KR20170018834A - 고순도의 저급 내독소 탄수화물(hple) 조성물, 및 그것의 분리방법 - Google Patents

Abstract

본원은 고순도의 탄수화물 조성물, 및 고순도의 탄수화물 조성물의 제조방법을 제공한다. 그 방법은 수용성 탄수화물 용액을 폴리에틸렌이민(PEI) 크로마토그래피의 매개물을 포함하는 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시켜 정제된 용액을 얻는 단계, 및 고순도의 탄수화물 조성물을 정제된 용액으로부터 분리하는 단계를 포함한다.

Description

고순도의 저급 내독소 탄수화물(HPLE) 조성물, 및 그것의 분리방법{HIGH PURITY LOW ENDOTOXIN CARBOHYDRATE (HPLE) COMPOSITIONS, AND METHODS OF ISOLATION THEREOF}

본 출원은 2014년 6월 13일에 출원된 미국 가출원 제62/011,810호의 35 U.S.C. 119(e) 하에서 우선권 주장되고, 그 개시물은 전문이 본원에서 인용된다.

본 발명은 고순도의 저급 내독소 탄수화물, 및 그것의 제조 및 사용방법에 관한 것이다.

탄수화물 또는 당은 단백질 또는 펩타이드와 같은 활성제를 수반하는 주사 가능한 제제와 같은 다양한 활성제용 제제 개선제로서 유용하다. 또한, 탄수화물은 세포 배양 또는 발효 보충제로서 사용될 수 있다. 모노, 디, 트리를 포함하는 탄수화물 및 글루코오스, 수크로오스, 갈락토오스, 트레할로오스, 말토오스, 아밀로오스, 말토헥사로오스, 말토헵타로오스, 말토테트라오스와 같은 다당류는 이들 출원에서 특히 유용하다는 것을 발견해 왔다.

대부분 식물에서 유래된 천연 물질의 경우와 마찬가지로, 탄수화물 및 당은 천연적으로 정제된 상태에서 천연으로 존재하지 않는다. 예를 들면, 설탕(수크로오스)은 식물 공급원에서 생산되고, 그것으로부터 추출되고 정제될 필요가 있다. 2가지 중요한 당 작물은: 사탕수수(Saccharum spp.) 및 사탕무(Betavulgaris)가 두드러지고, 당은 식물 건조 중량의 12%~20% 차지할 수 있다. 수크로오스는 통상적으로 온수를 사용하여 이들 작물의 추출에 의해 얻어지고; 추출물의 농축은 시럽이 되며, 이것으로부터 고체 수크로오스가 결정화될 수 있다.

그들의 천연 상태, 및 세련과 정제 후에 당과 탄수화물 간에는 다수의 주목할 만한 차이점이 있다. 가장 주목할 만한 것으로, 당의 결정화가 하나의 주요한 변형이다. 그러나, 세련 및 용이한 정제 후라도, 당은 본질적으로 이와 관련된 다수의 불순물을 갖는다. 본원에서 더 후술 될 이러한 불순물은 세균, 단백질, 내독소, 및 다양한 다른 식물에서 유래된 물질을 포함한다.

탄수화물은 크로마토그래피의 분리를 포함하여 다수의 기술을 통해 정제될 수 있다. 이것은 실험실 규모의 합성을 위해 신속하고 효율적으로 행해질 수 있지만, 칼럼 크로마토그래피 및 유사한 분리 기술은 다량의 당이 정제됨에 따라 덜 유용해진다. 칼럼의 크기, 용매와 고정상(예를 들면, 실리카겔)의 필요량 및 분리하는데 필요한 시간은 각각 정제된 생성물의 양에 따라 증가하고, 칼럼 크로마토그래피를 사용하여 다중 킬로그램 규모의 합성으로부터 정제를 비현실적으로 만든다.

