KR20160124245A - 건조한 트랜스글루타미나제 조성물 - Google Patents

건조한 트랜스글루타미나제 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 건조한 트랜스글루타미나제 조성물에 관한 것이며, 상기 조성물은 트랜스글루타미나제, 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 동결건조 또는 분무건조함으로써 얻어질 수 있고, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위이다. 더 나아가서, 본 발명은 상기 건조한 트랜스글루타미나제 조성물의 제조방법, 복원된 용액, 약학 조성물, 및 치료방법에 관련된다.

Description

건조한 트랜스글루타미나제 조성물{DRY TRANSGLUTAMINASE COMPOSITION}
본 발명은 트랜스글루타미나제 조성물, 특히 혈액 응고 인자(Factor) XIII의 안정한 동결건조된 또는 분무건조된 조성물에 관한 것이며, 더 나아가서 본 발명은 상기 조성물의 제조방법, 복원된 용액, 약학 조성물, 및 치료방법에 관련된다.
트랜스글루타미나제는 글루타민의 측쇄 γ-카르복사미드기와 리신의 측쇄ε-아미노기 사이에 단백질에서의 이소펩티드의 형성을 촉매하는 Ca2 + 의존성 효소이다. 트랜스글루타미나제는 세포외에서 및 세포내에서 발견된다. 트랜스글루타미나제의 예들은 인자 XIII, 상피 트랜스글루타미나제, 타입 II 트랜스글루타미나제(조직형 트랜스글루타미나제, 간 트랜스글루타미나제), 및 타입 I 트랜스글루타미나제 (케라틴생성세포 트랜스글루타미나제).
혈액 응고 인자 XIII (FXIII)은 "피브리노리가제" 및 "피브린 안정화 인자"로도 알려진 혈장 트랜스글루타미나제이고 그것은 20 마이크로그램/ml의 농도로 혈장에서 순환한다. 이 단백질은 두개의 A 서브유닛과 두개의 B 서브유닛(A2B2)으로 구성되는 테트라머로서 혈장에서 존재한다. 각 서브유닛은 대략 80,000 Da의 분자량을 가지며, 완전한 단백질은 대략 330,000 Da의 분자량을 갖는다. A 서브유닛은 트랜스글루타미나제 촉매 부위를 함유하는 한편, B 서브유닛은 촉매 활성을 갖지 않으나 A 서브유닛을 클리어런스로부터 보호하는 구조 단백질로서 작용한다.
인자 XIII은 활성화를 위해 트롬빈 및 Ca2 +에 의존한다. 트롬빈은 A 서브유닛에서 Arg37의 C-말단 측에서 절단하여, 이로써 활성화 펩티드(A 서브유닛의 잔기 1-37) 및 B 서브유닛을 방출하고 A2 다이머의 활성형태를 남긴다. 활성화된 FXIII A2 서브유닛(FXIIIa)은 FXIII의 촉매학적 활성형태이다.
FXIII 효소는 응고 캐스케이드에서 활성화할 마지막 효소이고 α- 및 γ-피브린 사슬을 가교결합하는 기능을 하여, 피브린용해(fibrinolysis)에 대한 증가된 저항성을 갖는 더 강한 응고물(clot)을 가져온다. 더 나아가서 수많은 항피브린용해, 전지혈 및 접착성 단백질이 응고물에 가교결합되어 이로써 플라스민 및 다른 단백질분해 효소에 의한 용해에 증가된 기계적 저항성을 갖는 강한 피브린 구조를 제공한다.
상업적으로 이용가능한 정제된 또는 부분적으로 정제된 트랜스글루타미나제 또는 인자 XIII 제제는, 많은 경우에, 사람 혈청 알부민(HSA)과 같은 첨가된 안정화제를 함유한다. 단백질 안정화제의 사용은 그것이 단백질 특이적 활성을 감소시키고, 환자에 투여했을 때 단백질 부하를 증가시키고 순도의 산정을 방해할 수도 있기 때문에 문제가 있다. 그것은 또한 단백질 제제를 면역원성이 되게 할 수도 있다. 단백질 안정화제의 이들 단점은 재조합 단백질과 같은 고도로 정제된 단백질을 안정화시키는데 특히 불리하다. 추가로, 단백질 안정화제의 사용은 예를 들어서, 알부민이 첨가될 때 바이러스 항원으로 잠재적인 오염을 야기한다.
태반 또는 혈장으로부터 분리된, 또는 신선한 동결된 혈장의 형태의 FXIII은 인자 XIII 결핍증의 치료에 다년간 사용되어왔다. 이들 조제물은, 그러나, 원하지 않는 면역원성과 같은 거기에 연관된 모든 문제들과 함께 이물 단백질을 함유하는 단점을 겪는다.
이제 재조합 DNA 기술을 사용하여 트랜스글루타미나제 및 인자 XIII을 제조하는 것이 가능하다. 여기서 사용된 바와 같이, rFXIII은 재조합 인자 XIII을 말한다. 그러나, 오늘까지 시중에서 상업적으로 이용가능한 rFXIII 제품은 없다.
치료법에 사용되는 단백질 제제의 조성 및 활성은 비교적 장기간에 걸쳐 안정해야 한다. 용액에서 이 안정성을 달성하는 것이 단지 드믈게 가능하며, 그러므로 이러한 제품은 빈번히 건조한 상태로 판매된다. 온화한 동결건조(lyophilization)는 이러한 제품을 건조시키는 선택의 여지가 있는 방법 중 한가지이다. 그러나, 이 방법이 사용될 때 조차도, 일체성 및 내구성에 대한 요건을 충족시키는 안정한 제제는 달성하기 어렵다.
트랜스글루타미나제 또는 인자 XIII 용액의 동결건조는 예를 들면, 활성의 현저한 저하 및 순도의 상실을 가져올 수도 있다. 예를 들면, 인자 XIII의 동결건조에 대한 더이상의 문제는 인자 XIII의 분해 생성물, 사전활성화된 인자 XIII으로도 불리는 소위 비단백질분해 활성화된 종(FXIIIa0)의 분해 생성물에 의해 조장된다. FXIIIa0는 심각한 독성 위험을 제기하는 것으로 생각되며 이것의 주사는 잠재적으로 원하지 않는 부작용을 야기할 수도 있다. 그러므로 트랜스글루타미나제 또는 인자 XIII 조제물을 비단백질분해 활성화된 생성물의 형성에 대해 안정화시키는 것이 바람직하다.
여러가지 건조한 FXIII 조성물이 종래기술에서 알려져 있다. 이하에 동결건조된 FXIII 조성물의 개시내용의 예들이 개시되어 있다. WO2002/36155는 동결건조된 FXIII 조성물이 1mM EDTA, 10 mM 글리신, 물 중의 2% 수크로스로, 또는 20 mM 히스티딘, 3% wt/vol 수크로스, 2 mM 글리신, 및 0.01% wt/vol 폴리소르베이트, pH 8.0로 조제될 수 있다는 것을 기술한다. US 6204036(Aventis Behring)은 D- 및 L-아미노산 및 그것의 염, 유도체, 상동체 및 다이머, 당 및 당 알콜, 표면 활성 성분, 및 환원제의 군으로부터 선택된 적어도 한가지의 첨가제를, 첨가제가 글리신이나 아르기닌이 아니라는 조건하에 포함하는 안정한 동결건조된 트랜스글루타미나제 조제물에 관련되며, 조제물은 단백질 안정화제를 함유하지 않고 상기 조제물은 비경구 투여에 적합한 수성 용매에서 어떤 혼탁 없이 용해성이다.
상기한 이들 조제물은, 그러나 이들 조제물의 임상적 및 상업적 가능성에 대한 장애물로 생각되는 높은 수준의 비단백질분해 활성화된 인자 XIII의 단점을 겪을 수 있다. 그러므로, 낮은 수준의 비단백질분해 활성화된 생성물을 갖는 안정한 건조한 트랜스글루타미나제 및 인자 XIII 조제물은 크게 바람직하다는 것이 명백하다. 더 나아가서, 이러한 조제물은 단백질 안정화제, 예를 들면 HSA의 첨가를 요하지 않아야 한다.
발명의 개요
본 발명은 염, 예를 들면 1가 염은 건조한 트랜스글루타미나제, 예를 들면 인자 XIII 조성물에 순도 및 사전활성화된 트랜스글루타미나제의 형성에 관하여 상당한 안정화 효과를 초래한다는 놀라운 발견에 기초한다. 이 효과는 건조한 상태에 특이적인 것으로 나타나며 안정한 상업적 제품을 제조하는데 특별한 중요성을 갖는다.
한 양태에서, 본 발명은 건조한 트랜스글루타미나제 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 트랜스글루타미나제, 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 동결건조 또는 분무건조함으로써 얻어질 수 있는데, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위이다.
더 이상의 양태에서, 본 발명은 상기 건조한 트랜스글루타미나제 조성물의 제조 방법, 복원된 용액, 약학 조성물, 및 치료방법을 제공한다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 다음의 상세한 설명으로부터 명백할 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적인 실시예들은 본 발명의 바람직한 구체예를 가리키면서 단지 예시로써만 주어지는데, 본 발명의 개념과 범위 내에서 여러가지 변화 및 수정이 이 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백할 것이기 때문이다.
