JP5300233B2 - 皮膚化粧料 - Google Patents

Description

本発明は、抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤、美白剤、皮膚化粧料及び飲食品に関するものである。

近年、特に生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、活性酸素としては、スーパーオキサイド（すなわち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン：・Ｏ_２ ⁻）、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）及び一重項酸素（^１Ｏ_２）等が挙げられる。これらの活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。

しかしながら、活性酸素の過剰な生成は、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。通常、生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されているが、スーパーオキサイドの産生が過剰である場合、又はＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分となり、スーパーオキサイド濃度が高くなり、これが関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等を引き起こす。

特に、皮膚は、紫外線等の環境因子の刺激を直接受けることから、スーパーオキサイドが生成しやすい器官であるため、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解し、変性し又は架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされる障害が、皮膚のシワ形成や皮膚の弾力低下等の老化の原因になるものと考えられている（非特許文献１参照）。したがって、活性酸素や生体内ラジカルの生成を阻害・抑制することにより、シワ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害を予防、治療又は改善できるものと考えられる。

そこで、活性酸素消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、このような作用を有するものとして、アブラナ科ブラシカ属植物からの抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物からの抽出物（特許文献２参照）等が知られている。

グルタチオンは、グルタミン酸、システイン、グリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンは、ラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、各種酵素のＳＨ供与体としての機能を果たすものであり、抗酸化成分としても知られている。その作用発現は、システイン残基に由来すると考えられている。しかしながら、皮膚中のグルタチオン量は、加齢により低下することが報告されており、このことが皮膚における酸化防御能を低下させ、細胞のＤＮＡ及びタンパク質等の構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。

すなわち、皮膚においてグルタチオンの産生を促進することは、加齢により衰える酸化ストレスに対する防御能を高め、かつ紫外線照射に起因する酸化ストレスによる障害を抑制することにつながり、皮膚の老化の予防、治療、又はシミ等の色素沈着に対する改善が期待できると考えられる。このような考えに基づき、グルタチオン産生促進作用を有するものとして、ビルベリー抽出物及びウォルナット抽出物（特許文献３参照）、クチナシ属植物の抽出物（特許文献４参照）等が知られている。

炎症性疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は、多種多様である。その原因として、一酸化窒素（以下「ＮＯ」と称することもある。）の産生によるもの、主にマクロファージから産生される腫瘍壊死因子（以下「ＴＮＦ−α」と称することもある。）によるもの、ヒアルロニダーゼの活性の亢進によるもの、ヒスタミンの遊離によるもの、及び血小板凝集によるもの等が知られている。

ＮＯは、大気汚染、酸性雨等の原因となる窒素酸化物である。また、近年、ＮＯは、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生態防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生されるＮＯが、細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。

しかし、マクロファージからＮＯが大量に産生されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リウマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に産生されたＮＯが、血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大とをもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシンショックを引き起こすこともある。

したがって、ＮＯの過剰な産生を抑制することが炎症性疾患の予防、治療又は改善を促進する上で重要となる。このような過剰なＮＯ産生を抑制する作用を有するものとして、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラ抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液及びアカブドウ抽出液（特許文献５参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花及び花椒（非特許文献２参照）等が知られている。

ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは、炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカクケシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。このような炎症としては、例えば、関節リウマチ、変形性関節症等の慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においては、ＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。このようなＴＮＦ−α産生抑制作用を有するものとして、例えば、シソ抽出液（非特許文献３参照）、ヒガンバナ科アルカロイドのリコリン及びリコシジノール（非特許文献４参照）等が知られている。

ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸の加水分解酵素である。体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中では紫外線、酸素等によって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は、生体内において細胞間組織として存在し、血管透過性にも関与している。さらに、ヒアルロニダーゼは、肥満細胞中に存在するが、その活性化により起こる脱顆粒により遊離され、炎症系ケミカルメディエーターとして作用する。したがって、ヒアルロニダーゼの活性を阻害することで、保湿の強化及び炎症の予防・軽減が期待される。このようなヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有するものとして、たとえば、オスベッキア属植物の抽出物（特許文献６参照）、藤茶抽出物（特許文献７参照）等が知られている。

ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。そのため、ヒスタミン遊離を阻害又は抑制する物質により、アレルギー性疾患及び炎症性疾患を予防又は治療する試みがなされている。しかし、ヒスタミンの遊離を直接的に評価することは困難であり、ヒスタミンの遊離と同時に遊離されることが確認されているヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミンの遊離を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより炎症性疾患等の予防、治療又は改善に効果があるものと考えられる。このようなヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものとして、たとえば、トラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン及び塩酸プロメタジン等が知られているが、これらの物質はいずれも副作用が強く、安全性の面で問題があるものである。

血小板が凝集して活性化することにより、生理的には止血、病理的には血栓形成を生じることが知られている。この血小板の凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ_２の活性化を招き、それによりロイコトリエンＢ及びプロスタグランジンＥ_２等が放出される。そのため、血小板の凝集は、炎症の生じる一因として知られている他、動脈硬化の進展、癌転移等に関与していると考えられている。このため、血小板の凝集を阻害・抑制することにより炎症性疾患を予防・改善することができると考えられている。血小板凝集抑制作用を有するものとしては、例えば、コウサンフウ抽出物（特許文献８参照）、藤茶抽出物（特許文献９参照）等が知られている。

皮膚の老化には、様々な因子が複雑に関与している。皮膚の老化の予防又は遅延を目的として、例えば、皮膚に存在し皮膚の分解に関与するマトリックス系プロテアーゼの活性阻害、女性ホルモンの減少抑制、皮膚の新陳代謝の遅延を防止する細胞増殖、紫外線や活性酸素による障害の予防・低減、角層の成熟に不可欠なコーニファイドエンベロープの形成を誘導するトランスグルタミナーゼの産生促進、及びタンパク質と糖との共存で非酵素的に反応するメイラード反応の抑制等が盛んに研究されている。

皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。

ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるエラスチンが分解・変質し、また、コラーゲンの産生量が減少するとともに架橋による弾力性低下を引き起こす。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が生じるため、肌は、張りや艶を失い、肌荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン、エラスチン等の真皮マトリックス成分の減少、変性等が関与している。

近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ；Matrix metalloproteinases）の関与が指摘されている。このＭＭＰｓの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。したがって、ＭＭＰ−１の活性を阻害することは、皮膚の老化症状を予防・改善する上で重要である。このようなＭＭＰ−１阻害作用を有するものとしては、例えば、ヒマラヤザクラからの抽出物（特許文献１０参照）、ショウガ科ジンギバーカッサムナー又はクワ科フィカスネリフォリアからの抽出物（特許文献１１参照）等が知られている。

加齢に伴う皮膚老化の一因は、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することにある。すなわち、エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招くほか、肌の過敏症、弾力性の低下、潤いの減少等、好ましくない肌の変化の原因となったり、閉経後の女性等におけるエストロゲンの欠乏は、冠動脈性心臓疾患や骨粗鬆症の原因となったりすることが知られている。

そこで、エストロゲンの分泌が衰える更年期以降の女性に対して、エストロゲンと同様の作用を有する物質を配合した薬剤を、経皮的又は経口的に投与することが行われている。このようなエストロゲン様作用を有するものとしては、例えば、ツルゲンゲからの抽出物（特許文献１２参照）、ストリガ属に属する植物からの抽出物（特許文献１３参照）等が知られている。

表皮は、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角層へと連なる４層構造からなるが、各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。通常、角化細胞は基底層で産生され、徐々に上層に分化しながら移動して角質細胞となって角層を構成し、最終的に垢として角層から脱落していく。

角層は皮膚の最外殻に存在しており、外界からの刺激に対する物理的なバリアとしての役割を果たしている。皮膚ではこのバリア機能を持たせるため、角化細胞が基底層で産生されてから垢となって剥がれ落ちるまでのサイクル（角化）を通常４週間の周期で繰り返し、表皮の新陳代謝を行っている。しかしながら、この角層も加齢によって新陳代謝機能が衰え、こじわ、くすみ、色素沈着、肌荒れ等の皮膚トラブルを発生することになる。そのため、角化細胞の増殖を促進し、肌の新陳代謝機能を回復させることにより、こじわ、くすみ、色素沈着等の皮膚の老化を改善できるものと考えられる。このような考えに基づき、表皮角化細胞増殖促進作用を有するものとして、タイソウ抽出物（特許文献１４参照）、土貝母からの抽出物（特許文献１５参照）等が知られている。

紫外線を過度に浴びると、紫外線の刺激により皮膚の細胞が活性酸素やサイトカイン等を産生し、細胞自身や周りの細胞に働きかけ、日焼け等の急性炎症反応、すなわち、皮膚に水疱等の炎症が形成され、ひいては色素沈着を生じる等の悪影響をもたらす。また、このとき生じた活性酸素は、ＤＮＡの損傷を引き起こすことが知られている。ＤＮＡに損傷が生じた細胞では、細胞内にｐ５３と呼ばれる癌抑制遺伝子タンパク質が発現し、このタンパク質がＤＮＡ損傷の度合いにより、ＤＮＡの修復、細胞周期の停止、アポトーシスを誘導することが知られている。皮膚中におけるアポトーシスの増加は、組織再生能の低下につながり、皮膚の老化を促進する原因となり得る。したがって、紫外線照射によって生じる障害を予防・改善することができれば、皮膚の保湿能力、弾力性、バリア機能等の皮膚機能を維持することにもつながると考えられる。

また、紫外線の慢性的な暴露は、皮膚の老化（光老化）を促進し、シミ、シワのみならず、皮膚癌の一因であることが知られている。その結果として、皮膚の老化やシワの形成等が生じ、皮膚機能が低下すると考えられている。したがって、紫外線によって誘発される皮膚の炎症反応や、その後に生じる皮膚機能の障害を予防・改善することは、皮膚の老化や癌を予防・改善することにもつながると考えられる。

従来、紫外線照射による障害を予防する方法として、ベンゾフェノン誘導体等の紫外線吸収剤、酸化チタン、酸化亜鉛等の無機紫外線散乱剤を配合したサンスクリーン製品が用いられている（特許文献１６〜１８参照）。しかしながら、これらのサンスクリーン製品は、高い紫外線防御効果が得られるものの、使用感の問題や、耐摩擦性、耐汗性等の物理的耐久性の限界から、継続的な予防効果として満足することができるものではなく、紫外線吸収剤で炎症を起こしてしまう等、安全性の点でも問題となっている。また、紫外線に暴露された後に生じる炎症やその後に引き起こされる障害等を予防・改善することのできる製剤の開発が望まれている。このような紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージからの回復作用を有するものとして、例えば、カンゾウの根からの抽出物（特許文献１９参照）等が知られている。

表皮は、基底層、有棘層、顆粒層及び角層から構成されており、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きを有している。基底層で分裂し、増殖した細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角層になり、最終的には垢として角層から脱落する。特に、顆粒層では、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ−１の作用により、タンパク分子間がグルタミル−リジン架橋され、コーニファイドエンベロープ（ＣＥ）が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能の基礎が形成される。

しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ−１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や乾燥性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このようなトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有するものとして、ニガリ又はその構成成分である塩化カルシウム（特許文献２０参照）、フロリジン及び／又はフロレチン（特許文献２１参照）等が知られている。

近年、メイラード（Maillard）反応が、皮膚の褐変、老化現象に深く関与していることが報告されている。メイラード反応は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質のアミノ基、ケトン、アルデヒド、特に還元糖が反応して褐色色素を生成するもので、食品分野では、その褐色と風味とが広く利用され、また研究されている。また、メイラード反応は、食品の劣化の指標となる場合もあるため、メイラード反応の抑制に関する研究も進められている。この反応生成物である褐変した色素の存在と蓄積とが、皮膚においても確認されている（非特許文献５，６参照）。この反応が、皮膚コラーゲンについても起こり、特に加齢に伴うコラーゲンの変性による皮膚の張り及び艶の消失の一因となることが報告されている。このようなメイラード反応抑制作用を有するものとして、例えば、カルカデ、ハイビスカス、シャゼンシ、トウニン、マロニエ、ケイシ、ゴミシ、シコン、センナ、トシシ及びビャッキュウからの抽出物（特許文献２２参照）等が知られている。