당을 위한 또 다른 일반적인 정제 기술은 이온 교환 수지의 사용을 수반한다. 이 기술은 이온 교환 수지의 지루한 전처리가 요구되어 지루할 수 있다. 또한, 다수의 이용 가능한 이온 교환 수지는 당을 염(예를 들면, NaCl)으로부터 반드시 분리시킬 수 있는 것은 아니다. 산성 수지는 조 생성물로 발견되는 금속 이온 및 용액에서 아미노- 또는 이미노-당 모두를 제거하는 경향이 있으므로 유용하지 않다. 이온 교환 수지를 사용하여 당을 정제한 후에, 희석된 수용액을 농축시키는 추가적인 단계가 종종 요구되고, 이 단계는 당의 분해를 야기할 수 있기 때문에, 문제가 될 수 있고, 이것은 오염 물질을 생성시키며, 수율도 감소시킬 수 있다.

마찬가지로, 다른 산업적 및 약학적으로 유용한 당은 다중 킬로그램 양의 정제까지 쉽게 칭량될 수 없는 크로마토그래피 및 이온 교환 수지를 사용하여 일반적으로 정제된다. 탄수화물로부터 내독소와 같은 불순물을 제거하는 것이 특히 중요하다.

일반적으로, 크로마토그래피의 분리 기술에 있어서, 특정 리간드는 고체 지지체 매트릭스에 공유 결합된다. 고정화 리간드에 특이적으로 결합(흡수)할 생물학적 분자를 함유하는 시료는 고정화 리간드와 접촉되어 있다. 흡수되지 않고 오염된 분자가 제거된 후, 특이적으로 결합된 분자는 용출 완충액의 이온 강도 또는 pH를 변화시키는 것과 같이, 여러 절차 중 하나에 의해 특이적으로 결합된 분자-리간드 상호 작용을 방해함으로써 고체 지지체로부터 용출된다.

이 절차에 의해, 고정화 약물, 비타민, 펩타이드, 호르몬 등이 상응하는 수용체 또는 수송 단백질을 분리하는데 사용될 수 있다. 고정화 단백질은 다른 상보적 또는 상호 작용 단백질을 분리하기 위한 역할을 할 수 있다. 마찬가지로, 이러한 절차는 세포막과 같은 특정 생물학적 표본과 특정 수용체를 지닌 손상되지 않은 세포를 분리하는데 사용될 수 있다. 또한, 이러한 절차의 사용은 폴리뉴클레오티드, 항원, 항체, 바이러스, 효소 등을 정제하는데 유용하다. 또한, 이러한 고체계 친화성 지지체 매트릭스는 촉매 등으로서 반응에 사용되는 효소를 고정화시키는데 이용되어 왔다.

이온-교환 크로마토그래피는 조성물의 이온 및/또는 극성 분자가 이온 교환기에 대한 그들의 친화성에 기초하여 분리를 용이하게 하는 일종의 친화성 크로마토그래피이다. 이온 교환기를 갖는 미립자는 순수 생성 및 크로마토그래피의 분야에서 분리 물질로서 널리 사용된다. 이온 교환기로서 폴리에틸렌이민을 그 안에 도입한 음이온 교환기는 킬레이트 수지, 예를 들면 아미노산, 펩타이드, 단백질, 핵산 및 단당류를 분석하거나 분리하기 위한 액체 크로마토그래피 분야에서 사용된다.

다양한 음이온 교환 수지는 다양한 공급원에서 이용 가능하다. 그들은 실리카, 아가로오스 또는 합성 폴리머와 같은 고체 지지체에 리간드를 결합시킴으로써 제조된다. 폴리에틸렌이민을 기초로 한 음이온 교환 수지는 폴리에틸렌이민에 합성 폴리머 또는 실리카를 결합시킴으로써 이루어진다.

폴리에틸렌이민을 그 안에 도입한 미립자로 이루어진 음이온 교환기의 제조방법의 예로서, 미국 특허공보 제4,191,814호에 개시된 바와 같이 폴리크로메틸스티렌과 같은 할로겐화 알킬기를 갖는 폴리머의 미립자에 폴리에틸렌이민을 도입하는 방법; 미국 특허공보 제4,111,859호에 개시된 바와 같이 에폭시기 또는 할로겐화 알킬기를 갖는 아크릴레이트 또는 메타크릴레이트 폴리머에 폴리에틸렌이민들 도입하는 방법; 및 미국 특허공보 제4,245,005호에 개시된 바와 같이 무기 미립자를 폴리에틸렌이민에 흡수시킨 다음, 흡수된 폴리에틸렌이민을 가교하는 방법을 언급할 수 있다.

