JP5307366B2 - 育毛剤 - Google Patents
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Description
本発明は、白蘭花の抽出物を含有する抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤、並びに化粧料及び美容用飲食品に関する。
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２ −）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの産生量が減少すると共に架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与している。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの産生量が減少すると共に架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与している。
近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群の分解及び再構築がある。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群(ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３)、（２）ゼラチナーゼ群(ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９)、（３）ストロメライシン群(ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０)、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献５参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群(ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３)、（２）ゼラチナーゼ群(ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９)、（３）ストロメライシン群(ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０)、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献５参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
また、加齢に伴う皮膚老化の一因として、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することがある。エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招く他、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等の好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。
したがってコラゲナーゼ活性の阻害、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害、あるいは加齢によるエストロゲン分泌減退を補うことにより、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を予防乃至治療できると考えられる。
したがってコラゲナーゼ活性の阻害、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害、あるいは加齢によるエストロゲン分泌減退を補うことにより、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を予防乃至治療できると考えられる。
また、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因としてヘキソサミニダーゼ遊離（ヒスタミン遊離）抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、主にマクロファージから産生される腫瘍壊死因子（以下、「ＴＮＦ−α」と称することもある）によるものが知られている。
前記ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離したヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このようなヒスタミン遊離抑制剤としては、例えばトラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジンなどが用いられてきた。しかし、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題がある。
前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
したがって炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献６参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。
したがって炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献６参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。
前記ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。そのような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症等の慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においてはＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。このようなＴＮＦ−α産生抑制剤としては、例えば、シソ抽出液（非特許文献３参照）、ヒガンバナ科アルカロイドのリコリン及びリコリシジノール（非特許文献４参照）、などが挙げられる。
また、血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それによりロイコトリエンＢ及びプロスタグランジンＥ２等が放出されて起炎物質となる。このため、血小板の凝集を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー疾患性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このような血小板凝集抑制作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、カナリウム属に属する植物の抽出物（特許文献７参照）、コウサンフウ抽出物（特許文献８参照）、藤茶抽出物（特許文献９参照）、などが報告されている。
また、男性ホルモンの１種であるテストステロンは、還元酵素であるテストステロン−５α−リダクターゼにより還元されて、ジヒドロテストステロンとなる。生成されたジヒドロテストステロンが頭皮に蓄積すると、毛根を萎縮させて、脱毛を誘発する原因となることが知られている。したがってジヒドロテストステロンの生成を抑制乃至阻害することによって、脱毛を予防及び治療できると考えられている。
そこで、テストステロン−５αリダクターゼ阻害作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、ウルシ科Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属植物の抽出物（特許文献１０参照）、マジトの抽出物及びカチュアの抽出物（特許文献１１参照）、五斂子の抽出物（特許文献１２参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、及び穿心蓮から選択されるいずれかの抽出物（特許文献１３参照）、などが提案されている。
そこで、テストステロン−５αリダクターゼ阻害作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、ウルシ科Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属植物の抽出物（特許文献１０参照）、マジトの抽出物及びカチュアの抽出物（特許文献１１参照）、五斂子の抽出物（特許文献１２参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、及び穿心蓮から選択されるいずれかの抽出物（特許文献１３参照）、などが提案されている。
また、肥満の防止には、脂肪の代謝促進に関与しているサイクリックＡＭＰを分解する酵素であるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制することが有効であると考えられる。実際、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑えると、細胞内サイクリックＡＭＰの濃度が上昇して脂質代謝が活発になり、肥満が解消されることが知られている。
そこで、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する物質を天然物から抽出することが試みられており、例えば、藤茶抽出物（特許文献１４参照）、カエデ属植物の抽出物（特許文献１５参照）、などが報告されている。
そこで、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する物質を天然物から抽出することが試みられており、例えば、藤茶抽出物（特許文献１４参照）、カエデ属植物の抽出物（特許文献１５参照）、などが報告されている。
これまでの美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、最近、紫外線ＵＶＢ照射後に表皮ケラチノサイトからの産生が上昇し、色素細胞（メラノサイト）を活性化するサイトカインとしてα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）等が報告されており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニン産生を抑制して美白効果を導く物質の開発が盛んに行われるようになってきている。このようなエンドセリン−１（ＥＴ−１）の色素細胞（メラノサイト）への作用を阻害する生薬の抽出物として、例えばカミツレ抽出物及びアルテア抽出物が報告されている（非特許文献５参照）。
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、スーパーオキサイド消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗酸化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗炎症剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第４に、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系育毛剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第５に、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗肥満剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第６に、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第７に、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した化粧料及び美容用飲食品を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗炎症剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第４に、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系育毛剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第５に、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗肥満剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第６に、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第７に、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した化粧料及び美容用飲食品を提供することを目的とする。
