JP2023540643A - ポリヌクレオチドを含む医薬組成物及びそのｃｏｖｉｄ－１９の予防又は治療への使用 - Google Patents

Abstract

【要約】本出願発明は、ポリヌクレオチドを含む医薬組成物及びそのＣＯＶＩＤ－１９の予防又は治療への使用に関する。より具体的には、本出願は、ポリリボイノシン－ポリリボシチジル酸、抗生物質又はポリアミノ化合物、陽イオンが含まれ、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来の抗原が任意的に含まれるＣＯＶＩＤ－１９を予防又は治療するための組成物を開示し、上記組成物の新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を予防又は治療するための薬剤又はワクチンの調製における適用にも関する。【選択図】図５

Description

本出願は、２０２０年０５月２９日に出願された中国特許出願の「ポリヌクレオチドを含む医薬組成物及びそのＣＯＶＩＤ－１９の予防又は治療への使用」（出願番号２０２０１０４７５３８８．６）の優先権を主張する。

本出願は、医学の分野に関し、特にコロナウイルス感染の予防又は治療に関する。より具体的には、ポリリボイノシン－ポリリボシチジル酸（ＰＩＣ）、抗生物質（又はポリアミノ化合物）、陽イオン、及び任意にウイルス由来の抗原（例えば、ウイルス粒子、タンパク質、核酸、ペプチドなどであり、これらに限定されない。）を含むコロナウイルス感染を予防又は治療するための医薬組成物に関し、及びコロナウイルス感染の予防又は治療への当該組成物の使用に関する。

新型コロナウイルス感染症は、主に新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、２０１９－ｎＣＯＶとも呼ばれる）が原因である。感染経路は、主に呼吸飛沫によるものであるが、接触によるものもある。人々は一般的に感染しやすく、高齢者や基礎疾患のある人は感染後の病状が重く、子供や乳幼児にも発症する。

現在の疫学的調査に基づくと、ＣＯＶＩＤ－１９の潜伏期間は１～１４日で、ほとんどが３～７日である。主な症状は、発熱、空咳、倦怠感である。少数の患者は、鼻づまり、鼻水、のどの痛み、筋肉痛、下痢などの症状を示す。重症患者は、発症後１週間で呼吸困難や低酸素血症を発症することが多く、重症になると急性呼吸窮迫症候群、敗血症性ショック、矯正困難な代謝性アシドーシス、凝固障害、多臓器不全などへと急速に進行する。注目すべきなのは、重症患者や重篤な患者は、病気の経過中に中等度から微熱、或は、明らかな発熱がないこともある。軽度の患者は、微熱、軽度の疲労などを示すだけで、肺炎は表現されなかった。現在の症例の状況から、ほとんどの患者は予後が良好であり、少数の患者は重篤な状態にある。高齢者や慢性基礎疾患のある人は予後が不良である。子供の場合は比較的軽度である。これまでに見られた感染源は、主に新型コロナウイルスに感染した患者である。無症状の感染者も感染源となる可能性がある。ウイルスは拡散力が強く、有効な薬がなく、非常に有害である。

現在、ＣＯＶＩＤ－１９に対して、有効な抗ウイルス治療法は確認されていない。ほとんどの薬剤候補はインビトロ実験に限定されており、その治療効果は動物やヒトで実証されていない。したがって、当技術分野では、有効な抗ウイルス治療組成物を提供する必要性が依然として必要である。

免疫組成物
上記に鑑み、本開示はポリリボイノシン－ポリリボシチジル酸（ポリＩ：Ｃ、ＰＩＣ）、抗生物質（又はポリアミノ化合物）、陽イオン、及び任意にウイルス由来の抗原を含むか、或は、ＰＩＣ、抗生物質（又はポリアミノ化合物）、陽イオン、任意にウイルス抗原で構成される免疫組成物を提供する。

一部の実施形態では、前記ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（そのバリアント又は亜種を含む）などのコロナウイルスである。一部の実施形態では、前記ウイルスは、不活化粗製又は不活化精製型である。

一部の実施形態では、本開示での使用に適したワクチン又は免疫組成物には、不活性化型、サブアクティブ ユニット型、遺伝子組換え型、ポリペプチド型ワクチン、核酸型が含まれるが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、本出願での使用に適したＰＩＣは、市販のＰＩＣであってもよく、又は当技術分野（例えば、２００６８００００７７６７や２００６８０００１０５９６）で開示されているポリイノシン酸－ポリシチジル酸に基づくアジュバントであってもよく、その全ては引用により本明細書に組み込まれている。

一部の実施形態では、免疫組成物中のＰＩＣは、分子量において異質であり、その分子量は少なくとも５０，０００ダルトンである。たとえば、６６，０００ダルトンの値は、６．４Ｓ沈降係数単位（Ｓｖｅｄｂｅｒｇｓ）の分子サイズに相当する。一部の実施形態では、ＰＩＣは６６，０００ダルトンから１，２００，０００ダルトン（６．４から２４．０沈降係数単位に相当）である。他の実施形態では、ＰＩＣの分子量は少なくとも１５０，０００ダルトンである。他の実施形態では、ＰＩＣの分子量は１００，０００から２００，０００ダルトン、又は３００，０００から４，０００，０００ダルトン、又は５００，０００から１，０００，０００ダルトン、又は１，０００，０００から１，５００，０００ダルトン、又は１，５００，０００から２，０００，０００ダルトン、又は２，０００，０００から２，５００，０００ダルトン、又は２，５００，０００から３，０００，０００ダルトン、又は３，０００，０００から３，５００，０００ダルトン、又は３，５００，０００から４，０００，０００ダルトン、又は４，０００，０００から４，５００，０００ダルトン、又は４，５００，０００から５，０００，０００ダルトンである。

本開示で使用される「異質」という用語は、免疫組成物又はワクチンの中に含まれるＰＩＣ分子が、分子量、サイズ、又は両方の物性において均一ではないことを指す。

一部の実施形態では、免疫組成物又はワクチン中の前記ＰＩＣの濃度は２５０μｇ／単位用量から５０００μｇ／単位用量であり、例えば、組成物中の前記ＰＩＣの濃度は、２５０μｇ／単位用量、５００μｇ／単位用量、１０００μｇ／単位用量、１５００μｇ／単位用量、２０００μｇ／単位用量、３０００μｇ／単位用量、４０００μｇ／単位用量、５０００μｇ／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。

一部の実施形態では、免疫組成物又はワクチン中の前記ＰＩＣの濃度は５００μｇ／単位用量から４０００μｇ／単位用量、１０００μｇ／単位用量から３０００μｇ／単位用量、１０００μｇ／単位用量から２５００μｇ／単位用量である。

本開示の免疫組成物又はワクチンがヒトに適用する場合、免疫組成物又はワクチン中の前記ＰＩＣの濃度は、５００μｇ／単位用量、１０００μｇ／単位用量、１５００μｇ／単位用量、２０００μｇ／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。本開示の免疫組成物又はワクチンが未成年（例えば子供）に適用する場合、免疫組成物又はワクチン中の前記ＰＩＣの濃度は、２５０μｇ／単位用量、５００μｇ／単位用量、１０００μｇ／単位用量、１２５０μｇ／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。

特定の実施形態では、含まれる抗生物質は、タクラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、アントラセンシクロピン、ブチロイン硫酸塩（ｂｕｔｙｒｏｓｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ）、ゲンタマイシン、ハイグロマイシン、アミカシン、カナマイシン（又はビスデオキシカナマイシン）、ネブラマイシン、β－ラクタム、メタアミド、ネオマイシン、プリンマイシン、ストレプトマイシン、ストレプトゾビンから選択した１つ又はそれらの組み合わせである。前記ポリアミノ化合物は、スペルミジン塩、スペルミジン（ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ）、Ｎ－（３－アミノプロピル）、Ｎ－（３－アミノプロピル）－１，４－ブタンジアミン、スペルミン（ｓｐｅｒｍｉｎｅ）、スペルミン、ＯＳ－ジメチルアミンチオりん酸エステル、ポリリジン、アミノグリコシドから選択された１つ又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、組成物中の前記抗生物質の濃度は、１０単位／ｍｌから１００，０００単位／ｍｌ、好ましくは１００単位／ｍｌから１０，０００単位／ｍｌ、より好ましくは５００単位／ｍｌから５，０００単位／ｍｌである。

