KR20170040327A - 인자 viii 제형 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인자 VIII 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

인자 VIII 제형{FACTOR VIII FORMULATION}
인자 VIII(FVIII)은 혈장에서 발견되는 단백질이며, 혈액 응고를 야기하는 반응의 케스케이드(cascade)에서 보조인자로서 작용한다. 혈액 내 FVIII 활성 양의 결핍은 주로 남성에서 발병되는 유전성 병태인, A형 혈우병으로 공지된 응고 장애를 초래한다. A형 혈우병은 현재 사람 혈장으로부터 유도되거나 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조된 FVIII 치료 제제로 치료된다. 이러한 제제는 출혈 에피소드에 대한 조치로서 투여되거나(요구 치료(on-demand therapy)) 또는 제어되지 않은 출혈을 예방하기 위해 자주, 규칙적 간격으로 투여된다(예방).
FVIII은 치료 제제에서 비교적 불안정한 것으로 공지되어 있다. 혈장에서, FVIII은 통상적으로 또 다른 혈장 단백질, 폰 빌레브란트 인자(von Willebrand factor: vWF)와 복합체화되며, 상기 폰 빌레브란트 인자는 혈장에서 FVIII에 대해 크게 몰 과량의 VWF 서브유닛으로 존재하며, FVIII이 조기 분해되는 것을 방지하는 것으로 사료된다. 또 다른 순환 혈장 단백질인, 알부민도 또한 생체내에서 FVIII을 안정화시키는데 역할을 할 수 있다. 따라서 현재 시판되는 FVIII 제제는 종종 제조 과정 동안 그리고 저장 동안 FVIII을 안정화시키기 위해 알부민 및/또는 vWF의 사용에 의존한다.
그러나, 현재 시판되는 FVIII 제제에서 사용된 알부민 및 vWF는 사람 혈장으로부터 유도되며, 이러한 물질의 사용은 어느 정도의 결점을 갖는다. 이러한 제제에서 FVIII의 안정성을 증가시키기 위해 FVIII에 비해 크게 몰 과량의 알부민이 통상적으로 부가되며, 이것은 이들 제제에서 FVIII 단백질 그 자체를 특성화하는 것을 더 어렵게 한다. 사람-유도된 알부민을 FVIII에 첨가하는 것은 또한 재조합으로-생성된 FVIII 제제에 대해 단점인 것으로 인지된다. 이는 이러한 알부민 첨가의 부재시, 재조합으로-유도된 FVIII 제제에서 바이러스에 전염될 이론상 위험이 감소될 것이기 때문이다.
알부민 또는 vWF를 사용하지 않고 (또는 비교적 낮은 수준의 이들 부형제를 사용하여) FVIII을 제형화하려는 몇몇 시도가 기재되었다. 예를 들면, 미국 특허 제5,565,427호(EP 508 194)는, 부형제, 예를 들면, 염화나트륨 및 수크로스 이외에 세제 및 아미노산, 구체적으로 아르기닌 및 글리신의 특정 조합물을 함유하는 FVIII 제제를 기재하고 있다.
미국 특허 제5,763,401호(EP 818 204)는 또한 15-60mM 수크로스, 50mM 이하의 NaCl, 5mM 이하의 염화칼슘, 65-400mM 글리신, 및 50mM 이하의 히스티딘을 포함하는, 알부민이 없는 치료적 FVIII 제형을 기재하고 있다.
오스터버그(Osterberg)(파마시아 앤드 업존(Pharmacia & Upjohn)에 양도됨)의 미국 특허 제5,733,873호(EP 627 924)는 0.01 내지 1mg/ml의 계면활성제를 포함하는 제형을 개시하고 있다.
낮은 또는 높은 농도의 염화나트륨을 사용하려는 다른 시도가 또한 기재되었다. 미국 특허 제4,877,608호(EP 315 968)는 비교적 낮은 농도의 염화나트륨, 즉 0.5mM 내지 15mM NaCl의 농도를 갖는 제형을 개시하고 있다.
다른 한편, 미국 특허 제5,605,884호(EP 0 314 095)는 비교적 고농도의 염화나트륨을 갖는 제형의 사용을 교시하고 있다.
추가의 FVIII 제형은 WO 2010/054238, EP 1 712 223, WO 2000/48635, WO 96/30041, WO 96/22107, WO 2011/027152, EP 2 361 613, EP 0 410 207, EP 0 511 234, US 5565427, EP 0 638 091, EP 0 871 476, EP 0 819 010, US 5874408, US 2005/0256038, US 2008/0064856, WO 2005/058283, WO 2012/037530 및 WO 2014/026954에 개시되어 있다. EP　1　712　223　A1은 히스티딘 및 CaCl2를 포함하는 FVIII 조성물을 개시하고 있지만, EP　1　712　223　A1의 조성물에서 히스티딘 및 Ca2 +의 조합 농도는 수용액에서 목적하는 FVIII 안정성을 제공하기에 너무 낮다.
선행 기술의 다른 치료적 FVIII 제형은 일반적으로 FVIII의 안정화를 위해 알부민 및/또는 vWF를 포함하므로 본 발명과 관계가 없다.
FVIII 조성물의 제조에서 한 가지 문제는 동결건조, 및 이후의 재구성 후 사용에 적합한 용액을 제공하는 것이다. 이와 관련하여 중요한 기준은 FVIII 용액이 안정한 FVIII 활성을 나타내야 하며, 동결건조 전 혼탁하지 않아야 한다는 것이다. FVIII 수용액이 동결건조 전 혼탁한 경우, 이는 용액 내 FVIII 그 자체를 포함한 하나 이상의 물질이 응집되었다는 명백한 징후이다. 이는 통상적으로 활성 감소를 야기하는 변성된 단백질의 징조이므로 매우 바람직하지 않다. FVIII 제형에 대한 2번째 주요 사안은 동결건조 후 이의 안정성이다. 불량한 안정성 징후는 동결건조, 저장 및 재구성 후 남아있는 FVIII 활성의 감소 및 FVIII의 고분자량 복합체의 존재를 포함한다.
따라서, 어떠한 혼탁도 나타내지 않거나 또는 예를 들면, 동결건조 전 활성의 유의미한 손실과 같은 다른 품질 관련된 손상을 나타내지 않고, 동시에 동결건조 후 장기간 안정성을 갖는, FVIII을 포함하는 조성물에 대한 강력한 요구가 존재한다. 동결건조 전 안정한 용액 및 조성물의 측면에서 안정한 동결건조물의 요건이 현저히 상이할 수 있으므로, 이러한 안정한 제형을 개발할 때 두 가지 모든 조건이 고려되어야 한다.
본 발명에 이르러 놀랍게도, 이는 특정 최소 농도의 히스티딘 및 칼슘을 포함하는 본 발명에 따른 조성물에 의해 달성될 수 있음을 발견하였다. 본 발명자들은 특히, FVIII 안정성에 대하여, 낮은 농도의 히스티딘이 높은 칼슘 농도에 의해 균형을 이룰 수 있으며, 그 반대일 수도 있음을 발견하였다. 이는, 예를 들면, EP　1　712　223　A1에 개시되지 않으며, 결국, 상기 문헌에 기재된 조성물은 본 발명에 청구된 요지가 예상되지 못한다. 구체적으로, EP　1　712　223　A1의 조성물의 히스티딘 농도는 본원의 제1항에 의해 요구되는 것보다 더 낮다. 본 발명의 조성물은, 이것이 삼투압농도(osmolarity)의 측면에서 생리적 조건에 가깝다는 추가의 이점을 갖는다. 이는 인자 VIII의 다수의 선행 기술 제형에 존재하는 상당히 과-삼투성(hyper-osmolaric) 조성물에 의해 유발될 수 있는 자극 또는 다른 국소 효과를 피한다.
본 발명은 FVIII의 수성 조성물에 관한 것이며, 상기 조성물은 A형 혈우병을 갖는 피험자를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
하기 항목 (1) 내지 (93)은 본 발명의 다양한 측면 및 양태를 기재한다:
(1) a. FVIII 분자;
b. 40 내지 195mM의 나트륨 염;
c. 히스티딘;
d. 적어도 1mM의 칼슘 염; 및
e. 계면활성제
를 포함하는, 응고 인자 VIII의 수성 조성물로서;
[His] ≥ 180mM - 20*[Ca2 +]이고, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 칼슘 이온의 농도이고, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 히스티딘의 농도이고; 상기 조성물의 삼투압농도는 600 mOsmol/L 이하인, 응고 인자 VIII의 수성 조성물.
(2) a. FVIII 분자;
b. 40 내지 95mM의 나트륨 염;
c. 히스티딘;
d. 적어도 1mM의 칼슘 염; 및
e. 계면활성제
를 포함하는, 응고 인자 VIII의 수성 조성물로서;
[His] ≥ 180mM - 20*[Ca2 +]이고, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 칼슘 이온의 농도이고, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 히스티딘의 농도이고, 상기 조성물의 삼투압농도는 바람직하게는 600 mOsmol/L 이하인, 응고 인자 VIII의 수성 조성물.
(3) a. FVIII 분자;
b. 적어도 40mM의 나트륨 염;
c. 히스티딘;
d. 수크로스;
e. 적어도 1mM의 칼슘 염; 및
f. 계면활성제
를 포함하는, 응고 인자 VIII의 수성 조성물로서;
[His] ≥ 180mM - 20*[Ca2 +]이고, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 칼슘 이온의 농도이고, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 히스티딘의 농도이고, 상기 조성물의 삼투압농도는 바람직하게는 600 mOsmol/L 이하인, 응고 인자 VIII의 수성 조성물.
(4) 항목 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 상기 식이 [His] > 0이라는 단서를 조건으로 하는, 수성 조성물.
(5) 항목 (1) 또는 (3)에 있어서, 상기 나트륨 염의 농도가 50 내지 150mM인, 수성 조성물.
(6) 항목 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 상기 나트륨 염의 농도가 50 내지 95mM인, 수성 조성물.
(7) 항목 (1) 내지 (6) 중 어느 하나에 있어서, 상기 나트륨 염의 농도가 50 내지 75mM인, 수성 조성물.
(8) 항목 (1) 내지 (7) 중 어느 하나에 있어서, 상기 나트륨 염의 농도가 60 내지 70mM인, 수성 조성물.
(9) 항목 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 있어서, 상기 나트륨 염의 농도가 약 65mM인, 수성 조성물.
(10) 항목 (1) 내지 (9) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 적어도 5mM인, 수성 조성물.
(11) 항목 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 적어도 10mM인, 수성 조성물.
(12) 항목 (1) 내지 (11) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 적어도 20mM인, 수성 조성물.
(13) 항목 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 적어도 30mM인, 수성 조성물.
(14) 항목 (1) 내지 (13) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 적어도 40mM인, 수성 조성물.
(15) 항목 (1) 내지 (14) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 적어도 50mM인, 수성 조성물.
(16) 항목 (1) 내지 (15) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 50 내지 150mM인, 수성 조성물.
(17) 항목 (1) 내지 (16) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘의 농도가 약 100mM인, 수성 조성물.
(18) 항목 (1) 내지 (17) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물의 pH가 5 내지 9인, 수성 조성물.
(19) 항목 (1) 내지 (18) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물의 pH가 6 내지 8인, 수성 조성물.
(20) 항목 (1) 내지 (19) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물의 pH가 6.5 내지 7.5인, 수성 조성물.
(21) 항목 (1) 내지 (20) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물의 pH가 6.8 내지 7.2인, 수성 조성물.
(22) 항목 (1) 내지 (21) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물의 pH가 약 7인, 수성 조성물.
(23) 항목 (1) 내지 (22) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 6개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(24) 항목 (1) 내지 (23) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 12개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(25) 항목 (1) 내지 (24) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 18개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(26) 항목 (1) 내지 (25) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 24개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(27) 항목 (1) 내지 (26) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 36개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(28) 항목 (1) 내지 (27) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +40℃의 온도 및 60%의 상대 습도에서 6개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(29) 항목 (1) 내지 (28) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +40℃의 온도 및 60%의 상대 습도에서 12개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(30) 항목 (1) 내지 (29) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +40℃의 온도 및 60%의 상대 습도에서 18개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(31) 항목 (1) 내지 (30) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +40℃의 온도 및 60%의 상대 습도에서 24개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조, 그리고 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
(32) 항목 (1) 내지 (31) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 12개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장, 및 (iii) 증류수 중에서 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, 18 NTU 이하의 혼탁도를 갖는, 수성 조성물.
(33) 항목 (1) 내지 (32) 중 어느 하나에 있어서, 상기 칼슘 염이 염화칼슘인, 수성 조성물.
(34) 항목 (1) 내지 (33) 중 어느 하나에 있어서, 상기 나트륨 염이 염화나트륨인, 수성 조성물.