내독소는 실험 기구를 쉽게 오염시킬 수 있는 작고, 안정적이며, 세균-유도된 소수성 분자이고, 그의 존재는 생체 외와 생체 내 실험 모두 상당하게 영향을 줄 수 있다. 그들의 존재는 0.01 내독소 단위 (EU)/㎖까지 검출할 수 있는 생물학적 내독소 시험(LAL) 분석에 의해 검출된다. 고순도 및 저급 내독소의 특성은 가장 낮은 레벨의 오염 물질, 특히 내독소(그람 음성 세균의 세포벽 단편) 및 다른 고분자량 불순물이 최종 생성물의 순도, 생물학적 활성, 유효 기간 또는 환자 안전을 손상시킬 수 있는 경우라도 필요하다.

약학 제제 또는 세포 배양 발효 보충제로서 사용되는 탄수화물에 대해서, 내독소 및 DNA와 RNA, 중금속, 관련된 탄수화물 종, 및 Ecoli와 같은 세균 오염 물질과 같은 다른 생물학적 불순물이 실질적으로 없는 탄수화물을 정제하는 것도 중요하다.

고순도의 저급 내독소 탄수화물을 제공하기 위해 내독소 및 다른 불순물을 안전하게 제거하기 위한 적절한 공정이므로 매우 바람직하다.

본원은 고순도의 탄수화물 조성물의 제조방법, 및 그로부터 얻어지는 고순도의 조성물을 제공하는 것이다. 그 방법은 수용성 탄수화물 용액을 폴리에틸렌이민(PEI) 크로마토그래피의 매개물을 포함하는 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시켜 정제된 용액을 얻는 단계, 및 고순도의 탄수화물 조성물을 정제된 용액으로부터 분리하는 단계를 포함한다. 일실시형태에 있어서, 분리 단계는: i) 알콜로 결정화하는 단계, 또는 ii) 정제된 용액을 분무 건조하는 단계 중 적어도 하나를 포함한다.

일실시형태에 있어서, 결정화 단계에서 사용되는 알콜은 에탄올이다. 일실시형태에 있어서, 그 방법은 그것을 PEI 칼럼에 통과시키는 단계 전에 수용성 탄수화물 용액의 여과 단계를 더 포함한다. 일실시형태에 있어서, 필터는 약 0.4 미크론~0.5 미크론의 공극 크기를 갖는다.

일실시형태에 있어서, 고순도의 탄수화물 조성물은 수크로오스, 갈락토오스, 및 트레할로오스의 군으로부터 선택되는 하나이다. 일실시형태에 있어서, 고순도의 탄수화물 조성물은 그램당 1 내독소 단위 미만의 내독소 레벨을 갖는다. 일실시형태에 있어서, 고순도의 탄수화물 조성물은 5 ppb 미만의 납과 같은 원소 불순물을 갖는다. 또 다른 실시형태에 있어서, 고순도의 탄수화물 조성물은 100 ppm 미만의 관련된 탄수화물 종, 바람직하게는 10 ppm 미만을 갖는다.

또 다른 실시형태에 있어서, 본원에 개시된 방법에 의해서 제조된 고순도의 탄수화물 조성물이 제공된다. 조성물은 그램당 1 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖는 수용성 탄수화물 용액을 포함한다. 일실시형태에 있어서, 수용성 탄수화물 용액은 그램당 .4 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖는다. 또 다른 실시형태에 있어서, 수용성 탄수화물 용액은 그램당 .3 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖고, 또 다른 실시형태에 있어서, 그램당 약 .1 내독소 단위의 값을 갖는다.

일실시형태에 있어서, 수용성 탄수화물 용액은 폴리에틸렌이민(PEI) 크로마토그래피의 매개물을 포함하는 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼을 통과했다. 또 다른 실시형태에 있어서, 수용성 탄수화물 용액은 i) 알콜로 결정화하는 단계, 또는 ii) 상기 정제된 용액을 분무 건조하는 단계 중 적어도 하나에 의해 칼럼을 통과시킨 후 더 분리되는 경우이다. 일실시형태에 있어서, 고순도의 탄수화물 조성물은 5 ppb 미만의 납과 같은 원소 불순물을 갖는다.

