수의 중증도별 차이를 가장 잘 반영하였다. 따라서, EDN이 천식 진단시 유용한 항원으로 사용될 수 있음을 확인하였다.
실험예 2: ELISA와의 진단 결과 비교
천식으로 진단된 5세의 영유아에서 EDN 농도가 0.62 ng/ml이상인 혈청 80개 검체, 그리고 동일 연령으로 천식이 없는 정상의 혈청 50개 검체를 구하고, 본 발명의 진단 키트와 ELISA 법으로 검사하였다. 도 3에서와 같이, 본 발명의 진단 키트와 ELISA법에 의한 검사시에 상관 관계가 r=0.603, P<0.001로 우수하게 나타남으로써 본 발명의 진단 키트가 신속 진단 키트로 사용하기에 충분한 결과를 나타내었다.
실험예 3: MBL , BF 키트와의 진단 결과 비교
실험예 2와 동일 검체에 대하여 본 발명의 진단 키트(Rapid)와, MBL(MEDICAL & BIOLOGICAL LABORATORIES CO., LTD) 키트, BF 키트에 대해 검사하였다. 도 4 및 도 5에서와 같이 본 발명의 진단 키트와 MBL 키트, BF 키트에 의한 검사시에 상관 관계가 각각 r=0.8933, r=0.8748로 우수하게 나타남으로써 본 발명의 진단 키트가 신속 진단 키트로 사용하기에 충분한 결과를 나타내었다.
본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.
<수탁 번호>
기탁기관명: 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank)
수탁 번호: KCLRF-BP-00389
기탁 일자: 2017년 1월 9일

Claims (6)

  1. 기저부, 상기 기저부 상에 형성되는 제1반응부, 및 상기 제1반응부와 상기 기저부 사이에 형성된 전개막을 포함하는 스트립을 포함하는 천식 진단용 키트이고,
    상기 제1반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank))의 하이브리도마 세포주로부터 발현되는 단일클론 항체를 포함하고,
    상기 제2반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현된 단일클론 항체를 포함하는 것인, 천식 진단용 키트.
  2. 기저부, 상기 기저부 상에 형성되는 제1반응부, 및 상기 제1반응부와 상기 기저부 사이에 형성된 전개막을 포함하는 스트립을 포함하는 천식 진단용 키트이고,
    상기 제1반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank))의 하이브리도마 세포주로부터 발현되는 단일클론 항체를 포함하고,
    상기 제2반응부는 수탁번호 KCLRF-BP-00389(기탁일: 2017년 1월 9일, 기탁 기관: 한국세포주은행)의 하이브리도마 세포주로부터 발현된 단일클론 항체를 포함하는 것인, 알레르기 질환 진단용 키트.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제1반응부 중 상기 단일클론항체는 금이 결합된 것인, 천식 진단용 키트.
  4. 제2항에 있어서, 상기 제1반응부 중 상기 단일클론항체는 금이 결합된 것인, 알레르기 질환 진단용 키트.
  5. 제1항에 있어서, 상기 전개막은 항 마우스 면역글로블린(IgG) 항체를 포함하는 대조부를 더 포함하는 것인, 천식 진단용 키트.
  6. 제2항에 있어서, 상기 전개막은 항 마우스 면역글로블린(IgG) 항체를 포함하는 대조부를 더 포함하는 것인, 알레르기 질환 진단용 키트.

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