KR20150093770A - 치료적 ｃｄ４７ 항체 - Google Patents

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파멜라 티 매닝
거하드 프레이
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Abstract

CD47 에 결합하여 그것의 활성을 저해하는 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 조각, 뿐만 아니라 상기 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 조각이 제공된다. 또한 임의의 상기의 조합이 제공된다. 그러한 항체 화합물은 1) IRI 이 발병기전의 구성요소인 장기 보존 및 이식의 상황, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 및 기타 수술 및/또는 외상의 경우에서 조직 허혈 및 허혈-재관류 손상 (IRI) 의 치료에서; 2) 자가면역 및 염증성 질환의 치료에서; 및 3) 포식세포 섭취 및 청소를 촉진 (증가) 시키고/거나, 그러한 세포를 직접 살해하는 걸리기 쉬운 암 세포에 독성인 항암제로서 다양하게 효과적이다.

Description

치료적 ＣＤ４７ 항체 {THERAPEUTIC CD47 ANTIBODIES}
관련 출원의 교차 참조
본 출원은 2012 년 12 월 12 일에 제출된 미국 가 출원 일련 번호 61/736,301 및 2013 년 6 월 11 일에 제출된 미국 가 출원 일련 번호 61/833,691 의 우선권을 주장하며, 상기 문헌들의 내용은 전부 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 분야
본 발명은 인간 및 기타 CD47 을 포함하는 CD47 에 결합하는 항체, 및 이러한 수용체에 의해 매개되는 허혈-재관류 손상 (IRI) 및 암과 같은 상태 및 장애를 치료함에 있어서의 상기 항체의 용도에 관한 것이다.
CD47 은 세포외 IgV set 도메인, 5 막을 가로지르는 막관통 도메인, 및 대안적으로 스플라이싱되는 세포질 꼬리 (tail) 로 구성되는 세포 표면 수용체이다. 하기 2 개의 리간드가 CD47 에 결합한다: 트롬보스폰딘-1 (TSP1), 및 신호 저해성 수용체 단백질 알파 (SIRP알파). CD47 에 대한 TSP1 결합은 이종삼합체 G 단백질 Gi 을 활성화시켜서, 세포내 사이클릭 AMP (cAMP) 수준의 억제를 초래한다. 또한, TSP1-CD47 경로는 모든 혈관 세포에서 산화 질소 경로의 유익한 효과를 방해한다. 산화 질소 (NO) 경로는 아르기닌을 기질로서 사용하여 생리활성 기체 NO 를 생성하는 임의의 3 가지 효소 (산화 질소 신타아제, NOS I, NOS II 및 NOS III) 로 이루어진다. NO 는 그것이 생성되는 세포 내에서, 또는 이웃 세포에서 작용할 수 있으며, 효소 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시켜 메신저 분자 사이클릭 GMP (cGMP) 를 생성한다. NO-cGMP 경로의 적절한 기능은 상처, 염증, 고혈압, 대사증후군, 허혈, 및 허혈-재관류 손상 (IRI) 으로부터 초래되는 것을 포함하나 이에 제한되지 않는 스트레스에 대항하여 심혈관계를 보호하는데 필수적이다. 이들 세포 스트레스의 상황에서, TSP1-CD47 시스템에 의한 NO-cGMP 경로의 저해는 스트레스의 효과를 악화시킨다. 이는 cGMP 및 cAMP 둘다가 중요한 보호 역할을 수행하는 심혈관계에서 특별한 문제이다. 많은 경우에 허혈 및 재관류 손상은 질환, 외상, 및 수술 절차의 불량한 결과를 야기하거나 그의 원인이 된다.
SIRP알파는 마크로파지 및 수지상 세포를 포함하는 조혈 세포 상에서 발현된다. SIRP알파가 잠재적 포식세포 표적 세포 상의 CD47 과 맞물릴 때, 포식작용은 둔화 또는 방지된다. CD47-SIRP알파 상호작용은 포식세포에게 "나를 먹지 마" 신호를 효과적으로 보낸다. 따라서, 이러한 치료 상황에서 모노클로날 항체에 의한 SIRP알파-CD47 상호작용의 차단은 숙주의 면역계에 의한 암 세포의 섭취 및 청소를 촉진, 즉, 증가시킴으로써 효과적 항-암 치료를 제공할 수 있다. 이러한 메카니즘은 백혈병 및 많은 유형의 고형 종양 둘다에서 효과적이다.
미국 특허 8,236,313 은 CD47 을 차단하는 항체를 포함하는, 조직 허혈 및 관련 연관 조직 및 세포 손상을 역전 및/또는 방지하는 혈류 및 허혈 분야에서 유용할 수 있는 항체를 고찰한다. 항체가 실제로 공개되어 있지는 않다.
미국 특허 8,101,719 는 혈액학적 장애를 치료하는데 사용하기 위한 CD47 에 결합하는 인간화된 항체를 공개한다. 발명의 목적은 감소된 항원성을 나타내면서 CD47 결합 활성 및 세포자멸사-유도 활성을 보유하는 인간화된 항-CD47 항체 및 작은 항체 조각을 포함한다. 그러한 항체 및 작은 조각은 혈액학적 장애 예컨대 다양한 유형의 백혈병, 악성 림프종, 재생불량성 빈혈, 골수형성이상증후군, 및 진성적혈구증가증의 치료에 사용되는 것이 고려된다. 이들 항체의 다른 특성은 공개되어 있지 않다.
PCT 국제 공보 WO 2011/143624 는 인간에서 CD47 과 연관되는 질환의 면역치료 및 진단용 시약으로서 사용하기 위한, 특히 암 치료에서, 예를 들어 CD47 을 발현하는 암 세포의 포식작용을 증가시키는, 키메라 및 인간화된 항-CD47 모노클로날 항체를 공개한다. 바람직한 항체는 비-활성화이며, 즉, 리간드 결합을 차단하지만 신호를 전달하지는 않는다. 공개된 인간화된 B6H12 및 5F9 항체는 가용성 인간 CD47 에 결합했고; B6H12 는 또한 인간 CD47-트랜스펙션된 YB2/0 세포의 표면 상의 인간 CD47 에 결합했다. 인간화된 B6H12 및 5F9 항체는 각각 시험관 내에서 마우스 골수- 또는 말초 혈액-유래 마크로파지에 의한 CFSE-표지된 HL-60 세포의 포식작용을 가능하게 했다. 인간화된 B6H12 는 인간 VH-3-7 및 VK3-11 골격을 이용했다.
U.S. 2013/0142786 은 CD47 발현 세포의 포식작용을 증가시키는 비-활성화 항-CD47 항체를 공개한다.
PCT 국제 공보 WO 2013/119714 는 유의한 수준의 인간 적혈구 응집을 야기하지 않는 항-CD47 항체를 공개한다.
발병기전에서 IRI 가 역할을 하는 상황에서 CD47 에 대한 TSP1 의 결합을 선택적으로 차단하여 심혈관계 내의 산화 질소-cGMP 신호전달 및 cAMP 신호전달의 유익한 효과를 촉진하는 인간 CD47 에 대한 항체가 필요하다. 이들 상황/질환은 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 손발가락/신체 부분의 재부착, 피부 이식, 및 외상을 포함한다. 또한 CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하여, 신규한 항-암 요법을 제공하는 항체가 필요하다. 형질전환된 또는 암 세포를 선택적으로 살해하거나 세포 사망을 유도하는 능력을 또한 갖는 그러한 항체는 또한 부가적 치료 유익을 제공할 것으로 예상된다.
본 발명의 항체 화합물은 이들 필요를 만족시킨다. 본 발명의 항체 화합물은 CD47 의 세포외 IgV 도메인 내의 에피토프에 결합하여, CD47 에 대한 TSP1 및 SIRP알파 결합 및 수용체 활성화를 저해하면서, 아고니스트 활성을 적게 유도하거나 유도하지 않는다. 본 발명의 특정 기타 항체는 종양 세포 포식작용 청소를 촉진하는 것 (증가시키는 것) 외에도 활성화된 또는 형질전환된 암 세포에 특이적인 종양-독성 또는 세포 사망 유도 효과를 또한 제공한다. 이들 특성에 비추어, 본 발명의 항체 화합물은 많은 형태의 IRI 및 혈액 암 및 고형 종양 둘다를 치료함에 있어서 치료적으로 유용할 것이다.
게다가, 본 발명의 항체 화합물은 다수의 기타 바람직한 특성을 보유하며, 예를 들어 인간, 마우스, 랫트, 돼지, 및 개를 포함하는 다양한 포유류 종의 CD47 과의 광범위한 반응성을 보유하여, 본 발명의 항체는 인간 의학 및 수의학 둘다에서 유용하다. 이러한 특색은 다양한 포유류 종에서 안전성 및 효능 연구를 포함하나 이에 제한되지 않는 전임상 연구, 및 그에 따라 그러한 항체의 인간 및 수의학 치료제로서의 개발을 촉진하는 점에서 추가로 유리하다.
따라서, 본 발명은 하기를 제공한다:
[1] 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 및 개 CD47 에 특이적으로 결합하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[2] [1] 에 있어서, 키메라 또는 인간화된, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[3] [1] 또는 [2] 에 있어서, 3 개의 경쇄 상보성 결정 부위 (LCDRs 1-3) 및 3 개의 중쇄 상보성 결정 부위 (HCDRs 1-3) 를 포함하며, 여기서:
LCDR 1 은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO:1) 을 포함하고;
LCDR 2 는 아미노산 서열 KVSYRFS (SEQ ID NO:2) 을 포함하고;
LCDR 3 은 아미노산 서열 SQNTHVPRT (SEQ ID NO:3) 을 포함하고;
HCDR1 은 아미노산 서열 GYTFTNYYVF (SEQ ID NO:4) 을 포함하고;
HCDR 2 는 아미노산 서열 DINPVNGDTNFNEKFKN (SEQ ID NO:5) 을 포함하고;
HCDR 3 은 아미노산 서열 GGYTMDY (SEQ ID NO:6) 을 포함하는,
모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[4] [1]-[3] 중 어느 하나에 있어서, 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74;
SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76;
SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
[5] 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
[6] 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74; 및
SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76.
[7] [1]-[6] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47, 특히 인간 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[8] [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 및 약학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
[9] [1]-[7] 중 어느 하나에 있어서, 인간 치료 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물의 치료, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물의 치료에서 사용하기 위한, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[10] [1]-[7] 중 어느 하나에 있어서, 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서, 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는데 사용하기 위한, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[11] [10] 에 있어서, 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
[12] [10] 또는 [11] 에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 또는 외상에서 발생하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[13] [10] 또는 [11] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[14] [1]-[7] 중 어느 하나에 있어서, 걸리기 쉬운 암을 치료하는데 사용하기 위한, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[15] [14] 에 있어서, 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74; 및
SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76.
[16] [14] 또는 [15] 에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암의 세포의 포식작용 및/또는 살해를 촉진하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[17] [14]-[16] 중 어느 하나에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[18] [17] 에 있어서, 상기 백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[19] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하기 위한, [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[20] [19] 에 있어서, 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 용도:
SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
[21] 걸리기 쉬운 암을 치료하기 위한, [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[22] [21] 에 있어서, 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 용도:
SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74; 및
SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76.
[23] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는 약제의 제조를 위한, [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[24] [23] 에 있어서, 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 용도:
SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
[25] [23] 또는 [24] 에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 및 외상에서 발생하는, 용도.
[26] [23] 또는 [24] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[27] 걸리기 쉬운 암을 치료하는 약제의 제조를 위한, [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[28] [27] 에 있어서, 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 용도:
SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74; 및
SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76.
[29] 그것을 필요로 하는 환자에서 허혈 또는 허혈-재관류 손상의 치료 방법으로서, 상기 환자에게 유효량의 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[30] [29] 에 있어서, 상기 환자가 허혈 또는 허혈-재관류 손상을 이제 막 겪을 예정이거나, 또는 그것을 경험하고 있는, 방법.
[31] [29] 또는 [30] 에 있어서, 상기 환자가 인간인, 방법.
[32] [29] 또는 [30] 에 있어서, 상기 환자가 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물인, 방법.
[33] [29]-[32] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈이 상기 환자가 외피 수술, 연조직 수술, 복합 조직 수술, 미용 수술, 외과적 절제, 재건 수술, 피부 이식 수술, 및 사지 재부착 수술로 이루어지는 군으로부터 선택되는 수술을 받을 예정이거나, 또는 그것을 받고 있기 때문에 발생하는, 방법.
[34] [33] 에 있어서, 상기 피부 이식이 자가이식인, 방법.
[35] [29]-[32] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈이 상기 환자가 장기 이식 수술을 받을 예정이거나, 또는 그것을 받고 있기 때문에 발생하는, 방법.
[36] [29]-[32] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제, 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 또는 피부 이식에서 발생하는, 방법.
[37] [29]-[36] 중 어느 하나에 있어서, 상기 모노클로날 항체, 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 상기 대상이 허혈 또는 수술을 겪기 전에, 동안, 또는 후에, 또는 임의의 이들 시간의 조합에 투여되는, 방법.
[38] [29]-[37] 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[39] [38] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[40] 그것을 필요로 하는 대상에서 조직 관류의 증가 방법으로서, 상기 대상에게 유효량의 [1]-[7] 중 어느 하나의 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[41] [40] 에 있어서, 상기 대상이 허혈-재관류 손상, 심근경색증, 심근 허혈, 뇌졸중, 대뇌 허혈, 겸상적혈구빈혈, 및 폐 고혈압으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환 또는 상태를 갖거나, 그것을 발달시킬 위험에 처해 있는, 방법.
[42] [40] 에 있어서, 상기 대상이 고혈압, 죽상동맥경화증, 혈관병증, 당뇨병에 이차적인 허혈, 및 말초혈관질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환 또는 상태를 갖거나, 그것을 발달시킬 위험에 처해 있는, 방법.
[43] [40] 에 있어서, 증가된 조직 관류에 대한 필요가 상기 대상이 외피 수술, 연조직 수술, 복합 조직 수술, 피부 이식 수술, 고형 장기의 절제, 및 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 수술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정이기 때문에 발생하는, 방법.
[44] [43] 에 있어서, 상기 피부 이식이 자가이식인, 방법.
[45] [40] 에 있어서, 증가된 조직 관류에 대한 필요가 상기 대상이 장기 이식 수술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정이기 때문에 발생하는, 방법.
[46] [40]-[45] 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[47] [46] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil® 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[48] 장기 기증자로부터 장기 수용자에게로의 기증자 장기의 이식 방법으로서, 하기 단계 i) - iii) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 임의의 단일 단계, 단계들의 임의의 조합, 또는 모든 단계들을 포함하는 방법:
i) 상기 장기 기증자에게 상기 기증자 장기의 기증 전에, 동안, 전에 및 동안 둘다, 후에, 또는 그들의 임의의 조합에 유효량의 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 및/또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 단계;
ii) 상기 기증자 장기를 상기 장기 수용자에게로의 이식 전에, 동안, 전에 및 동안 둘다, 후에, 또는 그들의 임의의 조합에 유효량의 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 및/또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각과 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 장기 수용자에게 상기 장기 수용자에게로의 상기 기증자 장기의 이식 전에, 동안, 전에 및 동안 둘다, 후에, 또는 그들의 임의의 조합에 유효량의 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 및/또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 단계.
[49] [48] 에 있어서, [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 상기 기증자 장기에서 허혈 재관류 손상을 감소시키는, 방법.
[50] [48] 또는 [49] 에 있어서, 상기 장기 기증자, 상기 기증자 장기, 상기 장기 수용자, 또는 그들의 임의의 조합에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 또는 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[51] [50] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[52] 그것을 필요로 하는 환자에서 자가면역 또는 염증성 질환의 치료 방법으로서, 상기 환자에게 유효량의 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[53] [52] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[54] [52] 또는 [53] 에 있어서, 상기 환자가 인간인, 방법.
[55] [52] 또는 [53] 에 있어서, 상기 환자가 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물인, 방법.
[56] [52]-[55] 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[57] [56] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[58] 그것을 필요로 하는 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 걸리기 쉬운 암의 치료 방법으로서, 상기 대상에게 유효량의 세포독성 활성을 나타내는 [1]-[7] 중 어느 하나의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[59] [58] 에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[60] [59] 에 있어서, 상기 백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[61] [58]-[60] 중 어느 하나에 있어서, 세포독성 활성을 나타내는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 상기 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 상기 걸리기 쉬운 암의 세포의 포식작용을 증가시키는, 방법.
[62] [61] 에 있어서, 세포독성 활성을 나타내고 상기 걸리기 쉬운 암의 세포의 포식작용을 증가시키는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 상기 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 SIRP알파에 대한 CD47 결합을 저해하는, 방법.
[63] [58]-[62] 중 어느 하나에 있어서, 세포독성 활성을 나타내는 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 상기 [1]-[7] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각이 상기 걸리기 쉬운 암의 세포에 직접 독성인, 방법.
[64] 인간 CD47 에 특이적으로 결합하는, 인간화된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[65] 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴.
[66] [65] 에 있어서, 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[67] [65] 의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 [66] 의 상기 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 및 약학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
[68] 인간 치료 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물의 치료, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물의 치료에서 사용하기 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[69] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는데 사용하기 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[70] [69] 에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 또는 외상에서 발생하는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[71] [69] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[72] 걸리기 쉬운 암을 치료하는데 사용하기 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
[73] [72] 에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[74] [73] 에 있어서, 상기 백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는,
인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[75] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하기 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[76] 걸리기 쉬운 암을 치료하기 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[77] [76] 에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[78] [77] 에 있어서, 상기 백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[79] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는 약제의 제조를 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[80] [79] 에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 및 외상에서 발생하는, 용도.
[81] [79] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[82] 걸리기 쉬운 암을 치료하는 약제의 제조를 위한,
인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[83] [82] 에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[84] [83] 에 있어서, 상기 백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[85] 그것을 필요로 하는 환자에서 허혈 또는 허혈-재관류 손상의 치료 방법으로서, 상기 환자에게 유효량의 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각
을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[86] [85] 에 있어서, 상기 환자가 허혈 또는 허혈-재관류 손상을 이제 막 겪을 예정이거나, 또는 그것을 경험하고 있는, 방법.
[87] [85] 또는 [86] 에 있어서, 상기 환자가 인간인, 방법.
[88] [85] 또는 [86] 에 있어서, 상기 환자가 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물인, 방법.
[89] [85]-[88] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈이 상기 환자가 외피 수술, 연조직 수술, 복합 조직 수술, 미용 수술, 외과적 절제, 재건 수술, 피부 이식 수술, 및 사지 재부착 수술로 이루어지는 군으로부터 선택되는 수술을 받을 예정이거나, 또는 그것을 받고 있기 때문에 발생하는, 방법.
[90] [89] 에 있어서, 상기 피부 이식이 자가이식인, 방법.
[91] [85]-[88] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈이 상기 환자가 장기 이식 수술을 받을 예정이거나, 또는 그것을 받고 있기 때문에 발생하는, 방법.
[92] [85]-[88] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제, 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 또는 피부 이식에서 발생하는, 방법.
[93] [85]-[92] 중 어느 하나에 있어서, 상기 모노클로날 항체, 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 상기 대상이 허혈 또는 수술을 겪기 전에, 동안, 또는 후에, 또는 임의의 이들 시간의 조합에 투여되는, 방법.
[94] [85]-[93] 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[95] [94] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[96] 그것을 필요로 하는 대상에서 조직 관류의 증가 방법으로서, 상기 대상에게 유효량의 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각
을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[97] [96] 에 있어서, 상기 대상이 허혈-재관류 손상, 심근경색증, 심근 허혈, 뇌졸중, 대뇌 허혈, 겸상적혈구빈혈, 및 폐 고혈압으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환 또는 상태를 갖거나, 그것을 발달시킬 위험에 처해 있는, 방법.
