CN114632091A - 用于治疗癌症的含有聚核苷酸的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及用于治疗癌症的含有聚核苷酸的药物组合物。更具体地，本申请公开了一种用于治疗癌症的组合物，其包含聚核糖肌苷‑聚核糖胞苷酸、抗生素或多氨基化合物、正价离子以及任选地病毒，还涉及上述组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。

Description

用于治疗癌症的含有聚核苷酸的药物组合物
本申请是申请号为201710191850.8，申请日为2017年03月28日，发明名称为“用于治疗癌症的含有聚核苷酸的药物组合物”的中国专利申请的分案申请。
技术领域
本申请涉及医学领域，尤其是癌症的治疗。更具体而言，涉及一种用于治疗癌症的药物组合物，其含有：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素(或多氨基化合物)、正价离子、以及任选地灭活或减毒的病毒；以及该组合物用于治疗癌症的用途。
背景技术
癌症，通常泛指恶性肿瘤。在致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的肿瘤。与良性肿瘤相比，恶性肿瘤生长速度快，浸润性生长，易发生出血、坏死、溃疡，并常有远端转移。
赫捷和陈万青等人在Cancer Journal for Clinicians上发表了论文CancerStatistics in China,2015。该研究对我国2015年恶性肿瘤的发病与死亡情况进行了分析和预测。数据显示，2015年我国预计恶性肿瘤新发病例4292000例。男性发病前五位为肺及支气管癌、胃癌、肝癌、食管癌和结直肠癌，女性发病前五位为乳腺癌、肺癌、胃癌、结直肠癌和食管癌，其中肺癌为我国最常见的恶性肿瘤，在恶性肿瘤死因中居首位。恶性肿瘤严重威胁我国人民的健康和社会经济发展。
目前，癌症的治疗方法主要包括：手术治疗；化学治疗，用可以杀死癌细胞的药物治疗癌症；放射线治疗，是使用辐射线杀死癌细胞；靶向治疗，其原理是利用对癌细胞具有特异性的分子来靶向癌细胞；免疫疗法，利用人体内的免疫机制来对抗肿瘤细胞。
除此之外，病毒在癌症治疗方面的应用也逐渐被人们所注意到。早在1912年，Depace就发现被犬咬伤而接种狂犬疫苗的妇女，其所患的宫颈癌也得到了缓解。此后也曾有一些关于病毒用于治疗癌症的报道。尤其是在50至60年代，病毒治疗癌症得到迅速发展，70年代由于担心病毒的致病性而降温，80年代又逐步升温。
邝国乾等人综述了病毒抗癌的潜在机制、以及在临床应用中的选择和使用方法(病毒治疗癌肿临床应用研究的现状与展望，广西医科大学学报，1995年第12卷，617-619)。目前了解的抗癌机制涉及直接溶瘤作用、增强机体免疫功能和刺激细胞因子的释放。普遍认为用于治疗癌症的病毒应当无致瘤性并且具有良好的抗原性。治疗用的病毒已经报道的包括：NDV、腮腺炎病毒、痘苗病毒、仙台病毒、HSV和细小病毒(Kenney S等人Viruses asoncolytic agents:a new age for therapeutic virus.J Nati Cancer Inst,1994,86:1185)。Lorence等人在动物实验中发现，活病毒抗癌的作用显著优于灭活的病毒(Completeregression of human neuroblastoma xenografts in athymic mice after localNewcastle disease virus therapy.JNati Cancer Inst,1994,86:1228)。
有些病毒能够特异性地杀伤肿瘤细胞，在肿瘤治疗中发挥作用，这类病毒称为溶瘤病毒(oncolytic virus)。溶瘤病毒能够选择性地在肿瘤细胞中复制，造成细胞病理效应和机体免疫反应，导致肿瘤细胞的裂解死亡。同时，溶瘤病毒对正常细胞和组织却影响较小(钟江，溶瘤病毒与肿瘤治疗，国外医学(微生物学分册)，2004年第27(6)卷)。
目前，已经有较多溶瘤病毒在癌症治疗方面的报道。例如，WO2009/016433中采用重组非VSV弹状病毒(例如Maraba病毒、Carajas病毒、Muir Springs病毒、和/或大巴伊亚病毒)治疗过度增殖性疾病(如癌症)。US2010/0297072A1公开了一种治疗癌症的组合物，其包含溶瘤病毒(副粘病毒、呼肠孤病毒、疱疹病毒腺病毒、塞姆利基森林病毒)和免疫刺激剂(CTLA-4阻断剂、IL-21、抗-CD40或GM-CSF)，在接种有MCA205肉瘤细胞或B16-ova黑色素瘤细胞的小鼠中施用这种组合物能够有效抑制肿瘤细胞的生长。
狂犬病毒，属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)。狂犬病毒外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链RNA。狂犬病毒是引起狂犬病的病原体。抗狂犬病免疫接种是早期免疫预防的成功范例之一。早在19世纪80年代巴斯德开创了对疫苗的使用。早期狂犬病疫苗为神经组织来源疫苗，此后又开发了禽胚培养疫苗、细胞培养疫苗、亚单位疫苗、以及正在发展的基因工程疫苗(谭寿南，张凤羽.狂犬病及人用狂犬病疫苗研究.医学信息.2011，vol 24：2841-2842)。目前，占市场主导的人用狂犬病疫苗狂犬病是采用病毒固定毒株(例如CTN-1V株、aG株)接种Vero细胞，培养后收获病毒液，经灭活病毒、浓缩和纯化，再加入适量明胶或蔗糖作为保护剂，冻干而制成(张玉慧.狂犬病疫苗纯化工艺的建立.中国生物制品学杂志1999年第12卷第4：231-232)。
孙介光等人发现，将人用狂犬病毒疫苗作为唯一活性成分，以2.5IU至10IU的剂量每日肌肉施用时，在动物肿瘤模型中改善了恶性肿瘤治疗中的不良反应状态，并且增强了巨噬细胞的吞噬和消化功能(见CN100341571C)。RU2414238C2还报道了一种提高癌症抗性的方法，发现狂犬病毒疫苗增加了9,10-二甲基-1，2-苯并蒽的癌症抗性。
病毒在癌症治疗方面有着很大的潜力。本领域仍然需要开发更多基于病毒的安全有效的癌症治疗药物。
发明内容
鉴于此，本公开提供了一种用于治疗癌症的组合物，其包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(以下简称PIC)、抗生素(或多氨基化合物)以及正价离子；或者，所述的治疗癌症的组合物由PIC、抗生素(或多氨基化合物)和正价离子组成。
根据另一方面，本公开提供了一种用于治疗癌症的组合物，其包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(以下简称PIC)、抗生素(或多氨基化合物)、正价离子以及任选地还含有病毒；或者，由PIC、抗生素(或多氨基化合物)、正价离子以及病毒组成。
在一些实施方式中，所述的病毒是灭活的、减毒的、或者在受试者体内不能繁殖。在具体的实施方式中，所述的病毒是灭活的。
在一些实施方式中，所述的病毒选自：弹状病毒科(Rhabdoviridae)、腺病毒(adeniviridae)、沙粒病毒(arenaviridae)、星状病毒(astroviridae)、本扬病毒(bunyaviridae)、杯状病毒(cliciviridae)、黄病毒(flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎病毒(hepeviridae)、单分子负链RNA病毒(mononegavirales)、巢病毒(nidovirales)、小RNA病毒(piconaviridae)、正黏液病毒(orthomyxoviridae)、乳头瘤病毒(papillomaviridae)、细小病毒(parvoviridae)、多瘤病毒(polyomaviridae)、痘病毒(poxviridae)、呼肠孤病毒(reoviridae)、反转录病毒(retroviridae)和披膜病毒(togaviridae)。在具体的实施方式中，所述病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属(Lyssavirus)。在具体的实施方式中，所述病毒是狂犬病毒。
在一些实施方式中，狂犬病毒是灭活粗制的(例如，仓鼠肾细胞灭活粗制的狂犬病抗原(HKC-ICRA))，或者是灭活纯化型的(例如，仓鼠肾细胞灭活纯化型狂犬病抗原(HKC-IPRA))。
在一些实施方式中，适用于本公开的狂犬病毒是狂犬病疫苗，包括但不限于灭活型、亚单位型、基因重组型、多肽型疫苗。具体而言，适用于本公开的狂犬病毒疫苗是人类双倍体细胞疫苗(HDCV)、或仓鼠肾细胞灭活纯化型狂犬病疫苗(HKC-IPRV)、或仓鼠肾细胞灭活粗制狂犬病疫苗(HKC-ICRV)、或纯化型Vero细胞狂犬病疫苗(PVRV)、或纯化型鸡胚细胞(PCEC)、或纯化型鸭胚疫苗(PDEV)。
在一些实施方式中，组合物中PIC在分子量上是异质的，其分子量为至少66,000道尔顿。66,000道尔顿的数值相当于6.4S沉降系数单位(Svedbergs)的分子尺寸。在一些实施方式中，PIC为66,000道尔顿至1,200,000道尔顿(相当于6.4至24.0沉降系数单位)。在其它一些实施方式中，PIC的分子量是至少150,000道尔顿。在其它一些实施方式中，PIC的分子量是100,000至200,000道尔顿，或是300,000至4,000,000道尔顿，或是500,000至1,000,000道尔顿，或是1,000,000至1,500,000道尔顿，或是1,500,000至2,000,000道尔顿，或是2,000,000至2,500,000道尔顿，或是2,500,000至3,000,000道尔顿，或是3,000,000至3,500,000道尔顿，或是3,500,000至4,000,000道尔顿，或是4,000,000至4,500,000道尔顿，或是4,500,000至5,000,000道尔顿。
在具体的实施方式中，所含的抗生素选自：泰百霉素、蒽环霉素、丁苷菌素硫酸盐、庆大霉素、潮霉素、艾米康丝菌素、双去氧卡那霉素、暗霉素、美它酰胺、新霉素、嘌呤霉素、链霉素、链脲霉素及其组合。所述的多氨基化合物选自：亚精氨酸盐、精眯、N-(3-氨基丙基)、N-(3-氨基丙基)-1,4-丁二胺、精碱精素、精素、OS-二甲基胺基硫代磷酸酯、多聚赖氨酸、氨基糖苷及其组合。