(35) 항목 (1) 내지 (34) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이 탄수화물을 추가로 포함하는, 수성 조성물.
(36) 항목 (35)에 있어서, 상기 탄수화물이 수크로스, 트레할로스 및 라피노스로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 수성 조성물.
(37) 항목 (35) 또는 (36)에 있어서, 상기 탄수화물이 수크로스인, 수성 조성물.
(38) 항목 (35) 내지 (37) 중 어느 하나에 있어서, 상기 탄수화물의 농도가 1 내지 20% w/w인, 수성 조성물.
(39) 항목 (35) 내지 (37) 중 어느 하나에 있어서, 상기 탄수화물의 농도가 2 내지 10% w/w인, 수성 조성물.
(40) 항목 (35) 내지 (37) 중 어느 하나에 있어서, 상기 탄수화물의 농도가 3 내지 8% w/w인, 수성 조성물.
(41) 항목 (35) 내지 (37) 중 어느 하나에 있어서, 상기 탄수화물의 농도가 4 내지 6% w/w인, 수성 조성물.
(42) 항목 (35) 내지 (37) 중 어느 하나에 있어서, 상기 탄수화물의 농도가 약 5% w/w인, 수성 조성물.
(43) 항목 (1) 내지 (42) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 적어도 0.001% v/v인, 수성 조성물.
(44) 항목 (1) 내지 (43) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 0.001 내지 0.1% v/v인, 수성 조성물.
(45) 항목 (1) 내지 (44) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 0.002 내지 0.2% v/v인, 수성 조성물.
(46) 항목 (1) 내지 (45) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 0.005% v/v인, 수성 조성물.
(47) 항목 (1) 내지 (46) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제가 비-천연 발생 계면활성제인, 수성 조성물.
(48) 항목 (1) 내지 (47) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 80인, 수성 조성물.
(49) 항목 (1) 내지 (48) 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트 20인, 수성 조성물.
(50) 항목 (1) 내지 (49) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산을 추가로 포함하는, 수성 조성물.
(51) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 류신, 이소류신 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 수성 조성물.
(52) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 아르기닌인, 수성 조성물.
(53) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 아스파라긴인, 수성 조성물.
(54) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 아스파르트산인, 수성 조성물.
(55) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 글루탐산인, 수성 조성물.
(56) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 글루타민인, 수성 조성물.
(57) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 라이신인, 수성 조성물.
(58) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 메티오닌인, 수성 조성물.
(59) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 페닐알라닌인, 수성 조성물.
(60) 항목 (50)에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 이소류신인, 수성 조성물.
(61) 항목 (50) 내지 (60) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산의 농도가 적어도 0.1mM인, 수성 조성물.
(62) 항목 (50) 내지 (60) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산의 농도가 적어도 1mM인, 수성 조성물.
(63) 항목 (50) 내지 (60) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산의 농도가 5 내지 300mM인, 수성 조성물.
(64) 항목 (50) 내지 (60) 중 어느 하나에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산의 농도가 10 내지 200mM인, 수성 조성물.
(65) 항목 (1) 내지 (64) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이 적어도 하나의 항산화제를 추가로 포함하는, 수성 조성물.
(66) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 수성 조성물.
(67) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 환원된 글루타티온인, 수성 조성물.
(68) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 메티오닌인, 수성 조성물.
(69) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 시스테인인, 수성 조성물.
(70) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 아황산나트륨인, 수성 조성물.
(71) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 비타민 A인, 수성 조성물.
(72) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 비타민 E인, 수성 조성물.
(73) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 아스코르브산인, 수성 조성물.
(74) 항목 (65)에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 아스코르브산나트륨인, 수성 조성물.
(75) 항목 (65) 내지 (74) 중 어느 하나에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제의 농도가 적어도 0.05mM인, 수성 조성물.
(76) 항목 (65) 내지 (74) 중 어느 하나에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제의 농도가 0.05 내지 100mM인, 수성 조성물.
(77) 항목 (65) 내지 (74) 중 어느 하나에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제의 농도가 0.1 내지 20mM인, 수성 조성물.
(78) 항목 (65) 내지 (74) 중 어느 하나에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제의 농도가 0.25 내지 5mM인, 수성 조성물.
(79) 항목 (1) 내지 (78) 중 어느 하나에 있어서, 상기 인자 VIII 분자가 비-천연 발생 FVIII 분자인, 수성 조성물.
(80) 항목 (79)에 있어서, 상기 인자 VIII 분자가 재조합으로 생성된, 수성 조성물.
(81) 항목 (79) 또는 (80)에 있어서, 상기 인자 VIII 분자가 사람 혈장-유도된 FVIII의 것과 상이한 당화 패턴을 갖는, 수성 조성물.
(82) 항목 (79) 내지 (81) 중 어느 하나에 있어서, 상기 FVIII 분자가 서열 번호: 1과 상이한 아미노산 서열을 갖는, 수성 조성물.
(83) 항목 (79) 내지 (82) 중 어느 하나에 있어서, 상기 FVIII 분자가 (i) B-도메인 결실된 또는 말단절단된(truncated) FVIII 분자, (ii) 단일쇄 FVIII 분자, (iii) 보호 그룹 또는 반감기 연장 모이어티를 갖는 FVIII 분자, (iv) 이종 아미노산 서열에 융합된 FVIII 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질, 및 (v) 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 수성 조성물.
(84) 항목 (1) 내지 (83) 중 어느 하나에 있어서, 상기 인자 VIII 분자가 서열 번호: 2에서 나타낸 아미노산 서열을 갖는, 수성 조성물.
(85) 항목 (1) 내지 (84) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이 18 NTU 이하, 바람직하게는 6 NTU 이하, 더 바람직하게는 3 NTU 이하의 혼탁도를 갖는, 수성 조성물.
(86) 항목 (85)에 있어서, 상기 조성물이, 동결건조 전에, 18 NTU 이하, 바람직하게는 6 NTU 이하, 더 바람직하게는 3 NTU 이하의 혼탁도를 갖는, 수성 조성물.
(87) 항목 (85)에 있어서, 상기 조성물이, 동결건조 및 증류수 중에서 재구성시, 18 NTU 이하, 바람직하게는 6 NTU 이하, 더 바람직하게는 3 NTU 이하의 혼탁도를 갖는, 수성 조성물.
(88) 항목 (1) 내지 (87) 중 어느 하나에 따른 수성 조성물을 동결건조시켜 수득가능한 조성물.
(89) 항목 (88)에 따른 동결건조된 수성 조성물을 수용액으로 재구성함으로써 수득가능한 수성 조성물.
(90) 항목 (89)에 있어서, 상기 수용액이 증류수, 염 용액 및 히스티딘을 포함하는 용액으로부터 선택되는, 수성 조성물.
(91) 항목 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 정의된 성분을 혼합하여 수성 조성물을 수득하고, 상기 수성 조성물을 동결건조시킴을 포함하는, FVIII 분자의 안정화 방법.
(92) 항목 (91)에 있어서, 상기 수득된 수성 조성물이 항목 (1) 내지 (87) 중 어느 하나에 따른 조성물인, 방법.
(93) 항목 (89) 또는 (90)의 조성물의 약제학적 유효량을 피험자에게 투여함을 포함하는, 혈액 응고 장애의 치료 방법.
도 1은 본 발명의 조성물에서 히스티딘 및 칼슘 이온 농도 사이의 관계를 도시한다. 도면은, 다른 부형제는 일정하게 유지시키는 한편(65mmol/L 염화나트륨, 5% 수크로스, 0.005% 트윈(Tween®) 80), 히스티딘 및 염화칼슘 농도는 변화시킨 액체 제형 연구(실시예 7)의 결과를 요약한다. 점 표시는 18 NTU의 역치 수준을 넘는 혼탁도를 나타내며, 다이아몬드 표시는 투명 용액(18 NTU 이하의 혼탁도)을 나타낸다. 본 그래프는 특정 농도의 히스티딘 및 칼슘 이온이 적용되는 경우, 투명한 용액이 수득되는 것을 실증한다. 투명한 용액을 위한 요건은 이후 제공된 식으로 표현된다.
인자 VIII 분자
본원에 사용된 용어 "인자 VIII" 또는 "FVIII"은 사람 천연 인자 VIII의 응고 활성 중 적어도 일부를 갖는 분자를 나타낸다. 사람 FVIII은 2351개의 아미노산(신호 펩타이드 포함) 및 2332개의 아미노산(신호 펩타이드 없음)으로 구성된다. "사람 천연 FVIII"은 서열 번호: 1(아미노산 1-2332)에서 나타낸 바와 같은 전장 서열을 갖는 사람 혈장-유도된 FVIII 분자이다. 상세한 도메인 구조, A1-a1-A2-a2-B-a3-A3-C1-C2는 상응하는 아미노산 잔기(서열 번호 1로 지칭됨): A1(1-336), a1(337-372), A2(373-710), a2(711-740), B(741-1648), a3(1649-1689), A3(1690-2020), C1(2021-2173) 및 C2(2174-2332)를 갖는다.
FVIII 분자의 응고 활성은 1-단계 응고 검정(예를 들면, Lee et al., Thrombosis Research 30, 511 519 (1983)에 기재된 검정) 또는 발색 기질 검정(chromogenic substrate assay)(예를 들면, Chromogenix-Instrumentation Laboratory SpA V. le Monza 338 - 20128 Milano, Italy로부터의 coamatic FVIII 시험 키트)을 사용하여 측정될 수 있다. 이들 활성 검정의 추가의 상세한 내용은 아래에 기재된다.
바람직하게는, 본 발명에 따라 사용된 FVIII 분자는 사람 천연 FVIII의 비 몰 활성(specific molar activity)의 적어도 10%를 갖는다. 용어 "비 몰 활성"은 FVIII 1mol 당 응고 활성을 나타내며, "IU/mol FVIII"로 표시된다.
바람직한 양태에서, FVIII 분자는 비-천연 발생 FVIII 분자이다. 바람직하게는, 비-천연 발생 FVIII 분자는 재조합으로 생성되었다. 또 다른 양태에서, FVIII 분자는 세포 배양시 생성되었다. 또 다른 바람직한 양태에서, 비-천연 발생 FVIII 분자는 혈장-유도된 FVIII의 당화 패턴과 상이한 당화 패턴을 갖는다. 여전히 또 다른 양태에서, FVIII 분자는 (i) B-도메인 결실되거나 말단절단된 FVIII 분자, (ii) 단일쇄 FVIII 분자, (iii) 재조합으로 생성된 이중쇄 FVIII 분자, (iv) 보호 그룹 또는 반감기 연장 모이어티를 갖는 FVIII 분자, (v) 이종 아미노산 서열에 융합된 FVIII 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질, 및 (vi) 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
용어 "인자 VIII" 및 "FVIII"은 본원에서 동의어로 사용된다. 본 발명의 의미에서 "인자 VIII 조성물"은 FVIII 및 FVIIIa를 포함하는 조성물을 포함한다. FVIIIa는, 조성물 내 FVIII 단백질의 총량을 지칭할 때, 통상적으로 소량으로, 예를 들면, 약 1 내지 2% FVIIIa로 존재할 수 있다. "FVIII"은 하나의 개체부터 다른 개체까지 존재하고 발생할 수 있는 FVIII의 천연 대립유전자 변이체를 포함한다. FVIII은 익히 공지된 제조 및 정제 방법을 사용하여, 혈장-유도되거나 재조합으로 생성될 수 있다. 당화의 정도 및 위치, 티로신 황산화 및 다른 번역후 변형은 선택된 숙주 세포 및 이의 성장 조건에 따라 달라질 수 있다.
용어 FVIII은 FVIII 유사체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "FVIII 유사체"는 서열 번호 1과 비교하여 하나 이상의 아미노산이 치환되거나 결실되거나, 또는 B-도메인 말단절단된/결실된 FVII 분자의 경우 서열 번호 1의 상응하는 부분이 치환되거나 결실된 FVIII 분자(전장 또는 B-도메인-말단절단된/결실된 FVIII 분자)를 나타낸다. FVIII 유사체는 천연에서 발생하지 않으며 사람에 의한 조작에 의해 수득된다.
본 발명의 조성물에 포함된 인자 VIII 분자는 또한 B-도메인-말단절단된/결실된 FVIII 분자일 수 있으며, 여기서 남아있는 도메인은 서열 번호: 1의 아미노산 번호 1-740 및 1649-2332에 기재된 서열에 상응한다. 다른 형태의 B-도메인 결실된 FVIII 분자는 이의 a3 도메인에서 추가로 부분적 결실을 가져 단일쇄 FVIII 분자를 야기한다.