一部の実施形態では、免疫組成物中の抗生物質又はポリアミノ化合物の濃度は、４００Ｕ／単位用量から１２００Ｕ／単位用量を挙げることができ、例えば、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００Ｕ／単位用量などであるがこれらに限定されない。

他の実施形態では、免疫組成物中の抗生物質又はポリアミノ化合物の濃度は４００Ｕ／ｍｌから１２００Ｕ／ｍｌを挙げることができ、例えば、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００Ｕ／ｍＬなどであるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、含まれる陽イオンは二価の陽イオンであり、カルシウム、カドミウム、リチウム、マグネシウム、セリウム、セシウム、クロム、コバルト、重水素、ガリウム、ヨウ素、鉄、亜鉛、及びそれらの組み合わせから選択される。具体的な実施形態では、陽イオンはカルシウムイオンである。前記陽イオンは、任意の適切な塩又は有機複合体の形態であることができ、塩化物、フッ化物、水酸化物、リン酸塩又は硫酸塩を含むがこれらに限定されない。例えば、陽イオンがカルシウムである場合、カルシウムイオンは、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、フッ化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸カルシウム、又は硫酸カルシウムの形態であってもよい。一部の実施形態では、組成物中の陽イオンの濃度は、１０μｍｏｌ～１０ｍｍｏｌ／ｍｌであり、例えば、５０μｍｏｌ～５ｍｍｏｌ／ｍｌ、又は１００μｍｏｌ～１ｍｍｏｌ／ｍｌである。

一部の実施形態では、免疫組成物中の陽イオンの濃度は、０．０１ｍｇ／単位用量から０．１ｍｇ／単位用量であり、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１ｍｇ／単位用量であるが、これらに限定されない。

他の実施形態では、免疫組成物中の陽イオンの濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌから０．１ｍｇ／ｍｌであり、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１ｍｇ／ｍｌであるが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来抗原はウイルス（例えば、弱毒化、不活化ウイルス、人工的合成のウイルスベクター、又はウイルス粒子）である。

一部の具体的な実施形態では、コロナウイルス由来抗原は、不活化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、弱毒化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、又は被験者において増殖できないウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。ＰＩＣに対する前記ウイルスの比率は、１アクティブ ユニット／５０μｇ、１アクティブ ユニット／６０μｇ、１アクティブ ユニット／７０μｇ、１アクティブ ユニット／８０μｇ、１アクティブ ユニット／９０μｇ、１アクティブ ユニット／１００μｇ、１アクティブ ユニット／１２５μｇ、１アクティブ ユニット／２００μｇ、１アクティブ ユニット／２５０μｇ、１アクティブ ユニット／３００μｇ、１アクティブ ユニット／３５０μｇ、１アクティブ ユニット／４００μｇ、１アクティブ ユニット／４５０μｇ、１アクティブ ユニット／５００μｇ、１アクティブ ユニット／５５０μｇ、１アクティブ ユニット／６００μｇ、１アクティブ ユニット／７００μｇ、１アクティブ ユニット／８００μｇ、１アクティブ ユニット／１０００μｇ、１アクティブ ユニット／１５００μｇ、１アクティブ ユニット／２０００μｇ、１アクティブ ユニット／２５００μｇ、１アクティブ ユニット／３０００μｇ、１アクティブ ユニット／４０００μｇ、１アクティブ ユニット／５０００μｇ、１アクティブ ユニット／６０００μｇ、１アクティブ ユニット／７０００μｇ、１アクティブ ユニット／８０００μｇ、１アクティブ ユニット／９０００μｇ、１アクティブ ユニット／１００００μｇ、及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来抗原がウイルス（例えば、弱毒化、不活化ウイルス、人工的合成のウイルスベクター、又はウイルス粒子）である場合、組成物中の前記抗原の濃度は、０．２アクティブ ユニット／単位用量～１００アクティブ ユニット／単位用量である。より具体的には、組成物中のウイルス又はウイルス由来抗原の濃度は、０．２アクティブ ユニット／単位用量、０．５アクティブ ユニット／単位用量、１．０アクティブ ユニット／単位用量、１．５アクティブ ユニット／単位用量、２．０アクティブ ユニット／単位用量、２．５アクティブ ユニット／単位用量、３．０アクティブ ユニット／単位用量、３．５アクティブ ユニット／単位用量、４．０アクティブ ユニット／単位用量、５．０アクティブ ユニット／単位用量、６．０アクティブ ユニット／単位用量、７．０アクティブ ユニット／単位用量、８．０アクティブ ユニット／単位用量、９．０アクティブ ユニット／単位用量、１０．０アクティブ ユニット単位／単位用量、１５．０アクティブ ユニット／単位用量、２０．０アクティブ ユニット／単位用量、３０．０アクティブ ユニット／単位用量、４０．０アクティブ ユニット／単位用量、５０．０アクティブ ユニット／単位用量、６０．０アクティブ ユニット／単位用量、７０．０アクティブ ユニット／単位用量単位用量あたりの単位、８０．０アクティブ ユニット／単位用量、９０．０アクティブ ユニット／単位用量、１００．０アクティブ ユニット／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。具体的な実施形態では、組成物中の前記ウイルス又はウイルス由来抗原の濃度は、０．５アクティブ ユニット／単位用量～３．０アクティブ ユニット／単位用量であり；好ましくは１．０アクティブ ユニット／単位用量～２．５アクティブ ユニット／単位用量である。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来抗原がウイルス（例えば、弱毒化、不活化ウイルス、人工的合成のウイルスベクター、又はウイルス粒子）である場合、組成物中の前記抗原の濃度は０．０５アクティブ ユニット／ｍｌから４０．０アクティブ ユニット／ｍｌであり、好ましくは、０．０５アクティブ ユニット／ｍｌ、０．１アクティブ ユニット／ｍｌ、０．１５アクティブ ユニット／ｍｌ、０．２アクティブ ユニット／ｍｌ、０．５アクティブ ユニット／ｍｌ、１．０アクティブ ユニット／ｍｌ、２．０アクティブ ユニット／ｍｌ、３．０アクティブ ユニット／ｍｌ、４．０アクティブ ユニット／ｍｌアクティブ ユニット／ｍｌ、５．０アクティブ ユニット／ｍｌ、１０アクティブ ユニット／ｍｌ、１５アクティブ ユニット／ｍｌ、２０アクティブ ユニット／ｍｌ、２５アクティブ ユニット／ｍｌ、３０アクティブ ユニット／ｍｌ、３５アクティブ ユニット／ｍｌ、４０アクティブ ユニット／ｍｌである。

一部の実施形態では、前記コロナウイルス由来抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｍタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｎタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｅタンパク質又はその免疫原性フラグメント、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の構造に基づいて設計されたタンパク質、ポリペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡから選択される場合、前記ＰＩＣに対する前記抗原の比率は、１μｇ／１０μｇ、１μｇ／２０μｇ、１μｇ／３０μｇ、１μｇ／４０μｇ、１μｇ／５０μｇ、１μｇ／６０μｇ、１μｇ／７０μｇ、１μｇ／８０μｇ、１μｇ／９０μｇ、１μｇ／１００μｇ、１μｇ／１２５μｇ、１μｇ／２００μｇ、１μｇ２５０μｇ、１μｇ／３００μｇ、１μｇ／３５０μｇ、１μｇ／４００μｇ、１μｇ／４５０μｇ、１μｇ／５００μｇ、１μｇ／５５０μｇ、１μｇ／６００μｇ、１μｇ／７００μｇ、１μｇ／８００μｇ、１μｇ／１０００μｇ、１μｇ／１５００μｇ、１μｇ／２０００μｇ、１μｇ／２５００μｇ、１μｇ／３０００μｇ、１μｇ／４０００μｇ、１μｇ／５０００μｇ、１μｇ／６０００μｇ、１μｇ／７０００μｇ、１μｇ／８０００μｇ、１μｇ／９０００μｇ、１μｇ／１００００μｇ及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。