[98] [96] 에 있어서, 상기 대상이 고혈압, 죽상동맥경화증, 혈관병증, 당뇨병에 이차적인 허혈, 및 말초혈관질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환 또는 상태를 갖거나, 그것을 발달시킬 위험에 처해 있는, 방법.
[99] [96] 에 있어서, 증가된 조직 관류에 대한 필요가 상기 대상이 외피 수술, 연조직 수술, 복합 조직 수술, 피부 이식 수술, 고형 장기의 절제, 및 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 수술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정이기 때문에 발생하는, 방법.
[100] [99] 에 있어서, 상기 피부 이식이 자가이식인, 방법.
[101] [96] 에 있어서, 증가된 조직 관류에 대한 필요가 상기 대상이 장기 이식 수술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정이기 때문에 발생하는, 방법.
[102] [96]-[101] 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[103] [102] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[104] 장기 기증자로부터 장기 수용자에게로의 기증자 장기의 이식 방법으로서, 하기 단계 i) - iii) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 임의의 단일 단계, 단계들의 임의의 조합, 또는 모든 단계들을 포함하는 방법:
i) 상기 장기 기증자에게 상기 기증자 장기의 기증 전에, 동안, 전에 및 동안 둘다, 후에, 또는 그들의 임의의 조합에 유효량의 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
a) 암 세포의 사망을 유도함, 및
b) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 단계;
ii) 상기 기증자 장기를 상기 장기 수용자에게로의 이식 전에, 동안, 전에 및 동안 둘다, 후에, 또는 그들의 임의의 조합에 유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 장기 수용자에게 상기 장기 수용자에게로의 상기 기증자 장기의 이식 전에, 동안, 전에 및 동안 둘다, 후에, 또는 그들의 임의의 조합에 유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 단계.
[105] [104] 에 있어서, 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 상기 기증자 장기에서 허혈 재관류 손상을 감소시키는, 방법.
[106] [104] 또는 [105] 에 있어서, 상기 장기 기증자, 상기 기증자 장기, 상기 장기 수용자, 또는 그들의 임의의 조합에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[107] [106] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[108] 그것을 필요로 하는 환자에서 자가면역 또는 염증성 질환의 치료 방법으로서, 상기 환자에게 유효량의 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각
을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[109] [108] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[110] [108] 또는 [109] 에 있어서, 상기 환자가 인간인, 방법.
[111] [108] 또는 [109] 에 있어서, 상기 환자가 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물인, 방법.
[112] [108]-[111] 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
[113] [112] 에 있어서, 상기 산화 질소 공여체 또는 전구체가 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노-시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질이 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[114] 그것을 필요로 하는 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 걸리기 쉬운 암의 치료 방법으로서, 상기 대상에게 유효량의 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
유효량의 상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 상기 이중 활성을 나타내는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
[115] [114] 에 있어서, 상기 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[116] [115] 에 있어서, 상기 백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
상기 육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[117] [9], [14]-[18], [21], [22], [27], [28], [58]-[63], [68], [72]-[74], [76]-[78], [82]-[84], 또는 [114]-[116] 에 있어서, 상기 환자에게 수술, 방사선, 항-종양 또는 항-신생물제, 및 임의의 상기의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항-종양 치료적 처리를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 용도 또는 방법.
[118] [117] 에 있어서, 상기 항-종양 또는 항-신생물제가 작은 화학 분자 또는 생물학적 치료제인, 용도 또는 방법.
[119] [118] 에 있어서, 상기 작은 화학 분자 또는 생물학적 치료제가 알킬화제; 항대사물질; 천연 산물; 암 치료에 사용되는 여러가지 물질; 호르몬; 안타고니스트; 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각; 사이토카인; 안티센스 올리고뉴클레오티드; 및 siRNA 로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도 또는 방법.
[120] 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제의 치료 효과의 향상 방법으로서, 그것을 필요로 하는 환자에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
i) 유효량의 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제, 및
ii) 상기 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제의 상기 치료 효과를 향상시키는데 효과적인 양의 [1]-[7] 또는 [65]-[66] 중 어느 하나의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[121] [120] 에 있어서, 상기 치료 효과가 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환의 치료를 포함하는, 방법.
[122] [121] 에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 또는 외상에서 발생하는, 방법.
[123] [121] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
[124] 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제의 치료 효과를 향상시키는 약제의 제조를 위한, [1]-[7] 또는 [65]-[66] 중 어느 하나의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[125] [124] 에 있어서, 상기 치료 효과가 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환의 치료를 포함하는, 용도.
[126] [125] 에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 및 외상에서 발생하는, 용도.
[127] [125] 에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
[128] 혈관 세포에서 cGMP 의 수준의 증가 방법으로서, 상기 세포에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
i) 유효량의 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제, 및
ii) 상기 혈관 세포에서 cGMP 의 수준을 증가시키는데 효과적인 양의 [1]-[7] 또는 [65]-[66] 중 어느 하나의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[129] [1]-[7] 또는 [65]-[66] 중 어느 하나에 있어서, IgG1 동형, IgG2 동형, IgG3 동형, 및 IgG4 동형으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IgG 동형인, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[130] [129] 의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 및 약학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
[131] [129] 에 있어서, 인간 치료 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물의 치료, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물의 치료에서 사용하기 위한, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[132] [129] 에 있어서, 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는데 사용하기 위한, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[133] [129] 에 있어서, 걸리기 쉬운 암을 치료하는데 사용하기 위한, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
[134] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하기 위한, [129] 의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[135] 걸리기 쉬운 암을 치료하기 위한, [129] 의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[136] 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는 약제의 제조를 위한, [129] 의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
[137] [129] 걸리기 쉬운 암을 치료하는 약제의 제조를 위한, [129] 의 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도.
본원에 개시된 임의의 방법, 용도, 조성물, 또는 임의의 기타 구현예에서의 [129]-[137] 의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도가 본원에 명백히 포함된다.
[138] [1]-[7] 또는 [65]-[66] 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG1 동형일 때, 인간 IgGl 불변부는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록; 및/또는 아미노산 Leu 234 및/또는 Leu235 에서 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록, 임의로 추가로 이황 결합의 도입에 의해 개질됨;
ii) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG2 동형일 때, 인간 IgG2 불변부는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록, 임의로 추가로 이황 결합의 도입에 의해 개질됨;
iii) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG3 동형일 때, 인간 IgG3 불변부는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록; 및/또는 아미노산 435 에서 반감기를 연장하도록; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록, 임의로 추가로 이황 결합의 도입에 의해 개질됨;
iv) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG4 동형일 때, 인간 IgG4 불변부는 힌지 영역 내에서 가닥 교환을 방지 또는 감소시키도록; 및/또는 아미노산 235 에서 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록; 및/또는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성; 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록, 임의로 추가로 이황 결합의 도입에 의해 개질됨.
[139] [138] 에 있어서, 하기와 같은 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각:
i) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG1 동형일 때, 인간 IgGl 불변부는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록 Asn297→Ala (N297A) 또는 Asn297→Gln (N297Q) 의 수식에 의해; 및/또는 아미노산 Leu 234 에서 Leu234→Ala (L234A) 의 수식에 의해 및/또는 아미노산 Leu235 에서 Leu235→Glu (L235E) 또는 Leu235→Ala (L235A) 의 수식에 의해 또는 아미노산 234 및 235 둘다에서 Leu234→Ala 및 Leu235→Ala 의 수식에 의해 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록 Met252→Tyr, Ser254→Thr, Thr256→Glu, Met428→Leu, 또는 Asn434→Ser 의 수식에 의해; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록 Thr366→Trp 의 수식에 의해, 및 임의로 추가로 맞은편 CH3 도메인 상의 Ser354→Cys 및 Tyr349→Cys 의 수식에 의한 이황 결합의 도입에 의해 개질됨;
ii) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG2 동형일 때, 인간 IgG2 불변부는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록 Asn297→Ala 또는 Asn297→Gln 의 수식에 의해; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록 Met252→Tyr, Ser254→Thr, Thr256→Glu, Met428→Leu, 또는 Asn434→Ser 의 수식에 의해; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록 Thr366→Trp 의 수식에 의해, 및 임의로 추가로 맞은편 CH3 도메인 상의 Ser354→Cys 및 Tyr349→Cys 의 수식에 의한 이황 결합의 도입에 의해 개질됨;
iii) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG3 동형일 때, 인간 IgG3 불변부는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록 Asn297→Ala 또는 Asn297→Gln 의 수식에 의해; 및/또는 아미노산 435 에서 반감기를 연장하도록 Arg435→His 의 수식에 의해; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록 Met252→Tyr, Ser254→Thr, Thr256→Glu, Met428→Leu, 또는 Asn434→Ser 의 수식에 의해; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록 Thr366→Trp 의 수식에 의해, 및 임의로 추가로 맞은편 CH3 도메인 상의 Ser354→Cys 및 Tyr349→Cys 의 수식에 의한 이황 결합의 도입에 의해 개질됨;
iv) 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 인간 IgG4 동형일 때, 인간 IgG4 불변부는 힌지 영역 내에서 가닥 교환을 방지 또는 감소시키도록 Ser228→Pro 의 수식에 의해; 및/또는 아미노산 235 에서 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록 Leu235→Glu 의 수식에 의해, 또는 힌지 영역 내의 수식에 의해 및 아미노산 235 에서 Ser228→Pro 및 Leu235→Glu 의 수식에 의해; 및/또는 아미노산 Asn297 에서 글리코실화를 방지하도록 Asn297→Ala 의 수식에 의해; 및/또는 FcRn 결합을 증강시키도록 Met252→Tyr, Ser254→Thr, Thr256→Glu, Met428→Leu, 또는 Asn434→Ser 의 수식에 의해; 및/또는 항체-의존적 세포성 세포독성 및/또는 보체-의존적 세포독성을 변경하도록; 및/또는 이종이합체화를 유도하도록 Thr366→Trp 의 수식에 의해, 및 임의로 추가로 맞은편 CH3 도메인 상의 Ser354→Cys 및 Tyr349→Cys 의 수식에 의한 이황 결합의 도입에 의해 개질됨.
본원에 개시된 임의의 방법, 용도, 조성물, 또는 임의의 기타 구현예에서의 [138]-[139] 의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 용도가 본원에 명백히 포함된다.
본 발명의 추가의 적용 범위는 아래 제공된 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적 예는 본 발명의 바람직한 구현예를 나타내지만 오직 설명을 위해 제시된 것이라고 이해되어야 하며, 상세한 설명으로부터 본 발명의 주제 및 범위 내의 다양한 변화 및 변경이 당업자에게 명백해질 것이다.
본 발명의 상기 및 기타 양상, 특색, 및 이점은 하기 상세한 설명과 첨부된 도면으로부터 더욱 잘 이해될 것이며, 이들은 모두 설명을 위해 제공되고 본 발명을 제한하는 것이 아니다:
도 1 (도 1a, 도 1b, 도 1c, 및 도 1d) 는 실시예 3 에 기재된 클론 Cl 1, Cl 1.1, Cl 13, 및 Cl 13.1 로부터의 다양한 농도의 정제된 항체를 사용하여 생성된, 각각, 인간, 마우스, 랫트, 및 돼지 RBC 에 대한 여러 종 결합 곡선을 보여준다. 클론 Cl 1 및 Cl 13 은 표 3 에 기재되어 있다. 클론 Cl 1.1 및 Cl 13.1 은 효과기 기능을 감소시키도록 개질된, 각각, 클론 Cl 1 및 Cl 13 의 Fc 돌연변이체이다. 이들은 각각 Fc 도메인에서 Asn297→Gln(N297Q) 돌연변이를 갖는다 (Sazinsky et al. (2008) PNAS 105(51):20167-20172). 모든 이들 클론은 시험된 모든 종의 RBC 에 대해 농도-의존적 결합을 보인다.
RBC 를 60 분 동안 얼음 위에서 클론 Cl 1, Cl 1.1, Cl 13, 및 Cl 13.1 로부터의 다양한 농도의 정제된 항체와 함께 인큐베이션한다. 그 후 세포를 EDTA 를 함유하는 차가운 PBS 로 세정하고, 부가적 시간 동안 얼음 위에서 FITC 표지된 당나귀 항-인간 항체와 함께 인큐베이션하고, 세정하고, BD FACS Aria 세포 분류기 (Becton Dickinson) 또는 C6 Accuri 유세포분석기 (Becton Dickinson) 를 사용하여 항체 결합을 분석한다.
도 2 는 인간 Jurkat 암 세포의 세포 생활력을 감소시킴으로써 평가되는 특정 인간화된 클론의 세포독성 활성을 보여준다. Jurkat JE6.1 세포를 96 웰 조직 배양 플레이트에 2x104 세포/㎖ 의 밀도로 5% (v/v) 열 불활성화된 소 태아 혈청을 함유하는 Iscove's 변형 둘베코 배지에 플레이팅하고, 5 ㎍/㎖ 의 정제된 인간화된 항체 (클론 13, 14, 및 24), 마우스 mAb 1F7 (양성 대조군), 및 IgG 대조군과 함께, 72 시간 동안 37℃ 에서 인큐베이션한다. 그 후 세포 밀도를 WST1 시약을 제조사 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN; Catalog #05015944001) 에 의해 기재된 바와 같이 사용하여 정량화한다. 클론 13 및 14 는 mAb 1F7 과 유사한 활성으로 세포독성을 나타내지만, 클론 24 는 세포 생활력을 감소시키지 않는다.
도 3 은 본 발명의 인간화된 항체에 의한 NO-자극되는 cGMP 생산의 TSP1 저해의 역전을 보여준다. 실시예 5 에 기재된 바와 같이, Jurkat JE6.1 세포를 무혈청 배지에서 밤새 인큐베이션하고, 그 후 본 발명의 인간화된 항체 또는 대조군 키메라 mAb 와 함께, TSP1 의 존재 또는 부재 하에 인큐베이션하고, 그에 뒤이어 NO 공여체의 존재 또는 부재 하에 처리한다. 세포를 5 분 후에 용해시키고, cGMP 를 측정한다. 시험된 본 발명의 인간화된 항체 클론, 또는 대조군 키메라 mAb 는 기저 cGMP 수준에 영향을 미치지 않는다. 대조군 키메라 항체는 TSP1 저해를 역전시키며, 본원에 개시된 인간화된 클론 1, 9, 11, 및 24 (각각, Cl 1; Cl 9; Cl 11; Cl 24) 도 TSP1 저해를 역전시킨다. PBS: 포스페이트 완충 식염수; TSP 또는 TSP1: 트롬보스폰딘-1; DEA: 디에틸아민 NONOate; chim: 키메라 항체 >VxP037-01LC (SEQ ID NO:7))/>VxP037-01HC (SEQ ID NO:57).
도 4 는 본 발명의 인간화된 항체에 의한 NO-자극되는 cGMP 생산의 TSP1 저해의 역전을 보여준다. 실시예 5 에 기재된 바와 같이, Jurkat JE6.1 세포를 무혈청 배지에서 밤새 인큐베이션하고, 그 후 본 발명의 정제된 인간화된 클론 1 및 13 항체, 또는 대조군으로서의 PBS 와 함께, TSP1 의 존재 또는 부재 하에 인큐베이션하고, 그에 뒤이어 NO 공여체의 존재 또는 부재 하에 처리한다. 세포를 5 분 후에 용해시키고, cGMP 를 측정한다. 인간화된 항체 클론 또는 PBS 는 기저 cGMP 수준에 영향을 미치지 않는다. 인간화된 클론 1 및 13 은 TSP1 저해를 역전시키지만, PBS 는 영향을 미치지 않는다. PBS: 포스페이트 완충 식염수; TSP 또는 TSP1: 트롬보스폰딘-1; DEA: 디에틸아민 NONOate.
도 5 는 장기 수확시 클론 1 (Cl 1) 에 의한 기증자 신장의 처리가 혈청 크레아티닌을 측정함으로써 평가할 때 랫트 신장 이식 모델에서 생체 내에서 IRI 및 신장 손상을 감소시킴에 있어서 효과적임을 보여준다. IRI 의 유전적동계 랫트 신장 이식 모델과 양측 신장절제된 수용자를 사용하여 이식 후 이식편 기능에 대한 항-CD47 모노클로날 항체 클론 1 의 효과를 평가한다. 무게가 275-300 g 인 수컷 Lewis 랫트를 기증자 및 수용자 동물 둘다로서 사용한다. 기증자 신장을 50 ㎍ 의 정제된 클론 1 또는 비히클 (포스페이트 완충 식염수, pH 7.2) 로 플러싱하고, 4℃ 에서 University of Wisconsin 보존 (WU) 용액 중에서 6 시간 동안 저장하고, 그 후 이식한다. 이식 후 2 일째에, 순환하는 혈청 크레아티닌을 측정함으로써 신장 기능을 평가한다. 클론 1 에 의한 기증자 신장의 처리는 혈청 크레아티닌의 감소에 의해 측정할 때 대조군에 비해 개선된 신장 기능을 초래한다.
도 6 은 정제된, 인간화된 항체 클론 13 (Cl 13) 이 유전적동계 마우스 급성 전골수구성 백혈병 (APL) 모델의 생체내에서 종양 부하 (burden) 를 감소시킨다는 것을 보여준다. 생쥐 APL 세포 (B6APL1) 를 3 개의 그룹 (5-10 마리 마우스/그룹) 으로 무작위화시킨 C57BL/6 마우스 내로 정맥내 주입한다: 그룹 1: APL 없음; 그룹 2: 처리하지 않은 APL; 그룹 3: 항-CD47mAb Cl 13 으로 처리한 APL. 항체 처리를 종양 접종일 (제 0 일) 에 개시하고, 제 0 일, 제 3 일, 및 제 6 일에 10 ㎍/투여물 (0.4 ㎎/㎏) 의 단일 투여물로 복강내 주입에 의해 제공한다. 종양 접종 후 제 25 일에 순환하는 APL 세포 (종양 부하를 나타냄) 를 흐름세포측정법 (CD34+/CD117+ 세포) 에 의해 평가한다. Cl 13 으로 처리된 마우스는 종양 접종 후 25 일째에 미처리 마우스에 비해 감소된 종양 부하를 가지며, 이는 이러한 인간화된 클론의 항-종양 활성을 입증한다.
본 발명의 하기 상세한 설명은 통상의 기술자가 본원에 기재된 모든 방법, 용도, 조성물 등을 포함하는 본원에 기재된 본 발명의 다양한 구현예를 실시하는 것을 돕기 위해 제공된다. 그렇기는 하지만, 통상의 기술자에 의해 본 발명의 의미 또는 범위에서 벗어나지 않으면서 본원에 논의된 구현예의 변형 및 변화가 만들어질 수 있으므로 하기 상세한 설명은 본 발명을 과도하게 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본원에 언급된 각 문헌의 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 항체 화합물은 CD47 의 세포외 IgV 도메인 내의 에피토프에 결합하여, CD47 에 대한 TSP1 및 SIRP알파 결합 및 수용체 활성화를 저해하면서, 아고니스트 활성을 적게 유도하거나 유도하지 않는다. 본 발명의 특정 항체는 활성화된 또는 형질전환된 세포에 특이적인 종양-독성, 세포 사망-유도 효과를, 종양 세포 포식작용 청소를 증가시키는 것에 더하여, 즉, 이중 활성을 제공한다. 이들 특성에 비추어, 본 발명의 항체 화합물은 많은 유형의 IRI 및 혈액 암 및 고형 종양 둘다를 치료함에 있어서 치료적으로 유용할 것이다.
본 발명의 항체 화합물은 또한 다수의 기타 바람직한 특성을 보유하며, 예를 들어 인간, 마우스, 랫트, 돼지, 및/또는 개를 포함하는 다양한 포유류 종, 즉, 이들 포유류 종 중 임의의 개별적 하나, 또는 이들의 다양한 조합의 CD47 과의 광범위한 반응성을 보유하여, 본 발명의 항체는 인간 의학 및 수의학 둘다에서 유용하다. 이러한 광범위한 반응성은 다양한 포유류 종에서 안전성 및 효능 연구를 포함하나 그에 제한되지 않는 전임상 연구, 및 그러므로 인간 및 수의학 치료제로서의 그러한 항체의 개발을 촉진하는 점에서 추가로 유리하다.