在具体的实施方式中，所述抗生素是卡那霉素。在一些实施方案中，所述抗生素在组合物中的浓度为10单位/ml至100,000单位/ml，优选100单位/ml至10,000单位/ml，更优选500单位/ml至5,000单位/ml。
在一些实施方式中，所含的正价离子选自：钙、镉、锂、镁、铈、铯、铬、钴、氘、镓、碘、铁、锌及其组合。在具体的实施方式中，所述的正价离子为钙离子。所述正价离子可以呈任何适当的盐或有机复合物的形式，包括但不限于：氯化物、氟化物、氢氧化物、磷酸盐或硫酸盐。例如，当该正价离子是钙时，则钙离子可呈碳酸钙、氯化钙、氟化钙、氢氧化钙、磷酸钙或硫酸钙的形式。在一些实施方案中，所述的正价离子在组合物中的浓度为0.01μmol至10mmol/ml，优选0.02μmol至5mmol/ml；再优选0.1μmol至1mmol/ml，最优选0.1μmol至100μmol/ml。
在一些实施方式中，所述病毒相对于PIC的比例选自：1IU/50μg、1IU/60μg、1IU/70μg、1IU/80μg、1IU/90μg、1IU/100μg、1IU/125μg、1IU/200μg、1IU/250μg、1IU/300μg、1IU/350μg、1IU/400μg、1IU/450μg、1IU/500μg、1IU/550μg、1IU/600μg、1IU/700μg、1IU/800μg、1IU/1000μg、1IU/1500μg、1IU/2000μg、1IU/2500μg、1IU/3000μg、1IU/4000μg、1IU/5000μg、1IU6000μg、1IU/7000μg、1IU/8000μg、1IU/9000μg、1IU/10000μg以及上述任意两点之间的范围。
在一些实施方式中，所述PIC在组合物中浓度为250μg/单位剂量至5000μg/单位剂量；例如，所述PIC在组合物中浓度选自：250μg/单位剂量、500μg/单位剂量、1000μg/单位剂量、1500μg/单位剂量、2000μg/单位剂量、3000μg/单位剂量、4000μg/单位剂量、5000μg/单位剂量，以及上述任意两点之间的范围。
在具体的实施方式中，PIC在药物组合物中浓度为500μg/单位剂量至4000μg/单位剂量，1000μg/单位剂量至3000μg/单位剂量，或者1000μg/单位剂量至2500μg/单位剂量。
当本公开的组合物适用于成人时，PIC在组合物中浓度选自500μg/单位剂量、1000μg/单位剂量、1500μg/单位剂量、2000μg/单位剂量以及上述任意两点之间的范围。当本公开的组合物适用于未成年人(如儿童)时，PIC在组合物中浓度选自250μg/单位剂量、500μg/单位剂量、1000μg/单位剂量、1250μg/单位剂量以及上述任意两点之间的范围。
在一些实施方式中，本公开中所述的单位剂量以体积的形式表示，并且选自选自：0.1ml、0.15ml、0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、10.0ml、20.0ml、30.0ml、40.0ml、50.0ml、60.0ml、70.0ml、80.0ml、90.0ml、100.0ml，150ml，200ml，250.00ml，以及上述任意两点之间的范围。技术人员理解，过大或过小的单位剂量导致临床操作不便。因此，当本公开的组合物注射施用于人类受试者时，单位剂量优选在0.5ml至1.0ml范围内。当本公开的组合物鼻内施用于人类受试者时，单位剂量优选在0.15ml至0.2ml范围内。当本公开的组合物静脉注射于人类受试者时，单位剂量优选在30.0ml至100。0ml范围内。此处应当理解的是，单位剂量虽然以体积进行表示，但是这并不意味着本公开的药物组合物只能是液体形式。当本公开的药物组合物制备成固体(干粉或冻干粉)时，单位剂量的体积是指干粉或冻干粉重新配制后的体积。
在一些实施方式中，所述病毒在组合物中的浓度为0.1IU/单位剂量至100IU/单位剂量。更具体地，所述病毒在组合物中的浓度选自0.2IU/单位剂量、0.5IU/单位剂量、1.0IU/单位剂量、1.5IU/单位剂量、2.0IU/单位剂量、2.5IU/单位剂量、3.0IU/单位剂量、3.5IU/单位剂量、4.0IU/单位剂量、5.0IU/单位剂量、6.0IU/单位剂量、7.0IU/单位剂量、8.0IU/单位剂量、9.0IU/单位剂量、10.0IU/单位剂量、15.0IU/单位剂量、20.0IU/单位剂量、30.0IU/单位剂量、40.0IU/单位剂量、50.0IU/单位剂量、60.0IU/单位剂量、70.0IU/单位剂量、80.0IU/单位剂量、90.0IU/单位剂量、100.0IU/单位剂量，以及上述任意两点之间的范围。在具体的实施方式中，所述病毒在组合物中的浓度为0.5IU/单位剂量至3.0IU/单位剂量；优选1.0IU/单位剂量至2.5IU/单位剂量。在一些具体的实施方式中，当组合物用于成人时，所述病毒在组合物中的浓度为0.5IU/单位剂量至10.0IU/单位剂量。在另一些具体的实施方式中，当组合物用于未成年人时，所述病毒在组合物中的浓度为0.5IU/单位剂量至5.0IU/单位剂量。
在一些实施方式中，所述病毒在组合物中的浓度为0.05IU/ml至40.0IU/ml；优选0.05IU/ml、0.1IU/ml、0.15IU/ml、0.2IU/ml、0.5IU/ml、1.0IU/ml、2.0IU/ml、3.0IU/ml、4.0IU/ml、5.0IU/ml、10IU/ml、15IU/ml、20IU/ml、25IU/ml、30IU/ml、35IU/ml、40IU/ml。
在一些实施方案中，本公开的所述组合物可以进一步包含辅料，作为赋形剂和稳定剂。所述辅料选自明胶、蔗糖、白砂糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、葡萄糖、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚山梨醇酯20、甘露醇聚乙二醇、人血白蛋白、重组白蛋白、辛酸钠、尿素、氢氧化铝、酚红、氯化镁、氯化钾、氯化钠、硫代硫酸钠、磷酸二氢钾、抗坏血酸、三氯甲烷、苯酚和硫柳汞。
在一些实施方式中，本公开的组合物还可以包含生理上可接受的缓冲液，选自：乙酸盐、三羟甲基氨基甲烷(tris)、碳酸氢盐、碳酸盐、磷酸盐缓冲液。适用于本公开组合物的缓冲液pH值选自：6.50、6.60、6.70、6.80、6.90、7.00、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.30、7.35、7.40、7.45、7.50、7.55、7.60、7.65、7.70、7.75、7.80、7.85、7.90、7.95、8.00以及上述任意两点之间的范围。在具体的实施方式中，缓冲液是PBS，并且pH值在7.3至7.5范围之内。
本公开的组合物可被制备成为干燥粉末、液态溶液(例如可注射型溶液、水性或生理食盐水溶液，或悬浮液、油膏、液滴、乳剂、凝胶、糖浆或浆液)、片剂、包衣片剂、微胶囊、栓剂、药片、颗粒、糖衣锭、胶囊。制备方法被一般性地叙述在Stanley A Plotkin等人，Vaccine第四版W.B.Saunders Company 2003中。优选，本公开的组合物被制备成为可注射型溶液。
根据本公开的另一方面，提供一种用于治疗癌症的组合物，其是上述组合物的干粉或冻干粉形式。
根据本公开的另一方面，提供了上述PIC、抗生素(或多氨基化合物)以及正价离子的组合在制备治疗癌症的药物中的用途。
根据本公开的又一方面，提供了CN103405762A中所公开的聚核苷酸佐剂组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
根据本公开的另一方面，提供了PIC、抗生素(或多氨基化合物)、正价离子和病毒的组合在制备治疗癌症的药物中的用途。
根据本公开的另一方面，提供了本公开的组合物在治疗癌症中的用途。
更具体地，提供了本公开的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
在一些具体的实施方式中，所述癌症选自：
唇恶性肿瘤，舌根恶性肿瘤，牙龈恶性肿瘤，口底恶性肿瘤，腭恶性肿瘤，腮腺恶性肿瘤，扁桃体恶性肿瘤，口咽恶性肿瘤，鼻咽恶性肿瘤，梨状窦恶性肿瘤，咽下部恶性肿瘤；
食管恶性肿瘤，胃恶性肿瘤，小肠恶性肿瘤，结肠恶性肿瘤，直肠乙状结肠连接处恶性肿瘤，直肠恶性肿瘤，肛门和肛管恶性肿瘤，肝和肝内胆管恶性肿瘤，胆囊恶性肿瘤，胰恶性肿瘤；
鼻腔和中耳恶性肿瘤，鼻旁窦恶性肿瘤，喉恶性肿瘤，气管恶性肿瘤，支气管和肺恶性肿瘤，胸腺恶性肿瘤，心脏、纵隔和胸膜恶性肿瘤；
骨和关节软骨恶性肿瘤；
皮肤恶性黑素瘤；
间皮和软组织的恶性肿瘤；
乳房恶性肿瘤；
外生殖器恶性肿瘤，阴道恶性肿瘤，子宫颈恶性肿瘤，子宫体恶性肿瘤，卵巢恶性肿瘤，胎盘恶性肿瘤；
阴茎恶性肿瘤，前列腺恶性肿瘤，睾丸恶性肿瘤；
泌尿道恶性肿瘤；
眼和附器恶性肿瘤；
脑膜恶性肿瘤，脑部恶性肿瘤；
脊髓、颅神经和中枢神经系统恶性肿瘤；
内分泌腺恶性肿瘤；
霍奇金病，滤泡性结节性非霍奇金淋巴瘤，弥漫性非霍奇金淋巴瘤，周边和皮肤T细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤，恶性浆细胞肿瘤，淋巴样白血病，髓系白血病，单核细胞白血病。
在具体的优选实施方式中，本公开的组合物可用于治疗肺癌、乳癌、甲状腺癌、肾癌、胃腺癌、肝癌、黑色素瘤、舌癌、直肠癌、子宫内膜癌和卵巢癌。
在本发明进一步优选的实施方案中，本发明的组合物可用于治疗转移性肿瘤。
进一步地，本发明提供了本发明的组合物与抗肿瘤治疗方案组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途，优选地，所述抗肿瘤方案选自化疗、放疗、靶向治疗、免疫治疗，所述化疗药物选自烷化剂、抗代谢抗肿瘤药、抗肿瘤抗生素、抗肿瘤植物药、铂化合物类抗肿瘤药、激素平衡类抗肿瘤药、杂类抗肿瘤药，所述靶向治疗药选自利妥昔单抗、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、伊马替尼、狄诺塞麦、西妥昔单抗、尼洛替尼和索拉非尼，所述免疫治疗类抗肿瘤药选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂和CTLA4抑制剂；更优选地，所述烷化剂选自环磷酰胺、异环磷酰胺和塞替派，所述抗代谢抗肿瘤药选自甲氨蝶呤、巯嘌呤、氟脲嘧啶和阿糖胞苷，所述抗肿瘤抗生素选自平阳霉素、柔红霉素、放线菌素D、丝裂霉素、多柔比星和米托恩醌，所述抗肿瘤植物药选自长春新碱、依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇和多西他赛，所述铂化合物类抗肿瘤药选自顺铂、卡铂和奥沙利铂，所述激素平衡类抗肿瘤药选自亮丙瑞林、他莫昔芬、氟他胺和福美司坦，所述杂类抗肿瘤药选自三氧化二砷。