또 다른 실시형태에 있어서, 약학 조성물용, 특히 생물 제제를 포함하는 약학 제제용 제제 성분이 본원에 제공된다. 제제 성분은 본원에 기재된 바와 같이 고순도의 탄수화물 조성물이다.

본 발명은 수크로오스, 갈락토오스, 및 트레할로오스와 같은 고순도의 저급 내독소(HPLE) 탄수화물을 생성하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에 있어서, 고순도의 저급 내독소 탄수화물은 매우 낮은 레벨의 내독소(1 EU/g 미만), 매우 낮은 레벨의 납과 같은 원소 불순물(<5 ppb), 매우 낮은 레벨의 관련된 탄수화물 종(100 ppm 미만), Ecoli와 같은 세균 오염 물질의 부재 및 착색된 식물에서 유래된 불순물이 없는 RNA와 DNA 부재의 고정제된 탄수화물이다. 바람직한 조성물에 있어서, 내독소 레벨은 0.6 EU/g이고, 0.1 EU/g 미만의 내독소 레벨을 가진 조성물이 가장 바람직하다. 탄수화물의 고순도의 저급 내독소 조성물은 음이온 교환 크로마토그래피의 공정에 뒤이어 (i) 에탄올로 결정화하는 단계 또는 (ii) 정제된 당 용액을 분무 건조하는 단계 중 어느 하나를 사용하는 분리에 의해 제조된다. 특히, 중합성 폴리에틸렌이민 (PEI) 크로마토그래피의 매개물은 수용성 당 용액으로부터 내독소와 다른 생물학적 불순물과 같은 오염 물질을 제거하는데 사용되어 왔다. 정제된 당 용액으로부터 결정질 당은 농축된 당 용액에 알콜을 첨가하는 단계나 정제된 당 용액을 분무 건조하는 단계 중 어느 하나에 의해 분리된다.

본 발명의 목적은 고순도의 내독소가 없는 당이 특히 폴리에틸렌이민을 함유하는 중합성 크로마토그래피의 매개물을 사용하여 음이온 교환 크로마토그래피의 매개물을 사용하여 얻어질 수 있다는 것을 나타낸다. 정제된 당 용액은 결정화 또는 분무 건조 중 어느 하나에 의해 분리될 수 있다. 상술한 조성물을 가진 HPLE 탄수화물은 단백질, 펩타이드 또는 유사한 화학 물질과 같은 주사 가능한 약물 제제, 또는 세포 배양 및 발효 보충제로서 사용되는 것을 포함하여 다수의 용도로 사용될 수 있지만, 이것에 제한되는 것은 아니다.

주 발명은 중합성 음이온 교환 수지, 바람직하게는 수크로오스, 갈락토오스 및 트레할로오스 2수화물의 정제용 폴리에틸렌이민 크로마토그래피의 수지를 사용하는 것에 관한 것이다. 본 발명에 의해서, 원당을 DI 수에 용해시키고 100-500 ㎎/㎖의 농축 범위로 100-500 ㎝/hour의 유속에서 폴리 PEI 수지와 같은 음이온 교환 수지로 패킹된 크로마토그래피 칼럼 상에 통과시켰다. 내독소 및 칼럼에 강하게 흡수되는 중성 pH에서 음으로 대전되어 있는 DNA 및 RNA와 같은 생물학적 불순물을 포함하는 다른 음이온 및 정제된 당 용액을 회수했다. 회수된 물질은 진공을 사용하여 가열 하에서 농축되고 에탄올을 첨가하여 수시간 동안 얼음에 머물게 했다. 하기 요인들: 1. 탄수화물의 농축 범위가 성공적인 결정화에 중요한 역할을 한다는 것을 예상하지 못했다. 탄수화물의 농축 범위는 500-800 ㎎/㎖에서 벗어난다. 수크로오스에 대한 바람직한 농축 범위는 750-800 ㎎/㎖이고, 갈락토오스는 600-700 ㎎/㎖이며, 트레할로오스 2수화물은 600-700 ㎎/㎖이다. 2. 알콜을 첨가하기 전에 농축된 용액의 온도. 알콜을 첨가하기 전에 농축된 용액의 농도는 10-60℃이다. 그러나, 바람직한 온도 범위는 24-60℃이고 가장 바람직한 온도는 40℃이다. 3. 알콜이 저온에서 첨가되는 경우, 첨가되는 알콜의 양은 유리 제품에 달라붙는 물질처럼 하드 캔디를 형성한다. 첨가되는 알콜의 부피는 농축된 용액의 부피에 대하여 2.5X~3.0X 범위이고, 바람직하게는 3.0X이다. 결정화된 물질을 여과에 의해 분리하고 에탄올로 세정하여 진공 하에서 건조한다. 또한, 정제된 용액은 분리를 위해 분무 건조될 수도 있다.

