KR20120039564A - 순수 ｐｅｇ-지질 컨쥬게이트 - Google Patents

순수 ｐｅｇ-지질 컨쥬게이트 Download PDF

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브라이언 찰스 켈러
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니안 우
브라이언 찰스 켈러
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Abstract

폴리에틸렌글리콜(PEG)-지질 컨쥬게이트의 합성을 개시한다. 이러한 합성은 소망한 사이즈의 쇄를 얻을 때까지 글리세롤 백본에 작은 PEG 올리고머를 단계적으로 첨가하여 이루어진다. 상기 합성으로부터 야기되는 폴리머는 고도의 단분산이다. 본 발명은 이러한 단순화된 합성, 고수율 산품 및 저가의 출발 원료와 같은 여러 가지 이점을 제공한다. 본 합성 방법은 넓은 범위의 컨쥬게이트를 제조하는데 적합하다. 다른 양태에서, 본 발명은 한 개 또는 두 개의 단분산 PEG쇄 및 한 개 또는 두 개의 지질에 공유결합된 글리세롤 백본을 갖는 PEG-지질 컨쥬게이트를 포함한다. 이러한 컨쥬게이트는 약학 제형에 특히 유용하다.

Description

순수 ＰＥＧ-지질 컨쥬게이트{PURE PEG-LIPID CONJUGATES}
본 발명은 폴리에틸렌글리콜(PEG)-지질 컨쥬게이트의 합성에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 단분산 PEG쇄를 주로 포함하는 PEG-지질 컨쥬게이트를 제조하기 위한 편리하고 경제적인 합성 방법 및 조성물에 관한 것이다.
본원은 2009년 6월 2일에 출원한 미국 특허 가출원 제61/217,627호, 발명의 명칭 "PURE PEG-LIPID CONJUGATES" 및 2009년 12월 12일에 출원한 미국 특허 가출원 제61/284,065호, 발명의 명칭 "PURE PEG-LIPID CONJUGATES"에 대하여 우선권을 주장한다.
PEG-지질 컨쥬게이트가 운반 비히클로서 사용되는 경우, PEG-지질 컨쥬게이트는 약리학 프로파일 및 친유성 약물의 용해도를 개선하는 능력을 가진다. 또한, 이들은 부작용을 최소화하고 치료적 처치에 수반된 유독성을 최소화하는 기타 잠재적인 이점을 제공한다.
약물 운반 폴리머의 좁은 분자량 분포는 생의학적 응용에 매우 중요하며, 특히 정맥내 주사용으로 사용되는 경우에 그러하다. 예를 들면, PEG-8 카프릴릭/카프릭 글리세라이드는 글리세롤의 모노에스테르, 디에스테르 및 트리에스테르와 200 내지 400의 평균 상대 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜의 모노에스테르 및 디에스테르의 혼합물이다. 동물에서 관찰된 부분적인 알러지 반응으로 인해, 다량의 수-난용성 약물에 대한 PEG-8 CCG의 응용은 제한됐고, 제한 복용량인 약 6%의 PEG-8 CCG를 인간 경구 약물 제형으로 했다.
자유 라디칼 중합으로부터 생산된 PEG쇄에 대한 분자량 분포는 약 200Da 내지 1,200Da이상의 분자량을 갖는 쇄로 좁게 제한되지 않는다. 일반적으로, 한 집단 중 50% 미만의 폴리머는 목표로 하는 분자량을 정확하게 갖는다. 더 좁은 분포는 사이즈 배제 크로마토그래피로 달성될 수 있고, 이것은 목표로 하는 분자량을 갖는 다량의 PEG 폴리머를 야기할 수 있다. 그러나 정제한 PEG의 단일-분포를 달성하기는 매우 어렵다.
약 12개의 서브유닛을 포함하는 고도로 순수한 PEG쇄를 상업적으로 이용가능하다. 그러나, 이러한 PEG는 매우 고가이고, 이를 약학 및/또는 화장품 제형에 포함시키는 추가적 합성 단계를 요구한다.
본 발명은 순수 PEG-지질 컨쥬게이트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본원은 폴리에틸렌글리콜(PEG)-지질 컨쥬게이트의 합성을 개시한다. 이러한 합성은 소정 크기의 쇄를 얻을 때까지 글리세롤 백본(backbone)에 작은 PEG 올리고머를 단계적으로 첨가하여 이루어진다. 상기 합성으로부터 야기되는 폴리머는 고도의 단분산이다. 본 발명은 이러한 단순화된 합성, 고수율 산품 및 저가의 출발 물질과 같은 여러 가지 이점을 제공한다. 본 합성 방법은 광범위한 컨쥬게이트를 제조하는데 적합하다.
다른 양태에서, 본 발명은 한 개 또는 두 개의 단분산 PEG쇄 및 한 개 또는 두 개의 지질에 공유결합된 글리세롤 백본을 갖는 PEG-지질 컨쥬게이트를 포함한다. 이러한 컨쥬게이트는 약학 제형에 특히 유용하다.
도 1은 1,2-디올레오일-rac-3-모노메톡시도데카에틸렌글리콜(mPEG-12)-글리세롤의 LC-MS 크로마토그램을 도시한다.
도 2는 이트라코나졸 IV(intravenous) 용액의 마우스 PK 프로파일을 도시한다.
도 3은 이트라코나졸 경구 용액의 마우스 PK 프로파일을 도시한다.
약어 목록
본 발명은 이하의 화학 명명법을 사용하여 본원에 개시된다.
DAG-PEGs: 디아실글리세롤-폴리에틸렌글리콜
DMAP: N,N-디메틸아미노피리딘
mPEG: 모노메톡스폴리에틸렌글리콜에테르
PEG 12: 폴리에틸렌글리콜 600
PEG 23: 폴리에틸렌글리콜 1,000
PEG 27: 폴리에틸렌글리콜 1,200
GDM-12: 1,2-디미리스토일-rac-글리세롤-3-도데카에틸렌글리콜
GDO-12: 1,2-디올레오일-rac-글리세롤-3-도데카에틸렌글리콜
GDC-12: 1,2-디콜로일-rac-글리세롤-3-도데카에틸렌글리콜
GDM-600: GDO-600: 1,3-디올레오일-글리세롤-2-도데카에틸렌글리콜
GDC-600: 1,3-디콜로일-글리세롤-2-도데카에틸렌글리콜
GDS-12: 1,2-디스테아로일-rac-글리세롤-3-도데카에틸렌글리콜
GOB-12: 1,2-비스(도데카에틸렌글리콜)글리세롤-3-올리에이트
GMB-12: 1,2-비스(도데카에틸렌글리콜)글리세롤-3-미리스테이트
DSB-12: 1,2-비스(도데카에틸렌글리콜)글리세롤-3-스테아레이트
GOBH: 1,2-비스(헥사에틸글리콜)글리세롤-3-올리에이트
GMBH: 1,2-비스(헥사에틸글리콜)글리세롤-3-미리스테이트
GCBH: 1,2-비스(헥사에틸글리콜)글리세롤-3-콜레이트
GCLBH: 1,2-비스(헥사에틸글리콜)글리세롤-3-콜레스테롤
GPBH: 1,2-비스(헥사에틸글리콜)글리세롤-3-팔미테이트
GDO-23: 1,2-디올레오일-rac-글리세롤-3-폴리에틸렌(1,000)글리콜, n=23
GDO-27: 1,2-디올레오일-rac-글리세롤-3-폴리에틸렌(1,200)글리콜, n=27
GDM-23: 1,2-디미리스토일-rac-글리세롤-3-폴리에틸렌(1,000)글리콜, n=23
GDM-27: 1,2-디미리스토일-rac-글리세롤-3-폴리에틸렌(1,200)글리콜, n=27
GDS-23: 1,2-디스테아로일-rac-글리세롤-3-폴리에틸렌(1,000)글리콜, n=23
TPGS-VE: d-알파-토코페릴폴리에틸렌글리콜-l,000숙신산
GDO-X-PEG 12: 1,2-디올레오일-rac-글리세롤-3-X-도데카에틸렌글리콜("X"는 연결체/스페이서 즉, 표 3에서 찾을 수 있는 티오일을 나타낸다)
사이클로스포린: 사이클로[[(E)-(2S,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸-2-(메틸아미노)-6-옥테노일]-L-2-아미노부티릴-N-메틸글리실-N-메틸-L-류실-L-발릴-N-메틸-L-류실-L-알라닐-D-알라닐-N-메틸-L-류실-N-메틸-L-류실-N-메틸-L-발릴]
POPC: 팔미토일-올레아일포스파티딜콜린
본 발명의 실시예는 좁은 범위로 정의된 분자량을 가진 PEG-지질 컨쥬게이트의 제조와 관련된 화합물, 합성 방법 및 중간체를 본원에서 설명된다. 당해 분야의 통상의 기술자는 하기 본 발명의 상세한 설명이 단지 예시의 목적이며, 어떤 방식으로도 본 발명을 제한하려는 의도가 아니라는 것을 이해해야 할 것이다. 통상의 기술자는 본 개시의 이점을 가진 본 발명의 다른 실시예를 접할 것이다. 참고 문헌은 본 발명의 실시를 위해 상세하게 다뤄질 것이다.
