KR20180059371A - 바리셀라 조스터 바이러스 백신 - Google Patents

바리셀라 조스터 바이러스 백신 Download PDF

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Abstract

본 발명은 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)로서, 구체적으로는 알루미늄 염(aluminum salt)으로 구성된 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 단백질 항원을 사용하기 때문에, 생균 백신보다 안전성이 우수하며, 면역 증강제의 혼합비율이 최적화되어 있어, 항체 유도능이 효과적으로 일어날 수 있기 때문에, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)에 의한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신으로 유용하다.

Description

바리셀라 조스터 바이러스 백신{Varicella Zoster Virus Vaccines}
본 발명의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE)을 항원으로 하는 백신 조성물에 관한 것이다.
바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus, VZV)는 주로 아동 및 청소년에서 수두를 일으키는 바이러스로, 한번 감염 후 수년 동안 감각신경근 및 뇌신경의 신경절 세포에 잠복해 있다가, 성인이 되어 면역력이 떨어지면, 재활성화 되어 대상포진을 유발하는 바이러스이다. 수두는 전염성이 강한데 일단 감염되면 열감 및 권태감을 동반한 전신에 수포성 홍반을 나타내게 된다. 정상 소아에서는 대부분의 경우 심각하게 진행되는 경우가 드물고 최종적으로 자기 한정 질환 (self-limiting disease)로 진행 하지만, 장기이식, 항암치료를 받은 환자에서 심각한 증상으로 진행하는 경우가 많이 발생하는 것으로 알려져 있다(Adriana Weinberg et al., J Infectious Diseases, 200(7):1068, 2009; Judith Breuer et al., Expert Review of Vaccines, 2017 , DOI:10.1080/14760584.2017.1394843).
대상포진의 초기 증상은 몸살처럼 온몸이 쑤시고 아프거나 심한 가려움증과 따끔거림, 화끈거림, 칼로 찌르는 듯한 심한 통증이 수반되며, 수일이 지나면 수포가 발생하게 되는데, 피부 병변이 많을수록 통증이 커지며, 고령의 환자일수록 더 심각한 통증을 호소하는 경향이 있는 질병이다. 대상포진은 완치가 돼도 신경통증의 후유증을 남기는데, 40세 이하의 성인에게는 비교적 드물지만, 60세 이상에서는 잠을 설치거나, 만성피로를 호소하기도 하고, 작은 접촉이나 마찰에도 심한 통증을 느끼거나, 우울증까지 유발할 수 있는 것으로 알려져 있다.
수두 예방 백신으로는 1970년도에 개발된 약독화 균주인 Oka 주를 사용하여 개발된 VARIVAX(머크사), VARILRIX(글락소스미스클라인사) 등의 제품이 대표적으며, 국내에서는 1980년도에 개발된 MAV/06주를 사용한 수두박스(녹십자) 등의 제품이 상용화 되어 있다. 해당 상용화 생백신은 평균 80%의 방어 효능을 보여 백신 접종자 중 20%에서 백신 후에도 질병에 감염되고 있으며, 백신에 포함된 살아있는 바이러스로 인한 수두 및 대상포진 발병 등의 안정성 문제가 꾸준히 지적되어 왔다.
대상포진 예방 백신으로는 Oka 주의 약독화 생백신인 ZOSTAVAX(머크사)가 개발되었으며, 백신에 포함된 바이러스의 양이 많기 때문에, 어린이나 청소년이 아닌 50세 이상 성인을 대상으로 사용하는 것을 조건으로 미국과 한국에서 허가되어 판매되고 있다. 최근에는 글락소 스미스클라인사에 의하여 50세 이상의 성인을 대상으로 하는 바이러스 표면 단백질인 gE 및 면역증강제로 구성된 백신이 개발되어, 임상시험에서 예방효과가 입증되었다.
백신 개발 초기에 사용된 항원은 주로 약독화 생균 또는 사균을 사용하였으나, 안정성 문제로 인하여, 구조와 성분이 명확한 단백질 항원으로의 개발로 전환되는 추세이다 그러나, 단백질 항원은 일반적으로 기존의 백신에 비하여 면역원성이 낮은 문제가 있다.
면역원성이 낮은 항원을 사용할 경우, 면역이 저하되어 백신접종의 효과가 충분히 나타나지 않는 만성 질환자나 고령자를 접종대상으로 할 경우. 그리고 인플루엔자와 같이 갑작스러운 전염병 창궐로 다량의 백신이 필요하여 항원 절감이 필요한 경우, 면역증강제(adjuvant)를 항원과 혼합 사용함으로써, 면역반응을 향상시킬 수 있으며, 백신의 교차반응성을 증가시킬 수 있어 백신에 포함되지 않은 혈청형 균주에 대한 방어효과의 증가시킬 수 있다(이나경, 특별기고 분자세포생물학뉴스레터 5월호, 2015).