이러한 순도 레벨의 탄수화물 조성물을 얻는 것은 본 발명의 놀라운 이점이다. 크로마토그래피 정제 없이 직접 결정화, 및 중공 섬유 필터와 같은 탄수화물을 정제하는 다른 공지된 방법은 이러한 순도의 탄수화물 조성물을 생산할 수 없다. 비교예로서, 이 타입의 결정화의 공지된 정제 기술은 약 10 Eu/g과 같은 훨씬 높은 내독소 레벨을 가진 탄수화물 조성물을 생산하고, RNA, DNA 및 다른 음이온성 불순물과 같은 다른 미량의 불순물을 함유한다. 이와 같이, 본 발명의 공정에 의해 이러한 고순도의 레벨을 얻는 것만이 가능하다.

본 발명의 탄수화물 조성물은 주사, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 기관지경, 피하의, 피부밑, 관절내, 피막밑, 지주막하, 척수속 및 흉골내 주사와 주입을 포함하는 창자 및 국소 투여 이외의 방법에 의해 투여되는 약학 조성물을 포함하는 비경구적인 조성물과 같은 약학 조성물에 특히 유용하다.

특히, 활성 성분으로서 생물 제제를 포함하는 약학 조성물은 고순도의 탄수화물 조성물을 갖는 것이 매우 중요하다. 이들 탄수화물이 직접 주사(비경구적인 제제)를 통해 투여되는 단백질 제제에 사용되기 때문에 이것은 중요하다. 소량의 내독소 및 다른 불순물이 존재하더라도 생성물 순도, 생물학적 안전성, 유효 기간 및 환자 안전을 손상시킬 것이다.

그들의 천연 상태의 당과 탄수화물, 및 분리, 세련과 정제 후에 탄수화물과 당 사이에 다수의 주목할 만한 차이점이 있다. 가장 주목할 만한 것으로, 당의 결정화가 하나의 주요한 변형이다. 그러나, 세련 및 용이한 정제 후라도, 당은 본질적으로 이와 관련된 다수의 불순물을 갖는다. 이러한 불순물은 세균, 다양한 단백질, 내독소, 및 다양한 다른 식물에서 유래된 물질을 포함하지만, 이것에 제한되는 것은 아니다. 통상적으로, 불순물은 탄수화물과 함께 혼합물로 존재하고, 다양한 이온력, 및 불순물과 탄수화물 사이에 다른 결합력으로 인해 추출 공정을 통해 탄수화물과 함께 남아있게 된다. 이와 같이, 본 발명의 공정으로부터 얻어진 고순도의 탄수화물이 천연으로 존재하지 않는 물질의 신규한 조성물을 제공한다.

실시예

본 발명은 하기 대표예에 의해 더 예시되지만, 이것에 한정되는 것은 아니고, 이것은 본 발명을 설명하기 위한 것으로 이것에 한정되는 것으로서 해석되어서는 안된다.

실시예 1

300g의 사탕수수 수크로오스를 800 ㎖의 증류수(DI)에 용해하고 1L까지 DI 수를 첨가하여 희석시켰다. 당 용액을 0.45 미크론 필터를 통해 여과시키고 용액을 4 ㎖/min에서 새롭게 패킹된 PEI 칼럼(25.0×1.0 ㎝)에 통과시켰다. 용액의 내독소를 분석했다. 내독소 값은 그램당 7.4 내독소 단위(EU/g)~<0.1 EU/g으로 감소했다.