명확성을 도모하기 위하여, 본원에서 개시된 실시의 일반적인 특징들 중 모두가 다뤄지고 개시되는 것은 아니다. 물론, 실질적인 실시를 위한 개발에서, 응용- 및 사업-관련 제한에 따른 개발자의 특정 목표를 달성하도록 다양한 실시-특이적 결정이 이루어져야 하고, 이러한 특정 목표는 실시 유형에 따라 그리고 개발자에 따라 달라질 것이라고 인식될 것이다. 게다가, 이러한 개발의 노력은 복잡하고 시간이 소비됨에도 불구하고, 당해 분야의 통상의 기술자는 본 개시의 이점을 가지는 일반적인 공학 처리를 할 것이다.
PEG-지질 컨쥬게이트를 약물 운반 비히클로 사용하는 경우, 잘 특징지어지고 고도로 순수한 컨쥬게이트를 사용하는 것이 더 중요해지고 있다. 예를 들면, 본원에서 참조로서 포함되는 미국 특허 제6,610,322호에는 PEG 및 아실쇄의 길이를 다양하게 하는 것은 PEG-지질 컨쥬게이트의 패킹 파라미터(packing parameters)에 영향을 미쳐서, 상기 컨쥬게이트의 조성물이 리포솜을 형성하는지 형성하지 않는 지를 결정한다고 교시한다. 지질 및 PEG 사이즈의 선택은 약물 제형의 물리적 구조에 영향을 미치는 것 외에 PEG-지질 컨쥬게이트를 포함한 특정 약물 화합물을 제형화하는 경우에 약물 동역학 및 안정성에 중요한 효과를 가질 수 있다. 그러므로, 특정 사이즈의 단분산 PEG쇄를 갖는 컨쥬게이트의 균일한 집단이 다양한 PEG 길이를 갖는 집단 보다 종종 더 선호된다.
본 발명은 단분산 PEG쇄를 갖는 고도로 순수한 PEG-지질 컨쥬게이트, 약 110Da 내지 300Da 범위의 분자량을 가진 PEG 올리고머로 시작 하는 이러한 PEG-지질 컨쥬게이트의 합성에 대한 화합물 및 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 포화 또는 불포화 지방산 또는 담즙산과 같은 다양한 지질을 포함하는 PEG-지질 컨쥬게이트의 제조 방법을 제공한다. 이러한 PEG-지질 컨쥬게이트는 약물 운반, 특히 난수용성제의 정맥내 투여에 사용될 수 있다.
일반적으로, 본 발명은 한 개 또는 두 개의 단분산 PEG쇄를 가진 글리세롤 백본 및 상기 백본에 연결된 한 개 또는 두 개의 지질군을 포함하는 PEG-지질 컨쥬게이트를 합성하기 위한 방법 및 조성물을 포함한다. 스페이서 또는 연결기는 상기 백본과 PEG쇄 및/또는 지질군 사이에 포함될 수 있다.
본 발명은 두 개의 지질 및 한 개의 단분산 PEG쇄(두 개의 이성질체)를 가진 글리세롤 백본, 한 개의 지질 및 두 개의 단분산 PEG쇄(두 개의 이성질체)를 가진 글리세롤 백본 및 한 개의 지질 및 한 개의 단분산 PEG쇄(두 개의 이성질체)를 가진 글리세롤 백본을 다양하게 포함하고, 상기 백본 상의 3번 위치에는 다양한 화합물 또는 성분(moiety)이 있을 수 있다.
게다가, 본 발명은 순수한 1,2 또는 1,3 글리세롤 이성질체를 만드는 방법을 제공한다. 상업적으로 이용가능한 1,2 글리세롤 지질 디에스테르는 상기 글리세롤 백본 상의 가능한 위치에 신규 성분을 연결함으로써 다양한 화합물을 만드는데 사용될 수 있다. 그러나, 위치 변화는 이러한 1,2 글리세롤 디에스테르의 저장 도중에 발생하여, 최대 약 30%의 비율로 존재할 수 있는 보다 안정한 1,3 글리세롤 이성질체의 형성을 야기한다. 본 발명은 1,2 또는 1,3 글리세롤 이성질체의 거울상체 순도를 유지하고 생산하는 유일한 가능성이 있다. 상기 1,2 또는 1,3 이성질체는 종종 기능적으로 동일할 수 있고, 이성질체의 선택은 약학적 응용에 비히클로서 뿐만 아니라 친유성 분자의 정맥내 운송 수단과 같은 운반 과정에의 다양성에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들면, 상기 이성질체들은 용해 및 저장 도중에 화합물을 안정화시키는 능력이 다를 수 있다. 화학 구조 1은 이러한 두 가지 이성질체의 입체적 구조의 차이를 설명한다.
Figure pct00001
1,200Da까지의 단분산 PEG쇄를 갖는 컨쥬게이트는 다양한 약물 운반 응용에 유용하다. 약 300Da 내지 600Da의 PEG쇄를 갖는 컨쥬게이트는 정맥내 주사 또는 내복액과 같은 액상 제형으로 제형화 하는 데에 특히 유용하다. 약 600Da 내지 1,200Da의 PEG쇄를 갖는 컨쥬게이트는 캡슐과 같은 고체상 제형으로 제형화 하는 데에 특히 유용하다. 상기 조합은 난용성제에 대하여 고체 제형을 만드는데 유용하고 여기서, 상기 컨쥬게이트의 액상(일반적으로 약 300Da 내지 600Da의 PEG쇄)은 용매로서 사용되고, 상기 컨쥬게이트의 고체상(일반적으로 약 600Da 내지 1,200Da의 PEG쇄)은 응고제(solidifier)로서 사용된다.
본 발명은 단분산 PEG-지질 컨쥬게이트를 제조하기 위한 편리하고 경제적인 합성 방법의 제공을 포함하고, 지질에서 폴리머로 컨쥬게이팅하는 다양한 선형 연결기를 제공한다. 상업적으로 이용가능한 PEG 올리고머는 유사한 PEG-지질 컨쥬게이트를 대량 생산하는데 굉장한 고액이 소비되므로, 본 발명은 단순 합성, 고품질 상품 및 저가의 출발 원료와 같은 다양한 이점을 제공한다. 또한, 본 합성 방법은 넓은 범위의 PEG-스페이서-지질 컨쥬게이트를 제조하는데 적합하다.
단분산 PEG쇄의 합성은, 최초 PEG의 단쇄(1개 내지 6개 서브유닛을 포함)를 보호된 글리세롤 백본에 연결시키는 단계를 수반한다. 상기 PEG쇄는 반복된 에테르화에 의해 연장된다. 실시예를 반응식1에 제시한다.