임상적으로 안정성과 효능이 검증되어, 현재 시판되는 대부분의 백신에 사용되고 있는 면역증강제로는 수산화알루미늄(aluminum hydroxide) 또는 인산화(aluminum phosphate) 등의 알루미늄 염(aluminum salt)이 대표적이다. 면역증강 반응에 있어서, 알루미늄의 명확한 작용 기전은 밝혀져 있지 않으나, 단백질과 흡착하여 단백질 항원의 안정성을 증가시고, 항원을 서서히 방출되도록 하기 때문에, 면역세포를 지속적으로 활성화하는 역할을 하는 것으로 여겨지고 있으며, 또한 알루미늄이 세포에 위험신호(danger signal)로 작용하여 IL-1β 분비를 유도한다는 보고가 있다(Kool M et al., 205(4):869, J Exp Med, 2008).
반면, 알루미늄은 홍반, 피하결절, 접촉성 과민반응, 육아종성 염증 등의 부작용을 수반하기 때문에, 함량을 감소시키는 방법 등으로 이를 해결하고자 노력하고 있으며, 그 밖에도 알루미늄이 함유된 백신은 동결건조를 할 수 없어 냉장보관해야 하고, 생산 품질 재현성이 떨어져 백신 제조과정에서 생산 로트마다 차이가 나타나기 때문에 백신의 품질관리가 쉽지 않은 단점이 있다.
알루미늄과 항원과의 흡착으로 면역반응이 상승하는 것으로 알려진 통상의 기대와는 달리, 최근에는 면역증강제의 양과 면역반응의 효과는 반드시 비례적으로 나타나지 않는 것으로 알려졌다, 또한 백신 내 함유된 알루미늄의 용량을 증가시키면 일정 범위까지 면역효과가 증가하지만, 과량을 사용하면 항원을 완전히 은폐 시키거나 대식세포에 대해 독성 효과를 야기하기 때문에 오히려 면역원성을 억제하는 단점이 있는 것으로 확인되었으며. 오히려, 단백질 항원과 알루미늄의 흡착으로 인하여, 면역반응의 상승효과보다는 열안정성이 높아지는 것으로 최근 확인되었다(Amber Haynes Fradkin et al., 100(11):4953, J Pharm Sci, 2011).
또한, 모든 항원에 대하여 동일하게 면역증강 효과가 나타나지 않는다. 장티푸스백신, 인플루엔자 haemagglutinin 항원, 파상풍 독소 결합형 인플루엔자 b형(Hib) 캡슐 다당체 등에 대해서는 면역증강제로서의 기능을 발휘하지 못하는 것으로 알려져 있다(RK Gupta et al., 32(3): 155, Adv Drug Deliv Rev, 1998).
이에 본 발명자들은 단백질 항원을 포함하는 수두 및 대상포진 백신을 개발하는데 있어서, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 유래의 단백질 항원에 의한 면역 유도능을 향상시키기 위하여 예의 노력한 결과, 특정 비율의 알루미늄을 면역증강제로 혼합 사용할 경우, 면역 유도능이 현저하게 향상되는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 백신 조성물은 단백질 항원을 사용하기 때문에, 생균 백신보다 안전성이 우수하며, 면역 증강제의 혼합비율이 최적화되어 있어, 항체 유도능이 효과적으로 일어날 수 있기 때문에, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)에 의한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신으로 유용하다.
도 1은 마우스에서 바리셀라 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE) 5 μg에 대한 알루미늄 양이온(Al3 +) 농도에 따른 항체 유도능을 확인한 그래프이다.
도 2는 마우스에서 표면 단백질(gE) 10 μg에 대한 알루미늄 양이온(Al3 +) 농도에 따른 항체 유도능을 확인한 그래프이다.
도 3은 기니피그에 대해 표면 단백질(gE)과 알루미늄 염에 의한 면역유도 후, 혈청에 포함된 항체가를 ELISA로 확인한 결과 그래프이다.
도 4는 기니피그에서 표면 단백질(gE)과 알루미늄 염의 면역에 의해 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 중화항체가 생성되는지를 확인하기 위하여 Plaque Reduction Neutralization Test(PRNT)에 의한 중화항체가 분석 그래프이다.
