BR112018067461B1 - Uso de uma composição para a manufatura de um medicamento para o tratamento de câncer - Google Patents

Abstract

?COMPOSIÇÃO PARA USO NO TRATAMENTO DE CÂNCER, USO DA COMPOSIÇÃO, MÉTODO PARA O TRATAMENTO DO CÂNCER E KIT PARA USO NO TRATAMENTO DE CÂNCER? A presente invenção refere-se a uma composição compreendendo poli I: C para tratamento de câncer. Mais particularmente, a presente invenção divulga uma composição para tratamento de câncer compreendendo ácido polinossínico-policitidílico (poli I:C), um antibiótico ou composto poliamina, um íon positivo e, opcionalmente, um vírus, e a sua utilização na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se ao campo médico, especialmente, no tratamento do câncer. Mais particularmente, este pedido refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo ácido poliinosínico:policitidílico (poli I:C), antibiótico ou composto poliamina, íon positivo, e, opcionalmente, um vírus inativado ou atenuado e o seu uso no tratamento de câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] O câncer, geralmente, se refere a um tumor maligno. Sob a influência de fatores carcinogênicos, algumas células no tecidos perdem sua regulação normal de crescimento a nível genético, o que leva à proliferação e diferenciação anormais, eventualmente, se tornando um tumor. Em comparação com um tumor benigno, um tumor maligno cresce mais rápido, é invasivo, propenso a hemorragias, necrose, ulceração e, muitas vezes, metástase.

[003] Existem mais de 100 diferentes tipos conhecidos de câncer que afetam os seres humanos. Os cinco locais mais comuns de câncer são pulmão, próstata, colorretal, estômago e fígado para homens e, câncer de mama, colorretal, pulmão, colo do útero e estômago para mulheres. Jie He, Wanqing Chen e seus colaboradores publicaram um artigo chamado Cancer Statistics in China, 2015 no Cancer Journal for Clinicians. Esta pesquisa analisou e previu a incidência e taxa de mortalidade de tumor maligno na China no ano de 2015. Os dados mostraram que a China esperava 4.292.000 novos casos de tumor maligno em 2015. Os cinco tipos de câncer mais comuns são câncer de pulmão e brônquios, câncer de estômago, câncer de fígado, câncer de esôfago e câncer colorretal para homens e, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de estômago, câncer colorretal e câncer de esôfago para mulheres. O câncer de pulmão é um dos tumores malignos mais comuns na China, sendo a maior taxa de mortalidade de tumores malignos.

[004] Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), existem cerca de 14 milhões de novos casos de câncer e 8,2 milhões de pessoas morrem de câncer a cada ano, que é cerca de 13% de todas as mortes no mundo. O câncer é a principal causa de morte nos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Espera-se que a preocupação cresça em todo o mundo com a estimativa de novos casos de câncer aumentando em cerca de 70% nas próximas duas décadas (OMS). Portanto, a tendência crescente da incidência do câncer forçou a humanidade a trabalhar mais na prevenção e nos tratamentos do câncer.

[005] Atualmente, os principais métodos para o tratamento do câncer incluem o tratamento cirúrgico, a quimioterapia, que utiliza medicamentos para eliminar células cancerosas, a radioterapia, que utiliza a radiação de alta energia para matar as células cancerosas, a terapia alvo, que utiliza substâncias direcionadas para células cancerosas específicas no tratamento da terapia alvo, e imunoterapia, que utiliza o sistema imunológico para tratar o câncer.

[006] Além disso, a aplicação de vírus no tratamento do câncer tem sido gradualmente reconhecida. Em 1912, DePace descobriu a regressão do tumor cervical após inoculação da vacina antirrábica a uma paciente do sexo feminino que foi mordida por um cachorro. Desde então, têm existido vários relatórios sobre o uso de vírus para o tratamento de câncer. Especialmente entre 1950 e 1960, o tratamento do câncer com vírus passou por um rápido desenvolvimento. Na década de 1970, o desenvolvimento do tratamento com vírus diminuiu devido à preocupação com a patogenicidade do vírus, mas o ritmo foi retomado na década de 1980.

[007] Guoqian Kuang e seus colaboradores descreveram o mecanismo potencial dos vírus anticancerígenos, bem como a seleção e o método na aplicação clínica (Current Status and Prospect of Cancer Virotherapy Clinical Studies, Journal of Guangxi Medical University, 1995 Vol. 12: 617-619). Atualmente, entende-se que o mecanismo dos vírus anticâncer envolve ação oncolítica direta, melhorando o sistema imunológico e estimulando a liberação de citocinas. Acredita-se, geralmente, que o vírus usado no tratamento do câncer deveria ser não-tumorigênico e com boa antigenicidade. Os vírus relatados para o tratamento antineoplásico incluem: NDV, vírus da caxumba, vírus Vaccinia, vírus Sendai, HSV e parvovírus (KENNEY, S. et al., Viruses as oncolytic agents: a new age for “therapeutic” viruses. J Nati Cancer Inst, 1994,86:1185). Lorence e seus colaboadores encontraram em estudos em animais que o vírus vivo mostrou um efeito anticancerígeno significativamente melhor comparado ao vírus inativado (Complete regression of human neuroblastoma xenografts in athymic mice after local Newcastle disease virus therapy. J Nati Cancer Inst, 1994, 86:1228).

[008] Alguns vírus podem eliminar, especificamente, as células tumorais no tratamento do câncer e são conhecidos como vírus oncolíticos. Os vírus oncolíticos podem replicar dentro das células cancerosas, resultando em efeitos citopáticos e respostas imunes que levam a morte das células tumorais, enquanto mostram um mínimo efeito sobre as células e tecidos normais (Jiang Zhong, Oncolytic Virus and Tumor Treatment, Foreign Medicine (Microbiology Section), 2004 Vol. 27 Iss. No. 6).

[009] Atualmente, existe um número significativo de relatórios sobre os vírus oncolíticos no tratamento de câncer. Por exemplo, a publicação internacional WO 2009/016433 descreve a utilização do rabdovírus recombinante não-VSV (tal como, o vírus Maraba, o vírus Carajás, o vírus Muir Springs e/ou vírus Bahia grande) para curar a doença hiperproliferativa (por exemplo, câncer). A patente norte-americana US 2010/0297072 A1 divulga uma composição para o tratamento de câncer compreendendo um vírus oncolítico (paramixovírus, reovírus, herpesvírus, adenovírus e vírus Semliki Forest) e um imunoestimulante (agente bloqueador CTLA-4, IL-21, anti-CD40 ou fator estimulante de colônia de granulócito-macrófago (GM- CSF)) e a administração desta composição em fibrossarcoma MCA205 ou murinos portadores de tumor com melanoma B16 inibiram, significativamente, o crescimento tumoral. O vírus da raiva pertence ao gênero Lyssavirus da família Rhabdoviridae. O vírus da raiva apresenta uma distinta forma de “projétil”, de nucleocapsídeo helicoidalmente simétrico com um envelope e contém RNA de cadeia simples dentro dele. O vírus da raiva é o patógeno da doença da raiva. A imunização antirrábica é um dos exemplos de vacinação precoce bem-sucedido. Na década de 1880, Pasteur foi pioneiro no uso de vacina. As precoces vacinas contra a raiva foram derivadas do tecido nervoso, posteriormente, foram desenvolvidas vacinas cultivadas em ovo embrionados, vacinas de cultura celular e vacinas de subunidade. Vacinas engenheiradas geneticamente estão em desenvolvimento (SHOUNAN, Tan; FENGYU, Zhang. Studies on Rabies and Human Rabies Vaccine. Medical Information; 2011 Vol. 24:2841-2842). Atualmente, a maioria das vacinas antirrábicas para uso humano são produzidas por inoculação de cepas virais fixadas (por exemplo, cepa CTN-1V, cepa aG) em células Vero, cultivando para obter o vírus em um líquido, seguido por inativação, concentração e purificação e, adicionalmente, liofilização após a adição de uma quantidade apropriada de gelatina ou sacarose como um agente protetor (YUHUI, Zhang. The Establishment of Rabies Vaccine Purification Technology. Chinese Journal of Biologicals 1999 Vol. 12 Iss. No. 4: 231-232).

[0010] Jieguang Sun e seus colaboradores descobriram que, através da utilização da vacina da raiva para o uso humano como o único ingrediente ativo na dose diária de 2,5 IU a 10 UI via injeção intramuscular, os efeitos adversos do tratamento de tumores malignos foram melhorados em um modelo tumoral animal, e este também melhora fagocitose por macrófagos (ver patente chinesa CN 100341571C). O documento de patente russo RU 2414238C2 também reporta um método para aumentar a resistência ao câncer, em que a vacina da raiva aumenta a resistência antitumoral do organismo ao composto 9,10-dimetil-1,2-benzantraceno.

[0011] Os vírus têm grande potencial no tratamento do câncer. Fármacos anticancerígenos com base em vírus mais eficazes e seguros são necessários nesta área.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0012] A presente invenção proporciona uma composição para utilização no tratamento do câncer, compreendendo ou consistindo: a) ácido poliinosínico:policitidílico (poli I:C), b) pelo menos um antibiótico ou pelo menos um composto poliamina, e c) pelo menos um íon positivo.

[0013] Num outro aspecto, a presente invenção revela uma composição para utilização no tratamento de câncer, compreendendo ou consistindo: a) ácido poliriboinosínico:poliribocitidílico (poli I:C), b) pelo menos um antibiótico ou pelo menos um composto poliamina, c) pelo menos um íon positivo e d) opcionalmente, um vírus.

[0014] Numa forma de realização, a composição compreende: a) ácido poliriboinosínico:poliribocitidílico (poli I:C), b) pelo menos um antibiótico ou pelo menos um composto poliamina, c) pelo menos um íon positivo e d) um vírus.

[0015] Em algumas formas de realização, o vírus é inativado, atenuado ou incapaz de replicação em um indivíduo humano. Em algumas formas de realização particulares, o vírus é inativado.

[0016] Em algumas formas de realização, o vírus é selecionado a partir do grupo que consiste Rhabdoviridae, Adenoviridae, Arenaviridae, Astroviridae, Bunyaviridae, Caliciviridae, Flaviviridae, vírus da Hepatite Delta, Hepeviridae, Mononegavirales, Nidovirales, Picornaviridae, Orthomyxoviridae, Papillomaviridae, Parvoviridae, Polyomaviridae,Poxviridae, Reoviridae, Retroviridae e Togaviridae. Em algumas formas de realização particulares, o vírus pertence ao gênero Lyssavirus da família Rhabdoviridae. Em formas de realização mais particulares, o vírus é um vírus da raiva.

[0017] Em algumas formas de realização, o vírus da raiva é um vírus inativado natural (por exemplo, antígeno da raiva natural inativado de células renais de hamster (HKC-ICRA)) ou vírus purificado inativado (por exemplo, antígeno da raiva purificado inativado de células renais de hamster (HKC- IPRA)).

[0018] Em algumas formas de realização, o vírus da raiva adequado para utilização na presente invenção está numa vacina antirrábica incluindo, mas não se limitando a vacina de polipeptídeo e geneticamente modificada, inativada, de subunidade. Em particular, a vacina antirrábica adequada para utilização na presente invenção é uma vacina de células diploides humanas (HDCV) ou vacina antirrábica purificada inativada de células renais de hamster (HKC-IPRV) ou vacina antirrábica natural inativada de células renais de hamster (HKC-ICRV) ou vacina antirrábica purificada de células Vero (PVRV) ou vacina antirrábica purificada de células embrionárias de galinha (PCEC) ou vacina antirrábica purificada de células embrionárias de pato (PDEV).

[0019] Em algumas formas de realização, os poli I:C são heterogéneos para o peso molecular, em que o peso molecular é igual a ou superior a 66.000 Daltons. O valor de 66.000 Daltons corresponde ao tamanho molecular da unidade de sedimentação de 6.4 (Svedbergs). Em algumas formas de realização, o peso molecular do poli I:C é de 66.000 a 1.200.000 Daltons (equivalente a 6,4 a 24,0 unidades de sedimentação). Em algumas outras formas de realização, o peso molecular do poli I:C é igual a ou superior a 150.000 Daltons. Em algumas outras modalidades, o peso molecular do poli I:C é de 100.000 a 200.000 Daltons, ou de 300.000 a 4,000.000 Daltons, ou de 500.000 a 1.000.000 Daltons, ou de 1.000.000 a 1.500.000 Daltons, ou de 1.500.000 a 2.000.000 Daltons, ou de 2.000.000 a 2.500.000 Daltons, ou de 2.500.000 a 3.000.000 Daltons, ou de 3.000.000 a 3.500.000 Daltons, ou de 3.500.000 a 4.000.000 Daltons, ou de 4.000.000 a 4.500.000 Daltons, ou de 4.500.000 a 5.000.000 Daltons.

[0020] Em algumas formas de realização particulares, o antibiótico é selecionado a partir do grupo que consiste tacrolamicina, antraciclina, sulfato de butirina, gentamicina, higromicina, amicacina, dideoxi-canamicina, nebramicina, Ã-lactama, neomicina, puromicina, estreptomicina, estreptozocina e qualquer combinação dos mesmos. O composto de poliamina é selecionado a partir do grupo que consiste sal de arginina, espermidina, N- (3-aminopropil), N-(3-aminopropil)-1,4-butanodiamina, espermina, OS- dimetilaminotofosfato, poli-lisina, aminoglicosídeo e qualquer combinação destes.

[0021] Em algumas formas de realização particulares, o antibiótico é canamicina. Em algumas formas de realização, a concentração do antibiótico na composição é de 10 unidades/mL a 100.000 unidades/mL, preferencialmente, de 100 unidades/mL a 10.000 unidades/mL, mais preferivelmente, de 500 unidades/mL a 5.000 unidades/mL.

[0022] Em algumas concretizações, o íon positivo é um cátion e é selecionado a partir do grupo consistido de cálcio, cádmio, lítio, magnésio, cério, césio, cromo, cobalto, deutério, gálio, iodo, ferro, zinco e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades particulares, o íon positivo é o cálcio. O íon positivo pode estar na forma de qualquer sal ou complexo orgânico adequado incluindo, mas não limitado ao cloreto, fluoreto, hidróxido, fosfato ou sulfato. Por exemplo, quando o íon positivo for cálcio, o íon cálcio pode estar na forma de carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, fluoreto de cálcio, hidróxido de cálcio, fosfato de cálcio ou sulfato de cálcio. Em algumas formas de realização, a concentração do íon positivo na composição é de 0,01 μmol a 10 mmol/ml, preferencialmente, de 0,02 μmol a 5 mmol/ml, mais preferencialmente, de 0,1 μmol a 1 mmol/ml, mais preferivelmente ainda, de 0,1 }imol a 100 }imol/ml.