정의
자연적으로 존재하는 전장 항체는 이황 결합에 의해 상호연결된 2 개의 중 (H) 쇄 및 2 개의 경 (L) 쇄를 포함하는 면역글로불린 분자이다. 각 사슬의 아미노 말단 부분은 그안에 함유된 상보성 결정 부위 (CDR) 를 통해 항원 인지를 주로 책임지는 약 100-110 개 이상의 아미노산의 가변부를 포함한다. 각 사슬의 카르복시-말단 부분은 효과기 기능을 주로 책임지는 불변부를 한정한다.
CDR 사이사이에 골격부 ("FR") 로 명명되는, 더욱 보존되어 있는 영역이 배치되어 있다. 각각의 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 는 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR 로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 경쇄의 3 개의 CDR 은 "LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3" 으로 언급되고, 중쇄의 3 개의 CDR 은 "HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3" 으로 언급된다. CDR 은 항원과의 특이적 상호작용을 형성하는 잔기를 대부분 함유한다. LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 아미노산 잔기의 번호지정 및 위치지정은 공지된 Kabat 번호지정 관습에 따른다. 본원에 개시된 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR 은 각각 1, 2, 및 3 으로 번호지정되어 있지만, 상응하는 항체 화합물 경 및 중쇄 가변부에서 그 번호순으로 이용되는 것이 필수적이지 않으며, 즉, 그들은 각각 경 또는 중쇄 가변부에서 임의의 번호순으로 존재할 수 있다.
경쇄는 카파 또는 람다로서 분류되고, 당해 기술분야에 공지된 특별한 불변부에 의해 특징지어진다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로서 분류되고, 항체의 동형을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD, 또는 IgE 로서 정의한다. IgG 항체는 서브클래스, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 로 추가로 분류될 수 있다. 각각의 중쇄 유형은 당해 기술분야에 공지된 서열을 갖는 특별한 불변부에 의해 특징지어진다.
본원에 기재된 방법 및 조성물에서 유용한 모노클로날 항체 및 기타 항체 화합물은 임의의 이들 동형에 속할 수 있다. 게다가, 임의의 이들 동형은 다음과 같은 아미노산 수식을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 불변부는 인간 IgGl 동형에 속한다.
일부 구현예에서, 인간 IgGl 불변부는 아미노산 Asn297 (Kabat 번호지정) 에서 항체의 글리코실화를 방지하도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Asn297→Ala (N297A) 또는 Asn297→Gln(N297Q) 일 수 있다 (Sazinsky et al. (2008) PNAS 105(51):20167-20172).
일부 구현예에서, 항체의 불변부는 아미노산 Leu234 (Kabat 번호지정) 에서 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Leu234→Ala (L234A) 일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체의 불변부는 아미노산 Leu235 (Kabat 번호지정) 에서 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Leu235→Glu (L235E) 또는 Leu235→Ala (L235A) 일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체의 불변부는 아미노산 234 및 235 둘다에서 변경된다. 예를 들어, 이들 수식은 Leu234→Ala 및 Leu235→Ala (L234A/L235A) 일 수 있다 (EU index of Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest).
일부 구현예에서, 항체의 불변부는 인간 IgG2 동형에 속한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG2 불변부는 아미노산 Asn297 (Kabat 번호지정) 에서 항체의 글리코실화를 방지하도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Asn297→Ala (N297A) 또는 Asn297→Gln(N297Q) 일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체의 불변부는 인간 IgG3 동형에 속한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG3 불변부는 아미노산 Asn297 (Kabat 번호지정) 에서 항체의 글리코실화를 방지하도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Asn297→Ala (N297A) 또는 Asn297→Gln(N297Q) 일 수 있다.
일부 구현예에서, 인간 IgG3 불변부는 아미노산 435 에서 반감기를 연장하도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Arg435→His (R435H) 일 수 있다 (EU index of Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest).
일부 구현예에서, 항체의 불변부는 인간 IgG4 동형에 속한다.
일부 구현예에서, 인간 IgG4 불변부는 힌지 영역 내에서 가닥 교환을 방지 또는 감소시키도록 수식된다. 예를 들어, 이러한 수식은 Ser228→Pro (S228P) 일 수 있다 (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30(1):105-108).
다른 구현예에서, 인간 IgG4 불변부는 아미노산 235 에서 Fc 수용체 상호작용을 변경하도록 수식된다. 예를 들어, 이는 Leu235→Glu (L235E) 일 수 있다.
일부 구현예에서, 인간 IgG4 불변부는 힌지 내에서 및 아미노산 235 에서 수식된다. 예를 들어, 이는 Ser228→Pro 및 Leu235→Glu (S228P/L235E) 일 수 있다.
일부 구현예에서, 인간 IgG4 불변부는 아미노산 Asn297 (Kabat 번호지정) 에서 항체의 글리코실화를 방지하도록 수식된다. 예를 들어, 이는 Asn297→Ala (N297A) 일 수 있다 (EU index of Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest).
일부 구현예에서, 인간 IgG 불변부는 FcRn 결합을 증강시키도록 수식된다. FcRn 에 대한 결합을 증강시키는 Fc 돌연변이의 예는 Met252→Tyr, Ser254→Thr, Thr256→Glu (각각, M252Y, S254T, 및 T256E) (Kabat 번호지정, Dall'Acqua et al. (2006) J. Biol. Chem. 281(33) 23514-23524), 또는 Met428→Leu 및 Asn434→Ser (M428L, N434S) 이다 (Zalevsky et al. (2010) Nature Biotech. 28(2):157-159). (EU index of Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest).
일부 구현예에서, 인간 IgG 불변부는 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존적 세포독성 (CDC) 을 변경하도록 수식되며, 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 아미노산 수식이다: Natsume et al. (2008) Cancer Res. 68(10):3863-72; Idusogie et al. (2001) J. Immunol. 166(4):2571-5; Moore et al. (2010) mAbs 2(2):181-189;
Lazar et al. (2006) PNAS 103(11):4005-4010; Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276( 9):6591- 6604; Stavenhagen et al. (2007) Cancer Res. 67(18):8882-8890; Stavenhagen et al. (2008) Advan. Enzyme Regul. 48:152-164; Alegre et al. (1992) J. Immunol. 148:3461-3468; reviewed in Kaneko and Niwa (2011) Biodrugs 25(1):1-11.
일부 구현예에서, 인간 IgG 불변부는 이종이합체화를 유도하도록 수식된다. 예를 들어, Thr366 에서 부피가 더 큰 아미노산, 예컨대 Trp 으로의 아미노산 수식 (T366W) 을 갖는 CH3 도메인은 위치 Thr366, Leu368, 및 Tyr407 에서 부피가 더 작은 아미노산, 예를 들어, 각각 Ser, Ala, 및 Val 으로의 아미노산 수식 (T366S/L368A/Y407V) 을 갖는 두번째 CH3 도메인과 우선적으로 짝을 이룰 수 있다. CH3 수식을 통한 이종이합체화는 이황 결합의 도입에 의해, 예를 들어 맞은편 CH3 도메인 상의 Ser354→Cys (S354C) 및 Tyr349→Cys (Y349C) 에 의해 추가로 안정화될 수 있다 (Carter (2001) Journal of Immunological Methods 248:7-15 에서 리뷰됨).
본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체" (mAb) 는 본 발명의 항체 화합물에 적용될 때 단일 카피 또는 클론, 예를 들어, 임의의 진핵, 원핵, 또는 파지 클론에서 유래하는 항체를 언급하며 그것이 생산되는 방법이 아니다. 본 발명의 mAb 는 바람직하게는 균질 또는 실질적 균질 집단으로 존재하고, 키메라 또는 인간화일 수 있다. 완전한 mAb 는 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄를 함유한다.
그러한 모노클로날 항체의 "항원-결합 조각" 은 작은 크기 및 결과적인 우수한 조직 분포로 인해 특정 응용에 바람직할 수 있고, 예를 들어, Fab 조각, Fab' 조각, F(ab')2 조각, Fd 조각, 단일 사슬 Fv 조각 (ScFv), 및 경쇄 및 중쇄를 포함하는 1-팔 (one-armed) 항체를 포함한다. 바람직한 항원-결합 조각은 온전한 항체에 의해 인지되는 항원에 결합하는 것이다. Fc 조각이 또한 수득될 수 있다. 본 발명의 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 조각은, 예를 들어, 재조합 기술, 파지 표시 기술, 합성 기술, 예를 들어, CDR-그래프팅 (grafting), 또는 그러한 기술의 조합, 또는 당해 기술분야에 공지된 기타 기술, 예를 들어 온전한 항체의 단백질분해 소화에 의해 생산될 수 있다.
"항체 화합물" 은 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 및 개 CD47 을 포함하는 다양한 종의 CD47 에 특이적으로 결합하고 본원에 개시된 특성을 나타내는 본원에 개시된 mAb 및 Fab, 및 경쟁하는 항체를 언급한다. 따라서, 본 발명에 포함되는 항체에 관해 본원에서 사용되는 용어 "mAb" 는 Fab 및 경쟁하는 항체를 포함한다. 본 발명에 따른 유사한 기능적 특성을 나타내는 부가적 항체 화합물은 종래의 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 마우스는 인간 CD47 또는 그의 조각으로 면역화될 수 있고, 결과적인 항체는 회수 및 정제될 수 있고, 그들이 본원에 개시된 항체 화합물과 유사한 또는 동일한 결합 및 기능적 특성을 보유하는지 여부의 확인은 하기 실시예 3 및 4 에 개시된 방법에 의해 평가될 수 있다. 항원-결합 조각은 또한 종래의 방법에 의해 제조될 수 있다. 항체 및 항원-결합 조각의 생산 및 정제 방법은 당해 기술분야예 공지되어 있고, 예를 들어, Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 5-8 및 15, ISBN 0-87969-314-2 에서 찾을 수 있다.
구절 "인간화된 항체" 는 본원에 개시된 것과 유사한 본 발명에 따른 결합 및 기능적 특성을 갖고, 비-인간 항체에서 유래하는 CDR 을 둘러싸는 실질적으로 인간 또는 완전히 인간인 골격부를 갖는 본원에 개시된 항체 화합물을 포함하는 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 조각을 언급한다. "골격부" 또는 "골격 서열" 은 골격부 1 내지 4 중 임의의 하나를 언급한다. 본 발명에 포함되는 인간화된 항체 및 항원-결합 조각은 골격부 1 내지 4 중 임의의 하나 또는 그 이상이 실질적으로 또는 완전히 인간인, 즉, 개별적 실질적 또는 완전 인간 골격부 1 내지 4 의 임의의 가능한 조합이 존재하는 분자를 포함한다. 예를 들어, 이는 골격부 1 및 골격부 2, 골격부 1 및 골격부 3, 골격부 1, 2, 및 3 등이 실질적으로 또는 완전히 인간인 분자를 포함한다. 실질적 인간 골격은 공지된 인간 생식선 골격 서열과 80% 이상의 서열 일치성을 갖는 것이다. 바람직하게는, 실질적 인간 골격은 본원에 개시된 골격 서열, 또는 공지된 인간 생식선 골격 서열과 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 일치성을 갖는다.
본 발명에 포함되는 CDR 은 본원에 구체적으로 개시된 것 뿐만 아니라, 본원에 개시된 CDR 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 일치성을 갖는 CDR 서열을 포함한다. 대안적으로, 본 발명에 포함되는 CDR 은 본원에 구체적으로 개시된 것 뿐만 아니라, 본원에 개시된 CDR 서열과 비교되는 상응하는 위치에서 1, 2, 3, 4, 또는 5 개의 아미노산 변화를 갖는 CDR 서열을 포함한다. 그러한 서열 동일한, 또는 아미노산 수식된, CDR 은 바람직하게는 온전한 항체에 의해 인지되는 항원에 결합한다.
본원에서 사용되는, 구절 "서열 일치성" 은 서열 대응을 최대화하도록, 즉, 갭 및 삽입을 고려하여 서열이 정렬되었을 때 둘 이상의 서열 내의 상응하는 위치에서 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 백분율을 의미한다. 일치성은 이에 제한되는 것은 아니나 하기에 기재된 것을 포함하는 공지된 방법에 의해 쉽게 계산될 수 있다: Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; 및 Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988). 일치성을 확인하는 방법은 시험되는 서열 사이의 최대 대응을 제공하도록 고안된다. 더욱이, 일치성을 확인하는 방법은 공중이 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 코드화된다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어, Smith & Waterman 의 국소 상동성 알고리즘 (local homology algorithm) 에 의해, 상동성 정렬 알고리즘 (homology alignment algorithm) 에 의해, 유사성 탐색 방법 (search for similarity method) 에 의해 또는, 이들 알고리즘의 컴퓨터화 실행 (Accelrys, Inc., San Diego, California, United States of America 로부터 입수가능한, GCG Wisconsin Package 내의 GAP, BESTFIT, PASTA, 및 TFASTA) 에 의해, 또는 시각적 검사에 의해 수행될 수 있다. 일반적으로 Altschul, S. F. et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990) 및 Altschul et al. Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402 (1997) 를 참고한다.
퍼센트 서열 일치성 및 서열 유사성의 확인에 적합한 알고리즘의 하나의 예는 BLAST 알고리즘이며, 이는 Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894; & Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990) 에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 National Center for Biotechnology Information 을 통해 공개적으로 입수가능하다. 이러한 알고리즘은 첫째로 데이타베이스 서열 내의 동일한 길이의 워드와 정렬되었을 때 일정한 양성-값 한계값 점수 T 을 만족시키거나 그에 대응하는 조회 서열 (query sequence) 내의 길이 W 의 짧은 워드를 식별함으로써 고득점 서열 쌍 (high scoring sequence pairs) (HSPs) 을 식별하는 것을 수반한다. T 는 이웃 워드 점수 한계값 (neighborhood word score threshold) 으로서 언급된다.
이들 초기 이웃 워드 히트 (neighborhood word hit) 는 그들을 함유하는 더 긴 HSP 를 발견하는 검색을 개시하기 위한 시드 (seed) 로서 작용한다. 그 후 누적 정렬 점수가 증가될 수 있는 한 워드 히트는 각 서열을 따라 양 방향으로 확장된다. 누적 점수는, 뉴클레오티드 서열의 경우, 파라미터 M (한 쌍의 대응 잔기에 대한 보상 점수; 항상; 0) 및 N (대응하지 않는 잔기에 대한 벌칙 점수; 항상; 0) 을 사용하여 계산된다. 아미노산 서열의 경우, 점수화 매트릭스가 사용되어 누적 점수를 계산한다. 워드 히트의 각 방향으로의 확장은 다음과 같을 때 중단된다: 누적 정렬 점수가 그것의 최대 달성 값으로부터 양 X 만큼 줄어들 때, 누적 점수가 하나 이상의 음성-득점 잔기 정렬의 축적으로 인해 0 이하로 갈 때, 또는 각 서열의 끝에 도달할 때. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T, 및 X 는 정렬의 민감도 및 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램 (뉴클레오티드 서열의 경우) 은 디폴트 (default) 로서 11 의 워드길이 (wordlength) (W), 10 의 기대값 (expectation) (E), 100 의 컷오프 (cutoff), M = 5, N = -4, 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 3 의 워드길이 (W), 10 의 기대값 (E), 및 BLOSUM62 점수화 매트릭스를 사용한다.
퍼센트 서열 일치성을 계산하는 것에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 2 개의 서열 사이의 유사성의 통계 분석을 수행한다. BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 하나의 척도는 최소 합산 확률 (smallest sum probability) (P(N)) 이며, 이는 2 개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 대응이 우연히 일어날 확률의 지표를 제공한다. 예를 들어, 시험 핵산 서열과 기준 핵산 서열의 비교에서 최소 합산 확률이 하나의 구현예에서 약 0.1 미만, 또다른 구현예에서 약 0.01 미만, 또다른 구현예에서 약 0.001 미만인 경우에, 시험 핵산 서열은 기준 서열과 유사한 것으로 여겨진다.
완전 인간 골격은 공지된 인간 생식선 골격 서열과 일치하는 것이다. 인간 골격 생식선 서열은 ImMunoGeneTics (IMGT) 로부터 그들의 웹사이트를 통해 또는 Marie-Paule Lefranc 및 Gerard Lefranc 에 의한 The Immunoglobulin FactsBook, Academic Press, 2001, ISBN 012441351 로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 생식선 경쇄 골격은 A11, A17, A18, A19, A20, A27, A30, LI, L1I, L12, L2, L5, L15, L6, L8, O12, O2, 및 O8 로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있고, 생식선 중쇄 골격부는 VH2-5, VH2-26, VH2-70, VH3-20, VH3-72, VHI-46, VH3-9, VH3-66, VH3-74, VH4-31, VHI-18, VHI-69, VI-13-7, VH3-11, VH3-15, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-48, VH4-39, VH4-59, 및 VH5-5I 로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 유사한 기능적 특성을 나타내는 본원에 개시된 것에 더하여 인간화된 항체는 여러 상이한 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 하나의 접근법에서, 부모 항체 화합물 CDR 이 부모 항체 화합물 골격과 높은 서열 일치성을 갖는 인간 골격 내로 그래프팅된다. 새로운 골격의 서열 일치성은 일반적으로 부모 항체 화합물 내의 상응하는 골격의 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 일치할 것이다. 100 개 미만의 아미노산 잔기를 갖는 골격의 경우에, 1, 2, 또는 3 개의 아미노산 잔기가 변화될 수 있다. 이러한 그래프팅은 부모 항체에 비해 결합 친화도의 감소를 초래할 수 있다. 이 경우에, 골격은 Queen et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2869 에 의해 개시된 특정 기준에 기초하여 특정 위치에서 부모 골격으로 역-돌연변이될 수 있다. 마우스 항체를 인간화시키는데 유용한 방법을 기술하는 부가적 참고문헌은 미국 특허 번호 4,816,397; 5,225,539; 및 5,693,761; Levitt (1983) J. Mol. Biol. 168:595-620 에 기재된 컴퓨터 프로그램 ABMOD 및 ENCAD; 및 Winter 및 동료의 방법 (Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; 및 Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536) 을 포함한다.
역-돌연변이가 고려되는 잔기의 식별은 다음과 같이 수행될 수 있다.
아미노산이 하기 카테고리에 속할 때, 사용되는 인간 생식선 서열의 골격 아미노산 ("수용자 골격") 은 부모 항체 화합물의 골격 ("기증자 골격") 의 골격 아미노산으로 대체된다: (a) 수용자 골격의 인간 골격부 내의 아미노산은 그 위치에서의 인간 골격에서 드물지만, 기증자 면역글로불린 내의 상응하는 아미노산은 그 위치에서의 인간 골격에서 전형적일 때; (b) 아미노산의 위치가 CDR 의 위치와 바로 인접할 때; 또는 (c) 3차원 면역글로불린 모델에서 골격 아미노산의 임의의 측쇄 원자가 CDR 아미노산의 임의의 원자의 약 5-6 옹스트롬 (중심에서 중심까지 (center-to-center)) 내에 있을 때.
수용자 골격의 인간 골격부의 각각의 아미노산 및 기증자 골격 내의 상응하는 아미노산이 일반적으로 그 위치에서의 인간 골격에서 드물 때, 그러한 아미노산은 그 위치에서의 인간 골격에 전형적인 아미노산으로 대체될 수 있다. 이러한 역-돌연변이 기준은 부모 항체 화합물의 활성을 회복하는 것을 가능하게 해준다.