Figure pct00002
반응식1에서, 제 1 반응 PEG 올리고머(b)는 PEG 올리고머의 제 1 말단을(예를 들면, 벤젠으로) 보호하고 제 2 반응 말단을(예를 들면, 제시된 바와 같이 토실기로) 생산함으로써 제조된다. 이어서, 제 1 반응 올리고머는 두 개의 보호된 -OH기(a)를 가진 글리세롤과 결합한다. 상기 글리세롤 상의 보호기는 제 1 반응 올리고머의 제 1 말단 상의 보호기를 제거한 안정한 상태하에서 선택된다. 상기 올리고머의 제 2 반응 말단은 -OH가 없는 글리세롤과 결합하여 글리세롤-올리고머 중간체(c)를 형성한다. 이어서, 상기 중간체 중 올리고머 부분의 제 1 말단 상에 보호기가 제거되어 반응 -OH기(d)를 노출시킨다. 제 2 반응 PEG 올리고머(e)는 상기 중간체에 첨가되어 상기 글리세롤 백본(f)에 결합된 확장 PEG쇄를 형성한다. 반응식1에서, 12개의 서브유닛 PEG쇄가 소망되기 때문에, 상기 제 2 반응 PEG 올리고머는 말단 메틸기에 의해 이의 제 1 말단이 보호된다. 더 긴 쇄를 소망한다면 쉽게 제거될 수 있는 제 2 반응 PEG 올리고머 상의 보호기를 선택하고, 예를 들면 제 2 올리고머로서 (b)를 재사용하여 PEG쇄를 추가로 연장한다. 상기 소망한 길이의 쇄가 달성되면, 상기 글리세롤 백본의 보호기는 제거되어 산물(g)을 형성한다. 이어서, 단분산 PEG쇄를 가진 산물(g)을 더 반응시켜서 소망의 지질을 상기 글리세롤 백본에 첨가할 수 있다. 비슷하게, 합성은 짧은 PEG쇄로 시작하거나, 두 개의 트리에틸렌글리콜, 트리에틸렌글리콜 및 모노메톡시트리에틸렌글리콜 사이의 에테르화로부터 헥사에틸렌글리콜을 제조할 수 있다. 이러한 과정에서, 둘 이상의 단계가 상기 합성에 수반될 것이다.
반응식1에서, 벤질 보호기는 임의의 적합한 시약에 의해 제거되어 유리 히드록실기를 노출시킨다. 예를 들면, PEG쇄가 에테르화 과정을 반복함으로써 연장되기 전에 상기 벤질기는 팔라듐 촉매 존재하에 수소화에 의해 제거될 수 있다.
반응식1에 예시한 바와 같이, 글리세롤 백본 상에 PEG쇄를 합성하여 상기 보호기가 글리세롤로부터 제거되어 2개의 유리 히드록실기를 야기한다. 이하의 반응식2에 제시된 바와 같이, 상기 유리 히드록실기는 불활성 용매 중의 N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP)의 존재 하에서 지방산과 반응할 수도 있다.
Figure pct00003
반응식3은 반응식2에서 사용되는 활성화된 지질을 제조하는 접근법을 나타낸다. 이러한 방법에서, 상기 지방산의 카르복실기는 적합한 활성화제로 활성화된다. 예를 들면, 제시한 바와 같이 옥살릴클로라이드를 사용할 수 있다.
Figure pct00004
앞서 설명한 내용이 단일 단분산 PEG쇄를 갖는 특정 PEG-지질 컨쥬게이트를 합성하는 한 가지 방법을 설명하는 반면, 본 발명은 광범위한 PEG-지질 컨쥬게이트를 만드는 방법 및 재료를 보다 광범위하게 교시한다.
제 1 반응 PEG 올리고머는 3개 내지 7개의 CH2CH2O 유닛을 포함하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 4개 내지 7개의 CH2CH2O 유닛을 포함하지만, 상기 올리고머는 12개 유닛까지의 임의의 길이일 수 있다. 또한, 추가적인 반응 올리고머는 3개 내지 7개의 CH2CH2O 유닛을 포함하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 4개 내지 7개의 CH2CH2O 유닛을 포함하지만, 상기 추가적인 올리고머는 12개 유닛까지의 임의의 길이일 수 있다.
본 발명의 상기 PEG-지질 컨쥬게이트들은 한 개 또는 두 개의 단일분산 PEG쇄를 각각 가진다. 다른 언급이 없다면, 특정 컨쥬게이트 내의 50% 이상의 PEG쇄는 동일한 분자량을 가진다. 보다 바람직하게는, 75% 이상이 동일한 분자량을 가진다. 가장 바람직하게는, 90% 이상이 동일한 분자량을 가진다. 또한 다른 언급이 없다면, PEG쇄는 약 6개 내지 27개의 폴리머 서브유닛으로 이루어진 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는 PEG쇄는 약 7개 내지 27개의 폴리머 서브유닛으로 이루어진 것이다. 가장 바람직하게는 PEG쇄는 약 7개 내지 23개의 폴리머 서브유닛으로 이루어진 것이다.
1,2-디미리스토일-rac-3-PEG 12-글리세롤을 합성하는 경우에서, 상기 글리세롤은 보호되어 제 3 위치 상에 상기 PEG쇄가 형성된다(반응식1 참조, 화합물(a)). 출발 요소로서 다른 글리세롤 파생물을 사용하는 것은 다른 위치에 PEG쇄를 갖는 컨쥬게이트를 야기할 것이라고 인식될 것이다. 예를 들면, 상기 글리세롤의 제 1 위치 및 제 3 위치를 보호하는 것은 제 2 위치(R)에서 PEG쇄를 야기할 것이다. 이러한 합성에 사용될 수 있는 글리세롤 파생물을 화학 구조 2에 제시한다.
Figure pct00005
만일, 두 개의 PEG쇄를 가진 컨쥬게이트가 필요하다면, 화학 구조 3 또는 화학 구조 4에 제시된 글리세롤 파생물이 사용될 수 있다. 이러한 구조에서, R은 추후에 대체될 수 있는 보호기 또는 상기 최종 구조물을 포함할 수 있는 아실 지질을 나타낸다. 이러한 컨쥬게이트에 대해서, 상기 PEG쇄는 나란히 성장하고 길이는 동일할 것이다. 두 개의 PEG쇄를 가진 컨쥬게이트는 분지된 PEG 컨쥬게이트로서 기능을 하는 일부 환경에서 특히 유용하다.
Figure pct00006
Figure pct00007
상기 글리세롤 백본 및 PEG쇄 사이에 아실기 보다 연결기를 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 티올 연결체는 불안정한 결합이 유용한 응용에 사용될 수 있다. 다른 유용한 연결체는 표 3 및 본원의 다른 곳에도 제시되어 있다. 상기 백본 및 PEG쇄 사이에 다른 연결체를 갖는 컨쥬게이트의 합성에 대해서, 상기 연결기는 보호된 글리세롤 백본에 먼저 결합된다(예를 들면, 화학 구조 3). 이어서, 제 1 반응 PEG 올리고머는 상기 연결체의 자유단에 결합되고, PEG는 소망한 대로 연장된다. 그렇지 않으면, 제 1 반응 PEG 올리고머는 상기 연결체가 백본에 결합되기 전에 연결체에 결합될 수 있다. 연결체를 다루는 실시예에서, 바람직한 PEG-시약은 히드록실, 아미노, 카르복실, 이소시아네이트, 티올, 카보네이트 작용기를 포함한다. 본 발명 방법의 실시예에서 사용되는 PEG-시약은 PEG-토실레이트, PEG-메실레이트 및 숙시닐-PEG를 포함하는 것이 특히 바람직하다.
또한, 상기 글리세롤 백본 및 지질군 사이에 동일한 연결기를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 컨쥬게이트를 얻기 위해서, 상기 연결체는 상기 백본에 결합되기 전에 상기 지질에 결합될 수 있거나, 상기 연결체는 지질이 연결체에 결합되기 전에 백본에 결합될 수 있다.