在本公开的上下文中，当本公开的组合物包含病毒时，待治疗的癌症不是由本公开组合物中的病毒所引起的。在具体的实施方式中，待治疗的癌症不是由狂犬病毒引起的。
根据本公开的另一方面，提供了一种治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本公开组合物。
在一些实施方式中，组合物的施用是系统性的(也作全身性)或局部的。在一些实施方式中，通过胃肠道外(如肌肉内、腹腔内、静脉内、皮下、皮内、瘤内、瘤周注射)注射来施用本公开的组合物。在其它实施方式中，本公开的组合物是以注射以外的方式(例如不以机械装置来破坏上皮细胞障壁的方式)经皮内传输。在另一些实施方式中，该组合物是通过直肠、阴道、鼻、口、舌下、呼吸道、眼、或透皮的途径而施用。
在一些实施方式中，按照选自以下的频率向受试者施用本公开的组合物：每月1次、每月2次、每月3次、每月4次、每月5次、每月6次、每月7次、每月8次、每周1次、每周2次、每周3次、每周4次、每周5次、每周6次、每三天1次、每三天2次、每三天3次、每两天1次、每两天2次、每天1次、每天2次。
根据本公开的另一方面，提供了一种用于实施上述治疗方法的药盒，其包含至少一个容器，所述容器分别独立地包含本公开的组合物。位于不同容器中组合物的组成和/或量可以相同，也可以不同。
在一些实施方式中，本公开的药盒包含：
至少一个容器，其含有2.0IU/ml的灭活狂犬病病毒和1000μg/ml的PIC。
在一些实施方式中，本公开的组合物配制于无菌液体内，并且装在无菌容器(如管、瓶、安瓿、注射器)内。在另一些实施方式中，本公开的组合物以干粉或冻干粉的形式装在容器内。临用前，配制成液体形式。
在一些实施方式中，本公开的药盒还包含选自以下的一项或其组合：针头、注射用水、使用说明书。
术语
灭活，是指去除病毒的致病能力和繁殖能力，但是仍然保留了刺激人体产生免疫应答的能力。使病毒灭活的方法为业界所熟知。任何常用方法均可使用以使病毒灭活，且可针对病毒种类而适当地选用。这些使病毒灭活的方法包括但不限于：利用光反应性化合物、氧化剂、辐射(例如UV射线；γ-射线)、核黄素和UV射线的组合、溶剂-去污剂处理(例如以有机溶剂三-N-丁基-磷酸酯和Tween 80去污剂来处理)、聚乙二醇处理、巴斯德灭菌法(热处理)、低pH处理、酶处理(胃蛋白酶或胰蛋白酶)、亚甲蓝光处理、以二甲基亚甲蓝和可见光进行处理、以补骨脂内酯衍生物S-59和UVA照射进行处理。
减毒，减毒的病毒仍然是活的，但是在制造过程中使病毒丧失致病能力，但是仍然保留繁殖能力和刺激人体产生免疫应答的能力。
本公开中所用术语“异质”，是指组合物中所含的PIC分子，在分子量、尺寸或二者皆有的物理特性上不是均一的。
本公开中所用术语“单位剂量”，是指在实体上呈分离的单位，适合作为使用于受试者个体的单位剂量。各个单位含有预定量的本公开组合物，该预定量呈现足以和药学/生理上可接受的稀释剂、载剂或载体共同产生所需效应的用量。
本说明书中所用术语“治疗”是指，获得所需药理和/或生理效应。该效应从完全地和/或部分地防止疾病或其症状的角度来看可以是属于预防性质的，和/或该效应从完全地和/或部分地稳定或治愈疾病和/或疾病所导致的负面效果来看可以是属于医疗性质的。
本说明书中，当描述数值范围时，所用的表述“…至…”、“范围之内”或“范围之间”包含端点值。
以下的实施例和说明书附图以及附图说明仅用于具体说明本发明的目的，并不意图限定本发明的范围。
附图说明
图1：在电子显微镜下观察到的PIC、抗生素(或多氨基化合物)以及正价离子所形成的结构。
图2A：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的肿瘤体积随时间的变化。■溶媒对照组；●顺铂组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图2B：接种LL/2肿瘤株后，不同组的肿瘤增殖率。●顺铂组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。
图3：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的肿瘤重量。**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01，#表示与本公开组合物YS－ON－001高剂量组相比p<0.05
图4：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的体重随时间的变化。■溶媒对照组；●顺铂组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图5：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的体重变化百分比。■溶媒对照组；●顺铂组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。误差线表示SEM；*表示具有统计学显著性差异，与溶媒对照组相比p<0.05，**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图6A和6B：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的胸腺重量和胸腺脏器指数。**表示具有统计学显著性差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图7A和7B：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的脾脏重量和脾脏脏器指数。*表示具有统计学显著性差异，与溶媒对照组相比p<0.05。
图8：接种4T1肿瘤株后，小鼠的肿瘤体积随时间的变化。■溶媒对照组；●多西紫杉醇组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。误差线表示SEM。**表示与溶媒对照组相比p<0.01。#表示与YS-ON-001本公开的组合物高剂量组(0.2mL/鼠)相比p<0.05；##表示与YS-ON-001高剂量组(0.2mL/鼠)相比p<0.01。
图9：接种4T1肿瘤株后，不同组的肿瘤增殖率。●多西紫杉醇组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。
图10：接种4T1肿瘤株后，小鼠的肿瘤重量。误差线表示SEM。**表示与溶媒对照组相比p<0.01；#表示与YS-ON-001高剂量组(0.2mL/鼠)相比p<0.05。
图11：接种4T1肿瘤株后，小鼠的体重随时间的变化。■溶媒对照组；●多西紫杉醇组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图12：接种4T1肿瘤株后，小鼠的体重变化百分比。■溶媒对照组；●多西紫杉醇组；△本公开组合物的低剂量组；◇本公开组合物的高剂量组。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图13A和13B：接种4T1肿瘤株后，小鼠的胸腺重量和胸腺脏器指数。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图14A和14B：接种4T1肿瘤株后，小鼠的脾脏重量和脾脏脏器指数。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图15A：YS-ON-001与索拉非尼联合用药对小鼠肝癌H22细胞Balb/c小鼠移植瘤模型肿瘤体积的影响。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01；#表示与联合用药组相比p<0.05；##表示与联合用药组相比p<0.01。
图15B：YS-ON-001与索拉非尼联合用药对小鼠肝癌H22细胞Balb/c小鼠移植瘤模型肿瘤增殖率的影响
图16A：接种LL/2肿瘤株后，小鼠的肿瘤体积随时间的变化。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图16B：接种LL/2肿瘤株后，不同组的肿瘤增殖率。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图17：接种LL/2肿瘤株后，不同组的瘤重。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图18A-18B：YS-ON-001对小鼠黑色素瘤B16F10细胞C57BL/6小鼠肺转移模型体重的影响。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图19：YS-ON-001对小鼠黑色素瘤B16F10细胞C57BL/6小鼠肺转移模型转移灶数量的影响。误差线表示SEM。**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图20A-20D：YS-ON-001对小鼠黑色素瘤B16F10细胞C57BL/6小鼠肺转移模型胸腺及脾脏重量的影响。误差线表示SEM。*表示与溶媒对照组相比p<0.05；**表示与溶媒对照组相比p<0.01。
图21：接种S-180肉瘤后小鼠的肿瘤体积随时间的变化。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图22：接种S-180肉瘤后小鼠的肿瘤瘤重随时间的变化。误差线表示SEM；**表示具有统计学差异，与溶媒对照组相比p<0.01。
图23：接种EAC肿瘤株后，小鼠存活率随时间的变化。●溶媒对照组；■环磷酰胺组；▲本公开组合物组。
图24A和24B：胸部CT。图24A为使用YS-ON-001前的CT，图24B为使用两个疗程YS-ON-001后的CT。