이는 이들 FVIII 분자가 형질전환된 숙주 세포, 바람직하게는 포유동물 기원의 형질전환된 숙주 세포에서 생성된 재조합 분자라는 결론에 이른다. 그러나, B-도메인 결실된 FVIII에서 나머지 도메인(즉, 3개의 A-도메인, 2개의 C-도메인 및 a1, a2 및 a3 영역)은 서열 번호 1(아미노산 1-740 및 1649-2332)에 기재된 각각의 아미노산 서열과 약간, 예를 들면, 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5% 상이할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함된 FVIII 분자는 이중쇄 FVIII 분자 또는 단일쇄 FVIII 분자일 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 FVIII 분자는 또한 FVIII의 생물학적 활성 단편, 즉, B-도메인 이외의 도메인(들)이 결실되거나 말단절단되었지만 결실된/말단절단된 형태의 FVIII 분자는 혈전의 형성을 지지하는 이의 능력을 보유하는 FVIII일 수 있다. FVIII 활성은 당해 분야에 익히 공지된 기술을 사용하여 시험관내에서 평가될 수 있다. 본 발명에 따라서 FVIII 활성을 측정하는 바람직한 검사는 발색 기질 검정 또는 1 단계 검정이다(하기를 참조한다). 아미노산 변형(치환, 결실 등)은, 예를 들면, 인자 VIII의, 다양한 다른 성분, 예를 들면, 폰 빌레프란트 인자(Von Willebrand Factor; vWF), 저밀도 지단백 수용체-관련된 단백질(low density lipoprotein receptor-related protein; LPR), 다양한 수용체, 다른 응고 인자, 세포 표면 등과의 결합 능력을 변형시키거나, 또는 당화 부위 등을 도입하고/하거나 없애기 위해 남아있는 도메인에 도입될 수 있다. FVIII 활성을 없애지 않는 다른 돌연변이가 또한 본 발명의 조성물에서의 사용을 위해 FVIII 분자/유사체에서 수용될 수 있다.
FVIII 유사체는 또한 모 폴리펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실되거나 또는 다른 아미노산 잔기로 치환되고/되거나 추가의 아미노산 잔기가 모 FVIII 폴리펩타이드에 첨가된 FVIII 분자를 포함한다.
더욱이, 인자 VIII 분자/유사체는 예를 들면, 말단절단된 B-도메인 및/또는 분자의 다른 도메인 중 하나 이상에서 다른 변형을 포함할 수 있다("FVIII 유도체"). 이들 다른 변형은, 예를 들면, 중합체 화합물, 펩티드 화합물, 지방산 유도된 화합물 등과 같이 인자 VIII 분자에 접합된 다양한 분자의 형태일 수 있다.
용어 FVIII은 글리코페길화된(glycopegylated) FVIII을 포함한다. 본 맥락에서, 용어 "글리코페길화된 FVIII"은 하나 이상의 PEG 그룹(들)이 폴리펩타이드의 다당류 측쇄(들)(글리칸(들))를 통해 FVIII 폴리펩타이드에 부착된 인자 VIII 분자(전장 FVIII 및 B-도메인 말단절단된/결실된 FVIII 포함)를 나타내는 것으로 의도된다.
용어 FVIII은 보호 그룹 또는 반감기 연장 모이어티를 갖는 FVIII 분자를 포함한다. 용어 "보호 그룹"/"반감기 연장 모이어티"는 하나 이상의 아미노산 부위 쇄 기능기에 부착된 하나 이상의 화학 그룹, 예를 들면, -SH, -OH, -COOH, -CONH2, -NH2, 또는 하나 이상의 N- 및/또는 O-글리칸 구조물을 나타내는 것으로 본원에서 이해되며, 이는 다수의 치료적 단백질/펩타이드에 접합될 때, 이들 단백질/펩타이드의 생체내 순환 반감기를 증가시킬 수 있다. 보호 그룹/반감기 연장 모이어티의 예는 생체 적합성 지방산 및 이의 유도체, 하이드록시 알킬 전분(HAS), 예를 들면, 하이드록시 에틸 전분(HES), 폴리(Glyx-Sery)n(호모 아미노산 중합체(HAP)), 히알루론산(HA), 헤파로산 중합체(HEP), 포스포릴콜린계 중합체(PC 중합체), 플렉시머(Fleximer®) 중합체(Mersana Therapeutics, MA, USA), 덱스트란, 폴리-시알산(PSA), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), Fc 도메인, 트랜스페린, 알부민, 엘라스틴 유사 펩타이드, XTEN® 중합체(Amunix, CA, USA), 알부민 결합 펩타이드, 폰 빌레브란트 인자 단편(vWF 단편), 카복실 말단 펩타이드(CTP 펩타이드, Prolor Biotech, IL), 및 이들의 임의의 조합(참조: 예를 들면, McCormick, C.L., A.B. Lowe, and N. Ayres, Water-Soluble Polymers in Encyclopedia of Polymer Science and Technology. 2002, John Wiley & Sons, Inc.)을 포함한다. 유도체화 방법은 결정적이지 않으며 상기로부터 설명될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 FVIII 분자는 이종 아미노산 서열, 바람직하게는 반감기 연장 아미노산 서열에 융합된 FVIII 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 바람직한 융합 단백질은 Fc 융합 단백질 및 알부민 융합 단백질이다. 용어 "Fc 융합 단백질"은 임의의 항체 이소형으로부터 유도될 수 있는 Fc 도메인에 융합된 FVIII을 포함하는 것으로 본원에 의도된다. IgG Fc 도메인은 종종 IgG 항체의 비교적 긴 순환 반감기로 인해 바람직할 것이다. 더욱이 Fc 도메인은 예를 들면, 상보적 결합 및/또는 특정 Fc 수용체에 대한 결합과 같이 특정 효과기 기능을 변경시키도록 변형될 수 있다. FVIII의 Fc 도메인(이는 FcRn 수용체에 결합하는 능력을 가짐)과의 융합은 일반적으로 wt FVIII의 반감기와 비교하여 융합 단백질의 연장된 순환 반감기를 초래할 것이다. 이는 본 발명에서 사용하기 위한 FVIII 분자가 또한 FVIII 유사체의 유도체, 예를 들면, FVIII 유사체의 융합 단백질, 페길화된 또는 글리코페길화된 FVIII 유사체, 또는 헤파로산 중합체에 접합된 FVIII 유사체일 수 있다는 결론에 이른다. 용어 "알부민 융합 단백질"은 알부민 아미노산 서열에 융합된 FVIII 또는 이의 단편 또는 유도체를 포함하는 것으로 본원에서 의도된다. 이종 아미노산 서열은 FVIII의 N- 또는 C-말단에 융합될 수 있거나, 또는 이는 FVIII 아미노산 서열 내에 내부에 삽입될 수 있다. 이종 아미노산 서열은 개시내용이 본원에 참조로 포함된 WO 2008/077616 A1에 기재된 임의의 "반감기 연장 폴리펩타이드"일 수 있다.
본 발명의 조성물에 사용하기 위한 FVIII 분자의 예는, 예를 들면, WO　2010/045568, WO　2009/062100, WO　2010/014708, WO　2008/082669, WO　2007/126808, US　2010/0173831, US　2010/0173830, US　2010/0168391, US　2010/0113365, US　2010/0113364, WO　2003/031464, WO　2009/108806, WO　2010/102886, WO　2010/115866, WO　2011/101242, WO　2011/101284, WO　2011/101277, WO　2011/131510, WO　2012/007324, WO　2011/101267, WO　2013/083858, 및 WO　2004/067566에 기재된 FVIII 분자를 포함한다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 FVIII 분자의 예는 애드베이트(Advate®), 헬릭세이트(Helixate®), 코게네이트(Kogenate®), 크신타(Xyntha®)의 활성 성분, 뿐만 아니라 WO　2008/135501, WO　2009/007451에 기재된 FVIII 분자 및 WO 2004/067566에서 "dBN(64-53)"으로 지칭되는 작제물을 포함한다. 이러한 작제물은 서열 번호 2에 나타난 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명의 조성물에서 인자 VIII의 농도는 통상적으로 10 내지 10,000 IU/mL의 범위이다. 상이한 양태에서, 본 발명의 조성물 중 FVIII 분자의 농도는 10-8,000 IU/mL, 또는 10-5,000 IU/mL, 또는 20-3,000 IU/mL, 또는 50-1,500 IU/mL, 또는 3,000 IU/mL, 또는 2,500 IU/mL, 또는 2,000 IU/mL, 또는 1,500 IU/mL, 또는 1,200 IU/mL, 1,000 IU/mL, 또는 800 IU/mL, 또는 600 IU/mL, 또는 500 IU/mL, 또는 400 IU/mL, 또는 300 IU/mL, 또는 250 IU/mL, 또는 200 IU/mL, 또는 150 IU/mL, 또는 100 IU/mL의 범위이다.
"국제 단위(International Unit)" 또는 "IU"는 "IU"로 교정된 국제 표준 제제에 대해 교정된 표준을 사용한 FVIII 활성 검정, 예를 들면, 1 단계 응고 검정 또는 발색 기질 FVIII 활성 검정에 의해 측정된 FVIII의 혈액 응고 활성(효능)의 측정 단위이다. 1 단계 응고 검정은 예를 들면, 문헌(참조: N Lee, Martin L, et al., An Effect of Predilution on Potency Assays of FVIII Concentrates, Thrombosis Research (Pergamon Press Ltd.) 30, 511 519 (1983))에 기재된 기술에 공지되어 있다. 1 단계 검정의 원리: 검사는 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(activated Partial Thromboplastin Time; aPTT)-검정으로 수행된다: 혈장을 인지질과 항온처리하고, 표면 활성제는 고유 응고계의 인자의 활성화를 야기한다. 칼슘 이온의 첨가는 응고 케스케이드를 촉발시킨다. 측정가능한 피브린 혈전의 형성 시간을 측정한다. 검정은 인자 VIII 결핍 혈장의 존재 하에 수행된다. 상기 결핍 혈장의 응고 능력은 시험될 샘플에 포함된 응고 인자 VIII에 의해 회복된다. 응고 시간의 단축은 샘플에 존재하는 인자 VIII의 양에 비례한다. 응고 인자 VIII의 활성은 국제 단위로 인자 VIII의 공지된 활성을 갖는 표준 제제와 직접 비교하여 정량화된다.
또 다른 표준 검정은 발색 기질 검정이다. 발색 기질 검정은 coamatic FVIII 검사 키트(Chromogenix-Instrumentation Laboratory SpA V. le Monza 338 - 20128 Milano, Italy)와 같이 상업적으로 구매될 수 있다. 발색 검정의 원리: 칼슘 및 인지질의 존재 하에, 인자 X는 인자 IXa 내지 인자 Xa로 활성화된다. 이러한 반응은 보조인자로서 인자 VIIIa에 의해 자극된다. FVIIIa는 측정될 샘플에서 FVIII로부터 반응 혼합물 중 소량의 트롬빈에 의해 형성된다. 최적의 농도의 Ca2 +, 인지질 및 인자 IXa, 및 과량의 인자 X를 사용하는 경우, 인자 X의 활성화는 인자 VIII의 효능에 비례한다. 활성화 인자 X는 발색 기질 S-2765로부터 발색단 pNA를 방출한다. 따라서 405nm에서 측정된 pNA의 방출은 형성된 FXa의 양에 비례하므로 또한 샘플의 인자 VIII 활성에 비례한다.
동결-건조(Freeze-drying) 또는 동결건조(lyophilization)는, 이것이 기재된 맥락에서 달리 지시되지 않는 한, 물질(즉, 활성 약제학적 성분 및 다양한 제형 첨가제 또는 "부형제")의 용액이 고체로 전환되는 건조 공정을 나타내는데 사용될 것이다. 통상적인 동결-건조 공정은 3 단계, "동결", "1차 건조" 및 "2차 건조"로 구성된다. 동결 단계에서 거의 모든 함유된 물은 얼음으로 전환되고, 용질은 고체(결정성 또는 무정형)로 전환된다. 1차 건조 단계에서, 물 분자(얼음)와 주위 대기 사이에 유리한 압력 구배를 유지함으로써 달성되는 직접적인 승화에 의해 생성물로부터 얼음을 제거한다. 2차 건조 단계에서 잔여 수분은 탈착에 의해 생성물로부터 제거된다.
동결-건조된 조성물에 대해 농도(w/v)가 주어진 경우, 이는 동결-건조 직전 용적을 나타낸다.
달리 주지되지 않는 한, 백분율 용어는 중량/중량 백분율로 표시되며, 온도는 섭씨 척도이다.