体内の脂肪は、消費エネルギーに対し摂取エネルギーが過剰である場合に、その過剰分が白色脂肪細胞の中性脂肪として蓄積するものである。体脂肪の蓄積によって生じる肥満は、美容上好ましくないばかりでなく、動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を引き起こす。昨今は飽食の時代であり、過食、運動不足、ストレス等による肥満が増加し、美容の観点からも男女を問わず大きな問題となっている。したがって、皮下脂肪等の蓄積は、健康上も好ましくなく、皮下脂肪等の減少・分解、又は蓄積の防止が重要な問題となっている。生体内の脂肪を分解するためには、脂肪細胞に蓄積されたトリグリセライドを分解し、遊離脂肪酸として血液中にて代謝する機構が考えられる。このような脂肪分解促進作用を有するものとして、例えば、エンドウの若芽からの抽出物（特許文献２３参照）、カバノキ科シラカバからの抽出物及び／又はイネ科クマザサからの抽出物（特許文献２４参照）等が知られている。
特開２００３−８１８４８号公報 特開２００５−２９４８３号公報 特開２００６−２４１０６２号公報 特開２００６−３４７９３４号公報 特開２００２−８７９７５号公報 特開２００３−５５２４２号公報 特開２００３−１２５３２号公報 特開２００２−５３４７７号公報 特開２００１−９７８７３号公報 特開２００３−１７６２３２号公報 特開２００３−１７６２３０号公報 特開２００５−２２０１００号公報 特開２００４−３４５９８２号公報 特開２００６−３１６０２８号公報 特開２００６−５６８５４号公報 特開平６−３０５９４９号公報 特開平７−１４５０２９号公報 特開平８−２５９４１９号公報 特開２００４−２５０３６８号公報 特開２００７−１０６７１２号公報 特開２００４−５１５９６号公報 特開平１１−１０６３３６号公報 特開２００４−２５６４６４号公報 特開２００６−０４５１２０号公報 「フレグランスジャーナル臨時増刊」，1995年，No.14，p.156 「和漢医薬学雑誌」，1998年，Vol.15，p.302-303 「炎症」，1993年，Vol.13，No.4，p.337-340 「薬学雑誌」，2001年，Vol.121，No.2，p.167-171 「Z. Ernaehrungswiss」，1991年，Vol.30，p.29-45 「Science」，1981年，Vol.211，No.4481，p.491-493

本発明は第一に、安全性の高い天然物の中からスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用及びグルタチオン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗酸化剤を提供することを目的とする。

本発明は第二に、安全性の高い天然物の中から一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗炎症剤を提供することを目的とする。

本発明は第三に、安全性の高い天然物の中からマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びメイラード反応阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗老化剤を提供することを目的とする。

本発明は第四に、安全性の高い天然物の中から脂肪分解促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗肥満剤又は脂肪分解促進剤を提供することを目的とする。

本発明は第五に、安全性の高い天然物の中からグルタチオン産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とする美白剤を提供することを目的とする。

本発明は第六に、安全性の高い天然物の中からスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用及び脂肪分解促進作用のうちの少なくともいずれか１つの作用を有するものを見出し、それを配合した皮膚化粧料又は飲食品を提供することを目的とする。

上記課題を解決するため、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤及び美白剤は、鳳凰木からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とし、本発明の皮膚化粧料及び飲食品は、鳳凰木からの抽出物を配合したことを特徴とする。

本発明の抗酸化剤においては、上記抽出物が、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用及びグルタチオン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましく、本発明の抗炎症剤においては、上記抽出物が、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましく、本発明の抗老化剤においては、上記抽出物が、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びメイラード反応阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましい。

本発明によれば、天然物である鳳凰木からの抽出物を有効成分として含有し、安全性に優れた抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤、美白剤、皮膚化粧料又は飲食品を提供することができる。

以下、本発明について説明する。
〔抗酸化剤，抗炎症剤，抗老化剤，抗肥満剤，脂肪分解促進剤，美白剤〕
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤は、鳳凰木からの抽出物を有効成分として含有する。

ここで本発明において「鳳凰木からの抽出物」には、鳳凰木を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。

本発明において使用する抽出原料は、鳳凰木（学名：Delonix regina，Delonix regia）である。

鳳凰木（Delonix regina，Delonix regia）は、マメ科ホウオウボク属に属する１５〜２０ｍの高木であり、別名、火炎樹とも呼ばれ、シンガポール、インドネシア、沖縄等では街路樹、緑陰樹として広く植えられており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る鳳凰木の構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部、地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部等の地上部である。

鳳凰木からの抽出物に含有されるスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用又は脂肪分解促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、鳳凰木からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。

例えば、上記植物を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用又は脂肪分解促進作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、鳳凰木の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

抽出溶媒としては、極性溶媒を用いるのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

抽出溶媒として使用することのできる親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。

精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。

鳳凰木からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料又は飲食品に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。

以上のようにして得られる鳳凰木からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、脂肪分解促進作用又は美白作用を有しているため、それぞれの作用を利用して抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤の有効成分として用いることができる。

ここで、鳳凰木からの抽出物が有する抗酸化作用は、例えば、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用及びグルタチオン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、鳳凰木からの抽出物が有する抗酸化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。なお、鳳凰木からの抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用及びグルタチオン産生促進作用を有するため、それらの作用を利用して、スーパーオキサイド消去剤、過酸化水素消去剤及びグルタチオン産生促進剤の有効成分として利用することができる。