前記課題を解決するため、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤について本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、白蘭花の抽出物が、（１）優れたスーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有し、抗酸化剤として有用であること、（２）優れたエラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であること、（３）優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有し、抗炎症剤として有用であること、（４）優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有し、育毛剤として有用であること、（５）優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有し、抗肥満剤として有用であること、（６）優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、美白剤として有用であることを、それぞれ知見した。
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞ スーパーオキサイド消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞ エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜６＞ ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗炎症剤である。
＜７＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞ テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有する前記＜７＞に記載の育毛剤である。
＜９＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤である。
＜１０＞ サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する前記＜９＞に記載の抗肥満剤である。
＜１１＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする美白剤である。
＜１２＞ エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１１＞に記載の美白剤である。
＜１３＞ 前記＜１＞から＜１２＞のいずれかに記載の白蘭花の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
＜１４＞ 前記＜１＞から＜１２＞のいずれかに記載の白蘭花の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品である。
＜１＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞ スーパーオキサイド消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞ エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜６＞ ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗炎症剤である。
＜７＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞ テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有する前記＜７＞に記載の育毛剤である。
＜９＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤である。
＜１０＞ サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する前記＜９＞に記載の抗肥満剤である。
＜１１＞ 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする美白剤である。
＜１２＞ エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１１＞に記載の美白剤である。
＜１３＞ 前記＜１＞から＜１２＞のいずれかに記載の白蘭花の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
＜１４＞ 前記＜１＞から＜１２＞のいずれかに記載の白蘭花の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品である。
本発明の抗酸化剤によると、優れたスーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを通じて、生体内の酸化防止、皮膚の老化を防止乃至改善することができる。
本発明の抗老化剤によると、優れたエラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワ及び弾力の低下の防止乃至改善することができる。
本発明の抗炎症剤によると、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを通じて、炎症性疾患を防止乃至改善することができる。
本発明の育毛剤は、優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを通じて、男性型脱毛症等の予防乃至治療に極めて有用である。
本発明の抗肥満剤は、優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を通じて、肥満を予防乃至防止することができる。
本発明の美白剤は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを通じて、美白効果を奏することができる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は、天然系抽出物であり安全性に優れ、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさないので化粧料に配合したり、美容用飲食品に添加して用いるのに好適なものである。
本発明の抗老化剤によると、優れたエラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワ及び弾力の低下の防止乃至改善することができる。
本発明の抗炎症剤によると、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを通じて、炎症性疾患を防止乃至改善することができる。
本発明の育毛剤は、優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを通じて、男性型脱毛症等の予防乃至治療に極めて有用である。
本発明の抗肥満剤は、優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を通じて、肥満を予防乃至防止することができる。
本発明の美白剤は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを通じて、美白効果を奏することができる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は、天然系抽出物であり安全性に優れ、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさないので化粧料に配合したり、美容用飲食品に添加して用いるのに好適なものである。
（抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤）
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は、白蘭花の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤は、白蘭花の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記抗酸化剤は、抗酸化作用として、スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗老化剤は、抗老化作用として、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗炎症剤は、抗炎症作用として、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有している。
前記育毛剤は、育毛作用として、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗肥満剤は、抗肥満作用として、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有している。
前記美白剤は、美白作用として、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有している。
前記白蘭花の抽出物における抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及美白作用の少なくともいずれかを有する物質の詳細については不明であるが、該白蘭花の抽出物がこれらの優れた作用を有し、抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として有用であることは現在までのところ全く知られておらず、これらのことは、本発明者らの鋭意研究による新知見である。
前記抗老化剤は、抗老化作用として、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗炎症剤は、抗炎症作用として、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有している。
前記育毛剤は、育毛作用として、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗肥満剤は、抗肥満作用として、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有している。
前記美白剤は、美白作用として、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有している。
前記白蘭花の抽出物における抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及美白作用の少なくともいずれかを有する物質の詳細については不明であるが、該白蘭花の抽出物がこれらの優れた作用を有し、抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として有用であることは現在までのところ全く知られておらず、これらのことは、本発明者らの鋭意研究による新知見である。
前記白蘭花（ハクランカ）は、モクレン科の植物であり、学名はＭｉｃｈｅｌｉａ ａｌｂａ ＤＣ．であり、銀厚朴（ギンコンボク）、白玉蘭（ハクギョクラン）とも呼ばれる、常緑の小高木であって、樹高は１０ｍほどになる。花には強い芳香があり、葉は長楕円形、全縁で縁が波打ち、先端が尖っている。
前記白蘭花は、東南アジア、中国の福健省、広東省、広西省、雲南省等で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。
前記白蘭花には、例えば止咳、利尿、去痰等の効能があり、慢性気管支炎、前立腺炎の治療に用いられている。
前記白蘭花は、東南アジア、中国の福健省、広東省、広西省、雲南省等で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。
前記白蘭花には、例えば止咳、利尿、去痰等の効能があり、慢性気管支炎、前立腺炎の治療に用いられている。