一部の実施形態では、前記コロナウイルス由来抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｍタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｎタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｅタンパク質又はその免疫原性フラグメント、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の構造に基づいて設計されたタンパク質、ポリペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡから選択される場合、免疫組成物中の抗原の濃度は、０．１μｇ／単位用量から１０００．０μｇ／単位用量であり、例えば、０．５μｇ／単位用量、１．０μｇ／単位用量、２．０μｇ／単位用量、３．０μｇ／単位用量、４．０μｇ／単位用量、５．０μｇ／単位用量、６．０μｇ／単位用量、７．０μｇ／単位、８．０μｇ／単位、９．０μｇ／単位、１０．０μｇ／単位、１５．０μｇ／単位、２０．０μｇ／単位、３０．０μｇ／単位、４０．０μｇ／単位、５０．０μｇ／単位用量、６０．０μｇ／単位用量、７０．０μｇ／単位用量、８０．０μｇ／単位用量、９０．０μｇ／単位用量、１００．０μｇ／単位用量、２００．０μｇ／単位用量、３００．０μｇ／単位用量、４００．０μｇ／単位用量、５００．０μｇ／単位用量、６００．０μｇ／単位用量、７００．０μｇ／単位用量、８００．０μｇ／単位用量、９００．０μｇ／単位用量、１０００．０μｇ／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲であり、又は、例えば、０．１μｇ／ｍｌから１０００．０μｇ／ｍｌであり、好ましくは、１μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、２００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌである。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来抗原がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質である場合、免疫組成物中の抗原の濃度は２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量である。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来抗原がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（例えば、ホモトリマー）である場合、免疫組成物中の抗原の濃度は、２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量である。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来抗原がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の免疫原性フラグメントである場合、免疫組成物中の抗原の濃度は２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量である。

一部の実施形態では、コロナウイルス由来の抗原がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤ領域である場合、免疫組成物中の抗原の濃度は２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量である。

一部の実施形態では、本開示に記載の単位用量は、体積で表され、且つ０．１ｍｌ、０．１５ｍｌ、０．２ｍｌ、０．５ｍｌ、１．０ｍｌ、１．５ｍｌ、２．０ｍｌ、２．５ｍｌ、３．０ｍｌ、４．０ｍｌ、５．０ｍｌ、１０．０ｍｌ、２０．０ｍｌ、３０．０ｍｌ、４０．０ｍｌ、５０．０ｍｌ、６０．０ｍｌ、７０．０ｍｌ、８０．０ｍｌ、９０．０ｍｌ、１００．０ｍｌ、１５０ｍｌ、２００ｍｌ、２５０．００ｍｌ、及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。当業者は、単位用量が大きすぎたり小さすぎたりすると臨床操作の不便を招くことに理解している。したがって、本開示の免疫組成物／ワクチンが注射によってヒト被験者に投与される場合、単位用量は、好ましくは０．５ｍｌ～１．０ｍｌの範囲にある。本開示の免疫組成物／ワクチンがヒト被験者に鼻腔内投与される場合、単位用量は、好ましくは０．１５ｍｌから０．２ｍｌの範囲にある。本開示の免疫組成物／ワクチンがヒト被験者に静脈内投与される場合、単位用量は、好ましくは３０．０ｍｌから１０００ｍｌの範囲にある。ここで理解すべきことは、単位用量は体積で表されるが、これは、本開示の免疫組成物／ワクチンが液体形態しかではないことを意味しないことである。本開示の免疫組成物／ワクチンが固体（乾燥粉末又は凍結乾燥粉末）に調製される場合、単位用量の体積は、乾燥粉末又は凍結乾燥粉末の再構成後の体積を指す。

一部の実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンは、ゼラチン、蔗糖、白砂糖、乳糖、麦芽糖、トレハロース、ブドウ糖、低分子デキストラン、ソルビトール、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、塩酸アルギニン、マンニトールポリエチレングリコール、ヒトアルブミン、組換えアルブミン、カプリル酸ナトリウム、尿素、水酸化アルミニウム、フェノールレッド、リン酸アルミニウム、スクワレン、サポニン、オリゴヌクレオチド、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、アスコルビン酸、クロロホルム、フェノール、チメロサールを含んでもよい。

一部の実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンは、さらに生理学的に許容される緩衝液を含み、酢酸塩、Ｔｒｉｓ、重炭酸塩、炭酸塩、リン酸緩衝液から選択され、本開示の組成物に適用した緩衝液のｐＨ値は、６．５０、６．６０、６．７０、６．８０、６．９０、７．００、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３０、７．３５、７．４０、７．４５、７．５０、７．５５、７．６０、７．６５、７．７０、７．７５、７．８０、７．８５、７．９０、７．９５、８．００及び前記任意の２点の間の範囲から選択される。特定の実施形態では、緩衝液はＰＢＳであり、且つｐＨ値は７．０～８．０の範囲にある。

一部の実施形態では、組成物中の緩衝液の濃度は、５ｍＭから５０ｍＭであり、具体的には５ｍＭから２０ｍＭである。挙げられる例は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０ｍＭである。

緩衝液は、本開示の組成物又はワクチンを調製した後、他の成分の添加によりそのｐＨが変化する可能性も否定できない。緩衝液の緩衝能力を考慮して、一部の実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンのｐＨ値は、適切な範囲に制御され、例えば、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、７．４、７．４５、７．５、７．５５、７．６、７．６５、７．７、７．７５、７．８、７．８５、７．９、７．９５、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０及び前記任意の２点の間の範囲である。特定の実施形態では、組成物のｐＨは７．０から８．０の範囲にある。

本開示の免疫組成物又はワクチンは、乾燥粉末、液体溶液（例えば、注射可能な溶液、水溶液又は生理食塩水、又は懸濁液、軟膏（Ointment）、液滴、乳剤、ゲル、シロップ又はスラリー、エアロゾル、スプレー、点鼻薬）、錠剤、コーティング錠、マイクロカプセル、坐剤、錠剤、顆粒剤、糖衣錠、カプセルに調製されてもよい。調製方法は、調製方法は、ＳｔａｎｌｅｙＡＰｌｏｔｋｉｎｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ４ｔｈｅｄｉｔｉｏｎＷ．Ｂ．ＳａｕｎｄｅｒｓＣｏｍｐａｎｙ２００３に一般的に記載されている。好ましくは、本開示の免疫組成物又はワクチンは、注射可能な溶液に調製される。

本開示の別の様態によれば、上記の免疫組成物に対応する乾燥粉末又は凍結乾燥粉末の形態である免疫組成物が提供される。当業者は、免疫組成物が乾燥粉末又は凍結乾燥粉末の形態である場合、液体の形態の免疫組成物との違いは含水量だけであることを理解することができる。一つの例として、乾燥粉末又は凍結乾燥粉末形態の免疫組成物が２ｍｇ／ｍｌのＰＩＣを含有する場合、当業者は、この濃度が、免疫組成物を液体形態に再度形成した後のＰＩＣの濃度を指すことを知っている。

一部の実施形態では、
コロナウイルス由来の抗原、
０．５ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌＰＩＣ、
４００単位／ｍｌ～１２００単位／ｍｌのカナマイシン、
０．０１ｍｇ／ｍｌ～０．１ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム、
１００ｍＭ～２００ｍＭ塩化ナトリウム、
５ｍＭ～２０ｍＭリン酸緩衝液を含む免疫組成物が提供される。

一部の実施形態では、
コロナウイルス由来の抗原、
０．５ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌＰＩＣ、
４００単位／ｍｌ～１２００単位／ｍｌのカナマイシン、
０．０１ｍｇ／ｍｌ～０．１ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム、
１００ｍＭ～２００ｍＭ塩化ナトリウム、
５ｍＭ～２０ｍＭリン酸緩衝液、
任意的に、１００ｍＭ～２００ｍＭのアルギニン塩酸塩、
任意的に、０．００５％ｗ／ｖ～０．０５％ｗ／ｖのポリソルベート８０、
任意的に、０．１％ｗ／ｗから１．０％ｗ／ｗのリン酸アルミニウムを含む免疫組成物が提供される。

方法と適用
本開示の別の態様によれば、前記ＰＩＣ、抗生物質（又はポリアミノ化合物）及び陽イオンの組み合わせのコロナウイルス感染を予防又は治療するための医薬品又はワクチンの調製における適用が提供される。

本開示のさらに別の態様によれば、ＣＮ１０３４０５７６２Ａに開示されたポリヌクレオチドアジュバント組成物のコロナウイルス感染を予防又は治療するための薬剤又はワクチンの調製における適用が提供される。