앞서 설명한 접근법은 제거 가능한 보호기에 의해 보호되는 백본 상에서 성장하는 PEG쇄를 설명한다. 이어서, PEG가 제자리에 있은 후에 상기 지질군은 백본에 결합된다. 그러나, PEG쇄가 성장하기 전에 상기 백본 상에 보호기로서 한 개 또는 두 개의 지질을 사용하는 것도 가능하다. 이러한 다른 접근법은 PEG 결합 및 연장 도중에 보호될 필요가 있는 반응기를 갖지 않는 알킬쇄에 특히 유용하다. 담즙산은 스테로이드산 컨쥬게이트가 요구되는 경우에는 훨씬 덜 유용하며, 이는 담즙산은 PEG 결합 및 연장 도중에 이슈를 만드는 다량의 측기(side group)를 포함하는 경향이 있기 때문이다.
상기 설명된 합성 방법이 본 발명을 포함하는 다량의 화합물을 만드는데 유용한 반면, 일부 경우에서 다른 방법을 이용하는 것이 더 필요하거나 더 편리할 수 있다. 예를 들면, 담즙산 및 27개의 서브유닛을 가진 두 개의 PEG쇄를 포함하는 컨쥬게이트가 소망되는 경우, 이러한 컨쥬게이트는 이것을 상기 글리세롤 백본에 결합하기 이전에 단분산 PEG쇄를 합성함으로써 만들어질 수 있다. 비슷하게, 상기 글리세롤 백본에 결합되기 이전에 합성된 PEG쇄를 이용하여 작은 PEG를 포함하는 본 발명의 다양한 화합물을 만드는 것이 가능하다.
또한, 본 발명의 다른 화합물의 합성이 특별히 고려될 수 있다. 상기 백본과 아실기 또는 백본과 PEG 사이에 연결체를 가진 컨쥬게이트는 연결체가 백본에 결합되기 이전에 상기 연결체의 결합 특성 등을 고려하여 단분산 PEG쇄를 제조함으로써 만들어지는 것이 바람직하다.
본 발명의 컨쥬게이트는 글리세롤 백본에 결합된 단일 지질 및 단일 단분산 PEG쇄를 가진 것을 포함하고 여기서, 백본 상의 제 3 위치는 히드록실기부터 활성제까지 범위의 다른 성분으로 차지된다. 상기 언급된 유리 히드록실기를 갖는 1,2 글리세롤 디에스테르를 보관하는 과정에서 위치 변화가 발생하는데, 주의할 것은 만약 상기 PEG쇄가 약 6개의 서브유닛보다 길다면 유리 히드록실기를 갖는 글리세롤 백본에 결합된 단일 지질 및 단일 단분산 PEG쇄를 포함한 컨쥬게이트에서 재조정될 기회는 훨씬 더 적을 것이고, 이것은 PEG쇄를 이동시키는데 다량의 에너지가 필요하기 때문이다(공간 배치, 분자크기 및 극성이 지질과 다르기 때문). 또한, 1,3 이성질체는 일반적으로 1,2 이성질체 보다 더 안정하다.
상기 언급한 이론에 따라, 한 개 또는 두 개의 단분산 PEG쇄를 포함하는 광범위한 PEG-지질 컨쥬게이트를 합성할 수 있다. 다수의 구체적인 실시예를 이하에 설명한다.
PEG-지질 컨쥬게이트의 합성에 적합한 지질은 알킬쇄뿐만 아니라 담즙산(스테로이드산)을 포함한다. 따라서, 본 발명은 본 액상 합성 방법으로 제조된 다양한 PEG-지질 컨쥬게이트를 포함한다. 상기 스테로이드산-PEG 컨쥬게이트는 특정 세포로의 지질계 약물 운반을 위한 표적화 성분으로서 또는 자가 유화하는 약물 운반 체계(SEDDS)로서 리포솜에 포함될 수 있다.
담즙산(스테로이드산)은 4개의 환을 포함한 스테로이드 구조, 카르복실산으로 종결되는 5개 또는 8개의 탄소 측쇄, 및 여러 개의 히드록실기의 존재 및 여러 개의 배향으로 구성된 분자의 큰 과(family)로 이루어져 있다. 상기 4개의 환은 왼쪽부터 오른쪽 순으로 A, B, C 및 D로 라벨링되고, D환은 한개의 탄소가 적어 다른 3개의 환보다 작다. 담즙산의 예를 화학 구조 5에 제시한다. 모든 담즙산은 측쇄를 갖는다. 타우린 또는 글리신으로 아미드 연결될 수 있는 카르복실산기와 마주하는 경우, 뉴클리어 히드록실기는 담즙 알콜로부터 수용성 담즙염의 형성에 필수적인 글루쿠로니드 또는 설페이트와 에스테르화 될 수 있다.
Figure pct00008
최근에는, 구조 내의 미세한 변형이 담즙염의 물리-화학적 특성에 미치는 영향에 대해 연구해왔다. 특허 공보(WO 02083147)에는 담즙산 또는 담즙염이 적합한 아미노산을 갖는 제 24번 위치(카르복실)에 컨쥬게이트 된 담즙염 지방산 컨쥬게이트가 개시되어 있고, 상기 불포화 C＝C 결합은 14개 내지 22개의 탄소 원자를 가진 하나 또는 두 개의 지방산 라디칼로 컨쥬게이트 된다. 상기 컨쥬게이트는 지방간, 과혈당 및 고혈압 치료하기 위한, 혈액 내 콜레스테롤 감소용 약학 조성물로서 사용되는 것이 목적이다. 다른 특허 공보(WO 2003212051)에는 아사이클로비르-담즙산 프로드러그(prodrug)를 개시하며, 상기 담즙산 및 상기 화합물 사이에 사용될 수 있는 연결기가 개시되어 있다.
일반적인 한 실시예에서, 본 발명은 구조식I에 관한 PEG-지질 컨쥬게이트를 제공한다. 구조식I에 제시된 두 개의 이형(variants) 사이의 차이점은 글리세롤 백본을 따라 위치하는 폴리머 및 지질쇄의 상대적 위치이다.
Figure pct00009
구조식I의 여러 가지 다른 실시예가 있다. 구조식I의 하나의 변형으로, R1 및 R2는 동일하거나 상이할 수 있고, 표 1 또는 표 2에 나열된 포화 및/또는 불포화 알킬기로부터 선택되며; X는 -O-C(O)-, -O-, -S-, -NH-C(O)- 또는 표 3에서 선택된 연결체이고, P는 PEG쇄이다.
구조식I의 다른 변형으로, R1 및 R2 중 하나는 알킬기이고, 다른 하나는 H이다. 이러한 구조식I의 실시예에서, R1 및 R2 중 하나 이상은 6개 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 알킬기이다. 바람직한 실시예에서, R1 및 R2는 동일하거나 6개 내지 22개의 탄소 원자를 포함하고, 더 바람직하게는 12개 내지 18개의 탄소 원자를 포함한다. 상기 용어 "알킬"은 포화 또는 불포화된 지방산을 포함한다.
또한, 본 발명은 구조식Ⅱ에 관한 PEG-지질 컨쥬게이트를 제공한다.
Figure pct00010
또한, 구조식Ⅱ의 여러 가지 다른 실시예가 있다. 구조식Ⅱ의 하나의 변형으로, R은 표 1 또는 표 2에 나열된 알킬기이며; X는 -O-C(O)-, -O-, -S-, -NH-C(O)- 또는 표 3에서 선택된 연결체이고, P1 및 P2는 동일한 PEG쇄이다. 두 개의 분지된 PEG쇄를 제공함으로써, 구조식Ⅱ에 따른 컨쥬게이트는 단일 긴 PEG쇄를 갖는 컨쥬게이트 보다 많은 이점을 제공할 수 있다.