도 1: 수크로스 및 NaCl 수준의 평가. 40℃에서 보관된 샘플의 AIE-HPLC 순도에 대한 25mM NaCl의 효과의 Modde 분석.
도 2: NaCl 및 히스티딘 수준의 완전 요인(full factorial) 연구. 25℃ rFXIIIa0 데이터의 Modde 분석.
도 3: NaCl 및 히스티딘 수준의 완전 요인 연구. AIE-HPLC 순도 데이터의 Modde 분석.
정의
본 발명과 관련하여, 용어 "사전활성화된" 또는 "비단백질분해 활성화된" 트랜스글루타미나제는 예를 들어서 인자 XIII이 트롬빈(트롬빈은 FXIII을 단백질분해로 절단하는 능력을 갖는다)의 존재 없이 활성화될 때 비단백질분해 활성화된 트랜스글루타미나제를 말하며, 그것은 비단백질분해 활성화된다고 한다; 참고문헌으로는, 예를 들면, Polgar J., et al. Biochem J 1990; 267: 557-60. Muszbek L., et al. Thrombosis Research 94 (1999) 271-305 참조. 비단백질분해 활성화된 인자 XIII (FXIII0)은 FXIII의 분해 생성물인데, 이 분해 생성물이 심각한 독성 위험을 제기하는 것으로 생각되기 때문에 약학적 FXIII 조성물의 생존력에 위협이 되고 있다.
여기서 사용된 용어 "생물학적으로 활성"은 의료, 농업 또는 화장품 활성과 같은 생명체에서 활성을 갖는 것을 의미한다.
본 발명과 관련하여, 용어 "수성 조성물"은 액체 물을 포함하는 조성물을 말한다. 이러한 조성물은 전형적으로 용액 또는 현탁액이다. 본 발명의 문맥에서 사용된 용어 "수성 조성물"은 적어도 50중량%(w/w)의 물을 포함하는 조제물을 말한다.
본 발명과 관련하여, 용어 "희석제"는, 액체 용액 또는 현탁액을 말한다. 본 발명의 문맥에서 사용된 용어 "희석제"는 적어도 50중량%(w/w)의 물을 포함하는 용액 또는 현탁액을 말한다. 본 발명의 문맥에서 희석제는 건조한 트랜스글루타미나제 조성물의 복원에 사용된다.
여기서 인용된 간행물, 특허출원, 및 특허를 포함하는 모든 참고문헌은 그 전체가 참고로 포함되며 각 참고문헌은 참고로 포함되는 것으로 개별적으로 구체적으로 표시되고 그 전체가 여기에 제시된 것처럼(법이 허용하는 최대 한도로) 같은 정도로 포함된다.
모든 제목 및 부제목들이 여기서 단지 편의상 사용되며 어떤 식으로든 본 발명을 제한하는 것으로서 해석되어서는 안된다.
여기서 제공된 어떤 실시예 및 모든 실시예, 또는 예시 언어(예를 들면 "과 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 조명하는 것을 의도하며 달리 특허청구되어 있지 않은 한 본 발명의 범위에 제한을 제기하지는 않는다. 명세서에서의 언어는 본 발명의 실시에 필수적인 만큼 어떤 청구되지 않은 요소를 가리키는 것으로서 해석되어서는 안된다.
여기서 특허 문서의 인용 및 포함은 단지 편의상 행해지며 이러한 특허 문서의 유효성, 특허성, 및/또는 시행성의 어떤 관점으로도 반영하지 않는다.
본 발명은 적용 법이 허용하는 것으로서 여기 첨부된 특허청구범위에 열거된 주제의 모든 변형 및 등가물을 포함한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 트랜스글루타미나제 조성물, 특히 혈액 응고 인자(Factor) XIII(FXIII)의 안정한 동결건조된 또는 분무건조된 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 상기 건조한 트랜스글루타미나제 조성물의 제조방법, 복원된 용액, 약학 조성물, 및 치료방법을 제공한다.
본 발명은 트랜스글루타미나제 생성물의 제조 공정, 보관 및 사용 중 기간을 통해 허용가능하게 남아 있는 순도의 수준 및 사전활성화의 수준을 갖는 트랜스글루타미나제, 예를 들면 인자 XIII을 포함하는 생성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 사전활성화의 수준에 관해서 및 전체 순도에 관해서 개선된 안정성을 제공하는데, 건조한 트랜스글루타미나제 조성물을 포함하고, 상기 조성물은 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 동결건조 또는 분무건조함으로써 얻어질 수 있고, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위이다.
한 구체예에서, 본 발명의 건조한 조성물은 건조한 트랜스글루타미나제 조성물을 포함하고, 상기 조성물은 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 동결건조 또는 분무건조함으로써 얻어질 수 있으며, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위이고, 단, 조성물은 0.5% NaCl 및 2.25% 글리신을 함유하는 인자 XIII 용액을 동결건조함으로써 얻어진 건조한 인자 XIII 조성물은 아니다.
한 구체예에서, 본 발명의 건조한 조성물은 알부민과 같은 어떤 단백질 안정화제를 함유하지 않는다.
이하 기술되는 구체예 및 실시예는 주로 재조합 FXIII (rFXIII)의 조성물을 기술하고 개시하나, 본 발명은 이들 구체예 및 실시예에 제한되지 않고, 현재 공지인 또는 앞으로 개발되는 어떤 트랜스글루타미나제의 조성물에도 적용될 수 있다.
조성물의 성분
본 발명의 조성물은 트랜스글루타미나제를 포함한다. 본 발명의 조제물에 의해 안정화될 수 있는 트랜스글루타미나제의 예들은 인자 XIII, 상피 트랜스글루타미나제, 타입 II 트랜스글루타미나제(조직형 트랜스글루타미나제, 간 트랜스글루타미나제), 및 타입 I 트랜스글루타미나제(케라틴생성세포 트랜스글루타미나제)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
인자 XIII
한 구체예에서, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물은 인자 XIII 화합물을 포함한다. 인자 XIII 화합물은 예를 들어서 자연 발생 야생형 인자 XIII 및 인자 XIII의 자연발생 대립유전자 변이체일 수 있다. 이들 FXIII 화합물은 예를 들어서 사람 또는 다른 동물 공급원, 예를 들면 사람 FXIII, 돼지 FXIII 및 소 FXIII으로부터 유래할 수 있다. 사람 인자 XIII의 야생형 서열은 예를 들어서 EP 268772 및 EP 236978에서 찾아볼 수 있다. 본 발명의 인자 XIII 화합물은, 완전한 인자 XIII 지모겐 테트라머(A2B2) 및 인자 XIIIa, 뿐만아니라 A 서브유닛을 포함하는 그것의 서브유닛 및 A2 다이머를 포함한다.
본 발명의 인자 XIII 화합물은 예를 들어서 야생형 인자 XIII의 특징적인 가교결합 활성의 적어도 일부를 보유하는 인자 XIII의 생물학적 활성 단편, 유도체 또는 변이체일 수 있다. 이 가교결합 활성은 본 분야에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다.
일부 구체예에서는, 인자 XIII의 생물학적 활성 단편, 유도체 또는 변이체는 야생형 인자 XIII의 가교결합 활성의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 를 보유한다.
인자 XIII의 단편, 유도체 및 변이체는 치환, 삽입 및 결실 변이체를 포함한다. 삽입 변이체는 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입 뿐만아니라 아미노 및/또는 카르복실 말단 융합을 포함한다. 삽입은 예를 들어서 야생형 인자 XIII 단백질의 성숙한 코딩 서열 내에 도입될 수 있다. 결실 변이체는 야생형 인자 XIII 단백질로부터 하나 이상의 아미노산 잔기의 제거를 특징으로 한다. 이들 변이체는 보통 단백질을 코드화하는 DNA 에서 뉴클레오티드의 부위 특이적 돌연변이하여, 이로써 변이체를 코드화하는 DNA를 생산하고, 그 후 재조합 세포 배양물에서 DNA를 발현함으로써 제조된다. 그러나, 변이체 단백질 단편은 또한 시험관내 합성에 의해 제조될 수도 있다. 아미노산 서열 변동을 도입하는 부위가 통상 사전결정되는 한편, 돌연변이 자체는 사전결정되는 것이 필요하지 않다. 예를 들면, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 최적화하기 위해, 랜덤 돌연변이가 표적 코돈 또는 영역에서 행해질 수 있고 발현된 단백질 변이체는 원하는 활성의 최적 조합에 대해 스크리닝되었다. 공지의 서열을 갖는 DNA에서의 사전결정된 부위에서 치환 돌연변이를 하는 기술은 잘 공지되어 있고, 예를 들면, M13 프라이머 돌연변이이다. 치환 돌연변이는 적어도 하나의 잔기 서열이 제거되고 다른 잔기가 그 자리에 삽입된 것들이다. 아미노산 치환은 전형적으로 단일 잔기이고; 삽입은 보통 1 내지 10개 아미노산 잔기 정도일 것이며; 결실은 약 1 내지 30 잔기의 범위일 것이다. 결실 또는 삽입은 예를 들어서 인접 쌍들로, 즉 2개 잔기의 결실 또는 2개 잔기의 삽입으로 행해질 수 있다. 치환, 결실, 삽입 또는 그것들의 어떤 조합을 조합하여 최종 구조물에 도달할 수도 있다. 명백하게, 변이체 단백질을 코드화하는 DNA에서 행해지게 되는 돌연변이는 판독 프레임 밖으로 서열을 두지 않아야 하며 바람직하게는 2차 mRNA 구조물을 생산할 수 있는 상보 영역을 조장하지 않을 것이다. 인자 XIII의 유전공학처리된 변이체의 예는 야생형 사람 인자 XIII의 Val34Leu 변이체(즉, 야생형 사람 인자 XIII의 아미노산 서열의 위치 34에서 Val 잔기가 류신 잔기에 의해 대치되는 변이체)이다.