鳳凰木からの抽出物が有する抗炎症作用は、例えば、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、鳳凰木からの抽出物が有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。なお、鳳凰木からの抽出物は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用を有するため、それらの作用を利用して、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤及び血小板凝集抑制剤の有効成分として利用することができる。また、鳳凰木からの抽出物は、その血小板凝集抑制作用に基づいて、血小板凝集に起因する疾患（例えば、血栓症、虚血性心疾患等）の予防・治療剤の有効成分として利用することができる。

鳳凰木からの抽出物が有する抗老化作用は、例えば、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びメイラード反応阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、鳳凰木からの抽出物が有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。なお、鳳凰木からの抽出物は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びメイラード反応阻害作用を有するため、それらの作用を利用して、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤、エストロゲン様作用剤、表皮角化細胞増殖促進剤、紫外線照射によるダメージ回復剤、過酸化水素による細胞障害抑制剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤及びメイラード反応阻害剤の有効成分として利用することができる。

鳳凰木からの抽出物が有する抗肥満作用は、例えば、脂肪分解促進作用に基づいて発揮される。ただし、鳳凰木からの抽出物が有する抗肥満作用は、上記作用に基づいて発揮される抗肥満作用に限定されるものではない。

鳳凰木からの抽出物が有する美白作用は、例えば、グルタチオン産生促進作用に基づいて発揮される。ただし、鳳凰木からの抽出物が有する美白作用は、上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。

本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤は、鳳凰木からの抽出物のみからなるものであってもよいし、上記抽出物を製剤化したものであってもよい。

鳳凰木からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。鳳凰木からの抽出物は、他の組成物（例えば、後述する皮膚化粧料、飲食品等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。

なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤は、必要に応じて、抗酸化作用、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、抗炎症作用、一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、抗老化作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用、抗肥満作用、脂肪分解促進作用又は美白作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。

本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤の投与方法としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。

本発明の抗酸化剤は、鳳凰木からの抽出物が有するスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用及びグルタチオン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、シワ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗酸化剤は、これらの用途以外にもスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用及びグルタチオン産生促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の抗炎症剤は、鳳凰木からの抽出物が有する一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡等の各種炎症性疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤は、これらの用途以外にも一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の抗老化剤は、鳳凰木からの抽出物が有するマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、及びメイラード反応阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、皮膚の老化を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗老化剤は、これらの用途以外にもマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、及びメイラード反応阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の抗肥満剤は、鳳凰木からの抽出物が有する脂肪分解促進作用を通じて、肥満症、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗肥満剤は、こられの用途以外にも脂肪分解促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の脂肪分解促進剤は、鳳凰木からの抽出物が有する脂肪分解促進作用を通じて、肥満症、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の脂肪分解促進剤は、こられの用途以外にも脂肪分解促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の美白剤は、鳳凰木からの抽出物が有するグルタチオン産生促進作用を通じて、紫外線による酸化ストレスに対する障害を抑制することができ、これにより紫外線の照射によるシミ等の色素沈着症等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の美白剤は、これらの用途以外にもグルタチオン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途にもちいることができる。

〔皮膚化粧料〕
鳳凰木からの抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用又は脂肪分解促進作用を有しており、皮膚に適用した場合の使用感と安全性とに優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。

この場合、皮膚化粧料には、鳳凰木からの抽出物を配合してもよいし、鳳凰木からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤を配合してもよい。

鳳凰木からの抽出物、又はそれらから製剤化された抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤若しくは美白剤を皮膚化粧料に配合することによって、皮膚化粧料にスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用又は脂肪分解促進作用を付与することができる。

鳳凰木からの抽出物を配合し得る皮膚化粧料の種類は、特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、ファンデーション、リップクリーム、口紅、入浴剤等が挙げられる。

鳳凰木からの抽出物を皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。

本発明の皮膚化粧料は、鳳凰木からの抽出物が有するスーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用又は脂肪分解促進作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。

〔飲食品〕
鳳凰木からの抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、グルタチオン産生促進作用、一酸化窒素産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、メイラード反応阻害作用又は脂肪分解促進作用を有しており、消化管で消化されるようなものではないことが確認されており、安全性にも優れているため、飲食品に配合するのに好適である。

この場合に、鳳凰木からの抽出物をそのまま配合してもよいし、鳳凰木からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤又は美白剤を配合してもよい。

上記鳳凰木からの抽出物、又はそれから製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤若しくは美白剤を飲食品に配合する場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して、成人１日あたりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが好ましい。

本発明の飲食品は、鳳凰木からの抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合したものであってもよいし、鳳凰木からの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。

本発明の飲食品を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類などの任意の助剤を添加して任意の形状の飲食品にすることができる。

鳳凰木からの抽出物を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などが挙げられ、これらの飲食品に上記鳳凰木からの抽出物を配合するときに、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。

なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、脂肪分解促進剤、美白剤、皮膚化粧料又は飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。

〔製造例１〕鳳凰木抽出物の製造
鳳凰木の葉部の粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒１０００ｍＬを加え、穏やかに攪拌しながら８０℃にて２時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を４０℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して鳳凰木葉部抽出物を得た（試料１〜３）。抽出溶媒として、水、５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比１：１）、８０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表１に示す。

〔試験例１〕スーパーオキサイド消去作用試験（ＮＢＴ法）
製造例１により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてスーパーオキサイド消去作用を試験した。

試験管に３ｍＭのキサンチン、０．０５ＭのＮａ_２ＣＯ_３緩衝液（ｐＨ１０．２）、３ｍＭのＥＤＴＡ、５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン溶液、及び０．７５ｍＭのＮＢＴ（nitroblue tetrazolium）を０．１ｍＬずつ加え、これに各試料溶液（試料１〜３）０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。放置後、酵素溶液としてのキサンチンオキシダーゼ溶液０．１ｍＬを加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍＭの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させて、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。

酵素溶液を添加しない場合についても、同様の操作と吸光度の測定を行い、さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式によりスーパーオキサイド消去率（％）を算出した。

スーパーオキサイド消去率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
上記式において、Ａは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｃは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を、Ｄは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を示す。

