METODOS DE DIAGNOSTICO RAPIDO PARA ALERGIAS E INFECCIONES DISTINTIVAS DESCRIPCION DE LA INVENCION Esta invención es un método rápido y simple para el diagnóstico diferencial de alergias, sinusitis e infecciones del tracto respiratorio superior. El método involucra el uso de indicadores o tiras de prueba de reactivo específicamente adaptadas, comercialícente disponibles o novedosas que están en contacto con las secreciones nasales. Basándose en la lectura diferencial de la tira indicadora y una medida de la infiltración de eosinofilos en la secreción nasal, un usuario de la tira es capaz de determinar, con la asistencia de un método de conteo descrito en la misma, si una condición alérgica o una infección es la causa del malestar respiratorio. Es común para pacientes afligidos con malestar respiratorio buscar el dictamen de un médico en un esfuerzo para minimizar o superar su malestar. Tal malestar es generalmente atribuible a una de las siguientes etiologías: reacciones alérgicas, e infecciones del tracto respiratorio superior virales (URIs) o infecciones bacterianas que pueden producir sinusitis. Sin embargo, el médico presentado ante tal paciente tiene típicamente la atemorizante tarea de determinar cual de estas tres etiologías principales es responsable del malestar experimentado por un paciente particular. El peligro inherente en un mal diagnóstico puede ser bastante severo. Por ejemplo, si el médico diagnostica incorrectamente una alergia como sinusitis, seria típicamente prescrito un curso de antibiótico. Naturalmente, tal tratamiento haría poco para aliviar el malestar alérgico que se experimenta por el paciente mientras que al mismo tiempo, el paciente está expuesto a un antibiótico al cual existe una posibilidad de hacer surgir una infección bacteriana resistente. Si esto ocurriera, un problema mucho más severo que la condición alérgica original se habrá causado no intencionalmente . El predominio de cepas resistentes a antibióticos a una escala global debido a la sobre prescripción de antibióticos se ha vuelto un problema crecientemente reconocido (Service. R.F., 1995). En el ejemplo anterior, la disponibilidad de un método de diagnóstico diferencial rápido y simple resultaría en lugar de resultar en un problema compuesto en la simple recomendación por el médico de que el paciente se adhiera a un curso de tratamiento de antihistamínicos evitar alérgenos y/o un régimen de sensibilización toleragénico . Desgraciadamente, sin embargo, a la fecha no existe tal procedimiento simple que proporcione al médico con el diagnóstico diferencial necesario. El método aceptado de diagnóstico para la sinusitis bacteriana es la formación de imagen radiológica cara (típicamente rayos X o barrido T) de los senos del paciente (véase Katz et al., 1995). Han aparecido muchos artículos científicos dirigidos a una u otra de las diversas etiologías del malestar respiratorio. Sin embargo, no se ha encontrado un método de diagnóstico diferencial rápido y barato. Así, por ejemplo, ang et al., Correlations between Complaints inflammatory Cells and Mediator Concentrations in Nasal Secretions after Nasal Allergen Challenge and during Natural Allergen Exposure, Int. Arch. Allergy Immunology 1995; 106:278-285, describe un método para usar una técnica de microsucción nasal. Mostraron que el reto del alérgeno nasal (NAC) de pacientes de rinitis alérgica estacional (fuera de estación) asintomática resulta en aumentos inmediatos (5 minutos), en histamina, leucotrieno C4 (LTC4), y triptasa con un aumento más gradual (una hora después de NCA) y prolongado en la concentración de eosinófilos y proteína catiónica eosinófila (ECP) en las secreciones nasales. En contraste, el paciente sintomático (rinitis alérgica en estación) se observó altas concentraciones de eosinófilos, ECP. LTC4 e histamina pero no triptasa. Se concluyó que la rinitis alérgica es una inflamación crónica de la mucosa nasal y que la infiltración de eosinófilos y la liberación de mediadores inflamatorios de última fase son los marcadores patofisiológicos predominantes. Sin embargo, esta publicación no enseña ni sugiere que estas observaciones pueda aplicarse para distinguir pacientes que sufren de una condición alérgica en oposición a una infección. Además, los métodos usados por estos autores son laboriosos y consumen tiempo y no involucran el uso de tiras de prueba reactivas. Sigurs et al., Eosinophil cationlc protein in nasal secretion and serum and myeloperoxidase in serum in respiratory syncytial virus bronchioliris : relation to asthma and atopy. Acta Paediatr 1994; 83:1151-5 concluyó que no es posible predecir las relaciones de proteina/albúmina catiónica de eosinófilo en secreciones nasales o de concentraciones de ECP y mieloperoxidasa en suero, sin niños con virus bronquilitis (RSV) del sincitio respiratorio desarrollaría asma. La publicación no proporciona enseñanza o sugerencia de un método que pueda distinguir fácilmente pacientes que sufren de una condición alérgica en oposición a una infección. Los métodos usados por estos autores son laboriosos y consumen tiempo y no involucran el uso de tiras de prueba reactiva Okuda et al., A Novel Method of Counting Eosinophils in Nasal Secretion of Allergic Rhinitis by Hemocytometric Methodr Int. Aren. Allergy Immunol. 1994: 104 (suppl. 1):6, describe un método rápido para cuantificar el número de eosinófilos en secreciones nasales como un método para diagnóstico de rinitis alérgica. El método involucra la preparación de una muestra solubilizada de secreción nasal y conteo de eosinófilos completos. No existe mención de tiras de prueba reactiva y no existe mención de un método para distinguir pacientes que sufren de una condición alérgica en oposición a una infección. Kowalski et al., Neutrophil chemotactic activity (NCA) in nasal secretions from atopic and nonatopic subjects. Allergy 1993; 48:409-414, reportaron que las secreciones nasales básales de personas saludables y pacientes con rinitis crónica contienen actividad quimotáctica significativa para neutrófilo. El estudio también reporta que existe un aumento en el contenido de proteina de las secreciones nasales en pacientes con rinitis alérgica permanente (A ) después del reto con un antigeno. No existe mención de tiras de prueba reactiva y no existe mención de un método para distinguir pacientes que sufre de una condición alérgica en oposición a una infección. Igarashi et al., Analysis of nasal Secretions during experimental rhinovirus upper respiratory infections, J. Allergy Clin. Immunol. 1993; 92:722-731, estudiaron pacientes con rinitis alérgica o sujetos control inoculados con rinovirus. Las muestras de lavado nasal antes y después de una infección se analizaron por proteína y mastositos mediadores. Se ha encontrado que la proteína total (incluyendo las proteínas plasmáticas albúmina e IgG y las proteínas glandulares lactoferrina, lisoazima IgA secretorias) aumentó después de la infección, debido predominantemente al aumento en la permeabilidad vascular. También se encontró que los sujetos alérgicos tenían menos síntomas, pero mayor permeabilidad vascular y mayor secreción de histamina que los sujetos control después de la infección de rinovirus. La proteína se determinó por la prueba de proteína acida bicinconínica (Pierce Chemical Co.) en alícuotas de lavado nasal. Se nota en diversos puntos de la publicación que los síntomas de los pacientes infectados con rinovirus y los pacientes con reacciones alérgicas nasales son similares, alejando así la posibilidad de que un método de prueba de secreción nasal simple podría usarse para distinguir estas condiciones. En cuanto a este estudio se dirige a determinar las diferencias en las secreciones nasales entre individuos normales o alérgicos infectados de rinovirus, el estudio se dirige a un problema diferente que al dirigido por la invención actual, que es un método para medir las diferencias en secreciones nasales de pacientes infectados con un rinovirus, por ejemplo, y un paciente no infectado con un rinovirus pero sufriendo de rinitis alérgica. Los métodos usados por estos autores son laboriosos y consumen tiempo y no involucran el uso de tiras de prueba reactiva. Sporbor et al., In vivo delection of a novel macrophage-derived protein involved in the regulation of nasal mucus-like glycoconjugate secretion, J. Allergy Clin.