[표 1]
Figure pct00011
[표 2]
Figure pct00012
[표 3]
본 발명에 사용되는 추가 연결체
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
또한, 본 발명의 PEG-지질 컨쥬게이트는 상기 지질부가 한 개 또는 두 개의 담즙산을 포함하는 화합물을 포함한다. 이러한 컨쥬게이트는 상기 알킬기가 담즙산으로 대체되었다는 것을 배제하고는 구조식I 및 구조식Ⅱ에 제시된 것과 동일한 구조를 갖는다. 담즙산 컨쥬게이트에 대해서, 변형 및 바람직한 실시예는 PEG-알킬 컨쥬게이트에 대하여 설명한 것과 동일하다. 담즙산은 알킬기에도 마찬가지로 친유성이기 때문에, 담즙산 컨쥬게이트는 유사한 물리적 특성을 공유 하기도하고 일반적으로 PEG-알킬 컨쥬게이트로서 일부에 동일하게 사용되기에 적합하다.
화학 구조 6은 단일 PEG쇄 및 글리세롤 백본에 결합된 두 개의 담즙산을 갖는 본 발명의 두 개의 변형을 제시한다.
Figure pct00017
화학 구조 6에서, Y1 및 Y2는 동일하거나 상이할 수 있고, OH, H, CH3일 수 있으며, 또는 표 4에 제시된 상기 담즙산과 부합할 수 있다. 유사하게, 다양한 측쇄(표 4에 제시)를 가진 담즙산은 상기 글리세롤 백본에 컨쥬게이션 될 수 있다. 표 4는 본 발명의 실시에 유용한 담즙산 및 이의 유도체를 나열한다.
[표 4]
본 발명에 사용되는 담즙산(스테로이드산) 및 그 유사체
Figure pct00018
Figure pct00019
또, 본 발명의 다른 변형은 R1 또는 R2 중 둘 중 하나가 담즙산이지만, 다른 하나는 알킬기인 구조식I에 대한 화합물을 포함한다. 지질 폴리머 컨쥬게이트의 이러한 변형의 예는 화학 구조 7에 제시된다.
Figure pct00020
화학 구조 3에서, Y1 및 Y2는 동일하거나 상이하고, OH, H, CH3이며, 또는 표 4에 제시된 상기 담즙산에 따라 선택된다. 또한, 상기 담즙산의 측쇄는 표 4에 제시된 구조에 따라 변형될 수 있다. R은 표 1 및 표 2에서 선택된 포화 및/또는 불포화 알킬기이다.
구조식Ⅱ의 화합물에 대한 다른 바람직한 실시예는 화학 구조 8에 대한 PEG-담즙산 컨쥬게이트이다.
Figure pct00021
화학 구조 8에서, Y1 및 Y2는 OH, H, CH3 또는 표 4에 제시된 담즙산에서 선택된다. 또한, 상기 담즙산의 측쇄는 표 4에 제시된 구조에 따라 변형될 수 있다.
구조식Ⅱ의 화합물에 대한 다른 바람직한 실시예는 화학 구조 9에 제시된 구조 중 하나를 따른 PEG-콜레스테롤 컨쥬게이트이다.
Figure pct00022
본 발명의 다른 실시예를 반응식4에 제시한다. 이러한 방법에서, 콜산과 같은 임의의 적합한 담즙산은 디클로로메탄 중의 N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP)의 존재하에서 3-mPEG-12-글리세롤과 반응하여 최종 산물인 1,2-디콜로일-rac-3-mPEG 12-글리세롤을 생산한다. 다량의 다양한 길이를 가진 단분산 PEG쇄가 사용될 수 있다는 것이 인식될 것이다.
Figure pct00023
반응식5에 제시된 본 발명의 다른 실시예는 DL-1,2-이소프로필리덴글리세롤 중간체가 지방산과 반응하여 I를 얻거나, 콜레스테롤과 반응하여 II을 각각 얻는 반응을 수반한다. 임의의 바람직한 방법에 의해 이소프로필기를 제거하는 것은 각각 중간체Ⅲ 및 중간체Ⅳ를 제공한다.
Figure pct00024
상기 설명한 방법은 다양한 신규 PEG-지질 컨쥬게이트를 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 임의의 지방산쇄를 함유하는 순수한 형태의 3-PEG-1,2-알킬글리세롤을 제조하는데 사용될 수 있다. 바람직한 지방산은 탄소쇄 길이가 약 C6 내지 C22의 범위이고, 더 바람직하게는 약 C10 내지 약 C18이다.
상기 설명한 방법은 다양한 신규 PEG-지질 컨쥬게이트를 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 임의의 담즙산쇄를 함유하는 순수한 형태의 3-PEG-1,2-디스테로이드산-글리세롤을 제조하는데 사용될 수 있다.
상기 설명된 방법은 다양한 신규 PEG-지질 컨쥬게이트를 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 임의의 지방산쇄를 함유하는 순수한 형태의 3-알킬-1,2-비스PEG-글리세롤을 제조하는데 사용될 수 있다. 바람직한 지방산은 탄소쇄 길이가 약 C6 내지 C22의 범위이고, 더 바람직하게는 약 C10 내지 약 C18이다(반응식6).
Figure pct00025
반응식6은 글리세롤 백본, 지질군 및 두 개의 단분산 PEG쇄를 갖는 화합물을 야기한다. 그러나 반응식1에 예시된 것으로, PEG쇄의 연장은 트리에틸렌글리콜과 같은 다른 올리고머 또는 앞선 섹션에서 설명한 바와 같이 트리에틸렌글리콜과 모노트리에틸렌글리콜 사이에서 행해질 수 있다.
상기 설명된 방법은 다양한 신규 분지된 PEG-지질 컨쥬게이트를 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 임의의 담즙산쇄를 함유하는 순수한 형태의 스테로이드산-글리세롤을 함유하는 순수한 형태의 3-스테로이드산-1,2-비스PEG-글리세롤을 제조하는데 사용될 수 있다(반응식7).
Figure pct00026
독창적인 PEG-지질은 리포솜 및 다른 지질 함유 제형의 제조에 바람직하게 사용된다. 본 발명에 따르면, 약학 조성물은 하나 이상의 유전 벡터, 안티센스 분자, 단백질, 펩타이드, 생리활성 지질 또는 약물을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 활성제는 하나 이상의 약물(예를 들면, 하나 이상의 항암 약물 또는 다른 항암제)을 포함할 수 있다. 일반적으로 친수성 활성제는 상기 제형에 직접적으로 첨가될 것이고, 소수성 활성제는 다른 성분을 혼합하기 전에 PEG-지질에 의해 용해될 것이다.
상기 독창적인 제형 내에 존재할 수 있는 적합한 활성제는 상술한 바와 같이 하나 이상의 유전 벡터, 안티센스 분자, 단백질, 펩타이드, 생리활성 지질 또는 약물을 포함한다. 독창적인 PEG-지질은 정맥내 사용하는 PEG 올리고머의 존재하에서 보다 안전한 활성제를 투여하는데 사용될 수 있다.