본 발명의 인자 XIII은 인자 XIII을 자연적으로 생산하는 세포와, 또한 인자 XIII을 코드화하는 DNA로 형질전환된 효모 세포와 같은 인자 XIII을 생산하도록 유전적으로 변경된 세포의 용해물, 균질물 또는 추출물을 포함하는 크게 다양한 생물학적 물질로부터 정제될 수 있다. 인자 XIII을 정제하는 방법의 예는 WO/2006/021584에 개시되어 있다.
본 발명의 인자 XIII은 예를 들어서, 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 재조합 인자 XIII을 제조하는 방법은 본 분야에서 공지이다. 예를 들면, Davie et al., EP 268.772; Grundmann et al., AU-A-69896/87; Bishop et al., Biochemistry 1990, 29: 1861-1869; Board et al., Thromb. Haemost. 1990, 63: 235-240; Jagadeeswaran et al., Gene 1990, 86: 279-283; 및 Broker et al., FEBS Lett. 1989, 248: 105-110 참조. 한 구체예 내에서, 인자 XIII A2 다이머는 미국 특허출원 일련번호 07/741,263에서 개시된 바와 같이 효모 Saccharomyces cerevisiae 에서 세포질에서 제조된다. 세포는 수집 및 용해되고, 투명 용해물이 제조된다. 용해물은 DEAE Fast-Flow SepharoseTM (Pharmacia) 등과 같은 유도체화된 아가로스의 컬럼을 사용하여 중성 내지 약간 알칼리성 pH에서 음이온 교환 크로마토그라피에 의해 분별된다. 인자 XIII은 다음에, 숙신산암모늄 완충액에 대한 정용여과(diafiltration)에 의해서와 같이, 용출물을 농축하고 pH를 5.2-5.5로 조절함으로써 컬럼 용출물로부터 침전시킨다. 다음에 침전을 용해시키고 또한 겔 여과 및 소수성 상호작용 크로마토그라피와 같은 종래의 크로마토그라피 기술을 사용하여 정제한다.
본 발명의 한 구체예에서, 인자 XIII은 재조합 인자 XIII이다. 본 발명의 한 구체예에서, 인자 XIII은 사람 인자 XIII이다. 본 발명의 한 구체예에서, 인자 XIII은 재조합 사람 인자 XIII이다. 본 발명의 한 구체예에서, 인자 XIII은 A 서브유닛의 다이머이다.
동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물에서 인자 XIII의 농도는, 예를 들면 넓은 범위로 다양할 수 있고, 한 구체예에서는 0.003-100 mg/ml의 범위이고, 더 이상의 구체예에서는 1-30 mg/ml의 범위이고 더욱 더 이상의 구체예에서는, 2-15 mg/ml의 범위이다.
염
본 발명의 수성 조성물은 염 또는 염의 혼합물을 포함한다. 염은 사전활성화에 관해서 및 전체 순도에 관해서 건조한 조성물의 안정성을 개선하기 위해 사용된다. 본 발명의 희석제는 예를 들어서 염 또는 염들의 혼합물을 포함한다. 일부 구체예에서는 염은 1가 염이다. 예를 들어서 사용될 수 있는 1가 염의 예들은 염화나트륨, 염화칼륨, 아세트산나트륨, 황산나트륨, 글루콘산나트륨 및 이들의 혼합물을 포함하나 이들에 제한되지 않는다. 일부 구체예에서 염은 2가 염이다. 일부 구체예에서 염은 2가 염이 Ca(II) 염은 아닌 조건으로 2가 염이다.
사용된 염, 예를 들면 NaCl의 농도는 일정한 범위 내에서 다양할 수 있고, 한 구체예에서는 5-100 mM의 범위이고, 더 이상의 구체예에서는 5-99 mM, 7-95 mM, 8-90 mM, 10-80 mM, 15-70 mM, 25-75 mM, 및 20-60 mM의 범위이고 더욱 더 이상의 구체예에서는 25-50 mM의 범위이다.
당 및 당 알콜
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물은 한가지 이상의 당 또는 당 알콜을 포함한다. 건조된 조성물의 복원을 위해 사용되는 희석제는 예를 들어서 한가지 이상의 당 또는 당 알콜을 포함할 수 있다. 당 또는 당 알콜은 물리적/화학적 탈안정화 효과(예를 들면 풀림)을 방지하기 위해 동결건조의 동안에 본 발명의 건조한 조성물에서 단백질을 안정화시키기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어서 사용될 수 있는 당 또는 당 알콜의 예들은 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 락토스, 말토스, 소르비톨, 라피노스, 덱스트린, 시클로덱스트린, 및 그의 유도체, 상동체, 및 그의 혼합물을 포함하나 이들에 제한되지 않는다.
사용되는 당 또는 당 알콜의 농도는 예를 들면 넓은 범위로 다양할 수 있고, 한 구체예에서는 0.1-15% (w/w)의 범위이고, 더 이상의 구체예에서는 0.1-8.5% (w/w)의 범위이고, 더욱 더 이상의 구체예에서는, 0.5-5.0% (w/w)의 범위이다.
아미노산
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물은 한가지 이상의 아미노산을 포함한다. 본 발명의 일부 구체예에서는, 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 한가지 이상의 아미노산을 포함한다. 아미노산은 예를 들어서 동결건조 또는 분무건조된 조성물의 안정성을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 한 구체예에서, 한가지 이상의 아미노산이 조성물의 보관 동안에 트랜스글루타미나제, 예를 들면 FXIII의 응집물 형성을 감소시키기 위해 사용된다. 아미노산의 예들은 글리신, 히스티딘, 아르기닌, 글루탐산, 메티오닌, 트레오닌, 리신, 알라닌, 이소류신, 및 시스테인(Gly, His, Arg, Glu, Met, Thr, Lys, Ala, Ile, 및 Cys) 및 그의 염, 유도체, 상동체, 다이머, 올리고머, 및 그의 혼합물을 포함하나 이들에 제한되지 않는다.
적합한 유도체 및 상동체는 잘 공지되어 있다. 적합한 유도체는 카르복실기의 에스테르, 티오에스테르, 및 아미드; 우레탄 유도체를 포함하는 아미노기의 아실화된 유도체; 그리고 측쇄 작용기의 에스테르, 아미드, 및 에스테르를 포함하나 이들에 제한되지 않는다. 적합한 상동체는 예를 들면, 오르니틴(리신의 상동체), 호모세린, 및 α-아미노부티르산을 포함한다. 생리학적으로 허용되는 염도 또한 본 분야에 잘 공지되어 있고, 예를 들면, Remington's Pharmaceutical Science: Drug Receptors and Receptor Theory, (18th ed.), Mack Publishing Co., Easton Pa. (1990)에 기술되어 있다.
사용되는 아미노산의 농도는 예를 들어서 0.01-10% (w/w)의 범위, 또는 0.1-3% (w/w)의 범위일 수 있다.
완충액
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 완충액을 포함한다. 완충액은 소량의 산 또는 염기가 첨가되는 용액의 pH에 있어서 상당한 변화를 방지할 수 있고 이로써 용액의 원래의 산도 또는 염기도를 크게 유지할 수 있는 물질을 포함하는 용액이다. 완충액은 보통 약산 또는 약염기를 그것의 염과 함께 포함한다.
수성 조성물의 pH는 2 내지 10, 특히 7 내지 8의 범위일 수 있다. 2 내지 10의 범위의 pH를 갖는 상기한 아미노산 또는 완충액은 완충작용을 실행하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어서 사용될 수 있는 완충액의 예들은 아세트산염 완충액, 탄산염 완충액, 시트르산염 완충액, 글리실글리신 완충액, 히스티딘 완충액, 글리신 완충액, 리신 완충액, 아르기닌 완충액, 인산염 완충액(예를 들면 인산이수소나트륨, 인산수소이나트륨 또는 인산삼나트륨을 함유함), TRIS [트리스(히드록시메틸)아미노메탄] 완충액, 바이신 완충액, 트리신 완충액, 말레산염 완충액, 숙신산염 완충액, 말레산염 완충액, 푸마르산염 완충액, 타르타르산염 완충액, 아스파르트산염 완충액, 및 그의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구체예에서, 시트르산염 완충액, 히스티딘 완충액, 인산나트륨 완충액, 숙신산염 완충액, 및 TRIS 완충액이 사용된다. 한 구체예에서는, 히스티딘이 사용된다.