本開示の別の態様によれば、ＰＩＣ、抗生物質（又はポリアミノ化合物）、陽イオン及びウイルスの組み合わせのコロナウイルス感染を予防又は治療するための薬剤又はワクチンの調製における適用が提供される。

本開示の別の態様によれば、本開示の免疫組成物又はワクチンのコロナウイルス感染を予防又は治療するための適用が提供される。

より具体的には、本開示の免疫組成物又はワクチンのコロナウイルス感染を予防又は治療するための薬剤の調製における適用が提供される。

本開示の別の態様によれば、宿主動物において免疫応答を刺激する方法も関し、当該方法は、免疫応答を誘導するのに有効な量の本明細書に記載の免疫組成物を当該動物に投与することを含む。前記宿主動物は、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはサル、さらに好ましくはヒトである。本発明はまた、宿主動物をウイルスに対して免疫化する方法に関し、当該方法は、保護応答を誘導するのに有効な量の本明細書に記載の免疫組成物を前記動物に投与することを含む。前記宿主動物は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはサル、さらに好ましくはヒトである。

抗原又は組成物に対する「免疫反応」とは、被験者の体液性及び／又は細胞性免疫応答において生産された、目的組成物中に存在する分子に対する反応である。「体液性免疫反応」とは、抗体分子を介した免疫反応を指し、「細胞性免疫反応」とは、Ｔリンパ球及び／又は他の白血球を介した免疫反応である。

一部の具体的な実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンは、樹状細胞における共刺激分子（例えば、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ４０＋など）の発現をアップレギュレーションすること、樹状細胞の活性化すること、肺におけるサイトカイン（例えば、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＫＣ、ＩＦＮ－βなど）の発現を向上させること、ＩｇＧ抗体（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３など）の力価を向上させること、ＩＬ－２陽性細胞の比率を増やすること、ＩＦＮ－γ陽性細胞の比率を増やすること、肺のウイルス量を減らすことから選択される任意の１つ又は組み合わせを達成することができる。

本開示の別の態様によれば、本開示の組成物又はワクチンを予防又は治療に有効な量で被験者に投与することが含まれるコロナウイルス感染を予防又は治療する方法を提供する。

一部の実施形態では、組成物の投与は、系統的（全身的とも呼ばれる）又は局所的である。

一部の実施形態では、本開示の免疫原性組成物又はワクチンは、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、皮内）注射によって投与される。

他の実施形態では、本開示の免疫学的組成物又はワクチンは、注射以外の手段によって（例えば、機械的手段によって上皮細胞バリアを破壊しない方法で）皮内送達される。

他の実施形態では、免疫組成物は、直腸、膣、鼻、経口、舌下、呼吸器、眼、又は経皮経路によって投与される。

一部の実施形態では、免疫組成物は、筋肉内によって投与される。

一部の実施形態では、免疫組成物は点鼻によって投与される。

一部の実施形態では、吸入による投与の場合、本開示の組成物又はワクチンは、吸入器、ネブライザー、圧力パック又は導入ガスによって噴霧することができる。圧力パックは、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロモノフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素）を付属させることができる。加圧エアロゾルの場合、空気弁を設けることによって投薬単位を決定することができる。

任意選択で、吸入又は吹き込み投与の場合、本開示の組成物又はワクチンは、乾燥粉末の形態の組成物であり、例えば、コンディショニング剤とラクトースやデンプンなどの適切な乾燥粉末ベースの粉末混合物である。粉末混合物は、単位用量の形態でカプセルやカートリッジに入れてもよく、或は、例えば、ゼラチン包装の場合、吸入器や吹き込み器を用いて、この容器から粉末を投与することができる。鼻腔内投与の場合、抗体は、例えばプラスチック製の噴霧器を通して、液体スプレー又は点鼻薬によって投与できる。

一部の実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンは、月１回、月２回、月３回、月４回、月５回、月６回、毎月７回、月８回、週１回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、３日に１回、３日に２回日、３日に３回、２日に１回、２日に２回、１日１回、１日２回から選択される頻度で被験者に投与される。

一部の実施形態では、予防又は治療の方法には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原を含む本開示の免疫組成物の投与が含まれるが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードする核酸を含む組成物の投与も可能である。当業者は、核酸ワクチン及び核酸ワクチン技術、ならびにタンパク質及びポリペプチドに基づく技術の概念、適用、及び有効性に精通している。核酸に基づく技術により、裸の又はカプセル化されたスパイクポリペプチドをコードする核酸を組織や細胞に直接投与できる。当該技術は、これらの核酸が受容体生体の細胞に取り込まれて発現されて免疫原性決定クラスターを生成することができることに基づいている。本開示の免疫組成物（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２含有スパイクタンパク質）の単回又は複数回の注射において、このようなタンパク質ベースのワクチンは、中和、防御抗体依存性免疫応答を誘導できる。

本開示の別の態様によれば、上記の予防又は治療方法を実施するためのキットが提供され、少なくとも１つの容器を含み、前記容器は、本開示の免疫化組成物又はワクチンを含む。異なる容器中の組成物及び／又は組成物の量は、同じであってもよく、異なっていてもよい。

一部の実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンは、無菌液体で処方され、無菌容器（例えば、チューブ、ボトル、アンプル、注射器）に装填される。他の実施形態では、本開示の免疫組成物又はワクチンは、乾燥粉末又は凍結乾燥粉末の形態で容器に装填される。使用する前に、液体の形に調製する。

一部の実施形態では、本開示のキットは、針、注射用水、使用説明書から選択される一つ又は組み合わせを含む。

本開示の医薬組成物が生体ＤＣを活性化し、共刺激分子の産生をアップレギュレーションする。 図２Ａから図２Ｂは、マウスに本開示の医薬組成物を点鼻した後、肺のサイトカイン濃度を効果的に向上させる。 ＩｇＧサブタイプ抗体価。 ウサギ血清中の抗新型コロナウイルスＳタンパク質のＩｇＧ抗体価。 異なる医薬組成物によって誘導される中和抗体力価は異なる。 ＩＬ－２、ＩＦＮ－γを発現する細胞の比率。 ＩＬ－２、ＩＦＮ－γを発現する細胞の比率。 ＩＬ－２、ＩＦＮ－γを発現する細胞の比率。 ＩＬ－２、ＩＦＮ－γを発現する細胞の比率。 マウスにおけるチャレンジ後の肺のウイルス量。 マウスにおけるチャレンジ後の肺のウイルス量。

「抗原」とは、宿主に侵入したときに宿主の免疫系によって認識されることにより、免疫応答を誘発することができる任意の物質（例えば、タンパク質、ペプチド、癌細胞、糖タンパク質、糖脂質、生ウイルス、殺されたウイルス、ＤＮＡなど）を意味する。抗原は、精製された形又は未精製の形で提供されてもよい。本出願における抗原には、病原体のタンパク質、組換えタンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、及びポリヌクレオチド、生ウイルス、組換えウイルス、弱毒化又は不活化ウイルスが含まれる。

免疫原性フラグメントは、前述の「抗原」の一部（例えば、抗原がタンパク質又はポリペプチドである場合、免疫原性フラグメントが当該タンパク質又はポリペプチドの非全長ペプチドフラグメントである）を指し、宿主の免疫系によって認識されて免疫応答を誘発する能力を依然として（全部又は一部）保持している。

不活性化とは、ウイルスの病原性や繁殖能力を取り除くが、体を刺激して免疫反応を起こさせる能力は残っていることである。ウイルスを不活化する方法は、業界ではよく知られている。ウイルスを不活化する方法は、一般的に用いられている方法を用いることができ、ウイルス種に応じて適宜選択することもできる。ウイルス不活性化の方法には、光反応性化合物、酸化剤、放射線（例えば、紫外線、ガンマ線）、リボフラビンと紫外線の組み合わせ、溶剤―洗剤を利用した処理（有機溶剤トリ－Ｎ－ブチルホスフェートとＴｗｅｅｎ８０洗剤などで処理）、ポリエチレングリコール処理、Ｐａｓｔｅｕｒｉｚａｔｉｏｎ低温殺菌法（熱処理）、低ｐＨ処理、酵素処理（ペプシン又はトリプシン）、メチレンブルー光処理、ジメチルメチレンブルーと可視光での処理、ソラレン誘導体Ｓ－５９とＵＶＡ照射による処理を含むが、これらに限定されない。