본 발명에서 양립할 수 있는 바람직한 활성제는 말초신경, 아드레날린성 수용체, 콜린성 수용체, 골격근, 심혈관계, 평활근, 혈액 순환계, 시냅스 부, 신경효과제 결합부, 내분비 및 호르몬계, 면역계, 생식계, 골격계, 소화 및 배설계, 히스타민계 및 중추 신경계에서 작용하는 시제(agent)를 포함한다. 적합한 시제는, 예를 들면 단백질, 효소, 호르몬, 뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드, 핵단백질, 다당류, 당단백질, 지질 단백질, 폴리펩티드, 스테로이드, 터페노이드, 레티노이드, 항궤양성 H2 수용체, 길항제, 항궤양 약물, 저칼슘제, 모이스춰라이저, 화장품 등에서 선택될 수 있다. 활성제는 진통제, 마취약, 항부정맥제, 항생제, 항알러지제, 항균제, 항암제(예를 들면, 미토산트론, 텍산, 파클리탁셀, 캠토테신 및 캠토테신 유도체(예를 들면, SN-38), 젬시타빈, 안타사이클린, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 항체, 사이토신, 항체 독소 등), 혈압 강하제(예를 들면, 디히드로피리딘, 항우울제, cox-2 억제제), 항응혈제, 항우울제, 항당뇨제, 항간질제, 항염증 코르티코스테로이드, 알츠하이머 또는 파키슨병의 치료제, 항궤양제, 항원충감염제, 불안 완화제, 갑상선제, 항갑상선제, 항바이러스제, 식욕 감퇴제, 비스포스포네이트, 심장 근육 수축력 촉진제, 심혈관제, 코르티코스테로이드, 이뇨제, 도파민성 활성제, 위장제, 지혈제, 고콜레스테롤제, 혈압 강하제, 면역 억제제, 항통풍제, 항말라리아제, 항편두통제, 무스카린제, 류마티스, 관절염, 건선, 염증성 장질환, 크론병 치료용 시제와 같은 항염증제, 또는 다발성 경화증, 안과제를 포함하는 탈수질환 치료용 시제, 백신(예를 들면, 인플루엔자 바이러스, 폐렴, A형 간염, B형 간염, C형 간염, 콜레라 독소 B-서브유닛, 장티푸스, 열대 열원충, 디프테리아 파상풍, 단순 헤르페스 바이러스, 폐결핵, HIV, 보르데텔라 백일해, 홍역, 볼거리, 풍진, 박테리아 변성 독소, 백시니아 바이러스, 아데노 바이러스, SARS 바이러스, 카나리아 바이러스, BCG(바실루스 칼메트 게린), 폐렴 간균 백신 등), 히스타민 수용체 길항제, 수면제, 신장 보호제, 지질 조정제, 근 이완제, 신경 이완제, 항신경성제, 오피오이드 작용제 및 길항제, 부교감 신경양 작용제, 프로테아제 억제제, 프로스타글란딘, 진정제, 성호르몬(예를 들면, 안드로겐, 에스트로겐 등), 흥분제, 교감 신경 흥분제, 혈관 확장제, 크산틴 및 이러한 종들의 합성 유사체일 수 있다. 상기 치료 시제는 사이클로스포린 및 암포테리신 B와 같은 신세포 용해성이거나 암포테리신 B 및 파클리탁셀, 에톱시드, 사이토카인, 리보자임, 인터페론, 올리고뉴클레오티드, siRNA, RNAi 및 앞서 말한 기능성 유도체와 같은 심장 독성일 수 있다.
상기 독창적인 방법에서 화학치료제가 적합하게 사용된다. 화학치료제를 암세포에 직접적으로 운반하기 위하여, 화학치료제를 함유하는 상기 독창적인 PEG-지질 제형은 종양 조직에 직접적으로 투여될 수 있다. 일부의 경우에 있어서, 특히 종양 절제 후에, 상기 리포솜 제형은 종양 절제에 따른 구멍(cavity)에 직접적으로 주입될 수 있고, 코팅처럼 남아있는 조직에 응용될 수 있다.
본 발명의 PEG-지질은 정제, 캡슐, 알약, 과립제, 좌약, 용액, 현탁액 및 에멀젼, 페이스트, 연고, 젤, 크림, 로션, 점안액, 파우더 및 스프레이를 포함하는 다양한 제형 및 이 밖에 적합한 수용성 또는 난용성 부형제를 포함하는 다양한 제형을 제조하는데 사용될 수 있다.
상기 독창적인 PEG-지질 컨쥬게이트는 생체 조건 안에서 상기 활성제를 목표 세포에 운반하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 경구, 주사(예를 들면, 정맥내, 피하, 근육내, 비경구, 복강내, 조직 또는 치료가 필요한 부분에의 직접적인 주사 등), 흡입, 점막 운반, 국부적 및/또는 직장으로 또는 알려지거나 개발된 어떤 방법들에 의해 운반될 수 있다. 또한, PEG화된 카이디올리핀을 함유하는 제형은 예를 들면 크림, 피부 연고, 건성 피부 소프트너, 모이스춰라이저 등으로 국부 투여될 수 있다.
생체 조건 내의 사용에서, 본 발명은 질병 치료를 위한 약물을 제조하는데 있어서 하나 이상의 활성제를 함유하는 본원에 설명된 조성물의 사용을 제공한다. 즉, 본 발명은 질병 치료를 위한 하나 이상의 활성제를 함유하는 본원에 설명된 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 일반적으로, 상기 질병은 사람 또는 동물 환자에 존재한다. 바람직한 실시예에서, 상기 질병은 암이고 예를 들면, 본 발명의 조성물은 활성제로서 하나 이상의 항암제를 포함한다. 예를 들면, 본 발명에 따르면 본원에 설명된 조성물은 단독으로 사용되거나, 머리, 목, 뇌, 혈액, 가슴, 폐, 췌장, 뼈, 비장, 방광, 전립선, 고환, 결장, 신장, 난소 및 피부의 암과 같은 암 치료를 위한 기타 치료법(예를 들면, 화학 치료 또는 방사선 치료)과 병용하여 이용될 수 있다. 하나 이상의 항함제를 포함하는 본 발명의 조성물은 특히 급성 백혈병(예를 들면, 급성 림프성 백혈병 또는 급성 골수성 백혈병)과 같은 백혈병을 치료하는데 적합하다. 또한, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma)은 본 발명의 조성물 및 방법을 사용하여 치료될 수 있다.
또한, 이하의 구조는 본 발명을 설명한다.
Figure pct00027
화학 구조 10에서 "X"는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 나열된 것들을 포함하는 연결체이다. "n"은 반복 단위체의 개수이다. 이러한 구조는 글리세롤 백본 상에서 성장하는 단일 단분산 PEG쇄의 중간체를 나타내며, n은 일반적으로 약 6개 내지 21이다. 상기 PEG쇄는 연결체를 통해 상기 글리세롤에 직접적으로 결합되어 있는 트리에틸렌글리콜 또는 테트라에틸렌글리콜과 같은 작은 쇄로 시작하는 순차적인 에테르화를 통해 연장된다. PEG쇄 상의 말단기는 메틸기일 수 있지만 이것에 한정되는 것은 아니다.
Figure pct00028
화학 구조 11에서 "X"는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 나열된 것들을 포함하는 연결체이다. "n"은 반복 단위체의 개수이다. 이러한 구조는 글리세롤 백본 상에서 성장하는 두 개의 단분산 PEG쇄의 최종 단계를 나타낸다. 상기 "R"은 포화(표 1) 또는 불포화 지방산(표 2)과 같은 알킬기, 콜릴기 또는 유사체(표 4)이다. 메틸 이외에 말단기가 PEG쇄 상에 포함될 수 있다.
Figure pct00029
화학 구조 12에서 "X"는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 나열된 것들을 포함하는 연결체이다. "n"은 반복 단위체의 개수이다. 이러한 구조는 글리세롤 백본 상에서 성장하는 두 개의 단분산 PEG쇄의 최종 단계를 나타낸다. 유사하게, 상기 PEG쇄는 연결체를 통해 상기 글리세롤에 직접적으로 결합되어 있는 트리에틸렌글리콜 또는 테트라에틸렌글리콜과 같은 작은 쇄로 시작하는 순차적인 에테르화를 통해 연장된다. 상기 "R"은 포화(표 1) 또는 불포화 지방산(표 2)과 같은 알킬기, 콜릴기 또는 유사체(표 4)이다. 메틸 이외에 말단기가 PEG쇄 상에 포함될 수 있다.