삼투압농도
본 발명의 인자 VIII 조성물은 통상적으로 0.6 Osm/L 미만의 삼투압농도를 갖는다. 이는 고농도의 염화나트륨을 함유하는 다수의 선행 기술 제형에서의 삼투압농도보다 생리적 상태에 더 가깝다. 본 발명의 상이한 양태에서, 제형은 0.55 Osm/L 미만, 0.5 Osm/L 미만, 0.45 Osm/L 미만, 또는 0.4 Osm/L 미만의 삼투압농도를 갖는다. 용어 "삼투압농도" 및 "삼투 농도"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
삼투압농도 또는 삼투 농도는 용액 1 리터(L)당 용질의 오스몰수(Osm)로 정의되는, 용질 농도의 척도이다(osmol/L 또는 Osm/L). 몰농도가 용액 단위 용적당 용질의 몰수를 측정하는 한편, 삼투압농도는 용액 단위 용적당 용질 입자의 오스몰수를 측정한다.
삼투압농도의 이론적 계산은 당해 분야의 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 간략하게, 이는 용액 중 각각의 성분에 대해 삼투 계수(osmotic coefficient) f, 물에서 해리된 분자의 입자수 n, 및 몰 농도의 결과물을 계산하고, 모든 성분에 대한 결과를 합한다. 용액의 삼투압농도는 하기 수식으로부터 계산될 수 있으며: Osm/L = Σi fi ni Ci, 여기서 지수 i는 특정 성분의 신원(identity)을 나타내며; f는 특정 성분에 대한 삼투 계수이고; n은 물에서 해리된 분자의 입자수이며; C는 성분의 몰 농도이다. 몰 농도는 약간 온도 의존성을 가지며; 본원의 목적을 위해 25 ℃에서의 농도로 지칭된다.
주입 후 용액이 발휘할 수 있는 삼투압을 평가하는 대안적인 방법은, 성분의 함량이 용매 질량에 대해 평가되는 삼투질농도(osmolality)를 평가하는 것이다. 삼투질농도 및 삼투압농도는 용액의 밀도 및 용해된 성분의 건조 중량이 공지된 경우 용이하게 상호전환될 수 있다. 삼투질농도는 다수의 방법, 가장 통상적으로는 빙점 강하에 의해 측정될 수 있다.
예를 들면, 물의 경우, 물 1kg에 첨가된 용질 1 Osmol은 빙점을 1.86℃ 저하시킨다. 용액의 삼투질농도를 빙점 강하로 측정하는 방법은, 예를 들면, 유럽 약전 2.2.35 및 미국 약전 챕터 785에 기재되어 있다.
하기 표는 일부 중요한 부형제에 대한 삼투 계수 및 입자수를 열거한다. 다른 성분의 경우, f=1의 값은 사실상 충분히 양호한 근사치를 제공하며, n의 값은 비경구용 약제와 관련된 본질적으로 모든 화합물에 대해 익히 공지되어 있다.
Figure pct00001
염
본 발명에 따른 조성물은 나트륨 염을 포함한다.
한 양태에서 본 발명의 조성물은 적어도 40mM의 나트륨 염(예를 들면, NaCl)을 함유한다. 일련의 양태에서, 상기 조성물은 40 내지 195mM의 나트륨 염(예를 들면, NaCl), 또는 45 내지 180mM, 또는 45 내지 150mM, 또는 50 내지 125mM 또는 50 내지 100mM, 또는 60 내지 95mM, 또는 60 내지 75mM, 예를 들면, 약 65mM의 나트륨 염을 포함한다. 여전히 또 다른 양태에서 나트륨 염(예를 들면, NaCl)의 농도는 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 또는 95mM이다.
바람직하게는, 나트륨 염은 염화나트륨이며; 또 다른 양태에서, 상기 염은 아세트산나트륨이다. 제3 양태에서, 본 발명의 조성물은 염화나트륨과 아세트산나트륨의 혼합물을 함유한다.
본 발명에 따른 조성물은 칼슘 염을 추가로 포함한다. 본 발명에 따라 사용된 칼슘 염은 통상적으로 물에 가용성이어서 이는 수용액 중에서 용해될 때 하나 이상의 칼슘 이온 및 카운터-음이온(counter-anion)으로 해리한다. 용어 "Ca2 +"은 용어 "칼슘 이온"과 동의어이다.
한 양태에서 칼슘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[Ca2+] ≥ 9mM - 0.05*[His]
또 다른 양태에서 칼슘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[Ca2+] ≥ 9.5mM - 0.05*[His]
또 다른 양태에서 칼슘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[Ca2+] ≥ 10mM - 0.05*[His]
또 다른 양태에서 칼슘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[Ca2+] ≥ 10.5mM - 0.05*[His]
상기 식은 [Ca2 +] > 0이라는 단서를 조건으로 한다. 통상적으로, 상기 조성물은 적어도 1mM, 바람직하게는 적어도 2mM, 더 바람직하게는 적어도 4mM, 가장 바람직하게는 적어도 5mM의 칼슘 염을 함유한다. 또 다른 양태에서 상기 조성물은 100mM 이하의 칼슘 염을 함유한다. 또 다른 양태에서, 상기 조성물은 1 내지 50mM의 칼슘 염, 또는 2 내지 40mM, 또는 3 내지 30mM, 또는 4 내지 20mM의 칼슘 염을 포함한다. 하나의 특정 양태에서, 상기 조성물은 약 10mM의 칼슘 염을 함유한다.
칼슘 염은, 예를 들면, 염화칼슘, 아세트산칼슘, 글루콘산칼슘, 락트산칼슘, 벤조산칼슘 및 이들의 혼합물, 및 당해 분야의 숙련가에 의해 익히 공지된 다른 가용성 칼슘 염의 그룹으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 양태에서, 칼슘 염은 염화칼슘이다.
히스티딘
본 발명에 따른 조성물은 히스티딘, 바람직하게는 L-히스티딘을 포함한다.
한 양태에서 히스티딘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[His] ≥ 180mM - 20*[Ca2+]
또 다른 양태에서 히스티딘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[His] ≥ 190mM - 20*[Ca2 +]
또 다른 양태에서 히스티딘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[His] ≥ 200mM - 20*[Ca2+]
또 다른 양태에서 히스티딘 농도는 하기 식으로 정의되며, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 칼슘 이온의 농도이며, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 히스티딘의 농도이다:
[His] ≥ 210mM - 20*[Ca2+]
상기 식은 [His] > 0이라는 단서를 조건으로 한다. 통상적으로, 상기 히스티딘의 농도는 적어도 5mM, 바람직하게는 적어도 10mM, 바람직하게는 적어도 20mM, 바람직하게는 20-400mM, 바람직하게는 적어도 25mM, 바람직하게는 25-200mM, 바람직하게는 적어도 50mM, 바람직하게는 50-300mM, 바람직하게는 55-170mM, 바람직하게는 60-150mM, 바람직하게는 65-120mM, 더 바람직하게는 50-100mM, 예를 들면, 약 100mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 상기 히스티딘의 농도는 10, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300 또는 400mM이다.
계면활성제
본 발명에 따른 조성물은 계면활성제를 포함한다. 본원에 사용된 "계면활성제"는 활성 물질을 공기-대-용액 계면 또는 용액-대-표면 계면 유도된 스트레스 또는 손상으로부터 보호하는 제제를 나타낸다. 바람직하게는, 계면활성제는 비-천연 발생 계면활성제이다.
통상적인 비-천연 발생 계면활성제(괄호 [ ]로 주어진 상품명의 예를 가짐)는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트[트윈 20], 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트[트윈 40] 또는 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[트윈 80], 폴록사머, 예를 들면, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 블록 공중합체[플루로닉(Pluronic®) F68 / 폴록사머 188], 폴리에틸렌 글리콜 옥틸페닐 에테르[트리톤(Triton®) X-100] 또는 폴리옥시에틸렌글리콜 도데실 에테르[Brij® 35]이다. 수성 조성물에서 계면활성제의 용도는 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 편의상 문헌(참조: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995)이 참조된다. 본 발명의 한 양태에서, 조성물은 소르비탄 모노올레에이트[트윈 80]를 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 조성물은 산화에 민감하지 않은 계면활성제, 예를 들면, 알킬 사카라이드를 포함한다. 또 다른 양태에서, 계면활성제는 식물-유도된 계면활성제이고/이거나 석유화학물질(petrochemical)이 없고/없거나 석유화학물질을 사용하지 않고 제조되었다.
한 양태에서, 계면활성제의 농도는 적어도 0.001% v/v, 바람직하게는 0.001 - 0.1% v/v, 바람직하게는 0.002 - 0.3% v/v, 더 바람직하게는 0.003 내지 0.1% v/v, 가장 바람직하게는 약 0.005% v/v이다. 여전히 또 다른 양태에서 계면활성제의 농도는 0.001, 0.002, 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.5, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1.0% v/v이다. 한 양태에서, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[트윈 80]의 농도는 적어도 0.001% v/v, 바람직하게는 0.001 - 0.1% v/v, 바람직하게는 0.002 - 0.3% v/v, 더 바람직하게는 0.003 내지 0.1% v/v, 가장 바람직하게는 약 0.005% v/v이다.
완충제
본 발명에 따른 조성물은 완충제를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "완충제" 또는 "버퍼"는 제제의 투여(예를 들면, 정맥내 또는 피하 투여)가 보통 익히 허용되며(예를 들면, pH 5 내지 9), 더욱이, pH 변화를 피하고 동결건조 동안 활성 물질을 pH 유도된 스트레스 또는 손상으로부터 보호하는 범위에서 제제의 pH를 유지시키는 제제를 나타낸다. 버퍼 물질로서 사용되는 물질의 통상적인 예는, 예를 들면, 카보네이트, 포스페이트, 시트레이트, 보레이트, 2-아미노-2-하이드록시메틸-1,-3-프로판디올[=TRIS], 히스티딘, 글리신이다.
버퍼(또는 완충제)는 아세테이트, 벤조에이트, 카보네이트, 시트레이트, 글리실글리신, 헤페스(Hepes), 히스티딘, 글리신, 및 트리스(TRIS), 바이신(bicine), 트리신(tricine), 석시네이트, 아스파르트산, 글루탐산 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 한 양태에서, 완충 물질의 농도는 1 내지 200mM, 예를 들면, 1 내지 150mM 또는 1 내지 50mM 또는 1 내지 25mM 또는 5 내지 20mM 또는 5 내지 15mM이다.
본 발명의 조성물은 통상적으로 4 내지 10의 pH를 갖는다. 또 다른 양태에서, 조성물은 5.0 내지 9.0 또는 6.0 내지 8.0 또는 6.5 내지 7.5 또는 6.8 내지 7.2 또는 약 7의 pH를 갖는다. 다른 양태에서, 조성물의 pH는 5.5±0.2, 5.6±0.2, 5.7±0.2, 5.8±0.2, 5.9±0.2, 6.0±0.2, 6.1±0.2, 6.2±0.2, 6.3±0.2, 6.4±0.2, 6.5±0.2, 6.6±0.2, 6.7±0.2, 6.8±0.2, 6.9±0.2, 7.0±0.2, 7.1±0.2, 7.2±0.2, 7.3±0.2, 7.4±0.2, 또는 7.5±0.2이다. 다른 양태에서, 조성물의 pH는 5.5±0.1, 5.6±0.1, 5.7±0.1, 5.8±0.1, 5.9±0.1, 6.0±0.1, 6.1 ±0.1, 6.2±0.1, 6.3±0.1, 6.4±0.1, 6.5±0.1, 6.6±0.1, 6.7±0.1, 6.8±0.1, 6.9±0.1, 7.0±0.1, 7.1±0.1, 7.2±0.1, 7.3±0.1, 7.4±0.1, 또는 7.5±0.1이다. 또 다른 양태에서, 안정화 제형의 pH는 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 06.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 또는 8.0이다.
탄수화물
본 발명의 조성물은 탄수화물을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "탄수화물"은, 예를 들면, 프룩토스, 글루코스, 만노스, 만니톨, 소르보스, 소르비트, 크실로스, 말토스, 락토스, 수크로스, 갈락토스, 덱스트란, 트레할로스, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 및 카복시메틸셀룰로스를 포함하는, 당, 예를 들면, 단당류, 이당류 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸을 나타낸다.
탄수화물은, 예를 들면, 단당류, 이당류, 또는 다당류(예를 들면, 단당류 프룩토스, 글루코스, 만노스, 갈락토스, 이당류 락토스, 수크로스, 트레할로스, 말토스 및 다당류 덱스트란, 라피노스, 스타키오스 포함)의 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 한 양태에서, FVIII 조성물은 수크로스, 라피노스, 트레할로스, 또는 이들의 혼합물의 그룹으로부터의 하나 이상의 탄수화물을 포함한다. 한 양태에서, FVIII 조성물은 탄수화물을 2 내지 10% w/w, 바람직하게는 3 내지 8% w/w, 바람직하게는 4 내지 6% w/w, 가장 바람직하게는 5% w/w의 농도로 포함한다. 여전히 또 다른 양태에서 탄수화물의 농도는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10% w/w이다.