사용되는 완충액의 농도는 예를 들어서 0-50 mM의 범위, 또는 0-25 mM의 범위일 수 있다.
기타 성분들
한가지 이상의 기타 성분들이 또한 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제에 포함될 수 있다. 이러한 추가의 성분들은 비이온성 계면활성제, 환원제, 킬레이트제, 산화방지제, 보존제, 습윤제, 유화제, 벌크제, 등장화제(등장성 조절제), 유성 부형제, 단백질(예를 들면, 사람 혈청 알부민, 젤라틴 또는 기타 단백질) 및 양쪽이온성 물질(예를 들면, 베타인, 타우린 또는 아르기닌, 글리신, 리신 또는 히스티딘과 같은 아미노산)을 포함하나 이들에 제한되지 않는다. 이러한 추가의 성분들은 물론, 본 발명의 수성 조성물 또는 건조한 조성물의 전체적인 안정성에 불리하게 영향을 미치지 않아야 한다. 이점에 있어서, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995 참조.
비이온성 계면활성제
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 비이온성 계면활성제를 포함한다. 이온성 계면활성제는 단백질을 임계 표면(예를 들면, 패키징, 고형물)으로부터 차단시킴으로써 효과를 발휘하는 표면 활성제이다. 이온성 계면활성제는 예를 들어서 동결건조 또는 분무건조된 조성물의 안정성을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어서 사용될 수 있는 비이온성 계면활성제의 예들은 Tween 80, Tween 20, PEG, 아세틸알콜, PVP, PVA, 라놀린 알콜, 소르비탄 모노올레에이트, 폴록사머, 및 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 구체예에서, Tween 20이 사용된다.
사용되는 비이온성 계면활성제의 농도는 예를 들어서 0.00001-5% (w/w)의 범위, 또는 0.0002% 내지 0.1% (w/w)의 범위일 수 있다.
환원제
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 환원제를 포함한다. 산화방지제와 같은 환원제가 단백질을 불안정화시킬 수 있는 자유라디칼을 제거하기 위해 사용된다. 예를 들어서 사용될 수 있는 환원제의 예들은 시스테인, N-아세틸-시스테인, 티오글리세롤, 황화나트륨, 토코페롤, 및 글루타치온을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
킬레이트제
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 킬레이트제를 포함한다. 킬레이트제는 조제물로부터 금속(철, 구리)을 제거하기 위해 사용되며 보통 금속-촉매작용 반응으로부터 단백질을 보호하는 경향이 있다. 예를 들어서 사용될 수 있는 킬레이트제의 예들은 EDTA, 시트르산, 및 아스파르트산의 염, 및 그의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 한 구체예에서, 킬레이트제는 0.1mg/ml 내지 5mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 한 구체예에서, 킬레이트제는 0.1mg/ml 내지 2mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 이상의 구체예에서 킬레이트제는 2mg/ml 내지 5mg/ml의 농도로 존재한다.
산화방지제
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 산화방지제를 포함한다. 한 구체에에서, 수성 조성물은, 메티오닌 잔기를 그것들의 술폭사이드 형태로의 산화를 억제하기 위해, 트랜스글루타미나제, 예를 들면 FXIII이 이러한 산화에 민감한 적어도 하나의 메티오닌 잔기를 포함하는 폴리펩티드일 때 메티오닌(또는 또 다른 황함유 아미노산 또는 아미노산 유사체)을 포함한다. 용어 "산화를 억제하는"은 시간에 걸친 (메티오닌의) 산화된 종의 축적의 최소화를 가리키는 것을 의도한다. 메티오닌 산화의 억제는 폴리펩티드의 그것의 적당한 분자 형태로의 더 큰 유지를 가져온다. 메티오닌의 어떤 입체이성질체(L, D 또는 DL 이성질체) 또는 이들의 조합이 예를 들어서 사용될 수 있다. 첨가할 양은 메티오닌의 술폭시드 형태의 양이 조정 당국에서 허용하도록 하는 메티오닌 잔기의 산화를 억제하기에 충분한 양이어야 한다. 전형적으로, 이것은 조성물이 약 10% 내지 약 30% 이하의 메티오닌 술폭시드 형태를 함유한다는 것을 의미한다. 이것은 예를 들어서 일반적으로 첨가된 메티오닌 대 메티오닌 잔기의 몰비가 약 1:1 내지 약 1000:1, 예를 들면 10:1 내지 약 100:1 범위이도록 하는 양으로 메티오닌을 첨가함으로써 달성될 수 있다.
보존제
본 발명의 일부 구체예에서는, 동결건조 또는 분무건조할 수성 조성물, 및/또는 건조된 조성물의 복원에 사용되는 희석제는 보존제를 포함한다. 보존제는 수회 투여량 용기에 규제 요건을 위해 첨가될 수 있다. 보존제는 바이알로부터 수회투여량 회수의 동안에 미생물 오염으로부터 보호하기 위한 항미생물제로서 사용된다. 예를 들어서 사용될 수 있는 보존제의 예들은 페놀, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 클로로크레졸, 메틸 p-히드록시벤조에이트, 에틸 p-히드록시벤조에이트, 프로필 p-히드록시벤조에이트, 부틸 p-히드록시벤조에이트, 2-페녹시에탄올, 2-페닐에탄올, 벤질알코올, 클로로부탄올, 티오메로살, 브로노폴, 벤조산, 이미드우레아, 클로로헥시딘, 소듐 데히드로아세테이트, 벤제토늄 클로라이드, 클로르페네신 (3-p-클로르페녹시프로판-1,2-디올) 및 이것들의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 보존제는 예를 들어서 0.1 mg/ml 내지 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서 보존제는 0.1 mg/ml 내지 5 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 이상의 구체예에서 보존제는 5 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서 보존제는 10 mg/ml 내지 20 mg/ml의 농도로 존재한다.
당업자는 단지 일상적인 실험으로, 본 발명의 건조한 조성물 또는 수성 조성물에서 한가지 이상의 첨가된 성분들의 안정성, 사전활성화 및 순도에 대한 효과를 분석하기 위해 이하에 기술되는 방법을 사용할 수 있을 것이다.
건조한 조성물 - 분말
동결건조 또는 분무건조 후 본 발명의 조성물은 건조한 형태일 것이다. 본 발명의 건조한 조성물은 예를 들어서 고체, 분말 또는 과립상 물질일 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 건조한 조성물은 분말이다. 이 건조된 조성물에서 잔류 습기의 수준은 보관 동안에 건조한 트랜스글루타미나제, 예를 들면 FXIII의 안정성을 위해 중요하다. 본 발명의 한 구체예에서, 건조한 조성물은 3% 미만의 잔류 습기를 함유한다. 더 이상의 구체예에서, 건조한 조성물은 1% 미만의 잔류 습기를 함유한다.
건조 기술 및 복원
본 발명의 수성 조성물의 동결건조 및 분무건조는 당업자들에게 잘 알려진 동결건조 및 분무건조 방법을 사용하여 수행될 수 있다: 동결건조에 대해서는, 예를 들면, Williams and Polli (1984), J. Parenteral Sci . Technol. 38:48-59 참조. 분무건조에 대해서는, 예를 들면, Masters in Spray-Drying Handbook (5th ed; Longman Scientific and Technical, Essex, U.K., 1991), pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel . Ind . Pharm. 18:1169-1206; 및 Mumenthaler et al. (1994) Pharm . Res. 11:12-20 참조. 공기중 건조와 같은 다른 건조 기술도 또한 사용될 수 있다. Carpenter and Crowe (1988), Cryobiology 25:459-470; 및 Roser (1991) Biopharm. 4:47-53 참조.
본 발명과 관련하여, 동결건조 및 분무건조를 참고할 때, 다른 건조 기술들이 사용될 수 있다는 것이 또한 생각된다. 예를 들면, 본 발명과 관련하여, "동결건조 및 분무건조할 수성 조성물"이라는 표현은 또한 "다른 건조 기술로 건조할 수성 조성물"을 포함하는 것을 의미한다.
한 구체예에서, 본 발명의 건조한 조성물은 동결건조에 의해 얻어진다. 동결건조 공정은 전형적으로 다음 단계들: 동결 단계, 일차 건조 단계 및 이차 건조단계를 포함한다. 동결 단계에서, 수성 조성물은 냉각된다. 동결 단계의 온도 및 지속기간은 조성물 중의 모든 성분들이 완전히 동결되도록 선택된다. 예를 들면, 적합한 동결 온도는 대략 -40℃이다. 일차 건조 단계에서, 동결의 동안에 형성된 얼음은 진공하에서 주위온도 아래의 온도에서 승화에 의해 제거된다. 예를 들면, 승화를 위해 사용된 챔버 압력은 예를 들어서 약 40 mTorr 내지 400 mTorr일 수 있고, 온도는 예를 들어서 -30℃ 내지 -5℃일 수 있다. 일차 건조 후, 승화에 의해 제거될 수 없는 어떤 잔류량의 액체는 이차 건조, 즉 탈착에 의해 제거된다. 이차 건조 동안의 온도는 주위 온도 근처이거나 그 보다 높다.
