KR20120119976A - 레독스 관련 인자 발현 촉진제 - Google Patents

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Abstract

생체 내에서 레독스 관련 인자의 발현을 촉진함으로써, 안전하며 또한 효율적으로 생체의 산화 스트레스를 감소시켜, 건강을 유지하고, 또한 산화 스트레스에 기인하는 여러가지 질환 및 증상을 방지하는 것을 과제로 한다.
본 발명은 캠페롤, 케르세틴 혹은 이들의 배당체 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 레독스 관련 인자 발현 촉진제, 및 은행잎 추출물, 산내 추출물 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 레독스 관련 인자 발현 촉진제에 관한 것이다.

Description

레독스 관련 인자 발현 촉진제{AN AGENT FOR ENHANCING THE EXPRESSION OF REDOX-ASSOCIATED FACTORS}
본 발명은 캠페롤, 케르세틴 혹은 이들의 배당체 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 레독스 관련 인자 발현 촉진제, 및 은행잎 추출물, 산내(山柰) 추출물 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 레독스 관련 인자 발현 촉진제에 관한 것이다.
생체는, 그 생존 유지, 항상성 유지를 위해, 레독스 조절을 행하고 있다. 생체 내의 레독스 조절은, 주로 세포 내의 단백질에 존재하는 시스테인 잔기 상의 티올기의 가역적인 산화 환원 반응에 기초하고 있으며, 여러가지 세포 기능을 제어하고 있다. 레독스 조절에 관한 인자(레독스 관련 인자)는, 세포 내를 환원 상태로 유지하며, 세포의 생존에 필수적인 역할을 달성하는 한편으로, 생체 내의 활성 산소종의 소거에 있어서도 중요한 역할을 달성하는 것이 알려져 있다. 이러한 레독스 관련 인자가 정상적으로 기능하지 않는 경우, 생체 내의 활성 산소종이 과잉으로 생산되어, 과도한 산화 스트레스에 노출되게 된다. 이러한 과도한 산화 스트레스는, DNA나 단백질, 지질의 생체 고분자를 산화함으로써 이들에게 상해를 부여하며, 여러가지 질환이나 노화의 원인이 되는 것으로 생각되고 있다. 이 때문에, 최근, 산화 스트레스를 초래하는 활성 산소종의 소거계로서 작용하는 레독스 관련 인자의 연구가 활발히 행해지고 있다.
생체의 산화 스트레스에 대한 방어 기구로서 작용하는 레독스 관련 인자로서는, 글루타티온계가 알려져 있다. 글루타티온은 포유 동물에게 존재하는 트리펩티드이며, 분자 내의 티올기에 의한 환원 작용, 보효소로서의 작용, 메르캅터르산의 생성 및 그 외의 해독 기구에의 관여, 티올 효소 또는 그 외의 세포 성분의 보호 작용, 유해물의 배설 작용 촉진, 콜린에스테라아제의 활성을 높이는 것에 따른 항알레르기 작용, 효소 부활 작용을 갖는 것이 보고되어 있다. 그러나, 글루타티온은 제제 중에서 침전을 발생시키고, 또한 많은 세포에서 글루타티온을 받아들일 수 없기 때문에, 세포 내에서 글루타티온의 생산을 촉진시키기 위한 성분은 매우 유용해질 수 있다. 이러한 성분으로서는 지금까지 γ-토코페롤 또는 δ-토코페롤이 보고되어 있고, 이들 성분을 함유하는 글루타티온 생산 촉진제가 개시되어 있다(일본 특허 공개 제2007-284430호(특허문헌 1)).
또한, 다른 레독스 관련 인자로서는 티오레독신계가 알려져 있고, 티오레독신계도 또한 생체에서의 산화 스트레스에 대한 방어 기구로서 작용한다(세포 공학 Vol.25, No.2, 2006, p143-148(비특허문헌 1)). 또한, 티오레독신의 형질 전환 마우스는 장수명이 되는 것(Mitsui A, et al: Antioxid Redox Signal(2002) 4: 693-696(비특허문헌 2)), 및 티오레독신은 뇌경색, 당뇨병에의 저항성을 갖는 것(Takagi Y, et al: Proc Natl Acad Sci USA(1999) 96: 4131-4136(비특허문헌 3), Hotta M, et al: J Exp Med(1998) 188: 1445-1451(비특허문헌 4))이나 알레르기성 피부염에 유효한 것(일본 특허 공개 제2007-269671호(특허문헌 2))이 보고되어 있고, 티오레독신은 활성 산소 소거제로서 폭 넓게 사용되고 있다(일본 특허 공개 평성 제9-157153호(특허문헌 3)). 그러나, 티오레독신계는 고분자 단백질이기 때문에, 이들 화합물을 대상에 직접 투여하였다고 해도, 이들 분자를 세포 내에 받아들일 수 없다. 이 때문에, 생체 내에서 티오레독신계의 발현을 촉진시키는 것이 바람직하지만, 이들의 발현을 촉진하는 성분으로서는, 지금까지 쑥 추출물 또는 푸른 차조기 추출물이 알려져 있을 뿐이다(국제 공개 번호 WO 2006/033351(특허문헌 4)).