[0023] Em algumas formas de realização, a razão entre o vírus e o poli I:C é selecionada a partir do grupo que consiste: 1 IU/50 }ig, 1 IU/60 }ig, 1 UI/70 }ig, 1 UI/80 }ig, 1 UI/90 }ig, 1 UI/100 }ig, 1 UI/125 }ig, 1 UI/200 }ig, 1 UI/250 μg, 1 UI/300 μg, 1 UI/350 μg, 1 UI/400 μg, 1 UI/450 μg, 1 UI/500 μg, 1 UI/550 μg, 1 UI/600 μg, 1 UI/700 μg, 1 UI/800 μg, 1 UI/1.000 μg, 1 UI/1.500 μg, 1 UI/2.000 μg, 1 UI/2.500 μg, 1 UI 3.000 μg, 1 UI/4.000 μg, 1 UI/5.000 μg, 1 UI/6.000 μg, 1 UI/7.000 μg, 1 UI/8.000 μg, 1 UI/9.000 μg, 1 UI/10.000 μg e um intervalo entre quaisquer duas das razões acima. Em particular, a razão entre o referido vírus e o referido poli I:C é de 1 UI/500 }ig.

[0024] Em algumas formas de realização, a quantidade de poli I:C na composição é de 250 μg a 5.000 μg por dose unitária; por exemplo, a quantidade de poli I:C é selecionada a partir do grupo que consiste 250 }ig, 500 }ig, 1.000 }ig, 1.500 }ig, 2.000 }ig, 3.000 }ig, 4.000 }ig, 5.000 }ig por dose unitária e um intervalo entre quaisquer montantes acima.

[0025] Em algumas formas de realização particulares, a quantidade de poli I:C na composição é de 500 μg a 4.000 μg por dose unitária ou de 1.000 μg a 3.000 μg por dose unitária ou de 1.000 μg a 2.500 μg por dose unitária.

[0026] Quando a composição da presente invenção for aplicada a adultos, a quantidade de poli I:C na composição é selecionada a partir do grupo que consiste 500 μg, 1.000 μg, 1.500 μg, 2.000 μg por dose unitária e uma faixa entre quaisquer dois dos valores anteriores. Quando a composição da presente invenção for aplicada a menores (por exemplo, crianças), a quantidade de poli I:C na composição é selecionada a partir do grupo consistindo 250 μg, 500 μg, 1.000 μg, 1.250 μg por dose unitária e uma gama entre quaisquer duas quantidades acima.

[0027] Em algumas formas de realização, a dose unitária na presente invenção é preparada para um volume que é selecionado a partir do grupo consistido de 0,1 ml, 0,15 ml, 0,2 ml, 0,5 ml, 1,0 ml, 1,5 ml, 2,0 ml, 2,5 ml, 3,0 ml, 4,0 ml, 5,0 ml, 10 ml, 20 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml, 60 ml, 70 ml, 80 ml, 90 ml, 100 ml, 150 ml, 200 ml, 250 ml, e um intervalo entre quaisquer dois dos volumes supracitados. Será entendido pelo técnico no assunto que um volume de administração que for demasiadamente grande ou pequeno levará a inconveniência na prática clínica. Portanto, quando as composições da presente invenção forem administradas a um indivíduo humano, a dose unitária será, de preferência, na faixa de 0,5 ml a 1,0 ml para injeção, preferencialmente, na faixa de 0,15 ml a 0,2 ml para administração por via intranasal, preferivelmente, num intervalo de 30 ml a 100 ml para administração intravenosa. Entende-se que, embora a dose unitária seja expressa em volume, isto não significa que a composição da presente invenção possa estar apenas numa forma de dosagem líquida. Quando a composição da presente invenção for preparada numa forma de dosagem sólida (pó seco ou liofilizado), o volume por dose unitária deve referir-se ao volume da solução após reconstituição do pó seco ou liofilizado.

[0028] Em algumas formas de realização, a quantidade de vírus na composição é de 0,1 UI a 100 UI por unidade de dose ou a partir de 0,2 a 100 UI por unidade de dosagem. Em particular, a quantidade do vírus na composição é selecionada a partir do grupo que compreende 0,2 IU, 0,5 IU, 1,0 IU, 1,5 IU, 2,0 IU, 2,5 IU, 3,0 IU, 3,5 IU, 4,0 IU, 5,0 IU, 6,0 IU , 7,0 UI, 8,0 UI, 9,0 UI, 10 UI, 15 UI, 20 UI, 30 UI, 40 UI, 50 UI, 60 UI, 70 UI, 80 UI, 90 UI, 100 UI por unidade de dose e uma faixa entre quaisquer dois dos valores acima. Em algumas formas de realização particulares, a quantidade do vírus na composição é de 0,5 IU a 3,0 IU por dose unitária; preferencialmente, de 1,0 IU a 2,5 UI por dose unitária. Em algumas formas de realização particulares, quando aplicadas em adultos, a quantidade do vírus na composição é de 0,5 IU a 10 IU por dose unitária. Em outras formas de realização particulares, quando aplicadas em menores, a quantidade do vírus na composição é de 0,5 IU a 5,0 IU por dose unitária.

[0029] Em algumas formas de realização, a concentração do vírus na composição é de 0,05 IU/ml a 40 IU/ml; preferencialmente, selecionado a partir do grupo consistido de 0,05 IU/ml, 0,1 IU/ml, 0,15 IU/ml, 0,2 IU/ml, 0,5 IU/ml, 1,0 IU/ml, 2,0 IU/ml, 3,0 IU/ml, 4,0 IU/ml, 5,0 IU/ml, 10 IU/ml, 15 IU/ml, 20 IU/ml, 25 IU/ml, 30 IU/ml, 35 IU/ml e 40 IU/ml.

[0030] Em algumas formas de realização, a composição da presente invenção compreende ainda pelo menos um material auxiliar como excipiente e estabilizador. O material auxiliar é selecionado a partir do grupo que consiste gelatina, sacarose, açúcar, lactose, maltose, trealose, glicose, dextrano de baixo peso molecular, sorbitol, polissorbato 20, manitol polietileno glicol, albumina de soro humano, albumina recombinante, octoato de sódio, ureia, hidróxido de alumínio, vermelho de fenol, cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio, tiossulfato de sódio, dihidrogenofosfato de potássio, ácido ascórbico, triclorometano, fenol e timerosal e qualquer combinação destes.

[0031] Em algumas formas de realização, a composição da presente invenção compreende ainda pelo menos um tampão fisiologicamente aceitável que é selecionado a partir do grupo que consiste acetato, tris (hidroximetil) aminometano (tris), bicarbonato, carbonato, tampão fosfato e qualquer combinação destes. O pH do tampão ou da composição é selecionado a partir do grupo consistindo 6,50, 6,60, 6,70, 6,80, 6,90, 7,00, 7,05, 7,10, 7,15, 7,20, 7,25, 7,30, 7,35, 7,40, 7,45, 7,50, 7,55, 7,60, 7,65, 7,70, 7,75, 7,80, 7,85, 7,90, 7,95, 8,00 e um intervalo entre quaisquer dois dos valores de pH acima. Numa forma de realização, o pH da composição está entre pH 6,5 e pH 8,0. Em algumas formas de realização particulares, o tampão é PBS e o pH do tampão ou da composição é 7,3 a 7,5.

[0032] A composição da presente invenção pode ser preparada numa forma de dosagem sólida ou líquida. A composição da presente invenção pode ser preparada na forma selecionada a partir do grupo que consiste um pó seco, uma solução líquida ou uma forma de dosagem líquida (por exemplo, solução injetável, solução salina aquosa ou fisiológica, suspensão, pomada, gotícula, emulsão, gel, xarope ou serofluido), comprimido, comprimido revestido, microcápsula, supositório, granulado, comprimido revestido com açúcar e cápsula. O método de preparação é, geralmente, descrito em Vaccine 4th Edition (STANLEY, A Plotkin et al., W. B. Saunders Company 2003). De um modo preferido, a composição da presente invenção é preparada na forma de uma solução injetável.

[0033] Noutro aspecto, a presente invenção provê uma composição para utilização no tratamento de câncer, que está na forma de um pó seco ou pó liofilizado.

[0034] Outro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização da combinação de poli I:C, pelo menos um antibiótico (ou, pelo menos, um composto de poliamina) e pelo menos um íon positivo na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0035] Em outro aspecto, a presente invenção trata da utilização da combinação compreendendo um adjuvante de poli I:C divulgado na patente chinesa CN 103405762A na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0036] Num outro aspecto, a presente invenção fornece a utilização da combinação de poli I:C, pelo menos um antibiótico (ou, pelo menos, um composto de poliamina), pelo menos um íon positivo e um vírus na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0037] Em outro aspecto, a presente descrição fornece o uso da composição para o tratamento do câncer.

[0038] Mais particularmente, a presente invenção proporciona a utilização da composição na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0039] Em algumas modalidades particulares, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste câncer de orofaringe, carcinoma de nasofaringe, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cólon, câncer de fígado, colangiocarcinomas, câncer de vesícula biliar, câncer de pâncreas, câncer de pulmão, câncer de traqueia, timoma, câncer de ossos, câncer de articulação, melanoma, câncer mesotelial, câncer de mama, câncer de colo do útero, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de cérebro, mieloma, leucemia, neoplasia maligna de lábio, neoplasia maligna de raiz da língua, neoplasia maligna de gengiva, neoplasia maligna de boca, neoplasia maligna de palato, neoplasia maligna da parótida, neoplasia maligna de amígdala, neoplasia maligna de orofaringe, neoplasia maligna de nasofaringe, neoplasia maligna de seio piriforme, neoplasia maligna de hipofaringe, neoplasia maligna de esôfago, neoplasia maligna gástrica, neoplasia maligna de intestino delgado, neoplasia maligna de cólon, neoplasia maligna da junção retossigmóide, neoplasia maligna retal, neoplasia maligna anal e do canal anal, neoplasia maligna de fígado e do duto biliar intra-hepático, neoplasia maligna da vesícula biliar, neoplasia maligna pancreática, neoplasia maligna da cavidade nasal e ouvido médio, neoplasia maligna do seio nasal, neoplasia maligna de laringe, neoplasia maligna de traqueia, neoplasia maligna brônquica e pulmonar, neoplasia maligna de timo, neoplasia maligna do coração, do mediastino e da pleura, neoplasia maligna do osso e cartilagem articular, melanoma maligno de pele, neoplasia maligna mesotelial e de tecidos moles, neoplasia maligna da mama, neoplasia maligna genital, neoplasia maligna vaginal, neoplasia maligna do colo do útero, neoplasia maligna de útero, neoplasia maligna de ovário, neoplasia maligna de placenta, neoplasia maligna peniana, neoplasia maligna de próstata, neoplasia maligna testicular, neoplasia maligna do trato urinário, neoplasia maligna de apêndice e de olho, neoplasia maligna das meninges, neoplasia maligna do cérebro, neoplasia maligna da medula espinhal, do nervo craniano e do sistema nervoso central, neoplasia maligna da glândula endócrina, Doença de Hodgkin, linfoma nodular folicular não-Hodgkin, linfoma não-Hodgkin difuso, linfoma de células T periférico e cutâneo, mieloma múltiplo, tumor maligno de células plasmáticas, leucemia linfoide, leucemia mieloide, leucemia monocítica.

[0040] [041] Em algumas formas de realização preferidas, a composição da presente invenção é utilizada no tratamento de câncer que é selecionado a partir do grupo consistido de câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de tireoide, câncer de rim, adenocarcinoma gástrico, câncer de fígado, melanoma, câncer de língua, câncer retal, câncer endometrial e câncer de ovário.

[0041] Numa outra forma de realização preferida, a composição da presente invenção é utilizada no tratamento de tumor metastático.

[0042] Em outras realizações, a presente invenção provê a utilização da composição em combinação com um regime de tratamento antitumoral na fabricação de um medicamento para tratamento do câncer, preferencialmente, o referido regime de tratamento antitumoral é selecionado a partir do grupo que compreende quimioterapia, radioterapia, terapia direcionada e imunoterapia, onde o agente terapêutico utilizado na referida quimioterapia é selecionado a partir do grupo constituído por agente alquilante, agente antineoplásico anti-metabólico, antibiótico antitumoral, antitumoral botânico, agente antineoplásico composto de platina, agente antineoplásico de equilíbrio hormonal e agente antineoplásico variado, em que o agente terapêutico utilizado na referida terapia dirigida é selecionado a partir do grupo que consiste rituximabe, bevacizumabe, trastuzumabe, imatinibe, dinoxetina, cetuximabe, nilotinibe e sorafenibe, em que o agente terapêutico utilizado na referida imunoterapia é selecionado a partir do grupo consistido de inibidor de PD-1, inibidor de PD-L1 e inibidor de CTLA4, mais preferencialmente, o referido agente alquilante é selecionado a partir do grupo que consiste ciclofosfamida, ifosfamida e tiotepa, o referido agente antineoplásico anti-metabólico é selecionado a partir do grupo que consiste metotrexato, mercaptopurina, fluoruracil e citarabina, o referido antibiótico antitumoral é selecionado a partir do grupo consistindo em bleomicina, daunorrubicina, actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina e mitoxantrona, o referido antitumoral botânico 0 selecionado a partir do grupo consistido de vincristina, etoposido, teniposido, paclitaxel e docetaxel, o referido agente antineoplásico composto de platina 0 selecionado a partir do grupo que compreende cisplatina, carboplatina e oxaliplatina, o dito agente antineoplásico de equilíbrio hormonal 0 selecionado a partir do grupo que consiste leuprorrelina, tamoxifeno, flutamida e formestano, o referido agente antineoplásico variado 0 trióxido de arsênio.

