KR20140132661A - Il-17a, il-17f 및/또는 il-17a/f를 겨냥하는 아미노산 서열 및 이를 포함하는 폴리펩타이드 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, (본원에서 정의되는) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열, 및 화합물 또는 구조체, 특히, 상기한 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, 단백질 및 폴리펩타이드 (또한, 본원에서는 각각 "본 발명의 아미노산 서열", "본 발명의 화합물" 및 "본 발명의 폴리펩타이드"로도 지칭됨)에 관한 것이다.

Description

IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17A/F를 겨냥하는 아미노산 서열 및 이를 포함하는 폴리펩타이드 {AMINO ACID SEQUENCES DIRECTED AGAINST IL-17A, IL-17F AND/OR IL17-A/F AND POLYPEPTIDES COMPRISING THE SAME}
본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 중 임의의 것을 겨냥하는 (본원에서 정의되는) 바와 같은 아미노산 서열, 화합물 또는 구조체, 특히 상기 하나 이상의 상기 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, 단백질 및 폴리펩타이드 (본원에서는 각각 "본 발명의 아미노산 서열", "본 발명의 화합물" 및 "본 발명의 폴리펩타이드"로도 지칭됨)에 관한 것이다.
본원에 상세히 기술된 바와 같이, 바람직하게는, 본 발명의 아미노산 서열은 면역글로불린 단일 가변 도메인 ("ISV")이다. 면역글로불린 단일 가변 도메인은,
- 면역글루불린 폴드(fold)를 포함하거나, 적정 조건 (예, 생리 조건)에서 (즉, 폴딩에 의해) 면역글로불린 폴드, 즉, 면역글로불린 가변 도메인 (예, VH, VL 또는 VHH 도메인)을 형성할 수 있으며;
- (기능적인 항원 결합 부위를 형성하는데 있어서, 다른 면역글로불린 가변 도메인과의 상호작용 (예, VH-VL 상호작용)을 필요로하지 않는다는 의미에서) 기능적인 항원 결합 활성을 포함하는 면역글로불린 가변 도메인을 형성하는 (또는 적정 조건 하에 형성할 수 있는), 아미노산 서열이다.
또한, ISV인 본 발명의 아미노산 서열은 본원에서 "본 발명의 ISV"로 지칭된다. 본 발명에 사용하기 적합한 면역글로불린 단일 가변 도메인에 대한 바람직한 일부 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이며, 예를 들어, VHH 및/또는 (다른) 나노바디(nanobody)(바람직함), 예로 인간화된 VHH 또는 카멜화된 인간 VH와 같은 카멜화된 VH, dAb 및 (단일) 도메인 항체를 포함한다.
또한, 본 발명은, 상기한 아미노산 서열 및 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 (본원에서 "본 발명의 핵산" 또는 "본 발명의 뉴클레오티드 서열"로도 지칭됨); 상기한 아미노산 서열 및 폴리펩타이드의 제조 방법; 상기한 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드를 발현하거나 발현할 수 있는 숙주 세포; 조성물, 구체적으로, 상기 아미노산 서열, 폴리펩타이드, 핵산 및/또는 숙주 세포를 포함하는 약학 조성물; 및 본원에 언급된 예방학적, 치료학적 또는 진단적 목적과 같이, 특히 예방학적, 치료학적 또는 진단적 목적을 위한, 상기 아미노산 서열, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포 및/또는 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 측면들, 구현예들, 이점 및 용도는 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다. 본원 명세서 전체에 걸쳐 몇가지 문헌들이 인용되어 있다. 본원에서 인용된 각각의 문헌들 (모든 특허, 특허 출원, 과학 간행물, 제조사의 설명서, 지침서 등)은, 그 전체 내용이 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 그러나, 이러한 문헌이 본 발명에 대한 종애 기술임을 용인하는 것으로 해석되어서는 안된다.
인터루킨-17A (IL-17A, 문헌에서 IL-17로도 지칭됨)는, IL-6, IL-8, G-CSF 및 MCP-1 등의 다른 염증성 사이토카인들과 케모카인들을 생산하도록 상피세포, 내피세포 및 섬유모세포를 자극하는, T-세포 유래의 전-염증성 분자이다 [Yao, Z. et al., J. Immunol., 122 (12): 5483-5486 (1995); Yao, Z. et al., Immunity, 3 (6) : 811-821 (1995); Fossiez, F., et al., J. Exp. Med., 183 (6): 2593-2603 (1996); Kennedy, J. , et al. , J. Interferon Cytokine Res. , 16 (8): 611-7 (1996); Cai, X. Y. , et al., Immunol. Lett, 62 (1) : 51-8 (1998); Jovanovic, D. V. , et al. , J. Immunol., 160 (7): 3513-21 (1998); Laan, M. , et al., J. Immunol.. 162 (4) : 2347-52 (1999); Linden, A. , et al. , Eur Respir J, 15 (5): 973-7 (2000); 및 Aggarwal, S. and Gurney, A. L., J Leukoc Biol, 71 (1) : 1-8 (2002)]. 또한, IL-17A는 TNF-α 및 IL-lβ 등의 다른 사이토카인들과 상승적으로 작용하여 케모카인 발현을 추가로 유도한다 (Chabaud, M. , et al., J. Immunol. 161 (1) : 409-14 (1998)). IL-17A는 다양한 유형의 세포들에서 다면적인 생물학적 활성을 발휘한다. IL-17A는, 또한, ICAM-1 표면 발현, T 세포 증식 및 CD34+ 인간 선조세포의 생장과 호중구로의 분화를 유도하는 능력을 가지고 있다. 또한, IL-17A는 골 대사와도 관련 있으며, 류마티스 관절염 및 골 임플란트의 느슨해짐과 같이, 활성화된 T 세포의 존재와 TNF-α 생산이 특징적인 병리학적 병태에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 제시되었다 (Van Bezooijen et al., J. Bone Miner. Res., 14: 1513-1521 [1999]). 류마티스 관절염 환자로부터 유래된 윤활 조직의 활성화된 T 세포가 정상인 또는 골관절염 환자로부터 유래된 조직 보다 IL-17A를 다량으로 분비하는 것으로 확인되었다 (Chabaud et al., Arthritis Rheum., 42: 963-970 [1999]). 이러한 전-염증성 사이토카인은 류마티스 관절염에서 활막 염증에 적극적으로 기여하는 것으로 제시되었다. 이러한 전-염증성 기능과는 별개로, IL-17A는 또 다른 기전을 통해 류마티스 관절염의 병인에 기여하는 것으로 보인다. 예를 들어, IL-17A는 골모세포에서 파골세포 분화 인자 (ODF) mRNA의 발현을 유도하는 것으로 확인된 바 있다 (Kotake et al., J. Clin. Invest., 103: 1345-1352 [1999]). ODF는 선조세포가 골 재흡수에 관여하는 세포인 파골세포로 분화하도록 자극한다. IL-17A의 수준은 류마티스 관절염 환자의 활액에서 현저하게 증가되기 때문에, IL-17A가 류마티스 관절염에서 골 재흡수에 중요한 역할을 수행하는 것으로 보인다. 또한, IL-17A는 다발성 경화증 (Matusevicius et al., Mult. Scler., 5: 101-104 (1999); Kurasawa, K. , et al., Arthritis Rheu 43 (li) : 2455-63 (2000)) 및 건선 (Teunissen, M. B. , et al. , J Invest Dermatol 1 11 (4): 645-9 (1998) ; Albanesi, C., et al., J Invest Dermatol 115 (1) : 81-7 (2000); 및 Homey, B., etal., J. Immunol. 164 (12 : 6621-32 (2000)) 등의 특정한 기타 자가면역 장애들에서 주된 역할을 하는 것으로 여겨진다.
IL-17A는, 세포내 신호 전달을 통해, 인간 대식세포에서 Ca2+ 유입과 [cAMP] 감소를 자극하는 것으로도 확인되었다 (Jovanovicetal., J. Immunol., 160: 3513 [1998]). IL-17A는 섬유모세포에서는 NF-KB의 활성화를 유도하고 [Yao et al., Immunity, 3: 811 (1995), Jovanovic et al., supra], 대식세포에서는 NF-κB와 미토겐-활성화된 단백질 키나제의 활성화를 유도한다 (Shalom-Barek et al., J. Biol. Chem., 273: 27467 [1998]). 아울러, IL-17A는 뼈와 연골 성장에 관여하는 포유류 사이토카인 유사 인자 7과 서열 유사성도 공유하고 있다.
인터루킨 17A는 현재 신생 사이토카인 패밀리에 속하는 프로토타입 멤버로서 인지되고 있다 (Gaffen, 2009 Nature Review Immunology 9:556-567). 인간과 다른 척추동물에 대한 대규모 게놈 서열분석을 통해, IL-17A와 관련된 단백질을 코딩하는 부가적인 유전자의 존재가 명확하게 밝혀졌으며, 이로써 새로운 사이토카인 패밀리가 규명되었다. 인간 및 마우스에서 IL-17 패밀리에 속하는 멤버 6종 이상, 예컨대 IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E 및 IL-17F와, 6종의 관련 수용체들 IL-17RA, IL-17RB, IL-17RC (IL-17 RL이라고도 함), IL-17RD 및 IL-17RF (Gaffen ibid.)이 존재한다. 이러한 IL-17 멤버에 속하는 한가지 (IL-17F로 지칭됨)는 인간 IL-17 수용체 (IL-17R)에 결합하는 것으로 입증되었다 (Yao et al., Cytokine, 9 (11): 794-800 (1997)). 초기 특정화에서, IL-17A와 마찬가지로, 신규 동정된 이들 분자들 중 몇개가 면역 기능을 조절할 수 있는 것으로 제시되었다. 이들 몇몇 인자들에서 강력한 염증 작용이 확인되었고, 주요 인간 질환과의 관련성이 규명되었는 바, 이들 단백질들이 염증 프로세스에 중요한 역할을 하는 것일 수 있으며, 치료학적 개입 기회를 제공할 수 있는 것으로 시사되었다.
인간 IL-17F를 코딩하는 유전자는 IL-17A 코딩 유전자에 인접하게 위치되어 있다 (Hymowitz, S. G., et al., Embo J, 20 (19): 5332-41 (2001)). IL-17A와 IL-17F는 약 50%의 아미노산 동일성을 공유하지만, IL-17 패밀리의 다른 멤버들은 훨씬 제한된 15 - 27%의 아미노산 동일성을 공유하므로, IL-17A와 IL-17F가 IL-17 패밀리에서 구분된 아군을 형성하는 것으로 제시되었다 (Starnes et al., J Immunol, 167 (8): 4137-40 (2001); Aggarwal and Gurney J. Leukoc Biol, 71 (1) : 1-8 (2002)). IL-17F는 IL-17A와 유사한 생물학적 기능을 하는 것으로 보이며, 매우 다양한 세포들에서 IL-6, IL-8 및 G-CSF의 생산을 촉진할 수 있다. 이것은, IL-17A와 마찬가지로, 연골 기질 분비를 유도하고, 새로운 연골 기질 합성을 유도할 수 있다 (US-2002-0177188-A1, 2002년 11월 28일 공개). 따라서, IL-17A와 마찬가지로, IL-17F는 염증 장애의 병인에 기여할 가능성이 있을 수 있다.
최근 들어, IL-17A와 IL-17F 둘다 인터루킨 23 (IL-23)에 의해 T 세포에서 유도되는 것으로 관찰되었다 (Aggarwal et al., J. Biol. Chem., 278 (3): 1910-4 (2003)). IL-17A와 IL-17F가 염색체 위치성이 비슷하고 상당한 서열 유사성을 공유한다는 사실과, IL-17A와 IL-17F가 특이적인 자극에 반응하여 동일한 세포 집단에 의해 유도되는 것으로 보인다는 연구 결과에 이어, IL-17A 및 IL-17F가 (2개의 이황화 결합을 통해) 공유 결합된 이형이량체 (이하, IL-17A/F)로 구성된 새로운 인간 사이토카인이 동정되었다 (WO05/010044, Wright et al., J. Biol. Chem., 282: 13447 (2007); Kawaguchi et al., J. Allergy Clin. Immunol., 114: 1265 (2004); 및 Kolls, JK et al., Immunity, 21: 467 (2004).
일반적으로, 본 발명의 아미노산 서열, 폴리펩타이드 및 조성물을 사용하여, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 어느 것이라도 IL-17RA 및/또는 IL-17RC 컴플렉스에 결합하는 것을 조절, 보다 구체적으로, 저해 및/또는 방지할 수 있으며, 따라서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이, IL-17RA 및/또는 IL-17RC 컴플렉스에 결합함으로써 매개되는 신호 전달을 조절하거나, 구체적으로, 저해 또는 방지하거나, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이, IL-17RA 및/또는 IL-17RC 컴플렉스와의 결합을 수반하는 생물학적 경로를 조절하거나, 및/또는 이들 신호 전달 또는 경로와 관련된 생물 기전, 반응 및 효과를 조절할 수 있다. IL-17 수용체 컴플렉스의 화학량론은 명확하게 결정되지 않았지만, IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F는 IL-17RA 및/또는 IL-17RC의 이량체 및/또는 삼량체를 통해 신호 전달하는 것으로 생각된다 (Gaffen ibid.).
이와 같이, 본 발명의 아미노산 서열, 폴리펩타이드 및 조성물은, 면역 관련 질환 및 장애 (본원에서는 '본 발명의 면역 관련 질환 및 장애'로 지칭됨)의 (본원에 정의된 바와 같이) 예방 및 치료용으로 사용될 수 있다. 일반적으로, "본 발명의 면역 관련 질환 및 장애"는, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 조성물 (특히 이의 약제학적으로 활성인 함량으로), 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 생물 경로 또는 기전을 겨냥하는 공지된 활성 유효 성분을 (특히 이의 약제학적으로 활성인 함량으로), 이를 필요로 하는 개체 (즉, 질환 또는 장애나 이의 한가지 이상의 증상을 가지고 있거나, 질환 또는 장애의 발병 또는 유발 위험성이 있는 개체)에게 적절히 투여함으로써, 각각 예방 및/또는 치료할 수 있는 질환 및 장애로 정의될 수 있다. 이러한 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애에 대한 예들은 본원의 기술 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이며, 예를 들어, 다음과 같은 질환 및 장애를 포함한다: 전신 홍반성 루프스, 류마티스 관절염, 골 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절증, 전신 경화증, 특발성 염증성 근증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 진성 당뇨병 (diabetes mellitus), 면역 매개성 신장 질환, 중추 신경계 및 말초 신경계의 탈수초성 질환, 예컨대 다발성 경화증, 특발성 탈수초 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군 및 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 간담도계 질환, 예컨대 감염증, 자가면역성 만성 활동형 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-민감성 장질환 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개성 피부 질환, 예컨대 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민증 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예컨대 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예컨대 이식 거부 반응 및 이식 편대 숙주 질환.
특히, 본 발명의 아미노산 서열, 폴리펩타이드 및 조성물은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 의해 매개되는 과도한 및/또는 원치않은 신호 전달 또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 경로(들)가 특징적인, 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애를 예방 및 치료하는데 사용할 수 있다. 본 발명의 상기한 면역 관련 질환 및 장애의 예는 본원에 기술된 내용을 토대로 당업자들에게 자명할 것이다.
이에, 이로 한정되지 않지만, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 상기 인용한 종래 기술 분야에서 언급된 바와 같은, 예컨대 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 의해 매개되는 신호 전달을 조절할 수 있는 유효 성분을 이용하여 현재 예방 또는 치료 중인 모든 질환 및 장애를 예방 및/또는 치료하는데 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리펩타이드는, 현재 치료를 위해 상기한 유효 성분이 개발 중이거나, 제안되었거나, 또는 향후 제안 또는 발굴될 모든 질환과 장애를 예방 및/또는 치료하는데 사용할 수 있을 것으로 보인다. 아울러, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같은 이들의 유익한 특성들로 인해, 본 발명의 폴리펩타이드는, 이들 공지된 유효 성분들이 사용 중이거나 또는 제안 또는 발굴될 질환 및 장애 이외의 다른 질환 및 장애를 예방 및 치료하는데에도 사용할 수 있거나; 및/또는 본 발명의 폴리펩타이드는 본원에 기술된 질환 및 장애를 치료하기 위한 새로운 방법 및 용법을 제공할 수 있을 것으로 예상된다.
본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드의 다른 활용과 용도는 본원에 상세히 기술된 내용을 통해 당업자에게 명확해지게 될 것이다.
일반적으로, 본 발명의 과제는, 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애를 진단, 예방 및/또는 치료하는데 사용할 수 있는 약리학적 활성 성분과 이를 포함하는 조성물; 및 상기한 성분과 조성물의 투여 및/또는 사용을 포함하는 상기한 질환 및 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
구체적으로, 본 발명의 과제는, 당해 기술 분야에서 현재 사용 중이나 및/또는 공지된 성분, 조성물 및/또는 방법에 비해, 특정한 이점을 가지는 상기한 약리학적 활성 성분, 조성물 및/또는 방법을 제공하는 것이다. 이러한 이점들은 하기 추가적인 내용들로부터 명확해질 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 과제는, 약리학적 활성 성분으로서 사용될 수 있는 치료 단백질 뿐만 아니라 이를 포함하는 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애 및/또는 본원에 언급된 다른 질환 및 장애에 대한 진단, 예방 및/또는 치료용 조성물; 및 상기한 치료 단백질 조성물의 투여 및/또는 사용을 포함하는 상기한 질환 및 장애의 진단, 예방 및/또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
이에, 본 발명의 구체적인 과제는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 (본원에 정의된 바와 같이) 겨냥하는, 구체적으로, 온혈 동물 유래 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 보다 구체적으로, 포유류 유래 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 특히 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열; 및 상기한 아미노산 서열 하나 이상으로 필수적으로 이루어지거나 이를 포함하는 단백질 및 폴리펩타이드를 제공하는 것이다.
특히, 본 발명의 구체적인 과제는 온혈 동물, 특히 포유류, 보다 구체적으로 인간을 대상으로 한 예방학적, 치료학적 및/또는 진단적인 용도에 적합한 상기한 아미노산 서열 및 상기한 단백질 및/또는 폴리펩타이드를 제공하는 것이다.
특히, 본 발명의 구체적인 과제는, 온혈 동물, 구체적으로 포유류, 보다 구체적으로 인간에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 관련있거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 의해 매개되는, 한가지 이상의 질환, 장애 또는 병태 (예, 본원에 언급된 질환, 장애 및 병태)를 예방, 치료, 완화 및/또는 진단하는데 사용할 수 있는, 상기한 아미노산 서열 및 상기한 단백질 및/또는 폴리펩타이드를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 구체적인 과제는, 온혈 동물, 구체적으로 포유류, 보다 구체적으로 인간에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 관련있거나, 및/또는 이에 의해 매개되는, 한가지 이상의 질환, 장애 또는 병태 (예, 본원에 언급된 질환, 장애 및 병태)를 예방 및/또는 치료하기 위한 약학 조성물 또는 수의학적 조성물의 제조에 사용할 수 있는, 상기한 아미노산 서열 및 상기한 단백질 및/또는 폴리펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명에서, 일반적으로, 이러한 과제들은 본원에 기술된 아미노산 서열, 단백질, 폴리펩타이드 및 조성물을 사용함으로써 달성된다. 언급된 바와 같이, 본 발명에서 사용되는 아미노산 서열은 바람직하게는 본원에 기술된 면역글로불린 단일 가변성 도메인 또는 "ISV"이며, 본 발명에 사용되는 단백질 및 폴리펩타이드는 바람직하게는 이러한 면역글로불린 단일 가변성 도메인들 중 하나 이상을 포함하는 단백질 및 폴리펩타이드이다.
일반적으로, 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 (본원에 정의된 바와 같이) 겨냥하거나 및/또는 (본원에 정의된 바와 같이) 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열 (바람직하게는, ISV); 뿐만 아니라 화합물 및 구조체, 구체적으로 하나 이상의 상기한 아미노산 서열을 포함하는 단백질 및 폴리펩타이드를 제공한다.
보다 구체적으로, 본 발명은, 본원에 정의된 바와 같은 친화성 (본원에 상세히 기술된 바와 같이, KD-값 (실제 값 또는 겉보기 값), KA-값 (실제 값 또는 겉보기 값), kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서 적절하게 측정 및/또는 표시됨)으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있는, 아미노산 서열 (바람직하게는, ISV); 뿐만 아니라 화합물 및 구조체, 특히 하나 이상의 상기한 아미노산 서열을 포함하는, 단백질 및 폴리펩타이드를 제공한다.
구체적으로, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 바람직하게는,
- 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 예로, 10-5 내지 10-15 mole/L, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 예로, 10-7 내지 10-15 mole/L, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 mole/L 또는 10-8 내지 10-15 mole/L (즉, 조합 상수 (KA) 105 내지 1012 L/mole 또는 그 이상, 예로, 105 내지 1015 L/mole, 바람직하게는 107 내지 1012 L/mole 또는 그 이상, 예로, 107 내지 1015 L/mole, 더 바람직하게는 108 내지 1012 L/mole 또는 108 내지 1015 L/mole)로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것이거나;
및/또는
- kon-속도 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것이거나;
및/또는
- koff 속도 1 s-1 (t1/2=0.69 s) 내지 10-6 s-1 (t1/2가 수일인 거의 비가역적인 복합체를 제공함), 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것이다.
바람직하게는, 본 발명의 1가 아미노산 서열 (또는 본원의 아미노산 서열 하나만 포함하는 폴리펩타이드)은, 바람직하게는 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 또는 1 nM 미만, 예로, 500 pM 미만의 친화성으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것일 것이다.
본 발명의 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합함에 있어, 일부 바람직한 IC50 값은 본원의 추가적인 설명과 예들로부터 명확해질 것이다.
본원에서, "특이적으로 결합할 수 있다" 및 "특이적으로 결합한다"는 동의적으로 사용되며, 각각 지칭하는 실체에 특이적으로 결합하는 능력을 지칭하는 것임에 유념한다.
IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하기 위해, 본 발명의 아미노산 서열은, 아미노산 서열내에, 본 발명의 아미노산 서열이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있게 하는, 아미노산 잔기들로 구성된 하나 이상의 가닥 (즉, 각 "가닥"은, 즉 아미노산 서열의 1차 또는 3차 구조에서, 서로 인접한 또는 서로 매우 근접한 2개 이상의 아미노산 잔기로 구성됨)이나 또는 하나 이상의 아미노산 잔기들을 일반적으로 포함하게 될 것이며, 따라서 아미노산 잔기들 또는 아미노산 잔기들로 구성된 가닥들은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하기 위한 "부위(site)" (또한, 본원에서는 "항원 결합부"로 지칭됨)를 형성하게 될 것이다.
본 발명에서 제공하는 아미노산 서열은, 바람직하게는, (본원에 정의된 바와 같이) 본질적으로 분리된 형태이거나, 또는 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하거나 필수적으로 구성될 수 있으며, 선택적으로 하나 이상의 다른 아미노산 서열을 더 포함할 수 있는 (모두 하나 이상의 적정 링커를 통해 선택적으로 연결됨), 본 발명의 (본원에 기술된 바와 같이) 단백질 또는 폴리펩타이드의 일부를 형성한다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열은 상기한 단백질 또는 폴리펩타이드에서 결합 유닛으로서 사용될 수 있으며, 이는 각각 본원에 기술된 바와 같은, 본 발명의 1가, 다가 또는 다중 특이성의 폴리펩타이드를 제공하기 위한, 결합 유닛 (즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 이외의 하나 이상의 다른 타겟에 대한 것임)으로서 사용될 수 있는, 하나 이상의 다른 아미노산 서열을 선택적으로 포함할 수 있다. 상기한 단백질 또는 폴리펩타이드는 또한 (본원에 정의된 바와 같이) 본질적으로 분리된 형태일 수 있다.
본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 이와 같이 기본적으로 임의의 다른 아미노산 서열 또는 체인 (그러나, 이는 하나 이상의 분자내 이황화 결합을 포함하거나 포함하지 않을 수 있음, 예로, 나노바디 - 본원에 기술된 바와 같이 - 는 CDR3 및 CDR1 또는 FR2 간에 이황화 결합을 때로는 포함할 수 있음)과 이황화 결합을 통해 연결되지 않은, 단일 아미노산 체인으로 구성된다. 그러나, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열이, 서로 및/또는 다른 아미노산 서열과 (예로, 이황화 결합을 통해) 연결되어, 본 발명에서 또한 사용가능할 수 있는 펩타이드 구조체 (예, Fab' 단편, F(ab')2 단편, ScFv 구조체, "디아바디(diabodies)" 및 기타 다중특이성 구조체)로 제공될 수 있다는 점도 유념하여야 한다. 예로, 이는 Holliger and Hudson, Nat Biotechnol. 2005 Sep;23(9):1126-36)의 리뷰를 참조한다.
일반적으로, 본 발명의 아미노산 서열 (또는 화합물, 구조체 또는 이를 포함하는 폴리펩타이드)을 개체에게 (예로, 본원에 기술된 치료학적 및/또는 진단적 목적으로) 투여하고자 하는 경우, 이는 상기 개체에서 천연적이지 않은 아미노산 서열이 바람직하거나; 또는 상기 개체에서 천연적인 경우, 이는 (본원에 정의된 바와 같이) 필수적으로 분리된 형태이다.
또한, 당해 기술 분야의 당업자라면, 약학적 용도를 위해, 본 발명의 아미노산 서열 (뿐만 아니라 화합물, 구조체 및 이를 포함하는 폴리펩타이드)이 바람직하게는 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며; 수의학적인 목적일 경우에는, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드가 바람직하게는 치료할 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나, 또는 치료할 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 적어도 교차 반응한다는 것은 자명할 것이다.
아울러, 본 발명의 아미노산 서열은, 선택적으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하기 위한 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟에 결합하기 위한 하나 이상의 다른 결합부를 포함할 수 있다.
본 명세서 및 청구항에서, 아래 용어들은 다음과 같이 정의된다:
A) 04G01-like 서열: "04G01-like 서열", "04G01-like ISV" 또는 "04G01-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 (본원에 기술된) ISV로 정의되며:
a) (i) 아미노산 서열 IHVMG, 또는 (ii) 아미노산 서열 IHVMG와 (본원에 정의된 바와 같이) 아미노산 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR1; 및/또는
b) (i) 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG; 또는 (ii) 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR2; 및/또는
c) (i) 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH; 또는 (ii) 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR3,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 04G01-like ISV가, 예를 들어 Alphascreen 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적절한 분석으로 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지도록 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예를 들어, 실시예 9에 기술된 바와 같은 HT-1080 세포성 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산을 차단하는 활성을 가지며, 이때 IC50은 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그보다 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만이거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산을 차단하는 활성을 가지며, 이때 IC50은 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 35 nM 미만이다.
바람직하게는, 상기 04G01-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 각각 a) 및 b)로 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 각각 a) 및 c)로 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 각각 b) 및 c)로 정의된다. 더 바람직하게는, 상기 04G01-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 모두 각각 a), b) 및 c)로 정의된다. 다시 말해, 상기 04G01-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 상기한 04G01-like 서열에서, CDR1은 아미노산 서열 IHVMG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2 및 CDR3는 각각 b) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 a) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1 및 CDR2는 각각 a) 또는 b)로 정의됨). 구체적으로, 04G01-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우, CDR1은 아미노산 서열 IHVMG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있고, CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR3는 상기 c)로 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 IHVMG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있고, CDR3는 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2는 상기 b)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있고, CDR3는 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1은 상기 a)로 정의됨). 다시 말해, 상기 04G01-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 측면에서, "04G01-like 서열", "04G01-like ISV" 또는 "04G01-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 ISV이다:
d) (i) 아미노산 서열 IHVMG, 또는 (ii) 아미노산 서열 IHVMG와 (본원에 정의된 바와 같이) 3, 2 또는 1개의 아미노산 서열 차이만 있는 아미노산 서열인, CDR1; 및/또는
e) (i) 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG, 또는 (ii) 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 서열 차이만 있는 아미노산 서열인, CDR2; 및/또는
f) (i) 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH 또는 (ii) 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 서열 차이만 있는 아미노산 서열인, CDR3로서,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 04G01-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 d) 및 e)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 d) 및 f)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 e) 및 f)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 이러한 04G01-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 d), e) 및 f)에 따라 정의된다. 다시 말해, 이러한 04G01-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 04G01-like 서열에서, CDR1은 아미노산 서열 IHVMG이거나(CDR2 및 CDR3는 각각 e) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG이거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 d) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH이다 (CDR1 및 CDR2는 각각 d) 및 e)에 따라 정의됨). 특히, 04G01-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 IHVMG이고, CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG이거나 (CDR3는 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 IHVMG이고, CDR3는 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH이거나 (CDR2는 e)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG이고, CDR3는 EIGYYSGGTYYSSEAH이다 (CDR1는 각각 d)에 따라 정의됨). 다시 말해, 상기한 04G01-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 04G01-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 IHVMG이고, CDR2는 아미노산 서열 LIFSGGSADYADSVKG이고, CDR3는 아미노산 서열 EIGYYSGGTYYSSEAH이다.
단락 A)에 기술된 모든 04G01-like 서열에서, 프래임워크 서열은 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다. 바람직하게는, 상기 프래임워크 서열은, 프래임워크 서열이 (예로, 계산에서 CDR은 제외되며, 해당 서열과 04G01의 서열의 전체 서열 동일성 수준을 측정함으로써 결정할 수 있는) 04G01의 프래임워크 서열과, 80% 이상, 예로, 85% 이상, 예로, 90% 이상, 예로 95% 이상의 서열 동일성을 가지게 하는 것이다. 다시 말해, 주어진 서열에 존재하는 CDR과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 04G01-like 서열은, 서열번호 635와의 서열 동일성이 70% 이상, 예로 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상 또는 95% 이상인 ISV이다. 예컨대, 이러한 측면에 따른 04G01-like 서열에서, CDR들은 전술한 특히 바람직한 측면에 따를 수 있으며, 특히 (그러나 비제한적으로) IHVMG (CDR1); LIFSGGSADYADSVKG (CDR2); and EIGYYSGGTYYSSEAH (CDR3)일 수 있다. 다시 말해, 바람직하게는, 이러한 04G01-like ISV에 존재하는 CDR들과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 04G01-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 04G01-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 임의의 04G01-like 서열은, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 인간화되거나 및/또는 서열 최적화될 수 있다.
B) 16A04-like 서열 : "16A04-like 서열", "16A04-like ISV" 또는 "16A04-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 (본원에 기술된) ISV로 정의되며:
a) (i) 아미노산 서열 SYVVG, 또는 (ii) 아미노산 서열 SYVVG와 (본원에 정의된 바와 같이) 2개 또는 (바람직하게는) 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이들로 필수적으로 구성된, CDR1; 및/또는
b) (i) 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD 또는 (ii) 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR2; 및/또는
c) (i) 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY 또는 (ii) 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR3로서,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 a) 및 b)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 a) 및 c)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 b) 및 c)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 a), b) 및 c)에 따라 정의된다. 다시 말해, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 상기한 16A04-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 SYVVG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2 및 CDR3는 각각 b) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 a) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1 및 CDR2는 각각 a) 또는 b)로 정의됨). 특히, 16A04-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 SYVVG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR3는 상기 c)로 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 SYVVG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR3는 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2는 상기 b)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR3는 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1은 상기 a)로 정의됨). 다시 말해, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 측면에서, "16A04-like 서열", "16A04-like ISV" 또는 "16A04-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 ISV이다:
d) (i) 아미노산 서열 SYVVG, 또는 (ii) 아미노산 서열 SYVVG와 (본원에 정의된 바와 같이) 2개 또는 (바람직하게는) 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR1; 및/또는
e) (i) 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD 또는 (ii) 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR2; 및/또는
f) (i) 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY 또는 (ii) 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR3로서,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 16A04-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 d) 및 e)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 d) 및 f)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 e) 및 f)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 d), e) 및 f)에 따라 정의된다. 다시 말해, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 16A04-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 SYVVG이거나 (CDR2 및 CDR3는 각각 e) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD이거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 d) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY이다 (CDR1 및 CDR2는 각각 d) 및 e)에 따라 정의됨). 특히, 16A04-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 SYVVG이고, CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD이거나 (CDR3는 각각 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 SYVVG이고, CDR3는 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY이거나 (CDR2는 각각 e)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD이고, CDR3는 DQEFGYLRFGRSEY이다 (CDR1는 각각 d)에 따라 정의됨). 다시 말해, 상기한 16A04-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 16A04-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 SYVVG이고, CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDSIYYAVSEKD이고, CDR3는 아미노산 서열 DQEFGYLRFGRSEY이다.
단락 B)에 기술된 모든 16A04-like 서열에서, 프래임워크 서열은 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다. 바람직하게는, 상기 프래임워크 서열은, 프래임워크 서열이 (예로, 계산에서 CDR은 제외되며, 해당 서열과 16A04의 서열의 전체 서열 동일성 수준을 측정함으로써 결정할 수 있는) 16A04의 프래임워크 서열과, 80% 이상, 예로, 85% 이상, 예로, 90% 이상, 예로 95% 이상의 서열 동일성을 가지게 하는 것이다. 다시 말해, 주어진 서열에 존재하는 CDR과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 16A04-like 서열은, 서열번호 648과의 서열 동일성이 70% 이상, 예로 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상 또는 95% 이상인 ISV이다. 예컨대, 이러한 측면에 따른 16A04-like 서열에서, CDR들은 전술한 특히 바람직한 측면에 따를 수 있으며, 특히 (그러나 비제한적으로) SYVVG (CDR1); AISGSGDSIYYAVSEKD (CDR2); 및 DQEFGYLRFGRSEY (CDR3)일 수 있다. 다시 말해, 바람직하게는, 이러한 16A04-like ISV에 존재하는 CDR들과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 16A04-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 300 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 180 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 16A04-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 65 nM 미만, 60 nM 미만 또는 55 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 50 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 임의의 16A04-like 서열은, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 인간화되거나 및/또는 서열 최적화될 수 있다.
C) 13B03-like 서열: "13B03-like 서열", "13B03-like ISV" 또는 "13B03-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 (본원에 기술된) ISV로 정의되며:
a) (i) 아미노산 서열 INWFG, 또는 (ii) 아미노산 서열 INWFG와 (본원에 정의된 바와 같이) 3, 2 또는 (바람직하게는) 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이들로 필수적으로 구성된, CDR1; 및/또는
b) (i) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG, 또는 (ii) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR2; 및/또는
c) (i) 아미노산 서열 DLSTVRY 또는 (ii) 아미노산 서열 DLSTVRY와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 DLSTVRY와 (본원에 정의된 바와 같이) 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR3로서,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 a) 및 b)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 a) 및 c)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 b) 및 c)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 a), b) 및 c)에 따라 정의된다. 다시 말해, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 상기한 13B03-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 INWFG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2 및 CDR3는 각각 b) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 a) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 DLSTVRY를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1 및 CDR2는 각각 a) 또는 b)로 정의됨). 특히, 13B03-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 INWFG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR3는 상기 c)로 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 INWFG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR3는 아미노산 서열 서열 DLSTVRY를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2는 상기 b)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR3는 아미노산 서열 서열 DLSTVRY를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1은 상기 a)로 정의됨). 다시 말해, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 측면에서, "13B03-like 서열", "13B03-like ISV" 또는 "13B03-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 ISV로서:
d) (i) 아미노산 서열 INWFG, 또는 (ii) 아미노산 서열 INWFG와 (본원에 정의된 바와 같이) 3, 2 또는 (바람직하게는) 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR1; 및/또는
e) (i) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG, 또는 (ii) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR2; 및/또는
f) (i) 아미노산 서열 DLSTVRY, 또는 (ii) 아미노산 서열 DLSTVRY와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 DLSTVRY와 (본원에 정의된 바와 같이) 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR3,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 13B03-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 d) 및 e)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 d) 및 f)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 e) 및 f)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 d), e) 및 f)에 따라 정의된다. 다시 말해, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 13B03-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 INWFG이거나 (CDR2 및 CDR3는 각각 e) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG이거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 d) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 DLSTVRY이다 (CDR1 및 CDR2는 각각 d) 및 e)에 따라 정의됨). 특히, 13B03-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 INWFG이고, CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG이거나 (CDR3는 각각 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 INWFG이고, CDR3는 아미노산 서열 DLSTVRY이거나 (CDR2는 각각 e)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG이고, CDR3는 DLSTVRY이다 (CDR1는 각각 d)에 따라 정의됨). 다시 말해, 상기한 13B03-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 13B03-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 INWFG이고, CDR2는 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG이고, CDR3는 아미노산 서열 DLSTVRY이다.
단락 C)에 기술된 모든 13B03-like 서열에서, 프래임워크 서열은 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다. 바람직하게는, 상기 프래임워크 서열은, 프래임워크 서열이 (예로, 계산에서 CDR은 제외되며, 해당 서열과 13B03의 서열의 전체 서열 동일성 수준을 측정함으로써 결정할 수 있는) 13B03의 프래임워크 서열과, 80% 이상, 예로, 85% 이상, 예로, 90% 이상, 예로 95% 이상의 서열 동일성을 가지게 하는 것이다. 다시 말해, 주어진 서열에 존재하는 CDR과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 13B03-like 서열은, 서열번호 662와의 서열 동일성이 70% 이상, 예로 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상 또는 95% 이상인 ISV이다. 예컨대, 이러한 측면에 따른 13B03-like 서열에서, CDR들은 전술한 특히 바람직한 측면에 따를 수 있으며, 특히 (그러나 비제한적으로) INWFG (CDR1); GIRWSDAYTEYANSVKG (CDR2); 및 DLSTVRY (CDR3)일 수 있다. 다시 말해, 바람직하게는, 이러한 13B03-like ISV에 존재하는 CDR들과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 13B03-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 300 nM 미만, 250 nM 미만 또는 심지어 그 미만, 예로, 200 nM 미만, 175 nM 미만, 160 nM 미만, 155 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 150 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13B03-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 30 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 임의의 13B03-like 서열은, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 인간화되거나 및/또는 서열 최적화될 수 있다.
이러한 상황에서, 본 발명의 한가지 추가적인 구현예는 또한 하기를 포함하는 폴리펩타이드를 고려한다:
(i) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG를 가지는 CDR2; 및/또는
(ii) 아미노산 서열 DLSTVRY를 가지는 CDR3로서,
상기 CDR2 및 CDR3 서열 (i) 및 (ii)는 전체적으로 최대 4개의 단일 아미노산 결손, 삽입 및/또는 치환을 가질 수 있으며;
상기 폴리펩타이드는 IL-17A 및/또는 IL-17F에 특이적으로 결합하며, 바람직하게는 상기 폴리펩타이드는 IL-17A에 Kd < 50 pM으로, IL-17F에 Kd < 5 nM로 특이적으로 결합한다.
바람직하게는, 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는 IL-17A의 아미노산 L74, Y85 및 N88로부터 선택되는 IL-17A의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 바람직하게는, 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는, IL-17A의 3개 이상의 에피토프, 예컨대 적어도 IL-17A (서열번호 839)의 아미노산 L74, Y85 및 N88에 특이적으로 결합한다.
또한, 하기로 정의되는 폴리펩타이드가 바람직하다:
(iii) 아미노산 서열 GIRWSDAYTEYANSVKG를 가지는 CDR2; 및/또는
(iv) 아미노산 서열 DLSTVRY를 가지는 CDR3를 포함하며,
상기 CDR2 및 CDR3 서열들 (i) 및 (ii)는 전체적으로 최대 4개의 단일 아미노산 결손, 삽입 및/또는 치환을 가질 수 있으며, 및
상기 폴리펩타이드는 IL-17A 및/또는 IL-17F에 특이적으로 (바람직하게는, 각각 Kd < 5 nM임) 결합하지만, IL-17B, IL-17C, IL-17D 및 IL-17E 중 임의의 것에는 결합하지 않는다. 바람직하게는, 상기 폴리펩타이드는 IL-17A (서열번호 839)의 적어도 아미노산 L74, Y85 및 N88에 특이적으로 결합한다. 물론, CDR2 및/또는 CDR3를 포함하는 전술한 폴리펩타이드들 모두 본원에 기술된 질병의 치료에 사용가능하며 유효하다.
D) 13E02-like 서열: "13E02-like 서열", "13E02-like ISV" 또는 "13E02-like 빌딩 블럭"은 하기를 포함하는 (본원에 기술된) ISV로 정의되며:
a) (i) 아미노산 서열 AMG, 또는 (ii) 아미노산 서열 AMG와 (본원에 정의된 바와 같이) 1개의 아미노산 차이를 가진 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이들로 필수적으로 구성된, CDR1; 및/또는
b) (i) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG, 또는 (ii) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR2; 및/또는
c) (i) 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN 또는 (ii) 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN과 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN과 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된, CDR3로서,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 a) 및 b)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 a) 및 c)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 b) 및 c)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 a), b) 및 c)에 따라 정의된다. 다시 말해, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 상기한 13E02-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 AMG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2 및 CDR3는 각각 b) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 a) 또는 c)로 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1 및 CDR2는 각각 a) 또는 b)로 정의됨). 특히, 13E02-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 AMG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR3는 상기 c)로 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 AMG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR3는 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있거나 (CDR2는 상기 b)로 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, CDR3는 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있다 (CDR1은 상기 a)로 정의됨). 다시 말해, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다
특히 바람직한 측면에서, "13E02-like 서열", "13E02-like ISV" 또는 "13E02-like 빌딩 블럭"은 하기로 정의되는 ISV이다:
d) (i) 아미노산 서열 AMG, 또는 (ii) 아미노산 서열 AMG와 (본원에 정의된 바와 같이) 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR1; 및/또는
e) (i) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG, 또는 (ii) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG와 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG와 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR2; 및/또는
f) (i) 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN 또는 (ii) 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN과 아미노산 동일성이 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상, 또는 95% 이상인 아미노산 서열; 또는 (iii) 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN과 (본원에 정의된 바와 같이) 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 아미노산 서열인, CDR3를 포함하며,
상기 ISV에 존재하는 프래임워크 서열은 본원에 추가적으로 기술된 바와 같으며, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
바람직하게는, 이러한 특히 바람직한 측면에 따른 13E02-like 서열에서, CDR1 및 CDR2는 d) 및 e)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR1 및 CDR3는 d) 및 f)에 따라 각각 정의되거나; 또는 CDR2 및 CDR3는 e) 및 f)에 따라 각각 정의된다. 더 바람직하게는, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는 각각 각각 d), e) 및 f)에 따라 정의된다. 다시 말해, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
예컨대, 특히 바람직한 측면에 따른 13E02-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 AMG (CDR2 및 CDR3는 각각 e) 및 f)에 따라 정의됨)이거나; 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG이거나 (CDR1 및 CDR3는 각각 d) 및 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR3는 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN이다 (CDR1 및 CDR2는 각각 d) 및 e)에 따라 정의됨). 특히, 13E02-like 서열이 이러한 측면에 따를 경우: CDR1은 아미노산 서열 AMG이고, CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG이거나 (CDR3는 각각 f)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR1은 아미노산 서열 AMG이고, CDR3는 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN이거나 (CDR2는 각각 e)에 따라 정의됨); 및/또는 CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG이고, CDR3는 RRGLYYVWDSNDYEN이다 (CDR1는 각각 d)에 따라 정의됨). 다시 말해, 상기한 13E02-like 서열에서, CDR1, CDR2 및 CDR3는, 바람직하게는, 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히 바람직한 13E02-like 서열에서: CDR1은 아미노산 서열 AMG이고, CDR2는 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG이고, 및 CDR3는 아미노산 서열 RRGLYYVWDSNDYEN이다.
단락 D)에 기술된 모든 13E02-like 서열에서, 프래임워크 서열은 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다. 바람직하게는, 상기 프래임워크 서열은, 프래임워크 서열이 (예로, 계산에서 CDR은 제외되며, 해당 서열과 13E02의 서열의 전체 서열 동일성 수준을 측정함으로써 결정할 수 있는) 13E02의 프래임워크 서열과, 80% 이상, 예로, 85% 이상, 예로, 90% 이상, 예로 95% 이상의 서열 동일성을 가지게 하는 것이다. 다시 말해, 주어진 서열에 존재하는 CDR과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 13E02-like 서열은, 서열번호 664와의 서열 동일성이 70% 이상, 예로 80% 이상, 예로 85% 이상, 예로 90% 이상 또는 95% 이상인 ISV이다. 예컨대, 이러한 측면에 따른 13E02-like 서열에 있어서, CDR들은 전술한 특히 바람직한 측면에 따를 수 있으며, 특히 (그러나 비제한적으로) AMG (CDR1); AISGSGDDTYYADSVKG (CDR2); 및 RRGLYYVWDSNDYEN (CDR3)일 수 있다. 다시 말해, 바람직하게는, 이러한 13E02-like ISV에 존재하는 CDR들과 프래임워크의 조합은, 바람직하게는, 제조되는 13E02-like ISV가, 예를 들어, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)에 의해서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석을 통해 측정할 수 있는, 차단 활성을 가지게 하는 것이다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 그 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 또는 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만, 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 13E02-like ISV는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 예로 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
일 특정 측면에서, 임의의 13E02-like 서열은, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 인간화되거나 및/또는 서열 최적화될 수 있다.
이러한 상황에서, 본 발명의 한가지 추가적인 구현예는 또한 하기로 정의되는 폴리펩타이드를 고려한다:
(i) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG 가지는 CDR2; 및/또는
(ii) 아미노산 서열 RRGLYYVWDANDYEN를 가지는 CDR3를 포함하며,
상기 CDR2 및 CDR3 서열 (i) 및 (ii)는 전체적으로 최대 4개의 단일 아미노산 결손, 삽입 및/또는 치환을 가질 수 있으며;
상기 폴리펩타이드는 IL-17A 및/또는 IL-17F에 특이적으로 결합하며, 바람직하게는 상기 폴리펩타이드는 IL-17A에 Kd < 50 pM으로, IL-17F에 Kd < 5 nM로 특이적으로 결합한다.
바람직하게는, 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는 IL-17A의 아미노산 L74, Y85 및 N88로부터 선택되는 IL-17A의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 바람직하게는, 이러한 구현예에 따른 폴리펩타이드는, IL-17A의 3개 이상의 에피토프, 예컨대 적어도 IL-17A (서열번호 839)의 아미노산 L74, Y85 및 N88에 특이적으로 결합한다.
또한, 하기로 정의되는 폴리펩타이드가 바람직하다:
(iii) 아미노산 서열 AISGSGDDTYYADSVKG를 가지는 CDR2; 및/또는
(iv) 아미노산 서열 RRGLYYVWDANDYEN을 가지는 CDR3를 포함하며,
상기 CDR2 및 CDR3 서열들 (i) 및 (ii)는 전체적으로 최대 4개의 단일 아미노산 결손, 삽입 및/또는 치환을 가질 수 있으며, 및
상기 폴리펩타이드는 IL-17A 및/또는 IL-17F에 특이적으로 (바람직하게는, 각각 Kd < 5 nM임) 결합하지만, IL-17B, IL-17C, IL-17D 및 IL-17E 중 임의의 것에는 결합하지 않는다. 바람직하게는, 상기 폴리펩타이드는 IL-17A (서열번호 839)의 적어도 아미노산 L74, Y85 및 N88에 특이적으로 결합한다.
물론, CDR2 및/또는 CDR3를 포함하는 전술한 폴리펩타이드들 모두 본원에 기술된 질병의 치료에 사용가능하며 유효하다.
언급된 바와 같이, 본 발명의 폴리펩타이드는, 바람직하게는, IL-17A 및/또는 IL-17F의 3개 이상의 에피토프, 예컨대
(i) IL-17A (서열번호 839)의 적어도 아미노산 L74, Y85 및 N88;
(ii) IL-17A (서열번호 839)의 적어도 아미노산 H54, L74 및 Y85; 및/또는
(iii) IL-17A (서열번호 840)의 적어도 아미노산 R47, R73, I86 및 N89에 특이적으로 결합한다.
본원에 상세히 기술된 바와 같이, 임의의 설명, 작동 기전 또는 가설로 한정하고자 하는 것은 아니며, 본 발명에서, IL-17A, IL-17F 또는 IL-17A/F와, 수용체 IL-17RA 또는 IL-17RC 컴플렉스 중 하나 또는 둘다의 상호작용을 저해하는 능력을 토대로 (특히, 아래 실시예 5에 기술된 알파스크린 분석으로), 본 발명의 4가지 아미노산 서열 클래스를 동정하였다. 이들 본 발명의 4가지 아미노산 서열 클래스는 다음과 같다 (본원에서 다음과 같이 정의된다):
- "클래스 1 아미노산 서열": IL-17A와, 수용체 IL-17RA 또는 IL-17RC 컴플렉스의 (적어도 하나, 가장 바람직하게는 둘다와의) 상호작용은 저해할 수 있지만, 필연적으로 IL-17RA 또는 IL-17RC와 IL-17A/F의 상호작용은 저해할 수 없는, 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본원에 기술된 바와 같이, ISV). 클래스 1 아미노산 서열에 대한 일부 구체적이나 비제한적인 예들을 본원에서 추가적인 설명들에 제시한다 (예, 표 5-8 참조);
- "클래스 2 아미노산 서열": IL-17A 및 IL-17A/F의, 수용체 IL-17RA 또는 IL-17RC 수용체 컴플렉스와의 (적어도 하나, 가장 바람직하게는 둘다와의) 상호작용은 저해할 수 있는, 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본원에 기술된 바와 같이, ISV). 클래스 2 아미노산 서열에 대한 일부 구체적이나 비제한적인 예들을 본원에서 추가적인 설명들에 제시한다 (예, 표 5-8 참조). 본 발명의 클래스 2 아미노산 서열에 대한 일부 구체적이나 비제한적인 예는 (본원에 정의된 바와 같이) "04G01-like 서열"이며, 04G01의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체 (예, 표 23 및 24)가 특히 바람직함;
- "클래스 3 아미노산 서열": IL-17F의, 수용체 IL-17RA 또는 IL-17RC 수용체 컴플렉스와의 (적어도 하나, 가장 바람직하게는 둘다와의) 상호작용을 저해할 수 있는, 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본원에 기술된 바와 같이, ISV). 클래스 3 아미노산 서열은 IL-17A/F와, 수용체 IL-17RA 또는 IL-17RC 수용체 컴플렉스와의 (적어도 하나, 가장 바람직하게는 둘다와의) 상호작용도 저해할 수도 있다. 클래스 3 아미노산 서열에 대한 일부 구체적이나 비제한적인 예들을 본원에서 추가적인 설명들에 제시한다 (예, 표 5-8 참조). 클래스 3 아미노산 서열에 대한 일부 구체적이나 비제한적인 예는 (본원에 정의된 바와 같이) "16A04-like 서열"이며, 16A04의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체 (예, IL17MS3063, 표 30 참조)가 특히 바람직하다. 일부 구체적이나 비제한적인 예에 있어서, 클래스 3 아미노산 서열은, 이들의 조합을 비롯하여 hIL-17F의 R47, R73, I86 및/또는 N89를 겨냥하거나 및/또는 이에 결합한다 (예, 표 11);
- "클래스 4 아미노산 서열" (본원에서 "교차-반응성 아미노산 서열"로도 언급하며, "X"로도 표시됨): IL-17A/F를 비롯하여, IL-17A 및 IL-17F 둘다, 수용체 IL-17RA 또는 IL-17RC 수용체 컴플렉스와의 (적어도 하나, 가장 바람직하게는 둘다와의) 상호작용을 저해할 수 있는, 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본원에 기술된 바와 같이, ISV). 클래스 4 아미노산 서열에 대한 일부 구체적이나 비제한적인 예는 (본원에 정의된 바와 같이) "13B03-like 서열" 및 "13E02-like 서열"이며, 13B03 (예, IL17MS3068, 표 26 참조) 및 13E02 (예, IL17MS3069 및 IL17MS3070, 표 28 참조)의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체가 각각 특히 바람직하다. 일부 구체적이나 비제한적인 예에 있어서, 클래스 4 아미노산 서열은, hIL-17A의 L74, Y85 및/또는 N88을 겨냥하거나 및/또는 이에 결합한다 (예, 표 11).
표 A-0: 나노바디 클래스들의 항-IL-17 차단 특이성에 대한 개괄
나노바디 클래스 실시예 차단 활성 1)
IL-17A IL-17F IL-17A/F
클래스 1 O 반드시 X X
클래스 2 04G01 O X O
클래스 3 16A04 X O 부분적으로 O
클래스 4 13E02, 13B03 O O O
1) 전술한 바와 같은, 인간 섬유육종 HT-1080에서 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 의해 측정한, 차단 활성
본 발명의 아미노산 서열들의 클래스들 각각 (특히, 이들 클래스 각각에 속하는 ISV)은 본 발명의 다른 측면을 형성한다. 일반적으로, 본 발명은 이로 한정되지 않으나, 클래스 2 아미노산 서열(의 빌딩 블럭으로서 사용)이 클래스 1 아미노산 서열 보다 더 바람직하며, 클래스 3 및/또는 클래스 4 아미노산 서열 (의 빌딩 블럭으로서의 사용)이 클래스 2 아미노산 서열 보다 더 바람직하다.
이들 클래스 각각에 속하는 본 발명의 ISV에 대한 바람직하나 비제한적인 예를 본원의 실시예에 제시한다.
또한, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 본 발명의 한가지 장점은, 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV)을 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 및 폴리펩타이드를 제공하기 위한 빌딩 블럭으로서 사용할 수 있다는 것이다. 이런 방식으로, 예컨대, 비제한적인 예로, 본 발명은 또한 여러가지 클래스에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV)을, 본 발명의 단일 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드로 조합할 수 있다. 특히, 클래스 3 ISV와 클래스 4 ISV를 본 발명의 단일 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드로 조합하는 것이 고유한 결합 특성을 가지는 것으로 확인되었다 (비교. 실시예 29).
본원에 상세히 기술된 바와 같이, 이러한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 예컨대, 비제한적으로, 하기를 포함하거나, 하기로 필수적으로 구성될 수 있다:
- 본 발명의 아미노산 서열 (특히 본 발명의 ISV) 및 (본원에 상세히 기술된 바와 같이) 직접 또는 바람직하게는 하나 이상의 적정 링커를 통해 서로 연결된, 하나 이상 (예, 1 또는 2종)의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (본원에 상세히 기술된 바와 같이, 예컨대 본 발명의 아미노산 서열의 반감기를 연장시키는, 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛);
- 본 발명의 2 이상 (예, 2 또는 3종의)의 아미노산 서열 (동일하거나 상이할 수 있음), 구체적으로, 본 발명의 2종 이상의 (예, 2 또는 3종의) ISV (이는 동일하거나 상이할 수 있음), 및 선택적으로, (본원에 상세히 기술된 바와 같이) 직접 또는 바람직하게는 하나 이상의 적정 링커를 통해 서로 연결된, 하나 이상 (예, 1 또는 2종)의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (본원에 상세히 기술된 바와 같이, 예컨대, 본 발명의 아미노산 서열(들)의 반감기를 연장시키는, 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛).
또한, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드가 하나 이상 (예, 1 또는 2종의) 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 포함하는 경우, 이들은, 바람직하게는, (비제한적으로) (i) 하나 이상의 다른 면역글로불린 단일 가변성 도메인 (예컨대, 본 발명의 다중 특이성인 단백질 또는 폴리펩타이드를 제공하기 위해, IL-17A, IL-17F 또는 IL-17A/F 이외의 다른 타겟에 관한 것임), 및/또는 (ii) 예로, (인간) 혈청 알부민 등의 혈청 단백질과 관련된 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (예컨대, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같이, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드)일 수 있는, 본 발명의 아미노산 서열(들)의 반감기를 연장시키는, 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이다.
따라서, 예로, 비제한적으로, 상기한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는 하기를 포함하거나 이들로 필수적으로 구성될 수 있다:
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 1에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 2에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 1에 속하는 본 발명의 2종의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 2종의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 2에 속하는 본 발명의 2종의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 2종의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 2종의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 2종의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 2종의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 2종의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 1에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 2에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 1에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 1에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 2에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 2에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드).
전술한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 각각은 본 발명의 다른 측면을 구성한다.
본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 중 한가지 (예, 앞의 단락들 중 한가지 단락에 따른 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 중 하나)가 클래스 2 서열을 포함하는 경우, 이는 바람직하게는 (본원에 정의된 바와 같이) 04G01-like 서열이며, 더 바람직하게는, 04G01의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체이다. 이에, 본 발명의 다른 측면은, (본원에 정의된 바와 같이) 04G01-like 서열이고, 더 바람직하게는 04G01의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체인, 클래스 2 아미노산 서열을 포함하는, 본원 기술된 (특히 앞의 단락들에서 기술된) 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드이다.
본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 중 한가지 (예, 앞의 단락들 중 한가지 단락에 따른 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 중 하나)가 클래스 3 서열을 포함하는 경우, 이는 바람직하게는 (본원에 정의된 바와 같이) 16A04-like 서열이며, 더 바람직하게는, 16A04의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체이다. 이에, 본 발명의 다른 측면은, (본원에 정의된 바와 같이) 16A04-like 서열이고, 더 바람직하게는 16A04의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체인, 클래스 3 아미노산 서열을 포함하는, 본원 기술된 (특히 앞의 단락들에서 기술된) 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드이다.
본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 중 한가지 (예, 앞의 단락들 중 한가지 단락에 따른 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드 중 하나)가 클래스 3 서열을 포함하는 경우, 이는 바람직하게는 (본원에 정의된 바와 같이) 13B03-like 서열이며, 더 바람직하게는, 13B03의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체이거나, 또는 (본원에 정의된 바와 같이) 13E02-like 서열이며, 더 바람직하게는, 13E02의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체이다. 이에, 본 발명의 다른 측면은, (본원에 정의된 바와 같이) 13B03-like 서열, 더 바람직하게는, 13B03의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체, 및/또는 (본원에 정의된 바와 같이) 13E02-like 서열, 더 바람직하게는, 13E02의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체인, 클래스 4 아미노산 서열을 포함하는, 본원 기술된 (특히 앞의 단락들에서 기술된) 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드이다.
이들 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 바람직하나 비제한적인 몇가지 예들을 아래 예들에서 기술한다. 본원의 내용을 토대로, 당업자라면, 예를 들어, 본 발명의 하나 이상의 적정 아미노산 서열 (예, 아래 실시예들에 기술된 서열)을, 상기 아미노산 서열 (예, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, ISV 또는 (인간) 혈청 알부민을 겨냥하는 소형 펩타이드)의 반감기를 연장하는, 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛과 조합함으로써, 그러한 다른 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드를 제공할 수 있을 것이다.
특히 바람직하게는, 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는 하기를 포함하거나, 또는 하기로 필수적으로 구성될 수 있다:
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드). 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 상기한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 클래스 4 서열로서, "13B03-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13B03의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체) 또는 "13E02-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13E02의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), 그리고 클래스 3 서열로서, "16A04-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 16A04의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체)을 포함한다. 이들 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 일부 특히 바람직한 비제한적인 예로는 IL17MS3084, IL17MS3085, IL17MS3086 및 IL17MS3087이 있다 (참조: 실시예 26 및 표 33). 상기한/유사한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 다른 예들은 본원의 내용을 토대로 당업자라면 자명할 것이다.
- (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 2종의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 2종의 ISV), 및 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 상기 아미노산 서열의 반감기를 연장하는 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛 (바람직하게는, 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 ISV, 또는 혈청 단백질, 특히 혈청 알부민에 대한 펩타이드). 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 그러한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 서로 동일하거나 상이할 수 있는, 2종의 "13B03-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13B03에 대한 2종의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), 또는 서로 동일하거나 상이할 수 있는, 2종의 "13E02-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13E02의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체)을 포함하며, 2종의 "13B03-like 서열"을 포함하거나 이로 필수적으로 구성된 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드가 특히 바람직하다. 이러한 본 발명의 폴리펩타이드에 대한 특히 바람직한 비제한적인 예는 IL17MS3079이다 (참조: 실시예 26 및 표 33). 상기한/유사한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 다른 예들은 본원의 내용을 토대로 당업자라면 자명할 것이다.
본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 특히 바람직한 비제한적인 일부 예는 하기를 포함하거나 하기로 필수적으로 구성될 수 있다:
- 동일하거나 또는 상이할 수 있는 (바람직하게는 동일한), 2종의 "13B03-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13B03에 대한 2종의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), 및 (본원에 기술된 바와 같이) 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 하나의 ISV 또는 인간 혈청 알부민에 대한 펩타이드;
- "13B03-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13B03의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), "16A04-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 16A04의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), 및 (본원에 기술된 바와 같이) 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 하나의 ISV 또는 인간 혈청 알부민에 대한 펩타이드;
- "13E02-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 13E02의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), "16A04-like 서열" (본원에 정의된 바와 같음, 더 바람직하게는 16A04의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 변이체), 및 (본원에 기술된 바와 같이) 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 하나의 ISV 또는 인간 혈청 알부민에 대한 펩타이드.
다시 말해, 이러한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 구체적이나 비제한적인 일부 예들은 본원에 제시되거나 (참조: 예컨대 표 34) 또는 본원의 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이다.
바람직하게는, 상기 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 예컨대 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)을 이용하여, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석으로 측정할 수 있는, 차단 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 9에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다.
특히, (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 1에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV)을 포함하는 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 있어서, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그보다 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 18 nM 미만, 16 nM 미만, 15 nM 미만, 14 nM 미만, 13 nM 미만, 12 nM 미만 또는 11 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 10 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히, (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 2에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV)을 포함하는 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 있어서, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그보다 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히, (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 3에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV)을 포함하는 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이에 있어서, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그보다 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 250 nM 미만, 더 바람직하게는, 200 nM 미만, 150 nM 또는 그 미만, 예컨대, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만 또는 40 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 35 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
특히, (본원에 정의된 바와 같이) 클래스 4에 속하는 본 발명의 아미노산 서열 (특히, 본 발명의 ISV)을 포함하는 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 있어서, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 0.3 ㎍/ml의 IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그보다 미만, 예컨대, 20 nM 미만, 15 nM 미만, 10 nM 미만, 9 nM 미만, 8 nM 미만, 7 nM 미만 또는 6 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 4.5 ㎍/ml의 IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 350 nM 미만, 더 바람직하게는, 250 nM 미만, 200 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 175 nM 미만, 150 nM 미만, 140 nM 미만 또는 125 nM 미만, 보다 더 바람직하게는 110 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가지거나, 및/또는 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, 1.5 ㎍/ml의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, IC50 200 nM 미만, 더 바람직하게는, 150 nM 미만, 125 nM 또는 심지어 그 미만, 100 nM 미만, 80 nM 미만, 75 nM 미만, 70 nM 미만, 60 nM 미만, 50 nM 미만, 40 nM 미만 또는 30 nM 미만, 보다 더 바람직하게는, 25 nM 미만으로, 차단하는 활성을 가진다.
당해 기술 분야의 당업자라면, 2 이상 (빌딩 블럭)의 클래스 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드의 차단 활성을 전술한 임의의 분석에 따라 측정할 수 있으며, 이때 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드가, 바람직하게는, 이를 구성하는 각 구성 성분들의 차단 활성과 유사한 차단 활성, 즉 상기 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 포함된 클래스 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열들 (빌딩 블럭) 각각의 차단 활성과 비슷한 차단 활성을 가짐을, 숙지할 것이다. 상기한 바람직한 본 발명의 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드에 대한 구체적이나 비제한적인 일부 예로는 다음과 같다:
- 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드.
- 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과 (본원에 정의된 바와 같이) 85% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드.
- 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과 (본원에 정의된 바와 같이) 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드.
- 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열과 (본원에 정의된 바와 같이) 95% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드.
- 동일하거나 상이할 수 있는 2종의 13B03-like 서열로 구성되며, 각각의 13B03-like 서열이 독립적으로 IL17MS3067 또는 IL17MS3068로부터 선택되며, 인간 혈청 알부민에 대한 하나의 ISV 또는 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 펩타이드 (예, Alb-8/Alb-11)를 추가로 포함하며; 모두 선택적으로 (본원에 기술된 바와 같이) 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 이러한 폴리펩타이드에 대한 구체적이나 비제한적인 예는 IL17MS3079이다.
- 선택적으로, (본원에 기술된 바와 같이) 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 독립적으로 IL17MS3067 또는 IL17MS3068로부터 선택되는 13B03-like 서열, 독립적으로 IL17MS3063 (또는 E1D 치환되지 않은 IL17MS3063)으로부터 선택되는 16A04-like 서열, 및 인간 혈청 알부민에 대한 하나의 ISV 또는 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 펩타이드 (예, Alb-8/Alb-11)로 구성된, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 이러한 폴리펩타이드에 대한 구체적이나 비제한적인 예들은 IL17MS3084와 IL17MS3085이다.
- (본원에 기술된 바와 같이) 선택적으로, 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결된, 독립적으로 IL17MS3069 또는 IL17MS3070으로부터 선택된 13E02-like 서열, 독립적으로 IL17MS3063 (E1D 치환되지 않은 IL17MS3063)로부터 선택된 16A04-like 서열, 및 인간 혈청 알부민에 대한 하나의 ISV 또는 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 펩타이드 (예, Alb-8/Alb-11)로 구성된, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 이러한 폴리펩타이드에 대한 구체적이나 비제한적인 예들은 IL17MS3086, IL17MS3087 및 IL17MS3091이다.
- IL17MS3079와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는, 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 바람직하게는, IL17MS3079와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는, 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 예컨대 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)을 이용하여, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석으로 측정할 수 있는, 차단 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 26에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, IL17MS3079와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는, 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 1nM IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 심지어 1 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 IL17MS3079와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는, 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 15nM IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 100 nM 미만, 더 바람직하게는, 75 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 40 nM 미만, 또는 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 10 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 IL17MS3079와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 5 nM IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM 미만, 또는 3 nM, 또는 심지어 2 nM 미만의 차단 활성을 가진다.
- IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 바람직하게는, IL17MS3084와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체는, 예컨대, 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)을 이용하여, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석으로 측정할 수 있는, 차단 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 26에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 1nM IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 심지어 1 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 15nM IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 100 nM 미만, 더 바람직하게는, 75 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 40 nM 미만, 또는 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 10 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 5 nM IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM 미만, 또는 3 nM, 또는 심지어 2 nM 미만의 차단 활성을 가진다.
- IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 바람직하게는, IL17MS3085와 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 예컨대 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)을 이용하여, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석으로 측정할 수 있는, 차단 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 26에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 1nM IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 심지어 1 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 15nM IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 100 nM 미만, 더 바람직하게는, 75 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 40 nM 미만, 또는 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 10 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 5 nM IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM 미만, 또는 3 nM, 또는 심지어 2 nM 미만의 차단 활성을 가진다.
- IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 바람직하게는, IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 예컨대 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음), 속도 배제 분석 "KinExA" 기법 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)을 이용하여, 당해 기술 분야의 당업자에게 공지된 임의의 적절한 분석으로 측정할 수 있는 차단 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 26에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 1nM IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 심지어 1 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 15nM IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 100 nM 미만, 더 바람직하게는, 75 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 40 nM 미만, 또는 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 10 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3086과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 5 nM IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM, 또는 심지어 3 nM 미만의 차단 활성을 가진다.
또한, 바람직하게는, 결합 활성을 KinExA 기법을 이용한 분석으로 결정한다. 바람직하게는, IL17MS3086 (즉, IL17MS3091의 테그가 없는 것)과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, hIL-17A와의 용액내 평형 해리 상수 (Kd)가 50 pM 미만, 더 바람직하게는, 40 pM 미만, 30 pM 또는 심지어 그 미만, 예를 들어, 20 pM 미만, 또는 15 pM, 10 pM, 9 pM, 8 pM, 7 pM 또는 6 pM, 보다 더 바람직하게는, 5 pM 미만, 예로, 4 pM, 3 pM, 2 pM 또는 심지어 1 pM 미만, 예로, 0.5 pM 미만이거나, 및/또는 IL17MS3086 (즉, IL17MS3091의 테그가 없는 것)과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, hIL-17F와의 용액내 평형 해리 상수 (Kd)가, 100 pM 미만, 더 바람직하게는, 80 pM 미만, 60 pM 또는 심지어 그 미만, 예를 들어, 50 pM 미만, 40 pM, 30 pM, 20 pM 또는 15 pM, 10 pM, 9 pM, 8 pM, 7 pM 또는 6 pM, 보다 더 바람직하게는 5 pM 미만, 예로, 4 pM, 또는 3 pM 또는 심지어 2 pM 미만, 예로, 1.5 pM 미만이다.
- IL17MS3087과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드. 바람직하게는, IL17MS3087과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 예컨대 알파스크린 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음) 또는 세포성 분석 (예, 본원에 기술된 바와 같음)을 이용하여, 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지된 임의의 적정 분석으로 측정할 수 있는, 차단 활성을 가진다. 바람직하게는, 상기 차단 활성은, 예컨대, 실시예 26에 기술된 바와 같이, HT-1080 세포 분석으로 측정한다. 바람직하게는, IL17MS3087과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 상기 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 1nM IL-17A-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 심지어 1 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 IL17MS3087과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 15nM IL-17F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 100 nM 미만, 더 바람직하게는, 75 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 40 nM 미만, 또는 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 또는 보다 더 바람직하게는 10 nM 미만의 차단 활성을 가지거나, 및/또는 상기 IL17MS3087과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 예로, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 가진, 화합물, 구조체, 단백질 또는 폴리펩타이드는 5 nM IL-17A/F-유도성 IL-6 생산에 대해, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서, IC50 150 nM 미만, 더 바람직하게는, 100 nM 미만, 50 nM 또는 심지어 그 미만, 예로, 20 nM 미만 또는 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM 또는 6 nM, 보다 더 바람직하게는, 5 nM 미만, 예로, 4 nM 미만, 또는 3 nM, 또는 심지어 2 nM 미만의 차단 활성을 가진다.
본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드의 효능, 및 이를 포함하는 조성물의 효능은, 관련된 구체적인 질환 또는 장애에 따라, 임의의 적합한 시험관내 분석, 세포 분석, 생체내 분석 및/또는 자체 공지된 동물 모델, 또는 이들의 조합을 이용하여, 검사할 수 있다. 적합한 분석과 동물 모델들은 당업자들에게 자명할 것이며, 예를 들어, AlphaScreen, KinExA 및 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서의 IL-17A; -F; -A/F-유도성 IL-6 생산 저해 (실험 파트 참조) 뿐만 아니라 하기 실험 파트와 본원에 인용된 종래 기술 분야에서 사용되는 분석 및 동물 모델을 포함한다.
또한, 본 발명에 있어서, 제1 온혈 동물 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 한가지 이상의 다른 온혈 동물 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 교차-반응성을 나타내거나, 또는 나타내지 않을 수 있다. 예를 들어, 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 하나 이상의 다른 종의 영장류 (예로, 비제한적으로, 마카카 속의 원숭이 (예로, 구체적으로, 시노몰구스 원숭이 (마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)) 및/또는 레수스 원숭이 (마카카 물라타(Macaca mulatta)) 및 바분 (피피오 우르시누스(Papio ursinus))으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해, 및/또는 동물 질환 모델 (예로, 마우스, 랫, 토끼, 돼지 또는 개), 구체적으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 관련된 질환 또는 장애에 대한 동물 모델 (예로, 본원에서 언급되는 종들 및 동물 모델들)로 종종 사용되는 한가지 이상의 동물 종으로부터 유래된, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해, 교차 반응성을 나타내거나 나타내지 않을 수 있다. 이런 측면에서, 당업자에게는, 이러한 교차-반응성이, 존재하는 경우, 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열 및 폴리펩타이드를 이러한 질환 모델에서 테스트할 수 있으므로, 약물 개발 측면에서 장점이 될 수 있음이 자명할 것이다.
보다 일반적으로, 복수의 포유류 종 유래의, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 교차 반응성을 가지는 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 동일한 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 복수의 종들에서 사용가능해질 것이므로, 수의학적 용도로 사용하는데 통상적으로 유용할 것이다. 따라서, 한가지 동물 종으로부터 유래된, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열 및 폴리펩타이드 (예, 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열 및 폴리펩타이드)는, 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드의 사용이 처리 종들에서 바람직한 효과를 제공하는 한, 다른 동물 종의 치료에 사용될 수 있음을 포괄한다.
본 발명은, 광의적으로, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드가 겨냥하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의, 특이적인 항원 결정부, 에피토프, 파트(part), 도메인, 서브유닛 또는 컨퍼메이션(confirmation) (적용가능한 경우)으로 구체적으로 한정 또는 규정되지 않는다. 예를 들어, 상기 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 (본원에 정의된 바와 같이) "상호작용부"를 겨냥하거나, 겨냥하지 않을 수 있다. 그러나, 일반적으로 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 바람직하게는 (본원에 정의된 바와 같이) 상호작용부를 겨냥하며, 특히, 단일 또는 2-특이적인 결합 유닛 (실험 파트 (예, 표1)에서 본 발명의 다른 클래스의 불특정 결합 분자도 참조함)에 의해 생물학적 반응의 차단을 허용하는, 임의의 IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17A/F에 존재하는 에피토프 또는 유사 에피토프들을 겨냥한다. 따라서, 바람직하나 비제한적인 일 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F로의 결합 및/또는 이에 대한 생물학적 반응의 차단을 허용하는, 에피토프를 겨냥하며, 본원에서 추가적으로 정의된다. 바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 (바람직하게는, ISV)이 hIL-17A (서열번호 839)의 아미노산(들) L74, Y85 및/또는 N88을 겨냥하거나 이에 결합하거나, 및/또는 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 (바람직하게는, ISV)이 hIL-17F (서열번호 840)의 아미노산(들) R47, R73, I86, N89 및/또는 이의 조합을 겨냥하거나 또는 이에 결합하는, 본 발명의 (바람직하게는, ISV의) 2종 이상의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
이에, 본 발명은, 아미노산 서열이 인간 IL-17A 및 IL-17A/F (클래스 2)를 겨냥하거나 이에 결합할 수 있으며, 아미노산 서열이 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해 유의하게 감소된 친화성으로 L74A, Y85A 및/또는 H54A IL-17A 돌연변이에 결합하는, 본 발명에 따른 이러한 아미노산 서열에 관한 것이다.
즉, 본 발명은, 아미노산 서열이 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F (클래스 4)를 겨냥하거나 이에 결합할 수 있으며, 아미노산 서열이 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해 유의하게 감소된 친화성으로 L74A, Y85A 및/또는 N88A IL-17A 돌연변이에 결합하는, 본 발명에 따른 이러한 아미노산 서열에 관한 것이다.
이에, 본 발명은, 아미노산 서열이 인간 IL17F를 겨냥하거나 이에 결합할 수 있으며, 아미노산 서열이 야생형 IL-17F 서열에 대한 결합성에 비해 유의하게 감소된 친화성으로 R47A, R73A, I86A 또는 N89A IL-17F 돌연변이에 결합하는, 본 발명에 따른 이러한 아미노산 서열에 관한 것이다.
이와 관련하여, 본원에서 사용되는 "유의하게 감소된 친화성"은 기준 친화성 보다 친화성이 낮다는 것을 의미한다. 바람직하게는, "유의하게 감소된 친화성"은, 친화성은 나타낸 기준 친화성에 비해 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 40, 50배 또는 적어도 100배 낮다는 것을 의미한다.
본원에 상세히 기술된 바와 같이, 본 발명의 폴리펩타이드는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 본 발명의 2종 이상의 아미노산 서열 (바람직하게는, ISV)을 포함할 수 있다. 일반적으로, 이러한 폴리펩타이드는, 본 발명의 단일 아미노산 서열에 비해, (예, 실시예 22에 기술된 KinExA 기법으로 측정된 바에 따르면) 증가된 항원-항체 결합성(avidity)으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 것이다. 이러한 폴리펩타이드는, 예컨대, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 (적용가능한 경우) (상호작용부이거나 아닐 수 있는) 동일한 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인, 서브유닛 또는 컨퍼메이션을 겨냥하는, 본 발명의 2종의 아미노산 서열을 포함할 수 있거나; 또는 (상호작용부이거나 아닐 수 있는) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 (적용가능한 경우) 동일한 제1 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인, 서브유닛 또는 컨퍼메이션을 겨냥하는 본 발명의 하나 이상의 "제1" 아미노산 서열과, (상호작용부이거나 아닐 수 있는) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 (적용가능한 경우) 제2 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인, 서브유닛 또는 컨퍼메이션을 겨냥하는 본 발명의 하나 이상의 "제2" 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 상기한 "2중 파라토프(biparatopic)" 폴리펩타이드에서, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열은 (본원에 정의된 바와 같이) 상호작용부를 겨냥하지만, 본 발명은 광의의 의미에서 이로 한정되지 않는다.