具体实施方式
如无特别说明，本公开涉及的试验动物操作遵照《实验动物管理条例》、《关于善待实验动物的指导性意见》、国家标准GB/14925进行。
实施例
实施例1：本公开药物组合物的制备方法
1.病毒：
灭活狂犬病毒。
2.按照以下组成制备本公开的组合物：
本公开的组合物包含灭活狂犬病毒、PIC、卡那霉素和氯化钙，进一步地，其还包括作为辅料的麦芽糖、右旋糖酐和人血白蛋白。
其中，灭活狂犬病毒：PIC＝2.0IU：1000μg。
在无菌条件下，将上述组合物配制在生理可接受的缓冲液中。根据待施用的受试者(包括但不限于年龄、性别、体重、健康情况)、待治疗癌症(包括但不限于癌症类型、严重程度)、施用途径、施用频率的因素，允许对上述配制的组合物浓度和体积进行调整。对于同样的治疗有效量，当组合物的浓度高时，施用体积就小；当组合物的浓度低时，施用体积就大。
当组合物应用于小鼠时，将本公开的组合物YS-ON-001配制成浓度：2.0IU/mL灭活狂犬病毒、1000μg/mL PIC、800IU/mL卡那霉素以及0.16μmol/mL钙离子。
PIC在人体中物不稳定，可迅速被核酸酶分解，抗生素(或多氨基化合物)和正价离子可与PIC形成三维结构，提高PIC的稳定性，三者所形成的结构的电镜结构如图1所示。
实施例2：本公开的组合物在肺癌动物模型中的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物：
1.1雌性C57BL/6小鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)；6周龄，体重为17.5±0.1克。
1.2饲养管理条件：按SPF级动物饲养条件饲养，颗粒饲料从北京科澳协力饲料有限公司购买。鼠笼、垫料、饲料及饮用水均经高温高压灭菌处理。鼠笼放置在洁净度为100级的层流架中，每笼3至5只动物，每周更换两次鼠笼。动物房室内温度21至25℃，相对湿度40％至70％。
2.肿瘤株：
Lewis LL/2肺癌细胞株，购于美国模式菌种收集中心(ATCC)。
培养条件：培养液为含有10％胎牛血清的DMEM培养基，培养条件为37℃，5％二氧化碳。传代比例为1:5至1:8，每周传代3至4次。
3.LL/2肿瘤移植模型构建：
C57BL/6小鼠皮下接种LL/2Lewis肺癌细胞株，接种量为每鼠1×106个细胞，成瘤率为100％。接种后第3天按小鼠体重随机分组。各组动物按表1设定的剂量给药。
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设4个组：溶媒对照组、顺铂组、YS-ON-001低剂量组以及YS-ON-001高剂量组(剂量和分组详见表1)。
表1.针对LL/2的给药方案
Figure BDA0003591896950000121
2.人道终点：溶媒对照组平均瘤体积达到2500mm3以后结束实验。
3.实验结束后处死动物，剥离肿瘤拍照并称重。剥取胸腺和脾脏称重并计算脏器指数。
III.观察指标：
1.肿瘤体积
使用测量瘤径的方法，动态观察被试药物的抗肿瘤效应。每周测量3次肿瘤体积，并计算相对肿瘤增殖率T/C(％)。
1.1肿瘤体积(TV)的计算公式为：
TV＝1/2×a×b2
其中，a、b分别表示长和宽。
1.2相对肿瘤增殖率T/C(％)＝TVt/TVc×100％
其中TVt为治疗组平均肿瘤体积，TVc为溶媒对照组平均肿瘤体积。
2.瘤重
实验结束后剥取肿瘤组织，记录肿瘤重量并按以下公式计算抑瘤率：
Figure BDA0003591896950000131
其中TWc为溶媒对照组瘤重，TWt为治疗组瘤重。
3.体重
每周3次测量动物体重，按以下公式计算体重变化率(BWC)：
Figure BDA0003591896950000132
其中BW0为分组给药当天体重，BWn为每次测量时的体重。
4.胸腺与脾脏重量
实验结束后摘取受试动物胸腺与脾脏进行称重，并且按以下公式计算脏器指数：脏器指数＝脏器重量/动物体重×100％。
IV.数据处理及统计学处理
所有数据均以平均值±SEM的形式表示。组间比较采用单因素方差分析。
V.结果
1.肿瘤体积
图2A显示YS-ON-001对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型肿瘤体积的影响。
图2B显示YS-ON-001对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型肿瘤增殖率的影响。
以肿瘤接种当天作为第0天。在实验第3天按照体重随机分组给药。溶媒对照组肿瘤生长良好，实验结束时肿瘤体积超过2500mm3，达到2707±257mm3。
与溶媒对照组相比，顺铂组的肿瘤体积从第10天到实验结束均明显降低，实验结束时相对肿瘤增殖率为53.04％。具有极显著差异(p<0.01)。
与溶媒对照组相比，YS-ON-001低剂量以及高剂量组的肿瘤体积从第10天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。高剂量组瘤体积比低剂量组略低，但是差异无显著意义(p>0.05)。在实验结束时相对肿瘤增殖率分别为43.36％以及34.33％。
2.瘤重
图3显示YS-ON-001对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型瘤重的影响。
实验结束后，对所有存活动物进行安乐死，并且解剖肿瘤称瘤重，瘤重结果与肿瘤体积相似，顺铂组以及两个YS-ON-001治疗组的瘤重与溶媒对照组相比明显缩小，具有极显著差异(p<0.01)。YS-ON-001的高剂量组瘤重比顺铂组以及低剂量组明显降低，经统计学分析，差异有显著意义(p<0.05)。顺铂组、YS-ON-001低剂量以及高剂量组的抑瘤率分别为29.46％，29.49％以及53.87％。
3.体重
图4和图5显示YS-ON-001对带有小鼠Lewis肺癌LL/2肿瘤的C57BL/6小鼠体重的影响。
顺铂组开始给药后，动物体重逐渐下降，无论是体重还是体重变化率在实验第5天、第10天直到实验结束，与溶媒对照组相比明显降低，有显著差异(p<0.01)。
与溶媒对照组相比，YS-ON-001低剂量以及高剂量组给药后绝对体重没有明显变化。YS-ON-001高剂量组的体重变化率在实验第7天与溶媒组相比明显降低，具有显著差异(p<0.05)。而在其他时间点没有明显变化。
4.胸腺以及脾脏重量
图6A、图6B、图7A和图7B显示YS-ON-001对带有小鼠Lewis肺癌LL/2肿瘤的C57BL/6小鼠胸腺以及脾脏重量的影响。
实验结束时，除了肿瘤，还摘取了胸腺以及脾脏称重并计算脏器指数。顺铂组的胸腺以及脾脏与溶媒组相比，均明显缩小。其中胸腺无论是重量还是脏器指数与溶媒组相比均具有极显著差异(p<0.01)。脾脏的重量与溶媒组相比具有显著差异(p<0.05)，而脾脏的脏器指数与溶媒组相比只表现出了缩小的趋势但是差异无显著意义(p>0.05)。YS-ON-001低剂量组以及高剂量组无论是胸腺还是脾脏与溶媒对照组相比均无明显变化。
VI.讨论及结论
在本实施例中，溶媒对照组肿瘤生长旺盛，顺铂组作为阳性对照表现出了明显的抑制肿瘤生长的作用。
YS-ON-001按照0.1mL/鼠以及0.2mL/鼠的剂量对荷瘤小鼠进行肌肉注射，两个受试剂量均表现出了抑制肿瘤生长的作用，作用呈剂量依赖趋势。
而且，动物耐受良好，对于荷瘤鼠体重、脾脏重量以及胸腺重量均无明显影响，毒副作用比顺铂对照药物明显降低。其中高剂量组的抗肿瘤作用优于顺铂对照药物。
试验结果显示，在本次对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型的研究中，在受试剂量下YS-ON-001均表现出抑制肿瘤生长的作用，作用呈剂量依赖性趋势。同时对荷瘤鼠无明显毒副作用。
实施例3.本公开的组合物在乳腺癌动物模型中的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物：
1.1雌性Balb/c小鼠(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)；6周龄，体重为17.2±0.1克。
1.2饲养管理条件：按SPF级动物饲养条件饲养，颗粒饲料从北京科澳协力饲料有限公司购买。鼠笼、垫料、饲料及饮用水均经高温高压灭菌处理。鼠笼放置在洁净度为100级的层流架中，每笼3至5只动物，每周更换两次鼠笼。动物房室内温度21至25℃，相对湿度40％至70％。
2.肿瘤株：
4T1乳腺癌细胞株，购于美国模式菌种收集中心(ATCC)，由辉源生物科技(上海)有限公司保种维持传代。
培养条件：培养液为含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基，培养条件为37℃，5％二氧化碳。传代比例为1:5至1:8，每周传代3至4次。
3.肿瘤移植模型构建：
Balb/c小鼠皮下接种4T1细胞株，接种量为每鼠1×106个细胞，成瘤率为100％。接种后第3天按小鼠体重随机分组。各组动物按表2设定的剂量给药。
表2.针对4T1的给药方案
Figure BDA0003591896950000151
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设4个组：溶媒对照组、多西紫杉醇组、YS-ON-001低剂量组以及YS-ON-001高剂量组(剂量和分组详见表2)。
2.人道终点：溶媒对照组平均瘤体积达到2500mm3以后结束实验。
3.实验结束后处死动物，剥离肿瘤拍照并称重。剥取胸腺和脾脏称重并计算脏器指数。
III.观察指标：同实施例2第III部分。
IV.数据处理及统计学处理
所有数据均以平均值±SEM的形式表示。组间比较采用单因素方差分析。
V.结果
1.肿瘤体积
图8显示YS-ON-001对小鼠乳腺癌4T1细胞Balb/c移植瘤模型肿瘤体积的影响。
图9显示YS-ON-001对小鼠乳腺癌4T1细胞Balb/c移植瘤模型肿瘤增殖率的影响。
以肿瘤接种当天作为第0天。在实验第3天按照体重随机分组给药。溶媒对照组肿瘤生长良好，实验结束时肿瘤体积超过2500mm3，达到2576±108mm3。
与溶媒对照组相比，多西紫杉醇组的肿瘤体积从第8天到实验结束均明显降低，实验结束时相对肿瘤增殖率为50.12％。具有极显著差异(p<0.01)。