[0043] Alternativamente, a presente invenção inclui o uso de uma composição aqui divulgada na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer, em que o medicamento 0 para uso em combinação com um regime de tratamento antitumoral. De preferência, o referido regime de tratamento antitumoral 0 selecionado a partir do grupo consistido de quimioterapia, radioterapia, terapia direcionada e imunoterapia, onde o agente terapêutico utilizado na referida quimioterapia 0 selecionado a partir do grupo constituído por agente alquilante, agente antineoplásico anti- metabólico, antibiótico antitumoral, antitumoral botânico, agente antineoplásico composto de platina, agente antineoplásico de equilíbrio hormonal e agente antineoplásico variado, em que o agente terapêutico utilizado na referida terapia dirigida 0 selecionado a partir do grupo que consiste rituximabe, bevacizumabe, trastuzumabe, imatinibe, dinoxetina, cetuximabe, nilotinibe e sorafenibe, em que o agente terapêutico utilizado na referida imunoterapia 0 selecionado a partir do grupo consistido de inibidor de PD-1, inibidor de PD-L1 e inibidor de CTLA4, mais preferencialmente, o referido agente alquilante 0 selecionado a partir do grupo que consiste ciclofosfamida, ifosfamida e tiotepa, o referido agente antineopl^sico anti- metabólico 0 selecionado a partir do grupo que consiste metotrexato, mercaptopurina, fluoruracil e citarabina, o referido antibiótico antitumoral 0 selecionado a partir do grupo consistindo em bleomicina, daunorrubicina, actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina e mitoxantrona, o referido antitumoral botânico é selecionado a partir do grupo consistido de vincristina, etoposido, teniposido, paclitaxel e docetaxel, o referido agente antineoplásico composto de platina é selecionado a partir do grupo que compreende cisplatina, carboplatina e oxaliplatina, o dito agente antineoplásico de equilíbrio hormonal selecionado a partir do grupo que consiste leuprorrelina, tamoxifeno, flutamida e formestano, o referido agente antineoplásico variado é trióxido de arsênio.

[0044] A presente invenção também inclui a utilização de uma composição aqui divulgada na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer e a utilização de pelo menos um outro agente antitumoral na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer. A presente invenção também inclui o uso de uma composição, aqui revelada, e pelo menos um outro agente antitumoral na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

[0045] De preferência, o composto antitumoral é selecionado a partir do grupo que consiste um agente quimioterápico, um agente terapêutico direcionado e um agente imunoterapêutico.

[0046] De preferência, o agente quimioterápico é selecionado a partir do grupo que consiste um agente alquilante, agente antineoplásico anti- metabólico, antibiótico antitumoral, antitumoral botânico, agente antineoplásico composto de platina, agente antineoplásico de equilíbrio hormonal e agente antineoplásico variado.

[0047] Preferencialmente, o referido agente terapêutico direcionado é selecionado a partir do grupo que consiste rituximabe, bevacizumabe, trastuzumabe, imatinibe, dinoxetina, cetuximabe, nilotinibe e sorafenibe.

[0048] De preferência, o dito o agente terapêutico imunológico é selecionado a partir do grupo que consiste um inibidor de PD-1, inibidor de PD-L1 e inibidor de CTLA4.

[0049] Preferivelmente, o referido agente alquilante é selecionado a partir do grupo que consiste em ciclofosfamida, ifosfamida e tiotepa.

[0050] Em especial, o referido agente antineoplásico anti-metabólico é selecionado a partir do grupo consistido de metotrexato, mercaptopurina, fluorouracil e citarabina.

[0051] De um modo preferido, o referido antibiótico antitumoral é selecionado a partir do grupo consistido de bleomicina, daunorrubicina, actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina e mitoxantrona.

[0052] De preferência, o referido botánico antitumoral é selecionado a partir do grupo que consiste uma vincristina, etoposido, teniposido, paclitaxel e docetaxel.

[0053] De um modo preferido, o referido agente antineoplásico composto de platina é selecionado a partir do grupo consistido de cisplatina, carboplatina e oxaliplatina.

[0054] De um modo preferido, o referido agente antineoplásico de equilíbrio hormonal selecionado a partir do grupo consistindo de leuprorrelina, tamoxifeno, flutamida e formestano.

[0055] De preferência, o referido agente antineoplásico variado é o trióxido de arsênio.

[0056] No contexto da presente invenção, quando a composição da presente invenção compreender um vírus, o câncer a ser tratado não é causado pelo vírus da composição. Em algumas formas de realização particulares, o câncer a ser tratado não é causado pelo vírus da raiva.

[0057] Noutro aspecto, a presente invenção proporciona um método para o tratamento de câncer, compreendendo uma etapa de administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição a um indivíduo, por exemplo, um humano.

[0058] Em algumas realizações, a administração da composição é sistêmica ou localizada. Em algumas formas de realização, a composição é administrada via injeção parenteral (por exemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, intradérmica, intratumoral, peritumoral). Em algumas outras formas de realização, a composição é administrada de forma intradérmica através de uma via diferente da injeção (por exemplo, uma via que não destrua a barreira de células epiteliais através de meios mecânicos). Em outras formas de realização, a composição é administrada via retal, vaginal, nasal (por exemplo, intranasal), oral, bucal, sublingual, respiratória, ocular (por exemplo intraocular) ou via transdérmica.

[0059] Em particular, os exemplos de via de administração incluem intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, transdérmica, intradérmica, intranasal, intraocular, oral, sublingual, intratumoral e peritumoral.

[0060] Em algumas formas de realização, a composição da presente invenção é administrada a um indivíduo humano com base na frequência selecionada a partir do grupo que consiste uma vez por mês, 2 vezes por mês, 3 vezes por mês, 4 vezes por mês, 5 vezes por mês, 6 vezes por mês, 7 vezes por mês, 8 vezes por mês, uma vez por semana, 2 vezes por semana, 3 vezes por semana, 4 vezes por semana, 5 vezes por semana, 6 vezes por semana, uma vez a cada três dias, 2 vezes a cada três dias, 3 vezes a cada três dias, uma vez a cada dois dias, 2 vezes a cada dois dias, uma vez por dia, duas vezes por dia.

[0061] Em particular, o método compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição, de acordo com a invenção, a um humano através de injeção intramuscular numa frequência de 2 vezes a cada três dias ou administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição, de acordo com a invenção, a um humano via injeção intramuscular com uma frequência de uma vez por semana.

[0062] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um kit farmacêutico ou um kit para uso em implementar o referido método de tratamento que compreende pelo menos um recipiente, em que cada um do dito recipiente compreende, independentemente, a composição da presente invenção. A composição e/ou a quantidade da composição nos diferentes recipientes podem ser iguais ou diferentes.

[0063] Em algumas formas de realização, o kit da presente invenção compreende pelo menos um recipiente contendo 2,0 UI/mL de vírus da raiva inativado e 1.000 μg/ml de poli I:C.

[0064] Em algumas formas de realização, a composição da presente invenção é formulada em líquido estéril e está contida num recipiente estéril (por exemplo, tubo, frasco, ampola, seringa). Noutras formas de realização, a composição da presente invenção está contida num recipiente na forma de pó seco ou liofilizado que é reconstituído em forma líquida antes da utilização.

[0065] Em algumas formas de realização, o kit da presente invenção compreende ainda o item selecionado a partir do grupo que consiste agulha, água para injeção, bula e qualquer combinação destes.

DEFINIÇÕES

[0066] Como aqui utilizado, o termo "compreendendo' ou "incluindo' deve ser interpretado como especificando a presença das características declaradas, inteiros, etapas ou componentes como referido, mas não exclui a presença ou adição de uma ou mais características, inteiras, etapas ou componentes ou grupos dos mesmos. No entanto, no contexto da presente invenção, o termo "compreendendo' ou "incluindo' também inclui "consistido de". As variações da palavra "compreendendo", como "compreende" e "compreendem", e "incluindo", como "inclui" e "incluem", têm significados variados correspondentes.

[0067] "Inativado" refere-se à remoção da patogenicidade do vírus e/ou capacidade de replicação, mas mantendo a habilidade de induzir uma resposta imune protetora no organismo humano. As estratégias de inativação do vírus são conhecidas na indústria. Qualquer método comum pode ser usado para inativar o vírus e um método adequado pode ser selecionado para um tipo de vírus específico. Métodos de inativação do vírus incluindo, mas não limitados a utilização de um composto fotorreativo, um agente oxidante, radiação (por exemplo , radiação UV , radiação y), radiação UV em combinação com riboflavina, tratamento com solvente/detergente (S/D) (como uso de tri-(n-butil)-fosfato e/ou Tween 80), tratamento com polietilenoglicol (PEG), pasteurização (tratamento térmico), tratamento com pH ácido, tratamento enzimático (pepsina ou tripsina), tratamento com luz azul de metileno, com azul de dimetil metileno e luz visível, derivado de psoraleno S-59 e tratamento com irradiação UVA.

[0068] "Atenuado", refere-se a um vírus que ainda é viável, mas a virulência é reduzida durante o processo de fabricação. O vírus atenuado mantém a capacidade de se replicar e estimular o corpo humano a induzir uma resposta imune.

[0069] O termo "heterogêneo", como aqui utilizado, no contexto da composição da presente invenção, indica que as moléculas de poli I:C na composição não são uniformes em relação ao peso molecular, tamanho ou ambos.

[0070] O termo "dose unitária", tal como aqui utilizado, refere-se a adequadas unidades fisicamente discretas como dosagens unitárias para humanos. Cada unidade contém uma quantidade predeterminada suficiente da presente composição para produzir o efeito desejado em combinação com o diluente ou veículo farmaceuticamente/ fisiologicamente aceitável.

[0071] Os termos "tratamento", "tratando", "tratar" e similares são aqui utilizados para referir, geralmente, a obtenção de um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser profilático em termos de prevenir completa ou parcialmente uma doença ou seu sintoma e/ou pode ser terapêutico em termos de uma estabilização parcial ou completa ou cura de uma doença e/ou efeito adverso atribuível à doença. O "tratamento", tal como aqui utilizado, abrange qualquer tratamento de uma doença em um indivíduo, particularmente, um humano, e inclui: (i) prevenir que a doença ocorra num indivíduo que possa estar predisposto para a doença, mas ainda não tenha sido diagnosticado como tendo-a; (ii) inibir a doença, ou seja, impedir seu desenvolvimento; ou (iii) aliviar a doença, isto é, causar a regressão da doença.

[0072] Na presente descrição, quando se descreve o intervalo numérico, a expressão "para", "dentro da faixa", "um intervalo entre" e similares incluem os valores de ponto final.

[0073] Como aqui utilizado, o termo vírus refere-se a um vírus inteiro ou a um fragmento de um vírus e inclui uma vacina de vírus, bem como um antígeno viral.

[0074] Os seguintes exemplos e figuras e descrições das figuras destinam-se apenas a ilustrar, especificamente, a presente invenção e não pretendem limitar o âmbito da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0075] A figura 1 mostra a estrutura de poli I:C, antibiótico (ou composto de poliamina) e íon positivo observado em microscopia eletrônica.

[0076] A figura 2A mostra o volume do tumor em camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, ■ grupo controle do veículo, • grupo com cisplatina, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0077] A figura 2B mostra a taxa de proliferação tumoral relativa (T/C) em camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, •grupo com cisplatina, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON- 001 de dose alta.

[0078] A figura 3 mostra o peso do tumor em camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo. #: p<0,05 vs. grupo YS-ON-001 de dose alta.

[0079] A figura 4 apresenta o peso corporal de camundongos com tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, ■ grupo controle do veículo, • grupo com cisplatina, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta. SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0080] A figura 5 apresenta a alteração do peso corporal em camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, ■ grupo controle do veículo, • grupo com cisplatina, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta. SEM. *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0081] As figuras 6A e 6B mostram o índice de timo e o peso de timo em camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0082] As figuras 7A e 7B mostram o índice de baço e o peso do baço em camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo.

[0083] A figura 8 mostra o volume do tumor 4T1 em camundongos portadores de tumor após tratamento. Sendo, ■ grupo controle do veículo,

[0084] • grupo com docetaxel, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta. SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo. #: p<0,05 vs. grupo YS-ON-001 de dose alta. ##: p<0,01 vs. grupo YS-ON-001 de dose alta.

[0085] A figura 9 apresenta a taxa de proliferação de tumor relativa (T/C) em camundongos portadores de tumor 4T1 após tratamento. Sendo, • grupo com docetaxel, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta.

[0086] A figura 10 mostra o peso tumoral de camundongos com tumores 4T1 após o tratamento. Sendo, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo. #: p<0,05 vs. grupo YS-ON-001 de dose alta.

[0087] A figura 11 apresenta o peso corporal de camundongos portadores de tumor 4T1 após tratamento. Sendo, ■ grupo controle do veículo, • grupo com docetaxel, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta. SEM. *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0088] A figura 12 mostra a alteração do peso corporal de camundongos portadores de tumor 4T1 após tratamento. Sendo, ■ grupo controle do veículo, • grupo com docetaxel, 0 grupo YS-ON-001 de dose baixa, O grupo YS-ON-001 de dose alta. SEM. *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0089] As figuras 13A e 13B apresentam o índice do timo e o peso do timo em camundongos portadores de tumor 4T1 após o tratamento. Sendo, *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0090] As figuras 14A e 14B mostram o índice do baço e peso do baço em camundongos portadores de tumor 4T1 após o tratamento. Sendo, *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0091] A figura 15A apresenta um volume tumoral em camundongos portadores de tumor H22 durante o tratamento. Sendo, SEM. *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo. #: p<0,05 vs. grupo com sorafenibe + YS-ON-001. ##: p<0,01 vs. grupo sorafenibe + YS-ON-001.

[0092] A figura 15B mostra a taxa de proliferação tumoral relativa (T/C) em camundongos portadores de tumor H22 durante o tratamento.

[0093] A figura 16A apresenta o volume tumoral de camundongos portadores de tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0094] A figura 16B mostra a taxa de proliferação tumoral relativa (T/C) em camundongos com tumor LL/2 após o tratamento.

[0095] A figura 17 apresenta o peso tumoral de camundongos com tumor LL/2 após o tratamento. Sendo, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0096] As figuras 18A e 18B mostram o peso corporal de camundongos portadores de tumor B16F10 pós-tratamento. Sendo, SEM. *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0097] A figura 19 apresenta o número de metastases pulmonares em camundongos portadores de tumor B16F10 após o tratamento. Sendo, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0098] As figuras 20A a 20D mostram o peso do baço e timo de camundongos portadores de tumor B16F10 pós-tratamento. Sendo, SEM. *: p<0,05 vs. grupo controle do veículo. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[0099] A figura 21 exibe o volume tumoral em camundongos portadores de tumor S180 durante o tratamento. Sendo, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[00100] A figura 22 apresenta o peso tumoral de camundongos portadores de tumor S180 após o tratamento. Sendo, SEM. **: p<0,01 vs. grupo controle do veículo.

[00101] A figura 23 mostra a taxa de sobrevivência em camundongos portadores de tumor S180 durante o tratamento. Sendo, • solução salina, CTX, ♦ YS-ON-001.

[00102] As figuras 24A e 24B exibem a tomografia computadorizada (TC) de tórax. A figura 24A mostra a TC antes da administração de YS-ON- 001; A figura 24B mostra a tomografia computadorizada após dois ciclos de tratamento com YS-ON-001.