본 발명의 한 구체예에서, 어닐링(가열 단계)은 동결건조 동안에 동결 단계에서 도입된다. 이 가열은 조제물의 빙점보다 아래의 온도로 수행된다. 이 어닐링(가열 단계)는 또한 본 발명의 건조한 조성물을 안정화시킬 수 있다.
복원
원하는 단계에서, 예를 들어서 트랜스글루타미나제, 예를 들면 FXIII을 환자에게 투여할 시기일 때, 본 발명의 건조한 조성물은 희석제로 복원시킨다. 복원은 일반적으로 완전한 수화를 보장하기 위해 약 25℃의 온도에서 일어나나, 원함에 따라 다른 온도가 사용될 수도 있다. 복원에 요구되는 시간은 예를 들어서, 희석제의 유형, 트랜스글루타미나제의 양 및 다른 성분들에 의존할 것이다.
본 발명의 한 구체예에서, 희석제는 증류수이다. 예를 들면 증류수를 사용하는 것이, 별도의 맞춤 희석제를 제조할 필요가 없기 때문에 유리할 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 희석제는 에탄올이다.
본 발명의 한 구체예에서, 희석제는 예를 들어서 염, 당, 아미노산, 완충액, 비이온성 계면활성제, 환원제, 킬레이트제, 산화방지제, 보존제, 습윤제, 유화제, 벌크제, 등장화제, 유성 부형제, 단백질(예를 들면, 사람 혈청 알부민, 젤라틴 또는 기타 단백질) 및 양쪽이온성 물질을 포함할 수 있다. 어느 성분을 희석제에 포함시킬 것인지와 이들 성분의 양은 이들 성분들에 의해 달성할 원하는 효과에 의해 지배된다. 희석제의 예들은 주사용 정균수(BWFI), a pH 완충된 용액 (예를 들면 인산염 완충 식염수), 멸균 식염수 용액, 및 덱스트로스 용액을 포함하나, 이들에 제한되지 않는다.
복원된 용액에서 단백질 농도는 적어도 5 mg/ml, 예를 들면 약 10 mg/ml 내지 약 400 mg/ml, 약 20 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 또는 약 30 mg/ml 내지 약 150 mg/ml이다. 복원된 용액에서 높은 단백질 농도는 복원된 용액의 피하 전달이 의도되는 경우 특히 유용하다. 그러나, 정맥내 투여와 같은 다른 투여 경로에 대해, 복원된 용액에서 단백질의 더 낮은 농도가 요구될 수 있다(예를 들면 복원된 용액에서 약 5-50 mg/ml, 또는 약 10-40 mg/ml 단백질). 어떤 구체예에서는, 복원된 용액 중의 단백질 농도는 사전건조된 조제물에서의 농도보다 상당히 더 높다. 예를 들면, 복원된 용액에서의 단백질 농도는 사전건조된 수성 조성물의 농도의 약 2-40 배, 3-10 배 및 또는 3-6 배(예를 들면 적어도 세 배 또는 적어도 네 배)일 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 예를 들면 인자 XIII을 포함하는 건조한 트랜스글루타미나제 조성물은 3년 넘게 보관하는 동안 안정하고, 복원된 용액은 6주 넘게 사용하는 동안 안정하다. 본 발명의 한 구체예에서, 예를 들면 인자 XIII을 포함하는 건조한 트랜스글루타미나제 조성물은 2년 넘게 보관하는 동안 안정하고, 복원된 용액은 4주 넘게 사용하는 동안 안정하다. 본 발명의 한 구체예에서, 예를 들면 인자 XIII을 포함하는 건조한 트랜스글루타미나제 조성물은 1년 넘게 보관하는 동안 안정하고, 복원된 용액은 2주 넘게 사용하는 동안 안정하다. 본 발명의 한 구체예에서, 복원된 인자 XIII 조성물의 1% 이하는, 비단백질분해 활성화된 인자 XIII이다. 본 발명의 한 구체예에서, 복원된 인자 XIII 조성물의 0.5% 이하는, 비단백질분해 활성화된 인자 XIII이다.
예시 변이체
표 1 및 2는 본 발명의 예시 변이체의 비제한적 목록을 개시한다.
　표 1: 예시 변이체의 비제한적 목록　
5 ml 충전; 2.5 ml 복원
　 　 충전 용액 충전 용액 복원된 것
　 조성물 농도
( mM ) 		고형물
(mg/ml) 		오스몰 농도 (mM)
단백질 2.5 0 2.5 0
수크로스 26 mg/ml 75 26 150
히스티딘 20 mM 20 3.1 40
NaCl 25 mM 25 1.45 100
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 33.05 290
6 ml 충전; 3 ml 복원 　 　 　 　
단백질 2.5 0 2.5 0
수크로스 26 mg/ml 75 26 150
히스티딘 20 mM 20 3.1 40
NaCl 25 mM 25 1.45 100
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 33.05 290
3 ml 충전 3 ml로 복원 　 　 　 　
단백질 5.0 mg/ml 0 5 0
수크로스 55 mg/ml 160 55 160
히스티딘 20 mM 20 3.1 20
NaCl 50 mM 50 2.9 100
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 66 280
3 ml 충전 3 ml로 복원 　 　 　 　
단백질 5.0 mg/ml 0 5 0
수크로스 72 mg/ml 210 72 210
히스티딘 20 mM 20 3.1 20
NaCl 25 mM 25 1.45 50
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 81.55 280
3 ml 충전 3 ml로 복원 　 　 　 　
단백질 5.0 mg/ml 0 5 0
수크로스 48 mg/ml 140 48 140
히스티딘 40 mM 40 6.2 40
NaCl 50 mM 50 2.9 100
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 62.1 280
4 ml 충전 2 ml로 복원 　 　 　 　
단백질 5.0 mg/ml 0 5 0
수크로스 26 mg/ml 76 26 152
히스티딘 20 mM 20 3.1 40
NaCl 25 mM 25 1.45 100
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 35.55 292
2 ml 충전; 3 ml 복원 　 　 　 　
단백질 7.5 0 7.5 0
수크로스 85 mg/ml 250 57 166
히스티딘 20 mM 20 3.1 13
NaCl 50 mM 50 2.9 33
Polysorbate 20 0.01% 0 0 0
　 　 　 70.5 212
표 2: 비제한적 예시 변이체
12 ml 바이알을 3 ml 충전 용액으로 충전하고, 동결건조한 다음, 3 ml 물로 복원함
충전 용액 동결건조된 바이알
(분말) 		복원된 바이알
5 mg/ml rFXIII 15 mg 5 mg/ml
55 mg/ml 수크로스 165 mg 55 mg/ml
20 mM 히스티딘 9.3 mg 20 mM
0.01% Polysorbate 20 0.3 mg 0.01%
50 mM NaCl 8.7 mg 50 mM
pH = 8 - pH = 8
약학 조성물
본 발명은 트랜스글루타미나제, 예를 들면 인자 XIII을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 이 약학 조성물은 본 발명의 복원된 용액이나 아니면 건조한 조성물을 포함한다.
한 구체예에서, 약학 조성물은 사용에 앞서 희석제의 첨가에 의해 의사 또는 환자에 의해 복원을 의도한 건조한 조성물(예를 들면 동결건조 또는 분무건조 조성물)이다.
트랜스글루타미나제, 예를 들면 인자 XIII을 함유하는 본 발명의 약학 조성물은 몇가지 다른 경로에 의해, 예를 들면 국소적으로(예를 들어서 피부에 또는 점막에 도포에 의해서), 흡수를 우회하는 경로에 의해(예를 들어서 동맥에, 정맥에 또는 심장에 투여), 그리고 흡수를 수반하는 경로에 의해(예를 들어서 피부에, 피하에, 근육에 또는 복부에 투여) 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다.