Figure pct00030
화학 구조 13에서 "X" 및 "L"은 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 나열된 것들을 포함하는 연결체와 동일하거나 다르다. "n"은 반복 단위체의 개수이다. 이러한 구조는 글리세롤 백본 상에서 성장하는 두 개의 단분산 PEG쇄의 최종 단계를 나타내며, n은 일반적으로 약 5개 내지 12이다. 상기 "R"은 포화(표 1) 또는 불포화 지방산(표 2)과 같은 알킬기 또는 콜릴기 및 이들의 유사체(표 4)이다. 메틸 이외에 말단기가 PEG쇄 상에 포함될 수 있다.
본 발명의 실시예는 활성제의 용해도를 증가시키고 이의 운반을 향상시키는 정제된 PEG-지질 컨쥬게이트를 포함하는 본원에의 약학 조성물 제조의 관점에서 설명된다. 제형화된 약물에 대한 대략적으로 바람직한 조성물은 본원에 일반적으로 설명되지만, 일반적으로 다른 약물은 다른 최상의 조제법을 가진다.
Ⅳ 용액에서, 약물의 바람직한 농도는 0.1% 내지 30%이다. 보다 바람직하게는 1% 내지 10%이다. 가장 바람직하게는 1% 내지 5%이다. PEG-지질 대 약물(PEG-지질/약물)의 바람직한 비율은 1 대 20이다. 보다 바람직하게는 1 대 10이다. 가장 바람직하게는 1 대 5이다.
내복액에 대해서, 약물의 바람직한 농도는 1% 내지 40%이다. 보다 바람직하게는 2.5% 내지 30%이다. 가장 바람직하게는 5% 내지 30%이다. PEG-지질 대 상기 약물(PEG-지질/약물)의 바람직한 비율은 0.5 대 20이다. 보다 바람직하게는 1 대 5이다. 가장 바람직하게는 1 대 3이다.
점안액에 대해서, 약물의 바람직한 농도는 0.01% 내지 5%이다. 보다 바람직하게는 0.05% 내지 2%이다. 가장 바람직하게는 0.1% 내지 2%이다. PEG-지질 대 상기 약물(PEG-지질/약물)의 바람직한 비율은 1 대 20이다. 보다 바람직하게는 3 대 15이다. 가장 바람직하게는 5 대 10이다.
국부 용액에 대해서, 약물의 바람직한 농도는 0.05% 내지 5%이다. 보다 바람직하게는 0.1% 내지 5%이다. 가장 바람직하게는 0.1% 내지 2%이다. PEG-지질 대 상기 약물(PEG-지질/약물)의 바람직한 비율은 1 대 20이다. 보다 바람직하게는 3 대 15이다. 가장 바람직하게는 5 대 10이다.
내복 캡슐에 대해서, 약물의 바람직한 캡슐 함유량은 10mg 내지 250mg이다. 보다 바람직하게는 25mg 내지 200mg이다. 가장 바람직하게는 25mg 내지 100mg이다. PEG-지질 대 상기 약물(PEG-지질/약물)의 바람직한 비율은 1 대 10이다. 보다 바람직하게는 1 대 5이다. 가장 바람직하게는 2 대 5이다.
국부용 조제물에 대해서, 약물의 바람직한 농도는 0.05% 내지 5%이다. 보다 바람직하게는 0.1% 내지 5%이다. 가장 바람직하게는 0.5% 내지 2%이다. PEG-지질 대 상기 약물(PEG-지질/약물)의 바람직한 비율은 1 대 50이다. 보다 바람직하게는 3 대 20이다. 가장 바람직하게는 5 대 10이다.
이전의 논의는 글리세롤 백본을 갖고 PEG쇄를 함유하는 폴리머-지질 컨쥬게이트에 초점을 맞추지만, 본 발명은 다른 백본 및 폴리머를 더 포함한다. 3-아미노-1, 2-프로판디올, 3-브로모-1, 2-프로판디올, 3-클로로-1, 2-프로판디올, 3-플루오로-1, 2-프로판디올, DL-글리세린산, 아스파르트산, 글루탐산 및 1,2,4-부탄트리올은 다른 백본으로서 사용되어 유사한 PEG-지질 컨쥬게이트를 합성할 수 있다. 화학 구조 14는 백본으로서 아스파르트산을 이용하는 본 발명의 컨쥬게이트를 설명한다. 이러한 컨쥬게이트를 제조하기 위해서, 상기 아미노산에 두 개의 카르복실기가 이미 있기 때문에 상기 출발 물질은 올레산 대신에 올레오일 알코올일 것이다. 숙신산 연결체는 백본에 PEG를 결합시키는데 사용된다. 이러한 다른 실시예에서, 상기 PEG쇄(또는 다른 폴리머쇄)는 항상 단분산이다.
Figure pct00031
프로필렌글리콜 및 메틸렌글리콜올리고머는 에틸렌글리콜올리고머에 대한 대안으로서 사용될 수 있다. 또한, 이러한 기초 구성 요소로 이루어진 코폴리머 또는 블록 코폴리머를 생산하는 것이 가능하다.
본원에 설명된 합성 방법은 임의의 적합한 방법으로 수정될 수 있다. 예를 들면, 상기 독창적인 방법에 사용되는 PEG-시약은 중앙 글리세롤 또는 3-아미노-1,2-프로판디올 군 등의 히드록실기 또는 아미노기와 반응하거나 임의의 연결체의 작용기와 반응할 수 있는 임의의 PEG 유도체일 수 있다.
상기 독창적인 방법에서 PEG-지질 컨쥬게이션 반응을 위한 용매는 N,N-디메틸폼아미드(DMF), 디메틸술폭시드(DMSO), 피리딘, 테트라히드로푸란(THF), 디클로로메탄, 클로로폼, 1,2-디클로로에탄, 다이옥산 등과 같은 극성 비양성자성 용매를 포함하는 것이 바람직하다.