EXEMPLOS

[00103] Tendo agora descrito, de um modo geral, a invenção, a mesma será mais facilmente compreendida através da referência aos exemplos eu seguem, que são fornecidos a título ilustrativo, e não pretendem ser limitativos para a presente invenção.

[00104] Salvo indicação em contrário, os estudos em animais descritos nesta invenção foram conduzidos de acordo com os Regulamentos sobre a Administração de Animais de Laboratório, Orientações sobre o Tratamento de Animais de Laboratório e o Padrão Nacional da China GB/14925.

EXEMPLO 1. MÉTODO DE FABRICAÇÃO DA COMPOSIÇÃO DA PRESENTE INVENÇÃO

[00105] 1. Vírus: Vírus da raiva inativado.

[00106] 2. A composição da presente invenção é preparada de acordo com os seguintes componentes: A composição compreende vírus da raiva inativado, poli I:C, canamicina e cloreto de cálcio. A composição compreende ainda materiais auxiliares incluindo maltose, dextrano e albumina de soro humano. [0109] Em que, o vírus da raiva inativado: poli I:C = 2,0 UI:1.000 }ig. [0110] Sob condições estéreis, a composição acima é formulada num tampão fisiologicamente aceitável. A concentração e o volume da composição a ser formulada foram ajustados de acordo com os fatores incluindo indivíduo a ser administrado (incluindo, mas não se limitando a idade, sexo, peso corporal, condição de saúde), condição do câncer (incluindo mas não se limitando ao tipo de câncer, gravidade), via de administração e frequência de administração. Para a mesma quantidade terapeuticamente eficaz, quando a concentração da composição for alta, o volume de administração é pequeno; quando a concentração da composição for baixa, o volume de administração é grande.

[00107] Quando a composição for aplicada ao camundongo, a composição YS-ON-001 é preparada na concentração de 2,0 IU/mL de vírus da raiva inativado, 1.000 μg/mL de poli I:C, 800 UI/mL de canamicina e 0,16 }imol/ml de íon de cálcio.

[00108] O poli I:C é instável no corpo humano e pode ser rapidamente decomposto por nuclease. O antibiótico (ou composto de poliamina) e o íon positivo podem formar uma estrutura tridimensional com poli I:C, aumentando assim, a estabilidade de poli I:C. O microscópio eletrônico mostra a estrutura final da figura 1.

EXEMPLO 2. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) NO MODELO ANIMAL DE CÂNCER DE PULMÃO I. Construção do Modelo Tumoral 1. Animais

[00109] 1.1 Um camundongo fêmea C57BL/6 (6 semanas de idade, peso corporal de 17,5 ± 0,1 g) foram obtidos a partir de Shanghai SIPPR-BK Laboratory Animal Co. Ltd.

1.2 Criação Animal

[00110] Os animais foram alimentados segundo as condições de alimentação animal nível SPF, e foram providos com alimentos (dieta de roedores Keaoxieli certificada). A gaiola, a cama, os alimentos e a água de beber foram autoclavados. As gaiolas foram colocadas no suporte de fluxo laminar com a limpeza de 100, 3 a 5 animais por gaiola e as gaiolas foram substituídas duas vezes por semana. A temperatura na sala dos animais foi de 21 a 25°C, com a umidade relativa entre 40% e 70%.

2. Linhagem Celular do Tumor

[00111] A linhagem celular LL/2 de câncer de pulmão de Lewis em murino (ATCCfi CRL-1642TM) foi obtida da American Type Culture Collection (ATCC). As células foram mantidas em DMEM com soro bovino fetal a 10% em uma atmosfera 5% de CO2 a 37”C. A proporção de passagem foi de 1:5 e 1:8, com a frequência de 3 a 4 vezes por semana.

3. Construção do Modelo de Transplante Tumoral LL/2

[00112] O modelo tumoral pulmonar de Lewis LL/2 em murino foi estabelecido em camundongo fêmea C57BL/6 por inoculação subcutânea com 1x106 células por animal. A taxa de formação do tumor foi de 100%. Três dias após a inoculação celular, os camundongos inoculados em células foram aleatoriamente selecionados em grupos de tratamento por peso. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a Tabela 1.

II. Método do Teste 1. Grupos do Teste

[00113] Existiam quatro grupos: grupo do veículo, grupo com cisplatina, grupo YS-ON-001 de dose baixa e grupo YS-ON-001 de dose alta. TABELA 1. DESENHO EXPERIMENTAL PARA LL/2

[00114] Grupo 1: no grupo do veículo, o DPBS foi injetado em ambas as patas traseiras a 0,1 mL/local.

[00115] Grupo 3: grupo YS-ON-001 de dose baixa, 0,1 mL de YS-ON- 001 foi injetado na pata traseira direita e 0,1 mL de DPBS foi injetado na pata traseira esquerda a 0,1 mL/camundongo

[00116] Grupo 4: grupo YS-ON-001 de dose alta, YS-ON-001 foi injetado em ambas as patas traseiras a 0,1 mL/local, num total de 0,2 mL.

[00117] 2. Os estudos foram encerrados quando o volume médio do tumor no grupo do veículo atingiu 2.500 mm3.

[00118] 3. No final do estudo, a massa tumoral foi removida e fotografada. O peso do tumor foi registrado. O timo e o baço foram removidos e pesados. E então, o índice do órgão foi calculado.

III. Índices Observacionais 1. Volume do Tumor

[00119] O efeito antitumoral do artigo de teste foi observado pela medição do diãmetro do tumor. Os volumes tumorais foram medidos 3 vezes por semana e a taxa de proliferação do tumor relativo T/C (%) foi calculado.

[00120] 1.1 O volume do tumor (TV) foi calculado da seguinte forma: TV = 1/2XaXb2 onde a e b indicam, respectivamente, longo e largo.

[00121] 1.2 Taxa de proliferação tumoral relativa T/C ^%®= TVt/TVcx 100% onde TVt é o volume médio do tumor do grupo de tratamento e TVc é o volume médio do tumor do grupo controle do veículo.

2. Peso do Tumor

[00122] No final do estudo, a massa tumoral foi removida e pesada.

[00123] Registrado o peso do tumor e calculado a taxa de inibição do tumor, de acordo com a seguinte fórmula: Taxa de inibição do tumor = (TWC - TWT) / TWC x 100% onde TWT é o peso médio do tumor do grupo de tratamento e de TWC é o peso médio do tumor do grupo controle do veículo

3. Peso corporal

[00124] O peso corporal de cada camundongo foi pesado três vezes por semana. A mudança do peso corporal (BWC) foi calculada como: BWC = (BWn - BW0) / BW0 x 100% onde BWn é o BW no dia n e BW0 é o BW no dia em que o tratamento foi iniciado.

4. Peso do Timo e Baço

[00125] No final do estudo, o timo e o baço foram removidos e pesados. O índice de órgão foi calculado como: índice de órgão = peso de órgão / peso corporal x 100%

IV. Análise e Apresentação de Dados

[00126] Os dados foram relatados como média ± SEM. A comparação entre os grupos foi analisada usando ANOVA.

V. Resultados 1. Volume do tumor

[00127] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 no volume de tumor de pulmão de Lewis LL/2 em murino é mostrada na figura 2A.

[00128] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 na taxa de proliferação de tumor de pulmão de Lewis LL/2 em murino é mostrada na figura 2B.

[00129] Considerando o dia do tumor como dia 0. No dia 3, os animais foram distribuídos aleatoriamente por peso corporal e administrados de acordo com a atribuição dos grupos.

[00130] Os tumores no grupo controle do veículo aumentaram, progressivamente, em todos os dez camundongos. No final do estudo, o volume médio do tumor atingiu 2.707 - 257 mm3.

[00131] O tratamento com cisplatina inibiu, significativamente, o crescimento do tumor a partir do dia 10 até ao final do estudo, o que resultou numa taxa de proliferação do tumor relativa de 53,04%, com uma diferença significativa em comparação com o grupo controle do veículo. (p<0,01).

[00132] O tratamento com YS-ON-001 inibiu, significativamente, o crescimento do tumor a partir do dia 10 até ao final do estudo, em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,01). O volume do tumor no grupo de dose alta foi menor do que no grupo de dose baixa, no entanto, a diferença não foi significativa (p> 0,05). A taxa de proliferação tumoral relativa no final do estudo foi de 43,36% e 34,33%, respectivamente.

2. Peso do tumor

[00133] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 no peso do tumor de pulmão de Lewis LL/2 em murino é mostrado na figura 3. [0150] No final do estudo, a massa tumoral foi removida e pesada. Semelhante ao volume do tumor, o tratamento com cisplatina ou YS-ON-001 reduziu, significativamente, o peso do tumor em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,01). O peso do tumor no grupo YS-ON-001 de dose alta foi significativamente menor do que no grupo de com cisplatina e no grupo YS- ON-001 de dose baixa (p<0,05). A taxa de inibição foi de 29,46%, 29,49% e 53,87%, para o grupo cisplatina, YS-ON-001 de dose baixa e grupo de dose alta, respectivamente.

3. Peso corporal

[00134] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 nas alterações do peso corporal do tumor de pulmão de Lewis LL/2 em murino é mostrada nas figuras 4 e 5.

[00135] O peso corporal médio (BW) foi significativamente afetado pelo tratamento com cisplatina em comparação ao grupo veículo no dia 5 e a partir do dia 10 até o final do estudo (p<0,01). O mesmo resultado foi observado na mudança de peso corporal.

[00136] O peso do corpo do camundongo não foi, obviamente, afetado pelo tratamento dos dois grupos YS-ON-001 em comparação com o grupo veículo (p>0,05). A mudança de peso corporal no grupo YS-ON-001 de dose alta de foi significativamente menor no dia 7, em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,05), enquanto que, não houve mudança significativa em outros momentos.

Peso do Timo e Baço

[00137] Uma apresentação gráfica do peso do timo e do baço, bem como o índice de órgãos do tumor de pulmão de Lewis LL/2 em murino é mostrado nas figuras 6 e 7.

[00138] No final do estudo, com exceção da massa tumoral, o timo e o baço foram removidos e pesados. Em comparação com o grupo do veículo, o tratamento com cisplatina reduziu, significativamente, o peso do timo e o peso do baço. O índice do timo e o peso do timo foi significativamente reduzido em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,01). O peso do baço foi, significativamente, reduzido em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,05), no entanto, o índice do baço mostra uma tendência de redução que não foi significativa (p> 0,05). O peso do timo, o peso do baço e o índice do órgão não foram afetados pelo tratamento do YS- ON-001 comparado ao grupo veículo.

VI. Discussão e Conclusão

[00139] No presente exemplo, o grupo controle do veículo apresentou um forte crescimento tumoral e o grupo com cisplatina mostrou um efeito inibidor significativo no crescimento do tumor como um controle positivo. [0160] O grupo YS-ON-001 mostrou atividade antitumoral de um modo dose- dependente quando utilizado como um agente único a 0,1 mL/camundongo e 0,2 mL/camundongo.

[00140] Além disso, os animais foram bem tolerados e não apresentaram efeito significativo sobre o peso corporal, peso do baço e peso do timo. Os efeitos colaterais foram significativamente inferiores aos do grupo com cisplatina. O efeito antitumoral no grupo YS-ON-001 de dose alta foi melhor que no grupo com cisplatina.

[00141] Os resultados mostraram que o YS-ON-001 apresentou efeito inibitório de forma dose-dependente sobre o crescimento tumoral no nível de dose testada no modelo animal de câncer de pulmão de Lewis LL/2 em murino. Enquanto que, os camundongos portadores de tumor não mostraram efeitos colaterais óbvios.

EXEMPLO 3. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) NO MODELO ANIMAL DE CÂNCER DE MAMA I. Construção do modelo tumoral 1. Animais

[00142] 1.1 Camundongos fêmeas Balb/c (6 semanas de idade, peso corporal de 17,2 - 0,1 g) foram obtidos em Shanghai SIPPR-BK Laboratory Animal Co. Ltd.

2. Criação Animal

[00143] Os animais foram alimentados segundo as condições de alimentação animal nível SPF, e foram providos com alimentos (dieta de roedores Keaoxieli certificada). A gaiola, a cama, os alimentos e a água de beber foram autoclavados. As gaiolas foram colocadas no suporte de fluxo laminar com a limpeza de 100, 3 a 5 animais por gaiola e as gaiolas foram substituídas duas vezes por semana. A temperatura na sala dos animais foi de 21 a 25°C, com a umidade relativa entre 40% e 70%.

3. Linhagem Celular do Tumor

[00144] A linhagem celular com câncer de mama 4T1 em murino foi obtida da American Type Culture Collection (ATCC) e mantidas pela HD Biosciences. As células foram mantidas em DMEM com soro bovino fetal a 10% em uma atmosfera de 5% de CO2 a 37”C. A proporção de passagem foi de 1:5 e 1:8, com a frequência de 3 a 4 vezes por semana.

4. Construção do Modelo de Transplante Tumoral 4T1

[00145] O modelo tumoral de câncer de mama 4T1 em murino foi estabelecido em camundongo fêmea Balb/c por inoculação subcutânea com 1x106 células por animal. A taxa de formação do tumor foi de 100%. Três dias após a inoculação celular, os camundongos inoculados por células foram selecionados, por sorteio, em grupos de tratamento por peso. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a Tabela 2.TABELA 2. DESENHO EXPERIMENTAL PARA 4T1

[00146] Grupo 1: no grupo do veículo, o DPBS foi injetado em ambas as patas traseiras a 0,1 mL/local.

[00147] Grupo 3: grupo YS-ON-001 de dose baixa, 0,1 mL de YS-ON- 001 foi injetado na pata traseira direita e 0,1 mL de DPBS foi injetado na pata traseira esquerda a 0,1 mL/camundongo

[00148] Grupo 4: grupo YS-ON-001 de dose alta, YS-ON-001 foi injetado em ambas as patas traseiras a 0,1 mL/local, num total de 0,2 mL.

II. Método do Teste 1. Grupos do Teste

[00149] Houve 4 grupos: grupo do veículo, grupo com docetaxel, grupo YS-ON-001 de dose baixa e grupo YS-ON-001 de dose alta.

[00150] 2. Os estudos foram encerrados quando o volume médio do tumor no grupo do veículo atingiu 2.500 mm3.

[00151] 3. No final do estudo, a massa tumoral foi removida e fotografada.

[00152] O peso do tumor foi registrado. O timo e o baço foram removidos e pesados. E então, o índice do órgão foi calculado.

III. Índices Observacionais: mesmo do Exemplo 2 - Seção III IV. Análise e Apresentação de dados

[00153] Os dados foram relatados como média - SEM. A comparação entre os grupos foi analisada usando ANOVA.