Immunol, 1993; 92:581-588, describe un estudio dirigido a la caracterización de un nuevo secretagogo de moco nasal de 68 Kd (NMS-68) y liberado por monocitos. En cuanto a esta proteina se encontró estar presente en el tejido nasal de pacientes con rinitis alérgica y no alérgica, no parece proporcionar un método para distinguir entre estas condiciones (aunque el nivel de linea base de esta proteina es más elevada en los pacientes alérgicos) . Las tiras de prueba reactiva no se usaron en este estudio. Knani et al.r Indirect evidence of nasal inflammation assessed by titration of inflawmatory mediators and enumeration of cells in nasal secretions of patients with chronic rhinitis, J. Allergy Clin. Inmuno1, 1992/ 90:880-889, examinaron las células de lavado nasal y seis mediadores inflamatorios liberados en las secreciones nasales de cuatro grupos de pacientes con rinitis permanente y un grupo control. Se encontró que los pacientes con rinitis alérgica sintomática hablan aumentado los niveles de eosinófilos, asi como de proteina de eosinófilo X (FPX) , LTC4/D4 triptasa, MPO y PGD2. Se encontró que los pacientes con rinitis no alérgica habían aumentado las concentraciones de neutrófilo, triptasa, MPO y EP . Estas mediciones proporcionaron evidencia indirecta de inflamación nasal. Sin embargo, hubo análisis de las diferencias entre las secreciones nasales de pacientes de rinitis y pacientes que sufren por ejemplo, de una infección rinoviral o una infección de seno bacteriana. Klementsson et al., Eosinophíls, secretory responsiveness and glucocorticoid-induced affects on the nasal mucosa during a weak pollen season, Clinical and Experimental Allergy 1991; 21:705-710. Analizaron el flujo de eosinófilos, la concentración de ECP y resposividad secretoria después de reto de metacolina en muestras de lavado nasal de pacientes con rinitis alérgica. No hubo análisis concurrente de secreciones nasales de pacientes con seno bacteriano o infecciones virales, y las tiras de prueba reactiva no se emplearon. Gordon et al., The pathophysiology of rhinitis, J. Allergy Clin. Immunol . 1991; 88:33-42, retaron pacientes con rinitis estacional en un lado de la nariz con un alérgeno y secreciones nasales de ambos lados de la nariz se analizaron por proteina y mediadores. No hubo análisis concurrente de secreciones nasales de pacientes con infecciones bacterianas o virales y las tiras de prueba reactiva no se emplearon. Cohén, R. A. and Brestel E.P., Nasal secretory response to allergen provocation, 1988; 18:435-443, analizaron muestras de lavado nasal de sujetos sensibles a ambrosia y control después de reto con polen de ambrosia. El estudio no reveló aumento en proteina total, albúmina, potasio, actividad de lisozima, o actividad de peroxidasa en los sujetos control. Hubo aumentos en todos estos constituyentes en los sujetos sensibles a la ambrosia. Estos constituyentes se probaron por enlace de tinte (Bradford) en un electroforesis de cohete, espectroscopia de absorción, oxidación ABTS (Sigma Chemical Co.), y difusión radial respectivamente. El uso de tiras de prueba reactiva no se enseña ni sugiere, ni existe un análisis concomitante de estos constituyentes en sujetos no alérgicos infectados bacterialmente o viralmente. Liu et al., Injurious effect of eosinophil extract on the human nasal mucosa. Rhinology 1988; 26:121-132, intentaron elucidar el papel de eosinófilos en las secreciones nasales de sujetos alérgicos. Estos autores concluyen que los extractos de eosinófilo probado pueden actualmente ser perjudiciales a la función de la mucosa nasal humana. El uso de tiras de prueba reactiva no se enseña ni sugiere ni existe un análisis concomitante de estos constituyentes en sujetos infectados. Anderson et al., Allergen-induced nasal hyperactivity appears unrelated to the size of the nasal and dermal immediate allergic reaction. Allergy 1987; 42:631-637, analizaron "cebo" en el cual muestras de lavado nasal de pacientes con fiebre del heno se probaron después de un reto inicial y un re-reto con alérgeno. El parámetro bioquímico usado como la medida de la reacción alérgica fue TAME-estereasa por medio de un método radioquímico (liberación de metanol marcado de tritio a partir del sustrato sintético H3-TAME) . El uso de tiras de prueba reactiva no se enseña ni sugiere ni existe un análisis concomitante de estos constituyentes en sujetos infectados. Setripane, G.A. and Klein D.E., Non Allergio
Rhinitis; Demography of Eosinophils in Nasal Smear, Blood Total Eosinophil Counts and IgE Levéis, NER Allergy Proc. 1985; 6:363-366, en un intento para desarrollar una metodología para diagnóstico diferencial de pacientes con rinitis no alérgica, evaluaron pacientes con rinitis y pruebas de piel negativas (tomadas para significar que sus rinitis tenían una etiología no alérgica) , por causa de la rinitis. Los frotis nasales de estos pacientes se obtuvieron rodando un cotonete con secreciones nasales sobre un porta objetos de vidrio, fijando con metanol, tiñendo con tinción Camaco (tinción right-Giemsa) , y contando el número de eosinófilos por 100 células. Se condujeron rayos x del seno para detectar sinusitis. NARES, rinitis no alérgica con síndrome de eosinófilia, se define clínicamente en el papel como "congestión/rinorrea nasal con pruebas en piel de alergia negativa, IgE, en suero normal y de >5% de eosinófilos en el frotis nasal". El propósito del estudio fue "intentar corroborar NARES como un nuevo síndrome e intentar clasificar adicionalmente y clarificar la rinitis no alérgica". No hubo discusión en este papel con respecto al problema de la mala identificación de esta condición clínica con infecciones del tracto respiratorio superior, y el uso de tiras de prueba reactiva como parte del diagnóstico diferencial no se describe ni sugiere. Brofeldt, et al., Biochemical Analysis of Nasal
Secretions induced by methacholine Histamine, and Allergen Provocations. , Am. Rev. Respir, Dis. 1986; 133:1138-1142, obtuvieron metacolina, histamina y secreciones nasales inducidas por alérgeno de sujetos durante un periodo de 15 minutos después de la inducción. Las secreciones nasales se pesaron y probaron por contenido de exosa (método de orcinol) , contenido de proteína (método de Lowry) , carbohidrato (cromatografía de gas líquido) , ácido siálico (prueba colorimétrica del ácido tiobarbitúrico) , sulfato inorgánico (RaC12 radioactivo) , ADN (difenilamina) , albúmina e inmunoglobulinas (inmunoelectroforesis de cohete o ELISA) . Se encontró que en los diferentes inductores tienen efectos diferentes sobre los diferentes elementos probados. Sin embargo, no hubo estudio concomitante de las secreciones nasales de los pacientes que sufren de una infección ni se enseñó o sugirió el uso de tiras de prueba reactiva. Eggelston, et al., Mediators of Immediate Hypersensitivity in Nasal Secretions during Natural Colds and Rhinovirus Infection Acta Otolaryngol 1984; suppl. 413; 25-35, nota que "las infecciones respiratorias virales y la rinitis alérgicas tienen muchas similaridades . No solamente son síntomas similares en las dos condiciones, sino que la anatomía patológica de ambas está dominada por la dilatación vascular y edema con infiltrado celular mínimo en fases agudas...". Los autores postularon que estas similaridades se deben a la activación de mastocitos durante la infección, resultando en la liberación de histamina. Sin embargo, reportan que el análisis espectroflorométrico de histamina en las secreciones nasales de sujetos control o pacientes con un catarro natural o con una infección de rinovirus no soporta esta hipótesis. Las concentraciones de histamina se encontraron ser generalmente inferiores en individuos infectados con influenza A o rinovirus. También no se encontró la TAME-estearasa elevada durante estas infecciones. Este artículo reporta que durante la infección viral del tracto respiratorio existe poca o ninguna elevación de estearasa, mientras que en la rinitis alérgica existe elevación de estearasa (véase la discusión en la página 34 de la referencia) . Sin embargo, el uso de tiras de prueba reactiva para este propósito no se enseña ni sugiere ni existe una discusión de cómo estos resultados podrían usarse en un método diagnóstico diferencial también dirigido para distinguir sinusitis. Baumgarten, et al. f Plasma Kallikrein During Experimentally Induced Allergie Rhinitis; Role in Kinin Formation and Contribution to TAME-Esterase Activity in Nasal Secretions, J. Immunol, 1986; 137:977-982, reporta la observación de que cuando individuos alérgicos y no alérgicos se retan intranasalmente con un alérgeno, los lavados nasales después del reto de solamente los individuos alérgicos contienen niveles elevados de Kallikren/prekallikrein (iHPR) . En plasma humano inmunoreactivo . Este aumento en iHPK correlaciona con aumentos en quininas, histaminas, TAME-esterasa, y síntomas clínicos. De hecho, estos investigadores argumentan que la actividad de TAME-esterasa se produce por calicreina en plasma y triptasa de mastositos. Así, el iHPK puede ser un marcador adicional que podría usarse en una tira de prueba reactiva para diagnóstico de rinitis alérgica. Sin embargo, en este estudio, la esterasa se probó por un método radioquímico y las quininas se probaron usando un radioinmunoensayo, más que cualquier tipo de tira de prueba reactiva. Anderson et al., Mechanisms of nasal hyper-reactivity. Eur. Aren. Otorhinolaryngol , 1995:252 (suppl. 1): 522-526, revisa los factores conocidos involucrados en hiper-reactividad nasal inducida por alérgeno. Sin embargo, no hay enseñanza o sugerencia de un método para distinguir la rinitis alérgica de la relacionada con infección. Las tiras de prueba reactiva para este propósito no se proponen ni sugieren.