본원에 개시된 항체 화합물과 유사한 기능적 특성을 나타내는 인간 조작 항체로의 또다른 접근법은 골격을 변화시키지 않으면서 그래프팅된 CDR 내의 아미노산을 무작위 돌연변이시키는 것, 및 결과적인 분자를 부모 항체 화합물 만큼 양호하거나 그보다 양호한 결합 친화도 및 기타 기능적 특성에 대해 스크리닝하는 것을 수반한다. 단일 돌연변이가 또한 각각의 CDR 내의 각각의 아미노산 위치에 도입되고, 그에 뒤이어 결합 친화도 및 기타 기능적 특성에 대한 그러한 돌연변이의 효과가 평가될 수 있다. 개선된 특성을 초래하는 단일 돌연변이가 조합되어, 서로 조합되었을 때의 효과가 평가될 수 있다.
나아가, 상기 2 가지 접근법의 조합이 가능하다. CDR 그래프팅 후에, CDR 내에 아미노산 변화를 도입하는 것에 더하여 특정 골격부를 역-돌연변이시킬 수 있다. 이러한 방법론이 Wu et al. (1999) J. Mol. Biol. 294:151-162 에 기재되어 있다.
하기 실시예 1 에 기재된 방법이 또한 이용될 수 있다.
본 발명의 교시를 적용할 때, 당해 기술분야의 통상의 기술자는 통상적 기술, 예를 들어, 자리-지정 돌연변이를 사용하여, 본원에 개시된 CDR 및 골격 서열 내의 아미노산을 치환하고, 그에 의해 본 발명의 서열에서 유래하는 추가의 가변부 아미노산 서열을 생성할 수 있다. 거의 모든 자연 발생적 아미노산이 특정 치환 자리에 도입될 수 있으며, 예를 들면 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 보존적 아미노산 치환이다. 그 후 본원에 개시된 방법을 사용하여 이들 부가적 가변부 아미노산 서열을 스크리닝하여 명시된 시험관내 및/또는 생체내 기능을 갖는 서열을 식별할 수 있다. 이러한 방식으로, 본 발명에 따른 인간 조작 항체 및 그의 항원-결합 부분의 제조에 적합한 추가의 서열이 식별될 수 있다. 바람직하게는, 골격 내의 아미노산 치환은 본원에 개시된 4 개의 경쇄 및/또는 중쇄 골격부 중 임의의 하나 이상 내의 1, 2, 또는 3 개의 위치에 제한된다. 바람직하게는, CDR 내의 아미노산 치환은 3 개의 경쇄 및/또는 중쇄 CDR 중 임의의 하나 이상 내의 1, 2, 또는 3 개의 위치에 제한된다. 이들 골격부 및 위에 기재된 CDR 내의 다양한 변화의 조합이 또한 가능하다.
위에 논의된 아미노산 수식을 도입함으로써 생성되는 항체 화합물의 기능적 특성이 본원에 개시된 특정 분자가 나타내는 것과 일치하고, 그와 비슷하다는 것은 하기 실시예에 개시된 방법에 의해 확인될 수 있다.
본 발명의 항체 화합물에 적용되는 용어 "특이적으로 결합한다", "결합한다 특이적으로", "특이적 결합" 등은 특이적 결합 물질 (예컨대 항체) 이 다른 분자 종에 대한 결합보다 우선적으로 표적 분자 종에 결합하는 능력을 언급하며, 그에 따라 특이적 결합 물질 및 표적 분자 종이 혼합된다. 특이적 결합 물질은 표적에 특이적으로 결합할 수 있을 때 표적 분자 종을 특이적으로 인지한다고 여겨진다.
"결합 친화도" 는 분자 상의 하나의 자리에서 하나의 분자의 또다른 분자에 대한 결합의 강도를 언급하는 용어이다. 특정 분자가 또다른 특정 분자에 결합하거나 그와 특이적으로 연?될 경우, 이들 2 개의 분자는 서로 결합 친화도를 나타낸다고 여겨진다. 결합 친화도는 한 쌍의 분자에 대한 결합 상수 및 해리 상수와 관련되지만, 이들 상수가 측정 또는 확인되는 본원의 방법에 중요하지는 않다. 오히려, 기재된 방법의 분자 사이의 상호작용을 기술하는데 본원에서 사용되는 친화도는 일반적으로 실증 연구에서 관찰되는 명목 친화도 (apparent affinities) (다르게 명시되지 않으면) 이며, 이는 하나의 분자 (예를 들어, 항체 또는 기타 특이적 결합 파트너) 가 2 가지 다른 분자 (예를 들어, 펩티드의 2 가지 버전 또는 변이체) 에 결합하는 상대 강도를 비교하는데 사용될 수 있다. 결합 친화도, 결합 상수, 및 해리 상수의 개념은 공지되어 있다.
용어 "에피토프" 는 항체 또는 항체 조각이 결합하는 펩티드 또는 단백질에 위치하는 아미노산의 특정 배열을 언급한다. 에피토프는 흔히 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 집단으로 이루어지고, 특이적 3차원 구조 특성 뿐만 아니라 특이적 전하 특성을 갖는다. 에피토프는 선형, 즉 아미노산의 단일 서열에 대한 결합을 수반하거나, 또는 입체배좌 (conformational), 즉, 반드시 인접할 필요는 없는 항원의 다양한 영역 내의 아미노산의 둘 이상의 서열에 대한 결합을 수반할 수 있다.
본원에 개시된 분자와 "경쟁하는" 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각은 본 발명의 분자가 결합하는 자리와동일한, 또는 그와 중첩되는 자리에서 인간 CD47 에 결합하는 것이다. 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각은, 예를 들어, 항체 경쟁 검정을 통해 식별될 수 있다. 예를 들어, 정제된 또는 일부 정제된 인간 CD47 세포외 도메인의 샘플은 고형 지지체에 결합될 수 있다. 그 후, 본 발명의 항체 화합물, 또는 그의 항원-결합 조각, 및 그러한 본 발명의 항체 화합물과 경쟁할 수 있다고 의심되는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 첨가된다. 2 가지 분자 중 하나는 표지된다. 표지된 화합물 및 표지되지 않은 화합물이 CD47 상의 별개의 분리된 자리에 결합하는 경우, 의심받는 경쟁하는 화합물이 존재하는지 여부와 관계 없이 표지된 화합물은 동일한 수준으로 결합할 것이다. 그러나, 상호작용의 자리가 일치하거나 중첩되는 경우에, 표지되지 않은 화합물은 경쟁할 것이고, 항원에 결합되는 표지된 화합물의 양은 적어질 것이다. 표지되지 않은 화합물이 과잉량으로 존재하는 경우에, 매우 적은, 만약에 있다면, 표지된 화합물이 결합할 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각은 CD47 에 대한 본 발명의의 항체 화합물의 결합을 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99% 만큼 감소시키는 것이다. 그러한 경쟁 검정을 수행하기 위한 절차의 세부사항은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어, Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 페이지 567-569, ISBN 0-87969-314-2 에서 찾을 수 있다. 그러한 검정은 정제된 항체를 사용하여 정량적으로 실시될 수 있다. 표준 곡선은 하나의 항체를 그 자신에 대해 적정함으로써 확립되며, 즉, 동일한 항체가 표지 및 경쟁자 둘다에 사용된다. 플레이트에 대한 표지된 분자의 결합을 저해하는 표지되지 않은 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 능력이 적정된다. 결과를 도표화하고, 원하는 정도의 결합 저해를 달성하는데 필수적인 농도를 비교한다.
그러한 경쟁 검정에서 본 발명의 항체 화합물과 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각이 본 발명의 항체 화합물과 동일한 또는 유사한 기능적 특성을 보유하는지 여부는 하기 실시예 3-7 에 기재된 방법과 함께 이들 방법을 통해 확인될 수 있다. 본원에 포함되는 치료적 방법에서 사용하기 위한 바람직한 경쟁하는 항체는 본원에 개시된 항체 화합물과 약 ±30%, 약 ±20%, 약 ±10%, 약 ±5%, 또는 동일한 생물학적 활성을 가지며, 이는 실시예 3-7 에 개시된 방법에 의해 확인된다.
용어 "치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료") 는 징후, 증상, 장애, 상태, 또는 질환의 진행 또는 중증도를 둔화, 개입, 저지, 조절, 중단, 감소, 또는 역전시키는 것을 의미하나, 반드시 모든 질환-관련 징후, 증상, 상태, 또는 장애의 총체적 제거를 수반하는 것은 아니다. 용어 "치료하는" 등은 질환 또는 병적 상태가 발달하기 시작한 후에 그것의 징후, 증상 등을 개선하는 치료적 개입을 언급힌다.
급성 사건 및 만성 상태는 치료될 수 있다. 급성 사건에서, 항체 또는 그의 항원-결합 조각은 증상, 장애, 상태, 질환, 또는 절차의 발생시 투여되고, 급성 사건의 종료시, 또는 장기로의 장기 이식의 경우에, 장기 수확시 및/또는 이식 수용자에게로의 장기 이식의 경우에 장기 이식시 중단된다. 이와 대조적으로, 만성 증상, 장애, 상태, 또는 질환은 더 긴 기간에 걸쳐 치료된다.
용어 "유효량" 은 환자 또는 장기에 대한 단일 또는 복수 투여물 투여시 원하는 치료 또는 예방을 제공하는 본 발명의 항체 화합물의 양 또는 투여량을 언급한다. 본 발명의 항체 화합물의 치료 유효량은 수확된 장기 또는 환자에게 투여되는 단일 투여물 당 약 0.1 ㎎/㎏ 내지 약 150 ㎎/㎏, 더욱 바람직하게는 약 0.1 ㎎/㎏ 내지 약 100 ㎎/㎏, 더욱더 바람직하게는 약 0.1 ㎎/㎏ 내지 약 50 ㎎/㎏ 범위의 양을 포함할 수 있다. 임의의 개별 환자에 대한 치료 유효량은 이에 제한되는 것은 아니나 간, 신장, 폐, 창자, 췌장 및 심장을 포함하는 치료되는 장기의 손상의 바이오마커, 예컨대 혈청 바이오마커, 폐동맥압의 변화, 종양 또는 비-종양 조직에서의 세포 표면 CD47 발현, 종양 퇴행, 순환하는 종양 세포 또는 종양 줄기 세포 등에 대한 항체 화합물의 효과를 모니터링함으로써 건강 관리 제공자에 의해 결정될 수 있다. 이들 방법에 의해 수득되는 데이타의 분석은 치료 동안 치료 섭생법의 수정을 허용하여, 최적량의 본 발명의 항체 화합물이 투여될 수 있고 (단독으로 또는 서로와의 조합으로, 또는 또다른 치료제와의 조합으로 이용되는 아니든, 또는 둘다), 치료의 치속시간이 또한 결정될 수 있다. 이러한 방식으로, 투여/치료 섭생법은 치료의 경과에 따라 수정되어, 그에 따라 만족스러운 효능을 나타내는 단독으로 또는 조합으로 사용되는 항체 화합물의 최저량이 투여될 수 있고, 그러한 화합물의 투여는 환자를 성공적으로 치료하는데 필수적인 한 계속될 수 있다.
본 발명의 항체 화합물은 다양한 경로에 의해 투여되는, 인간 의학 및 수의학에서 약제로서 사용될 수 있다. 수의학적 적용은 반려/애완 동물, 예컨대 고양이 및 개; 일하는 동물, 예컨대 안내 또는 서비스견, 및 말; 스포츠 동물, 예컨대 말 및 개; 동물원 동물, 예컨대 영장류, 고양이과 예컨대 사자 및 호랑이, 곰 등; 및 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물의 치료를 포함한다.
가장 바람직하게는, 그러한 조성물은 비경구 투여, 예를 들어, 정맥내, 근육내, 피하 등, 주입, 주사, 이식 등에 의한 투여를 위한 것이며, 이들은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 그러한 약학적 조성물은 당해 기술분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition (2005), Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA 를 참고한다. 그러한 약학적 조성물은 하나 이상의 본원에 개시된 항체 화합물, 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용가능한, 예를 들어, 생리학적으로 허용가능한, 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함한다.
조합 치료
항체 화합물의 조합
본원에서 공개되고 청구되는 치료 방법, 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 및 CD47 에 결합하는 이들 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 경쟁하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각은 모두 단독으로, 또는 서로와의 임의의 적절한 조합으로 사용되어, 최고 치료 효능을 달성할 수 있다는 점에 유의해야 한다.
IRI-관련 증상을 치료하는 추가의 치료적 조합
바로 위에 기재된 항체 화합물의 조합을 투여하는 것에 더하여, 본 발명의 방법, 예를 들어 IRI-관련 증상의 치료와 관련된 방법은, 그것을 필요로 하는 환자에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
이들 방법에서, 산화 질소 공여체 또는 전구체는 NO 기체, 이소소르비드 디니트레이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil®, 및 아르기닌으로부터 선택될 수 있다.
가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질은 혈관 세포 내의 cGMP 수준을 증가시키는 가용성 구아닐일 사이클라제의 비-NO (산화 질소)-계 화학적 활성화제일 수 있다. 그러한 활성화제는 NO 결합 모티프 이외의 영역의 가용성 구아닐일 사이클라제에 결합하고, 국소적 NO 또는 반응성 산소 스트레스 (ROS) 와 상관 없이 효소를 활성화시킨다. 가용성 구아닐일 사이클라제의 화학적 활성화제의 비제한적 예는 유기 니트레이트 (Artz et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:18253-18256); 프로토포르피린 IX (Ignarro et al. (1982) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:2870-2873); YC-1 (Ko et al. (1994) Blood 84:4226-4233); BAY 41-2272 및 BAY 41-8543 (Stasch et al. (2001 Nature 410 (6825): 212-5), CMF-1571, 및 A-350619 (Evgenov et al. (2006) Nat. Rev. Drug. Discov. 5:755-768 에서 리뷰됨); BAY 58-2667 (Cinaciguat; Frey et al. (2008) Journal of Clinical Pharmacology 48 (12): 1400-10); BAY 63-2521 (Riociguat; Mittendorf et al. (2009) Chemmedchem 4 (5): 853-65) 을 포함한다. 부가적 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제가 Stasch et al. (2011) Circulation 123:2263-2273; Derbyshire and Marletta (2012) Ann. Rev. Biochem. 81:533-559, 및 Nossaman et al. (2012) Critical Care Research and Practice, Volume 2012, Article ID 290805, 페이지 1-12 에 개시되어 있다.
사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질은 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필로부터 선택될 수 있다.
암 증상을 치료하는 추가의 치료적 조합
상기에 더하여, 본 발명의 방법, 예를 들어 암 증상의 치료와 관련된 방법은 수술, 방사선, 및/또는 종양 상태를 치료하는 종래에 사용된 또는 현재 개발되고 있는 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 핵산 치료제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 화학적 소분자 또는 생물학적 약물의 유효량을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 통해 환자를 치료하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 이는 본원에 개시된 것 이외의 항체, 사이토카인, 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNAs 등을 포함한다.
통상의 기술자에게 잘 알려진 바와 같이, 조합 요법은 흔히 암 치료에서 단일-제제 요법 또는 절차가 질환 또는 상태를 치료 또는 치유하는데 충분하지 않으므로 이용된다. 종래의 암 치료는 흔히 수술, 방사선 처리, 상가 또는 상승 효과를 달성하는 세포독성 약물의 조합의 투여, 및 임의의 또는 모든 이들 접근의 조합을 수반한다. 특히 유용한 화학치료적 및 생물학적 요법 조합은 상이한 작용 메카니즘을 통해 기능하는 약물을 이용하여, 암 세포 제어 또는 살해를 증가시키고, 요법 동안 약물 저항성의 가능성을 감소시키고, 개별 약물의 감소된 투여량의 사용을 허용함으로써 가능한 중첩 독성을 최소화시킨다.
본 발명에 포함되는 조합 요법에 유용한 종래의 항-종양/항-신생물제의 부류는, 예를 들어, Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Twelfth Edition (2010) L.L. Brunton, B.A. Chabner, and B. C. Knollmann Eds., Section VIII, "Chemotherapy of Neoplastic Diseases", Chapters 60-63, pp. 1665-1770, McGraw-Hill, NY 에 개시되어 있고, 예를 들어, 알킬화제; 항대사물질; 천연 산물; 여러 가지 물질; 호르몬 및 안타고니스트; 및 모노클로날 항체를 포함한다.
용어 "종양" 은 모든 악성 또는 양성 신생 세포 성장 및 증식, 및 전-암 및 암 세포 및 조직을 언급한다. 용어 "암", "암의", 및 "종양" 은 본원에서 상호 배타적이지 않게 사용된다.
용어 "암" 및 "암의" 는 이상 세포 성장/증식을 전형적 특징으로 하는 포유류에서의 생리학적 상태를 언급 또는 기술한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에서 사용되는 용어 "걸리기 쉬운 암" 은 그것의 세포가 CD47 을 발현하고 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 조각에 의한 처리에 반응성인 암을 언급한다. 예시적 걸리기 쉬운 암은, 이에 제한되는 것은 아니나, 백혈병, 예를 들어 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 만성 골수성 백혈병, 및 형질 세포 백혈병; 림프종, 예를 들어 호지킨 림프종 및 비-호지킨 림프종, 예를 들어 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증; 난소암; 유방암; 자궁내막암; 결장암; 직장암; 방광암; 폐암; 기관지암; 골암; 전립선암; 췌장암; 위암; 간 및 담도 암; 식도암; 신장암; 갑상선암; 두경부암; 고환암; 아교모세포종; 별아교세포종; 흑색종; 골수형성이상증후군; 및 육종 예를 들어, 이에 제한되는 것은 아니나, 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종을 포함한다.
용어 "직접 독성" 은 보체 또는 기타 세포, 예를 들어 이에 제한되는 것은 아니나, T 세포, 호중구, 자연 살해 세포, 마크로파지, 또는 수지상 세포의 참여 없이 세포 자율 메카니즘을 통해 형질전환된/암 세포를 살해하는 본원에 개시된 특정 인간화된 항체 또는 그의 항원-결합 조각의 능력을 언급한다.
용어 "직접 독성", "직접 세포독성" 등 및 "세포 사망을 유도한다", "세포사를 유도하는" 등은 또한 본원에서 호환되게 사용되고, 배양되는 암 세포에 본 발명의 항체 화합물을 첨가하는 것이 이들 세포가 하기 중 임의의 하나, 또는 그 이상을 포함하는 세포 사망과 연관되는 정량화할 수 있는 특성을 나타내는 것을 야기하는 것을 의미한다:
1. 세포에 대한 Annexin V (칼슘 이온의 존재시) 의 결합 (흐름세포측정법 또는 공초점 형광 현미경법에 의해 탐지됨);
2. 형광 화합물 프로피디움 요오드화물의 흡수 (흐름세포측정법에 의해 검정됨);
3. 염료 트립판 블루의 흡수 (광학 현미경법으로 점수매겨짐);
4. 미토콘드리아 막 전위의 손실 (여러 입수가능한 전위차 형광 염료 예컨대 DiIodo-C6 또는 JC1 중 하나에 의해 검정됨);
5. 테트라졸륨 염료 유도체 예컨대 레사주린의 전환 (포르마잔-기반 검정 (MTT, WST1));
6. 세포 배양물의 성장 속도의 동적 측정 (살아 있는 세포의 계수 (트립판 블루의 배제) 에 의해 평가됨); 및/또는
7. 표지된 뉴클레오티드 전구체의 DNA 내로의 편입율 (정량화를 위해 뉴클레오티드 유사체와 에피토프 태그 또는 방사성 뉴클레오티드를 사용함).
본 발명의 인간화된 또는 키메라 mAb 에 의해 유도되는 세포독성/세포 사망의 양은 mAb 1F7 에 의해 유도되는 양과 비교될 수 있고, 동등한 농도에서 비슷하거나 더 높을 것으로 예상된다 (Manna and Frazier (2003) J. Immunol. 170:3544-3553; Manna and Frazier (2004) Cancer Res. 64:1026-1036; Riss et al. (2013) Cell Viability Assays, NCI/NIH guidance manual, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144065 에서 입수가능).