또한, 타겟이 결합 쌍 (즉, 본원에 기술된 바와 같이, 수용체-리간드 결합 쌍)의 일부인 경우, 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 이들이 타겟과의 결합을 위해 동종 결합 파트너 (cognate binding partner) (예, 적용가능한 경우. 리간드, 수용체 또는 다른 결합 파트너)와 경쟁하게 하는 것이거나, 및/또는 타겟에 대한 결합 파트너의 결합을 (완전히 또는 부분적으로) 무력화하게 하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 범위내에서, 적용가능한 경우, 본 발명의 아미노산 서열은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의, 2 이상의 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인, 서브유닛 또는 컨퍼메이션에 결합할 수 있다. 이럴 경우, 본 발명의 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드가 결합하는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인 또는 서브유닛은, 기본적으로 동일하거나 (예, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합은 반복된 구조 모티프를 포함하거나 또는 다량체 형태인 경우), 또는 상이할 (이 경우, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 동일하거나 상이할 수 있는 친화성 및/또는 특이성으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 다른 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인, 서브유닛에 결합할 수 있음) 수 있다.
또한, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 일반적으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의, 모든 천연 또는 합성 유사체, 변이체, 돌연변이, 대립유전자, 파트 및 단편에 결합하거나; 또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 (예, 야생형의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합)에서, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드가 결합하는, 항원 결정기(들) 또는 에피토프(들)와 기본적으로 동일한, 하나 이상의 항원 결정부 또는 에피토프를 포함하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 유사체, 변이체, 돌연변이, 대립유전자, 파트 및 단편에 결합할 것으로 예상된다. 다시 말해, 상기한 경우에, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 본 발명의 아미노산 서열이 (야생형) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 친화성 및 특이성과 동일하거나 또는 상이한 (즉, 보다 높거나 낮은) 친화성 및/또는 특이성으로, 그러한 유사체, 변이체, 돌연변이, 대립유전자, 파트 및 단편에 결합할 수 있다. 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 일부 유사체, 변이체, 돌연변이, 대립유전자, 파트 및 단편에 결합하지만, 다른 것과는 결합하지 않는 것 역시 본 발명의 범위에 포함된다.
또한, 당업자들에게 자명한 바와 같이, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 2 이상의 아미노산 서열 (바람직하게는, ISV)을 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드는, 대응되는 단량체 아미노산 서열(들) 보다 높은 항원-항체 결합성으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있다. 비제한적인 예로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 여러가지 에피토프들을 겨냥하는 2 이상의 아미노산 서열을 포함하는, 단백질 또는 폴리펩타이드는, 다른 각각의 단량체들 보다 높은 항원-항체 결합성으로 결합할 수 있으며 (통상 결합할 것이며), IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥한 2 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 다량체에 높은 항원-항체 결합성을 결합할 수 있다 (통상 결합할 것이다).
일반적으로, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는, 당업자들에게 자명한 바와 같이, 생물학적 및/또는 치료학적 관점에서 가장 적절한 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 (단량체, 다량체 및/또는 조합 형태(associated form) 등의) 형태들에 적어도 결합할 것이다.
본원에서 고려되는 용도에 적합한 한, 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩타이드의 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자 및/또는 유도체를 이용하거나, 및/또는 상기 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자 및/또는 유도체들 중 하나 이상을 포함하거나 이들로 필수적으로 구성된 단백질 또는 폴리펩타이드를 이용하는 것도 본 발명의 범위에 포함된다. 이러한 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자 및/또는 유도체는, 통상적으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 결합을 위한 기능성 항원-결합부를 (적어도 부분적으로) 포함할 것이며; 보다 바람직하게는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 것이며, 보다 더 바람직하게는, 본원에 정의된 바와 같은, 친화성 (본원에서 추가적으로 기술되는 바와 같이, KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서 적절하게 측정 및/또는 표시됨)으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있을 것이다. 이러한 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자, 유도체, 단백질 및/또는 폴리펩타이드는 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다. 또한, 본 발명의 추가적인 단편 또는 폴리펩타이드도, 본원에 기술된 하나 이상의 (소형) 파트 또는 단편들을 (즉, 연결 또는 유전자 융합에 의해) 적절하게 조합함으로써 제공할 수 있다. 본 발명의 아미노산 서열이 ISV인 경우, 상기한 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자 및/또는 유도체는 상기 ISV의 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자 및/또는 유도체일 수 있다.
본원에서 추가적으로 기술될, 본 발명의 비제한적인 특정한 일 측면에서, 이러한 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자, 유도체는 이것이 유래된 아미노산 서열과 비교하여 (본원에 추가적으로 기재된 바와 같이) 혈청내 반감기가 길다. 예를 들어, 본 발명의 아미노산 서열은, 반감기가 증가된 본 발명의 아미노산 서열의 유도체를 제공하기 위해, 반감기를 연장시키는 하나 이상의 기 또는 모이어티 (예, PEG)가 (화학적으로 또는 다른 방식으로) 연결될 수 있다.
비제한적인 특정한 일 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열은, 면역글로불린 폴드를 포함하는 아미노산 서열, 또는 적정 조건 하에 (예로, 생리 조건 하에) 면역글로불린 폴드를 (즉, 폴딩함으로써) 형성할 수 있는 아미노산 서열일 수 있다. 특히, Halaby et al., J. (1999) Protein Eng. 12, 563-71을 참조한다. 바람직하게는, 면역글로불린 폴드를 형성하도록 적절하게 폴딩되었을 때, 이러한 아미노산 서열은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 (본원에 기술된 바와 같이) 특이적으로 결합할 수 있으며; 보다 바람직하게는, 본원에 정의된 바와 같은, 친화성 (본원에서 추가적으로 기술되는 바와 같이, KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서 적절하게 측정 및/또는 표시됨)으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있다. 또한, 이러한 아미노산 서열의 파트, 단편, 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자 및/또는 유도체는, 바람직하게는, 면역글로불린 폴드를 포함하거나, 또는 적정 조건 하에 면역글로불린 폴드를 형성할 수 있게 하는 것이다.
구체적이나 비제한적으로, 본 발명의 아미노산 서열은 프래임워크 영역 4개 (각각 FR1 내지 FR4)와 상보성 결정부 3개 (각각 CDR1 내지 CDR3); 또는 (본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 하나 이상의 CDR을 형성하는 아미노산 잔기들의 적어도 일부를 통상 포함하게 될) 상기한 아미노산 서열의 임의의 적정 단편으로 필수적으로 구성된 아미노산 서열일 수 있다.
본 발명의 아미노산 서열은 구체적으로 면역글로불린 서열 또는 이의 적정 단편일 수 있으며, 보다 구체적으로는 면역글로불린 가변 도메인 서열 또는 이의 적정 단편, 예컨대 경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열) 또는 이의 적정 단편; 또는 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열) 또는 이의 적정 단편일 수 있다. 본 발명의 아미노산 서열이 중쇄 가변성 도메인 서열인 경우, 이는 통상적인 4-쇄 항체로부터 유래되는 중쇄 가변성 도메인 서열 (비제한적인 예로서, 인간 항체로부터 유래되는 VH 서열) 또는 (본원에 정의된 바와 같이) 이른바 "중쇄 항체"로부터 유래되는 (본원에 정의된 바와 같이) 소위 VHH-서열일 수 있다.
그러나, 본 발명은, 본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV)의 (또는 이를 발현하기 위해 사용되는 본 발명의 뉴클레오티드 서열의) 오리진, 또는 본 발명의 아미노산 서열이나 뉴클레오티드 서열이, 제조 또는 수득되는 (또는 제조 또는 수득되어 온) 방식으로도 한정되지 않음에 유념하여야 한다. 따라서, 본 발명의 아미노산 서열은 (임의의 적정 종 유래의) 천연 아미노산 서열, 합성 아미노산 서열 또는 반합성 아미노산 서열일 수 있다. 본 발명의 구체적이나 비제한적인 측면에서, 아미노산 서열은 (임의의 적정 종 유래의) 천연 면역글로불린 서열, 합성 면역글로불린 서열 또는 반합성 면역글로불린 서열이며, 비제한적인 예로서, (본원에 기술된 바와 같이) "인간화된" 면역글로불린 서열 (예로, 부분 또는 완전히 인간화된 마우스 또는 토끼 면역글로불린 서열, 구체적으로, 부분 또는 완전히 인간화된 VHH 서열 또는 나노바디), "카멜화된" (본원에 기술된 바와 같이) 면역글로불린 서열, 뿐만 아니라 친화성 성숙화 (예, 합성, 랜덤 또는 천연 면역글로불린 서열로부터 출발됨), CDR 그래프팅, 베니어화 (veneering), 여러가지 면역글로불린 서열들로부터 유래된 단편들의 조합, 중첩성 프라이머를 이용한 PCR 어셈블리 및 당업자에게 잘 공지된 면역글로불린 서열을 조작하기 위한 유사 기술; 또는 전술한 임의의 내용의 임의의 적정 조합과 같은 기법에 의해 수득된 면역글로불린 서열을 포함한다. 예로, 표준 교재 뿐만 아니라 본원에 언급된 추가적인 설명과 종래 기술을 참조한다.
마찬가지로, 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 천연 뉴클레오티드 서열, 합성 서열 또는 반합성 서열일 수 있으며, 예로, 적정 천연 주형 (예, 세포로부터 분리된 DNA 또는 RNA)으로부터 PCR에 의해 분리되는 서열, 라이브러리 (특히, 발현 라이브러리)로부터 분리한 뉴클레오티드 서열, 천연 뉴클레오티드 서열에 (미스매치 PCR과 같은, 자체 공지된 임의의 적정 기법을 이용하여) 돌연변이를 도입함으로써 제작한 뉴클레오티드 서열, 중첩 프라이머를 이용한 PCR에 의해 제작한 뉴클레오티드 서열, 또는 자체 공지된 DNA 합성 기법을 이용하여 제작한 뉴클레오티드 서열일 수 있다.
언급한 바와 같이, 본 발명의 아미노산 서열은, 바람직하게는, 기능적인 항원 결합성을 포함하는 면역글로불린 가변성 도메인을 의미하는 면역글로불린의 단일 가변성 도메인 (ISV)이다 (즉, 기능적인 항원 결합부를 형성하기 위해, 다른 면역글로불린 가변성 도메인과의 상호작용 - 예컨대 VH-VL 상호작용 -이 필요없다는 의미임).
본 발명의 아미노산 서열은 특히 도메인 항체 (또는 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열), 단일 도메인 항체 (또는 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열), "dAb" (또는 dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열) 또는 나노바디™ (본원에서 정의된 바와 같이, 비제한적인 예로, VHH 서열); 기타 단일 가변성 도메인, 또는 이들 중 임의의 것의 임의 적정 단편일 수 있다. (단일) 도메인 항체에 대한 일반적인 설명으로서, 또한 상기에 인용된 종래 기술과 EP 0 368 684를 참조한다. 용어 "dAb"에 대해서는, 예로 Ward et al. (Nature, 1989 Oct 12; 341 (6242): 544-6), Holt et al., Trends Biotechnol., 2003, 21(11):484-490; 및 예로, WO 06/030220, WO 06/003388 및 Domantis Ltd의 기타 공개된 특허 출원을 참조한다. 또한, 이는 포유류 오리진이 아니므로 본 발명의 내용에서 덜 바람직하지만, 단일 도메인 항체 또는 단일 가변성 도메인은 임의 종의 상어로부터 유래될 수 있음에 유념하여야 한다 (예로, 소위 "IgNAR 도메인", 예로 WO 05/18629을 참조함).
특히, 본 발명의 아미노산 서열은 (본원에서 정의된 바와 같이) 나노바디® 또는 이의 적정 단편일 수 있다 [주의: 나노바디 ® , Nanobodies ® 및 Nanoclone ®은 Ablynx N.V.의 등록 상표임]. 또한, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 나노바디는 "본 발명의 나노바디"로 본원에서 언급될 것이다.
나노바디에 대한 일반적인 설명은 아래 추가적인 설명과 본원에 인용된 종래 기술을 참조한다. 그러나, 이러한 측면에서, 이러한 설명과 종래 기술 분야에서는 주로 소위 "VH3 클래스"의 나노바디 (즉, DP-47, DP-51 또는 DP-29와 같은 VH3 클래스의 인간 생식계열(germline) 서열과 서열 상동성이 높은 나노바디)를 기술하며, 나노바디는 본 발명의 바람직한 측면을 형성함에 유념하여야 한다. 그러나, 본 발명은 광의의 의미로 일반적으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 모든 타입의 나노바디를 포괄하며, 예를 들어, 또한 WO 07/118670에 예시된 바와 같이, 소위 "VH4 클래스"의 나노바디 (즉, DP-78과 같은 VH4 클래스의 인간 생식계열 서열과 서열 상동성이 높은 나노바디)에 속하는 나노바디를 포괄함에 유념하여야 한다.
일반적으로, 나노바디 (구체적으로, VHH 서열 및 부분 인간화된 나노바디)는 하나 이상의 프래임워크 서열 (본원에 추가적으로 기재된 바와 같이)에 하나 이상의 (본원에 기술된 바와 같이) "홀마크 잔기"의 존재로 특히 특정될 수 있다.
따라서, 일반적으로, 나노바디는 (일반) 구조식을 가진 아미노산 서열로서 정의될 수 있으며:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4
여기에서, FR1 내지 FR4는 각각 프래임워크 영역 1 - 4이고, CDR1 내지 CDR3는 각각 상보성 결정부 1 - 3이고, 하나 이상의 홀마크 잔기는 본원에 추가적으로 정의된 바와 같다.
구체적으로, 나노바디는 (일반) 구조식을 가진 아미노산 서열일 수 있으며:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4
여기에서, FR1 내지 FR4는 각각 프래임워크 영역 1 - 4이고, CDR1 내지 CDR3는 각각 상보성 결정부 1 - 3이고, 프래임워크 서열은 본원에서 추가적으로 정의된 바와 같다.
보다 구체적으로, 나노바디는 (일반) 구조식을 가진 아미노산 서열일 수 있으며:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4
여기에서, FR1 내지 FR4는 각각 프래임워크 영역 1 - 4이고, CDR1 내지 CDR3는 각각 상보성 결정부 1 - 3이고,
i) 바람직하게는, Kabat 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108 위치에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 아래 표 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택되고,
ii) 상기 아미노산 서열은 서열번호 1-22의 아미노산 서열들 중 하나 이상의 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 가지며, 아미노산 동일성 수준을 결정하기 위한 목적에서는, CDR 서열을 구성하는 (서열번호 1-22의 서열에서 X로 표시된) 아미노산 잔기들이 배제된다.
이들 나노바디에서, CDR 서열은 일반적으로 본원에서 추가적으로 정의된 바와 같다. 따라서, 본 발명은 또한 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 (본원에 정의된 바와 같이) 결합할 수 있거나, 및/또는 이를 겨냥하는 나노바디, 이의 적정 단편, 뿐만 아니라 상기한 나노바디 및/또는 적정 단편들 중 하나 이상을 포함하거나 이로 필수적으로 구성된 폴리펩타이드에 관한 것이다.
서열번호 623 - 693 (표 A-1)은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대하여 제작된, 다수의 VHH 서열들의 아미노산 서열이다.
표 A-1: 바람직한 VHH 서열 또는 나노바디 서열들 (본원에서 특정 명칭 또는 서열번호 X의 서열로 언급될 수도 있음, 이때 X는 해당 아미노산 서열을 지칭하는 번호임):
명칭 특성 서열번호 X, X = 아미노산 서열
01D02 항-IL-17A 623 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGLSFSSYALGWFRQAPGKERDFVAAINWSGDNTHYADSVKGRFTISRDNAKNTVSLQMNSLKPEDTAVYYCAAQLGYESGYSLTYDYDYWGQGTQVTVSS
01G03 항-IL-17A 624 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASERTISNYDMGWFRQAPGKERELIAADISWSALNTNYADSVKGRFTISRDNAKNMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAARRSGYASFDNWGQGTQVTVSS
02E03 항-IL-17A 625 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWARQAPGEGLEWVSDINSGGTRTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYVCAKLSVFRSQLGGKYYGGDYENRGQGTQVTVSS
03B08 항-IL-17A 626 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFDDYAIGWFRQAPGKEREGVSCISSSDGSIYYADSVKGRFTISSDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYHCARFGRTGWAEECVDYDYWGQGTQVTVSS
03E05 항-IL-17A 627 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVTFDDYSIGWFRQAPGKEREGVSCISSSDGIPYYSDFVKGRFTTSIDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAGFGRLCAEFDSWGQGTQVTVSS
01D06 항-IL-17A 및 IL-17A/F 628 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAADGRTFSTYGMTWFRQVPGKEREFVAHIPRSTYSPYYANSVKGRFTIARDDAKSTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVFTGGTYYVPTAYDYWGQGTQVTVSS
02A08 항-IL-17A 및 IL-17A/F 629 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCADSERSFSFNAMGWFRQAPGKEREFVAAISATGDDTYYADSVKGRFAISRDTARNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCGARVNFDGTVSYTNDYAYWGQGTQVTVSS
02A10 항-IL-17A 및 IL-17A/F 630 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFALGYYAIGWFRQAPGKEREGVSCDSSSDGRTYYGDSVKGRFTISTDSAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCATCTDFEYDYWGQGTQVTVSS
04B09 항-IL-17A 및 IL-17A/F 631 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLGYYAIGWFRQAPGKEREGVSCDSSSDGDTYYANSVKGRFTISTDNGKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCATCTDWNYDYWGQGTQVTVSS
03C07 항-IL-17A 및 IL-17A/F 632 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFDDYAIGWFRQAPGKEREAVSCFSSSDGSIYYADSVKGRFTISSDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAGGGGSYYYTQLNYCYDMDYWGKGTQVTVSS
04A02 항-IL-17A 및 IL-17A/F 633 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRNINIINYMAWYRQAPGNQRELVAAMTSDATTEYADSVKGRFTISRDIPENTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNAKGIWDYLGRRDFGDYWGQGTQVTVSS
04B10 항-IL-17A 및 IL-17A/F 634 EVQLVESGGGLVQAGGSQSLSCVASGTIVNINVMGWYRQAPGKQRELVALITSGGGTTYGDSVKGRFTISIDNAKNTVILQMNSLEAEDTAVYYCAAEIGYYSGGTYFSSEAHWGQGTQVTVSS
04G01 항-IL-17A 및 IL-17A/F 635 EVQLVESGGGLVQAGGSQRLSCTASGTIVNIHVMGWYRQAPGKQRELVALIFSGGSADYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLEMNSLKAEDTAVYYCAAEIGYYSGGTYYSSEAHWGQGTQVTVSS
04F09 항-IL-17A 및 IL-17A/F 636 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSTHAMGWFRQAPGKERDFVAAIRWSDGSSFYADSVKGRFTISRDNAKNAVYLQSNSLKSEDTAVYVCYADVEGPTALHKYWGRGTQVTVSS
09D10 항-IL-17A 및 IL-17A/F 637 EVQLVESGGGLVQAGGSLSLSCAASGSVFRIDVMRWHRQAPGKQREFLASIASGGTTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCGANAESGPYTYWGLGTQVTVSS
09G10 항-IL-17A 및 IL-17A/F 638 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASDSVFTAKAVGWYRQPPGLQREWVAIITSGGKTNYADSSVKGRFTVSVDKVKNTVTLQMNSLKPEDTAVYYCYAQWMGRDYWGQGTQVTVSS
11A06 항-IL-17A 및 IL-17A/F 639 EVQLVESGGGLVQPGESLRLSCKASGFSLDYYALGWFRQAPGKEREGISCITSSDASAYYTDSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLKTEDTAIYYCAAALLTCSSYYDAYTYWGQGTQVTVSS
06E11 항-IL-17F 640 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCPVSGRAFSRGRLGWFRQAPGKEREFVAVAHWSGAITSYADSVKGRFTFSRDNAKNTMNLQMNSLKPEDTAVYYCAADSETSGNWVYWGQGTQVTVSS
07B09 항-IL-17F 641 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGASGGTFSSYATGWFRQAPGKEREFVAVLRWSDGHTAYADSVKGRFTISRDGAKNTMYLQMSSLKPEDTAIYYCTTATRPGEWDYWGQGTQVTVSS
24G10 항-IL-17F 642 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGAAGGTFSSYATGWFRQAPGKEREFVAVFRWSDSHTAYADSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMSSLKPEDTAIYYCTTATRPGEWDYWGQGTQVTVSS
07B11 항-IL-17F 643 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGRAFSSYVMGWFRQAPGMEREFVALIRWSDGITGYVDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAAVRPGDYDYWGQGTQVTVSS
08A08 항-IL-17F 644 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFRPYRMGWFRRAPGKAREFVTLISWSSGRTSYADSVKGRFTISRDSAKNAVYLQMDNLKPEDTAVYFCAVDLSGDAVYDSWGQGTQVTVSS
08B07 항-IL-17F 645 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRDFRVKNVGWIRQAPGKQRELVATITVGGSTNYADSAKGRFTISRDNAKNTVYLQMSSLKPEDTAVYYCNAVATVTDYTGTYSDGFWGQGTQVTVSS
08H01 항-IL-17F 646 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGASGGTFSSYATGWFRQAPGKEREFVAVLRWSDSHTAYADSVEGRFTISRDGAKNTVYLQMSSLKPEDTAIYYCTTGTRPGEWHYWGQGTQVTVSS
12A09 항-IL-17F 647 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYRMAWVRQAPGKGLEWVSSTSTGGEMTNYADSVKGRFTISRDNAKNTLHLQMNSLKPEDTALYYCAAGTSAGHWSTGGQGTQVTVSS
16A04 항-IL-17F 648 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSYVVGWFRQAPGKEREFIGAISGSGDSIYYAVSEKDRFTISRDNGKNTLYLQMSSLKAEDTAVYYCTADQEFGYLRFGRSEYWGQGTQVTVSS
24B08 항-IL-17F 649 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSTYKMGWFRQAPGKEREIVARISTNGPTAYAEFVKGRFTVSRENTKNTVYLQMNSLNIEDTAVYYCAAGYDSLFAGYDYWGQGTQVTVSS
01A01 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 650 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFDDYDIGWFRQAPGKEREGVSCFTSSDGRTFYADSVKGRFTVSADNAKNTVYLQMNSLEPEDTAVYFCAAVNTFDESAYAAFACYDVVRWGQGTQVTVSS
09B09 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 651 EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWARQAPGKGLEWISALAPGGDDEYYADSVNGRFTISRDNAENSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAKDHNVGYRTGEYDYGGQGTQVTVSS
09E11 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 652 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWISALAPGGDNRYYADSVNGRFTISRDNAENSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAKDHNVGYRTGEYDYGGQGTQVTVSS
10A04 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 653 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWISALAPGGGNRYYAESVNGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAKDHNVGYRTGEYDYGGQGTQVTVSS
10A05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 654 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWISALAPGGDNRYYADSVNGRFTISRDNAENSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAKDHNVGYRTGEYDYGGQGTQVTVSS
10D11 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 655 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWISALAPGGEHRYYADSVNGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAKDHNVGYRTGEYDYGGQGTQVTVSS
10F02 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 656 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWISALAPGGGNAYYADSVNGRFTISRDNAENLLYLQMNSLKSEDTAVYYCAKDHNVGYRTGEYDYGGQGTQVTVSS
11A02 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 657 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVIFRLNAMGWYRAAPGKQRELVAIIINGGSTNYADSVKGRFTISRDSAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYYNIPGDVYWGQGTQVTVSS
11A07 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 658 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPGVIFRLNAMGWYRAAPGKQRELVAIIANGGSTNYADSVKGRFTISRDSAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYYNIPGDVYWGQGTRVTVSS
11C08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 659 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVIFRLNAMGWYRAAPGKQRELVAIIVNGGSTNYADSVKGRFTISRDSAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYYNIPGDVYWGQGTQVTVSS
11C09 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 660 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVIFRLNAMGWYRAAPGKQRELVAIIVNGGSTNYADSVKGRFTISRDSAKNAVYLQMDSLKPEDTAVYYCYYNIPGDVYWGQGTQVTVSS
12H11 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 661 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGVIFRLNAMGWYRAAPGKQRELVAIIVNGGSTNYADSVKGRFTISRDNAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYYNIPGDVYWGQGTQVTVSS
13B03 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 662 EVQLVESGGGSVQAGDSLRLSCAASGRANSINWFGWFRQTPGKEREFVAGIRWSDAYTEYANSVKGRFTISRDNAKNTVDLQMDSLKPEDTAVYYCVLDLSTVRYWGQGTQVTVSS
13D05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 663 EVQLVESGGGSVQAGDSLRLSCAASGRANSINWFGWFRQTPGKEREFVAGIRWTDAYTEYAASVKGRFTISRDNAKNTVGLQMDSLKPEDTAVYYCVLDLSTVRYWGQGSQVTVSS
13E02 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 664 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYDAMGWLRQAPGKEREFVAAISGSGDDTYYADSVKGRFTISKDNAGITMYLQMNSLKPEDTAVYYCATRRGLYYVWDSNDYENWGQGTQVTVSS
01D08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 665 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYYAMGWLRQAPGKEREFVAAISGSGDDTYYADSVKGRFTISKDNAGITMYLEMNSLKPEDTAVYYCATRRGRYYVWDSNDYENWGQGTQVTVSS
13E07 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 666 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYYAMGWLRQAPGKEREFVAAISGSGDDTYYADSVKGRFTISKDNAGITMYLQMNSLKPEDTAVYYCATRRGLYYVWDSNDYENWGQGTQVTVSS
13G06 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 667 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYHAMGWLRQAPGKEREFVAAVSGSGDDTYYADSVKGRFTISKDNAGITMYLQMNSLKPEDTAVYYCATRRGLYYVWDSNDYENWGQGTQVTVSS
13H05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 668 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYDAMGWFRQAPGKEREFVAAISGSGEDTYYADSVKGRFTCSKDNAKDTMYLQMNSLKPEDTAVYYCATRRGLYFITDSNDYENWGQGTQVTVSS
13E05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 669 EVQLVESGGGKVQAGDSLTLSCVASGGTFSNYAAWFRQAPGKDRRELVVSIFRTGSITYTADSVKGRFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCASAYNPGVGYDYWGQGTQVTVSS
17B03 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 670 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCEASGGTFSNYAAWFRQGPGKGRELVVSIFRSGTITYTADSVKGRFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTGIYYCASAYNPGIGYDYWGQGTQVTVSS
17D08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 671 EVQLVESGGGLVQAGDSLTLSCVASGGTFSNYAAWFRQAPGKDRRELVVSIFRTGSITYTADSVKGRFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCASAYNPGVGYDYWGQGTQVTVSS
17E05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 672 EVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCEASGGTFSNYAAWFRQGPGKGRELVVSIFRSGTITYTADSVKGRFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTGIYYCASAYNPGIGYDYWGQGTQVTVSS
17G08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 673 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGGTFSNYAAWFRQGPGKGRELVVSIFRSGTITYTADSVKGRFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTGIYYCASAYNPGIGYDYWGQGTQVTVSS
17H04 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 674 EVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCVASGGTFSNYAAWFRQAPGKGRELILSIFRSGSITYTADSVKGRFTGSRVNTKNTAYLQMNNLKPEDTAVYYCASAYNPGIGYDYWGQGTQVTVSS
17H07 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 675 EVQLVESGGGLVQAGDSLTLSCVASGGTFSNYAAWFRQAPGKDRRELVVSIFRTGSITYTADSVKGRFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCASAYNPGVGYDYWGQGTQVTVSS
01C09 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 676 EVQLVKSGGGLVQAGGSLKLSCAASGRTFTTYPMGWFRQAPGKEREFVGAISMSGEDTIYATSVKGRFTISRDDARNTVTLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYNGRYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
01F10 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 677 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFTTYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGEDAAYATSVKGRFTISRDNARNTVYLHMTTLKPEDTAVYYCAARTSYNGIYDYIDDYSYWGQGTQ VTVSS
02D02 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 678 EVQLVESGGGLVQAGGSLKLSCARSGRTFTTYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAYATFVKGRFTIVRDDDKNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYSGTYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13A08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 679 EVQLVESRGRLVQAGGSLRLSCAASGRTFTSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDAAYADFVRGRFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYDGTYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13B05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 680 EVQLVESGGRLVQAGGSLRLSCAASGRTFTSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAYTDFVRGRFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYDGTYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13C06 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 681 EVQLVESGGRLVQAGGSLRLSCAASGRTFTSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDAAYADFVRGRFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYDGTYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13E01 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 682 EVQLVESEGGLVQAGGSLRLSCARSGHAFTSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTIYRDFVKGRFTISRDNARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYDGRYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13E03 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 683 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFTTYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAYATFVKGRFTISRDSARNTVYLHMTRLKPEDTAVYSCAARTSYDGRYDYIDDYSDWGQGTQVTVSS
13E08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 684 EVQLVESRGGLVQAGGSLRLSCAGSGRTLYSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAVATFVKGRFTISRDNARNTVYLHMTSLKPEDTAVYHCAARTSYSGRYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13G04 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 685 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTLYSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAVATFVKGRFTISRDNARNTVYLHMSSLKPEDTAVYHCAARTSYSGRYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13G05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 686 EVQLVESGGGLVQAGGSLELSCARSGRTFTTYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAYATFVKGRFTFSRDDDKNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYSGMYDYIHDYSYWGQGTQVTVSS
13G08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 687 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFFSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDSAYRDFVKGRFTISRDNARDTVYLHMTSLKPEDTAIYYCAARTSYNGRYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
13H03 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 688 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFTTYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDTAYATFVKGRFTISRDNARNTVYLHMTRLKPEDTAVYSCAARTSYDGRYDYIDDYSDWGQGTQVTVSS
17C01 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 689 EVQLVESGGRLVQAGGSLRLPCAASGRTFTSYPMGWFRQAPGKEREFVAAISMSGDDAAYADFVRGRFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAARTSYDGTYDYIDDYSYWGQGTQVTVSS
15A08 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 690 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVSCVSSSDGRTAYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCATVMEYGLGCTTDVLDAWGQGTLVTVSS
13G02 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 691 EVQLVESRGGLVQAGGSLRLSCAASGGTFSVFAMRWFRQAPGKEREFVAGISWTGGTTYYADSVKGRFTMSADNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVDVGGGSDRYLGQGTQVTVSS
17E02 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 692 EVQLVESRGGLVQAGGSLRLSCAASGGTFSVFAMRWFRQAPGKEREFVAGISWTGGTTYYADSVKGRFTMSADNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVDVGGGSDRYLGQGTQVTVSS
18B05 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 693 EVQLVKSGGGLVQPGGSLRLSCAASGGTFSLFAMGWFREAPGKEREFVAAIRWSDGSSYYADSVKGRFTISRDNAKNAVHLQSNSLKSEDTAVYYCYADVQGGLHRYWGQGTQVTVSS
구체적으로, 본 발명은 일부 구체적인 측면에서, 하기 아미노산 서열과; 아울러 (본원에서 추가적으로 기술될 수 있으며, 본원에 기술된 바와 같이 이중 특이성 및/또는 이중 파라토프 폴리펩타이드일 수 있는) 그러한 아미노산 서열들 중 하나 이상을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드, 및 상기한 아미노산 서열 및 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 서열을 제공한다.
- (본원에서 정의된 바와 같이) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며, 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 예로, 90% 또는 95% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는, 아미노산 서열. 이들 아미노산 서열은, 또한, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 동족 리간드의 결합을 무력화하거나; 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합에 대해 동족 리간드와 경쟁하거나; 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 (본원에 정의된 바와 같이) 상호작용부 (예, 리간드 결합부)를 겨냥하게 하는 것일 수 있음;
- IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조) 중 하나 이상의 아미노산 서열의 결합을 (본원에서 정의된 바와 같이) 교차-차단하거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합에 대한 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 하나 이상의 아미노산 서열과 경쟁하는 아미노산 서열. 즉, 이들 아미노산 서열은, 또한, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 동족 리간드의 결합을 무력화하거나; IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합에 대해 동족 리간드와 경쟁하거나; 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 (본원에서 정의된 바와 같이) 상호작용부를 겨냥하게 하는 것일 수 있음;
이때 아미노산 서열은 본원에 추가적으로 기술될 수 있는 아미노산 서열 (또는 ISV) (및 예로 나노바디일 수 있음)일 수 있다. 이러한 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 임의의 천연 리간드를 포함하지 않는다.
일부 다른 특정 측면들에서, 본 발명은 하기인 아미노산 서열과; (본원에서 추가적으로 기술될 수 있으며, 본원에 기술된 바와 같이 이중 특이성 및/또는 이중 파라토프 폴리펩타이드일 수 있는) 이들 아미노산 서열들 중 하나 이상을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드, 및 상기한 아미노산 서열 및 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 서열을 제공한다:
- IL-17B, IL-17C, IL-17D, 및/또는 IL-17E와 비교하여, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적인, 본 발명의 아미노산 서열 (특히 ISV);
이때, 본 발명의 아미노산 서열은, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다 (그리고 예로 나노바디일 수 있음). 이러한 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 임의의 천연 리간드를 포함하지 않는다.
이에, 본 발명의 일부 특히 바람직한 나노바디는 (본원에서 추가적으로 정의된 바와 같이) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며, 하기 i) 및 ii)인 나노바디이다:
i) 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조) 중 하나 이상의 아미노산 서열과의 아미노산 동일성이 80% 이상이며, 이때, 아미노산 동일성 수준을 측정함에 있어서, CDR 서열을 구성하는 아미노산 잔기들은 배제됨. 이와 관련하여, 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 나노바디의, 프래임워크 1 서열 (서열번호 126 - 196), 프래임워크 2 서열 (서열번호 268 - 338), 프래임워크 3 서열 (서열번호 410 - 480) 및 프래임워크 4 서열 (서열번호 552 - 622)이 열거된 표 B-1을 참조한다 (프래임워크 1 서열의 1-4번 및 27-30번 위치의 아미노산에 대해, 또한 아래 코멘트를 참조함. 즉, 아미노산 동일성 수준을 결정할 때, 이들 잔기들은 바람직하게 배제됨);
ii) 바람직하게는, Kabat 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 상기 표 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
이들 나노바디에서, CDR 서열은 일반적으로 본원에서 추가로 정의된 바와 같다.
즉, 상기한 나노바디는 임의의 적정 수단으로, 임의의 적정 소스로부터 유래될 수 있으며, 예를 들어, 천연 VHH 서열 (즉, 적정 카멜리드 종 유래) 또는 합성 또는 반합성의 아미노산 서열일 수 있으며, 비제한적인 예로 (본원에서 정의된 바와 같이) "인간화된" 나노바디, (본원에서 정의된 바와 같이) "카멜화된" 면역글로불린 서열 (특히, 카멜화된 중쇄 가변성 도메인 서열), 뿐만 아니라 친화성 성숙화 (예, 합성, 랜덤 또는 천연 면역글로불린 서열에서 시작함), CDR 그래프팅, 베니어화, 여러가지 면역글로불린 서열로부터 유래된 단편들의 조합, 중첩성 프라이머를 이용한 PCR 어셈블리 및 당업자에게 잘 알려진 면역글로불린 서열을 조작하기 위한 유사 기법; 또는 본원에 추가적으로 기술된 바와 같이 이들 중 임의의 기법의 임의의 적정 조합과 같은 기법을 통해 수득한 나노바디일 수 있다. 또한, 나노바디가 VHH 서열을 포함하는 경우, 상기 나노바디는, 본 발명의 하나 이상의 추가적인 (부분 또는 전체) 인간화된 나노바디를 제공하기 위해, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 적절하게 인간화될 수 있다. 마찬가지로, 나노바디가 합성 또는 반합성 서열 (예, 부분 인간화된 서열)을 포함하는 경우, 상기 나노바디는, 재차, 본 발명의 하나 이상의 추가적인 (부분 또는 전체) 인간화된 나노바디를 제공하기 위해, 선택적으로, 즉, 본원에 기술된 바와 같이 추가로 적절하게 인간화될 수 있다.
특히, 인간화된 나노바디는, 앞의 단락에서 포괄적으로 나노바디에 대해 정의되어 있으나, (본원에서 정의된 바와 같이) 인간화 치환 (humanizing substitution)이거나 및/또는 인간화 치환에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기가 (특히, 하나 이상의 프래임워크 잔기에) 존재하는, 아미노산 서열일 수 있다. 일부 바람직한 비제한적인 인간화 치환 (및 이의 적정 조합)은 본원의 내용을 기초로 당업자들에게 자명할 것이다. 아울러, 또는 다른 예로, 다른 잠재적으로 유용한 인간화 치환은, 천연 VHH 서열의 프래임워크 영역들의 서열을, 매우 관련성 높은 하나 이상의 인간 VH 서열들의 대응되는 프래임워크 서열과 비교함으로써, 확인할 수 있으며, 이렇게 확인된 하나 이상의 잠재적으로 유용한 인간화 치환 (또는 이의 조합)을 상기 VHH 서열에 (본원에 추가적으로 기재된 바와 같이, 자체 공지된 임의 방식으로) 도입할 수 있으며, 제조되는 인간화된 VHH 서열은, 표적에 대한 친화성, 안정성, 발현 용이성, 발현 수준 및/또는 다른 바람직한 성질에 대해 테스트할 수 있다. 이러한 방식으로, 제한된 수준의 시도 및 실수를 통해, 다른 적합한 인간화 치환 (또는 이의 적정 조합)을 본원의 내용을 기초로 당업자가 결정할 수 있다. 또한, 전술한 내용을 기초로, 나노바디 (이의 프래임워크 영역들)는 부분 인간화되거나 또는 전체 인간화될 수 있다.
이에, 본 발명의 다른 바람직한 일부 나노바디는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 (본원에서 추가적으로 정의된 바와 같이) 결합할 수 있으며, 하기로 정의되는 나노바디이다:
i) 서열번호 623 - 693(표 A-1 참조)의 아미노산 서열들 중 하나에 대한 인간화된 변이체임; 및/또는
ii) 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 아미노산 서열들 중 하나 이상과의 서열 동일성이 80% 이상이며, 아미노산 동일성 수준을 결정하기 위한 목적으로, CDR 서열을 형성하는 아미노산 잔기들은 배제된 것임;
그리고,
i) 바람직하게는, Kabat 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 상기 표 B-2에 기술된 홀마크 잔기들로부터 선택된 것임.
본 발명의 다른 구체적인 측면에서, 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합으로의 결합을 위한 특히 적합한 아미노산 잔기들로 구성된 다수 가닥 (즉, 소형 펩타이드)을 제공한다. 이들 아미노산 잔기들로 구성된 가닥들은, 특히 본 발명의 아미노산 서열의 항원 결합부(의 일부)를 구성하는 방식으로, 본 발명의 아미노산 서열내에 존재하거나 및/또는 본 발명의 아미노산 서열에 병합시킬 수 있다. 이들 아미노산 잔기들로 구성된 가닥들은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 생성된 (또는 본원에 추가적으로 기재된 바와 같이, 상기한 CDR 서열을 기반으로 하거나 또는 이로부터 유래될 수 있는) 중쇄 항체의 CDR 서열 또는 VHH 서열로서 먼저 제조되기 때문에, 이는 또한 일반적으로 본원에서 "CDR 서열" (즉, 각각 CDR1 서열, CDR2 서열 및 CDR3 서열)로 지칭될 것이다. 그러나, 아미노산 잔기로 구성된 가닥들이 본 발명의 아미노산 서열이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있게 하는 한, 본 발명은 광의의 의미로, 이들 아미노산 잔기들로 구성된 가닥들이 본 발명의 아미노산 서열내에 있을 수 있게 하는 특정한 구조적 규칙이나 기능으로 제한되지 않음에 유념하여야 한다. 따라서, 일반적으로, 본 발명은, 광의의 의미로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있으며 본원에 기술된 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는, 특히, 전체 아미노산 서열이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있는 결합 도메인 및/또는 결합 단위를 형성할 수 있도록, 하나 이상의 다른 아미노산 서열을 통해 서로 적절하게 연결된, 2 이상의 상기 CDR 서열의 조합을 포함하는, 임의의 아미노산 서열을 포괄한다. 그러나, 또한, 본 발명의 아미노산 서열내에 상기한 CDR 서열이 단지 하나 존재하는 것도, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있는 본 발명의 아미노산 서열을 제공하는데 그 자체로도 이미 충분할 수 있음에 유념하여야 하며; 예로 WO 03/050531 또는 이후 출원에 기술된 소위 "엑스페디트 단편(Expedite fragment)"을 참조한다.
따라서, 다른 구체적이나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV)은, 본원에 기술된 CDR1 서열, CDR2 서열 및 CDR3 서열 (또는 이의 임의 적정 조합)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 서열일 수 있다. 특히, 본 발명의 아미노산 서열은, 본원에 기술된 CDR1 서열, CDR2 서열 및 CDR3 서열 (또는 이의 임의의 적정 조합)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는, 하나 이상의 항원 결합부를 포함하는 아미노산 서열일 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 이러한 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열은 (또는 ISV는), 아미노산 잔기들로 구성된 하나 이상의 가닥을 포함하는 임의의 아미노산 서열일 수 있으며, 이때 아미노산 잔기들로 구성된 상기 가닥은 본원에 기술된 하나 이상의 CDR 서열에 대응되는 아미노산 서열을 가진다. 이러한 아미노산 서열은 면역글로불린 폴드를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 비제한적인 예로, 이러한 아미노산 서열은, 하나 이상의 상기한 CDR 서열을 포함하나, (완전한) 면역글로불린 폴드를 형성할만큼 크지 않은, 면역글로불린 서열의 적정 단편일 수 있다 (예로, WO 03/050531에 기술된 "엑스페디트 단편"을 참조함). 다른 예로, 이러한 아미노산 서열은, 상기한 CDR 서열에 해당되는 아미노산 잔기들로 구성된 하나 이상의 가닥을 포함하는, 적합한 "단백질 스캐폴드"일 수 있다 (즉, 이의 항원 결합부의 일부분으로서). 아미노산 서열이 제시되는 적합한 스캐폴드는 당업자들에게 자명할 것이며, 비제한적인 예로, 면역글로불린 기반의 또는 유래의 결합 스캐폴드 (즉, 본원에 이미 기술된 면역글로불린 서열 이외의 서열), 단백질 A 도메인 유래의 단백질 스캐폴드 (예, Affibodies™), 텐다미스타트 (tendamistat), 파이브로넥틴 (fibronectin), 리포칼린 (lipocalin), CTLA-4, T-세포 수용체, 고안된 앤키린 반복체 (designed ankyrin repeat), 아비머 (avimer) 및 PDZ 도메인 (Binz et al., Nat. Biotech 2005, Vol 23:1257), 및 DNA 또는 RNA 기반의 결합 모티프, 비제한적인 예로, DNA 또는 ENA 앱타머 (Ulrich et al., Comb Chem High Throughput Screen 2006 9(8):619-32)를 포함한다.
다시 말해, 이들 CDR 서열들 중 하나 이상을 포함하는 본 발명의 임의의 아미노산 서열은, 바람직하게는, (본원에서 정의된 바와 같이) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있도록 하는 것이며, 보다 바람직하게는, 본원에 정의된 바와 같은, 친화성 (KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), Kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로 적절하게 측정 및/또는 표시됨, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같음)으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합할 수 있게 하는 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명의 이러한 측면에 따른 아미노산 서열은, 하나 이상의 항원 결합부를 포함하는 임의의 아미노산 서열 (또는 ISV)일 수 있으며, 이때 상기 항원 결합부는, (i) 제1 아미노산 서열이 본원에 기술된 CDR1 서열로부터 선택되는 경우, 제2 아미노산 서열은 본원에 기술된 CDR2 서열 또는 본원에 기술된 CDR3 서열로부터 선택되거나; (ii) 제1 아미노산 서열이 본원에 기술된 CDR2 서열로부터 선택되는 경우, 제2 아미노산 서열은 본원에 기술된 CDR1 서열 또는 본원에 기술된 CDR3 서열로부터 선택되거나; 또는 (iii) 제1 아미노산 서열이 본원에 기술된 CDR3 서열로부터 선택되는 경우, 제2 아미노산 서열은 본원에 기술된 CDR1 서열 또는 본원에 기술된 CDR3 서열로부터 선택되도록, 본원에 기술된 CDR1 서열, 본원에 기술된 CDR2 서열 및 본원에 기술된 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 2 이상의 아미노산 서열을 포함한다.
더욱 더 구체적으로, 본 발명의 아미노산 서열은 하나 이상의 항원 결합부를 포함하는 아미노산 서열 (또는 ISV)일 수 있으며, 이때 상기 항원 결합부는, 제1 아미노산 서열이 본원에 기술된 CDR1 서열로부터 선택되고, 제2 아미노산 서열이 본원에 기술된 CDR2 서열로부터 선택되고, 제3 아미노산 서열이 본원에 기술된 CDR3 서열로부터 선택되도록, 본원에 기술된 CDR1 서열, 본원에 기술된 CDR2 서열 및 본원에 기술된 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 3개 이상의 아미노산 서열을 포함한다. CDR1, CDR2 및 CDR3 서열의 바람직한 조합은 본원에서 추가적인 설명들로부터 명확해질 것이다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 이러한 아미노산 서열은 바람직하게는 (본원에 추가적으로 기술된 바와 같이) 면역글로불린 서열이지만, 그 예로 상기 CDR 서열을 제시하기 위한 적합한 스캐폴드를 포함하는 임의의 다른 아미노산 서열일 수도 있다.
따라서, 비제한적인 일 특정 측면에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기들로 구성된 하나 이상의 가닥을 포함하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 아미노산 서열에 관한 것이다:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
또는 이들의 임의의 적정 조합.
본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV)이 b) 및/또는 c)에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경우:
i) b) 및/또는 c)에 따른 상기 아미노산 서열에서의 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, 그리고 a)에 따른 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) b) 및/또는 c)에 따른 아미노산 서열은, 바람직하게는, 아미노산 치환만을 포함하며, a)에 따른 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, 아미노산 결손 또는 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) b) 및/또는 c)에 따른 아미노산 서열은, 자체 공지된 한가지 이상의 친화성 성숙화 기법을 이용한 친화성 성숙화에 의해, a)에 따른 아미노산 서열로부터 유래되는 아미노산 서열일 수 있다.
마찬가지로, e) 및/또는 f)에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경우:
i) e) 및/또는 f)에 따른 상기 아미노산 서열에서의 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, 그리고 d)에 따른 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) e) 및/또는 f)에 따른 아미노산 서열은, 바람직하게는, 아미노산 치환만을 포함하며, d)에 따른 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, 아미노산 결손 또는 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) e) 및/또는 f)에 따른 아미노산 서열은, 자체 공지된 한가지 이상의 친화성 성숙화 기법을 이용한 친화성 성숙화에 의해, d)에 따른 아미노산 서열로부터 유래되는 아미노산 서열일 수 있다.
또한, 마찬가지로, h) 및/또는 i)에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경우:
i) h) 및/또는 i)에 따른 상기 아미노산 서열에서의 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, 그리고 g)에 따른 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) h) 및/또는 i)에 따른 아미노산 서열은, 바람직하게는, 아미노산 치환만을 포함하며, g)에 따른 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, 아미노산 결손 또는 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) h) 및/또는 i)에 따른 아미노산 서열은, 자체 공지된 한가지 이상의 친화성 성숙화 기법을 이용한 친화성 성숙화에 의해, g)에 따른 아미노산 서열로부터 유래되는 아미노산 서열일 수 있다.
바로 앞 단락들은 또한 b), c), e), f), h) 또는 i) 각각에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명의 임의의 아미노산 서열에 일반적으로 적용되는 것으로 이해되어야 한다.
이러한 특정 측면에서, 아미노산 서열 (또는 ISV)은, 바람직하게는, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기들로 구성된 하나 이상의 가닥들을 포함한다:
i) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
ii) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열; 및
iii) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
또는 이들의 임의의 적정 조합.
또한, 바람직하게는, 이러한 아미노산 서열에서, 아미노산 잔기들로 구성된 상기 가닥들 중 적어도 하나는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하기 위한 항원 결합부의 일부를 형성한다.
보다 구체적이나 비제한적인 측면에서, 본 발명은, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기들로 구성된 2 이상의 가닥을 포함하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열 (또는 ISV)에 관한 것으로:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열,
(i) 제1 아미노산 잔기 가닥이 a), b) 또는 c)에 따른 아미노산들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 d), e), f), g), h) 또는 i)에 따른 아미노산 서열들 중 하나에 해당되거나; (ii) 제1 아미노산 잔기 가닥이 d), e) 또는 f)에 따른 아미노산들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 a), b), c), g), h) 또는 i)에 따른 아미노산 서열들 중 하나에 해당되거나; 또는 (iii) 제1 아미노산 잔기 가닥이 g), h) 또는 i)에 따른 아미노산들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 a), b), c), d), e) 또는 f)에 따른 아미노산 서열들 중 하나에 해당된다.
이러한 구체적인 측면에서, 아미노산 서열은 바람직하게는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기들로 구성된 2 이상의 가닥을 포함하며:
i) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
ii) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열; 및
iii) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열,
(i) 제1 아미노산 잔기 가닥이 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 서열번호 339 - 409 또는 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나에 해당되거나; (ii) 제1 아미노산 잔기 가닥이 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 서열번호 197 - 267 또는 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나에 해당되거나; 또는 (iii) 제1 아미노산 잔기 가닥이 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 서열번호 197 - 267 또는 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나에 해당된다.
또한, 상기한 아미노산 서열에서, 아미노산 잔기들로 구성된 2 이상의 가닥들은 바람직하게는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합하기 위한 항원 결합부의 일부분을 형성한다.
보다 더 구체적이나 비제한적인 측면에서, 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 아미노산 잔기 가닥 3개 이상을 포함하는 아미노산 서열에 관한 것이되,
제1 아미노산 잔기 가닥은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
a) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들;
b) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
제2 아미노산 잔기 가닥은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
d) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들;
e) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및 제3 아미노산 잔기 가닥은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
g) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들;
h) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
바람직하게는, 이러한 구체적인 측면에서, 제1 아미노산 잔기 가닥은 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되고; 제2 아미노산 잔기 가닥은 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되고; 제3 아미노산 잔기 가닥은 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된다.
즉, 바람직하게는, 이러한 아미노산 서열에서, 아미노산 잔기들로 구성된 3개 이상의 가닥들은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합하기 위한 항원 결합부의 일부분을 형성한다.
아미노산 서열로 구성된 이러한 가닥들의 바람직한 조합은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해지게 될 것이다.
바람직하게는, 이러한 아미노산 서열에서, CDR 서열들은, 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 아미노산 서열들 중 하나 이상의 CDR 서열들과, 70% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 80% 이상의 아미노산 동일성, 보다 바람직하게는 90% 이상의 아미노산 동일성, 예로 95%의 아미노산 동일성 또는 그 이상의 동일성, 또는 보다 필연적으로는 100%의 아미노산 동일성을 가진다. 이러한 아미노산 동일성 수준은, 예를 들어, 상기 아미노산 서열과 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 서열들 중 하나 이상 간의 아미노산 동일성 정도를 (본원에 기술된 방식으로) 측정함으로써 알 수 있으며, 이때 프래임워크 영역을 형성하는 아미노산 잔기들은 배제된다. 또한, 본 발명의 이러한 아미노산 서열은 본원에서 추가로 기술된 바와 같을 수 있다.
또한, 이러한 아미노산 서열은, 바람직하게는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 (본원에서 정의된 바와 같이) 특이적으로 결합할 수 있으며, 보다 구체적으로는 본원에 정의된 바와 같은 친화성 (KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), Kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서 적절하게 측정 및/또는 표시됨, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같음)으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있게 하는 것이다.
본 발명의 아미노산 서열이 4개의 프래임워크 영역들 (각각 FR1 - FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 - CDR3)로 필수적으로 구성되는 경우, 본 발명의 아미노산 서열은 바람직하게는 다음과 같다:
- CDR1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
a) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들;
b) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
d) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들;
e) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR3는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
g) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들;
h) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
특히, 본 발명의 이러한 아미노산 서열 (또는 ISV)은, CDR1이 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및/또는 CDR2가 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및/또는 CDR3가 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는, 아미노산 서열일 수 있다.
특히, 본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV)이 4개의 프래임워크 영역들 (각각 FR1 - FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 - CDR3)로 필수적으로 구성되는 경우, 본 발명의 아미노산 서열은 바람직하게는 다음과 같다:
- CDR1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
a) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들;
b) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
d) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들;
e) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR3는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
g) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들;
h) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열; 또는 상기한 아미노산 서열의 임의의 적정 단편.
특히, 본 발명의 상기한 아미노산 서열 (또는 ISV)은, CDR1이 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되고; CDR2가 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되고; CDR3가 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되어진 것일 수 있다.
다시 말해, CDR 서열들의 바람직한 조합은 본원의 추가적인 내용들로부터 명확해지게 될 것이다.
또한, 상기한 아미노산 서열은, 바람직하게는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 (본원에서 정의된 바와 같이) 특이적으로 결합할 수 있으며, 보다 구체적으로는, 본원에 정의된 바와 같은 친화성 (KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), Kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서 적절하게 측정 및/또는 표시됨, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같음)으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있게 하는 것이다.
바람직하나 비제한적인 일 측면에서, 본 발명은, 4개의 프래임워크 영역들 (각각 FR1 - FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 - CDR3)로 필수적으로 구성되는 아미노산 서열 (또는 ISV)에 관한 것이되, 상기 아미노산 서열의 CDR 서열들은 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 아미노산 서열들 중 하나 이상의 CDR 서열들과 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 예로 95%의 아미노산 동일성 또는 그 이상, 또는 심지어 본질적으로 100%의 아미노산 동일성을 가진다. 아미노산 동일성 수준은, 예를 들어, 상기 아미노산 서열과 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 서열들 중 하나 이상의 서열 간의 아미노산 동일성 정도를 (본원에 기술된 방식으로) 측정함으로써 알 수 있으며, 이때 프래임워크 영역을 형성하는 아미노산 잔기들은 배제된다. 본 발명의 이러한 아미노산 서열은 본원에서 추가로 기술된 바와 같을 수 있다.
본 발명의 이러한 아미노산 서열에서, 프래임워크 서열은 임의의 적합한 프래임워크 서열일 수 있으며, 예컨대, 적합한 프래임워크 서열은 예로 표준 교재와 본원의 아래 내용 및 본원에 언급된 종래 기술을 토대로 당업자에게 자명할 것이다.
프래임워크 서열은, 바람직하게는, 면역글로불린 프래임워크 서열들, 또는 면역글로불린 프래임워크 서열들로부터 (예로, 인간화 또는 카멜화에 의해) 유래된 프래임워크 서열들 (의 적정 조합)이다. 예컨대, 프래임워크 서열은, 경쇄 가변성 도메인 (예, VL-서열) 및/또는 중쇄 가변성 도메인 (예, VH-서열)으로부터 유래된 프래임워크 서열들일 수 있다. 특히 바람직한 일 측면에서, 프래임워크 서열은 VHH-서열로부터 유래된 프래임워크 서열 (여기서, 프래임워크 서열은 선택적으로 부분 또는 전체 인간화된 것일 수 있음) 또는 (본원에 기술된 바와 같이) 카멜화된 통상적인 VH 서열이다.
프래임워크 서열은, 바람직하게는, 본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV)이 도메인 항체 (또는 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열); 단일 도메인 항체 (또는 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열); "dAb" (또는 dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열); 또는 나노바디 (비제한적인 예로, VHH 서열)가 되게 하는 것이다. 재차, 적합한 프래임워크 서열들은 예로 표준 교재 및 본원에 언급된 추가적인 내용과 종래 기술을 토대로 당업자들에게 명확해질 것이다.
구체적으로, 본 발명의 아미노산 서열에 존재하는 프래임워크 서열은, 본 발명의 아미노산 서열이 나노바디이도록 (본원에서 정의된 바와 같이) 하나 이상의 홀마크 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 프래임워크 서열(의 적정 조합)에 대한 일부 바람직한 비제한적인 예는 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해지게 될 것이다.
다시 말해, 본 발명의 아미노산 서열들에 대해 본원에서 일반적으로 기술된 바와 같이, (예로, 이들 CDR들 및 프래임워크 서열이 단편이 유래된 전장 면역글로불린 서열에서 이루어질 수 있는 바와 동일한 순서로) 하나 이상의 프래임워크 서열을 통해 적절하게 연결되거나 및/또는 측면에 위치된, 하나 이상의 CDR 서열들을 포함하는 단편 등의, 전술한 임의의 것의 적정한 단편들 (또는 단편들의 조합)을 이용하는 것도 가능하다. 이러한 단편들은, 또한, 이들이 면역글로불린 폴드를 포함하거나 또는 형성할 수 있도록 할 수 있거나, 또는 다른 예로, 이는 면역글로불린 폴드를 포함하지 않거나 형성하지 않게 하는 것일 수 있다.
일 특정 측면에서, 이러한 단편은, 단편이 유래된 면역글로불린 서열에서, CDR 서열에 인접한 프래임워크 서열 (특히 프래임워크 서열(들)의 일부분) (의 일부분)의 각 측면에 위치되어 있는, 본원에 기술된 바와 같은 단일 CDR 서열 (및 특히 CDR3 서열)을 포함한다. 예컨대, CDR3 서열은 FR3 서열(의 일부분)의 뒤에 있고, 그 뒤에 FR4 서열(의 일부분)이 올 수 있다. 이러한 단편은, 또한, 이황화 결합을 포함할 수 있으며, 특히 CDR 서열의 각 앞과 뒤에 있는 2개의 프래임워크 영역들을 연결하는 이황화 결합을 포함할 수 있다 (이러한 이황화 결합을 형성하기 위해, 상기 프래임워크 영역에 천연적인 시스테인 잔기들이 사용되거나, 또는 다른 예로 시스테인 잔기들이 상기 프래임워크 영역에 합성에 의해 부가 또는 도입될 수 있음). 이러한 "엑스페디트 단편(Expedite fragment)"에 대한 추가적인 내용은, WO 03/050531 및 WO2008/068280을 참조한다 (또한 PCT/EP2009/054533 참조).
다른 측면에서, 본 발명은 화합물 또는 구조체, 특히 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 (또는 ISV) (또는 이의 적정 단편)을 포함하거나 필수적으로 구성되며, 선택적으로 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 추가로 포함하는, 단백질 또는 폴리펩타이드 (또한 본원에서 "본 발명의 화합물" 또는 "본 발명의 폴리펩타이드"로서 각각 언급됨)에 관한 것이다. 본원의 추가적인 내용으로부터 당업자가 자명하게 이해하게 될 바와 같이, 이러한 다른 기, 잔기, 모이어티, 결합 유닛 또는 아미노산 서열은 본 발명의 아미노산 서열 (및/또는 존재하는 경우 화합물 또는 구조체)에 추가적으로 기능성을 제공하거나 제공하지 않을 수 있으며, 이는 본 발명의 아미노산 서열의 성질을 변형시키거나 또는 변형시키지 않을 수 있다.
예를 들어, 이러한 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛은, 화합물 또는 구조체가 (융합) 단백질 또는 (융합) 폴리펩타이드이 되게 하는, 하나 이상의 추가적인 아미노산 서열일 수 있다. 바람직하나 비제한적인 측면에서, 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛은 면역글로불린 서열이다. 보다 바람직하게는, 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛은, 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 구현예로, 이러한 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛은, 예를 들어, 생물학적으로 또는 약리학적으로 스스로 활성을 나타내거나 비활성형일 수 있는, 화학적 기, 잔기, 모이어티일 수 있다. 비제한적인 예로, 이러한 기는 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열에 연결되어, 본 발명의 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드의 "유도체"를 제공할 수 있다.
또한, 본원에 기술된 하나 이상의 유도체를 포함하거나 이들로 필수적으로 구성되며, 선택적으로 하나 이상의 링커를 통해 선택적으로 연결된, 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 추가로 포함하는, 화합물 또는 구조체도 본 발명에 포함된다. 바람직하게는, 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛은 아미노산 서열이다.
전술한 화합물 또는 구조체에서, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 및 하나 이상의 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛은 서로 직접 연결되거나 및/또는 하나 이상의 적정 링커 또는 스페이트를 통해 연결될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 아미노산 서열인 경우, 또한 링커는 아미노산 서열일 수 있으며, 그래서 제조되는 화합물 또는 구조체는 융합 (단백질) 또는 융합 (폴리펩타이드)이다.
상기와 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해지게 될 바와 같이, 본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV)은, 즉, 이들을 서로, 하나 이상을 본 발명의 다른 아미노산 서열과, 및/또는 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛과, 적절하게 조합하여, 하나의 분자 안에 하나 이상의 원하는 성질 또는 생물학적 기능을 조합하는, 본원에 기술된 화합물 또는 구조체 (예, 비제한적으로, 본원에 기술된 본 발명의 2중 파라토프, 2가/다가 및 2중/다중 특이성 폴리펩타이드)를 형성함으로써, 본 발명의 폴리펩타이드를 제조하기 위한 "빌딩 블럭"으로서 사용할 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드는, 일반적으로, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 (또는 ISV)을, 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛에, 선택적으로 하나 이상의 적정 링커를 통해 적절하게 연결시킴으로써, 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드를 제공하는 하나 이상의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리펩타이드는, 적어도 본 발명의 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 제공하는 단계, 상기 핵산을 적합한 방식으로 발현시키는 단계 및 본 발명의 발현된 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 일반적으로 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다. 이러한 방법들은, 당업자에게 자명한 자체 공지된 방식으로, 예로 본원에 추가적으로 기술된 방법 및 기법을 토대로 수행할 수 있다.
본 발명의 아미노산 서열에서 출발하여, 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드를 설계/선택 및/또는 제조하는 프로세스는, 또한, 본원에서 본 발명의 상기 아미노산 서열 "포맷팅(formatting)"으로 지칭되며, 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드의 일부를 형성하는 본 발명의 아미노산은, 본 발명의 상기 화합물 또는 폴리펩타이드를 "포맷화"하는 것으로 또는 "의 포맷 형태"인 것으로 지칭된다. 본 발명의 아미노산 서열을 포맷화할 수 있는 방식의 예와, 이러한 포맷의 예들은 본원의 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이며, 이러한 포맷화된 아미노산 서열은 본 발명의 다른 측면을 형성한다.
본 발명의 일 특정 측면에서, 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 폴리펩타이드는, 본 발명의 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, 증가된 반감기를 가질 수 있다. 이러한 화합물 및 폴리펩타이드에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원에 추가적인 설명을 토대로 당업자에게 자명해질 것이며, 예로, 이의 반감기를 증가시키도록 (예, 페길화에 의해) 화학적으로 변형된 본 발명의 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드; 혈청 단백질 (예, 혈청 알부민)에 결합하기 위한 하나 이상의 부가적인 결합부를 포함하는 본 발명의 아미노산 서열; 또는 본 발명의 아미노산 서열의 반감기를 증가시키는 하나 이상의 모이어티 (특히 하나 이상의 아미노산 서열)가 연결된 하나 이상의 본 발명의 아미노산 서열을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드를 포함한다. 이러한 반감기를 연장하는 모이어티 또는 아미노산 서열을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드의 예들은 본원의 추가적인 내용을 토대로 당업자에게 자명해질 것이며; 예로, 비제한적으로, 하나 이상의 혈청 단백질 또는 이의 단편 (예, (인간) 혈청 알부민 또는 이의 적정 단편), 또는 혈청 단백질에 결합할 수 있는 하나 이상의 결합 유닛 (예, 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 또는 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민)과 같은 혈청 단백질, IgG와 같은 혈청 면역글로불린 또는 트랜스페린에 결합할 수 있는 나노바디; 본원의 추가적인 설명 및 언급된 참조 문헌을 참조함)이 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열에 적절하게 연결된 폴리펩타이드; 본 발명의 아미노산 서열이, Fc 단백질 (예, 인간 Fc) 또는 이의 적합한 파트 또는 단편과 연결된, 폴리펩타이드; 또는 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열이, 혈청 단백질에 결합할 수 있는 하나 이상의 소형 단백질 또는 펩타이드에 적절하게 연결된, 폴리펩타이드를 포함한다.
예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 폴리펩타이드는 (본원에 상세히 기술될 수 있으며; 본 발명의 2 이상의 아미노산 서열이 존재하는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있는) 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열과, 하나 이상의 (통상적으로는, 오직 1개, 혈청 알부민 결합 펩타이드인 경우에는 탠덤 반복체일 수 있음) 혈청 알부민 결합 펩타이드 또는 혈청 알부민 결합 도메인 (및 선택적으로, 본원에 상세히 기술된 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛)을 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 화합물 또는 폴리펩타이드에서, "혈청 알부민 결합 펩타이드 또는 결합 도메인"은 (혈청-알부민 결합 펩타이드 또는 결합 도메인이 없는 동일 구조체와 비교하여) 구조체의 반감기를 증가시킬 수 있는 임의의 적합한 혈청-알부민 결합 펩타이드 또는 결합 도메인일 수 있으며, 특히 WO 2008/068280에서 출원인 (특히 WO 2009/127691 및 미공개된 미국 출원 61/301,819의 출원인)에 의해 개시된 혈청 알부민 결합 펩타이드, 또는 혈청 알부민 결합성 면역글로불린 단일 가변성 도메인 (예, 혈청-알부민 결합 나노바디; 예로, Ab-1 또는 Alb-1의 인간화된 버전, 예로 Alb-8, 예로 WO 06/122787을 참조함)일 수 있다. 또한, Alb-11을 사용할 수 있다. 일 구현예에서, Alb-11은 서열번호 841 또는 서열번호 842의 아미노산 서열을 가진다.
반감기와 관련하여, 본 발명에서, 본원에 기술된 다양한 반감기 연장 기법을 이용함으로써 (예로, WO 2008/068280, WO 2009/127691 및/또는 미공개된 미국 출원 61/301,819에 따라 혈청-알부민 결합 펩타이드를 적절하게 선택함으로써), 본 발명의 구조체 또는 폴리펩타이드의 반감기는 의도된 (치료학적 및/또는 진단적) 용도에 적합하게 및/또는 원하는 치료학적 및/또는 약리학적 효과와 가능한 부적절한 부작용 간의 최상의 균형을 달성하기 위해 "맞춤 제작"될 수 있다 (그리고 바람직하다).
일반적으로, 반감기가 증가된 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 본 발명의 대응되는 아미노산 서열 자체의 반감기 보다 적어도 1.5배인, 바람직하게는 적어도 2배인, 예로 적어도 5배인, 예로 적어도 10배인 또는 20배 이상으로 긴 반감기를 가진다. 예를 들어, 반감기가 증가된 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드는, 본 발명의 대응되는 아미노산 서열 자체와 비교하여, 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 보다 바람직하게는 6시간 이상, 예로, 12시간 이상 또는 심지어 24, 48 또는 72시간 이상 긴 반감기를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 상기한 화합물 또는 폴리펩타이드는, 본 발명의 대응되는 아미노산 서열 자체와 비교하여, 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 보다 바람직하게는 6시간 이상, 예로 12시간 이상, 또는 심지어 24, 48 또는 72시간 이상 증가된 혈청 반감기를 가진다.
본 발명의 다른 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 상기한 화합물 또는 폴리펩타이드는, 적어도 약 12시간, 바람직하게는 적어도 24시간, 보다 바람직하게는 적어도 48시간, 보다 더 바람직하게는 적어도 72시간 또는 그 이상인, 혈청 반감기를 인간에서 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드는, 적어도 5일 (예, 약 5 - 10일), 바람직하게는 적어도 9일 (예, 약 9 - 14일), 보다 바람직하게는 적어도 약 10일 (예, 약 10 - 15일), 또는 적어도 약 11일 (예, 약 11 - 16일), 보다 바람직하게는 적어도 약 12일 (예, 약 12 - 18일 또는 그 이상), 또는 14일 이상 (예, 약 약 14 - 19일)의 반감기를 가질 수 있다.
도 6과 서열번호 710 내지 759, 및 도 8과 서열번호 826 내지 837이 본 발명의 폴리펩타이드에 대한 일부 바람직한 예이지만 이들로 한정되지 않으며, 이들 각각이 본 발명의 다른 측면들을 구성한다. 이들 폴리펩타이드들은 모두 반감기 연장을 제공하기 위해 WO 06/122787에 따른 알부민 결합성 나노바디 (Alb-8, 이는 본원에서 Alb-11로도 지칭됨)를 포함한다. 도 8 및 서열번호 826 내지 837의 폴리펩타이드는 빌딩 블럭으로서 본 발명의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 아미노산 서열의 기본이다. 본원에 추가적인 설명을 토대로, 당업자라면, 본원에 기술된 동일하거나 다른 빌딩 블럭을 기초로, 및/또는 다른 모이어티, 결합 도메인, 결합 유닛 또는 반감기 연장을 제공하기 위한 펩타이드를 포함하는, 본 발명의 다른 화합물, 구조체 및/또는 폴리펩타이드를 제공할 수 있을 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 아미노산 서열 (또는 ISV) 또는 본 발명의 폴리펩타이드 (또는 이의 적정 단편)을 코딩하는 핵산에 관한 것이다. 이러한 핵산은 본원에서 "본 발명의 핵산"으로도 지칭될 것이며, 예로 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이 유전자 구조체의 형태일 수 있다. 다른 바람직한 측면에서, 본 발명의 아미노산 (또는 ISV)은 빌딩 블럭으로서 간주된다.
다른 측면에서, 본 발명은, 본 발명의 아미노산 서열을 및/또는 본 발명의 폴리펩타이드를 발현하며 (또는 적정 조건하에 발현할 수 있며); 및/또는 본 발명의 핵산을 포함하는, 숙주 또는 숙주 세포에 관한 것이다. 이러한 숙주 또는 숙주 세포에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예는 본원의 추가적인 설명으로부터 자명해질 것이다.
본 발명은 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 (또는 ISV), 본 발명의 하나 이상의 폴리펩타이드 (또는 이의 적정 단편) 및/또는 본 발명의 하나 이상의 핵산, 및 선택적으로, 예컨대, 조성물의 의도된 용도에 따라, 자체 공지된 조성물의 하나 이상의 다른 구성 성분을, 함유 또는 포함하는 산물 또는 조성물에 관한 것이다. 이러한 산물 또는 조성물은, 예컨대 (본원에 기술된 바와 같이) 약학 조성물, 수의학 조성물, 또는 (본원에 기술된 바와 같이) 진단 용도의 산물 또는 조성물일 수 있다. 이러한 산물 또는 조성물에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
또한, 본 발명은, 시험관내 (예, 시험관내 또는 세포 분석에서) 또는 생체내 (예, 단일 세포 또는 다세포성 유기체, 특히 포유류, 보다 구체적으로 인간, 예로 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애를 앓고 있거나 위험성이 있는 인간)에서 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 조절하는데 있어(하기 위한 방법 또는 조성물에)서의, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드의 용도, 또는 이를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다.
또한, 본 발명은, 시험관내 (예, 시험관내 또는 세포 분석에서) 또는 생체내 (예, 단일 세포 또는 다세포성 유기체, 특히 포유류, 보다 구체적으로 인간, 예로 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애를 앓고 있거나 위험성이 있는 인간)에서 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 조절하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드를 이용하여 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 조절하는데 적합한 양과 방식으로, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드를, 또는 이를 포함하는 조성물을, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 접촉시키는 단계를 적어도 포함한다.
또한, 본 발명은, 시험관내 (예, 시험관내 또는 세포 분석에서) 또는 생체내 (예, 단일 세포 또는 다세포성 유기체, 특히 포유류, 보다 구체적으로 인간, 예로 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애를 앓고 있거나 위험성이 있는 인간)에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 조절하기 위한 조성물 (예, 비제한적으로 본원에 추가적으로 기술된 바와 같은, 약학 조성물 또는 조제물)의 제조에 있어서의, 본 발명의 하나의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 내용에서, "조절하는" 또는 "조절하기 위해"는 일반적으로 적합한 시험관내 분석, 세포성 분석 또는 생체내 분석 (예, 본원에 언급된 분석)을 이용하여 측정되는 바와 같이, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 활성의 저해 또는 감소, 또는 다른 예로, 활성의 증가를 의미한다. 특히, "조절하는" 또는 "조절하기 위해"는, 적합한 시험관내 분석, 세포성 분석 또는 생체내 분석 (예, 본원에 언급된 분석)을 이용하여 측정되는 바와 같이, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드가 존재하지 않는 동일한 조건에서 동일하게 분석하였을 때의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 활성과 비교하여, 적어도 1%, 바람직하게는 적어도 5%, 예로 적어도 10% 또는 적어도 25%, 예로, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 90% 또는 그 이상으로의, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들 조합의 활성의 저해 또는 감소, 또는 다른 예로, 활성의 증가를 의미할 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 또한, "조절하는"은, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드가 존재하지 않는 동일한 조건에서와 비교하여, 이의 타겟, 리간드 또는 기질들 중 하나 이상에 대한 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들 조합의 친화성, 항원-항체 결합성, 특이성 및/또는 선택성 측면에서 (증가 또는 감소일 수 있는) 변화의 발생; 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들 조합이 존재하는 배지 또는 환경(surroundings)에서 한가지 이상의 조건 (예, pH, 이온 세기, 조인자의 존재 등)에 대한 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들 조합의 민감도 (증가 또는 감소일 수 있는) 측면에서의 변화 발생을 포함할 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 이는 본원에 기술된 분석 또는 본원에 인용된 종래 기술과 같이 자체 공지된 임의의 적합한 방식 또는 임의의 적절한 분석을 이용하여, 즉 결정할 수 있다.
또한, "조절하는"은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 (또는 이의 신호 전달 경로 또는 대사 경로 및 이들과 관련된 생물학적 또는 생리학적 작용들과 같이, 이의 기질(들), 리간드(들) 또는 경로(들)이 참여하는) 한가지 이상의 생물학적 기전, 생리학적 기전, 작용, 반응, 기능, 경로 또는 활성에 대한 변화 (즉, 각각 작용제 또는 길항제로서의 활성) 구현을 의미할 수 있다. 다시 말해, 당업자에게 자명한 바와 같이, 상기한 작용제 또는 길항제로서의 작용은 본원에 기술된 분석 또는 본원에 인용된 종래 기술과 같이 자체 공지된 임의의 적합한 방법으로 및/또는 임의의 적합한 (시험관내, 일반적으로 세포성 분석 또는 생체내 분석) 분석을 이용하여 측정할 수 있다. 구체적으로, 작용제 또는 길항제로서의 작용으로, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드가 존재하지 않는 동일 조건에서 동일하게 분석하였을 때의 생물학적 또는 생리학적 활성과 비교하여, 적어도 1%, 바람직하게는 적어도 5%, 예로 적어도 10% 또는 적어도 25%, 예로, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 90% 또는 그 이상으로, 의도한 생물학적 또는 생리학적 활성이 증가 또는 감소될 수 있다.
조절은, 예로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 이의 기질 또는 리간드 중 하나와 결합하는 것을 강하 또는 저해하거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합에 대해 천연 리간드, 기질과 경쟁하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 조절은, 관련된 기전 또는 경로 또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들 조합의 활성화를 포함할 수 있다. 조절은 가역적 또는 비가역적일 수 있지만, 약학적 및 약리학적 목적으로, 통상적으로 가역적인 방식일 것이다.
또한, 본 발명은, 본원에 기술된 아미노산 서열 (또는 ISV), 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물의 제조 또는 생산 방법에 관한 것이다. 이러한 방법에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해지게 될 것이다.
일반적으로, 이러한 방법들은 하기 단계들을 포함할 수 있다:
a) 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션(collection) 또는 라이브러리를 제공하는 단계; 및
b) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있으며 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 친화성을 가지는 아미노산 서열을, 상기 아미노산 서열의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리에서 스크리닝하는 단계;
및
c) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있으며 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성을 가지는 아미노산 서열(들)을 분리하는 단계.
상기한 방법에서, 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 아미노산 서열들로 구성된 임의의 적합한 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, (본원에 기술된 바와 같이) 면역글로불린 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리, 예컨대, 면역글로불린 서열들로 구성된 나이브(naive) 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 면역글로불린 서열들로 구성된 합성 또는 반합성 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 및/또는 친화성 성숙화를 수행한 면역글로불린 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다.
또한, 이러한 방법에서, 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 중쇄 가변성 도메인 (예, VH 도메인 또는 VHH 도메인) 또는 경쇄 가변성 도메인으로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 단일 도메인 항체 또는 도메인 항체로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있거나, 또는 도메인 항체 또는 단일 도메인 항체로서 기능할 수 있는 아미노산 서열 또는 ISV들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다.