与溶媒对照组相比，YS-ON-001低剂量以及高剂量组的肿瘤体积从第8天到实验结束均明显降低，差异有非常显著意义(p<0.01)。从第11天到实验结束，YS-ON-001低高剂量组之间瘤体积有明显差异，差异有显著意义(p<0.05)。在实验结束时相对肿瘤增殖率分别为63.43％以及45.87％。
2.瘤重
图10显示YS-ON-001对4T1乳腺癌Balb/c小鼠移植瘤模型瘤重的影响。
实验结束后，对所有存活动物进行安乐死，并且解剖肿瘤称瘤重，瘤重结果与肿瘤体积相似，多西紫杉醇组的瘤重与溶媒对照组相比明显缩小，具有极显著差异(p<0.01)。YS-ON-001的低剂量组以及高剂量组瘤重比溶媒对照组都有降低，但是经统计学分析，仅有高剂量组的瘤重与溶媒对照组相比具有极显著差异(p<0.01)。另外YS-ON-001高剂量组的瘤重比低剂量组有所降低，差异有显著意义(p<0.05)。多西紫杉醇组、YS-ON-001低剂量以及高剂量组的抑瘤率分别为35.55％，18.21％以及42.26％。
3.体重
图11和12显示YS-ON-001对带有4T1乳腺癌的Balb/c小鼠的体重影响。
多西紫杉醇组开始给药后，动物体重逐渐下降，其中体重在实验第8天、第13天直到实验结束，与溶媒对照组相比明显降低，差异有显著意义(p<0.05)。而体重变化率从第4天直到实验结束，与溶媒对照组相比明显降低，差异有显著意义(p<0.05)。与分组给药时的自身体重相比，实验实验结束时的体重也呈下降趋势。
与溶媒对照组相比，YS-ON-001低剂量给药后绝对体重没有明显变化。YS-ON-001组高剂量组的体重从实验第15天与溶媒组相比明显降低，差异有显著意义(p<0.05)。从体重变化率的角度进行考察，那么YS-ON-001两个剂量组的体重均有所下降，其体重变化率在实验第4天、第15天直到实验结束与溶媒组相比明显降低，具有极显著差异(低剂量组：p<0.05；高剂量组：p<0.01)。但是与开始分组给药时的体重进行自身对比，体重仍然是增加的。
4.胸腺以及脾脏重量
图13A、图13B、图14A和图14B显示YS-ON-001对带有小鼠4T1乳腺癌的Balb/c小鼠胸腺以及脾脏重量的影响。
实验结束时，除了肿瘤，发明人还摘取了胸腺以及脾脏称重并计算脏器指数。
多西紫杉醇组的胸腺以及脾脏与溶媒组相比，无论是脏器重量还是脏器指数均明显缩小，经统计学分析，具有极显著差异(p<0.01)。而YS-ON-001低剂量组以及高剂量组的胸腺重量以及胸腺脏器指数与溶媒对照组相比均无明显变化。但是脾脏的脏器指数与溶媒组相比，明显升高，其中低剂量组具有极显著差异(p<0.01)；而高剂量组具有显著差异(p<0.05)。
VI.讨论及结论
在本实施例中，溶媒对照组肿瘤生长旺盛，多西紫杉醇组作为阳性对照表现出了明显的抑制肿瘤生长的作用。
YS-ON-001按照0.1mL/鼠以及0.2mL/鼠的剂量对荷瘤小鼠进行肌肉注射，两个受试剂量均表现出了抑制肿瘤生长的作用，作用呈剂量依赖趋势。而且动物耐受良好，对于荷瘤鼠胸腺重量无明显影响。其中高剂量组的抗肿瘤作用与多西紫杉醇对照药物基本相当。毒副作用比多西紫杉醇对照药物明显降低。
在本实施例中，YS-ON-001两个受试剂量组动物的脾脏脏器指数与溶媒组相比有所增加，具体原因还需要进一步实验分析。初步判断可能是增强免疫功能导致的免疫器官增重。
试验结果显示，在本次对小鼠乳腺癌4T1细胞Balb/c小鼠移植瘤模型的研究中，在受试剂量下YS-ON-001均表现出抑制肿瘤生长的作用，作用呈剂量依赖性趋势，同时荷瘤鼠耐受良好。
实施例4：本公开的组合物与索拉非尼联用在小鼠肝癌H22细胞移植瘤模型上的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物来源、饲养与管理如实施例2所述。
2.肿瘤株：
H22小鼠肝癌细胞株，购于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，由辉源生物科技(上海)有限公司保种维持传代。传代条件：以腹水形式于Balb/c小鼠体内传代，每7～8天传代1次。
3.H22肿瘤移植模型构建：
将供体小鼠安乐死后全身酒精消毒，抽取腹水计数后稀释至所需浓度，按照每鼠5×106个细胞的接种量在Balb/c小鼠皮下接种H22细胞株，成瘤率为100％。接种后第3天按小鼠体重随机分组。各组动物按表1设定的剂量给药。
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设4个组，溶媒对照组、索拉非尼单用药组、本公开组合物YS-ON-001单用药组以及本公开组合物YS-ON-001与索拉非尼的联合用药组。剂量和分组详见表3。
表3.实验给药剂量及分组
Figure BDA0003591896950000181
2.人道终点：平均瘤体积达到2500mm3以后对该组动物进行安乐死。
3.实验结束后处死动物，剥离肿瘤拍照并称重。
III.观察指标：
1.肿瘤体积的测量、计算以及统计学处理如实施例2所述。
IV.结果
1.肿瘤体积
图15A显示本公开组合物YS-ON-001与索拉非尼联合用药对小鼠肝癌H22细胞Balb/c小鼠移植瘤模型肿瘤体积的影响。
图15B显示本公开组合物YS-ON-001与索拉非尼联合用药对小鼠肝癌H22细胞Balb/c小鼠移植瘤模型肿瘤增殖率的影响。
接种后第3天按照体重随机分组给药，以分组给药当天作为第0天。溶媒对照组肿瘤生长良好，在第12天肿瘤体积超过2000mm3，达到2120±182mm3。
在第10天，溶媒对照组有1只动物因为瘤体积超过2500mm3而被安乐死。
在第19天，索拉非尼单用药组有2只动物因为瘤体积超过2500mm3而被安乐死。
整个实验于第21天结束。
与溶媒对照组相比，索拉非尼组的肿瘤体积从第3天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。在第12天溶媒对照组结束时相对肿瘤增殖率为41.09％。
与溶媒对照组相比，本公开组合物YS-ON-001组肿瘤体积从第1天到实验结束均明显降低，具有显著差异(p<0.05或者p<0.01)。在第12天实验结束时相对肿瘤增殖率为29.90％。
与溶媒对照组相比，联合用药组肿瘤体积从第1天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。在第12天实验结束时相对肿瘤增殖率为10.61％。
与联合用药组相比，索拉非尼组肿瘤体积在第1天、第5天以及第10天到实验结束均有显著差异(p<0.05或者p<0.01)。
本公开组合物YS-ON-001单用药组肿瘤体积在第5天以及第12天到实验结束与联合用药组相比均有极显著差异(p<0.05或者p<0.01)。
V.讨论及结论
在本次实验中，溶媒对照组肿瘤生长旺盛，索拉非尼组作为阳性对照表现出了明显的抑制肿瘤生长的作用，表明本次实验成功，结果可信。
本公开组合物YS-ON-001按照0.2mL/次/鼠，每天两次给药的剂量对荷瘤小鼠进行给药，表现出了明显的抑制肿瘤生长的作用，能够减缓肿瘤发展的进程。索拉非尼和YS-ON-001联合用药组，表现出了极明显的抑制肿瘤生长的作用并且具有明显的协同作用。不管是单用药还是联合用药均表现出抑制肿瘤生长的作用而且动物能够耐受，实验过程中没有动物因为药物毒性死亡。
试验结果显示，在本次对小鼠肝癌H22细胞Balb/c小鼠移植瘤模型的研究中，本公开组合物YS-ON-001无论是单用药还是与索拉非尼联合用药均表现出明显的抑制肿瘤生长的作用。而且联合用药组表现出了明显的协同作用。
实施例5：本公开的组合物与不含病毒组合物在肺癌动物模型中的治疗效果比较及本组合物与顺铂联用在肺癌动物模型中的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物来源、饲养与管理如实施例2所述。
2.Lewis LL/2肺癌细胞株的获得、培养以及LL/2肿瘤移植模型构建如实施例2所述。各组动物按表4设定的剂量给药。
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设6个组：溶媒对照组、阳性对照组、本公开组合物YS-ON-001治疗组、不含病毒组合物YS-ON-002治疗组、人用狂犬病疫苗组以及YS-ON-001与顺铂的联合用药组(剂量和分组详见表4)，其中YS-ON-002与YS-ON-001相比的差别在于YS-ON-002中不含有灭活狂犬病毒，其余组分相同。
表4.实验给药剂量及分组
Figure BDA0003591896950000191
Figure BDA0003591896950000201
2.人道终点：溶媒对照组平均瘤体积达到2500mm3以后结束实验。
3.实验结束后处死动物，剥离肿瘤拍照并称重。
III.观察指标：
1.肿瘤体积
肿瘤体积、重量的测量和计算、数据处理及统计学处理如实施例2所述。
2.联合用药指数
按照金氏公式计算Q值，Q＝0.85-1.15时为相加，Q>1.15时为协同：
Q＝Ea+b/(Ea+Eb-Ea×Eb)
其中Ea+b为联合用药组抑瘤率，Ea以及Eb分别为单用药组抑瘤率。
IV.结果
1.肿瘤体积
图16A显示本组合物与不含狂犬病毒组合物对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型肿瘤体积影响的比较及本组合物与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型肿瘤体积的影响。
图16B显示本组合物与不含狂犬病毒组合物对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型肿瘤增殖率的比较及本组合物与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型肿瘤增殖率的影响。
以肿瘤接种当天作为第0天。在实验第3天按照体重随机分组给药。溶媒对照组肿瘤生长良好，实验结束时肿瘤体积超过2500mm3，达到2535±148mm3。
与溶媒对照组相比，顺铂组的肿瘤体积从第5天到实验结束均明显降低，实验结束时相对肿瘤增殖率为47.46％。具有极显著差异(p<0.01)。
与溶媒对照组相比，本公开组合物YS-ON-001、不含病毒组合物YS-ON-002组的肿瘤体积从第5天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。在实验结束时相对肿瘤增殖率分别为37.02％，40.56％以及40.51％。