전술한 대로, 글루타티온계나 티오레독신계라고 하는 레독스 관련 인자를 생체에 직접 투여하였다고 해도 세포 내에 효율적으로 받아들일 수 없기 때문에, 생체 내에서 레독스 조절 기능이나 항산화 기능을 발휘할 수 없을 우려가 있다. 이들 레독스 관련 인자의 발현은, 자외선 조사 스트레스에 의해 항진되는 것이 알려져 있지만, 생체에 안전하며 또한 유효하게 작용하는 화학 물질에 대해서는 지금까지 거의 알려져 있지 않고, 생체 내에서의 레독스 관련 인자의 발현 기서(機序)에 대해서도 자세하게는 해명되어 있지 않다. 따라서, 생체 내에서 레독스 관련 인자의 발현을 촉진하기 위한 안전하며 또한 유효한 성분의 발견이 여전히 기대되고 있다.
특허문헌 1: 일본 특허 공개 제2007-284430호 특허문헌 2: 일본 특허 공개 제2007-269671호 특허문헌 3: 일본 특허 공개 평성 제9-157153호 특허문헌 4: 국제 공개 번호 WO 2006/033351
비특허문헌 1: 세포공학 Vol.25, No.2, 2006, p143-148 비특허문헌 2: Mitsui A, et al: Antioxid Redox Signal(2002) 4: 693-696 비특허문헌 3: Takagi Y, et al: Proc Natl Acad Sci USA(1999) 96: 4131-4136 비특허문헌 4: Hotta M, et al: J Exp Med(1998) 188: 1445-1451
본 발명은 생체 내에서 레독스 관련 인자의 발현을 촉진함으로써, 안전하며 또한 효율적으로 생체의 산화 스트레스를 감소시키고, 건강을 유지하며, 또한 산화 스트레스에 기인하는 여러가지 질환 및 증상을 방지하는 것을 과제로 한다.
본 발명자들은 금번, 생체 내에서의 레독스 관련 인자로서 글루타티온계 및 티오레독신계의 발현 및 활성을 항진하는 성분으로서, 플라보놀류에 속하는 캠페롤 및 케르세틴을 발견하였다. 의외인 것은, 이러한 작용은 플라보놀류 중에서도 캠페롤과 케르세틴에 특이적인 것이며, 구조가 유사한 미리세틴에는 보이지 않았다. 글루타티온계나 티오레독신계의 분자를 직접 적용하는 경우와 비교하여, 캠페롤이나 케르세틴의 적용은 생체 내의 글루타티온계나 티오레독신계라고 하는 레독스 관련 인자의 발현 및 활성을 유효하게 촉진하는 것이 가능해지기 때문에, 본 발명에 따라, 생체 내의 다종 다양한 산화 스트레스를 보다 강력하게 경감할 수 있다. 캠페롤이나 케르세틴이라고 하는 플라보놀류는 차 잎 식물에 널리 분포하고 있고, 생체에 있어서 무독이며 안전하게 섭취할 수 있다. 이와 같이, 캠페롤 및 케르세틴을 생체 내에서의 레독스 관련 인자의 발현을 촉진하기 위한 유효 성분으로 함으로써, 적용되는 생체에 스트레스를 부여하는 일 없이, 생체 내의 지나친 활성 산소종을 소거하는 것이 가능해진다.
따라서, 본원은 이하의 발명을 포함한다:
[1] 캠페롤, 케르세틴 혹은 이들의 배당체 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는, 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
[2] 상기 레독스 관련 인자가, 티오레독신, 티오레독신 환원효소, 글루타티온 환원효소 및 글루타레독신으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 복수의 물질인 것을 특징으로 하는, [1]에 기재된 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
[3] 은행잎 추출물, 산내 추출물 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는, 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
[4] 상기 레독스 관련 인자가, 티오레독신, 티오레독신 환원효소, 글루타티온 환원효소 및 글루타레독신으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 복수의 물질인 것을 특징으로 하는, [3]에 기재된 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
[5] 레독스 관련 인자 발현 촉진제를 조제하기 위한, 캠페롤, 케르세틴 혹은 이들의 배당체 또는 이들의 조합의 사용.
[6] 레독스 관련 인자 발현 촉진제를 조제하기 위한, 은행잎 추출물, 산내 추출물 또는 이들의 조합의 사용.
생체 내에서의 레독스 관련 인자의 발현을 촉진함으로써, 안전하며 또한 효율적으로 생체 내의 활성 산소종을 감소시켜, 산화 스트레스로부터 생체를 방어할 수 있다. 이에 따라 생체의 건강을 유지하고, 또한 산화 스트레스에 기인하는 여러가지 질환 및 증상을 방지하는 것이 가능해진다.
도 1은 캠페롤에 의한 생체 내에서의 레독스 발현 인자의 발현 항진을 나타내는 도면이다.
도 2는 캠페롤에 의한 피부 등가 모델에서의 레독스 관련 인자의 발현 항진을 나타내는 도면이다.
도 3은 플라보노이드 화합물에 의한 티오레독신계의 발현 항진 작용에 있어서의 비교를 나타내는 도면이다.
도 4는 은행잎 추출액 및 산내 추출액에 의한 티오레독신 환원효소의 발현 항진을 나타내는 도면이다.
도 5는 캠페롤 및 케르세틴에 의한 티오레독신 환원효소의 활성 촉진 효과를 나타내는 도면이다.
도 6은 캠페롤, 및 은행잎 추출액 및 산내 추출액에 의한 염증성 사이토카인(IL1β)의 생산을 억제하는 효과를 나타내는 도면이다.