이러한 방법에 대한 바람직한 측면에서, 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 예를 들어 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 또는 이의 항원성 파트, 단편, 영역, 도메인, 루프 또는 그외 에피토프 등의, 이를 토대로 한 또는 이로부터 유래된 적정 항원 결정부를 이용하여 적절하게 면역화된, 포유류로부터 유래된 면역글로불린 서열들로 구성된 면역 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다. 일 특정 측면에서, 상기 항원 결정부는 세포외 파트, 영역, 도메인, 루프 또는 기타 세포외 에피토프(들)일 수 있다.
상기 방법들에서, 아미노산 서열들의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 스크리닝을 용이하게 하기 위해, 파지, 파지미드, 리보솜 또는 적정 미생물 (예, 효모) 상에 나열(display)될 수 있다. 아미노산 서열 (의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리)을 나열 및 스크리닝하기 위한, 적합한 방법, 기법 및 숙주 유기체는, 예를 들어, 본원의 추가적인 설명을 토대로 당해 기술 분야의 당업자에게 자명할 것이다. 또한, Hoogenboom in Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 (2005)의 리뷰를 참조한다.
다른 측면에서, 아미노산 서열을 제조하는 방법은 하기 단계들을 적어도 포함한다:
a) 아미노산 서열을 발현하는 세포 콜렉션 또는 샘플을 제공하는 단계;
b) 상기 세포 콜렉션 또는 샘플에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성을 가지는 아미노산 서열을 발현하는 세포를 스크리닝하는 단계; 및
c) (i) 상기 아미노산 서열을 분리하는 단계, 또는 (ii) 상기 세포로부터 상기 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 분리한 다음, 상기 아미노산 서열을 발현시키는 단계.
예를 들어, 바람직한 아미노산 서열이 면역글로불린 서열인 경우, 세포 콜렉션 또는 샘플은 예컨대 B 세포 콜렉션 또는 샘플일 수 있다. 또한, 이러한 방법에서, 세포 샘플은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합으로, 또는 이의 항원 파트, 단편, 영역, 도메인, 루프 또는 기타 에피토프 등의, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 기반으로 하거나 이로부터 유래된 적합한 항원 결정부로 적절하게 면역화된 포유류로부터 유래될 수 있다. 일 특정 측면에서, 상기 항원 결정부는 세포외 파트, 영역, 도메인, 루프 또는 기타 세포외 에피토프(들)일 수 있다.
상기 방법은 당업자에게 자명한 바와 같이 임의의 적합한 방식으로 수행할 수 있다. 예를 들어, EP 0 542 810, WO 05/19824, WO 04/051268 및 WO 04/106377을 참조한다. 단계 b)의 스크리닝 단계는, 바람직하게는 FACS와 같은 유세포 측정 기법을 이용하여 수행한다. 이에 대해서는, 예로, Lieby et al., Blood, Vol. 97, No. 12, 3820 (2001)을 참조한다.
다른 측면에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열의 제조 방법은 적어도 하기 단계들을 포함할 수 있다:
a) 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 제공하는 단계;
b) 상기 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성을 가지는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 스크리닝하는 단계; 및
c) 상기 핵산 서열을 분리한 다음, 상기 아미노산 서열을 발현시키는 단계.
상기한 방법에서, 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 예컨대, 면역글로불린 서열들로 구성된 나이브(naive) 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 면역글로불린 서열들로 구성된 합성 또는 반합성 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 및/또는 친화성 성숙화를 수행한 면역글로불린 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다.
또한, 상기한 방법에서, 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 중쇄 가변성 도메인 (예, VH 도메인 또는 VHH 도메인) 또는 경쇄 가변성 도메인들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩할 수 있다. 예컨대, 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 도메인 항체 또는 단일 도메인 항체들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리, 또는 도메인 항체 또는 단일 도메인 항체로서 기능할 수 있는 아미노산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩할 수 있다.
본 방법의 바람직한 측면에서, 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 예로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합으로, 또는 이의 항원 파트, 단편, 영역, 도메인, 루프 또는 기타 에피토프 등의, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 기반으로 하거나 이로부터 유래된 적정 항원 결정부로 적절하게 면역화된, 포유류로부터 유래되는 핵산 서열들로 구성된 면역 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다. 일 특정 측면에서, 상기 항원 결정부는 세포외 파트, 영역, 도메인, 루프 또는 기타 세포외 에피토프(들)일 수 있다.
핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 예컨대 경쇄 가변성 도메인 또는 중쇄 가변성 도메인들로 구성된 면역 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩할 수 있다. 일 특정 측면에서, 뉴클레오티드 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 VHH 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩할 수 있다.
상기 방법에서, 뉴클레오티드 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 스크리닝을 쉽게 하기 위해, 파지, 파지미드, 리보솜 또는 적정 미생물 (예, 효모) 상에 나열할 수 있다. 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열 (의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리)을 나열 및 스크리닝하기 위한, 적합한 방법, 기법 및 숙주 유기체는 예를 들어 본원의 추가적인 설명을 토대로 당해 기술 분야의 당업자에게 자명할 것이다. 또한, Hoogenboom in Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 (2005)의 리뷰를 참조한다.
다른 측면에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열의 제조 방법은 적어도 하기 단계들을 포함할 수 있다:
a) 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 제공하는 단계;
b) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성을 가지는 아미노산 서열을 코딩하며, 본 발명의 나노바디, 예컨대 서열번호 623 - 693 (표 A-1), 본 발명의 인간화된 나노바디, 또는 본 발명의 폴리펩타이드 또는 구조체에 의해 교차-차단되거나 이에 대해 교차-차단성인, 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 스크리닝하는 단계; 및
c) 상기 핵산 서열을 분리한 다음, 상기 아미노산 서열을 발현시키는 단계.
또한, 본 발명은, 상기 방법들에 의해 수득되거나, 또는 다른 예로 상기 방법들 중 한가지와, 아울러 상기 면역글로불린 서열의 핵산 서열 또는 아미노산 서열을 결정하는 단계 및 상기 아미노산 서열을 자체 공지된 방식으로, 예로 적합한 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서의 발현에 의해 또는 화학적 합성에 의해, 발현 또는 합성하는 단계를 적어도 포함하는 방식에 의해 수득되는 아미노산 서열에 관한 것이다.
또한, 상기 단계들 이후에, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열은 적절하게 인간화 (또는 다른 예로 카멜화)하거나; 및/또는 이렇게 수득되는 아미노산 서열(들)을 서로 또는 하나 이상의 다른 적합한 아미노산 서열과 (선택적으로 하나 이상의 적정 링커를 통해) 연결함으로써, 본 발명의 폴리펩타이드를 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열은 적절하게 인간화 (또는 다른 예로 카멜화)하여, 적절하게 발현시키거나; 및/또는 본 발명의 아미노산 서열을 코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 서로 또는 다른 적합한 아미노산 서열을 코딩하는 하나 이상의 핵산 서열과 (선택적으로 하나 이상의 적정 링커를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 통해) 연결한 다음, 수득되는 뉴클레오티드 서열을 적절하게 발현시켜, 본 발명의 폴리펩타이드를 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물의 이용 및 용도 뿐만 아니라, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 관련된 질환 및 장애의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이다. 일부 바람직하나 비제한적인 이용 및 용도들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
또한, 본 발명은 치료법에 사용하기 위한 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 또한 필요한 개체에게 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체 또는 폴리펩타이드를 (약제학적 유효량으로) 투여함으로써, 예방 또는 치료할 수 있는 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물에 관한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명은 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 기타 측면, 구현예, 이점 및 용도들은, 본 발명의 나노바디 및 이를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드에 대해 보다 상세하게 기술 및 논의할 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이며, 이들은 본 발명의 바람직한 측면들의 일부를 구성한다.
본원의 추가적인 설명으로부터 명확해지게 될 바와 같이, 나노바디는 일반적으로 (개략적으로 기술된) "dAb" 또는 유사한 (단일) 도메인 항체 또는 면역글로불린 서열에 비해 특별한 이점을 제공하며, 이점은 또한 본 발명의 나노바디에 의해 제공된다. 그러나, 하기 내용에 대한 보다 포괄적인 측면들이 본 발명의 다른 아미노산 서열에도 (직접 또는 유사하게) 적용될 수 있음은 당업자들에게 자명할 것이다.
도 1: hIL-17A - hIL-17RA 상호작용 차단에 대한, 알파스크린에서의 클래스 2 나노바디의 IC50 측정 그래프의 예.
도 2: IL-17A로 자극한 HT-1080 세포에서의 IL-6 분비. 0.3 ㎍/mL로, 재조합 인간 IL-17A 및 다양한 농도의 나노바디 또는 참조 화합물 mAb02의 존재시, HT-1080 세포의 IL-6 분비에 대한 대표적인 농도-반응 곡선. 결과들은 평균 IL-6 분비 및 STD로 나타낸다.
도 3: IL-17F로 자극한 HT-1080 세포에서의 IL-6 분비. 4.5 ㎍/mL로, 재조합 인간 IL-17F 및 다양한 농도의 나노바디 또는 참조 화합물 mAb B-E52의 존재시, HT-1080 세포의 IL-6 분비에 대한 대표적인 농도-반응 곡선. 결과들은 평균 IL-6 분비 및 STD로 나타낸다.
도 4: IL-17A/F로 자극한 HT-1080 세포에서의 IL-6 분비. 1.5 ㎍/mL로, 재조합 인간 IL-17A/F 및 다양한 농도의 나노바디 또는 참조 화합물 mAb02의 존재시, HT-1080 세포의 IL-6 분비에 대한 대표적인 농도-반응 곡선. 결과들은 평균 IL-6 분비 및 STD로 나타낸다.
도 5: 클래스 1, 클래스 2, 클래스 3 및 클래스 4에 속하는 나노바디의 아미노산 서열.
도 6: 본 발명의 폴리펩타이드에 대한 바람직하나 비제한적인 일부 예들의 아미노산 서열.
도 7: 본 발명의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 아미노산에 대한 바람직하나 비제한적인 일부 예들의 아미노산 서열.
도 8: 본 발명의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 아미노산 서열을 기초로 한, 본 발명의 폴리펩타이드에 대한 바람직하나 비제한적인 일부 예들의 아미노산 서열.
도 9: 실시예들에 사용된 시약 및 참조 물질들 몇 종에 대한 아미노산 서열들.
도 10: 에피토프 결합 실험의 센서그램(Sensorgram). IL17A를 고정하고, 01A01을 결합시키고, 2차 테스트 나노바디의 결합 (우측 표 참조)을 평가하였다.
도 11: 에피토프 결합 실험의 센서그램. IL17F를 고정하고, 07B11을 결합시키고, 2차 테스트 나노바디의 결합 (우측 표 참조)을 평가하였다.
도 12: IL17MS3086 나노바디, 참조 양성 대조군 mAb02 (A), mAb B-F60 (B), mAb03 (A,B) 또는 음성 나노바디 (ALB11) 또는 항체 (hIgG1) 대조군 (A,B)을 지정된 용량으로 사전에 정맥내 투여한 BALB/c 마우스 5마리로 구성된 그룹들에서의, rhIL-17A (A) 또는 rhIL-17F (B)의 피하 투여 후 혈청내 KC 수준. 결과는 그룹 당 평균 ± SEM으로 나타낸다. 통계적 분석은 일원식 ANOVA와 던네트 사후 검정 (Dunnet's post test)으로 수행하였으며, 유의값을 표시한다 본원에서 사용된 바와 같이, "Alb11"은 인간 혈청 알부민 (HSA)에 특이적으로 결합하는 나노바디를 지칭한다. Alb11 서열을 포함하는 ISV는 연장된 생물 반감기, 즉 반감기 연장 (HLE)를 가진다.
도 13: 시노몰구스 암컷 원숭이에게 각각 2 mg/kg (n=2) 및 6 mg/kg (n=3)?로 1회 정맥내 볼루스 투약하거나 또는 6 mg/kg (n=3)을 1회 피하 투약한 후, 혈청내 IL17MS3086의 평균 농도(n=3이라면, +s.d.)-시간 프로파일.
도 14. 실험 동물의 관절염 점수. 그룹 당 시노몰구스 암컷 원숭이 5-10마리에게 프로인트 완전 보강제 (Freund's complete adjuvant)내에서 II형 소 콜라겐을 2번 피하 감작시키고, IL17MS3086 (2.8 mg/kg 및 10 mg/kg), mAb03 (10 mg/kg) 또는 제형 완충액을 피하로 매주 처리하였다. 양성 대조군으로 다른 그룹 (동물 2마리)에는 토실리주맵 (Tocilizumab)을 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 관절의 관절염을 56일까지 매주 점수를 매겼으며, 평균 ± SEM으로 나타낸다.
도 15. 실험 동물의 혈청 CRP 수준. 그룹 당 시노몰구스 암컷 원숭이 5-10마리에게 프로인트 완전 보강제내에서 II형 소 콜라겐을 2번 피하 감작시키고, IL17MS3086 (2.8 mg/kg 및 10 mg/kg), mAb03 (10 mg/kg) 또는 제형 완충액을 피하로 매주 처리하였다. 양성 대조군으로 다른 그룹 (동물 2마리)에는 토실리주맵을 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 혈청 CRP 수준을 56일까지 매주 측정하여 mg/dL로 기록하였다. 결과는 평균 ± SEM으로 나타낸다.
도 16. 실험 동물 손발의 방사선 평가. 그룹 당 시노몰구스 암컷 원숭이 5-10마리에게 프로인트 완전 보강제내에서 II형 소 콜라겐을 2번 피하 감작시키고, IL17MS3086 (2.8 mg/kg 및 10 mg/kg), mAb03 (10 mg/kg) 또는 제형 완충액을 피하로 매주 처리하였다. 양성 대조군으로 다른 그룹 (동물 2마리)에는 토실리주맵을 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 관절 간격 좁아짐 (Joint space narrowing) 및 위축 (점수 A) (A) 및 뼈 부식 또는 뼈 부식에 의한 골격 관절 파괴 (architectural joint destruction) (점수 B)(B)를 점수 평가하였다. 결과는 각 개체 점수의 평균 ± SEM으로 나타낸다.
도 17. 모든 실험 동물에 대한 조직학적 평가. 그룹 당 시노몰구스 암컷 원숭이 5-10마리에게 프로인트 완전 보강제내에서 II형 소 콜라겐을 2번 피하 감작시키고, IL17MS3086 (2.8 mg/kg 및 10 mg/kg), mAb03 (10 mg/kg) 또는 제형 완충액을 피하로 매주 처리하였다. 양성 대조군으로 다른 그룹 (동물 2마리)에는 토실리주맵을 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 57일째에 부검한 후, 파라핀-포매한 조직을 절편화하여 이를 헤마톡실린-에오신 및 사프라닌-O로 염색하여, 우측 손목뼈와 PIP 관절의 슬라이드 생검을 제작하였다. 관절에서 각 파라미터에 대한 고 등급 발생율%을 나타낸다. 고 등급은 점수의 + 및 2+로 표시하였다.
도 18. 실험 동물의 전체적인 상태 점수. 그룹 당 시노몰구스 암컷 원숭이 5-10마리에게 프로인트 완전 보강제내에서 II형 소 콜라겐을 2번 피하 감작시키고, IL17MS3086 (2.8 mg/kg 및 10 mg/kg), mAb03 (10 mg/kg) 또는 제형 완충액을 피하로 매주 처리하였다. 양성 대조군으로 다른 그룹 (동물 2마리)에는 토실리주맵을 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 사육장의 바에 따라 동물이 이동하고 매달리는 방식으로 검사하여, 표 40에 나타낸 척도에 따라 매주 점수를 매겼다. 결과는 각 그룹에 대한 평균 ± SEM으로 나타낸다.
본 명세서, 실시예들 및 청구항에서:
a) 다르게 기술 또는 정의되지 않은 한, 사용된 모든 용어들은 당업자에게 자명한 당해 기술 분야의 일반적인 의미를 가진다. 예를 들어, WO 08/020079의 46 페이지 a) 단락에서 언급된 표준 교재를 참조한다.
b) 다르게 기술되지 않은 한, 용어 "면역글로불린 서열", "서열", "뉴클레오티드 서열" 및 "핵산"은 WO 08/020079, 46 페이지, 단락 b)에 기술된 바와 같다.
c) 다르게 기술되지 않은 한, 구체적으로 상세하게 기술되지 않은 모든 방법들, 단계들, 기법들 및 조작들은, 당업자에게 자명한 바와 같이, 자체 공지된 방식으로 수행될 수 있으며, 수행되었다. 예를 들어, 본원에 언급된 표준 교재와 일반적인 백그라운드 분야 및 이들에 인용된 추가적인 참조문헌들을 참조하며, 아울러, 예로, 하기 리뷰들을 참조한다: Presta, Adv. Drug Deliv. Rev. 2006, 58 (5-6): 640-56; Levin and Weiss, Mol. Biosyst. 2006, 2(1): 49-57; Irving et al., J. Immunol. Methods, 2001, 248(1-2), 31-45; Schmitz et al., Placenta, 2000, 21 Suppl. A, S106-12, Gonzales et al., Tumour Biol., 2005, 26(1), 31-43. 이들 문헌들에는 친화성 성숙화와 같은 단백질 조작 기법과 면역글로불린과 같은 단백질의 특이성 및 기타 바람직한 특징들을 개선시키는 기타 기법들이 개시되어 있다.
d) 아미노산 잔기들은 표준 3문자 또는 1문자 아미노산 코드로 표시된다. Ablynx N.V.의 표제 "Amino acid sequences directed against IL-6R and polypeptides comprising the same for tbe treatment of diseases and disorders associated with Il-6 mediated signalling"의 국제출원 WO 08/020079, 48페이지, 표 A-2를 참조한다.
e) 2개 이상의 뉴클레오티드 서열을 비교하기 위한 목적으로, 제1 뉴클레오티드 서열과 제2 뉴클레오티드 서열 간의 "서열 동일성" 퍼센트는, WO 08/020079 (본원에 원용에 의해 포함됨), 49페이지, 단락 e)에 기술된 바와 같이, 예컨대, 제2 뉴클레오티드 서열에서의 뉴클레오티드의 - 제1 뉴클레오티드 서열과 비교하여 - 각각의 결손, 삽입, 치환 또는 부가는 하나의 뉴클레오티드 (위치)에서의 차이로서 간주하여, [제1 뉴클레오티드 서열에서, 제2 뉴클레오티드 서열내 대응되는 위치의 뉴클레오티드와 동일한 뉴클레오티드의 수]를 [제1 뉴클레오티드 서열의 뉴클레오티드 총 수]로 나누고 이를 [100%]를 곱함으로써, 또는 WO 08/020079 (본원에 원용에 의해 포함됨), 49페이지, 단락 e)에 기술된 바와 같이 적합한 컴퓨터 알고리즘 또는 기법을 이용하여 계산 또는 결정할 수 있다.
f) 2개 이상의 아미노산 서열을 비교하기 위한 목적으로, 제1 아미노산드 서열과 제2 아미노산 서열 간의 "서열 동일성" (또한, 본원에서 "아미노산 동일성"으로 지칭됨) 퍼센트는 WO 08/020079 (본원에 원용에 의해 포함됨), 49 및 50 페이지, 단락 f)에 기술된 바와 같이, 예컨대, 제2 아미노산 서열에서의 아미노산 잔기의 - 제1 아미노산 서열과 비교하여 - 각 결손, 삽입, 치환 또는 부가는 단일 뉴클레오티드 (위치)에서의 차이, 즉, 본원에 정의된 바와 같이 "아미노산 차이"로서 간주하여, [제1 아미노산 서열에서, 제2 아미노산 서열내 대응되는 위치의 아미노산 잔기와 동일한 아미노산 잔기의 수]를 [제1 아미노산 서열의 아미노산 잔기의 총 수]로 나누고 이를 [100%]를 곱함으로써, 또는 WO 08/020079 (본원에 원용에 의해 포함됨) 49-50페이지, 단락 f)에 기술된 바와 같이 적합한 컴퓨터 알고리즘 또는 기법을 이용하여, 계산 또는 결정할 수 있다.
또한, 2개의 아미노산 서열 간의 서열 동일성의 수준을 결정함에 있어, 당업자는, WO 08/020079의 50페이지에 기술된 바와 같이 소위 "보존적인" 아미노산 치환을 고려할 수 있다.
본원에 기술된 폴리펩타이드에 적용되는 임의의 아미노산 치환은, Schulz et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, 1978에 의해 개발된 여러가지 종들의 상동적인 단백질들 간의 아미노산 변이 빈도 분석, Chou and Fasman, Biochemistry 13: 211, 1974 및 Adv. Enzymol., 47: 45-149, 1978에 의해 개발된 구조 형성 가능성 분석, 및 Eisenberg et al., Proc. Nad. Acad Sci. USA 81: 140-144, 1984; Kyte & Doolittle; J Molec. Biol. 157: 105-132, 198 1, 및 Goldman et al., Ann. Rev. Biophys. Chem. 15: 321-353, 1986에 의해 개발된 단백질에서의 소수성 패턴 분석을 기반으로 할 수 있으며, 상기 문헌들은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 나노바디의 일차, 이차 및 삼차 구조에 대한 정보는 본원의 내용과 상기 인용된 일반적인 백그라운드 분야에서 제공된다. 또한, 이를 위해, 라마 유래 VHH 도메인의 결정 구조는, 예로, Desmyter et al., Nature Structural Biology, Vol. 3, 9, 803 (1996); Spinelli et al., Natural Structural Biology (1996); 3, 752-757; 및 Decanniere et al., Structure, Vol. 7, 4, 361 (1999)에 의해 제공된다. 통상적인 VH 도메인에서 VH/VL 인터페이스를 형성하는 일부 아미노산 잔기들과, 이들 위치에서의 잠재적인 카멜화 치환에 대한 추가적인 정보는, 상기에서 인용된 종래 기술에서 확인할 수 있다.
g) 아미노산 서열 및 핵산 서열이 전체 길이에서 (본원에 기술된 바와 같이) 100% 서열 동일성을 가진다면, 이들은 "실제 동일하다"고 한다.
h) 2개의 아미노산 서열을 비교할 때, 용어 "아미노산 차이"는 제2 서열과 비교하여, 제1 서열의 위치 상에서의 단일 아미노산 잔기의 삽입, 결손 또는 치환을 의미하며, 이는, 2개의 아미노산 서열이 1, 2 또는 그 이상의 상기한 아미노산 차이를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
j) 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열이 다른 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열을 각각 "포함한다" 또는 다른 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열"로 필수적으로 구성된다"라고 하는 경우, 이는 WO 08/020079의 51-52페이지, 단락 i)에 제시된 의미를 가진다.
h) 용어 "본질적으로 분리된 형태"는 WO 08/020079의 52-53페이지, 단락 j)에 제시된 의미를 가진다.
k) 용어 "도메인" 및 "결합 도메인"은 WO 08/020079의 53페이지, 단락 k)에 제시된 의미를 가진다.
l) 용어 "항원 결정부" 및 "에피토프"는 본원에서 상호 호환적으로 사용될 수도 있으며, WO 08/020079의 53페이지, 단락 l)에 제시된 의미를 가진다. 본 발명의 내용에서 에피토프는, 본 발명의 아미노산 서열에 특이적으로 결합할 수 있는 모든 펩타이드 또는 펩타이드-유도체 결정기를 포함한다. 에피토프는, (IL17A 및/또는 IL17F 및/또는 IL17A/F의 선형 서열과 관련하여) 모든 적절한 위치에서, (폴딩된 IL17A 및/또는 IL17F 및/또는 IL17A/F에 대한) 배위(orientation)로, 임의의 적정 수의 아미노산, 또는 이의 단편, 아미노산 조성 (즉, 적어도 부분적으로, 전하)을 포함할 수 있다. 즉, 예를 들어, 에피토프는, IL17A 및/또는 IL17F 및/또는 IL17A/F의 일차 서열과 관련하여 하나 이상의 연속 또는 비연속적인 위치들에 존재하는, 약 3-10개, 전형적으로 3-8개의 아미노산으로 구성될 수 있다 (예컨대, 에피토프는 CD38에서 1, 2, 3, 4 또는 5곳의 비연속적인 위치들에 분포된 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 잔기들로 필수적으로 구성될 수 있음). 다른 예로, 에피토프는, IL17A 및/또는 IL17F 및/또는 IL17A/F에서 (단독으로 또는 인전합 CD38 도메인의 일부와 조합하여) 약 5-40개의 인접한 아미노산 잔기들 (예, 아미노산 잔기 약 7-30개, 약 5-20개, 또는 약 3-15개)로 구성된 영역으로 규정되는 것으로 간주할 수 있다. 일부 에피토프들에서는, 단지 아미노산 잔기 1개 또는 단지 몇개의 아미노산 잔기만이 CDR 또는 CDR(들) 인지에 결정적인 (그래서, 항원 친화성 및 항원-항체 결합성에서는, IL17A 및/또는 IL17F 및/또는 IL17A/F에 결합하는데 가장 중요한) 경우일 수도 있다. 이처럼, 에피토프는 이러한 결정적인 잔기들 중 하나 이상의 토대로 특정될 수 있으며, 다른 잔기들은 이 에피토프에 대한 기여도가 약간 낮을 수 있음을 인지할 수 있다. 아미노산들의 영역에 의해 규정되는 에피토프의 경우, 상기 영역내 하나 이상의 아미노산 서열이 항원 결합에 최소한 또는 심지어 무시가능한 수준으로만 기여하여, 그러한 잔기들은 특이적인 본 발명의 적어도 일부 아미노산 서열들에 대한 에피토프의 "상실"이 발생되지 않게 하면서, 적절한 다른 잔기로 치환시킬 수도 있다.
m) WO 08/020079의 53페이지, 단락 m)에 추가적으로 기술된 바와 같이, 특이적인 항원 결정부, 에피토프, 항원 또는 단백질 (또는 이의 적어도 하나의 파트, 단편 또는 에피토프)에 대해 (특이적으로) 결합할 수 있거나, 이에 대해 친화성을 가지거나, 및/또는 이에 대해 특이성을 가지는, 아미노산 서열 (예, 본 발명의 나노바디, 항체, 폴리펩타이드, 또는 일반적으로 항원 결합성 단백질 또는 폴리펩타이드, 또는 이의 단편)은, 상기 항원 결정부, 에피토프, 항원 또는 단백질"에 대한 (against)"것이나 또는 "을 겨냥하는 (directed ahainst)" 것으로 칭해진다.
n) 용어 "특이성"은 WO 08/020079의 53-56페이지 단락 n)에 제시된 의미를 가지며; 상기 문헌에서 언급된 바와 같이, 특정 항원-결합성 분자 또는 항원-결합성 단백질 (예, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩타이드) 분자가 결합할 수 있는 다수의 여러가지 타입의 항원 또는 항원 결정부를 지칭한다. 본 발명의 아미노산 서열에서 이러한 결합 특성은 때때로 본 문헌에서 "특이적인 결합"으로도 언급된다. 용어 "특이적인 결합"이 본 문헌에 어느 부분에 있든지, 타겟에 결합하는 본 발명의 아미노산 서열의 결합 특성은 본 단락에 설명된 이러한 특이성을 발휘한다는 것을 의미한다. 항원-결합성 단백질의 특이성은, WO 08/020079 (원용에 의해 본 명세서에 포함됨)의 53-56페이지에 기술된 바와 같이, 친화성 및/또는 항원-항체 결합성을 토대로 결정할 수 있으며, 상기 문헌에는 또한 항원-결합성 분자 (예, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩타이드)와 관련(pertinent) 항원 간의 결합성을 측정하기 위한 바람직한 기법들 몇가지가 기술되어 있다. 전형적으로, 항원-결합성 단백질 (예, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 및/또는 폴리펩타이드)은 해리 상수 (KD) 10-5 - 10-12 mole/L 이하, 바람직하게는 10-7 - 10-12 mole/L 이하, 보다 바람직하게는 10-8 - 10-12 mole/L (즉, 조합 상수 (KA) 105 - 1012 L/mole 이상, 바람직하게는 107 - 1012 L/mole 이상, 보다 바람직하게는 108 - 1012 L/mole)로 이의 항원에 결합할 것이다. > 104 mol/L인 임의의 KD 값 (또는 임의의 KA 값 < 104 M-1) L/mol은, 일반적으로, 비-특이적인 결합을 의미하는 것으로 간주된다. 바람직하게는, 본 발명의 일가 면역글로불린 서열은, 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 예로 500 pM 미만의 친화성으로 바람직한 항원에 결합할 것이다. 항원 또는 항원 결정부에 대한 항원-결합성 단백질의 특이적인 결합은, 예로, 스캐차드 분석 및/또는 경쟁적인 결합 분석, 예로 방사성면역분석 (RIA), 효소 면역분석 (EIA) 및 샌드위치 경쟁 분석 등의 자체 공지된 임의의 적합한 방식으로, 및 당해 기술 분야에 자체 공지된 이의 여러가지 변형된 방법; 뿐만 아니라 본원에 언급된 다른 기법으로 결정할 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 그리고 WO 08/020079의 53-56페이지에 기술된 바와 같이, 해리 상수는 실측 또는 대략적인(apparent) 해리 상수일 수 있다. 해리 상수를 결정하는 방법은 당업자에게 자명할 것이며, WO 08/020079의 53-56페이지에 기술된 기법을 예로 포함한다.
o) 본 발명의 아미노산 서열, 화합물 또는 폴리펩타이드의 반감기는, WO 08/020079의 57페이지, o) 단락과 상기 문헌에 언급된 바와 같이, 일반적으로 규정할 수 있으며, 혈청내 아미노산 서열, 화합물 또는 폴리펩타이드의 농도가 생체내에서, 예로, 서열 또는 화합물의 분해 및/또는 천연적인 기전에 의한 서열 또는 화합물의 소거 또는 격리로 인해, 50%로 감소되는데 걸리는 시간을 의미한다. 본 발명의 아미노산 서열, 화합물 또는 폴리펩타이드의 생체내 반감기는, 약동학적 분석에 의해서와 같이 자체 공지된 임의 방식으로 결정할 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자들에게는 적합한 기법들이 자명할 것이며, 일반적으로 예로, WO 08/020079 57페이지 o) 단락에 기술된 바와 같을 수 있다. 또한, WO 08/020079 57페이지 o) 단락에 언급된 바와 같이, 반감기는 t1/2-alpha, t1/2-beta 및 곡선하 면적 (AUC) 등의 파라미터를 이용하여 표시할 수 있다. 예를 들어, 하기 실험 부분과, 표준 교재, 예컨대 Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists and Peters et al, Pharmacokinete analysis: A Practical Approach (1996)를 참조한다. 또한, "Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982)을 참조한다. 용어 "반감기 증가" 또는 "증가된 반감기"는 또한 WO 08/020079, 57페이지, o) 단락에서와 같이 정의되며, 특히, t1/2-alpha 및/또는 AUC 또는 둘다의 증가를 수반하거나 수반하지 않는 t1/2-beta의 증가를 의미한다.
p) 본 발명의 내용에서, "조절하는" 또는 "조절하기 위해"는 일반적으로 적합한 시험관내, 세포성 또는 생체내 분석을 이용하여 측정된 바와 같이, 타겟 또는 항원의 활성의 저해 또는 감소, 또는 다른 예로 활성의 증가를 의미한다. 특히, "조절하는" 또는 "조절하기 위해"는, 적합한 시험관내, 세포성 또는 생체내 분석 (이는 통상적으로 사용되는 타겟 또는 항원에 따라 결정됨)을 이용하여 측정된 바와 같이, 본 발명의 구조체가 존재하지 않는 것을 제외하고는 동일한 조건에서 동일하게 분석한 타겟 또는 항원의 활성과 비교하여, 적어도 1%, 바람직하게는 적어도 5%, 예로 적어도 10% 또는 적어도 25%, 예로, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 90% 또는 그 이상으로의, 타겟 또는 항원의 활성의 저해 또는 감소, 또는 다른 예로 (해당 또는 의도한) 생물학적 활성의 증가를 의미할 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 또한, "조절하는"은, 본 발명의 구조체가 존재하지 않는 것을 제외하고는 동일한 조건에서 비교하여, 이의 리간드, 결합 파트너, 동형다량체 또는 이형다량체 형태로 조합하는 파트너, 또는 기질들 중 하나 이상에 대한 타겟 또는 항원의 친화성, 항원-항체 결합성, 특이성 및/또는 선택성 측면에서 (증가 또는 감소일 수 있는) 변화 발생; 및/또는 타겟 또는 항원이 존재하는 배지 또는 환경(surroundings)에서의 한가지 이상의 조건 (예, pH, 이온 세기, 조인자의 존재 등)에 대한 상기 타겟 또는 항원의 민감도 (증가 또는 감소일 수 있는) 측면에서의 변화 발생을 포함할 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 이는 참여하는 타겟 또는 항원에 따라, 임의의 적정 방식 및/또는 자체 공지된 임의의 적절한 분석을 이용하여 결정할 수 있다.
또한, "조절하는"은, 타겟 또는 항원 (또는 이의 신호 전달 경로 또는 대사 경로 및 이와 조합된 생물학적 또는 생리학적 작용들과 같이, 이의 기질(들), 리간드(들) 또는 경로(들))이 참여하는 한가지 이상의 생물학적 기전, 생리학적 기전, 작용, 반응, 기능, 경로 또는 활성에 대한 변화 (즉, 타겟 또는 항원 및 바람직한 생물학적 또는 생리학적 효과에 따라 각각 작용제, 길항제 또는 역 작용제로서의 활성) 발생을 의미할 수 있다. 다시 말해, 당업자에게 자명한 바와 같이, 상기한 작용제 또는 길항제로서의 작용은, 참여하는 타겟 또는 항원에 따라, 임의의 적합한 방법으로 및/또는 자체 공지된 임의의 적합한 (시험관내, 일반적으로 세포성 또는 분석에서) 분석을 이용하여 측정할 수 있다. 구체적으로, 작용제 또는 길항제로서의 작용은, 본 발명의 구조체가 존재하지 않는 것만 제외하고는 동일 조건에서 동일하게 분석하였을 때의 생물학적 또는 생리학적 활성과 비교하여, 적어도 1%, 바람직하게는 적어도 5%, 예로 적어도 10% 또는 적어도 25%, 예로, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 90% 또는 그 이상으로, 의도한 생물학적 또는 생리학적 활성이 증가 또는 감소되게 하는 것일 수 있다.
또한, 조절은 타겟 또는 항원의 알로스테릭 조절; 및/또는 타겟 또는 항원의 이의 기질 또는 리간드 중 하나와의 결합 감소 또는 저해, 및/또는 타겟 또는 항원에 대한 천연 리간드, 기질과의 경쟁을 포함할 수 있다. 조절은, 또한, 이것이 참여하는 기전 또는 경로, 또는 타겟 또는 항원의 활성화를 포함할 수 있다. 조절은, 항원 또는 타겟의 폴딩 또는 컨퍼메이션에 있어서의 변화 발생, 또는 타겟 또는 항원의 폴딩 능력, 이의 컨퍼메이션 (예, 리간드의 결합시) 변화력, 다른 (서브)유닛과의 조합력, 또는 해리력에 있어서의 변화 발생을 포함할 수 있다. 또한, 조절은, 예컨대, 타겟 또는 항원의 다른 화합물들에 대한 (예, 이온) 채널로서 제공하거나 또는 다른 화합물을 수송하는 능력에서의 변화 발생을 포함할 수 있다.
조절은 가역적이거나 비가역적일 수 있지만, 약제학적 및 약리학적 목적에서는 가역적인 방식이 일반적일 것이다.
q) 타겟 또는 항원과 관련하여, 타겟 또는 항원 상의 용어 "상호작용 부위"는, 리간드, 수용체 또는 기타 결합 파트너에 대한 결합 부위, 촉매 부위, 절단 부위, 알로스테릭 상호작용을 위한 부위, 타겟 또는 항원의 다량체화 (예, 동형중합 또는 이형이량체화)에 참여하는 부위인, 타겟 또는 항원 상의 부위, 에피토프, 항원 결정부, 파트, 도메인 또는 아미노산 잔기들로 구성된 가닥; 또는 타겟 또는 항원의 생물학적 작용 또는 기전에 관여하는 타겟 또는 항원 상의 임의의 기타 부위, 에피토프, 항원 결정부, 파트, 도메인 또는 아미노산 잔기들로 구성된 가닥을 의미한다. 보다 일반적으로, "상호작용 부위"는 본 발명의 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 결합하여, 항원 또는 타겟 (및/또는 타겟이나 항원이 참여하는 임의의 경로, 상호작용, 신호 전달, 생물 기전 또는 생물학적 효과)을 (본원에 기술된 바와 같이) 조절할 수 있는, 타겟 또는 항원 상의 임의의 부위, 에피토프, 항원 결정부, 파트, 도메인 또는 아미노산 잔기로 구성된 가닥일 수 있다.
r) 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드는, 적어도 10배, 예로, 적어도 100배, 바람직하게는 적어도 1000배 및 최대 10000배의 친화성 (전술한 바와 같이, KD-값, KA-값, Kon-속도 및/또는 koff-속도로 적절하게 측정 및/또는 표시됨)으로, 또는 상기 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 제2 타겟 또는 폴리펩타이드에 결합하는 친화성 보다 높은 친화성으로 제1 항원에 결합할 때, 제2 항원 또는 타겟과 비교하여, 제1 타겟 또는 항원에 "특이적이다"라고 한다. 예를 들어, 제1 항원은, 상기 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 제2 타겟 또는 폴리펩타이드에 결합하는 KD 보다, 적어도 10배 미만, 예로, 적어도 100배 미만, 바람직하게는 적어도 1000배 미만, 예로, 10000배 미만인 KD로, 타겟 또는 항원에 결합할 수 있다. 바람직하게는, 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 제2 타겟 또는 항원에 비해 제1 항원 또는 타겟에 "특이적"인 경우, 이는 (본원에 정의된 바와 같이) 상기 제1 타겟 또는 항원을 겨냥하며, 상기 제2 타겟 또는 항원은 겨냥하지 않는다.
s) 용어 "교차-차단", "교차-차단된" 및 "교차-차단성"은 본원에서 상호 호환적으로 사용되며, 본 발명의 다른 아미노산 서열 또는 결합 물질이 소정의 타겟에 결합하는 것을 간섭할 수 있는, 아미노산 서열 또는 기타 결합 물질 (예, 본 발명의 나노바디, 폴리펩타이드, 화합물 또는 구조체)의 간섭 능력을 의미한다. 본 발명의 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질이, 타겟에 다른 것이 결합하는 것을 방해할 수 있는 수준은, 즉, 본 발명에 따른 교차-차단이라 할 수 있는 것은, 경쟁적인 결합 분석을 이용하여 확인할 수 있다. 특히 적합한 정량적인 교차-차단성 분석은 표면 플라스몬 공명 기법을 이용한 상호작용 정도를 측정할 수 있는 Biacore 장치를 이용한다. 다른 적절한 정량적인 교차-차단 분석에서는 타겟에 대한 결합 측면에서 아미노산 서열들간 또는 다른 결합 물질들 간의 경쟁성을 측정하기 위해 ELISA 기반의 분석을 이용한다.
아래에서는, 일반적으로 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질이 교차-차단하거나 또는 본 발명에 따라 교차-차단할 수 있는지를 결정하기 위한, 적합한 Biacore 분석을 설명한다. 본 분석은 본원에 기술된 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질들 중 임의의 것과 함께 사용할 수 있을 것으로 이해된다. Biocaore 장치 (예, Biacore 3000)는 제조사의 권고안에 따라 작동시킨다. 즉, 교차-차단 분석에서, 타겟 단백질을 표준 아민 커플링 화학법을 이용하는 CM5 Biacore 칩과 커플링하여, 타겟으로 코딩된 표면을 제작한다. 전형적으로, 타겟의 200 - 800 공명 단위 (쉽게 측정가능한 결합 수준을 제공하지만 사용되는 테스트 물질의 농도로 쉽게 포화가능한 양)이 칩에 커플링될 것이다. 서로 교차-블록하는 능력을 분석할 2가지 아미노산 서열 (A* 및 B*로 지칭됨)들을 적정 완충액 중에서 결합부 몰비 1:1로 혼합하여, 테스트 혼합물을 만든다. 결합부를 기준으로 농도를 계산할 때, 아미노산 서열의 분자량은 아미노산 서열의 총 분자량을 아미노산 서열의 타겟 결합부의 수로 나누어 추산한다. 테스트 혼합물에서 각 아미노산 서열의 농도는 Biacore 칩에 포획된 타겟 분자의 상기 아미노산 서열에 대한 결합부를 쉽게 포화할만큼 매우 충분하여야 한다. 혼합물내 아미노산 서열들은 (결합성을 기준으로) 동일한 몰 농도이며, 농도는 전형적으로 (결합부를 기준으로) 1.00 및 1.5 마이크로몰일 것이다. 또한 A* 단독 및 B* 단독 함유 용액을 각각 제조하였다. 이들 용액내 A*와 B*는 동일한 완충액내에서 테스트 혼합물과 동일한 농도이어야 한다. 테스트 혼합물을 타겟으로 코팅된 Biacore 칩 상을 통과시키고, 총 결합량을 기록한다. 그런 후, 칩을 이런 방식으로 처리하여, 칩에 결합된 타겟에는 손상없이 결합된 아미노산 서열을 탈착시킨다. 전형적으로, 이는 칩을 60초간 30 mM HCl로 처리함으로써 수행한다. 그런 후, A* 단독 용액을 타겟-코팅된 표면 상으로 통과시키고, 결합량을 기록한다. 다시 칩에 처리하여, 칩에 결합된 타겟에는 손상없이 결합된 아미노산 서열들을 모두 탈착시킨다. 이후, B* 단독 용액을 타겟-코팅된 표면 상으로 통과시키고, 결합량을 기록한다. A* 및 B* 혼합물의 이론적인 최대 결합성을 계산하며, 이는 타겟 표면을 따라 통과시켰을 때 각 아미노산 서열의 결합성의 총합이다. 혼합물의 실제 기록된 결합성이 이 이론 최대값 보다 낮다면, 2가지 아미노산 서열들은 서로 교차-차단성이다. 즉, 일반적으로, 본 발명에 따른 교차-차단성 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질은 상기 Biacore 교차-차단성 분석에서 타겟에 결합하게 될 것이며, 본 발명의 제2 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질의 존재 하에 분석 시, 기록되는 결합성은, 2가지 아미노산 서열들 또는 결합 물질들의 조합에서의, (앞서 정의된 바와 같이) 이론적인 최대 결합성의 80% 내지 0.1% (예, 80% 내지 4%), 특히 이론적인 최대 결합성의 75% 내지 0.1% (예, 75% 내지 4%), 보다 구체적으로는 이론적인 최대 결합성의 70% 내지 0.1% (예, 70% 내지 4%)일 것이다. 전술한 Biacore 분석은, 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질이 본 발명에 따라 서로 교차-차단하는지를 확인하는데 사용되는 일차 분석이다. 드물게는, 특정 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질들이 CM5 Biacore 칩에 아민 화합물을 통해 커플링된 타겟에 결합하지 않을 수 있다 (이는, 타겟의 해당 결합부가 마스킹되거나 칩에 커플링되어 파괴된 경우에 보통 발생됨). 이러한 경우, 교차-차단성은 타겟의 테깅된 버전, 예컨대 N-말단 His-테깅 버전을 이용하여 결정할 수 있다. 이러한 특수 포멧으로, 항-His 아미노산 서열을 Biacore 칩에 커플링시킨 다음, His-테깅된 타겟을 칩 표면 위로 통과시켜 항-His 아미노산 서열로 포착하게 될 것이다. 이러한 교차 차단 분석은, 각 칩 재생 사이클 다음에, 새로운 His-테깅된 타겟을 항-His 아미노산 서열로 코팅된 표면으로 다시 로딩하는 것을 제외하고는, 기본적으로 전술한 바와 같이 수행한다. N-말단 His-테깅된 타겟을 이용하는 제공된 예 외에도, C-말단 His-테깅된 타겟을 다른 예로 사용할 수 있다. 아울러, 당해 기술 분야에 공지된 다양한 다른 테그 및 테그 결합 단백질 조합물을 이러한 교차-차단 분석 (예, HA 테그와 항-HA 항체; FLAG 테그와 항-FLAG 항체; 바이오틴 테그와 스트렙타비딘)에 이용할 수 있다.
하기에서는 일반적으로 타겟을 겨냥하는 아미노산 서열 또는 다른 결합 물질이 본원에 정의된 바와 같이 교차-차단하거나 또는 교차-차단할 수 있는지를 확인하기 위한 ELISA 분석을 기술한다. 본 분석에 본원에 기술된 임의의 아미노산 서열 (또는 본 발명의 폴리펩타이드 등의 다른 결합 물질)과 함께 사용할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 일반적인 분석 원리는 ELISA 플레이트의 웰에 코팅된 타겟을 겨냥하는 아미노산 서열 또는 결합 물질을 가지는 것이다. 제2의 잠재적인 교차-차단성 (즉, ELISA 플레이트에 결합하지 않는) 항-타겟 아미노산 서열을 과량으로 용액에 첨가한다. 그런 후, 웰에 타겟을 제한된 양으로 첨가한다. 코팅된 아미노산 서열과 용액 중의 아미노산 서열은 제한된 수의 타겟 분자와 결합에 대해 경쟁한다. 플레이트을 세척하여, 코팅된 아미노산 서열에 결합되지 않은 과잉의 타겟을 제거하고, 또한 제2의 액상 아미노산 서열 뿐만 아니라 제2의 액상 아미노산 서열 및 타겟 간에 형성된 임의의 복합체들을 제거한다. 그런 후, 결합된 타겟의 양을 타겟을 검출하는데 적합한 시약을 이용하여 측정한다. 코팅된 아미노산 서열을 교차-차단할 수 있는 용액 중의 아미노산 서열은, 코팅된 아미노산 서열이 제2의 액상 아미노산 서열의 부재시에 결합할 수 있는 타겟 분자의 수에 대한, 코팅된 아미노산 서열이 결합할 수 있는 타겟 분자의 수적 감소를 유발할 수 있을 것이다. 제1 아미노산 서열, 예컨대 Ab-X를 고정된 아미노산 서열로 선정하는 경우, ELISA 플레이트의 웰에 코팅한 다음, 플레이트를 후속적으로 첨가되는 물질의 비특이적인 결합을 최소화하기 위해 적정 차단 용액으로 블록킹한다. 그런 후, 제2 아미노산 서열, 예컨대 Ab-Y를, 웰 당 Ab-Y 타겟 결합부의 몰 수가 ELISA 플레이트의 코팅시에 웰 당 사용되는 Ab-X 타겟 결합부의 몰 수 보다 적어도 10배 높도록, 과량으로 ELISA 플레이트에 첨가한다. 그런 다음, 웰 당 첨가되는 타겟의 몰 수가 각 웰 코팅에 사용되는 Ab-X 타겟 결합부의 몰 수 보다 적어도 25배 낮도록, 타겟을 첨가한다. 적정 인큐베이션 기간이 지난 후, ELISA 플레이트를 세척하고, 타겟을 검출하기 위한 시약을 첨가하여 코팅된 항[타겟 아미노산 서열 (이 경우, Ab-X)에 특이적으로 결합된 타겟의 양을 측정한다. 이 분석의 백그라운드 신호는 코팅된 아미노산 서열 (이 경우에는, Ab-X), 제2 액상 아미노산 서열 (이 경우, Ab-Y), 타겟 완충액 단독 (즉, 타겟 비존재) 및 타겟 검출 시약이 든 웰에서 입수한 신호로서 정해진다. 본 분석의 양성 대조군 신호는 코팅된 아미노산 서열 (이 경우에는, Ab-X), 제2 액상 아미노산 서열 완충액 단독 (즉, 제2의 액상 아미노산 서열 비존재), 타겟 및 타겟 검출 시약이 든 웰에서 입수한 신호로서 정해진다. ELISA 분석은 양성 대조군 신호가 백그라운드 신호 대비 적어도 6배이게 하는 방식으로 수행할 수 있다. 코팅 아미노산 서열로서 사용하기 위한 아미노산 서열 선정과 제2 (경쟁자) 아미노산 서열로서 사용하기 위한 아미노산 서열 선정에 따라 발생되는 모든 노이즈 (예, 타겟에 대한 Ab-X와 Ab-Y간의 유의하게 상이한 친수성)를 피하기 위해, 교차-차단 분석은, 1) Ab-X가 ELISA 플레이트에 코팅하는 아미노산 서열이고, Ab-Y가 용액 중의 경쟁자 아미노산 서열인, 포멧 1, 및 2) Ab-Y가 ELISA 플레이트에 코팅하는 아미노산 서열이고, Ab-X가 용액 중의 경쟁자 아미노산 서열인, 포멧 2인, 2가지 포켓으로 수행될 수 있다. Ab-X와 Ab-Y는, 포멧 1 또는 포멧 2에서, 액상 항-타겟 아미노산 서열이, 액상 항-타겟 아미노산 서열의 부재시 수득되는 타겟 검출 신호 (즉, 양성 대조군 웰)와 비교하여, 타겟 검출 신호 {즉, 코팅된 아미노산 서열에 결합되는 타겟의 양}의 60% 내지 100%, 특히 70% 내지 100%, 보다 구체적으로는 80% 내지 100% 감소를 유발할 수 있다면, 교차-차단성인 것으로 정의된다.
t) 다른 항원들 또는 항원들에 (본원에 정의된 바와 같이) 특이적이라면, 아미노산 서열은 이들 2종의 다른 항원 또는 항원 결정기 (예, 2종의 다른 포유류로부터 유래된 혈청 알부민, 예컨대, 인간 혈청 알부민 및 시노 혈청 알부민)에 "교차-반응성"이라고 한다.
u) "기본적으로 pH 독립적인"은, 일반적으로, (본원에 상세히 기술된 바와 같이) 동물 또는 인간 신체의 세포에서 조성된 pH 값(들)에서, 혈청 단백질 (예, 혈청 알부민)에 대한 아미노산 서열의 결합 상수 (KA)가, 상기 세포외에서 형성된 pH 값(들)에서의 동일 혈청 단백질에 대한 아미노산 서열의 조합 상수 (KA)의 적어도 5%, 예로, 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 25%, 더 바람직하게는 적어도 50%, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%, 예로, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 예로, 적어도 80% 또는 90% 또는 그 이상 (또는 100% 이상, 예로, 110% 이상, 120% 이상 또는 심지어 130% 이상, 또는 150% 이상, 200% 이상)이라는 의미이다. 다른 예로, "기본적으로 pH 독립적인"은, 일반적으로, (본원에 상세히 기술된 바와 같이) 동물 또는 인간 신체의 세포에서 형성되는 pH 값(들) (예, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 예컨대, pH 약 5.5, 예로, 5.3 - 5.7)에서, 혈청 단백질 (예, 혈청 알부민)에 대한 아미노산 서열의 (Biacore로 측정되는) koff 속도가, 상기 세포외에서 형성된 pH 값(들), 예컨대, pH 7.2 내지 7.4에서의 동일 혈청 단백질에 대한 아미노산 서열의 koff 속도의 적어도 5%, 예로, 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 25%, 더 바람직하게는 적어도 50%, 보다 더 바람직하게는 적어도 60%, 예로, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 예로, 적어도 80% 또는 90% 또는 그 이상 (또는 100% 이상, 예로, 110% 이상, 120% 이상 또는 심지어 130% 또는 그 이상, 또는 150% 이상, 또는 200% 이상)이라는 의미이다. "동물 또는 인간 신체의 세포에서 형성되는 pH 값(들)"은, 세포 내부에 형성될 수 있는, 특히, 혈청 단백질의 재순환에 참여하는 세포 내부에 형성될 수 있는 pH 값(들)을 의미한다. 특히, "동물 또는 인간 신체의 세포에서 형성되는 pH 값(들)"은, 엔도좀(endosome), 리소좀(lysosome) 또는 피노좀(pinosome) 등의, 혈청 단백질의 재순환에 참여하는 (서브)세포 구획 또는 소낭 (예, 피노사이토시스, 엔도사이토시스, 트랜스사이토시스, 엑소사이토시스 및 파고사이토시스, 또는 유사한 세포 흡수 또는 내재화 기전의 결과로서) 내부에 형성될 수 있는 pH 값(들)을 의미한다.
v) 본원에 추가적으로 기재된 바와 같이, 나노바디에서 아미노산 잔기의 총 수는 110 - 120 범위일 수 있으며, 바람직하게는 112-115, 가장 바람직하게는 113이다. 그러나, 나노바디의 (본원에 추가적으로 기재된 바와 같이) 파트, 단편, 유사체 또는 유도체는, 이들 파트, 단편, 유사체 또는 유도체가 본원에 개괄된 추가적인 요건들을 충족시키고, 바람직하게는 본원에 기술된 목적에 부합되는 한, 그 길이 및/또는 크기로 구체적으로 한정되지 않음에 유념하여야 한다.
w) WO 08/020079 (본원에 원용에 의해 포함됨)의 58-59페이지, 단락 q)에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 나노바디의 아미노산 잔기는, Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1-2): 185-195 (예, 본 공개문헌의 도 2 참조)의 논문에서 카멜리드 유래 VHH 도메인에 적용되는 바와 같이, Kabat et al. ("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91)에 의해 제시된 VH 도메인에 대한 일반적인 번호 지정법에 따라 번호가 지정되며, 따라서, 나노바디의 FR1은 1-30번 위치의 아미노산 잔기들을 포함하며, 나노바디의 CDR1은 31-35번 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 나노바디의 FR2는 36-49번 위치의 아미노산 잔기들을 포함하며, 나노바디의 CDR2는 50-65번 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 나노바디의 FR3는 66-94번 위치의 아미노산 잔기들을 포함하며, 나노바디의 CDR3는 95-102번 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 나노바디의 FR4는 103-113번 위치의 아미노산 잔기들을 포함한다.
x) 도면, 서열목록 및 실험 부분/실시예들은 본 발명을 추가적으로 예시하기 위해 제공된 것일 뿐, 본원에서 다르게 명시적으로 기술되지 않은 한, 본 발명의 범위 및/또는 첨부된 청구항의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 해석 또는 이해되어서는 안된다.
중쇄 항체과 이의 가변성 도메인에 대한 일반적인 설명을 위해, 본원에 인용된 종래 기술 뿐만 아니라 WO 08/020079의 59페이지에 언급된 종래 기술과 국제 출원 WO 06/040153의 41-43 페이지에 언급된 참조문헌 리스트를 특히 참조하며, 종래 기술과 참조문헌들은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
당해 기술 분야에서 사용되는 용어에 따라 (상기 참조문헌 참조), 천연 중쇄 항체에 존재하는 가변성 도메인은, 또한, 통상적인 4-쇄 항체들에 존재하는 중쇄 가변성 도메인 (본원에서 이하 "V H 도메인"으로 언급됨)과 통상적인 4-쇄 항체에 존재하는 경쇄 가변성 도메인 (본원에서 이하 "V L 도메인"으로 언급됨)과 이를 구분하기 위해 "V HH 도메인"으로서 언급될 것이다.
전술한 종래 기술에서 언급된 바와 같이, VHH 도메인은 다수의 독특한 구조적 특징과 기능적 특성을 가져, 분리된 VHH 도메인 (뿐만 아니라 이를 토대로한 나노바디, 이는 천연 VHH 도메인과 구조적 특징들과 기능적 특성들을 공유함) 및 이를 포함하는 단백질을 기능성 항원-결합성 도메인 또는 단백질로서 사용하는데 매우 유용해진다. 특히, 이로 한정되지 않으나, VHH 도메인 (경쇄 가변성 도메인 없이, 그리고 경쇄 가변성 도메인과의 어떠한 상호작용 없이, 항원에 기능적으로 결합하는 특성으로 인해 "지칭되어짐") 및 나노바디는, 단일의, 상대적으로 작고, 기능적인 항원-결합성 구조 유닛, 도메인 또는 단백질로서 기능할 수 있다. 이런 점이, VHH 도메인을 일반적인 4-쇄 항체들의 VH 및 VL 도메인들과 구분시켜주며, 그 자체는 일반적으로 단일 항원-결합성 단백질 또는 도메인으로서의 실무적인 적용에는 적합하지 않아, 기능적인 항원-결합 유닛을 제공하기 위해서는 일정 형태로 조합되거나 또는 다른 것과 조합되어야 한다 (예, Fab 단편과 같은 통상적인 항체 단편; ScFv 단편에서, VL 도메인과 공유 결합으로 연결된 VH 도메인으로 구성됨).
이러한 독특한 특성으로 인해, 단일 항원-결합성 단백질로서 또는 항원-결합성 도메인 (즉, 더 큰 단백질 또는 폴리펩타이드의 일부로서)으로서의 VHH 도메인과 나노바디의 사용은, 통상적인 VH 및 VL 도메인, scFv 또는 통상적인 항체 단편 (예, Fab- 또는 F(ab')2-단편)의 사용 보다 다수의 유리한 이점을 제공하며, 그 예는 WO 08/020079의 60-61페이지에 열거된 이점을 포함한다.
구체적이고 바람직한 측면에서, 본 발명은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 나노바디, 특히, 온혈 동물 유래의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 나노바디, 보다 구체적으로, 포유류 유래의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 나노바디, 특히 인간 유래의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 나노바디; 뿐만 아니라 이러한 나노바디 하나 이상을 포함하는 단백질 및/또는 폴리펩타이드를 제공한다.
특히, 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 통상적인 항체 또는 이의 단편과 비교하여, 상기한 통상적인 항체 또는 항체 단편 (예, Fab' 단편, F(ab')2 단편, ScFv 구조체, "디아바디" 및 기타 다중 특이성의 구조체 (예로, Holliger and Hudson, Nat Biotechnol. 2005 Sep;23(9):1126-36 참조))에 토대가 될 수 있는 구조체와 비교하여, 아울러 소위 "dAb" 또는 통상적인 항체의 가변성 도메인으로부터 유래될 수 있는 유사한 (단일)도메인 항체와 비교하여, 개선된 치료학적 및/또는 약리학적 특성 및/또는 기타 유익한 특성들 (예, 상품의 제조 용이성 개선 및/또는 비용 감소)을 가지는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 나노바디, 및 이를 포함하는 단백질 및/또는 폴리펩타이드를 제공한다. 이러한 개선되고 유익한 특성들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해지게 될 것이며, 예로, 비제한적으로 하기 중 하나 이상을 포함한다:
- 일가 포맷, 다가 포맷 (예, 이가 포맷) 및/또는 다중 특이성 포맷 (예, 하기 본원에 기술된 다중 특이성 포맷 중 한가지)으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성 및/또는 항원-항체 결합성 증가;
- 다가 포맷 (예, 이가 포맷)으로 포맷화하기에 우수한 적합성;
- 다중 특이적인 포맷 (예, 하기에 기술된 다중 특이성 포맷들 중 하나)으로 포맷화하기에 우수한 적합성;
- (본원에 정의된 바와 같이) "인간화" 치환에 있어 개선된 적합성 또는 수행성(susceptibility);
- 일가 포맷, 다가 포맷 (예, 이가 포맷) 및/또는 다중 특이성 포맷 (예, 하기에 기술된 다중 특이성 포맷들 중 하나)에서의 낮은 면역원성;
- 일가 포맷, 다가 포맷 (예, 이가 포맷) 및/또는 다중 특이성 포맷 (예, 하기에 기술된 다중 특이성 포맷들 중 하나)에서의 안정성 증가;
- 일가 포맷, 다가 포맷 (예, 이가 포맷) 및/또는 다중 특이성 포맷 (예, 하기에 기술된 다중 특이성 포맷들 중 하나)에서의, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 특이성 증가;
- 여러가지 종 유래의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 교차-반응성 감소 또는 필요에 따라서는 증가;
및/또는
- 일가 포맷, 다가 포맷 (예, 이가 포맷) 및/또는 다중 특이성 포맷 (예, 하기에 기술된 다중 특이성 포맷들 중 하나)에서의, 약학적 용도 (예방학적 용도 및/또는 치료학적 용도 포함) 및/또는 진단적 용도 (이미지화를 위한 용도를 비제한적으로 포함함)에 적합한 한가지 이상의 다른 특성들의 개선.
본 발명의 아미노산 서열에 대해 본원에서 일반적으로 기술한 바와 같이, 본 발명의 나노바디는, 바람직하게는 (본원에서 정의된 바와 같이) 본질적으로 분리된 형태이거나, 또는 본 발명의 (본원에서 정의된 바와 같이) 단백질 또는 폴리펩타이드의 일부를 형성하며, 본 발명의 하나 이상의 나노바디를 포함하거나 이로 필수적으로 구성될 수 있으며, 선택적으로 하나 이상의 다른 아미노산 서열을 (모두 선택적으로 하나 이상의 적정 링커를 통해 연결됨) 추가적으로 포함할 수 있다. 예컨대, 비제한적으로, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열 (또는 ISV)은 상기한 단백질 또는 폴리펩타이드에서 결합 유닛으로서 사용될 수 있으며, 선택적으로, (즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 이외의 다른 하나 이상의 타겟에 대한) 결합 유닛으로서 사용될 수 있는 하나 이상의 다른 아미노산 서열 (또는 ISV)을 포함하여, 모두 본원에 기술된 바와 같이, 각각 본 발명의 1가, 다가 또는 다중 특이성의 폴리펩타이드를 제공할 수 있다. 특히, 이러한 단백질 또는 폴리펩타이드는 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하거나 필수적으로 구성될 수 있으며, 선택적으로 모두 하나 이상의 적정 링커를 통해 연결되는, 하나 이상의 (다른) 나노바디 (ISV), 즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 이외의 다른 타겟을 겨냥하는 나노바디를 선택적으로 포함하여, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같이, 각각 1가, 다가 또는 다중 특이성의 나노바디 구조체를 제공할 수 있다. 이러한 단백질 또는 폴리펩타이드는 또한 (본원에서 정의된 바와 같이) 본질적으로 분리된 형태일 수 있다.
본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하기 위한 결합 부위는, 바람직하게는 CDR 서열에 의해 형성된다. 선택적으로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는, 또한, 그리고, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 결합 부위 하나 이상 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟에 대한 하나 이상의 추가적인 결합 부위들을 포함할 수 있다. 이러한 제2 결합 부위들을 도입하기 위한 방법 및 위치에 관해서는, 예로, Keck and Huston, Biophysical Journal, 71, October 1996, 2002-2011; EP 0 640 130; 및 WO 06/07260을 참조한다.
본 발명의 아미노산 서열에 대해 본원에 일반적으로 기술된 바와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) (또는 이를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드)를 개체에게 (예, 본원에 기술된 바와 같은, 치료학적 및/또는 진단 목적으로) 투여하고자 하는 경우, 이는 바람직하게는 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며; 반면, 수의학적 목적인 경우, 이는 바람직하게는 치료할 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥한다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열에서와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 교차-반응하거나 하지 않을 수 있다 (즉, 인간 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 및/또는 본원에 언급된 한가지 이상의 포류유 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 것과 같이, 2 이상의 포유류 종으로부터 유래된 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥함).
또한, 본 발명의 아미노산 서열에 대해 본원에서 일반적으로 기술된 바와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의, 임의 항원 결정부, 에피토프, 파트, 도메인, 서브유닛 또는 컴퍼메이션 (적용가능한 경우)을 겨냥할 수 있다. 그러나, 일반적으로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) (및 이를 포함하는 폴리펩타이드)는 본원에 기술된 본 발명의 에피토프를 겨냥하는 것으로 생각되며, 이러한 것이 바람직하다.
이미 본원에서 기술된 바와 같이, 나노바디 (또는 ISV)의 아미노산 서열 및 구조는, 당해 기술 분야에서 언급되는, 4개의 프래임워크 영역 또는 "FR들" (또는 때때로 "FW들"로 지칭됨)로 구성되는 것으로 간주될 수 있으나, 이로 한정되지 않으며, 본원에서는 "프래임워크 영역 1" 또는 "FR1"; "프래임워크 영역 2" 또는 "FR2"; "프래임워크 영역 3" 또는 "FR3"; 및 "프래임워크 영역 4" 또는 "FR4"로 각각 지칭되며; 프래임워크 영역들 사이에 3개의 상보성 결정부 또는 "CDR들"이 삽입되는데, 이것은 당해 기술 분야에서 "상보성 결정 영역 1" 또는 "CDR1"; "상보성 결정 영역 2" 또는 "CDR2"; 및 "상보성 결정 영역 3" 또는 "CDR3"로 각각 지칭된다. 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 존재하는 일부 바람직한 프래임워크 서열들과 CDR들 (및 이들의 조합)은 본원에 기술된 바와 같다. 기타 적합한 CDR 서열들은 본원에 기술된 방법에 의해 수득할 수 있다.
본 발명의 바람직하나 비제한적인 측면에 있어, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)(에 존재하는 CDR 서열들)은, 하기와 같다:
- 나노바디 (또는 ISV)는 해리 상수 (KD) 10-5 - 10-12 mole/L 이하, 바람직하게는 10-7 - 10-12 mole/L 이하, 보다 바람직하게는 10-8 - 10-12 mole/L (즉, 조합 상수 (KA) 105 - 1012 L/mole 이상, 바람직하게는 107 - 1012 L/mole 이상, 보다 바람직하게는 108 - 1012 L/mole)로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있음; 및/또는
- 나노바디 (또는 ISV)는 kon-속도 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 보다 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있음; 및/또는
- 나노바디 (또는 ISV)는 koff 속도 1 s-1 (t1/2=0.69 s) 내지 10-6 s-1 (t1/2가 수일인 거의 비가역적인 복합체를 제공함), 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 보다 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있음.
바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)(에 존재하는 CDR 서열들)은, 본 발명의 일가 나노바디 (또는 ISV) (또는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 한가지만 포함하는 폴리펩타이드)가, 바람직하게는 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 예로 500 pM 미만의 친화성으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하게 하는 것이다.
본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성은, 자체 공지된 방식으로, 예컨대 본원에 기술된 KD. KA, koff 또는 kon를 측정하기 위한 일반적인 기술 뿐만 아니라 본원에 기술된 구체적인 일부 분석법을 이용하여 결정할 수 있다.
본 발명의 나노바디 (또는 ISV) (및 이를 포함하는 폴리펩타이드)와 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합에 있어 일부 바람직한 IC50 값은 추가적인 설명과 본원의 예들로부터 명확해질 것이다.
바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명은 4개의 프래임워크 영역 (각각 FR1 - FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 - CDR3) 또는 상기한 아미노산 서열의 임의 적정 단편으로 구성되고, 하기로 특정되는, (본원에서 정의된 바와 같은) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다:
- CDR1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
a) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들;
b) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
d) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들;
e) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR3는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
g) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들;
h) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
특히, 이러한 바람직하나 비제한적인 측면에 있어서, 본 발명은, 4개의 프래임워크 영역 (각각 FR1 - FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 - CDR3) 또는 이러한 아미노산 서열의 임의의 적합한 단편으로 구성되고, 하기로 특정되는, (본원에서 정의된 바와 같이) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다:
- CDR1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨:
a) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들;
b) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 - 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨
d) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들;
e) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 - 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR3는 하기로 이루어진 군으로부터 선택됨
g) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들;
h) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 - 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
본 발명의 아미노산 서열에 대해 본원에서 포괄적으로 언급된 바와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 b) 및/또는 c)에 따른 하나 이상의 CDR1 서열을 포함하는 경우,
i) b) 및/또는 c)에 따른 상기한 CDR내 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, a)에 따른 대응되는 CDR과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) b) 및/또는 c)에 따른 CDR은 바람직하게는 a)에 따른 대응되는 CDR과 비교하여, 아미노산 치환만을 포함하고, 아미노산 결손 또는 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) b) 및/또는 c)에 따른 CDR은 자체 공지된 한가지 이상의 친화성 성숙화 기법을 이용한 친화성 성숙화에 의해 a)에 따른 CDR로부터 유래되는 CDR일 수 있다.
마찬가지로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 e) 및/또는 f)에 따른 하나 이상의 CDR2 서열을 포함하는 경우,
i) e) 및/또는 f)에 따른 CDR내 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, d)에 따른 대응되는 CDR과 비교하여, (본원에 기술된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) e) 및/또는 f)에 따른 CDR은 바람직하게는 d)에 따른 대응되는 CDR과 비교하여 아미노산 치환만을 포함하며, 아미노산 결손 또는 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) e) 및/또는 f)에 따른 CDR은 자체 공지된 한가지 이상의 친화성 성숙화 기법을 이용한 친화성 성숙화에 의해 d)에 따른 CDR로부터 유래되는 CDR일 수 있다.
또한, 마찬가지로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 h) 및/또는 i)에 따른 하나 이상의 CDR3 서열을 포함하는 경우,
i) h) 및/또는 i)에 따른 CDR내 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, g)에 따른 대응되는 CDR과 비교하여, (본원에 기술된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) h) 및/또는 i)에 따른 CDR은 바람직하게는 g)에 따른 대응되는 CDR과 비교하여 아미노산 치환만을 포함하며, 아미노산 결손 또는 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) h) 및/또는 i)에 따른 CDR은 자체 공지된 한가지 이상의 친화성 성숙화 기법을 이용한 친화성 성숙화에 의해 g)에 따른 CDR로부터 유래되는 CDR일 수 있다.
각각 b), c), e), f), h) 또는 i)에 따른 하나 이상의 CDR1 서열, CDR2 서열 및/또는 CDR3 서열을 포함하는, 본 발명의 임의의 나노바디 (또는 ISV)에 마지막 3개의 단락이 일반적으로 적용되는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 나노바디 (또는 ISV)들 중에서, 상기에서 명확하게 열거된 CDR들 중 하나 이상을 포함하는 나노바디 (또는 ISV)가 특히 바람직하며; 상기에서 명확하게 열거된 CDR들 중 2 이상을 포함하는 나노바디 (또는 ISV)가 보다 특히 바람직하며; 상기에서 명확하게 열거된 3가지 CDR들을 포함하는 나노바디 (또는 ISV)가 가장 바람직하다.
CDR 서열들에 대한 일부 특히 바람직하나 비제한적인 조합들과, 더불어, CDR 서열들과 프래임워크 서열들의 바람직한 조합들을 아래 표 B-1에 나타내는데, 여기에는 본 발명의 바람직한 다수의 (그러나 비제한적인) 나노바디 (또는 ISV)에 존재하는 CDR 서열들과 프래임워크 서열들이 열거된다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 동일 클론에서 생기는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들의 조합 (즉, 표 B-1에서 동일 라인에 기재되어 있는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들)이 일반적으로 바람직할 것이다 (그러나, 본 발명은 광의의 의미로는 이로 제한되지 않으며, 또한 표 B-1에 언급된 CDR 서열들의 다른 적합한 조합들도 포함함). 또한, 동일 클론에서 생기는 CDR 서열들과 프래임워크 서열들의 조합 (즉, 표 B-1에서 동일 라인, 예컨대 동일 열에 기재되어 있는 CDR 서열들과 프래임워크 서열들)이 일반적으로 바람직할 것이다 (그러나, 본 발명은 광의의 의미로는 이로 제한되지 않으며, 예로, 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같이, 또한 표 B-1에 언급된 예컨대 다른 열에 기재된 CDR 서열들과 프래임워크 서열들로 구성된 다른 적합한 조합 뿐만 아니라 그러한 CDR 서열들과 다른 적합한 프래임워크 서열들의 조합도 포함함).
또한, 표 B-1에 기재된 CDR 서열들의 임의 조합을 포함하는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 각각의 CDR은, 기재된 CDR 서열과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 CDR로 치환될 수 있으며; 여기서,
i) 상기한 CDR에서의 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, 표 B-1에 언급된 대응되는 CDR 서열과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) 임의의 상기한 CDR 서열은, 바람직하게는, 표 B-1에 기재된 대응되는 CDR 서열과 비교하여, 아미노산 치환만 포함하고, 아미노산 결손이나 삽입은 포함하지 않거나;
및/또는
iii) 임의의 상기한 CDR 서열은 자체 공지된 친화성 성숙화 기술을 이용하여, 특히 표 B-1에 기재된 대응되는 CDR 서열로부터 출발하여 유래되는 CDR이다.
그러나, 당업자에게 자명한 바와 같이, CDR 서열들(의 조합들) 뿐만 아니라 표 B-1에 기재된 CDR 서열들과 프래임워크 서열들(의 조합들)이 일반적으로 바람직할 것이다.