試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイド消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ_５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表２に示す。

表２に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れたスーパーオキサイド消去作用を有することが確認された。また、スーパーオキサイド消去作用の程度は、鳳凰木葉部抽出物の濃度によって調節できることが確認された。

〔試験例２〕過酸化水素消去作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１〜３）について、以下のようにして過酸化水素消去作用を試験した。

１．５ｍＭの過酸化水素溶液１０μＬに試料溶液（試料１〜３）１０μＬを加え、３７℃で２０分間反応させた後、発色溶液（１００ｍＭのＤＡ−６４（和光純薬社製）、０．５質量％トライトンＸ−１００を含有する０．１ＭのＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１００ｍＬに１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペルオキシダーゼ１ｍＬを添加し、全量を１００ｍＬに調整したもの）２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間インキュベートした。その後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。

過酸化水素の標準溶液を添加していない場合についても、同様の操作と吸光度測定を行い、さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式により過酸化水素消去率（％）を算出した。

過酸化水素消去率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
上記式において、Ａは「過酸化水素標準溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｂは「過酸化水素標準溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｃは「過酸化水素標準溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表し、Ｄは「過酸化水素標準溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表す。

試料濃度を段階的に減少させて上記過酸化水素消去率の測定を行い、過酸化水素の消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ_５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表３に示す。

表３に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れた過酸化水素消去作用を有することが確認された。また、過酸化水素消去作用の程度は、鳳凰木葉部抽出物の濃度により調節できることが確認された。

〔試験例３〕グルタチオン産生促進作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにしてグルタチオン産生促進作用を試験した。

ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度に１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養後、１％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料３，試料濃度：２００μｇ／ｍＬ）を各ウェルに２００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、各ウェルから培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）にて洗浄後、１５０μＬのＭ−ＰＥＲ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。このようにして得られた細胞溶解液１００μＬを用いて、総グルタチオンの定量を下記のようにして行った。

細胞溶解液１００μＬ、０．１Ｍのリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍＭのＮＡＤＰＨ２５μＬ及びグルタチオンレダクターゼ２５μＬ（終濃度１７．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）を加え、３７℃で１０分間加温した後、１０ｍＭの5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。得られた値を総タンパク量あたりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。

グルタチオン産生促進率(％)＝Ｂ／Ａ×１００
上記式において、Ａは「試料無添加時の細胞中における総タンパク量あたりのグルタチオン量」を、Ｂは「試料添加時の細胞中における総タンパク量あたりのグルタチオン量」を表す。
上記試験の結果を表４に示す。

表４に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れたグルタチオン産生促進作用を有することが確認された。

〔試験例４〕一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにして一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。

マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞，大日本製薬社製）を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地（日水製薬社製）にて前培養後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料３，試料濃度：２００μｇ／ｍＬ）を各ウェルに１００μＬ添加し、１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，終濃度１μｇ／ｍＬ，E.coli0111:B4，DIFCO社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。

一酸化窒素（ＮＯ）産生量は、亜硝酸イオン（ＮＯ_２ ⁻）量を指標に測定した。培養終了後、各ウェルの培養液に、培養上清と同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド，０．１％N-1-naphthyl ethylendiamine dihydrochlpride in ５％リン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応させた。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制率（％）は、試料無添加時（コントロール）の一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基に、下記式により算出した。

ＮＯ産生抑制率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時のブランクの吸光度」を表し、Ｃは「試料添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加時のブランクの吸光度」を表す。
結果を表５に示す。

表５に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れた一酸化窒素産生抑制作用を有することが確認された。

〔試験例５〕腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにして腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用を試験した。

マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞，大日本製薬社製）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地（日水製薬社製）を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１ウェルあたり１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／１００μＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。

培養終了後、培地を抜き、終濃度２％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて溶解した試料溶液（試料３）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（LPS，E.coli0111;B4，DIFCO社製）を１００μＬ加え、細胞を刺激した。その後、３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養し、培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ−α量を、下記のサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。

一次抗体であるラット抗マウスＴＮＦ−αモノクローナル抗体（Endogen Inc.社製）を５０ｍｍｏｌ／Ｌ炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ９．６）で２．５μｇ／ｍＬの濃度になるように溶解した。かかる溶液１００μＬを９６ウェルプレートに加え、一晩４℃でコーティングした。次いで、洗浄液（０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液）で各ウェルを洗浄後、１質量％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液でブロッキングを行った。

次に、洗浄液によって各ウェルを洗浄後、試験培地で培養上清を希釈し、その１００μＬを各ウェルに加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各ウェルを洗浄した後、二次抗体として０．３質量％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液に２．５μｇ／ｍＬの濃度で溶解させたウサギ抗マウスＴＮＦ−αポリクローナル抗体（Endogen Inc.社製）１００μＬを加え、３７℃で６０分間インキュベートしてから洗浄した。

そして、５００倍に希釈したアルカリフォスファターゼ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（CHEMICON Inc.社製）を１００μＬ加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各ウェルを洗浄した後、発色用緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸マグネシウム含有トリス塩酸緩衝液，ｐＨ８．０）１００ｍＬにｐ−ニトロフェニルリン酸５０ｍｇを溶解してなる基質溶液１５０μＬを各ウェルに添加し、３７℃で２０〜３０分間酵素反応を行って発色させ、波長４０５ｎｍの吸光度を測定し、リコンビナントマウスＴＮＦ−α（Endogen Inc.社製）標準液より作成した標準曲線から、培養上清中のＴＮＦ−α量（ｐｇ／ｍＬ）を求めた。得られた結果から、下記式によりＴＮＦ−α産生抑制率（％）を算出した。

ＴＮＦ−α産生抑制率(％)＝{(Ｂ−Ａ)／Ｂ}×１００
式中、Ａは「試料溶液添加時のＴＮＦ−α量」を表し、Ｂは「試料溶液無添加時のＴＮＦ−α量」を表す。
結果を表６に示す。

表６に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れたＴＮＦ−α産生抑制作用を有することが確認された。