V. Resultados

[00154] 1. Volume do tumor [0182] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 no volume de tumor de mama 4T1 em murino é mostrada na figura 8.

[00155] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 na taxa de proliferação de tumor de mama 4T1 em murino é mostrada na figura 9. [0184] Considerando o dia do tumor como dia 0. No dia 3, os animais foram randomizados por peso corporal e administrados de acordo com a atribuição dos grupos.

[00156] Os tumores no grupo controle do veículo aumentaram, progressivamente, em todos os dez camundongos. No final do estudo, o volume médio do tumor atingiu 2.576 - 108 mm3.

[00157] O tratamento com docetaxel inibiu, significativamente, o crescimento do tumor a partir do dia 8 até ao final do estudo, o que resultou numa taxa de proliferação do tumor relativa de 50,12%, com uma diferença significativa em comparação com o grupo controle do veículo. (p<0,01).

[00158] O tratamento com YS-ON-001 inibiu, significativamente, o crescimento do tumor a partir do dia 8 até ao final do estudo, em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,01). Existe uma diferença significativa entre o grupo YS-ON-001 de dose baixa e o grupo YS-ON-001 de dose alta desde o dia 11 até ao final do estudo (p<0,05). A taxa de proliferação tumoral relativa no final do estudo foi de 63,43% e 45,87%, respectivamente.

2. Peso do tumor

[00159] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 na taxa de proliferação de tumor de mama 4T1 em murino é mostrada na figura 10. [0190] No final do estudo, a massa tumoral foi removida e pesada. Semelhante ao volume do tumor, o tratamento com docetaxel reduziu, significativamente, o peso do tumor em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,01). O grupo YS-ON-001 de dose alta diminuiu, significantemente, o peso do tumor quando comparado ao grupo controle do veículo. O grupo YS-ON-001 de dose baixa reduziu ligeiramente o peso do tumor quando comparado ao grupo controle do veículo. O peso do tumor no grupo YS-ON-001 de dose alta é significativamente menor do que no grupo YS-ON-001 de dose baixa (p < 0,05). A taxa de inibição é de 35,55%, 18,21% e 42,26% para o grupo com docetaxel, grupo YS-ON-001 de dose baixa e de dose alta, respectivamente.

3. Peso corporal

[00160] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 nas alterações do peso corporal do tumor de mama 4T1 em murino é mostrada nas figuras 11 e 12.

[00161] O peso corporal médio (BW) foi significativamente afetado pelo tratamento com docetaxel comparado ao grupo veículo no dia 8 e a partir do dia 13 até o final do estudo (p<0,01). A variação média do peso corporal foi significativamente reduzida pelo tratamento com docetaxel em comparação com o grupo do veículo a partir do dia 4 até o final do estudo (p<0,05). O peso no final do estudo também mostrou uma tendência de queda em relação ao mesmo grupo no momento do agrupamento.

[00162] O peso do corpo do camundongo não foi, obviamente, afetado pelo tratamento com o grupo YS-ON-001 de dose baixa em comparação com o grupo veículo. O peso corporal no grupo YS-ON-001 de dose alta foi, significativamente, menor a partir do dia 15 do que no grupo veículo (p<0,05). As alterações do peso corporal nos dois grupos YS-ON-001 foram, significantemente, inferiores no dia 4 e a partir do dia 15 até o final do estudo comparado ao grupo controle do veículo (p<0,05 para o grupo de dose baixa, p<0,01 para o grupo de dose alta). No entanto, o peso corporal ainda estava aumentando em comparação com o mesmo grupo no momento do agrupamento.

[00163] Peso do Timo e Baço [0196] Uma apresentação gráfica do peso do timo e do baço, bem como o índice de órgãos do tumor de mama 4T1 em murino é mostrado nas figuras 13 e 14.

[00164] No final do estudo, com exceção da massa tumoral, o timo e o baço foram removidos e pesados.

[00165] Em comparação com o grupo do veículo, o tratamento com docetaxel reduziu, significativamente, o peso do timo e do baço e o índice de timo e baço (p<0,01). O peso do timo, o peso do baço e o índice de órgãos do timo não foram afetados pelo tratamento com YS-ON-001 comparado ao grupo veículo. Em ambas as doses dos grupos YS-ON-001, o índice do órgão baço foi, significativamente, maior em comparação com o grupo veículo (p<0,01 para o grupo de dose baixa, p<0,05 para o grupo de dose alta).

VI. Discussão e Conclusão

[00166] No presente exemplo, o grupo controle do veículo apresentou um forte crescimento tumoral e o grupo com docetaxel mostrou um efeito inibidor significativo no crescimento do tumor como um controle positivo. [0201] O YS-ON-001 mostrou atividade antitumoral de um modo dose- dependente quando utilizado como um agente único a 0,1 mL/camundongo e 0,2 mL/camundongo. Além disso, os animais foram bem tolerados e não apresentaram efeito significantes sobre o peso do timo. O efeito antitumoral no grupo YS-ON-001 de dose alta foi comparado ao grupo com docetaxel, com redução significativa nos efeitos colaterais.

[00167] No presente exemplo, o índice de baço nos dois grupos YS- ON-001 aumentou em comparação com o grupo controle do veículo. Mais uma análise adicional foi necessária para entender a causa. O julgamento preliminar pode ser a função imune aumentada, resultando no aumento de peso no órgão imunológico.

[00168] Os resultados mostraram que o YS-ON-001 apresentou efeito inibitório de forma dose-dependente sobre o crescimento tumoral no nível de dose testada no modelo animal de câncer de mama em modelos animais de câncer de mama 4T1. Enquanto que, os camundongos portadores de tumor não apresentaram efeitos colaterais óbvios.

EXEMPLO 4. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) SOZINHA OU COMBINADA COM SORAFENIBEE NO MODELO SUBCUTÂNEO DE CARCINOMA HEPATOCELULAR H22 EM MURINO 1. Construção do modelo tumoral

[00169] 1. Animais e criação de animais foram os mesmos que no Exemplo 2.

2. Linhagem Celular do Tumor

[00170] A linhagem celular com carcinoma hepatocelular H22 em murino foi obtida da China Center for Type Culture Collection (CCTCC) e mantidas pela HD Bioscience. As células foram mantidas em camundongos Balb/c como ascites. O intervalo de passagem foi de 7 a 8 dias.

3. Construção do Modelo de Transplante Tumoral H22

[00171] Os camundongos doadores com ascites H22 foram sacrificados e esterilizados em 75% de imersão em álcool. As ascites foram recolhidas e ressuspensas em DPBS pré-arrefecido em densidade apropriada. O modelo tumoral carcinoma hepatocelular H22 em murino foi estabelecido em camundongos fêmea Balb/c por via inoculação subcutânea com 5x106 células por animal. A taxa de formação de tumor foi de 100%. Três dias após a inoculação celular, os camundongos inoculados em células foram aleatoriamente selecionados em grupos de tratamento por peso. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a tabela 3. [0210] II. Método de teste

Grupos de Teste

[00172] Existiam quatro grupos: grupo veículo, grupo com sorafenibe, grupo YS-ON-001 e grupo sorafenibe + YS-ON-001.TABELA 3. DOSAGEM E GRUPO EXPERIMENTAL

[00173] 2. Os estudos foram encerrados quando o volume médio do tumor no grupo do veículo atingiu 2.500 mm3.

[00174] 3. No final do estudo, a massa tumoral foi removida e fotografada. O peso do tumor foi registrado.

III. Índices Observacionais: os mesmos do Exemplo 2. IV. Resultados 1. Volume do tumor

[00175] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 no volume do tumor de carcinoma hepatocelular H22 em murino é mostrada na figura 15A.

[00176] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 na taxa de proliferação tumoral do carcinoma hepatocelular H22 em murino é mostrada na figura 15 B.

[00177] Considerando o dia do tumor como dia 0. No dia 3, os animais foram distribuídos aleatoriamente por peso corporal e administrados de acordo com a atribuição dos grupos.

[00178] Os tumores no grupo de controle tratado com veículo aumentaram, progressivamente, em todos os dez camundongos. Quando o grupo do veículo foi finalizado no dia 12, o volume médio do tumor atingiu 2.120 - 182 mm3.

[00179] Um camundongo no grupo veículo e dois camundongos no grupo sorafenibe foram sacrificados no dia 10 e no dia 19, quando o volume do tumor atingiu 2.500 mm3. Todo o estudo foi encerrado no dia 21.

[00180] O tratamento com sorafenibe inibiu, significativamente, o crescimento do tumor a partir do dia 3 até o final do estudo em comparação com o do grupo controle do veículo (p<0,01). A taxa de proliferação tumoral relativa no dia 12 foi de 29,90%.

[00181] O tratamento com sorafenibe + YS-ON-001 inibiu, significativamente, o crescimento do tumor a partir do dia 1 até o final do estudo, em comparação com o grupo controle do veículo (p<0,01). A taxa de proliferação tumoral relativa no dia 12 foi de 10,61%.

[00182] Existem diferenças significativas no volume do tumor entre o grupo com sorafenibe e o grupo com sorafenibe + YS-ON-001 no dia 1, dia 5 e a partir do dia 10 até o final do estudo (p<0,05 ou p<0,01).

[00183] Existem diferenças significativas no volume do tumor entre o grupo YS-ON-001 e o grupo com sorafenibe + YS-ON-001 no dia 5 e a partir do dia 10 até o final do estudo (p<0,05 ou p<0,01).

[00184] V. Discussão e Conclusão [0228] No presente exemplo, o grupo controle do veículo apresentou um forte crescimento tumoral e o grupo com sorafenibe mostrou um efeito inibidor significativo no crescimento do tumor como um controle positivo. Assim, indicando que os resultados são confiáveis.

[00185] O grupo YS-ON-001 mostrou forte atividade antitumoral quando usado BID a 0,2 mL/camundongo. O grupo com sorafenibe + YS- ON-001 mostrou uma inibição muito significativa do crescimento do tumor e um efeito sinérgico significativo. Não houve morte de animais devido à toxicidade das drogas num único grupo de drogas ou grupo de drogas combinados.

[00186] Os resultados mostraram que o grupo YS-ON-001 e o grupo combinado apresentaram forte atividade antitumoral em modelo tumoral de carcinoma hepatocelular H22 em murino no nível de dosagem testado. A combinação de YS-ON-001 e sorafenibe induziu a uma forte atividade antitumoral aumentada em comparação com qualquer agente sozinho.

EXEMPLO 5. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) E PIKA ISOLADO NO MODELO SUBCUTÂNEO DE CÂNCER DE PULMÃO DE LEWIS LL/2 EM MURINO EM CAMUNDONGOS FÊMEAS C57BL/6 I. Construção do modelo tumoral

[00187] 1. Animais e criação de animais foram os mesmos que no Exemplo 2.

[00188] 2. Foi obtida a linhagem celular de cãncer de pulmão de Lewis LL/2 em murino, cultivou-se e estabeleceu-se o modelo tumoral de pulmão de Lewis LL/2 em murino igual ao do Exemplo 2. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a tabela 4.

II. Método de teste 1. Grupos de teste

[00189] Existiam 6 grupos: grupo veículo, grupo com cisplatina, grupo YS-ON-001, grupo YS-ON-002 (sem vírus) , grupo de vacina antirrábica e grupo com cisplatina + YS-ON-001. A diferença entre YS-ON-001 e YS-ON- 002 foi que não houve vírus da raiva inativado em YS-ON-002.TABELA 4. DOSAGEM E GRUPO EXPERIMENTAL

[00190] 2. Os estudos foram encerrados quando o volume médio do tumor no grupo do veículo atingiu 2.500 mm3.

[00191] 3. No final do estudo, a massa tumoral foi removida e fotografada. O peso do tumor foi registrado.

III. Índices Observacionais 1. Volume do tumor

[00192] A medição e o cálculo do volume do tumor e o peso do tumor foram os mesmos que no Exemplo 2.

2. Índice de medicamentos combinados

[00193] O valor de Q foi calculado de acordo com a fórmula de Jin, onde Q = 0,85-1,15 para o efeito adicional, Q> 1,15 para o efeito sinérgico: Q = Ea+b / (Ea + Eb - Ea X Eb) onde Ea+b é a taxa de inibição tumoral no grupo de combinação de medicamentos, Ea e Eb são as taxas de inibição do tumor no grupo de medicamento único.

IV. Resultados 1. Volume do tumor

[00194] Uma representação gráfica do efeito do YS-ON-001, YS-ON- 002 e o grupo de combinação no volume do camundongo portador de tumor de carcinoma pulmonar de Lewis LL/2 em murino é mostrada na figura 16A. [0247] Uma representação gráfica do efeito do YS-ON-001, YS-ON-002 e o grupo de combinação na taxa de proliferação do tumor de camundongos portadores de carcinoma pulmonar de Lewis LL/2 em murino é mostrada na figura 16B.

[00195] Considerando o dia do tumor como dia 0. No dia 3, os animais foram distribuídos aleatoriamente por peso corporal e administrados de acordo com a atribuição dos grupos.

[00196] Os tumores no grupo controle do veículo aumentaram, progressivamente, em todos os dez camundongos. Quando o grupo veículo foi finalizado, o volume médio do tumor atingiu 2.535 - 148 mm3. [0250] O tratamento com cisplatina inibiu, significativamente, o crescimento do tumor em comparação com o grupo controle do veículo a partir do dia 5 até o final do estudo (p<0,01), resultando em uma taxa de proliferação tumoral relativa de 47,46%.

[00197] O tratamento com YS-ON-001 e YS-ON-002 inibiu, significativamente, o crescimento do tumor quando comparado com o grupo controle do veículo desde o dia 5 até ao final do estudo (p<0,01). A taxa de proliferação tumoral relativa foi de 37,02% e 40,56%, respectivamente.

[00198] O tratamento com vacina antirrábica não apresentou efeito evidente em comparação com o grupo controle do veículo (p>0,05). A taxa de proliferação tumoral relativa foi de 97,87 % no final do estudo.

[00199] O grupo de combinação inibiu, significativamente, o crescimento do tumor quando comparado com o grupo controle do veículo a partir do dia 5 até o final do estudo (p<0,01). A taxa de proliferação tumoral relativa foi de 28,38% no final do estudo. A taxa relativa de proliferação tumoral foi menor do que nos grupos isolados de cisplatina e YS-ON-001. De acordo com a fórmula de Jin, os grupos YS-ON-001 e cisplatina tiveram efeito adicional, Q = 0,87.