실시예 2

450g의 사탕무 수크로오스를 800 ㎖의 증류수(DI)에 용해하고 1L까지 DI 수를 첨가하여 희석시켰다. 당 용액을 0.45 미크론 필터를 통해 여과시키고 용액을 4 ㎖/min에서 새롭게 패킹된 PEI 칼럼(25.0×1.0 ㎝)에 통과시켰다. 용액의 내독소를 분석했다. 내독소 값은 그램당 7.0 내독소 단위(EU/g)~<0.1 EU/g으로 감소했다. 물질은 348 미크론의 평균 입자 크기로 자유 유동한다.

실시예 3

300g의 트레할로오스 2수화물을 800 ㎖의 DI 수에 용해하고 1L까지 DI 수를 첨가하여 희석시켰다. 당 용액을 0.45 미크론 필터를 통해 여과시키고 용액을 4 ㎖/min에서 새롭게 패킹된 PEI 칼럼(25.0×1.0 ㎝)에 통과시켰다. 용액의 내독소를 분석했다. 내독소 값은 19 EU/g~0.1 EU/g으로 감소했다.

실시예 4

300g의 갈락토오스를 800 ㎖의 증류수(DI)에 용해하고 1L까지 DI 수를 첨가하여 희석시켰다. 당 용액을 0.45 미크론 필터를 통해 여과시키고 용액을 4 ㎖/min에서 새롭게 패킹된 PEI 칼럼(25.0×1.0 ㎝)에 통과시켰다. 용액의 내독소를 분석했다. 내독소 값은 그램당 25.6 내독소 단위(EU/g)~<0.1 EU/g으로 감소했다.

실시예 5

정제된 당 용액을 700-800 ㎎/㎖로 농축하고 40℃-60℃로 냉각했다. 그 다음, 2x~3x 부피의 무수 알콜을 교반하면서 첨가했다. 비커 내용물이 실온에 도달하자마자, 비커를 간헐적 교반하면서 2~4시간 동안 0℃~20℃ 얼음 배스에서 냉각했다. 형성된 결정을 무수 알콜로 세정하고 4시간 동안 50℃에서 진공 하에서 건조했다. 이 절차를 사용하여 얻어진 결정은 자유 유동하고 80 미크론~500 미크론의 입자 크기 범위를 갖는다.

실시예 6

760 ㎎/㎖ 수크로오스는 프룩토오스 또는 덱스트로오스와 같은 환원당과 함께 첨가된 후, 결정화된다. 상기 요약된 통상적인 절차에 따라 1000 ppm 스파이크액으로부터 결정화된 고체 수크로오스는 환원당을 200 ppm 이하로 제거했다. 이 데이터는 결정화의 공정이 프룩토오스 및 덱스트오로스와 같은 소량(0.1%까지)의 환원당을 제거시킨다고 시사하고 있다.

실시예 7

7.5 kg 당(수크로오스)을 약 50 rpm 교반 속도에서 오버헤드 교반을 사용하여 교반 하에서 약 25L 정제수에서 용해하여 약 23%의 고형분을 갖는 용액을 생성했다. 오염되지 않은 용액을 얻을 때까지 용액을 교반했다. 그 다음, 얻어진 용액을 약 14000 rpm의 속도에서 크기 100 ㎜를 갖는 회전식 분무기가 장착된 분무 건조기를 사용하여 분무 건조했다. 약 149-151℃의 입구 온도, 약 100-180℃의 출구 온도 및 시간당 약 5L의 분무 속도는 분무 건조된 당을 생성하기 위해 유지되었다. 약 20-25%의 수율은 당 분무 건조 실험 완료 후에 얻어졌다.

따라서, 본 발명의 바람직한 실시형태인 것으로 현재 생각되고 있는 것을 기재하고 있지만, 당업자는 본 발명의 사상을 벗어나는 것 없이 그것에 변경 및 수정이 이루어질 수 있다는 것을 인식할 것이고, 이러한 모든 변경 및 수정이 본 발명의 진정한 범위 내에 속한다는 것을 주장하고자 한다.