표 B-1: CDR 서열들의 바람직한 조합, 프래임워크 서열들의 바람직한 조합, 및 프래임워크와 CDR 서열들의 바람직한 조합
("ID"는 본원에 사용된 서열번호를 지칭함)
ID FR1 ID CDR1 I
D		 FR2 ID CDR2 ID FR3 ID CDR3 ID FR4
01D02 126 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGLSFS 197 SYALG 268 WFRQAPGKERDFVA 339 AINWSGDNTHYADSVKG 410 RFTISRDNAKNTVSLQMNSLKPEDTAVYYCAA 481 QLGYESGYSLTYDYDY 552 WGQGTQVTVSS
01G03 127 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASERTIS 198 NYDMG 269 WFRQAPGKERELIA 340 ADISWSALNTNYADSVKG 411 RFTISRDNAKNMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAA 482 RRSGYASFDN 553 WGQGTQVTVSS
02E03 128 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 199 SYAMS 270 WARQAPGEGLEWVS 341 DINSGGTRTTYADSVKG 412 RFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYVCAK 483 LSVFRSQLGGKYYGGDYEN 554 RGQGTQVTVSS
03B08 129 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFD 200 DYAIG 271 WFRQAPGKEREGVS 342 CISSSDGSIYYADSVKG 413 RFTISSDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYHCAR 484 FGRTGWAEECVDYDY 555 WGQGTQVTVSS
03E05 130 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVTFD 201 DYSIG 272 WFRQAPGKEREGVS 343 CISSSDGIPYYSDFVKG 414 RFTTSIDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA 485 GFGRLCAEFDS 556 WGQGTQVTVSS
01D06 131 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAADGRTFS 202 TYGMT 273 WFRQVPGKEREFVA 344 HIPRSTYSPYYANSVKG 415 RFTIARDDAKSTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAV 486 FTGGTYYVPTAYDY 557 WGQGTQVTVSS
02A08 132 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCADSERSFS 203 FNAMG 274 WFRQAPGKEREFVA 345 AISATGDDTYYADSVKG 416 RFAISRDTARNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCGA 487 RVNFDGTVSYTNDYAY 558 WGQGTQVTVSS
02A10 133 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFALG 204 YYAIG 275 WFRQAPGKEREGVS 346 CDSSSDGRTYYGDSVKG 417 RFTISTDSAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 488 CTDFEYDY 559 WGQGTQVTVSS
04B09 134 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLG 205 YYAIG 276 WFRQAPGKEREGVS 347 CDSSSDGDTYYANSVKG 418 RFTISTDNGKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 489 CTDWNYDY 560 WGQGTQVTVSS
03C07 135 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFD 206 DYAIG 277 WFRQAPGKEREAVS 348 CFSSSDGSIYYADSVKG 419 RFTISSDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAG 490 GGGSYYYTQLNYCYDMDY 561 WGKGTQVTVSS
04A02 136 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRNINI 207 INYMA 278 WYRQAPGNQRELVA 349 AMTSDATTEYADSVKG 420 RFTISRDIPENTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNA 491 KGIWDYLGRRDFGDY 562 WGQGTQVTVSS
04B10 137 EVQLVESGGGLVQAGGSQSLSCVASGTIVN 208 INVMG 279 WYRQAPGKQRELVA 350 LITSGGGTTYGDSVKG 421 RFTISIDNAKNTVILQMNSLEAEDTAVYYCAA 492 EIGYYSGGTYFSSEAH 563 WGQGTQVTVSS
04G01 138 EVQLVESGGGLVQAGGSQRLSCTASGTIVN 209 IHVMG 280 WYRQAPGKQRELVA 351 LIFSGGSADYADSVKG 422 RFTISRDNAKNTVYLEMNSLKAEDTAVYYCAA 493 EIGYYSGGTYYSSEAH 564 WGQGTQVTVSS
04F09 139 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFS 210 THAMG 281 WFRQAPGKERDFVA 352 AIRWSDGSSFYADSVKG 423 RFTISRDNAKNAVYLQSNSLKSEDTAVYVCYA 494 DVEGPTALHKY 565 WGRGTQVTVSS
09D10 140 EVQLVESGGGLVQAGGSLSLSCAASGSVFR 211 IDVMR 282 WHRQAPGKQREFLA 353 SIASGGTTNYADSVKG 424 RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCGA 495 NAESGPYTY 566 WGLGTQVTVSS
09G10 141 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASDSVFT 212 AKAVG 283 WYRQPPGLQREWVA 354 IITSGGKTNYADSSVKG 425 RFTVSVDKVKNTVTLQMNSLKPEDTAVYYCYA 496 QWMGRDY 567 WGQGTQVTVSS
11A06 142 EVQLVESGGGLVQPGESLRLSCKASGFSLD 213 YYALG 284 WFRQAPGKEREGIS 355 CITSSDASAYYTDSVKG 426 RFTISRDNSKNTVYLQMNSLKTEDTAIYYCAA 497 ALLTCSSYYDAYTY 568 WGQGTQVTVSS
06E11 143 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCPVSGRAFS 214 RGRLG 285 WFRQAPGKEREFVA 356 VAHWSGAITSYADSVKG 427 RFTFSRDNAKNTMNLQMNSLKPEDTAVYYCAA 498 DSETSGNWVY 569 WGQGTQVTVSS
07B09 144 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGASGGTFS 215 SYATG 286 WFRQAPGKEREFVA 357 VLRWSDGHTAYADSVKG 428 RFTISRDGAKNTMYLQMSSLKPEDTAIYYCTT 499 ATRPGEWDY 570 WGQGTQVTVSS
24G10 145 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGAAGGTFS 216 SYATG 287 WFRQAPGKEREFVA 358 VFRWSDSHTAYADSVKG 429 RFTISRDGAKNTLYLQMSSLKPEDTAIYYCTT 500 ATRPGEWDY 571 WGQGTQVTVSS
07B11 146 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGRAFS 217 SYVMG 288 WFRQAPGMEREFVA 359 LIRWSDGITGYVDSVKG 430 RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA 501 AVRPGDYDY 572 WGQGTQVTVSS
08A08 147 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFR 218 PYRMG 289 WFRRAPGKAREFVT 360 LISWSSGRTSYADSVKG 431 RFTISRDSAKNAVYLQMDNLKPEDTAVYFCAV 502 DLSGDAVYDS 573 WGQGTQVTVSS
08B07 148 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRDFR 219 VKNVG 290 WIRQAPGKQRELVA 361 TITVGGSTNYADSAKG 432 RFTISRDNAKNTVYLQMSSLKPEDTAVYYCNA 503 VATVTDYTGTYSDGF 574 WGQGTQVTVSS
08H01 149 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGASGGTFS 220 SYATG 291 WFRQAPGKEREFVA 362 VLRWSDSHTAYADSVEG 433 RFTISRDGAKNTVYLQMSSLKPEDTAIYYCTT 504 GTRPGEWHY 575 WGQGTQVTVSS
12A09 150 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 221 SYRMA 292 WVRQAPGKGLEWVS 363 STSTGGEMTNYADSVKG 434 RFTISRDNAKNTLHLQMNSLKPEDTALYYCAA 505 GTSAGHWST 576 GGQGTQVTVSS
16A04 151 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFS 222 SYVVG 293 WFRQAPGKEREFIG 364 AISGSGDSIYYAVSEKD 435 RFTISRDNGKNTLYLQMSSLKAEDTAVYYCTA 506 DQEFGYLRFGRSEY 577 WGQGTQVTVSS
24B08 152 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFS 223 TYKMG 294 WFRQAPGKEREIVA 365 RISTNGPTAYAEFVKG 436 RFTVSRENTKNTVYLQMNSLNIEDTAVYYCAA 507 GYDSLFAGYDY 578 WGQGTQVTVSS
01A01 153 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFD 224 DYDIG 295 WFRQAPGKEREGVS 366 CFTSSDGRTFYADSVKG 437 RFTVSADNAKNTVYLQMNSLEPEDTAVYFCAA 508 VNTFDESAYAAFACYDVVR 579 WGQGTQVTVSS
09B09 154 EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 225 SYWMY 296 WARQAPGKGLEWIS 367 ALAPGGDDEYYADSVNG 438 RFTISRDNAENSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAK 509 DHNVGYRTGEYDY 580 GGQGTQVTVSS
09E11 155 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 226 SYWMY 297 WVRQAPGKGLEWIS 368 ALAPGGDNRYYADSVNG 439 RFTISRDNAENSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAK 510 DHNVGYRTGEYDY 581 GGQGTQVTVSS
10A04 156 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 227 SYWMY 298 WVRQAPGKGLEWIS 369 ALAPGGGNRYYAESVNG 440 RFTISRDNAKNSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAK 511 DHNVGYRTGEYDY 582 GGQGTQVTVSS
10A05 157 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 228 NYWMY 299 WVRQAPGKGLEWIS 370 ALAPGGDNRYYADSVNG 441 RFTISRDNAENSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAK 512 DHNVGYRTGEYDY 583 GGQGTQVTVSS
10D11 158 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFS 229 SYWMY 300 WVRQAPGKGLEWIS 371 ALAPGGEHRYYADSVNG 442 RFTISRDNAKNSLYLQMNSLKSEDTAVYYCAK 513 DHNVGYRTGEYDY 584 GGQGTQVTVSS
10F02 159 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 230 SYWMY 301 WVRQAPGKGLEWIS 372 ALAPGGGNAYYADSVNG 443 RFTISRDNAENLLYLQMNSLKSEDTAVYYCAK 514 DHNVGYRTGEYDY 585 GGQGTQVTVSS
11A02 160 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVIFR 231 LNAMG 302 WYRAAPGKQRELVA 373 IIINGGSTNYADSVKG 444 RFTISRDSAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYY 515 NIPGDVY 586 WGQGTQVTVSS
11A07 161 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPGVIFR 232 LNAMG 303 WYRAAPGKQRELVA 374 IIANGGSTNYADSVKG 445 RFTISRDSAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYY 516 NIPGDVY 587 WGQGTRVTVSS
11C08 162 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVIFR 233 LNAMG 304 WYRAAPGKQRELVA 375 IIVNGGSTNYADSVKG 446 RFTISRDSAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYY 517 NIPGDVY 588 WGQGTQVTVSS
11C09 163 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVIFR 234 LNAMG 305 WYRAAPGKQRELVA 376 IIVNGGSTNYADSVKG 447 RFTISRDSAKNAVYLQMDSLKPEDTAVYYCYY 518 NIPGDVY 589 WGQGTQVTVSS
12H11 164 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGVIFR 235 LNAMG 306 WYRAAPGKQRELVA 377 IIVNGGSTNYADSVKG 448 RFTISRDNAKNAVYLQMNSLKPEDTAVYYCYY 519 NIPGDVY 590 WGQGTQVTVSS
13B03 165 EVQLVESGGGSVQAGDSLRLSCAASGRANS 236 INWFG 307 WFRQTPGKEREFVA 378 GIRWSDAYTEYANSVKG 449 RFTISRDNAKNTVDLQMDSLKPEDTAVYYCVL 520 DLSTVRY 591 WGQGTQVTVSS
13D05 166 EVQLVESGGGSVQAGDSLRLSCAASGRANS 237 INWFG 308 WFRQTPGKEREFVA 379 GIRWTDAYTEYAASVKG 450 RFTISRDNAKNTVGLQMDSLKPEDTAVYYCVL 521 DLSTVRY 592 WGQGSQVTVSS
13E02 167 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYD 238 AMG 309 WLRQAPGKEREFVA 380 AISGSGDDTYYADSVKG 451 RFTISKDNAGITMYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 522 RRGLYYVWDSNDYEN 593 WGQGTQVTVSS
01D08 168 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYY 239 AMG 310 WLRQAPGKEREFVA 381 AISGSGDDTYYADSVKG 452 RFTISKDNAGITMYLEMNSLKPEDTAVYYCAT 523 RRGRYYVWDSNDYEN 594 WGQGTQVTVSS
13E07 169 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYY 240 AMG 311 WLRQAPGKEREFVA 382 AISGSGDDTYYADSVKG 453 RFTISKDNAGITMYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 524 RRGLYYVWDSNDYEN 595 WGQGTQVTVSS
13G06 170 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYH 241 AMG 312 WLRQAPGKEREFVA 383 AVSGSGDDTYYADSVKG 454 RFTISKDNAGITMYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 525 RRGLYYVWDSNDYEN 596 WGQGTQVTVSS
13H05 171 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYD 242 AMG 313 WFRQAPGKEREFVA 384 AISGSGEDTYYADSVKG 455 RFTCSKDNAKDTMYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 526 RRGLYFITDSNDYEN 597 WGQGTQVTVSS
13E05 172 EVQLVESGGGKVQAGDSLTLSCVASGGTFS 243 NYAA 314 WFRQAPGKDRRELV 385 VSIFRTGSITYTADSVKG 456 RFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAS 527 AYNPGVGYDY 598 WGQGTQVTVSS
17B03 173 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCEASGGTFS 244 NYAA 315 WFRQGPGKGRELVV 386 SIFRSGTITYTADSVKG 457 RFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTGIYYCAS 528 AYNPGIGYDY 599 WGQGTQVTVSS
17D08 174 EVQLVESGGGLVQAGDSLTLSCVASGGTFS 245 NYAA 316 WFRQAPGKDRRELV 387 VSIFRTGSITYTADSVKG 458 RFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAS 529 AYNPGVGYDY 600 WGQGTQVTVSS
17E05 175 EVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCEASGGTFS 246 NYAA 317 WFRQGPGKGRELVV 388 SIFRSGTITYTADSVKG 459 RFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTGIYYCAS 530 AYNPGIGYDY 601 WGQGTQVTVSS
17G08 176 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGGTFS 247 NYAA 318 WFRQGPGKGRELVV 389 SIFRSGTITYTADSVKG 460 RFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTGIYYCAS 531 AYNPGIGYDY 602 WGQGTQVTVSS
17H04 177 EVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCVASGGTFS 248 NYAA 319 WFRQAPGKGRELIL 390 SIFRSGSITYTADSVKG 461 RFTGSRVNTKNTAYLQMNNLKPEDTAVYYCAS 532 AYNPGIGYDY 603 WGQGTQVTVSS
17H07 178 EVQLVESGGGLVQAGDSLTLSCVASGGTFS 249 NYAA 320 WFRQAPGKDRRELV 391 VSIFRTGSITYTADSVKG 462 RFTASRVNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAS 533 AYNPGVGYDY 604 WGQGTQVTVSS
01C09 179 EVQLVKSGGGLVQAGGSLKLSCAASGRTFT 250 TYPMG 321 WFRQAPGKEREFVG 392 AISMSGEDTIYATSVKG 463 RFTISRDDARNTVTLHMTSLKPEDTAVYYCAA 534 RTSYNGRYDYIDDYSY 605 WGQGTQVTVSS
01F10 180 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFT 251 TYPMG 322 WFRQAPGKEREFVA 393 AISMSGEDAAYATSVKG 464 RFTISRDNARNTVYLHMTTLKPEDTAVYYCAA 535 RTSYNGIYDYIDDYSY 606 WGQGTQVTVSS
02D02 181 EVQLVESGGGLVQAGGSLKLSCARSGRTFT 252 TYPMG 323 WFRQAPGKEREFVA 394 AISMSGDDTAYATFVKG 465 RFTIVRDDDKNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 536 RTSYSGTYDYIDDYSY 607 WGQGTQVTVSS
13A08 182 EVQLVESRGRLVQAGGSLRLSCAASGRTFT 253 SYPMG 324 WFRQAPGKEREFVA 395 AISMSGDDAAYADFVRG 466 RFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 537 RTSYDGTYDYIDDYSY 608 WGQGTQVTVSS
13B05 183 EVQLVESGGRLVQAGGSLRLSCAASGRTFT 254 SYPMG 325 WFRQAPGKEREFVA 396 AISMSGDDTAYTDFVRG 467 RFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 538 RTSYDGTYDYIDDYSY 609 WGQGTQVTVSS
13C06 184 EVQLVESGGRLVQAGGSLRLSCAASGRTFT 255 SYPMG 326 WFRQAPGKEREFVA 397 AISMSGDDAAYADFVRG 468 RFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 539 RTSYDGTYDYIDDYSY 610 WGQGTQVTVSS
13E01 185 EVQLVESEGGLVQAGGSLRLSCARSGHAFT 256 SYPMG 327 WFRQAPGKEREFVA 398 AISMSGDDTIYRDFVKG 469 RFTISRDNARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 540 RTSYDGRYDYIDDYSY 611 WGQGTQVTVSS
13E03 186 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFT 257 TYPMG 328 WFRQAPGKEREFVA 399 AISMSGDDTAYATFVKG 470 RFTISRDSARNTVYLHMTRLKPEDTAVYSCAA 541 RTSYDGRYDYIDDYSD 612 WGQGTQVTVSS
13E08 187 EVQLVESRGGLVQAGGSLRLSCAGSGRTLY 258 SYPMG 329 WFRQAPGKEREFVA 400 AISMSGDDTAVATFVKG 471 RFTISRDNARNTVYLHMTSLKPEDTAVYHCAA 542 RTSYSGRYDYIDDYSY 613 WGQGTQVTVSS
13G04 188 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTLY 259 SYPMG 330 WFRQAPGKEREFVA 401 AISMSGDDTAVATFVKG 472 RFTISRDNARNTVYLHMSSLKPEDTAVYHCAA 543 RTSYSGRYDYIDDYSY 614 WGQGTQVTVSS
13G05 189 EVQLVESGGGLVQAGGSLELSCARSGRTFT 260 TYPMG 331 WFRQAPGKEREFVA 402 AISMSGDDTAYATFVKG 473 RFTFSRDDDKNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 544 RTSYSGMYDYIHDYSY 615 WGQGTQVTVSS
13G08 190 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFF 261 SYPMG 332 WFRQAPGKEREFVA 403 AISMSGDDSAYRDFVKG 474 RFTISRDNARDTVYLHMTSLKPEDTAIYYCAA 545 RTSYNGRYDYIDDYSY 616 WGQGTQVTVSS
13H03 191 EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFT 262 TYPMG 333 WFRQAPGKEREFVA 404 AISMSGDDTAYATFVKG 475 RFTISRDNARNTVYLHMTRLKPEDTAVYSCAA 546 RTSYDGRYDYIDDYSD 617 WGQGTQVTVSS
17C01 192 EVQLVESGGRLVQAGGSLRLPCAASGRTFT 263 SYPMG 334 WFRQAPGKEREFVA 405 AISMSGDDAAYADFVRG 476 RFTISRDDARNTVYLHMTSLKPEDTAVYYCAA 547 RTSYDGTYDYIDDYSY 618 WGQGTQVTVSS
15A08 193 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLD 264 YYAIG 335 WFRQAPGKEREGVS 406 CVSSSDGRTAYADSVKG 477 RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAT 548 VMEYGLGCTTDVLDA 619 WGQGTLVTVSS
13G02 194 EVQLVESRGGLVQAGGSLRLSCAASGGTFS 265 VFAMR 336 WFRQAPGKEREFVA 407 GISWTGGTTYYADSVKG 478 RFTMSADNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAV 549 DVGGGSDRY 620 LGQGTQVTVSS
17E02 195 EVQLVESRGGLVQAGGSLRLSCAASGGTFS 266 VFAMR 337 WFRQAPGKEREFVA 408 GISWTGGTTYYADSVKG 479 RFTMSADNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAV 550 DVGGGSDRY 621 LGQGTQVTVSS
18B05 196 EVQLVKSGGGLVQPGGSLRLSCAASGGTFS 267 LFAMG 338 WFREAPGKEREFVA 409 AIRWSDGSSYYADSVKG 480 RFTISRDNAKNAVHLQSNSLKSEDTAVYYCYA 551 DVQGGLHRY 622 WGQGTQVTVSS
따라서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들 중 적어도 하나는 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 각각 이루어진 군으로부터; 또는 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 하나 이상과 각각, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 (본원에 정의된 바와 같이) "서열 동일성"을 가지는, 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 (본원에 정의된 바와 같이) "아미노산 차이(들)"만 있는, 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
이러한 문맥에서 "적합하게 선택된다"는, 필요에 따라, CDR1 서열이 (즉, 본원에 정의된 바와 같이) 적합한 CDR1 서열들로부터 선택되고, CDR2 서열이 (즉, 본원에 정의된 바와 같이) 적합한 CDR2 서열들로부터 선택되고, CDR3 서열이 (즉, 본원에 정의된 바와 같이) 적합한 CDR3 서열들로부터 각각 선택되는 것을 의미한다. 보다 구체적으로, CDR 서열들은, 바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 본원에 정의된 바와 같은 친화성 (KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), Kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로 적절하게 측정 및 표시됨, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같음)으로 결합되도록 선택된다.
특히, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 적어도 CDR3 서열은 표 B-1에 열거된 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터, 또는 표 B-1에 열거된 하나 이상의 CDR3 서열과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 하나 이상의 CDR3 서열과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이만(들) 있는 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들 중 2 이상이, 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터; 또는 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 하나 이상과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 "아미노산 차이(들)"만 있는, 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
특히, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 적어도 CDR3 서열은 표 B-1에 열거된 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터, 또는 표 B-1에 열거된 하나 이상의 CDR3 서열과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택되고; 존재하는 CDR1 및 CDR2 서열 중 하나 이상은, 표 B-1에 열거된 각각 CDR1 및 CDR2 서열들로 이루어진 군으로부터, 또는 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1 및 CDR2 서열 중 하나 이상과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 각각 CDR1 및 CDR2 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 CDR1 및 CDR2 서열 중 하나 이상과 각각 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 각각의 CDR1 및 CDR2 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
가장 바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 3개 모두 각각 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터, 또는 각각 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 하나 이상과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 각각 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는, 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 하나 이상은, 각각 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다. 바람직하게는, 이러한 측면에서, 존재하는 다른 2종의 CDR 서열들 중 적어도 하나, 바람직하게는 둘다는 각각 표 B-1에 열거된 대응되는 CDR 서열들 중 하나 이상과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, CDR 서열들로부터; 및/또는 각각 표 B-1에 열거된 대응되는 서열들 중 적어도 하나와 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는, CDR 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
특히, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 적어도 CDR3 서열은, 표 B-1에 열거된 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다. 바람직하게는, 이러한 측면에서, 존재하는 CDR1 및 CDR2 서열 중 하나 이상, 바람직하게는 둘다는, 각각 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1 및 CDR2 서열과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, 각각의 CDR1 및 CDR2 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 각각 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1 및 CDR2 서열 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는, 각각의 CDR1 및 CDR2 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 중 2 이상은, 각각 표 B-1에 열거된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다. 바람직하게는, 이러한 측면에서, 존재하는 나머지 CDR 서열은 표 B-1에 열거된 대응되는 CDR 서열들 중 하나 이상과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, CDR 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 대응되는 서열들 중 적어도 하나와 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는, CDR 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
특히, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 적어도 CDR3 서열은, 표 B-1에 열거된 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택되며, CDR1 서열 또는 CDR2 서열은, 각각 표 B-1에 열거된 CDR1 및 CDR2 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다. 바람직하게는, 이러한 측면에서, 존재하는 나머지 CDR 서열은 표 B-1에 열거된 대응되는 CDR 서열들 중 하나 이상과, 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, CDR 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 대응되는 CDR 서열들과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는, CDR 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
보다 더 바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들은 각각 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다.
또한, 일반적으로, 표 B-1에 열거된 CDR들의 조합들 (즉, 표 B-1에 동일 라인, 예, 열에 기재된 것들)이 바람직하다. 따라서, 일반적으로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서의 한가지 CDR이 표 B-1에 기재된 CDR 서열이거나 또는 표 B-1에 열거된 CDR 서열과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR 서열들로 이루어진 군으로부터; 및/또는 표 B-1에 열거된 CDR 서열에 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 CDR 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택되는 경우, 다른 CDR들 중 적어도 하나, 바람직하게는 둘다는, 표 B-1에서 동일 조합 (즉, 표 B-1에 동일 라인, 예, 열에 기재된 것)에 속하는 CDR 서열들로부터 적합하게 선택되거나, 또는 동일 조합에 속하는 CDR 서열(들)과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택되거나, 및/또는 동일 조합에 속하는 CDR 서열(들)과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이(들)만 있는 CDR 서열들로 이루어진 군으로부터 적합하게 선택된다. 또한, 상기 단락들에 기재된 다른 선호성도 표 B-1에 언급된 CDR들의 조합에 적용된다.
따라서, 비제한적인 예로서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는, 예를 들어, 표 B-1에 언급된 CDR1 서열 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1 서열, 표 B-1에 언급된 (그러나, 다른 조합에 속하는) CDR2 서열들 중 하나와 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이가 있는 CDR2 서열, 및 CDR3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 나노바디 (또는 ISV)는, (1) 표 B-1에 언급된 CDR1 서열들 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1 서열; 표 B-1에 언급된 (그러나, 다른 조합에 속하는, 예를 들어 적어도 한줄 이상의 다른 열에서 유래된) CDR2 서열들 중 하나와 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이가 있는 CDR2 서열; 및 표 B-1에 언급된 (그러나 다른 조합에 속하는) CDR3 서열들 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3 서열을 포함하거나; 또는 (2) 표 B-1에 언급된 CDR1 서열들 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1 서열; CDR2 서열; 및 표 B-1에 열거된 CDR3 서열들 중 하나를 포함하거나; 또는 (3) CDR1 서열; 표 B-1에 열거된 CDR2 서열들 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR2 서열; 및 CDR2 서열과 동일한 조합에 속하는 표 B-1에 언급된 CDR3 서열과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가지는 CDR3 서열을 포함한다.
본 문맥에서, 당해 기술 분야의 당업자라면, "동일한 조합"이 표 B-1에서 동일한 열 (또는 라인)에 표시된 CDR1, CDR2 및 CDR3의 조합을 지칭하는 것이며, "다른 조합"은 하나 이상의 CDR이 다른 CDR과 표 B-1에서 동일한 열 (또는 라인)에 표시되지 않는, CDR1, CDR2 및 CDR3의 조합을 지칭하는 것임을 알 것이다.
본 발명의 일부 특히 바람직한 나노바디는, 예로, 하기를 포함할 수 있다: (1) 표 B-1에 열거된 CDR1 서열 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1; 동일한 조합에 속하는, 표 B-1에 열거된 CDR2 서열과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가지는 CDR2 서열; 및 동일한 조합에 속하는, 표 B-1에 열거된 CDR3 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3 서열; (2) CDR1 서열; 표 B-1에 열거된 CDR2 및 표 B-1에 열거된 CDR3 서열 (여기에서, CDR2 서열과 CDR3 서열은 다른 조합에 속할 수 있음).
본 발명의 일부 보다 더 바람직한 나노바디 (또는 ISV)는, 예로, 하기를 포함할 수 있다: (1) 표 B-1에 열거된 CDR1 서열 중 하나와 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR1; 동일 조합에 속하는 표 B-1에 열거된 CDR2 서열; 및 다른 조합에 속하는 표 B-1에 열거된 CDR3 서열; 또는 (2) 표 B-1에 열거된 CDR1 서열; 동일 조합에 속하는 표 B-1에 열거된 CDR2 서열과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가지는 CDR2 서열; 및 동일하거나 다른 조합에 속하는 표 B-1에 열거된 CDR3 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR3 서열.
본 발명의 특히 바람직한 나노바디 (또는 ISV)는, 예컨대, 표 B-1에 열거된 CDR1 서열, 동일 조합에 속하는 표 B-1에 열거된 CDR2 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 가지는 CDR2 서열; 및 동일 조합에 속하는 표 B-1에 열거된 CDR3 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 가장 바람직한 나노바디 (또는 ISV)에서, 존재하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들은 각각 표 B-1에 열거된 각각의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들의 조합들 중 하나로부터 적합하게 선택된다.
본 발명의 다른 바람직하나 비제한적인 측면에서, (a) CDR1은 1-12개의 아미노산 잔기의 길이, 통상적으로 2-9개의 아미노산 잔기, 예로, 5, 6 또는 7개의 아미노산 잔기 길이를 가지며; 및/또는 (b) CDR2는 13-24개의 아미노산 잔기, 통상적으로 15-21개의 아미노산 잔기, 예컨대 16 및 17개의 아미노산 잔기 길이를 가지며; 및/또는 (c) CDR3는 2-35개의 아미노산 잔기, 통상적으로 3-30개의 아미노산 잔기, 예로 6-23개의 아미노산 잔기 길이를 가진다.
다른 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명은, (본원에서 정의된 바와 같이) CDR 서열들이 서열번호 623 - 693 (표 A-1 참조)의 아미노산 서열들 중 하나 이상의 서열의 CDR 서열들과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예로 99% 이상의 서열 동일성을 가지는, 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다.
일반적으로, 상기 CDR 서열들을 가지는 나노바디 (또는 ISV)는 본원에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있으며, 바람직하게는 본원에 추가적으로 기술된 바와 같은 프래임워크 서열을 가진다. 따라서, 예로, 본원에 언급된 바와 같이, 상기한 나노바디 (또는 ISV)는 (임의 적정 종 유래의) 천연 나노바디 (또는 ISV), 천연 VHH 서열 (즉, 카멜리드의 적정 종 유래) 또는 합성 또는 반합성의 아미노산 서열 또는 나노바디 (또는 ISV)일 수 있으며, 이에 대한 비제한적인 예로는, 부분적으로 인간화된 나노바디 (또는 ISV) 또는 VHH 서열, 완전히 인간화된 나노바디 (또는 ISV) 또는 VHH 서열, 카멜화된 중쇄 가변성 도메인 서열, 뿐만 아니라 본원에 언급된 기법으로 수득되는 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다.
따라서, 비제한적인 특정한 일 측면에서, 본 발명은, 4개의 프래임워크 영역 (각각 FR1 내지 FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 내지 CDR3)로 이루어지되, CDR1 - CDR3는 본원에 정의된 바와 같으며, 하나 이상의 (본원에서 정의된 바와 같이) 인간화 치환, 특히 (본원에서 정의된 바와 같이) 그 프래임워크 서열들 중 적어도 하나에 하나 이상의 인간화 치환을 포함하는, 인간화된 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다.
다른 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명은, CDR 서열들이 서열번호 623 - 693 (표 A-1)의 아미노산 서열들 중 하나 이상의 CDR 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더 바람직하게는 적어도 90%, 예컨대 95% 이상의 아미노산 동일성, 또는 심지어 기본적으로 100% 아미노산 동일성을 가지는, 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다. 아미노산 동일성 수준은 예를 들어 상기 나노바디 (또는 ISV)와 서열번호 623 - 693 (표 A-1)의 하나 이상의 서열 간의 아미노산 동일성 수준을 (본원에 기술된 방식으로) 결정함으로써 정할 수 있으며, 이때 프래임워크 영역을 구성하는 아미노산 잔기들이 배제된다. 이러한 나노바디 (또는 ISV)는 본원에 상세히 기술된 바와 같을 수 있다.
다른 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명은, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1)으로 이루어진 군 또는 서열번호 623 내지 693 (표 A-1)의 하나 이상의 아미노산 서열과 (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더 바람직하게는 95% 이상, 예로 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는, 아미노산 서열을 가진 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다.
당업자에게는, 본원에서 "바람직한" (또는 "보다 바람직한", "보다 더 바람직한" 등)으로 언급되는 나노바디 (또는 ISV)가 본원에 기술된 폴리펩타이드에 사용하는데 또한 바람직 (또는 보다 바람직한, 또는 보다 더 바람직한 등)함이 자명할 것이다. 따라서, 본 발명의 하나 이상의 "바람직한" 나노바디 (또는 ISV)를 포함하거나 이들로 필수적으로 구성되는 폴리펩타이드가 일반적으로 바람직할 것이며, 본 발명의 하나 이상의 "보다 바람직한" 나노바디 (또는 ISV)를 포함하거나 또는 필수적으로 구성된 폴리펩타이드가 일반적으로 보다 바람직할 것이다.
일반적으로, 단일 나노바디 (또는 ISV) (예, 본 발명의 단일 나노바디 (또는 ISV))를 포함하거나 또는 필수적으로 구성된 단백질 또는 폴리펩타이드는, 본원에서 "일가" 단백질 또는 폴리펩타이드 또는 "일가 구조체"로서 언급될 것이다. 2 이상의 나노바디 (또는 ISV) (예, 본 발명의 2 이상의 나노바디 (또는 ISV) 또는 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)와 하나 이상의 다른 나노바디 (또는 ISV))를 포함하거나 또는 이로 필수적으로 구성된 단백질 및 폴리펩타이드는, 본원에서 "다가" 단백질 또는 폴리펩타이드로서 또는 "다가 구조체"로서 언급될 것이며, 이는 본 발명의 대응되는 일가 나노바디 (또는 ISV)에 비해 특별한 이점을 제공할 수 있다. 이러한 다가 구조체의 일부 비제한적인 실시예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
구체적인 비제한적인 일 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 본 발명의 2 이상의 나노바디 (또는 ISV), 예컨대 본 발명의 2 또는 3종의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하거나 필수적으로 구성된다. 본원에서 추가로 기술된 바와 같이, 이러한 다가 구조체는 본 발명의 단일 나노바디 (또는 ISV)를 포함하거나 이로 필수적으로 구성된 단백질 또는 폴리펩타이드와 비교하여, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 훨씬 개선된 항원-항체 결합성과 같이, 특정한 이점을 제공할 수 있다. 이러한 다가 구조체는 본원의 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이다.
다른 구체적이나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)와 하나 이상의 다른 결합 유닛 (즉, 다른 에피토프, 항원, 타겟, 단백질 또는 폴리펩타이드를 겨냥함)을 포함하거나 또는 이로 필수적으로 구성되며, 상기 결합 유닛도 바람직하게는 또한 나노바디 (또는 ISV)이다. 이러한 단백질 또는 폴리펩타이드는, 또한, 본원에서 "다중 특이적인" 단백질 또는 폴리펩타이드로서, 또는 "다중 특이성 구조체"로서 언급되며, (일부 바람직하나 비제한적인 다중 특이성 구조체에 대해 본원에 추가적인 논의로부터 자명한 바와 같이) 본 발명의 대응되는 일가 나노바디 (또는 ISV)와 비교하여 특정한 이점을 제공할 수 있다. 이러한 다중 특이성 구조체는 본원의 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이다.
또 다른 구체적이나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV), 선택적으로 하나 이상의 추가적인 나노바디 (또는 ISV) 및 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 제조되는 융합 단백질에 하나 이상의 원하는 특성을 부여하는 하나 이상의 다른 아미노산 서열 (예, 단백질 또는 폴리펩타이드)을 포함하거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다. 다시 말해, 이들 융합 단백질은 본 발명의 대응되는 일가 나노바디 (또는 ISV)와 비교하여 특정한 이점을 제공할 수 있다. 이러한 아미노산 서열 및 융합 구조체에 대한 일부 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
또한, 예를 들어, 본 발명의 2종의 나노바디 (또는 ISV) 및 하나의 다른 나노바디 (또는 ISV), 및 선택적으로 하나 이상의 다른 아미노산 서열을 포함하는, 3가 2중 특이성 구조체를 제공하기 위해, 상기 측면들 중 2 이상의 측면을 조합하는 것도 가능하다. 이러한 구조체 뿐만 아니라 본 발명의 내용에서 특히 바람직한 일부 구조체에 대한 추가적인 비제한적인 예들은, 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
상기 구조체에서, 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 다른 아미노산 서열은 서로 직접 연결되거나 및/또는 하나 이상의 링커 서열을 통해 서로 적절하게 연결될 수 있다. 이러한 링커에 대한 일부 적합하나 비제한적인 예는 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
본 발명의 일 특정 측면에서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 또는 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 본 발명의 화합물, 구조체 또는 폴리펩타이드는, 본 발명의 대응되는 아미노산 서열과 비교하여 증가된 반감기를 가질 수 있다. 이러한 나노바디 (또는 ISV), 화합물 및 폴리펩타이드에 대한 일부 바람직한 비제한적인 예는, 본원의 추가적인 내용을 기초로 당업자에게 자명할 것이며, 예컨대, 반감기를 증가시키도록 화학적으로 변형된 (예, 페길화에 의해) 본 발명의 나노바디 서열 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드; 혈청 단백질 (예, 혈청 알부민, 예로, EP 0 368 684 B1 4페이지 참조)과의 결합을 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 포함하는 본 발명의 아미노산 서열; 또는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 반감기를 증가시키는 하나 이상의 모이어티 (특히, 하나 이상의 아미노산 서열)에 연결된 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는, 본 발명의 폴리펩타이드를 포함한다. 상기한 반감기를 연장시키는 모이어티 또는 아미노산 서열을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드의 예는 본원의 추가적인 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이며, 예컨대, 비제한적으로, 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)가 하나 이상의 혈청 단백질 또는 이의 단편 (예, 혈청 알부민 또는 이의 적정 단편)에 또는 혈청 단백질에 결합할 수 있는 하나 이상의 결합 유닛 (예, 혈청 알부민과 같은 혈청 단백질, IgG와 같은 혈청 면역글로불린 또는 트랜스페린에 결합할 수 있는 나노바디 또는 (단일) 도메인 항체)에 적합하게 연결된 폴리펩타이드; 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 Fc 부분 (예, 인간 Fc) 또는 이의 적정 파트 또는 단편과 연결된 폴리펩타이드; 또는 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)가 혈청 단백질에 결합할 수 있는 하나 이상의 소형 단백질 또는 펩타이드에 적합하게 연결된 폴리펩타이드를 포함한다 (비제한적인 예로서, WO 91/01743, WO 01/45746, WO 02/076489 및 2006년 12월 5일자로 출원된 Ablynx N.V.의 미국 가출원 "Peptides capable of binding to serum proteins" (PCT/EP/2007/063348 참조)에 기술된 단백질 및 펩타이드).
재차, 당업자에게 자명한 바와 같이, 이러한 나노바디 (또는 ISV), 화합물, 구조체 또는 폴리펩타이드는, 3중 내지 다중 특이성의 나노바디 (또는 ISV) 구조체를 제공하기 위해, 하나 이상의 다른 아미노산 서열, 특히 하나 이상의 추가적인 나노바디 (또는 ISV) (즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하지 않음) 등의, 하나 이상의 추가적인 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 포함할 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 반감기가 증가된 나노바디 (또는 ISV) (또는 이를 포함하는 화합물, 구조체 또는 폴리펩타이드)는, 바람직하게는, 자체 본 발명의 대응되는 아미노산 서열 보다 반감기가 1.5배 이상, 바람직하게는 2배 이상, 예로 5배 이상, 예로 10배 이상 또는 20배 이상 길다. 예컨대, 본 발명의 반감기가 증가된 나노바디 (또는 ISV), 화합물, 구조체 또는 폴리펩타이드는, 자체 본 발명의 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 보다 바람직하게는 6시간 이상, 예로 12시간 이상, 또는 보다 더 바람직하게는 24, 48 또는 72시간 이상 긴 반감기를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 상기한 나노바디 (또는 ISV), 화합물, 구조체 또는 폴리펩타이드는, 약 12시간 이상, 바람직하게는 24시간 이상, 보다 바람직하게는 48시간 이상, 보다 더 바람직하게는 72 시간 이상의 혈청 반감기를 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 폴리펩타이드는, 5일 이상 (예, 약 5 - 10일), 바람직하게는 9일 이상 (예, 약 9 - 14일), 보다 바람직하게는 약 10일 이상 (예, 약 10 - 15일), 또는 약 11일 이상 (예, 약 11 - 16일), 보다 바람직하게는 약 12일 이상 (예, 약 12 - 18일 또는 그 이상), 또는 14일 이상 (예, 약 14 - 19일)의 반감기를 가질 수 있다.
본 발명의 다른 일 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 본 발명의 수득되는 폴리펩타이드가 혈액 뇌 장벽을 통과할 수 있게 하는 하나 이상 (예, 2개, 바람직하게는 1개) 아미노산 서열과 (선택적으로 하나 이상의 적정 링커 서열을 통해) 연결된 본 발명의 하나 이상 (예, 2개, 바람직하게는 1개)의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 특히, 상기 본 발명의 수득되는 폴리펩타이드가 혈액 뇌 장벽을 통과할 수 있게 하는 하나 이상의 아미노산 서열은, 하나 이상 (예로, 2개, 바람직하게는 1개)의 나노바디 (또는 ISV), 예를 들어 WO 02/057445에 기술된 나노바디 (또는 ISV)일 수 있으며, FC44 (WO 06/040153의 서열번호 189) 및 FC5 (WO 06/040154의 서열번호 190)가 바람직한 예이다.
특히, 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 하기로 특정되는 것이다:
- 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 mole/L (즉, 조합 상수 (KA) 105 내지 1012 L/mole 또는 그 이상, 바람직하게는 107 내지 1012 L/mole 또는 그 이상, 바람직하게는 108 내지 1012 L/mole)로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것이거나;
및/또는
- kon-속도 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것이거나;
및/또는
- koff 속도 1 s-1 (t1/2=0.69 s) 내지 10-6 s-1 (t1/2가 수일인 거의 비가역적인 복합체를 제공함), 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것임.
바람직하게는, 본 발명의 하나의 아미노산 서열만을 포함하는 폴리펩타이드는, 바람직하게는, 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 보다 바람직하게는 1 nM 미만, 예로 500 pM의 친화성으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하게 될 것이다. 이러한 측면에서, 본 발명의 2 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 폴리펩타이드는, 본 발명의 하나의 아미노산 서열만을 포함하는 폴리펩타이드와 비교하여, 증가된 항원-항체 결합성으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있음은 당업자에게 자명할 것이다.
본 발명의 아미노산 서열 또는 폴리펩타이드가 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합함에 있어 일부 바람직한 IC50 값은 본원의 추가적인 설명과 예들로부터 명확해질 것이다.
본 발명의 다른 측면은 본 발명의 아미노산 서열 (예, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)) 또는 이를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산에 관한 것이다. 즉, 본 발명의 핵산에 대해 본원에서 포괄적으로 기술된 바와 같이, 이러한 핵산은 본원에 정의된 바와 같이 유전자 구조체의 형태로 존재할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 본 발명의 아미노산 서열 (예, 나노바디 (또는 ISV)) 및/또는 이를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드를 발현하거나 발현할 수 있거나, 및/또는 본 발명의 핵산을 포함하는, 숙주 또는 숙주 세포에 관한 것이다. 이러한 숙주 또는 숙주 세포에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
본 발명의 다른 측면은, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열, 본 발명의 하나 이상의 폴리펩타이드 및/또는 본 발명의 하나 이상의 핵산과, 선택적으로, 즉, 조성물의 의도한 용도에 따라, 자체 공지된 조성물의 하나 이상의 추가적인 구성 성분들을, 함유하거나 포함하는, 산물 또는 조성물에 관한 것이다. 이러한 산물 또는 조성물은 (본원에 기술된 바와 같이) 약학 조성물, 수의학 조성물 또는 (또한, 본원에 기술된 바와 같이) 진단 용도의 산물 또는 조성물일 수 있다. 이러한 산물 또는 조성물에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
또한, 본 발명은 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물의 제조 또는 생산 방법에 관한 것이다. 이러한 방법에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
또한, 본 발명은, 본원에 기술된 아미노산 서열, 화합물, 구조체, 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포, 산물 및 조성물의 이용 및 용도 뿐만 아니라 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 관련된 질환 및 장애의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이다. 이러한 이용 및 용도에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 예들은 본원의 추가적인 설명으로부터 명확해질 것이다.
또한, 본 발명의 다른 측면들, 구현예, 장점 및 응용은 아래 추가적인 설명들로부터 명확해질 것이다.
일반적으로, 본원에서 용어 나노바디 (또는 ISV)는 광의의 의미로 특정한 생물원 또는 특수 제조 방법으로 제한되지 않음에 유념하여야 한다. 예컨대, 아래에서 보다 상세하게 논의되는 바와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 WO 08/020079의 61 및 62페이지에 언급된 기법들 (1) - (8) 중 임의의 기법이나 또는 자체 공지된 임의의 다른 적정 기법으로 수득할 수 있다. 나노바디 (또는 ISV)의 바람직한 한가지 유형은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 천연 중쇄 항체의 VHH 도메인이다. 본원에서 추가로 기술된 바와 같이, 상기한 VHH 서열들은, 일반적으로, 카멜리드 종을 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합으로 적합하게 면역화하거나 (즉, 면역 반응 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 중쇄 항체를 생성시키기 위해), 상기 카멜리드로부터 적정 생물 샘플 (예, 혈액 샘플, 혈청 샘플 또는 B 세포 샘플)을 수득함으로써, 그리고 상기 샘플로 시작하여 자체 공지된 임의의 적정 기법을 이용하여 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 VHH 서열을 제조함으로써, 제조 또는 수득할 수 있다. 이러한 기법은 당업자에게 자명할 것이며 및/또는 본원에서 추가로 기술된다.
다른 예로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 상기한 천연 VHH 도메인은, 카멜리드 VHH 서열의 나이브(naive) 라이브러리로부터, 예컨대, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 또는 이의 적어도 하나 이상의 파트, 단편, 항원 결정부 또는 에피토프를 자체 공지된 한가지 이상의 스크리닝 기법을 이용하여 상기 라이브러리를 스크리닝함으로써, 수득할 수 있다. 이러한 라이브러리 및 기법들은 예컨대 WO 99/37681, WO 01/90190, WO 03/025020 및 WO 03/035694에 기술되어 있다. 다른 예로, 나이브 VHH 라이브러리로부터 유래된 개선된 합성 또는 반-합성 라이브러리, 예컨대 WO 00/43507에 예시된 바와 같이, 랜덤 돌연변이유발 및/또는 CDR 셔플링과 같은 기법에 의해 나이브 VHH 라이브러리로부터 수득되는 VHH 라이브러리를 사용할 수 있다.
따라서, 다른 측면에서, 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 나노바디 (또는 ISV)의 제조 방법에 관한 것이다. 일 측면에서, 상기 방법은 하기 단계를 적어도 포함한다:
a) 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 제공하는 단계;
b) 상기 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 상기 세트, 콜렉션 또는 라이브러리에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 친화성을 가지는 나노바디 (또는 ISV) 서열을 스크리닝 하는 단계; 및
c) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 친화성을 가지는 나노바디 (또는 ISV) 또는 나노바디 (또는 ISV)들을 분리하는 단계.
상기 방법에서, 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 나이브 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 합성 또는 반-합성의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 및/또는 친화성 성숙화를 수행한 나노바디 (또는 ISV) 서열로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다.
본 방법의 바람직한 측면에서, 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 나노바디 (또는 ISV) 서열들로 구성된 면역 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있으며, 구체적으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합으로, 또는 이를 토대로 하거나 이로부터 유래된 적정 항원 결정부, 예컨대 이의 항원성 파트, 단편, 영역, 도메인, 루프 또는 다른 에피토프로 적절하게 면역화된, 카멜리드 종들로부터 유래되어진, VHH 서열들로 구성된 면역 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다. 일 특정 측면에서, 상기 항원 결정부는 세포외 파트, 영역, 도메인, 루프 또는 다른 세포외 에피토프(들)일 수 있다.
상기 방법에서, 나노바디 (또는 ISV) 또는 VHH 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 스크리닝을 돕기 위해, 파지, 파지미드, 리보좀 또는 적정 미생물 (예, 효모) 상에 제시(display) 될 수 있다. 나노바디 (또는 ISV) 서열들(로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리)을 제시 및 스크리닝하기 위한, 적합한 방법, 기법 및 숙주 유기체들은, 예컨대 본원의 추가적인 설명을 기초로 당해 기술 분야의 당업자에게 자명할 것이다. 또한, WO 03/054016과 Hoogenboom in Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 (2005)의 리뷰를 참조한다.
다른 측면에서, 나노바디 (또는 ISV) 서열을 제조하는 방법은 하기 단계들을 적어도 포함한다:
a) 면역글로불린 서열들을 발현하는 카멜리드 종으로부터 유래된 세포 콜렉션 또는 샘플을 제공하는 단계;
b) 상기 세포 콜렉션 또는 샘플에서, (i) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 친화성을 가지는 면역글로불린 서열을 발현하는 세포와, (ii) 중쇄 항체를 발현하는 세포를, (i)와 (ii)를 기본적으로 단일 스크리닝 단계로서 또는 임의의 적정 순서로 2가지 별개의 스크리닝 단계로서 수행할 수 있는, 스크리닝하는 단계로서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 친화성을 가지는 중쇄 항체를 발현하는 하나 이상의 세포를 제공하는 단계;
c) (i) 상기 세포로부터 상기 중쇄 항체에 존재하는 VHH 서열을 분리하거나, 또는 (ii) 상기 세포로부터 상기 중쇄 항체에 존재하는 VHH 서열을 코딩하는 핵산 서열을 분리한 다음 상기 VHH 도메인을 발현시키는 단계.
이러한 측면에 따른 방법에서, 상기 세포 콜렉션 또는 샘플은 예컨대 B 세포 콜렉션 또는 샘플일 수 있다. 또한, 본 방법에서, 세포 샘플은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 또는 이를 토대로 하거나 이로부터 유래된 적정 항원 결정부, 예컨대 이의 항원성 파트, 단편, 영역, 도메인, 루프 또는 다른 에피토프로, 적절하게 면역화한, 카멜리드로부터 유래될 수 있다. 일 특정 측면에서, 상기 항원 결정부는 세포외 파트, 영역, 도메인, 루프 또는 다른 세포외 에피토프(들)일 수 있다.
상기 방법은 당업자에게 자명한 바와 같이 임의의 적합한 방법으로 수행할 수 있다. 예를 들어, EP 0 542 810, WO 05/19824, WO 04/051268 및 WO 04/106377을 참조한다. 단계 b)의 스크리닝은, 바람직하게는, FACS와 같은 유세포 기법을 이용하여 수행한다. 이에 대해서는, 예로, Lieby et al., Blood, Vol. 97, No. 12, 3820을 참조한다. 특히, Ablynx N.V.의 국제출원 WO 06/079372에 기술된 이른바 "Nanoclone™" 기법을 참조할 수 있다.
다른 측면에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열의 제조 방법은 적어도 하기 단계를 포함할 수 있다:
a) 중쇄 항체 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열을 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 제공하는 단계;
b) 상기 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리에서, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대해 친화성을 가지는 중쇄 항체 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열을 코딩하는 핵산 서열을 스크리닝하는 단계; 및
c) 상기 핵산 서열을 분리한 다음, 상기 중쇄 항체에 존재하는 VHH 서열 또는 상기 나노바디 (또는 ISV) 서열을 각각 발현시키는 단계.
상기 방법에서, 상기 중쇄 항체 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열을 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 예컨대, 중쇄 항체 또는 VHH 서열의 나이브 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 나노바디 (또는 ISV) 서열의 합성 또는 반합성 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리; 및/또는 친화성 성숙화가 수행된 나노바디 (또는 ISV) 서열의 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 코딩하는 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리일 수 있다.
본 방법의 바람직한 측면에서, 핵산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 또는 이를 토대로 하거나 이로부터 유래된 적정 항원 결정부, 예컨대 이의 항원성 파트, 단편, 영역, 도메인, 루프 또는 다른 에피토프로 적절하게 면역화된, 카멜리드로부터 유래되어진, 중쇄 항체 또는 VHH 서열들을 코딩하는 핵산 서열의 면역 세트, 콜렉션 또는 라이브러리 일 수 있다. 일 특정 측면에서, 상기 항원 결정부는 세포외 파트, 영역, 도메인, 루프 또는 다른 세포외 에피토프(들)일 수 있다.
상기 방법에서, 뉴클레오티드 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 스크리닝을 돕기 위해, 파지, 파지미드, 리보좀 또는 적정 미생물 (예, 효모) 상에 제시될 수 있다. 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열들(로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리)을 제시 및 스크리닝하기 위한, 적합한 방법, 기법 및 숙주 유기체들은, 예컨대 본원의 추가적인 설명을 기초로 당해 기술 분야의 당업자에게 자명할 것이다. 또한, WO 03/054016과 Hoogenboom in Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 (2005)의 리뷰를 참조한다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 본원에 기술된 방법들에서 스크리닝 단계는 또한 선별 단계로서 수행할 수 있다. 즉, 용어 "스크리닝"은 본원에서 선별, 스크리닝 또는 선별 및/또는 스크리닝 기법들의 임의 적정 조합을 포함할 수 있다. 또한, 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 사용하는 경우, 이는 임의의 적정 수의 서열들, 예컨대 1, 2, 3 또는 약 5, 10, 50, 100, 500, 1000, 5000, 104, 105, 106, 107, 108 또는 그 이상의 수의 서열들을 포함할 수 있다.
또한, 상기 아미노산 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리에서 하나 이상의 서열 또는 모든 서열들은, 합리적으로 또는 반-실험적인 방식, 예컨대 컴퓨터 모델링 기법, 생물정역학(biostatic) 또는 데이타 마이닝 기법에 의해 수득 또는 규명할 수 있다.
아울러, 이러한 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는, 다른 것으로부터 유래된 변이체 (예, 계획한 점 돌연변이나 랜덤 포지션을 가지고 있음)인, 1개, 2개 또는 그 이상의 수의 서열들을 포함할 수 있으며, 천연적으로 다양화된 서열들로 구성된 다양성 세트(diverse set) (예, 면역 라이브러리)로부터 유래된 복수의 서열들 또는 임의의 다른 소스의 다양한 서열들을 포함할 수 있다 (예, Hoogenboom et al, Nat Biotechnol 23:1105, 2005 및 Binz et al, Nat Biotechnol 2005, 23:1247). 상기한 서열들로 구성된 세트, 콜렉션 또는 라이브러리는 파지 입자, 리보좀, 박테리아, 효모 세포, 포유류 세포의 표면에 제시될 수 있으며, 이들 캐리어(carrier) 안에서 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 연계될 수 있다. 이로써 상기 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 본 발명의 원하는 아미노산 서열을 분리하기 위한 선별 절차들에서 다루기 쉬워진다. 보다 일반적으로, 서열이 적정 숙주나 숙주 세포 상에 제시되는 경우, 상기 숙주 또는 숙주 세포로부터 원하는 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 먼저 분리한 다음, 적합한 숙주 유기체에서 상기 뉴클레오티드 서열을 적절하게 발현시킴으로써 원하는 서열을 수득하는 것도 가능하다. 즉, 이는 당업자에게 자명한 바와 같이 자체 공지된 임의의 적합한 방식으로 수행할 수 있다.
IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 VHH 서열 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열을 수득하기 위한 또 다른 기법은, (즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 면역 반응 및/또는 중쇄 항체를 형성하기 위해) 중쇄 항체를 발현할 수 있는 형질전환 포유류를 적합하게 면역화하는 단계, 상기 VHH 서열 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열 (을 코딩하는 핵산 서열)을 포함하는 상기 형질전환 포유류로부터 적절한 생물학적 샘플 (예, 혈액 샘플, 혈청 샘플 또는 B 세포)을 수득하는 단계, 및 자체 공지된 임의의 적합한 기법 (예, 본원에 기술된 임의의 방법 또는 하이브리도마 기법)을 이용하여 상기 샘플에서 시작하여 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 VHH 서열을 수득하는 단계를 포함한다. 예컨대, 이를 위해, 중쇄 항체를 발현하는 마우스 및 WO 02/085945, WO 04/049794, WO 06/008548 및 Janssens et al., Proc. Natl. Acad. Sci .USA. 2006 Oct 10;103(41):15130-5에 기술된 추가적인 방법들과 기법들을 사용할 수 있다. 예를 들어, 상기한 중쇄 항체를 발현하는 마우스는, 천연 소스 유래의 (단일) 가변성 도메인 (예, 인간 (단일) 가변성 도메인, 카멜 (단일) 가변성 도메인 또는 상어 (단일) 가변성 도메인) 뿐만 아니라 예를 들어 합성 또는 반-합성의 (단일) 가변성 도메인 등의, 모든 적합한 (단일) 가변성 도메인을 가진 중쇄 항체를 발현할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기한 방법에 의해 수득되거나, 또는 다른 예로 상기 방법들 중 한가지와, 아울러, 상기 VHH 서열 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열의 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열을 결정하는 단계; 및 적정 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서의 발현 또는 화학 합성과 같이 자체 공지된 방식으로 상기 VHH 서열 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열을 발현 또는 합성하는 단계를 적어도 포함하는 방법에 의해 수득되는, VHH 서열 또는 나노바디 (또는 ISV) 서열에 관한 것이다.
본원에 언급된 바와 같이, 본 발명의 특히 바람직한 유형의 나노바디 (또는 ISV)는, 천연 VHH 도메인의 아미노산 서열에 대응되지만, "인간화"된, 즉, WO 08/020079 63 페이지에 추가적으로 기술된 바와 같이 언급된 기술을 이용하여, 상기 천연 VHH 서열 (특히 프래임워크 서열)의 아미노산 서열내 하나 이상의 아미노산 잔기를, (예, 상기 나타낸) 인간 유래 통상적인 4쇄 항체 VH 도메인에서 해당 위치(들)에 존재하는 하나 이상의 아미노산 잔기들로 치환함으로써, 인간화된 아미노산 서열을 가진 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 본 발명의 다른 특히 바람직한 나노바디 (또는 ISV) 유형은, 천연 VH 도메인의 아미노산 서열에 대응되지만, 즉, 통상적인 4쇄 항체 유래의 천연 VH 도메인의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 WO 08/020079의 63페이지에서 추가로 기술된 바와 같이 언급된 기법을 이용하여, 중쇄 항체의 VHH 도메인에서 대응되는 위치(들)에 있는 하나 이상의 잔기들로 치환함으로써 "카멜화된" 아미노산 서열을 가진 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다.
천연 VH 서열 또는 바람직하게는 VHH 서열로부터 시작하여, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 이를 코딩하는 핵산을 수득하기 위한 다른 적합한 방법 및 기법들은, 당업자에게 자명할 것이며, WO 08/00279 64페이지에 언급된 기술을 포함할 수 있다. 본원에 언급된 바와 같이, 나노바디 (또는 ISV)는 하나 이상의 프래임워크 서열내 하나 이상의 (본원에 기술된 바와 같이) "홀마크 잔기"의 존재가 특징적일 수 있다.
일반적으로, 면역글로불린 단일 가변성 도메인 (구체적으로, VHH 서열 및 서열 최적화된 면역글로불린 단일 가변성 도메인)은 하나 이상의 프래임워크 서열 (본원에 추가적으로 기재된 바와 같이)에 하나 이상의 (본원에 기술된 바와 같이) "홀마크 잔기"의 존재가 특히 특징적일 수 있다.
따라서, 일반적으로, 면역글로불린 단일 가변성 도메인은 (일반) 구조식을 가진 아미노산 서열로서 정의될 수 있으며:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4
여기에서, FR1 내지 FR4는 각각 프래임워크 영역 1 - 4이고, CDR1 내지 CDR3는 각각 상보성 결정부 1 - 3이다.
바람직한 측면에서, 본 발명은 (일반) 구조식의 아미노산 서열을 가지는 적어도 면역글로불린 단일 가변성 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4
여기에서, FR1 내지 FR4는 각각 프래임워크 영역 1 - 4이고, CDR1 내지 CDR3는 각각 상보성 결정부 1 - 3이되,
i) 바람직하게는, Kabat 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108 위치에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는 아래 표 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택되고,
ii) 상기 아미노산 서열은 WO 2009/138519 (본원의 서열번호 1 내지 125, 또는 WO 2009/138519)에 나타낸 면역글로불린 단일 가변성 도메인들 중 적어도 하나와 적어도 80%, 더 바람직하게는 90%, 보다 더 바람직하게는 95%의 아미노산 동일성을 가지며, 아미노산 동일성 수준을 결정함에 있어, CDR 서열을 구성하는 (서열에 X로 표시된) 아미노산 잔기들은 배제되며;
iii) CDR 서열들은 일반적으로 본원에서 추가적으로 정의된 바와 같다 (예, 표 (B-2)에 나타낸 조합의 CDR1, CDR2 및 CDR3, CDR 규정은 카바트 넘버링 체계에 따라 산정됨).
표 B-2: VHH에서의 홀마크 잔기들
위치 인간 VH3 홀마크 잔기들
11 L, V; 주로 L L, S, V, M, W, F, T, Q, E, A, R, G, K, Y, N, P, I; 바람직하게는 L
37 V, I, F; 통상 V F(1), Y, V, L, A, H, S, I, W, C, N, G, D, T, P, 바람직하게는 F(1) 또는 Y
44(8) G E(3), Q(3), G(2), D, A, K, R, L, P, S, V, H, T, N, W, M, I;
바람직하게는 G(2), E(3) 또는 Q(3); 가장 바람직하게는 G(2) 또는 Q(3) .
45(8) L L(2), R(3), P, H, F, G, Q, S, E, T, Y, C, I, D, V; 바람직하게는 L(2) 또는 R(3)
47(8) W, Y F(1), L(1) 또는 W(2) G, I, S, A, V, M, R, Y, E, P, T, C, H, K, Q, N, D; 바람직하게는 W(2) , L(1) 또는 F(1)
83 R 또는 K; 통상 R R, K(5), T, E(5), Q, N, S, I, V, G, M, L, A, D, Y, H; 바람직하게는 K 또는 R; 가장 바람직하게는 K
84 A, T, D; 주로 A P(5), S, H, L, A, V, I, T, F, D, R, Y, N, Q, G, E; 바람직하게는 P
103 W W(4), R(6), G, S, K, A, M, Y, L, F, T, N, V, Q, P(6), E, C; 바람직하게는 W
104 G G, A, S, T, D, P, N, E, C, L; 바람직하게는 G
108 L, M 또는 T; 주로 L Q, L(7), R, P, E, K, S, T, M, A, H; 바람직하게는 Q 또는 L(7)
주의:
(1) 특히, 비제한적으로, 43-46 위치에서 KERE 또는 KQRE와 조합.
(2) 일반적으로 44-47 위치에서 GLEW.
(3) 일반적으로 43-46 위치에서 KERE 또는 KQRE, 예, 43-47 위치에서 KEREL, KEREF, KQREL, KQREF, KEREG, KQREW 또는 KQREG. 다른 예로, TERE (예, TEREL), TQRE (예, TQREL), KECE (예, KECEL or KECER), KQCE (예, KQCEL), RERE (예, REREG), RQRE (예, RQREL, RQREF 또는 RQREW), QERE (예, QEREG), QQRE, (예, QQREW, QQREL 또는 QQREF), KGRE (예, KGREG), KDRE (예, KDREV) 등의 서열도 가능함. 일부 다른 예로 가능하지만, 덜 바람직한 서열은, 예로 DECKL 및 NVCEL임.
(4) 44-47 위치에 GLEW를, 43-46 위치에 KERE 또는 KQRE.
(5) 천연 VHH 도메인의 83-84번 위치에서 대개 KP 또는 EP.
(6) 구체적이나 비제한적으로, 44-47번 위치에서 GLEW로 조합됨.
(7) 44-47번 위치가 GLEW인 한, 108번 위치는 103번 위치에 W를 또한 포함하는 (비-인간화된) VHH 서열에서 항상 Q임.
(8) GLEW 그룹은 또한 44-47번 위치에 GLEW-유사 서열, 예로, GVEW, EPEW, GLER, DQEW, DLEW, GIEW, ELEW, GPEW, EWLP, GPER, GLER 및 ELEW를 포함함.
다시 말해, 상기한 면역글로불린 단일 가변성 도메인은 임의의 적정 소스로부터 임의의 적합한 방식으로 유래될 수 있으며, 예를 들어, (즉, 적정 카멜리드 종, 예컨대 라마 유래) 천연 VHH 서열, 또는 합성 또는 반-합성 VH 또는 VL (예, 인간 유래)일 수 있다. 이러한 면역글로불린 단일 가변성 도메인은 "인간화된"으로 아니면 "서열 최적화된" VHH, "카멜화된" 면역글로불린 서열 (특히, 카멜화된 중쇄 가변성 도메인 서열, 즉, 카멜화된 VH) 뿐만 아니라 인간 VH, 인간 VL, 친화성 성숙화 (예, 합성, 랜덤 또는 천연 면역글로불린 서열로부터 출발됨), CDR 그래프팅, 베니어화(veneering), 여러가지 면역글로불린 서열들로부터 유래된 단편들의 조합, 중첩성 프라이머를 이용한 PCR 어셈블리 및 당업자에게 잘 공지된 면역글로불린 서열을 조작하기 위한 유사 기술; 또는 본원에 상세히 기술된 바와 같이 전술한 임의의 내용의 임의의 적정 조합과 같은 기법에 의해 변형시킨 카멜리드 VHH를 포함할 수 있다.
다른 바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명은, CDR 서열들이 서열번호 623 내지 693 (표 A-1)의 적어도 하나의 아미노산 서열의 CDR 서열에 대해 적어도 70%의 아미노산 동일성, 바람직하게는 적어도 80%의 아미노산 동일성, 더 바람직하게는 적어도 90%의 아미노산 동일성, 예를 들어 95%의 아미노산 동일성 또는 그 이상, 심지어 기본적으로 100%의 아미노산 동일성을 가지는, 전술한 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다. 이러한 아미노산 동일성 수준은, 예를 들어, 상기 나노바디 (또는 ISV)와 서열번호 623 내지 693 (표 A-1) 중 하나 이상의 서열 간의 아미노산 동일성 수준을 (본원에 기술된 방식으로) 측정함으로써 결정할 수 있으며, 이때 프래임워크 영역을 구성하는 아미노산 잔기들은 배제된다. 이러한 나노바디 (또는 ISV)는 본원에 상세히 기술된 바와 같을 수 있다.
본원에서 앞서 언급한 바와 같이, 본 발명의 다른 바람직하지만 비제한적인 측면은, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 서열번호 623 내지 693 (표 A-1) 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더 바람직하게는 95% 이상, 예로, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성 (본원에 정의된 바와 같이)을 가지는 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 나노바디 (또는 ISV)에 관한 것이다.
또한, 상기 나노바디 (또는 ISV)에서:
i) (본원에서 정의되는 바와 같이 인간화 치환이 아닌 경우) 임의의 아미노산 치환은, 바람직하게는, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1) 중 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 보존적인 아미노산 치환이거나;
및/또는
ii) 이의 아미노산 서열은, 바람직하게는, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1) 중 대응되는 아미노산 서열과 비교하여, 오직 1개의 아미노산 치환, 또는 바람직하게는 5개 이하, 바람직하게는 3개 이상, 더 바람직하게는 오직 1개 또는 2개의 아미노산 결손 또는 삽입을 포함하거나;
및/또는
iii) CDR은, 예를 들어, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1) 중 대응되는 아미노산 서열의 CDR로부터 출발하여 친화성 성숙화를 통해 유래된 CDR일 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, 상기 CDR 서열들과 FR 서열들은, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) (및 이를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드)가 하기가 되게 하는 것이다:
- 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 mole/L (즉, 조합 상수 (KA) 105 내지 1012 L/mole 또는 그 이상, 바람직하게는 107 내지 1012 L/mole 또는 그 이상, 더 바람직하게는 108 내지 1012 L/mole)로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하거나;
및/또는
- kon-속도 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하거나;
및/또는
- koff 속도 1 s-1 (t1/2=0.69 s) 내지 10-6 s-1 (t1/2가 수일인 거의 비가역적인 복합체를 제공함), 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합함.
바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서, CDR 서열들과 FR 서열들은, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 500 nM, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 500 pM 미만의 친화성으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합되게 하는 것이다.
본 발명의 비제한적인 일 측면에 따르면, 나노바디 (또는 ISV)는 본원에 정의된 바와 같을 수 있지만, 단, 적어도 하나 이상의 프래임워크 영역내에, 천연 인간 VH 도메인의 대응되는 프래임워크 영역과 비교하여, 특히 DP-47의 대응되는 프래임워크 영역과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 적어도 "하나의 아미노산 차이"를 가진다. 보다 구체적으로, 본 발명의 한가지 비제한적인 측면에 따라면, 나노바디 (또는 ISV)는 본원에 정의된 바와 같을 수 있지만, 단, 적어도 하나 이상의 홀마크 잔기 (108, 103 및/또는 45번 위치의 잔기들을 포함함)에, 천연 인간 VH 도메인의 대응되는 프래임워크 영역과 비교하여, 특히 DP-47의 대응되는 프래임워크 영역과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이) 적어도 "하나의 아미노산 차이"를 가진다. 통상적으로, 나노바디 (또는 ISV)는 FR2 및/또는 FR4 중 적어도 하나에서, 특히 FR2 및/또는 FR4내 하나 이상의 홀마트 잔기 (즉, 108, 103 및/또는 45번 위치의 잔기들을 포함함)에서, 천연 VH 도메인과 하나 이상의 아미노산 차이를 가질 것이다.
또한, 본 발명의 인간화된 나노바디 (또는 ISV)는 본원에 정의된 바와 같을 수 있지만, 단, 적어도 하나 이상의 프래임워크 영역내에, 천연 VHH 도메인의 대응되는 프래임워크 영역과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이, 적어도 "하나의 아미노산 차이"를 가진다. 더욱 특히, 본 발명에 따른 비제한적인 일 측면에 따르면, 인간화된 나노바디 (또는 ISV)는 본원에 정의된 바와 같을 수 있지만, 단, 적어도 하나 이상의 홀마크 잔기 (108, 103 및/또는 45번 위치의 잔기들을 포함함)에, 천연 VHH 도메인의 대응되는 프래임워크 영역과 비교하여, (본원에 정의된 바와 같이, 적어도 "하나의 아미노산 차이"를 가진다. 통상적으로, 인간화된 나노바디 (또는 ISV)는 FR2 및/또는 FR4 중 적어도 하나에서, 특히 FR2 및/또는 FR4내 하나 이상의 홀마트 잔기 (즉, 108, 103 및/또는 45번 위치의 잔기들을 포함함)에, 천연 VHH 도메인과 하나 이상의 아미노산 차이를 가질 것이다.
본원의 내용으로부터 명확해지는 바와 같이, 본원에 정의된, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 천연 또는 합성 유사체, 돌연변이, 변이체, 대립유전자, 상동체 및 오르소로그 (본원에서는 총체적으로 "유사체"로 지칭됨), 특히 서열번호 623 - 693 (표 A-1)의 나노바디 (또는 ISV)에 대한 유사체를 사용하는 것 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명의 일 측면에 따라, 용어 "본 발명의 나노바디 (또는 ISV)"는 광의의 의미로서 이러한 유사체들을 포괄한다.
일반적으로, 상기한 유사체에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가, 본원에 정의된 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)와 비교하여 치환, 결손 및/또는 첨가된 것일 수 있다. 이러한 치환, 삽입 또는 결손은 하나 이상의 프래임워크 영역 및/또는 하나 이상의 CDR들에서 행해질 수 있다. 이러한 치환, 삽입 또는 결손이 하나 이상의 프래임워크 영역에서 행해지는 경우, 홀마크 잔기에서의 치환, 삽입 또는 결손이 일반적으로 선호되지 않더라도 (이들이 본원에 기술된 바와 같이 적합한 인간화 치환이 아니더라도), 프래임워크 영역내 하나 이상의 홀마크 잔기 및/또는 다른 하나 이상의 위치에서 행해질 수 있다.
비제한적인 예로서, 치환은, 예를 들어, (본원에 기술된 바와 같이) 보존적인 치환일 수 있거나, 및/또는 아미노산 잔기는 다른 VHH 도메인내 동일 위치에서 천연적으로 존재하는 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있지만 (이러한 치환에 대한 일부 비제한적인 예로, 표 B-4 내지 B-7), 본 발명은 일반적으로 이러한 것으로 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 특성을 개선시키거나, 또는 적어도, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 원하는 특징들, 특징들의 밸런스 또는 특징들의 조합을 심하게 (즉, 나노바디 (또는 ISV)가 의도한 용도에 더 이상 적합하지 않게 되는 수준까지) 감소시키지 않는, 임의의 하나 이상의 치환, 결손 또는 삽입, 또는 이의 임의 조합은, 본 발명의 범위에 포함된다. 당해 기술 분야의 당업자라면, 일반적으로, 본원의 내용을 토대로, 그리고 선택적으로는, 예를 들어, 제한된 수의 가능한 치환을 도입하여 수득되는 나노바디 (또는 ISV)의 특성에 대한 이의 영향을 확인하는 단계를 포함할 수 있는, 제한된 수준의 일상적인 실험을 수행한 후, 적합한 치환, 결손 또는 삽입, 또는 이들의 적정 조합을 결정할 수 있을 것이다.
예를 들어, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용되는 숙주 유기체에 따라, 이러한 결손 및/또는 치환은, 당해 기술 분야의 당업자의 능력에 포함되는 바와 같이, 번역 후 수정을 위한 한 곳 이상의 부위 (예, 한 곳 이상의 당화 부위)가 제거되는 방식으로 설계될 수 있다. 다른 예로, 치환 또는 삽입은, 예를 들어 (본원에 재차 언급된 바와 같이) 부위-특이적인 페길화가 가능한 (본원에 기술된) 관능기를 부착하기 위한 하나 이상의 부위를 도입하도록 설계될 수 있다.
상기 표 B-4 내지 B-7에 제시된 VHH 엔트로피(entropy) 및 VHH 다변성(variability) 데이타로부터 알 수 있는 바와 같이, 프래임워크 영역내 일부 아미노산 잔기들이 다른 것들에 비해 보존성이 높다. 일반적으로, 본 발명은 광의의 측면에서는 이로 한정되지 않지만, 임의의 치환, 결손 또는 삽입은, 바람직하게는 보존성이 낮은 위치에서 이루어진다. 아울러, 일반적으로, 아미노산 치환이 아미노산 결손 또는 삽입 보다 선호된다.
유사체는, 바람직하게는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 대해 정의되는 바와 같은 친화성 (KD-값 (실제 값 또는 겉보기 값), KA-값 (실제 값 또는 겉보기 값), kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 적절하게 측정 및/또는 표현됨)으로 결합할 수 있는 것이다.
유사체는, 또한, 바람직하게는, 본원에 기술된 나노바디 (또는 ISV)의 우호적인 특성들을 유지하는 것이다.
또한, 바람직한 일 측면에 따라, 유사체는, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1) 중 한가지 나노바디 (또는 ISV)에 대해, 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더 바람직하게는 적어도 90%, 예로, 적어도 95%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지거나, 및/또는 (본원에 정의된 바와 같이) 바람직하게는 약 20개, 바람직하게는 10개, 보다 더 바람직하게는 5개, 예를 들어, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이만 가진다.
또한, 유사체의 프래임워크 서열 및 CDR 서열들은, 바람직하게는, 본원에 정의된 바람직한 측면에 따르는 것이다. 보다 일반적으로는, 본원에 기술된 바와 같이, 유사체는, (a) 108 위치에 Q; 및/또는 (b) 45번 위치에 하전된 아미노산 또는 시스테인 및 바람직하게는 44번 위치에 E, 더 바람직하게는 44번 위치에 E와 45번 위치에 R; 및/또는 (c) 103번 위치에 P, R 또는 S를 가질 것이다.
본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 바람직한 클래스의 유사체는 (즉, 본 발명의 천연 나노바디 (또는 ISV)의 서열에 비해) 인간화된 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 본원에 언급한 백그라운드 분야에서 언급된 바와 같이, 이러한 인간화는 일반적으로 천연 VHH의 서열내 하나 이상의 아미노산 잔기를 인간 VH3 도메인과 같은 인간 VH 도메인내 동일 위치에 존재하는 아미노산 잔기로 치환하는 것을 포함한다. 가능한 인간화 치환 또는 인간화 치환들의 조합에 대한 예들은, 예를 들어, 본원의 표들로부터, 본원에 언급된 백그라운드 분야에서 언급되는 가능한 인간화 치환들로부터, 및/또는 나노바디 (또는 ISV)의 서열과 천연 인간 VH 도메인 서열 간의 비교를 통해, 당업자에게 명확해질 것이다.
인간화 치환은, 제조되는 인간화된 나노바디 (또는 ISV)가 본원에 정의된 바와 같은 나노바디 (또는 ISV)의 우호적인 특징들을 여전히 유지하도록, 보다 바람직하게는, 선행 단락에서 유사체에 대해 기술된 바와 같도록 선택되어야 한다. 당업자라면, 본원의 내용과, 선택적으로는, 예를 들어, 제한된 수의 가능한 인간화 치환을 도입하여 수득되는 나노바디 (또는 ISV)의 특성에 대한 이의 영향을 확인하는 단계를 포함할 수 있는, 제한된 수준의 일상적인 실험을 수행한 후, 적합한 인간화 치환 또는 인간화 치환들의 적정 조합을 결정 및 선택할 수 있을 것이다.
통상적으로, 인간화의 결과로서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는, 본원에 기술된 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 우호적인 특성들을 그대로 유지하면서 보다 "인간에 가까워"지게 될 수 있다. 그 결과, 이러한 인간화된 나노바디 (또는 ISV)는, 대응되는 천연 VHH 도메인에 비해, 면역원성 감소 등의 몇가지 이점을 가질 수 있다. 다시 말해, 본원의 내용과 선택적으로 제한된 수준의 일상적인 실험을 수행함으로써, 당업자들은, 인긴화 치환에 의해 부여되는 우호적인 특성과 천연 VHH 도메인의 우호적인 특성들 간의 바람직한 또는 적합한 균형을 최적화 또는 달성하는, 인간화 치환 또는 적정 인간화 치환들의 조합을 선택할 수 있을 것이다.
본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는, 임의의 프래임워크 잔기(들)에, 예컨대 (본원에 정의된 바와 같이) 하나 이상의 홀마크 잔기 또는 하나 이상의 다른 프래임워크 잔기 (즉, 홀마크 잔기가 아닌 잔기) 또는 이들의 임의의 적정 조합 위치에서 적절하게 인간화될 수 있다. "P,R,S-103 그룹" 또는 "KERE 그룹"의 나노바디 (또는 ISV)에 바람직한 한가지 인간화 치환은 Q108을 L108로 치환하는 것이다. "GLEW 클래스"의 나노바디 (또는 ISV) 또한, 다른 홀마크 잔기들 중 적어도 하나가 카멜리드 (카멜화) 잔기를 (본원에 정의된 바와 같이) 포함하는 한, Q108을 L108로 치환함으로써 인간화될 수 있다. 예를 들어, 전술한 바와 같이, 인간화된 나노바디 (또는 ISV)에 대한 특히 바람직한 한가지 클래스는 44-47번 위치에 GLEW 또는 GLEW-like 서열을; 103번 위치에 P, R 또는 S (특히, R); 및 108번 위치에 L을 가진다.
인간화된 다른 유사체, 및 이를 코딩하는 핵산 서열은 자체 공지된 임의 방식으로, 예를 들어 WO 08/020079의 103 및 104 페이지에 언급된 한가지 이상의 기법을 이용하여 제공할 수 있다.
또한, 본원에 기술된 인간화 치환 외에도, 본 발명의 아미노산 서열은 하나 이상의 다른/추가적인 치환을 포함할 수 있다. 즉, 이러한 다른/추가적인 치환에 대한 바람직하나 비제한적인 일부 예들은 본원에 추가적인 설명들로부터 명확해질 것이며, 예를 들어 하기 치환들 중 하나 이상을 포함(바람직하게는 이들로 필수적으로 구성)할 수 있다:
(a) 하나 이상의 보존적인 아미노산 치환; 및/또는
(b) 특정 위치의 "카멜리드" 아미노산 잔기를 상기 위치에 존재하는 다른 "카멜리드" 아미노산 잔기로 치환하는, 한가지 이상의 치환으로서, 이는 야생형 VHH의 각 아미노산 위치에 존재하는 다양한 카멜리드 잔기들이 언급된 PCT/EP2008/066365 (2009년 6월 4일자로 WO 09/068627로 공개됨)의 표 A-6 내지 A-9를 참조한다. 이러한 치환은 홀마크 위치에 존재하는 아미노산을 야생형 VHH의 홀마크 위치에 존재하는 다른 아미노산 잔기로 적절하게 치환하는 것도 포함할 수 있다 (예로, PCT/EP2008/066365의 표 A-6 내지 A-9를 참조함); 및/또는
(c) 단백질의 보관시 장기 안정성 및/또는 특성들을 개선시키는 치환 등의, 단백질의 (다른) 특성들을 개선시키는 한가지 이상의 치환. 이는, 비제한적인 예로, (예, 메티오닌 잔기의) 산화 현상을 방지 또는 감소; 피로글루타메이트 형성을 방지 또는 감소; 및/또는 (예로, DG, DS, NG 또는 NS 모티프의) 아스파르트산 또는 아스파라긴의 이성체화 또는 탈아미드화를 방지 또는 감소하는 치환일 수 있다. 이러한 치환에 대해서는, 일반적으로 이러한 치환을 이용함으로써 단일 면역글로불린 가변성 도메인을 안정화하는 방법에 관한 것이며 적합한 치환에 대한 일부 구체적인 예도 제시해주는, 국제 출원 WO 09/095235를 참조한다 (예, 4, 5 및 10-15 페이지). 이러한 치환에 대한 일 예는, 82a 및 82b 위치의 NS 모티프를 NN 모티프로 치환하는 것일 수 있다 (비교, 본원의 B-6);
(d) 의도한 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서 발현 수준을 개선시키거나, 및/또는 원하는 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서 생산/발현과 관련된 다른 특성들을 개선시키는, 한가지 이상의 치환. 이는, 예를 들어, 발현/생산을 위해 사용되는 숙주 세포 또는 숙주 유기체에 따라, (바람직하지 않은) 번역 후 수정이 발생할 가능성이 있는 부위를 제거하거나, 및/또는 (바람직하지 않은) 번역 후 수정 (비제한적인 예로, 당화 또는 인산화 가능성이 있는)을 줄이는 치환을 포함할 수 있으며, 예컨대, (재차, 사용되는 숙주 세포나 숙주 유기체에 따라) 단백질 분해되기 쉬울 수 있는 부위를 제거하는 치환을 포함할 수 있다.