人用狂犬疫苗组的肿瘤体积在整个实验过程中与溶媒对照组均无明显变化(p>0.05)。在实验结束时相对肿瘤增殖率分别为97.87％。
与溶媒对照组相比，YS-ON-001与顺铂联合用药组的肿瘤体积从第5天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。实验结束时相对肿瘤增殖率为28.38％，比顺铂以及YS-ON-001单用药组的增殖率都要低，采用金氏公式计算Q值为0.87,表现出相加作用。
YS-ON-001(本公开的组合物)与YS-ON-002(不含狂犬病毒组合物)相比，肿瘤体积降低虽然没有统计学意义，但是从第5天到实验结束时YS-ON-001组肿瘤体积均小于YS-ON-002组，采用金氏公式计算Q值为0.93,狂犬病毒与本公开组合物其他组份表现出相加作用。
2.瘤重
图17显示本公开组合物与不含狂犬病毒组合物对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型瘤重的比较及本组合物与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型瘤重的影响。
实验结束后，对所有存活动物进行安乐死，并且解剖肿瘤称瘤重，瘤重结果与肿瘤体积相似，顺铂组、本公开组合物YS-ON-001、不含病毒组合物YS-ON-002以及顺铂与YS-ON-001联合组的瘤重与溶媒对照组相比明显缩小，具有极显著差异(p<0.01)。其抑瘤率分别为42.38％，60.88、56.04％、51.26％以及75.44％。
按照金氏公式计算Q值为0.97,说明本公开组合物中加入狂犬病毒抗原具有药效相加作用。
V.讨论及结论
在本次实验中，溶媒对照组肿瘤生长旺盛，顺铂组作为阳性对照表现出了明显的抑制肿瘤生长的作用，表明本次实验成功，结果可信。
本公开组合物YS-ON-001及不含狂犬病毒组合物YS-ON-002按照0.2mL/鼠的剂量对荷瘤小鼠进行肌肉注射，均表现出了抑制肿瘤生长的作用。而且动物耐受良好，对于荷瘤鼠体重略有影响，但是毒副作用比对照药物顺铂明显降低。其抗肿瘤作用至少与对照药物顺铂相当。
本公开组合物YS-ON-001与顺铂联合用药组的相对肿瘤增殖率为28.38％，明显低于顺铂以及YS-ON-001单用药组，采用金氏公式计算二者联用具有相加作用。
YS-ON-001(本公开组合物)和YS-ON-002(不含狂犬病病毒组合物)相比抑瘤效率虽然没有统计学上的差异，但通过金氏公式计算发现，狂犬病病毒与本申请组合物其他成份有相加作用。
试验结果显示，在本次对小鼠Lewis肺癌LL/2细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型的研究中，在受试剂量下本组合物YS-ON-001及YS-ON-002均表现出抑制肿瘤生长的作用。本公开组合物YS-ON-001与顺铂联用具有相加作用。
实施例6：本公开的组合物在小鼠黑色素瘤B16F10转移模型中的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物：
实验动物来源、饲养与管理如实施例2所述。
2.肿瘤株：
B16F10细胞株，购于美国模式培养物集存库(ATCC)。由辉源生物科技(上海)有限公司保种维持传代。
培养条件：培养液为含有10％胎牛血清的DMEM培养基，培养条件为37℃，5％二氧化碳。传代比例为1:5～1:8，每周传代3～4次。
3.LL/2肿瘤移植模型构建：
C57BL/6小鼠尾静脉接种B16F10小鼠黑色素瘤细胞，接种量为5×104/0.2mL。接种后24小时按小鼠体重随机分组。各组动物按设定的剂量给药。
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设3个组，溶媒对照组、顺铂组以及本公开组合物YS-ON-001组。剂量和分组详见表5。
表5.实验给药剂量及分组
Figure BDA0003591896950000221
2.连续给药15天后对动物进行安乐死。剥离肺组织拍照并计算肺脏转移灶数量。剥取胸腺和脾脏称重并计算脏器指数.
III.观察指标：
1.1体重
每周3次测量动物体重，按以下公式计算体重变化率(BWC)：
BWC＝(BWn-BW0)/BW0×100％
其中BW0为分组给药当天体重，BWn为每次测量时的体重。
1.2肺脏转移灶数量
实验结束后剥取肺组织，计数肺脏转移灶数量。
1.3胸腺与脾脏重量
实验结束后摘取受试动物胸腺与脾脏进行称重。
IV.数据处理及统计学处理
所有数据均以平均值±SEM的形式表示。组间比较采用单因素方差分析。
V.结果
1.体重
图18A-18B显示本公开组合物YS-ON-001对小鼠黑色素瘤B16F10细胞C57BL/6小鼠肺转移模型体重的影响。
与溶媒对照组相比，顺铂组的平均体重从实验第5天到实验结束(除第7天)均显著地降低(p<0.01)，体重变化率也得到相类似的结果。
与溶媒对照组相比，本公开组合物YS-ON-001治疗组给药后体重有一过性的轻微下降，然后开始回升，但是在某些时间点(第5天和第15天)，与溶媒对照组相比仍然有显著性差异。
2.肺脏转移灶数量
图19显示本公开组合物YS-ON-001对小鼠黑色素瘤B16F10细胞C57BL/6小鼠肺转移模型转移灶数量的影响。
实验结束后，对所有存活动物进行安乐死，并且解剖肺脏拍照并计算肺脏转移灶数量。
与溶媒对照组相比，顺铂和YS-ON-001治疗组的肺脏转移灶数量均显著地减少，具有极显著差异(p<0.01)。
3.胸腺以及脾脏重量
图20A-20D显示本公开组合物YS-ON-001对小鼠黑色素瘤B16F10细胞C57BL/6小鼠肺转移模型胸腺及脾脏重量的影响
实验结束时，除了肺脏，我们还摘取了胸腺以及脾脏称重并计算脏器指数。
实验结果显示，与溶媒对照组相比，顺铂组的胸腺重量和胸腺脏器指数均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。脾脏重量及脾脏脏器指数则无明显差异。
本公开组合物YS-ON-001组动物的胸腺重量以及胸腺脏器指数显著地低于溶媒对照组(p<0.01)。
与溶媒对照组相比,本公开组合物YS-ON-001组动物的脾脏重量以及脾脏脏器指数明显升高(p<0.01)。
VI.讨论及结论
在本次实验中，溶媒对照组的平均肺脏转移灶数量达到93.43±1.76个，而且所有动物均出现大量的肺转移灶，顺铂组作为阳性对照表现出显著减少肺脏转移灶数量的作用，表明本次实验成功，结果可信。
YS-ON-001受试样品按照0.2mL/次/鼠，每天两次给药的剂量对荷瘤小鼠进行给药，其肺脏转移灶数量显著降低，表现出了明显的抗肿瘤转移效果。
实施例7：本公开的组合物在小鼠肉瘤移植模型上的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物来源、饲养与管理如实施例2所述。
2.肿瘤株：
S180鼠肉瘤细胞株，购自中医科学院肿瘤细胞库，由中国科学院过程工程研究所保种维持传代。
培养条件：以腹水形式于Balb/c小鼠传代，每5-6天传代1次，具体视小鼠肚子情况而定。
3.S180肉瘤移植模型构建：
Balb/c动物适应性饲养5～7天后，于腹腔接种S180瘤株作为F0代小鼠，饲养，待腹腔鼓起到一定程度，抽出腹水，接种于F1代小鼠，传代至F2～F3代小鼠后用于正式实验，抽取腹水，计数，接种于皮下，接种量为2×106/0.2mL。接种后第2天随机分组并开始给药各组动物按表4设定的剂量给药。
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设三个组，一个溶媒对照组，环磷酰胺组(阳性对照)、本公开组合物YS-ON-001组。
表6：S180模型分组给药方案
Figure BDA0003591896950000241
2.第10次给药结束后，间隔1天，剥取肿瘤拍照称瘤重。
III.观察指标：
1.肿瘤体积
使用测量瘤径的方法，动态观察被试药物的抗肿瘤效应。每周测量3次肿瘤体积，并计算相对肿瘤增殖率T/C(％)。
1.1肿瘤体积(TV)的计算公式为：
TV＝1/2×a×b2
其中，a、b分别表示长和宽。
2.瘤重
实验结束后剥取肿瘤组织，记录肿瘤重量。
IV.数据处理及统计学处理
所有数据均以平均值±SEM的形式表示。组间比较采用单因素方差分析。
V.结果
1.肿瘤体积
图21显示本公开组合物YS-ON-001对小鼠肉瘤S180细胞Balb/c小鼠移植瘤模型肿瘤体积的影响。
肿瘤接种后第2天给药，溶媒对照组肿瘤生长良好，实验结束时肿瘤体积接近2000mm3。
与溶媒对照组相比，环磷酰胺组的肿瘤体积从第4天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。
与溶媒对照组相比，本公开组合物YS-ON-001肿瘤体积从第4天到实验结束均明显降低，具有极显著差异(p<0.01)。与阳性对照药环磷酰胺相比，肿瘤体积类似。
2.瘤重
图22显示本公开组合物YS-ON-001对小鼠肉瘤S-180细胞Balb/c小鼠移植瘤模型瘤重的影响。
实验结束后，对所有存活动物进行安乐死，并且解剖肿瘤称瘤重，瘤重结果与肿瘤体积相似，环磷酰胺组和YS-ON-001治疗组瘤重与溶媒对照组相比明显缩小，具有极显著差异(p<0.01)。
VI.讨论及结论
在本实施例中，溶媒对照组肿瘤生长旺盛，环磷酰胺组作为阳性对照表现出了明显的抑制肿瘤生长的作用。
肌肉注射本公开组合物YS-ON-001对荷瘤小鼠的肿瘤生长均产生了明显的抑制，肿瘤体积及瘤重明显降低。
试验结果显示，在本次对小鼠肉瘤S180细胞Balb/c小鼠移植瘤模型的研究中，在受试剂量下本公开组合物YS-ON-001表现出抑制肿瘤生长的作用。
实施例8.本公开的组合物在艾氏腹水瘤动物模型中的治疗效果
I.肿瘤模型的构建
1.实验动物：
1.1昆明鼠，雌性，5～6周龄，适应性饲养5～7天后进行试验。
1.2饲养管理条件：按SPF级动物饲养条件饲养，颗粒饲料从北京科澳协力饲料有限公司购买。鼠笼、垫料、饲料及饮用水均经高温高压灭菌处理。鼠笼放置在洁净度为100级的层流架中，每笼3至5只动物，每周更换两次鼠笼。动物房室内温度21至25℃，相对湿度40％至70％。
2.肿瘤株：
艾氏腹水瘤瘤株(EAC)，中医科学院肿瘤细胞库，由中国科学院过程工程研究所保种维持传代。
培养条件：以腹水形式与昆明鼠传代，每7-8天传代1次，具体视小鼠肚子情况而定。
3.肿瘤移植模型构建：