도 5는 바이러스 감염 세포에 대한 항체가를 확인하기 위하여 Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen(FAMA) Test를 통해 기니피그에 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염을 투여한 후 생성된 항체가 바리셀라 조스터 바이러스에 감염된 세포에 결합할 수 있는지를 확인한 그래프이다.
도 6은 서로 다른 종류의 알루미늄 염을 포함하는 백신 조성물에 의한 면역유도능을 확인한 그래프이다.
본 발명의 일 실시예에서는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리스타 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE)을 항원으로 하고, 이를 면역증강제(adjuvant)와 혼합하여 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 백신 조성물을 제조하여 동물에 투여한 후 항원 특이적 면역을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 표면 단백질(gE)은 Clade 1 유래의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 외피(envelop)를 구성하는 당 단백질(glycoprotein) 유래이며, C 말단의 일부가 제거된 537개의 아미노산으로 구성된 펩티드 단편(truncated protein)으로서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
생물학적으로 균등한 아미노산 변이를 고려한다면, 본 발명에서 사용되는 아미노산 서열은 서열번호 1의 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 정렬하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 정렬된 서열을 분석한 경우에, 최소 70%의 상동성, 보다 구체적으로는 80%의 상동성, 보다 더 구체적으로는 90%의 상동성, 가장 구체적으로는 95%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다.
본 발명의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 표면 단백질(gE)은 단백질 항원이며, 통상적으로 단백질 항원 단독으로는 면역 반응이 약하게 유도되기 때문에, 면역증강제(adjuvant)를 혼합하여 백신 조성물의 효과를 나타내도록 한 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 사용하는 면역증강제(adjuvant)는 알루미늄 염(aluminum salt)을 포함하는 것을 특징으로 하며, 구체적으로는 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)일 수 있으며, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명에서 용어 “알루미늄(aluminum)”은, 알루미늄 염에서 음이온성 무기염 또는 유기염을 제외한 3가의 알루미늄 양이온(Al3 +) 자체를 의미한다. 따라서, “조성물 내 알루미늄 함유량”은 알루미늄 염 전체가 아닌 알루미늄 양이온의 함유량을 의미한다.
알루미늄 양이온의 질량과 특정 형태의 알루미늄 염 전체 질량 간의 관계는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 알루미늄 하이드록사이드[Al(OH)3] 2.890 mg 내에 1mg의 Al3 +가 존재하고, 알루미늄 포스페이트(AlPO4)의 경우 4.533 mg 내에 1mg의 Al3 +가 존재한다[Simone Vecchi et al., J Pharm Sci . 101(1): 17-20(2012)].
본 발명에서, 용어 "면역증강제"는 면역세포의 초기 활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대한 면역 반응을 촉진하는 물질로, 숙주에게 면역원은 아니지만 면역계의 세포의 활성을 증대시킴으로써 면역을 강화하는 제제, 분자 등을 의미한다(Warren et al., Annu .Rev. Immunol, 4:369, 1986). 본 발명에서 사용되는 면역 반응을 증강할 수 있는 면역증강제는 백신 조성물과 동시에 투여되거나 시간 간격을 두고 순차적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 상기 표면 단백질(gE)의 함유량은 1 ~ 125 ㎍ 일 수 있으며, 구체적으로는 1 ~ 30 ㎍일 수 있고, 보다 구체적으로는 5 ~ 25 ㎍일 수 있다. 가장 구체적으로는 5, 10, 15, 20 및 25 ㎍ 중에서 선택되는 어느 하나의 함량일 수 있다.
본 발명에서, 용어 “예방”은 질환 또는 질병을 보유하고 있다고 진단된 적은 없으나, 이러한 질환 또는 질병에 걸릴 가능성이 있는 대상체에서 질환 또는 질병의 발생을 억제하는 것을 의미한다.
본 발명에서 용어 “치료”는 (a) 질환, 질병 또는 증상의 발전의 억제; (b) 질환, 질병 또는 증상의 경감; 또는 (c) 질환, 질병 또는 증상을 제거하는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물은 바리셀라 조스터 바이러스 감염을 원인으로 하는 질환인 수두 또는 대상포진에 걸린 개체에서 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 면역반응을 활성화시킴으로써 증상의 발전을 억제하거나, 이를 제거하거나 또는 경감시키는 역할을 한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 그 자체로 수두 또는 대상포진의 치료 조성물이 될 수도 있고, 혹은 다른 약리성분과 함께 투여되어 상기 질환에 대한 치료 보조제로 적용될 수도 있다.