본 발명의 일실시양태에 있어서, 캠페롤, 케르세틴 혹은 이들의 배당체 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 레독스 관련 인자 발현 촉진제가 제공된다.
본 명세서에서 「레독스 관련 인자」는, 생체, 예컨대 포유류, 바람직하게는 인간의 체내에 존재하는 단백질의 시스테인 잔기의 티올기와 산화적 또는 환원적으로 반응하며, 세포 내를 환원 상태로 유지하는 인자를 의미한다. 세포의 활성화나 정보 전달 물질의 프로세싱, 즉 시그널 전달 기구에 있어서는, 특히 세포 내의 단백질에 존재하는 시스테인 잔기 상의 티올기의 산화에 따른 단백질-단백질 사이의 상호 작용에 있어서의 수식이 중요한 역할을 달성하고 있는 것으로 생각되고 있다. 이 시스테인 잔기 상의 티올기의 산화?환원(레독스)은, 유전자의 전사, 단백질의 세포내 국재, 합성, 분해의 조절, 및 세포의 증식이나 세포사 등의 여러가지 생명 현상의 조절에 관여하고 있다. 이러한 생체 내에서의 레독스에 관련하는 계로서는, 글루타티온계 및 티오레독신계가 알려져 있고, 이들은 각각 1군의 분자에 의해 구성된다. 이들 레독스 관련 인자는, 생체 내에서 발생하고 존재하는 활성 산소종의 소거에도 관여하는 것이 알려져 있다.
티오레독신계는, 특히 티오레독신과 티오레독신 환원효소 등의 인자로 구성된다. 티오레독신(TRX)은, 대장균의 DNA 합성에 필수적인 효소인 리보뉴클레오티드 환원효소에 수소를 공여하는 보효소로서 발견되었다. TRX는 원핵 생물이나 인간의 다양한 생체에서 보존되어 있는 약 12 kDa의 단백질이며, 4개의 β스트랜드와 3개의 α헬릭스로 이루어지는 입체 구조를 갖고, -Cys-Gly-Pro-Cys-라고 하는 활성 부위를 갖고 있다. TRX는 그 활성 부위의 2개의 시스테인 잔기의 사이에서 디술피드 결합을 만드는 산화형(S-S)과, 환원형(-SH, SH-)이 존재하고, 환원형은 기질 단백질의 디술피드 결합을 환원하여, 스스로 산화형이 된다. 산화형 TRX는, NADPH와 티오레독신 환원효소에 의해 환원되어, 환원형으로 재생된다. 기질 단백질의 하나로서, 페록시레독신(peroxiredoxin)이라고 총칭되는 H2O2 소거 효소 패밀리가 알려져 있다. 환원형 페록시레독신이 H2O2를 환원한다. 그리고, 산화형이 된 페록시레독신이 기질이 되며 티오레독신에 의해 환원된다. 산화형이 된 티오레독신은 티오레독신 환원효소에 의해 환원된다. 이러한 활성 산소종의 무독화 시스템에 티오레독신계는 중요한 역할을 달성하고 있다.
글루타티온계는, 특히 글루타티온, 글루타티온 환원효소 및 글루타레독신 등의 인자로 구성된다. 글루타티온은, 글루타민산, 시스테인 및 글리신으로 이루어지는 트리펩티드이며, 비단백질성의 티올 성분으로서 세포 내에 다량으로 존재하고 있고, 세포 내의 친수성 구획에 있어서의 주요한 항산화 물질로서 알려져 있다. 글루타티온은, 활성 산소종(예컨대 슈퍼옥시드 또는 과산화수소)과 반응하여 안정한 글루타티온라디칼을 형성하고, 2량체(GSSG: 산화형 글루타티온)로 변화하지만, 이것은 더욱 글루타티온 환원효소가 NADPH로부터의 전자를 GSSG에 전이하여, GSH(환원형 글루타티온)로 재생된다. 글루타레독신(GRX)은, 티오레독신과 공통된 -Cys-Pro-Tyr-Cys-라고 하는 활성 부위를 갖고 있고, 티오레독신과의 공통성으로부터 티오레독신 슈퍼 패밀리라고 불린다. 그 활성 부위의 2개의 시스테인 잔기의 사이에서 디술피드 결합을 만드는 산화형(S-S)과, 환원형(-SH, SH-)이 존재한다. 티오레독신과 마찬가지로, 환원형은 기질 단백질의 디술피드 결합을 환원하여, 스스로 산화형이 된다. 그 생물 활성에 관해서는 불명료한 점도 많지만, 생체 내의 레독스 조절이나 산화 스트레스 응답에 관여하는 것이 알려져 있다.
이와 같이, 티오레독신, 티오레독신 환원효소, 글루타티온 환원효소 및 글루타레독신이라고 하는 레독스 관련 인자를 활성화하거나, 혹은 그 발현을 촉진함으로써, 생체 내의 과잉된 활성 산소종을 감소시키며, 산화 스트레스로부터 생체를 방어할 수 있다.