弱毒化は、弱毒化されたウイルスはまだ生きているが、製造プロセス中にウイルスの病気を引き起こす能力は失っているが、繁殖能力と体を刺激して免疫反応を起こさせる能力は保持している。

本明細書において、スパイクタンパク質（スパイク又はＳタンパク質）という用語は、そのバリアントのカテゴリーをカバーする。スパイクタンパク質のバリアントは、天然のスパイクポリペプチドと実質的に相同のポリペプチドであるが、１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入又は置換により天然のスパイクタンパク質と異なるアミノ酸配列を有する。バリアントは、保守的置換の配列を含むことができ、保守的置換とは、与えられたアミノ酸残基が同様の生化学的性質を持つ残基に置き換えられることである。このような保守的置換は知られており、保守的置換の実例には、脂肪族残基同士の置換が含まれ、例えば、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａの間の相互置換、又は極性残基の間の相互置換、例えば、ＬｙｓとＡｒｇの間、ＧｌｕとＡｓｐの間、ＧｌｎとＡｓｎの間である。本発明は、天然に存在するスパイクポリペプチドバリアントも含む。このようなバリアントの実例としては、代替ｍＲＮＡスプライシングイによって、又はスパイクインポリペプチドのタンパク質分解によって生成されるタンパク質が挙げられる。タンパク質分解に起因する変異には、例えば、宿主細胞における異なるタイプの発現後に生じる末端の違いが含まれ、これは、パイクポリペプチドのタンパク質から１つ以上の末端アミノ酸が加水分解で除去されたためである。

本開示のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原がタンパク質又はポリペプチドである場合、多量体（ホモ多量体又はヘテロ多量体）の形態で調製でき、例えば二量体、三量体、四量体、五量体などであるがこれらに限定されず、それによって抗原接触の機会をより多く提供する。具体的な例では、当業者はフォルドンをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原のＮ末端又はＣ末端に融合させ、当該フォルドンのセグメントは抗原が多量体の形態の形成に貢献する。このようなフォルドンは当技術分野で周知であり、本出願抗原の正しいフォルドンに影響を与えず、免疫原性にも影響を与えない。示例として、三量体化に使用できるフォルドンは、タンパク質又はペプチドに結合する（融合とも呼ばれる）場合、三量体構造の形成が許容される。本開示では、任意の既知の三量体化フォルドン／ドメインを使用できる。三量体化フォルドン／ドメインの例としては、ＨＩＶ－Ｉｇｐ４１三量体化ドメイン、ＳＩＶｇｐ４１三量体化ドメイン、エボラウイルスｇｐ－２三量体化ドメイン、ＨＴＬＶ－Ｉｇｐ－２１三量体化ドメイン、Ｔ４ｆｉｂｒｉｔｉｎ三量体化ドメイン、酵母熱ショック転写因子三量体化ドメイン、及びヒトコラーゲン三量体化ドメインを含むがこれらに限定されない。また、例えば、ＣＮ１１１５６００７４Ａでは、ＨＰ＿Ｆｅｒｒｉｔｉｎの自己集合によって二十四量体ナノ抗原を形成でき、ＣＮ１１１６０７６０５Ａでは、ＬＴＢ２６が自己集合して五量体を形成できる特性によって、融合タンパク質の五量体が得られた。

本開示で使用される「単位用量」という用語は、個々の対象に対する単位用量として適した物理的に別個の単位を指す。各単位には所定量の本開示の組成物が含まれ、所定量は、医薬的／生理学的に許容される希釈剤、担体又はビヒクルと共に所望の効果をもたらすのに十分な量を示す。

本明細書における組成物の「有効量」とは、無毒であるが、所望の応答（例えば、免疫応答）を提供し、対応する予防／治療効果を産生するのに十分な組成物の量を指す。正確な必要量は、被験者によって異なり、被験者の種、年齢、対象の全体条件、治療する疾患の重症度、及び関心のある具体的な高分子、投与方法などによる。具体的な例では、適切な「有効量」は、動物実験によるヒト対象における有効量の決定などの一般的な実験方法を使用して、当業者によって測定できる。

本説明書で使用されている「治療」という用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果が得られることを意味する。当該効果は、疾患又はその症状を完全に及び／又は部分的に予防するという意味で予防的であってもよく、及び／又は当該効果は、病気及び／又は病気の悪影響を安定又は治療する意味で医療的な性質に属してもよい。

本明細書において、値の範囲を記述する場合の「．．．から．．．」、「範囲内」、「範囲の間」という表現には、終点値を含む。

本明細書の文脈において、医薬的組成物、医薬品、免疫学的組成物、ワクチンは交換可能に使用される。

実施例
特に明記しない限り、本開示の実験動物の操作は、「実験動物管理条例」、「実験動物の適正な取り扱いに関する指導意見」、及び中国の国家標準ＧＢ／１４９２５に従って実行された。

実施例１：本開示の医薬組成物１の調製方法

１．抗原：組み換え新型コロナウイルスＳ－三量体タンパク質。

２．本開示の組成物は、以下の組成物に従って調製された：
本開示の組成物１（単位用量１ｍｌ）は、以下を含む：
組み換え新型コロナウイルスＳ－三量体タンパク質（２．５μｇ、５μｇ、６μｇ、１０μｇ及び２０μｇ）、
ＰＩＣ（１ｍｇ／ｍｌ）、
カナマイシン（８００単位／ｍｌ）、及び
塩化カルシウム（０．０４７２ｍｇ／ｍｌ）。

無菌条件下で、上記の組成物は、生理学的に許容される緩衝液（塩化ナトリウム１５０ｍＭ、リン酸二ナトリウム０．００４３Ｍ、及びリン酸二水素ナトリウム０．００１７Ｍ）中で調製された。

実施例２：本開示の医薬組成物２の調製方法

１．抗原：組み換え新型コロナウイルスＳ－三量体タンパク質。

２．本開示の組成物は、以下の組成物に従って調製された：
本開示の組成物２（単位用量１ｍｌ）は、以下を含む：
組み換え新型コロナウイルスＳ－三量体タンパク質（２．５μｇ、５μｇ、１０μｇ及び２０μｇ）、
ＰＩＣ（１ｍｇ／ｍｌ）、
カナマイシン（８００単位／ｍｌ）、
塩化カルシウム（０．０４７２ｍｇ／ｍｌ）、
アルギニン塩酸塩（１４０ｍＭ）、
ポリソルベート ８０ （０．０１％ ｗ／ｖ）。

無菌条件下で、上記の組成物は生理学的に許容される緩衝液（塩化ナトリウム１５０ｍＭ、リン酸二ナトリウム０．００４３Ｍ及びリン酸二水素ナトリウム０．００１７Ｍ）中で調製された。

実施例３：本開示の医薬組成物３の調製方法

１．抗原：組み換え新型コロナウイルスＳ１タンパク質。

２．本開示の組成物は、以下の組成物に従って調製された：
本開示の組成物３（単位用量１ｍｌ）は、以下を含む：
組み換え新型コロナウイルスＳ１タンパク質（２．５μｇ、５μｇ、６μｇ、１０μｇ及び２０μｇ）、
ＰＩＣ（１ｍｇ／ｍｌ）、
カナマイシン（８００単位／ｍｌ）、
塩化カルシウム（０．０４７２ｍｇ／ｍｌ）。

無菌条件下で、上記の組成物は、生理学的に許容される緩衝液（塩化ナトリウム１５０ｍＭ、リン酸二ナトリウム０．００４３Ｍ、及びリン酸二水素ナトリウム０．００１７Ｍ）中で調製された。

実施例４：本開示の医薬組成物４の調製方法

１．抗原：組み換え新型コロナウイルスＲＢＤタンパク質（即ち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質ＲＢＤ領域）。

２．本開示の組成物は、以下の組成物に従って調製された：
本開示の組成物４（単位用量１ｍｌ）は、以下を含む：
組み換え新型コロナウイルスＲＢＤタンパク質（２．５μｇ、５μｇ、６μｇ、１０μｇ及び２０μｇ）、
ＰＩＣ（１ｍｇ／ｍｌ）、
カナマイシン（８００単位／ｍｌ）、及び
塩化カルシウム（０．０４７２ｍｇ／ｍｌ）。