前記白蘭花の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。なお、前記白蘭花の抽出物には、白蘭花の抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
前記白蘭花の抽出原料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、白蘭花の葉部、花（蕾）部、枝部、種子、樹皮（これらを地上部という）、根部などを用いることができる。これらの中でも、花部等の地上部が特に好ましい。
前記抽出原料である白蘭花は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記白蘭花は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、白蘭花の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。
本発明において、抽出原料である白蘭花から、抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有する物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としての白蘭花の花部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として用いることができる。
得られる白蘭花の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
なお、得られる白蘭花の抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、前記白蘭花の抽出物は、特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料及び美容用飲食品に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製としては、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
以上のようにして得られる白蘭花の抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、エストロゲン様作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、血小板凝集抑制作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲンレセプター拮抗作用、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有しており、これらの作用に基づいて、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤として使用することができる。
本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の育毛剤における育毛作用は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗肥満剤における抗肥満作用は、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用に基づいて発揮される。
本発明の美白剤における美白作用は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の白蘭花の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有すると共に、皮膚及び頭皮に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、特に、以下に説明する本発明の化粧料に配合するのに好適である。
また、本発明の白蘭花の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有すると共に、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、特に、以下に説明する本発明の美容用飲食品に配合するのに好適である。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の育毛剤における育毛作用は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗肥満剤における抗肥満作用は、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用に基づいて発揮される。
本発明の美白剤における美白作用は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の白蘭花の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有すると共に、皮膚及び頭皮に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、特に、以下に説明する本発明の化粧料に配合するのに好適である。
また、本発明の白蘭花の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有すると共に、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、特に、以下に説明する本発明の美容用飲食品に配合するのに好適である。
（化粧料）
本発明の化粧料は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
本発明の化粧料は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス、などが挙げられる。
本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、又は前記美白剤の前記化粧料全体における配合量は、化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記白蘭花の抽出物に換算して０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。
前記化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、本発明の前記抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかの妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、前記白蘭花の抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。
前記その他の成分としては、本発明の前記抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかの妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、前記白蘭花の抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。
本発明の化粧料は、皮膚及び頭皮に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、表皮角化細胞増殖促進作用、エストロゲン様作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、血小板凝集抑制作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲンレセプター拮抗作用、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、及びＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを効果的に発揮して、生体内の酸化防止、育毛、美白、老化防止、炎症性疾患の予防乃至治療に有用である。
（美容用飲食品）
本発明の美容用飲食品は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
本発明の美容用飲食品は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記美白剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
本発明の前記美容用飲食物は、白蘭花の抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、白蘭花の抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。
前記美容用飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
前記その他の成分としては、前記美容用飲食品を製造するに当たって通常用いられる補助的原料又は添加物、などが挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、などが挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、などが挙げられる。
前記美容用飲食品における本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、又は前記美白剤の添加量は、対象となる美容用飲食品の種類に応じて異なり一概には規定することができないが、美容用飲食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、各種対象美容用飲食品に対し、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、顆粒、錠剤又はカプセル形態の美容用飲食品の場合には、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
本発明の美容用飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分である白蘭花の抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを極めて効果的に発揮させることができる。
なお、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、美白剤、化粧料、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
（製造例１）
−白蘭花の水抽出物の製造−
抽出原料として白蘭花の花部の粉砕物１００ｇを、水１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
−白蘭花の水抽出物の製造−
抽出原料として白蘭花の花部の粉砕物１００ｇを、水１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
（製造例２）
−白蘭花の５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料として白蘭花の花部の粉砕物１００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
−白蘭花の５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料として白蘭花の花部の粉砕物１００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
（製造例３）
−白蘭花のエタノール抽出物の製造−
抽出原料として白蘭花の花部の粉砕物１００ｇを、エタノール１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
−白蘭花のエタノール抽出物の製造−
抽出原料として白蘭花の花部の粉砕物１００ｇを、エタノール１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
（参考例１）
−スーパーオキサイド消去試験（ＮＢＴ法）−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）各０．１ｍＬと、０．０５ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬを試験管にとり、これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
測定した各吸光度より、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
ただし、前記数式１中、Ａは「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」、Ｂは「試料
溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」、Ｃは「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光
度」、Ｄは「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」を表す。
−スーパーオキサイド消去試験（ＮＢＴ法）−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）各０．１ｍＬと、０．０５ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬを試験管にとり、これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
測定した各吸光度より、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
ただし、前記数式１中、Ａは「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」、Ｂは「試料
溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」、Ｃは「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光
度」、Ｄは「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」を表す。
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表２に示す。
（参考例２）
−ＤＰＰＨに対するラジカル消去試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えたのち直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
そして、測定した各吸光度より、下記数式２によりラジカル消去率（％）を算出した。
＜数式２＞
ラジカル消去率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式２中、Ａはコントロールの吸光度、Ｂは試料溶液を添加した場合の吸光度、Ｃはブランクの吸光度をそれぞれ表す。
−ＤＰＰＨに対するラジカル消去試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えたのち直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
そして、測定した各吸光度より、下記数式２によりラジカル消去率（％）を算出した。
＜数式２＞
ラジカル消去率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式２中、Ａはコントロールの吸光度、Ｂは試料溶液を添加した場合の吸光度、Ｃはブランクの吸光度をそれぞれ表す。
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ラジカル消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表３に示す。
（実施例３）
−一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２質量％のＤＭＳＯを含む１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２ −）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｐｒｉｄｅ ｉｎ ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基にして、下記数式３からＮＯ産生抑制率を算出した。
−一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２質量％のＤＭＳＯを含む１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２ −）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｐｒｉｄｅ ｉｎ ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基にして、下記数式３からＮＯ産生抑制率を算出した。
＜数式３＞
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
ただし、前記数式３中、Ａは試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＣはコントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＤはコントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、をそれぞれ表す。
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
ただし、前記数式３中、Ａは試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＣはコントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＤはコントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、をそれぞれ表す。
次に、製造例１〜３の各抽出物溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＮＯ産生抑制率を測定し、ＮＯ産生抑制率が５０％になる濃度ＩＣ５０を内挿法により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＮＯ産生抑制作用が強い）。結果を表４に示す。
（実施例４）
−ＴＮＦ−α産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりＴＮＦ−α産生抑制作用を試験した。
まず、マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞、大日本製薬株式会社製）を、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコＭＥＭ（日水製薬株式会社製）培地にて前培養後、セルスクレーパーより細胞を集め、１穴当たり１×１０５／ｃｅｌｌｓ／１００μＬの密度で９６穴マイクロプレートに細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間前培養した。
次に、９６穴マイクロプレート中の培地を捨て、予め２質量％のＤＭＳＯを含む培養液で溶解した試料溶液を１００μＬ添加した後、リポポリサッカライド(ＬＰＳ、終濃度１μｇ／ｍＬ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１、Ｂ４、ＤＩＦＣＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製)を１００μＬ添加し、細胞を刺激した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間の培養により産生したＴＮＦ−αの産生量を、下記サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
次に、一次抗体であるラット抗マウスＴＮＦ−αモノクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ Ｉｎｃ．製）を５０ｍｍｏｌ／Ｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９.６）で２．５μｇ／ｍＬとなるように溶解した。その溶液１００μＬを９６ウェルマイクロプレートに加え、一夜、４℃でコーティングした。次いで、洗浄液（０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液）で各ウェルを洗浄後、１質量％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液でブロッキングを行った。
次に、洗浄液によって各ウェルを洗浄後、試験培地で培養上清を希釈し、その１００μＬを各ウェルに加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各ウェルを洗浄した後、二次抗体として、０．３質量％のＢＳＡを含むリン酸緩衝液に２．５μｇ／ｍＬの濃度で溶解させたウサギ抗マウスＴＮＦ−αポリクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ Ｉｎｃ．製）１００μＬを加え、３７℃で６０分間インキュベートしてから洗浄した。
−ＴＮＦ−α産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりＴＮＦ−α産生抑制作用を試験した。
まず、マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞、大日本製薬株式会社製）を、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコＭＥＭ（日水製薬株式会社製）培地にて前培養後、セルスクレーパーより細胞を集め、１穴当たり１×１０５／ｃｅｌｌｓ／１００μＬの密度で９６穴マイクロプレートに細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間前培養した。
次に、９６穴マイクロプレート中の培地を捨て、予め２質量％のＤＭＳＯを含む培養液で溶解した試料溶液を１００μＬ添加した後、リポポリサッカライド(ＬＰＳ、終濃度１μｇ／ｍＬ、Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１、Ｂ４、ＤＩＦＣＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製)を１００μＬ添加し、細胞を刺激した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間の培養により産生したＴＮＦ−αの産生量を、下記サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
次に、一次抗体であるラット抗マウスＴＮＦ−αモノクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ Ｉｎｃ．製）を５０ｍｍｏｌ／Ｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９.６）で２．５μｇ／ｍＬとなるように溶解した。その溶液１００μＬを９６ウェルマイクロプレートに加え、一夜、４℃でコーティングした。次いで、洗浄液（０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液）で各ウェルを洗浄後、１質量％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液でブロッキングを行った。
次に、洗浄液によって各ウェルを洗浄後、試験培地で培養上清を希釈し、その１００μＬを各ウェルに加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各ウェルを洗浄した後、二次抗体として、０．３質量％のＢＳＡを含むリン酸緩衝液に２．５μｇ／ｍＬの濃度で溶解させたウサギ抗マウスＴＮＦ−αポリクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ Ｉｎｃ．製）１００μＬを加え、３７℃で６０分間インキュベートしてから洗浄した。
次いで、５００倍に希釈したアルカリフォスファターゼ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ＣＨＥＭＩＣＯＮ Ｉｎｃ．製）を１００μＬ加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各ウェルを洗浄した後、発色用緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌの硫酸マグネシウム含有トリス塩酸緩衝液、ｐＨ８．０）１００ｍＬにｐ−ニトロフェニルリン酸５０ｍｇを溶解してなる基質溶液１５０μＬをウェルに添加し、３７℃で２０分間〜３０分間酵素反応を行って発色させ、４０５ｎｍの吸光度を測定し、リコビナントマウスＴＮＦ−α（Ｅｎｄｏｇｅｎ Ｉｎｃ．製）標準液より作成した標準曲線から、培養上清中のＴＮＦ−α量（ｐｇ／ｍＬ）を求めた。