인간화된 및/또는 서열-최적화된 본 발명의 아미노산 서열에 대한 일부 구체적인지만 비제한적인 예들은 도 7과 서열번호 760-825로 제공되며, 이들 각각은 본 발명의 다른 측면들을 구성한다. 본원에 추가적인 내용을 토대로, 당업자라면 본 발명의 다른 인간화된 및/또는 서열-최적화된 아미노산 서열을 제공할 수 있을 것이다.
도 8과 서열번호 826 내지 837은 빌딩 블럭으로서 본 발명의 인간화된 및/또는 서열-최적화된 아미노산 서열들을 기초로 하는 본 발명의 폴리펩타이드의 몇가지 바람직하나 비제한적인 예들을 제공하며, 이들 각각은 본 발명의 다른 측면들을 구성한다. 본원에 추가적인 내용을 토대로, 당업자라면 본 발명의 다른 인간화된 및/또는 서열-최적화된 아미노산 서열을 기초로 하는 본 발명의 다른 화합물 및/또는 폴리펩타이드를 제공할 수 있을 것이다.
언급된 바와 같이, 당업자라면, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) (이의 유사체도 포함됨)를, 인간 VH 서열 (즉, 아미노산 서열 또는 대응되는 뉴클레오티드 서열), 예컨대 DP-47, DP-51 또는 DP-29 등의 인간 VH3 서열들로부터 출발하여, 즉, 하나 이상의 카멜화 치환을 도입하여 (즉, 상기 인간 VH 도메인의 아미노산 서열내 하나 이상의 아미노산 잔기를 VHH 도메인내 대응되는 위치에 존재하는 아미노산 잔기로 바꿈), 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 서열을 제공하거나 및/또는 이로써 수득되는 서열에 나노바디 (또는 ISV)의 우호적인 특성을 부여함으로써, 설계 및/또는 제조할 수 있음이 자명할 것이다. 다시 말해, 이는 일반적으로 다양한 방법들과 앞의 단락에 언급된 기법으로 출발 포인트로서 인간 VH 도메인에 대한 아미노산 서열 및/또는 뉴클레오티드 서열을 이용하여 수행할 수 있다.
일부 바람직하나 비제한적인 카멜화 치환은 표 B-4 내지 B-7로부터 유래될 수 있다. 또한, 홀마크 잔기들 중 하나 이상에서의 카멜화 치환이, 일반적으로, 한곳 이상의 다른 아미노산 위치에서의 치환 보다 바람직한 특성에 대해 강한 영향력을 가질 것임에 자명할 것이지만, 이들 치환 둘다 그리고 이들의 임의의 적정 조합도 본 발명의 범위에 포함된다. 예를 들어, 적어도 몇가지 바람직한 특징을 이미 부여하는 하나 이상의 카멜화 치환을 도입한 다음, 상기 특징을 추가로 개선시키거나 및/또는 추가적인 우호적인 특징들을 부여하는 다른 카멜화 치환을 도입하는 것도 가능한 일이다. 다시 말해, 당업자들은, 일반적으로, 본원의 내용을 토대로, 그리고 선택적으로는, 예를 들어, 제한된 수의 가능성 있는 카멜화 치환을 도입한 다음 나노바디 (또는 ISV)의 우호적인 특징이 (즉, 오리지날 VH 도메인과 비교하여) 달성되거나 개선되는지를 확인하는 단계를 포함할 수 있는, 제한된 수준의 일상적인 실험을 수행한 후, 적합한 카멜화 치환 또는 이들의 적정 조합을 결정할 수 있을 것이다.
그러나, 일반적으로, 이러한 카멜화 치환은, 바람직하게는, 수득되는 아미노산 서열이 적어도 (a) 108 위치에 Q; 및/또는 (b) 45번 위치에 하전된 아미노산 또는 시스테인 및 바람직하게는 44번 위치에 E, 더 바람직하게는 44번 위치에 E 및 45번 위치에 R; 및/또는 (c) 103번 위치에 P, R 또는 S; 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 카멜화 치환을 포함하게 하는 것이다. 더 바람직하게는, 상기 카멜화 치환은, 인간화된 유사체 및/또는 바람직하게는 앞 단락들에서 정의된 유사체에서와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 (본원에 정의된 바와 같이) 이의 유사체가 제조되게 하는 것이다.
또한, 나노바디 (또는 ISV)는 천연적으로는 드물지만, 그럼에도 불구하고 구조적으로 VH 도메인 폴드에 적합한, 치환을 병합함으로써, VH 도메인으로부터 유래될 수 있다. 비제한적인 예로서, 이들 치환은 다음과 같은 한가지 이상을 포함할 수 있다: 35번 위치에 Gly, 37번 위치에 Ser, Val 또는 Thr, 39번 위치에 Ser, Thr, Arg, Lys, His, Asp 또는 Glu, 45번 위치에 Glu 또는 His, 47번 위치에 Trp, Leu, Val, Ala, Thr 또는 Glu, 50번 위치에 S 또는 R (Barthelemy et al. J Biol Chem. 2008 Feb 8;283(6):3639-54. Epub 2007 Nov 28).
본원의 내용으로부터 명확해지는 바와 같이, 본원에 정의된 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 일부분 또는 단편, 또는 2 이상의 일부분 또는 단편의 조합, 특히 서열번호 623 내지 693 (표 A-1)의 나노바디 (또는 ISV)의 일부분 또는 단편을 이용하는 것도, 본 발명의 범위에 포함된다. 이에, 본 발명의 일 측면에 따라, 용어 "본 발명의 나노바디 (또는 ISV)"는 광의의 측면에서 이러한 일부분 또는 단편들을 역시 포괄한다.
일반적으로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) (이의 유사체 포함)의 상기한 일부분 또는 단편들은, 본 발명의 대응되는 전장 나노바디 (또는 ISV)의 아미노산 서열과 비교하여, N-말단에 1개 이상의 아미노산 잔기, C-말단에 1개 이상의 아미노산 잔기, 1개 이상의 연속한 내부 아미노산 잔기 또는 이들의 임의 조합이, 결손 및/또는 제거된, 아미노산 서열을 가진다.
상기 일부분 또는 단편들은, 바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 대해 본원에 정의된 바와 같은, 친화성 (KD-값 (실제 값 또는 겉보기 값), KA-값 (실제 값 또는 겉보기 값), a kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로서, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 적절하게 측정 및/또는 표현됨)으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있는 것이다.
임의의 일부분 또는 단편은, 바람직하게는, 본 발명의 대응되는 전장 나노바디 (또는 ISV)의 아미노산 서열에서, 10개 이상의 연속적인 아미노산 잔기들, 바람직하게는 20개 이상의 연속적인 아미노산 잔기들, 보다 바람직하게는 30개 이상의 연속적인 아미노산 잔기들, 예를 들어 40개 이상의 연속적인 아미노산 잔기들을 포함하는 것이다.
또한, 임의의 일부분 또는 단편은, 바람직하게는, CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 중 적어도 하나, 또는 이의 적어도 일부분 (특히, 적어도 CDR3 또는 적어도 이의 일부분)을 포함하는 것이다. 보다 바람직하게는, 임의의 일부분 또는 단편은, 1종 이상의 CDR (바람직하게는 적어도 CDR3 또는 이의 일부분)과, 바람직하게는 적정 프래임워크 서열(들) 또는 이의 적어도 일부분에 의해 연결된, 1종 이상의 다른 CDR (즉, CDR1 또는 CDR2) 또는 이의 적어도 일부분을 포함하는 것이다. 보다 바람직하게는, 임의의 일부분 또는 단편은, 1종 이상의 CDR (바람직하게는 적어도 CDR3 또는 이의 일부분)과, 바람직하게는 적정 프래임워크 서열(들) 또는 이의 적어도 일부분에 의해 연결된, 나머지 CDR 2종의 적어도 일부분을 포함하는 것이다.
특히 바람직하나 비제한적인 다른 측면에 따르면, 이러한 일부분 또는 단편은, 예를 들어 국제 출원 WO 03/050531 (Lasters et al.)에 기술된 바와 같이, 본 발명의 대응되는 전장 나노바디 (또는 ISV)의 FR3, CDR3 및 FR4와 같이, 적어도 CDR3를 포함한다.
상기에서 이미 언급된 바와 같이, (본 발명의 동일 또는 상이한 나노바디 (또는 ISV)로부터 유래된) 이러한 일부분 또는 단편들 2 이상을 조합하여, (본원에 정의된) 유사체를 제공하거나, 및/또는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 (본원에 정의된) 추가적인 일부분 또는 단편들을 제공하는 것도 가능하다. 또한, 예를 들어, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 하나 이상의 일부분 또는 단편을, 인간 VH 도메인의 하나 이상의 일부분 또는 단편과 조합할 수 있다.
바람직한 일 측면에 따르면, 상기 일부분 또는 단편은, 서열번호 623 내지 693 (표 A-1)의 나노바디 (또는 ISV) 중 하나와, 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 60%, 더 바람직하게는 적어도 70%, 보다 더 바람직하게는 적어도 80%, 예로, 적어도 90%, 95% 또는 99% 또는 그 이상의 서열 동일성 수준을 가진다.
상기 일부분 및 단편, 및 이를 코딩하는 핵산 서열이 제공될 수 있으며, 선택적으로 자체 공지된 임의의 방식으로 조합될 수 있다. 예를 들어, 이러한 일부분 또는 단편은 본 발명의 전체 크기의 나노바디 (또는 ISV)를 코딩하는 핵산에 정지 코돈을 삽입한 다음, 수득되는 핵산을 (예로, 본원에 기술된) 자체 공지된 방식으로 발현시킴으로써, 수득할 수 있다. 다른 예로, 이러한 일부분 또는 단편을 코딩하는 핵산은, 본 발명의 전체 크기의 나노바디 (또는 ISV)를 코딩하는 핵산을 적절하게 절단하거나, 또는 자체 공지된 방식으로 상기한 핵산을 합성함으로써, 수득할 수 있다. 일부분 또는 단편은 자체 공지된 펩타이드 합성 기법을 이용하여 제공할 수도 있다.
또한, 본 발명은 광의의 의미로 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 유도체를 포함한다. 상기 유도체는 일반적으로 변형에 의해 수득할 수 있으며, 특히, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를 형성하는 하나 이상의 아미노산 잔기의, 화학적 및/또는 생물학적 (예, 효소적) 변형에 의해 수득할 수 있다.
이러한 변형의 예 뿐만 아니라 상기한 방식 (즉, 단백질 벡본 상에, 바람직하게는 측쇄 상에서), 상기한 변형과 상기 변형의 잠재적 용도 및 이점을 도입하기 위해 사용될 수 있는 방법 및 기법으로 변형시킬 수 있는 나노바디 (또는 ISV) 서열내 아미노산 잔기의 예는, 당업자에게 자명할 것이다.
예컨대, 상기 변형은, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)로 또는 나노바디 (또는 ISV) 상으로 하나 이상의 관능기, 잔기 또는 모이어티의 (예, 공유결합 링커 결합 또는 다른 적정 방식에 의해) 도입, 구체적으로 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 한가지 이상의 바람직한 특성 또는 기능성을 부여하는 하나 이상의 관능기, 잔기 또는 모이어티의 도입을 포함할 수 있다. 상기 관능기의 예는 당업자에게 자명할 것이다.
예컨대, 상기 변형은, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 반감기, 용해성 및/또는 흡수를 증가시키는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 면역원성 및/또는 독성을 낮추는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 임의의 부적절한 부작용을 없애거나 또는 약화시키는, 및/또는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드에 다른 유익한 특성을 부여하거나 및/또는 부적절한 특성을 낮추거나; 또는 이들 중 2 이상의 조합을 수행하는, 하나 이상의 관능기의 (예, 임의의 다른 적정 방식으로 또는 공유 결합에 의한) 도입을 포함할 수 있다. 이러한 관능기와 이를 도입하는 기법에 대한 예들은 당업자에게 자명할 것이며, 일반적으로 전술한 일반적인 백그라운드 분야에서 언급한 모든 관능기와 기법들 뿐만 아니라 약학 단백질을 변형시키기 위한, 특히, 예컨대 항체 또는 항체 단편 (ScFv 및 단쇄 항체 포함)을 변형시키기 위한 자체 공지된 관능기 및 기법을 포함할 수 있으며, 예로, Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1980)를 참조한다. 이러한 관능기들은, 당업자에게 자명할 바와 같이, 예컨대 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 (예, 공유결합에 의해) 직접 또는 선택적으로 적정 링커나 스페이서를 통해 연결될 수 있다.
약학 단백질의 면역원성을 낮추거나 반감기를 높이기 위해 가장 널리 사용되는 기법들 중 한가지는, 폴리(에틸렌글리콜)(PEG) 또는 이의 유도체 (예, 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 또는 mPEG)와 같은 적합한 약리학적으로 허용가능한 폴리머의 부착을 포함한다. 일반적으로, 항체 및 항체 단편 ((단일) 도메인 항체 및 ScFV를 비제한적으로 포함함)에 대해 당업계에게 사용되는 페길화와 같이 임의의 적합한 형태의 페길화를 사용할 수 있으며; 예로, Chapman, Nat. Biotechnol., 54, 531-545 (2002); Veronese and Harris, Adv. Drug Deliv. Rev. 54, 453-456 (2003), Harris and Chess, Nat. Rev. Drug. Discov., 2, (2003) 및 WO 04/060965를 참조한다. 또한, 단백질의 페길화를 위한 다양한 시약들은 예컨대 미국의 Nektar Therapeutics에서와 같이 상업적으로 구입가능하다.
바람직하게는, 특히 시스테인-잔기를 통한 부위-특이적인 페길화를 사용한다 (예, Yang et al., Protein Engineering, 16, 10, 761-770 (2003). 예컨대, 이를 위해, PEG를 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에서 본래 존재하는 시스테인 잔기에 부착시킬 수 있으며, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 PEG를 부착시키기 위한 하나 이상의 시스테인 잔기를 적합하게 도입하도록 변형시키거나, 또는 PEG를 부착시키기 위한 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 N- 및/또는 C-말단에 융합시킬 수 있으며, 이들 모두 당업자에게 자체 공지된 단백질 조작 기법들을 이용한다.
바람직하게는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및 단백질의 경우, 분자량 5000 이상, 예로 10,000 이상 200,000 미만, 예로 100,000, 예로 20,000-80,000의 PEG를 사용한다.
다른, 일반적으로 덜 바람직한 변형은, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용되는 숙주 세포에 따라, 통상적으로 동시-번역 및/또는 번역 후 수정의 일부로서, N-연결된 또는 O-연결된 당화를 포함한다.
또 다른 변형은, 표지한 나노바디 (또는 ISV)의 의도한 용도에 따라, 하나 이상의 검출가능한 표지 또는 기타 신호-발생 기 또는 모이어티의 도입을 포함할 수 있다. 이를 부착, 이용 및 검출하기 위한 적합한 표지 및 기법은 당업자에게 자명할 것이며, 예로, 비제한적으로, WO 08/020079 109 페이지에 언급된 것과 같이, 플루오레센트 표지, 포스포레센트 표지, 화학발광 표지, 생물발광 표지, 방사성 동위원소, 금속, 금속 킬레이트, 금속 양이온, 발색단 및 효소를 포함한다. 다른 적합한 표지들은 당업자에게 자명할 것이며, 예로 NMR 또는 ESR 스펙트로스코피를 이용하여 검출할 수 있는 모이어티를 포함한다.
본 발명의 이러한 표지된 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 예컨대 시험관내, 생체내 또는 인시츄 분석 (예, ELISA, RIA, EIA 및 기타 "샌드위치 분석" 등의 공지된 면역분석 등) 뿐 아니라 특정 표지물의 선정에 따라, 생체내 진단 및 이미지화 목적으로 사용될 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 다른 변형으로는, 예컨대, 상기 언급된 금속 또는 금속 양이온들 중 하나를 킬레이팅하기 위한 킬레이팅 기의 도입을 포함할 수 있다. 적합한 킬레이팅 기로는, 예컨대, 디에틸-에네트리아민펜타아세트산 (DTPA) 또는 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)이 있으나, 이로 한정되지 않는다.
또 다른 변형은, 바이오틴-(스트렙트)아비딘 결합 쌍과 같이 특이적인 결합 쌍의 한 파트인 관능기의 도입을 포함할 수 있다. 이러한 관능기를 사용하여, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를, 상기 결합 쌍의 다른 반쪽과 결합되는 다른 단백질, 폴리펩타이드 또는 화합물에, 즉, 결합 쌍 형성을 통해 연결시킬 수 있다. 예컨대, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 바이오틴과 접합되거나, 아비딘 또는 스트렙트아미딘과 접합된 다른 단백질, 폴리펩타이드, 화합물 또는 캐리어와 연결시킬 수 있다. 예컨대, 이러한 접합된 나노바디는, 리포터로서, 예컨대, 검출가능한 신호-발생 물질이 아비딘 또는 스트렙트아비딘과 접합되는 진단 시스템에서 사용할 수 있다. 이러한 결합 쌍은, 예컨대, 또한, 약제학적 목적에 적합한 캐리어 등의 캐리어에 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를 결합시키는데 이용할 수 있다. 비제한적인 일예는 Cao and Suresh, Journal of Drug Targetting, 8, 4, 257 (2000)에 기술된 리포좀 제형이다. 이러한 결합 쌍들은 또한 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 치료학적 활성 물질을 연결시키는데 사용할 수 있다.
일부 용도에서는, 특히, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 (예컨대, 암 치료에서) 겨냥하는 타겟을 발현하는 세포를 사멸시키거나, 또는 상기 세포의 생장 및/또는 증식을 감소 또는 서행시키기 위한 것으로 의도된 용도에서는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를 독소 또는 독성 잔기나 모이어티와 연결시킬 수 있다. 본 발명의 나노바디에 - 예컨대 - 세포독성 화합물을 제공하기 위해 연결시킬 수 있는 독성 모이어티, 화합물 또는 잔기의 예들은 당업자에게 자명할 것이며, 예를 들어 상기에서 언급된 종래 기술 및/또는 본원에서의 추가적인 설명에서 확인할 수 있다. 일 예는 WO 03/055527에 기술된 소위 ADEPT™ 기술이다.
다른 가능성 있는 화학적 변형과 효소적 변형들도 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 또한 연구 목적으로 (예, 기능-활성 상관성을 연구하기 위해) 도입할 수 있다. 예를 들어, Lundblad and Bradshaw, Biotechnol. Appl. Biochem., 26, 143-151 (1997)을 참조한다.
바람직하게는, 유도체는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 대해 본원에 정의된 바와 같은 친화성 (KD-값 (실측 또는 겉보기), KA-값 (실측 또는 겉보기), Kon-속도 및/또는 koff-속도, 또는 다른 예로 IC50 값으로 적절하게 측정 및/또는 표시됨, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같음)으로 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것이다.
전술한 바와 같이, 또한, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)로 필수적으로 구성되거나 이를 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드에 관한 것이다. "필수적으로 구성되는"은, 본 발명의 폴리펩타이드의 아미노산 서열이, 본 발명의 나노바디의 아미노산 서열과 실제 동일하거나 또는 나노바디의 아미노산 서열의 아미노 말단에, 카르복시 말단에, 또는 아미노 말단과 카르복시 말단 둘다에 부가된, 제한된 수의 아미노산 잔기, 예로 1-20개, 예로 1-10개, 바람직하게는 1-6개, 예로 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 잔기를 가지는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 아미노산 서열에 해당된다는 의미이다.
상기 아미노산 잔기들은 나노바디 (또는 ISV)의 (생물학적) 특성을 변화, 변이시키거나 또는 영향을 미칠 수 있으며, 나노바디 (또는 ISV)에 다른 기능성을 부가하거나 부가하지 않을 수 있다. 예를 들어, 이러한 아미노산 잔기는:
- 예를 들어, 이종 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서 발현된 결과로서 N-말단에 Met 잔기를 포함할 수 있다.
- 합성시 숙주 세포로부터 나노바디 (또는 ISV)의 분비를 지시하는 신호 서열 또는 리더 서열이 만들어질 수 있다. 적합한 분비 리더 펩타이드는 당업자에게 자명할 것이며, 본원에 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다. 통상적으로, 상기 리더 서열은 나노바디 (또는 ISV)의 N-말단에 연결되는 것이나, 본 발명은 광의의 의미에서는 이로 한정되지 않는다.
- 나노바디 (또는 ISV)를, 특정 장기, 조직, 세포 또는 세포의 파트 또는 구획 쪽으로 향하게 하거나 및/또는 침투 또는 유입시키게 하거나, 및/또는 나노바디 (또는 ISV)를 세포막과 같은 생물학적 경계, 상피세포 층과 같은 세포 층, 고형 종양 등의 종양 또는 혈액-뇌 장벽로 침투 또는 통과하게 하는 서열 또는 신호를 형성할 수 있다. 이러한 아미노산 서열의 예는 당업자에게 자명할 것이며, WO 08/020079의 112페이지 단락 c)에 언급된 것을 포함한다.
- "테그", 예컨대 상기 서열 또는 잔기를 겨냥하는 친화성 기법을 이용하여 나노바디 (또는 ISV)의 정제를 가능하게 하거나 용이하게 하는 아미노산 서열 또는 잔기를 형성할 수 있다. 그런 후, 상기 서열 또는 잔기는 (예, 화학적 또는 효소적 절단에 의해) 제거하여 나노바디 (또는 ISV) 서열을 제공할 수 있다 (이를 위해, 테그는 선택적으로 절단가능한 링커 서열을 통해 나노바디 (또는 ISV)에 연결되거나 또는 절단성 모이어티를 포함할 수 있음). 이러한 잔기에 대한 일부 바람직한 비제한적인 예는 복수의 히스티딘 잔기들, 글루타티온 잔기들 및 myc-테그 (예, WO 06/12282의 서열번호 31)를 포함한다.
- 관능화되었거나 및/또는 관능기를 부착시키기 위한 부위로서 사용할 수 있는 하나 이상의 아미노산 잔기일 수 있다. 적합한 아미노산 잔기들과 관능기들은 당업자에게 자명할 것이며, 비제한적으로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 유도체에 대한 본원에 언급된 아미노산 잔기와 관능기를 포함한다.
일 구현예로서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 623 내지 693 및 826-838 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837 및 838로부터 선택됨) 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때 상기 아미노산 서열은 최대 6개의 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩타이드는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 IL-17-F에 특이적으로 결합한다.
다른 구현예로서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 623 내지 693 및 826-838 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837 및 838로부터 선택됨) 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때 상기 아미노산 서열은 최대 6개의 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩타이드는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 IL-17-F에 Kd 5 nM 미만, 가장 바람직하게는 Kd 50 pM 미만으로 결합한다.
일 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 623 내지 693 및 826-838 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837 및 838부터 선택됨) 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 이때 상기 아미노산 서열은 최대 3개의 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩타이드는 바람직하게는 IL-17A 및/또는 IL-17-F에 특이적으로 결합한다.
일 구현예로서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 836번의 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함하며, 상기 아미노산 서열은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 단일 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩타이드가 바람직하게는 Kd 5 nM 미만, 가장 바람직하게는 Kd 50 pM 미만으로 IL 17A 및/또는 IL 17F에 특이적으로 결합한다.
다른 구현예로서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 623 내지 693 및 826-838 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837 및 838으로부터 선택됨) 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 아미노산 서열은 최대 6개의 단일 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩타이드는 바람직하게는 Kd 5 nM 미만, 가장 바람직하게는 Kd 50 pM 미만으로 서열번호 839 및/또는 서열번호 840에 특이적으로 결합한다.
다른 구현예로서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 623 내지 693 및 826-838 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837 및 838로부터 선택됨) 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며, 상기 아미노산 서열이 최대 3개의 단일 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩타이드가 바람직하게는 Kd 5 nM 미만, 가장 바람직하게는 Kd 50 pM 미만으로 서열번호 839 및/또는 서열번호 840에 특이적으로 결합한다.
또한, 폴리펩타이드가,
(i) IL-17F (서열번호 840), 및 IL-17A (서열번호 839)과 IL-17F (서열번호 840)의 이형이량체에 특이적으로 결합하지만, IL-17A (서열번호 839)에는 특이적으로 결합하지 않는, 서열번호 640-649 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648 및 649 중에서 임의로 선택됨), 제1 아미노산 서열; 및/또는
(ii) IL-17A (서열번호 839), IL-17F (서열번호 840), 및 IL-17A (서열번호 839)와 IL-17F (서열번호 840)의 이형이량체에 특이적으로 결합하는, 서열번호 650-693 중 임의의 것으로부터 선택되는 (즉, 서열번호 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693 중에서 임의로 선택됨), 제2 아미노산 서열을 포함하며;
상기 제1 아미노산 서열과 제2 아미노산 서열이 총체적으로 최대 6개의 아미노산 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있으며;
상기 각각의 경우에서의 특이적인 결합이 Kd 5 nM 미만으로 이루어지는, 본 발명의 폴리펩타이드를 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는, IL-17A (서열번호 839)의 적어도 아미노산 L74, Y85 및 N88에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 이러한 결합성 에피토프들은 치료학적 가치가 입증된 바 있다.
다른 측면에 있어서, 본 발명의 폴리펩타이드는, IL-17F (서열번호 840)의 적어도 아미노산 R47, R73, I86 및 N89에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 이러한 결합성 에피토프들은 치료학적 가치가 입증된 바 있다.
물론, 상기한 폴리펩타이드들 모두 본원에 기술된 질환의 치료에 사용될 수 있으며 효과적이다.
다른 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는, 즉, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)와 하나 이상의 추가적인 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질을 제공하기 위해, 아미노 말단에, 카르복시 말단에, 또는 아미노 말단과 카르복시 말단 둘다에, 하나 이상의 추가적인 아미노산 서열이 융합된, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 또한, 이러한 융합은 본원에서 "나노바디 융합 (또는 ISV)"으로 언급될 것이다.
하나 이상의 추가적인 아미노산 서열은 임의의 적정 및/또는 바람직한 아미노산 서열일 수 있다. 추가적인 아미노산 서열은 나노바디 (또는 ISV)의 (생물학적) 특성을 변화, 변이시키거나 또는 영향을 미치거나 미치지 않을 수 있으며, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드에 추가적인 기능성을 부가하거나 부가하지 않을 수 있다. 바람직하게는, 상기 추가적인 아미노산 서열은 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드에 한가지 이상의 바람직한 특성이나 기능성을 부여하는 것이다.
예컨대, 또한, 추가적인 아미노산 서열은, 임의의 원하는 단백질, 폴리펩타이드, 항원, 항원 결정부 또는 에피토프 (비제한적으로, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 겨냥하는 동일한 단백질, 폴리펩타이드, 항원, 항원 결정부 또는 에피토프, 또는 상이한 단백질, 폴리펩타이드, 항원, 항원 결정부 또는 에피토프를 포함함)를 겨냥할 수 있는 제2 결합부를 제공할 수 있다.
이러한 아미노산 서열의 예는 당업자에게 자명할 것이며, 일반적으로, 통상적인 항체 및 이의 단편 (비제한적으로, ScFv 및 단일 도메인 항체을 포함함)을 기반으로 펩타이드 융합에 사용되는 모든 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136 (2005)의 리뷰를 참조한다.
예컨대, 상기한 아미노산 서열은, 자체 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)와 비교하여, 본 발명의 폴리펩타이드의, 반감기, 용해도 또는 흡수를 증가시키거나, 독성 또는 면역원성을 낮추거나, 부적절한 부작용을 소거 또는 약화시키거나, 다른 유익한 특징을 부여하거나, 및/또는 바람직하지 않은 특성을 줄이는, 아미노산 서열일 수 있다. 이러한 아미노산 서열에 대한 일부 비제한적인 예는, 인간 혈청 알부민과 같은 혈청 단백질 (예, WO 00/27435) 또는 헵텐 분자 (예, 순환성 항체에 의해 인지되는 헵텐, 예, WO 98/22141)이다.
특히, 면역글로불린의 단편 (예, VH 도메인)을 혈청 알부민 또는 그 단편에 연결하여, 반감기를 증가시킬 수 있음은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. WO 00/27435와 WO 01/077137을 참조한다. 본 발명에 있어서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는, 바람직하게는, 혈청 알부민 (또는 이의 적정 단편)에 직접 또는 적정 링커, 특히 본 발명의 폴리펩타이드를 유전자 융합체(단백질)로서 발현시킬 수 있도록 연결된 적합한 펩타이드를 통해 연결된다. 구체적인 일 측면에서, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 혈청 알부민의 도메인 III 또는 이의 일부분을 적어도 포함하는 혈청 알부민의 단편에 연결될 수 있다. 예를 들어, Ablynx N.V의 WO 07/112940을 참조한다.
다른 예로, 추가적인 아미노산 서열은, 혈청 단백질 (예, 인간 혈청 알부민 또는 IgG와 같은 다른 혈청 단백질)을 겨냥하는 제2 결합부 또는 결합 유닛을 제공하여, 혈청내에서의 반감기 증가를 제공할 수 있다. 이러한 아미노산 서열은, 예컨대, 하기 기술된 나노바디 (또는 ISV) 뿐만 아니라, WO 91/01743, WO 01/45746 및 WO 02/076489에 기술된 소형 펩타이드와 결합 단백질들, 및 WO 03/002609와 WO 04/003019에 기술된 dAb를 포함한다. Harmsen et al., Vaccine, 23 (41); 4926-42, 2005, EP 0 368 684, WO 08/028977, WO 08/043821, Ablynx N.V의 WO 08/043822 및 Ablynx N.V의 "혈청 단백질에 결합할 수 있는 펩타이드"라는 표제의 2006년 12월 5일가 미국 가출원을 참조한다 (또한, PCT/EP2007/063348을 참조함).
상기한 아미노산 서열은, 혈청 알부민 (보다 구체적으로 인간 혈청 알부민) 및/또는 IgG (보다 구체적으로 인간 IgG)를 겨냥할 수 있다. 예컨대, 상기한 아미노산 서열은, (인간) 혈청 알부민을 겨냥하는 아미노산 서열, 및 혈청 알부민의 FcRn과의 결합에 참여하지 않는 (인간) 혈청 알부민 상의 아미노산 잔기에 결합할 수 있는 아미노산 서열 (예, WO 06/0122787), 및/또는 혈청 알부민의 도메인 III의 일부를 형성하지 않는 혈청 알부민 상의 아미노산 잔기에 결합할 수 있는 아미노산 서열 (예, WO 06/0122787); 반감기가 증가되거나 반감기 증가를 제공할 수 있는 아미노산 서열 (예, Ablynx N.V. WO 08/028977); 하나 이상의 포유류 종, 특히 하나 이상의 영장류 종 (예, 비제한적으로, 마카카 속의 원숭이 (예로, 구체적으로 시노몰구스 원숭이 (마카카 파시쿨라리스) 및/또는 레수스 원숭이 (마카카 물라타)) 및 비비 (파피오 우르시누스), WO 08/028977을 참조함)으로부터 유래된 혈청 알부민과 교차 반응하는 인간 혈청 알부민에 대한 아미노산 서열; pH 의존적인 방식으로 혈청 알부민에 결합할 수 있는 아미노산 서열 (예, Ablynx N.V.의 표제 "pH와는 본질적으로 독립적인 방식으로 혈청 단백질에 결합하는 아미노산 서열, 이를 포함하는 화합물 및 이의 용어"의 WO 08/043821) 및/또는 조건성 결합자(conditional binder)인 아미노산 서열 (예, Ablynx N.V.의 표제 "조건에 따른 방식으로 원하는 분자에 결합하는 아미노산 서열" WO 08/043822)일 수 있다.
다른 측면에서, 하나 이상의 추가적인 아미노산 서열은 통상적인 4쇄 항체 (및 구체적으로 인간 항체) 및/또는 중쇄 항체의 하나 이상의 파트, 단편 또는 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 통상적으로 덜 바람직하지만, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 선택적으로 링커 서열 (비제한적으로, 다른 (단일) 도메인 항체, 예로 Ward et al에 기술된 dAb를 포함함)을 통해 일반적인 (바람직하게는 인간) VH 또는 VL 도메인에, 또는 VL 도메인의 천연 또는 합성 유사체에 연결될 수 있다.
하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)는, 또한, 선택적으로 링커 서열을 통해, 하나 이상의 (바람직하게는 인간) CH1, CH2 및/또는 CH3 도메인에 연결될 수 있다. 예를 들어, 적정 CH1 도메인이 연결된 나노바디 (또는 ISV)는, 예컨대, 일반적인 Fab 단편들 또는 F(ab')2 단편들과 유사하나 일반적인 VH 도메인의 하나, 또는 (F(ab')2 단편의 경우) 하나 또는 둘다가 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 의해 치환되어진, 항체 단편/구조체를 제조하기 위해 - 적정 경쇄와 함께 - 사용할 수 있다. 또한, 2개의 나노바디 (또는 ISV)는 CH3 도메인 (선택적으로 링커를 통해)과 연결되어, 생체내 반감기가 증가된 구조체를 제공할 수 있다.
본 발명의 폴리펩타이드의 구체적인 일 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)는, 하나 이상의 불변 도메인 (예, Fc 단백질의 일부분으로 사용되거나 Fc 단백질을 형성하기 위해 사용할 수 있는 2 또는 3개의 불변 도메인), Fc 영역 및/또는 본 발명의 폴리펩타이드에 한가지 이상의 작동자(effector) 기능을 부여하거나 및/또는 하나 이상의 Fc 수용체에 결합하는 능력을 부여할 수 있는, 하나 이상의 항체 파트, 단편 또는 도메인에, (선택적으로 적정 링커 또는 힌지부를 통해) 연결될 수 있다. 예컨대, 이러한 목적으로, 그러나 비제한적으로, 하나 이상의 추가적인 아미노산 서열은, (본원에 기술된 바와 같이) 중쇄 항체로부터, 보다 바람직하게는 일반적인 인간 4쇄 항체로부터 유래되는 등의, 항체의 하나 이상의 CH2 및/또는 CH3 도메인을 포함할 수 있으며; 및/또는 예컨대 IgG (예, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)로부터, IgE로부터 또는 IgA, IgD 또는 IgM과 같은 다른 인간 Ig로부터 유래된 Fc 영역 (또는 일부)을 형성할 수 있다. 예를 들어, WO 94/04678은 카멜리드 VHH 도메인 또는 이의 인간화된 유도체 (즉, 나노바디 (또는 ISV))를 포함하는 중쇄 항체를 개시하고 있는데, 카멜리드 CH2 및/또는 CH3 도메인은 인간 CH2 및 CH3 도메인으로 치환되어, 각각 나노바디 (또는 ISV)와 인간 CH2 및 CH3 도메인(CH1 도메인은 아님)을 포함하는 2개의 중쇄로 구성된 면역글로불린을 제공하며, 면역글로불린은 CH2 및 CH3 도메인에 의해 제공되는 작동자 기능을 가지며, 면역글로불린은 임의의 경쇄가 존재하지 않는 상태로도 기능할 수 있다. 작동자 기능을 제공하기 위해 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 적합하게 연결시킬 수 있는 다른 아미노산 서열은 당업자에게 자명할 것이며, 원하는 작동자 기능(들)을 기초로 선택할 수 있다. 예를 들어, WO 04/058820, WO 99/42077, WO 02/056910 및 WO 05/017148와, 앞에서 언급한 Holliger & Hudson의 리뷰; 및 Ablynx N.V.의 2007년 12월 4일자 미공개된 미국 가출원 "단일 가변 도메인과 IgE 유래 Fc 영역을 포함하는 구조체"를 참조한다. 또한, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 Fc 영역의 커플링은, 본 발명의 대응되는 나노바디 (또는 ISV)와 비교하여 반감기 증가를 유도할 수 있다. 일부 적용에서, Fc 영역 및/또는 어떠한 생물학적으로 유의한 작동자 기능 없이 반감기 증가를 부여하는 불변 도메인 (즉, CH2 및/또는 CH3 도메인)을 사용하는 것도 역시 적합하거나 또는 심지어 바람직할 수 있다. 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV) 및 하나 이상의 생체내 반감기가 증가된 불변 도메인을 포함하는 다른 적합한 구조체는 당업자에게 자명할 것이며, 예로, 선택적으로 링커 서열을 통해 CH3 도메인에 연결된 2개의 나노바디 (또는 ISV)를 포함할 수 있다. 일반적으로, 반감기가 증가된 임의의 융합 단백질 또는 유도체는, 바람직하게는 신장 흡수를 위한 컷-오프 수치인 분자량 50 kD 이상의 분자량을 가진다.
다른 구체적이나 비제한적인 일 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드를 형성하기 위해, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열은, (즉, 일반적인 4쇄 항체에서 일반적으로 생성되는 불변 도메인과 비교하여) 이량체로 자가-조합되는 경향이 감소 (또는 기본적으로 없는)된, 천연, 합성 또는 반합성 불변 도메인 (또는 이의 유사체, 변이체, 돌연변이, 파트 또는 단편)에 (선택적으로, 적정 링커 또는 힌지 영역을 통해) 연결될 수 있다. 이러한 단량성 (즉, 자가-조합되지 않는) Fc 체인 변이체 또는 이의 단편은 당업자에게 자명할 것이다. 예컨대, Helm et al., J Biol Chem 1996 271 7494에서는 본 발명의 폴리펩타이드 체인에 사용될 수 있는 단량성 Fcγ 체인 변이체가 기술되어 있다.
또한, 이러한 단량성 Fc 체인 변이체는, 바람직하게는, (이것이 유래된 Fc 영역에 따라) 관련 Fc 수용체(들) 또는 보체(complement)에 여전히 결합할 수 있으며, 및/또는 이것이 유래된 Fc 영역의 작동자 기능 중 일부 또는 전체를 여전히 (또는 의도된 용도에 여전히 적합한 감소된 수준으로) 가지게 하는 것이다. 다른 예로, 본 발명의 이러한 폴리펩타이드에서, 단량성 Fc 체인을 사용하여 폴리펩타이드 체인에 반감기 증가를 부여할 수 있으며, 이 경우 단량성 Fc 체인은 또한 작동자 기능을 가지지 않거나 본질적으로 없을 수 있다.
또한, 본 발명의 이가/다가, 2중 특이성/다중 특이성 또는 2중 파라토프성/다중 파라토프성 폴리펩타이드는, 2007년 12월 4일에 출원된 미국 가출원 US 61/005,331 "면역글로불린 구조체"에 기술되는 타입의 폴리펩타이드 구조체를 제공하기 위해, Fc 영역들과 연결될 수 있다.
또한, 추가적인 아미노산 서열은, (예, 본 발명의 폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용되는 숙주 세포에 따라, 본 발명의 폴리펩타이드의 프리-프로- 또는 프리프로- 형태를 제공하기 위해) 합성 시 숙주 세포로부터 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 분비를 지시하는 신호 서열 또는 리더 서열을 형성할 수도 있다.
또한, 추가적인 아미노산 서열은, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 특정 장기, 조직, 세포 또는 세포의 부위 또는 구획들로 향하게 하거나 및/또는 침투 또는 유입시키게 하거나, 및/또는 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드가 세포 막과 같은 생물학적 장벽, 상피 세포의 층과 같은 세포증, 고형 종양 등의 종양, 또는 혈액-뇌 장벽을 침투 또는 통과시키게 하는, 서열 또는 신호를 형성할 수 있다. 이러한 아미노산 서열로 적합한 예들은 당업자에게 자명할 것이며, 예로, WO 08/020079의 118페이지에 기술된 것이 있으나, 이로 한정되지 않는다. 일부 적용시, 특히 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)가 (예, 암 치료에서) 겨냥하는 타겟을 발현하는 세포를 사멸시키거나, 또는 상기 세포의 생장 및/또는 증식을 감소시키거나 서행시키고자 의도한 경우에, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)는 또한 (세포)독성 단백질 또는 폴리펩타이드에도 연결시킬 수 있다. 예컨대, 본 발명의 세포독성 폴리펩타이드를 제공하기 위해, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 연결시킬 수 있는 상기한 독성 단백질 및 폴리펩타이드의 예는 당업자에게 자명할 것이며, 예로, 상기 인용된 종래 기술 및/또는 본원의 추가적인 설명에서 찾을 수 있다. 일 예는 WO 03/055527에 기술된 소위 ADEPT™ 기술이다.
바람직하나 비제한적인 일 측면에서, 상기 하나 이상의 추가적인 서열은, 2 이상, 예컨대 3, 4, 5개 또는 그 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드를 제공하기 위해, 하나 이상의 추가적인 나노바디 (또는 ISV)를 포함하며, 이때 상기 나노바디 (또는 ISV)는 선택적으로 하나 이상의 (본원에 기술된 바와 같이) 링커 서열들을 통해 연결될 수 있다. WO 08/020079의 119 및 120 페이지에 기술된 바와 같이, 하나 이상이 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)인, 2 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는, 본 발명의 폴리펩타이드는, 본원에서 본 발명의 "다가" 나노바디 (또는 ISV)로서 지칭할 수 있으며, 이러한 폴리펩타이드에 존재하는 나노바디 (또는 ISV)는 또한 본원에서 또한 "다가 포맷"인 것으로 언급될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 "2가" 및 "3가" 폴리펩타이드는 WO 08/020079의 119 및 120 페이지에서 추가적으로 기술된 바와 같을 수 있다.
하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)가 제1 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합)을 겨냥하고, 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)가 제2 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 아닌 것)을 겨냥하는 것인, 2종 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드는, 또한, 본 발명의 "다중 특이적인" 폴리펩타이드로서 언급될 수 있으며, 이러한 폴리펩타이드에 존재하는 나노바디 (또는 ISV)는 또한 본원에서 "다중 특이성인 포맷"인 것으로 언급될 수 있다. 따라서, 예컨대, 본 발명의 "2중 특이성인" 폴리펩타이드는, 제1 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합)을 겨냥하는 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)와 제2 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 아닌 것)을 겨냥하는 하나 이상의 다른 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 폴리펩타이드이고, 본 발명의 "3중 특이성인" 폴리펩타이드는, 제1 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합)을 겨냥하는 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV), 제2 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 아닌 것)을 겨냥하는 하나 이상의 다른 나노바디 (또는 ISV)와, 제3 항원(즉, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 및 제2 항원과 상이한 것)을 겨냥하는 하나 이상의 다른 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 폴리펩타이드이다.
따라서, 가장 단순한 형태에서, 본 발명의 2중 특이성인 폴리펩타이드는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 제1 나노바디 (또는 ISV)와 제2 항원을 겨냥하는 제2 나노바디를 포함하며, 이때 제1 및 제2 나노바디 (또는 ISV)가 선택적으로 (본원에 기술된 바와 같이) 링커 서열을 통해 연결될 수 있는, (본원에 기술된 바와 같이) 본 발명의 2가 폴리펩타이드이고; 반면, 본 발명의 3중 특이성인 폴리펩타이드의 경우 가장 단순한 형태는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 제1 나노바디 (또는 ISV), 제2 항원을 겨냥하는 제2 나노바디 (또는 ISV)와 제3 항원을 겨냥하는 제3 나노바디 (또는 ISV)를 포함하되, 상기 제1, 제2 및 제3 나노바디 (또는 ISV)가 선택적으로 하나 또는 2 이상, 특히 1개 이상, 구체적으로 2개의 링커 서열을 통해 연결될 수 있는, 3가 폴리펩타이드이다.
그러나, 전술한 설명으로부터 명확해지는 바와 같이, 본 발명은, 본 발명의 다중 특이성인 폴리펩타이드는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)와, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과는 상이한 하나 이상의 항원을 겨냥하는 임의 수의 나노바디 (또는 ISV)를 포함할 수 있다는 의미에서, 상기한 내용으로 한정되지 않는다.
아울러, 본 발명의 폴리펩타이드에서 다양한 나노바디 (또는 ISV)의 구체적인 순서 또는 배치가 본 발명의 최종 폴리펩타이드의 특성 (비제한적인 예로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 또는 하나 이상의 다른 항원에 대한 특이성 또는 항원-항체 결합성)에 일부 영향을 미칠 수 있음은 본 발명의 범위에 포함되지만, 이러한 순서 또는 배치는 일반적으로 결정적인 것이 아니며, 선택적으로 본원의 설명을 기초로 일부 제한된 통상적인 실험을 거친 후 당업자가 적절하게 선택할 수 있다. 따라서, 본 발명의 구체적인 다가 또는 다중 폴리펩타이드를 참조하는 경우, 달리 명시되지 않은 한, 여기에서 해당 나노바디 (또는 ISV)의 모든 순서나 배치를 포괄함에 유념하여야 한다.
마지막으로, 본 발명의 폴리펩타이드가 2 이상의 나노바디 (또는 ISV)와 (본원에 언급된 바와 같이) 하나 이상의 추가적인 아미노산 서열을 포함하는 것도 본 발명의 범위에 포함된다.
하나 이상의 VHH 도메인을 포함하는 다가 및 다중 특이성인 폴리펩타이드 및 이의 제조에 있어서, 또한 Conrath et al., J. Biol. Chem., Vol. 276, 10. 7346-7350, 2001; Muyldermans, Reviews in Molecular Biotechnology 74 (2001), 277-302; 뿐만 아니라 예로 WO 96/34103 및 WO 99/23221을 참조한다. 본 발명의 일부 구체적인 다중 특이성인 및/또는 다가의 폴리펩타이드에 대한 다른 예들은 본원에서 언급한 Ablynx N.V.의 출원에서 확인할 수 있다.
본 발명의 다중 특이성인 폴리펩타이드에 대한 바람직하나 비제한적인 일 예는, 하나 이상의 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)와, 반감기 증가를 제공하기 위한 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 이러한 나노바디 (또는 ISV)는, 예컨대, 혈청 단백질, 특히 일간 혈청 알부민과 같은 인간 혈청 단백질, 티록신 결합 단백질, (인간) 트랜스페린, 파이브로겐, IgG, IgE 또는 IgM과 같은 면역글로불린 또는 WO 04/003019에 열거된 혈청 단백질들 중 하나를 겨냥하는 나노바디 (또는 ISV)일 수 있다. 이들 중, 혈청 알부민 (특히 인간 혈청 알부민) 또는 IgG (특히 인간 IgG, 예로 전술한 Muyldermans 리뷰에서 언급된 나노바디 (또는 ISV) VH-1을 참조함)에 결합할 수 있는 나노바디 (또는 ISV)가 특히 바람직하다 (예컨대, 마우스 또는 영장류 실험에서, 각각 마우스 혈청 알부민(MSA) 또는 상기 영장류의 혈청 알부민과 교차 반응하거나 이를 겨냥하는 나노바디 (또는 ISV)를 사용할 수 있다. 그러나, 약학적 용도를 위해서는 인간 혈청 알부민 또는 인간 IgG에 대한 나노바디 (또는 ISV)가 일반적으로 바람직할 것임). 반감기 증가를 제공하고 본 발명의 폴리펩타이드에 사용될 수 있는 나노바디 (또는 ISV)는, WO 04/041865, WO 06/122787 및 전술한 바와 같이 Ablynx N.V.의 특허 출원에 기술된, 혈청 알부민을 겨냥하는 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다.
예컨대, 본 발명에 사용하기 위한 반감기 증가를 제공하는 일부 바람직한 나노바디 (또는 ISV)는, 혈청 알부민의 FcRn과의 결합성에 참여하지 않는 (인간) 혈청 알부민 상의 아미노산 잔기들에 결합할 수 있는 나노바디 (또는 ISV) (예, WO 06/0122787 참조); 혈청 알부민의 도메인 III의 파트를 형성하지 않는 혈청 알부민 상의 아미노산 잔기에 결합할 수 있는 나노바디 (또는 ISV) (예, WO 06/0122787 참조); 증가된 반감기를 가지거나 제공할 수 있는 나노바디 (또는 ISV) (예, 본원에 언급된 Ablynx N.V의 WO 08/028977 참조); 하나 이상의 포유류 종, 특히 하나 이상의 영장류 종 (예, 비제한적으로, 마카카 속의 원숭이 (예로, 구체적으로 시노몰구스 원숭이 (마카카 파시쿨라리스) 및/또는 레수스 원숭이 (마카카 물라타)) 및 비비 (파피오 우르시누스), Ablynx N.V의 WO 08/028977을 참조함)으로부터 유래된 혈청 알부민과 교차 반응하는 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 나노바디 (또는 ISV); pH 의존적인 방식으로 혈청 알부민에 결합할 수 있는 나노바디 (또는 ISV) (예, 본원에 언급된 Ablynx N.V.의 WO 08/043821) 및/또는 조건성 결합자(conditional binder)인 나노바디 (또는 ISV) (예, Ablynx N.V.의 WO 08/043822)를 포함한다.
본 발명의 폴리펩타이드에 사용될 수 있으며 반감기 증가를 제공하는, 일부 특히 바람직한 나노바디 (또는 ISV)는, WO 06/122787 (표 II 및 III 참조)에 기술된 나노바디 ALB-1 내지 ALB-10를 포함하며, 특히 ALB-8 (WO 06/122787에서 서열번호 62 참조)이 바람직하다.
본 발명의 구체적이나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는, 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV) 외에도, 인간 혈청 알부민을 겨냥하는 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다.
일반적으로, 반감기가 증가된 본 발명의 임의의 폴리펩타이드는, 하나 이상의 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 및 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 임의의 유도체, 또는 본 발명의 대응되는 나노바디 (또는 ISV)의 반감기에 비해 증가된 반감기, 바람직하게는 1.5배 이상, 바람직하게는 2배 이상, 예로 5배 이상, 예로 10배 이상 또는 20배 이상 긴 반감기를 가지는 상기한 폴리펩타이드의 임의의 유도체를 포함한다. 예컨대, 반감기가 증가된 상기한 유도체 또는 폴리펩타이드는, 자체 본 발명의 대응되는 나노바디 (또는 ISV)와 비교하여, 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 보다 바람직하게는 6시간 이상, 예로 12시간 이상, 심지어 24시간, 48시간 또는 72시간 이상 긴 반감기를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직하나 비제한적인 측면에서, 상기한 유도체 또는 폴리펩타이드는 인간에서의 혈청 반감기가 약 12시간 이상, 바람직하게는 24시간 이상, 보다 바람직하게는 48시간 이상, 보다 더 바람직하게는 72시간 이상일 수 있다. 예컨대, 이러한 유도체 또는 폴리펩타이드는 적어도 5일 (예, 약 5 - 10일), 바람직하게는 적어도 9일 (예, 약 9 - 14일), 보다 바람직하게는 적어도 약 10일 (예, 약 10 - 15일), 또는 적어도 약 11일 (예, 약 11 - 16일), 보다 바람직하게는 적어도 약 12일 (예, 약 12 - 18일 또는 그 이상), 또는 14일 이상 (예, 약 14 - 19일)의 반감기를 가질 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 폴리펩타이드에 생체내 폴리펩타이드의 반감기를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 분자를 결합시킬 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드에 분해 및/또는 소거 또는 격리에 대해 저항성을 가지는 분자를 결합시킴으로써 생체내에서 안정화되고 반감기가 증가된다. 전형적으로, 이러한 분자는 자체적으로 생체내 반감기가 긴 천연 단백질이다. 본 발명의 다중 특이성인 폴리펩타이드에 대한 다른 바람직하나 비제한적인 예로는, 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)와, 본 발명의 폴리펩타이드를 특정 장기, 조직, 세포 또는 세포의 일부분이나 구획으로 향하게 하거나 및/또는 침투 또는 도입을 허용하거나, 및/또는 나노바디 (또는 ISV)가 세포막, 상피 세포 층과 같은 세포 층, 고형 종양 등의 종양, 또는 혈액-뇌 장벽 등의 생물학적 장벽을 침투 또는 통과하는 것을 허용하는, 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함한다. 이러한 나노바디 (또는 ISV)에 대한 예로는, 원하는 장기, 조직 또는 세포의 특정 세포-표면 단백질, 마커 또는 에피토프 (예, 종양 세포에 조합된 세포-표면 마커들)로 향하는 나노바디 (또는 ISV), 및 WO 02/057445 및 WO 06/040153에 기술된 단일-도메인 뇌 타겟팅 항체 단편를 포함하며, FC44 (WO 06/040153에서 서열번호 189)와 FC5 (WO 06/040154에서 서열번호 190)이 바람직한 예이다. 본 발명의 폴리펩타이드에서, 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV)와 하나 이상의 폴리펩타이드는 (예로 WO 99/23221에 기술된 바와 같이) 서로 직접 연결될 수 있거나, 및/또는 하나 이상의 적합한 스페이서 또는 링커를 통해 서로 연결되거나 또는 이의 임의 조합일 수 있다.
다가 및 다중 특이성인 폴리펩타이드에 사용하기 위한 적합한 스페이서 또는 링커는 당업자에게 자명할 것이며, 일반적으로 아미노산 서열을 연결시키기 위해 당해 분야에서 사용되는 임의의 링커 또는 스페이서일 수 있다. 바람직하게는, 상기 링커 또는 스페이서는 약학 용도로 의도된 단백질 또는 폴리펩타이드의 제조에 사용하기 적합하다. 일부 특히 바람직한 스페이서로는 항체 단편 또는 항체 도메인을 연결하기 위해 당해 기술 분야에 사용되는 스페이서 및 링커를 포함한다. 이는 전술한 일반적인 종래 기술 분야에 언급된 링커 뿐만 아니라 예로 ScFv 단편 또는 다이아바디를 구축하기 위해 당해 분야에서 사용되는 링커를 포함한다 (이러한 측면에서, 그러나, 디이아바디와 ScFv 단편에서, 사용되는 링커 서열은 적절한 VH 및 VL 도메인이 함께 완전한 항원-결합부를 형성하게 하는 길이, 유연성 정도 및 그외 특성을 가져야 하는 반면, 나노바디 (또는 ISV) 자체가 완전한 항원-결합부를 형성하기 때문에 본 발명의 폴리펩타이드에 사용되는 링커의 길이나 유연성에는 특정한 제한이 없음에 유념하여야 한다). 예컨대, 링커는 적합한 아미노산 서열, 특히 1-50개, 바람직하게는 1-30개, 예로 1-10개의 아미노산 잔기로 구성된 아미노산 서열일 수 있다. 이러한 아미노산 서열에 대한 일부 바람직한 예는, gly-ser 링커, 예컨대 타입 (glyxsery)z, 예로, WO 99/42077에 기술된 바와 같이 (gly4ser)3 또는 (gly3ser2)3, 그리고 본원에 언급된 Ablynx의 출원에 기술된 GS30, GS15, GS9 및 GS7 링커 (예, WO 06/040153 및 WO 06/122825 참조), 뿐만 아니라 천연 중쇄 항체의 힌지 영역 또는 유사 서열 등의 힌지-유사 영역 (예, WO 94/04678)을 포함한다. 특히 바람직한 일부 다른 링커는 폴리-알라닌 (예, AAA), 뿐만 아니라 링커 GS30 (WO 06/122825에서 서열번호 85) 및 GS9 (WO 06/122825에서 서열번호 84)이다. 다른 적정 링커는 일반적으로 유기 화합물 또는 폴리머, 특히 약학 용도로 단백질에 사용하기 적합한 것을 포함한다. 예컨대, 폴리(에틸렌글리콜) 모이어티이 항체 도메인에 연결하는데 사용되며, 예로 WO 04/081026을 참조한다. 사용되는 링커(들)의 길이, 유연성 정도 및/또는 기타 특성이 (결정적인 것은 아니지만, 일반적으로 ScFv 단편에서 사용되는 링커에서 그러한 것처럼) 본 발명의 최종 폴리펩타이드의 특성, 예컨대, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합 또는 다른 하나 이상의 항원에 대한 친화성, 특이성 또는 항원-항체 결합성에 일부 영향을 미칠 수 있음이 본 발명에 포함된다. 본원의 내용을 기초로, 당업자는 선택적으로 일부 제한된 일반적인 실험을 수행한 후 본 발명의 특정 폴리펩타이드에 사용하기 위한 최적의 링커(들)를 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 다량체성 항원 (예, 다량체성 수용체 또는 기타 단백질)을 겨냥하는 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 본 발명의 다가 폴리펩타이드에서, 링커의 길이와 유연성은, 바람직하게는, 폴리펩타이드에 존재하는 본 발명의 각 나노바디 (또는 ISV)를 다량체의 서브유닛 각각 상의 항원성 결정기에 결합하게 하는 것이다. 마찬가지로, 동일한 항원 상의 2 이상의 상이한 항원 결정부를 겨냥하는 (예로, 항원의 여러가지 에피토프, 및/또는 다량체성 수용체, 채널 또는 단백질의 여러가지 서브유닛을 겨냥하는) 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는, 본 발명의 다중 특이성인 폴리펩타이드에서, 링커의 길이와 유연성은, 바람직하게는, 각 나노바디 (또는 ISV)가 이의 의도한 항원 결정부에 결합하게 하는 것이다. 즉, 본원의 내용을 기반으로, 당업자는 선택적으로 일부 제한된 통상적인 실험을 수행한 후 본 발명의 특정 폴리펩타이드에 사용하기 위한 최적 링커(들)를 결정할 것이다. 또한, 사용되는 링커(들)가 본 발명의 폴리펩타이드에 한가지 이상의 그외 유용한 특성 또는 기능성을 부여하거나, 및/또는 유도체 형성을 위한 및/또는 관능기 (예, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 유도체를 위한 것으로 본원에 기술된 바와 같이) 부착을 위한 하나 이상의 부위를 제공하는 것도, 본 발명의 범위에 포함된다. 예컨대, 하나 이상의 하전된 아미노산 잔기를 포함하는 링커 (국제 특허 WO 08/020079의 48페이지 표 A-2 참조)는 향상된 친수성 특성을 제공할 수 있으며, 검출, 동정 및/또는 정제 목적으로 소형 에피토프 또는 테그를 형성하거나 포함하는 링커를 사용할 수 있다. 재차, 본원의 내용을 기반으로, 당업자는 선택적으로 일부 제한적인 일반적인 실험을 수행한 후 본 발명의 구체적인 폴리펩타이드에 사용하기 위한 최적의 링커를 결정할 수 있을 것이다. 마지막으로, 본 발명의 폴리펩타이드에 2개 이상의 링커가 사용되는 경우, 이 링커들은 동일하거나 상이할 수 있다. 재차, 본원의 내용을 기반으로, 당업자는 선택적으로 일부 제한적인 일반적인 실험을 수행한 후 본 발명의 구체적인 폴리펩타이드에 사용하기 위한 최적의 링커를 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로, 발현 및 제조 용이성을 위해, 본 발명의 폴리펩타이드는 선형 폴리펩타이드일 것이다. 그러나, 본 발명은 광의의 의미에서 이로 한정되지 않는다. 예컨대, 본 발명의 폴리펩타이드가 3개 이상의 나노바디 (또는 ISV)를 포함하는 경우, 3개 이상의 "팔"을 가진 링커를 사용함으로써 이들을 연결시킬 수 있는데, 각각의 "팔"은 하나의 나노바디 (또는 ISV)에 연결되어, "별 형태"의 구조를 제공할 수 있다. 또한, 일반적으로 덜 바람직하지만, 환형의 구조도 이용할 수 있다. 또한, 본 발명은, 즉, 본원에 기술된 바와 같이, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 유도체와 기본적으로 유사할 수 있는, 본 발명의 폴리펩타이드의 유도체를 포함한다. 또한, 본 발명은, 본 발명의 폴리펩타이드로 "필수적으로 구성되는" 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함한다 (여기서, "필수적으로 구성되는"은 기본적으로 전술한 바와 동일한 의미를 가짐).
본 발명의 일 측면에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 본원에서 정의된 바와 같이 본질적으로 분리된 형태이다. 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV), 폴리펩타이드 및 핵산은, 본원의 추가적인 내용으로부터 당업자에게 자명한 바와 같이, 자체 공지된 방식으로 제조할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)와 폴리펩타이드는 항체 제조에 대해, 특히 항체 단편 ((단일) 도메인 항체 및 ScFv 단편을 비제한적으로 포함함)의 제조에 대해 자체 공지된 임의의 방식으로 제조할 수 있다. 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV), 폴리펩타이드 및 핵산의 제조 방법에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 방법으로는 본원에 기술된 방법 및 기술을 포함한다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드의 제조에 있어 특히 유용한 방법은 일반적으로 하기 단계를 포함한다:
i) 적합한 숙주 세포 또는 숙주 유기체 (또한, 본원에서는 "본 발명의 숙주"로 언급됨) 또는 다른 적합한 발현 시스템에서의, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 (또한, "본 발명의 핵산"으로 본원에서는 언급됨)의 발현; 선택적으로 하기 단계가 후속됨:
ii) 수득되는 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 분리 및/또는 정제.
구체적으로, 상기 방법은 하기 단계들을 포함할 수 있다:
i) 본 발명의 숙주가 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드를 발현 및/또는 생산하는 조건에서 상기 본 발명의 숙주를 배양 및/또는 유지시키는 단계; 및 후속적으로
ii) 수득한 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 분리 및/또는 정제하는 단계.
본 발명의 핵산은 단일 또는 이중 가닥의 DNA 또는 RNA 형태일 수 있으며, 바람직하게는 이중 가닥의 DNA 형태이다. 예컨대, 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 게놈 DNA, cDNA 또는 합성 DNA (예, 의도한 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서 발현시키기 위해 특이적으로 순응시킨 코돈이 적용된 DNA)일 수 있다. 본 발명의 일 측면에서, 본 발명의 핵산은 본원에 정의된 바와 같이 기본적으로 분리된 형태이다. 본 발명의 핵산은 또한 예컨대 플라스미드, 코스미드 또는 YAC와 같이, 벡터 형태이거나, 벡터에 존재하거나 및/또는 벡터의 일부일 수 있으며, 기본적으로 분리된 형태일 수 있다. 본 발명의 핵산은 본원에 제시된 본 발명의 폴리펩타이드의 아미노산 서열 정보를 토대로 자체 공지된 방식으로 제조 또는 수득할 수 있거나, 및/또는 적합한 천연원으로부터 분리할 수 있다. 유사체를 제공하기 위해, 천연 VHH 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을, 예로, 부위-특이적인 돌연변이 유발을 수행하여, 상기 유사체를 코딩하는 본 발명의 핵산을 제공할 수 있다. 또한, 당업자에게 자명한 바와 같이, 본 발명의 핵산을 제조하기 위해, 나노바디 (또는 ISV)를 코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열과 같은 수종의 뉴클레오티드 서열과 예컨대 하나 이상의 링커를 코딩하는 핵산을 적합한 방식으로 함께 연결시킬 수 있다. 본 발명의 핵산을 제조하는 기술은 당업자에게 자명할 것이며, 예컨대, 자동 DNA 합성; 부위 특이적인 돌연변이; 2 이상의 천연 및/또는 합성 서열들 (또는 2 이상의 이의 파트)의 조합; 절단된 발현 산물의 발현을 유도하는 돌연변이의 도입; 하나 이상의 제한효소 부위의 (예, 적합한 제한효소를 이용하여 쉽게 절단 및/또는 연결시킬 수 있는 영역 및/또는 카세트를 제조하기 위해) 도입; 및/또는 예컨대 주형으로서 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 천연 형태의 서열을 이용하여, 하나 이상의 "미스매치형" 프라이머를 이용하는 PCR 반응의 수단에 의한 돌연변이의 도입을 포함할 수 있으나, 이로 한정되지 않는다. 이러한 기법과 그외 기법들은 당업자에게 자명할 것이며, 상기 언급된 Sambrook et al. and Ausubel et al.와 같은 일반 교제 뿐만 아니라 하기 예를 참조한다. 또한, 본 발명의 핵산은, 당해 기술 분야의 당업자에게 자명한 바와 같이, 그리고 WO 08/020079 (원용에 의해 본 명세서에 포함됨) 131-134 페이지에 기술된 바와 같이, 유전자 구조체 형태이거나, 유전자 구조체에 존재하거나 및/또는 유전자 구조체의 일부분일 수 있다. 이러한 유전자 구조체는, 일반적으로, 예컨대 하나 이상의 적합한 조절 인자 (예, 적정 프로모터(들), 인핸서(들), 종결인자(들) 등)와 같이 자체 공지된 유전자 구조체의 하나 이상의 인자 및 본원에 언급된 유전자 구조체의 추가적인 인자에 선택적으로 연결된, 본 발명의 하나 이상의 핵산을 포함한다. 또한, 본 발명의 하나 이상의 핵산을 포함하는 상기한 유전자 구조체는 "본 발명의 유전자 구조체"로 본원에서 언급될 것이다. 본 발명의 유전자 구조체는 DNA 또는 RNA일 수 있으며, 바람직하게는 이중 가닥의 DNA이다. 본 발명의 유전자 구조체는, 또한, 의도한 숙주 세포 또는 숙주 유기체의 형질전환에 적합한 형태, 의도한 숙주 세포의 게놈 DNA내로 삽입하기에 적합한 형태, 또는 의도한 숙주 유기체에서 독립적인 복제, 유지 및/또는 유전에 적합한 형태일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자 구조체는 예컨대 플라스미드, 코스미드, YAC, 바이러스 벡터 또는 트랜스포존과 같은 벡터의 형태일 수 있다. 특히, 벡터는 발현 벡터, 즉, 시험관내 및/또는 생체내에서 (예, 적합한 숙주 세포, 숙주 유기체 및/또는 발현 시스템에서) 발현을 제공할 수 있는 벡터일 수 있다.
바람직하나 비제한적인 측면에서, 본 발명의 유전자 구조체는,
i) 하기와 작동가능하게 연결된, 본 발명의 하나 이상의 핵산;
ii) 프로모터 및 선택적으로 적정 종결인자 등의 하나 이상의 조절 인자; 및 선택적으로
iii) 자체 공지된 유전자 구조체의 하나 이상의 추가적인 인자를 포함하며,
상기 용어 "작동가능하게 연계된" 및 "작동가능하게 연결된"은 WO 08/020079의 131-134페이지에 제시된 의미를 가지며; "조절 인자", "프로모터", "종결인자" 및 "추가적인 인자"는 WO 08/020079의 131-134페이지에 기술된 바와 같으며; 유전자 구조체는 또한 WO 08/020079의 131-134 페이지에 기술된 바와 같을 수 있다.
본 발명의 핵산 및/또는 본 발명의 유전자 구조체는, 즉, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 발현 및/또는 제조를 위해, 숙주 세포 또는 숙주 유기체를 형질전환시키는데 사용할 수 있다. 적합한 숙주 또는 숙주 세포는 당업자에게 자명할 것이며, 예로, 임의의 적합한 진균, 원핵 또는 진핵생물 세포 또는 세포주, 또는 임의의 적합한 진균, 원핵 또는 진핵생물 유기체, 예컨대, WO 08/020079의 134 및 135 페이지에 기술된 것 뿐만 아니라, 당업자에게 자명한, 항체 및 항체 단편 ((단일) 도메인 항체 및 ScFv 단편을 비제한적으로 포함함)의 발현 및 제조를 위한 자체 공지된 기타 모든 숙주 또는 숙주 세포일 수 있다. 또한, 상기에서 언급된 일반적인 종래 기술과, 예로 WO 94/29457; WO 96/34103; WO 99/42077; Frenken et al., (1998); Riechmann and Muyldermans, (1999); van der Linden, (2000); Thomassen et al., (2002); Joosten et al., (2003); Joosten et al., (2005) 및 본원에 인용된 다른 참조문헌을 참조한다.
또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, WO 08/020079의 135-136 페이지와 WO 08/020079에 인용된 다른 참조문헌에 기술된 바와 같이, 예컨대 예방학적 및/또는 치료학적 목적 (예, 유전자 요법으로서)을 위해, 다세포 유기체의 하나 이상의 세포, 조직 또는 기관에 도입 및 발현시킬 수 있다.
세포에서의 나노바디 (또는 ISV)의 발현을 위해, 이는 또한 예컨대 WO 94/02610, WO 95/22618 및 US-A-7004940; WO 03/014960; Cattaneo, A. & Biocca, S. (1997) Intracellular Antibodies: Development and Applications. Landes and Springer-Verlag; and in Kontermann, Methods 34, (2004), 163-170에 기술된 바와 같이, 소위 "인트라바디(intrabodies)"로서 발현시킬 수 있다.
본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, 예컨대, 형질전환 포유류의 모유에서, 예컨대 토끼, 소, 염소 또는 양의 모유에서 (예로, 포유류에 트랜스진을 도입하는 일반적인 기술에 대한 US-A-6,741,957, US-A-6,304,489 및 US-A-6,849,992), 식물 또는 식물의 일부분에서, 예컨대 이의 잎, 꽃, 열매, 종자, 뿌리 또는 덩이줄기에서 (예, 담배, 옥수수, 콩 또는 알파파) 또는 예컨대 누에 봄빅스 모리(Bombix mori)의 번데기에서 생산될 수 있다.
아울러, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, 또한, 무세포 발현 시스템(cell-free expression system)에서 발현 및/또는 생산할 수 있으며, 이러한 시스템에 대한 적절한 예는 당업자에게 자명할 것이다. 일부 바람직하나 비제한적인 예로는 밀 맥아(wheat germ) 시스템에서, 토끼 망상적혈구 용혈물 또는 E. coli Zubay 시스템에서의 발현을 포함한다.
전술한 바와 같이, 나노바디 (또는 ISV)를 이용하는 한가지 이점은, 이를 이루는 폴리펩타이드를 적합한 박테리아 시스템에서의 발현을 통해 제조할 수 있으며, 적합한 박테리아 발현 시스템, 벡터, 숙주 세포, 조절 인자 등은 예컨대 전술한 참조문헌으로부터 당업자에게 자명할 것이다. 그러나, 본 발명은 광의의 의미로 박테리아 시스템에서의 발현으로 한정되지 않음에 유념하여야 한다.
바람직하게는, 본 발명에서는, 약학적 용도에 적합한 형태로 본 발명의 폴리펩타이드를 제공하는 박테리아 발현 시스템 등의 (생체내 또는 시험관내) 발현 시스템이 사용되며, 이러한 발현 시스템은 당업자에게 자명할 것이다. 또한, 당업자에게 자명한 바와 같이, 약학적 용도에 적합한 본 발명의 폴리펩타이드는 펩타이드 합성 기법을 이용하여 제조할 수 있다.
공업적인 스케일로 제조하기 위한, 나노바디 (또는 ISV) 또는 나노바디 (또는 ISV)-함유 단백질 치료물질에 바람직한 이종의 숙주는, 대규모 발현/제조/발효에 적합한, 특히 대규모 약학적 (즉, GMP 등급) 발현/제조/발효에 적합한, E. coli, 피키아 패스토리스 (Pichia pastoris), 사카로마이세스 세레비지애(S. cerevisiae)를 포함한다. 이러한 균주에 대한 적합한 예들은 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 균주와 생산/발현 시스템은 또한 Biovitrum (Uppsala, Sweden)과 같은 회사에서 구입가능하다.
다른 예로, 포유류 세포주, 특히, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포를 대규모 발현/제조/발효에, 특히 대규모 약학적 발현/제조/발효에 사용할 수 있다. 재차, 이러한 발현/제조 시스템은 상기 언급된 회사들 중 일부에서 구입할 수 있다. 구체적인 발현 시스템의 선택은, 임의의 번역 후 수정, 보다 구체적으로는 당화 요건에 따라 부분적으로 의존할 것이다. 당화가 요망되거나 요구되는 나노바디 (또는 ISV)-함유성 재조합 단백질를 제조하는데에는 발현되는 단백질을 당화시키는 능력을 가진 포유류 발현 숙주의 사용이 필수적일 것이다. 이러한 측면에서, 수득되는 당화 패턴 (즉, 부착되는 잔기의 종류, 수 및 위치)은 발현에 사용되는 세포 또는 세포주에 따라 결정될 것임은 당업자에게 자명할 것이다. 바람직하게는, 인간 세포 또는 세포주 (즉, 인간 당화 패턴을 기본적으로 가지는 단백질로 유도함) 또는 인간 당화와 기본적으로 및/또는 기능적으로 동일하거나 또는 적어도 인간 당화를 모방하는 당화 패턴을 제공할 수 있는, 다른 포유류 세포가 사용된다. 일반적으로, E. coli와 같은 원핵생물 숙주는 단백질 당화 능력을 가지고 있지 않으며, 통상적으로 효모와 같은 저급 진핵생물은 인간 당화와 다른 당화 패턴을 유도한다. 그럼에도 불구하고, 모든 전술한 숙주 세포와 발현 시스템이, 수득할 바람직한 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드에 따라, 본 발명에서 사용될 수 있음에 유념하여야 한다. 따라서, 본 발명의 비제한적인 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 당화된다. 본 발명의 다른 비제한적인 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 당화되지 않는다. 바람직하나 비제한적인 본 발명의 일 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 박테리아 세포, 특히 전술한 균주의 세포와 같이, 대규모 약학적 생산에 적합한 박테리아 세포에서 생산한다. 본 발명의 다른 바람직한 비제한적인 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 효모 세포, 특히 전술한 종의 세포 등의 대규모 약학적 생산에 적합한 효모 세포에서 생산한다. 본 발명의 또 다른 바람직한 비제한적인 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 인간 세포 또는 인간 세포주의 세포에서, 보다 구체적으로는, 상기 언급된 세포주 등의 대류모 약학적 생산에 적합한 인간 세포 또는 인간 세포주의 세포에서 생산한다. WO 08/020079의 138 및 139 페이지에 추가적으로 기술된 바와 같이, 숙주 세포에서의 발현을 이용하여 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드를 생산하는 경우, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 세포내에서 (예, 세포질, 페리플라스마 또는 봉입체)에서 생산한 다음 숙주 세포에서 분리하고, 선택적으로 추가로 정제할 수 있거나; 또는 세포외로 (예, 숙주 세포가 배양된 배지) 생산하여 배양 배지로부터 분리하고 선택적으로 추가로 정제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 비제한적인 측면에 있어서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는, 세포내에서 생산되어 숙주 세포로부터 분리된, 특히 박테리아 세포 또는 박테리아 세포내 봉입체로부터 분리되어진, 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드이다. 본 발명의 다른 비제한적인 측면에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는, 세포외에서 생산하여 숙주 세포를 배양한 배지로부터 분리한, 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드이다. 이들 숙주 세포와 함께 이용하기에 바람직하나 비제한적인 프로모터는 WO 08/020079의 139-140 페이지에 언급된 것을 포함한다. 이들 숙주 세포와 함께 이용하기에 바람직하나 비제한적인 분비 서열은 WO 08/020079의 140 페이지에 언급된 것을 포함한다. 본 발명의 숙주 또는 숙주 세포의 적합한 형질전환 기법들은 당업자에게 자명할 것이며, 이는 사용할 유전자 구조체와 의도한 숙주 세포/숙주 유기체에 따라 달라질 수 있다. 이는 상기 언급된 교재와 특허 출원을 참조한다. 형질전환 후, 본 발명의 뉴클레오티드 서열/유전자 구조체로 성공적으로 형질전환되어진 숙주 세포 또는 숙주 유기체를 검출 및 선별하는 단계를 수행할 수 있다. 이는, 예컨대 본 발명의 유전자 구조체에 존재하는 선별 마커를 기반으로 한 선별 단계 또는 예컨대 특이적인 항체를 이용하여 본 발명의 아미노산 서열을 검출하는 단계일 수 있다. (안정적인 세포주 형태에 존재하거나 안정적인 세포주일 수 있는) 형질전환된 숙주 세포 또는 (안정적인 돌연변이 주 또는 균주의 형태에 존재할 수 있는) 숙주 유기체는 본 발명의 다른 측면을 형성한다. 바람직하게는, 이들 숙주 세포 또는 숙주 유기체는, 이들이, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 (숙주 유기체의 경우에: 이의 하나 이상의 세포, 파트, 조직 또는 기관에서) (예, 적정 조건 하에) 발현하거나 또는 (적어도) 발현할 수 있도록 하는 것이다. 또한, 본 발명은, 예컨대 유성 또는 무성 생식에 의해 세포 분열에 의해 수득할 수 있는, 본 발명의 숙주 세포 또는 숙주 유기체의 이후 세대, 후대(progeny) 및/또는 자손(offspring)을 포함한다. 본 발명의 아미노산 서열을 제조/발현을 수득하기 위해, 형질전환된 숙주 세포 또는 형질전환된 숙주 유기체는, 일반적으로, (바람직한) 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드가 발현/생산되도록 하는 조건 하에서 보관, 유지 및/또는 배양할 수 있다. 적합한 조건은 당업자에게 자명할 것이며, 일반적으로 사용되는 숙주 세포/숙주 유기체, 뿐만 아니라 본 발명의 (해당) 뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 조절 인자에 따라 정해질 것이다. 이는, 재차, 본 발명의 유전자 구조체에 대한 단락에서 상기 언급된 교재와 특허 출원을 참조한다. 일반적으로, 적합한 조건은 적정 배지의 사용, 적정 식이원 및/또는 적정 영양원의 존재, 적정 온도의 사용, 및 (예, 본 발명의 뉴클레오티드 서열이 유도성 프로모터의 제어 하에 있는 경우) 선택적으로 적정 유도 인자 또는 화합물의 존재를 포함할 수 있으며; 이들 모두 당업자가 선택할 수 있다. 이러한 조건 하에, 본 발명의 아미노산 서열은 구성적인 방식(constitutive manner), 일시적인 방식 또는 적합하게 유도된 경우에만 발현될 수 있다.