[00200] O volume tumoral do grupo YS-ON-001 foi menor que o grupo YS-ON-002, porém, a diferença foi estatisticamente insignificante. O volume do tumor do grupo YS-ON-001 foi inferior ao grupo YS-ON-002 a partir do dia 5 até o final do estudo. De acordo com a fórmula de Jin, o vírus da raiva e outros componentes na composição apresentaram efeito adicional, Q = 0,93.

2. Peso do tumor

[00201] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001, YS-ON- 002 e o grupo de combinação no peso do tumor de camundongos portadores de carcinoma pulmonar de Lewis LL/2 em murino é mostrada na figura 17. [0257] No final do estudo, a massa tumoral foi removida e pesada. Semelhante ao efeito no volume do tumor, o grupo com cisplatina, YSON- 001, YS-ON-002 e o grupo de combinação apresentaram uma significativamente redução no peso tumoral quando comparado com o grupo controle do veículo (p<0,01), resultando em taxas de inibição tumoral de 42,38%, 60,88%, 56,04% e 75,44%, respectivamente.

[00202] De acordo com a fórmula de Jin, vírus da raiva e outros componentes na composição apresentam um efeito adicional, Q = 0,97.

V. Discussão e Conclusão

[00203] No presente exemplo, o grupo controle do veículo apresentou um forte crescimento tumoral e o grupo com cisplatina mostrou um efeito inibidor significativo no crescimento do tumor como um controle positivo. Estes indicam que os resultados são confiáveis.

[00204] Os grupos YS-ON-001 e YS-ON-002 mostraram forte atividade antitumoral quando usados como agente isolados a 0,2 mL/camundongo administrado i.m. em modelo tumoral de pulmão de Lewis LL/2 em murino. Os animais foram bem tolerados e apresentaram um leve efeito no peso corporal, no entanto, os efeitos colaterais tóxicos foram significativamente menores do que a droga de controle cisplatina. O efeito antitumoral foi comparável com a droga de controle cisplatina.

[00205] O grupo de combinação em relação a taxa de proliferação do tumor foi de 28,38%, que foi inferior aos grupos tratados com cisplatina e YS-ON-001 isoladamente. De acordo com a fórmula de Jin, os grupos YS- ON-001 e com cisplatina tiveram efeito adicional.

[00206] Não há variações significativas, estatisticamente, no efeito inibidor do tumor entre YS-ON-001 e ON-YS-002, no entanto, o vírus da raiva e outros componentes na composição apresentam efeito adicional de acordo com a fórmula de Jin.

[00207] Os resultados mostraram que YS-ON-001 e YS-ON-002 apresentaram efeito inibitório no nível de dose testado no modelo animal de câncer de pulmão de Lewis LL/2. A composição YS-ON-001 e cisplatina teve efeito adicional.

EXEMPLO 6. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) NO MODELO DE MET'STASE TUMORAL B16F10 EM CAMUNDONGOS FÊMEAS C57BL/6 I. Construção do modelo tumoral 1. Animais e criação de animais foram os mesmos que no Exemplo 2. 2. Linhagem Celular do Tumor

[00208] A linhagem celular B16F10 foi obtida da American Type Culture Collection (ATCC) e mantida pela HD Biosciences. As células foram mantidas em DMEM com soro de bovino fetal a 10% numa atmosfera de 5% de CO2 a 37”C. A proporção de passagem estava entre 1:5 e 1:8, com a frequência de 3 a 4 vezes por semana. em ciclos de claro/escuro de 12 horas. 3. Construção de Modelo de Transplante Tumoral LL/2

[00209] O modelo tumoral de met.l-'stase B16F10 foi estabelecido em camundongos fêmeas C57BL/6 por inoculação intravenosa com 5x104/0,2 mL por animal. Um dia após a inoculação de células, os camundongos foram aleatoriamente classificados em grupos de tratamento por peso. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a Tabela 5.

II. Método de teste 1. Grupos de teste

[00210] Houve 3 grupos: grupo veículo, grupo com cisplatina e grupo YS-ON-001. TABELA 5. DOSAGEM E GRUPO EXPERIMENTAL

[00211] No final do estudo, os estudos foram terminados no dia 15. O pulmão foi removido e fotografado. O número de pontos de metástase foi contado. O timo e o baço foram removidos, pesados e calculados para os índices de órgãos.

III. Índices Observacionais 1. Peso Corporal

[00212] O peso corporal de cada camundongo foi pesado três vezes por semana. A mudança de peso corporal (BWC) foi calculada como: BWC = (BWn - BW0) / BW0 x 100% onde BWn é o BW no dia n e BW0 é o BW no dia em que o tratamento foi iniciado.

2. Número de Metástases Pulmonares

[00213] No final do estudo, os animais foram sacrificados e o pulmão foi removido. E então, o número de metástase foi contado.

3. Peso do Timo e Baço

[00214] No final do estudo, o timo e o baço foram removidos e pesados.

IV. Análise e Apresentação de Dados

[00215] Os dados foram relatados como média - SEM. A comparação entre os grupos foi analisada usando ANOVA.

V. Resultados 1. Peso Corporal

[00216] Uma representação gráfica do efeito do YS-ON-001 no peso corporal e nas alterações do peso corporal dos camundongos é mostrada nas figuras 18A e 18B.

[00217] O peso corporal médio (BW) foi significativamente diminuído pelo tratamento com cisplatina em comparação com o grupo do veículo (p<0,01) a partir do dia 5 até o final do estudo (exceto no dia 7). Um resultado semelhante foi observado na mudança de peso corporal. [0288] No grupo YS- ON-001, o peso corporal foi transitória e ligeiramente reduzido em comparação com o grupo controle do veículo. No entanto, no dia 5 e no dia 15, o peso corporal no grupo YS-ON-001 foi, significativamente, reduzido em comparação com o grupo controle do veículo.

2. Número de Metástases Pulmonares

[00218] Uma apresentação gráfica do efeito do YS-ON-001 sobre o número de metástases pulmonares dos camundongos é mostrada na figura 19. [0291] No final do estudo, os animais foram sacrificados e o pulmão foi removido. E então, o número de metástase foi contado.

[00219] Em comparação com o grupo do veículo, o número de metástases pulmonares diminuiu significativamente pelo tratamento com cisplatina e YS-ON-001 (p<0,01).

3. Peso do baço e do timo

[00220] Uma representação gráfica do peso do timo e do baço, bem como cada índice de órgão dos camundongos é mostrada na figura 20.

[00221] No final do estudo, além do pulmão, o timo e o baço foram removidos e pesados. Os índices dos órgãos para cada órgão foram calculados.

[00222] Em comparação com o grupo do veículo, o tratamento com cisplatina diminuiu, significativamente, o peso do timo (p<0,01), o índice do timo (p<0,01), enquanto o peso do baço e o índice de baço não foram afetados.

[00223] Comparado com o grupo veículo, o índice do timo e o peso do timo foram, significativamente, diminuídos pelo tratamento com YS-ON-001 (p<0,01), enquanto o peso do baço e o índice de baço aumentaram significativamente (p<0,01).

VI. Discussão e Conclusão

[00224] No presente exemplo, as metástases pulmonares foram observadas em todos os animais no grupo controle do veículo, resultando no número médio de metástases pulmonares de 93,43 ± 1,76. O número médio de metástases pulmonares foi significativamente reduzido no grupo com cisplatina. Estes indicam que os resultados são confiáveis. [0300] O grupo YS-ON-001 apresentou forte atividade antimetastática com número médio, significativamente, reduzido de metástases pulmonares no modelo de metástase tumoral B16F10 no nível de dosagem testado.

EXEMPLO 7. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) NO MODELO TUMORAL S180 EM CAMUNDONGOS FÊMEAS BALB/C I. Construção do modelo tumoral

[00225] Animais e criação de animais foram os mesmos que no Exemplo 2.

2. Linhagem Celular do Tumor

[00226] A linhagem celular S180 foi obtida do Banco de Células da Academia Chinesa de Ciências Médicas e mantida no laboratório IPECAS. As células foram mantidas em camundongos Balb/c como ascites. O intervalo de passagem foi de 5 a 6 dias.

[00227] 3. Construção do Modelo de Transplante Tumoral S180 [0306] Animais Balb/c foram alimentados durante 5 a 7 dias, e o tumor S180 foi inoculado intraperitonealmente em camundongos de geração F0. As ascites foram retiradas quando a cavidade abdominal, até certo ponto, e então inoculadas em camundongos de geração F1. Os testes usaram camundongos de geração F2-F3. O modelo tumoral S180 foi estabelecido em camundongos fêmeas Balb/c por inoculação via subcutânea com suspensão de células (2x106/0,2 mL/animal). Dois dias após a inoculação celular, os camundongos inoculados com as células foram aleatoriamente selecionados em grupos de tratamento. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a Tabela 6.

II. Método de teste 1. Grupos de teste

[00228] Houve 3 grupos: grupo do veículo, grupo com ciclofosfamida (CTX) e grupo YS-ON-001.TABELA 6. DOSAGEM E GRUPO EXPERIMENTAL

[00229] 2. No final do estudo, os estudos foram terminados no dia 21. O tumor foi removido e fotografado. O peso do tumor foi registrado.

III. Índices Observacionais 1. Volume do tumor

[00230] O efeito antitumoral do pedido foi observada por medição de diâmetro dos tumores. Os volumes dos tumores foram medidos 3 vezes por semana e a taxa de proliferação do tumor relativa T/C (%) foi calculada.

[00231] 1.1 O volume do tumor (TV) é calculado da seguinte forma: TV=1/2xaxb2 onde a e b indicam longa e largo, respectivamente.

[00232] No final do estudo, a massa tumoral foi removida e pesada.

IV. Análise e Apresentação de Dados

[00233] Os dados foram relatados como média - SEM. A comparação entre os grupos foi analisada usando ANOVA.

V. Resultados 1. Volume do tumor

[00234] Uma apresentação gráfica do efeito do grupo YS-ON-001 no volume tumoral do modelo tumoral S180 em camundongos fêmeas Balb/C é mostrada na figura 21.

[00235] Os tumores no grupo controle tratado com solução salina cresceram, progressivamente, em todos os dez camundongos. No dia 21, o volume médio do tumor atingiu 2.000 mm3.

[00236] O tratamento com CTX inibiu, significativamente, o crescimento do tumor em comparação com o grupo controle salino desde o dia 4 até ao final do estudo (p<0,01).

[00237] O tratamento com YS-ON-001 inibiu, significativamente, o crescimento do tumor quando comparado com o grupo controle salino a partir do dia 4 até o final do estudo (p<0,01). O volume do tumor no grupo YS-ON- 001 foi semelhante ao do grupo CTX.

[00238] 2. Peso do tumor [0325] Uma representação gráfica do efeito do YS-ON-001 no peso do tumor do modelo tumoral S180 em camundongos fêmeas Balb/c 0 mostrada na figura 22.

[00239] No final do estudo, a massa tumoral foi removida e pesada. Semelhante ao efeito no volume tumoral, o CTX e o YS-ON-001 apresentaram diminuição significativa do peso do tumor quando comparados ao grupo controle salino (p<0,01).

VI. Discussão e Conclusão

[00240] No presente exemplo, o grupo controle do veículo apresentou um forte crescimento tumoral e o grupo CTX mostrou um efeito inibidor significativo no crescimento do tumor como um controle positivo.

[00241] O tratamento com YS-ON-001 inibiu, significativamente, o crescimento do tumor com volume do tumor e peso do tumor, significativamente, reduzido.

[00242] Os resultados mostraram que o grupo YS- ON -001 apresentou forte atividade antitumoral no modelo tumoral S180 no nível de dosagem testado.

EXEMPLO 8. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO (YS-ON- 001) NO MODELO TUMORAL DE C'NCER EHRLICH ASCITES (EAC) EM CAMUNDONGOS FÊMEAS BALB/C I. Construção do modelo tumoral 1. Animais

[00243] 1.1 Camundongos fêmeas Kunming (5 a 6 semanas de idade) foram obtidos e testados após 5 a 6 dias de alimentação adaptativa. [0334] 1.2 Criação de animais

[00244] Os animais foram alimentados, de acordo com as condições de alimentação dos animais ao nível SPF, e receberam alimentos (dieta de roedores certificada Keaoxieli). Gaiolas, cama, alimentação e água potável foram autoclavados. As gaiolas foram colocadas num suporte de fluxo laminar com a limpeza de 100, 3 a 5 animais por gaiola e as gaiolas foram substituídas duas vezes por semana. A temperatura na sala dos animais é de 21 a 25°C, com a umidade relativa entre 40% e 70%.

Linhagem Celular do Tumor

[00245] A linhagem celular do tumor de Ehrlich Ascites Cancer (EAC) foi obtida a partir do banco de células da Academia Chinesa de Ciências Médicas e mantida no laboratório IPE-CAS. As células foram mantidas em camundongos Kunming como ascites. O intervalo de passagem foi de 7-8 dias.

3. Construção do Modelo de Transplante Tumoral

[00246] Os animais foram alimentados durante 5 a 7 dias, e o tumor EAC foi inoculado, intraperitonealmente, em camundongos de geração F0. As ascites foram retiradas quando a cavidade abdominal se estendeu até certo ponto e, então, foram inoculadas em camundongos de geração F1. Os testes usaram camundongos de geração F2-F3. O modelo tumoral EAC foi estabelecido em camundongos fêmeas Kunming por inoculação intraperitoneal com suspensão de células (1x106 /0,2 mL/animal). Dois dias após a inoculação celular, os camundongos inoculados com células foram aleatoriamente selecionados em grupos de tratamento. Os animais de cada grupo foram administrados de acordo com a tabela 7.TABELA 7. DESENHO EXPERIMENTAL PARA EAC

[00247] Grupo 1: No grupo do veículo, o PBS foi injetado em ambas as patas traseiras a 0,1 mL/local.

[00248] Grupo 3: os grupos YS-ON-001, YS-ON-001 foram injetados em ambas as patas traseiras a 0,1 mL/local, no total de 0,2 mL

II. Método de teste Grupos de teste

[00249] Existiam 3 grupos: grupo do veículo, grupo CTX e grupo YS- ON-001.

[00250] 2. No final do estudo, os estudos foram terminados no dia 21. O tumor foi removido e fotografado. O peso do tumor foi registrado.

III. Índices de Observacionais: duração, atraso do crescimento do tumor

[00251] O atraso no crescimento tumoral (TGD) foi calculado como (TGD) = (T-C)/C x 100% , onde T e C referem-se à duração mediana (dias) para o camundongo individual morrer pelos grupos de controle e tratados, respectivamente.

IV. Análise e Apresentação de Dados

[00252] A comparação entre os grupos foi analisada usando ANOVA.