이러한 치료를 필요로 하는 환자에 본 발명에 따르는 약학 조성물의 투여는 여러가지 투여 경로를 통해서, 예를 들면, 혀에, 혀밑에, 볼안에, 경구, 위 또는 장에, 코에, 폐에(예를 들면, 세기관지 및 폐포를 통해서 또는 둘다에 의해), 상피에, 피부에, 경피, 질에, 직장에, 눈에(예를 들면 결막을 통해서), 요관에 또는 비경구일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 여러가지 투여량 형태로, 예를 들면, 용액, 현탁액, 에멀션, 마이크로에멀션, 다중 에멀션, 발포정, 사브연고, 페이스트, 고약, 연고, 정제, 코팅정, 린스제, 캡슐(예를 들면, 경질 젤라틴 캡슐 또는 연질 젤라틴 캡슐), 좌제, 직장 캡슐, 드롭, 겔, 분무제, 분말, 에어로졸, 흡입제, 점안약, 안연고, 안린스제, 질 페사리, 질 링, 질 연고, 주사용액, 인시투 변환 용액(예를 들면 인시투 겔링, 인시투 세팅, 인시투 침전 또는 인시투 결정화), 주입용액, 또는 이식물로서 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 트랜스글루타미나제, 예를 들면 인자 XIII의 안정성을 더 향상시키기 위해, 생체이용성을 증가시키기 위해, 용해도를 증가시키기 위해, 부작용을 감소시키기 위해, 당업자들에게 잘 알려진 생체리듬치료 (chronotherapy)를 달성하기 위해, 그리고/또는 환자 순응도를 증가시키기 위해 (예를 들면 공유, 소수성 및 정전 상호작용을 통해) 약물 담체, 약물 전달 시스템 또는 진보된 약물 전달 시스템에 화합되거나, 또는 결합 또는 접합될 수 있다. 담체, 약물 전달 시스템 및 진보된 약물 전달 시스템의 예들은 중합체, 예를 들면 셀룰로스 및 그의 유도체, 기타 다당류(예를 들면 덱스트란 및 그의 유도체, 전분 및 그의 유도체), 폴리(비닐알콜), 아크릴레이트 및 메타크릴레이트 중합체, 폴리락트산 및 폴리글리콜산 및 그의 블록 공중합체, 폴리에틸렌글리콜, 담체 단백질(예를 들면 알부민), 겔(예를 들면, 서모겔링 시스템, 예를 들면 당업자들에게 잘 알려진 블록 공중합체 시스템), 미셀, 리포좀, 미소구, 나노입자, 액정 및 그의 분산물, 액체-물 시스템에서 상 작용이 당업자들에게 잘 알려진 L2 상 및 그의 분산물, 중합체 미셀, 다중 에멀션(자체 유화 및 자체 마이크로유화), 시클로덱스트린 및 그의 유도체, 및 덴드리머를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 예를 들면 당업자들에게 잘 알려진 장치들인 계량 투여량 흡입기, 건조 분말 흡입기 또는 네뷸라이저를 사용하여 폐 투여를 위한 고체, 반고체, 분말 및 용액의 조제물에 사용하기에 적합하다.
본 발명의 약학 조성물은 제어된 방출, 지속 방출, 연장 방출, 지연 방출, 및 서방 약물 전달 시스템의 조제물에 사용하기에 적합하다. 본 발명의 약학 조성물은 예를 들어서, 당업자들에게 잘 알려진 타입의 비경구 제어된 방출 및 지속 방출 시스템(두 시스템은 투여 회수의 여러 배 감소를 가져온다)의 조제물에 유용하다. 본 발명의 범위를 제한하지 않고, 유용한 제어된 방출 시스템 및 조성물의 예는 히드로겔, 유성 겔, 액정, 중합체 미셀, 미소구 및 나노입자이다. 본 발명의 약학 조성물에 유용한 제어된 방출 시스템을 제조하는 방법은 결정화, 응축, 공결정화, 침전, 공침, 유화, 분산, 고압 균질화, 캡슐화, 분무건조, 마이크로캡슐화, 코아세르베이션, 상분리, 미소구를 제조하기 위한 용매 증발, 압출 및 임계초과 유체 공정을 포함하나, 이들에 제한되지 않는다. 일반적인 참고문헌은 Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L., ed., Marcel Dekker, New York, 2000) 및 Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., ed. Marcel Dekker, New York, 2000)이다.
비경구 투여는 주사기, 예를 들면 펜형 디바이스의 주사기에 의한 피하, 근육내, 복강내 또는 정맥내 주사에 의해 수행될 수 있다. 대안으로는, 비경구 투여는 예를 들어서 주입 펌프에 의해 수행될 수 있다. 용액 또는 현탁액의 형태로 본 발명의 약학 조성물의 투여를 위한 더 이상의 선택의 여지는 코 또는 폐 분무로서의 투여이다. 또 다른 선택의 여지로서, 본 발명의 약학 조성물은 예를 들면 바늘없는 주사에 의해, 패치(예를 들어서 이온도입식 패치)의 도포에 의해 또는 경점막(예를 들면, 볼안) 투여에 의해 경피 투여에 적합하게 만들어질 수 있다.
본 발명과 관련하여 여러가지 문법 형태로 용어 "치료하는"은 (1) 질병의 불리한 영향, (2) 질병 진행, 또는 (3) 질병 원인인자를 치유, 역전, 약화, 경감, 완화, 억제, 최소화, 진압, 또는 중지시키는 것을 말한다.
본 발명의 문맥에서, 약학 조성물의 "유효량"은 단독 또는 다른 투여된 치료제와 조합하여 1) 질병의 불리한 영향, (2) 질병 진행, 또는 (3) 질병 원인인자를 예방, 치유, 역전, 약화, 경감, 완화, 억제, 최소화, 진압, 또는 중지시키기 위해 충분한 약학 조성물, 예를 들면 인자 XIII의 양으로서 정의된다.
인자 XIII이 선천적 인자 XIII 결핍을 갖지 않는 환자들에서 뿐만 아니라 선천적 인자 XIII 결핍을 갖는 환자들에서 출혈 에피소드를 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다고 기술되었다. 예를 들어서 US 5,114,916, US 5,607,917, WO 2002038167, WO 2002036155, WO 200267981, 및 WO 200267980 참조.
본 발명은 출혈 에피소드를 치료 또는 예방하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, FXIII을 포함하는 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 대상자에서 응고 시간을 감소시키는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 포유동물 혈장에서 응고물 용해 시간을 연장시키는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 포유동물 혈장에서 응고물 강도를 증가시키는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 포유동물 혈장에서 피브린 응고물 형성을 향상시키는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 미숙아에서 뇌실내 출혈의 예방방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 본 발명은 수술 동안 또는 수술 후에 대상자에서 수술 관련 혈액 손실을 감소시키는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 혈우병 A를 치료하는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 혈우병 B를 치료하는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 혈소판 장애를 치료하는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다. 더 이상의 구체예에서, 본 발명은 폰 빌레브란트 병(von Willebrand's disease)을 치료하는 방법에 관련되는데, 이 방법은 필요로 하는 대상자에, 본 발명의 약학 조성물의 유효량의 투여를 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은, FXIII을 포함할 때, 뼈 또는 상처 치유, 궤양 결장염, 피부경화증, 숀라인 헨노흐 자반증(Scholein Henoch purpura), 지주막하 출혈(subarchnoidal hemorrhage), 뇌실내 출혈(intraventricular bleeding), 및 원인불명의 출혈을 포함하는 상태를 치료하기 위해 전신 또는 국소 적용에 또한 유용하다.
이들 방법의 더 이상의 구체예에서, 인자 XIII을 포함하는 본 발명의 약학 조성물은 WO 200185198에 기술된 바와 같이 인자 VIIa의 유효량과 조합하여 투여된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 약학 조성물은 지시된 치료를 위한 대상자에 투여되는 단독 활성제이다.
한 구체예에서는, 치료할 대상자는 사람이고; 한 구체예에서는, 대상자는 손상된 트롬빈 생산을 가지며; 한 구체예에서, 대상자는 피브리노겐의 저하된 혈장 농도를 갖는다(예를 들면, 다수회 수혈받은 대상자의 경우).
따라서 일반적으로 기술된 본 발명은 다음의 실시예를 참고하여 더 쉽게 이해될 것이며, 이것은 예시로써 제공되며 본 발명을 제한하는 것을 의도하지 않는다.
실시예
본 발명의 조성물을 개발하기 위해 여러가지 조성물을 그것들의 효과와 함께 보관 동안의 조성물의 후속 안정성에 대해 연구하였다.
실시예 1: 인자 XIII의 동결건조 및 복원
동결건조 실험을 상업적으로 이용가능한 동결건조기에서 수행하였다. 추가의 성분들과 함께 효모 세포에서의 발현에 의해 제조된 재조합 인자 XIII의 용액들을 적합한 동결건조 프로그램에 따라 건조시켰다. 동결건조물을 그 다음 증류수를 사용하여 복원시켰다.
실시예 2: 건조한 인자 XIII 조성물의 안정성
일련의 건조한 rFXIII 조성물을 실시예 1에 따라 동결건조에 의해 제조하고, 순도를 AIE-HPLC에 의해 측정하고 응집물(aggregates)을 SEC-HPLC에 의해 측정한 안정성 연구를 하였다. 이 연구는 표 3 및 표 4에 주어진 바와 같이 수성 충전 용액 중에 포함된 NaCl의 세가지 수준, 0 mM, 12.5 mM 및 25 mM NaCl과 수크로스의 네가지 수준을 조사하였다.