〔試験例６〕ヒアルロニダーゼ阻害作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１〜３）について、下記のようにしてヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。

試料（試料１〜３）を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬ（試料濃度；４００μｇ／ｍＬ）にヒアルロニダーゼ溶液（Type IV-S(from bovine testis)，SIGMA社製，４００ＮＦｕｎｉｔｓ／ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸カリウム溶液（from Rooster Comb）０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間反応させた。

その後、０．４ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムを０．２ｍＬ加えて反応を停止し、冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬（p-Dimethylaminobenzaldehyde，和光純薬工業社製）６ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた測定結果から、下記式によりヒアルロニダーゼ阻害率（％）を算出した。

ヒアルロニダーゼ阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
式中、Ａは「試料添加・酵素溶液添加時の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料添加・酵素溶液無添加時の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「試料無添加・酵素溶液添加時の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｄは「試料無添加・酵素溶液無添加時の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表７に示す。

表７に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。

〔試験例７〕ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。

ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度に希釈し、終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるようにDNP-specific IgE（SIGMA社製）を添加した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、培地を抜き、シリガリアン緩衝液５００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液（試料１〜３）１０μＬを加え、３７℃にて１０分間静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ溶液（LSL Co.，Ltd.社製）１０μＬを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ溶液（p-nitrophenyl N-acetyl b-D-glucosaminide，SIGMA社製）１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間反応させた。反応終了後、各ウェルに０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬと、０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３２５０μＬとの混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。得られた測定結果から、下記式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出した。

ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「試料無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・ｐ−ＮＡＧ無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表す。

試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出し、その結果から内挿法により、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％阻害する試料濃度ＩＣ_５０（μｇ／ｍＬ）を求めた。
結果を表８に示す。

表８に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。また、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用の程度は、鳳凰木葉部抽出物の濃度により調節できることが確認された。

〔試験例８〕血小板凝集抑制作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１〜３）について、以下のようにして血小板凝集抑制作用を試験した。

（１）血小板浮遊液の調製
採血したウサギの血液にヘパリンナトリウム注射液(日本薬局方)を１／１０量加えて遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）して、血小板浮遊液（Platelet Rich Plasma，P.R.P.）を得た。

（２）血小板凝集抑制作用試験
次に、血小板浮遊液（P.R.P.）２２３μＬに２００ｍｍｏ１／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに試料溶液１μＬを加え、さらに２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹絆した後、コラーゲン溶液２５μＬを添加して、３７℃で１０分間反応した後の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして試料溶液の代わりに試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。得られた結果から、下記式により血小板凝集抑制率（％）を算出した。

血小板凝集抑制率(％)＝(Ａ−Ｂ)／Ａ×１００
式中、Ａは「コントロールの血小板凝集率」を表し、Ｂは「試料添加時の血小板凝集率」を表す。

試料濃度を段階的に減少させて上記血小板凝集抑制率の測定を行い、血小板凝集抑制率が５０％になる試料濃度ＩＣ_５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
結果を表９に示す。

表９に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れた血小板凝集抑制作用を有することが確認された。また、血小板凝集抑制作用の程度は、鳳凰木葉部抽出物の濃度により調節できることが確認された。

〔試験例９〕マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用を試験した。

蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）で調製した試料溶液５０μＬ、０．１ｍｇ／ｍＬのマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１，COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum，SIGMA社製）溶液５０μＬ、及び０．５ｍｍｏｌ／ＬのＰｚ−ペプチド（Pz-Pro-Leu-gly-Pro-D-Arg-OH，BACHEM Feinchemikalien AG社製）溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え、反応を停止した。

その後、酢酸エチル５ｍＬをさらに加えて、激しく振とうした。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法により空試験を行った。得られた結果から、下記式によりマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害率（％）を算出した。

ＭＭＰ−１阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の吸光度」を表す。

試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、マトリックスメタロプロテアーゼ−１の活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ_５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
結果を表１０に示す。

表１０に示すように、鳳凰木葉部抽出物は、優れたＭＭＰ−１阻害作用を有することが確認された。また、ＭＭＰ−１阻害作用の程度は、鳳凰木葉部抽出物の濃度により調節できることが確認された。

〔試験例１０〕エストロゲン様作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにしてエストロゲン様作用を試験した。

ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、活性炭処理した１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有しフェノールレッドを含有しないＭＥＭ培地（Ｔ−ＭＥＭ培地）を用いて、３．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度に調整した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭ培地で終濃度の１０倍に調整した試料溶液（試料３，試料濃度：５０μｇ／ｍＬ）を各ウェルに５０μＬずつ添加し培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭ培地で終濃度に調整した試料溶液を各ウェルに０．５ｍＬずつ添加し、さらに培養を続けた。

エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１％ＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭ培地に終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各ウェルに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１×１０^−９Ｍのエストラジオールを使用した。得られた結果から、下記式によりエストロゲン様作用率（％）を算出した。

エストロゲン様作用率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表１１に示す。

表１１に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れたエストロゲン様作用を有することが確認された。

〔試験例１１〕表皮角化細胞増殖促進作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにして表皮角化細胞増殖作用を試験した。

正常ヒト新生児包表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ^２のフラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（Epilife-KG2）を用いて３７℃、５％ＣＯ_２−９５％ａｉｒの条件下で培養した後、トリプシン処理にて細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにEpilife-KG2にて希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。その後、試料をEpiLife-KG2に溶解した試料溶液（試料３，試料濃度：３．１３μｇ／ｍＬ）を各ウェルに１００μＬ添加し、３日間培養した。

表皮角化細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ウェル１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。得られた結果から、下記式により表皮角化細胞増殖促進率（％）を算出した。

表皮角化細胞増殖促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
上記式において、Ａは「試料添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表１２に示す。

表１２に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認された。

〔試験例１２〕紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用試験
製造例１によれ得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにして紫外線ＵＶ−Ｂによるダメージからの回復作用を試験した。

ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにα−ＭＥＭ培地を用いて希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ^２のＵＶ−Ｂを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した試料溶液（試料３）を各ウェルに４００μＬずつ添加し、２４時間培養した。

紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ウェルに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出し、抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞を播種した後、ＵＶ−Ｂを照射しない細胞及びＵＶ−Ｂを照射し試料溶液を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群及び照射群とした。得られた測定結果から、下記式により、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復率（％）を算出した。

ダメージ回復率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中、Ａは「ＵＶ−Ｂを照射していない細胞での吸光度」を表し、Ｂは「ＵＶ−Ｂを照射し試料溶液を添加していない細胞での吸光度」を表し、Ｃは「ＵＶ−Ｂを照射し試料溶液を添加した細胞」での吸光度を表す。
結果を表１３に示す。

表１３に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）は、優れた紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用を有することが確認された。

〔試験例１３〕過酸化水素による細胞障害抑制作用
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにして過酸化水素による細胞障害抑制作用を試験した。

ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）１０％ＦＢＳを含有するα−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、培地を抜き、１％ＦＢＳを含有するα−ＭＥＭに試料を溶解した試料溶液（試料３，試料濃度：４００μｇ／ｍＬ）を、各ウェルに２００μＬずつ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄した。洗浄後、過酸化水素を溶解したHank's緩衝液（過酸化水素最終濃度：１ｍＭ）を各ウェルに２００μＬ添加し、２時間培養した。

また、試料溶液を添加して培養し、培養後、過酸化水素を溶解していないHank's緩衝液を２００μＬ添加し、同様の条件で培養した。さらに、試料溶液を添加せずに培養し、培養後、過酸化水素を溶解したHank's緩衝液を２００μＬ添加し、同様の条件で培養した。

培養後、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄し、終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬで１％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解したニュートラルレッド溶液を、各ウェルに２００μＬずつ添加し、２．５時間培養した。この後、ニュートラルレッド溶液を除去し、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）３００μＬを各ウェルに加え、色素を抽出した。その後、マイクロプレートリーダーを用い５４０ｎｍでの吸光度を測定し、下記式により過酸化水素による細胞障害抑制率（％）を算出した。

細胞障害抑制率(％)＝{１−(Ｃ−Ａ)／(Ｃ−Ｂ)}×１００
上記式において、Ａは「試料溶液添加・過酸化水素溶液添加時の吸光度」を、Ｂは「試料溶液無添加・過酸化水素溶液添加時の吸光度」を、Ｃは「試料溶液無添加・過酸化水素溶液無添加時の吸光度」を表す。
結果を表１４に示す。

表１４に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れた過酸化水素による細胞障害抑制作用を有することが確認された。

〔試験例１４〕トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにしてトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト新生児表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。培養終了後、ＫＧＭで溶解した試料溶液（試料３）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量を、モノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりトランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）を算出した。

トランスグルタミナーゼ−１産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度」を表す。
試験結果を表１５に示す。

表１５に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れたトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有することが確認された。

〔試験例１５〕メイラード反応抑制作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにしてメイラード反応抑制作用を試験した。

試料溶液（試料３）５０μＬ、１００ｍｍｏｌ／ＬのＤ(−)−リボース２００μＬ、２５ｍｇ／ｍＬのリゾチーム２００μＬ、１００ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸水素ナトリウム（ｐＨ７．４）５００μＬ、及び滅菌蒸留水５０μＬを混合し（全量１０００μＬ）、３７℃で７日間静置した。

７日間静置後、ボルテックスで攪拌し、反応液２０μＬにＳＤＳ−ＰＡＧＥ用サンプルバッファー２０μＬを混合した後、沸騰浴中で３分間加熱し、分析サンプルとした。アクリルアミド濃度を、分離ゲル１５％、濃縮ゲル４％に調整したポリアクリルアミドゲルに分析サンプル２０μＬをアプライし、電気泳動を行った。泳動したゲルをクマシーブリリアントブルー染色後脱色し、検出したバンドをKODAK 1D Image Analysis Software EDAS290 Version3.5にて定量的に測定した。コントロールとして、試料溶液の代わりに蒸留水としたものについても同様に試験するとともに、ブランクとして、試料溶液の代わりに蒸留水とし、４℃で７日間静置したものについても同様に試験した。

結果は、各バンドのNet intensity（バンド強度）を用いて、リゾチームの二量体、三量体の形成阻害率を計算し、得られた結果から、下記式によりメイラード反応阻害率（％）を算出した。

メイラード反応阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｃ)／(Ｂ−Ｃ)}×１００
式中、Ａは「試料添加時の二量体及び三量体のNet intensityの和」を表し、Ｂは「コントロールの二量体及び三量体のNet intensityの和」を表し、Ｃは「ブランクの二量体及び三量体のNet intensityの和」を表す。
結果を表１６に示す。

表１６に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れたメイラード反応阻害作用を有することが確認された。

〔試験例１６〕脂肪分解促進作用試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）について、以下のようにして脂肪分解促進作用を試験した。

（１）脂肪細胞液の調製
ウイスター系雄性ラット（８週齢）７匹をエーテル麻酔にかけ、麻酔下で断頭により放血致死させた。副睾丸上の脂肪組織を切り出し、３７℃に保温した生理食塩水中で組織をハサミで細かく切った。組織小片を小型の三角フラスコに入れ、これに１０ｍＬの緩衝液Ａ（１１９ｍｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウム、４．７ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カリウム、２．６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム、１．２ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素カリウム、１．２ｍｍｏｌ／Ｌの硫酸マグネシウム、３２．３ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２０ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン、及び２ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース）に溶解した１０ｍｇのコラゲナーゼを入れて１時間３７℃で攪拌（１００ｒｐｍ／ｍｉｎ）しながら反応させた。

反応後、ガーゼで濾過して未消化組織を除き、濾液を蓋付きスピッツ管に取って遠心し（１８０×ｇ，２０秒）、下層をパスツールピペットで取り除いた。これに緩衝液Ａを１０ｍＬ加え、混合した後、再度遠心した。この操作を４回繰り返し、コラゲナーゼを十分取り除いた。最後に、１０ｍＬ程度の緩衝液Ａを加えて、脂肪細胞液とした。