전술한 대로, 본 발명자들은 금번, 캠페롤 및 케르세틴이 상기 레독스 관련 인자를 활성화하고, 그리고 그 발현을 촉진한다고 하는 놀라운 지견을 얻었다. 캠페롤 및 케르세틴을 포함하는 플라보놀류는, 이하에 나타낸 일반식을 가지며, 이들은 식물 중에 널리 분포하고 있는 플라보노이드 화합물의 하나이다:
Figure pct00001
캠페롤:R1=H;R2=H
케르세틴:R1=OH;R2=H
미리세틴:R1=OH;R2=OH
이들 플라보놀류는, 항산화 작용을 갖는 것이 알려져 있고, 또한 이들 플라보놀류는 혈관 강화 작용이나 항염증 작용을 갖는 것도 보고되어 있다. 그러나, 지금까지 플라보놀류가 생체 내에서의 레독스 관련 인자의 발현을 촉진하는 것에 대해서는 알려져 있지 않고, 또한 그 화학 구조가 매우 근사한 이들 플라보놀류 중에서, 캠페롤 및 케르세틴만이 레독스 관련 인자의 발현을 특이적으로 촉진하는 것은 매우 의외이다. 이러한 지견으로부터, 캠페롤 및 케르세틴이 레독스 관련 인자의 발현을 촉진하기 위한 활성 성분으로서 매우 유용한 것은 분명하다.
또한, 플라보놀류가 다양한 배당체를 형성하는 것은 주지이며, 본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제에 있어서도, 캠페롤 및 케르세틴의 배당체를 활성 성분으로서 사용할 수 있다. 본 발명에서 이들과 배당체를 형성하는 당은, 제한되는 일 없이, 알도오스로서, 예컨대 글루코오스, 만노오스, 갈락토오스, 푸코오스, 람노오스, 아라비노오스, 크실로오스, 및 케토오스로서, 예컨대 프룩토오스를 들 수 있다.
전술한 대로 캠페롤, 케르세틴 및 이들의 배당체는 식물에 널리 분포하고 있는 성분이기 때문에, 이들 성분을 포함하는 식물 추출물도 또한 생체 내에서의 레독스 관련 인자의 발현을 촉진하기 위해 유용하다. 본 발명자들은, 식물 추출물 중에서도, 특히 은행잎 추출물 및 산내 추출물이 생체내 레독스 관련 인자의 발현을 현저하게 촉진하는 것을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 다른 실시양태에서는, 은행잎 추출물, 산내 추출물 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 레독스 관련 인자 발현 촉진제가 제공된다.
본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제에 유효 성분으로서 사용되는 캠페롤, 케르세틴 혹은 이들의 배당체 또는 이들의 조합의 배합량은 특별히 한정되지 않지만, 0.00001?0.5 질량％, 바람직하게는 0.0001?0.001 질량％, 그리고 가장 바람직하게는 0.0001 질량％?0.0005 질량％ 정도이다. 또한, 본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제에 유효 성분으로서 사용되는 은행잎 추출물, 산내 추출물 또는 이들의 조합의 배합량은 추출물 건조 잔분으로 환산하여, 예컨대 0.00001?0.5 질량％, 바람직하게는 0.0001?0.1 질량％, 그리고 가장 바람직하게는 0.0001?0.01 질량％ 정도이다.
본 발명에서, 상기 유효 성분은 이들을 함유하는 레독스 관련 인자 발현 촉진제로서 경구적 또는 비경구적으로 투여할 수 있고, 이것은 예컨대 경구용 조성물 또는 외용 조성물로서 조제하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제에 의해 생체의 건강을 유지하고, 또한 산화 스트레스에 기인하는 여러가지 질환 및 증상을 방지하는 것이 가능하다. 이러한 질환 및 증상으로서는, 제한되는 일 없이, 암, 당뇨병, 자가 면역 질환, 예컨대 관절 류마티스, 전신성 에리테마토데스, 항인지질 항체 증후군, 피부 근염, 전신성 피부 경화증, 쇼그렌 증후군, 길랭?바레 증후군, 만성 위축성 위염, 대동맥 염증후군, 굿패스쳐 증후군, 급속 진행성 사구체 신장염, 그레이브스병, 만성 원판형 에리테마토데스 또는 습관성 유산, 허혈성 질환, 예컨대 협심증, 심근 경색, 뇌경색 또는 폐색성 동맥 경화증, 알레르기 질환, 예컨대 기관지 천식, 알레르기성 비염, 화분증, 알레르기성 위장염, 두드러기, 접촉 피부염 또는 아토피성 피부염, 피부의 노화, 색소 침착, 주름, 지루증, 햇빛그을림, 화상, 여드름, 피부의 처짐, 비만, 고혈압, 대사 증후군, 빈혈을 들 수 있다. 이 때문에 본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제의 용도에 관해서는 무한한 가능성이 있고, 식품, 음료, 화장품, 의약품, 의약 부외품 등의 원료 및 첨가물로서 치료적 또는 미용학적으로 사용할 수 있다.
경구용 조성물로서 취할 수 있는 형태로서는, 예컨대 일반 식품의 외에, 기능성 식품, 영양 보조 식품, 특정 보건용 식품, 미숙아용 조제유, 유아용 조제유, 유아용 식품, 임산부 식품, 노인용 식품, 음료, 기능성 식품, 의약품의 형태를 들 수 있고, 예컨대, 정제, 분말, 과립, 트로키, 내복액, 현탁액, 유탁액, 시럽 등의 가공 형태여도 좋다.