상기는 항체 세포독성/세포 사망의 유도를 평가하는데 사용될 수 있는 다수의 유형의 세포 생활력 검정을 기술하는 NCI/NIH 매뉴얼에 대한 링크이다: Assay Guidance Manual (Internet), "Cell Viability Assays", Terry L Riss, PhD, Richard A Moravec, BS, Andrew L Niles, MS, Helene A Benink, PhD, Tracy J Worzella, MS, and Lisa Minor, PhD. Contributor Information, 2013 년 5 월 1 일에 공개됨.
암 세포의 "포식작용" 은 마크로파지에 의한 그러한 세포의 포식 및 소화, 및 이들 암 세포의 궁국적 소화 또는 붕괴 및 그들의 세포외 또는 세포내 방출에 의한 추가 가공에의 적용을 언급한다. CD47 에 대한 SIRP알파 결합을 차단하는 항-CD47 모노클로날 항체, 정상 세포에 비해 암 세포에서 고도로 발현되는 "나를 먹지마" 신호는 암 세포의 마크로파지 포식작용을 유도한다. 암 세포 상의 CD47 에 대한 SIRP알파 결합은 그렇지 않은 경우 이들 세포가 마크로파지 포식작용을 탈출하는 것을 허용할 것이다.
마우스 또는 인간 혈액으로부터 단리된 마크로파지에 의한 종양 세포의 포식작용은 Willingham et al. (2012) Proc Natl Acad Sci USA 109(17):6662-7 및 Tseng et al. (2013) Proc Natl Acad Sci U S A 110(27):11103-8 에 기재된 바와 같이 본질적으로 시험관 내에서 측정된다.
시험관내 포식작용 검정을 위해, 웰 당 103 - 105 개의 마크로파지 (효과기 세포) 를 조직 배양 플레이트 (공초첨 현미경법에 의한 분석을 위해 마크로파지의 부착을 촉진하도록 처리되거나 또는 흐름세포측정법 분석을 위해 준비된 현탁액을 허용하도록 처리되지 않음) 내로 플레이팅하고, 부착되는 것을 허용하고, 그 후 검정에 앞서 무혈청 배지에서 인큐베이션된다. 혈액 또는 고형 종양 기원일 수 있는 암 세포주 (표적 세포) 는 제조사의 프로토콜 (Sigma-Aldrich) 에 따라 2.5 μM 카르복시플루오레세인 숙신이미딜 에스테르 (CFSE) 로 표지되고, 1:1 내지 1:4 효과기 대 표적 세포 비율로 첨가된다. 다양한 농도의 항-CD47 또는 대조군 항체 (0.1 - 10 ㎍/㎖) 를 첨가하고, 2 h 동안 37℃ 에서 인큐베이션한다. 마크로파지를 반복 세정하고, 후속적으로 현미경을 사용하여 영상화하고, 마크로파지에 의해 포식된 암 세포의 수를 계수한다. 포식세포 지수를 마크로파지 100 개 당 포식된 CFSE-표지된 암 세포의 수로서 계산한다. 대안적으로, 마크로파지는 또한 마크로파지에 특이적인 형광 태그된 항체로 표지될 수 있고, 포식된 세포의 수가 2-색 흐름세포측정법을 사용하여 평가될 수 있다.
본원에 개시된 항-CD47 인간화된 및 키메라 mAb 는 사용되는 항체의 농도 및 친화도, 뿐만 아니라 표적 세포 CD47 과 마크로파지 SIPR알파의 상호작용을 차단하는 항체의 능력에 의존적으로, 포식세포 지수를 낮은 포식작용 수준 (0 - 20 개 표적 세포 / 100 개 마크로파지) 로부터 훨씬 더 높은 수준 (50 - 200+ 개 표적 세포 / 100 개 마크로파지) 으로 증가시킬 것으로 예상된다. 바람직한 본 발명의 항체는 40 개 이상, 더욱 바람직하게는 50 개 이상 표적 세포 / 100 마크로파지 의 포식세포 지수를 갖는다.
용어 "촉진하다", "촉진하는" 등은 본원에서 "증가시키다", "증가시키는" 등과 동의어로 사용된다.
"허혈" 은, 예를 들어, 하나 이상의 혈관의 협착 또는 폐쇄에 의해, 신체 장기, 조직, 또는 부위로의 혈액 공급의 감소가 야기되는 혈관 현상을 언급한다. 허혈은 때때로 혈관수축 또는 혈전증 또는 색전증으로부터 초래된다. 허혈은 직접 허혈 손상, 감소된 산소 공급에 의해 야기되는 세포 사망으로 인한 조직 손상을 초래할 수 있다. 허혈은 예를 들어 급성으로, 수술 동안, 또는 사고, 부상 및 전쟁 상황에서 발생하는 외상으로부터 조직으로, 또는 후속 이식을 위한 장기의 수확 후에 발생할 수 있다. 허혈은 또한 아급성으로 발생할 수 있으며, 이는 혈관의 진행성 협착이 조직 및 장기로의 부적절한 혈류를 초래하는 죽상경화 말초혈관질환에서 발견된다.
조직이 허혈을 겪을 때, 궁국적으로 세포 기능이상 및 괴사를 초래할 수 있는 화학적 사건의 시퀀스가 개시된다. 혈류의 회복에 의해 허혈이 종료되는 경우에, 두번째 일련의 손상 사건이 뒤따라서, 부가적 손상을 초래한다. 따라서, 대상에서 혈류의 일시적 감소 또는 중단이 존재할 때마다, 결과적인 손상은 2 가지 요소를 수반한다 -- 허혈 간격 동안 발생하는 직접 손상, 및 뒤따르는 간접 또는 재관류 손상.
"허혈성 뇌졸중" 은 여러 상이한 종류의 질환에 의해 야기될 수 있다. 가장 흔한 문제는 목 또는 머리에 있는 동맥의 협착이다. 이는 가장 흔히 죽상동맥경화증, 또는 점차적 콜레스테롤 분해에 의해 야기된다. 동맥이 너무 좁아지는 경우, 혈액 세포는 그 안에서 수집되고 혈전을 형성할 수 있다 (혈전증). 이들 혈전은 그들이 형성되는 동맥을 차단할 수 있거나 (혈전증), 제거되거나 뇌에 가까운 동맥에 걸릴 수 있다 (색전증). 대뇌 뇌졸중은 죽상경화판이 부분적으로 혈관벽으로부터 분리되고 혈관을 통한 혈류를 폐쇄할 때 발생할 수 있다.
"재관류" 는 혈류의 감소로 인해 허혈 상태인 조직으로의 혈류의 회복을 언급한다. 재관류는 생활력 있는 허혈 조직이 회복되는 것을 가능하게 하여 추가의 괴사를 제한하는, 경색증 또는 기타 허혈을 치료하는 절차이다. 그러나, 재관류는 그 자체로 허혈 조직을 추가로 손상시켜, 재관류 손상을 야기할 수 있다.
혈류 부족 동안 발생하는 즉각적 손상에 더하여, "허혈/재관류 손상" 은 혈류가 회복된 후에 발생하는 조직 손상을 수반한다. 현재의 이해는 많은 이러한 손상이 허혈 조직에 의해 방출되는 화학적 산물, 자유 라디칼, 및 활성 생물학적 물질에 의해 야기된다는 것이다.
"산화 질소 공여체, 전구체, 또는 산화 질소 생성 국소성 제제" 는 NO 를 전달하거나, 효소적 또는 비-효소적 과정을 통해 NO 로 전환될 수 있는 화합물 또는 제제를 언급한다. 예는, 이에 제한되는 것은 아니나, NO 기체, 이소소르비드 디니트라이트, 니트라이트, 니트로프루시드, 니트로글리세린, 3-모르폴리노시드논이민 (SIN-1), S-니트로소-N-아세틸-페니실라민 (SNAP), 디에틸렌트리아민/NO (DETA/NO), S-니트로소티올, Bidil® 및 아르기닌을 포함한다.
"가용성 구아닐일 사이클라제 (sGC)" 는 혈관 평활근 내의 산화 질소에 대한 수용체이다. 심혈관계에서, 산화 질소는 내피 산화 질소 신타아제에 의해 L-아르기닌으로부터 내생적으로 생성되고, 인접한 혈관 평활근 세포 내의 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시켜 cGMP 수준을 증가시켜, 혈관 이완을 유도한다. 산화 질소는 가용성 구아닐일 사이클라제의 정상적으로 환원된 헴 (heme) 모이어티에 결합하고, GTP 로부터 cGMP 의 형성을 증가시켜, 세포내 칼슘 감소, 혈관확장, 및 항-염증 효과를 초래한다. sGC 상의 헴 철의 산화는 산화 질소에 대한 효소의 응답성을 감소시키고, 혈관수축을 촉진한다. 산화 질소-sGC-cGMP 경로는 그러므로 혈관 질환에서 중요한 역할을 수행한다. 질소-함유 화합물 예컨대 나트륨 아지드, 나트륨 니트라이트, 히드록실아민, 니트로글리세린, 및 나트륨 니트로프루시드는 sGC 를 자극하여, cGMP 증가, 및 혈관 이완을 야기하는 것으로 밝혀졌다. 환원된 sGC 에 결합하는 sGC 의 자극제와 대조적으로, sGC 의 활성화제는 산화 질소에 응답성이 아닌 산화된 또는 헴-결핍 sGC 효소를 활성화시키며, 즉 그들은 산화환원 상태와 무관하게 sGC 를 자극한다. sGC 의 자극제는 환원된 sGC 의 산화 질소에 대한 민감도를 향상시킬 수 있지만, sGC 의 활성화제는 효소가 산?되어 산화 질소에 덜 반응성이거나 비반응성일 때에도 sGC 효소 활성을 증가시킬 수 있다. 따라서, sGC 활성화제는 비-산화 질소계이다. Nossaman et al. 의 리뷰 (2012) Critical Care Research and Practice, Volume 2012, article 290805, 및 Derbyshire and Marletta (2012) Ann. Rev. Biochem. 81:533-559 에 주목한다.
"가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질" 은, 예를 들어, 유기 니트레이트 (Artz et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:18253-18256); 프로토포르피린 IX (Ignarro et al. (1982) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:2870-2873); YC-1 (Ko et al. (1994) Blood 84:4226-4233); BAY 41-2272 및 BAY 41-8543 (Stasch et al. (2001 Nature 410 (6825): 212-5), CMF-1571, 및 A-350619 (Evgenov et al. (2006) Nat. Rev. Drug. Discov. 5:755-768 에서 리뷰됨); BAY 58-2667 (Cinaciguat; Frey et al. (2008) Journal of Clinical Pharmacology 48 (12): 1400-10); BAY 63-2521 (Riociguat; Mittendorf et al. (2009) Chemmedchem 4 (5): 853-65) 을 언급한다. 부가적 가용성 구아닐일 사이클라제 활성화제가 Stasch et al. (2011) Circulation 123:2263-2273; Derbyshire and Marletta (2012) Ann. Rev. Biochem. 81:533-559, 및 Nossaman et al. (2012) Critical Care Research and Practice, Volume 2012, Article ID 290805, 페이지 1-12 에 개시되어 있다.
"사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질" 의 예는 실데나필, 타달라필, 바르데나필, 유데나필, 및 아바나필을 포함한다.
단수형은 문맥이 명백히 다르게 명시하지 않으면 복수형을 포함한다. 유사하게, 단어 "또는" 은 문맥이 명백히 다르게 명시하지 않으면 "및" 을 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, A 또는 B 를 포함하는 것은 A, 또는 B, 또는 A 및 B 를 포함하는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "약" 은 "대략" 또는 "거의" 와 유사한 의미를 갖는 융통성 있는 단어이다. 용어 "약" 은 정확성이 요구되지 않고, 오히려 변화가 예상된다는 것을 나타낸다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어 "약" 은 구체적으로 언급된 값으로부터 1 또는 2 표준 편차 이내, 또는 구체적으로 언급된 값에 비해 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 5% 이하, 또는 4%, 3%, 2%, 또는 1% 이하의 ± 범위를 의미한다.
본원에서 청구항에서 사용되는 용어 "포함하는" 는 끝이 열려 있고, 청구항이 거기에서 구체적으로 언급된 모든 특색들을 가져야 함을 의미하나, 또한 존재하는 것으로 언급되지 않은 부가적 특색들에 대한 금지가 존재하지 않는다. 용어 "포함하는" 은 청구항을 심지어는 많은 양의 명시되지 않은 성분들의 포함에 대해 열려 있게 한다. 청구항의 용어 "로 본질적으로 이루어지는" 은 본 발명이 열거된 성분들을 필수적으로 포함하고, 본 발명의 기본적 신규한 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 열거되지 않은 성분들에 대해 열려 있는 것을 의미한다. "로 본질적으로 이루어지는" 청구항은 닫힌 "로 이루어지는" 형태로 기재된 닫힌 청구항과 "포함하는 형태" 로 작성된 완전히 열린 청구항 사이의 중간 지대를 차지한다. 이들 용어는 이것이 필요해질 경우에, 및 그때 호환되게 사용될 수 있다.
게다가, 용어 "포함하는", 뿐만 아니라 기타 관련 형태, 예컨대 "포함하다" 및 "포함된" 의 사용은 제한적이 아니다.
CD47 및 허혈-재관류 손상 (IRI)
조직 허혈 기간 이후, 혈류의 개시는 "허혈-재관류 손상" 또는 IRI 로 언급되는 손상을 야기한다. 일정한 시간 동안 혈류를 멈춰야 하는 필요성으로 인해 IRI 이 발생하는 많은 수술 절차에서, 혈류가 중단되고 이후에 치료적 개입에 의해 회복되는 많은 형태/원인의 외상에서, 장기 이식에 요구되는 절차, 심장/폐 우회 절차, 절단된 신체 부분의 재부착, 재건 및 미용 수술 및 기타 혈류 중단 및 재개를 수반하는 상황에서, IRI 는 불량한 결과에 기여한다. 허혈 자체는 스스로 궁국적으로 세포 및 조직 괴사 및 사망을 초래할 많은 생리학적 변화를 야기한다. 재관류는 반응성 산소 종의 생성, 혈전증, 염증 및 사이토카인 매개 손상을 포함하는 자체의 일련의 손상 사건을 제기한다. TSP1-CD47 시스템에 의해 제한되는 경로는 정확히 IRI 의 손상과 싸우는데 가장 유익한 것이다. 따라서, 본원에 개시된 항체에 의한 TSP1-CD47 경로의 차단은 이들 내생적 보호 경로의 더욱 견실한 기능을 제공할 것이다.
본 발명의 인간화된 항-CD47 항체, 그의 항원-결합 조각, 및 경쟁하는 항체 및 그의 항원-결합 조각은 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 8,236,313 에 개시된 방법에서 사용될 수 있다.
CD47 및 암
CD47 은 혈액암 (Majeti et al. (2009) Cell 138(2):286-99, 뿐만 아니라 고형 종양 예컨대 대장, 전립선, 유방 및 뇌 암 (Willingham et al. (2012) Proc Natl Acad Sci USA 109(17):6662-7) 에서 신규한 치료적 표적으로서 확인되었다. 많은 인간 암이 CD47 의 세포 표면 발현을 상향조절하고, CD47 의 최고 수준의 발현은 환자에게 가장 공격적이고 가장 치명적이다. 증가된 CD47 발현은 SIRP알파, CD47-보유 세포의 포식작용을 방지하는 저해성 수용체를 통해 마크로파지에게 "날 먹지마" 신호를 보냄으로써 암 세포를 포식작용 청소로부터 보호하는 것으로 여겨진다 (Jaiswal et al. (2009) Cell 138(2):271-85l; Chao et al. (2010) Science Translational Medicine 2(63):63ra94). 따라서, 많은 암에 의한 CD47 발현의 증가는 마크로파지 및 수지상 세포에 의한 포식작용 청소를 둔화시키는 "자기" 의 외투를 제공한다. CD47/SIRP알파 상호작용을 차단하는 항-CD47 mAbs (CD47mAbs) 는 시험관내에서 암 세포의 포식작용을 향상시키고 공개된 인간 대 마우스 이종이식 종양 모델에서 종양 부하의 제어에 기여한다. 그러나, CD47 mAbs 가 암과의 전쟁에서 아직 이용되지 않은 형질전환된 세포를 공격할 수 있는 메카니즘이 존재한다.
Frazier 등은 특별한 항-인간 CD47mAb (클론 1F7) 가 인간 T 세포 백혈병 (Manna and Frazier (2003) A. J. Immunol. 170:3544-53) 및 여러 유방암 (Manna and Frazier (2004) A. Cancer Research 64(3):1026-36) 에 대한 직접, 종양-독성 효과를 갖는다는 것을 밝혔다. 다른 그룹은 그러한 발견을 부가적 유형의 백혈병 (Uno et al. (2007) Oncol. Rep. 17(5):1189-94; Mateo et al. (1999) Nat. Med. 5:1277-84) 에서 보고했다. MAb 1F7 은 NK 세포, T 세포 또는 마크로파지에 의한 보체 또는 세포 매개 살해의 작용 없이 CD47 보유 종양 세포를 살해한다. 대신에, mAb 1F7 은 미토콘드리아에 대한 직접 CD47-의존적 공격을 수반하는 비-세포자멸사 메카니즘을 통해 작용하여, 그들의 막 전위를 방전시키고 세포의 ATP-생성 능력을 파괴하여 신속한 세포 사망을 초래한다. mAb 1F7 은 CD47 을 또한 발현하는 휴지기 백혈구를 살해하지 않으나, 형질전환에 의해 "활성화되는" 세포만 살해한다는 점에 주목한다. 따라서, 모두 CD47 을 발현하는, 정상적 순환하는 세포는 남지만, 암 세포는 종양-독성 CD47mAb 에 의해 선택적으로 살해된다 (Manna and Frazier (2003) A. J. Immunol. 170:3544-53). CD47/SIRP알파 결합의 단순 차단에 의한 포식작용 촉진 (증가) 의 수동 메카니즘가 대조적으로, 이러한 메카니즘은 종양 세포에 대해 주도적, 선택적 및 직접적 공격으로 여겨질 수 있다. 중요하게도, mAb 1F7 은 또한 CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고 그에 따라 그것은 2 개의 메카니즘을 통해 작용할 수 있다: (1) 종양 세포독성 유도, 세포 사망 유도 및 (2) 죽은 및 죽어가는 종양 세포의 포식작용 촉진 (증가). 두 가지 기능을 달성할 수 있느 단일 mAb 는 오직 CD47/SIRP알파 결합을 차단하는 것보다 우수할 수 있다. 실제로, CD47mAb 를 차단하여 포식작용을 촉진하는 것과 세포독성 항-CD20 mAb, 리툭시맙의 조합은 mAb 단독보다 이종이식 마우스 모델에서 인간 비-호지킨 림프종을 근절함에 있어서 더욱 효과적이라는 것이 밝혀졌다 (Chao et al. (2010) Cell 142(5):699-713). 그러나, 리툭시맙은 암 세포를 용해시킴으로써 살해하여, 가혹한 부작용 프로파일을 초래한다 (Hansel et al. (2010) Nat Rev Drug Discov. 9(4):325-38). 그와 대로적으로, 종양-독성 mAb 1F7 은 신속한 세포 용해를 야기하지 않으나, 오히려 세포 표면 위의 포스파티딜세린의 표시를 야기하여, 그에 따라 또한 이러한 메카니즘에 의한 포식작용 청소를 촉진 (증가) 시킨다.