Florman, et al., Rapid Non-invasive Techniques for Determining Enology of Bronchitis and Pneumonía in Infants and Children. Clin. Chest. Med. 1987; 8:669-679, proporciona una revisión de técnicas para diagnóstico diferencial del agente causativo en infecciones del tracto respiratorio inferior. Se menciona un número de pruebas rápidas no especificas y especifica. Sin embargo/ no existe mención de diagnóstico diferencial de condiciones alérgicas de infectivas y las tiras de prueba reactiva para este propósito no se describen ni sugieren. Katz et al., A comparison of Imaging Techniques in Patients with Chronic Sinusitis (X-Ray, MRI, A- ode Ultrasound) Allergy Proc. 1995, 16:123-127, demuestra la necesidad largamente sentida de una forma rápida, barata de diagnosticar sinusitis y distinguir esta condición de rinitis alérgica. El método de la invención actual tiene el potencial de reemplazar las técnicas de diagnóstico mucho más caras reportadas en este articulo por ser más confiable en el diagnóstico de sinusitis (barridos CAT y MRI) . Demoly et al., ñssessment of Inflammation in noninfectious chronic maxillary sinusitis, J. Allergy Clin. Immunol. 1994; 94:95-108, sugiere que pudiera ser posible distinguir sinusitis (infección) de rinitis alérgica basándose en el contenido de la mucosa nasal. Sin embargo/ las técnicas usadas para intentar distinguir estas condiciones dependen del uso de inmunohistoquímica de especímenes quirúrgicos, inmunocitoquímica de fluidos de lavado, y medición de mediadores inflamatorios específicos en fluidos de lavado de seno (ELISA, RIA) . No existe enseñanza o sugerencia de que palillos sumergidos en reactivo podría usarse para este propósito. En consecuencia, ha habido una necesidad largamente sentida en la técnica para una técnica no invasiva rápida, barata para un método capaz de distinguir entre alergias e infecciones. El método de la invención actual involucra probar secreciones nasales con tiras de prueba reactiva nuevas o modificadas comercialmente disponible (Ames División. Miles Laboratories, Inc., Elkhart, IN 46515). Las tiras comercialmente disponibles, también referidas como palillos sumergidos, prueba de pH, proteína, glucosa, cetona, esterasa de leucocito, bilirubina y sangre. Las siguientes Patentes Norteamericanas que pueden ser relevantes a la invención actual se enlistan en el inserto de producto de las tiras de prueba reactiva de Miles Laboratories Inc., y se incorporan en la presente para referencia : 1) 3,438,737- Composición de prueba para proteína y método para detectar proteínas en fluidos usando la composición de prueba. 2) 4,301,115- Dispositivo de prueba que tiene resistencia a contaminación cruzada entre áreas reactantes y procesos para hacerlo. 3) 4,637,979- Composición y dispositivo de prueba para determinar la presencia de leucocitos que contienen un agente de acoplamiento zwiterión para determinar la presencia de leucocitos, esterasa o proteasa en una muestra. 4) 4,645,842- Composición de pirrol para detectar la presencia de analitos hidroliticos, útil en la detección de leucocitos, esterasa y proteasa en una muestra de prueba. 5) 4,657,855- Composición y dispositivo de prueba para determinar la presencia de leucocitos, esterasa y proteasa en una muestra de prueba. 6) 4,704,460- Compuestos novedosos para detectar la presencia de analitos hidroliticos en una muestra de prueba que indica la presencia de leucocitos, esterasa y proteasa en una muestra de prueba. 7) 4,758,508- Procesos analíticos y agentes para la detección de enzimas esterolíticas y/o proteolítica en una muestra líquida. Las siguientes Patentes Norteamericanas que pueden ser relevantes a la invención actual se enlistan en el inserto o empaque del producto de tiras de prueba reactiva de Boehringer Mannheim Corporarion, y se incorporan en la presente para referencia: 1) 3,359,072- Un método de determinación de proteínas.
2) 3,418,079- Un dispositivo y método de determinación de proteínas. 3) 3,712,853- Un reactivo y método de detección de nitritos . 4) 3,897,214- Un dispositivo de diagnóstico. 5) 3,802,842- Una tira de prueba reactiva. 6) 4,013,416- Un método de detección de proteínas. 7) 4,385,114- Un sistema indicador de oxidación. Sin embargo, ninguna de estas patentes sugiere o describe un método para probar secreciones mucosas nasales para distinguir las condiciones alérgicas de las infecciosas. En el método de esta invención, se prueba una muestra de secreciones nasales del paciente y, basándose en el pH, cantidad de proteína, nitrito y esterasa de leucocito y eosinófilos, puede determinarse rápidamente si el paciente sufre de una alergia, una simple infección viral, o sinusitis bacterianas. El método tiene el potencial de reemplazar procedimientos clínicos invasivos y muchos más caros. Esta invención proporciona un método para diferenciar rápidamente en forma no invasiva y en forma barata entre rinitis alérgica e infecciones virales o bacterianas respiratorias. El método involucra medir, por ejemplo poniendo en contacto una tira de prueba reactiva con una muestra de secreción nasal, una serie de agentes en las secreciones nasales. La tira de prueba reactiva proporciona información sobre el pH, contenido de proteínas, contenido de nitritos, actividad de esterasa y preferiblemente también proporciona información sobre el nivel de infiltración de eosinófilo en la muestra contactada, tal que una combinación de un pH entre aproximadamente 7.5 y 9, una presencia moderadamente fuerte de proteína, al menos una traza de esterasa y nitrito y poca o ninguna infiltración de eosinófilos indica la presencia de una infección bacteriana (sinusitis) . La combinación de un pH entre aproximadamente 5.0 y 7.5, poca o ninguna proteína, poca o ninguna actividad de esterasa y poca o ninguna infiltración de eosinófilos, es una indicación de infección viral (URI) . Sin embargo, el mismo perfil que en la infección viral URI pero con clara indicación de infiltración de eosinófilos es una indicación de rinitis alérgica. También se proporciona una tira de prueba reactiva específicamente adaptada para diferenciar rápidamente, en forma no invasiva y en forma barata entre alergia e infección respiratoria. La tira de prueba reactiva se adapta para proporcionar información sobre el pH, contenido de proteínas, contenido de nitritos, actividad de esterasa e infiltración de eosinófilos de la muestra contactada, tal que el método de esta invención puede practicarse rápida y fácilmente.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra las diferentes lecturas químicas obtenidas al poner en contacto las tiras de prueba reactiva con las secreciones nasales de múltiples pacientes que presentan malestar respiratorio. Los círculos cerrados ( · ) representan pacientes con sinusitis probada radiológicamente; los círculos abiertos (O) representan pacientes que no tienen sinusitis basándose en investigación radiológica: cuadrados abiertos (?) representan pacientes con sinusitis probada radiológicamente que fueron al menos parcialmente tratados con antibióticos antes de o durante el periodo de evaluación. La Figura 2 es un histograma basado en los datos mostrados en la Figura 1 y una medida de la infiltración de eosinófilos en los exudados nasales de los pacientes de la Figura 1 (no mostrados en la Figura 1) . De los datos en bruto de la Figura 1, se estableció un sistema de puntuación tal que la fuerte evidencia de infiltración de eosinófilos (+ + + eosinófilo) recibió una cuenta negativa de -6, la infiltración moderada (+ + eosinófilos) recibió una cuenta de -4 , y la infiltración traza (+ eosinófilos) recibió una cuenta de -2; los pH mayores de o iguales a 8.5 recibieron una cuenta de + 3, un pH entre 8.0 y 8.4 recibió una cuenta de + 2, un pH entre 7.25 y 7.9 recibió una cuenta de + 1, y un pH entre 5.0 y 7.25 recibió una cuenta de 0; el contenido de proteínas entre aproximadamente 30-100 mg/dl se le dio una cuenta de + 1; entre aproximadamente 100 mg/dl y 300 mg/dl