또한 본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제는, 본 발명의 유효 성분 이외에, 일반적으로 음식품, 의약품 또는 의약 부외품에 이용되는 각종 담체나 항산화제 등의 첨가물을 포함하여도 좋다. 예컨대 본 발명의 레독스 관련 인자의 발현 촉진제는, 본 발명의 유효 성분 이외에, 담체로서, 각종 캐리어 담체, 익스텐더제, 희석제, 증량제, 분산제, 부형제, 결합제 용제(예, 물, 에탄올, 식물유), 용해 보조제, 완충제, 용해 촉진제, 겔화제, 현탁화제, 밀가루, 쌀가루, 전분, 옥수수 전분, 다당류, 우유 단백질, 콜라겐, 미강유, 레시틴을 포함하여도 좋다. 첨가제로서는, 예컨대, 비타민류, 감미료, 유기산, 착색제, 향료, 습화 방지제, 섬유질, 전해질, 미네랄, 영양소, 항산화제, 보존제, 방향제, 습윤제, 천연의 식물 추출물, 야채 추출물을 들 수 있지만, 이들에 한정되어 있는 것은 아니다. 또한 항산화제로서는, 예컨대, 토코페롤류, 플라본 유도체, 필로둘신류, 코지산, 갈산 유도체, 카테킨류, 후키산(fukiic acid), 고시폴, 피라진 유도체, 세사몰, 구아야올, 구아약산(guaiac acid), p-쿠마린산, 노르디히드로구아야레트산, 스테롤류, 테르펜류, 핵산 염기류, 카로티노이드류, 리그난류와 같은 천연 항산화제 및 아스코르빈산팔미틴산에스테르, 아스코르빈산스테아린산에스테르, 부틸히드록시아니솔(BHA), 부틸히드록시톨루엔(BHT), 모노-t-부틸히드록시논(TBHQ), 4-히드록시메틸-2,6-디-t-부틸페놀(HMBP)로 대표되는 것과 같은 합성 항산화제를 들 수 있다.
외용 조성물로서 취할 수 있는 형태로서는, 예컨대 연고, 크림, 프로텍터, 첩부제, 팩, 화장수, 유액, 로션, 목욕용제, 헤어 로션, 헤어 토닉, 헤어 리퀴드, 샴푸, 린스 등의 제형으로 조제할 수 있고, 통상의 외용제로서 관습적으로 이용되는 성분, 예컨대 미백제, 보습제, 유성 성분, 자외선 흡수제, 계면 활성제, 증점제, 알코올류, 분말 성분, 색제, 수성 성분, 물, 각종 피부 영양제 등을 필요에 따라 적절하게 배합할 수 있다. 또한, 본 발명의 레독스 관련 인자 발현 촉진제에는, 외용제에 관용적인 조제, 예컨대 에데트산2나트륨, 에데트산3나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속 봉쇄제, 카페인, 탄닌, 베라파밀, 트라넥삼산 및 그 유도체, 감초 추출물, 글라브리딘, 모과 과실의 열수 추출물, 각종 생약, 초산토코페롤, 글리실리진산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제, 비타민 C, 아스코르빈산인산마그네슘, 아스코르빈산글루코시드, 알부틴, 코지산 등의 미백제, 글루코오스, 프룩토오스, 만노오스, 자당, 트레할로오스 등의 당류, 레티노인산, 레티놀, 초산레티놀, 팔미틴산레티놀 등의 비타민 A류도 적절하게 배합할 수 있다.
본 발명에서 투여되는 레독스 관련 인자 발현 촉진제의 대표적인 처방예를 이하에 나타낸다.
프로텍터 A
조성 배합량(질량％)
데카메틸시클로펜타실록산 3
메틸페닐폴리실록산 3
베헤닐 알코올 1
1,3-부틸렌글리콜 5
이소스테아린산폴리옥시에틸렌글리세릴 1.5
모노스테아린산폴리옥시에틸렌글리세린 1
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.0001
에데트산3나트륨 0.1
파라메톡시계피산2-에틸헥실 7
크산탄 검 0.1
카르복시비닐폴리머 0.3
페녹시에탄올 적량
정제수 잔량
향료 적량
프로텍터 B
조성 배합량(질량％)
바셀린 1
디메틸폴리실록산 3
메틸페닐폴리실록산 3
스테아릴알코올 0.5
글리세린 7
디프로필렌글리콜 3
1,3-부틸렌글리콜 7
크실리톨 3
스쿠알란 1
이소스테아린산 0.5
스테아린산 0.5
모노스테아린산폴리옥시에틸렌글리세린 1
모노스테아린산글리세린 2
수산화칼륨 0.05
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 산내 추출액(건조 잔분) 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.0001
아세틸화히알루론산나트륨 0.1
EDTA3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 2
파라메톡시계피산2-에틸헥실 5
카르복시비닐폴리머 0.1
페녹시에탄올 적량
정제수 잔량
향료 적량
2층 타입 크림
조성 배합량(질량％)
디메틸폴리실록산 5
데카메틸시클로펜타실록산 25
트리메틸실록시규산 5
폴리옥시에틸렌?메틸폴리실록산 공중합체 2
디프로필렌글리콜 5
팔미틴산덱스트린 피복 미립자 산화아연(60 ㎚) 15
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.01
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.0005
파라벤 적량
페녹시에탄올 적량
에데트산3나트륨 적량
파라메톡시계피산2-에틸헥실 7.5
디메틸디스테아릴암모늄헥토라이트 0.5
구형 폴리아크릴산알킬 분말 5
부틸에틸프로판디올 0.5
정제수 잔량
향료 적량
연고
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.01
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.0001
스테아릴알코올 18.0
목랍 20.0
폴리옥시에틸렌(20)모노올레인산에스테르 0.25
글리세린모노스테아린산에스테르 0.3
바셀린 40.0
정제수 잔량
첩부제
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 산내 추출물(건조 잔분) 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.0001