CD47 을 차단하고 SIRP알파에 대한 그것의 결합을 방지하는 항체 ("차단 mAbs") 는 마우스 (이종이식) 종양 모델에서 인간 종양에 효능을 보여줬다. 이러한 특성을 보이는 그러한 차단 CD47mAbs 는 마크로파지에 의한 암 세포의 포식작용을 촉진 (증가) 시켜, 종양 부하를 감소시킬 수 있고 (Majeti et al. (2009) Cell 138(2):286-99), 궁국적으로 종양에 대한 적응 면역 응답의 생성을 초래할 수 있다 (Tseng et al. (2013) Proc Natl Acad Sci U S A.110(27):11103-8). 이들 차단 mAbs 는 암 세포에 대항하여 직접 세포독성 작용을 갖지 않으며, 이는 본원에서 실시예 4 에 기재된 여러 클론에 의해 예시되고 본 발명에 포함되는 본 발명의 mAbs 와 다르다.
흥미롭게도 중요하게도, 비-호지킨 림프종의 이종이식 모델에서 차단 CD47mAbs 의 효능이 암 세포 상의 CD20 에 결합하고 암 세포를 향한 세포독성 활성을 갖는 또다른 mAb (그 경우에, Rituxan®/ 리툭시맙) 와의 동시 처리에 의해 향상될 수 있다는 것이 밝혀졌다 (Chao et al. (2010) Cell 142(5):699-713). 그 연구는 직접 세포독성과 CD47/SIRP알파 차단의 조합으로부터 초래되는 증가된 치료 유익에 대한 잠재성을 입증한다. 따라서, 2 가지 특성, 즉, SIRP알파 결합의 차단 및 또한 암 세포 사망의 유도/촉진을 조합하는 단일 항CD47mAb 항체 화합물, "이중 작용 항체" 가 1 가지 단일 특성을 단독으로 갖는 CD47mAb 보다 더욱 효능적 치료적 실체라고 예상하는 것이 합리적이다.
그러한 이중 작용 mAb 의 부가적 유익은 유도된 세포 사망이 죽어 가는/죽은 세포의 표면 위에 마크로파지 상의 전포식세포 (prophagoclytic) 수용체에 의해 인지될 수 있는 부가적 분자 (예를 들어, 포스파티딜세린 또는 칼레티쿨린) 의 출현을 초래하여, 그에 따라 단순히 CD47-SIRP알파 상호작용의 차단에 의해 달성될 수 있는 것을 넘어 암 세포의 포식작용 청소를 추가로 촉진할 것이라는 점이다.
그러므로, 차단 및 세포독성 기능 둘다를 갖는 본 발명에 포함되는 그러한 이중 작용 CD47mAb 항체 화합물은 단일 기능만을 나타내는 항체에 비해 증가된 치료적 유익을 제공할 것이라는 점이 완전히 예상된다.
치료 적응증
IRI-관련 및 자가면역/염증 상태
본원에 개시된 CD47 mAb 또는 그의 항원-결합 조각의 투여는 IRI 이 기여 특색인 다수의 질환 및 상태의 치료, 및 다양한 자가면역 및 염증성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 이들은 하기를 포함한다: 본 발명의 mAb 또는 그의 항원-결합 조각이 장기 수확 전에 기증자에게, 수확된 기증자 장기에게, 장기 보존 용액에, 수용자 환자에게, 또는 그들의 임의의 조합에게 투여되는 장기 이식; 피부 이식; 그러한 mAb 또는 조각이 국소적으로 주입에 의해 영향받은 조직에 또는 비경구적으로 환자에게 투여되는 외과적 절제 또는 조직 재건; 신체 부분의 재부착; 외상 손상의 처리; 폐 고혈압; 겸상 적혈구 빈혈증 (위기); 심근경색증; 뇌졸중; 수술-유도 허혈; 급성 신장 질환/신장 부전; IRI 이 발생하고 질환의 발병기전에 기여하는 임의의 기타 상태; 및 자가면역/염증성 질환, 예를 들어 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염.
본 발명의 CD47 mAbs 및 그의 항원-결합 조각은 또한 그러한 처리를 필요로 하는 대상에서 조직 관류를 증가시키는데 사용될 수 있다. 그러한 대상은 증가된 조직 관류에 대한 필요를 나타내는 진단 절차에 의해 확인될 수 있다. 게다가, 증가된 조직 관류에 대한 필요는 대상이 외피 수술, 연조직 수술, 복합 조직 수술, 피부 이식 수술, 고형 장기의 절제, 장기 이식 수술, 또는 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착으로부터 선택되는 수술을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정이기 때문에 발생할 수 있다.
걸리기 쉬운 암
암 치료제로서 효과적인 본원에 개시된 mAbs 및 그의 항원-결합 조각은 걸리기 쉬운 혈액 암 및 고형 종양 예를 들어, 이에 제한되는 것은 아니나, 백혈병, 예를 들어 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 만성 골수성 백혈병, 및 형질 세포 백혈병; 림프종, 예를 들어 호지킨 림프종 및 비-호지킨 림프종, 예를 들어 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증; 난소암; 유방암; 자궁내막암; 결장암; 직장암; 방광암; 폐암; 기관지암; 골암; 전립선암; 췌장암; 위암; 간 및 담도 암; 식도암; 신장암; 갑상선암; 두경부암; 고환암; 아교모세포종; 별아교세포종; 흑색종; 골수형성이상증후군; 및 육종 예를 들어, 이에 제한되는 것은 아니나, 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종을 갖는 환자에게, 바람직하게는 비경구적으로, 투여될 수 있다.
특정 경우에, mAb 를 종양 내로의 주입에 의해 암에 직접 투여하는 것이 유리할 수 있다. 많은 암에서 CD47 발현이 상향조절되므로, 암/종양의 생체내 영상화 분야의 통상의 기술자에게 알려진 방사성 또는 기타 추적자로 표지되었을 때 영상화 및 진단 물질로서 하나 이상의 개시된 mAb 를 사용하는 것이 또한 바람직할 수 있다.
항체 호환성: 암 치료제로서 및/또는 IRI 증상에서 모든 mAb 클론 1-24 의 사용
본원에 개시된 상이한 항체는 세포독성 또는 비-세포독성으로서 분류되었고, 암 (SIRP알파) 및 IRI (트롬보스폰딘-1) 에서 그것의 역할을 책임지는 CD47 의 리간드가 2 가지 클래스의 항체에 의해 CD47 에 대한 결합이 방지되므로 암 증상 또는 허혈-재관류 증상에 유용하다.
그러므로, 특정 질환, 상태, 치료적 적용, 또는 암에서 특정 발병 메카니즘의 우위에 따라, 한 가지 클래스의 항체가 특정 치료 상황에서 효과적일 수 있고, 그에 따라 적절히 호환되게 서로 대신에 또는 서로 조합되어 사용되어 원하는 치료 효과를 달성할 수 있다.
각각 하기 실시예 4 및 5 에서, 항체 호환성을 입증하는 데이타 및 추가 논의에 주목한다.
조합 요법
본원에 포함되는 치료적 방법은 본원에 개시된 항체의 사용을 단독으로, 및/또는 서로와의, 및/또는 그의 항원-결합 조각과의, 및/또는 또한 적절한 생물학적/치료적 활성을 나타내는 경쟁하는 항체와의 조합으로, 즉, 이들 항체 화합물의 모든 가능한 조합을 포함한다는 점에 주목해야 한다.
게다가, 본 발명의 치료적 방법은 또한 이들 항체, 그의 항원-결합 조각, 경쟁하는 항체 등, 및 추가로 하기와 조합된 그의 조합물을 특별한 증상에 원하는 치료적 처리 효과를 달성하는 적절한 조합으로 포함한다: (1) 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 산화 질소 생성 국소성 제제, 및/또는 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질, 및/또는 본원에 개시된 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질 중 임의의 하나 이상, 또는 (2) 수술, 방사선, 항-종양 또는 항-신생물제로부터 선택되는 임의의 하나 이상의 항-종양 치료적 처리, 및 이들의 임의의 조합, 또는 (3) 통상의 기술자에게 명백한 상기 (1) 또는 (2) 의 임의의 등가물.
하기 실시예는 본 발명의 다양한 양상을 설명하나, 본 발명을 이들 특별히 개시된 구현예에만 한정하는 것으로 여겨져서는 안된다. 하기 실시예에서 이용되는 재료 및 방법은 설명을 목적으로 하는 것이고, 본 발명의 실시를 그에 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 통상의 기술자에게 명백한 본원에 기재된 것과 유사 또는 동등한 임의의 재료 및 방법이 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있다.
실시예 1
CD47 항체의 생산
본원에 개시된 인간화된 항체는 인간 게놈에서 유래하는 골격을 포함한다. 컬렉션은 인간 생식선 서열에서 발견되는 다양성을 포함하여, 생체내에서 기능적으로 발현되는 항체를 초래한다. 표적 키메라, 비-인간 항체 VxP037-01LC/ VxP037-01HC 의 경 및 중쇄 가변부 (SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:57) 내의 상보성 결정 부위 (CDRs) 를, 예를 들어, "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains", In: Antibody Engineering Lab Manual, Eds. S. Duebel and R. Kontermann, Springer-Verlag, Heidelberg (2001) 에 공개된 하기 통상적으로 받아들여지는 규칙에 따라 확인한다. CDR 조각을 합성하고 골격의 푸울 (pool) 과 조합하여 전장 가변부를 생성한다. 그 후 인간화된 가변부를 분비 신호 및 인간 카파 및 인간 IgG1 불변부와 조합하고, 포유류 발현 시스템 (예를 들어, OptiCHO System, Lifetechnologies, Carlsbad, CA) 내로 클로닝하여 인간화된 IgG1 변이체의 라이브러리를 생성한다. 라이브러리의 분취물을 서열분석하여 개별 클론의 해독 프레임의 완전성 및 높은 다양성을 보장한다. 그 후 인간화된 변이체 라이브러리의 분취물을 단일 클론으로서 96 웰 플레이트 내로 재배열하고, 미니-프렙 (mini-prep) (예를 들어, 96 웰 Miniprep Kit, Qiagen Hilden, Germany) 하고, CHO 세포 내로 트랜스펙션한다 (Lifetechnologies, Carlsbad, CA 에 의해 권장되는 리포펙타민 (Lipofectamine) 트랜스펙션 프로토콜). 트랜스펙션된 CHO 세포를 10% FBS 함유 DMEM 배지 (둘다 Lifetechnologies, Carlsbad, CA 로부터 입수가능) 에서 37℃ 에서 5% CO2 하에 성장시킨다. 인간화된 변이체가 전장 IgG1 분자로서 발현되고, 배지 내로 분비된다.
그 후 인간화된 IgG 변이체를 함유하는 세포 배양 상청액을 표적 항원에 대한 결합에 대해 스크리닝한다. 이와 병행하여, 각각의 클론에 대한 특이적 활성을 계산하기 위해 각각의 변이체의 농도를 확인한다. 각각의 클론의 특이적 활성을 동일한 플레이트 상에서 발현된 키메라 클론 VxP037-01LC/ VxP037-01HC (SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:57) 의 특이적 활성과 비교하고, 정규화한다. 각각의 플레이트로부터의 탑 히트 (top hits) 를 재배열하고, 확인을 위해 재스크리닝한다. 최종 후보를 특이적 활성, 기능적 활성, 발현 수준, 및 서열 다양성, 뿐만 아니라 기타 기준에 의해 아래 기재된 바와 같이 선별한다.
실시예 2
CD47 항체 CDR
본 발명의 인간 조작 항체의 경쇄 및 중쇄 가변부, 완전한 경 및 중쇄의 아미노산 서열, 및 이들 각각을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 아래 제목이 "아미노산 및 핵산 서열" 인 섹션에 열거되어 있다.
경쇄 및 중쇄 CDR 아미노산 서열이 각각 표 1 및 2 에 제시되어 있다.
표 1. 경쇄 CDR
Figure pct00001
표 2. 중쇄 CDR
Figure pct00002
실시예 3
상이한 종의 CD47 에 대한 항체의 결합
Kamel et al. (2010) Blood. Transfus. 8(4):260-266 에 개시된 방법에 따라 인간, 마우스, 랫트, 돼지, 및 개로부터의 표면에 CD47 을 표시하는 새롭게 단리된 적혈구 (RBCs) 를 사용하여 본 발명의 인간화된 항체의 교차 종 반응성을 확인한다.
항체 클론을 인코딩하는 플라스미드로 일시적으로 트랜스펙션된 CHO 세포로부터 분비된 항체를 함유하는 상청액을 수집하고, 수집된 그대로 사용하거나, 표준 방법을 사용하여 상청액으로부터 항체를 추가로 정제한다. 트랜스펙션된 CHO 세포를 10% 열 불활성화된 소 태아 혈청 (BioWest; S01520) 을 함유하는 F-12 배지에서 성장시킨다. 상청액 중의 항체 농도를 정량적 ELISA 를 이용하여 확인한다. ELISA 플레이트를 당나귀 항-인간 FC 항체 (Sigma; Catalog #12136) 로 10 ㎍/㎖ 에서 밤새 4℃ 에서 코팅한다 (Promega; Catalog # W4031). 플레이트를 PBS 로 세정하고, 그 후 카세인 차단 용액 (ThermoScientific; Catalog # 37532) 으로 60 분 동안 실온에서 차단한다. 플레이트를 다시 PBS 로 세정하고, 조직 배양 상청액을 첨가하고, 플레이트를 60 분 동안 실온에서 인큐베이션한다. 그 후 플레이트를 PBS 로 3 회 세정하고, 퍼옥시다제-접합된 염소 항-인간 IgG (Jackson Immunoresearch Labs; Catalog #109-035-003) 와 함께 60 분 동안 실온에서 인큐베이션한다. 플레이트를 PBS 로 3 회 세정하고, 퍼옥시다제 기질 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘을 첨가한다 (Sigma; Catalog #T4444). 0.7N 까지 HCl 의 첨가에 의해 반응을 종료시키고, Tecan model Infinite M200 플레이트 판독기를 사용하여 450nM 에서의 흡광도를 확인한다.
RBC 를 60 분 동안 얼음 위에서 포스페이트 완충 식염수, pH 7.2, 2.5 mM EDTA (PBS+E) 의 용액 중 10 ng/㎖ 의 농도로 분비된 인간화된 항체를 함유하는 조직 배양 상청액과 함께, 또는 다양한 농도의 정제된 항체와 함께 인큐베이션한다. 그 후 세포를 차가운 PBS+E 로 세정하고, 부가적 시간 동안 얼음 위에서 PBS+E 중 FITC 표지된 당나귀 항-인간 항체 (Jackson Immuno Research Labs, West Grove, PA; Catalogue # 709-096-149) 와 함께 인큐베이션한다. 그 후 세포를 PBS+E 로 세정하고, BD FACSAria 세포 분류기 (Becton Dickinson) 또는 C6 Accuri 유세포 분석기 (Becton Dickinson) 를 사용하여 항체 결합을 분석한다. 키메라 항체 >VxP037-01LC (SEQ ID NO:7))/>VxP037-01HC (SEQ ID NO:57) 에 상대적인 평균 형광 값의 비교에 의해 항체 결합을 정량화한다. 각각의 항체에 대한 평균 형광 값을 키메라 항체에 대한 평균 형광 값으로 나눈다.
상청액으로부터 수득된 결과가 표 3 에 제시되어 있으며, 표에서 "키메라" 는 키메라 항체 >VxP037-01LC (SEQ ID NO:7))/>VxP037-01HC (SEQ ID NO:57) 를 나타내고, 클론 1 은 >pVxK7b-037-hum01-LC (SEQ ID NO:8)/>pVxK7b-037-hum01-HC (SEQ ID NO:58) 를 나타내고, 클론 2 는 >pVxK7b-037-hum02-LC (SEQ ID NO:9)/ >pVxK7b-037-hum02-HC (SEQ ID NO:59) 를 나타내고, 나머지 클론 3-24 의 경우에도 유사하게 적용된다.
표 3
상이한 포유류 종의 적혈구의 표면 상의 CD47 에 대한 인간화된 항체의 결합
Figure pct00003
도 1 은 클론 Cl 1, Cl 1.1, Cl 13, 및 Cl 13.1 로부터의 다양한 농도의 정제된 항체를 사용하여 생성된 인간, 마우스, 랫트, 및 돼지 RBC (각각, 도 1a, 도 1b, 도 1c, 및 도 1d) 에 대한 교차 종 결합 곡선을 보여준다. 클론 Cl 1 및 Cl 13 은 상기 표 3 에 기재되어 있다. 클론 Cl 1.1 및 Cl 13.1 은 효과기 기능을 감소시키도록 수식된, 각각, 클론 Cl 1 및 Cl 13 의 Fc 돌연변이체이다. 이들은 각각 Fc 도메인에서 Asn297→Gln(N297Q) 돌연변이를 갖는다 (Sazinsky et al. (2008) PNAS 105(51):20167-20172). 모든 이들 클론은 시험된 모든 종의 RBC 에 대해 농도-의존적 결합을 나타낸다.
이들 데이타는 본원에 개시된 모든 인간화된 CD47 mAb 클론이 여러가지 상이한 포유류 종의 CD47 에 잘 결합한다는 것을 입증하며, 이들 항체의 유용한 교차-종 반응성을 확인해 준다.
실시예 4
세포 생활력 검정
이 실험의 목적은 세포독성 활성을 나타내는, 및 나타내지 않는 본 발명의 항체 클론을 식별하는 것이다. 이식 및 IRI 과 관련된 기타 적용을 포함하는 심혈관 증상에서 사용하기 위해, 치료적 mAb 는 이상적으로 세포독성 활성을 결여해야 한다. 이와 반대로, 암 치료에 유용한 항체는 이상적으로 형질전환된/암 세포에 대해 독성을 나타내야 한다. 암 세포에 대한 선별적 독성의 이러한 부가적 특성은 오직 CD47 에 대한 SIRP알파 결합을 방지하는 mAb 에 비해 이점을 가질 것으로 예상된다.
그러나, 상기 제목이 "항체 호환성" 인 섹션에서 언급된 바와 같이, 본원에 개시된 항체는 세포독성 또는 비-세포독성으로 분류되었지만, 그들은 암 (SIRP알파) 및 IRI (트롬보스폰딘-1) 에서 그것의 역할을 책임지는 CD47 의 리간드가 2 가지 클래스의 항체에 의해 CD47 에 대한 결합이 방지되므로 암 증상 또는 허혈-재관류 증상에 유용하다. 예로서, 비-세포독성 및 세포독성 항체 둘다를 이용하는 하기 실시예 5 를 주목한다.
그러므로, 특정 질환, 상태, 치료적 적용, 또는 암에서 특정 발병 메카니즘의 우위에 따라, 한 가지 클래스의 항체가 특정 치료 상황에서 효과적일 수 있고, 그에 따라 적절히 호환되게 서로 대신에 또는 서로 조합되어 사용되어 원하는 치료 효과를 달성할 수 있다.
이용되는 방법은 Vistica et al. (1991) Cancer Res. 51:2515 - 2520 에 기재되어 있다.
Jurkat JE6.1 세포 (ATCC, Manassas, VA; Catalog # TIB-152) 를 5% (v/v) 열 불활성화된 소 태아 혈청 (BioWest; Catalogue # S01520), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 (Sigma; Catalogue # P4222) 을 함유하는 Iscove's 변형 둘베코 배지에서 1 x 106 세포/㎖ 미만의 밀도로 성장시킨다. 세포 생활력 검정을 위해, 세포를 96 웰 조직 배양 플레이트에 5% (v/v) 열 불활성화된 소 태아 혈청 (BioWest; Catalog # S01520), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 (Sigma; #P4222) 과 함께 상기 실시예 3, 표 3 에 기재된 바와 같이 제조된 최종 농도 10 ng/㎖ 의 본원에 개시된 인간화된 항체, 또는 농도 5 ㎍/㎖ 의 도 2 의 정제된 항체를 함유하는 Iscove's 변형 둘베코 배지에 2x104 세포/㎖ 의 밀도로 플레이팅한다. 세포를 72 시간 동안 37℃ 에서 5% (v/v) CO2 의 분위기에서 인큐베이션한다. 그 후 세포 밀도를 WST1 시약 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN; Catalog #05015944001) 을 제조사의 지침에 따라 사용하여 정량화한다. 세포 성장에 대한 항체의 효과를 첨가된 항체를 함유하지 않는 세포의 성장과 비교하여 정량화한다 (PBS; 평균 퍼센트 살해 = 0).