se le dio una cuenta de +2; la proteína entre aproximadamente 300 mg/dl y 2000 mg/dl se le dio una cuneta de +3; y la proteína mayor de 2000 mg/dl recibió una cuenta de +4; concentraciones de nitrito baja recibieron una cuenta de +1; cuentas moderadas de nitrito recibieron una cuenta de +2/ y cuentas elevadas de nitrito recibieron una cuenta de +3; actividad de esterasa en pequeñas cantidades recibió una cuenta de aproximadamente +1, una cuenta de +2 se asignó a cantidades moderadas y una cuenta de +3 asignó a cantidades de esterasa. Sumando las cuentas asignadas a los eosinófilos, pH, nitrito/ proteína, y esterasa, se produjo el histograma de la Figura 2. El nivel de infiltración de eosinófilos se muestra en la figura por +, + +, y + + + para infiltración de eosinófilos traza, moderada y fuerte, respectivamente. Los pacientes que tienen sinusitis radiológicamente confirmados se muestran con símbolos punteados; los pacientes radiológicamente confirmados que tienen sinusitis pero quienes han sido al menos parcialmente tratados con antibióticos se muestran con un símbolo medio punteado medio lleno; los pacientes radiológicamente transparentes de sinusitis pero que presentaron eosinofilia se muestran por símbolos abiertos; los' pacientes radiológicamente transparentes de sinusitis sin eosinofilia concomitante se muestran con símbolos diagonalmente llenos/vacíos. Esta invención es un método para distinguir no invasivamente, en forma rápida y simple entre alergias e infecciones que involucra la prueba en secreciones nasales de los niveles de un número de agentes. Preferiblemente el método comprende poner en contacto secreciones nasales con tiras de prueba reactiva específicamente adaptadas novedosas o comercialmente disponibles (por ejemplo de Ames División. Miles Laboratories, Inc., Elk ar, IN 46515. o de Boehringer Mannheim Corporation Advanced Diagnostics. 9115Hague Road. P.O. Box 50457, Indianapolis, IN 46250-0457). Las tiras comercialmente disponibles, también referidas como palillos remojados, típicamente prueban por ??, proteína, glucosa, nitrito, cetona, esterasa de leucocito, bilirubina y sangre. En el método de esta invención, una muestra de las secreciones nasales del paciente se pone en contacto con una tira de prueba reactiva y, basándose en el pH, la presencia o ausencia de proteína, niveles de nitrito, esterasa y una medida de la infiltración de eosinófilos en la secreción nasal, puede determinarse rápidamente si el paciente sufre de una alergia o una infección. El método tiene el potencial de reemplazar procedimientos clínicos mucho más caros e invasivos. En el método de esta invención, una tira de prueba reactiva comercialmente disponible, o una tira de prueba reactiva novedosa, específicamente adaptada se pone en contacto con una muestra de una secreción nasal del paciente. El paciente puede ser cualquier mamífero, incluyendo un animal o un humano. Basándose en la lectura diferencial de la tira de prueba reactiva, que incluye preferiblemente una medida de la infiltración de eosinófilos, puede hacerse una determinación de sí una alergia o una infección es responsable del malestar de tracto respiratorio superior. Con respecto a las tiras de prueba reactiva comercialmente disponibles, aquellas vendidas por Ames División of Miles Laboratories o the Boehringer Mannheim Corporation son generalmente aceptable. Estas tiras de prueba pueden hacerse como se describe en la presente o como se describe en cualquiera de las Patentes Norteamericanas Nos. 3,438,737; 4,301,115; 4, 637, 979; 4, 645, 842; 4, 657, 855; 4,704,460; 4,758,508; 3,359,072; 3,418,079; 3,712,853; 3,897,214; 3,802,842; 4,013,416; y 4,385,114; todas las cuales se incorporan para referencia en la presente para este propósito. Las tiras de prueba reactiva pueden emplearse en el método novedoso de esta invención como se describe además posteriormente con el requerimiento adicional de que debe hacerse una medición de eosinófilos. En consecuencia, una modalidad de esta invención es un método simple para distinguir pacientes con alergias y pacientes con infecciones respiratorias superiores involucra probar las secreciones nasales de estos pacientes con tiras de reactivo descritas, en los pacientes antes mencionados. Estos palillos sumergidos son baratos, y proporcionan una indicación de un pH, proteína, glucosa, cetona, nitrito, esteras, bilirubina y contenido de sangre del fluido puesto en contacto. ?4. paciente descarga su nariz en un receptáculo (por ejemplo, papel, cera o película plástica tal como Sarán rap o similar) o se toma un cotonete de secreción nasal, y se pone en contacto con la tira de prueba. El contenido de pH, proteína, nitrito y esterasa se evalúa después basándose en las instrucciones del fabricante encontradas en el lado externo de la caja en el cual se venden las tiras de prueba reactiva comercialmente disponibles. El procedimiento generalmente toma menos de aproximadamente sesenta segundos. La siguiente tabla proporciona los resultados y el significado de los mismos:
Estos datos pueden visualizarse refiriéndose a la
Figura 1 que proporciona una representación gráfica de las diferentes lecturas químicas obtenidas al poner en contacto las tiras de prueba reactiva, con las secreciones nasales de múltiples pacientes que presentan malestar respiratorio. Los círculos cerrados ( · ) representan pacientes con sinusitis probada radiológicamente; los círculos abiertos (O) representan pacientes que no tienen sinusitis basándose en investigación radiológica; los cuadrados abiertos (?) representan pacientes con sinusitis probada radiológicamente que fueron al menos parcialmente tratados con antibióticos antes de o durante el periodo de evaluación. Como puede verse en la Figura 1, existe un racimo en los puntos de datos para el contenido de pH, proteína, nitrito y esterasa de los pacientes con o sinusitis. Para auxiliar en el diagnóstico diferencial de la rinitis alérgica, URI viral y sinusitis, se ha descubierto que al asignar un sistema de puntos a varios parámetros medidos a partir de las secreciones de moco de los pacientes, puede lograrse la dispersión diferencial delimitada de las poblaciones de pacientes con solamente una cantidad menor de traslapamiento entre los pacientes que tienen estas diversas condiciones clínicas. La Figura 2 es un histograma basado en los datos mostrados en la Figura 1 y una medición de la infiltración de eosinófilos en los exudados nasales de los pacientes de la Figura 1 (no mostrados en la Figura 1) . De los datos en bruto de la Figura 1, se estableció un sistema de puntos tal que la fuerte evidencia de infiltración de eosinófilos (+ + + eosinófilo) recibió una cuenta negativa de -6, la infiltración moderada (+ + eosinófilos) recibió una cuenta de -4 , y la infiltración traza (+ eosinófilos) recibió una cuenta de -2; los pH mayores de o iguales a 8.5 recibieron una cuenta de + 3, un pH entre 8.0 y 8.4 recibió una cuenta de + 2, un pH entre 7.25 y 7.9 recibió una cuenta de + 1, y un pH entre 5.0 y 7.25 recibió una cuenta de 0; el contenido de proteínas entre aproximadamente 30-100 mg/dl se le dio una cuenta de + 1; entre aproximadamente 100 mg/dl y 300 mg/dl se le dio una cuenta de +2; la proteína entre aproximadamente 300 mg/dl y 2000 mg/dl se le dio una cuenta de +3; y la proteína mayor de 2000 mg/dl recibió una cuenta de +4; concentraciones de nitrito bajas recibieron una cuenta de -1; concentraciones de nitrito moderadas recibieron una cuenta de +2; y concentraciones de nitrito elevadas recibieron una cuenta de +3; actividad de esterasa en pequeñas cantidades recibió una cuenta de aproximadamente +1, una cuenta de +2 se asignó a cantidades moderadas y una cuenta de +3 se asignó a cantidades mayores de esterasa. Sumando las cuentas asignadas a los eosinófilos, pH, nitrito, proteína, y esterasa, se produjo el histograma de la Figura 2. El nivel de infiltración de eosinófilos se muestra en la Figura por +, + +, y + + + para infiltración de