V. Resultados

[00253] Uma apresentação gráfica da taxa de sobrevivência do modelo tumoral EAC em camundongos fêmeas Kunming é mostrada na figura 23.

[00254] Considerando o dia da inoculação do tumor como dia 0. No dia 2, os animais foram randomizados e administrado de acordo com a atribuição de grupos. Os tumores no grupo controle do veículo aumentaram progressivamente em todos os dez camundongos. Os camundongos foram observados no dia 23, e todos os camundongos morreram no dia 27. A duração mediana foi de 25,5 dias.

[00255] Em comparação com o grupo do veículo, os murinos do grupo CTX foram observados mortos no dia 27 e todos os murinos morreram no dia 30. O atraso no crescimento tumoral (TGD) no tratamento com CTX foi de 14,74%, com a duração mediana aos 29 dias.

[00256] Em comparação com o grupo do veículo, os camundongos do grupo YS-ON-001 foram observados mortos no dia e e todos os camundongos morreram no dia 39. O atraso no crescimento tumoral (TGD) após o tratamento com CTX foi de 38,65%, com uma duração mediana de 34,5 dias. VI. Discussão e Conclusão

[00257] No presente exemplo, o grupo controle do veículo apresentou um forte crescimento tumoral e o grupo CTX mostrou um efeito de atraso significativo no crescimento tumoral como um controle positivo.

[00258] O tratamento com a composição YS-ON-001 a 0,2 mL/camundongo mostrou um efeito de atraso do crescimento tumoral significativo, enquanto os animais foram bem tolerados. O efeito antitumoral do YS-ON-001 foi, significativamente, melhor que o do medicamento de controle CTX.

[00259] Os resultados mostraram que o grupo YS-ON-001 apresentou forte atividade antitumoral e efeito inibidor no crescimento tumoral no modelo tumoral EAC ao nível de dosagem testado, enquanto os camundongos portadores de tumor foram bem tolerados.

EXEMPLO 9. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER DE TIREOIDE COM METÁSTASES LINFONODAL E PULMÃO 1. Indivíduo:

[00260] Mao, do sexo feminino, 53 anos, diagnosticada em agosto de 2013 com câncer de tireoide com met.Lstase pulmonar, foi submetida à tireoidectomia radical. A patologia pós-operatória mostrou carcinoma papilífero no lobo lateral esquerdo da tireoide, com metástase linfonodal, bócio nodular no lobo lateral direito da tireoide. Posteriormente, em 28 de outubro de 2013 e 6 de fevereiro de 2014, ela foi submetida a duas terapias com iodo-131. Em 2015, ela foi submetida a 4 ciclos de radioterapia com Etoposido + Carboplatina (28.09.2015; 20.10.2015; 07.11.2015; 04.12.2015). Após o tratamento, enquanto 1-2 lesões no pulmão encolheram, as outras 5-6 lesões não mudaram, os efeitos colaterais da quimioterapia foram óbvios e a condição física é desprivilegiada.

2. Composição:

[00261] Quando administrado a um indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00262] Com o consentimento do paciente, o YS-ON-001 (1ml) foi administrado por injeção intramuscular no braço, uma vez a cada 3 dias, totalizando 12 doses.

4. Resultados:

[00263] Neste exemplo, os indivíduos administrados com a composição da presente invenção não mostraram efeitos colaterais óbvios, todas as lesões estavam estáveis e a condição física foi melhorada.

EXEMPLO 10. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER DE RIM 1. Indivíduo:

[00264] Ma, do sexo masculino, 70 anos, em novembro de 2015, iniciou sintomas intermitentes de hematúria, dores ocasionais na cintura esquerda. Um exame abrangente foi realizado e ele foi diagnosticado com câncer no rim esquerdo, com tamanho de cerca de 11x12x6cm. A tomografia de tórax (TC) suspeitou de câncer no pulmão direito, inflamação crônica em ambos os pulmões que poderia estar associada a cistos no fígado. Considerando a idade do paciente e a opinião da família, optou-se por não se submeter à cirurgia ou radioterapia e quimioterapia. Ele recebeu alta após tratamento anti-inflamatório simples.

2. Composição:

[00265] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00266] Com o consentimento do paciente e sua família, o YS-ON-001 (2ml) foi administrado por injeção intramuscular no braço a partir de 25 de dezembro, uma vez a cada 3 dias, perfazendo 12 doses.

4. Resultados:

[00267] Neste exemplo, o indivíduo administrado com a composição da presente invenção não mostrou efeitos colaterais óbvios, o sintoma de hematúria e a dor na cintura desapareceram.

EXEMPLO 11. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO ADENOCARCINOMA GÁSTRICO COM CÂNCER DE FÍGADO METASTÁTICO 1. Indivíduo:

[00268] Nan, do sexo feminino, 55 anos, diagnosticada em outubro de 2015 com adenocarcinoma gástrico estágio IV com câncer de fígado metastático, foi submetida à quimioterapia com Oxaliplatina + Lapatinibe. No entanto, a quimioterapia foi descontinuada devido a danos hepáticos significativos. Depois de receber tratamento de redução de transaminases e tratamento sintomático, a função hepática voltou, basicamente, ao normal.

2. Composição:

[00269] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração: 3.1 Primeiro ciclo de tratamento:

[00270] Com o consentimento do paciente, o YS-ON-001 (1ml) foi administrado por injeção intramuscular no braço a partir de 25 de dezembro de 2015, uma vez a cada 3 dias. Este ciclo foi descontinuada devido à elevação anormal das transaminases em 29 de dezembro. [0380] 3.2 Segundo ciclo de tratamento:

[00271] Em 02 de janeiro de 2016, a função hepática recuperada até o nível de pré-injeção. O segundo ciclo do tratamento YS-ON-001 foi retomado a partir de 11 de janeiro, a dosagem permaneceu a mesma. Revisado em 27 de janeiro.

4. Resultados:

[00272] Após o primeiro ciclo de tratamento, com transaminase anormalmente elevada, suspeitou-se de necrose do tecido do fígado causada pela administração da composição, acredita-se ser resposta antitumoral não específica.

[00273] Após o segundo ciclo de tratamento, o paciente não apresentou efeitos colaterais óbvios. As lesões do fígado visualizadas pela TC mostraram redução da sombra nodal, confirmando a conjectura do primeiro ciclo de tratamento.

EXEMPLO 12. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO C'NCER DE MAMA COM MET'STASES LINF'TICAS, PULMONARES E OSSEAS 1. Indivíduo:

[00274] Mulher, 34 anos, diagnosticada em maio de 2008 com carcinoma ductal infiltrante de mama esquerda, submetida a mastectomia modificada. O caso sugeriu metástases linfonodais, os resultados imuno- histoquímicos mostraram ER-, PR++, HER2++. Em junho de 2015 confirmou-se a metástase pulmonar e óssea. A TC craniana mostrou múltiplas metástases no hemisfério cerebelar bilateral e no vermis cerebelar. A condição foi julgada como disfunção progressiva da doença (DP).

2. Composição:

[00275] Quando administrado a indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de administração: 3.1 Primeiro ciclo de tratamento:

[00276] Com o consentimento do paciente, a partir de 29 de setembro de 2015, o YS-ON-001 foi administrado por injeção intramuscular, uma dose por semana (1', 3', 5' dose a 2ml, 2', 4', 6' dose a 1ml), submetidas a quimioterapia sob orientação médica.

[00277] 3.2 Segundo ciclo de tratamento:

[00278] A partir de 14 de dezembro, o segundo ciclo de YS-ON-001 foi administrado por injeção intramuscular, uma dose (1ml) a cada 3 dias.

4. Resultados:

[00279] Após o primeiro ciclo de tratamento, a revisão por TC de tórax encontrou linfonodos axilares inchados, derrame pleural significativamente reduzido, tecidos de pulmão direito recrutados, necrose nos tecidos de ambos os pulmões, metástases cerebrais desaparecidas. Após uma semana, a doença foi determinada como doença estável (SD).

[00280] Após o segundo ciclo de tratamento, a TC de tórax encontrou a sombra nodular pulmonar obviamente diminuída. A figura 24A mostra o TC antes de utilizar o YS-ON-001 e a figura 24B mostra o TC após dois ciclos de tratamento do YS-ON-001. A sombra nodular pulmonar foi significativamente reduzida, comparando os dois. A composição da presente invenção apresentou efeitos antitumorais significativos.

EXEMPLO 13. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER DE LÍNGUA 1. Indivíduo:

[00281] Zhou, do sexo feminino, 78 anos, diagnosticada com câncer de língua em abril de 2015, foi submetida a excisão extensa do câncer de língua esquerda + ressecção parcial mandibular + extração dentária. A patologia pós- operatória mostrou carcinoma espinocelular bem diferenciado. Em maio de 2016, o câncer de língua esquerda rescindiu, sendo submetida a ressecção estendida no carcinoma recorrente de língua esquerda.

2. Composição:

[00282] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00283] Com o consentimento do paciente, a partir de 26 de julho de 2016, o YS-ON-001 foi administrado através de injeção intramuscular nas nádegas, 2 doses diárias. Após administrado por 2 dias, aumentou a dose para 4 vezes ao dia.

4. Resultados:

[00284] Neste exemplo, o indivíduo administrado com a composição da presente invenção não mostrou efeitos colaterais óbvios. O paciente declarou que a profundidade das úlceras dos maxilares superiores foi diminuída (para superficial), a condição física melhorada, o sono melhorou, aumento do apetite e a força física estava intensificando.

EXEMPLO 14. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER DE PRÓSTATA COM MÚLTIPLAS METÁSTASES ÓSSEAS Indivíduo:

[00285] Xu, sexo masculino, idade 81, diagnosticado com câncer de próstata com múltiplas metástases ósseas em janeiro de 2013.

2. Composição:

[00286] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00287] Com o consentimento do paciente, a partir de 3 de Julho de 2016, o YS-ON-001 foi administrado por injeção intramuscular em dias alternados, 2 doses de cada vez. A partir de 3 de agosto de 2016, as doses aumentaram para 3. A partir de 5 de agosto de 2016, a injeção em dias alternados, 4 doses de cada vez. Ao mesmo tempo Zoladex foi usado como tratamento combinado por aconselhamento do médico.

4. Resultados:

[00288] Neste exemplo, o indivíduo administrado com a composição da presente invenção não mostrou efeitos colaterais óbvios, exceto a rigidez muscular devido à injeção a longo prazo. Durante o tratamento, o nível de antígeno específico da próstata total diminuiu, aprimorou a condição física, aliviou a dor. Antes do tratamento, o resultado da biópsia da punção prostática mostrou que todas as 10 agulhas tiveram resultado positivo e esse número foi reduzido para 5 positivos em 10 após o tratamento.

EXEMPLO 15. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER RETAL 1. Indivíduo:

[00289] Sun, sexo masculino, 63 anos, diagnosticado em novembro de 2012 com câncer retal, foi submetido à ressecção do câncer retal + biópsia hepática. A patologia pós-operatória mostrou câncer de úlcera retal moderadamente diferenciado, infiltrado em toda a parede do intestino, múltiplos nódulos cancerosos observados no interior do tecido adiposo mesentérico, câncer metastático visível nos linfonodos, nódulos metastáticos vistos no fígado. Após recuperação da operação, a partir de maio de 2012, foi submetido ao tratamento com Bevacizumabee (600mg) e Xelox (OXA 250 mg, Xelod 3.0, 14d). Após 8 ciclos, tomando apenas Bevacizumabee até setembro de 2015. Durante março de 2016, o diagnóstico por imagem de TC relatou múltiplas metástases intrahepáticas, metástases ósseas múltiplas em todo o corpo, metástase de pequenos nódulos no lobo inferior do pulmão esquerdo pendente para confirmação.

2. Composição:

[00290] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00291] Com o consentimento do paciente, a partir de 25 de março de 2016, o YS-ON-001 foi administrado por injeção intramuscular. No primeiro mês, 1 dose (1ml) foi administrada em dias alternados. No segundo mês, 1 dose administrada por dia. No terceiro mês, 2 doses diárias. A partir de 10 de agosto, 3 doses diárias.

4. Resultados:

[00292] Neste exemplo, o indivíduo administrado com a composição da presente invenção não mostrou efeitos colaterais óbvios. Durante o tratamento, os sintomas do paciente foram inalterados, a doença esteve estável sem complicação adicional. O edema nos membros inferiores causado pelo uso de Bevacizumabe foi melhorado.

EXEMPLO 16. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER ENDOMETRIAL 1. Indivíduo:

[00293] Zhang, do sexo feminino, 56 anos, diagnosticada em dezembro de 2010 com câncer endometrial de terceiro estágio, foi submetida a extensa histerectomia abdominal + cirurgia radical de câncer de ovário. A patologia pós-operatória encontrou adenocarcinoma endometrial (tumor histológico grau 1), infiltração bilateral do câncer ovariano, metástase do ligamento uterossacro direito. Após a cirurgia, em janeiro de 2011 iniciou-se o tratamento com quimioterapia com docetaxel + cisplatina.

[00294] Em janeiro de 2015, foi observado recorrência hepática e retal e metástases, seguido de quimioterapia e tratamento da dor do câncer.

2. Composição:

[00295] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00296] Com o consentimento do paciente, a partir de 10 de junho de 2016, o YS-ON-001 foi administrado por injeção intramuscular. Nos primeiros 10 dias, 2 doses (2 ml) por dia e, subsequentemente, 4 doses (4 ml) diariamente.

4. Resultados:

[00297] Neste exemplo, o indivíduo administrado com a composição da presente invenção não mostrou efeitos colaterais óbvios, exceto pela rigidez muscular no local da injeção. Após 2 meses de tratamento, em comparação com o exame de TC do mês anterior, os tumores de menor densidade na parede do abdome esquerdo foram ligeiramente reduzidos, o espessamento irregular evidente na flexura esplênica nas proximidades, um pouco melhor do que antes.

EXEMPLO 17. EFEITOS TERAPÊUTICOS DA COMPOSIÇÃO NO CÂNCER DE OVÁRIO 1. Indivíduo:

[00298] Zhou, do sexo feminino, 56 anos, diagnosticada em junho de 2016 com câncer de ovário estágio IIIc (carcinoma seroso de alto grau), foi submetida à laparotomia para cirurgia citorredutora de câncer de ovário + ressecção de câncer retal. A patologia pós-operatória reportou (apêndices uterinos esquerdos, ovário direito) combinados com carcinoma seroso de alto grau, lesões retais, tecidos cancerosos encontrados na parede abdominal e na serosas do apêndice.

2. Composição:

[00299] Quando administrado ao indivíduo, o YS-ON-001 é formulado em água estéril para injeção.