표 3: NaCl의 존재 및 부재에서 연구한 조성물
연구한 조성물
DP 충전용액
CD 표시를 위해 사용		 비율 1 비율 2 비율 3 비율 4
rFXIII, mg/ml 2.5 5.0 5.0 5.0 5.0
수크로스, mg/ml 42.5 80 40 20 0
히스티딘, mM 20 20 20 20 20
Polysorbate 20 0.01% 0.01% 0.01% 0.01% 0.01%
수크로스-대-단백질 비율 17 16 8 4 0
표 4: 수크로스 및 NaCl의 함량
실험명 수크로스 NaCl
N1 0 0
N2 20 0
N3 40 0
N4 80 0
N5 0 25
N6 20 25
N7 40 25
N8 80 25
N9 0 12.5
N10 0 12.5
N11 0 12.5
N12 0 12.5
표 5: 결과
번호 AIE-순도
0		 AIE-순도 1M40 SEC %응집물
0		 SEC %응집물
M40		 SEC %응집물
M40		 AIE-순도 2M40 SEC %응집물 3M40 SEC %응집물
3M25
N1 3.87 3.95 0.2 0.6 0.9 61 1 0.5
N2 74.75 65.87 0.05 0.1 0.1 61 0.1 0.1
N3 74.48 66.47 0.05 0.1 0.1 64.4 0.1 0.1
N4 74.75 69.74 0.1 0.1 0.1 66.2 0.1 0.1
N5 73.39 71.67 4.1 1.6 1.8 66.9 2.3 1.9
N6 75.11 72.42 0.1 0.1 0.1 68.5 0.1 0.1
N7 75.13 72.32 0.1 0.1 0.1 68.9 0.1 0.1
N8 74.05 72.61 0.1 0.1 0.1 69.5 0.1 0.1
N9 72.63 69.14 1.8 1.3 1.5 65.8 1.6 1.2
N10 72.33 69.57 1.7 1.4 1.4 66.6 1.5 1.2
N11 72.79 69.71 1.7 1.2 1.5 65.7 1.7 1.2
N12 72.74 69.05 1.7 1.4 1.5 66.8 1.3 1.2
표 5 및 도 1에 제공된 결과는 40 ℃에서 보관된 샘플에 대해 NaCl 과 AIE-HPLC 순도 간에 통계학적으로 상당한 관계가 있음을 증명한다. 샘플의 초기 순도에 대한 영향은 없다. 그러므로, NaCl은 건조한 상태, 즉 건조한 조성물에 대해 특이적으로 작용하며, 이로써 건조한 rFXIII 조성물의 보관 안정성을 상당히 개선한다고 결론지어진다.
실시예 3: 완전 요인 연구
연구의 목적은 동결건조시 rFXIIIa0의 형성에 대해, 히스티딘과 염화나트륨의 효과를 조사하기 위해 rFXIII의 동결건조된 조제물에 대해 예비 스크리닝 실험을 수행하는 것이었다. 실험의 완전 요인 설계(full factorial design)을 이용하여 건조한 rFXIII 조성물에서 20-60 mM 범위에 대한 히스티딘 농도 그리고 0-50 mM 범위에 대한 NaCl 농도를 평가하였다.
표 6: 실험 요인
번호 NaCl 히스티딘
N1 0 20
N2 25 20
N3 50 20
N4 0 40
N5 25 40
N6 50 40
N7 0 60
N8 25 60
N9 50 60
N10 25 40
N11 25 40
N12 25 40
표 7: 결과
번호 % 활성화
초기 		%활성화
2M25 		AIE 순도
2M25 		SEC
2M25 		%활성화
1M40 		%활성화
4M25
N1 0.4 1.1 67.4 0.1 2.6 1.8
N2 0.4 0.7 70.3 0.1 1.6 1.2
N3 0.4 0.7 71 0.1 1.5 1.1
N4 0.4 1.1 67.8 0.1 2.3 2
N5 0.5 0.8 70.3 0.2 1.8 1.2
N6 0.4 0.7 71 0.2 1.3 1
N7 0.4 1.2 68.4 0.1 2.3 2
N8 0.4 0.9 70.3 0.2 1.6 1.3
N9 0.5 0.8 70.8 0.2 1.3 1
N10 0.6 0.9 70.5 0.1 1.7 1.2
N11 0.4 1 70.2 0.1 1.7 1.3
N12 0.4 0.8 70.2 0.5 1.5 1.1
번호 AIE 순도 4M25 SEC
4M25 		%활성화
6M25 		SEC
6M25 		AIE 순도 6M25 AIE 순도
초기
N1 65.1 0.1 2.2 0.1 63.5 72.1
N2 69.2 0.1 1.4 0.1 68 72.4
N3 70.2 0.1 1.1 0.1 69.5 72.3
N4 66 0.1 2.2 0.1 64.6 71.8
N5 69 0.2 1.4 0.2 68.3 72.1
N6 70 0.2 1.1 　 　 72.2
N7 67.1 0.1 2 0.1 65.3 71.9
N8 69.8 0.2 1.5 0.2 68.6 72.2
N9 70 0.2 1.3 0.2 69.6 72.3
N10 69.5 0.1 1.3 0.1 68.9 72.3
N11 69.6 0.1 1.4 0.1 69 72.3
N12 69.2 0.1 1.4 0.1 68.9 72.3
표 7 및 도 2 및 3에 제공된 결과는 NaCl의 포함은 각각 40 ℃ 및 25℃에서 1개월 및 2개월 간 보관된 샘플들에 대해 rFXIIIa0의 형성 및 순도에 대해 상당한 안정화 효과를 가짐을 증명한다. NaCl의 포함은 초기 시점에서 샘플에 대해 유의한 효과를 갖지 않는다. 여기서 연구한 NaCl 및 히스티딘 수준은 25℃에서 2개월 후 SE-HPLC에 의한 응집물 수준에 대해 유의한 효과를 갖지 않는다. 이 연구는 건조한 rFXIII 조성물에서 NaCl의 포함이 %순도 및 %rFXIIIa0에 관해서 조성물의 보관 안정성을 상당히 개선한다는 것을 나타낸다.
실시예 4: 복원 연구
이 실험은 NaCl의 안정화 효과가 건조한 상태, 즉 건조한 조성물에 대해 특이적임을 입증하기 위해 수행하였다. 이 실험에서 동결건조된 rFXIII 조성물의 바이알을 물로 복원시킨 다음 둘로 등부피로 분할하고 여기에 한 쪽에 NaCl을 첨가하였다. 용액을 24시간 동안 실온에서 보관한 다음 rFXIIIa0에 대해 분석하였다. 세가지 농도의 NaCl을 평가하였다. 실험 설계를 표 8에 묘사한다.
표 8: 실험 설계-용액 중 rFXIIIa0 형성에 대한 NaCl의 효과
rFXIII 약물 제품 분말을 함유하는 12 mL 바이알
바이알 #1. 2.5mL 물로 복원 바이알 #2. 2.5mL 물로 복원 바이알 #3. 2.5mL 물로 복원
0mM NaCl 25mM NaCl 0mM NaCl 50mM NaCl 0mM NaCl 75mM NaCl
용액을 실온에서 24 시간동안 보관한 다음 분석 용액을 실온에서 24 시간동안 보관한 다음 분석 용액을 실온에서 24 시간동안 보관한 다음 분석
표 9: NaCl 복원 연구로부터의 효능 결과
샘플 ID NaCl 농도
(mM)		 전체 rFXIII (IU/ml) rFXIIIa (IU/ml) % rFXIIIa (복원 24시간 후 분석)
1a 0 957 5.0 0.5
1b 25 854 5.6 0.7
2a 0 889 4.4 0.5
2b 50 887 5.1 0.6
3a 0 990 4.1 0.4
3b 75 837 5.7 0.7
표 9에 제공된 결과는 NaCl을 함유하는 샘플이 NaCl을 함유하지 않는 각각의 비교용 용액보다 24시간 후 약간 더 높은 rFXIIIa0 값을 갖는다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 25-75 mM 범위의 농도에 걸쳐, 수성 조성물 중의 NaCl은 rFXIIIa0 의 형성에 관하여 안정화 효과를 갖지 않는다는 것을 증명한다. 상기 실시예의 데이터에 의해 증명된, 동결건조된 rFXIII 조성물 중의 NaCl의 안정화 효과는 건조한 상태(건조한 조성물)에 특이적이라고 결론지어진다. 이 효과는 놀라운 것이고 이제까지 알려지지 않은 것이다.
분석
분석 (I): FXIIIa 0 의 측정방법
FXIIIa0의 양에 대한 동결건조의 효과를 연구하기 위해, 정제된 재조합 인자 XIII을 효소학적 FXIII 활성 분석에 의해 분석할 수 있고, FXIIIa0 활성은 초기 트롬빈 활성화 없이 샘플의 알리컷의 활성을 트롬빈이 첨가된 같은 샘플의 또 다른 알리컷의 활성과 비교함으로써 측정한다. % FXIIIa0 를 100*[트롬빈 없는 샘플의 활성]/[트롬빈 있는 샘플의 활성]으로서 계산한다.
분석 (II): FXIII 순도의 측정방법
FXIII의 순도에 대한 동결건조의 효과를 연구하기 위해, 정제된 재조합 FXIII을 음이온 교환 고성능 액체 크로마토그라피(AIE-HPLC)에 의해 분석할 수 있다.