eosinófilos traza, moderada y fuerte, respectivamente. Los pacientes que tienen sinusitis radiológicamente confirmados se muestran con símbolos punteados; los pacientes radiológicamente confirmados que tienen sinusitis pero quienes han sido al menos parcialmente tratados con antibióticos se muestran con un símbolo medio punteado medio lleno; los pacientes radiológicamente transparentes de sinusitis pero que presentaron eosinofilia se muestran por símbolos abiertos; los pacientes radiológicamente transparentes de sinusitis sin eosinofilia concomitante se muestran con símbolos diagonalmente llenos/vacíos. Este método de diagnóstico diferencial puede usarse con cualquier método para recolectar el pH, proteína, esterasa, nitrito y contenido de eosinófilos de secreciones nasales, y no se restringe al uso de tiras indicadoras de reactivos. El uso de la tira indicadora de reactivo es, sin embargo, uno de los métodos más fácilmente conducidos, baratos y rápidos para lograr este análisis. El nivel de infiltración de eosinófilos se estima fácilmente en una modalidad de la invención usando microscopía de campo de alta potencia (aproximadamente 400 x de aumento) determinando el porcentaje de células totales que son eosinófilos en un frotis de secreción nasal teñido de Hansel. En consecuencia, un perfil de eosinófilos de 0-10% no recibió cuenta negativa; un perfil de eosinófilo de 10-25% recibió un "+" (es decir, cuenta asignada de -2); un perfil de eosinófilo de 26-50% recibió un "++" (es decir, cuenta asignada de -4) ; y un perfil de eosinófilo de 51-75% recibió un "+++" (es decir, una cuenta asignada de -6) . Conforme al inserto del paquete del producto AMES 9SG Multisux® , la siguiente información suministrada para urinalisis por este fabricante puede aplicarse directamente a la utilidad novedosa descrita y reclamada en la presente, y se incorpora por este medio como sigue: Las TIRAS DE REACTIVO para análisis de moco son tiras de plástico firme a las cuales se fijan varias áreas de reactivos separadas. Dependiendo del producto usado, las TIRAS DE REACTIVO AMES proporcionan pruebas para glucosa, bilirubina, cetona (ácido acetoacético) , gravedad específica, sangre, pH, proteína, urobilinógeno, nitrito y leucocitos en orina. Un usuario de estas tiras se refiere a la etiqueta del cartón y la botella para áreas de reactivo específicas sobre el producto que se usa. Las áreas de prueba del reactivo sobre las TIRAS DE REACTIVO AMES son fáciles de usar al retirarlas de la botella y la tira de reactivo completa es desechable. Las tiras pueden leerse visualmente, no requiriendo equipo de laboratorio adicional para la prueba. Algunas configuraciones de tiras también pueden leerse instrumentalmente, usando la familia CLINITEK® de analizadores de química de orina y el Módulo de Programa apropiado o Tarjeta de Programa de AMES. Las instrucciones deben seguirse exactamente. El tiempo preciso es esencial para proporcionar resultados óptimos. Las tiras de reactivo deben mantenerse en la botella con la tapa cerrada apretadamente para mantener la reactividad del reactivo. Para obtener resultados óptimos es necesario usar moco fresco. Principios Químicos del Procedimiento pH: Esta prueba se basa en un principio indicador doble que da un amplio rango de colores que cubren el rango de pH urinario completo. Los colores varían de naranja hasta amarillo y verde hasta azul. Proteína: esta prueba se basa en el principio de proteína error de indicadores. A un pH constante, el desarrollo de cualquier color verde se debe a la presencia de proteínas. Los colores varían de amarillo para reacciones "Negativas" a través de amarillo-verde y verde hasta verde-azul para reacciones "Positivas". Nitrito: Al pH ácido del área reactiva, el nitrito en la secreción nasal reacciona con ácido p-arsanílico para formar un compuesto de diazonio. Este compuesto de diazonio a su vez se acopla con 1, 2, 3, 4-tetrahidrobenzo (h) quinolin-3-ol para producir un color rosa. La intensidad del color rosa desarrollado se usa como la base para asignar la cuenta de concentración de nitrito como se describió anteriormente. Leucocitos: Los leucocitos granulocíticos contienen esterasa que cataliza la hidrólisis del éster pirrol aminoácidos derivatizado para liberar 3-hidroxi-5-fenil pirrol. Este pirrol reacciona después con una sal de diazonio para producir un producto púrpura. La intensidad del color púrpura desarrollando se usa para asignar un valor a la actividad de esterasa como se describió anteriormente. REACTIVOS (Con base en el peso seco en el momento de la impregnación) : pH: 0.2% peso/peso de rojo de metilo; 2.8% peso/peso de rojo de metilo; 2.8% peso/peso de azul de bromotinol; 97.0% peso/peso de ingredientes no reactivos. Proteína: 0.3% peso/peso de azul de tetrabromofenol; 97.3% peso/peso de regulador; 2.4% peso/peso de ingredientes no reactivos. Nitrito: 1.4% peso/peso de ácido p-arsanílico; 1.3% peso/peso de 1, 2, 3, 4-tetrahidrobenzo- (h) -quinolin-3-ol; 10.8% peso/peso regulador; 86.5% peso/peso de ingredientes no reactivos . Leucocitos: 0.4% peso/peso de éster pirrol aminoácido derivado; 0.2% peso/peso de sal de diazonio; 40.9% peso/peso de regulador; 58.5% peso/peso de ingredientes no reactivos . Aquellos expertos en la técnica reconocerán que otros componentes químicos pueden usarse para llevar a cabo el método descrito en la presente. Procedimientos Recomendados para Manejo de las Tiras de Reactivo: Todas las tiras no usadas deben permanecer en la botella original. La transferencia a cualquier otro recipiente puede causar deterioro a las tiras de reactivo y volverse no reactivas. No remover los desecadores de la botella. No remover la tira de la botella hasta inmediatamente antes de usarse para la prueba. Reponer la tapa inmediatamente y cerrar herméticamente removiendo la tira de reactivo. No tocar las áreas de prueba de la tira de reactivo. Las áreas de trabajo y los recipientes de espécimen deben estar libres de detergentes y otras sustancias contaminantes . Sumergir las áreas de prueba en moco completamente, pero brevemente, para evitar disolver los reactivos. Si se usan tiras leer visualmente los resultados de la prueba cuidadosamente en los tiempos especificados en una buena luz (tal como fluorescente) y con el área de prueba sostenidas cerca de la Carta de Color apropiada en la etiqueta de la botella. No leer las tiras en luz solar directa. Si las tiras se usan instrumentalmente, seguir cuidadosamente las instrucciones dadas en el manual de operación del instrumento apropiado. La protección en contra de la humedad ambiental, la luz y el calor es esencial para protegerse en contra del reactivo alterado. La decoloración u oscurecimiento de las áreas reactivo puede indicar deterioro. Si esto es evidente, o si los resultados de prueba son cuestionables o inconsistentes con el descubrimiento esperado, se recomiendan los siguientes pasos: (1) confirmar que el producto está dentro de la fecha de caducidad mostrada en la etiqueta; (2) comprobar el funcionamiento en contra de cualquier material control positivo (por ejemplo, CHEK-STIX® Control Strips) ; (3) reprobar con un producto reciente. El siguiente procedimiento debe seguirse exactamente para lograr resultados de la prueba confiables: 1. Recolectar espécimen de moco reciente sobre una superficie no absorbente. 2. Remover una tira de la botella y reponer la tapa. Sumergir completamente las áreas de reactivo de la tira en moco reciente y remover inmediatamente para evitar disolver los reactivos. 3. Si se lee visualmente, comparar las áreas reactivas con la carta de color correspondiente sobre la etiqueta de la botella en el tiempo especificado. Sostener la tira cerca los bloques de color y comparar cuidadosamente. Evitar colocar la tira directamente sobre la carta de color, puesto que esto resultará en ensuciar la carta. 4. Si se lee instrumentalmente, seguir cuidadosamente las instrucciones dadas en el manual de operación del instrumento apropiado.