크로타미톤 3.2
파나셋 875R 2.5
스쿠알란 1.0
dl-캠퍼 0.07
폴리옥시에틸렌(60몰) 경화 피마자유 1.2
진한 글리세린 5.0
젤라틴 1.2
폴리비닐피롤리돈 K-90 0.6
메틸파라벤 적량
d-솔비톨액 35.0
수산화알루미늄 0.2
요소 1.3
아황산나트륨 적량
에데트산나트륨 적량
시트르산 적량
하이비스와코 104R 0.02
폴리아크릴산나트륨 0.24
카르복시메틸셀룰로오스나트륨 2.8
카올린 1.0
정제수 잔량
이온 도입제
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 산내 추출액(건조 잔분) 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.0001
글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
히알루론산 0.05
시트르산(식품) 0.35
이온 교환수 잔량
캔디 A
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.5
설탕 50.000
물엿 잔량
향료 1.000
정제 C
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 산내 추출액(건조 잔분) 0.1
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.5
자당 에스테르 4.667
메틸셀룰로오스 2.400
글리세린 1.667
N-아세틸글루코사민 24.7998
히알루론산 20.000
비타민 E 12.000
비타민 B6 1.333
비타민 B2 0.667
α-리포산 1.333
코엔자임 Q10 2.667
세라미드(곤약 추출물) 3.333
L-프롤린 20.000
결정 셀룰로오스 잔량
소프트 캡슐 B
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출물(건조 잔분) 0.1
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.0001
식용 대두유 35.333
로얄젤리 16.4668
마카 2.000
GABA 2.000
밀랍 4.000
젤라틴 잔량
글리세린 8.000
글리세린 지방산 에스테르 7.000
과립 A-B
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.01
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 산내 추출액(건조 잔분) 0.02
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.001
대두 이소플라본 42.2998
환원 유당 45.000
대두 올리고당 3.000
에리스리톨 3.000
덱스트린 2.500
시트르산 2.000
향료 잔량
드링크 A
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 산내 추출액(건조 잔분) 0.001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.0001
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 케르세틴 0.0001
환원 맥아당 물엿 65.3998
에리스리톨 16.000
시트르산 4.000
향료 2.600
N-아세틸글루코사민 2.000
히알루론산 1.000
비타민 E 0.600
비타민 B6 0.400
비타민 B2 0.200
α-리포산 0.400
코엔자임 Q10 2.400
세라미드(곤약 추출물) 0.800
L-프롤린 4.000
정제수 잔량
쿠키
조성 배합량(질량％)
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 은행잎 추출액(건조 잔분) 0.5
레독스 관련 인자 발현 촉진제: 캠페롤 0.5
박력분 48.7998
버터 17.500
그래뉴당 20.000
계란 12.500
향료 잔량
버터를 교반하면서, 그래뉴당를 서서히 첨가한 후, 계란, 은행잎 추출액, 산내 추출액, 캠페롤, 케르세틴 및 향료를 첨가하여 더욱 교반한다. 충분히 혼합한 후, 균일하게 체에 친 박력분을 가하여, 저속에서 교반하여 덩어리형으로 냉장고에 휴지시킨다. 그 후, 성형하여 170℃?15분 소성하여 쿠키로 한다.
<실시예>
예1. 티오레독신계를 발현 항진하는 약제의 탐색
정상적인 인간 표피 각화 세포(KK-4009, KURABO)를 Defined Keratjnocyte-SFM 배지(10744-019, GIBCO) 중, 고습, CO2 5％, 37℃에서 배양하였다. 최종 밀도 100％의 세포를 칼슘 농도 1.5 mM로 조정한 EpiLifeTM CalciuM-Free Phenol Red Free 배지(M-EPICF/PRF-500, KURABO)로 치환하였다. 24시간 후, 이들에 캠페롤(K0018, 토쿄카세이코교가부시키가이샤), 비타민 E(95240, FULKA), 및 리포산((+/-)-α-리포산)(T1395, SIGMA)을 최종 농도가 10 μM이 되도록 첨가하였다.
약제 첨가 후, 24시간 후에 QIAZOL Lysis Reagent(79306, QIAGEN)를 이용하여 RNA를 단리하고, RNeasy kit(74106, QIAGEN)를 이용하여 RNA를 정제하였다. 그 후, Quanti Tect SYBR Green RT-PCR Kit(204243, QIAGEN)를 이용하여, 라이트사이클러 소프트웨어(Roche)에 의해 티오레독신 환원효소, 티오레독신, 글루타티온 환원효소, 글루타레독신, 내부 표준으로서 리포솜 단백질의 mRNA량을 정량하였다. 이용한 프라이머의 배열을 이하에 나타낸다.