특정 양태에서 탄수화물은 수크로스이다. 한 양태에서, FVIII 조성물은 수크로스를 2 - 10% w/w, 바람직하게는 3 - 8% w/w, 바람직하게는 4 - 6% w/w, 가장 바람직하게는 5% w/w의 농도로 포함한다. 여전히 또 다른 양태에서 수크로스의 농도는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10% w/w이다.
특정 양태에서 탄수화물은 트레할로스이다. 한 양태에서, FVIII 조성물은 트레할로스를 2 내지 10% w/w, 바람직하게는 3 내지 8% w/w, 바람직하게는 4 내지 6% w/w, 가장 바람직하게는 5% w/w의 농도로 포함한다. 여전히 또 다른 양태에서 트레할로스의 농도는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10% w/w이다.
특정 양태에서 탄수화물은 라피노스이다. 한 양태에서, FVIII 조성물은 라피노스를 2 내지 10% w/w, 바람직하게는 3 내지 8% w/w, 바람직하게는 4 내지 6% w/w, 가장 바람직하게는 5% w/w의 농도로 포함한다. 여전히 또 다른 양태에서 라피노스의 농도는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10% w/w이다.
아미노산
한 양태에서 본 발명의 조성물은 히스티딘 이외에 하나 이상의 아미노산을 추가로 포함한다. 본원에서 사용된 "아미노산"은 천연 또는 비-천연 약제학적으로 허용되는 아미노산을 나타낸다. 아미노산의 비제한적인 예는 이소류신, 알라닌, 류신, 아스파라긴, 라이신, 아스파르트산, 메티오닌, 시스테인, 페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌, 글루타민, 트립토판, 글리신, 발린, 프롤린, 셀레노시스테인, 세린, 티로신, 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 타우린 등을 포함한다. 히스티딘 이외의 아미노산은 바람직하게는 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신, 류신 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
한 양태에서 상기 수성 조성물은 아르기닌 및 이소류신을 포함한다.
한 양태에서 상기 수성 조성물은 아르기닌, 글루탐산 및 페닐알라닌을 포함한다.
한 양태에서 상기 수성 조성물은 아르기닌, 글루탐산, 페닐알라닌 및 메티오닌을 포함한다.
한 양태에서 상기 수성 조성물은 아르기닌, 이소류신 및 메티오닌을 포함한다.
한 양태에서 상기 수성 조성물은 글루타민, 글루탐산, 이소류신 및 메티오닌을 포함한다.
한 양태에서 히스티딘 이외의 아미노산의 농도는 적어도 0.2mM, 바람직하게는 1 내지 300mM, 바람직하게는 5 내지 300mM, 바람직하게는 10 내지 200mM, 바람직하게는 55 내지 150mM, 바람직하게는 25 내지 100mM, 바람직하게는 40 내지 180mM, 바람직하게는 50 내지 90mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 히스티딘 이외의 아미노산의 농도는 0.2, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 200mM이다.
한 양태에서 아르기닌의 농도는 적어도 1mM, 바람직하게는 5 내지 300mM, 바람직하게는 10 내지 200mM, 바람직하게는 55 내지 150mM, 바람직하게는 25 내지 100mM, 바람직하게는 40 내지 180mM, 바람직하게는 50 내지 90mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 아르기닌의 농도는 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 200mM이다.
한 양태에서 이소류신의 농도는 적어도 1mM, 바람직하게는 5 내지 300mM, 바람직하게는 10 내지 200mM, 바람직하게는 55 내지 150mM, 바람직하게는 25 내지 100mM, 바람직하게는 40 내지 180mM, 바람직하게는 50 내지 90mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 이소류신의 농도는 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 200mM이다.
한 양태에서 글루탐산의 농도는 적어도 1mM, 바람직하게는 5 내지 300mM, 바람직하게는 10 내지 200mM, 바람직하게는 55 내지 150mM, 바람직하게는 25 내지 100mM, 바람직하게는 40 내지 180mM, 바람직하게는 50 내지 90mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 글루탐산의 농도는 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 200mM이다.
한 양태에서 페닐알라닌의 농도는 적어도 1mM, 바람직하게는 5 내지 200mM, 바람직하게는 10 내지 160mM, 바람직하게는 55 내지 150mM, 바람직하게는 25 내지 100mM, 바람직하게는 40 내지 180mM, 바람직하게는 50 내지 90mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 페닐알라닌의 농도는 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 또는 200mM이다.
항산화제
본 발명의 조성물은 하나 이상의 항산화제(들)를 추가로 함유할 수 있다. "항산화제"는 본 발명의 의미 내에서 산화 과정을 감속시키고/시키거나 억제하고/하거나 방해하고/하거나 중지시키는 약제학적으로 적합한 화합물 또는 조성물이다. 항산화제는, 특히, 하기 물질을 포함한다: 토코페롤 및 이의 에스테르, 환원된 글루타티온, 메티오닌, 모노티오글리세롤, 시스테인, 호모시스테인, 시스타티오닌, 비타민 A, 참깨유의 세사몰, 벤조인 수지의 코니페릴 벤조에이트, 노르디하이드로구아이에틱 수지(nordihydroguaietic resin) 및 노르디하이드로구아이아레틱산(nordihydroguaiaretic acid; NDGA), 갈레이트(그 중에서도, 메틸, 에틸, 프로필, 아밀, 부틸, 라우릴 갈레이트), 부틸화된 하이드록시아니솔(BHAIBHT, 또한 부틸-p-크레졸); 아스코르브산 및 이의 염 및 에스테르(예를 들면, 아코르빌 팔미테이트), 에리토르빈산(erythorbinic acid)(이소아스코르빈산) 및 이의 염 및 에스테르, 모노티오글리세롤, 나트륨 포름알데히드 설폭실레이트, 메타중아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 부틸화된 하이드록시아니솔, 부틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 프로피온산. 통상적인 항산화제는 토코페롤, 예를 들면, a-토코페롤 및 이의 에스테르, 부틸화된 하이드록시톨루엔 및 부틸화된 하이드록시아니솔이다. 용어 "토코페롤"은 또한 토코페롤의 에스테르를 포함한다. 공지된 토코페롤은 a-토코페롤이다. 용어 "a-토코페롤"은 a-토코페롤의 에스테르(예를 들면, a-토코페롤 아세테이트)를 포함한다. 본 발명의 한 양태에서 항산화제는 메티오닌, 예를 들면, L-메티오닌이다.
한 양태에서, 항산화제의 농도는 적어도 0.05mM, 바람직하게는 0.05 내지 100mM, 바람직하게는 0.1 내지 80mM, 바람직하게는 0.2 내지 50mM, 바람직하게는 0.5 내지 70mM, 바람직하게는 1 내지 25mM, 바람직하게는 0.1 내지 20mM, 바람직하게는 0.25 내지 1mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 항산화제의 농도는 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0, 10.0, 11.0, 12.0, 13.0, 14.0, 15.0, 16.0, 17.0, 18.0, 19.0, 20.0, 25.0, 30.0, 35.0, 40.0, 45.0, 50.0, 55.0, 60.0, 65.0, 70.0, 75.0, 80.0, 85.0, 90.0, 95.0 또는 100.0mM이다.
한 양태에서, 메티오닌의 농도는 적어도 0.05mM, 바람직하게는 0.05 내지 100mM, 바람직하게는 0.1 내지 80mM, 바람직하게는 0.2 내지 50mM, 바람직하게는 0.5 내지 70mM, 바람직하게는 1 내지 25mM, 바람직하게는 0.1 내지 20mM, 바람직하게는 0.25 내지 5mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 메티오닌의 농도는 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0, 10.0, 11.0, 12.0, 13.0, 14.0, 15.0, 16.0, 17.0, 18.0, 19.0, 20.0, 25.0, 30.0, 35.0, 40.0, 45.0, 50.0, 55.0, 60.0, 65.0, 70.0, 75.0, 80.0, 85.0, 90.0, 95.0 또는 100.0mM이다.
한 양태에서, 글루타티온의 농도는 적어도 0.05mM, 바람직하게는 0.05 내지 100mM, 바람직하게는 0.1 내지 80mM, 바람직하게는 0.2 내지 50mM, 바람직하게는 0.5 내지 70mM, 바람직하게는 1 내지 25mM, 바람직하게는 0.1 내지 20mM, 바람직하게는 0.25 내지 1mM이다. 여전히 또 다른 양태에서 글루타티온의 농도는 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0, 10.0, 11.0, 12.0, 13.0, 14.0, 15.0, 16.0, 17.0, 18.0, 19.0, 20.0, 25.0, 30.0, 35.0, 40.0, 45.0, 50.0, 55.0, 60.0, 65.0, 70.0, 75.0, 80.0, 85.0, 90.0, 95.0 또는 100.0mM이다.
안정화제
본 발명의 조성물은 안정화제를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "안정화제"는 용액 상태에서 또는 동결-융해 뿐만 아니라 동결-건조 및 차후 탈수된 동결건조물의 저장 동안 수성 제형에서 불안정한 치료제의 안정화를 돕는 화학물질(다른 동의어는 예를 들면, "보조용매", "공존-용질(co-solute)", "화학적 첨가제; "부형제"이다)을 나타낸다. 본원에 제공된 제형 및 방법을 위한 적합한 안정화제의 예는, 제한 없이, 완충제(예를 들면, 트리스, 헤페스, 아미노산 등), 삼투물질(예를 들면, 당, 당 알코올 등), 동결방지제(cryoprotectant)/동결건조보호제(lyoprotectant)(예를 들면, 알코올, 예를 들면, 글리세롤, 메탄올, 이소프로판올; 당, 예를 들면, 수크로스, 자일리톨, 덱스트로스, 트레할로스; 카복실산 및 카복실레이트, 예를 들면, 락트산 및 락테이트, 말산 및 말레에이트; PEG, 예를 들면, 에틸렌 글리콜, PEG 200, PEG 2 000, PEG 20　000; 중합체, 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈, PVP 12, PVP 17,PVP 30; 벌킹제(예를 들면, 아미노산, 폴리올, 예를 들면, 만니톨 등), 염, 중합체, 계면활성제, 항산화제 등을 포함한다.
안정화제의 농도는 제제의 화학적 성질에 의존적이며, 상기 본원의 개시내용에 따라 선택될 수 있다.
안정성
상기 제공된 조성물의 특정 양태에서, 조성물은 안정하다. 본원에 사용된 용어 "안정한"은 일정 기간 동안 저장 후 FVIII 활성 검정에 의해 측정된 조성물의 효능이 저장 전 효능의 적어도 80%임을 의미한다. 달리 본원에 지시되지 않는 한, 안정성 시험은 2003년 8월자로 제목이 "NOTE FOR GUIDANCE ON STABILITY TESTING: STABILITY TESTING OF NEW DRUG SUBSTANCES AND PRODUCTS"인 유럽 의약청(European Medicines Agency)으로부터의 문서 CPMP/ICH/2736/99에 기재된 바와 같이 수행된다.
일련의 양태에서, 본원에 제공된 조성물은 동결건조시 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48개월 이상 동안 안정할 것이다(25℃; 40% 상대 습도[RH]). 바람직한 양태에서, 동결건조된 조성물은 적어도 6개월 동안 안정할 것이다(25℃; 40% RH). 더 바람직한 양태에서, 동결건조된 조성물은 적어도 12개월 동안 안정할 것이다(25℃; 40% RH). 또 다른 바람직한 양태에서, 동결건조된 조성물은 적어도 18개월 동안 안정할 것이다(25℃; 40% RH). 또 다른 바람직한 양태에서, 동결건조된 조성물은 적어도 24개월 동안 안정할 것이다(25℃; 40% RH). 또 다른 바람직한 양태에서, 동결건조된 조성물은 적어도 36개월 동안 안정할 것이다(25℃; 40% RH).
상기 제공된 조성물의 특정 양태에서, 동결건조된 조성물은, 25℃/40% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 30℃/40% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 40℃/40% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 25℃/60% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 30℃/60% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 40℃/60% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 25℃/65% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 30℃/65% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 40℃/65% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 25℃/75% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 30℃/75% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 40℃/75% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 25℃/25% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 30℃/25% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
상기 제공된 조성물의 또 다른 양태에서, 동결건조된 조성물은, 40℃/25% RH에서 저장될 때, 적어도 6개월, 바람직하게는 적어도 12개월, 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안 안정하다.
바람직하게는, 상기 정의된 조건 중 하나의 조건 하에 동결건조된 조성물의 저장 후, SE-HPLC로 측정된, 고분자량 성분의 양은 3% 이하이다. 본원의 실시예에 기재된 바와 같이 SE-HPLC로 측정된 고분자량 성분의 양.