El tiempo de lectura apropiado es crítico para resultados óptimos. Si se usan las tiras visualmente, leer el pH, proteína y nitrito en 60 segundos; y leucocitos en dos minutos. El pH y las áreas de proteína pueden también leerse inmediatamente o en cualquier tiempo hasta 2 minutos después de sumergir. Después de sumergir la tira, comprobar el área de pH. Si el color sobre la almohadilla no es uniforme, leer el área de reactivo inmediatamente, comparando el color más obscuro con la Carta de Color apropiada. Todas las áreas reactivo excepto leucocitos pueden leerse en aproximadamente 1 minuto para identificar especímenes negativos y para determinación del pH. Una reacción positiva (pequeña o más grande) en menos de 2 minutos en la prueba de leucocito puede considerarse como una indicación positiva de leucocitos. Los cambios de color que ocurren después de 2 minutos no son de valor para diagnóstico. Si se usan tiras instrumentalmente, el instrumento leerá automáticamente cada área reactiva en un tiempo especificado. Para mejores resultados, el funcionamiento de las tiras de reactivo debe confirmase probando especímenes negativos y positivos conocidos o controles siempre que se abra una nueva botella. Los especímenes negativos y positivos o controles también pueden esconderse aleatoriamente en cada lote de especímenes probados. Cada laboratorio debe establecer sus propias metas para estándares adecuados de funcionamiento, y deben cuestionar el manejo y los procedimientos de prueba si estos estándares no se satisfacen. CHEK-STIX® Urinalysis Control Strips (# 1360) de AMES®, con resultados positivos o definidos, proporciona una base conveniente para el programa de control de calidad. Los resultados con las TIRAS DE REACTIVOS AMES se obtienen en unidades clinicamente significativas directamente de la comparación de la Carta de Color cuando se usan las tiras visualmente. Con uso instrumental, los parches reactivos se "leen" por el instrumento y los resultados se muestran o imprimen. Los bloques de color y los valores mostrados del instrumento representan valores nominales; los valores actuales variarán alrededor de los valores nominales. pH: Si no se sigue el procedimiento apropiado y permanece exceso de moco en la tira, un fenómeno conocido como "derrame" puede ocurrir, en el cual el regulador ácido del reactivo de proteína correrá sobre el área de pH, causando una disminución falsa del resultado de pH. Proteína: La contaminación del espécimen de secreción nasal con compuestos de amonio cuaternarios (por ejemplo, de algunos antisépticos y detergentes) o con limpiadores de la piel que contienen clorexhidina también pueden producir resultados positivos falsos. Nitrito: Manchas rosas o borde rosas no deben interpretarse como un resultado positivo. Cualquier grado de desarrollo de color rosa uniforme debe interpretarse como una prueba de nitrito positiva. Leucocitos: Las concentraciones de glucosa elevada
(>3 g/dl) o alta gravedad especifica puede causar resultados de la prueba disminuidos. La presencia de cefalexina
(Keflex®) , cefalotin (Klefin®), o altas concentraciones de ácido oxálico pueden también causar resultados de la prueba disminuidos. La tetraciclina puede causar reactividad disminuida, y altos niveles del fármaco pueden causar una reacción negativa falsa. Leucocitos: La secreción nasal normal generalmente producirá resultados negativos; los resultados positivos
(pequeños o mayores) son clínicamente significativos. Los resultados traza individualmente observados puede ser de significancia clínica cuestionable; sin embargo, los resultados traza observados repetidamente pueden ser clínicamente significativos. Los resultados traza positivos y repetidos indican la necesidad de prueba adicional del paciente y/o espécimen nasal, conforme a los procedimientos médicamente aceptados. Características de funcionamiento específico: Las características de funcionamiento específicas se basan en estudios clínicos y analíticos. En especímenes clínicos, la sensibilidad depende de varios factores; la variabilidad de la percepción del color; la presencia o ausencia de factores inhibidores, la gravedad específica, y el pH; y las condiciones de iluminación cuando el producto se lee visualmente. Debido a que el color de cada área de reactivo cambia conforme aumenta la concentración de analito, el porcentaje de especímenes detectados como positivos aumentará con la concentración de analito. Cada bloque de color o valor mostrado instrumental representa un rango de valores. Debidos a la variabilidad del espécimen y la lectura, los especímenes con concentraciones de analito que caen entre los niveles nominales pueden dar resultados en cualquier nivel. La concordancia exacta entre los resultados visuales y los resultados instrumentales pueden no encontrarse debido a las diferencias inherentes entre la percepción del ojo humano y el sistema óptico de los instrumentos . pH: El área de prueba de pH mide los valores de pH generalmente dentro de una unidad en el rango de 5-8.5 visualmente y 5-9 instrumentalmente . Proteína: el área de reactivo es más sensible a la albúmina que a las globulinas, hemoglobina, Proteína Bence-Jones y mucoproteína; un resultado negativo no excluye la presencia de estas otras proteínas. Nitrito: La comparación del área de reactivo reaccionada en contra de un fondo blanco puede auxiliar en la detección de bajos niveles del ion nitrito, que de otra forma pueden perderse. Disponibilidad: Las TIRAS DE REACTIVO AMES para Urinalysis están disponibles en botellas de 100 tiras: MULTISTIX® 10 SG (#2300A); MULTISTIX® 9 (#2301A) ; MULTISTIX® 9 SG (#2303A); MULTISTIX® 8 SG (#2304A) ; MULTISTIX® 7 (#2305A); N MULTISTIX® SG (#2740A] ; MULTISTIX® SG (#2741A) ; N-MULTISTIX® (#2829A); MULTISTIX® (#2820A) ; y BILI-LABSTIX® (#2814A) . Cualquiera de estas u otras tiras de prueba reactiva comercialmente disponibles que proporcionan pH, proteína, nitrito, esterasa y preferiblemente también datos de eosinófilos pueden usarse conforme a esta descripción para diferenciar entre infecciones bacterianas, infecciones virales y condiciones alérgicas. Así, en un modo completamente análogo al descrito anteriormente para las tiras de prueba reactiva TIRAS DE REACTIVO Ames comercialmente disponibles producidas por Bochringer Mannheim Corporation pueden usarse o adaptarse para este propósito. Por ejemplo CHEMSTRIP 9 No. de Catálogo 417109, proporciona una lectura para leucocitos, nitrito, pH, proteínas y varios otro analitos. La información proporcionada en el inserto del paquete para el CHEMSTRIP 6, 7, 8, 9, 10 (que también proporciona una lectura para gravedad específica) , es considerablemente análoga a la información proporcionada anteriormente del producto Multistxx®. Aquí, la prueba de las secreciones nasales usando el producto de Boheringer produjo resultados que, conforme a esta invención, son similares a aquellos obtenidos usando el producto