분석 (III): FXIII 활성의 측정방법
FXIII 가교결합 활성을 측정하는 방법은 본 분야에 잘 공지되어 있다. FXIII 활성은 Berichrom FXIIIR 시험 키트와 같은 상업적으로 이용가능한 키트를 사용하여 측정할 수 있다.
분석 (IV): 습기 함량의 측정방법
건조한 트랜스글루타미나제, 예를 들면 FXIII, 조성물의 습기 함량을 연구하기 위해, Karl Fischer Titration이 사용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 특징:
1. 건조한 트랜스글루타미나제 조성물로서, 이 조성물은 트랜스글루타미나제, 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 동결건조 또는 분무건조함으로써 얻어질 수 있고, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위이다.
2. 항목 1에 따르는 조성물로서, 트랜스글루타미나제는 인자 XIII 화합물이다.
3. 항목 2에 따르는 조성물로서, 인자 XIII 화합물은 사람 인자 XIII이다.
4. 항목 2-3 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 인자 XIII 화합물은 재조합 인자 XIII이다.
5. 항목 2-4 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 인자 XIII 화합물은 A 서브유닛의 다이머이다.
6. 항목 2에 따르는 조성물로서, 인자 XIII 화합물은 야생형 인자 XIII의 특징적인 가교결합 활성의 적어도 일부를 보유하는 인자 XIII, 및 그것의 생물학적 활성 단편, 유도체, 및 변이체로 구성되는 군으로부터 선택된다.
7. 항목 1-6 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 상기 인자 XIII 화합물의 농도는 1 내지 약 100 mg/ml의 범위이다.
8. 항목 1-7 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 염은 1가 염이다.
9. 항목 8에 따르는 조성물로서, 1가 염은 염화나트륨 염이다.
10. 항목 1-9 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 수성 조성물 중 상기 염의 농도는 10 내지 75 mM의 범위이다.
11. 항목 10에 따르는 조성물로서, 수성 조성물 중 상기 염의 농도는 20 내지 60 mM의 범위이다.
12. 항목 1-11 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 수성 조성물은 당을 포함하고 상기 당은 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 락토스, 말토스, 소르비톨, 라피노스, 덱스트린, 시클로덱스트린, 및 그의 유도체, 상동체, 및 그의 혼합물의 군으로부터 선택된 당 또는 당 알콜이다.
13. 항목 12에 따르는 조성물로서, 상기 당 및 당 알콜의 농도는 0.1% 내지 8.5% (w/w)이다.
14. 항목 1-13 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 상기 조성물은 아미노산을 포함하고 상기 아미노산은 글리신, 히스티딘 및 아르기닌의 군으로부터 선택된다.
15. 항목 1-14 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 수성 조성물은 완충액을 포함하고 상기 완충액은 시트르산염, 히스티딘, 인산나트륨, 숙신산염 및 TRIS의 군으로부터 선택된다..
16. 항목 1-15 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 수성 조성물은 더 나아가서 비이온성 계면활성제, 환원제, 킬레이트제, 산화방지제, 보존제, 습윤제, 유화제, 벌크제, 등장화제, 양쪽이온성 물질로 구성되는 군으로부터 선택된 한가지 이상의 추가의 성분들을 포함한다.
17. 항목 1-16 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 조성물은 분말 형태이다.
18. 항목 1-17 중 어느 하나에 따르는 조성물로서, 건조한 조성물은 3% 미만의 습기를 함유한다.
19. 항목 18에 따르는 조성물로서, 건조한 조성물은 1% 미만의 습기를 함유한다.
20. 트랜스글루타미나제, 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 건조시키는 것에 의한 항목 1-19 중 어느 하나에 따르는 건조한 조성물의 제조방법으로서, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위이다.
21. 항목 20에 따르는 방법으로서, 수성 조성물의 건조는 동결건조 또는 분무건조에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
22. 항목 20-21 중 어느 하나에 따르는 방법으로서, 방법은 복원 후 1% 이하의 비단백질분해 활성화된 인자 XIII을 포함하는 인자 XIII 조성물을 제조하기 위해 사용된다.
23. 트랜스글루타미나제를 포함하는 복원된 용액으로서, 이 용액은 항목 1-19 중 어느 하나에 따르는 건조한 조성물을 희석제에서 복원시킴으로써 제조된다.
24. 항목 23에 따르는 용액으로서, 상기 희석제는 증류수이다.
25. 항목 23에 따르는 용액으로서, 상기 희석제는 염, 당, 아미노산, 완충액, 비이온성 계면활성제, 환원제, 킬레이트제, 산화방지제, 보존제, 습윤제, 유화제, 벌크제, 등장화제, 유성 부형제, 단백질 및 양쪽이온성 물질로 구성되는 군으로부터 선택된 한가지 이상의 추가의 성분들을 포함하는 희석제이다.
26. 항목 23 내지 25 중 어느 하나에 따르는 용액으로서, 트랜스글루타미나제는 인자 XIII 화합물이다.
27. 항목 26에 따르는 용액으로서, 상기 인자 XIII 화합물의 1% 이하는 비단백질분해 활성화된 인자 XIII이다.
28. 항목 27에 따르는 용액으로서, 상기 인자 XIII 화합물의 0.5% 이하는 비단백질분해 활성화된 인자 XIII이다.
29. 항목 23-28 중 어느 하나에 따르는 용액 또는 항목 1-19 중 어느 하나에 따르는 건조한 조성물을 포함하는 약학 조성물.
30. 혈액 손실을 감소시키기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
31. 미숙아에서 뇌실내 출혈을 예방하기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
32. 수술 동안 또는 수술 후에 환자에서 수술 관련 혈액 손실을 감소시키기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
33. 혈우병 A를 치료하기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
34. 혈우병 B를 치료하기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
35. 혈소판 장애를 치료하기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
36. 폰 빌레브란트 병을 치료하기 위한 항목 29에 따르는 약학 조성물.
37. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는 출혈 에피소드의 치료 또는 예방 방법.
38. 항목 29에 따르는 약학 조성물을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는 대상자에서 응고 시간을 감소시키는 방법.
39. 항목 29에 따르는 약학 조성물을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는 대상자에서 응고 시간을 감소시키는 방법.
40. 항목 29에 따르는 약학 조성물을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는 응고물 강도를 증가시키는 방법.
41. 항목 29에 따르는 약학 조성물을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는 피브린 응고물 형성을 향상시키는 방법.
42. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는, 미숙아에서 뇌실내 출혈을 예방하는 방법.
43. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는, 수술 동안 또는 수술 후에 대상자에서 수술 관련 혈액 손실을 감소시키는 방법.
44. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는, 혈우병 A를 치료하는 방법.
45. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는, 혈우병 B를 치료하는 방법.
46. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는, 혈소판 장애를 치료하는 방법.
47. 항목 29에 따르는 약학 조성물의 유효량을 필요로 하는 대상자에 투여하는 것을 포함하는, 폰 빌레브란트 병을 치료하는 방법.
48. 비단백질분해 활성화된 트랜스글루타미나제의 수준을, 복원 후 직접 측정된 전체 트랜스글루타미나제 함량의 1% 이하를 구성하도록 하고, 안정화 효과는 트랜스글루타미나제, 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 건조시킴으로써 제공되고, 수성 조성물 중의 염의 농도는 5 내지 100 mM의 범위인, 건조한 상태로 보관 동안에 트랜스글루타미나제 조성물을 안정화시키는 방법.
49. 항목 48에 따르는 방법으로서, 트랜스글루타미나제 조성물은 인자 XIII이다.

Claims (5)

  1. 인자 XIII 화합물, 염화나트륨 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 동결건조함으로써 얻어질 수 있고, 수성 조성물 중의 염화나트륨염의 농도는 10 내지 75 mM의 범위이고, 상기 인자 XIII 화합물이 재조합 인자 XIII 화합물인 것을 특징으로 하는 건조한 인자 XIII 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 인자 XIII 화합물은 사람 인자 XIII인 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 조성물은 분말 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 인자 XIII 화합물, 1가 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 건조시키는 것에 의한 제 1 항 또는 제 2 항에 따르는 건조한 조성물의 제조방법으로서, 수성 조성물 중의 1가 염의 농도는 10 내지 75 mM의 범위이고, 상기 1가 염이 염화나트륨이고, 상기 방법이 복원 후 1% 이하의 비단백질분해 활성화된 인자 XIII을 포함하는 인자 XIII 조성물을 제조하기 위해 사용되는 것을 특징으로 하는 건조한 조성물의 제조방법.
  5. 건조한 상태로 보관 동안에 인자 XIII 조성물을 안정화시키는 방법으로서, 비단백질분해 활성화된 인자 XIII의 수준을, 복원 후 직접 측정된 전체 인자 XIII 함량의 1% 이하를 구성하도록 하고, 안정화 효과는 인자 XIII 화합물, 1가 염 그리고 당, 아미노산, 및 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한가지 추가의 성분을 포함하는 수성 조성물을 건조시킴으로써 제공되고, 수성 조성물 중의 1가 염의 농도는 10 내지 75 mM의 범위이고, 1가 염이 염화나트륨인 것을 특징으로 하는 조성물을 안정화시키는 방법.
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