动物适应性饲养5～7天后，于腹腔接种EAC瘤株作为F0代小鼠，饲养，待腹腔鼓起到一定程度，抽出腹水，接种于F1代小鼠，传代至F2～F3代小鼠后用于正式实验，抽取腹水接种于腹腔，接种量为1×106/0.2mL。接种后第2天随机分组。各组动物按表7设定的剂量给药。
表7.针对EAC的给药方案
Figure BDA0003591896950000261
II.试验方法：
1.实验分组：
实验共设3个组：溶媒对照组、环磷酰胺组、YS-ON-001组(剂量和分组详见表2)。
2.给药10次后结束给药，持续观察动物存活情况。
III.观察指标：生存期、生命延长率
生命延长率＝(给药组平均生存时间-阴性对照组平均生存时间)/阴性对照组平均生存时间×100％。
IV.数据处理及统计学处理
组间比较采用单因素方差分析。
V.结果
图23显示本公开组合物YS-ON-001对小鼠艾氏腹水瘤模型生存期的影响。
以肿瘤接种当天作为第0天。在实验第2天随机分组给药。溶媒对照组肿瘤生长良好，在第23天开始出现死亡，第27天全部死亡，生存期中位数为25.5天。
与溶媒对照组相比，阳性对照环磷酰胺组在第27天开始出现死亡，第30天全部死亡，生命延长率为14.74％，生存期中位数为29天。
与溶媒对照组相比，本公开组合物YS-ON-001组在第33天开始出现死亡，第39天全部死亡，生命延长率为38.65％，生存期中位数为34.5天。
VI.讨论及结论
在本实施例中，溶媒对照组肿瘤生长旺盛，环磷酰胺组作为阳性对照表现出了明显延长生存期的作用。
本公开组合物YS-ON-001按照0.2mL/鼠的剂量对荷瘤小鼠进行肌肉注射，表现出了明显延长生存期的作用，而且动物耐受良好。其抗肿瘤作用显著优于环磷酰胺对照药物。
试验结果显示，在本次对小鼠艾氏腹水瘤模型的研究中，在受试剂量下YS-ON-001表现出抑制肿瘤生长，延长生存期的作用，同时荷瘤鼠耐受良好。
实施例9：本公开的组合物在甲状腺癌伴肺、淋巴结转移中的治疗效果
1.受试者：
毛某，女，53岁，2013年8月确诊为甲状腺癌伴肺转移，进行甲状腺联合根治术，术后病理回示甲状腺左叶乳头状癌，伴淋巴结转移，甲状腺右叶结节性甲状腺肿。后又分别于2013年10月28日和2014年2月6日两次进行碘131治疗，2015年进行4周期“依托泊苷+卡铂”放疗治疗(2015.09.28，2015.10.20，2015.11.07，2015.12.04)，治疗后虽然肺部1-2处病灶出现缩小，但其它5-6处病灶无明显改善，化疗副作用明显，身体状况不佳。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
在患者知情同意下使用YS－ON－001(1ml)上臂肌内注射，三天一剂，共12剂。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后无明显副作用，各部位病兆稳定，身体状况改善。
实施例10：本公开的组合物在肾癌中的治疗效果
1.受试者：
马某，男，70岁，2015年11月开始出现间歇性淡红色尿血，偶伴左腰部隐痛，经全面检查确诊为左肾癌，大小约11x12x6cm；胸部CT怀疑右肺肿瘤，两肺慢性炎症，并可能伴有肝囊肿。考虑患者年龄和家属意见，决定不予手术或放化疗治疗，仅进行简单抗炎症治疗后出院。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
经患者和家属知情同意下，于12月25日起开始使用YS-ON-001(2ml)上臂肌内注射，三天一剂，共约12剂。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后无明显副作用，尿血症状和腰肋部位疼痛消失。
实施例11：本公开的组合物在胃腺癌伴肝转移中的治疗效果
1.受试者：
南某，女，55岁，2015年10月确诊为胃腺癌IV期肝转，后进行“奥沙利铂+阿帕替尼”化疗，由于肝损伤较大，中止化疗，经保肝降酶及对症处理后，肝功能基本恢复正常。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
3.1第一疗程：
在患者知情同意下，于2015年12月25日开始使用YS-ON-001上臂肌内注射，每三天一剂(1ml)，至12月29日由于转氨酶异常升高停药。
3.2第二疗程：
2016年1月2日肝功能恢复到注射前水平前后，于1月11日重新开始使用YS－ON－001，计量同前，1月27日复查。
4.结果：
第一疗程后，转氨酶异常升高，怀疑是由施用本组合物后引起肝组织坏死，为非特异性抑瘤反应。
第二疗程后，患者无明显副作用；使用后，肝部病灶CT结节阴影略有变弱，印证第一疗程猜测。
实施例12：本公开的组合物在乳癌伴淋巴结、肺及成骨转移中的治疗效果
1.受试者：
女，34岁。2008年5月确诊为左乳浸润性导管癌，进行左乳癌改良术，病例提示淋巴结癌转移，免疫组化结果ER－、PR++、Her2++。2015年6月确认双肺及成骨转移，头颅CT显示双侧小脑半球及小脑蚓部多发转移灶；病情判断为疾病进展(PD)。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
3.1第一疗程：
在患者知情同意下，从2015年9月29日开始使用YS-ON-001肌内注射，每周一剂(第一、三、五剂2ml，第二、四、六剂1ml)，并按医嘱进行放化疗。
3.2第二疗程：
12月14日开始使用第二轮YS-ON-001肌内注射，每三日一剂(1ml)。
4.结果：
第一疗程后，复查胸部CT发现右侧腋窝淋巴结肿大；胸腔积液明显减少；右肺组织复张，双肺肿瘤组织坏死；脑部转移灶消失。一周后判断病情为疾病稳定(SD)。
第二疗程后，胸部CT复查发现双肺结节性阴影明显减少。图24A为使用YS-ON-001前的CT，图24B为使用两个疗程YS-ON-001后的CT。比较可见，肺部结节性阴影明显减少，本公开组合物抑瘤效果明显。
实施例13：本公开的组合物在舌癌中的治疗效果
1.受试者：
周某，女，78岁，2015年4月确诊为舌癌，进行左舌癌扩大切除术+下颌骨部分切除术+拔牙术，术后病理回示高分化鳞状细胞癌。后于2016年5月左舌癌复发，行左舌癌复发灶扩大切除术。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
在患者知情同意下，于2016年7月26日开始使用YS－ON－001臀部肌内注射，每天2剂。使用2天后，改为每天4剂。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后无明显副作用，自觉上颚溃疡深度变浅，身体状况改善，睡眠好转，食欲增加，体力渐佳。
实施例14：本公开的组合物在前列腺癌伴多发性骨转移中的治疗效果
1.受试者：
徐某，男，81岁，2013年1月确诊为前列腺癌伴多发性骨转移。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
在患者知情同意下，于2016年7月3日使用YS－ON－001肌内注射，隔日注射，每次2剂。2016年8月3日注射3剂。2016年8月5日起，隔日注射，每次4剂。并按医嘱同时采用诺雷得进行联合治疗。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后除长期注射引起的肌肉僵硬外无其他明显副作用。治疗期间，前列腺总特异抗原水平降低，身体状况改善，疼痛缓解。前列腺穿刺病理诊断结果显示由治疗前10针均见癌变为治疗后10针仅5针见腺癌伴治疗反应。
实施例15：本公开的组合物在直肠癌中的治疗效果
1.受试者：
孙某，男，63岁，2012年11月确诊为直肠癌，进行直肠癌切除术+肝肿瘤活检术，术后病理回示直肠溃疡型中分化类癌，浸润肠壁全层，肠系膜脂肪组织内见多发癌结，淋巴结可见转移癌，肝脏见癌转移结节。术后恢复可，于2012年5月开始贝伐单抗(600mg)联合XELOX(OXA 250mg，Xelod3.0，14d)进行治疗。8个周期后，单独使用贝伐单抗直到2015年9月。2016年3月复查CT影像诊断报告提示肝内多发转移瘤，全身多发骨转移瘤，左肺下叶小结节转移待排。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
在患者知情同意下，于2016年3月25日开始使用YS－ON－001，肌肉注射。第一个月隔天1剂(1ml)，第二个月每天1剂，第三个月每天2剂，直至8月10日开始每天3剂。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后无明显副作用。治疗期间，患者病灶基本无变化，病情稳定，未出现进一步恶化。此外，因使用贝伐单抗所引起的下肢浮肿有所改善。
实施例16：本公开的组合物在子宫内膜癌中的治疗效果
1.受试者：
张某，女，56岁，2010年12月确诊为子宫内膜癌III期，进行腹式广泛宫切术+卵巢癌根治术，术后病理回示子宫内膜腺癌(组织学分级I级)双侧卵巢癌侵润，右侧宫骶韧带癌转移。术后于2011年1月开始多西他赛+顺铂方案化疗。2015年1月发现肝及结肠复发及转移，遂进行化疗及癌痛治疗。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
在患者知情同意下，于2016年6月10日开始使用YS－ON－001，肌肉注射。前十天每天2剂(2ml)，之后每天4剂(4ml)。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后除注射部位出现肿块外无明显副作用。治疗2个月后，CT检查结果显示与一个月前相比，左侧腹壁稍低密度团块略有减小，邻近结肠脾区明显不规则增厚，较前略好转。
实施例17：本公开的组合物在卵巢癌中的治疗效果
1.受试者：
周某，女，56岁，2016年6月确诊为卵巢癌IIIc期(高级别浆液性癌)，进行开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术+直肠癌根治术，术后病理回示(左附件、右卵巢)符合高级别浆液性癌，直肠病灶、阑尾浆膜、腹壁均见癌组织。
2.组合物：
当施用至人类受试者时，YS-ON-001配制在无菌注射用水中。
3.施用方案：
在患者知情同意下，于2016年6月16日开始使用YS－ON－001，肌肉注射。前七天每天2剂(2ml)，之后每天4剂(4ml)。并按医嘱同时采用多帕菲和卡铂进行联合治疗。
4.结果：