（２）遊離脂肪酸量の測定
上記のようにして調製した脂肪細胞液を９６ウェルプレートに１ウェルあたり９０μＬずつ播種し、試料溶液を各ウェルに１０μＬずつ添加して、１．５時間インキュベートした。その後、各ウェルから５μＬずつ採取して、遊離した脂肪酸量をＮＥＦＡ−Ｃテストワコー（和光純薬工業社製）により測定した。得られた測定結果から、下記式により脂肪分解促進率（％）を算出した。

脂肪分解促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の遊離脂肪酸量」を表し、Ｂは「試料無添加時の遊離脂肪酸量」を表す。
結果を表１７に示す。

表１７に示すように、鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物は、優れた脂肪分解促進作用を有することが確認された。

〔試験例１７〕肌荒れ改善作用（皮膚老化防止・改善作用）試験
製造例１により得られた鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（試料３）を配合した乳液（以下「実施例乳液」という）を常法に従って調製した。実施例乳液の組成を以下に示す。

鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物（製造例１） ０．１ｇ
セチルアルコール ０．５ｇ
ミツロウ ２．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（10E.O.） １．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル １．０ｇ
ヒアルロン酸 ０．１ｇ
プロピレングリコール ５．０ｇ
エタノール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．３ｇ
香料 ０．０３ｇ
精製水 （全量を１００ｇとする）

鳳凰木葉部８０容量％エタノール抽出物を含まない他は実施例乳液と同一の組成からなる比較例乳液を調製し、実施例乳液及び比較例乳液について下記の評価試験を行った。

被験者：２３〜４８歳の女性多数の中から、皮溝・皮丘が消失し、広範囲にわたって角質がめくれている（下記表１９に示す評点１）、又は皮溝・皮丘が不鮮明で、角質が部分的にめくれている（下記表１９に示す評点２）肌荒れと判定された２０名を選抜して被験者とした。
塗布試験：各被験者の顔の右半分には実施例乳液を、左半分には比較例乳液を、朝夕各１回、３０日間塗布させた。

［判定１：肌荒れ改善効果］
塗布試験終了後、シルフロ（FLEXICL DEVELOPMENTS LTD.社製）によるレプリカ法を用いて顔のレプリカをとり、５０倍の顕微鏡で皮紋の状態及び角質剥離の状態を観察し、下記表１８に示す評価基準で肌の状態を判定した。
判定結果を表１９に示す。

表１９に示すように、実施例乳液を塗布した領域は、比較例乳液を塗布した領域に比べて顕著に肌荒れ（皮膚の老化）が改善された。このことから、鳳凰木葉部抽出物は、優れた肌荒れ改善効果を示すことが確認された。

［判定２：官能評価］
使用感と肌への効果とについて、実施例乳液と比較例乳液とを比較した優劣を被験者全員に質問した。
回答の集計結果を表２０に示す。

表２０に示すように、実施例乳液は、比較例乳液に比べて使用感に優れていることが確認された。
これらのことから、鳳凰木葉部抽出物を配合した皮膚化粧料が、皮膚の老化防止・改善作用（肌荒れ改善作用）を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性とに優れていることが確認された。

〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
鳳凰木葉部８０％エタノール抽出物（製造例１） １．０ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
鳳凰木葉部８０％エタノール抽出物（製造例１） ２．２ｇ
グリセリン ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
鳳凰木葉部８０％エタノール抽出物（製造例１） １．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
鳳凰木葉部８０％エタノール抽出物（製造例１） ５．０ｇ
ポリビニルアルコール １５．０ｇ
ポリエチレングリコール ３．０ｇ
プロピレングリコール ７．０ｇ
エタノール １０．０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例５〕
下記の混合物を打錠して、錠剤状の栄養補助食品を製造した。
鳳凰木葉部８０％エタノール抽出物（製造例１） ５０質量部
粉糖（ショ糖） １８８質量部
グリセリン脂肪酸エステル １２質量部

〔配合例６〕
下記の混合物を顆粒状にして、栄養補助食品を製造した。
鳳凰木葉部８０％エタノール抽出物（製造例１） ５０質量部
ビートオリゴ糖 １０００質量部
ビタミンＣ １６７質量部
ステビア抽出物 １０質量部

本発明の抗酸化剤は、活性酸素が関与する各種障害の予防、治療又は改善に、本発明の抗炎症剤は、各種炎症性疾患の予防、治療又は改善に、本発明の抗老化剤は、皮膚の老化の予防、治療又は改善に、本発明の抗肥満剤又は脂肪分解促進剤は、肥満や、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病等の予防、治療又は改善に、本発明の美白剤は、シミ等の色素沈着症等の予防、治療又は改善に大きく貢献できる。

Claims (8)

1. 水、低級脂肪族アルコール又はこれらの混合液を用いて抽出された鳳凰木の葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
2. 前記抽出物が、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項１に記載の抗炎症剤。
3. 水、低級脂肪族アルコール又はこれらの混合液を用いて抽出された鳳凰木の葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
4. 前記抽出物が、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害作用、エストロゲン様作用、表皮角化細胞増殖促進作用、紫外線（ＵＶ−Ｂ）照射によるダメージ回復作用、過酸化水素による細胞障害抑制作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用及びメイラード反応阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項３に記載の抗老化剤。
5. 水、低級脂肪族アルコール又はこれらの混合液を用いて抽出された鳳凰木の葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗肥満剤。
6. 水、低級脂肪族アルコール又はこれらの混合液を用いて抽出された鳳凰木の葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする脂肪分解促進剤。
7. 水、低級脂肪族アルコール又はこれらの混合液を用いて抽出された鳳凰木の葉部からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。
8. 水、低級脂肪族アルコール又はこれらの混合液を用いて抽出された鳳凰木の葉部からの抽出物を配合したことを特徴とする抗炎症、抗老化、抗肥満又は美白の用途に用いられる皮膚化粧料。