또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 (먼저) (전술한 바와 같이) 미성숙 형태로 제조한 다음, 사용되는 숙주 세포/숙주 유기체에 따라, 번역 후 수정을 행할 수 있음은, 당업자에겐 자명할 것이다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드는 사용되는 숙주 세포/숙주 유기체에 따라 당화될 수 있다. 그런 후, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를, 숙주 세포/숙주 유기체로부터 및/또는 숙주 세포 또는 숙주 유기체가 배양된 배지로부터, 자체 공지된 단백질 분리 및/또는 정제 기법, 예컨대 (분취용) 크로마토그래피 및/또는 전기영동 기법, 차별적인 침전 기법, 친화성 기법 (예, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드와 융합된 특이적이고 절단가능한 아미노산 서열을 이용하여) 및/또는 (즉, 분리할 아미노산 서열에 대한 항체를 이용하여) 분취용 면역학적 기법으로, 분리할 수 있다. 일반적으로, 약학적 목적으로, 본 발명의 폴리펩타이드는, 본 발명의 하나 이상의 폴리펩타이드와 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제 및/또는 보강제, 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 약학적으로 활성인 폴리펩타이드 및/또는 화합물을 포함하는, 약학 조제물 또는 조성물로서 제형화될 수 있다. 비제한적인 예로, 이러한 제형은 경구 투여용, 비경구 투여용 (예, 정맥내, 근육내 또는 피하 주사 또는 정맥내 주입), 국소 투여용, 흡입, 피부 패치, 임플란트, 좌제에 의한 투여용 등에 적합한 형태일 수 있다. 이러한 적합한 투여 형태 - 투여 방식에 따라 고형, 반고형 또는 액체일 수 있음 - 뿐만 아니라 이의 제조 방법 및 사용되는 담체는 당업자에게 자명할 것이며, 본원에서 추가적으로 기술된다. 따라서, 다른 측면에서, 본 발명은, 본 발명의 하나 이상의 아미노산, 본 발명의 하나 이상의 나노바디 (또는 ISV) 또는 본 발명의 하나 이상의 폴리펩타이드, 및 하나 이상의 적합한 (즉, 약학적 용도에 적합한) 담체, 희석제 또는 부형제, 및 선택적으로 하나 이상의 다른 활성 물질을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 일반적으로, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, 자체 공지된 임의의 적정 방식으로 제형화하여 투여할 수 있으며, 예로, 상기 인용된 일반적인 종래 기술 (특히, WO 04/041862, WO 04/041863, WO 04/041865, WO 04/041867 및 WO 08/020079)과 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Company, USA (1990), Remington, the Science and Practice of Pharmacy, 21th Edition, Lippincott Williams and Wilkins (2005); 또는 the Handbook of Therapeutic Antibodies (S. Dubel, Ed.), Wiley, Weinheim, 2007 (예로, 252-255 페이지 참조) 등의 일반 교재를 참조한다. 예컨대, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 일반적인 항체 및 항체 단편 (ScFv 및 다이아바디 포함) 및 그외 약학적 활성 단백질에 대해 공지된 임의 방식으로 제형화하여 투여할 수 있다. 이러한 제형과 이의 제조 방법은 당업자에게 자명할 것이며, 예로 비경구 투여 (예, 정맥내, 복막내, 피하, 근육내, 강내, 동맥내 또는 수막강내 투여) 또는 국소 (즉, 경피 또는 진피내) 투여에 적합한 조제물을 포함한다. 비경구 투여용 조제물은, 예컨대 주입 또는 주사에 적합한, 멸균 용액, 현탁액, 분산제 또는 에멀젼일 수 있다. 이러한 조제물에 적합한 담체 또는 희석제로는, 예컨대, 비제한적으로, WO 08/02007 143 페이지에 언급된 것을 포함한다. 일반적으로 수성 용액 또는 현탁액이 바람직할 것이다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 유전자 요법 전달 방법을 이용하여 투여할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 5,399,346을 참조하며, 전체 내용이 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 유전자 요법 전달 방법을 이용하여, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 코딩하는 유전자로 형질전환된 일차 세포에, 부가적으로, 특정 장기, 조직, 그래프트, 종양 또는 세포를 타겟으로 하기 위한 조직 특이적인 프로모터를 형질전환시킬 수 있으며, 추가적으로 세포내 국지화된 발현을 위한 신호 및 안정화 서열도 형질전환시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, 무활성 희석제 또는 동화가능한 식이성 담체 등의 약제학적으로 허용가능한 비히클과 조합하여, 전신, 예컨대 경구 투여할 수 있다. 이는 경질 또는 연질 셀 젤라틴 캡슐내에 봉입될 수 있으며, 정제로 압축될 수 있거나 또는 환자의 음식에 직접 혼합할 수 있다. 치료학적 경구 투여를 위해, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드를 하나 이상의 부형제와 조합할 수 있으며, 소화하기 어려운 정제, 볼 정제, 트로키제, 캡슐제, 엘릭시르제, 현탁제, 시럽제, 웨이퍼 등의 형태로 사용할 수 있다. 이러한 조성물 및 조제물은 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 함량이 적어도 0.1% 이어야 한다. 조성물 및 조제물내 이의 퍼센트는 물론 달라질 수 있으며, 통상적으로 소정의 단위 투약 형태 (unit dosage form)의 약 2 내지 60 중량%일 수 있다. 이러한 치료학적으로 유용한 조성물내, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 함량은, 유효량 수준이 달성되게 하는 함량이다.
또한, 정제, 트로키제, 환제, 캡슐제 등은 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제 및 감미제 또는 향미제, 예컨대 WO 08/020079의 143-144 페이지에 언급된 것을 포함할 수 있다. 단위 투약 형태가 캡슐인 경우, 이는, 상기 타입의 물질 외에도, 식물성 오일 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 액체 담체를 포함할 수 있다. 다양한 다른 물질들도 코팅제로서 존재하거나, 또는 고형 단위 투약 형태의 물리적 형태를 변형시킬 수 있다. 예컨대, 정제, 환제 또는 캡슐제를 젤라틴, 왁스, 셀락 또는 당 등으로 코팅할 수 있다. 시럽제 또는 엘릭시르제는 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드, 감미제로서 슈크로스 또는 프럭토스, 보존제로서 메틸 및 프로필파라벤, 염료 및 체리향 또는 오렌지향 등의 향미제를 포함할 수 있다. 물론, 임의의 단위 투약 형태의 제조에 사용되는 임의의 물질은 약제학적으로 허용가능하며 실질적으로 사용되는 양에서는 무독성일 수 있다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 서방형 제형(sustained-release preparation) 및 디바이스로 통합될 수 있다.
또한, 경구 투여용 조제물 및 제형은 본 발명의 구조체가 위 환경을 견디고 장으로 통과하게 하는 장 코팅을 구비할 수 있다. 보다 일반적으로, 경구 투여용 조제물 및 제형은, 위장관의 임의의 바람직한 부위로 전달하기 위해 적합하게 제형화될 수 있다. 아울러, 위장관으로의 전달을 위해 적정 좌제를 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 WO 08/020079의 144-145 페이지에 추가적으로 기술된 바와 같이, 주입 또는 주사에 의해 정맥내로 또는 복막내로 투여될 수 있다. 국소 투여를 위해, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, 즉, 액체인 경우, 순수한 형태로 사용할 수 있다. 그러나, 일반적으로, WO 08/020079의 145 페이지에 추가로 기술된 바와 같이, 고체 또는 액체일 수 있는, 피부학적으로 허용가능한 담체와 조합하여, 조성물 또는 제형으로서 피부에 이를 투여하는 것이 바람직할 것이다.
일반적으로, 액체 조성물, 예컨대 로션내 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드의 농도는 약 0.1 - 25 wt%, 바람직하게는 약 0.5 - 10 wt%일 것이다. 겔 또는 분말과 같은 반고체 또는 고체 조성물내 농도는 약 0.1 - 5 wt%, 바람직하게는 약 0.5 - 2.5 wt%일 것이다. 치료용으로 필요한 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드의 양은, 선택되는 구체적인 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드에 따라 다를 것이며, 또한 투여 경로, 치료중인 병태의 특성과 환자의 연령 및 증상에 따라 달라질 것이며, 궁극적으로 주치의나 임상의의 판단에 따를 것이다. 또한, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드의 투여은을 타겟 세포, 종양, 조직, 그래프트 또는 장기에 따라 달라진다. 바람직한 투여량은, 통상적으로, 단일 투약으로 또는 일정한 간격으로 투여하는 분할된 투약으로서, 예컨대 1일 2, 3, 4 또는 그 이상의 횟수로 제공될 수 있다. 서브-투여량 자체도, 예컨대 개별적으로 대략적인 간격의 복수 투여로; 예컨대 취입기를 통한 복수의 흡입 또는 눈에 여러번 점적 적용에 의해, 추가로 분할될 수 있다. 투여 요법은 장기간의 매일 처리를 포함할 수 있다. "장기간"은 적어도 2주, 바람직하게는 수주, 수개월 또는 수년의 기간을 의미한다. 이러한 투약 범주에 대한 불가결한 변형은 본원의 교시 내용에 제공된 통상적인 실험만으로도 당해 기술 분야의 당업자가 결정할 수 있다. Remington's Pharmaceutical Sciences (Martin, E.W., ed. 4), Mack Publishing Co., Easton, PA를 참조한다. 또한, 투여량은 임의의 합병증 발생시 개개 의사가 조절할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 이를 포함하는 약학 조성물을 약제학적으로 활성인 양으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 본 발명의 한가지 이상의 면역 관련 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 내용에서, 용어 "예방 및/또는 치료"는, 질환의 예방 및/또는 치료를 포함할 뿐만 아니라, 질환의 개시 예방, 질환의 진행 서행 또는 무효화, 질환과 관련된 한가지 이상의 증상의 개시 예방 또는 서행, 질환과 관련된 한가지 이상의 증상의 경감 및/또는 완화, 질환 및/또는 이와 관련된 임의 증상의 중증도 및/또는 기간의 감소, 및/또는 질환 및/또는 이와 관련된 임의 증상의 중증도의 추가적인 악화 예방, 질환에 의해 야기되는 임의 생리학적 손상의 예방, 경감 또는 회복, 및 일반적으로 치료 중인 환자에게 유익한 임의의 약리학적 작용을 포함한다. 치료할 개체는 임의의 온혈 동물, 구체적으로 포유류, 보다 구체적으로 인간일 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 치료할 개체는 특히 본원에 언급된 질환 및 질병을 앓고 있거나 위험성이 있는 개체일 것이다. 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 이의의 생물학적 또는 약리학적 활성, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 생물학적 경로 또는 신호 전달과 관련된, 한가지 이상의 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것으로, 상기 방법은, 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 이를 포함하는 약학 조성물을 약제학적인 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특히, 본 발명은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 이의 생물학적 또는 약리학적 활성, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 생물학적 경로 또는 신호 전달을 조절함으로써 치료할 수 있는, 한가지 이상의 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은, 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 이를 포함하는 약학 조성물을, 약제학적 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특히, 상기 약제학적 유효량은, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 이의 생물학적 또는 약리학적 활성, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 생물학적 경로 또는 신호 전달을 조절하는데 충분한 양일 수 있거나; 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합, 이의 생물학적 또는 약리학적 활성, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 생물학적 경로 또는 신호 전달을 조절하는데 충분한, 순환성 수준으로, 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 본 발명의 폴리펩타이드를 제공하는 양일 수 있다. 또한, 본 발명은, 환자에게 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 또는 본 발명의 폴리펩타이드를 투여함으로써 예방 및/또는 치료할 수 있는 질환 또는 장애 중 한가지를 예방 및/또는 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 본 발명의 폴리펩타이드, 및/또는 이를 포함하는 약학 조성물을 약제학적 활성인 양으로 이를 필요로하는 개체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명은, 본원에 열거된 질환 및 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 한가지 이상의 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 본 발명의 아미노산 서열, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV), 본 발명의 폴리펩타이드, 및/또는 이를 포함하는 약학 조성물을 약제학적 활성인 양으로 이를 필요로하는 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애의 예들은 본원의 내용을 토대로 당업자들에게는 자명할 것이며, 그 예로는 다음과 같은 질환 및 장애를 포함한다: 전신 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosis), 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염 (spondyloarthropathies), 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증 (idiopathic inflammatory myopathies), 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환.
상기 방법들에서, 본 발명의 아미노산, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드 및/또는 이를 포함하는 조성물은, 사용될 구체적인 약학 제형 또는 조성에 따라, 임의의 적합한 방식으로 투여할 수 있다. 따라서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드, 및/또는 이를 포함하는 조성물은, 사용될 구체적인 약학 제형 또는 조성에 따라, 예컨대, 경구, 복막내 (예, 정맥내, 피하, 근육내 또는 위장관을 우회하는 임의의 다른 투여 경로를 통해), 코내, 진피내, 국소, 좌제에 의해, 흡입에 의해 투여될 수 있다. 임상학자는 예방 또는 치료할 질환 또는 장애와 임상학자에게 잘 알려져 있는 다른 인자에 따라, 이러한 투여에 사용할 적합한 약학 제형 또는 조성물과 적정 투여 경로를 선택할 것이다.
본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드 및/또는 이를 포함하는 조성물은, 예방 또는 치료할 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료에 적합한 치료 용법에 따라 투여된다. 임상학자는, 일반적으로, 예방 또는 치료할 질환이나 장애, 치료할 질환 및/또는 이의 증상의 중증도, 사용할 구체적인 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드, 구체적인 투여 경로, 사용할 약학 제형 또는 조성물, 환자의 연령, 성별, 체중, 식이, 전반적인 상태, 및 임상학자에게 널리 공지된 유사 인자들과 같은 인자들에 따라, 적합한 치료 용법을 정할 수 있을 것이다.
일반적으로, 치료 용법은 하나 이상의 약제학적 유효량 또는 용량으로 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드 또는 이를 포함하는 하나 이상의 조성물의 투여를 포함할 것이다. 투여할 유효량(들) 또는 용량은 즉 전술한 인자를 기초로 정할 수 있다.
일반적으로, 본원에 언급된 질환 및 장애를 예방 및/또는 치료하기 위해, 치료할 구체적인 질환 또는 장애, 본 발명의 구체적인 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드, 구체적인 투여 경로와 사용할 구체적인 약학 제형 또는 조성물에 따라, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는 통상적으로 1일 당 체중 1 kg 당 1 g - 0.01 ㎍으로, 바람직하게는 0.1 g - 0.1 ㎍/kg/일로, 예컨대 약 1, 10, 100 또는 1000 ㎍/kg/일로, 연속적으로 (예, 주입에 의해), 매일 1회로, 또는 하루 중 여러번 투약으로서 투여될 것이다. 임상학자는, 통상적으로, 적절한 매일 투여량을 본원에 기술된 인자에 따라 정할 수 있을 것이다. 또한, 구체적인 사례들에서, 임상학자는 예컨대 전술한 인자와 본인의 전문가적 판단을 근거로 이러한 양적 범위를 벗어나게 선택할 수 있다. 일반적으로, 투여할 양에 대한 일부 가이드라인은, 친화성/항원-항체 결합성, 효능, 생체분포, 반감기 및 당업자에게 잘 알려진 유사 인자들에서의 차이를 고려하여, 기본적으로 동일한 경로를 통해 투여되는 동일한 타겟에 대한 유사한 기존 항체 또는 항체 단편이 일반적으로 투여되는 양으로부터 구할 수 있다.
통상적으로, 상기 방법에서, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드 하나가 사용될 것이다. 그러나, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및/또는 폴리펩타이드를 조합하여 2 이상을 사용하는 것도 본 발명의 범위에 포함된다.
또한, 본 발명의 ISV, 나노바디 (또는 ISV), 아미노산 서열 및 폴리펩타이드는 하나 이상의 추가적인 약제학적 활성 화합물 또는 유효 성분들과 조합하여 즉 조합된 치료 용법으로서 사용될 수 있으며, 이는 상승 작용을 유발하거나 유발하지 않을 수 있다. 재차, 임상학자는 이러한 추가적인 화합물 또는 유효 성분들을 선택할 수 있을 뿐만 아니라 전술한 인자들과 자신의 전문가적 판단을 기초로 적합한 조합 치료 용법을 선택할 수 있을 것이다. 특히, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 및 폴리펩타이드는, 그 결과로서 상승 작용이 달성되거나 달성되지 않을 수 있는, 본원에 언급된 질환 및 장애의 예방 및/또는 치료를 위해 사용되거나 사용될 수 있는, 다른 약제학적 활성 화합물 또는 유효 성분들과 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 화합물과 유효 성분들의 예 뿐만 아니라 이를 투여하기 위한 경로, 방법 및 약학 제형 또는 조성물은 임상학자에게 자명할 것이다.
2가지 이상의 물질 또는 유효 성분들을 조합된 치료 용법의 일부분으로서 사용하고자 하는 경우, 이는 동일한 투여 경로나 상이한 투여 경로를 통해 기본적으로 동시에 또는 다른 시기에 (예, 기본적으로 동시에, 연속적으로, 또는 교대 용법(alternating regime)에 따라) 투여할 수 있다. 물질 또는 유효 성분들을 동일한 투여 경로를 통해 동시에 투여하고자 하는 경우, 이는 당업자에게 자명한 바와 같이, 상이한 약학 제형 또는 조성물로서 또는 조합된 약학 제형 또는 조성물의 일부로서 투여할 수 있다.
또한, 2가지 이상의 활성 물질과 유효 성분들을 조합 치료 용법의 일부분으로서 사용하는 경우, 이러한 물질 또는 유효 성분들 각각은 동일한 양으로, 그리고, 화합물 또는 유효 성분이 단독으로 사용되는 경우와 같이 동일한 용법에 따라 투여할 수 있으며, 이러한 조합 사용은 상승 작용을 유도하거나 유도하지 않을 수 있다. 그러나, 2가지 이상의 활성 물질 또는 유효 성분들의 조합 사용으로 상승 작용이 발생하는 경우, 이는 투여할 물질 또는 유효 성분들 중 하나 이상의 양 또는 전체의 양을 줄이면서도 동시에 바람직한 치료학적 작용을 달성할 수 있다. 이는, 예를 들어, 이들을 이의 통상적인 양으로 사용하였을 때 상기 물질 또는 유효 성분들 중 하나 이상의 사용과 관련된 임의의 원치않은 부작용을 방지, 제한 또는 줄이면서, 동시에 바람직한 약학적 또는 치료학적 효과를 수득할 수 있다.
본 발명에 따라 사용되는 치료 용법의 효과는, 임상학자에게 자명한 바와 같이, 관련된 질환 또는 장애에 대해 공지된 임의의 방식으로 결정하거나 및/또는 추적할 수 있다. 또한, 임상학자는, 바람직한 치료학적 효과를 달성하기 위해, 원치않은 부작용을 방지, 제한 또는 낮추기 위해, 및/또는 바람직한 치료학적 효과 달성과 부적절한 부작용의 방지, 제한 또는 감소 간의 적절한 균형을 달성하기 위해, 필요에 따라 경우에 따라서 구체적인 치료 용법을 바꾸거나 수정할 수 있을 것이다. 일반적으로, 치료 용법은 바람직한 치료학적 효과를 달성할 때까지 및/또는 바람직한 치료학적 효과가 유지되는 한 수행될 것이다. 즉, 이는 임상학자가 결정할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애 중 한가지 이상의 예방 및/또는 치료에; 및/또는 본원에 언급된 하나 이상의 치료 방법에 사용하기 위한, 약학 조성물의 제조에 있어서의 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다.
치료할 개체는 임의의 온혈 동물일 수 있으며, 구체적으로는 포유류, 보다 구체적으로는 인간이다. 예를 들어, 인간 IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17A/F (또는 이들의 조합)에 대해 일차적으로 만들어진 대부분의 나노바디 (또는 ISV)가 마모셋 IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17A/F (또는 이들의 조합)에 교차 반응하는 것으로 밝혀진 바 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 치료할 개체는 특히 본원에 언급된 질환 및 장애를 앓고 있거나 발병 위험성이 있는 사람일 것이다.
또한, 본 발명은, 환자에게 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드를 투여함으로써 예방 및/또는 치료할 수 있는 한가지 이상의 질환 또는 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한 약학 조성물의 제조에 있어서의 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명은, 본 발명의 면역 관련 질환 및 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한, 특히 본원에 열거된 하나 이상의 질환 및 장애의 예방 및 치료를 위한, 약학 조성물의 제조에 있어서의 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다. 재차, 본 발명의 상기한 약학 조성물에서, 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV) 또는 폴리펩타이드 역시 본원에 언급된 바와 같은 하나 이상의 다른 활성 성분과 적절하게 조합될 수 있다. 최종적으로, (본원에 정의된 바와 같이) 본 발명의 나노바디 (또는 ISV) 및 본 발명의 폴리펩타이드를 사용하는 것이 훨씬 바람직하지만, 본원의 설명을 기반으로, 당업자는, 유사한 방식으로, 다른 아미노산 서열, 특히 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 대한 (단일) 도메인 항체 뿐만 아니라 상기한 (단일) 도메인 항체를 포함하는 폴리펩타이드를 설계 및/또는 제작할 수 있을 것임이 자명할 것이다. 예컨대, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 대해 전술한 CDR들 중 하나 이상을 상기한 (단일) 도메인 항체 또는 다른 단백질 스캐폴드 상에 "그래프트" 가능할 수 있음이 당업자에게는 자명할 것이며, 상기 스캐폴드로는 인간 스캐폴드 또는 비-면역글로불린 스캐폴드가 있으나 이로 한정되지 않는다. 적합한 스캐폴드와 이러한 CDR 그래프팅 기술은 당업자들에게 자명할 것이며, 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예로, WO 08/020079에 언급되어 있다. 예컨대, 마우스 또는 랫의 CDR을 인간 프래임워크 및 스캐폴드에 이식하는 자체 공지된 기법을 유사한 방식으로 사용하여, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)의 하나 이상의 CDR과 하나 이상의 인간 프래임워크 영역 또는 서열을 포함하는 키메라 단백질을 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 나노바디 (또는 ISV)에 전술한 바람직한 CDR 서열 이외의 다른 하나 이상의 CDR 서열이 포함되는 경우, 이들 CDR 서열은 자체 공지된 임의의 방식으로, 예컨대 WO 08/020079에 기술된 한가지 이상의 기법을 이용하여 수득할 수 있다. 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 (또는 ISV), 폴리펩타이드, 핵산, 유전자 구조체, 숙주 및 숙주 세포는 본원의 내용을 기초로 당업자에게 자명할 것이다. 예컨대, 비제한적으로, 본 발명의 아미노산 서열은 적정 캐리어 또는 고체 지지체와 연결시켜, 조성물 및 이를 포함하는 조제물로부터 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 정제하기 위해 자체 공지된 방식으로 이용할 수 있는 매질(medium)을 제공할 수 있다. 적합한 검출가능한 표지물질을 포함하는 본 발명의 아미노산 서열의 유도체는 또한 세포나 조직의 표면 상의 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 존재를 (예로, 적합한 세포 분류 기법과 조합하여) 선택적으로 검출하기 위한 마커로서 또는 조성물 또는 조제물내 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합의 존재를 (정성적으로 또는 정량적으로) 측정하기 위한 마커로서 사용할 수 있다.
본 발명의 일부 매우 바람직한 측면은 다음과 같다:
● 인간 IL-17A, 인간 IL-17F, 인간 IL-17A/F 및/또는 이들의 임의 조합을 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열
● 해리 속도 (koff 속도)가 10-4 s-1 내지 10-6 s-1인 각 아미노산 서열.
● 인간 IL-17A, 인간 IL-17F, 인간 IL-17A/F 및/또는 이들의 임의 조합에 대한 친화성이 1 nM 미만인, 각 아미노산 서열.
● 면역글로불린 폴드를 포함하는 각 아미노산 서열.
● 면역글로불린 서열인 각 아미노산 서열.
● 경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열); 또는 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열)로 필수적으로 구성된 각 아미노산 서열.
● 나노바디로 필수적으로 구성된 각 아미노산 서열.
● 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지되, 아미노산 동일성 수준의 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들은 배제되며; 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치에서의 하나 이상의 아미노산 잔기들은 표 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택되는, 폴리펩타이드로 필수적으로 구성된 각 아미노산 서열.
● 인간 IL-17A에 특이적으로 결합할 수 있는, 각 아미노산 서열.
● 인간 IL-17A 및 인간 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는, 상기 청구항들 중 임의에 따른 각 아미노산 서열.
● 인간 IL-17F에 특이적으로 결합할 수 있는, 각 아미노산 서열.
● 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는, .
● 아미노산 서열이, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 또는 H54A IL-17A 돌연변이에 결합하는 것을 특징으로 하는, 인간 IL-17 A 및 IL-17A/F (클래스 2)를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
● 아미노산 서열이, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 또는 N88A IL-17A 돌연변이에 결합하는 것을 특징으로 하는, 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F (클래스 4)를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
● 아미노산 서열이, 야생형 IL-17F 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, R47A, R73A, I86A 또는 N89A IL-17F 돌연변이에 결합하는 것을 특징으로 하는, 인간 IL17F를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
● 인간 IL-17A 및/또는 IL-17 A/F와의 결합에 대해 제2 아미노산 서열과 경쟁하는 제1 아미노산 서열로서, 상기 제2 아미노산 서열은 인간 IL-17 A 및 IL-17A/F (클래스 2)에 특이적으로 결합하며, 상기 제2 아미노산 서열은, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 또는 H54A IL-17A 돌연변이에 결합하며, 상기 제1 아미노산 서열이 IL-17A, IL-17 A/F 및/또는 IL-17F가 아닌, 제1 아미노산 서열.
● 인간 IL-17A, IL-17 A/F 및/또는 IL-17F와의 결합에 대해 제2 아미노산 서열과 경쟁하는 제1 아미노산 서열로서, 상기 제2 아미노산 서열은 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F (클래스 4)에 특이적으로 결합하며, 상기 제2 아미노산 서열은, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 또는 N88A IL-17A 돌연변이에 결합하며, 상기 제1 아미노산 서열은 IL-17A, IL-17 A/F 및/또는 IL-17F가 아닌, 제1 아미노산 서열.
● 인간 IL-17F와의 결합에 대해 제2 아미노산 서열과 경쟁하는 제1 아미노산 서열로서, 상기 제2 아미노산 서열은 인간 IL-17F에 특이적으로 결합하며, 상기 제2 아미노산 서열은, 야생형 IL-17F 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, R47A, R73A, I86A 또는 N89A IL-17F 돌연변이에 결합하며, 상기 제1 아미노산 서열은 IL-17A, IL-17 A/F 및/또는 IL-17F가 아닌, 제1 아미노산 서열.
● 본 발명의 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
● 질병을 치료하기 위한, 본 발명의 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드의 용도.
● 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염, 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환을 치료하기 위한, 본 발명의 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드의 용도; 또는
전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염, 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환을 치료하기 위한, 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 아미노산 서열 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약학 조성물; 또는
제1항 내지 제13항 중 어느 한항에 따른 폴리펩타이드 및/또는 아미노산 서열을 유효량으로 투여함으로써, 이를 필요로 하는 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염, 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환의 치료에 적합한 것인, 방법.
● 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 아미노산 서열 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물.
본 발명에 대한 일부 바람직하나 비제한적인 측면들을 아래에 열거한다. 본 발명의 다른 측면들과 구현예들은 본원의 내용을 토대로 당업자에게 자명할 것이다.
측면 A-1: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며, 바람직하게는 결합 유닛으로서 기능하는, 아미노산 서열.
측면 A-2: 본질적으로 분리된 형태인, 측면 A-1에 따른 아미노산 서열.
측면 A-3: 개체에 투여하기 위한, 상기 개체에서 천연적으로 만들어지 않는, 측면 A-1 또는 A-2에 따른 아미노산 서열.
측면 A-4: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열. 이 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-5: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-6: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1, 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-7: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-8: 하기로 특정되는 폴리펩타이드로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 - 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-9: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 - 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-10: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합을 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟과 결합하기 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 포함하는, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-11: 임의의 IL-17A를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
측면 A-12: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, 임의의 IL-17A에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-13: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, 임의의 IL-17A에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-14: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1, 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, 임의의 IL-17A에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-15: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, 임의의 IL-17A에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-16: 하기로 특정되는 폴리펩타이드로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 - 627 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-17: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 - 627 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-18: 임의의 IL-17A 및 IL-17A/F를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
측면 A-19: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-20: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-21: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1, 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-22: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17A 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-23: 하기로 특정되는 폴리펩타이드로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 628 - 639 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-24: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 628 내지 639 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-25: IL-17A 및 IL-17A/F와의 결합을 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟과 결합하기 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 포함하는, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-26: IL-17F를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
측면 A-27: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-28: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-29: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1, 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-30: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-31: 하기로 특정되는 폴리펩타이드로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 640 내지 649 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-32: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 640 내지 649 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-33: IL-17F와의 결합을 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟과 결합하기 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 포함하는, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-34: IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열.
측면 A-35: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-36: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-37: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1, 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-38: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 A-39: 천연 아미노산 (임의의 적합한 종, 특히 포유류, 예컨대 인간 또는 마모셋으로부터 유래), 합성 아미노산 서열, 또는 반-합성 아미노산 서열인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-40: 면역글로불린 폴드를 포함하거나, 적정 조건에서 면역글로불린 폴드를 형성할 수 있는, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-41: 4개의 프래임워크 영역 (각각 FR1 내지 FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 내지 CDR3)로 필수적으로 구성된, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-42: 면역글로불린 서열인 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-43: (임의의 적합한 종으로부터 유래된) 천연 면역글로붙린 서열, 합성 면역글로불린 서열, 또는 반-합성 면역글로불린 서열인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-44: 인간화된 면역글로불린 서열, 카멜화된 면역글로불린 서열 또는 친화성 성숙화와 같이 기법으로 수득한 면역글로불린 서열인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-45: 경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열); 또는 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열)로 필수적으로 구성된, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-46: 통상적인 4쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변성 도메인 서열 또는 중쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변성 도메인 서열로 필수적으로 구성된, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-47: 도메인 항체 (또는 도메인 항체로 사용하기에 적합한 아미노산 서열), 단일 도메인 항체 (또는 단일 도메인 항체로 사용하기에 적합한 아미노산 서열), "dAb" (또는 dAb로 사용하기에 적합한 아미노산 서열) 또는 나노바디 (비제한적으로 VHH 서열을 포함함)로 필수적으로 구성된, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-48: 나노바디로 필수적으로 구성된, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-49: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 1 내지 22 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-50: 하기로 특정되는 폴리펩타이드로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 650 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-51: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성되는 것인, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
(i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 650 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
(ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 A-52: 인간화된 나노바디로 필수적으로 구성된, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-53: IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F와의 결합을 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟과 결합하기 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 포함하는, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 A-54: 상기 아미노산 서열이 ISV (본원에 정의된 바와 같이)이며, 결합 유닛으로서 기능하는, 상기 A-1 내지 A-53의 각각의 측면 및 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
CDR-관련 측면들
측면 B-1: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합(예, 결합 유닛)을 겨냥하거나 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 잔기 가닥을 포함하는, 아미노산 서열:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
또는 이들의 임의의 적정 조합.
이러한 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 B-2: 상기 아미노산 잔기 가닥 하나 이상이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합하기 위한 항원 결합부를 형성하는 것인, 측면 B-1에 따른 아미노산 서열.
측면 B-3: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기 가닥 2개 이상을 포함하는, 아미노산 서열:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열,
(i) 제1 아미노산 잔기 가닥이 a), b) 또는 c)에 따른 아미노산들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 d), e), f), g), h) 또는 i)에 따른 아미노산 서열들 중 하나에 해당되거나;
(ii) 제1 아미노산 잔기 가닥이 d), e) 또는 f)에 따른 아미노산들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 a), b), c), g), h) 또는 i)에 따른 아미노산 서열들 중 하나에 해당되거나; 또는
(iii) 제1 아미노산 잔기 가닥이 g), h) 또는 i)에 따른 아미노산들 중 하나에 해당되는 경우, 제2 아미노산 잔기 가닥은 a), b), c), d), e) 또는 f)에 따른 아미노산 서열들 중 하나에 해당됨.
이러한 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54, B-1 또는 B-2 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 B-4: 상기 아미노산 잔기 가닥 2 이상이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합하기 위한 항원 결합부를 형성하는, 측면 B-3에 따른 아미노산 서열.
측면 B-5: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며, 아미노산 잔기 가닥 3개 이상을 포함하는 아미노산 서열로서,
상기 제1 아미노산 잔기 가닥이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
상기 제2 아미노산 잔기 가닥이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
상기 제3 아미노산 잔기 가닥이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 아미노산 서열:
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
이러한 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54 및/또는 B-1 내지 B-4 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 B-6: 상기 아미노산 잔기 가닥 3개 이상이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합하기 위한 항원 결합부를 형성하는 것인, 측면 B-5에 따른 아미노산 서열.
측면 B-7: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있는 아미노산 서열로서, 상기 아미노산 서열의 CDR 서열들이, 서열번호 623 내지 693의 하나 이상의 아미노산 서열의 CDR 서열에 대해, 70% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 80% 이상의 아미노산 동일성, 보다 바람직하게는 90% 이상의 아미노산 동일성, 예로 95%의 아미노산 동일성 또는 그 이상의 동일성, 또는 보다 본질적으로는 100%의 아미노산 동일성을 가지는 것인, 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54 및/또는 B-1 내지 B-6 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 B-8: 상기 아미노산 서열이 ISV (본원에 정의된 바와 같이)인, B-1 내지 B-7 측면들 중 임의 측면 및 각 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 C-1: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열 (예, 결합 유닛)이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합하는 것을 교차-차단하는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54 및/또는 B-1 내지 B-8 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다. 또한, 바람직하게는, 이러한 아미노산 서열은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있다.
측면 C-2: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 의해, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합으로부터 교차-차단되는 아미노산 서열. 이러한 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54 및/또는 B-1 내지 B-8 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다. 또한, 바람직하게는, 이러한 아미노산 서열은 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있다.
측면 C-3: 상기 아미노산 서열의 교차-차단력 또는 교차-차단되는 능력은 Biacore 분석으로 검출되는 것인, C-1 또는 C-2 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 C-4: 상기 아미노산 서열의 교차-차단력 또는 교차-차단되는 능력은 ELISA 분석으로 검출되는 것인, C-1 내지 C-3 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 C-5: 상기 아미노산 서열이 (본원에 정의된 바와 같이)ISV이고, 바람직하게는, 결합 유닛으로서 기능하는, 상기 C-1 내지 C-4 측면들 중 임의 측면 및 각 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-1: 본질적으로 분리된 형태인, B-1 내지 B-8 또는 C-1 내지 C-5 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-2: 아미노산 서열이 개체에서 천연적으로 형성되지 않는, 개체에게 투여하기 위한, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5 및/또는 D1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-3: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, 및/또는 D1 내지 D-2 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-4: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, 및/또는 D-1 내지 D-3 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-5: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, 및/또는 D-1 내지 D-4 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-6: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, 및/또는 D-1 내지 D-5 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 D-7: 상기 아미노산 서열이 ISV이고 (본원에 정의된 바와 같이), 바람직하게는, 결합 유닛으로서 기능하는, 상기 D-1 내지 D-6 측면들 중 임의 측면 및 각 측면에 따른 아미노산 서열.
상기 D-1 내지 D-7 측면에 따른 아미노산 서열은 특히 A-1 내지 A-54 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
측면 E-1: (임의의 적정 종 유래의) 천연 아미노산 서열, 합성 아미노산 서열 또는 반합성 아미노산 서열인, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5 및/또는 D1 내지 D-7 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-2: 면역글로불린 폴드를 포함하거나, 적정 조건에서 면역글로불린 폴드를 형성할 수 있는, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-3: 면역글로불린 서열인, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 또는 E-2 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-4: (임의의 적합한 종으로부터 유래된) 천연 면역글로붙린 서열, 합성 면역글로불린 서열, 또는 반-합성 면역글로불린 서열인, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-3 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-5: 인간화된 면역글로불린 서열, 카멜화된 면역글로불린 서열 또는 친화성 성숙화와 같이 기법으로 수득한 면역글로불린 서열인, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-4 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-6: 경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열); 또는 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열)로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-5 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-7: 통상적인 4쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변성 도메인 서열 또는 중쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변성 도메인 서열로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-6 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-8: 도메인 항체 (또는 도메인 항체로 사용하기에 적합한 아미노산 서열), 단일 도메인 항체 (또는 단일 도메인 항체로 사용하기에 적합한 아미노산 서열), "dAb" (또는 dAb로 사용하기에 적합한 아미노산 서열) 또는 나노바디 (비제한적으로 VHH 서열을 포함함)로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-7 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-9: 나노바디로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-8 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-10: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-9 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 1 내지 22 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 E-11: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-10 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 E-12: 인간화된 나노바디로 필수적으로 구성된, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-11 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-13: CDR 서열들에 의해 형성되는 결합을 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟과 결합하기 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 포함하는, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7, 및/또는 E-1 내지 E-11 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 E-14: 상기 아미노산 서열이 ISV이고 (본원에 정의된 바와 같이), 바람직하게는, 결합 유닛으로서 기능하는, 상기 E-1 내지 E-13 측면들 중 임의 측면 및 각 측면에 따른 아미노산 서열.
상기 측면에 따른 아미노산 서열은 E-1 내지 E-14 특히 A-1 내지 A-54 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열일 수 있다.
프래임워크 + CDR들의 측면들
측면 F-1: 4개의 프래임워크 영역 (각각 FR1 내지 FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 내지 CDR3)로 필수적으로 구성되는 아미노산 서열로서,
- CDR1이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR3가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 아미노산 서열:
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
이러한 아미노산 서열은 바람직하게는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합 (예, 결합 유닛으로서)할 수 있다. 또한, 이러한 아미노산 서열은, 바람직하게는, A-1 내지 A-54, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7 및/또는 E-1 내지 E-14 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열이다.
측면 F-2: 4개의 프래임워크 영역 (각각 FR1 내지 FR4)과 3개의 상보성 결정부 (각각 CDR1 내지 CDR3)로 필수적으로 구성된, 아미노산 서열로서:
- CDR1이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR3가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 아미노산 서열:
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
이러한 아미노산 서열은 바람직하게는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 (예, 결합 유닛으로서) 결합할 수 있다. 또한, 이러한 아미노산 서열은 바람직하게는 A-1 내지 A-54, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7 및/또는 E-1 내지 E-14 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열이다.
측면 F-3: 상기 아미노산 서열의 CDR 서열이, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열의 CDR 서열에 대해, 70% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 80% 이상의 아미노산 동일성, 보다 바람직하게는 90% 이상의 아미노산 동일성, 예로 95%의 아미노산 동일성 또는 그 이상의 동일성, 또는 보다 본질적으로는 100%의 아미노산 동일성을 가지는 것인, F-1 및 F-2 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
이러한 아미노산 서열은 바람직하게는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, 아미노산 서열이다. 또한, 이러한 아미노산 서열은 바람직하게는 A-1 내지 A-54, C-1 내지 C-5, D1 내지 D-7 및/또는 E-1 내지 E-14 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열이다.
측면 F-4: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며, 서열번호 623 내지 693의 임의 측면에 따른 하나 이상의 아미노산 서열의 결합을 교차-차단하는, F-1 내지 F-3 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-5: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하며, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 의해 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합으로부터 교차-차단되는, F-1 내지 F-3 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-6: 상기 아미노산 서열의 교차-차단력 또는 교차-차단되는 능력은 Biacore 분석으로 검출되는 것인, F-4 또는 F-5 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-7: 상기 아미노산 서열의 교차-차단력 또는 교차-차단되는 능력은 ELISA 분석으로 검출되는 것인, F-4 또는 F-5 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-8: 본질적으로 분리된 형태인, F-1 내지 F-7 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-9: 상기 아미노산 서열을 천연적으로 생성하지 못하는 개체에게 투여하기 위한 것인, F-1 내지 F-8 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-10: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, F-1 내지 F-9 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-11: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, F-1 내지 F-10 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-12: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, F-1 내지 F-11 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-13: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, F-1 내지 F-12 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-14: (임의의 적정 종 유래의) 천연 아미노산 서열, 합성 아미노산 서열 또는 반합성 아미노산 서열인, F-1 내지 F-13 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-15: 면역글로불린 폴드를 포함하거나, 적정 조건에서 면역글로불린 폴드를 형성할 수 있는, F-1 내지 F-14 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-16: 면역글로불린 서열인, 특히 ISV인, F-1 내지 F-15 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-17: (임의의 적합한 종으로부터 유래된) 천연 면역글로붙린 서열, 합성 면역글로불린 서열, 또는 반-합성 면역글로불린 서열인, F-1 내지 F-16 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-18: 인간화된 면역글로불린 서열, 카멜화된 면역글로불린 서열 또는 친화성 성숙화와 같이 기법으로 수득한 면역글로불린 서열인, F-1 내지 F-17 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-19: 경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열); 또는 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열)로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-18 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-20: 통상적인 4쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변성 도메인 서열 또는 중쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변성 도메인 서열로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-19 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-21: 도메인 항체 (또는 도메인 항체로 사용하기에 적합한 아미노산 서열), 단일 도메인 항체 (또는 단일 도메인 항체로 사용하기에 적합한 아미노산 서열), "dAb" (또는 dAb로 사용하기에 적합한 아미노산 서열) 또는 나노바디 (비제한적으로 VHH 서열을 포함함)로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-20 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-22: 나노바디로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-21 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 F-23: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-22 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 1 내지 22 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며; 및
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 F-24: 하기로 특정되는 나노바디로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-23 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열:
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 - 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며;
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택됨.
측면 F-25: 인간화된 나노바디로 필수적으로 구성된, F-1 내지 F-24 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 G-1: CDR 서열들에 의해 형성되는 결합을 위한 하나 이상의 결합부 외에도, 다른 항원, 단백질 또는 타겟에 대한 결합을 위한 하나 이상의 추가적인 결합부를 (예, 결합 유닛으로서) 포함하는, 전술한 임의 측면에 따른 아미노산 서열.
측면 H-1: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 (예, 결합 유닛으로서) 결합할 수 있거나, 및/또는 이를 겨냥하는, 나노바디.
측면 H-2: 본질적으로 분리된 형태인, H-1 측면에 따른 나노바디.
측면 H-3: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, H-1 내지 H-2 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-4: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, H-1 내지 H-3 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-5: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, H-1 내지 H-4 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-6: 친화성 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 더 바람직하게는 10 nM 미만, 예로, 500 pM 미만으로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는, H-1 내지 H-5 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-7: (임의의 적정 종으로부터 유래된) 천연 나노바디, 합성 나노바디 또는 반-합성 나노바디인, H-1 내지 H-6 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-8: VHH 서열, 부분 인간화된 VHH 서열, 완전히 인간화된 VHH 서열, 카멜화된 중쇄 가변성 도메인 또는 친화성 성숙화와 같은 기법으로 수득한 나노바디인, H-1 내지 H-7 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-9: H-1 내지 H-8 중 임의 측면에 따른 나노바디로서,
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 1 내지 22 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며;
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택되는 것인, 나노바디.
측면 H-10: H-1 내지 H-9 중 임의 측면에 따른 나노바디로서,
i) 아미노산 동일성 수준 결정시 CDR 서열들을 구성하는 아미노산 잔기들을 배제하는 경우, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지며;
ii) 바람직하게는, 카바트 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치의 아미노산 잔기들 중 하나 이상이 B-2에 언급된 홀마크 잔기들로부터 선택되는 것인, 나노바디.
측면 H-11: H-1 내지 H-10 중 임의 측면에 따른 나노바디로서,
- CDR1이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및/또는
- CDR3가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 나노바디:
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
측면 H-12: H-1 내지 H-11 중 임의 측면에 따른 나노바디로서,
- CDR1이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
a) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열;
b) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
c) 서열번호 197 내지 267의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
d) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열;
e) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
f) 서열번호 339 내지 409의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열;
및
- CDR3가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 나노바디:
g) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열;
h) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가진, 아미노산 서열;
i) 서열번호 481 내지 551의 아미노산 서열들 중 하나 이상과 3, 2 또는 1개의 아미노산 차이를 가진, 아미노산 서열.
측면 H-13: 상기 CDR 서열들이, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열의 CDR 서열에 대해, 70% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 80% 이상의 아미노산 동일성, 보다 바람직하게는 90% 이상의 아미노산 동일성, 예로 95%의 아미노산 동일성 또는 그 이상의 동일성, 또는 보다 본질적으로는 100%의 아미노산 동일성을 가지는, H-1 내지 H-12 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-14: 부분 인간화된 나노바디인, H-1 내지 H-13 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-15: 완전히 인간화된 나노바디인, H-1 내지 H-14 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-16: 서열번호 623 내지 693으로 이루어진 군으로부터, 또는, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해, (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더 바람직하게는 95% 이상, 예로, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는, H-1 내지 H-15 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-17: 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해, (본원에 정의된 바와 같이) 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더 바람직하게는 95% 이상, 예로, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 인간화된 나노바디인, H-1 내지 H-16 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-18: 서열번호 623 내지 693으로 이루어진 군으로부터 선택되는, H-1 내지 H-17 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-19: 서열번호 623 내지 693 중 임의의 하나 이상의 아미노산 서열이 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 결합하는 것을 교차-차단하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 나노바디.
측면 H-20: 서열번호 623 내지 693 중 임의의 하나 이상의 아미노산 서열에 의해, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과의 결합으로부터 차단되는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는, 나노바디.
측면 H-21: 상기 나노바디의 교차-차단력 또는 교차-차단되는 능력은 Biacore 분석으로 검출되는 것인, H-19 또는 H-20 중 임의 측면에 따른 나노바디.
측면 H-22: 상기 나노바디의 교차-차단력 또는 교차-차단되는 능력은 ELISA 분석으로 검출되는 것인, H-19 내지 H-21 중 임의 측면에 따른 나노바디.
폴리펩타이드.
측면 K-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 아미노산 서열, 및/또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 나노바디를 포함하거나, 이로 필수적으로 구성되며, 선택적으로, 하나 이상의 펩타이드 링커 및/또는 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 더 포함하는, 폴리펩타이드.
측면 K-2: 상기 하나 이상의 결합 유닛이 면역글로불린 서열, 특히 ISV인, K-1 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-3: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, K-1 또는 K-1 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-4: 상기 하나 이상의 본 발명의 아미노산 서열이 면역글로불린 서열인, K-1 내지 K-3 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-5: 상기 하나 이상의 본 발명의 아미노산 서열이 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, K-1 내지 K-4 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-6: H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 나노바디를 포함하거나 이로 필수적으로 구성되며, 상기 하나 이상의 다른 결합 유닛이 나노바디인, K-1 내지 K-5 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-7: 상기 하나 이상의 결합 유닛이 다가 구조체(multivalent construct)인, K-1 내지 K-6 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-8: 상기 하나 이상의 결합 유닛이 다중 파라토프성 구조체(multiparatopic construct)인, K-1 내지 K-8 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-9: 상기 하나 이상의 결합 유닛이 다중 특이성 구조체 (multispecific construct)인, K-1 내지 K-8 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-10: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각에 비해, 반감기가 증가된, K-1 내지 K-9 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-11: 상기 하나 이상의 다른 결합 유닛이, A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각에 비해, 반감기가 증가된 폴리펩타이드를 제공하는 것인, K-10 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-12: 상기 반감기가 증가된 폴리펩타이드를 제공하는 하나 이상의 다른 결합 유닛이 혈청 단백질 또는 이의 단편, 혈청 단백질에 결합할 수 있는 결합 유닛, Fc 영역, 및 혈청 단백질에 결합할 수 있는 소형 단백질 또는 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, K-10 또는K-11 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-13: 상기 반감기가 증가된 폴리펩타이드를 제공하는 하나 이상의 다른 결합 유닛이 인간 혈청 알부민 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, K-1 내지 K-12 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-14: 상기 반감기가 증가된 폴리펩타이드를 제공하는 하나 이상의 다른 결합 유닛이 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민) 또는 혈청 면역글로불린 (예, IgG)에 결합할 수 있는 결합 유닛들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, K-1 내지 K-13 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-15: 상기 반감기가 증가된 폴리펩타이드를 제공하는 하나 이상의 다른 결합 유닛이, 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민) 또는 혈청 면역글로불린 (예, IgG)에 결합할 수 있는, 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, K-1 내지 K-14 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-16: 상기 반감기가 증가된 폴리펩타이드를 제공하는 하나 이상의 다른 결합 유닛이 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민) 또는 혈청 면역글로불린 (예, IgG)에 결합할 수 있는 나노바디인, K-1 내지 K-15 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-17: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각의 반감기에 비해, 적어도 1.5배, 바람직하게는 적어도 2배, 예컨대 적어도 5배, 예컨대, 적어도 10배 또는 20배 이상 긴 혈청 반감기를 가지는, K-1 내지 K-16 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-18: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각에 비해, 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 더 바람직하게는 6시간 이상, 예컨대 12시간 이상, 또는 심지어, 24, 48 또는 72시간 이상으로 증가된 혈청 반감기를 가지는, K-1 내지 K-17 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
측면 K-19: 인간에서, 적어도 약 12시간, 바람직하게는 적어도 24시간, 더 바람직하게는 적어도 48시간, 보다 더 바람직하게는 적어도 72시간 또는 그 이상; 예컨대, 적어도 5일 (예, 약 5 내지 10일), 바람직하게는 적어도 9일 (예, 약 9 내지 14일), 더 바람직하게는 적어도 약 10일 (예, 약 10 내지 15일), 또는 적어도 약 11일 (예, 약 11 내지 16일), 더 바람직하게는 적어도 약 12일 (예, 약 12 내지 18일 또는 그 이상), 또는 14일 이상 (예, 약 14 내지 19일)의 혈청 반감기를 가지는, K-1 내지 K-18 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드.
화합물 또는 구조체
측면 L-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 아미노산 서열 및/또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 나노바디를 포함하거나 또는 이로 필수적으로 구성되며, 선택적으로, 하나 이상의 링커를 통해 선택적으로 연결된 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 추가로 포함하는, 화합물 또는 구조체.
측면 L-2: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 아미노산 서열인, L-1 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-3: 상기 하나 이상의 링커가, 존재한다면, 하나 이상의 아미노산 서열인, L-1 또는 L-2 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-4: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 면역글로불린 서열, 특히 ISV인, L-1 내지 L-3 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-5: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-1 내지 L-4 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-6: 상기 하나 이상의 본 발명의 아미노산 서열이 면역글로불린 서열인, L-1 내지 L-5 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-7: 상기 하나 이상의 본 발명의 아미노산 서열이 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-1 내지 L-6 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-8: H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 나노바디를 포함하거나 이로 필수적으로 구성되며, 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 나노바디인, 화합물 또는 구조체.
측면 L-9: 다가 구조체인 L-1 내지 L-8 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-10: 다중 특이성 구조체인 L-1 내지 L-9 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-11: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각에 비해, 반감기가 증가된, L-1 내지 L-10 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-12: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이, A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각과 비교하여, 반감기가 증가된 화합물 또는 구조체를 제공하는 것인, L-1 내지 L-11 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-13: 반감기가 증가된 화합물 또는 구조체를 제공하는 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 혈청 단백질 또는 이의 단편, 혈청 단백질에 결합할 수 있는 결합 유닛, Fc 영역, 및 혈청 단백질에 결합할 수 있는 소형 단백질 또는 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-12 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-14: 반감기가 증가된 화합물 또는 구조체를 제공하는 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 인간 혈청 알부민 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-12 또는 L-13 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-15: 반감기가 증가된 화합물 또는 구조체를 제공하는 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민) 또는 혈청 면역글로불린 (예, IgG)에 결합할 수 있는 결합 유닛들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-12 내지 L-14 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-16: 반감기 증가를 제공하는 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기 적합한 아미노산 서열 또는 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민) 또는 혈청 면역글로불린 (예, IgG)에 결합할 수 있는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-12 내지 L-14 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-17: 반감기가 증가된 화합물 또는 구조체를 제공하는 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 혈청 알부민 (예, 인간 혈청 알부민) 또는 혈청 면역글로불린 (예, IgG)에 결합할 수 있는 나노바디인, L-12 내지 L-14 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-18: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각의 반감기 보다 적어도 1.5배, 바람직하게는 적어도 2배, 예컨대 적어도 5배, 예컨대, 적어도 10배 또는 20배 이상 긴 혈청 반감기를 가지는, L-12 내지 L-17 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-19: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열 또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 각각에 비해 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 더 바람직하게는 6시간 이상, 예컨대 12시간 이상, 또는 심지어, 24, 48 또는 72시간 이상 증가한 혈청 반감기를 가지는 것인, L-12 내지 L-18 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-20: 인간에서 적어도 약 12시간, 바람직하게는 적어도 24시간, 더 바람직하게는 적어도 48시간, 보다 더 바람직하게는 적어도 72시간 또는 그 이상; 예컨대, 적어도 5일 (예, 약 5 내지 10일), 바람직하게는 적어도 9일 (예, 약 9 내지 14일), 더 바람직하게는 적어도 약 10일 (예, 약 10 내지 15일), 적어도 약 11일 (예, 약 11 내지 16일), 더 바람직하게는 적어도 약 12일 (예, 약 12 내지 18일 또는 그 이상), 또는 14일 이상 (예, 약 14 내지 19일)의 혈청 반감기를 가지는 것인, L-12 내지 L-19 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 L-21: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열 하나 및/또는 H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 하나를 포함하거나, 또는 이로 필수적으로 구성된, 1가 구조체.
측면 L-22: 본 발명의 상기 아미노산 서열이 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, L-21 측면에 따른 1가 구조체.
측면 L-23: H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디 하나를 포함하거나 또는 이로 필수적으로 구성된 1가 구조체.
핵산
측면 M-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, 이를 코딩하는 핵산 또는 뉴클레오티드 서열의 발현에 의해 수득될 수 있는 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 임의 측면에 따른 1가 구조체를 코딩하는, 핵산 또는 뉴클레오티드 서열.
측면 M-2: 유전자 구조체 형태인, M-1 측면에 따른 핵산 또는 뉴클레오티드 서열.
숙주 세포
측면 N-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, 이를 코딩하는 핵산 또는 뉴클레오티드 서열의 발현에 의해 수득할 수 있는 L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체를 발현하거나 또는 적정 조건에서 발현할 수 있거나; 및/또는 M-1 측면에 따른 핵산 또는 뉴클레오티드 서열, 또는 M-2 측면에 따른 유전자 구조체를 포함하는, 숙주 또는 숙주 세포.
조성물
측면 O-1: A-1 내지 A-5454, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체, 또는 M-1 또는 M-2 측면에 따른 핵산 또는 뉴클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 조성물.
측면 O-2: 약학 조성물인 O-1 측면에 따른 조성물.
측면 O-3: 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제 및/또는 보강제를 추가로 포함하며, 선택적으로, 하나 이상의 추가적인 약제학적 활성 폴리펩타이드 및/또는 화합물을 포함하는, 약학 조성물인, O-2 측면에 따른 조성물.
본 발명의 제제 및 조성물의 제조
측면 P-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, 이를 코딩하는 핵산 또는 뉴클레오티드 서열의 발현에 의해 수득할 수 있는 L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체의 제조 방법으로서,
상기 방법은, 적어도,
a) 적합한 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서, 또는 다른 적합한 발현 시스템에서, M-1 측면에 따른 핵산 또는 뉴클레오티드 서열, M-2 측면에 따른 유전자 구조체를 발현시키는 단계; 및 선택적으로
b) 수득되는, A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체를 분리 및/또는 정제하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
측면 P-2: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, 이를 코딩하는 핵산 또는 뉴클레오티드 서열의 발현에 의해 수득할 수 있는 L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체의 제조 방법으로서,
상기 방법은, 적어도,
a) 측면에 따른 숙주 또는 숙주 세포를, 상기 숙주 또는 숙주 세포가 A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체 중 적어도 하나를 발현 및/또는 생산하게 하는 조건 하에, 배양 및/또는 유지하는 단계; 및 선택적으로,
b) 수득되는, A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체를 분리 및/또는 정제하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
LEAD를 이용한 스크리닝 방법
측면 Q-1: 적어도 하기 단계를 포함하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합을 겨냥하는 아미노산 서열의 스크리닝 방법:
a) 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열 세트, 콜렉션 또는 라이브러리를 제공하는 단계;
b) IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 결합할 수 있거나 및/또는 이에 대한 친화성을 가지며, 본 발명의 나노바디, 예컨대 서열번호 623 내지 693 (표-1)에 의해 교차-차단되거나 교차-차단성인, 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을, 상기 핵산 서열 세트, 콜렉션 또는 라이브러리에서 스크리닝하는 단계; 및
c) 상기 핵산 서열을 분리한 다음, 상기 아미노산 서열을 발현시키는 단계.
본 발명의 결합 물질의 이용
측면 R-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체; 또는 O-2 또는 O-3 측면에 따른 조성물 중 적어도 하나를 약제학적 활성인 함량으로, 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 본 발명의 한가지 이상의 면역 관련 질환 및 장애의 예방 및/또는 치료 방법.
측면 R-2: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체; 또는 O-2 또는 O-3 측면에 따른 조성물 중 하나 이상을 약제학적으로 활성인 함량으로, 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합과 관련있거나, 이의 생물학적 또는 약리학적 활성과 관련있거나, 및/또는 IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합이 참여하는 생물학적 경로나 신호 전달과 관련있는, 한가지 이상의 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료 방법.
측면 R-3: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체; 또는 O-2 또는 O-3 측면에 따른 조성물 중 하나 이상을, 약리학적으로 활성인 함량으로, 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는,
A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체; 또는 O-2 또는 O-3 측면에 따른 조성물 중 하나 이상을, 이를 필요로 하는 개체에게 투여함으로써 예방 및/또는 치료할 수 있는 한가지 이상의 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료 방법.
측면 R-4: 서열 A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체; 또는 O-2 또는 O-3 측면에 따른 조성물 중 하나 이상을 약리학적으로 활성인 함량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역치료법
측면 R-5: 본 발명의 한가지 이상의 면역 관련 질환 및 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한; 및/또는 R-1 내지 R-3 측면에 따른 한가지 이상의 방법에 사용하기 위한, 약학 조성물에 제조에 있어서의, A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체의 용도.
측면 R-6: 본 발명의 한가지 이상의 면역 관련 질환 및 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한, A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, L-1 내지 L-21 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, L-22 또는 L-23 중 임의 측면에 따른 1가 구조체; 또는 O-2 또는 O-3 측면에 따른 조성물.
단편 측면
측면 S-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디의, 파트 또는 단편.
측면 S-2: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, S-1 측면에 따른 파트 또는 단편.
측면 S-3: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, S-1 또는 S-2 중 임의 측면에 따른 파트 또는 단편.
측면 S-4: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, S-1 내지 S-3 중 임의 측면에 따른 파트 또는 단편.
측면 S-5: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, S-1 내지 S-4 중 임의 측면에 따른 파트 또는 단편.
측면 S-6: S-1 내지 S-4 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 파트 또는 단편을 포함하거나 또는 이로 필수적으로 구성되며, 선택적으로, 하나 이상의 링커를 통해 선택적으로 연결된, 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 추가로 포함하는, 화합물 또는 구조체.
측면 S-7: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 아미노산 서열인, S-6 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 S-8: 상기 하나 이상의 링커가 존재한다면 하나 이상의 아미노산 서열인, S-6 또는 S-7 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 S-9: S-1 내지 S-7 중 임의 측면에 따른 파트 또는 단편 또는 S-8 측면에 따른 화합물 또는 구조체를 코딩하는, 핵산 또는 뉴클레오티드 서열.
측면 S-10: S-1 내지 S-7 중 임의 측면에 따른 파트 또는 단편, S-6 내지 S-8 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 S-9 측면에 따른 핵산 또는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 조성물.
유도체 측면
측면 T-1: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디의, 유도체.
측면 T-2: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-1 측면에 따른 유도체.
측면 T-3: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 몰/L 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/L 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-1 또는 T-2 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-4: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-1 내지 T-3 측면에 따른 유도체.
측면 T-5: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-1 내지 T-4 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-6: K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드 또는 L-1 내지 L-23 중 임의 측면에 따른 화합물 구조체의, 유도체.
측면 T-7: IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-6 측면에 따른 유도체.
측면 T-8: 해리 상수 (KD) 10-5 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 mole/L 또는 그 미만, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 mole/L로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-6 또는 T-7 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-9: 조합 속도 (kon-속도) 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 더 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 107 M-1s-1, 예로, 105 M-1s-1 내지 107 M-1s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-6 내지 T-8 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-10: 해리 속도 (koff 속도) 1 s-1 내지 10-6 s-1 바람직하게는 10-2 s-1 내지 10-6 s-1, 더 바람직하게는 10-3 s-1 내지 10-6 s-1, 예로, 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로, IL-17A, IL-17F, IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있는 것인, T-6 내지 T-9 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-11: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, H-1 내지 H-22 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드 또는 L-1 내지 L-23 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체의 반감기에 비해, 적어도 1.5배, 바람직하게는 적어도 2배, 예컨대 적어도 5배, 예컨대, 적어도 10배 또는 20배 이상 긴 혈청 반감기를 가지는 것인, T-1 내지 T-10 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-12: A-1 내지 A-54, B-1 내지 B-8, C-1 내지 C-5, D-1 내지 D-7, E-1 내지 E-14, F-1 내지 F-25 또는 G-1 중 임의 측면에 따른 대응되는 아미노산 서열, H-1 내지 H-23 중 임의 측면에 따른 나노바디, K-1 내지 K-19 중 임의 측면에 따른 폴리펩타이드, 또는 L-1 내지 L-23 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체 각각과 비교하여, 1시간 이상, 바람직하게는 2시간 이상, 더 바람직하게는 6시간 이상, 예컨대 12시간 이상, 또는 심지어, 24, 48 또는 72시간 이상 증가된 혈청 반감기를 가지는 것인, T-1 내지 T-11 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-13: 인간에서 적어도 약 12시간, 바람직하게는 적어도 24시간, 더 바람직하게는 적어도 48시간, 보다 더 바람직하게는 적어도 72시간 또는 그 이상; 예컨대, 적어도 5일 (예, 약 5 내지 10일), 바람직하게는 적어도 9일 (예, 약 9 내지 14일), 더 바람직하게는 적어도 약 10일 (예, 약 10 내지 15일), 적어도 약 11일 (예, 약 11 내지 16일), 더 바람직하게는 적어도 약 12일 (예, 약 12 내지 18일 또는 그 이상), 또는 14일 이상 (예, 약 14 내지 19일)의 혈청 반감기를 가지는 것인, T-1 내지 T-12 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-14: 페길화된 유도체인 T-1 내지 T-13 중 임의 측면에 따른 유도체.
측면 T-15: T-1 내지 T-14 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 유도체를 포함하거나 이로 필수적으로 구성되며, 선택적으로 하나 이상의 링커를 통해 선택적으로 연결된 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛을 추가로 포함하는, 화합물 또는 구조체.
측면 T-16: 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 유닛이 아미노산 서열인, T-15 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 T-17: 상기 하나 이상의 링커가 존재한다면 하나 이상의 아미노산 서열인, T-16 측면에 따른 화합물 또는 구조체.
측면 T-18: T-16 또는 T-17 측면에 따른 화합물 또는 구조체를 코딩하는 핵산.
측면 T-19: T-1 내지 T-14 중 임의 측면에 따른 하나 이상의 유도체, T-15 내지 T-17 중 임의 측면에 따른 화합물 또는 구조체, 또는 T-18 측면에 따른 핵산 또는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 조성물.
본 발명은 아래 비제한적인 실시예들과 비제한적인 도면을 들어 추가로 예시될 것이다. 실시예에 언급된 본 발명의 아미노산 서열과 본 발명의 폴리펩타이드의 서열들은 서열목록과 도 5-8에 제시된다.
실시예들
실시예 1: IL-17A 및 IL-17F 면역원의 생산 및 정제
Hek293 세포를 인간의 분비 형태의 IL-17A (GenBank Acc. number U32659, 부록의 코딩 서열)와 6-His C-말단 연장을 코딩하는 플라스미드 DNA로 형질전환하여, 인간 IL-17A를 발현시켰다. 간략하게는, 4 ml/L 인슐린-트랜스페린-셀레늄-X 첨가제 (Invitrogen) 및 1% 소 태아 혈청 (Invitrogen)이 첨가된 DMEM:F12 배지 (Invitrogen) 중의 세포 현탁물을 플라스미드 DNA와 폴리-에틸렌이민 혼합물 (PolySciences)과 함께 배양하였다. 90분 후, 형질전환된 세포를 프리스타일 배지 (Invitrogen)에 1:1로 희석하여, 5% CO2 인큐베이터에 160 rpm 교반하에 37℃로 오르비탈 교반기에 장착하였다. 상층액을 6일 후 회수하고, 0.22 ㎛ 멤브레인 카트리지 (Millipore)를 통해 멸균 여과하였다. 재조합 단백질을 Ni 이온으로 하전된 포로스 20 MC 금속 킬레이트 친화성 크로마토그래피 컬럼 (Applied Biosystems)을 수행한 다음, GE 헬스케어 사의 하이로드 슈퍼덱스 75 분취용 16/60 컬럼에서 PBS 중에서 크기 배제 크로마토그래피하여, 정제하였다.
인간 IL-17F (GenBank Acc. number AF384857, 부록의 코딩 서열)를 6-His C-말단 테깅된 단백질로서 발현시키고, 인간 IL-17A에서와 동일한 조건으로 정제하였다.
실시예 2: 면역화
중쇄 항체 의존적인 채액성 면역 반응을 유도하기 위해, 라마 3마리 (346, 347 및 374)를 재조합 인간 IL-17A로 면역화하였다. 0일째에, 완전 프레운드 보강제에 에멀젼화한 항원 100 ㎍을 목에 근육내 주사로 투여하였다. 불완전 프레운드 보강제에 에멀젼화한 항원 50, 25 및 25 ㎍을 각각 2주마다 3번 추가로 투여하였다. 말초 혈액 림프구 (PBL)와 림프절 (LN) 생샘검을 마지막 부스팅 후 4일 및 8일째에 수집하였다.
마찬가지로, 라마 3마리 (292, 293 및 399)를 재조합 인간 IL-17F로 면역화하고, 라마 2마리 (190b 및 344)를 R&D Systems (Cat No. 5194-IL/CF) 사에서 구입한 E. coli에서 생산된 재조합 인간 IL-17A/F로 면역화하였다.
체액성 면역 반응은, 면역화 개시 전에 (0일) 수집한 샘플의 항원 특이적인 혈청 역가와 3번의 항원 투여 후 (35일) 전형적으로 수집한 혈청 샘플의 항원 특이적인 혈청 역가를 비교함으로써, 면역화 과정 중에 모니터링하였다. 간략하게는, 96웰 Maxisorp 플레이트 (Nunc, Wiesbaden, Germany)에 인간 IL-17A, IL-17F 또는 IL-17A/F를 코팅하였다. 블록킹하고, 희석한 혈청 샘플을 첨가한 다음, HRP (호르세라디쉬 퍼옥시다제)가 접합된 염소 항-라마 면역글로불린 (Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, Texas USA)과, 후속적으로, 기질 TMB (3,3',5,5'-테트라멘틸벤지딘) (Pierce, Rockford, IL, USA)의 존재 하에서의 효소적 반응을 이용함으로써, 항-IL-17 나노바디의 존재를 확인하였다.
실시예 3: 라이브러리 구축
말초 혈액 단핵구 세포를 피콜-하이큐를 제조사의 지침서에 따라 사용하여 혈액 샘플로부터 준비하였다. 이들 세포와 림프절로부터 추출한 총 RNA를 RT-PCR의 출발 물질로서 사용하여, 유전자 단편을 코딩하는 나노바디를 증폭시켰다. 이들 단편을 파지미드 벡터 pAX50로 클로닝하였다. 표준 프로토콜에 따라 파지를 준비하고 (Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press; 1st edition (October 28, 1996) Brian K. Kay, Jill Winter, John McCafferty), 향후 사용할 때까지 4℃에서 필터 멸균하여 보관하였다. 종합적으로, 8종의 라이브러리를 구축하였으며 (346, 347, 374, 292, 293, 399, 190b 및 344), 라이브러리 크기는 4.5 x 107 - 5 x 108이며, 삽입율은 95 내지 100%이다.
실시예 4: 항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F 나노바디 검색에서의 선별
인간 및 시노몰구스 원숭이 IL-17A 및/또는 IL-17F 및/또는 IL-17A/F를 인지하는 나노바디를 동정하기 위해, 파지 라이브러리를 가용성의 바이오킨화된 IL-17과 함께 인큐베이션하였다. 시노몰구스 원숭이 IL-17A 및 IL-17F는 Hek293 세포에서 생산하여, 실시예 1에서와 같이 정제하였다. 이들 단백질 2종은 부록에 언급된 코딩 서열을 가지고 있으며 6-His를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 인-프레임으로 3' 말단에 포함하는 플라스미드에서 발현시켰다.
시노몰구스 원숭이 IL-17A, 시노몰구스 원숭인 IL-17F, 인간 IL-17A, 인간 IL-17F 및 인간 IL-17A/F를 Sulfo-NHS-LC-Biotin (Pierce)을 이용하여 바이오틴화하였다. 바이오틴화된 IL-17과 파지의 컴플렉스를 스트렙타비딘으로 코팅된 자기 비드 상에서 용액으로부터 포획하였다. PBS/ 0.05% Tween20으로 잘 세척한 후, 트립신 (1 mg/ml)을 첨가하여 결합된 파지를 희석하였다. 파지 라이브러리 292, 293 및 399를 가용성의 바이오틴화된 인간 및 시노몰구스 IL-17A (100, 10 및 1 nM)와 인큐베이션하고, 파지 라이브러리 346, 347 및 374를 가용성의 바이오틴화된 인간 및 시노몰구스 IL-17F (100, 10 및 1 nM)와 인큐베이션하고, 파지 라이브러리 190b 및 344를 가용성의 바이오틴화된 인간 IL-17A/F, 시노몰구스 IL-17A 및 시노몰구스 IL-17F (100 및 1 nM)와 인큐베이션하였다. 이들 제1 라운드 선별 결과를 농화 인자 (대조군 대비 용리물에 존재하는 파지의 수)를 분석하였으며, 이들 제1 라운드에서 수득한 개개 클론들을 취하였다.
고친화성으로 결합된 인간 IL-17F 나노바디를 동정하기 위해, 파지 라이브러리 292, 293 및 399를, 가용성의 바이오틴화된 hIL-17A/F (1000, 100, 10, 1 및 0.1 pM)를 저농도로 사용하여, 함께 인큐베이션하였다. 또한, 이들 결과로부터 각 클론을 취하였다. 인간 IL-17A 및 IL-17F 및 IL-17A/F를 인지하는 나노바디를 특이적으로 동정하기 위해, 2가지 전략을 수행하였다. 제1 전략으로, 인간 및 시노몰구스 IL-17A (100, 10 및 1 nM)에서 선별한 결과인 파지 라이브러리 346, 347 및 374를 바이오틴화된 hIL-17F (10 - 1 nM)와 인큐베이션하고, 인간 및 시노몰구스 IL-17F (100, 10 및 1 nM)에서 선별한 결과인 파지 라이브러리 292, 293 및 399를 바이오틴화된 hIL-17A (10 - 1 nM)와 인큐베이션하였다. 제2 전략으로, 파지 라이브러리 346, 347 및 374를 바이오틴화된 hIL-17F (10 - 1 nM) 및 바이오틴화된 hIL-17A (10 - 1 nM) 상에서, 동일 조건을 이용하여, 2번의 연속적인 선별 라운드로, 선별하였다. 이들 2번의 선별을 통해, 개개 클론들을 취하였다.
개개 클론들을 모두 96웰의 딥 플레이트 (체적 1 mL)에서 배양하였다. IPTG를 최종 농도 1 mM로 첨가하여, 나노바디 발현을 유도하였다. 세포 펠렛을 냉동시키고, 이를 100 ㎕ PBS에 용해시켜, 주변세포질 추출물을 준비하였다. 세포 파편들을 원심분리로 제거하였다. 대조군으로서, 선별한 주변세포질 추출물을 ELISA에서 hIL-17A, hIL-17F 또는 hIL-17A/F에 대한 결합성을 스크리닝하였다. 간략하게는, 뉴트라비딘 (1 ㎍/ml)을 폴리소르브 마이크로타이터 플레이트 (Nunc)에 고정하였다. 자유 결합부(free binding site)를 PBS 중의 4% Marvel 용액으로 차단하였다. 바이오틴화된 hIL-17 (10 nM)을, 0.1 % Marvel/ PBS/ 0.05% Tween20 중에서, 여러가지 클론의 나노바디가 첨가된, 1/10 희석된 주변세포질 추출물과 함께 1시간 인큐베이션한 다음, 고정시킨 뉴트라비딘을 통해 이를 포착하였다. 인큐베이션 및 세척한 후, 나노바디 결합을 항-c-Myc와, 이후 HRP-접합된 항-마우스 항체 및 TMB 기질을 이용하여 검출하였다.
실시예 5: 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 이용한 알파스크린 분석을 통한 주변세포질 추출물에서의 나노바디 블록킹 스크리닝
나노바디의 차단력을 측정하기 위해, 주변세포질 추출물을 알파스크린 기법 (PerkinElmer, Waltham, MA USA)을 이용한 단백질을 이용한 경쟁 분석으로 스크리닝하였다. IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F 리간드와 IL-17RA 또는 IL-17RC의 여러가지 조합에 대해 알파스크린 분석을 확립하였다.
Hek293 세포에서 생산된 hIL-17A와 hIL-17F, 및 E. coli에서 생산된 hIL-17A/F를 Sulfo-NHS-LC-Biotin (Pierce)을 이용하여 바이오틴화하였다. 인간 IL-17RA-Fc (R&D Systems) 및 hIL-17RC-Fc 키메라 (실시예 1에 기술된 바와 같이, Hek293 세포에서 생산됨)를 제조사의 지침에 따라 준비한 항-인간 Fc 나노바디로 코팅된 어셉터 비드 (PerkinElmer) 상에 포착하였다. 항-IL-17 나노바디의 차단력을 평가하기 위해, 주변세포질 추출물의 희석물을 바이오틴화된 hIL-17과 함께 예비 인큐베이션하였다. 이 혼합물에, IL-17R-Fc, 어셉털 비드 및 스트렙타비딘-커플링된 도너 비드를 첨가하고, 실온에서 1시간 추가로 인큐베이션하였다. EnVision Multilabel Plate Reader (PerkinElmer)에서 여기 파장 680 nm 및 방출 파장 520 nm를 이용하여, 형광을 측정하였다. 알파스크린에서 신호 감소는, 바이오틴화된 hIL-17이 IL-17 수용체에 결합하는 것이 주변세포질 추출물에 존재하는 나노바디에 의해 차단됨을, 의미한다.