상청액을 사용한 결과가 표 4 에 제시되어 있다. 표의 값은 3 회의 별도의 실험의 평균을 나타낸다. "키메라" 및 클론 번호는 상기 실시예 3 에 기재된 바와 같다. 1F7 은 상기 인간 T 세포 백혈병 (Manna and Frazier (2003) A. J. Immunol. 170:3544-53) 및 여러 유방암 (Manna and Frazier (2004) A. Cancer Research 64(3):1026-36) 에 대해 직접, 종양-독성 효과를 갖는 항-인간 CD47mAb 이다.
정제된 클론 13, 14 및 24 를 사용하는 결과가 도 2 에 제시되어 있다.
표 4
형질전환된 인간 T 세포, Jurkat JE6.1 에 대한 인간화된 CD47mAbs 의 세포독성
Figure pct00004
이들 데이타는 대부분의 본 발명의 인간화된 항체 클론이 Jurkat T 세포에 대해 유의하게 세포독성이 아니라는 것을 입증한다. 그러나, 특정 클론은, 이전에 식별된 마우스 항-인간 CD47mAb 1F7 (Manna and Frazier, J. Immunol. (2003) 170(7):3544-53 와 유사하게, 유의한 세포독성을 갖는다.
표 2 에 "예" 로 표시된 하기 클론은 세포독성으로 여겨진다: 2, 3, 5, 6, 8, 10, 13, 14, 15, 16, 17, 및 19.
하기 클론은 비-독성으로 여겨진다: 1, 4, 7, 9, 11, 12, 18, 20, 21, 22, 23, 및 24. 도 2 에 제시된 정제된 클론 13, 14, 및 24 를 사용하는 결과는 또한 클론 13 및 14 가 1F7 과 유사한 활성으로 세포독성이지만, 클론 24 는 세포 생활력을 감소시키지 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 5
산화 질소 신호전달의 조절
이 실험의 목적은 본 발명의 비-세포독성 (번호 1, 9, 11, 및 24) 및 세포독성 (번호 13) 인간화된 항체 클론이 NO-자극되는 cGMP 합성의 TSP1-매개되는 저해를 역전시키는 능력을 나타내는 것을 입증하는 것이며, 이는 예를 들어, 이전에 CD47 에 대한 마우스 모노클로날 항체를 사용하여 기재되었고, Isenberg et al. (2006) J. Biol. Chem. 281:26069-80 에 의해 개시되었다. 이는 상기 상세한 설명 및 실시예 4 에서 논의된 본 발명의 항체 호환성의 예이다.
cGMP 를 측정하는데 이용되는 방법은 제조사에 의해 기재된 바와 같다 (CatchPoint Cyclic-GMP Fluorescent Assay Kit, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Jurkat JE6.1 세포 (ATCC, Manassas, VA; Catalog # TIB-152) 를 사용하며, 이는 이들 세포가 배양물에서 성장할 때 NO-cGMP 신호전달 경로를 유지하고 CD47 의 TSP1 결찰에 대한 견고한 재현가능한 저해 반응을 나타내기 때문이다. 세포를 5% (v/v) 열 불활성화된 소 태아 혈청 (BioWest; Catalogue # S01520), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 (Sigma; Catalogue # P4222) 을 함유하는 Iscove's 변형 둘베코 배지에서 1 x 106 세포/㎖ 미만의 밀도로 성장시킨다. cGMP 검정을 위해, 세포를 96 웰 조직 배양 플레이트에 5% (v/v) 열 불활성화된 소 태아 혈청 (BioWest; Catalog # S01520), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 (Sigma; #P4222) 을 함유하는 Iscove's 변형 둘베코 배지에서 24 시간 동안 1x105 세포/㎖ 의 밀도로 플레이팅하고, 그 후 무혈청 배지에 밤새 옮긴다.
그 후 상기 실시예 3 에 기재된 CHO 세포에서의 일시적 트랜스펙션으로부터 정제된 본원에 개시된 인간화된 항체, 뿐만 아니라 대조군 키메라 항체를 최종 농도 20 ng/㎖ 로 첨가하고, 그에 뒤이서 15 분 후에 0 또는 1 ㎍/㎖ 인간 TSP1 (Athens Research and Technology, Athens, GA, Catalogue # 16-20-201319) 을 첨가한다. 부가적 15 분 후에, NO 공여체, 디에틸아민 NONOate (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, Catalog # 82100) 를 웰의 절반에 최종 농도 1 μM 로 첨가한다. 5 분 후에, 세포를 cGMP 키트에 제공된 완충액으로 용해시키고, 각각의 웰의 분취물을 cGMP 함량에 대해 검정한다.
도 3 및 4 에 나타난 바와 같이, 시험된 본 발명의 인간화된 항체 클론, 또는 키메라 대조군 mAb 중 어느 것도 기저 cGMP 수준에 영향을 미치지 않는다. 예상한 바와 같이, 키메라 항체 (>VxP037-01LC (SEQ ID NO:7))/>VxP037-01HC (SEQ ID NO:57) 는 TSP1 저해를 역전시킨다.
본 발명의 인간화된 클론 1, 9, 11, 13, 및 24 는 또한 TSP1 저해를 유의하게 역전시키며, 이는 그들이 NO 신호전달을 증가시키는 능력을 갖는다는 것을 입증하고 (도 3 및 4), 그들이 상처, 염증, 고혈압, 대사증후군, 허혈, 및 허혈-재관류 손상 (IRI) 으로부터 초래되는 것을 포함하나 이에 제한되지 않는 스트레스에 대항하여 심혈관계를 보호하는데 유용하다는 것을 시사한다.
실시예 6
생체내에서 허혈-재관류 손상의 감소
이 실험의 목적은 실시예 5 에서 시험관내에서 산화 질소 신호전달을 조절하는 것으로 밝혀진 본원에 개시된 인간화된 항체 클론, 즉, 클론 1 이 랫트 신장 이식 모델의 생체내에서 IRI 및 신장 손상을 감소시키는데 효과적이라는 것을 입증하는 것이다. IRI 은 지연된 이식편 기능 및 이식편 손실을 초래하는 염증에 유의하게 기여하고, 트롬보스폰딘-1/CD47 시스템에 의해 산화 질소 신호전달의 저해를 통해 악화된다.
Schumacher et al. (2003) Microsurg. 23:389-394 및 Karatzas et al. (2007) Microsug. 27:668-672 에 기재된 바와 같이 IRI 의 유전적동계 랫트 신장 이식 모델과 양측 신장절제된 수용자를 사용하여 이식 후 이식편 기능에 대한 항-CD47 모노클로날 항체 클론 1 의 효과를 평가한다.
무게가 275-300 g 인 수컷 Lewis 랫트를 Charles River Laboratories (Wilmington, MA) 로부터 입수한다. 기증자 신장을 50 ㎍ 의 정제된 클론 1 또는 비히클 (포스페이트 완충 식염수, pH 7.2) 로 플러싱하고, 4℃ 에서 University of Wisconsin 보존 용액 (UW) 중에서 6 시간 동안 저장하고, 그 후 이식한다. 이식 후 2 일 째에, 표준 방법론에 의해 혈청 크레아티닌을 측정함으로써 신장 기능을 평가한다.
도 5 에 나타난 바와 같이, 기증자 신장의 CD47mAb 클론 1 관류는 혈청 크레아티닌의 감소에 의해 측정할 때 대조군에 비해 개선된 신장 기능을 초래한다.
실시예 7
생체내 항-종양 활성
이 실험의 목적은 실시예 4 에서 시험관내에서 세포독성 활성을 나타내고 세포 생활력을 감소시키는 것으로 밝혀진 본원에 개시된 인간화된 항체 클론, 즉, 클론 13 이 마우스 백혈병 모델의 생체내에서 종양 부하를 감소시키는 것을 입증하는 것이다.
항-CD47mAb 클론 13 (Cl 13; 클론 번호는 상기 실시예 3 에 기재된 바와 같음) 의 항-종양 활성을 Ramirez et al. (2009) Blood 113:6206-6214 에 기재된 바와 같은 급성 전골수구성 백혈병 (APL) 의 유전적동계 생쥐 모델에서 확인한다.
생쥐 APL 세포 (B6APL1) 를 3 개의 그룹 (5-10 마리 마우스/그룹) 으로 무작위화시킨 C57BL/6 마우스 내로 정맥내 주입한다: 그룹 1: APL 없음; 그룹 2: 처리하지 않은 APL; 그룹 3: 항-CD47mAb Cl 13 으로 처리한 APL. 항체 처리를 종양 접종일 (제 0 일) 에 개시하고, 제 0 일, 제 3 일, 및 제 6 일에 포스페이트 완충 식염수, pH 7.2 중 10 ㎍/투여물 (0.4 ㎎/㎏) 의 단일 투여물로 복강내 주입에 의해 제공한다.
종양 세포 접종 후 제 25 일에 종양 부하를 평가한다. 각각의 마우스로부터의 혈액 샘플을 자동 혈구계를 사용하여 백혈구 총수에 대해 분석하고, 순환하는 APL 세포 (종양 부하를 나타냄) 를 흐름세포측정법 (CD34+/CD117+ 세포) 에 의해 정량화한다.
도 6 에 나타난 바와 같이, Cl 13 으로 처리된 마우스는 종양 접종 후 25 일째에 미처리 마우스에 비해 감소된 종양 부하를 가지며, 따라서 이러한 인간화된 클론의 항-종양 활성을 입증한다.
본 발명은 이와 같이 기재되었지만, 많은 방식으로 변화될 수 있음이 명백할 것이다. 그러한 변화는 본 발명의 주제 및 범위에서 벗어나지 않는다고 여겨지고, 통상의 기술자에게 명백한 모든 그러한 변화는 하기 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다.
아미노산 및 핵산 서열
경쇄 가변부 아미노산 서열
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
경쇄 가변부 핵산 서열
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
중쇄 가변부 아미노산 서열
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
중쇄 가변부 핵산 서열
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
완전한 경쇄 아미노산 서열
>VxP037-01-LC-Pro 은 전장 경쇄 가변부 + 불변부 아미노산 서열을 나타낸다. 밑줄친 아미노산 서열 = 골격 4 + 불변부. 모든 인간화된 경쇄 서열은 VxP037-01-LC-Pro 와 동일한 불변부를 함유한다. 그러나, 이는 나머지 인간화된 경쇄 아미노산 서열에서 제시되어 있지 않다.
Figure pct00029
완전한 경쇄 핵산 서열
밑줄친 핵산 서열은 상기 >VxP037-01-LC-Pro 내의 밑줄친 단백질 서열을 인코딩한다.
Figure pct00030
완전한 중쇄 아미노산 서열
>VxP037-01-HC-Pro 은 전장 중쇄 가변부 + 불변부 아미노산 서열을 나타낸다. 밑줄친 아미노산 서열 = 골격 4 + 불변부. 모든 인간화된 중쇄 서열은 >VxP037-01-HC-Pro 와 동일한 불변부를 함유한다. 그러나, 이는 나머지 인간화된 중쇄 아미노산 서열에 제시되어 있지 않다.
Figure pct00031
완전한 중쇄 핵산 서열
밑줄친 핵산 서열은 상기 >VxP037-01-HC-Pro 내의 밑줄친 단백질 서열을 인코딩한다.
Figure pct00032
<110> Frazier, William Manning, Pamela Frey, Gerhard Chang, Hwai Wen <120> Therapeutic CD47 Antibodies <130> VLX0001-401-PC <150> US 61/736301 <151> 2012-12-12 <160> 110 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain complementarity determining region <400> 1 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain complementarity determining region <400> 2 Lys Val Ser Tyr Arg Phe Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain complementarity determining region <400> 3 Ser Gln Asn Thr His Val Pro Arg Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain complementarity determining region <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr Val Phe 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain complementarity determining region <400> 5 Asp Ile Asn 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ccctgtggac acagccacgt attactgtgc aagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 92 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 92 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag actcaccatc tccaaggaca cctccaaaaa ccaggtggtc 240 cttacaatga ccaacatgga ccctgtggac acagccacgt attactgtgc aagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 93 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 93 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc ctggggctac agtgaaaatc 60 tcctgcaagg tttctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt 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<211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 100 gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaagg gttctggcta caccttcacc aactactatg tattctggat caggcagtcc 120 ccatcgagag gccttgagtg gctgggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 101 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 101 gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaagg gttctggcta caccttcacc aactactatg tattctggat caggcagtcc 120 ccatcgagag gccttgagtg gctgggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 102 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 102 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 103 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 103 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag actcaccatc tccaaggaca cctccaaaaa ccaggtggtc 240 cttacaatga ccaacatgga ccctgtggac acagccacgt attactgtgc aagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 104 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 104 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag actcaccatc tccaaggaca cctccaaaaa ccaggtggtc 240 cttacaatga ccaacatgga ccctgtggac acagccacgt attactgtgc aagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 105 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 105 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag actcaccatc tccaaggaca cctccaaaaa ccaggtggtc 240 cttacaatga ccaacatgga ccctgtggac acagccacgt attactgtgc aagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 106 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 106 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc ctggggctac agtgaaaatc 60 tcctgcaagg tttctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggtgac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccaggga 327 <210> 107 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> complete light chain <400> 107 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Tyr Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Asn 85 90 95 Thr His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 108 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> complete light chain <400> 108 gatgttgtta tgacccaaac tccactctcc ctgtctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc ctaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaaatac acatgttcct 300 cggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttga 660 660 <210> 109 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> complete heavy chain <400> 109 Glu Val Gln Leu Gln Gln Phe Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Met Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Val Phe Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Val Asn Gly Asp Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Thr Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 110 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> complete heavy chain <400> 110 gaggtccagc tgcagcagtt tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc aatgaagttg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc aactactatg tattctgggt gaaacagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagac attaatcctg tcaatggtga tactaacttc 180 aatgagaaat tcaagaacaa ggccacactg actgtagaca agtcctccac cacaacatac 240 ttgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagagggggt 300 tatactatgg actactgggg ccagggaacg ctggtcaccg tcagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtcagca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtctc cgggtaaatg a 1341

Claims (22)

  1. 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 및 개 CD47 에 특이적으로 결합하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  2. 제 1 항에 있어서, 키메라 또는 인간화된, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 3 개의 경쇄 상보성 결정 부위 (LCDRs 1-3) 및 3 개의 중쇄 상보성 결정 부위 (HCDRs 1-3) 를 포함하며, 여기서:
    LCDR 1 은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO:1) 을 포함하고;
    LCDR 2 는 아미노산 서열 KVSYRFS (SEQ ID NO:2) 을 포함하고;
    LCDR 3 은 아미노산 서열 SQNTHVPRT (SEQ ID NO:3) 을 포함하고;
    HCDR 1 은 아미노산 서열 GYTFTNYYVF (SEQ ID NO:4) 을 포함하고;
    HCDR 2 는 아미노산 서열 DINPVNGDTNFNEKFKN (SEQ ID NO:5) 을 포함하고;
    HCDR 3 은 아미노산 서열 GGYTMDY (SEQ ID NO:6) 을 포함하는,
    모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
    SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
    SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
    SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
    SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
    SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
    SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
    SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
    SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
    SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
    SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
    SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
    SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
    SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
    SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
    SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
    SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
    SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
    SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74;
    SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
    SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76;
    SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
    SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
    SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
    SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
    SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  6. 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
    i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
    ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴.
  7. 제 6 항의 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 상기 이중 활성을 나타내는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 및 약학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  9. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 치료 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물의 치료, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물의 치료에 사용하기 위한, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  10. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 허혈-재관류 손상, 또는 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는데 사용하기 위한, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  11. 제 10 항에 있어서, 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
    SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:57;
    SEQ ID NO:8 및 SEQ ID NO:58;
    SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:61;
    SEQ ID NO:14 및 SEQ ID NO:64;
    SEQ ID NO:16 및 SEQ ID NO:66;
    SEQ ID NO:18 및 SEQ ID NO:68;
    SEQ ID NO:19 및 SEQ ID NO:69;
    SEQ ID NO:25 및 SEQ ID NO:75;
    SEQ ID NO:27 및 SEQ ID NO:77;
    SEQ ID NO:28 및 SEQ ID NO:78;
    SEQ ID NO:29 및 SEQ ID NO:79;
    SEQ ID NO:30 및 SEQ ID NO:80; 및
    SEQ ID NO:31 및 SEQ ID NO:81.
  12. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서, 허혈-재관류 손상이 장기 이식, 급성 신부전, 심폐 우회술, 폐 고혈압, 겸상 적혈구 빈혈증, 심근경색증, 뇌졸중, 외과적 절제 및 재건 수술, 부속기관 또는 기타 신체 부분의 재부착, 피부 이식, 또는 외상에서 발생하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  13. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서, 자가면역 또는 염증성 질환이 관절염, 다발경화증, 건선, 크론병, 염증성 창자병, 루푸스, 그레이브스병 및 하시모토 갑상선염, 및 강직성 척추염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  14. 대상에게 유효량의 산화 질소 공여체, 전구체, 또는 둘다; 산화 질소 생성 국소성 제제; 가용성 구아닐일 사이클라제를 활성화시키는 물질; 사이클릭 뉴클레오티드 포스포디에스테라제를 저해하는 물질; 또는 임의의 상기의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 제 9 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항의 용도.
  15. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 걸리기 쉬운 암을 치료하는데 사용하기 위한, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  16. 제 15 항에 있어서, 경쇄 가변부 (LCVR) 및 중쇄 가변부 (HCVR) 를 포함하며, 여기서 상기 LCVR 및 상기 HCVR 은, 각각, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
    SEQ ID NO:9 및 SEQ ID NO:59;
    SEQ ID NO:10 및 SEQ ID NO:60;
    SEQ ID NO:12 및 SEQ ID NO:62;
    SEQ ID NO:13 및 SEQ ID NO:63;
    SEQ ID NO:15 및 SEQ ID NO:65;
    SEQ ID NO:17 및 SEQ ID NO:67;
    SEQ ID NO:20 및 SEQ ID NO:70;
    SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:71;
    SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:72;
    SEQ ID NO:23 및 SEQ ID NO:73;
    SEQ ID NO:24 및 SEQ ID NO:74; 및
    SEQ ID NO:26 및 SEQ ID NO:76.
  17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 걸리기 쉬운 암의 세포의 포식작용 및/또는 살해를 촉진하는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  18. 제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  19. 제 18 항에 있어서,
    백혈병이 급성 림프구 (림프모구) 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 다발 골수종, 형질 세포 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    림프종이 호지킨 림프종 및 B 세포 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 비-호지킨 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    육종이 골육종, 유잉 육종, 평활근육종, 윤활막 육종, 포상 연부 육종, 혈관육종, 지방육종, 섬유육종, 횡문근육종, 및 연골육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는,
    모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  20. 환자에게 수술, 방사선, 항-종양 또는 항-신생물제, 및 임의의 상기의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항-종양 치료적 처리를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 제 9 항 또는 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항의 용도.
  21. 그것을 필요로 하는 인간 또는 반려/애완 동물, 일하는 동물, 스포츠 동물, 동물원 동물, 또는 가두어 길러지는 기타 귀중한 동물에서 걸리기 쉬운 암을 치료하는데 사용하기 위한,
    인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 특이적으로 결합하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 하기의 이중 활성을 나타내는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각:
    i) 암 세포의 사망을 유도함, 및
    ii) 상기 암 세포의 포식작용을 증가시킴, 또는
    상기 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각과 인간, 랫트, 마우스, 돼지, 또는 개 CD47 에 대한 결합에 대해 경쟁하고, CD47 에 대한 SIRP알파의 결합을 차단하고, 상기 이중 활성을 나타내는, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
  22. 제 21 항에 있어서, 걸리기 쉬운 암이 백혈병, 림프종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 결장암, 직장암, 위암, 방광암, 폐암, 기관지암, 골암, 전립선암, 췌장암, 간 및 담도 암, 식도암, 신장암, 갑상선암, 두경부암, 고환암, 아교모세포종, 별아교세포종, 흑색종, 골수형성이상증후군, 및 육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 인간화된 또는 키메라 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각, 또는 경쟁하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 조각.