티오레독신 환원효소?포워드 프라이머:
TGCTGGCAATAGGAAGAGATGGCTTGCAC
티오레독신 환원효소?리버스 프라이머:
GCAATCTTCCTGCCTGCCTGGATTGCAACTGG
티오레독신?포워드 프라이머:
TCGGTCCTTACAGCCGCTCGTCAGACTCCA
티오레독신?리버스 프라이머:
AGGCCCACACCACGTGGCTGAGAAGTCAAC
글루타티온 환원효소?포워드 프라이머:
GATCCTGTCAGCCCTGGGTTCTAAGACATC
글루타티온 환원효소?리버스 프라이머:
TAACCATGCTGACTTCCAAGCCCGACAA
글루타레독신?포워드 프라이머:
ATCACAGCCACCAACCACACTAACGAGA
글루타레독신?리버스 프라이머:
GTTACTGCAGAGCTCCAATCTGCTTTAGCC
리포솜 단백질?포워드 프라이머:
ACAGAGGAAACTCTGCATTCTCGCTTCCTG
리포솜 단백질?리버스 프라이머:
CACAGACAAGGCCAGGACTCGTTTGTACC
티오레독신 환원효소, 티오레독신, 글루타티온 환원효소, 및 글루타레독신의 mRNA량을, 리포솜 단백질의 mRNA량으로 나눈 것을 mRNA 발현량으로 하였다.
그 결과, 캠페롤은, 항산화 작용을 갖는 것으로 알려져 있는 비타민 E 및 리포산과 비교하여, 레독스 관련 인자의 발현을 유의하게 항진하였다(도 1).
예 2. 피부 등가 모델 중의 레독스 관련 인자의 발현에서 캠페롤의 작용
정상 인간, 정상 인간 각화 세포(Invitrogen), 정상 인간 선유아 세포(ATCC) 및 콜라겐 I(Sigma)로 피부 등가 모델을 제작하고, Dulbecco's Modified Eagle's 배지(D-MEM)(Invitrogen) 중, 고습, CO2 5％, 37℃에서 배양하였다. 2 mM 또는 10 mM의 캠페롤을 상기 배양 배지에 첨가하고, 상기 모델을 24시간 배양하였다. 그 후, QIAGEN mRNA 단리 키트를 이용하여 피부 등가 모델의 상피층으로부터 RNA를 단리하였다. 계속해서, Real-time PCR 키트(Bio-Rad)를 이용한 q-PCR(Bio-Rad MyiQ 단색 리얼 타임 PCR 검출 시스템에 따른 정량 PCR)에 의해, 티오레독신 환원효소 및 글루타티온 환원효소, 및 내부 표준으로서 36B4의 mRNA를 정량하였다. 프라이머는 QIAGEN으로부터 구입하였다(TXNRD2: #QT00070371; GSR; #QT00038325). 티오레독신 환원효소량 및 글루타티온 환원효소량을 36B4의 mRNA량으로 나누어, mRNA 발현 레벨을 얻었다.
그 결과, 캠페롤은 피부 등가 모델 중의 레독스 관련 인자의 발현을 유의하게 항진하였다(도 2).
예 3. 티오레독신계를 발현 항진하는 약제의 탐색-플라보노이드 화합물
정상 인간 표피 각화 세포(KK-4009, KURABO)를 Defined Keratinocyte-SFM 배지(10744-019, GIBCO) 중, 고습, CO2 5％, 37℃에서 배양하였다. 최종 밀도 100％의 세포를 칼슘 농도 1.5 mM로 조정한 EpiLifeTM CalciuM-Free Phenol Red Free 배지(M-EPICF/PRF-500, KURAB0)로 치환하였다. 24시간 후에, 하기 약제를 최종 농도가 10 μM이 되도록 첨가하였다.
캠페롤(K0018, 토쿄카세이코교가부시키가이샤)
케르세틴(173-00403, 와코쥰야쿠코교(주))
미리세틴(70050, FLUKA)
에피갈로카테킨갈레이트(E4143, CIAL)
헤스페리딘(086-07342, 와코쥰야쿠코교(주))
아피게닌(012-18913, 와코쥰야쿠코교(주))
제니스테인(070-04681, 와코쥰야쿠코교(주))
약제 첨가 후 24시간 후에 상기 예 1의 방법으로 레독스 관련 인자의 mRNA의 발현량을 정량하였다.
그 결과, 상기 플라보노이드 화합물 중, 캠페롤과 케르세틴만이 티오레독신계의 발현을 유의하게 항진하였다(도 3).
예 4. 티오레독신계를 발현 항진하는 약제의 탐색-식물 엑기스의 탐색
정상 인간 표피 각화 세포(KK-4009, KURABO)를 Defined Keratinocyte-SFM 배지(10744-019, GIBCO) 중, 고습, CO2 5％, 37℃에서 배양하였다. 최종 밀도 100％의 세포를 칼슘 농도 1.5 mM로 조정한 EpiLifeTM CalciuM-Free Phenol Red Free 배지(M-EPICF/PRF-500, KURABO)로 치환하였다. 24시간 후에 하기 약제를 최종 농도 0.1％가 되도록 첨가하였다.
산내 추출액: 산내(Kaempferia galanga)의 근경을 50％ 1,3-부틸렌글리콜로 추출하여 얻어지는 것:
은행잎 추출액: 은행 나무(Ginkgo biloba L.) 잎의 50％ 에탄올 추출물을 1,3-부틸렌글리콜에 전용(轉溶)하여 얻어지는 것;
첨차 엑기스: 첨차(甛茶)(Rubus Suavissimus Shugan Lee.(Rosaseae))의 열탕 추출물을 50％ 1,3-부틸렌글리콜에 전용하여 얻어지는 것.
약제 첨가 후 24시간 후에 예 1의 방법으로 레독스 관련 인자의 mRNA의 발현량을 정량하였다.