이러한 스크리닝 공정을 수행한 후, 몇몇 클래스의 나노바디가 동정되었다: 1) 양쪽 수용체에 대한 IL-17A의 상호작용은 저해하지만, IL-17A/F의 상호작용은 저해하지 않는, 나노바디, 2) 양쪽 수용체에 대한 IL-17A와 IL-17A/F의 상호작용을 저해하는, 나노바디, 3) 양쪽 수용체에 대한 IL-17A의 상호작용을 저해하며, 일부는 또한 IL-17A/F를 부분적으로 차단하는, 나노바디, 및 4) 양쪽 수용체에 대한 IL-17A 및 IL-17F의 상호작용을 저해하는, 나노바디 (IL-17A 및 IL-17F 교차-반응성 나노바디로 지칭됨) (표 1).
표 1: 알파스크린 분석을 이용한 스크리닝 공정에서 동정된 나노바디 클래스들 (+ = 차단성; - = 비-차단성; blank = 실험 안 함)
나노바디 클래스 특성 알파스크린 분석
IL-17A-IL-17RA IL-17A-IL-17RC IL-17F-
IL-17RA 		IL-17F-
IL-17RC 		IL-17A/F-IL-17RA IL-17A/F-IL-17RC
클래스 1 항-IL-17A + + - -
클래스 2 항-IL-17A 및 IL-17A/F + + + +
클래스 3 항-IL-17F 타입 1 + + - -
항-IL-17F 타입 2 + + + -
항-IL-17F 타입 3 + + - +
클래스 4 교차-반응성:
항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F		 + + + +
실시예 6: IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 대한 주변세포질 추출물의 표면 플라스몬 공명 분석
Biacore T100 장치를 이용한 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해, 항-IL-17 나노바디를 포함하는 주변세포질 추출물의 오프-속도를 측정하였다. 인간 IL-17A, IL-17F 또는 IL-17A/F를, 활성화의 경우 EDC/NHS 및 탈활성화의 경우 HCl을 이용한, 아민 커플링을 통해 CM 센서 칩 표면에 공유결합시켰다. IL-17 중화 나노바디를 포함하는 주변세포질 추출물을 유속 45 ㎕/min으로 2분간 주입하여, 칩에 결합된 항원에 결합되게 하였다. 그런 후, 주변세포질 추출물 없이 결합 완충액만 동일 유속으로 칩 위로 흘려보내, 결합된 나노바디가 자연적으로 해리되게 하였다. 여러가지 주변세포질 추출물에 대해 수득한 센소르그람으로부터 koff-값 (kd)을 계산하였다. 이 Biacore 분석을 토대로, 최상의 오프-속도를 가진 IL-17 나노바디 세트를 선별하여 서열분석하였다. 서열 분석 결과, 항-IL-17 중화 나노바디 패밀리 63종이 확인되었다 (표 2). 도 5는 선별된 클래스 1 내지 클래스 4의 나노바디 서열을 도시한다.
표 2: 항-IL-17 나노바디 타입 당 나노바디 패밀리의 수
나노바디 클래스 설명 패밀리의 수
클래스 1 항-IL-17A 14
클래스 2 항-IL-17A 및 IL-17A/F 22
클래스 3 항-IL-17F 18
클래스 4 교차-반응성: 항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F 9
또한, 클래스 1, 클래스 2, 클래스 3 및 클래스 4의 나노바디를 포함하는 주변세포질 추출물에 대해, 고정된 시노몰구스 원숭이 IL-17A 및 IL-17F에 대한 오프-속도를 결정함으로써, 시노몰구스 원숭이 IL-17에 대한 교차-반응성도 스크리닝하였다. 클래스 1, 클래스 2 및 클래스 4 유래의 나노바디를 포함하는 모든 테스트한 추출물들도 시노몰구스 원숭이 IL-17A에 대한 결합성을 나타내었으며, 클래스 3 및 클래스 3의 나노바디는 시노몰구스 원숭이 IL-17F에 대해 결합성을 나타내었다.
실시예 7: 다양한 클래스의 항-IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F 나노바디들의 발현 및 정제
클래스 1 나노바디 5종, 클래스 2 나노바디 12종, 클래스 3 나노바디 10종 및 클래스 4의 교차-반응성 나노바디 9종을, 알파스크린 분석에서의 이들의 차단력을 토대로, 발현 및 정제를 위해 선별하였다. 서열들을 도 5에 나타낸다.
나노바디들을, 배양 부피 500 mL에서, c-myc, His6-테깅된 단백질로서 E. coli TG1 세포에서 발현시켰다. 1 mM IPTG를 첨가하여 발현을 유도하였으며, 37℃에서 3시간 계속하였다. 세포 배양물을 회전시킨 후, 주변세포질 추출물을 펠렛을 냉동-해동시키고 dPBS에 재현탁함으로써 준비하였다. 이들 추출물을 Histrap FF 크루드 컬럼 (GE Healthcare)을 이용한 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC)의 출발 물질로서 사용하였다. 250 mM 이미다졸로 컬럼으로부터 나노바디를 용리시킨 다음, dPBS로 탈염하였다. 후술된 세포성 분석을 위해, 50 mM 옥틸 β-D-글루코피라노시드 (OGP, Sigma)의 존재 하에 겔 여과를 통해 내독소를 제거하였다. 내독소 수준을 표준 LAL-분석으로 측정하였다.
실시예 8: 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 이용한 알파 스크린 분석에서의 정제한 나노바디의 차단력
실시예 7에 기술된 바와 같이, 4종의 다른 클래스에 속하는 정제한 나노바디 36종의 차단력을, 인간 리간드 IL-17A, IL-17F 및 IL-17-A/F와 인간 수용체 IL-17RA 및 IL-17RC 간의 모든 가능한 상호작용에 대한 알파스크린 단백질을 이용한 경쟁 분석으로 측정하였다. 250 nM에서 시작해 1 pM까지로 희석한 연속 희석물들을 실온에서 (RT)에서 15분간 바이오틴화된 hIL-17 리간드와 함께 인큐베이션하였다. 여러가지 분석 설정에 사용되는 리간드 농도를 표 3에 열거한다. 이 혼합물에, IL-17RA 또는 IL-17RC Fc-융합체, 어셉터 비드 및 스트렙타비딘 도너 비드를 첨가하여, 다시 RT에서 1시간 인큐베이션하였다. 특이적인 리간드-수용체 상호작용을 차단하는 나노바디에 대해서, 농도-의존적인 520 nm에서의 형광 강도 감소가 관찰되었으며, IC50 값을 각 차단성 나노바디에서 결정할 수 있었다 (표 4). IL-17A - IL-17RA 상호작용에 대해 선별한 항-IL-17 나노바디의 차단력을 설명해주는 예시적인 그래프를 도 1에 나타낸다. 항-IL-17A 및 IL-17A/F 특이적인 Fab 단편 Fab01을 양성 대조군으로 포함시켰다.
표 3: 나노바디의 IC50 값을 결정하기 위한 알파스크린 분석에 사용된 IL-17 리간드 및 IL-17 수용체의 농도에 대한 개괄
분석 설정
리간드 - 수용체 조합 		리간드 농도 (nM) 수용체 농도 (nM)
IL-17A - IL-17RA 0.26 0.26
IL-17A - IL-17RC 0.64 0.64
IL-17F - IL-17RA 1.60 0.64
IL-17F - IL-17RC 0.10 0.26
IL-17A/F - IL-17RA 0.64 1.60
IL-17A/F - IL-17RC 0.10 0.26
표 4: 여러가지 알파스크린 분석에서 측정된, 다양한 차단성 항-IL-17 나노바디들의 IC50 값. nb: 비-차단성; N/A: 적용 불가
나노바디 나노바디 클래스 IL-17A - IL-17RA (IC50, pM) IL-17A - IL-17RC (IC50, pM) IL-17F - IL-17RA (IC50, pM) IL-17F - IL-17RC (IC50, pM) IL-17A/F - IL-17RA (IC50, pM) IL-17A/F - IL-17RC (IC50, pM)
01D02 클래스 1 130 363 nb nb 71660 94650
01G03 클래스 1 325 1147 nb nb nb nb
02E03 클래스 1 256 778 nb nb nb >250000
03B08 클래스 1 80 384 nb nb nb nb
03E05 클래스 1 58 380 nb nb > 250000 nb
01D06 클래스 2 618 1521 nb nb 401 198
02A08 클래스 2 126 419 > 250000 > 250000 170 87
02A10 클래스 2 115 381 nb nb 199 248
03C07 클래스 2 84 371 nb nb 366 565
04A02 클래스 2 399 837 nb nb 1960 3173
04B09 클래스 2 67 252 nb nb 121 169
04B10 클래스 2 68 366 nb nb 95 52
04F09 클래스 2 99 468 nb nb 3978 3149
04G01 클래스 2 14 217 nb nb 67 39
09D10 클래스 2 211 1122 nb 69400 9020 8655
09G10 클래스 2 46 323 nb nb 101 120
11A06 클래스 2 81 461 nb >250000 140 39
06E11 클래스 3 nb nb 799 71 nb 952
07B09 클래스 3 nb nb 614 19 일부 89
07B11 클래스 3 nb nb 1104 15 일부 58
08A08 클래스 3 nb nb 3843 1297 nb 19660
08B07 클래스 3 nb nb 761 108 > 250000 nb
08H01 클래스 3 nb nb 323 33 partial 259
12A09 클래스 3 nb nb 1842 612 > 250000 33210
16A04 클래스 3 >77870 >131000 1093 52 90360 389
24B08 클래스 3 nb nb 491 42 138 일부
24G10 클래스 3 nb nb 476 23 일부 47
01A01 클래스 4 51 211 16180 13500 102 46
10A04 클래스 4 78140 >250000 746 220 37740 15640
11C08 클래스 4 2119 4798 2255 488 3252 1162
13B03 클래스 4 56 202 2114 848 79 31
13B05 클래스 4 118 249 719 603 464 944
13E02 클래스 4 67 187 395 214 71 117
13E05 클래스 4 159 1091 1100 286 862 315
17C01 클래스 4 66 169 296 168 264 801
18B05 클래스 4 173 408 36640 13260 231 87
Fab01 N/A 787 1115 nb nb 2736 5842
실시예 9: IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 이용한 세포성 분석에서의 정제한 나노바디의 차단 활성
또한, HT-1080 세포에 의한 농도-의존적인 hIL-17A, hIL-17F 또는 hIL-17A/F 유발성 IL-6 분비 저해를 조사하는, HT-1080 세포성 분석을 이용하여, 정제된 나노바디의 차단력을 분석하였다. 실험 프로토콜을 다음과 같다: 인간 HT-1080 섬유육종 세포 (ATCC reference CCL-121)를, 완전 배지로 지칭되는, 10% 소 태아 혈청 (FBS)과 1% 페니실린-스트렙토마이신 용액 (P-S)이 첨가된 둘베코의 최소 필수 배지 (DMEM)에서 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 세포 생산과 매주 계대 배양을 위해, 세포를 T75 배양 플라스크에 2 x 104 cells/cm2로 접종하였다.
시험관내 자극 분석을 위해, HT-1080 세포 3 x 104개를 100 ㎕ DMEM + 2.5% FBS 및 0.25% P-S 중에서, 평면 바닥의 96웰 플레이트에 넣어, 밤새 배양하였다. 자극 당일, 배지 80 ㎕를 교체하였다. 나노바디를 1:3로 희석한 연속 희석물 7종 또는 항-IL-17A mAb02 참조 화합물을 출발 농도 100 ㎍/mL로 PBS 중에서 사용하였으며, 각 나노바디 또는 mAb02 희석 용액 10 ㎕를 HT-1080 세포의 각 웰에 첨가하였으며, 나노바디는 2세트로, mAb02를 4세트로 사용하였다. 나노바디 또는 참조 화합물 mAb02의 최종 농도는 10 ㎍/mL, 0.0045 ㎍/mL이다. 항-IL-17F mAb 참조 화합물 mAb B-E52 (Diaclone, Besancon, France)의 1:3 연속 희석물 7종을 출발 농도 500 ㎍/mL에서 시작하여 PBS 중에서 제작하고, 각 mAb B-E52 희석한 용액 10 ㎕를 HT-1080 세포 웰 당 첨가하였다. 참조 화합물 mAb B-E52의 최종 농도는 100 ㎍/mL, 0.045 ㎍/mL이다. 자극원 단독 또는 비히클 단독을 위한 대조군 웰에는 10 ㎕ PBS를 4세트로 넣었다.
플레이트는, 특정 자극원을 첨가하기 전에, 30분간 37℃ 및 5%CO2에서 인큐베이션하였다. 인간 IL-17A로 자극하기 위해, PBS 중의 3 ㎍/mL 재조합 인간 IL-17A 용액 10 ㎕ (IL-17A 최종 농도: 0.3 ㎍/mL)를 각 해당 웰에 첨가하였다. 인간 IL-17F로 자극하기 위해, PBS 중의 45 ㎍/mL 재조합 인간 IL-17F 용액 10 ㎕ (IL-17F 최종 농도: 4.5 ㎍/mL)를 각 해당 웰에 첨가하였다. 인간 IL-17A/F로 자극하기 위해, PBS 중의 15 ㎍/mL 재조합 인간 IL-17A/F 용액 10 ㎕ (IL-17A/F 최종 농도: 1.5 ㎍/mL)를 각 해당 웰에 첨가하였다. 비히클 단독의 음성 대조군 웰에는 10 ㎕ PBS를 넣었다.
플레이트를 24시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 상층액을 회수하여, 96웰 플레이트로 옮긴 다음 -80℃에 보관하였다. 1:3 또는 1:4 희석 상층액 (PBS + 1% 소 혈청 알부민 중의 희석물)에서 인간 IL-6의 농도를 시판 IL-6 ELISA 분석 (Human Duoset IL-6 ELISA, R&D Systems, Abingdon, UK)을 제조사의 지침에 따라 사용하여 결정하였다. Fluostar OPTIMA 리더 (BMG Labtech, Offenburg, Germany)를 이용하여 450 nM에서 광학 밀도 (OD) 측정을 수행하였고, 각 샘플에서의 IL-6 농도를 내부 IL-6 표준물질의 OD 판독값을 이용하여 계산한 4-매개변수 로지스틱 곡선 피트에서 외삽법으로 구하였다.
데이타 분석에서, 각 나노바디에 대해 나노바디 화합물의 몰 질량은 15 kDa로 추정되었다. 참조 mAb의 몰 질량은 150 kDa으로 추정되었다. 각 실험에서 IC50 및 Emax는, XLFit 소프트웨어 (ID Business Solutions, Guilford, UK)와 식: y = A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))으로 제시된 바와 같이 4-매개변수 로그 피트를 이용하여, 쌍을 이룬 데이타 화합물 농도/IL-6 농도로부터 계산하였으며, 식에서 A는 최소값 y이고, B는 최고값 y이며, C는 Log IC50이고, D는 기울기 인자이다. 복수의 실험들에서 각 화합물에 대한 평균 IC50, Emax 및 각각의 STD를 XLFit로 계산하였다.
도 2 및 표 5에 나타낸 바와 같이, 클래스 1, 클래스 2 및 클래스 4의 나노바디들과 참조 화합물 mAb02는 농도-의존적인 방식으로 IL-17A에 의해 유도되는 IL-6 방출을 HT-1080 세포에서 저해하였다.
도 3 및 표 6에 나타낸 바와 같이, 클래스 3 및 클래스 4의 나노바디들 (17C01 및 18B05는 제외됨)과 참조 화합물 B-E52는 농도-의존적인 방식으로 IL-17F에 의해 유도되는 IL-6 방출을 HT-1080 세포에서 저해하였다.
도 4 및 표 7에 나타낸 바와 같이, 클래스 2, 클래스 3 (08A08 및 08B07은 제외됨) 및 클래스 4의 나노바디들과 참조 화합물 mAb02는 농도-의존적인 방식으로 IL-17A/F에 의해 유도되는 IL-6 방출을 HT-1080 세포에서 저해하였다.
표 5: 항-IL-17 1가 나노바디와 참조 화합물에 의한 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서의 IL-17A-유도성 IL-6 생산 저해. 결과는 N 실험들의 평균 ± SD로 나타내었다. NI: 저해 관찰 안 됨; N/A: 적용 불가
나노바디 나노바디 클래스 자극원 IL-17A
IC50 (nM) Emax (%) N
02E03 클래스 1 16.4 ± 9 99.3 ± 5 3
03E05 클래스 1 4.0 ± 3 100.0 ± 6 2
01D02 클래스 1 4.8 ± 3 101.0 ± 6 2
01G03 클래스 1 68.3 ± 33 85.7 ± 5 3
03B08 클래스 1 3.6 ± 3 98.5 ± 5 2
02A08 클래스 2 8.8 ± 7 102.7 ± 10 3
03C07 클래스 2 4.2 ± 4 101.0 ± 6 3
04B09 클래스 2 3.2 ± 3 105.7 ± 6 3
04G01 클래스 2 5.4 ± 7 112.7 ± 9 3
09G10 클래스 2 4.0 ± 3 99.0 ± 0 2
11A06 클래스 2 4.0 ± 3 98.5 ± 2 2
01D06 클래스 2 42.8 ± 38 98.3 ± 5 3
02A10 클래스 2 4.3 ± 4 103.7 ± 9 3
04A02 클래스 2 12.6 ± 10 102 ± 7 3
04B10 클래스 2 5.1 ± 4 99.7 ± 12 3
04F09 클래스 2 9.7 ± 10 111.3 ± 13 3
09D10 클래스 2 8.5 ± 5 93.5 ± 1 2
06E11 클래스 3 NI NI 2
07B09 클래스 3 NI NI 2
07B11 클래스 3 NI NI 2
08H01 클래스 3 NI NI 2
16A04 클래스 3 NI NI 2
24B08 클래스 3 NI NI 2
24G10 클래스 3 NI NI 2
08A08 클래스 3 NI NI 2
08B07 클래스 3 NI NI 2
12A09 클래스 3 NI NI 2
01A01 클래스 4 2.7 ± 2 104.0 ± 10 3
11C08 클래스 4 130.1 ± 64 73.0 ± 1 2
13B03 클래스 4 2.9 ± 1 101.0 ± 0 2
13B05 클래스 4 14.0 ± 3 104.0 ± 6 4
13E02 클래스 4 3.5 ± 2 102.5 ± 2 2
13E05 클래스 4 12.3 ± 1 101.0 ± 7 2
17C01 클래스 4 15.1± 5 104.8 ± 4 4
10A04 클래스 4 65.4 ± 17 31.5 ± 6 2
18B05 클래스 4 20.6 ± 21 103.7 ± 3 3
mAb02 N/A 3.9 ± 4 99.1 ± 5 20
mAb B-E52 N/A NI NI 2
표 6: 항-IL-17 1가 나노바디와 참조 화합물에 의한 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서의 IL-17F-유도성 IL-6 생산의 저해. 결과는 N 실험들의 평균 ± SD로 나타내었다. NI: 저해 관찰 안 됨; N/A: 적용 불가
나노바디 나노바디 클래스 자극원 IL-17F
IC50 (nM) Emax (%) N
02E03 클래스 1 NI NI 3
03E05 클래스 1 NI NI 2
01D02 클래스 1 NI NI 2
01G03 클래스 1 NI NI 3
03B08 클래스 1 NI NI 2
02A08 클래스 2 NI NI 2
03C07 클래스 2 NI NI 2
04B09 클래스 2 NI NI 2
04G01 클래스 2 NI NI 2
09G10 클래스 2 NI NI 2
11A06 클래스 2 NI NI 2
01D06 클래스 2 NI NI 2
02A10 클래스 2 NI NI 2
04A02 클래스 2 NI NI 2
04B10 클래스 2 NI NI 2
04F09 클래스 2 NI NI 2
09D10 클래스 2 NI NI 2
06E11 클래스 3 88.0 ± 20 70.5 ± 6 2
07B09 클래스 3 75.1 ± 15 71.8 ± 12 4
07B11 클래스 3 57.5 ± 23 67.0 ± 14 2
08H01 클래스 3 85.5 ± 16 71.5 ± 1 2
16A04 클래스 3 112.4 ± 22 100.0 ± 6 4
24B08 클래스 3 141.4 ± 43 84.3 ± 9 4
24G10 클래스 3 90.6 ± 17 78.8 ± 7 4
08A08 클래스 3 206.0 ± 105 62.0 ± 8 2
08B07 클래스 3 174.5 ± 23 77.0 ± 14 2
12A09 클래스 3 105.2 ± 28 91.0 ± 10 2
01A01 클래스 4 206.2 ± 87 47.2 ± 12 3
11C08 클래스 4 222.6 ± 86 84.5 ± 15 2
13B03 클래스 4 149.2 ± 38 85.5 ± 11 2
13B05 클래스 4 249.0 ± 137 43.0 ± 8 4
13E02 클래스 4 103.6 ± 15 86.5 ± 11 2
13E05 클래스 4 115.0 ± 9 123.5± 22 2
17C01 클래스 4 NI NI 4
10A04 클래스 4 111.9 ± 14 102.0 ± 10 2
18B05 클래스 4 NI NI 3
mAb02 N/A NI NI 2
mAb B-E52 N/A 62.4 ± 27 84.0 ± 11 20
표 7: 항-IL-17 1가 나노바디와 참조 화합물에 의한 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서의 IL-17A/F-유도성 IL-6 생산의 저해. 결과는 N 실험들의 평균 ± SD로 나타내었다. NI: 저해 관찰 안 됨; ND: 수행 안 함; N/A: 적용 불가
나노바디 나노바디 클래스 자극원 IL-17A/F
IC50 (nM) Emax (%) N
02E03 클래스 1 NI NI 3
03E05 클래스 1 NI NI 2
01D02 클래스 1 NI NI 2
01G03 클래스 1 NI NI 3
03B08 클래스 1 NI NI 2
02A08 클래스 2 26.2 ± 16 109.0 ± 1 2
03C07 클래스 2 27.8 ± 17 102.0 ± 3 2
04B09 클래스 2 22.7 ± 10 102.0 ± 17 2
04G01 클래스 2 34.7 ± 0.5 104.5 ± 2 2
09G10 클래스 2 22.2 ± 0.1 107.5 ± 25 2
11A06 클래스 2 28.1 ± 8 106.5 ± 9 2
01D06 클래스 2 51.1 ± 0.2 79.5 ± 23 2
02A10 클래스 2 29.2 ± 16 98.5 ± 9 2
04A02 클래스 2 70.4 ± 4 67.6 ± 23 2
04B10 클래스 2 59.2 ± 13 97.0 ± 23 2
04F09 클래스 2 45.9 ± 37 68.5 ± 6 2
09D10 클래스 2 124.4 ± 131 55.0 ± 7 2
06E11 클래스 3 7.2 ± 5 57.5 ± 4 4
07B09 클래스 3 12.4 ± 9 70.3 ± 6 4
07B11 클래스 3 15.1 ± 13 71.0 ± 1 2
08H01 클래스 3 15.9 ± 14 62.5 ± 4 2
16A04 클래스 3 48.2 ± 32 95.0 ± 10 4
24B08 클래스 3 18.1 ± 11 50.5 ± 18 4
24G10 클래스 3 28.9 ± 14 72.8 ± 14 4
08A08 클래스 3 NI NI 2
08B07 클래스 3 NI NI 2
12A09 클래스 3 100.5 ± 108 41.5 ± 4 2
01A01 클래스 4 27.8 ± 17 102.0 ± 3 2
11C08 클래스 4 91.2 ± 4 89.5 ± 13 2
13B03 클래스 4 26.8 ± 3 112.5 ± 13 2
13B05 클래스 4 35.5 ± 15 108.5 ± 7 4
13E02 클래스 4 21.7 ± 4 108.5 ± 11 2
13E05 클래스 4 26.0 ± 9 159.5 ± 35 2
17C01 클래스 4 41.8 ± 25 107.3 ± 12 2
10A04 클래스 4 122.1 ± 19 79.5 ± 18 2
18B05 클래스 4 37.1 ± 4 118.0 ± 1 3
mAb02 N/A 18.4 ± 11 91.3 ± 12 17
실시예 10: IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 대한 정제한 나노바디들에 대한 SPR 분석
알파스크린 분석과 세포성 분석에서 최상의 효능을 나타내는 항-IL-17 나노바디들의 오프-속도를 실시예 6에 기술된 바와 같이 Biacore T100 장치를 이용한 SPR로 측정하였다. 여러가지 나노바디에서 수득한 센소르그램으로부터 koff-값을 계산하여, 표 8에 나타낸다.
표 8: Biacore에서 측정한 항-IL-17 나노바디의 인간 IL-17에 대한 결합 오프-속도.
나노바디 클래스 나노바디 hIL-17A (s-1)의 koff hIL-17F (s-1)의 koff hIL-17A/F (s-1)의 koff
클래스 1 01D02 4,4E-04* NB* NB*
클래스 1 01G03 4,5E-04* NB* NB*
클래스 1 02E03 9,0E-04* NB* NB*
클래스 1 03B08 1,0E-04* NB* NB*
클래스 1 03E05 1,0E-04* NB* NB*
클래스 2 01D06 9,7E-04* NB* 1,3E-03*
클래스 2 02A08 4,2E-04 NB* 1,5E-04
클래스 2 02A10 2,2E-04 NB* 2,8E-04
클래스 2 03C07 2,0E-04 NB* 7,6E-04
클래스 2 04A02 1,3E-03* NB* 1,1E-02*
클래스 2 04B09 2,7E-04 NB* 3,5E-04
클래스 2 04B10 4,0E-04 NB* 5,0E-04
클래스 2 04F09 6,3E-04 NB* 8,1E-03
클래스 2 04G01 1,8E-04 NB* 2,3E-04
클래스 2 09D10 1,5E-04* NB* 1,7E-03*
클래스 2 09G10 1,2E-04 NB* 1,3E-04
클래스 2 11A06 1,6E-04 NB* 3,8E-05
나노바디 클래스 나노바디 hIL-17A (s-1)의 koff hIL-17F (s-1)의 koff hIL-17A/F (s-1)의 koff
클래스 3 06E11 NB* 3,10E-04 4,4E-03
클래스 3 07B09 NB* 1E-03 - 1E-04 1E-03 - 1E-04
클래스 3 07B11 NB* 1,50E-04 4,7E-04
클래스 3 08A08 NB* 4,8E-02 7,9E-03
클래스 3 08B07 NB* 1,9E-03 2,0E-01
클래스 3 08H01 NB* 8,8E-04 1,1E-03
클래스 3 12A09 NB* 1,0E-02 - 1,0E-03 1,7E-02
클래스 3 16A04 NB* 5,30E-04 3,0E-03
클래스 3 24B08 NB* <1,0E-05 <1E-04
클래스 3 24G10 NB* 1,6E-04 <1E-04
클래스 4 01A01 8,5E-05 2,6E-02 2,7E-04
클래스 4 10A04 <2E-04* 4,8E-03 1,5E-02
클래스 4 11C08 7,9E-03 1,3E-02 6,3E-03
클래스 4 13B03 6,3E-05 5,8E-03 3,6E-05
클래스 4 13B05 3,0E-04 6,3E-02 6,8E-04
클래스 4 13E02 1,3E-04 3,6E-03 7,1E-05
클래스 4 13E05 1,6E-03 1,3E-02 1,9E-03
클래스 4 17C01 2,9E-04 5,6E-02 7,5E-04
클래스 4 18B05 2,2E-04 1,4E-01 1,2E-04
NB = 결합 안 함 (* 표시된 오프-속도는 주변세포질 추출물에서 측정한 것이고, 나머지는 정제된 단백질에서 측정됨)
실시예 11: 항-IL-17 나노바디의 종 교차-반응성
다른 IL-17 종에 대한 선택한 패널의 항-IL-17 나노바디들의 결합성을 결합 ELISA를 이용하여 분석하였다. 96웰 Maxisorp 플레이트 (Nunc, Wiesbaden, Germany)를 다른 종으로부터 유래된 IL-17A 또는 IL-17F로 PBS 중의 1 ㎍/ml로 코팅하였다. PBS/ 1% 카세인으로 블록킹한 후, 항-IL-17 나노바디를 PBS/ 0,1 % 카세인/ 0,05% Tween20 중의 250 nM 농도로 첨가하였다. HRP (호르세라디쉬 퍼옥시다제)가 접합된 항-myc (Serotec, MCA 2200P)를 기질로서 esTMB를 이용한 검출에 사용하였다. 마모셋, 마우스 또는 기니아 피그 기원의 IL-17A와, 마모세, 마우스 및 랫 기원의 IL-17F를, Hek293 세포를 이용한 인간 IL-17A 및 F에 대하여 실시예 1에 기술된 바와 동일한 조건 하에 발현시켰다. E. coli에서 생산한 랫 IL-17A는 eBioscience (San Diego, CA, USA; Cat Nr 14-8170)에서 구입하였다. 클래스 2 및 클래스 4의 나노바디들 모두 마모셋 IL-17A와 교차-반응하였지만, 마우스, 랫 또는 기니아 피그 IL-17A와는 반응하지 않았다 (표 9). 클래스 3 및 클래스 4 나노바디 대부분은 비록 낮지만 마모셋 IL-17F와 교차반응하였다. 이들 나노바디들은 마우스 또는 랫의 IL-17F와는 교차-반응하지 않았다 (표 10).
표 9: 인간, 마모셋, 마우스, 랫 및 기니아 피그 기원의 IL-17A에 대한 항-IL-17 나노바디들의 결합성의 ELISA에서의 OD 값
나노바디 클래스 나노바디 인간 IL-17A 마모셋 IL-17A 마우스 IL-17A 랫 IL-17A 기니아 피그 IL-17A
클래스 2 02A08 1,945 1,953 -0,001 0,002 0,002
클래스 2 03C07 1,704 1,699 -0,004 0,003 0,004
클래스 2 04B09 1,817 1,842 0,000 0,001 0,006
클래스 2 04G01 1,897 1,932 -0,001 0,004 0,008
클래스 2 09G10 1,635 1,582 -0,001 0,003 0,006
클래스 2 11A06 1,691 1,707 0,004 0,008 0,007
클래스 3 06E11 0,073 -0,003 -0,001 0,006 0,006
클래스 3 07B09 0,005 0,005 -0,001 0,003 0,009
클래스 3 07B11 0,030 0,186 -0,003 0,005 0,007
클래스 3 08H01 0,022 0,431 -0,002 0,006 0,007
클래스 3 16A04 0,043 0,019 -0,002 0,003 0,008
클래스 3 24B08 0,103 0,129 -0,002 0,004 0,012
클래스 3 24G10 0,009 0,122 -0,001 0,004 0,008
클래스 4 01A01 1,830 1,839 -0,003 0,004 0,008
클래스 4 11C08 1,710 0,671 -0,005 0,002 0,002
클래스 4 13B03 1,948 1,936 -0,001 0,004 0,004
클래스 4 13B05 1,824 1,911 -0,006 0,003 0,001
클래스 4 13E02 1,787 1,846 -0,001 0,003 0,006
클래스 4 13E05 1,957 1,889 0,004 0,003 0,006
클래스 4 17C01 1,826 1,843 -0,001 0,000 0,007
표 10: 인간, 마모셋, 마우스, 랫 및 기니아 피그 기원의 IL-17F에 대한 항-IL-17 나노바디들의 결합성의 ELISA에서의 OD 값
나노바디 클래스 나노바디 인간 IL-17F 마모셋 IL-17F 마우스 IL-17F 랫 IL-17F
클래스 2 02A08 -0,014 -0,0005 -0,0005 0,0035
클래스 2 03C07 -0,016 -0,0015 0,0005 0,0015
클래스 2 04B09 -0,015 0,0025 -0,0025 0,0015
클래스 2 04G01 -0,016 0,0005 -0,0005 -0,0005
클래스 2 09G10 -0,018 0,0045 -0,0005 0,0025
클래스 2 11A06 0,673 0,0225 0,0455 0,0045
클래스 3 06E11 2,593 2,123 0,0215 0,0085
클래스 3 07B09 1,872 1,0855 -0,0015 0,0025
클래스 3 07B11 1,849 1,6395 -0,0005 -0,0105
클래스 3 08H01 1,767 0,5515 -0,0005 0,0045
클래스 3 16A04 1,736 1,6365 -0,0015 0,0015
클래스 3 24B08 1,815 1,7625 -0,0015 0,0035
클래스 3 24G10 1,96 1,6365 -0,0005 0,0025
클래스 4 01A01 0,612 0,2195 -0,0005 0,0005
클래스 4 11C08 1,655 1,4045 -0,0025 0,0005
클래스 4 13B03 1,656 1,3255 -0,0005 0,0085
클래스 4 13B05 0,712 0,445 0,0205 0,0095
클래스 4 13E02 1,099 0,248 0,0155 0,0255
클래스 4 13E05 1,771 0,3375 0,0005 0,0025
클래스 4 17C01 0,772 0,0525 -0,0005 0,0025
실시예 12: 항-IL-17 나노바디들의 특이성
선택한 패널의 항-IL-17 나노바디들, 02A08, 03C07, 04B9, 04G1, 09G10, 11A06 (클래스 2), 06E11, 07B09, 07B11, 08H01, 16A04, 24G10 (클래스 3), 및 01A01, 11C08, 13B03, 13B05, 13E02, 13E05, 17C01 (클래스 4)의 오프-타겟 결합성을, 인간 IL-17B (Peprotech Cat No. 200-28), IL-17C (R&D Systems, Cat No. 234-IL/CF), IL-17D (Peprotech 200-27) 또는 IL-17E (Peprotech Cat No. 200-24)에 대한 항-IL-17 나노바디들의 결합력을, Biacore T100 장치를 이용한 SPR로 측정함으로써, 분석하였다. 인간 IL-17B, IL-17C, IL-17D 또는 IL-17E를 모두 E. coli에서 발현시키고, 활성화시에는 EDC/NHS를, 탈활성화시에는 HCl을 이용한 아민 커플링을 통해 CM 센서 칩 표면에 공유 결합시켰다. 정제한 나노바디 또는 대조군 mAb (항-hIL-17B Mab1248, 항-hIL-17E Mab1258, 항-hIL-17C Mab1234, 항-hIL-17D Mab1504, R&D Systems)를 유속 45 ㎕/min으로 2분간 주입하여, 칩에 결합된 항원에 결합되게 하였다. 그런 후, 결합 완충액을 동일 유속으로 상기 칩으로 흘려, 결합된 나노바디나 항체가 자연적으로 해리되게 하였다. 모든 대조군 항체들은 이들 각 타겟에 결합하였지만, 테스트한 나노바디들은 인간 IL-17B, IL-17C, IL-17D 또는 IL-17E에 결합하지 않았다.
실시예 13 : 부위 특이적인 돌연변이 유발을 이용한 에피토프 맵핑
A. 돌연변이 IL17A와 IL17F의 설계
인간 IL-17A 및 F인 대칭적인 이량체에서, 대응되는 돌연변이 세트들은 단량체의 단쇄 상에서 규정하였다. 돌연변이 네트워크는 대칭적인 방식으로 이량체의 표면에 분포시켰다. 구체적인 돌연변이 리스트는 다음과 같다:
IL-17A의 경우: K38E, K38A, D42A, N45A, N45Q, R46A, H54A, K70A, K70Q, R72A, H73A, L74A, I77A, D80A, N82K, N82A, Y85A, H86A, N88A
IL-17F의 경우: S39E, S39A, N43A, R47A, T55A, T55H, Q71A, Q71K, R73A, N74A, L75A, I78A, Q81A, K83N, K83A, I86A, S87A, S87H, N89A
선택한 위치들 모두 중성 아미노산인 알라닌으로 변이시켰는데, 알라닌은 통상 단백질 구조에서 대부분 위치에서의 허용성이 우수한 편이다. 알라닌 이외의 다른 아미노산들도 급격한 변화를 도입하기 위해 특정 위치에 사용하였다. 앞서 언급된 바와 같이, 이들 모든 위치는 IL-17A 및 F의 표면 절반을 차지한다.
B. 스크리닝 방법의 원리
FLAG-테깅된 IL-17A 및 F의 단일 아미노산 돌연변이체들을 부위 특이적인 돌연변이 유발을 통해 수득하여, 이를 HEK-293 세포에 일시적으로 발현시킨 다음, 나노바디 결합성을 ELISA로 테스트하였다. 단일 IL-17 돌연변이체에 대한 각각의 나노바디의 결합을 비교하였고, 동일 나노바디가 야생형 사이토카인에 결합하는 결합성에 대해 정규화(normalisation)하였다. 다클로성의 특이 항-IL-17 항체를 양성 대조군으로 사용하여, 돌연변이 분자의 구조 완전성을 체크하였다.
C. 부위 특이적인 돌연변이 유발을 통한 단일 IL-17 돌연변이체의 구축
최초로 Stratagene에서 개시한 퀵 체인 돌연변이유발 PCR 프로코톨에 대한 수정 버전에 따라 돌연변이성 올리고뉴클레오티드를 이용하여, IL-17A 및 F 사이토카인에 단일 아미노산 돌연변이를 도입하였다. 오리지날 프로토콜과의 주된 차이는 2개가 아닌 하나의 프라이머만 사용하며, 센스 가닥의 서열으로도 충분하며, Stratagene사의 Pfu Turbo DNA 중합효소 대신 Roche 사의 Pwo DNA 중합효소 (Cat No. 03789403001)를 사용한다는 것이다. 이들 2가지 사이토카인들은 C-말단에 FLAG 테그를 가지고 있으며, 포유류 세포에서의 발현을 위해 이를 발현 벡터 pTT5 (Durocher Y et al., Nucleic Acids Res. 2002, 30, E9)에 클로닝하였다. 최종 구조체는 전장 IL-17A 또는 IL-17F 코딩 서열에 대한 DNA 서열 분석을 통해 검증하였다.
D. 포유류 세포에서의 단일 IL-17 돌연변이체들의 일시적 발현
재조합 Flag-테깅된 IL-17A 및 -F 돌연변이체들과, 참조 모체인 야생형 사이토카인의 소규모 생산은, 10% FCS, 2mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린 및 100㎍/ml 스트렙토마이신이 첨가된 D-MEM/F-12 (1:1) 배지 (Invitrogen cat no 21331-020)에서 HEK-293를 배양함으로써, 6웰 플레이트 포맷으로 수행하였다. Mirus Bio Corporation 사의 TransIT-LT1 형질전환 시약 (cat no MIR-2305)을 공급사의 권고 프로토콜에 따라 사용하였다. 형질전환은 혈청 함유 배지에서 수행하였다. 간략하게는, 6웰 플레이트의 웰 당 LPS-무첨가 미니프렙 플라스미드 DNA 2.5 ㎍을 형질전환에 사용하였고, 배양 시간은 48 - 72시간이다.
E. IL-17 돌연변이체에 대한 나노바디의 결합을 검출하기 위한 ELISA 프로토콜
Nunc-Immuno plates Maxisorp (invitrogen, Nunc # 439454)에, 다클론성 토끼 항-FLAG® 에피토프 (DYKDDDDK) 항체 (Covance #PRB-132P)를 PBS, pH 7.4 중의 2㎍/ml로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 플레이트를 PBST (PBS + 0.05% Tween20)로 3번 헹구고, IL-17-FLAg-테깅된 돌연변이체가 포함된 희석하지 않은 순 조직 배양 상층액 (the undiluted neat tissue culture supernatant)을 37℃에서 1시간 30분간 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBST로 3번 헹구고, 2% BSA가 포함된 PBS로 37℃에서 2시간 블록킹하였다. 플레이트를 PBST로 3번 헹군 다음, 여러가지 항-IL17 HIS 및 cmyc-테깅된 1가 나노바디를 PBS pH 7.4 중의 5㎍/ml로 웰에 넣었다. 플레이트를 37℃에서 2시간 배양한 다음, PBST로 3번 헹구었다. 여기에, 2차 HRP가 접합된 토끼 다클론성 6X His tag® (HHHHHH) 항체 (Abcam #ab1187)를 PBS pH 7.4 중의 1/5000 희석물로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 (RT), 45분 인큐베이션한 다음, PBST로 3번 헹구고, 테트라메틸벤지딘 (TMB) ELISA 퍼옥시다제 기질 용액 (Uptima #UP664781)을 100㎕/well로 첨가하였다. 플레이트는 RT에서 5분 둔 후, 1M H2SO4로 블록킹하여, 450nm에서 OD 값을 판독하였다. 단일 IL-17 돌연변이체들과 야생형 사이토카인의 발현을 검증하기 위해, 구조적으로 충분히 폴딩되고 항-FLAG 항체로 충분히 포착되는, 다클론성 항-IL17A 또는 -F를 1차 항체로서 사용한 다음, HRP가 접합된 2차 항체를 사용하였다. IL-17A 및 IL-17F 구조체의 경우, 다클론성 염소 IgG 항-인간 IL-17A (Life span, #LS-C37027)와 다클론성 염소 IgG 항-인간 IL-17F (R&D systems, #AF1335)를 각각 사용한 다음; HRP가 접합된 소 항-염소 IgG(H+L)를 검출을 위해 사용하였다 (Jackson ImmunoResearch #805-035-180).
클래스 2 나노바디에 의해 인지되는 에피토프
A-차단제 및 X-반응성 나노바디 에피토프들 전체에 공통된 5곳의 잔가 위치를 동정하였다: L74, Y85, H73, N82 및 R72 (표 11). 한 경우를 제외하고 나머지 부위들에서, 나노바디 결합성에 강하게 작용하는 바와 같이, L74와 Y85가 상기 에피토프에서 중요한 위치이다. 이들 2가지 돌연변이체에 대한 선택한 나노바디들의 결합 친화성은 적어도 야생형 결합성의 50% 미만이고, 대부분의 경우에서는 25% 미만이다. 4B09에서는 Y85이 예외인데, 이는 결합 친화성이 야생형 단백질의 60%이다. 본 발명의 결과에 비추어, L74를 핫 스팟으로 명확하게 분류할 수 있다. H73 역시 정도는 낮지만 모든 에피토프들에서 가장 중요한 잔기인 것으로 확인되었다. 몇몇 위치는 A-차단제 대비 X-반응성 나노바디를 구별한다. N88은 X-반응성 나노바디들 (11C08 제외)의 에피토프들에서 광범위하게 확인되었다. 대조적으로, A-차단제의 에피토프들에서 H54 또는 K70이 발견되었지만, X-반응성 나노바디들의 에피토프들에서는 드문 편이다. IL-17A에 대한 A-차단제와 X-반응성 에피토프들에서 공통적인 잔기 위치 5곳 중에서도, 3곳에는 IL-17F의 경우 다른 아미노산이 존재한다 (Y85I, H73N 및 N82K). 이는, X-반응성 나노바디들의 에피토프들이 관련 단백질들 간에 엄격하게 동일할 필요가 없다는 것을 시사해준다. 에피토프를 구성하는 아미노산 세트의 특정 수준의 다양성이 허용된다. 그러나, 주잔기 2개 (L74, Y85)는 IL-17F (L75, I86)에서는 동일한 카운터파트를 가진다.
클래스 4 나노바디에 의해 인지되는 에피토프
X-반응성 나노바디들 13B03 및 13E02만 IL-17 돌연변이체들에 대한 Fc 융합체로서 테스트하였다. 이들의 친화성은 평균적으로 IL-17A에 비해 IL-17F에서 10배 낮다. IL-17A에서와 같이, L75 및 I86 (IL-17A에서의 대응 잔기 L74 및 Y85)은 IL-17F에 대한 모든 나노바디들의 에피토프들에서 중요한 위치이다. 아울러, 본 발명의 결과, I78이 또한 엘에피에 대한 모든 나노바디 에피토프들에서의 주 잔기임을 보뎌준다. 이후 결과는, 심지어 X-반응성 나노바디에서도, IL-17A에서의 대응 위치 (I77)에서의 비슷한 행태는 관찰되지 않았기 때문에, 해석하기 어렵다. IL-17A에서 관찰된 평균 A-차단제와 X-반응성 에피토프들 간의 구분은, 해당 실험 데이타 세트 (1가 형태들의 약한 결합성으로 인해 교차-반응성 나노바디 2종에 불과함)가 한정적이기 때문에, IL-17F트에서 불가하였다.
돌연변이체들 모두 수용체 컴플렉스의 양쪽 체인, IL-17RA 및 IL-17RC에 대한 결합성을 테스트하였다. IL-17A에서 수득한 결과는, R46이 수용체 양쪽 체인들의 결합부에서 강력하게 작용함을 보여준다 (데이타 미기재). 이러한 데이타를, IL-17F와 IL-17RA의 복합체에 대한 X-선 구조와 조합하면 (Ely et al., Nature Immunology 10, 1245 - 1251, 2009), 테스트한 대부분의 나노바디들의 에피토프들이 IL-17A 상의 수용체 결합부와 일부 중첩될 수 있다는 몇가지 단서가 확인된다.
아래 표 11에서, Y85는, 테스트한 IL-17A에 결합하는 3종의 나노바디 모두에 영향을 미치기 때문에, 중요한 잔기라는 것이 명확해졌다. N88은 교차-(X)-반응성 나노바디에서는 중요하지만, 다른 것에서는 그렇지 않다.
클래스 3 나노바디에 의해 인지되는 에피토프
항-IL-17F 특이적인 나노바디의 경우, IL-17F에서 4곳의 위치가 중요한 R73, I86 및 N89로서 동정되었으며, 흥미롭게도 이 위치는 IL-17A의 L74, Y85 및 N88 위치들에 해당되는데, 이 위치들은 나노바디들에서 중요한 것으로 입증된 바 있다. R47은 IL-17A (R46)에서는 확인되지 않은 중요한 위치인 것으로 보인다.
표 11: 다클론성 항-IL-17A의 결합성에 대해 정규화한, IL-17A 단일 알라닌 돌연변이체들에 대한 나노바디들의 결합율
인간 IL-17A 돌연변이체 R46 L74 H54 N78 D80 Y85 N88
클래스 2 90 13,6 18 100 100 12 93
클래스 4 92 9,6 81 100 95 29 9
클래스 4 89 9,2 100 100 100 11 38
인간 IL-17F 돌연변이체 R47 R73 I86 N89
클래스 3 14,2 18,3 2,8 1,7
실시예 14: IL-17 수용체들에 대한 1가 나노바디들의 에피토프 결합성
선별한 항-IL-17 나노바디들이 각각 IL-17RA, IL-17RC에서와 같이, 각각 IL-17A, IL-17F 상의 중첩성 에피토프에 결합하는지를 조사하기 위해, Biacore에서 에피토프 결합 실험을 설정하였다. 수용체 (IL-17RA 또는 IL-17RC)를, 칩 상에 코팅된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 이의 인간 Fc-테일을 통해 포획하였다. 이후, 나노바디와 복합체를 이룬 IL-17A 또는 IL-17F 혼합물을 그 표면 위로 주입하였다. IL-17A 또는 IL-17F의 농도는 IL-17의 >99%로 복합체를 형성하는 이론적인 계산치로 사용하였다. 클래스 2 또는 클래스 4 나노바디 - IL-17A 복합체들 모두 IL-17RA에 대한 결합성이 관찰되지 않았으며 (표 12), 이는, 이들 나노바디들이 IL-17A 상에서 IL-17RA와 비슷한 에피토프에 결합한다는 것을 의미한다. 클래스 3 나노바디의 경우, 오직 하나의 나노바디 - IL-17F 복합체, 즉 24B08 - IL-17F가 IL-17RC에 결합하는 것으로 입증되었는데 (표 12), 이는 이 나노바디가 IL-17F 상에서 IL-17RC와 다른 에피토프에 상호작용한다는 것을 의미한다. 클래스 4 나노바디의 경우, 오직 2종의 나노바디 - IL-17F 복합체들이 IL-17RC에 결합하지 않았다; 11C08, 및 13E02. 01A01, 13B03 및 13E05 - IL-17F 복합체들은 최저 결합성을 나타낸 반면, 13B05 및 17C01은 상당한 결합성을 나타내었는데, 이는 이들 나노바디들에 의해 인지되는 IL-17F 에피토프가 IL-17RC와 일부분만 중첩됨을 의미한다.
표 12: 고정된 IL-17RC 또는 IL-17RA에 대한 IL-17 - 나노바디 복합체의 Biacore 결합성%
나노바디 나노바디 클래스 Biacore 결합성% (IL-17A-NB)-IL-17RA Biacore 결합성% (IL-17F-NB)-IL-17RC
02A08 클래스 2 0,46
03C07 클래스 2 -0,08
04B09 클래스 2 -1,39
04G01 클래스 2 -0,43
09G10 클래스 2 2,05
11A06 클래스 2 -0,35
06E11 클래스 3 8,17
07B09 클래스 3 5,17
07B11 클래스 3 6,67
08H01 클래스 3 9,17
16A04 클래스 3 4,84
24B08 클래스 3 59,88
24G10 클래스 3 8,51
01A01 클래스 4 -1,04 12,01
11C08 클래스 4 3,25 6,34
13B03 클래스 4 -2,24 15,68
13B05 클래스 4 -0,89 35,03
13E02 클래스 4 -1,04 7,17
13E05 클래스 4 0,54 15,51
17C01 클래스 4 -2,01 32,53
대부분의 클래스 2 및 클래스 4 나노바디들이 IL-17A의 중첩성 에피토프를 인지한다는 사실을 검증하기 위해, 인간 IL-17A를 센서 칩에 고정시키고, 클래스 4 나노바디 01A01을 결합시킨 다음 클래스 2 또는 클래스 4의 2차 테스트 나노바디를 칩 상으로 흘려주는, SPR 실험을 수행하였다. RI 값 증가가 관찰되지 않는다면, 테스트 나노바디는 01A01 보다 중첩성 에피토프에 결합하는 것이다. 이는, 11A06을 제외하고는, 테스트한 나노바디들 모두 그러하였는데, 이는 나노바디가 IL-17A의 다른 에피토프에 결합한다는 것을 의미한다. 그 결과를 도 10에 나타낸다.
마찬가지로, 인간 IL-17F 고정, 클래스 3 나노바디 07B11의 결합성과, 이후의 클래스 3 또는 클래스 4의 2차 테스트 나노바디의 결합성을 통해, 이들 나노바디들이 모두 24B08을 제외한 중첩성 에피토프를 인지하는 것으로 확인되었으며, 이는 전술한 결과를 재차 검증해준다. 그 결과를 도 11에 나타낸다.
실시예 15: 반감기가 연장된 (HLE) 다가 야생형 항-IL-10 나노바디들의 제작
IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 차단하는 반감기 연장된 나노바디 생성물을 제작하기 위해, 1가 나노바디들을 포맷화하였다. 클래스 2 (IL-17A 및 IL-17A/F -차단성, 도면에 A로 표시됨) 및 클래스 3 나노바디 (IL-17F-차단성, F로 표시됨)를 A-F 조합 또는 F-A 조합으로 조합하였다. 클래스 4 (IL-17A-IL-17F 교차-반응성 나노바디, X로 표시됨)를 2가 구조체 X-X로 포맷화하거나, 클래스 3 나노바디와 함께 F-X 또는 X-F로 조합하였다. 반감기 연장을 위해, 항-HSA 나노바디 ALB8 또는 Fc-영역에 이 구조체를 융합하는 것을 채택하였다.
ALB8 HLE의 포맷화된 야생형 나노바디
다양한 A-F, F-A, X-X, F-X 및 X-F 조합을 DMA 수준으로 제작하여, 구조체의 양쪽 부위에 9GS-링커를 통해 또는 구조체의 C- 말단에 연결된 항-IL17 나노바디들 사이에서의 ALB8 나노바디의 위치를 다변화하는 것을 채택하였으며, 이때, 2종의 항-IL-17 나노바디들은 35GS-링커를 통해 연결되며, ALB8은 9GS-링커를 통해 가운데 나노바디에 연결된다. 빌딩 블록으로서 사용한 1가 나노바디들을 표 13에 나타낸다.
표 13: 포맷화된 구조체에 대한 빌딩 블록으로서 선별된 나노바디들. 굵은 글씨체로 표시된 교차-반응성 나노바디들만 F-X 및 F-X 조합으로 사용되었다.
클래스 2 (A) 클래스 3 (F) 클래스 4 (X)
02A08 06E11 01A01
03C07 07B11 11C08
04B09 08H01 13B03
04G01 16A04 13B05
09G10 24G10 13E02
11A06 　 13E05
선별한 다가 나노바디 50종을 피키아 패스토리스 (Pichia pastoris)에서 c-myc, His6-테깅된 단백질 (도 6에 아미노산 서열을 나타냄)로 발현시켰다. 나노바디 발현 유도는 메탄올의 단계적인 첨가를 통해 수행하였다. 나노바디가 방출된 맑은 배지를 고정된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC)의 출발 물질로 사용하였으며, 이후 탈염한 바, SDS-PAGE에서 90% 순도가 확인되었다. 적절한 경우, WO 2010/125187에 기술된 방법들은 발현 및 폴딩을 추가로 개선하기 위해 적용하였다.
Fc HLE를 가진 포맷화된 야생형 나노바디
Fc-테일이 융합된 2가 교차-반응성 나노바디를 구축하였다. Fc-융합체는 교차-반응성 나노바디 01A01, 13E02 및 13B03으로 제조된다. 인간 IgG1 C->S (서열: EPKSSDKTHTCPPCP) 유래 짧은 힌지 영역을 가지거나, 또는 라마 IgG2b (EPKTPKPQPQPQPQPNPTTESKCPKCP) 유래 긴 힌지 영역을 가지는 구조체들을 제조하였다. 또한, Hek-293-6E 세포에서 발현시킨 후 나노바디를 방출시키기 위해, 2가지 타입의 신호 펩타이드도 사용하였다: MEFGLSWLFLVAKIKGVQC 서열의, VH3-23 (hIgG HC) 유래 신호 펩타이드 1종과, MEWSWVFLFFLSVTTGVHS 서열의 마우스 생식세포계 유래 1종. Fc-구조체들을 일시적으로 Hek-293-6E 세포에 형질전환시켜, 나노바디를 배양 배지 (프리스타일 배지 75-400 ml)로 발현 배출시켰다. 이 배지를 형질전환 3일 후에 회수하여, Fc-융합된 나노바디를 단백질 A 크로마토그래피 (Mab Select Sure)와 이후의 크기 배제 크로마토그래피를 수행하여 정제하였다.
실시예 16: ALB8 HLE를 가진 정제한 다가 야생형 항-IL-17 나노바디들의, 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 이용한 알파스크린 분석에서의, 차단력
다가 나노바디 50종을, 표 14에 나타낸 최적화된 리간드와 수용체 농도를 사용하고, 각 나노바디를 50 nM에서 시작하여 0.181 pM까지 연속 희석하는 것을 제외하고는, 실시예 8에 기술된 바와 같이, 알파스크린 IL-17A-IL-17RA, IL-17F-IL-17RC 및 IL-17-A/F-RA를 이용하여 테스트하였다.
표 14: 다가 나노바디의 IC50을 결정하기 위해 알파스크린 분석에 사용된 IL-리간드와 IL-17 수용체의 최적화된 농도에 대한 개괄
분석에서 설정된, 리간드-수용체 조합 리간드 농도 (nM) 수용체 농도 (nM)
IL-17A - IL-17RA 0.10 10
IL-17F - IL-17RC 0.05 3
IL-17A/F - IL-17RA 0.32 4
저해 효능과 최대 수준을 토대로, 추가적인 특정화를 위해 최상의 다가 나노바디 14종을 선정하였다. 이들 중 9종은, 모두 6번의 알파스크린 분석으로 IC50을 측정하였다. 아울러, 알파스크린 분석에서의 HSA 존재가 IC50에 영향을 미치는지 여부를 조사하였다. 이를 위해, IL-17A-IL-17RA, IL-17F-IL-17RC 및 IL-17A/F-IL-17RA 분석을 5 μM HSA 존재 하에 또는 부재 하에 반복 실시하였다. 다른 나노바디 5종에서는, IL-17A-IL-17RA 및 IL-17F-IL-17RC 분석에서만 효능이 측정되었다. 그 결과를 표 15에 요약 개시한다. X-X 포맷이 IL-17F - 수용체의 상호작용을 차단하는데 있어 효능이 비록 낮았지만, 나노바디들 모두 매우 강력한 효능을 나타내었다. HSA의 존재는 효능에 주된 영향력을 미치지 않았다.
표 15: 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디 14종으로 구성된 선별 패널에 대한 알파스크린을 통해 추정한 IC50 값들의 요약, nd = 측정 안됨
특이성 나노바디 ID 구조체 IC50 (pM) 알파스크린
IL17A-RA IL17A-RA + HSA IL17A-RC IL17F-RA IL17F-RC IL17F-RC + HSA IL17A/F-RA IL17A/F-RA + HSA IL17A/F-RC
A - F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 115 185 130 369 41 54 97 131 47
F - A IL17MS0141 07B11-35GS-04B09-9GS-ALB8 87 92 146 819 29 36 99 130 68
F - A IL17MS0166 24G10-35GS-04G01-9GS-ALB8 161 203 367 1094 46 56 128 95 51
X - X IL17MS1003 13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03 116 72 171 564 189 177 85 90 45
X - X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 64 67 167 408 102 113 101 86 104
F - X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 63 83 183 456 23 28 98 90 39
F - X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 99 70 170 328 17 22 142 124 50
X - F IL17MS2042 01A01-9GS-ALB8-9GS-24G10 130 111 152 619 30 35 122 99 59
F - X IL17MS2081 07B11-35GS-01A01-9GS-ALB8 78 86 138 543 22 27 99 100 36
특이성 나노바디 ID 구조체 IC50 (pM) 알파스크린
IL17A-RA IL17A-RA + HSA IL17A-RC IL17F-RA IL17F-RC IL17F-RC + HSA IL17A/F-RA IL17A/F-RA + HSA IL17A/F-RC
A - F IL17MS0110 04G01-35GS-16A04-9GS-ALB8 45 nd nd nd 48 nd nd nd nd
F - A IL17MS0154 16A04-35GS-04G01-9GS-ALB8 56 nd nd nd 47 nd nd nd nd
X - X IL17MS1005 13E02-9GS-ALB8-9GS-13E02 56 nd nd nd 363 nd nd nd nd
X - F IL17MS2117 13B03-35GS-16A04-9GS-ALB8 nd nd nd nd 30 nd nd nd nd
X - F IL17MS2131 13E02-35GS-16A04-9GS-ALB8 44 nd nd nd 20 nd nd nd nd
실시예 17: 인간 IL-17A 또는 IL-17F를 이용한 경쟁적인 ELISA에서의, ALB8 HLE 대 Fc HLE를 구비한, 정제한 다가 고차-반응성 항-IL-17 나노바디들의, 차단력
ALB8 HLE, 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 및 13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03을 구비한 포맷화된 나노바디들의 효능을, Fc-HLE, SH-Fc-(GS)2-13E02 및 13B03-SH-Fc 13B03-LH-Fc를 구비한 동일 나노바디들의 효능과, 경쟁적인 ELISA로 비교하였다. 이를 위해, IL-17RA, 각각 IL-17RC를 PBS 중의 1㎍/ml 농도로 코팅하였다. 나노바디 또는 참조 화합물의 연속 희석물을 바이오틴화된 IL-17A (12 pM) 각각 IL-17F (10 pM)와 인큐베이션하고, 수용체에 대한 결합성을 엑스트라비딘-HRP로 검출하였다. 이들 양자 분석에서, 포맷화된 나노바디들 모두 이의 1가 카운트파트에 비해 효능 개선을 나타내었으며, 대부분의 나노바디들은 표 16에 나타낸 바와 같이 참조 화합물 보다 양호한 효능을 나타내었다.
표 16: 경쟁적인 ELISA로 결정한 다가 항-IL-17 나노바디들의 IC50 값
시험 화합물 IC50 경쟁 ELISA IL17A -RA (pM) IC50 경쟁 ELISA IL17F -RC (pM)
13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03 20 148
13B03-SH-Fc 20 3364
13B03-LH-Fc 31 292
SH-Fc-(GS)2-13B03 44 350
13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 102 534
SH-Fc-(GS)2-13E02 112 267
13B03 121 91600
13E02 420 3020
mAB02 914 　
B-F60 mAB 　 1200
실시예 18: HSA 존재 또는 부재 하에, 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 이용한 세포성 분석에서의, 정제한 포맷화된 야생형 항-IL-10 나노바디들의 차단 활성
ALB-HLE를 구비한 선별한 포맷화된 나노바디 9종과 Fc-융합된 나노바디 4종에 대해, HT-1080 세포의 hIL-17A, hIL-17F 또는 hIL-17A/F 유발성 IL-6 분비에 대한 저해를 조사하였다. 인간 HT-1080 섬유육종 세포를 바닥이 평평한 96웰 플레이트에 1500 cells/well로 접종하였다. 나노바디 mAB02 참조 화합물 또는 항-IL-17F B-F60 mAb 참조 화합물의 1:3 연속 희석물들을 준비하여, HT-1080 세포를 접종한 상기 웰에, 나노바디 및 mAB02의 경우 최종 농도 10 ㎍/mL - 0.0045 ㎍/mL로, mAB B-F60의 경우 최종 농도 100 ㎍/mL - 0.045 ㎍/mL로 첨가하였다. 1차 실험에서, (표 17)에서와 같이 나노바디를 첨가하고, 2차 실험에서는, 나노바디를 100 μM HSA와 예비 인큐베이션하였다 (표 18). 플레이트를 30분간 37℃ 및 5%CO2에서 인큐베이션한 다음, 특정 자극원, 즉 인간 IL-17A를 최종 농도 1 nM로, 인간 IL-17F를 최종 농도 15 nM로, 또는 인간 IL-17A/F를 최종 농도 5 nM로 첨가하였다. 플레이트를 다시 24시간 동안 37℃ 및 5%CO2에서 인큐베션하였다. 상층물을 회수하여, 96웰 플레이트로 옮긴 다음, 시판 IL-6 ELISA 분석을 이용하여 인간 IL-6의 수준을 측정하였다. 표 17에 나타낸 바와 같이, 나노바디들은 모두 포맷 또는 HLE와 상관없이, IL-17A 활성 차단에 대해 비슷한 효능 (IC50 0.19 - 0.78 nM)을 나타내었다. 또한, IL-17F 활성 차단 효능도 나노바디들 모두들에서 비슷하였다 (IC50 2.7 - 8.2 nM). 표 18에 나타낸 바와 같이 (비교, 표 17), 분석시 100 μM HSA의 존재가 나노바디의 효능에 영향을 미치지 않았다.
표 17: HSA 부재시, 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디 또는 참조 화합물에 의한, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서의 인간 IL-17A 또는 IL-17F 유발성 IL-6 생산의 저해. 결과는 N(1 - 7)회 실험들의 평균 ± SD로 나타낸다.
특이성 나노바디 참조 화합물 구조체 IC50 (nM) hIL-17A Emax (%) IC50 (nM) hIL-17F Emax (%)
A - F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 0.38 ± 0.1 102 ± 1 4 87
F - A IL17MS0141 07B11-35GS-04B09-9GS-ALB8 0.25 105 5.9 110
F - A IL17MS0166 24G10-35GS-04G01-9GS-ALB8 0.83 105 7.35 ± 2 102 ± 3
X - X IL17MS1003 13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03 0.45 ± 0.03 101 ± 1 6.4 ± 5 101 ± 4
X - X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 0.47 ± 0.04 102 ± 3 6.45 ± 2 97.5 ± 1
F - X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 0.60 ± 0.1 102 ± 8.05 ± 0.2 97 ± 5
F - X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 0.78 ± 0.1 103 ± 4 8.2 ± 0.6 96 ± 7
X - F IL17MS2042 01A01-9GS-ALB8-9GS-24G10 0.28 101 6.6 111
F - X IL17MS2081 07B11-35GS-01A01-9GS-ALB8 0.7 100 6.3 99
X - X MSB0010606 13E02-LH-Fc 0.19 ± 0.1 100 ± 6 2.7 ± 2.9 96 ± 4
X - X MSB0010619 SH-Fc-(GS)2-13E02 0.31 ± 0.3 102 ± 5 4.9 ± 3.5 98 ± 6
X - X MSB0010618 SH-Fc-(GS)2-13B03 0.37 ± 0.3 100 ± 6 5.7 ± 3.2 94 ± 14
X - X MSB0010493 13B03-SH-Fc 0.19 ± 0 100 ± 4 5.8 ± 0.3 105 ± 15
A mAb02 0.59 ± 0.4 99 ± 2 ND ND
F B-F60 mAb ND ND 3.9 ± 3.12 93 ± 10
표 18: 100 μM HSA 부재시, 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디 또는 참조 화합물에 의한, 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서의 인간 IL-17A, IL-17F 또는 IL-17A/F 유발성 IL-6 생산의 저해. 결과는 N회 실험들의 평균 ± SD로 나타낸다. N= 2 또는 *N=1
속성 나노바디 또는 참조 화합물 구조체 IC50 (nM) hIL-17A Emax (%) IC50 (nM) hIL-17F Emax (%) IC50 (nM) hIL-17A/F Emax (%)
A - F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 1.00 ± 0.6 97 ±1 7.3 ±1.3 89.5 ±1 1.01 ± 0.1 83 ±3
F - A IL17MS0141 07B11-35GS-04B09-9GS-ALB8 0.85 ± 0.5 98 ± 0 14.8 ±10.2 91.5 ±5 0.34 ± 0.1 78 ±3
F - A IL17MS0166 24G10-35GS-04G01-9GS-ALB8 1.95 ± 0.6 98 ±1 8.5 ±3.5 85.0 ±8 1.47 ± 0.5 72 ±15
X - X IL17MS1003 13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03 1.55 ±1.2 96 ±1 10.8 ±3.2 86.5 ±6 0.53 ± 0.4 78 ±8
X - X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 1.00 ± 0.6 97 ± 0 14.8 ±3.6 81 ±3 0.43 ± 0.1 78 ±6
F - X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 0.85 ± 0.4 97 ± 0 4.1 ±3.1 91.5 ±1 0.61 ± 0.4 72 ±9
F - X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 0.90 ± 0.7 96 ±6 8.3 ± 0.5 91.5 ±8 0.44 ± 0.0 86 ±2
X - F IL17MS2042 01A01-9GS-ALB8-9GS-24G10 *0.44 *100 *5.7 *93 0.57 ± 0.1 85 ±4
F - X IL17MS2081 07B11-35GS-01A01-9GS-ALB8 1.05 ± 0.4 95 ±6 5.2 ±4.6 93.5 ±8 0.72 ± 0.5 87 ±8
X - X MSB0010530 13B03-LH-Fc 0.95 ± 0.8 97.5 ±1 15.6 ± 0.07 75 ±4 ND ND
X - X MSB0010606 13E02-LH-Fc 0.85 ± 0.5 98.5 ±2 15.3 ±1.3 80.5 ±2 ND ND
A mAb02 0.65 ± 0.2 96 ±3 ND ND 3.94 ±5.4 74 ±9
F mAb B-F60 ND ND 5.8 ±2.6 84 ±7 ND ND
실시예 19: 인간 IL-17A와 IL-17F의 조합에 의해 자극한 HT-1080 세포에서의 정제한 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디의 이중 저해
다음 단계로, HT-1080 세포를 인간 IL-17A와 IL-17F의 조합으로 자극하였을 때, 포맷화된 나노바디들이 농도 의존적인 방식으로 IL-6 분비를 저해할 수 있는지를 조사하였다. IL-17A와 IL-17F를 여러가지 농도로 조합하였다: 1) 1 nM IL-17A + 15 nM IL-17F, 2) 5 nM IL-17A + 5 nM IL-17F, 3) 15 nM IL-17A + 15 nM IL-17F. 나노바디 테스트 세트는 매우 양호한 이중 저해 활성을 나타내었다 (표 19).
표 19: 인간 IL-17A와 IL-17F의 조합을 이용한 HT-1080 분석에서의 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디 몇몇의 IC50 값. 결과는 N회 실험의 평균 ± SD로 나타낸다. N= 2 또는 *N=1. ND: 수행 안 함.
특이성 나노바디 또는 참조 화합물 구조체 IC50 (nM) hIL-17A (1nM) IC50 (nM) hIL-17F
(15 nM) 		IC50 (nM) IL-17A+IL-17F (1+15nM) IC50 (nM) IL-17A+IL-17F (5+5nM) IC50 (nM) IL-17A+IL-17F (15+15nM)
A - F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 0.38 ± 0.1 *4 *1.03 *3.11 *10.3
X - X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 0.47 ± 0.04 6.45 ± 2 *0.82 *1.64 *4.9
F - X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 0.60 ± 0.1 8.05 ± 0.2 *3.23 *2.77 *10.5
F - X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 0.78 ± 0.1 8.2 ± 0.6 *3.76 *3.02 *11.2
A mAb02 0.48 ± 0.2 ND ND ND ND
A + F mAb02+ mAb B-F60 ND ND *1.03 *1.23 *5.3
F mAb B-F60 ND 2.5 ± 1.6 ND ND ND
표 20: 시노몰구스 원숭이 IL-17A 또는 IL-17F를 이용한 HT-1080 생물분석에서의 포맷화된 항-IL-17 나노바디들의 IC50 값. 결과는 N (1 내지 5)회 실험의 평균 ± SD로 나타낸다. NI: 저해 안 됨
특이성 나노바디 ID 구조체 IC50 (nM) Cyno IL17A Emax (%) IC50 (nM) Cyno IL17F Emax (%)
A - F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 0.52 100 ND ND
X - X IL17MS1003 13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03 0.86 102 3.8 ± 4.3 98 ± 16
X - X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 0.88 102 NI NI
F - X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 0.76 101 3.6 ± 0.4 93 ± 21
F - X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 1.02 100 4.5 ± 4.9 94 ± 20
X - X MSB0010606 13E02-LH-Fc 0.19 ± 0.09 101 ± 7 NI NI
X - X MSB0010619 SH-Fc-(GS)2-13E02 0.29 ± 0.09 100 ± 6 8.3 ± 6 87 ± 21
X - X MSB0010618 SH-Fc-(GS)2-13B03 0.37 ± 0.21 98 ± 4 5.0 ± 4 103 ± 16
X - X MSB0010493 13B03VHH-SH-Fc 0.21 106 3.8 111
실시예 20: 시노몰구스 원숭이 IL-17A 및 IL-17F를 이용한 세포성 분석에서의 정제한 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디들의 차단 활성
HT-1080 세포에서의 시노몰구스 원숭이 IL-17A (1 nM) 및 IL-17F (15 nM) 유발성 IL-6 분비에 대한 농도-의존적인 저해를 조사하였다. 모든 1가 나노바디들이 인간 및 시노몰구스 원숭이 IL-17A 및 IL-17F에 대해 등가의 효능을 나타내었기 때문에, 1가 및 Fc 나노바디들도 등가의 효능을 나타낼 것으로 예상되었다. 이는, 실제, 시노몰구스 IL-17F에 대해 저해를 나타내지 않은 IL17MS1013 (13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8) 및 MSB0010606 (13E02-LH-Fc)을 제외하고는, 테스트한 나노바디들 (표 20)에 해당되었다.
실시예 21: ALB8 HLE를 구비한, 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디의, 인간 혈청 알부민에 대한 결합성
ALB8 HLE를 구비한 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디 14종을 대상으로, 인간 혈청 알부민과의 결합에 대한 오프 속도를 Biacore를 이용한 표면 플라스몬 공명에 의해 측정하였다 (표 21). 나노바디들 모두 5.4E-03 내지 6.6E-03 s-1의 비슷한 오프-속도 범위를 나타내었다. 이는, ALB8 단독의 오프-속도에 비해 조금 높으며 (1.65E-03 s-1), 이는 일반적으로, ALB8를 다른 나노바디 빌딩 블럭에 융합하였을 때 관찰되며, 따라서 이러한 오프-속도들은 수용가능하다.
표 21: ALB8 단독 경우의 친화성 대비 ALB8 HLE 항-IL-17 나노바디의 HSA에 대한 친화성
특이성 나노바디 ID 구조체 K off (s-1)
A - F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 6,60E-03
A - F IL17MS0110 04G01-35GS-16A04-9GS-ALB8 6,10E-03
F - A IL17MS0141 07B11-35GS-04B09-9GS-ALB8 5,80E-03
F - A IL17MS0154 16A04-35GS-04G01-9GS-ALB8 5,70E-03
F - A IL17MS0166 24G10-35GS-04G01-9GS-ALB8 5,90E-03
X - X IL17MS1003 13B03-9GS-ALB8-9GS-13B03 5,80E-03
X - X IL17MS1005 13E02-9GS-ALB8-9GS-13E02 5,80E-03
X - X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 6,40E-03
F - X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 5,40E-03
F - X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 5,70E-03
X - F IL17MS2042 01A01-9GS-ALB8-9GS-24G10 6,30E-03
F - X IL17MS2081 07B11-35GS-01A01-9GS-ALB8 6,60E-03
X - F IL17MS2117 13B03-35GS-16A04-9GS-ALB8 6,00E-03
X - F IL17MS2131 13E02-35GS-16A04-9GS-ALB8 6,20E-03
실시예 22: KinExA 기법을 이용한 포맷화된 야생형 항-IL17 나노바디의 친화성 측정
제한된 세트의 포맷화된 나노바디들의 친화성을 KinExA를 이용하여 측정하였다. 표 22에 나타낸 바와 같이, 나노바디를 포맷화하였을 때 측정할 수 있는 명확한 항체-항원 결합 효과가 존재하며, 이러한 효과는, 특히, 예를 들어, 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 또는 Fc-융합체로서 포맷화된 교차-반응성 나노바디 13E02 X-X, Fc-융합체로서 포맷화된 교차-반응성 나노바디 13B03 X-X, 및 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 및 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02로 포맷화된 나노바디 F-X의 경우, IL-17F에 대해 특히 명확하다. 예상한 바와 같이, A-F 구조체에서는 항원-항체 결합성이 관찰되지 않으며, 빌딩 블럭이 이미 고친화성을 가지고 있기 때문에 항원-항체 결합은 필수적이지 않다. Fc-융합체 구조체의 경우, 긴 힌지를 구비한 13B03-Fc는 짧은 힌지를 구비한 13B03-Fc에 비해 보다 우수한 항원-항체 효과를 제공하는 것으로 보인다.