そして、各試料溶液のＴＮＦ−α産生抑制率は、以下の数式４に基づいて算出した。試料濃度２００μｇ／ｍＬでのＴＮＦ−α産生抑制率を表５に示す。
＜数式４＞
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝{（Ｂ−Ａ）／Ｂ}×１００
ただし、前記数式４中、Ａは試料溶液添加時のＴＮＦ−α量、Ｂは試料溶液無添加時のＴＮＦ−α量を表す。
そして、各試料溶液のＴＮＦ−α産生抑制率は、以下の数式４に基づいて算出した。試料濃度２００μｇ／ｍＬでのＴＮＦ−α産生抑制率を表５に示す。
＜数式４＞
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝{（Ｂ−Ａ）／Ｂ}×１００
ただし、前記数式４中、Ａは試料溶液添加時のＴＮＦ−α量、Ｂは試料溶液無添加時のＴＮＦ−α量を表す。
（実施例５）
−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物について、下記の試験方法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。なお、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に培地で希釈し、ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ（ＳＩＧＭＡ社
製）が終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるよう添加した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液１０μＬを加え、３７℃にて１０分静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ（ＬＳＬ ｃｏ．，Ｌｔｄ製）溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６穴プレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各穴の細胞上清１０μＬ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ Ｎ−ａｃｅｔｙｌ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ、ＳＩＧＭＡ社製）溶液１０μＬを、新たな９６穴プレートに添加し、３７℃、１時間反応させた。反応終了後、各穴に０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３を２５０μＬ加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬ、及び０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３を２５０μＬ混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。そして、下記数式５からヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を表６に示す。
＜数式５＞
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式５中、Ａは、試料溶液無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、ｐ−ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物について、下記の試験方法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。なお、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に培地で希釈し、ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ（ＳＩＧＭＡ社
製）が終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるよう添加した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液１０μＬを加え、３７℃にて１０分静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ（ＬＳＬ ｃｏ．，Ｌｔｄ製）溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６穴プレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各穴の細胞上清１０μＬ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ Ｎ−ａｃｅｔｙｌ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ、ＳＩＧＭＡ社製）溶液１０μＬを、新たな９６穴プレートに添加し、３７℃、１時間反応させた。反応終了後、各穴に０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３を２５０μＬ加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬ、及び０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３を２５０μＬ混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。そして、下記数式５からヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を表６に示す。
＜数式５＞
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式５中、Ａは、試料溶液無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、ｐ−ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
（実施例６）
−血小板凝集抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により血小板凝集抑制作用を試験した。
まず、ヘパリンナトリウム注射液（日本薬局方）を１／１０量加えて採血したウサギの血液を遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）して、血小板浮遊液（Ｐｌａｔｅｌｅｔ
Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに試料溶液１μＬを加え、更に２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して、３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして試料溶液の代わりに試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。
そして、これらの測定結果から、下記数式６により血小板凝集抑制率（％）を求めた。
＜数式６＞
血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００
ただし、前記数式６中、Ａは、コントロールの血小板凝集率、Ｂは、試料溶液添加時の血小板凝集率を表す。
−血小板凝集抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により血小板凝集抑制作用を試験した。
まず、ヘパリンナトリウム注射液（日本薬局方）を１／１０量加えて採血したウサギの血液を遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）して、血小板浮遊液（Ｐｌａｔｅｌｅｔ
Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに試料溶液１μＬを加え、更に２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して、３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして試料溶液の代わりに試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。
そして、これらの測定結果から、下記数式６により血小板凝集抑制率（％）を求めた。
＜数式６＞
血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００
ただし、前記数式６中、Ａは、コントロールの血小板凝集率、Ｂは、試料溶液添加時の血小板凝集率を表す。
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記血小板凝集抑制率を測定し、抑制率が５０％になる濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた（このＩＣ５０値が小さいほど血小板凝集抑制作用が強い）。結果を表７に示す。
（参考例７）
−エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ ＳＹＢＲ ＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）によるリアルタイム ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＥＴ−１の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式７によりＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬでのＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表８に示す。
＜数式７＞
エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式７中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照
射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表
す。
−エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ ＳＹＢＲ ＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）によるリアルタイム ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＥＴ−１の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式７によりＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬでのＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表８に示す。
＜数式７＞
エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式７中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照
射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表
す。
（参考例８）
−ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＳＣＦ、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）によるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＳＣＦの発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式８によりＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬでのＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表９に示す。
＜数式８＞
ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式８中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
−ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＳＣＦ、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）によるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＳＣＦの発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式８によりＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬでのＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表９に示す。
＜数式８＞
ＳＣＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式８中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
（参考例９）
−エラスターゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、９６穴マイクロプレートにて、０．２ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した各試料溶液５０μＬ、及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプＩＩＩ溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのＮ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥを１００μＬ添加して、２５℃にて１５分間反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式９によりエラスターゼ活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのエラスターゼ活性阻害率を表１０に示す。
−エラスターゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、９６穴マイクロプレートにて、０．２ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した各試料溶液５０μＬ、及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプＩＩＩ溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのＮ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥを１００μＬ添加して、２５℃にて１５分間反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式９によりエラスターゼ活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのエラスターゼ活性阻害率を表１０に示す。
＜数式９＞
エラスターゼ活性阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式９中、Ａは、試料溶液無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、試料溶液添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
エラスターゼ活性阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式９中、Ａは、試料溶液無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、試料溶液添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
（参考例１０）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ ａｎｄ Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ Ｔｙｐｅ ＩＶ ｆｒｏｍ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式１０によりＭＭＰ−１活性阻害率を算出した。
＜数式１０＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式１０中、Ａは試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｃは試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｄは試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度を表す。
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ ａｎｄ Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ Ｔｙｐｅ ＩＶ ｆｒｏｍ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式１０によりＭＭＰ−１活性阻害率を算出した。
＜数式１０＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式１０中、Ａは試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｃは試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｄは試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度を表す。
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＭＭＰ−１活性阻害率を測定し、阻害率が５０％になる濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を近似曲線により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＭＭＰ−１活性阻害作用が強い）。結果を表１１に示す。
（参考例１１）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用を試験した。
９６穴マイクロプレートにて、５０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２、０．０５質量％のＢｒｉｊ−３５、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＮＢ〔５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｏｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ〕緩衝液（ｐＨ７．５）で調製したＭＭＰ−１４溶液２０μＬ、及び５０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２、０．０５質量％のＢｒｉｊ−３５、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＮＢ〔５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｏｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ〕緩衝液で調製した各試料溶液２０μＬを混合した。３７℃にて４５分間反応させた後、１０μＬの基質溶液を添加し、反応を開始した。基質分解産物のメルカプト基と緩衝液中のＤＴＮＢとの反応生成物である２−ｎｉｔｏｒｏ−５−ｔｈｉｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄの量を波長４１２ｎｍで３０分間の吸光度を測定し、１分間当たりの生成量に基づいて３０分間の傾斜度の値を求めた。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＭＭＰ−１４としては、Ｅｎｚｙｍｅ（Ｈｕｍａｎ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ） Ｆｒｏｍ：Ｅ．ｃｏｌｉ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ＭＭＰ−１４ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎ（Ｂｉｏｍｏｌ社製）を用いた。
基質としては、ｔｈｉｏｐｅｐｔｉｄｅ（Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−ＯＣ２Ｈ５）（Ｂｉｏｍｏｌ社製）を用いた。
そして、得られた結果から、下記数式１１により、ＭＭＰ−１４活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのＭＭＰ−１４活性阻害率を表１２に示す。
＜数式１１＞
ＭＭＰ−１４活性阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、前記数式１１中、Ａは試料溶液無添加時の３０分間における傾斜度の値、Ｂは試料溶液添加時の３０分間における傾斜度の値を表す。
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用を試験した。
９６穴マイクロプレートにて、５０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２、０．０５質量％のＢｒｉｊ−３５、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＮＢ〔５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｏｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ〕緩衝液（ｐＨ７．５）で調製したＭＭＰ−１４溶液２０μＬ、及び５０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２、０．０５質量％のＢｒｉｊ−３５、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＮＢ〔５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｏｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ〕緩衝液で調製した各試料溶液２０μＬを混合した。３７℃にて４５分間反応させた後、１０μＬの基質溶液を添加し、反応を開始した。基質分解産物のメルカプト基と緩衝液中のＤＴＮＢとの反応生成物である２−ｎｉｔｏｒｏ−５−ｔｈｉｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄの量を波長４１２ｎｍで３０分間の吸光度を測定し、１分間当たりの生成量に基づいて３０分間の傾斜度の値を求めた。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＭＭＰ−１４としては、Ｅｎｚｙｍｅ（Ｈｕｍａｎ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ） Ｆｒｏｍ：Ｅ．ｃｏｌｉ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ＭＭＰ−１４ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎ（Ｂｉｏｍｏｌ社製）を用いた。
基質としては、ｔｈｉｏｐｅｐｔｉｄｅ（Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−ＯＣ２Ｈ５）（Ｂｉｏｍｏｌ社製）を用いた。
そして、得られた結果から、下記数式１１により、ＭＭＰ−１４活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのＭＭＰ−１４活性阻害率を表１２に示す。
＜数式１１＞
ＭＭＰ−１４活性阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、前記数式１１中、Ａは試料溶液無添加時の３０分間における傾斜度の値、Ｂは試料溶液添加時の３０分間における傾斜度の値を表す。
（参考例１２）
−エストロゲン様作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエストロゲン様作用を試験した。
ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した１０％のＦＢＳ、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含ＭＥＭ（Ｔ−ＭＥＭ）を用いて３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴マイクロプレートに１穴あたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭで終濃度の１０倍に調製した各試料溶液を各穴に５０μＬずつ添加し、培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭで終濃度に調製した試料溶液を各穴に５００μＬ添加し、更に培養を続けた。
エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１質量％のＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭに終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１０−９ｍｏｌ／Ｌのエストラジオールを使用した。
そして、得られた測定結果から、エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）率を下記数式１２から算出した。試料濃度５０μｇ／ｍＬでのエストロゲン様作用率（％）を表１３に示す。
−エストロゲン様作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエストロゲン様作用を試験した。
ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した１０％のＦＢＳ、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含ＭＥＭ（Ｔ−ＭＥＭ）を用いて３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴マイクロプレートに１穴あたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭで終濃度の１０倍に調製した各試料溶液を各穴に５０μＬずつ添加し、培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭで終濃度に調製した試料溶液を各穴に５００μＬ添加し、更に培養を続けた。
エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１質量％のＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭに終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１０−９ｍｏｌ／Ｌのエストラジオールを使用した。
そして、得られた測定結果から、エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）率を下記数式１２から算出した。試料濃度５０μｇ／ｍＬでのエストロゲン様作用率（％）を表１３に示す。
＜数式１２＞
エストロゲン様作用率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式１２において、Ａは、試料溶液添加の場合の吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加の場合の吸光度を表す。
エストロゲン様作用率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式１２において、Ａは、試料溶液添加の場合の吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加の場合の吸光度を表す。
（参考例１３）
−表皮角化細胞増殖促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次に、表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式１３により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。試料濃度３．１２μｇ／ｍＬでの表皮角化細胞増殖促進率を表１４に示す。
＜数式１３＞
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ／Ｃｔ）×１００
ただし、前記数式１３中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度を表す。
−表皮角化細胞増殖促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次に、表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式１３により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。試料濃度３．１２μｇ／ｍＬでの表皮角化細胞増殖促進率を表１４に示す。
＜数式１３＞
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ／Ｃｔ）×１００
ただし、前記数式１３中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度を表す。
（実施例１４）
−テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、秤量蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬのテストステロン２０μＬ、及び１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨ含有５ｍｍｏｌ／ｍＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、各試料溶液８０μＬ、及びラット肝ホモジネート（Ｓ−９）７５μＬを加え、再び混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止した。これを遠心分離（１６００×ｇ、１０分間）し、塩化メチレン層を下記の条件でガスクロマトグラフィー分析した。また、同様の方法で空試験を行った。
−テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、秤量蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬのテストステロン２０μＬ、及び１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨ含有５ｍｍｏｌ／ｍＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、各試料溶液８０μＬ、及びラット肝ホモジネート（Ｓ−９）７５μＬを加え、再び混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止した。これを遠心分離（１６００×ｇ、１０分間）し、塩化メチレン層を下記の条件でガスクロマトグラフィー分析した。また、同様の方法で空試験を行った。
−ガスクロマトグラフィー分析−
予め、３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンの標準品の塩化メチレン溶液を同様にガスクロマトグラフィー分析し、これら３つの化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出しておき、ラット肝ホモジネート（Ｓ−９）による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンのピーク面積あたりの濃度をそれぞれ求めた（下記数式１４参照）。その後、下記数式１５に従って、各試料溶液の変換率を求めた。得られた変換率に基づいて、下記数式１６からテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を求めた。試料濃度３０００μｇ／ｍＬの時の結果を表１５に示す。
予め、３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンの標準品の塩化メチレン溶液を同様にガスクロマトグラフィー分析し、これら３つの化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出しておき、ラット肝ホモジネート（Ｓ−９）による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンのピーク面積あたりの濃度をそれぞれ求めた（下記数式１４参照）。その後、下記数式１５に従って、各試料溶液の変換率を求めた。得られた変換率に基づいて、下記数式１６からテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を求めた。試料濃度３０００μｇ／ｍＬの時の結果を表１５に示す。
＜数式１４＞
濃度（％）＝（試料溶液のピーク面積×標準品濃度）／標準品のピーク面積
濃度（％）＝（試料溶液のピーク面積×標準品濃度）／標準品のピーク面積
＜数式１５＞
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）
ただし、前記数式１５中、Ａは、３α−アンドロスタンジオールの濃度を表す。Ｂは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度を表す。Ｃは、テストステロンの濃度を表す。
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）
ただし、前記数式１５中、Ａは、３α−アンドロスタンジオールの濃度を表す。Ｂは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度を表す。Ｃは、テストステロンの濃度を表す。
＜数式１６＞
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００
ただし、前記数式１６中、Ｄは、空試験での変換率を表す。Ｅは、試料溶液添加での変換率を表す。
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００
ただし、前記数式１６中、Ｄは、空試験での変換率を表す。Ｅは、試料溶液添加での変換率を表す。
〔ガスクロマトグラフィーの条件〕
・使用機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−７Ａ（株式会社島津製作所製）
・カラム：ＤＢ−１７０１（直径０．５３ｍｍ×３０ｍ、膜厚：１．０μｍ）
・カラム温度／注入温度：２４０℃／３００℃
・検出器：ＦＩＤ
・キャリアガス：窒素ガス
・使用機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−７Ａ（株式会社島津製作所製）
・カラム：ＤＢ−１７０１（直径０．５３ｍｍ×３０ｍ、膜厚：１．０μｍ）
・カラム温度／注入温度：２４０℃／３００℃
・検出器：ＦＩＤ
・キャリアガス：窒素ガス
（実施例１５）
−アンドロゲンレセプター拮抗作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりアンドロゲンレセプター拮抗作用を試験した。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌、ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％のＤＣＣ−牛胎児血清（ＦＢＳ）、及び１０−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロン含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）で希釈し、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を含む０．５質量％のＢＳＡ含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した試料溶液を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ／２に溶解したＭＴＴを各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
そして、これらの結果から、下記数式１７により、アンドロゲンレセプター拮抗率を算出した。
＜数式１７＞