無菌条件下で、上記の組成物は、生理学的に許容される緩衝液（塩化ナトリウム１５０ｍＭ、リン酸二ナトリウム０．００４３Ｍ、及びリン酸二水素ナトリウム０．００１７Ｍ）中で処方された。

実施例５：本開示の医薬組成物５の調製方法

本開示の組成物５（単位用量１ｍｌ）は、以下を含む：
ＰＩＣ（１ｍｇ／ｍｌ）、
カナマイシン（８００単位／ｍｌ）、及び
塩化カルシウム（０．０４７２ｍｇ／ｍｌ）。

無菌条件下で、上記の組成物は、生理学的に許容される緩衝液（塩化ナトリウム１５０ｍＭ、リン酸二ナトリウム０．００４３Ｍ、及びリン酸二水素ナトリウム０．００１７Ｍ）中で調製された。

実施例６：本開示の医薬組成物６の調製方法

１．抗原：不活性化精製 新型コロナウイルス。

２．本開示の組成物６（単位用量１ｍｌ）は、以下を含む組成物に従って調製された：
不活性化精製新型コロナウイルス（６００アクティブ ユニット）、
ＰＩＣ（１ｍｇ／ｍｌ）、
カナマイシン（８００単位／ｍｌ）、
塩化カルシウム（０．０４７２ｍｇ／ｍｌ）及び、
リン酸アルミニウム（アルミニウム含有量０．５％ ｗ／ｗ）。

無菌条件下で、上記の組成物は、生理学的に許容される緩衝液（塩化ナトリウム１５０ｍＭ、リン酸二ナトリウム０．００４３Ｍ、及びリン酸二水素ナトリウム０．００１７Ｍ）中で処方された。

試験例１：本開示の医薬組成物５により生体の樹状細胞を活性化し、共刺激分子をアップレギュレーションする

方法：Ｃ５７ＢＬ／６マウス骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を使用して、本開示の医薬組成物５とインビトロで１８時間インキュベーションした。フローサイトメトリーによってＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、およびＣＤ４０＋細胞の比率と平均蛍光強度を検出した。

結果：図１に示すように、本開示の医薬組成物５がマウスＢＭＤＣと相互作用した後、ＣＤ８０＋細胞の比率は５９．８２％から９０．６６％に増加し、ＣＤ８６＋細胞の比率は１１．７０％から３８．６６％に増加し、ＣＤ４０＋細胞の比率は１６．９８％から５８．６２％に増加して、共刺激分子の産生を大幅にアップレギュレートした。

結論：本実験は、本開示の医薬組成物５が生体の樹状細胞を有意に誘導して共刺激分子をアップレギュレートし、樹状細胞の活性化を促進できることを証明している。

試験例２：本開示の医薬組成物５は、点鼻した後に肺内のサイトカイン濃度を効果的に向上できる

方法：マウスにＰＢＳまたは本開示の医薬組成物５をそれぞれ点鼻で投与し、指定の時間に殺した。肺組織を収集し、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘタンパク質アレイ システムを使用してサンプルのＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＫＣに対するテストを繰り返し、ＥＬＩＳＡキットによりＩＦＮ－βを検出した。

結果： 図 ２Ａ から ２Ｄ を参照する。

結論：本開示の医薬組成物５をマウスに点鼻で投与した後、マウスの肺のサイトカインであるＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＫＣ、およびＩＦＮ－βが有意に増加し、マウスへの経鼻投与が気道の自然免疫を効果的に活性化し、免疫細胞によるサイトカインとケモカインの産生をもたらすことが示され、これらのサイトカインとケモカインは、マウス気道におけるウイルス複製の阻害に関連している。

試験例３：本開示の医薬組成物１は、マウスにおいて新型コロナウイルスのＳ１タンパク質に対するＩｇＧ抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３）の産生を効果的に誘導できる

方法：本開示の医薬組成物１を用いてマウスをそれぞれ免疫し、血液を採取して血清を分離し、マウスの血清中の新型コロナウイルスＳ１タンパク質に対するＩｇＧ抗体サブタイプの力価をＥＬＩＳＡにより検出した。

結論：本開示の医薬組成物は、血清中の新型コロナウイルスＳ１タンパク質に対するＩｇＧサブタイプ抗体価を有意に上昇させることができる（図３）。

試験例４：本開示の医薬組成物１は、ウサギにおいて新型コロナウイルスのＳタンパク質に対するＩｇＧ抗体の産生を効果的に誘導できる

本開示の医薬組成物１を用いてそれぞれウサギを免疫し、血液を採取して血清を分離し、ウサギの血清中の抗新型コロナウイルスＳタンパク質のＩｇＧ抗体価をＥＬＩＳＡにより検出した。

結論：開示された医薬組成物は、ウサギ血清中の新型コロナウイルスＳタンパク質に対するＩｇＧ抗体価を有意に上昇させることができる（図４）。

試験例５：本開示の医薬組成物１、３～４は、ウサギにおいて抗新型コロナウイルス中和抗体の産生を効果的に誘導できる

方法：本開示の医薬組成物１、３～４をそれぞれ使用してウサギを免疫し、血液を採取して血清を分離し、シュードウイルス中和アッセイによってウサギ血清中の中和抗体力価を検出する。

結論：本開示の医薬組成物１、３～４は、ウサギ血清中の中和抗体力価を有意に増加させることができ、且つ異なる医薬組成物によって誘導された中和抗体力価は異なっている（図５）。

試験例６：本開示の医薬組成物２は、特異的細胞性免疫応答を効果的に誘導できる

方法：マウスを本開示の医薬組成物２でそれぞれ免疫化し、脾臓を採取して脾臓細胞懸濁液を分離し、エリスポット法を使用して抗原特異的細胞性免疫応答を検出した。

結論：本開示の医薬組成物２は、マウスの細胞免疫応反応を有意に向上させＩＬ－２、ＩＦＮ－Ｙを発現する細胞の割合を顕著に増加させることができる（結果について、図６Ａ～図６Ｄを参照）

試験例７：本開示の医薬組成物１は、ｈＡＣＥ２マウスにおける新型コロナウイルス量を効果的に減少させる

方法：方法：ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウス（６週齢、１８～２６ｇ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染されたｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスモデル）を本開示の医薬組成物１で免疫化し、初回免疫の１４日後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２により鼻腔内チャレンジし、チャレンジの５日後に肺組織を採取して、肺のウイルス量を検出した。

結論：本開示の医薬組成物１は、チャレンジ後のマウスの肺のウイルス量を有意に減少させ、肺の炎症をある程度緩和し、良好な予防効果を有する（結果については図７を参照）。

試験例８：本開示の医薬組成物２は、ｈＡＣＥ２マウスにおける新型コロナウイルス量を効果的に減少させる

方法：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を使用してｈＡＣＥ２マウスに対して点鼻チャレンジし、同時に、本開示の医薬組成物２を投与し、チャレンジの５日後に肺組織を採取して、肺のウイルス量を検出した。

結論：本開示の医薬組成物２は、チャレンジ後のマウスの肺のウイルス量を有意に減少でき、良好な治療効果を有する（結果については図８を参照）。

試験例９：本開示の医薬組成物２は、カニクイザルに新型コロナウイルスのＳタンパク質に対するＩｇＧ抗体の産生を効果的に誘導できる

方法：カニクイザルをそれぞれ本開示の医薬組成物２で免疫化し、採血して血清を分離し、ＥＬＩＳＡ法によりカニクイザルの血清中の新型コロナウイルスＳタンパク質に対するＩｇＧ抗体価を検出した。

結論：本開示の医薬組成物は、カニクイザルの血清中の新型コロナウイルスＳタンパク質に対するＩｇＧ抗体価を有意に上昇させることができる。本開示の医薬組成物２の低用量および本開示の医薬組成物２の高用量グループの動物は、２回目の免疫の１週間後（Ｄ１５、３回目の投与前）に特異的なＩｇＧ抗体を検出でき、発生率は、それぞれ１０／１０と１０／１０であり、抗体価は全てが１：１６００から＞１：１０２４００の範囲であった。動物特異的ＩｇＧ抗体価は、低用量グループ、高用量グループともに投与回数の増加に伴い上昇した。薬物中止の４週間後（Ｄ５７）、低用量グループおよび高用量グループのすべての動物の特異的ＩｇＧ抗体価は低下しなかった。