표 22: KinExA로 측정한, 1가 및 포맷화된 야생형 항-IL-17 나노바디와 참조 화합물 몇종의, 인간 IL-17A 및 IL17-F 결합 친화성
특이성 나노바디 ID 구조체 나노바디 농도 (pM) Kd (pM) IL-17A-6HIS Kd (pM) IL-17F-6HIS
A 　 04G01 600 13.4 　
A 　 04B09 600 20.7 　
X 　 01A01 200 1.3 　
X 　 13B03 500 22.5 4910.0
X 　 13E02 500 35.9 3625.0
F 　 16A04 100 　 19.4
F 　 07B11 600 　 12.8
X-X 　 13B03-SH-Fc 300 0.2 132.3
X-X 　 13B03-LH-Fc 50 2.0 20.0
X-X 　 13B03-LH-Fc 10 0.5 22.3
X-X 　 SH- (GS)2-Fc-13B03 100 　 144.8
특이성 나노바디 ID 구조체 나노바디 농도 (pM) Kd (pM) IL-17A-6HIS Kd (pM) IL-17F-6HIS
X-X 　 SH- (GS)2-Fc-13B03 10 0.1 　
X-X 　 13E02-SH-Fc 100 9.0 155.5
X-X 　 13E02-SH-Fc 30 3.6 　
X-X 　 13E02-LH-Fc 600 　 2040.0
X-X 　 SH-(GS)2-Fc-13E02 100 　 11.8
X-X IL17MS1013 13E02-35GS-13E02-9GS-ALB8 300 0.3 230.0
A-F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB8 50 7.0 　
A-F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB9 100 　 17.9
A-F IL17MS0089 02A08-35GS-16A04-9GS-ALB9 300 　 156.4
F-A IL17MS0141 07B11-35GS-04B09-9GS-ALB8 50 5.0 　
F-A IL17MS0141 07B11-35GS-04B09-9GS-ALB8 100 　 10.5
F-X IL17MS2022 16A04-9GS-ALB8-9GS-13B03 50 4.2 4.6
F-X IL17MS2024 16A04-9GS-ALB8-9GS-13E02 50 4.6 1.7
A 　 mAb02 Fab 200 362.8 　
A 　 mAb02 IgG 500 112.2 　
A 　 mAb02 IgG 100 255.6
F 　 B-E52 mAB 600 　 643.0
실시예 23: 서열 최적화
나노바디들, IL17MS04G01 (A) (서열번호 635), IL17MS16A04 (F) (서열번호 648), IL17MS13E02 (X) (서열번호 664) 및 IL17MS13B03 (X) (서열번호 662)를, 인간화 및 서열 최적화를 위해 추가로 취하였다. 이들로, A-F / F-A, X-F/ F-X 및 X-X의 모든 포맷으로 제작 가능하다. 인간화는 모체가 되는 야생형 나노바디® 서열을 돌연변이시켜, 인간 VH3-JH 생식계 컨센서스 세포와 보다 동일한 나노바디® 서열을 제작하는 과정이다. 서열 최적화에는, 나노바디의 한가지 이상 (바람직한) 특성을 개선시키기 위해, 서열내 하나 이상의 특정 아미노산 잔기를 치환하는 것이 포함된다. 이러한 서열 최적화의 몇몇 예들은 본원에 상세히 기술되어 있으며, 비제한적인 예로, 장기 안정성 또는 보관성을 개선시키는 치환, 바람직한 숙주 세포 또는 숙주 유기체에서 발현 수준을 높이는 치환, 및/또는 바람직한 숙주 세포 또는 숙주 유기체에 따른 (바람직하지 않은) 번역 후 수정(들) (예, 당화 또는 인산화)을 없애거나 낮추는 치환이 있다. 나노바디®와 인간 VH3-JH 생식계 콘센서스 간의 차이가 있는, FR내 소위 홀마크 잔기를 제외한 특정 아미노산들을, 단백질 구조, 활성 및 안정성을 그대로 유지하는 방식으로, 인간 카운터파트로 변형시킨다. 모체가 되는 야생형 나노바디® 아미노산 서열을 또한 (라마 IGHV 생식계에 대한 나노바디®를 대상으로 한 BlastP 분석에서 상위에 랭킹된 것으로 동정된) 나노바디®의 라마 IGHV 생식계 아미노산 서열과 정렬시키고, 일부 경우에는 라마 생식계로의 돌연변이를 도입하여, 나노바디의 안정성을 높이며, 이를 카멜화라고 한다.
비제한적인 예로, IL17MS04G01의 인간화 및 서열 최적화를 조사하였을 때, IL17MS04G01에서 아미노산 잔기 8개가 인간화/카멜화 목적으로 치환시킬 수 있는 것으로 확인되었고, 아미노산 잔기 1개는 화학적 안정성을 개선시키기 위해 치환될 수 있는 가능성 있는 잔기인 것으로 확인되었다. IL17MS04G01의 서열 최적화 공정에서, IL17MS04G01 버전 12종 (기본 변이체 1종과, 추가적인 변이체 11종)을 구축하였다. 기본 변이체 (IL17MS3010)에는 5개의 치환이 포함된다: A14P, A74S, E81Q, K83R 및 Q108L. 이러한 변화 외에도, E1D, Q18L, T23A 및 A84P 치환을 도입하여, 추가적인 변이체들을 조가하였다. 이것들은 PCR 중첩 연장 방법으로 올리고뉴클레오티드로부터 조립하였다. 구조체들을 E.coli에서 발현시키고, IMAC와 탈염으로 정제하였다.
선택한 갯수의 변이체들을, 표면 플라스몬 공명을 통해 이들의 hIL-17 결합력을 조사하고, 알파스크린으로 이들의 중화 활성을 평가하였다. 또한, 변이체들의 열 안정성을 DSC나 Lightcycler (Roche)를 이용한 열 변동 분석으로 테스트하였다. 이러한 분석에서, 나노바디 변이체들을 여러가지 pH에서 시프로 오렌지의 존재하에 인큐베이션하고, 온도 구배를 적용한다. 나노바디들이 변성되기 시작할 때, 시프로 오렌지가 결합하여 갑자기 형광 측정값이 증가하며, 용융 온도 등을 특정 pH에서 측정할 수 있다. 2회 분석을 수행하며, 1회에서는, 기본 변이체에서의 단일 돌연변이와 조합 돌연변이들을 조사하고, 그 결과를 토대로, 최종 변이체 2종을 제작하여, E1D 돌연변이의 효과를 연구하였다. 이들 돌연변이의 도입은 가능한 피로글루타메이타 형성을 방지한다. 그 결과를 표 23 및 표 24에 요약 개시한다.
표 24, 26, 28, 30, 33 및 34에서:
- "IC50 세포성 분석 hIL-17A" 및 "IC50 hIL17A"은 각각 실시예 9에 기술된 hIL-17A를 이용한 세포성 분석을 지칭함;
- "IC50 세포성 분석 hIL-17F" 및 "IC50 hIL17F"는 각각 실시예 9에 기술된 hIL-17F를 이용한 세포성 분석을 지칭함;
- "IC50 세포성 분석 hIL-17A/F" 및 "IC50 hIL17A/F"는 각각 실시예 9에 기술된 hIL-17A/F를 이용한 세포성 분석을 지칭함.
표 23: 1차 서열 최적화 변이체 IL17MS04G01의 분석 결과
ID 돌연변이(들)
평균 IC50 알파스크린
IL-17A-IL-17RA (pM) 		k off hIL-17A (s-1) koff IL-17A/F (s-1) pH 7에서의 Tm (℃) TSA Tm (℃) DSC
IL17MS04G01 WT 93 1.80 -1.16E-04 2.30 - 1.70E-04 73.13 - 75 74.5
IL17MS3010 기본 A14P, A74S, E81Q, K83R, Q108L 184 1.30E-04 2.17E-04 74.79 74.4
IL17MS3011 기본 + Q18L 139 1.32E-04 2.23E-04 77.28
IL17MS3012 기본 + T23A 101 1.37E-04 2.28E-04 71.47 69.5
IL17MS3013 기본 + A84P 81 1.16E-04 1.85E-04 78.11 76.3
IL17MS3015 기본 + Q18L, A84P 171 79.8
IL17MS3016 기본 + T23A, A84P 177 72.7
IL17MS3017 기본 + Q18L, T23A, A84P 163 1.44E-04 2.42E-04 76.45 76.1
표 24: 2차 서열 최적화 변이체 IL17MS04G01의 분석 결과
ID 돌연변이 평균 IC50 알파스크린 IL-17A-IL-17RA (pM) IC50 세포성 분석 hIL-17A (pM) IC50 세포성 분석 hIL-17A/F (pM) IC50 IL-17A-IL-17RA 경쟁 ELISA (pM) k off hIL-17A (s-1) koff cyno IL-17A (s-1) koff IL-17A/F (s-1) pH 7에서의 Tm (℃) TSA Tm (℃) DSC
IL17MS04G01 WT 93 710 7550 122 1.16E-04 3.20E-04 1.70 - 2.30 E-04 73 - 75 74.5
IL17MS3060 기본 + E1D, Q18L, A84P 81 930 5500 181 1.50E-04 1.54E-04 2.09E-04 81 81.6
IL17MS3061 기본 + E1D, Q18L, T23A, A84P 27 940 8150 1.46E-04 1.81E-04 1.95E-04 76.5 77.6
수용체 차단 분석에서, 변이체들 모두 효능에 현저한 변화없이 충분히 허용가능하였다 (아생형 대비 최대 2배 차이). 또한, 오프-속도 데이타도 야생형과 동일 범위이다. Q18L과 A84P는 Tm에 긍정적인 효과를 가진다. 그러나, T23A는 Tm에 부정적인 효과를 나타내어, 최종 변이체에서 제외시켰다.
2차 분석 (표 24)을 통해, E1D 돌연변이가 Tm 또는 효능에 영향을 미치지 않는다고 결론 내릴 수 있었다. IL17MS3060의 Tm은 WT 보다 7℃ 높고, IL17MS3061의 Tm은 WT 보다 겨우 2.5℃ 높았으며, 이에 IL17MS3060/3015를 최종 변이체로 하였으며, 이의 수용체 차단 분석에서의 효능은 야생형과 비슷하며, 또한 HT-1080 분석을 기반으로 한 세포에서의 hIL-17A 및 h-IL17A/F 효능은 WT와 동일한 범위이다. 인간 IL-17A, 인간 IL-17A/F 및 cyno IL-17A에 대한 IL17MS3060의 오프-속도는 WT의 오프-속도와 비슷하다. IL17MS3060의 프래임워크 영역의 프래임워크 동일성%은, AbM 정의를 기준으로 (Antibody Engineering, Vol 2 by Kontermann & Dubel (Eds), Springer Verlag Heidelberg Berlin, 2010), 88.8%이고, IL17MS3015는 89.9%이다.
표 25: 라이브러리 스크린을 통해 선별한 IL17MS13B03에 대한 서열 최적화된 변이체들의 분석 결과, A-RA = hIL-17A- IL-17RA 알파스크린; F-RC = hIL-17F-IL-17RC 알파스크린
ID 돌연변이
(기본 = A14P, A74S, K83R, Q108L) 		WT 대비, A-RA IC50의 차이 배수 WT 대비, F-RC IC50의 차이 배수 k off (s-1) IL-17A k off (s-1)
IL-17F 		k off IL-17A/F
(s-1) 		pH 7에서의 Tm (℃)
IL17MS 13B03 WT 1.0 1 1.31E - 2.08E-04 7.92E-03 6.21E-05 - 1.25E-04 80
IL17MS3044 기본 + S11L 2.12E-04 7.76E-03 2.53E-04 79
IL17MS3045 기본 + T40A 2.70E-04 7.94E-03 6.16E-04 83
IL17MS3046 기본 + N61A 2.81E-04 8.48E-03 5.15E-04 81
IL17MS3048 기본 + D82aN 2.95E-04 8.74E-03 6.65E-04 81.5
IL17MS3050 기본 + D16G 2.67E-04 8.55E-03 5.75E-04 82
IL17MS3051 N29F 1.4 0.4 2.05E-04 2.16E-03 3.96E-04 75
IL17MS3052 N29S 0.9 0.5 2.89E-04 4.39E-03 5.18E-04 78
IL17MS3053 S30T 1.3 1.2 2.58E-04 9.82E-03 5.20E-04 78
IL17MS3043 기본 + D16G, D79Y 2.76E-04 8.11E-03 5.85E-04 91
IL17MS3049 기본 + T40A, D79Y 1.50E-04 7.57E-03 2.48E-04 91
IL17MS3047 기본 + S11L, D16G, T40A, N61A, D79Y, D82aN 1.1 0.7 2.52E-04 3.48E-03 5.38E-04 94.5
마찬가지로, 비제한적으로, IL17MS13B03 (서열번호 662)의 인간화 및 서열 최적화를 조사하였을 때, IL17MS13B03에서 아미노산 잔기 10개가 인간화를 위해 치환가능하다는 것을 확인하였다. 이 경우, A14P, A74S, K83R 및 Q108L을 포함하는, 기본형 변이체를 제작하였다. 그런 후, 11, 16, 40, 61, 79 및 82aN 위치에서 25 *3= 96으로 치환한 기본형 돌연변이체의 미니-라이브러리를 구축하였다. 탈아미드화 부위인 N29S30을 없애기 위해, 29 및 30번 위치를 무작위화하여, 추가적인 라이브러리 2종을 구축하였다.
라이브러리들을 TG1으로 형질전환하고, 개개 콜로니들을 취하여, 96웰 플레이트에서 배양하였다. 주변세포질 추출물을 제작하여, 서열분석하고, 오프-속도를 스크리닝하였다. 돌연변이들은 오프-속도에 주된 영향을 미치지 않았다. 선택한 구조체들을 정제하여, 알파스크리닝으로 효능을 체크하고, Tm을 결정하였다. 결과는 표 25에 요약 개시한다.
조사한 대부분의 돌연변이들은 13B03의 효능 또는 오프-속도에 주된 영향을 미치지 않지만, N29S와 N29F 돌연변이는 인간 IL-17F에 대한 효능을 개선시키는 것으로 보였다. N29F는 Tm 강하를 야기하므로, N29S를 향후 다룰 대상으로 선정하였다.
다른 돌연변이들은 모두 Tm의 소폭 증가를 나타내었고, 심지어 D79Y 돌연변이는 Tm을 11℃ 증가시켰다. 모든 인간화 돌연변이와 N29S 돌연변이들이 포함된, 2차 돌연변이들을 제작하였다. 또한, Eq 위치에서의 20%의 피로글루타메이트 형성을 방지하기 위해, E1D 돌연변이 효과를 조갛였다. 아울러, F34M 돌연변이도 포함시켰다. 평가는, 단백질 기반의 경쟁 분석과 세포성 분석으로 수용체 차단 효능 측정, 오프-속도와 Tm 결정을 통해 이루어졌으며, 표 26에 나타낸다. 새로운 변이체들에서는 WT에 비해 상당한 Tm 상승이 관찰되었다. 변이체들의 IL-17A 차단 효능은 WT에 상응하였지만, IL-17F에 대한 효능은 상당히 개선되었다. 최종 변이체는 IL17MS3067과 IL17MS3068 (나노바디의 경우 다가 구조체에서 N-말단에 위치한, E1D 돌연변이가 포함됨)이 되었다. AbM 정의를 기준으로, IL17MS3067의 프래임워크 영역의 프래임워크 동일성 %는 88.8%이고, IL17MS3068는 89.9%이다.
또한, 비제한적으로, IL17MS13E02의 인간화 및 서열 최적화를 조사하였을 때, IL17MS13E02에서 아미노산 잔기 8개가 인간화/카멜화를 위해 치환가능한 것으로 확인되었다. IL17M13E02의 1차 서열 최적화 공정에서, 16개의 IL17MS13E02 버전들 (기본형 변이체 + 15개의 추가적인 변이체)이 구축되었다. 기본형 변이체 (IL17MS3018)는 4개의 치환을 포함한다: A14P, A74S, K83R 및 Q108L. 이러한 치환 외에도, L37F, K71R, G75K 및 I76N 치환을 도입하여, 추가적인 변이체들에서 조사하였다. 이것은 PCR 중첩 연장 방법을 이용하여 올리고뉴클레오티드로부터 조립하였다. 선별한 구조체들은 E.coli에서 발현시키고, 향후 분석을 위해 IMAC과 탈염으로 정제하였다.
PTM 부위를 없애기 위해, 4개의 라이브러리를 구축하여, M34, M78, D100c 및 S100D 위치를 랜덤화하였다. 이들 라이브러리들을 TG1으로 형질전환하고, 개개 콜로니들을 취하여, 96웰 플레이트에서 배양하였다. 주변 세포질 추출물을 준비하여, 서열분석한 다음, 오프-속도를 스크리닝하였다. 그 결과를 토대로, 다음과 같은 돌연변이체들을 향후 정제 단백질로서 조사하기 위한 용도로 선별하였다: M34L, M34V, M78L, M78V, S100dT 및 S100dA. 결과는 표 27에 요약 개시한다.
표 26: IL17MS13B03에 대한 2차 서열 최적화 변이체들의 분석 결과; A-RA = hIL-17A- IL-17RA 알파스크린; F-RC = hIL-17F-IL-17RC 알파스크린
ID 돌연변이
(기본 = A14P, A74S, K83R, Q108L) 		IC50 A-RA WT 대비 배수 차이 IC50 F-RC WT 대비 배수 차이 IC50
A-RA 경쟁 ELISA 		IC50
F-RC 경쟁 ELISA 		IC50 세포성 분석 hIL17A (nM) IC50 세포성 분석 hIL17F (nM) IC50 세포성 분석 cyno IL17F (nM) IC50 세포성 분석 hIL17A/F (nM) koff hIL17A(s-1) koff cyno IL17A(s-1) koff hIL17F (s-1) koff cyno IL17F(s-1) koff hIL17A/F(s-1) Tm, pH 7 (℃) Tm DSC (℃)
IL17MS 13B03 WT 1.0 1.0 131 7042 1.34 35 29
+/- 15		 4.32 1.31 -2.08E-04 1.14E-04 7.92E-03 4.69E-03 6.21E-05 -1.25E-04 80 81
IL17MS3066 basic + E1D, S11L, D16G, N29S, T40A, N61D, D79Y, D82aN 0.7 0.3 96
IL17MS3068 basic + S11L, D16G, N29S, F34M, T40A, N61D, D79Y, D82aN 1.2 0.2 99 100
IL17MS3067 basic + E1D, S11L, D16G, N29S, F34M, T40A, N61D, D79Y, D82aN 1.3 0.2 333 2301 0.7 35.0 13 +/- 5 1.8 1.33E-04 1.26E-04 1.38E-03 1.66E-03 1.83E-04 99 100
표 27: IL17MS13E02에 대한 서열 최적화 변이체들의 분석 결과; A-RA = hIL-17A- IL-17RA 알파스크린; F-RC = hIL-17F-IL-17RC 알파스크린
ID 돌연변이(들)
(basic = A14P, A74S, K83R, Q108L) 		IC50 A-RA WT 대비 배수 차이 IC50 F-RC WT 대비 배수 차이 koff hIL-17A
(s-1) 		koff hIL-17F (s-1) Biacore koff IL-17A/F (s-1) PH 7에서의 Tm(℃)
IL17MS13E02 WT 1 1 1.14E-04 2.23E-03 3.97E-05 66
IL17MS3018 basic A14P, A74S, K83R, Q108L 1.13 0.8 9.26E-05 2.67E-03 1.38E-05 67
IL17MS3019 basic + L37F 3.72 4.6 7.45E-04 3.49E-02 3.10E-04 74.39
IL17MS3020 basic + K71R 1.24 1.3 2.84E-05 1.47E-03 <1E-06* 67.34
IL17MS3021 basic + G75K 2.75 0.9 2.16E-04 4.32E-03 6.43E-05 64.02
IL17MS3022 basic + I76N 1.17 0.9 6.41E-05 2.40E-03 9.89E-06 70.24
IL17MS3027 basic + K71R, I76N 1.23 0.6 1.30E-03 70.6
IL17MS3032 basic + K71R, G75K, I76N 1.42 0.5 8.30E-04 72.7
IL17MS3034 M34L 1.68 2.7 1.16E-04 5.96E-03 4.02E-05 63.93
IL17MS3038 M34V 3.2 2.25E-04 1.01E-02 6.82E-05 62
IL17MS3035 M78L 2 1.22 7.59E-05 4.31E-03 3.65E-05 66.47
IL17MS3039 M78V 1.25 2.10E-04 5.15E-03 4.03E-05 66.5
IL17MS3036 S100dT 2.06 2.2 1.32E-04 4.40E-03 4.31E-05 67.71
IL17MS3037 S100dA 1.61 1 1.16E-04 3.67E-03 4.67E-05 68.54
표 28: IL17MS13E02에 대한 2차 서열 최적화 변이체들의 분석 결과; A-RA = hIL-17A- IL-17RA 알파스크린; F-RC = hIL-17F-IL-17RC 알파스크린
ID 돌연변이
(basic = A14P, A74S, K83R, Q108L) 		IC50 A-RA WT 대비 배수 차이 IC50 F-RC WT 대비 배수 차이 IC50 세포성 분석 hIL-17A (nM) IC50 세포성 분석 hIL-17F (nM) IC50 세포성 분석 cyno IL-17F (nM) IC50 세포성 분석 hIL-17A/F (nM) koff hIL-17A
(s-1) 		koff cyno IL-17A
(s-1) 		koff hIL-17F
(s-1) 		Biacore koff cyno IL-17F
(s-1) 		Biacore koff IL-17A/F (s-1) PH 7에서의 Tm(℃) Tm DSC pH 8.8
IL17MS13E02 WT 1 1 1.73 44 +/-22 35 +/-1 1.99 1.14E-04 1.03E-04 2.23E-03 4.60E-02 3.97E-05 66.09 70
IL17MS3069 basic + K71R, G75K, I76N, M78L, S100dA 0.15 75.62 78
IL17MS3070 basic + E1D, K71R, G75K, I76N, M78L, S100dA 0.58 0.15 0.74 18 +/-10 34 -/-33 1.63 6.34E-05 5.85E-05 1.12E-03 1.62E-02 7.82E-05 75.62
IL17MS3071 basic + M34L , K71R, G75K, I76N, M78L, S100dA 0.3 73.55
IL17MS3072 basic + E1D, M34L, K71R, G75K, I76N, M78L, S100dA 0.59 0.3 0.77 27 +/-15 25.2 +/- 23 3.5 73.55
L37F 돌연변이는 알파스크린에서 IL-17A-RA 및 IL-17F-RC에 대한 효과 감소를 나타내었으며, 또한 IL-17F에 대한 오프-속도에 영향을 미쳤다. 그래서, 이 돌연변이는 최종 변이체에 포함시키지 않았다. 그외 인간화 돌연변이들 K71R, G75K 및 I76N은 효능 또는 오프-속도에 주된 영향을 미치지 않았으며, 최종 변이체에 포함시켰다. M34를 V 또는 L로 치환한 경우에는 13E02의 효능을 감소시켰다.
M78L, S100dA를 포함하는, IL17MS3032의 2차 변이체 4종을 제작하였다. 돌연변이 M34L, E1D를 랜덤화하였다. 이들 변이체들에 대한 분석 결과는 표 28에 나타낸다. E1D 돌연변이는 Tm 또는 효능에 전혀 효과가 없었다. 변이체들은 모두 Tm이 WT에 비해 증가되었다 (약 9.5℃ 또는 7.5℃). 변이체들의 효능도 WT에 비해 개선되었으며, M34L 돌연변이를 포함하지 않는 IL17MS3070 변이체가 최상이었다. 따라서, M34L 돌연변이는 최종 변이체에 포함시키지 않았으며, IL17MS3069와 IL17MS3070 (나노바디의 경우에는 다가 구조체의 N-말단에 위치한, E1D 돌연변이를 포함함)가 최종 변이체가 되었다. IL17MS3069의 프래임워크 영역의 프래임워크 동일성%은, AbM 정의를 기준으로 92.1%이고, IL17MS3070은 91 %이다.
마찬가지로, 비제한적으로, IL17MS16A04의 인간화 및 서열 최적화를 조사하여, IL17MS16A04에서 아미노산 잔기 10개가 인간화를 위해 치환가능하다는 것을 확인하였다. 이 경우, A14P, K83R 및 Q108L을 포함하는, 기본형 변이체를 제작하였다. 그런 후, 48, 61, 63, 65, 74, 82a 및 84 위치에서 27 = 128으로 치환한 기본형 돌연변이체의 미니-라이브러리를 구축하였다. 이성체화 부위인 D55S56을 없애기 위해, 55 및 56번 위치를 무작위화하여, 추가적인 라이브러리 2종을 구축하였다. 라이브러리들을 TG1으로 형질전환하고, 개개 콜로니들을 취하여, 96웰 플레이트에서 배양하였다. 주변세포질 추출물을 제작하여, 서열분석하고, 오프-속도를 스크리닝하였다. V61D 및/또는 E63V 돌연변이들을 도입하였을 때, 오프-속도 하락은 관찰되지 않는다. 이들 돌연변이는 연속적인 변이체에 포함시키지 않는다. PTM 라이브러리를 대상으로, 돌연변이 D55G, D55E 및 S56T를 추가로 조사하기로 하였다. 1차로, 몇몇 돌연변이체들을 정제하여, 주로 Tm을 분석하였으며, 그 결과를 표 29에 요약 개시한다.
표 29: IL17MS16A04에 대한 서열 최적화 변이체들의 분석 결과
ID 돌연변이(들)
(basic = A14P, K83R,Q108L) 		IC50 IL-17F-IL-17RC 알파스크린 WT 대피 배수 차이 koff hIL-17F (s-1) koff IL-17A/F (s-1) Tm, pH 7 (℃) Tm (℃) DSC
IL17MS 16A04 WT 1.0 4.05E-04 2.40E-03 69.44 69
IL17MS3040 D55G 9.6 1.48E-03 8.78E-03 64.87
IL17MS3041 D55E 2.2 6.06E-04 4.27E-03 66.53
IL17MS3042 S56T 8.6 1.21E-03 5.00E-03 70.68
IL17MS3055 기본 + D65G, S82aN 4.93E-04 3.32E-03 68.6
IL17MS3054 기본 + G74S, A84P 4.59E-04 3.08E-03 72.34 75.5
IL17MS3056 기본 + I48V, G74S 5.14E-04 2.88E-03 63.62
특정 기전, 가설 또는 설명으로 한정되지 않으나, 본 데이타를 토대로, D55E가 친화성 측면에서 최상의 돌연변이인 것으로 추정되었지만, Tm을 소폭 하락시켰다. D55E는 향후 추가로 조사하는 보존 돌연변이이다. D55G는 양호한 후보인자가 될 만큼 효능이 좋지 않으며, Tm도 대폭 하락되어, 탈락시켰다. S56T는 Tm 측면에서는 최적의 돌연변이지만, 효능 측면에서는 그리 좋은 편은 아니다.
아울러, 특정 기전, 가설 또는 설명으로 한정되는 것은 아니나, 본 데이타를 토대로, IL17MS3056이 IL17MS3054 (G74S 돌연변이를 IL17MS3056과 공통적으로 포함함)에서는 나타나지 않는 Tm 하락을 나타낸다는 점에 주목하였다. A84P 돌연변이는 일반적으로 안정성을 높이기 때문에, Tm 하락은 I48V로 인한 것일 가능성이 있다. 이를 좀더 조사하였다. 2차로, 고정 돌연변이(기본 + D65G, G74S, S82aN 및 A84P)와 랜덤 돌연변이 (E1D, I48V, D55E, S56T)를 가진 변이체 5종을 구축하여, 분석하였으며, 그 결과는 표 30에 나타낸다.
2차 변이체에 대한 분석을 통해, I48V 돌연변이가 Tm 하락을 야기하며, 효능에도 부정적인 영향을 미친다는 것을 확인하였다. 그래서, 이 돌연변이는 최종 변이체에서 제외시켰다. E1D 돌연변이는 효능 또는 Tm에 영향을 미치지 않았다. 변이체들 모두는 효능이 WT에 비해 감소되었지만, IL17MS3063이 1가 포맷으로 효능 측면에서 최상이 결과를 제공하는 것으로 생각되었다. 이는 세포성 분석에서는 관찰되지 않았지만, 이 분석이 알파스크린 보다 민감성이 낮다. IL17MS3063의 Tm은 WT 대비 약간 높았다. 따라서, IL17MS3063 (N-말단일 경우) 또는 (1가 구조체에서 N-말단이 아닌 경우) E1D 돌연변이 없이 이를 기반으로 한 빌딩 블럭을, 추가적인 조사를 위해, 본 발명의 바람직한 아미노산 서열로 선택하였다. IL17MS3063의 프래임워크 영역의 동일성%은, AbM 정의를 기준으로 86.5%이고, E1D 돌연번이가 없는 IL17MS3063은 87.6%이다.
표 30: IL17MS16A04에 대한 2차 서열 최적화 변이체들의 분석 결과
ID 돌연변이
(basic = A14P, A74S, K83R, Q108L) 		IC50 IL-17F-IL-17RC 알파스크린 WT 대비 배수 차이 IC50 세포성 분석 hIL-17F (nM) IC50 세포성 분석 cyno IL-17F (nM) IC50 세포성 분석 hIL-17A/F (nM) koff IL-17F (s-1) koff cyno IL-17F
(s-1) 		koff IL-17A/F
(s-1) 		PH 7에서의 Tm(℃) Tm (℃) DSC
IL17MS 16A04 WT 1.0 28 +/-31 7.30 +/- 0.1 8.0 3.82 - 4.10E-04 6.36E-04 2.39 - 2.50E-03 69.4 69.0
IL17MS3059 Basic + E1D, I48V, D55E, D65G, G74S, S82aN, A84P 6.7 66.9
IL17MS3062 Basic + I48V, D55E, D65G, G74S, S82aN, A84P 7.4 67.7
IL17MS3063 Basic + E1D, D55E, D65G, G74S, S82aN, A84P 3.7 14 +/-13 34.2 +/- 34 1.6 6.55E-04 1.11E-03 2.65E-02 71.0 74.5
IL17MS3064 Basic + E1D, I48V, S56T, D65G, G74S, S82aN, A84P 30.3 68.9
IL17MS3065 Basic + E1D, S56T, D65G, G74S, S82aN, A84P 12.7 73.1
실시예 24: ALB11 HLE를 구비한, 서열 최적화된 1가 항-IL-17 나노바디의 제작 및 발현 수준 분석
바람직한 서열 최적화된 변이체들을 모든 가능한 조합 A-F / F-A, X-F/ F-X 및 X-X로 재설정하고, 2개의 9GS-링커로 ALB-HLE를 가운데 연결시켰다. 또한, 백업으로서, A-단독 포맷 2개를 제작하였다 (표 31). 구조체들을 피키아 패스토리스에서 텍 없이 생산하여, MEP 하이퍼셀 또는 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 통해 정제한 다음, 탈염하였다. 카피 수 스크린을 수행하고, 최대 카피 수를 가진 클론으로부터 발현 수율을 추정하였다 (표 31).
표 31: ALB11 HLE를 구비한, 정제한, 서열 최적화된 1가 항-IL-17 나노바디의 발현 수준 분석 결과
나노바디 ID 구조체 발효기에서의 추정 수율 (g/L)
IL17MS3076 IL17MS3070-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 1.5
IL17MS3077 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3069 1.5
IL17MS3078 IL17MS3070-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3069 >1.5
IL17MS3079 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 1
IL17MS3080 IL17MS3060-9GS-ALB11 0.5
IL17MS3081 ALB11(with E1D)-9GS-IL17MS3015 <<0.5
IL17MS3082 IL17MS3060-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) <0.5
IL17MS3083 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3015 <0.5
IL17MS3084 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 1.5
IL17MS3085 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) 1
IL17MS3086 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3069 1.5
IL17MS3087 IL17MS3070-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) 1
실시예 25: 인간 IL-17A 또는 IL-17F를 이용한 경쟁 ELISA에서의, ALB11 HLE를 구비한, 서열 최적화된 다가 항-IL-17 나노바디의 차단력 분석
실시예 17에 기술된 바와 같이, IL-17A-IL-17RA 및 IL-17F-IL-17RC의 경쟁적인 ELISA로 효능을 체크하였다. IC50 값을 표 32에 나타낸다.
표 32: 경쟁 ELISA에서의, ALB11 HLE를 구비한, 정제한, 서열 최적화된 다가 항-IL-17 나노바디의 차단력 결과; NI = 비-저해, nd = 측정 안 됨
특이성 나노바디 ID 모체가 되는 N-말단 나노바디 중간 나노바디 모체가 되는 C-말단 나노바디 IC50 경쟁 ELISA IL-17A-IL-17RA (pM) IC50 경쟁 ELISA IL-17F-IL-17RC (pM)
X-X IL17MS3076 13E02 ALB11 13B03 64 149
X-X IL17MS3077 13B03 ALB11 13E02 62 153
X-X IL17MS3078 13E02 ALB11 13E02 58 143
X-X IL17MS3079 13B03 ALB11 13B03 56 184
A IL17MS3080 04G01 　 ALB11 140 NI　
A IL17MS3081 ALB11 　 04G01 nd nd
A-F IL17MS3082 04G01 ALB11 16A04 43 100
F-A IL17MS3083 16A04 ALB11 04G01 141 99
F-X IL17MS3084 16A04 ALB11 13B03 29 16
X-F IL17MS3085 13B03 ALB11 16A04 40 20
F-X IL17MS3086 16A04 ALB11 13E02 54 13
X-F IL17MS3087 13E02 ALB11 16A04 88 23
X mAB03 　 　 　 50 17
A mAB02 　 　 　 1309 NI
실시예 26: HSA 존재 또는 부재 하의, 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F를 이용한 세포성 분석에서, ALB11 HLE를 구비한 정제한 서열 최적화된 다가 항-IL-17 나노바디의 차단 활성
hIL-17A, hIL-17F, hIL-17A/F, cIL-17A, 및 cIL-17F에 의한 HT-1080에서의 IL-6 방출 유도를 농도-의존적으로 저해하는 지를, ALB11 HLE를 구비한 정제한 서열 최적화된 다가 항-IL-17 나노바디 5종을 대상으로 실시예 18 및 20에서와 같이 HT-1080 바이오분석으로 조사하였다.
그 결과, 테스트한, 정제한 서열 최적화된 다가 항-IL-17 나노바디 5종이, hIL-17A, hIL-17F, hIL-17A/F, cIL-17A, 및 cIL-17F를 저해하며, 나노몰 이하 내지는 한자릿 수의 나노몰 수준의 비슷한 효능을 보이는 것을 확인하였다 (표 33). 효능과 효과는 항-IL-17A 및 항-IL-17A/F mAb 참조 화합물에서의 결과와 비슷하거나 보다 양호하였다. 아울러, 배양물에 100 μM HSA 첨가가, 정제한 서열 최적화된 다가 항-IL-17 나노바디의 효능에 유의한 영향을 미치지 않았다 (표 34 vs. 표 33).
표 33: HSA 부재 시, HT-1080 바이오분석에서의 포맷화된 서열 최적화된 항-IL-17 나노바디의 IC50 값. 결과는 N회 실험의 평균 ± SD로 나타낸다. N= 2 또는 *N=1.
나노다비 또는 대조군 구조체 세포 분석 HT-1080 (세포수 1500)
IC50 hIL17A 1)
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17F 2)
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17A/F 3) (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17A 4) (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17F 5) (nM) Emax
(%)
IL17MS3079 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 0.35 ± 0.08 95 ± 2 5.4 ± 3 82 ± -3 0.59 ± 0.25 83 ± 26 0.35 ± 0.04 97 ± 1 4.5 ± 4 88 ± 20
IL17MS3084 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 0.44 ± 0.03 94 ± 1 5.5 ± 3 85 ± 6 1.66 ± 1.2 82 ± 23 0.37 ± 0.06 97 ± 2 5.0 ± 2 89 ± 16
IL17MS3085 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) 0.54 ± 0.16 94 ± 1 5.8 ± 3 87 ± 4 0.98 ± 0. 5 83 ± 21 0.44 ± 0.04 95 ± 5 6.7 ± 1 90 ± 11
IL17MS3086 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3069 0.50 ± 0.13 95 ± 1 3.4 ± 1 84 ± 7 1.85 ± 0.7 87 ± -23 0.35 ± 0.08 96 ± 1 3.6 ± 3 94 ± 11
나노다비 또는 대조군 구조체 세포 분석 HT-1080 (세포수 1500)
IC50 hIL17A 1)
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17F 2)
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17A/F 3) (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17A 4) (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17F 5) (nM) Emax
(%)
IL17MS3087 IL17MS3070-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) 0.44 ± 0.01 94 ± 2 5.8 ± 1 84 ± 5 1.04 ± 0.2 87 ± 24 0.39 ± 0.04 97 ± 5 6.7 ± 2 95 ± 5
mAb03 mAb 0.89* 94 7.1 ± 0.5 88 ± -9 1.93* 102 2.8 ± 1.6 93 ± 1 6.3 ± 1 96 ± 18
mAb02 mAb 0.74* 90 　 　 0.95* 60 　 　 　 　
1) 최종 리간드 농도 1 nM;
2) 최종 리간드 농도 15 nM;
3) 최종 리간드 농도 5 nM;
4) 최종 리간드 농도 15 nM;
5) 최종 리간드 농도 1 nM;
표 34: HSA 존재 시, HT-1080 바이오분석에서의 포맷화된 서열 최적화된 항-IL-17 나노바디의 IC50 값. 결과는 N회 실험의 평균 ± SD로 나타낸다. N= 2 또는 *N=1.
나노다비 또는 대조군 구조체 세포 분석 HT-1080 (세포 수 1500)
IC50 hIL17A
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17F
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17A/F (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17A (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17F (nM) Emax
(%)
IL17MS3079 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 0.50 ± 0.03 91 ± 1 8.5 ± 1 87 ± 2 1.32 ± 0.3 95 ± 11 0.40* 100 4.0* 89
IL17MS3084 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3068 0.55 ± 0.16 93 ± 0 5.6 ± 5 89 ± 3 1.14 ± 0.9 96 ± 18 0.30* 98 1.1* 97
IL17MS3085 IL17MS3067-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) 0.73 ± 0.21 92 ± 2 6.6 ± 6 89 ± 4 1.58 ± 1.4 90 ± 9 0.33* 98 8.0* 80
IL17MS3086 IL17MS3063-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3069 0.70 ± 0.20 93 ± 0 6.0 ± 4 91 ± 4 2.52 ± 0.09 94 ± 15 0.33* 98 1.2* 97
나노다비 또는 대조군 구조체 세포 분석 HT-1080 (세포수 1500)
IC50 hIL17A
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17F
(nM) 		Emax
(%) 		IC50 hIL17A/F (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17A (nM) Emax
(%) 		IC50 Cyno IL17F (nM) Emax
(%)
IL17MS3087 IL17MS3070-9GS-ALB11-9GS-IL17MS3063 (E1D 비포함) 0.57 ± 0.16 91 ± 4 6.3 ± 4 83 ± 9 1.54 ± 1.3 88 ± 16 0.35* 94 7.0* 70
mAb03 mAb 0.89* 90 8.3 ± 1 90 ± 6 1.67* 104 2.68* 90 1.9* 96
mAb02 mAb 1.42* 88 9.21* 72
실시예 27: ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화된 항-IL-17 나노바디의, 인간 혈청 알부민에 대한 결합성
ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화 항-IL-17 나노바디 선별종 5종을 대상으로, 인간 혈청 알부민과의 결합성에 대한 오프-속도를 Biacore에서 표면 플라스몬 공명으로 측정하였다 (표 35). 나노바디들 모두 야생형의 포맷화된 항-IL-17 나노바디에 상응하는, 5.1E-03 내지 4.4E-03 s-1의 비슷한 오프-속도 범위를 나타내었다.
표 35: ALB11 HLE 항-IL-17 포맷화된 서열 최적화 나노바디의 HSA 친화성
특이성 나노바디 ID koff (s-1)
X-X IL17MS3079 4.40E-03
F-X IL17MS3084 4.60E-03
X-F IL17MS3085 4.60E-03
F-X IL17MS3086 5.00E-03
X-F IL17MS3087 5.10E-03
실시예 28: 재조합 인간 IL-17A 및 IL-17F를 투여한 마우스에서의, ALB11 HLE를 구비한 정제한 서열 최적화 다가 항-IL-17 나노바디들의, 생체내 차단 활성
본원에 기술한 1가 및 다가 항-IL-17 나노바디들은 마우스 IL-17A와 IL-17F 둘다를 인지하지 않지만, 마우스 세포는 인간 재조합 IL-17A 및 IL-17F에 반응을 나타낸다 (WO2007/070750, 실시예 7). 아울러, 재조합 IL-17A 또는 IL-17F를 정상 마우스에 투여하면 케모카인 CXCL8 (케라티노사이트-유래 케모카인의 경우 aka KC)의 방출을 유도하여, 지정된 시간대에 혈청에서 측정할 수 있다.
ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화 항-IL-17 나노바디, 즉, 나노바디의, 재조합 인간 IL-17A (rhIL-17A) 또는 재조합 인간 IL-17F (rhIL-17F) 주입한 후 유도되는 생체내 혈청 KC에 대한 차단력을 마우스에서 조사하였다. 마우스 5마리로 구성된 각 그룹에 100 ㎕ PBS를 단독으로 (모의군 PBS) 또는 재조합 인간 IL-17A 또는 IL-17F를 10 ㎍/mouse로 첨가하여, 피하 (s.c.)로 주입하였다. I:-17을 주사하기 4시간 전에, 이소형 대조군 항체, 대조군 나노바디 (ALB11) 또는 항-인간 IL-17 나노바디 IL17MS3086 (100 ㎍, 28.5 ㎍, 8.1 ㎍, 또는 2.3 ㎍/mouse)을 정맥내 (i.v.)로 마우스에 처리하였다. 항-IL-17A 단일클론 항체 mAb02, 항-IL-17F 단일클론 항체 mAb B-F60, 및 2중 특이성의 항-IL17A/F 단일클론 항체 mAb03을 비교 대조군으로 사용하였다. 원활한 비교를 위해 항체 대 나노바디를 등몰 농도의 용량으로 사용하였다 (항체 350 ㎍, 100 ㎍, 28.5 ㎍ 또는 8.1 ㎍). rhIL-17A 투여 후 2시간째와 rhIL-17F 투여 후 4시간째에, 채혈하고, 마우스를 희생시켰다. 혈청을 수집하여, ELISA로 KC 농도를 분석하였다.
rhIL-17A 및 rhIL-17F는 KC를 유도하여 농도를 증가시켰지만, 이는 rhIL-17A에서 훨씬 활발하였다 (도 12). IL17MS3086 나노바디는 rhIL-17A 및 rhIL-17F의 마우스 혈청에서의 KC 유도력을 차단하였다. 차단은, rhIL-17A의 경우, 명확하게 농도-의존적이었다 (도 12). 테스트한 모든 용량에서, IL17MS3086 나노바디는, rhIL-17F에 의해 마우스 혈청에서 유도되는 KC를, 등가 용량의 mAb03 또는 mAb B-F60에 비해 강하게 차단하였다. 부가적으로, 나노바디에 의한 저해는, rhIL-17A에 대해 mAb03 또는 mAb02에서 확인되는 등가 용량에서, 보다 우수하였으며, 예를 들어, IL17MS3086 용량 8.1 ㎍이 혈청내 rhIL-17A-유도성 KC를 현저하게 중화하는 반면, 동일 용량에서 mAb02 또는 mAb03는 그렇지 않았다 (도 12).
실시예 29: KinExA 기법을 이용한 ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화 항-IL17 나노바디의 친화성 결정
인간 및 시노몰구스 원숭이 IL-17A 및 IL-17F에 대한 - ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화된 Myc-HIS 테깅된 변이체 항-IL-17 나노바디 IL17MS3086 - IL17MS3091 (서열번호 838; 도 8)의 상대적인 친화성을, 액상 평형 해리 상수 (Kd)를 정하기 위한 KinExA® (Kinetic Exclusion Assay) 방법을 이용하여, 평가하였다. 카이네틱 결합 상수 Kon와 Koff는 결정되지 않았다.
IL17MS3091에서 관찰되는 Kd 평균 값과 범위 (표 36)는, 모체인, 포맷화된 서열 최적화 항-IL-17 나노바디 IL17MS3086이, 액상에서, IL-17A 및 IL-17F에 매우 강한 친화성 (한자리 수 pM 내지 pM 미만)으로 결합하며, IL-17A에 대한 친화성이 약간 더 높다는 것을 시사해준다. 아울러, 인간 및 시노몰구스 재조합 사이토카인들에서 관찰되는 Kd 값들 간에는 유의한 차이가 없었다.
표 36: KinExA에 의한 IL17MS3091에서 관찰되는 Kd 값의 범위와 평균
사이토카인 Kd - (picoM)
범위 평균
저 - 고
인간 IL-17A 0.094 - 1.02 0.4
시노몰구스 IL-17A 0.476 - 3.14 1.37
인간 IL-17F 0.146 - 3.16 1.14
시노몰구스 IL-17F 0.360 - 11.2 2.82
비교하면, Biacore로 측정한, hIL-17A에 대한 mAb03의 결합 친화성은 15 pM이고, hIL-17F의 결합 친화성은 10 pM이었다. 그래서, 클래스 3 ISV와 클래스 4 ISV의 조합을 가진 폴리펩타이드가 기존 항체들 보다 우수한 결합 친화성을 나타낸다.
실시예 30: ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화 항-IL17 나노바디의 종 교차-반응성
IL17MS3086의 테깅된 버전인 IL17MS3091을 대상으로, 다른 종의 IL17A 및 IL17F에 대한 결합성을, 실시예 11에 기술된 바와 같이, 결합성 ELISA를 이용하여 평가하였다. IL17MS3091은 마모셋 및 시노몰구스 IL17A 및 IL17F에 대해 결합성을 나타낸다. 마우스, 랫 및 기니아 피그 기원의 IL-17A에 대한 결합성도, 마우스 및 랫 기원의 IL-17F에 대한 결합성에 대해서도, 신호가 검출되지 않았다 (표 37 및 38).
표 37: 결합성 ELISA로, 여러가지 종 유래의 IL17A에 대한 IL17MS3091의 결합에 대해 수득한 OD 값, 양성 대조군과 음성 대조군의 신호들도 표시한다.
샘플 인간
IL17A 		cyno
IL17A 		마모셋
IL-17A 		마우스
IL17A 		랫
IL17A 		기니아 피그
IL17A
음성 대조군 0.018 0.011 0.013 0.015 0.010 0.011
양성 대조군 3.979 4.085 4.122 3.628 3.641 - *
IL17MS3091 1.523 2.225 2.517 -0.005 0.000 0.103
* 기니아 피그 IL-17A의 경우에는 이용가능한 대조군이 없음
표 38: 결합성 ELISA로, 여러가지 종 유래의 IL17F에 대한 IL17MS3091의 결합에 대해 수득한 OD 값.
샘플 인간
IL17F 		cyno
IL17F 		마모셋
IL17F 		마우스
IL17F 		랫
IL17F
음성 대조군 0.017 0.021 0.020 0.046 0.037
양성 대조군 3.564 3.981 3.550 3.549 3.571
IL17MS3091 0.741 1.314 0.573 -0.034 -0.027
실시예 31: ALB11 HLE를 구비한 포맷화된 서열 최적화 항-IL17 나노바디의 특이성
나노바디의, 인간 IL-17B, IL-17C, IL-17D 또는 IL-17E에 대한 결합력을, 실시예 12에 기술된 바와 같이, SPR로 측정함으로써, IL17MS3086의 오프-타겟 결합성을 평가하였다.
대조군 항체들은 모두 각각의 타겟에 결합한 반면, IL17MS3086는 인간 IL-17B, IL-17C, IL-17D 또는 IL-17E에 결합하지 않았다.
실시예 32: 시노몰구스 암컷 원숭이에서의 IL17MS3086의 약동학적 프로파일
시노몰구스 원숭이에게 1회 정맥내 (i.v.) 볼루스 투약 (2 및 6 mg/kg)한 후, 그리고 1회 피하 (s.c.) 투약 (6 mg/kg)한 후, 시노몰구스 암컷 원숭이에서, IL17MS3086의 약동학적 프로파일을 확인하였다. IL17MS3086은 경로 별, 그리고 투약 농도 별로, 건강한 나이브 암컷 시노몰구스 원숭이 3마리에게 투여하였다.
약동학적 데이타 분석을 위해, 기술 통계를 경로 별, 투약 그룹 별 및 샘플링 시간대 별로 계산하였다.
각각의 혈장 농도-시간 프로파일들을 WinNonlin Pro 5.1 (Pharsight Corporation, USA; 2006)을 이용하여 비구획 분석 (non-compartmental analysis: NCA)을 수행하였다. 곡선 하 면적 (AUC)을 라인 업/log 다운 규칙 (lin up/log down rule)을 이용하여 추산하였다. LLOQ 값들은, LLOQ (정량 하한치) 보다 높은 2개의 값들로 구성된 경우에는 이를 0으로 설정하고, 그 외에는 생략 (missing)으로 처리하였다.
다음과 같은 주요 약동학적 파라미터들을 추정하였다: i.v. 투여 후 0시간대 (C0)의 혈장 농도 또는 s.c. 투여 후 최고 혈장 농도 (Cmax); 무한대로 외삽한 혈장 농도-시간 곡선 하 면적 (AUCinf), (대략적인) 총 체내 소거율 (i.v. 데이타는 CL, s.c. 데이타는 CL/F), i.v. 데이타 경우에서만 정상 상태(steady-state)에서의 분포 용적 (Vdss), 최종 반감기 (terminal half-life) (t1/2), 및 절대 s.c. 생체이용성 (F).
i.v. 데이타의 경우, 0시간대 농도 (C0)는 처음 2개의 데이타 포인트에 기반한 역-계산으로 추산하였다. 최종 소거 반감기 (t1/2)는 최종 단계 (terminal phase)의 로그-선형 영역의 비-0(zero) 농도 -시간 데이타의 로스-선형 회귀를 이용하여 자동적으로 (베스트-핏) 계산하였다. λz 결정에, 최소 3개의 포인트들을 참작하였다.
동물 한마리, 즉, 6317 (i.v., 2 mg/kg)에서는, 호모기니어스 전기화학발광 브릿징 MSD 분석으로 평가된, 양성 ADA 역가는, 약동학적 프로파일 (투약 후 21일부터 계속)에서의 슬로프 (slpoe) 변화와 상관성을 나타내었다. 이에, 이 동물은 후속적인 PK 데이타 분석에서 제외시켰다.
도 13에, 1회 i.v. 2 및 6 mg/kg 볼루스 투약, 또는 1회 s.c. 6 mg/kg 투약을 각각 수행한 후, 암컷 시노몰구스 원숭이에서의 IL17MS3086의 평균 혈청 농도-시간 프로파일을 도시한다.
표 39는 주요 약동학적 파라미터들과, 암컷 시노몰구스 원숭이에서의, 1회 i.v. 2 및 6 mg/kg 볼루스 투약, 또는 1회 s.c. 6 mg/kg 투약을 각각 수행한 이후 IL17MS3086의 해당 기술 통계치를 열거한다.
표 39. 암컷 시노몰구스 원숭이에서의, 1회 i.v. 2 및 6 mg/kg 볼루스 투약 (상단), 또는 1회 s.c. 6 mg/kg 투약 (하단)을 각각 수행하였을 때, IL17MS3086의 주요 약동학적 파라미터들 (n=2 또는 3).
1회 정맥내 (i.v.) 투여
투여량 수준 　 C 0 AUC inf CL Vd ss t 1/2
(㎍/ml) (day*㎍/ml) (ml/day/kg) (ml/kg) (일)
2 mg/kg N 2 2 2 2 2
평균 46.8 218 9.17 81.0 6.05
SD NC NC NC NC NC
최소 46.2 216 9.10 78.5 5.39
중앙값 46.8 218 9.17 81.0 6.05
최대 47.4 220 9.24 83.4 6.71
CV% NC NC NC NC NC
6 mg/kg N 3 3 3 3 3
평균 181 866 6.99 64.4 6.86
SD 17.5 102 0.774 9.02 1.15
최소 168 796 6.11 58.9 5.72
중앙값 174 818 7.34 59.6 6.86
최대 201 983 7.53 74.8 8.01
CV% 9.67 11.8 11.1 14.0 16.7
NC, 계산 안됨
1회 피하 (i.v.) 투여
투여량 수준 　 C max T max AUC inf CL/F t 1/2
(㎍/ml) (일) (day*㎍/ml) (ml/day/kg) (일)
6 mg/kg N 3 3 3 3 3
평균 62.7 1.1 667 9.07 6.79
SD 10.3 0.858 76.2 0.973 0.246
최소 52.6 0.292 623 7.95 6.61
중앙값 62.3 1 623 9.63 6.71
최대 73.2 2 755 9.64 7.07
CV% 16.4 78.2 11.4 10.7 3.62
i.v.로 볼루스 투여하였을 때, IL17MS3086의 약동학적 프로파일은 2개의 지수적 감소(bi-exponential decline)를 나타내었다. 정맥내 투여하고 첫째 날에, 분산기(distribution phase)가 명확하게 나타났다. 그 후, IL17MS3086 혈청 농도는 일원식 지수적 양상 (mono-exponential fashion)으로 감소되었다. 입수된 데이타는 이들 건강한 원숭이에서 타겟 매개 배치 (target mediated disposition)를 시사하지 않는다.
i.v.로 투여하였을 때, 용량 증가에 따른 IL17MS3086 노출성 (AUCinf)도 증가하였다. 노출 증가는 2 - 6 mg/kg 용량 범위에서의 용량 비례 보다 약간 높아 (AUC x 3.96 vs 용량 x 3), 2 및 6 mg/kg i.v.투여에서의 CL 값은 각각 9.17 및 6.99 ml/kg/day이었다. 각각의 Vdss 값은 81.0 및 64.4 ml/kg이었는데, 이는 조직으로의 분포를 시사해준다. t1/2는 약 6 - 7일 이었으며, 시노몰구스 알부민의 혈청 반감기와 비슷하였다.
s.c.로 투여하였을 때, Cmax는 투여한지 1일째에 발생하였다. 흡수 조절 카이네틱스 (absorption controlled kinetics) (t1/2 약 6.8 versus 6 - 6.8 d)에 대한 증거는 s.c.로 투여하였을 때에는 명확하지 않았다. s.c.에서의 절대 생체이용성은 77%로 추산되었다.
실시예 33: 콜라겐-유도성 시노몰구스 원숭이 모델에서의 항-IL-17 A/F 나노바디의 생체내 효능
콜라겐-유도성 관절염 (CIA)에 대한 시노몰구스 원숭이 모델을 사용하여, IL17MS3086의 생체내 효능을 평가하였다. 간략하게는, 3-6세의 중국 태생의 암컷 시노몰구스 원숭이에게 케타민 염산염 (Kamud Drugs Pvt., Ltd 50 mg/ml)을 근육내 주사하여 마취한 다음, 소의 II형 콜라겐/프레운드 완전 보강제로 등 부위 19곳과 꼬리 기부 (tail base) 1곳에 피하적으로 감작시켰다. 감작화 과정은 실험 21째에 반복하였다. 1차 감작화한 당일과, 그로부터 1주일째에, IL17MS3086 (9-10 동물/그룹)을 10 mg/kg 또는 2.8 mg/kg으로 피하로 투여하였다. 선정한 이들 2가지 용량은, 비교 대조군으로 사용하였으며 10 mg/kg으로 피하 투여한 2중 특이성의 항-IL17A/F 단일클론 항체 mAb03에 대해, 등가 용량 (10 mg/kg)이거나 등가 몰 용량 (2.8 mg/kg)에 해당된다. 부가적으로, 음성 대조군 (28일까지는 동물 9마리, 그 이후로는 8마리)과 양성 대조군 (2마리)을 포함시켰다. 음성 대조군 동물에는 제형의 완충액을 피하 투여하였고, 양성 대조군에는 항-IL-6R 단일클론 항체인 Tocilizumab (RoActemra®)을 10 mg/kg으로 정맥내 투여한 다음 동일 스케줄에 따라 수행하였다. Tocilizumab은 과거 비슷한 CIA 시노몰구스 원숭이 모델에서 관절염 관련 변화들을 효과적으로 감퇴시킨다는 것이 입증된 바 있다 (Uchiyama et al, 2008; Biol. Pharm. Bull, 31(6): 1159-1163).
모든 그룹의 동물들 모두는, 8주간 진행되는 실험 전기간 동안 매일 적어도 1회 이상 관찰하였고, 이후 모두 부검하였다. 관절염 증상들은 육안 평가 시스템과 방사선 촬영법을 이용하여 평가하였다. 아울러, 염증 파라미터인 C-반응성 단백질 (CRP)을 정기적으로 모니터링하였다. 각 시간대에 각 동물에 행해진 여러가지 평가를, 표 40에 요약 개시한다.
표 40. 시노몰구스 원숭이 CIA 실험의 최종 평가 결과 (Measured endpoint)
최종 결과 시간대 방법
관절염 순응: 감작전 -4일
투약 기간: 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56일		 중수지절 관절, 근위지 절간 관절 및 원위지 절간 관절 및 손목, 발목, 팔꿈치와 무플 관절의 붓기를 맹검으로 평가하여, 다음과 같이 점수를 매겼다: 0 = 이상 없음, 1 = 육안으로는 붓지 않았지만, 촉감으로는 확인할 수 있음, 2 = 육안으로 판단시 약간 부었으며, 촉감으로 확인할 수 있음, 3 = 육안으로 판단시 확실하게 부었으며 관절을 완전히 굽힐 수 있음, 4 = 육안으로 판단시 활식하게 부었으며 관절을 완전히 굽힐 수 없음, 5 = 관절이 경직됨. 각 동물의 관절염 수치는 각각의 관련의 붓기 점수의 총합이다.
전체적인 상태 순응: 감작전 -4일
투약 기간: 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56일		 각 동물의 전반적인 상태는 다음과 같이 평가하였다: 0 = 이상 없음, 1 = 손가락으로 사육장의 바에 매달리기 어려움, 2 = (손목을 이용하여) 손가락으로 사육장의 바에 매달리지 못함, 3 = 앞다리 또는 뒷다리를 이용해서만 움직임, 4 = 웅크림, 5 = 비정상적인 자세.
X선 검사 순응: 감작전 -4일
투약 기간: 28, 56일		 동물을 케타민 염소산염으로 마취시킨 상태로, X선 TV 시스템 (DREX-WIN64, Toshiba Medical Systems Corporation)을 이용하여, X선 이미지를 촬영함. 그런 후, 이미지들을 조사하여, 손과 발의 관절들의 상태를 확인하였다 (첫번째 손가락을 제외한, 모든 손가락의 중수지절 관절, 근위지 절간 관절 및 원위지 절간 관절 - 동물 당 관절 48개). 관절 사이 공간이 좁아졌거나 및/또는 퇴화된 관절 각각에는 1점을 부가하였다. 마찬가지로, 뼈 부식 또는 구조적인 관절 파괴가 있는 경우, 관절에 1점을 부가하였다. 각 파라미터의 총 점수를 산정하였다.
체중 순응: 감작전 -1일
투약 기간: 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56일		 동물 모두 전자 체중계로 체중을 측정하였다 (HP-40K, A&D Co., Ltd.)
임상 신호 매일 실험 전 기간 동안 모든 동물들에서 임상 신호와 사망율을 관찰하였다. 행동, 의식, 자세, 신경학적 검사, 호흡, 체온, 심박, 변, 뇨, 구토/타액 및 피부/털/점액을 필요에 따라 관찰하였다.
혈중 CRP 농도 순응: 감작전 -6일
투약 기간: 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56일
 혈청내 CRP 농도를 자동 분석기 (JCA-BM6070, JEOL Ltd.)를 이용하여 라텍스 탁도계 면역분석법으로 측정하여, mg/dL로 표시하였다.
조직병리학적 상태 57일째, 부검 수득한 후, 절개하기 전에, 수근과 족근 관절 및 손가락 피부를 가위로 잘라내, 10% 중성의 완충화된 포르말린 중에 고정하였다. 에탄올에서 탈지방화하고, EDTA 탈칼슘화 용액에서 탈칼슘화한 다음, 관절을 파라핀으로 함침시키고, 조직 절편으로 자르기 위해 준비하였다. 이후, 조직 절편을 헤마톡실린-에오신 및 사프라닌-O로 염색한 다음, 현미경으로 검경하였다.
소의 II형 콜라겐을 이용한 감작화는 점진적인 관절 강직화와 붓기를 효과적으로 유도하여, 음성 대조군 동물에서의 관절염 점수로 측정시, 56일째에 최대에 도달하였다. 이와는 대조적으로, IL17MS3086, mAb03 및 양성 대조군을 처리한 동물은, 관절염 점수에 유의한 (p<0.01) 감소가 나타났으며 (도 14), 이와 병행하여 혈청내 CRP 농도도 약간 감소되었지만, 이 수준은 양성 대조군 동물의 수준 범위로까지는 감소되지 않았다 (도 15).
추가적으로, 실험 종료시, 이상이 생긴 관절을 방사선 촬영으로 검사한 결과, IL17MS3086-처리가, 관절염의 홀마크인(Van der Heijde et al., 1995; J. Rheumatol. 22(9): 1792-1796), 뼈 부식과 구조적인 관련 파괴를 상당히 개선시키고 (Score B) (p<0.01), 관절 공간 협소화를 낮은 수준으로 개선시키는 것으로 (Score A) 나타났다 (도 16). 관절의 병리학적 변화를 예방하는 IL17MS3086의 효능은, 이후의 부검을 통한 관절의 조직학적 조사를 통해 추가적으로 검증되었다. 관절 조직 단편을, IL-17A 및 IL-17F의 생물기전과 상관성이 매우 높으며 관절 염증과 골 리모델링을 표시하는, 수개의 파라미터들에 대해 표 41에 개시된 기준을 토대로 점수를 매겼다. 그 결과, mAb03-처리 또는 양성 대조군-처리 후에 관찰되는 결과들과 마찬가지로, IL17MS3086을 처리한 후 중증 등급의 발생율이 감소되었으며, 각 측면에 균일하게 효과적인 것으로 확인되었다 (도 17).
관절 경직, 붓기 및 손상에서 확인된 개선 결과로서, IL17MS3086-처리 동물은, 완충액-처리 동물에 비해, 불편함 최소 (lesser discomfort) 및 관절 움직임 개선을 나타내는, 전체적인 상태 점수가 동시에 개선되었다 (도 18). 최종적으로, IL17MS3086-처리 동물에서의, 최초 체중 대비, 실험 종료시의 체중 감소는 mAb03-처리 동물과 비스하게 5% 이내였지만, 완충액-처리 동물의 경우에는 체중이 14% ± 2.5% (평균 ± SEM)로 감소되었다.
이러한 결과들은 모두 IL17MS3086-처리 동물과 mAb03-처리 동물들에서의 질병 중증도 감소와 부합되며, IL17MS3086 처리가 확립된 CIA 원숭이 모델에서 관절염을 개선시킨다는 것을 입증해준다. 흥미롭게도, 평가한 최종 시점에, IL17MS3086-처리 동물에서 용량-의존성은 관찰되지 않았는데, 이는 용량 2.8 mg/kg이 mAb03 용량 10 mg/kg의 효능과 유사한 최대 효능을 이미 제공해준다는 것을 시사해준다.
실시예 28의 마우스에 대한 차단 활성 실험에서는, IL17MS3086 투여가 IL-17A에 의해 유도되는 혈청내 KC 농도를 저해하는 것으로 효과가 확인되었다. 도 12A (용량을 ㎍/kg로 조정함)에서, 용량 ~0.1 mg/kg (2.3 ㎍/마우스)에서 KC 혈청내 농도가 현저하게 감소되었다. 용량 ~0.4 mg/kg (8.1 ㎍/마우스) 또는 ~1.4 mg/kg (28.5 ㎍/마우스) 역시 KC 혈청내 농도를 감소시켰다. 그러나, 이미 0.4 mg/kg IL17MS3086이 포화 수준, 즉 정체기에 도달하여, 1.4 mg/kg IL17MS308628이 KC의 혈청내 농도를 감소시키는 정도는 매우 미미한 것으로 보인다. 이와는 대조적으로, mAb03은 본 실험에서 포화 수준에 도달하지 않았다.
본 시노몰구스 CIA 실험에서, IL17MS3086을 2.8 mg/kg 및 10 mg/kg으로 사용하였는데, 이 역시 마찬가지로 포화 수준이었지만, mAb03은 그렇지 않았다.
즉, IL17MS2086은 본 실험에서 매우 유효한 것으로 보인다.
표 41. 조직학적 분석의 점수 기준
관찰 사항 등급 척도
활막 세포의 과형성증 + 활막 세포 증가
2+ 활막 세포의 현저한 증가
육아 조직 형태 발생* ± 관절 강내 육아 조직 < 30%
+ 관절 강내 육아 조직 30% - 80%
2+ 관절 강내 육아 조직 > 80%
섬유화 + 섬유질이 드물게 존재하고, 세포 내용물 풍부
2+ 다량 및 고밀도로 섬유질 존재, 세포 내용물 비중 낮음
관절 연골 변형 ± 관절 연골의 거친 표면과 연골내 환형의 방추 연골 세포의 소실
+ 호산성 관절 연골, 연골 세포의 퇴행성 괴사 및 부분적인 파괴
2+ 기존 관절 연골의 광범위한 파괴
파골증 + 부분적인 골 파괴
2+ 골수강내 골 파괴
골 형성증 + 골모세포 증가 및 골 괴사 발생
호중구 침윤 ±
+
2+		 침윤 미미함
침윤 보통
침윤 현저함
SEQUENCE LISTING <110> Ablynx N.V. Merck Patent GmbH <120> Amino acid sequences directed against IL-17A, IL-17F and/or IL17-A/F and polypeptides comprising the same <130> P11-018-PCT <160> 842 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <220> <221> misc_feature <222> (31)..(35) <223> CDR <220> <221> misc_feature <222> (50)..(54) <223> CDR <220> <221> misc_feature <222> (87)..(91) <223> CDR <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Pro Phe Ser Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Asp Ser Val 35 40 45 Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys 50 55 60 Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala 65 70 75 80 Val Tyr Arg Cys Tyr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Gly Gln Gly Thr 85 90 95 Gln Val Thr Val Ser Ser 100 <210> 2 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KERE-class Nanobody <220> <221> 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103-class Nanobody FW3 sequence <400> 116 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Leu Tyr Leu His 1 5 10 15 Leu Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Arg 20 25 30 <210> 117 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P,R,S 103-class Nanobody FW3 sequence <400> 117 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Val Tyr Leu Arg 1 5 10 15 Leu Asn Ser Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys Asn Leu 20 25 30 <210> 118 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P,R,S 103-class Nanobody FW3 sequence <400> 118 Arg Phe Lys Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Gly Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Arg 20 25 30 <210> 119 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P,R,S 103-class Nanobody FW3 sequence <400> 119 Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Gly Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Arg 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Val 20 25 30 <210> 120 <211> 11 <212> 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 126 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ser Phe Ser 20 25 30 <210> 127 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 127 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Arg Thr Ile Ser 20 25 30 <210> 128 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 128 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 129 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 129 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp 20 25 30 <210> 130 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 130 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Phe Asp 20 25 30 <210> 131 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 131 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Asp Gly Arg Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 132 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 132 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Glu Arg Ser Phe Ser 20 25 30 <210> 133 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 133 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Leu Gly 20 25 30 <210> 134 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 134 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Gly 20 25 30 <210> 135 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 135 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp 20 25 30 <210> 136 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 136 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Asn Ile Asn Ile 20 25 30 <210> 137 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 137 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Gln Ser Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Thr Ile Val Asn 20 25 30 <210> 138 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 138 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Gln Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Thr Ile Val Asn 20 25 30 <210> 139 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 139 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 140 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 140 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Arg 20 25 30 <210> 141 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 141 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Ser Val Phe Thr 20 25 30 <210> 142 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 142 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asp 20 25 30 <210> 143 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 143 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Pro Val Ser Gly Arg Ala Phe Ser 20 25 30 <210> 144 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 144 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 145 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 145 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ala Gly Gly Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 146 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 146 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser 20 25 30 <210> 147 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 147 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Arg 20 25 30 <210> 148 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 148 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Asp Phe Arg 20 25 30 <210> 149 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 149 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 150 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 150 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 151 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 151 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 152 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 152 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 153 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 153 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp 20 25 30 <210> 154 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 154 Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 155 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 155 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 156 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 156 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 157 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 157 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 158 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 158 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 159 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 159 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 160 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Ile Phe Arg 20 25 30 <210> 165 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 165 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Asp 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Asn Ser 20 25 30 <210> 166 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 166 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Asp 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Asn Ser 20 25 30 <210> 167 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 167 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Tyr Asp 20 25 30 <210> 168 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 168 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu 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Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Arg Ser Gly Arg Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 182 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 182 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Arg Gly Arg Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 183 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 183 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 184 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 184 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 185 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 185 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Arg 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Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ser Ile Tyr Tyr Ala Val Ser Glu 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ala Asp Gln Glu Phe Gly Tyr Leu Arg Phe Gly Arg Ser Glu Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr 180 185 190 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys 195 200 205 Thr Thr Leu Tyr Leu Gln 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Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys 1 5 10 15 Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn 20 25 30 Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr 35 40 45 Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser 50 55 60 Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp 65 70 75 80 Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile 85 90 95 Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu 100 105 110 Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val 115 120 125 His His Val Ala 130 <210> 840 <211> 133 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 840 Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser 1 5 10 15 Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile 20 25 30 Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser 35 40 45 Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro 50 55 60 Ser Glu Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala 65 70 75 80 Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu 85 90 95 Thr Leu Val Val Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe Gln 100 105 110 Leu Glu Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val 115 120 125 Ile His His Val Gln 130 <210> 841 <211> 115 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Alb-11 V1 <400> 841 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 842 <211> 132 <212> PRT <213> artificial <220> <223> Alb11 V2 <400> 842 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 115 120 125 Asn Gly Ala Ala 130

Claims (28)

  1. 인간 IL-17A, 인간 IL-17F, 인간 IL-17A/F 및/또는 이들의 조합에 특이적으로 결합할 수 있거나, 및/또는 이를 겨냥하는, 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변성 도메인 (ISV: immunoglobulin single variable domain)을 포함하거나 또는 그것으로 구성된, 아미노산 서열.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 특이적인 결합은 해리 속도 (koff 속도) 10-4 s-1 내지 10-6 s-1로 특정되는 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  3. 제1항에 있어서, 상기 특이적인 결합은 KD 1 nM 미만으로 일어나는 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 있어서, 상기 아미노산 서열이 면역글로불린 폴드(immunoglobulin fold)를 포함하거나, 면역글로불린 폴드인 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한항에 있어서, 상기 아미노산 서열인 면역글로불린 서열인 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한항에 있어서,
    상기 아미노산 서열이,
    경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열), 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열) 및/또는 단일 가변성 도메인 (VHH)을 포함하거나, 또는
    경쇄 가변성 도메인 서열 (예, VL-서열), 중쇄 가변성 도메인 서열 (예, VH-서열) 및/또는 단일 가변성 도메인 (VHH)인 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한항에 있어서, 상기 아미노산 서열이 나노바디 (nanobody)를 포함하거나, 또는 나노바디인 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한항에 있어서,
    상기 아미노산 서열이, 서열번호 623 내지 693 중 하나 이상의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지는 폴리펩타이드를 포함하거나, 또는 상기 폴리펩타이드이되, 상기 아미노산 동일성 측정시, CDR 서열을 구성하는 아미노산 잔기들은 제외되며,
    바람직하게는, 카바트(Kabat) 넘버링에 따른 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 및 108번 위치에서의 하나 이상의 아미노산 잔기들이, 표 B-2에 열겨된 홀마크 잔기들로 이루어진 각각의 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한항에 있어서, 상기 아미노산 서열이 인간 IL-17A에 특이적으로 결합할 수 있는 것임을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한항에 있어서, 상기 아미노산 서열이 인간 IL-17A 및 인간 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 것임을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  11. 제10항에 있어서, 상기 아미노산 서열이 인간 IL-17F에 특이적으로 결합할 수 있는 것임을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  12. 제10항에 있어서, 상기 아미노산 서열이 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F에 특이적으로 결합할 수 있는 것임을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한항에 있어서,
    상기 아미노산 서열이, 인간 IL-17 A 및 IL-17A/F (클래스 2)를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며,
    상기 아미노산 서열이, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 및/또는 H54A IL-17A 돌연변이체에 결합하는 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한항에 있어서,
    상기 아미노산 서열이, 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F (클래스 4)를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며,
    상기 아미노산 서열이, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 및/또는 N88A IL-17A 돌연변이체에 결합하는 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한항에 있어서,
    상기 아미노산 서열이, 인간 IL-17F를 겨냥하거나, 및/또는 그것에 특이적으로 결합할 수 있으며,
    상기 아미노산 서열이, 야생형 IL-17F 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, R47A, R73A, I86A 및/또는 N89A IL-17F 돌연변이체에 결합하는 것을 특징으로 하는 아미노산 서열.
  16. 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는 아미노산 서열로서,
    제1 아미노산 서열이, 인간 IL-17A 및/또는 IL-17 A/F에 결합하기 위해, 제1항 내지 제13항 중 어느 한항에 따른 제2 아미노산 서열과, 경쟁하며,
    상기 제2 아미노산 서열이 인간 IL-17A 및 IL-17A/F (클래스 2)에 특이적으로 결합하며,
    상기 제2 아미노산 서열이, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 및/또는 H54A IL-17A 돌연변이체에 결합하는 것을 특징으로 하는, 아미노산 서열.
  17. 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는 제1 아미노산 서열로서,
    상기 제1 아미노산 서열이, 인간 IL-17A, IL-17 A/F 및/또는 IL-17F에 결합하기 위해, 제1항 내지 제12항 또는 제14항 중 어느 한항에 따른 제2 아미노산 서열과, 경쟁하며,
    상기 제2 아미노산 서열이 인간 IL-17A, IL-17F 및 IL-17A/F (클래스 4)에 특이적으로 결합하며,
    상기 제2 아미노산 서열이, 야생형 IL-17A 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, L74A, Y85A 및/또는 N88A IL-17A 돌연변이체에 결합하는 것을 특징으로 하는, 아미노산 서열.
  18. 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는 제1 아미노산 서열로서,
    상기 제1 아미노산 서열이, 인간 IL-17F에 결합하기 위해, 제1항 내지 제12항 또는 제15항 중 어느 한항에 따른 제2 아미노산 서열과, 경쟁하며,
    상기 제2 아미노산 서열이 인간 IL-17F에 특이적으로 결합하며,
    상기 제2 아미노산 서열이, 야생형 IL-17F 서열에 대한 결합성에 비해, 유의하게 감소된 친화성으로, R47A, R73A, I86A 및/또는 N89A IL-17F 돌연변이체에 결합하는 것을 특징으로 하는, 아미노산 서열.
  19. 제1항 내지 제19항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열을 하나 이상 포함하는 폴리펩타이드.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 폴리펩타이드가 서열번호 623 내지 693 및 826 내지 838 중 임의의 서열번호로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며,
    상기 아미노산 서열이 6개 이하의 단일 아미노산 서열 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있는 것을 특징으로 하는 폴리펩타이드.
  21. 제19항에 있어서,
    상기 폴리펩타이드가 서열번호 623 내지 693 및 826 내지 838 중 임의의 서열번호로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며,
    상기 아미노산 서열이 3개 이하의 단일 아미노산 서열 치환, 결손 및/또는 삽입을 포함할 수 있는 것을 특징으로 하는 폴리펩타이드.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한항에 있어서,
    상기 폴리펩타이드가 제1항 내지 제18항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열을 2개 이상 포함하며,
    상기 2개 이상의 아미노산 서열이 서로 상이한 것을 특징으로 하는 폴리펩타이드.
  23. 제19항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 하기 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리펩타이드:
    a. IL-17F (서열번호 840), 및 IL-17A (서열번호 839)와 IL-17F (서열번호 840)의 이형이량체에 특이적으로 결합하지만, IL-17A (서열번호 839)에는 특이적으로 결합하지 않는, 제1항 내지 제18항 중 어느 한항에 따른 제1 아미노산 서열; 및/또는
    b. IL-17A (서열번호 839), IL-17F (서열번호 840), 및 IL-17A (서열번호 839)와 IL-17F (서열번호 840)의 이형이량체에 특이적으로 결합하는, 제1항 내지 제18항 중 어느 한항에 따른 제2 아미노산 서열.
  24. 질병 치료에 있어서의, 제1항 내지 제23항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드의 용도.
  25. 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염, 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환을 치료하기 위한,
    제1항 내지 제23항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드의 용도.
  26. 제1항 내지 제23항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약학 조성물로서,
    전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염, 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환을 치료하기 위한 것임을 특징으로 하는, 약학 조성물.
  27. 치료 방법으로서,
    제1항 내지 제23항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드를 환자에게 유효량으로 투여하는 단계를 포함하며,
    상기 방법이 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 골관절염, 청소년기 만성 관절염, 척추관절염, 전신 경화증, 특발성 염증성 근병증, 쇼그렌 증후군, 전신 혈관염, 유육종, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역성 혈소판 감소증, 갑상선염, 당뇨병, 면역-매개 신장병, 중추 및 말초 신경계의 탈수초 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 특발성 탈수초성 다발성 신경병증 또는 길리안-바레 증후군, 및 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간담 질환, 예를 들어, 감염성, 자가면역성 만성 활성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 육아종성 간염 및 경화성 담관염, 염증성 장 질환, 글루텐-과민성 장병증, 및 휘플 질환, 자가면역성 또는 면역-매개 피부 질환, 비제한적인 예로, 수포성 피부 질환, 다형 홍반 및 접촉성 피부염, 건선, 알레르기성 질환, 예컨대, 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 음식 과민성 및 두드러기, 폐의 면역 질환, 예를 들어 호산성 폐렴, 특발성 폐 섬유증 및 과민성 폐렴, 이식 관련 질환, 예를 들어 이식 거부 및 이식 편대 숙주 질환을 치료하는데 적합한 것을 특징으로 하는, 치료 방법.
  28. 제1항 내지 제23항 중 어느 한항에 따른 아미노산 서열 및/또는 폴리펩타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약학 조성물.
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