Multistix®. Ligeros ajustes en las lecturas del color y los valores de las mismas pueden necesitarse debido a las diferencias entre las cartas de color usadas por los dos fabricantes, pero, basándose en la descripción actual, aquellos expertos en la técnica son capaces de hacer cualquier ajuste necesario. En un aspecto de la invención, se proporciona una tira de prueba reactiva específicamente adaptada para diferenciar rápidamente, no invasivamente y en forma barata entre las condiciones alérgicas y respiratorias, infecciones virales y bacterianas. En uso, la tira de prueba se optimiza para proporcionar información acerca de secreciones de moco nasal incluyendo, pero no limitándose a pH, contenido de proteína, nitrito, actividad de esterasa y nivel de infiltración de eosinófilos, tal que toda la información presentada en la Figura 2 pueda obtenerse de una tira indicadora individual. Esto se logra, por ejemplo, preparando una tira de prueba reactiva conforme a las tiras comercialmente disponibles, pero además, proporcionando un medio para medir la cantidad de proteína catiónica de eosinófilo (ECP) u otra proteína específica de eosinófilos o una enzima presente en la secreción nasal, la presencia de la cual es proporcional a la cantidad de infiltración de eosinófilo. Alternativamente, la tira de prueba podría hacerse como para atrapar selectivamente eosinófilos, y la prueba podría ser después para cualquier sustancia encontrada en eosinófilos (tal como una enzima o cualquier otra sustancia detectable) , sin ser necesario para la sustancia ser específica para eosinófilos. La tira de prueba reactiva novedosa de esta invención, por lo tanto, puede incluir una ubicación indicadora sobre la tira que comprende proteína catiónica de eosinófilo inmovilizada (ECP) u otra proteína apropiada enlazada al anticuerpo anti-ECP marcada u otro anticuerpo específico. En este caso, la tira se pone en contacto con moco de un paciente y todos los otros parámetros (pH, proteína, nitrito, esterasa) se leen a partir de la tira. La tira se incuba después durante una cantidad de tiempo suficiente de manera que la ECP presente en el moco, debido a la infiltración de eosinófilos compite con el anticuerpo marcado de la ECP enlazada a la tira. Como un resultado durante la visualización de la marca, a mayor cantidad de ECP presente en el moco, menor cantidad de marca visualizada. El anticuerpo podría marcarse enzimáticamente, o marcarse con biotina o avidina, que podría después visualizarse por métodos bien conocidos en la técnica. Análogamente, las ECP u otro anticuerpo específico de antígeno de eosinófilo podría inmovilizarse sobre la tira la cual con la exposición a las secreciones nasales, enlaza cualquier ECP u otra proteina o enzima específica de eosinófilo presente en la secreción. El exceso de muestra podría lavarse después de la tira y una segunda ECP marcada u otro anticuerpo específico de antígeno de eosinófilo o sustrato cromogénico de enzima específico de eosinófilo podría ponerse en contacto con la tira. En este caso, a mayor señal durante el desarrollo, mayor cantidad de eosinofilia en el paciente. Preferiblemente, una enzima específica de eosinófilo se detecta proporcionando un reactivo cromogénico sobre la tira que cambia de color en un grado proporcional a la cantidad de eosinófilos presentes en la muestra. En este contexto, las enseñanzas de las Patentes Norteamericanas Nos. 5,369,007 y 5,200,321, incorporadas en la presente para referencia, mientras que se dirigen a una técnica muy diferente (detección de fármacos ilícitos) son instructivas aquí. Conforme a aquellas patentes, una microprueba sobre una tarjeta podría adaptarse a la utilidad actual en un modo de desplazamiento o competencia como se describió anteriormente en la presente, usando antígenos y anticuerpo específicos de eosinófilos. Igualmente, los conceptos y métodos descritos en la presente podrían utilizarse para preparar la tira de prueba reactiva novedosa de la invención actual. En aún otra modalidad de la tira de prueba novedosa de esta invención una porción de la tira puesta en contacto con la secreción nasal es transparente. Esta poción se tiñe después simplemente y se cuantifica microscópicamente por eosinófilos como se describió anteriormente, después de leer todos los otros parámetros reactivo. En cualquier caso, aún con el uso de una tira de prueba reactiva comercialmente disponible estándar, todo lo que se requiere para el método de esta invención es que, además de poner en contacto a la secreción nasal, con una tira de prueba reactiva apropiada y cuantificar el pH, nitrito, esterasa y proteina es que el moco se evalúe por eosinófilos. Esto se logra rápida y fácilmente haciendo un frotis de la secreción nasal, tiñendo el frotis con eosina u otro tinte apropiado, y cuantificando el número de eosinófilos presentes por campo. Alternativamente, el método hemocitométrico de Okuda et ai., (Int. Arch Allergy Immunol, [1994] 104:6) o de Settipane [Allegy Proc. [1985] 6:303-366), incorporado en la presente para referencia, podría usarse para este propósito. Conforme a los métodos conocidos en la técnica, se ha encontrado que las ECP nasal varía entre aproximadamente 30 ng/ml en un individuo "normal", hasta aproximadamente 200 ng/ml en individuos que experimentan reacciones alérgicas agudas (véase Clin. Exp. Allergy 1997, 27:270-276; véase también JACI 1996, 97:104-112; véase también Clin. Exp. Allergy 1994, 24:1151-1156) . Los anticuerpos comercialmente disponibles para llevar a cabo el método y para hacer el dispositivo conforme a la presente invención pueden obtenerse, por ejemplo, de Pharmingen. Asi, el número de catálogos Pharmingen 15371A es un anticuerpo monoclonal IgGl de ratón (clon AIIE-1) que reconoce peroxidasa de eosinófilo humano, una proteina gránulo de 81 kD especifica para eosinófilo. El número de catálogo Pharmingen 15381A es un anticuerpo monoclonal IgGl de ratón (clon AHE-2) que reconoce Proteina Básica Principal de eosinófilo humano, una proteina gránulo de 14 kD especifica para eosinófilo. En consecuencia, una amplia diversidad de marcadores específicos de eosinófilos puede emplearse conforme al método y para el dispositivo de esta invención. Así, una proteina seleccionada del grupo pero no limitada al grupo, proteína básica principal de eosinófilo (MBP) , presente en aproximadamente 9µg millón de eosinófilos, proteína catiónica de eosinófilo (ECP) , presente en aproximadamente 5 µg/millón de eosinófilos, neurotoxinas derivada de eosinófilo (EDN) , presente en aproximadamente 3 µg/millón de eosinófilos, o peroxidasa de eosinófilo (EPO) , presente en aproximadamente 12 µg/millón de eosinófilos, (véase Texbook of Allergy, Principies and Practice, para concentraciones de estos marcadores), pueden emplearse en el dispositivo o método conforme a esta invención, usando anticuerpos comercialmente disponibles, o anticuerpos desarrollados independientemente.