이에, 본 명세서에서 용어 '치료' 또는 '치료제'는 '치료 보조' 또는 '치료 보조제'의 의미를 포함한다.
본 발명의 백신 조성물은 추가적으로 칼슘 포스페이트 하이드록사이드(calcium phosphate hydroxide), 미네랄 오일(mineral oil), 스쿠알렌(squalene), 톨유사수용체(Toll-like receptor, TLR)의 길항제(agonist), 계면 활성제(detergent), 리포좀(liposome), 사포닌(Saponin), 사이토카인(cytokine) 또는 이의 조합으로 구성된 면역증강제(Adjuvant)을 함유할 수 있다.
본 발명에서의 용어, '유효량'은 환자에서 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 면역 반응을 유도/증가시키는 것, 바리셀라 조스터 바이러스로 감염되거나 바리셀라 조스터 바이러스 생백신을 투여받은 환자에서 해당 바이러스의 재활성화를 예방, 완화 또는 제거하는 것, 대상포진(Herpes Zoster, HZ) 및/또는 대상포진 후 통증 (Post-herpetic neuralgia, PHN)을 예방하는 것, HZ 및/또는 PHN의 중증도 또는 지속기간을 감소시키는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않으며, 목적하는 효과를 낳기에 충분한 백신 조성물을 의미한다. 당업자는 이러한 수준이 달라질 수 있음을 인식하고 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 표면 단백질(gE)의 농도를 5 μg로 고정하고, 알루미늄의 농도를 순차적으로 증가했을 때, 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함유량이 0.5 mg에서 최적의 항체 형성능을 나타내며(도 1), 또한 표면 단백질(gE)의 농도를 10 μg으로 고정시키고 알루미늄의 양을 순차적으로 증가시킬 경우, 알루미늄 양이온(Al3+)의 함유량이 1 mg 일 때 최적의 항체 형성능을 나타내는 것을 확인(도 2)함으로써, 상술한 표면 단백질(gE) 대 알루미늄 양이온(Al3+)간의 최적의 함량비를 도출하였다.
특히, 본 발명에서의 도 1 및 도 2에 개시된 실험결과는 서로 다른 동물 및 면역 스케줄로 도출된 결과로서, 본 발명에 따른 백신 조성물의 항원(gE) 대 알루미늄 양이온(Al3 +)의 비율이 투여 조건에 상관없이 통상적으로 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 백신 조성으로 사용할 수 있는 최적의 비율이라는 것을 다각적으로 입증하는 것으로 해석된다.
따라서, 본 발명은 또 다른 관점에서, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염(aluminum salt)을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 상기 조성물 내 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 백신 조성물에서 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 보다 구체적으로는 9:1000 내지 13:1000(중량비)일 수 있고, 보다 더 구체적으로는 9:1000 내지 11:1000(중량비)일 수 있으며, 가장 구체적으로는 1:100(중량비)일 수 있다.
또는 본 발명의 백신 조성물에서 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 18:1000 내지 22:1000(중량비)일 수 있고, 보다 구체적으로는 19:1000 내지 21:1000(중량비)일 수 있으며, 가장 구체적으로는 20:1000(중량비)일 수 있다.
본 발명에서 사용하는 상기 알루미늄 염(aluminum salt)은 구체적으로는 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)일 수 있으며, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명에서 상기 알루미늄의 함유량은 0.025 ~ 5 mg이며, 구체적으로는 0.2 ~ 5 mg이고, 보다 구체적으로는 0.2 ~1.0 mg이며, 가장 구체적으로는 0.5 ~ 1.0mg 인 것을 특징으로 하나, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명의 백신 조성물은 투여 대상에서 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster virus)에 대한 면역 반응을 유도 또는 증가; 상기 바이러스에 감염되거나, 생백신을 투여 받은 환자에서 상기 바이러스의 재활성화 가능성을 예방, 완화, 제거 또는 감소; 및/또는 상기 바이러스의 재활성화와 관련된 다른 질환 또는 합병증, 예컨대 PHN이 발생할 가능성을 예방 또는 감소할 수 있다.
본 발명에서의 용어 "면역 반응"은 세포-매개된 (T-세포) 면역 반응 및/또는 항체 (B-세포) 반응을 지칭한다.