在本实施例中，受试者使用本公开组合物后无明显副作用。治疗期间，患者病灶基本无变化，病情稳定，未出现进一步恶化。
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RU2414238C2；
US2010/0297072A1；
WO2009/016433。

Claims (13)

1.一种用于治疗癌症的组合物，其包含：
聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸、
抗生素或多氨基化合物、
正价离子，以及
任选地，病毒；
其中所述的病毒是灭活、减毒的、或者在受试者体内不能繁殖的病毒。
2.根据权利要求1所述的用于治疗癌症的组合物，其中
所述的病毒选自：弹状病毒科(Rhabdoviridae)、腺病毒(adeniviridae)、沙粒病毒(arenaviridae)、星状病毒(astroviridae)、本扬病毒(bunyaviridae)、杯状病毒(cliciviridae)、黄病毒(flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎病毒(hepeviridae)、单分子负链RNA病毒(mononegavirales)、巢病毒(nidovirales)、小RNA病毒(piconaviridae)、正黏液病毒(orthomyxoviridae)、乳头瘤病毒(papillomaviridae)、细小病毒(parvoviridae)、多瘤病毒(polyomaviridae)、痘病毒(poxviridae)、呼肠孤病毒(reoviridae)、反转录病毒(retroviridae)和披膜病毒(togaviridae)，
其中，所述病毒优选属于弹状病毒科狂犬病毒属(Lyssavirus)；
更优选，所述病毒是狂犬病毒。
3.根据权利要求1所述的用于治疗癌症的组合物，其中所述的抗生素选自：泰百霉素、蒽环霉素、丁苷菌素硫酸盐、庆大霉素、潮霉素、艾米康丝菌素、双去氧卡那霉素、暗霉素、β-内酰胺类、新霉素、嘌呤霉素、链霉素、链脲霉素及其组合，和其中所述的多氨基化合物选自：亚精氨酸盐、精眯、N-(3-氨基丙基)、N-(3-氨基丙基)-1,4-丁二胺、精碱精素、精素、OS-二甲基胺基硫代磷酸酯、多聚赖氨酸、氨基糖苷及其组合。
4.根据权利要求1所述的用于治疗癌症的组合物，其中所述的正价离子选自钙、镉、锂、镁、铈、铯、铬、钴、氘、镓、碘、铁、锌及其组合；优选，所述的正价离子为钙离子。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用于治疗癌症的组合物，其中
所述病毒相对于所述聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸的比例选自：1IU/50μg、1IU/60μg、1IU/70μg、1IU/80μg、1IU/90μg、1IU/100μg、1IU/125μg、1IU/200μg、1IU/250μg、1IU/300μg、1IU/350μg、1IU/400μg、1IU/450μg、1IU/500μg、1IU/550μg、1IU/600μg、1IU/700μg、1IU/800μg、1IU/1000μg、1IU/1500μg、1IU/2000μg、1IU/2500μg、1IU/3000μg、1IU/4000μg、1IU/5000μg、1IU/6000μg、1IU/7000μg、1IU/8000μg、1IU/9000μg、1IU/10000μg以及上述任意两点之间的范围；
优选，所述病毒相对于所述聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸的比例是1IU/500μg。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的用于治疗癌症的组合物，其中
所述聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸在组合物中浓度为250μg/单位剂量至5000μg/单位剂量；
优选，所述聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸在组合物中浓度选自：250μg/单位剂量、500μg/单位剂量、1000μg/单位剂量、1500μg/单位剂量、2000μg/单位剂量、3000μg/单位剂量、4000μg/单位剂量、5000μg/单位剂量；和
其中，所述病毒在组合物中浓度为0.1IU/单位剂量至100.0IU/单位剂量；
优选，所述病毒在组合物中浓度选自0.5IU/单位剂量，1.0IU/单位剂量，1.5IU/单位剂量，2.0IU/单位剂量，2.5IU/单位剂量，3.0IU/单位剂量，3.5IU/单位剂量，4.0IU/单位剂量，5.0IU/单位剂量，6.0IU/单位剂量，7.0IU/单位剂量，8.0IU/单位剂量，9.0IU/单位剂量，10.0IU/单位剂量，15.0IU/单位剂量，20.0IU/单位剂量，30.0IU/单位剂量，40.0IU/单位剂量，50.0IU/单位剂量，60.0IU/单位剂量，70.0IU/单位剂量，80.0IU/单位剂量，90.0IU/单位剂量，100.0IU/单位剂量，以及上述任意两点之间的范围；
更优选，所述病毒在组合物中浓度为0.5IU/单位剂量至10.0IU/单位剂量；
最优选，所述病毒在组合物中浓度为1.0IU/单位剂量至5.0IU/单位剂量。
7.根据权利要求6所述的用于治疗癌症的组合物，其中
所述的单位剂量为0.1ml，0.15ml，0.2ml，0.5ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，10.0ml，20.0ml，30.0ml，40.0ml，50.0ml，60.0ml，70.0ml，80.0ml，90.0ml，100.0ml，150ml，200ml，250.00ml，以及上述任意两点之间的范围。
8.根据权利要求7所述的用于治疗癌症的组合物，其中
所述病毒在组合物中浓度为0.05IU/ml至40.0IU/ml。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的用于治疗癌症的组合物，所述组合物还包含生理上可接受的缓冲液。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的用于治疗癌症的组合物，可被制备成为固体剂型或液态剂型；
其中所述的液态剂型选自：注射溶液、悬浮液、油膏、乳剂、滴剂、糖浆剂、凝胶剂；
其中所述的固体剂型选自：干粉或冻干粉、片剂、胶囊剂、栓剂、颗粒剂、糖衣锭。
11.权利要求1至10中任一项所述的用于治疗癌症的组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症选自：
口咽癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、肠癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、肺癌、气管癌、胸腺癌、骨癌、关节癌、黑色素瘤、间皮癌、乳癌、子宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、脑癌、脊髓瘤、血癌；
唇恶性肿瘤、舌根恶性肿瘤、牙龈恶性肿瘤、口底恶性肿瘤、腭恶性肿瘤、腮腺恶性肿瘤、扁桃体恶性肿瘤、口咽恶性肿瘤、鼻咽恶性肿瘤、梨状窦恶性肿瘤、咽下部恶性肿瘤；
食管恶性肿瘤、胃恶性肿瘤、小肠恶性肿瘤、结肠恶性肿瘤、直肠乙状结肠连接处恶性肿瘤、直肠恶性肿瘤、肛门和肛管恶性肿瘤、肝和肝内胆管恶性肿瘤、胆囊恶性肿瘤、胰恶性肿瘤；
鼻腔和中耳恶性肿瘤、鼻旁窦恶性肿瘤、喉恶性肿瘤、气管恶性肿瘤、支气管和肺恶性肿瘤、胸腺恶性肿瘤、心脏、纵隔和胸膜恶性肿瘤；
骨和关节软骨恶性肿瘤；
皮肤恶性黑素瘤；
间皮和软组织的恶性肿瘤；
乳房恶性肿瘤；
外生殖器恶性肿瘤、阴道恶性肿瘤、子宫颈恶性肿瘤、子宫体恶性肿瘤、卵巢恶性肿瘤、胎盘恶性肿瘤；
阴茎恶性肿瘤、前列腺恶性肿瘤、睾丸恶性肿瘤；
泌尿道恶性肿瘤；
眼和附器恶性肿瘤；
脑膜恶性肿瘤、脑部恶性肿瘤；
脊髓、颅神经和中枢神经系统恶性肿瘤；
内分泌腺恶性肿瘤；
霍奇金病、滤泡性结节性非霍奇金淋巴瘤、弥漫性非霍奇金淋巴瘤、周边和皮肤T细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、恶性浆细胞肿瘤、淋巴样白血病、髓系白血病、单核细胞白血病；
优选地，所述癌症选自肺癌、乳癌、甲状腺癌、肾癌、胃腺癌、肝癌、黑色素瘤、舌癌、直肠癌、子宫内膜癌和卵巢癌，更优选地，其中所述癌症是转移性肿瘤。
12.根据权利要求11所述的用途，其中，
当权利要求1-10中任一项所述的用于治疗癌症的组合物含有病毒时，所述癌症不是由所述病毒引起的。
13.权利要求1至10中任一项所述的用于治疗癌症的组合物与抗肿瘤治疗方案组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途，优选地，所述抗肿瘤治疗方案选自化疗、放疗、靶向治疗、免疫治疗，所述化疗选自烷化剂、抗代谢抗肿瘤药、抗肿瘤抗生素、抗肿瘤植物药、铂化合物类抗肿瘤药、激素平衡类抗肿瘤药、杂类抗肿瘤药；所述靶向治疗选自利妥昔单抗、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、伊马替尼、狄诺塞麦、西妥昔单抗、尼洛替尼和索拉非尼，所述免疫治疗选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂和CTLA4抑制剂的免疫治疗类抗肿瘤药；更优选地，所述烷化剂选自环磷酰胺、异环磷酰胺和塞替派，所述抗代谢抗肿瘤药选自甲氨蝶呤、巯嘌呤、氟脲嘧啶和阿糖胞苷，所述抗肿瘤抗生素选自平阳霉素、柔红霉素、放线菌素D、丝裂霉素、多柔比星和米托恩醌，所述抗肿瘤植物药选自长春新碱、依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇和多西他赛，所述铂化合物类抗肿瘤药选自顺铂、卡铂和奥沙利铂，所述激素平衡类抗肿瘤药选自亮丙瑞林、他莫昔芬、氟他胺和福美司坦，所述杂类抗肿瘤药选自三氧化二砷。
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