3. Regime de Administração:

[00300] Com o consentimento do paciente, a partir de 16 de junho de 2016, o YS-ON-001 foi administrado por injeção intramuscular. 2 doses (2 ml) diariamente durante os primeiros 7 dias, seguidos, depois disso, com 4 doses (4 ml) diariamente. Simultaneamente, o docetaxel e a carboplatina foram utilizados como tratamento combinado, de acordo com as recomendações do médico.

4. Resultados:

[00301] Neste exemplo, o indivíduo administrado com a composição da presente invenção não mostrou efeitos colaterais óbvios. Durante o tratamento, os sintomas do paciente permaneceram inalterados, estáveis sem progressão adicional.

Referências

[00302] Qualquer listagem ou discussão de um documento aparentemente pré-publicado sobre este relatório descritivo não deve necessariamente ser tomada como um reconhecimento de que tal documento é parte do estado da técnica ou é um conhecimento geral comum.

[00303] As seguintes referências podem ser de interesse: WANQING, Chen, et al., Cancer Statistics in China, 2015.Cancer Journal for Clinicians. 2016 Vol. 66:115-132.

[00304] GUOQIAN, Kuang, et al. Current Status and Prospect of Cancer Virotherapy Clinical Studies. Journal of Guangxi Medical University, 1995 Vol. 12:617-619.

[00305] SHOUNAN, Tan, FENGYU, Zhang. Studies on Rabies and Rabies Vaccine for Human Use. Medical Information 2011 Vol. 24:2841-2842.

[00306] YUHUI, Zhang. The Establishment of Rabies Vaccine Purification Technology. Chinese Journal of Biologicals 1999 Vol. 12 Iss. No. 4: 231232.

[00307] JIANG, Zhong. Oncolytic Virus and Tumor Treatment, Foreign Medicine (Microbiology Section), 2004 Vol. 27 Iss. No. 6.

[00308] KENNEY, S, et al. Viruses as oncolytic agents: a new age for therapeutic virus. J Nati Cancer Inst, 1994,86:1185.

[00309] LORENCE, et al. Complete regression of human neuroblastoma xenografts in athymic mice after local Newcastle disease virus therapy. J Nati Cancer Inst, 1994, 86:1228.

[00310] Patente chinesa CN100341571C Patente russa RU2414238C2 Pedido de patente norte-americano US 2010/0297072A1 Publicação internacional WO 2009/016433

Claims (21)

1. USO DE UMA COMPOSIÇÃO, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um medicamento para o tratamento de câncer, compreendendo: a) ácido polinossínico-policitidílico (poli I:C), b) pelo menos um antibiótico ou pelo menos um composto de poliamina, c) pelo menos um íon positivo, em que o íon positivo é um cátion selecionado a partir do grupo que consiste em cálcio, cádmio, lítio, magnésio, cério, césio, cromo, cobalto, deutério, gálio, iodo, ferro, zinco e qualquer combinação dos mesmos; e preferencialmente, o dito íon positivo é cálcio. e d) opcionalmente, um vírus; onde o vírus é inativado, atenuado, ou incapaz de replicação em um indivíduo humano.

2. USO DE UMA COMPOSIÇÃO, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) a) ácido polinossínico-policitidílico (poli I:C), b) pelo menos um antibiótico ou pelo menos um composto de poliamina, c) pelo menos um íon positivo, e d) opcionalmente, um vírus; onde o vírus é inativado, atenuado, ou incapaz de replicação em um indivíduo humano; e (ii) um agente terapêutico utilizado em quimioterapia selecionado do grupo que consiste em agente alquilante (de preferência selecionado do grupo que consiste em ciclofosfamida, ifosfamida e tiotepa); agente antineoplásico antimetabólico (de preferência selecionado do grupo que consiste em metotrexato, mercaptopurina, fluorouracil e citarabina), antibiótico antitumoral (de preferência selecionado do grupo que consiste em bleomicina, daunorrubicina, actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina e mitoxantrona), anti-tumoral botânico (de preferência selecionado do grupo que consiste em vincristina, etopósido, tenipósido, paclitaxel e docetaxel), agente antineoplásico de composto de platina (de preferência selecionado do grupo que consiste em selecionado do grupo que consiste em cisplatina, carboplatina e oxaliplatina), agente antineoplásico de equilíbrio hormonal (preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em leuprolide, tamoxifeno, flutamida e formestano) e agente antineoplásico diverso (preferencialmente trióxido de arsênio); ou um agente terapêutico usado em terapia direcionada selecionado do grupo que consiste em rituximabe, bevacizumabe, trastuzumabe, imatinibe, dinoxetina, cetuximabe, nilotinibe e sorafenibe; ou um agente terapêutico usado em imunoterapia selecionado do grupo que consiste em inibidor de PD-1, inibidor de PD-L1 e inibidor de CTLA4;na manufatura de um medicamento de combinação para o tratamento do câncer.

3. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato do dito vírus ser selecionado a partir do grupo que consiste em Rhabdoviridae, Adenoviridae, Arenaviridae, Astroviridae, Bunyaviridae, Caliciviridae, Flaviviridae, vírus da Hepatite Delta, Hepeviridae, Mononegavirales, Nidovirales, Picornaviridae,Orthomyxoviridae, Papillomaviridae, Parvoviridae, Polyomaviridae, Poxviridae, Reoviridae, Retroviridae, Togaviridae; onde,preferencialmente, o dito vírus pertence ao gênero Lyssavirus da família Rhabdoviridae; e mais preferencialmente, o dito vírus é um vírus da raiva.

4. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato do dito antibiótico ser selecionado a partir do grupo que consiste em tacrolamicina, antraciclina, sulfato de butirina, gentamicina, higromicina, amicacina, dideoxi-canamicina, nebramicina, β-lactama, neomicina, puromicina, estreptomicina, estreptozocina e qualquer combinação dos mesmos.

5. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato do dito composto de poliamina ser selecionado a partir do grupo que consiste em sal de arginina, espermidina, N-(3-aminopropil), N-(3- aminopropil)-1,4-butanodiamina, espermina, OSdimetilaminotofosfato, poli- lisina, aminoglicosídeo e qualquer combinação destes.

6. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato da razão entre o dito vírus ao dito poli I:C ser selecionado a partir do grupo que consiste em: 1 IU/50 μg, 1 IU/60 μg, 1 UI/70 μg, 1 UI/80 μg, 1 UI/90 μg, 1 UI/100 μg, 1 UI/125 μg, 1 UI/200 μg, 1 UI/250 μg, 1 UI/300 μg, 1 UI/350 μg, 1 UI/400 μg, 1 UI/450 μg, 1 UI/500 μg, 1 UI/550 μg, 1 UI/600 μg, 1 UI/700 μg, 1 UI/800 μg, 1 UI/1.000 μg, 1 UI/1.500 μg, 1 UI/2.000 μg, 1 UI/2.500 μg, 1 UI 3.000 μg, 1 UI/4.000 μg, 1 UI/5.000 μg, 1 UI/6.000 μg, 1 UI/7.000 μg, 1 UI/8.000 μg, 1 UI/9.000 μg, 1 UI/10.000 μg e um intervalo entre quaisquer duas das razões acima. Em particular, a razão entre o referido vírus e o referido poli I:C é de 1 UI/500 μg.

7. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato da quantidade do dito poli I:C estar entre 250 μg a 5.000 μg por dose unitária; preferencialmente, a quantidade de poli I:C ser selecionada a partir do grupo que consiste em 250 μg, 500 μg, 1.000 μg, 1.500 μg, 2.000 μg, 3.000 μg, 4.000 μg, 5.000 μg por dose unitária.

8. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato da quantidade do dito vírus estar entre 0,1 UI a 100 UI por dose unitária; preferencialmente, a quantidade do dito vírus ser selecionada do grupo que consiste em 0,2 IU, 0,5 IU, 1,0 IU, 1,5 IU, 2,0 IU, 2,5 IU, 3,0 IU, 3,5 IU, 4,0 IU, 5,0 IU, 6,0 IU , 7,0 UI, 8,0 UI, 9,0 UI, 10 UI, 15 UI, 20 UI, 30 UI, 40 UI, 50 UI, 60 UI, 70 UI, 80 UI, 90 UI, 100 UI por dose unitária e uma faixa entre quaisquer dois dos valores acima; e mais preferencialmente, entre 0,5 IU a 10 IU por dose unitária; mais preferencialmente, entre 1,0 IU e 5,0 IU por dose unitária.

9. USO, de acordo com as reivindicações 7 ou 8, caracterizado pelo fato da dose unitária ser preparada num volume que é selecionado a partir do grupo que consiste em 0,1 ml, 0,15 ml, 0,2 ml, 0,5 ml, 1,0 ml, 1,5 ml, 2,0 ml, 2,5 ml, 3,0 ml, 4,0 ml, 5,0 ml, 10 ml, 20 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml, 60 ml, 70 ml, 80 ml, 90 ml, 100 ml, 150 ml, 200 ml, 250 ml e um intervalo entre quaisquer dois dos volumes supracitados.

10. USO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato da quantidade do dito vírus estar entre 0,05 IU/ml a 40,0 IU/ml por concentração.

11. USO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato da composição compreender ainda pelo menos um material auxiliar que é selecionado a partir do grupo que consiste em gelatina, sacarose, açúcar, lactose, maltose, trealose, glicose, dextrano de baixo peso molecular, sorbitol, polissorbato 20, manitol polietileno glicol, albumina de soro humano, albumina recombinante, octoato de sódio, ureia, hidróxido de alumínio, vermelho de fenol, cloreto de magnésio, cloreto de potássio, cloreto de sódio, tiossulfato de sódio, dihidrogenofosfato de potássio, ácido ascórbico, triclorometano, fenol e timerosal e qualquer combinação destes.

12. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato da dita composição compreender ainda pelo menos um tampão fisiologicamente aceitável que é selecionado a partir do grupo que consiste em acetato, tris (hidroximetil) aminometano (tris), bicarbonato, carbonato, tampão fosfato e qualquer combinação destes.

13. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato do pH da dita composição estar entre 6,5 e 8,0.

14. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato da dita composição ser preparada numa forma de dosagem sólida ou numa forma de dosagem líquida; onde a dita forma de dosagem líquida ser selecionada a partir do grupo que consiste em uma solução injetável, suspensão, pomada, emulsão, gotícula, xarope e gel; onde a dita forma de dosagem sólida ser selecionada do grupo constituído por um pó seco ou pó liofilizado, comprimido, cápsula, supositório, grânulo e comprimido revestido com açúcar.

15. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato do dito câncer ser selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de orofaringe, carcinoma de nasofaringe, câncer de esôfago, câncer gástrico, câncer de cólon, câncer de fígado, colangiocarcinomas, câncer de vesícula biliar, câncer de pâncreas, câncer de pulmão, câncer de traqueia, timoma, câncer de ossos, câncer de articulação, melanoma, câncer mesotelial, câncer de mama, câncer de colo do útero, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de cérebro, mieloma, leucemia, neoplasia maligna de lábio, neoplasia maligna de raiz da língua, neoplasia maligna de gengiva, neoplasia maligna de boca, neoplasia maligna de palato, neoplasia maligna da parótida, neoplasia maligna de amígdala, neoplasia maligna de orofaringe, neoplasia maligna de nasofaringe, neoplasia maligna de seio piriforme, neoplasia maligna de hipofaringe, neoplasia maligna de esôfago, neoplasia maligna gástrica, neoplasia maligna de intestino delgado, neoplasia maligna de cólon, neoplasia maligna da junção retossigmóide, neoplasia maligna retal, neoplasia maligna anal e do canal anal, neoplasia maligna de fígado e do duto biliar intra-hepático, neoplasia maligna da vesícula biliar, neoplasia maligna pancreática, neoplasia maligna da cavidade nasal e ouvido médio, neoplasia maligna do seio nasal, neoplasia maligna de laringe, neoplasia maligna de traqueia, neoplasia maligna brônquica e pulmonar, neoplasia maligna de timo, neoplasia maligna do coração, do mediastino e da pleura, neoplasia maligna do osso e cartilagem articular, melanoma maligno de pele, neoplasia maligna mesotelial e de tecidos moles, neoplasia maligna da mama, neoplasia maligna genital, neoplasia maligna vaginal, neoplasia maligna do colo do útero, neoplasia maligna de útero, neoplasia maligna de ovário, neoplasia maligna de placenta, neoplasia maligna peniana, neoplasia maligna de próstata, neoplasia maligna testicular, neoplasia maligna do trato urinário, neoplasia maligna de apêndice e de olho, neoplasia maligna das meninges, neoplasia maligna do cérebro, neoplasia maligna da medula espinhal, do nervo craniano e do sistema nervoso central, neoplasia maligna da glândula endócrina, Doença de Hodgkin, linfoma nodular folicular não-Hodgkin, linfoma não-Hodgkin difuso, linfoma de células T periférico e cutâneo, mieloma múltiplo, tumor maligno de células plasmáticas, leucemia linfoide, leucemia mieloide, leucemia monocítica, câncer de tireoide, câncer de rim, adenocarcinoma gástrico, câncer de língua, câncer retal, câncer endometrial e tumor metastático.

16. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que quando a composição compreender um vírus, o câncer não é causado por este vírus.

17. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o medicamento é para uma rota de administração selecionada a partir do grupo que consiste em intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, transdérmica, intradérmica, intranasal, intraocular, oral, sublingual, intratumoral e peritumoral.

18. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o medicamento é para ser administrado a um indivíduo humano com uma frequência selecionada entre o grupo que consiste em uma vez por mês, 2 vezes por mês, 3 vezes por mês, 4 vezes por mês, 5 vezes por mês, 6 vezes por mês, 7 vezes por mês, 8 vezes por mês, uma vez por semana, 2 vezes por semana, 3 vezes por semana, 4 vezes por semana, 5 vezes por semana, 6 vezes por semana, uma vez a cada três dias, 2 vezes a cada três dias, 3 vezes a cada três dias, uma vez a cada dois dias, 2 vezes a cada dois dias, uma vez por dia, duas vezes por dia.

19. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o referido tratamento compreende as etapas de: - administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição a um indivíduo humano através da injeção intramuscular numa frequência de 2 vezes a cada três dias, ou - administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição a um humano via injeção intramuscular com uma frequência de uma vez por semana.

20. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato do dito câncer ser selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de rim, adenocarcinoma gástrico, câncer de fígado, melanoma, câncer de língua, câncer retal, câncer endometrial e câncer de ovário; mais preferencialmente, o dito câncer ser um tumor metastático.

21. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que é em um paciente sujeito à radioterapia.