본 발명의 백신 조성물의 최적의 투여량은 피검체에서 적합한 면역 반응의 관찰을 포함하는 표준 연구에 의해 확인될 수 있다. 초기 백신화 후, 피검체는 적당한 간격을 두고 1회 또는 수 차례의 부스터 면역화 처리될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 결정될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 피하 주사, 피내 도입, 피부를 통한 각인, 또는 다른 투여경로, 예를 들어, 정맥, 근육 또는 흡입 전달을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 구체적으로는 피하 또는 근육 투여를 통해 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 건강한 환자 및 조혈모세포 이식(HCT) 또는 고형 기관 이식(SOT)을 받은 면역 제한된 환자, HIV-감염된 환자, 자가면역 질환에 걸린 환자, 혈액 암을 갖는 개체; 광범위한 고형 악성 종양에 걸쳐 화학요법을 받는 개체; 류마티스 관절염(RA), 전신성 루푸스(SLE), 크론병, 건선 및 다발성 경화증을 비롯한 광범위한 상태에 걸쳐 만성 면역억제 요법을 받는 환자를 포함하나 이에 제한되지 않는 면역적격 및 면역저하된 환자 집단에서, 수두 및/또는 HZ 및/또는 PHN을 예방하거나, 수두 및/또는 HZ 및/또는 PHN의 중증도 또는 지속기간을 감소시키는데 유용하다.
본 발명의 백신 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제형화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때의 제형은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, EastonPA)에 개시되어 있는 것을 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 단백질 항원(gE)의 제조
바리셀라 조스터 바이러스의 표면단백질(gE)을 코딩하는 유전자 단편 중 면역반응 유도에 가장 효율적인 단편으로써 서열번호 1의 단편(537 aa)을 선정하였다. 상기 서열번호 1의 단편을 코딩하는 핵산을 대한민국 공개공보 제2015-0076772호에 기재된 발현 벡터 pMSID2에 삽입하여 pMSID2-MGgE 플라스미드를 제작한 후, CHO(Chinese hamster ovary) 세포에 형질전환 후 gE를 발현하는 안정적인 세포주를 제작하였다. 상기 세포주를 14일간 배양 후, 배양 상층액을 채취하여 여과한 후 음이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피를 수행한 후 UF/DF를 실시하고 나노 여과 및 멸균 여과를 수행하여 gE 단백질을 정제하였다.
실시예 2: 동물 면역화(immunization)
실시예 1에서 제조된 바리셀라 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE)을 항원으로 하고, 이에 대한 알루미늄 염혼합 조성물의 백신 효능을 확인하기 위하여, 마우스에 대한 다음의 실험을 실시하였다.
5주령의 암컷 C57BL/6 마우스(오리엔트 바이오(주), 한국)에 대해, 표 1에 나타난 바와 같이, 각 그룹별 gE 항원 및 알루미늄 염(aluminium Hydroxide, Alhydrogel?, Invivogen) 을 포함하는 백신 조성물 0.1 ml를 좌측 대퇴부 근육에 근육 주사(intramuscular injection, IM)하였으며, 6주차에 마우스를 희생하고, 이로부터 채취한 100 ㎕ 이상의 혈액을 상온에서 20분 정도 방치한 다음, 5±3℃의 원심분리기에서 10,000 rpm으로 10분간 원심분리 후 상청액인 혈청을 얻었다. 얻은 혈청은 -15℃ 이하에 보관하였다.
Group 백신구성 투여량(100 μL) 동물수 Day of Immunization Day of Bleeding Day of Sacrifice
gE Al3 +
1 Nagative X X 5 wk 0
wk 3		 wk 0
wk 3
wk 6		 wk 6
2 gE+Alum 5 μg 0.2 mg 5
3 gE+Alum 5 μg 0.1 mg 5
4 gE+Alum 5 μg 0.5 mg 5
5 gE+Alum 5 μg 2.5 mg 5
Total 25
또한, immunization과 동물에 차이를 두어 조건에 따른 함량비를 파악하기 위하여, 표면 단백질(gE)와 알루미늄 염(aluminium Hydroxide, Alhydrogel?, Invivogen)을 표 2에 나타난 비율로 혼합하고, 5주령의 암컷 Balb/c 마우스(오리엔트 바이오㈜, 한국)에 근육당 0.1 mL씩 좌우측 대퇴부 내외 근육에 근육 투여하고, 3주차에 마우스의 안와정맥으로부터 혈액 100 ㎕를 채취하여 상온에서 20분 정도 방치한 다음, 5±3℃의 원심분리기에서 10,000 rpm으로 10분간 원심분리 후 상청액인 혈청을 얻었다. 얻은 혈청은 -15℃ 이하에 보관하였다.