Claims (20)

1. 고순도의 탄수화물 조성물의 제조방법으로서,
   i) 수용성 탄수화물 용액을 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시켜 정제된 용액을 얻는 단계; 및
   ii) 고순도의 탄수화물 조성물을 상기 정제된 용액으로부터 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 음이온 교환 수지는 폴리에틸렌이민(PEI)으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 분리 단계는 알콜로 결정화하는 단계, 또는 상기 정제된 용액을 분무 건조하는 단계 중 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
4. 제 3 항에 있어서, 상기 결정화하는 단계는 에탄올로 행해지는 것을 특징으로 하는 방법.
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 수용성 탄수화물 용액을 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시켜 정제된 용액을 얻기 전에 상기 수용성 탄수화물 용액의 여과 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
6. 제 1 항에 있어서,
   상기 얻어진 조성물은 식물에서 유래된 물질이 없는 무색 물질인 것을 특징으로 하는 방법.
7. 제 5 항에 있어서,
   상기 여과 단계는 상기 수용성 탄수화물 용액을 약 0.4 미크론~약 0.5 미크론의 공극 크기를 가진 필터에 통과시키는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
8. 제 1 항에 있어서,
   상기 고순도의 탄수화물 조성물은 수크로오스, 갈락토오스, 및 트레할로오스를 포함하는 탄수화물군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
9. 제 1 항에 있어서,
   상기 고순도의 탄수화물 조성물은 그램당 2.5 내독소 단위 미만의 내독소 레벨을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
10. 제 1 항에 있어서,
    상기 고순도의 탄수화물 조성물은 5 ppb 미만의 납과 같은 원소 불순물을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
11. 제 1 항에 있어서,
    상기 고순도의 탄수화물 조성물은 100 ppm 미만의 관련된 탄수화물 종, 바람직하게는 10 ppm 미만을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
12. 그램당 1 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖는 수용성 탄수화물 용액을 포함하는 고순도의 탄수화물 조성물로서,
    상기 고순도의 조성물은
    i) 수용성 탄수화물 용액을 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시켜 정제된 용액을 얻는 방법; 및
    ii) 고순도의 탄수화물 조성물을 상기 정제된 용액으로부터 분리시키는 방법으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
13. 제 12 항에 있어서,
    상기 수용성 탄수화물 용액은 그램당 .4 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
14. 제 12 항에 있어서,
    상기 수용성 탄수화물 용액은 그램당 .3 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
15. 제 12 항에 있어서,
    상기 수용성 탄수화물 용액은 그램당 약 .1 내독소 단위의 내독소 값을 갖는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
16. 제 12 항에 있어서,
    상기 수용성 탄수화물 용액은 폴리에틸렌이민(PEI) 크로마토그래피의 매개물을 포함하는 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시키는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
17. 제 15 항에 있어서,
    상기 수용성 탄수화물 용액은
    i) 알콜로 결정화하는 단계, 또는
    ii) 상기 정제된 용액을 분무 건조하는 단계 중 적어도 하나에 의해 더 분리되는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
18. 제 12 항에 있어서,
    상기 고순도의 탄수화물 조성물을 수크로오스, 갈락토오스, 및 트레할로오스의 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
19. 제 12 항에 있어서,
    상기 고순도의 탄수화물 조성물은 5 ppb 미만의 납과 같은 원소 불순물을 갖는 것을 특징으로 하는 고순도의 탄수화물 조성물.
20. 그램당 1 내독소 단위 미만의 내독소 값을 갖는 고순도의 탄수화물 조성물을 포함하는 약학 조성물용 제제 성분으로서,
    상기 고순도의 조성물은
    i) 수용성 탄수화물 용액을 음이온 교환 크로마토그래피 칼럼에 통과시켜 정제된 용액을 얻는 방법; 및
    ii) 고순도의 탄수화물 조성물을 상기 정제된 용액으로부터 분리시키는 방법으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 약학 조성물용 제제 성분.