한 양태에서 상기 조성물은, 4℃에서 액체 상태로 저장될 때, 적어도 48시간, 바람직하게는 적어도 72시간, 더 바람직하게는 적어도 96시간, 가장 바람직하게는 적어도 1주 동안 안정하다. 수성 조성물은 통상적으로, 2 내지 8℃에서 액체 상태로 저장될 때, 적어도 48시간, 바람직하게는 적어도 72시간, 더 바람직하게는 적어도 96시간, 가장 바람직하게는 적어도 1주 동안 이의 인자 VIII 활성의 적어도 80%를 유지한다. 이는 동결건조 전 수성 조성물에 적용되고/되거나 동결건조, 및 수용액, 예를 들면, 증류수 중에서 재구성 후 수성 조성물에 적용된다.
상기 제공된 조성물의 특정 양태에서, 상기 조성물은, 4℃에서 액체 상태로 저장될 때, 적어도 48시간, 바람직하게는 적어도 72시간, 더 바람직하게는 적어도 96시간, 가장 바람직하게는 적어도 1주 동안 이의 인자 VIII 활성의 적어도 85%를 유지한다. 이는 동결건조 전 수성 조성물에 적용되고/되거나 동결건조, 및 수용액, 예를 들면, 증류수 중에서 재구성 후 수성 조성물에 적용된다.
상기 제공된 조성물의 특정 양태에서, 상기 조성물은, 4℃에서 액체 상태로 저장될 때, 적어도 48시간, 바람직하게는 적어도 72시간, 더 바람직하게는 적어도 96시간, 가장 바람직하게는 적어도 1주 동안 이의 인자 VIII 활성의 적어도 90%를 유지한다. 이는 동결건조 전 수성 조성물에 적용되고/되거나 동결건조, 및 수용액, 예를 들면, 증류수 중에서 재구성 후 수성 조성물에 적용된다.
본 발명의 특정 양태에서, 상기 조성물은, 예를 들면, 동결건조 전 또는 동결건조 및 물 중에서 재구성시, 혼탁이 거의 없거나 아예 없다. 본원에 사용된 용어 "혼탁도"는 용액의 유백광(opalescence)을 나타낸다. 혼탁도는 문헌(참조: Pharm. Eur. 8.0, section 2.2.1. "Clarity and degree of opalescence of liquids")에 기재된 바와 같이, 시각적으로 또는 기기적으로 측정될 수 있다. 본원에서 혼탁도에 대한 임의의 언급은 문헌(참조: Pharm. Eur. 8.0, section 2.2.1."Clarity and degree of opalescence of liquids")에 기재된 방법을 나타낸다.
한 양태에서, 본 발명의 조성물은 18 NTU 이하의 혼탁도를 갖는다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 조성물은 6 NTU 이하의 혼탁도를 갖는다. 여전히 또 다른 양태에서, 본 발명의 조성물은 3 NTU 이하의 혼탁도를 갖는다. 이들 혼탁도 값은 동결건조 전, 및 동결건조 및 증류수 중에서 재구성 후 충족된다.
여전히 또 다른 양태에서, 본 발명의 조성물은 투명하다. 본원에서, 조성물 또는 용액은, 이의 유백광이 문헌(참조: Pharm. Eur. 8.0, section 2.2.1. "Clarity and degree of opalescence of liquids")에 기재된 "참조 현탁액 III"의 것보다 더 현저하지 않은 경우 "투명한" 것으로 간주된다. "혼탁을 갖지 않는" 또는 "혼탁이 없는" 조성물이 본원에 언급되는 경우, 상기 조성물은 이러한 정의에 따라서 "투명한" 것으로 이해되어야 한다.
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 1)이 바람직하다:
Figure pct00002
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 2)이 더욱 바람직하다:
Figure pct00003
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 3)이 더욱 바람직하다:
Figure pct00004
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 4)이 더욱 바람직하다:
Figure pct00005
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 5)이 더욱 바람직하다:
Figure pct00006
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 6)이 바람직하다:
Figure pct00007
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 7)이 바람직하다:
Figure pct00008
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 8)이 바람직하다:
Figure pct00009
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 9)이 바람직하다:
Figure pct00010
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 10)이 바람직하다:
Figure pct00011
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 11)이 바람직하다:
Figure pct00012
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 12)이 바람직하다:
Figure pct00013
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 13)이 바람직하다:
Figure pct00014
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 14)이 바람직하다:
Figure pct00015
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 15)이 더욱 바람직하다:
Figure pct00016
Figure pct00017
또 다른 양태에서 조성물 170 내지 233은 계면활성제, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[예를 들면, 트윈 80]를, 바람직하게는 적어도 0.001% w/w의 농도로 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서 조성물 170 내지 233은 히스티딘 이외의 하나 이상의 아미노산을 추가로 포함한다. 다른 아미노산은, 바람직하게는 적어도 1mM의 농도에서, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신 또는 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서 조성물 170 내지 233은 항산화제를, 바람직하게는 적어도 0.05mM의 농도에서 추가로 포함한다. 항산화제의 예는 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 본 발명의 한 양태에서 항산화제는 메티오닌, 예를 들면, L- 메티오닌이다.
또 다른 양태에서, 조성물 170 내지 233은 6.0-8.0 또는 6.5-7.5 또는 6.8-7.2 또는 7의 pH를 갖는다.
또 다른 양태에서 조성물 170 내지 233은
a. 바람직하게는 적어도 0.001% w/w의 농도의 계면활성제로서 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[예를 들면, 트윈　80],
b. 바람직하게는 적어도 1mM 농도의, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신 또는 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택되는 히스티딘 이외의 하나 이상의 아미노산,
c. 바람직하게는 적어도 0.05mM의 농도의, 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택되는 항산화제를 추가로 포함하며,
d. 상기 조성물은 6.0-8.0 또는 6.5-7.5 또는 6.8-7.2 또는 7의 pH를 갖는다.
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 16)이 바람직하다:
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
또 다른 양태에서 조성물 234 내지 297은 바람직하게는 적어도 0.001% w/w 농도의 계면활성제, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[예를 들면, 트윈 80]를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서 조성물 234 내지 297은 히스티딘 이외의 하나 이상의 아미노산을 추가로 포함한다. 다른 아미노산은 바람직하게는 적어도 1mM 농도의, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신 또는 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서 조성물 234 내지 297은 바람직하게는 적어도 0.05mM 농도의 항산화제를 추가로 포함한다. 항산화제의 예는 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 본 발명의 한 양태에서 항산화제는 메티오닌, 예를 들면, L-메티오닌이다.
또 다른 양태에서, 조성물 234 내지 297은 6.0-8.0 또는 6.5-7.5 또는 6.8-7.2 또는 7의 pH를 갖는다.
또 다른 양태에서 조성물 234 내지 297은
e. 바람직하게는 적어도 0.001% w/w 농도의 계면활성제로서 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[예를 들면, 트윈 80],
f. 바람직하게는 적어도 1mM 농도의, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신 또는 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택되는 히스티딘 이외의 하나 이상의 아미노산,
g. 바람직하게는 적어도 0.05mM 농도의, 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택되는 항산화제를 추가로 포함하며,
h. 상기 조성물은 6.0-8.0 또는 6.5-7.5 또는 6.8-7.2 또는 7의 pH를 갖는다.
하기를 포함하는 다음의 조성물(표 17)이 바람직하다:
Figure pct00021
Figure pct00022
또 다른 양태에서 조성물 298 내지 361은 바람직하게는 적어도 0.001% w/w 농도의 계면활성제, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[예를 들면, 트윈 80]를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서 조성물 298 내지 361은 히스티딘 이외의 하나 이상의 아미노산을 추가로 포함한다. 다른 아미노산은 바람직하게는 적어도 1mM 농도의, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신 또는 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서 조성물 298 내지 361은 바람직하게는 적어도 0.05mM 농도의 항산화제를 추가로 포함한다. 항산화제의 예는 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 본 발명의 한 양태에서 항산화제는 메티오닌, 예를 들면, L-메티오닌이다.
또 다른 양태에서, 조성물 298 내지 361은 6.0-8.0 또는 6.5-7.5 또는 6.8-7.2 또는 7의 pH를 갖는다.
또 다른 양태에서 조성물 298 내지 361은
i. 바람직하게는 적어도 0.001% w/w 농도의 계면활성제로서 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트[예를 들면, 트윈　80],
j. 바람직하게는 적어도 1mM 농도의, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 이소류신 또는 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택되는 히스티딘 이외의 하나 이상의 아미노산,
k. 바람직하게는 적어도 0.05mM 농도의, 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 혼합물로 이루어진 목록으로부터 선택되는 항산화제를 추가로 포함하며,
l. 상기 조성물은 6.0-8.0 또는 6.5-7.5 또는 6.8-7.2 또는 7의 pH를 갖는다.
특정 양태에서 본 발명은 상기 기재된 수성 조성물을 동결건조시켜 수득가능한 조성물에 관한 것이다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 기재된 수성 조성물을 동결건조시켜 수득된 조성물에 관한 것이다.
특정 양태에서 본 발명은 상기 기재된 동결건조된 수성 조성물을 적합한 용매로 재구성하여 수득가능한 조성물에 관한 것이다.
특정 양태에서 조성물은 상기 기재된 동결건조된 수성 조성물을 적합한 용매로 재구성하여 수득가능하며, 여기서 적합한 용매는 수용액이다.
특정 양태에서 조성물은 상기 기재된 동결건조된 수성 조성물을 수용액으로 재구성하여 수득가능하며, 여기서 수용액은 링거액, 링거 락테이트 용액(Ringer's lactate solution), 및 비경구 용도를 위한 임의의 다른 적합한 용액을 포함하는 그룹으로부터 선택된다.
특정 양태에서 조성물은 상기 기재된 동결건조된 수성 조성물을 수용액으로 재구성하여 수득가능하며, 여기서 수용액은 물, 바람직하게는 "주사용 물"이다.
특정 양태에서 조성물은 상기 기재된 동결건조된 수성 조성물을 수용액으로 재구성하여 수득가능하며, 여기서 수용액은 염화나트륨 용액이다.
특정 양태에서 조성물은 상기 기재된 동결건조된 수성 조성물을 수용액으로 재구성하여 수득가능하며, 여기서 수용액은 히스티딘 용액이다.
본 발명의 또 다른 측면은 혈액 응고 장애, 예를 들면, A형 혈우병의 치료에서의 본원에 기재된 조성물의 용도이다.
상기 제공된 조성물의 특정 양태에서, 조성물은 피하 및/또는 근육내 투여를 위해 제형화된다.
조성물은 경구로, 국소로, 경피로, 비경구로, 흡입 스프레이로, 질내로, 직장으로 또는 두개내 주사로, 바람직하게는 비경구로 투여된다. 본원에 사용된 용어 비경구는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 수조내 주사, 또는 주입 기술을 포함한다. 특정 부위에 정맥내, 피내, 근육내, 유방내, 복강내, 경막내, 안구후(retrobulbar), 폐내 주사 및/또는 외과적 이식에 의한 투여가 마찬가지로 고려된다. 일반적으로, 조성물은 본질적으로 발열원(예를 들면, 유럽 약전 7.0/2.06.08.00 참조), 뿐만 아니라 수용자에게 해로울 수 있는 다른 불순물이 없다.
실시예
하기 실시예는 FVIII 분자(서열 번호: 2; WO 2004/067566에 기재된 작제물 dBN(64-53))를 사용하여 수행되었다. 이러한 FVIII 분자는 하기에서 "CSL627"로 지칭될 것이다.
발색 FVIII :C 검정
발색 FVIII:C 검정을 Coamatic FVIII 검사 키트를 사용하여 수행했다(Chromogenix-Instrumentation Laboratory SpA V. le Monza 338 - 20128 Milano, Italy).
검정의 원리: 칼슘 및 인지질의 존재 하에, 인자 X는 인자 IXa 내지 인자 Xa에 의해 활성화된다. 이 반응은 보조인자로서 인자 VIIIa에 의해 자극된다. F VIIIa는 측정될 샘플에서 F VIII로부터 반응 혼합물 중 소량의 트롬빈에 의해 형성된다. 최적 농도의 Ca2 +, 인지질 및 인자 IXa 및 과량의 인자 X를 사용하는 경우, 인자 X의 활성화는 인자 VIII의 효능에 비례한다. 활성화 인자 X는 발색 기질 S-2765로부터 발색단 pNA를 방출시킨다. 따라서 405 nm에서 측정된 pNA의 방출은 형성된 FXa의 양에 비례하며, 따라서, 또한 샘플의 인자 VIII 활성에 비례한다. 검정은 베링(Behring) 응고 타이머(BCT) 또는 베링 응고 시스템(BCS)(둘 모두 Siemens Healthcare Diagnostics GmbH, Ludwig-Erhard-Straβe 12, 65760 Eschborn, Germany로부터 입수됨)의 자동 응고 분석기 상에서 수행되도록 조정되었다.