그 결과, 캠페롤, 케르세틴 및 이들의 배당체를 함유하는 것이 알려져 있는 식물 추출액 중, 은행잎 추출액 또는 산내 추출액이 특히 티오레독신계의 발현을 항진하는 것으로 확인되었다(도 4).
예 5. 티오레독신 환원효소 활성 촉진 효과
정상 인간 표피 각화 세포(KK-4009, KURABO)를 Defined Keratinocyte-SFM 배지(10744-019, GIBCO) 중, 고습, CO2 5％, 37℃에서 배양하였다. 최종 밀도 100％의 세포를 칼슘 농도 1.5 mM로 조정한 EpiLifeTM CalciuM-Free Phenol Red Free 배지(M-EPICF/PRF-500, KURAB0)로 치환하였다. 24시간 후에, 캠페롤(K0018, 토쿄카세이코교가부시키가이샤) 또는 케르세틴(173-00403, 와코쥰야쿠코교(주))을 최종 농도 10 μM가 되도록 첨가하였다. 약제 첨가 후 24시간 후에 용해 버퍼에 용해시켜, 불용성 분획을 14,000 rpm으로 15분, 4℃에서의 원심 분리 조작에 의해 제거하였다. 가용성 분획 중의 총단백질량을 정량 후, Arne Holmgren 등에 의한 티오레독신 환원효소 활성 측정 방법(METHODS IN ENZYMOLOGY, 1995, 252, 199-)에 준하여 활성 측정을 행하였다.
그 결과, 캠페롤 및 케르세틴은, 티오레독신 환원효소의 활성을 촉진하는 것이 확인되었다(도 5).
예 6. 캠페롤, 산내 추출액, 은행잎 추출액에 의한 염증성 사이토카인(IL1β)의 발현 억제 효과
정상 인간 표피 각화 세포(KK-4009, KURABO)를 Defined Keratinocyte-SFM 배지(10744-019, GIBCO) 중, 고습, CO2 5％, 37℃에서 배양하였다. 최종 밀도 100％의 세포를 칼슘 농도 1.5 mM로 조정한 EpiLifeTM CalciuM-Free phenol Red Free 배지(M-EPICF/PRF-500, KURABO)로 치환하였다. 24시간 후에 캠페롤을 최종 농도가 10 μM가 되도록, 하기 식물 추출액을 최종 농도가 0.1％가 되도록 첨가하였다.
캠페롤(K0018, 토쿄카세이코교가부시키가이샤)
산내 추출액: 산내(Kaempferia galanga)의 근경을 50％ 1,3-부틸렌글리콜로 추출하여 얻어지는 것
은행잎 추출액: 은행 나무(Ginkgo biloba L.) 잎의 50％ 에탄올 추출물을 1,3-부틸렌글리콜에 전용하여 얻어지는 것
약제 첨가 후 24시간 후에 예 1의 방법으로 RNA를 추출하고, 염증 관련 인자(IL1β)의 mRNA 발현량을 정량하였다. 이용한 프라이머는 하기와 같다.
IL1β?포워드 프라이머:
GGCCATGGACAAGCTGAGGAAGATGCTG
IL1β?리버스 프라이머:
TGCATCGTGCACATAAGCCTCGTTATCCC
IL1β의 mRNA량을 리포솜 단백질의 mRNA량으로 나눈 것을 mRNA 발현량으로 하였다.
그 결과, 캠페롤, 및 산내 추출액 및 은행잎 추출액에 의해, 염증성 사이토카인인 IL1β의 생산이 억제되었으므로, 이들 성분이 항염증 작용을 갖는 것으로 확인되었다(도 6).
SEQUENCE LISTING <110> SHISEIDO CO. LTD; THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION <120> AN AGENT FOR ENHANCING THE EXPRESSION OF REDOX-ASSOCIATED FACTORS <130> Y826-PCT <150> US 61/299,589 <151> 2010-01-29 <160> 12 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 1 tgctggcaat aggaagagat ggcttgcac 29 <210> 2 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 2 gcaatcttcc tgcctgcctg gattgcaact gg 32 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 3 tcggtcctta cagccgctcg tcagactcca 30 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 4 aggcccacac cacgtggctg agaagtcaac 30 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 5 gatcctgtca gccctgggtt ctaagacatc 30 <210> 6 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 6 taaccatgct gacttccaag cccgacaa 28 <210> 7 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 7 atcacagcca ccaaccacac taacgaga 28 <210> 8 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 8 gttactgcag agctccaatc tgctttagcc 30 <210> 9 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 9 acagaggaaa ctctgcattc tcgcttcctg 30 <210> 10 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 10 cacagacaag gccaggactc gtttgtacc 29 <210> 11 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 11 ggccatggac aagctgagga agatgctg 28 <210> 12 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 12 tgcatcgtgc acataagcct cgttatccc 29

Claims (4)

  1. 캠페롤, 케르세틴 또는 이들의 배당체 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는, 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 레독스 관련 인자가 티오레독신, 티오레독신 환원효소, 글루타티온 환원효소 및 글루타레독신으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 복수의 물질인 것을 특징으로 하는 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
  3. 은행잎 추출물, 산내 추출물 또는 이들의 조합을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는, 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
  4. 제3항에 있어서, 상기 레독스 관련 인자가 티오레독신, 티오레독신 환원효소, 글루타티온 환원효소 및 글루타레독신으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 복수의 물질인 것을 특징으로 하는 레독스 관련 인자 발현 촉진제.
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