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Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157018026A KR20150093770A (ko) 2012-12-12 2013-12-12 치료적 ｃｄ４７ 항체

Country Status (16)

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US (4) US20140363442A1 (ko)
EP (1) EP2931751B1 (ko)
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AU (1) AU2013359167B2 (ko)
BR (1) BR112015013431A2 (ko)
CA (1) CA2894439A1 (ko)
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RU (1) RU2015122228A (ko)
SG (1) SG11201504469XA (ko)
WO (2) WO2014093678A2 (ko)

Families Citing this family (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3056514T (pt) 2008-01-15 2019-07-19 Univ Leland Stanford Junior Métodos para manipulação de fagocitose mediada por cd47
JP6572131B2 (ja) 2012-12-12 2019-09-04 バスキュロックス インコーポレイテッド 治療用ｃｄ４７抗体
US9221908B2 (en) 2012-12-12 2015-12-29 Vasculox, Inc. Therapeutic CD47 antibodies
ES2755156T3 (es) 2012-12-17 2020-04-21 Trillium Therapeutics Inc Tratamiento de células enfermas CD47+ con fusiones SIRP alfa-Fc
EP3195168B1 (en) * 2014-07-31 2022-09-07 The University Of Western Australia A method for the identification of immunotherapy-drug combinations using a network approach
EP3204420B1 (en) 2014-10-10 2020-09-02 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Methods to eliminate cancer stem cells by targeting cd47
CN107406503B (zh) * 2014-11-18 2021-07-16 詹森药业有限公司 Cd47抗体、方法和用途
KR102313073B1 (ko) 2014-12-05 2021-10-18 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 분화 클러스터 47 유전자를 가진 비인간 동물
US20170151281A1 (en) 2015-02-19 2017-06-01 Batu Biologics, Inc. Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer
CN107921121B (zh) * 2015-03-04 2022-02-08 索伦托药业有限公司 结合cd47的抗体治疗剂
CN104804093A (zh) * 2015-05-27 2015-07-29 江苏春申堂药业有限公司 一种针对cd47的单域抗体
US10894831B2 (en) 2015-08-26 2021-01-19 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Enhanced depletion of targeted cells with CD47 blockade and an immune costimulatory agonist
US10221249B2 (en) * 2015-09-10 2019-03-05 Affigen, Llc Method of making patient specific anti-idiotype antibodies
UA126146C2 (uk) 2015-09-18 2022-08-25 Арч Онколоджі, Інк. Терапевтичне антитіло до cd47
GB2558131B (en) 2015-09-21 2021-05-19 Surface Oncology Inc Anti-CD47 antibodies and methods of use
EP3708588A1 (en) 2015-11-27 2020-09-16 Cartherics Pty. Ltd. Genetically modified cells and uses thereof
CN108925136B (zh) 2015-12-02 2022-02-01 斯特赛恩斯公司 特异于糖基化的btla（b和t淋巴细胞衰减因子）的抗体
ES2796378T3 (es) 2016-01-11 2020-11-26 Forty Seven Inc Anticuerpos monoclonales anti-cd47 humanizados, de ratón o químicos
JP7026047B2 (ja) * 2016-01-21 2022-02-25 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 免疫調節剤を併用するがんの治療
JP2019511552A (ja) * 2016-04-15 2019-04-25 トリリウム セラピューティクス インコーポレイテッド Ｃｄ４７遮断療法におけるマクロファージの刺激
CN106084052B (zh) * 2016-06-17 2019-12-27 长春金赛药业股份有限公司 抗cd47单克隆抗体及其应用
CN106117354B (zh) * 2016-06-24 2020-01-14 安徽未名细胞治疗有限公司 一种全人源抗CD47的全分子IgG抗体及其应用
JP7241677B2 (ja) 2016-07-19 2023-03-17 テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド 抗ｃｄ４７併用療法
EP3529276A4 (en) 2016-10-21 2020-06-17 Arch Oncology, Inc. CD47 THERAPEUTIC ANTIBODIES
EP3534964A4 (en) 2016-11-03 2020-07-15 Trillium Therapeutics Inc. IMPROVEMENT OF CD47 BLOCKING THERAPY BY PROTEASOME INHIBITORS
CN108779179B (zh) * 2016-11-28 2022-02-08 江苏恒瑞医药股份有限公司 Cd47抗体、其抗原结合片段及其医药用途
EP3345924A1 (en) * 2017-01-10 2018-07-11 Universität Duisburg-Essen Use of cd47 antibodies
GB201700621D0 (en) 2017-01-13 2017-03-01 Guest Ryan Dominic Method,device and kit for the aseptic isolation,enrichment and stabilsation of cells from mammalian solid tissue
JP7117311B2 (ja) * 2017-01-26 2022-08-12 ゼットリップ ホールディング リミテッド Ｃｄ４７抗原結合単位およびその使用
MX2019011624A (es) * 2017-03-27 2019-12-05 Celgene Corp Metodos y composiciones para la reduccion de la inmunogenicidad.
CN110958888A (zh) * 2017-03-28 2020-04-03 延龄草治疗公司 Cd47阻断疗法
US11168326B2 (en) 2017-07-11 2021-11-09 Actym Therapeutics, Inc. Engineered immunostimulatory bacterial strains and uses thereof
EP3661965A4 (en) * 2017-08-02 2022-07-13 Phanes Therapeutics, Inc. ANTI-CD47 ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2019034895A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Ultrahuman Four Limited LIAISON AGENTS
CN109422811A (zh) * 2017-08-29 2019-03-05 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd47抗体及其用途
EA039662B1 (ru) 2017-10-03 2022-02-24 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Антитела, специфичные к cd47 и pd-l1
EP4177270A1 (en) 2017-10-18 2023-05-10 Forty Seven, Inc. Anti-cd47 agent-based ovarian cancer therapy
JP2021500926A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 ハミングバード・バイオサイエンス・ホールディングス・プライベート・リミテッド Ｃｄ４７抗原結合分子
WO2019090355A1 (en) * 2017-11-06 2019-05-09 Children's National Medical Center Cells expressing antibodies and methods of treatment using the same
US11771764B2 (en) 2017-11-06 2023-10-03 Pfizer Inc. CD47 blockade with radiation therapy
MA51208A (fr) 2017-12-01 2020-10-07 Seattle Genetics Inc Anticorps (masqués) contre cd47 et leurs utilisations pour le traîtement du cancer
CN110144009B (zh) * 2018-02-14 2020-01-21 上海洛启生物医药技术有限公司 Cd47单域抗体及其用途
CN110305212A (zh) 2018-03-27 2019-10-08 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd47抗体及其用途
WO2019200462A1 (en) * 2018-04-16 2019-10-24 Adaerata, Limited Partnership Methods of preventing or treating non-hematopoietic slamf7 positive and slamf7 negative cancers
CN108484770B (zh) * 2018-05-16 2020-11-13 武汉云克隆科技股份有限公司 重组大鼠抗小鼠cd4单克隆抗体，制备方法和应用
CN110538321B (zh) * 2018-05-29 2023-03-10 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种cd47抗体药物组合物及其用途
US11634490B2 (en) 2018-06-15 2023-04-25 Accurus Biosciences, Inc. Blocking antibodies against CD47 and methods of use thereof
CN110615841B (zh) * 2018-06-20 2022-01-04 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人cd47单克隆抗体及其应用
KR20240067973A (ko) 2018-07-11 2024-05-17 액팀 테라퓨틱스, 인코퍼레이티드 조작된 면역자극성 박테리아 균주 및 이의 용도
WO2020036977A1 (en) * 2018-08-13 2020-02-20 Arch Oncology, Inc. Therapeutic cd47 antibodies
US11242528B2 (en) 2018-08-28 2022-02-08 Actym Therapeutics, Inc. Engineered immunostimulatory bacterial strains and uses thereof
JP2021535743A (ja) * 2018-08-31 2021-12-23 南京聖和薬業股▲ふん▼有限公司Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co., Ltd. 抗ｃｄ４７抗体及びその応用
WO2020097193A1 (en) 2018-11-06 2020-05-14 The Regents Of The University Of California Chimeric antigen receptors for phagocytosis
CN111253488A (zh) * 2018-12-03 2020-06-09 上海开拓者生物医药有限公司 Cd47抗体及其制备方法和应用
CN112969719B (zh) 2019-03-06 2022-11-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 双功能融合蛋白及其医药用途
US11026973B2 (en) 2019-04-30 2021-06-08 Myeloid Therapeutics, Inc. Engineered phagocytic receptor compositions and methods of use thereof
MA56119A (fr) 2019-06-07 2022-04-13 Alx Oncology Inc Procédés et réactifs pour réduire les interférences de médicaments se liant au cd47 dans des dosages sérologiques
WO2020253785A1 (en) * 2019-06-19 2020-12-24 Lepu Biopharma Co., Ltd. Anti-cd47 antibodies and uses thereof
AU2020296785A1 (en) * 2019-06-19 2022-01-20 Lepu Biopharma Co., Ltd. Anti-CD47 antibodies and uses thereof
CN114761041A (zh) 2019-07-16 2022-07-15 吉利德科学公司 Hiv疫苗及其制备和使用方法
BR112022003970A2 (pt) 2019-09-03 2022-06-21 Myeloid Therapeutics Inc Métodos e composições para integração genômica
MX2022002505A (es) * 2019-09-03 2022-06-02 Akeso Biopharma Inc Anticuerpo monoclonal anti-cd47 y uso del mismo.
TW202124450A (zh) 2019-10-18 2021-07-01 美商四十七股份有限公司 用於治療骨髓發育不良症候群及急性骨髓白血病之組合療法
US20220403023A1 (en) * 2019-10-25 2022-12-22 WuXi Biologics Ireland Limited Novel anti-cd47 antibodies and uses thereof
JP2022552748A (ja) 2019-10-31 2022-12-19 フォーティ セブン， インコーポレイテッド 抗ｃｄ４７及び抗ｃｄ２０による血液癌の治療
GB201918230D0 (en) 2019-12-11 2020-01-22 Prec Therapeutics Ltd Antibodies and their uses
US10980836B1 (en) 2019-12-11 2021-04-20 Myeloid Therapeutics, Inc. Therapeutic cell compositions and methods of manufacturing and use thereof
KR20220119439A (ko) 2019-12-20 2022-08-29 인스틸 바이오 유케이 리미티드 종양 침윤 림프구를 분리하기 위한 장치 및 방법 및 그것의 용도
WO2021130638A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 Carna Biosciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
WO2021163064A2 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
WO2021190441A1 (zh) * 2020-03-23 2021-09-30 倍而达药业（苏州）有限公司 Cd47/人源化cd47抗体或其抗原结合片段、免疫活性片段及应用
EP4130042A1 (en) * 2020-04-02 2023-02-08 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Antigen-binding polypeptide binding to cd47, and use thereof
CN111635459B (zh) * 2020-06-27 2021-01-15 广东赛尔生物科技有限公司 抗cd47抗体及其在治疗癌症中的应用
WO2022098642A1 (en) 2020-11-03 2022-05-12 Rdiscovery, LLC Therapies for treatment of cancer and phagocytosis-deficiency related diseases
US20230399405A1 (en) * 2020-11-04 2023-12-14 The Trustees Of Dartmouth College Vista agonist for treatment/prevention of ischemic and/or reperfusion injury
EP4240367A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Myeloid Therapeutics, Inc. Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof
JP2023552375A (ja) 2020-12-06 2023-12-15 エーエルエックス オンコロジー インコーポレイテッド 血清学的アッセイにおいてｃｄ４７に結合する薬物の干渉を低減するための多量体
WO2022130016A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Instil Bio (Uk) Limited Tumor infiltrating lymphocytes and anti-cd47 therapeutics
AU2022222994A1 (en) * 2021-02-19 2023-09-28 Seoul National University R&Db Foundation Single domain antibody against cd47 and use thereof
EP4304633A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Mendus B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
CN112979764B (zh) * 2021-03-26 2022-08-02 复旦大学附属中山医院 特异结合人cd47分子的多肽及其用途
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
EP4359389A1 (en) 2021-06-23 2024-05-01 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3222277A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3222439A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
KR20240005901A (ko) 2021-06-23 2024-01-12 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 디아실글리세롤 키나제 조절 화합물
CA3234909A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
WO2023077030A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
US20240124412A1 (en) 2021-12-22 2024-04-18 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
US20230242508A1 (en) 2021-12-22 2023-08-03 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
WO2023159220A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Kenjockety Biotechnology, Inc. Anti-cd47 antibodies
US20230373950A1 (en) 2022-03-17 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023183817A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
US20230374036A1 (en) 2022-04-21 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Kras g12d modulating compounds
WO2024006929A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2024015741A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Gilead Sciences, Inc. Hiv immunogenic polypeptides and vaccines and uses thereof
WO2024064668A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPα DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY
WO2024137852A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Gilead Sciences, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1340456C (en) 1986-07-07 1999-03-23 Hubert J.P. Schoemaker Chimeric rodent/human immunoglobulins specific for tumor-associated antigens
US7531643B2 (en) 1997-09-11 2009-05-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Monoclonal antibody inducing apoptosis
KR20010023866A (ko) 1997-09-11 2001-03-26 나가야마 오사무 아포토시스를 유기하는 모노클로날 항체
CA2226962A1 (en) * 1998-02-16 1999-08-16 Marie Sarfati Use of binding agents to cd47 and its ligands in the treatment or the prophylaxis of various inflammatory, autoimmune and allergic diseases and in the treatment of graft rejection
DE19813759C1 (de) 1998-03-27 1999-07-15 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Induktion einer durch NK-Zellen vermittelten Immunantwort
EP1167388A4 (en) 1999-03-10 2002-05-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd APOPTOSE INDUCING SINGLE STRING FV
US7696325B2 (en) 1999-03-10 2010-04-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide inducing apoptosis
WO2001005968A1 (en) * 1999-06-21 2001-01-25 Inkine Pharmaceutical Company, Inc. Angiocidin: a cys-ser-val-thr-cys-gly specific tumor cell adhesion receptor
US20010041670A1 (en) * 1999-12-06 2001-11-15 Ronit Simantov Thrombospondin-binding region of histidine-rich glycoprotein and method of use
JP2005520795A (ja) 2001-12-12 2005-07-14 コンフォーマ・セラピューティクス・コーポレイション Ｈｓｐ９０阻害活性を有するプリン類似体
US20040213792A1 (en) 2003-04-24 2004-10-28 Clemmons David R. Method for inhibiting cellular activation by insulin-like growth factor-1
AU2004287722A1 (en) 2003-11-11 2005-05-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Humanized anti-CD47 antibody
US20060088522A1 (en) 2004-09-10 2006-04-27 Wyeth Humanized anti-5T4 antibodies and anti-5T4/calicheamicin conjugates
JP2007008895A (ja) 2005-07-04 2007-01-18 Chugai Pharmaceut Co Ltd 抗ｃｄ４７抗体とインテグリンリガンドとの併用
US7514229B2 (en) 2005-09-29 2009-04-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for diagnosing and evaluating treatment of blood disorders
EP1994055B1 (en) 2006-03-10 2014-07-02 Wyeth LLC Anti-5t4 antibodies and uses thereof
WO2008043072A2 (en) 2006-10-05 2008-04-10 Biogen Idec Inc. Cd80 antagonists for treating neoplastic disorders
EP3424950A1 (en) 2006-10-06 2019-01-09 The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Prevention of tissue ischemia, related methods and compositions
ES2796085T3 (es) 2008-01-15 2020-11-25 Univ Leland Stanford Junior Marcadores de células madre de leucemia mieloide aguda
PT3056514T (pt) 2008-01-15 2019-07-19 Univ Leland Stanford Junior Métodos para manipulação de fagocitose mediada por cd47
AU2014201010B2 (en) 2008-01-15 2016-03-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for manipulating phagocytosis mediated by CD47
HUE034465T2 (en) 2008-02-11 2018-02-28 Cure Tech Ltd Monoclonal antibodies for tumor treatment
KR101604515B1 (ko) 2008-03-14 2016-03-17 알러간, 인코포레이티드 면역-기반 보툴리눔 독소 세로타입 ａ 활성 검정
EP2111869A1 (en) 2008-04-23 2009-10-28 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Compositions and methods to enhance the immune system
WO2010017332A2 (en) 2008-08-07 2010-02-11 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Radioprotectants targeting thrombospondin-1 and cd47
US8758750B2 (en) 2009-09-15 2014-06-24 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Synergistic anti-CD47 therapy for hematologic cancers
WO2011083141A2 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Ablynx Nv Method for generation of immunoglobulin sequences by using lipoprotein particles
EP2526118A4 (en) 2010-01-21 2013-11-13 Immunogen Inc COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF EGG CANCER
PT2569013T (pt) * 2010-05-14 2017-02-08 Univ Leland Stanford Junior Anticorpos monoclonais humanizados e quiméricos para cd47
WO2012047427A2 (en) 2010-08-31 2012-04-12 The Regents Of The University Of California Antibodies for botulinum neurotoxins
US20140271683A1 (en) 2010-12-21 2014-09-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Therapeutic and Diagnostic Methods for Manipulating Phagocytosis Through Calreticulin and Low Density Lipoprotein-Related Receptor
DK2812443T3 (da) 2012-02-06 2019-08-26 Inhibrx Inc Cd47-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
US20140140989A1 (en) 2012-02-06 2014-05-22 Inhibrx Llc Non-Platelet Depleting and Non-Red Blood Cell Depleting CD47 Antibodies and Methods of Use Thereof
KR20150023811A (ko) 2012-06-21 2015-03-05 컴퓨젠 엘티디. 암의 치료를 위한 lsr 항체 및 그의 용도
CA2892585C (en) 2012-12-03 2022-07-05 Novimmune S.A. Anti-cd47 antibodies and methods of use thereof
US9221908B2 (en) 2012-12-12 2015-12-29 Vasculox, Inc. Therapeutic CD47 antibodies
JP6572131B2 (ja) 2012-12-12 2019-09-04 バスキュロックス インコーポレイテッド 治療用ｃｄ４７抗体
SG10201706383XA (en) 2013-02-06 2017-09-28 Inhibrx Lp Non-platelet depleting and non-red blood cell depleting cd47 antibodies and methods of use thereof
DK2970493T3 (da) 2013-03-15 2019-05-13 Univ Leland Stanford Junior Fremgangsmåder til opnåelse af terapeutisk effektive doser af anti-cd47-midler
CN103665165B (zh) 2013-08-28 2016-02-24 江苏匡亚生物医药科技有限公司 一种靶向人CD47-SIRPα信号通路的双特异性抗体及其制备方法和用途
MX2015014724A (es) 2013-12-31 2016-06-02 Dev Center Biotechnology Anticuerpos anti-factor de crecimiento endotelial vascular (vegf) y uso de los mismos.
UA126146C2 (uk) 2015-09-18 2022-08-25 Арч Онколоджі, Інк. Терапевтичне антитіло до cd47
US10946042B2 (en) 2015-12-01 2021-03-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for selective phagocytosis of human cancer cells
EP3529276A4 (en) 2016-10-21 2020-06-17 Arch Oncology, Inc. CD47 THERAPEUTIC ANTIBODIES
CN111148535A (zh) 2017-03-22 2020-05-12 安驰肿瘤公司 治疗实体癌和血液癌的组合疗法
US20190309066A1 (en) 2017-03-22 2019-10-10 Arch Oncology, Inc. Combination therapy for the treatment of solid and hematological cancers

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