Group 백신구성 투여량(/100 μL) 동물수 Day of Immunization Day of Bleeding Day of Sacrifice
gE Al3 +
1 Negative X X 6 wk 0
 wk 0
wk 3
2 gE 10 μg X 6
3 gE+Alum 10 μg 5 mg 6
4 gE+Alum 10 μg 1.25 mg 6
5 gE+Alum 10 μg 1.0 mg 6
6 gE+Alum 10 μg 0.5 mg 6
7 gE+Alum 10 μg 0.2 mg 6
8 gE+Alum 10 μg 0.1 mg 6
9 gE+Alum 10 μg 0.05 mg 6
10 gE+Alum 10 μg 0.025 mg 6
Total 60
실시예 3: 표면 단백질(gE) 및 Alum의 면역원성 평가에 의한 비율 최적화
바리셀라 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE)을 항원으로 포함하는 백신 조성물에, 항원 대비 alum의 최적화된 혼합 비율을 결정하기 위하여, 실시예 2로부터 수득한 혈청에 대한 다음의 ELISA 방법을 통한 항체형성반응 효율을 확인하였다.
1. 플레이트 코팅 (Plate coating)
표면 단백질(gE)인 항원을 PBS(Lonza)에 1 ㎍/mL 농도로 혼합한 후, ELISA immunoplate(Corning, 미국)의 각 well당 100 ㎕씩 분주하고, plate sealer를 이용하여 플레이트를 밀봉한 상태로 5 ± 3℃에서 overnight(16시간 이상)동안 코팅하도록 반응시켰다.
2. Blocking 과정
코팅 반응이 완료되면 plate 상의 용액을 완전히 제거하고, 0.05% Tween20를 포함한 PBS인 ELISA washing buffer를 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 분주하고 2회 세척 후 2% BSA(Bovine serum albumin, Sigma)가 혼합된 PBS를 200 ㎕씩 각 well에 가하여, plate sealer로 다시 밀봉한 후, 실온(25 ± 5℃)에서 1 시간동안 반응시켰다. BSA에 의한 Blocking 반응이 종료되면, ELISA washing buffer를 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 분주하고 2회 세척하였다. 이 때 각 회당 plate 내에 용액이 완전히 제거되도록, plate를 뒤집어 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다.
3. 표면 단백질(gE)에 대한 항원-항체반응
실시예 2에서 수득하여 보관하였던 마우스 혈청을 ELISA washing buffer에 2% BSA를 혼합하여 제조한 ELISA assay buffer를 사용하여, 1:1000, 1:10,000, 1:100,000 배로 희석하여 각 well 당 100 ㎕씩 분주한 다음, 상온에서 2 시간 이상 항원-항체반응이 일어나도록 반응시켰다. 반응이 종료된 plate는 plate를 뒤집어 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다.
그런 다음, ELISA washing buffer로 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 4 회 세척하고, 이 때 각 회 당 plate 내에 용액이 완전히 제거되도록, plate를 뒤집어 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다.
4. 2nd antibody 반응 및 흡광도 측정
이차 항체로 사용한 Goat anti-mouse IgG(H+L)-HRP(Southern Biotech)은 ELISA assay buffer에 1:5,000으로 희석하여 준비하고, 모든 well에 100 ㎕씩 분주하여 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면 플레이트를 뒤집어 용액을 버린 후 plate에 남아 있는 용액을 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다. 그런 다음, ELISA washing buffer로 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 5 회 세척하였다.
세척이 완료된 plate에 HRP의 기질인 TMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, KPL)를 각 well에 100 ㎕씩 첨가하고, 15 분간 빛을 차단한 상태에서 상온에서 반응시켰다. 그런 다음, TMB Stop solution(KPL)을 각 well에 100 μL씩 첨가하여 효소 반응을 정지시키고, ELISA microplate reader(Spectramax 250, Molecular Device)를 사용하여 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정하여, 생성된 항체의 양을 확인하였다.
그 결과, 표면 단백질(gE)인 항원을 5 ㎍/으로 고정하고, 알루미늄의 농도를 변화시켰을 경우, 알루미늄 양이온을 0.5 mg 첨가했을 때, 가장 높은 면역반응이 유도되는 것으로 확인하였다(도 1).
또한, 상기 결과와 서로 다른 면역화 조건하에서 표면 단백질(gE)인 항원을 10 ㎍로 고정하고, 혼합되는 알루미늄의 양을 변화시켰을 때, 알루미늄 1.0 mg을 첨가한 경우, 즉, 항원과 알루미늄 양이온의 비율이 1:100인 경우에 가장 높은 면역반응이 유도되는 것으로 확인하였다. 또한 항원과 알루미늄 양이온의 비율이 1:100을 초과한 경우, 오히려 면역반응이 저하되는 것을 확인할 수 있었다(도 2).