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式１７中、Ａは、ＤＨＴ添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。
−アンドロゲンレセプター拮抗作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりアンドロゲンレセプター拮抗作用を試験した。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌、ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％のＤＣＣ−牛胎児血清（ＦＢＳ）、及び１０−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロン含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）で希釈し、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を含む０．５質量％のＢＳＡ含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した試料溶液を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ／２に溶解したＭＴＴを各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
そして、これらの結果から、下記数式１７により、アンドロゲンレセプター拮抗率を算出した。
＜数式１７＞
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式１７中、Ａは、ＤＨＴ添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記アンドロゲンレセプター拮抗率の測定を行い、各濃度におけるアンドロゲンの結合阻害率（％）を求め、その結果から内挿法により、アンドロゲンの結合を５０％拮抗する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を求めた。結果を表１６に示す。
（実施例１６）
−サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、５ｍｍｏl／Ｌの塩化マグネシウム含有５０ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液０．１ｍＬ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ、各試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間予備反応した。これに０．５ｍｇ／ｍＬのｃＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間反応した。３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止した。これを遠心分離（２２６０×ｇ、１０分間、４℃）し、上清を試料反応液として、下記の条件でＨＰＬＣ分析した。また同様の方法で空試験を行い補正した。
〔ＨＰＬＣ条件〕
・カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ Ｃ１８−ＯＤＳ ５μｍ
・移動相：１ｍｍｏｌ／ＬのＴＢＡＰ ｉｎ ２５ｍｍｏｌ／ＬのＫＨ２ＰＯ４：ＣＨ３ＣＮ＝９０：１０
・流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
・検出：ＵＶ、２６０ｎｍ
−サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、５ｍｍｏl／Ｌの塩化マグネシウム含有５０ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液０．１ｍＬ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ、各試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間予備反応した。これに０．５ｍｇ／ｍＬのｃＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間反応した。３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止した。これを遠心分離（２２６０×ｇ、１０分間、４℃）し、上清を試料反応液として、下記の条件でＨＰＬＣ分析した。また同様の方法で空試験を行い補正した。
〔ＨＰＬＣ条件〕
・カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ Ｃ１８−ＯＤＳ ５μｍ
・移動相：１ｍｍｏｌ／ＬのＴＢＡＰ ｉｎ ２５ｍｍｏｌ／ＬのＫＨ２ＰＯ４：ＣＨ３ＣＮ＝９０：１０
・流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
・検出：ＵＶ、２６０ｎｍ
次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）とサイクリックＡＭＰ標準品とホスホジエステラーゼ反応した上清のピーク面積（Ｂ１）とサイクリックＡＭＰ標準品と被験試料とホスホジエステラーゼ反応した上清のピーク面積（Ｂ２）を下記数式１８に基ついて標準品の分解率（Ｃ）と被験試料の分解率（Ｄ）を求めた。
＜数式１８＞
分解率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、式中のＢはＢ１又はＢ２のいずれかを表す。
＜数式１８＞
分解率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、式中のＢはＢ１又はＢ２のいずれかを表す。
その後、数式１８から求めた分解率に従い、ホスホジエステラーゼ活性阻害率を下記数式１９に基づいて算出した。
＜数式１９＞
ホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）＝（Ｃ−Ｄ）／Ｃ×１００
＜数式１９＞
ホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）＝（Ｃ−Ｄ）／Ｃ×１００
次に、試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて上記サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率の測定を行い、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性を５０％阻害する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表１７に示す。
（配合実施例１）
−乳液−
下記組成から乳液を常法により製造した。
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
−乳液−
下記組成から乳液を常法により製造した。
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
（配合実施例２）
−化粧水−
下記組成から化粧水を常法により製造した。
・製造例２の白蘭花の５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
−化粧水−
下記組成から化粧水を常法により製造した。
・製造例２の白蘭花の５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
（配合実施例３）
−クリーム−
下記組成からクリームを常法により製造した。
・製造例３の白蘭花のエタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
−クリーム−
下記組成からクリームを常法により製造した。
・製造例３の白蘭花のエタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
（配合実施例４）
−パック−
下記組成からパックを常法により製造した。
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
−パック−
下記組成からパックを常法により製造した。
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
（配合実施例５）
−ヘアトニック−
下記組成の育毛作用を有するヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・製造例２の白蘭花の５０質量％エタノール抽出物・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
−ヘアトニック−
下記組成の育毛作用を有するヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・製造例２の白蘭花の５０質量％エタノール抽出物・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
（配合実施例６）
−シャンプー−
下記組成の育毛作用を有するシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
−シャンプー−
下記組成の育毛作用を有するシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
（配合実施例７）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
（配合実施例８）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例３の白蘭花のエタノール抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例３の白蘭花のエタノール抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
（配合実施例９）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例１の白蘭花の水抽出物・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
（配合実施例１０）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例２の白蘭花の５０質量％エタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例２の白蘭花の５０質量％エタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
（配合実施例１１）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例３の白蘭花のエタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例３の白蘭花のエタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤の少なくともいずれかを配合した化粧料は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有し、生体内の酸化防止、育毛、美白、皮膚のシワや皮膚の弾力低下の防止及び改善、肌荒れの予防、肌荒れの防止に有効であり、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどに幅広く用いられる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤の少なくともいずれかを添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有し、安全性にも優れているので、例えば健康食品、栄養補助食品などに幅広く用いられる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及び美白剤の少なくともいずれかを添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及び美白作用の少なくともいずれかを有し、安全性にも優れているので、例えば健康食品、栄養補助食品などに幅広く用いられる。
Claims (2)
- 白蘭花の抽出物を含有することを特徴とする育毛剤。
- テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の育毛剤。
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