한 단계 응고 검정
FVIII:C 한 단계 응고 검정을 패스롬틴(Pathromtin) SL 시약 및 FVIII 결핍 혈장(둘 모두 Siemens Healthcare Diagnostics products GmbH, Emil-von-Behring -Str. 76, 35041 Marburg, Germany로부터 입수됨)을 사용하여 수행했다.
검정의 원리: 시험은 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(activated Partial Thromboplastin Time; aPTT)-검정의 변형된 버전으로 실행된다: 혈장을 인지질 및 표면 활성제로 항온처리하여 고유 응고계(coagulation system)의 인자의 활성화를 유도한다. 칼슘 이온을 첨가하여 응고 케스케이드를 촉발시킨다. 측정가능한 피브린 혈전(clot)의 형성 시간을 측정한다. 검정은 인자 VIII 결핍 혈장의 존재 하에 수행된다. 결핍 혈장의 응고 능력은 시험될 샘플에 포함된 응고 인자 VIII에 의해 회복된다. 응고 시간의 단축은 샘플에 존재하는 인자 VIII의 양에 비례한다. 응고 인자 VIII의 활성은 국제 단위로 공지된 활성의 인자 VIII을 갖는 표준 제제와의 직접적인 비교에 의해 정량화된다.
검정은 베링 응고 타이머(BCT) 또는 베링 응고 시스템(BCS)(둘 모두 Siemens Healthcare Diagnostics GmbH, Ludwig-Erhard-Straβe 12, 65760 Eschborn, Germany로부터 입수됨)의 자동 응고 분석기 상에서 수행되도록 조정되었다.
크기 배제 HPLC 에 의한 고분자량 성분( HMWC )
크기 배제 HPLC는 COSMOSIL Diol-300-II 7.5 x 600mm 컬럼(Nacalai Tesque, Kyoto, Japan), 및 여기 파장 280nm 및 방출 파장 340nm에서의 형광 검출을 사용하여 수행되었다. 이동상의 조성은 300mM NaCl, 20mM 헤페스, 10mM CaCl2 * 2H2O, 0,005% 트윈 80, 10% 이소프로판올, pH 7.0이었다. 용출은 주위 실온에서 75분에 걸쳐 0.5mL/분의 유속에서 등용매(isocratic)였다.
실시예 1:
FVIII 제형의 제조 및 탈염 컬럼을 통한 버퍼 교환 후 용액 특성의 평가
9500 IU/ml의 FVIII:C 활성(발색 기질 방법)에서 정제된 CSL627은 공급자 지침에 따라 NAP-25 탈염 컬럼(GE Healthcare Sephadex™ G 25; Cat. No. 17-0852-01)을 통한 버퍼 교환에 의해 목적하는 조성물로 제형화되었다. 이러한 버퍼 교환에 의해 1.4의 희석 인자를 초래했다.
이후 상이한 조성물을 이들의 외관(혼탁도) 및 FVIII:C 활성에서의 수율에 대해 조사했다.
FVIII:C의 수율은 버퍼 교환 후 수득된 조성물에서 FVIII:C의 양을 버퍼 교환 전 용액 중 FVIII:C의 양으로 나눈 값의 백분율로서 계산되었으며, 이때 버퍼 교환에 의해 희석에 대해 적절히 조정된다(희석 인자 1.4)
Figure pct00023
실시예 2:
FVIII 제형의 제조 및 탈염 컬럼을 통한 버퍼 교환 후 용액 특성의 평가
상이한 조성물을 실시예 1에 기재된 버퍼 교환에 의해 수득했다(출발 물질에서 FVIII:C 활성은 9733 IU/mL였다). 조성물은 버퍼 교환 후 이의 외관에 대해 평가되었다. 또한 조성물은 이후 멸균 여과(0.22μm)되었고 여과시 바로(시간 0) 및 1, 2, 3, 15, 30 및 60일 동안 +2 - +8℃에서의 저장 및 1, 2 및 3일 동안 +25℃ 및 +40℃에서의 저장 후 이의 FVIII:C 활성에 대해 검정되었다.
회수율(안정성)은 저장 후 FVIII:C를 시간 0에서의 FVIII:C 활성으로 나눈 값의 백분율로서 계산되었다(발색 기질 FVIII 활성 검정). 시간 0에서 FVIII:C 활성(0.22μm 여과 후)을 100%로 정의했다.
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
실시예 3:
탈염 컬럼을 통한 버퍼 교환 후 용액의 외관
상이한 조성물을 실시예 1에 기재된 버퍼 교환에 의해 수득했다(출발 물질에서 발색 기질 FVIII 활성 검정에 의한 FVIII:C 활성은 8317 IU/mL였다). 조성물은 버퍼 교환 후 이의 외관에 대해 평가되었다.
Figure pct00027
실시예 4:
탈염 컬럼을 통한 버퍼 교환 후 용액의 외관 및 FVIII:C 활성의 수율 및 저장시 FVIII:C 활성의 회수율.
상이한 조성물을 실시예 1에 기재된 버퍼 교환에 의해 수득했다(출발 물질에서 FVIII:C 활성은 4780 IU/mL였다).
조성물은 버퍼 교환 후 이의 외관에 대해 평가되었다. 또한 조성물은 이후 멸균 여과(0.22μm)되었고, 여과시 바로(시간 0) 및 1,2 및 3일 동안 2 - 8℃에서의 저장 및 3일 동안 25℃ 및 40℃에서의 저장 후 이의 FVIII:C 활성(발색 기질 검정)에 대해 검정되었다.
FVIII:C 활성에서 제형화 공정의 수율은 버퍼 교환 후 수득된 조성물에서의 FVIII:C를 버퍼 교환 전 용액에서의 FVIII:C로 나눈 값의 백분율로서 계산되었으며, 이때 희석에 대해 적절히 조정되었다. 저장시 회수율(안정성)은 저장 후 FVIII:C를 시간 0에서의 FVIII:C 활성으로 나눈 값의 백분율로서 계산되었다. 시간 0에서의 FVIII:C 활성(0.22μm 여과 후)을 100%로 정의했다.
Figure pct00028
실시예 5:
상승된 온도에서 저장시 동결-건조된 제제에서 HMWC 형성(SE-HPLC).
이 실시예의 제형의 FVIII:C 활성 및 부형제의 농도는 FVIII 농축물을 적절한 버퍼 용액으로 희석하여 조정되었다. 수득된 제형은 430 내지 480 IU/mL의 FVIII:C 농도를 나타냈다. 이후 상기 용액을 분배하고(2.5mL) 동결건조시켰다. 수득된 동결건조물을 +40℃에서 저장하고, 샘플을 1, 3, 6 및 12개월 후 채취했다. 동결건조물의 저장 전 및 후 재구성된 용액으로부터 샘플을 채취하고, -70℃에서 동결시켰다. 수욕(+37℃)에서 해동 후 샘플에서의 HMWC는 SE-HPLC로 측정되었다.
Figure pct00029
실시예 6:
상승된 온도에서 저장시 동결-건조된 제제에서 FVIII:C 발색 기질 활성 검정 및 HMWC 형성(SE-HPLC)
FVIII:C 활성 및 부형제의 농도는 FVIII 농축물을 적절한 버퍼 용액으로 희석하여 조정되었다. 이후 상기 용액을 분배하고(2.5mL) 동결건조시켰다. 수득된 동결건조물을 +40℃에서 저장하고, 샘플을 1, 3, 6, 12, 18 및 24개월 후 채취했다. 동결건조물의 저장 전 및 후 재구성된 용액으로부터 샘플을 채취하고, -70℃에서 동결시켰다. 수욕(+37℃)에서 해동 후, 동결 저장된 샘플에서 HMWC를 측정했다.
FVIII:C 활성(발색 기질 FVIII 활성 검정)은 동결-건조 전 새로운 용액에서, 및 동결-건조 후 바로 또는 저장 후 새롭게 재구성된 동결건조물에서 측정되었다. 회수율(안정성)은 저장 후 FVIII:C를 시간 0에서의 FVIII:C 활성으로 나눈 값의 백분율로서 계산되었다. (동결-건조 후) 시간 0에서의 FVIII:C 활성을 100%로 정의했다.
Figure pct00030
Figure pct00031
실시예 7:
FVIII 제형의 제조 및 탈염 컬럼을 통한 버퍼 교환 후 용액 특성의 평가.
정제된 CSL627은 공급자 지침에 따라 그리고 실시예 1에 기재된 바와 같이 NAP-25 탈염 컬럼(GE Healthcare Sephadex™ G 25; Cat. No. 17-0852-01)을 통한 버퍼 교환에 의해 목적하는 조성물로 제형화되었다. 이후, 상이한 조성물을 발색 활성 검정을 토대로 희석하여 약 7000 IU/mL의 발색 기질 FVIII 활성 검정을 사용한 FVIII:C 활성(효능)을 수득했다. 이후 상이한 조성물은 이의 외관(혼탁도)에 대해 조사되었다.
Figure pct00032
결과는 도 1에서 그래프로 도시된다. 점 표시는 18 NTU의 역치 수준을 초과하는 혼탁도를 나타내며, 다이아몬드 표시는 투명한 용액(18 NTU 이하의 혼탁도)을 나타낸다.
실시예 8
상승된 온도에서 저장시 동결-건조된 제제에서 HMWC 형성(SE-HPLC)
이 실시예의 제형의 FVIII:C 활성 및 부형제의 농도는 FVIII 농축물(CSL627)을 적절한 버퍼 용액으로 희석하여 조정되었다. 수득된 제형은 약 390 내지 435 IU/mL의 FVIII:C 농도를 나타냈다. 이후 상기 용액을 분배하고(2.5mL) 동결건조시켰다. 수득된 동결건조물을 +40℃에서 저장하고, 샘플을 1, 3, 6, 9 및 12개월 후 채취했다. 동결건조물의 저장 전 및 후 재구성된 용액으로부터 샘플을 채취하고, -70℃에서 동결시켰다. 수욕(+37℃)에서 해동 후 샘플에서의 HMWC를 SE-HPLC로 측정했다.
Figure pct00033
실시예 9
상승된 온도에서 저장시 동결-건조된 제제에서 FVIII:C 발색 기질 활성 검정 및 HMWC 형성(SE-HPLC)
FVIII:C 활성 및 부형제의 농도는 FVIII 농축물(CSL627)을 적절한 버퍼 용액으로 희석하여 조정되었다. 이후 상기 용액을 분배하고(2.5mL) 동결건조시켰다. 수득된 동결건조물을 +40℃에서 저장하고, 샘플을 1, 3, 6, 9 및 12개월 후 채취했다. 동결건조물의 저장 전 및 후 재구성된 용액으로부터 샘플을 채취하고, -70℃에서 동결시켰다. 수욕(+37℃)에서 해동 후, 동결 저장된 샘플에서의 HMWC를 측정했다.
FVIII:C 활성(발색 기질 FVIII 활성 검정)은 동결-건조 전 새로운 용액에서, 및 동결-건조 후 바로 또는 저장 후 새롭게 재구성된 동결건조물에서 측정되었다. 회수율(안정성)은 저장 후 FVIII:C를 시간 0에서의 FVIII:C 활성으로 나눈 값의 백분율로서 계산되었다. (동결-건조 후) 시간 0에서의 FVIII:C 활성을 100%로 정의했다.
Figure pct00034
Figure pct00035
실시예 10
상승된 온도에서 저장시 동결-건조된 제제에서 FVIII:C 발색 기질 활성 검정 및 HMWC 형성(SE-HPLC).
FVIII:C 활성 및 부형제의 농도는 FVIII 농축물(CSL627)을 적절한 버퍼 용액으로 희석함으로써 조정되었다. 이후 용액을 분배하고(2.5mL) 동결건조시켰다. 수득된 동결건조물을 +40℃에서 저장하고, 샘플을 3, 6 및 9개월 후 채취했다. 동결건조물의 저장 전 및 후 재구성된 용액으로부터 샘플을 채취하고, -70℃에서 동결시켰다. 수욕(+37℃)에서 해동 후, 동결 저장된 샘플에서의 HMWC를 측정했다.
FVIII:C 활성(발색 기질 FVIII 활성 검정)을 동결-건조 전에 새로운 용액에서 그리고 동결-건조 후 바로 또는 저장 후 새롭게 재구성된 동결건조물에서 측정했다. 회수율(안정성)은 저장 후 FVIII:C 활성을 시간 0에서의 FVIII:C 활성으로 나눈 값의 백분율로서 계산되었다. 시간 0에서의 FVIII:C 활성(동결-건조 후)을 100%로 정의했다.