실시예 4: 바리셀라 조스터 바이러스 생백신과의 면역유도능 비교
표면 단백질(gE)+ 알루미늄 염의 혼합 조성물과 약독화 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 생백신(수두박스주, (주)녹십자)을 사용하여 면역 유도능을 다음과 같이 관찰하였다.
1. 동물 면역화(immunization)
5 ㎍의 표면 단백질(gE) 단독; 5 ㎍의 표면 단백질(gE) 및 0.5 mg의 알루미늄 양이온(Al3+)을 포함하는 혼합물; 및 약독화 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 생백신(15000 PFU/0.5 mL)을 준비하여 Hartely guinea pig에 3주 간격으로 2회 피하 혹은 근육 투여하였고, 이에 대한 음성대조군으로는 PBS를 사용하였다. 최종 투여일로부터 3주 후 혈액을 채취해서 혈청을 분리하였다.
Group 백신구성 동물수 immunization Bleeding
1 PBS 3 wk 0/wk 3(im)

 wk 6
(cardiac puncture)
2 5 μg gE 4
3 5 μg gE + 0.5 mg Al3 + 5
4 생백신(LAV, 15000pfu/0.5 ml) 4 wk 0/wk 3(sc)
상기 혈청에 포함된 항체의 역가를 확인하기 위하여, gP ELISA와 Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) 및 Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen ( FAMA ) test 를 하기와 같이 실시하였다.
2. gP 특이적 항원-항체반응(ELISA)
VZV gP 단백질(VZV ELISA glycoprotein antigen; QED BIO, Cat No. BA104GVS)을 한 well당 0.1 ㎍이 되도록 ELISA plate에 분주하고, 4℃에서 overnight incubation하여 단백질 항원이 코팅되도록 하였다. 항원이 코팅된 ELISA plate에 희석된 혈청 샘플을 각 well에 첨가하고 2시간 동안 상온에서 incubation 하고 PBST로 세척하였다. 항원-항체 반응이 종료되면, HRP-conjugated rabbit anti-guineapig IgG항체(Abcam, Cat No. ab6771)를 첨가하여 상온에서 1시간 동안 다시 incubation하고 상기와 동일한 방법으로 세척하였다. 세척 후 TMB를 기질로 첨가하여 이차 항체에 결합된 효소에 의한 발색 반응을 유도하고, 최종적으로 stop solution을 첨가하여 반응을 중지시킨 후 분광기를 이용하여 450nm 파장에서 optical density를 측정하였다.
결론적으로 표면 단백질(gE) 항원을 면역 후 유도되는 VZV glycoprotein 특이적인 항체가의 증가를 확인하고자 anti-gP IgG ELISA assay를 endpoint titration 방법으로 수행한 결과, 생백신(약 15,000 PFU)에 의해 유도되는 VZV gP 특이적인 항체가보다 gE 5 ㎍ 및 알루미늄 양이온(Al3 +) 0.5 mg 조합에 의해 유도되는 항체가가 유의적으로 높음을 확인하였다(도 3).
3. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT)
표면 단백질(gE)의 면역에 의해 VZV에 대한 중화항체가 유도되는지 PRNT로 다음과 같이 확인하였다.
56℃에서 비동화한 혈청을 순차 희석하여 1000 PFU/mL의 바이러스와 동량 혼합하고 37℃에서 1시간 인큐베이션하였다. MRC-5 세포(ECACC, Cat No.05G007)를 단일층이 되도록 준비한 6 well 플레이트를 PBS로 세척 한 후, 상기 혈청과 바이러스 혼합액을 well당 200 ㎕씩 접종하고 1시간 30분 후 바이러스 접종배지(MEM (Gibco, Cat No. 11095-098) + 2% FBS (Gibco, Cat No. 11360-070)를 넣어 6 ~ 7일간 37℃에서 인큐베이션한 후, 0.5% 크리스탈 바이올렛(Sigma, Cat No. C-3886)으로 염색하여 플라크를 계수하였다. 50% 중화율을 보이는 희석배수를 계산하여 PRNT50을 구하였다.
그 결과, gE 5 ㎍ 및 알루미늄 양이온(Al3+) 0.5 mg 조합에 의해 유도되는 중화항체가가 생백신(약 15000 PFU)보다 유의적으로 높음을 확인하였다(도 4).
4. Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen (FAMA) test
바이러스 감염 세포에 대한 항체가를 확인할 수 있는 FAMA를 이용하여 gE 면역에 의해 생성된 항체가 감염세포에 binding 할 수 있는지를 평가하였다.