試験例１０：本開示の医薬組成物６は、ウサギの抗新型コロナウイルス中和抗体の産生を効果的に誘導できる

方法：ウサギをそれぞれ本開示の医薬組成物６で免疫化し、採血して血清を分離し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２野生株の中和試験によりウサギ血清中の中和抗体価を検出した。

結論：本開示医薬組成物６は、ウサギ血清において中和抗体力価を誘導できる。

本開示により提供される新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防および治療のための薬物の組み合わせにより、以下の効果を達成できる：
１．薬効が良好で治療効果が顕著であり、本開示の医薬組成物は、インターフェロン調節因子３およびＮＦ－κＢを活性化することができ、Ｉ型インターフェロンおよび炎症誘発性因子の発現をアップレギュレーションし、体の自然免疫と獲得免疫を活性化し、重要な抗ウイルスの役割を果たす。複数の動物試験の結果は、本開示の医薬組成物が動物の気道におけるウイルス力価負荷を効果的に減少させることができることを示している。

２．予防効果と治療効果の両方を持つことができる。

３．投与形態がフレキシブルで多用途であり、注射剤形を採用することができ、効果は速く信頼性が高く、薬液は組織に直接注入されて、ｐＨ、酵素、食品などの影響を受けず、初回通過効果がなく、薬物含有量が失われにくく、したがって、治療効果は信頼性が高く、危機的な患者の救助に使用できる。投与に便利で、患者が受け入れやすく、粘膜から迅速に吸収され、迅速に作用し、患者のコンプライアンスが良好なスプレー製剤を使用することもできる。

Claims (14)