Como se menciona anteriormente, los conjugados de avidina/biotina de tales marcadores específicos de eosinófilos también pueden emplearse conforme a esta invención. En consecuencia, esta invención proporciona un método para diferenciar rápidamente, en forma no invasiva o en forma barata entre alergia e infección respiratoria viral o bacteriana. El método involucra medir el pH, contenido de proteína, contenido de nitrito, actividad de esterasa y contenido de eosinófilos de una muestra de secreción nasal puesta en contacto. Una combinación de un pH entre aproximadamente 7.5 y 9 una presencia moderadamente fuerte de proteína, al menos una traza de esterasa y nitrito y ausencia de eosinófilos indica la presencia de una infección bacteriana. La combinación de un pH entre aproximadamente 5.0 y 7.0 poca o ninguna proteína, poco o ningún nitrito, poco o ninguna actividad de esterasa y contenido de eosinófilos de moderado a fuerte es indicativo de una condición alérgica. La combinación de un pH entre aproximadamente 5.0 y 7.0 poca o ninguna proteína, y al menos una traza de nitrito y esterasa y la ausencia de infiltración de eosinófilos indica una infección viral del tracto respiratorio superior. En una modalidad preferida de este método, cada valor obtenido para pH, proteína, nitrito, esterasa e infiltración de eosinófilos en una secreción nasal del paciente, se le asigna un valor tal que la suma de valores asignados resulta en una mejoría en la agrupación de pacientes que tienen infecciones bacterianas, una agrupación de pacientes que tienen infección viral, y una agrupación de pacientes que tienen alergias. Al mismo tiempo los valores asignados resultan preferiblemente en una separación entre estas agrupaciones. En una modalidad preferida, este método se práctica con una tira de prueba reactiva. Las tiras de prueba que se usan en esta prueba pueden ser aquellas producidas por la división Ames de laboratorio Miles como se describe en cualquiera de las Patentes Norteamericanas Nos. 3,438,737; 4,301,115; 4,637,979, 4,645,842; 4,657,855; 4,704,460; 4,758,508, o por Boehringer Mannheim Corporation, como se describe en cualquiera de las Patentes Norteamericanas Nos. 3, 359, 072; 3,418,079; 3,712,853; 3,897,214; 3,802,842; 4,013,416; 4,385,114. Una tira de prueba reactiva específicamente adaptada para diferenciar rápidamente, no invasiva o en forma barata entre alergia e infección respiratoria se proporciona también. Esta tira novedosa comprende reactivos adaptados para proporcionar información sobre el pH, contenido de proteína, contenido de nitrito, actividad de esterasa y contenido de eosinófilos de la muestra puesta en contacto. Referencias Service. R,F. (1995) Science 270:724-727 Katz, et ai. (1995) Allergy Proc. 16:123-127. Wang. et al., (1995) "Correlations between Complaints, Inflammatory Cells and Mediator concentrations in Nasal Secretions after Nasal Allergen Challenge and during Natural Allergen Exposure "Int. Arch. Allergy Immunology 106:278-285. Sigurs. et al. (1994) "Eosinophil cationic protein in nasal secretion and in serum and myeloperoxidase in serum in respiratory syncytial virus bronchiolitis : relation to asthma and atopy, " Acta Paediatr 83:1151-1155. Okuda et al. (1994) "A Novel Method of Counting Eosinophils in Nasal Secretion of Allergic Rhinitis by Hemocytometric Method "Int. Arch. Allergy Immunol. 104 (suppl. 1):6 Kowalski et al. (1993) "Neutrophil chemotactic activity (NCA) in nasal secretions from atopic and nonatopic subjects." Allergy 48:409-414. Igarashi, et al., (1993) "Analysis of nasal secretions during experimental rhinovirus upper respiratory infections "J. Allergy Clin, Immunol. 92:722-731. Sperber et al., (1993) "In vivo detection of a novel macrophage-derived protein involved in the regulation of nasal mucus-like glycoconjugate secretion "J. Allergy Clin. Immunol 92:581-588. Knani et al., (1992) "Indirect evidence of nasal inflammation assessed by titration of inflammatory mediators and enumeration of cells in nasal secretions of patients with chronic rhinitis "J. Allergy Clin. Immunol 90:880-889. Klementsson, et al., (1991) "Eosinophils, secretory responsiveness and glucocorticoid-induced effects on the nasal mucosa during a weak pollen season, " Clinical and Experimental Allergy 21:705-710. Gordon, et al . , (1991) "The pathophysiology of rhinitis." J. Allergy Clin. Immunol 88:33-42. Cohén, R.A., E.P. Brestel (1988) "Nasal secretory response to allergen provocation, " Clinical Allergy 18:435-443. Liu, et al. , (1988) "Injurious effect of eosinophil extract on the human nasal mucosa". Rhinology 26:121-132. Anderson, et al., (1987) "Allergen-induced nasal hyperactivity appears unrelated to the size of the nasal and dermal immediate allergic reaction," Allergy 42:631-637. Settipane. G.A. D.E. Klein (1985) "Non Allergic Rhinitis;
Demography of Eosinophils in Nasal Smear, Blood Total Eosinophil Counts and IgE Levéis," NER Allergy Proc. 6:363- 366. Brofeldt, et al., (1986) "Biochemical Analysis of Nasal Secretions induced by Methacholine, Histamine, and Allergen Provocations, " Am. Rev. Respir, Dis. 133:1138-1142. Eggelston, et al., (1984) "Mediators of Immediate Hypersensitivity in Nasal Secretions during Natural Colds and Rhinovirus Infection. "Acta Otolaryngol . suppl . 413:25-35. Baurngarten, et al., (1986) "Plasma Kallikrein During Experimentally Induced Allergic Rhinitis: Role in Kinin Formation and Contribution to TAME-Esterase Activity in Nasal Secretions "J. Immunol, 137:977-982. Anderson, et al . , (1995) "Mechanisms of nasal hyper-reactivity, " Eur. Arch. Otorhinolaryngol, 252 (suppl. 1) :S22-S26. Florman, et al. , (1987) "Rapid Non-invasive Techniques for Determining Etiology of Bronchitis and Pneumonía in Infants and Children," Clin. Chest Med, 8:669-679. Katz, et al.f (1995) "A comparison of Imaging Techiques in Patients with Chronic Sinusitis (X-Ray, MRI, A-Mode Ultrasound) , "Allergy. Proc. 16:123-127. Demoly, et al. , (1994) "Assessment of Inflammation in noninfectious chronic maxillary sinusitis." J. Allergy Clin. Immunol. 94:95-108. Atkinson, Roger I.ee. Marshall Lloyd Fader. Patente Norteamericana No. 3,438,737, expedida el 15 de abril de 1969. Rapkin, Myron C, David I., Tabb, Patente Norteamericana No. 4,301,115, expedida el 17 de noviembre de 1981. Skjold, A. Christopher, Herbert Hugl, Gerhard Wolfrum Patente Norteamericana No. 4,637,979, expedida el 20 de enero de 1987. Corey, Paul F., Patente Norteamericana No. 4,645,842, expedida el 24 de febrero de 1987. Corey, Paul F., Christopher Skjold. James H. Pendergrass, Lonnic Stover Patente Norteamericana No. 4,657,855, expedida el 14 de abril de 1987. Corey, Paul F. , Patente Norteamericana No. 4, 704, 460, expedida el 3 de noviembre de 1987. Schnabel, Eugen, James Travis, A. Christop er Skjold Patente Norteamericana No. 4,758,508, expedida el 19 de julio de 1988. Kid ell, David A, Patente Norteamericana No. 5,369,007, expedida el 29 de noviembre de 1994. Patente Norteamericana No. 5,200,321. Rey, Hans-Georg. Peter Rieckmann. Patente Norteamericana No.
3,359,072, expedida el 19 de diciembre de 1967. Rey, Hans-Georg. Peter Rieckmann, Patente Norteamericana No.
3,418,079, expedida el 24 de diciembre de 1968; Rittersdorf, Walter. Hans-Georg Rey. Peter Rieckmann, Patente Norteamericana No. 3,712,853, expedida el 23 de enero de
1973. Lange, Hans, Walter Rittersdorf, Hans-Georg Rey Patente Norteamericana No. 3,897,214, expedida el 29 de julio de 1975. Lange. Hans. Walter Rittersdorf, Hans-Georg Rey, Peter Rieckmann Patente Norteamericana No. 3,802,842, expedida el 9 de abril de 1974. Rittersdorf, Walter Werner Güthlein, Wolfgang Werner. Hans-Georg Rey. Peter Rieckmann Patente Norteamericana No. 4,013,416, expedida el 22 de marzo de 1977.
Güthlein Werner, Walter Rittersdorf, Hugo Tiedemann, Peter Vogel Wolfgang Werner, Patente Norteamericana No. 4,385,114, expedida el 24 de mayo de 1983.