VZV 바이러스를 감염시킨 감염세포를 준비하여 serial dilution한 혈청에 3 x 105개씩 첨가한 후 30분간 반응시켰다. 반응시간이 종료되면 감염세포를 PBS로 세척 후, Alexa488 conjugated anti-guinea pig IgG(molecular probes, Cat No. D2650)를 첨가하여 20분간 반응시키고 PBS로 다시 세척한 다음, 14 well slide에 세포를 도말하고 건조시킨 후 형광현미경으로 검경하였다. 한 시야당 총 세포 수가 30개 이상 되는 시야에서 Alexa488에 의한 형광으로 염색된 세포를 관찰하고 형광이 관찰되는 마지막 희석 배수를 FAMA titer로 결정하였다.
그 결과, Anti-gP ELISA, PRNT50 결과와 유사하게 gE 5 ㎍ 및 알루미늄 양이온(Al3+) 0.5 mg 조합에 의해 유도되는 중화항체가는 생백신(약 15000 PFU)에 의해 유도되는 항체가보다 높은 것으로 나타났다(도 5).
실시예 5: Alum 염 종류에 따른 면역유도능 비교
본 발명의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 백신 조성물에 의한 면역 유도효과에 있어, 알루미늄 염의 종류에 따른 면역유도반응의 차이를 확인하기 위하여 다음의 실험을 실시하였다.
표 4에 나타난 바와 같이, 다양한 알루미늄 면역증강제 제품을 알루미늄 양이온 기준으로 0.1 mg과 5 μg의 항원(gE)를 각각 혼합하여 5주령의 암컷 Balb/c 마우스(오리엔트 바이오㈜, 한국)에 0.1 mL씩 좌측 대퇴부 근육에 근육 투여하였다. 투여된 알루미늄 염의 종류에 대한 정보는 표 4에 나타난 바와 같다.
Alum
염 종류		 제품명 판매사 pH Viscosity Point of zero charge
Alhydrogel Aluminum hydroxide Alhydrogel Invivogen 7.8 ~8.0 Gel-like 10.5
CT-HS Rehydragel HS Chemtrade 6.0~8.0 1300 cps max 9.4
CT-HPA REhydragel HPA 5.5~6.5 Trixotropic 12.1
CT-LV Rehydraphos 5.8~6.8 1000 cps max 11.6
Al-Phos Aluminum phosphate 6.0~8.0 unknown unknown
3주차에 마우스의 안와정맥으로 부터 혈액 100 μL를 채취하여 상온에서 20분 정도 방치한 다음, 5±3℃의 원심분리기에서 10,000 rpm으로 10분간 원심분리 후 상청액인 혈청을 얻었다. 얻은 혈청은 -15℃ 이하에 보관하였으며, 보관 중인 시료(혈청)는 실시예 3에 개시된 gE ELISA법에 따라 면역원성을 확인하였다.
그 결과, 제품별 미미한 차이가 있긴 하나 aluminum hydroxide 이든 aluminum phosphate이든 항원 단독 투여 시 보다 높은 면역원성을 유도하는 것을 확인할 수 있었다. 또한 상기 제제의 완충액을 PBS 및 0.9% NaCl로 변화시킴에 관계없이 항원 단독에 비해 면역원성 유도능이 우월하게 유지되는 것을 확인하였다(도 6).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Mogam Institute for Biomedical Research <120> Varicella Zoster Virus Vaccine <130> P17-B302 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 537 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> gE of Varicella Zoster Virus <400> 1 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg 530 535

Claims (10)

  1. 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역증강제(adjuvant)는 알루미늄 염(aluminum salt)을 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 알루미늄 염(aluminum salt)은 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 칼슘 포스페이트 하이드록사이드(calcium phosphate hydroxide), 미네랄 오일(mineral oil), 스쿠알렌(squalene), 톨유사수용체(Toll-like receptor)의 길항제(agonist), 계면 활성제(detergent), 리포좀(liposome), 사포닌, 및 사이토카인으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 면역증강제(adjuvant)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 조성물 내 알루미늄의 함유량은 0.2 ~ 5 mg인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 내 표면 단백질(gE)의 함유량은 5 ~ 25 ㎍인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  7. 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염(aluminum salt)을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 상기 조성물 내 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 알루미늄 염(aluminum salt)은 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE)는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  10. 제7항에 있어서, 상기 표면 단백질(gE)의 함유량은 5 ~ 25 ㎍인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
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