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
<110> CSL LIMITED <120> FACTOR VIII FORMULATION <130> A213 <150> EP 14179732.4 <151> 2014-08-04 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 2332 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro 20 25 30 Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys 35 40 45 Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile Ala Lys Pro 50 55 60 Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln Ala Glu Val 65 70 75 80 Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser His Pro Val 85 90 95 Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp Asp Lys Val 115 120 125 Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu Lys Glu Asn 130 135 140 Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser Tyr Leu Ser 145 150 155 160 His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile Gly Ala Leu 165 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Ser 885 890 895 Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala 900 905 910 Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe 915 920 925 Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys 930 935 940 Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His 945 950 955 960 Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn 965 970 975 Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe 980 985 990 Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu 995 1000 1005 Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr 1010 1015 1020 Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met 1025 1030 1035 Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg 1040 1045 1050 Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile 1055 1060 1065 His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr 1070 1075 1080 Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val 1085 1090 1095 Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu 1100 1105 1110 Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe Leu Val 1115 1120 1125 Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly His 1130 1135 1140 Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp 1145 1150 1155 Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala 1160 1165 1170 Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu 1175 1180 1185 Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln 1190 1195 1200 Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser 1205 1210 1215 Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly 1220 1225 1230 Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys 1235 1240 1245 His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu 1250 1255 1260 His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu 1265 1270 1275 Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu 1280 1285 1290 Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe 1295 1300 1305 Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala Arg Leu His 1310 1315 1320 Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro 1325 1330 1335 Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met Lys Val Thr 1340 1345 1350 Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr 1355 1360 1365 Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His Gln Trp 1370 1375 1380 Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly Asn 1385 1390 1395 Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu 1400 1405 1410 Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln 1415 1420 1425 Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu 1430 1435 1440 Tyr

Claims (23)

  1. a. FVIII 분자;
    b. 40 내지 195mM의 나트륨 염;
    c. 히스티딘;
    d. 적어도 1mM의 칼슘 염; 및
    e. 계면활성제
    를 포함하는, 응고 인자 VIII의 수성 조성물로서;
    [His] ≥ 180mM - 20*[Ca2 +]이고, 여기서 [Ca2 +]은 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 칼슘 이온의 농도이고, [His]는 1리터당 밀리몰로 표시되는 상기 수성 조성물 중 히스티딘의 농도이고, 단, [His] > 0이며; 상기 조성물의 삼투압농도(osmolarity)는 600 mOsmol/L 이하인, 응고 인자 VIII의 수성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 수성 조성물 중 나트륨 염의 농도가 45 내지 95mM인, 수성 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, [His]가 5 내지 200mM인, 수성 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, [Ca2 +]이 5 내지 100mM인, 수성 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수성 조성물의 pH가 5 내지 9인, 수성 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이, (i) 동결건조, (ii) +25℃의 온도 및 40%의 상대 습도에서 12개월의 기간 동안 동결건조된 조성물의 저장 및 (iii) 증류수 중에서 상기 동결건조된 조성물의 차후 재구성시, (i) 동결건조 및 동결건조된 조성물의 저장 없이, (ii) 증류수 중에서 차후 즉시 재구성시 동일한 조성물과 비교하여 적어도 80%의 FVIII:C 활성의 회수율을 나타내는, 수성 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수성 조성물이, 4℃에서 액체 상태로 저장할 때, 적어도 48시간 동안 이의 인자 VIII 활성의 적어도 80%를 유지하는, 수성 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 염이 염화칼슘인, 수성 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나트륨 염이 염화나트륨인, 수성 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 탄수화물을 추가로 포함하는, 수성 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 탄수화물이 수크로스인, 수성 조성물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 탄수화물의 농도가 1 내지 20% (w/w)인, 수성 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 0.001 내지 0.2% (v/v)인, 수성 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 비-천연 발생 계면활성제인, 수성 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산을 추가로 포함하는, 수성 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 히스티딘 이외의 적어도 하나의 아미노산이 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 류신, 이소류신 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 수성 조성물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 적어도 하나의 항산화제를 추가로 포함하는, 수성 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제가 환원된 글루타티온, 메티오닌, 시스테인, 아황산나트륨, 비타민 A, 비타민 E, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 수성 조성물.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 적어도 하나의 항산화제의 농도가 0.05 내지 100mM인, 수성 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FVIII 분자가 비-천연 발생 FVIII 분자, 바람직하게는 재조합으로 생성된 FVIII 분자, 예를 들면, (i) B-도메인 결실되거나 말단절단된(truncated) FVIII 분자, (ii) 재조합으로 생성된 이중쇄 FVIII 분자, 또는 (iii) 단일쇄 FVIII 분자인, 수성 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 수성 조성물을 동결건조시켜 수득가능한 조성물.
  22. 제21항에 따른 동결건조된 조성물을 수용액으로 재구성하여 수득가능한, 응고 인자 VIII의 수성 조성물.
  23. 제1항에 정의된 성분들을 혼합하여 수성 조성물을 수득하고, 상기 수성 조성물을 동결건조시킴을 포함하는, FVIII 분자의 안정화 방법.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106279437B (zh) * 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
JP7113429B2 (ja) 2016-11-29 2022-08-05 Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 タンパク質組成物、その製造方法及び熱安定性向上方法
WO2018132874A1 (en) * 2017-01-19 2018-07-26 Csl Limited Method of preventing an immune response with alpha- 1 anti-trypsin
EP3706720A4 (en) 2017-11-07 2021-08-18 Rani Therapeutics, LLC COAGULATION FACTOR PREPARATIONS TO BE ADMINISTERED INTO INTESTINAL TRACT TISSUE BY MEANS OF A MEDICINAL DELIVERY DEVICE
CN110950964B (zh) * 2018-09-26 2021-06-18 安源医药科技（上海）有限公司 突变型单链人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
CN112138149A (zh) * 2019-06-28 2020-12-29 北京基科晟斯医药科技有限公司 重组凝血因子viii制剂
WO2022099223A2 (en) 2020-11-09 2022-05-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Purification of fviii from plasma using silicon oxide adsorption

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1712223A1 (en) * 2004-06-25 2006-10-18 Green Cross Holdings Pharmaceutical preparation of recombinant factor VIII lyophilized without albumin as a stabilizer
KR20060109950A (ko) * 2003-12-19 2006-10-23 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
KR20110073434A (ko) * 2008-09-03 2011-06-29 옥타파마 아게 재조합에 의해 제조된 인자 ⅷ을 위한 신규한 보호 조성물
WO2013083858A1 (en) * 2012-04-24 2013-06-13 Novo Nordisk A/S Compounds suitable for treatment of haemophilia

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5605884A (en) 1987-10-29 1997-02-25 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Factor VIII formulations in high ionic strength media
US4877608A (en) 1987-11-09 1989-10-31 Rorer Pharmaceutical Corporation Pharmaceutical plasma protein formulations in low ionic strength media
ES2097120T3 (es) 1989-07-24 1997-04-01 Bayer Ag Estabilizacion de proteinas altamente purificadas.
DE4001451A1 (de) 1990-01-19 1991-08-01 Octapharma Ag Stabile injizierbare loesungen von faktor viii und faktor ix
DE4111393A1 (de) 1991-04-09 1992-10-15 Behringwerke Ag Stabilisierte faktor viii-praeparationen
EP0638091B1 (en) 1992-04-30 2005-12-07 Probitas Pharma Inc. Improved solubilization and stabilization of factor viii complex
EP1016673B1 (en) 1992-10-02 2006-02-01 Genetics Institute, LLC Composition comprising coagulation factor VIII formulation, process for its preparation and use of a surfactant as stabilizer
GB9501040D0 (en) 1995-01-19 1995-03-08 Quadrant Holdings Cambridge Dried composition
SE9501189D0 (sv) 1995-03-31 1995-03-31 Pharmacia Ab Protein formulation
US5763401A (en) 1996-07-12 1998-06-09 Bayer Corporation Stabilized albumin-free recombinant factor VIII preparation having a low sugar content
PL203893B1 (pl) 1999-02-22 2009-11-30 Baxter Int Kompozycja czynnika VIII bez dodatku albuminy i jej zastosowanie
EP2042196B1 (en) 2001-10-10 2016-07-13 ratiopharm GmbH Remodelling and glycoconjugation of Granulocyte Colony Stimulating Factor (G-CSF)
GB0207092D0 (en) 2002-03-26 2002-05-08 Sod Conseils Rech Applic Stable pharmaceutical composition containing factor VIII
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
US7523304B2 (en) * 2005-11-22 2009-04-21 Ntt Docomo, Inc. Generation of set coverings with free riders, and generation of ordered sets of meeting points, in systems which include, but are not limited to, systems for broadcast encryption and systems for certificate revocation
ES2391657T3 (es) 2006-02-07 2012-11-28 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Composiciones estabilizadas de proteínas que tienen un resto tiol libre
TW200806317A (en) 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
EP2010222A1 (en) 2006-03-31 2009-01-07 Baxter International Inc. Pegylated factor viii
US7982010B2 (en) 2006-03-31 2011-07-19 Baxter International Inc. Factor VIII polymer conjugates
US7645860B2 (en) 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
US7985839B2 (en) 2006-03-31 2011-07-26 Baxter International Inc. Factor VIII polymer conjugates
WO2008077616A1 (en) 2006-12-22 2008-07-03 Csl Behring Gmbh Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
MX2009007145A (es) 2006-12-27 2009-08-27 Nektar Therapeutics Al Corp Conjugados de polimero con factor viii y factor de von willebrand que tienen una ligadura liberable.
EP1988101A1 (en) 2007-05-04 2008-11-05 Novo Nordisk A/S Improvement of factor VIII polypeptide titers in cell cultures
KR101293504B1 (ko) 2007-07-11 2013-08-07 노보 노르디스크 에이/에스 혼합형 또는 다중형 수지를 사용하는 인자 ｖⅰⅰⅰ의 정제
US8173597B2 (en) 2007-11-09 2012-05-08 Baxter International Inc. Modified recombinant factor VIII and von Willebrand factor and methods of use
AU2009219232B2 (en) 2008-02-27 2014-02-27 Novo Nordisk A/S Conjugated Factor VIII molecules
PT2349342T (pt) 2008-10-17 2018-10-26 Baxalta Inc Factores sanguíneos modificados que compreendem um baixo grau de polímero solúvel na água
BRPI0921429B1 (pt) 2008-11-07 2022-07-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável
WO2010102886A1 (en) 2009-02-19 2010-09-16 Novo Nordisk A/S Modification of factor viii
US20120093840A1 (en) 2009-04-06 2012-04-19 Novo Nordisk A/S Targeted delivery of factor viii proteins to platelets
GB0915480D0 (en) 2009-09-04 2009-10-07 Arecor Ltd Stable formulation of factor viii
EP2536752B1 (en) 2010-02-16 2015-04-08 Novo Nordisk A/S Modified recombinant Factor VIII
JP5914363B2 (ja) 2010-02-16 2016-05-11 ノヴォ ノルディスク アー／エス 低減されたｖｗｆ結合を有する因子ｖｉｉｉ分子
US9493543B2 (en) 2010-02-16 2016-11-15 Novo Nordisk A/S Factor VIII fusion protein
JP5946822B2 (ja) 2010-04-21 2016-07-06 ノヴォ ノルディスク アー／エス タンパク質の選択的改変
EP2593130A2 (en) 2010-07-15 2013-05-22 Novo Nordisk A/S Stabilized factor viii variants
AR083035A1 (es) 2010-09-17 2013-01-30 Baxter Int ESTABILIZACION DE INMUNOGLOBULINAS MEDIANTE UNA FORMULACION ACUOSA CON HISTIDINA A pH ACIDO DEBIL A NEUTRO, COMPOSICION ACUOSA DE INMUNOGLOBULINA
KR20140084208A (ko) * 2011-10-18 2014-07-04 시에스엘 리미티드 정제된 인자 ｖｉｉｉ의 재구성 후의 안정성을 향상시키는 방법
CN102580062B (zh) * 2012-03-09 2017-03-08 中国医学科学院输血研究所 人凝血因子VIII与vWF复合物或人凝血因子VIII制剂的干热处理稳定剂
WO2014026954A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Novo Nordisk A/S Liquid factor viii formulations

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20060109950A (ko) * 2003-12-19 2006-10-23 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
EP1712223A1 (en) * 2004-06-25 2006-10-18 Green Cross Holdings Pharmaceutical preparation of recombinant factor VIII lyophilized without albumin as a stabilizer
KR20110073434A (ko) * 2008-09-03 2011-06-29 옥타파마 아게 재조합에 의해 제조된 인자 ⅷ을 위한 신규한 보호 조성물
WO2013083858A1 (en) * 2012-04-24 2013-06-13 Novo Nordisk A/S Compounds suitable for treatment of haemophilia

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