1. 免疫組成物であって、
   ポリリボイノシン－ポリリボシチジル酸（ＰＩＣ）と、
   抗生物質又はポリアミノ化合物と、
   陽イオン、及び
   任意に、コロナウイルス由来の抗原を含み、
   前記コロナウイルスはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はそのバリアントであり、
   好ましくは、前記抗生物質は、タクラマイシン、アントラセンシクロピン、ブチロイン硫酸塩、ゲンタマイシン、ハイグロマイシン、アミカシン、カナマイシン、ネブラマイシン、β－ラクタム、メタアミド、ネオマイシン、プリンマイシン、ストレプトマイシン、ストレプトゾビンから選択した１つ又はそれらの組み合わせであり、
   好ましくは、前記ポリアミノ化合物は、スペルミジン塩、スペルミジン、Ｎ－（３－アミノプロピル）、Ｎ－（３－アミノプロピル）－１，４－ブタンジアミン、スペルミン、スペルミン、ＯＳ－ジメチルアミンチオりん酸エステル、ポリリジン、アミノグリコシドから選択された１つ又はそれらの組み合わせであり、
   好ましくは、前記陽イオンは、二価の陽イオンであり、より好ましくは、前記陽イオンは、カルシウム、カドミウム、リチウム、マグネシウム、セリウム、セシウム、クロム、コバルト、重水素、ガリウム、ヨウ素、鉄、亜鉛から選択した１つ又はそれらの組み合わせであり、最も好ましくは、前記陽イオンはカルシウムイオンであり、
   好ましくは、前記コロナウイルス由来抗原は、不活化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、弱毒化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、被験者において複製できないウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｍタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｎタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｅタンパク質又はその免疫原性フラグメント、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の構造に従って設計されたタンパク質、ポリペプチド、ＲＮＡ、ＤＮＡから選択した１つ又はそれらの組み合わせであることを特徴とする免疫組成物。
2. 前記コロナウイルス由来の抗原が、不活化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、弱毒化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、又は被験者において複製できないウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である場合、前記ＰＩＣに対する前記コロナウイルス由来抗原の比率は、
   １アクティブ ユニット／５０μｇ、１アクティブ ユニット／６０μｇ、１アクティブ ユニット／７０μｇ、１アクティブ ユニット／８０μｇ、１アクティブ ユニット／９０μｇ、１アクティブ ユニット／１００μｇ、１アクティブ ユニット／１２５μｇ、１アクティブ ユニット／２００μｇ、１アクティブ ユニット／２５０μｇ、１アクティブ ユニット／３００μｇ、１アクティブ ユニット／３５０μｇ、１アクティブ ユニット／４００μｇ、１アクティブ ユニット／４５０μｇ、１アクティブ ユニット／５００μｇ、１アクティブ ユニット単位／５５０μｇ、１アクティブ ユニット／６００μｇ、１アクティブ ユニット／７００μｇ、１アクティブ ユニット／８００μｇ、１アクティブ ユニット／１０００μｇ、１アクティブ ユニット／１５００μｇ、１アクティブ ユニット／２０００μｇ、１アクティブ ユニット／２５００μｇ、１アクティブ ユニット／３０００μｇ、１アクティブ ユニット／４０００μｇ、１アクティブ ユニット／５０００μｇ、１アクティブ ユニット／６０００μｇ、１アクティブ ユニット／７０００μｇ、１アクティブ ユニット／８０００μｇ、１アクティブ ユニット／９０００μｇ、１アクティブ ユニット／１００００μｇ、及び前記任意の２点の間の範囲のいずれかから選択され、
   或は、前記コロナウイルス由来抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｍタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｎタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｅタンパク質又はその免疫原性フラグメント、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の構造に従って設計されたタンパク質、ポリペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡからいずれかを選択する場合、前記ＰＩＣに対する前記抗原の比率は、
   １μｇ／１０μｇ、１μｇ／２０μｇ、１μｇ／３０μｇ、１μｇ／４０μｇ、１μｇ／５０μｇ、１μｇ／６０μｇ、１μｇ／７０μｇ、１μｇ／８０μｇ、１μｇ／９０μｇ、１μｇ／１００μｇ、１μｇ／１２５μｇ、１μｇ／２００μｇ、１μｇ２５０μｇ、１μｇ／３００μｇ、１μｇ／３５０μｇ、１μｇ／４００μｇ、１μｇ／４５０μｇ、１μｇ／５００μｇ、１μｇ／５５０μｇ、１μｇ／６００μｇ、１μｇ／７００μｇ、１μｇ／８００μｇ、１μｇ／１０００μｇ、１μｇ／２０００μｇ、１μｇ／２５００μｇ、１μｇ／３０００μｇ、１μｇ／４０００μｇ、１μｇ／５０００μｇ、１μｇ／６０００μｇ、１μｇ／７０００μｇ、１μｇ／８０００μｇ、１μｇ／９０００μｇ、１μｇ／１００００μｇ、及び前記任意の２点の間の範囲のいずれかから選択されることを特徴とする請求項１に記載の免疫組成物。
3. 免疫組成物中の前記ＰＩＣの濃度が、２５０μｇ／単位用量～５０００μｇ／単位用量であり、
   好ましくは、前記免疫組成物中のＰＩＣの濃度が、２５０μｇ／単位用量、５００μｇ／単位用量、１０００μｇ／単位用量、１５００μｇ／単位用量、２０００μｇ／単位用量、３０００μｇ／単位用量、４０００μｇ／単位用量、５０００μｇ／単位用量のいずれかから選択されることを特徴とする請求項１に記載の免疫組成物。
4. 前記コロナウイルス由来抗原が、不活化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、弱毒化ウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、又は被験者において複製できないウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である場合、前記免疫組成物中の前記コロナウイルス由来抗原の濃度は、０．１アクティブ ユニット／単位用量～１００．０アクティブ ユニット／単位用量であり、
   好ましくは、０．５アクティブ ユニット／単位用量、１．０アクティブ ユニット／単位用量、１．５アクティブ ユニット／単位用量、２．０アクティブ ユニット／単位用量、２．５アクティブ ユニット／単位用量、３．０アクティブ ユニット／単位単位用量、３．５アクティブ ユニット／単位用量、４．０アクティブ ユニット／単位用量、５．０アクティブ ユニット／単位用量、６．０アクティブ ユニット／単位用量、７．０アクティブ ユニット／単位用量、８．０アクティブ ユニット／単位用量、９．０アクティブ ユニット／単位用量、１０．０アクティブ ユニット／単位用量、１５．０アクティブ ユニット／単位用量、２０．０アクティブ ユニット／単位用量、３０．０アクティブ ユニット／単位用量、４０．０アクティブ ユニット／単位用量、５０．０アクティブ ユニット／単位用量、６０．０アクティブ ユニット／単位用量、７０．０アクティブ ユニット／単位用量、８０．０アクティブ ユニット／単位用量、９０．０アクティブ ユニット／単位用量、１００．０アクティブ ユニット／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲のいずれかから選択され、
   或は、前記コロナウイルス由来抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｍタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｎタンパク質又はその免疫原性フラグメント、Ｅタンパク質又はその免疫原性フラグメント、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の構造に従って設計されたタンパク質、ポリペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡのいずれかから選択され、その免疫組成物中における濃度が０．１μｇ／単位用量から１０００．０μｇ／単位用量である場合、
   好ましくは、０．５μｇ／単位用量、１．０μｇ／単位用量、２．０μｇ／単位用量、３．０μｇ／単位用量、４．０μｇ／単位用量、５．０μｇ／単位用量、６．０μｇ／単位用量、７．０μｇ／単位用量、８．０μｇ／単位用量、９．０μｇ／単位用量、１０．０μｇ／単位用量、１５．０μｇ／単位用量、２０．０μｇ／単位用量、３０．０μｇ／単位用量、４０．０μｇ／単位用量、５０．０μｇ／単位用量、６０．０μｇ／単位用量、７０．０μｇ／単位用量、８０．０μｇ／単位用量、９０．０μｇ／単位用量、１００．０μｇ／単位用量、２００．０μｇ／単位用量、３００．０μｇ／単位用量、４００．０μｇ／単位用量用量、５００．０μｇ／単位用量、６００．０μｇ／単位用量、７００．０μｇ／単位用量、８００．０μｇ／単位用量、９００．０μｇ／単位用量、１０００．０μｇ／単位用量、及び前記任意の２点の間の範囲のいずれかから選択されることを特徴とする請求項１に記載の免疫組成物。
5. 前記単位用量は、０．１ｍｌ、０．１５ｍｌ、０．２ｍｌ、０．５ｍｌ、１．０ｍｌ、１．５ｍｌ、２．０ｍｌ、２．５ｍｌ、３．０ｍｌ、４．０ｍｌ、５．０ｍｌ、１０．０ｍｌ、２０．０ｍｌ、３０．０ｍｌ、４０．０ｍｌ、５０．０ｍｌ、６０．０ｍｌ、７０．０ｍｌ、８０．０ｍｌ、９０．０ｍｌ、１００．０ｍｌ、１５０．０ｍｌ、２００．０ｍｌ、２５０．０ｍｌ、及び前記任意の２点の間の範囲のいずれかから選択されることを特徴とする請求項３又は４に記載の免疫組成物。
6. 前記免疫組成物にはさらに、ゼラチン、蔗糖、白砂糖、乳糖、麦芽糖、トレハロース、ブドウ糖、低分子デキストラン、ソルビトール、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、塩酸アルギニン、マンニトールポリエチレングリコール、ヒトアルブミン、組換えアルブミン、カプリル酸ナトリウム、尿素、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、スクワレン、サポニン、オリゴヌクレオチド、フェノールレッド、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム、アスコルビン酸、クロロホルム、フェノール、チメロサールから選択された１つ又はこれらの組み合わせを含んでいることを特徴とする請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫組成物。
7. さらに生理学的に許容される緩衝液を含み、酢酸塩、トリメチロールアミノメタン、重炭酸塩、炭酸塩、リン酸緩衝液の１つ又はそれらの組み合わせから選択され、
   好ましくは、緩衝液濃度は５ｍＭから５０ｍＭであり、好ましくは５ｍＭから２０ｍＭであり、
   好ましくは、前記免疫組成物のｐＨが６から９であることを特徴とする請求項１～６のいずれか一項に記載の免疫組成物。
8. 前記免疫組成物は、固形剤形又は液体剤形に調製でき、
   前記液体剤形は、注射液、懸濁液、スプレー、エアロゾル、点鼻薬、軟膏、エマルジョン、ドロップ、シロップ、ゲルのいずれかから選択され、
   前記固体剤形は、乾燥粉末、凍結乾燥粉末、錠剤、カプセル剤、坐剤、顆粒剤、糖衣錠のいずれかから選択されることを特徴とする請求項１～７のいずれか一項に記載の免疫組成物。
9. 前記ＰＩＣは分子量において異質であり、その分子量が５０，０００ダルトンから１，２００，０００ダルトンであり、或は
   前記ＰＩＣは分子量において異質であり、その沈降係数が５．０～２４．０であることを特徴とする請求項１～８のいずれか一項に記載の免疫組成物。
10. 免疫組成物中の前記抗生物質又はポリアミノ化合物の濃度は、４００Ｕ／単位用量から１２００Ｕ／単位用量であり、好ましくは、４００Ｕ／単位用量、５００Ｕ／単位用量、６００Ｕ／単位用量、７００Ｕ／単位用量、８００Ｕ／単位用量、９００Ｕ／単位用量、１０００Ｕ／単位用量、１１００Ｕ／単位用量、１２００Ｕ／単位用量であり、
    免疫組成物中の前記陽イオンの濃度は、０．０１ｍｇ／単位用量から０．１ｍｇ／単位用量であり、好ましくは、０．０１ｍｇ／単位用量、０．０２ｍｇ／単位用量、０．０３ｍｇ／単位用量、０．０４ｍｇ／単位用量、０．０５ｍｇ／単位用量、０．０６ｍｇ／単位用量、０．０７ｍｇ／単位用量、０．０８ｍｇ／単位用量、０．０９ｍｇ／単位用量、０．１ｍｇ／単位用量であることを特徴とする請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫組成物。
11. 前記コロナウイルス由来抗原は、
    ２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、
    ２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質多量体、
    ２．５μｇ／単位用量から２０μｇ／単位用量ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の免疫原性フラグメント、
    ２．５μｇ／単位単位用量から２０μｇ／単位用量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質ＲＢＤ領域、
    ３００アクティブ ユニット／単位用量から１０００アクティブ ユニット／単位用量の不活化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ビリオンのいずれかから選択され、
    好ましくは、前記多量体は二量体、三量体又は四量体であり、
    好ましくは、前記多量体は相同多量体であることを特徴とする請求項１～１０のいずれか一項に記載の免疫組成物。
12. コロナウイルス由来抗原、
    ０．５ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌのＰＩＣ、
    ４００単位／ｍｌ～１２００単位／ｍｌのカナマイシン、
    ０．０１ｍｇ／ｍｌ～０．１ｍｇ／ｍｌ塩化カルシウム、
    １００ｍＭ～２００ｍＭ塩化ナトリウム、
    ５ｍＭ～２０ｍＭリン酸緩衝液を含み、
    任意的に、さらに１００ｍＭ～２００ｍＭアルギニン塩酸塩、０．００５％ｗ／ｖ～０．０５％ｗ／ｖポリソルベート８０、０．１％ｗ／ｗ～１．０％ｗ／ｗリン酸アルミニウムのいずれかから選択される１つ又は組み合わせを含むことを特徴とする請求項１～１１のいずれか一項に記載の免疫組成物。
13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の免疫組成物のコロナウイルス感染症の予防又は治療のためのワクチン又は医薬品の製造における適用であって、
    好ましくは、前記コロナウイルスはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はそのバリアントであり、
    好ましくは、前記ワクチン又は医薬品は、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経皮、皮内、経口、舌下、呼吸器（鼻、咽頭、気管、気管支）の投与経路のいずれか１つに適した剤形に調製されることを特徴とする適用。
14. コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染を予防又は治療する方法であって、被験者に予防又は治療に有効な量の、請求項１～１２のいずれか一項に記載の免疫組成物を投与することを含む方法であり、
    好ましくは、前記免疫組成物は、４年に１～４回、３年に１～３回、２年に１～２回、年１回、年２回、年３回、年４回、年５回、年６回、月１回、月２回、月３回、月４回、月５回、月６回、毎月７回、月８回、週１回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、３日に１回、３日に２回日、３日に３回、２日に１回、２日に２回、１日１回、１日２回の頻度で前記被験者に投与され、
    毎回投与間の時間間隔は同じ又は異なり、
    前記投与は、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経皮、皮内、経口、舌下、呼吸器（鼻、咽頭、気管、気管支）のいずれかから選択される投与経路であることを特徴とする方法。

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