하나의 양태에서, 본 발명은 규정된 길이의 PEG쇄를 만드는 방법이며, 상기 방법은 (a) 제 1 상태하에서 안정하고 제 2 상태하에서 유리 히드록실기로 변환할 수 있는 글리세롤 보호기를 가진 글리세롤 유도체를 선택하는 단계; (b) 1개 내지 12개의 서브유닛을 갖는 초기 PEG 올리고머를 선택하는 단계로, 상기 초기 PEG 올리고머는 제 1 말단에 올리고머 보호기를 갖고 이런 올리고머 보호기는 제 1 상태하에서 히드록실기로 변환되고, 상기 초기 PEG 올리고머는 이것의 제 2 말단에 반응기를 갖고 이런 반응기는 유리 히드록실기를 갖는 화합물과 결합을 형성하며; (c) 글리세롤-PEG 컨쥬게이트를 형성하기 위하여 상기 글리세롤 유도체를 상기 초기 PEG 올리고머 와 반응시키는 단계; (d) 상기 컨쥬게이트를 제 1 상태에 노출시킴으로써 상기 올리고머 보호기를 제거하는 단계; (e) 하기에 설명되는 (f), (g) 및 (h) 단계를 0번 내지 6번 반복하는 단계; (f) 2개 내지 11개의 서브유닛을 갖는 연장 PEG 올리고머를 선택하는 단계로, 상기 연장 PEG 올리고머는 이의 제 1 말단에 올리고머 보호기를 갖고 이런 올리고머 보호기는 제 1 상태하에서 히드록실기로 변환되고, 상기 연장 PEG 올리고머는 이의 제 2 말단에 반응기를 갖고 이런 반응기는 유리 히드록실기를 갖는 화합물과 결합을 형성하며; (g) 연장된 글리세롤-PEG 컨쥬게이트를 형성하도록 상기 연장 PEG 올리고머를 상기 글리세롤-PEG 컨쥬게이트와 반응시키는 단계; (h) 상기 컨쥬게이트를 제 1 상태에 노출시킴으로써 상기 올리고머 보호기를 제거하는 단계; (i) 하기에 설명되는 단계(j) 또는 단계(k 및 l) 중 어느 하나에 의해 상기 PEG쇄를 종결하는 단계; (j) 말단기를 상기 연장된 글리세롤-PEG컨쥬게이트의 유리 히드록실기에 추가하는 단계; (k) 2개 내지 11개의 서브유닛을 갖는 말단 PEG 올리고머를 선택하는 단계로, 상기 말단 PEG 올리고머는 이의 제 1 말단에 말단기를 갖고, 상기 말단 PEG 올리고머는 이의 제 2 말단에 반응기를 갖고 이런 반응기는 유리 히드록실기를 갖는 화합물과 결합하여 형성되고; (l) 상기 글리세롤-PEG 컨쥬게이트 또는 확장된 글리세롤-PEG 컨쥬게이트를 상기 말단 PEG 올리고머와 컨쥬게이션 반응시키는 단계; 및 (m) 상기 연장된 글리세롤-PEG 컨쥬게이트를 제 2 상태에 노출시키는 단계를 포함한다. 상기 말단기는 메틸기일 수 있다. 제 1 상태는 촉매 환원일 수 있다. 제 2 상태는 산에 노출되는 상태일 수 있다. 상기 글리세롤 유도체는 반응식1(a)에 제시된 식으로 나타내어진 화합물일 수 있다. 상기 글리세롤 유도체는 화학 구조 2에 제시된 식으로 나타내어진 화합물일 수 있다. 상기 글리세롤 유도체는 화학 구조 3에 제시된 식으로 나타내어진 화합물일 수 있다. 상기 글리세롤 유도체는 화학 구조 4에 제시된 식으로 나타내어진 화합물일 수 있다. 상기 글리세롤 보호기는 알킬기일 수 있다. 상기 방법은 (n) 상기 글리세롤 보호기를 제거하는 단계; 및 (o) 지질기를 상기 글리세롤 백본에 결합시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 PEG-지질 컨쥬게이트를 포함하는 화학 조성물이며, 상기 PEG-지질 컨쥬게이트는 글리세롤 백본; 상기 글리세롤 백본에 공유결합된 지질군; 및 상기 글리세롤 백본에 공유결합된 PEG쇄를 포함하되, 상기 PEG쇄는 약 200Da 내지 1,200Da의 분자량을 갖고, 상기 조성물 중의 약 75%를 초과하는 컨쥬게이트 분자의 PEG쇄는 동일한 분자량을 갖는다. 상기 조성물 중의 약 90%를 초과하는 컨쥬게이트 분자의 PEG쇄는 동일한 분자량을 가질 수 있다. 상기 PEG쇄는 약 600Da을 초과하는 분자량을 가질 수 있다. 상기 지질은 알킬기일 수 있다. 상기 알킬기는 표 1 및 표 2의 알킬기들에서 선택될 수 있다. 상기 조성물은 상기 글리세롤 백본에 공유결합된 제 2 지질을 더 포함할 수 있다. 제 2 지질은 알킬기일 수 있다. 제 2 알킬기는 표 1 및 표 2의 알킬기들에서 선택될 수 있다. 상기 지질은 담즙산일 수 있다. 상기 담즙산은 표 4의 담즙산들에서 선택될 수 있다. 상기 담즙산은 콜레스테롤일 수 있다. 또한, 상기 조성물은 상기 글리세롤 백본과 PEG쇄 사이의 연결기를 포함할 수 있다. 상기 연결체는 표 3에의 -S-, -O-, -N-, -OCOO- 및 표 3의 연결체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 상기 글리세롤 백본에 공유결합된 제 2 PEG쇄를 포함할 수 있다. 상기 글리세롤 백본과 제 2 PEG쇄 사이의 연결체는 -O-C(O)-, -O-, -S- 및 -NH-C(O)-로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 글리세롤 백본과 제 2 PEG쇄 사이의 연결체는 표 3에서 선택될 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 앞선 문단(본원 명세서 식별번호 151)에 따른 조성물을 포함하고, 상기 글리세롤 백본은 3-아미노-1, 2-프로판디올, 3-브로모-1, 2-프로판디올, 3-클로로-1, 2-프로판디올, 3-플루오로-1, 2-프로판디올, DL-글리세린산, 아스파르트산, 글루탐산 및 1,2,4-부탄트리올로 이루어진 군에서 선택된 백본으로 대체된다.
다른 양태에서, 본 발명은 앞선 문단(본원 명세서 식별번호 151)에 따른 조성물을 포함하고, 상기 PEG쇄는 폴리메틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 및 메틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 에틸렌글리콜로 이루어지는 군에서 선택된 2개 이상의 모노머가 포함된 코폴리머로 이루어지는 군에서 선택된 폴리머로 대체된다.
다른 양태에서, 본 발명은 이하의 화합물: 반응식1(a)에 제시된 식으로 나타내어진 화합물; 화학 구조 2로서 제시된 식으로 나타내어진 화합물; 화학 구조 3으로서 제시된 식으로 나타내어진 화합물; 화학 구조 4로서 제시된 식으로 나타내어진 화합물; 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-에틸렌글리콜 분자, 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-디에틸렌글리콜 분자, 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-트리에틸렌글리콜 분자, 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-테트라에틸렌글리콜 분자, 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-펜타에틸렌글리콜 분자 및 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-헥사에틸렌글리콜 분자, 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-헵타에틸렌글리콜 분자 및 1,2-이소프로필리덴-글리세롤-3-옥타에틸렌글리콜 분자; 및 1,3-디아실글리세롤-2-에틸렌글리콜 분자, 1,3-디아실글리세롤-2-디에틸렌글리콜 분자, 1,3-디아실글리세롤-2-트리에틸렌글리콜 분자, 1,3-디아실글리세롤-2-테트라에틸렌글리콜 분자, 1,3-디아실글리세롤-2-펜다에틸렌글리콜 분자, 1,3-디아실클리세롤-2-헥사에틸렌글리콜 분자, 1,3-디아실글리세롤-2-헵타에틸렌글리콜 분자 및 1,3-디아실글리세롤-2-옥타에틸렌글리콜 분자를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 생물학적 이용 가능성 및/또는 활성제의 용해도를 증가시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은 본 발명의 하나 이상의 PEG-지질 컨쥬게이트를 함유하는 활성제를 제형화 하는 단계 및 상기 PEG-지질 컨쥬게이트계 제형을 동물 또는 사람에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 하기 구조식을 갖는 화학 조성물을 포함하며:
Figure pct00032
상기 구조식에서, n은 약 7 내지 12이고; X는 연결기이다. X는 약 16 내지 200의 분자량을 가질 수 있다. X는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 제시된 연결체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 약 15 내지 210의 분자량을 가질 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 메틸기일 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 보호기일 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 히드록실기일 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 이하 구조식을 갖는 화학 조성물을 포함하며:
Figure pct00033
상기 구조식에서, n은 약 3 내지 23이고; R은 지질이고; X는 연결기이다. X는 약 14 내지 620의 분자량을 가질 수 있다. X는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 제시된 연결체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. n은 약 4 내지 12일 수 있다. 보다 바람직하게, n은 약 7 내지 12일 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 약 15 내지 210의 분자량을 가질 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 메틸기일 수 있다. R은 표 1 또는 표 2에서 선택된 알킬기일 수 있다. R은 담즙산일 수 있다. R은 표 4에서 선택된 담즙산일 수 있다. R은 콜레스테롤일 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 이하 구조식을 갖는 화학 조성물을 포함하며:
Figure pct00034
상기 구조식에서, n은 약 3 내지 23이고; R은 지질이고; X는 동일하거나 상이한 연결기이다. X는 약 14 내지 620의 분자량을 가질 수 있다. X는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 제시된 연결체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. n은 약 4 내지 23일 수 있다. 보다 바람직하게 n은 약 7 내지 23일 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 약 15 내지 210의 분자량을 가질 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 메틸기일 수 있다. R은 표 3 또는 표 4에서 선택된 알킬기일 수 있다. R은 담즙산일 수 있다. R은 표 4에서 선택될 수 있다. R은 콜레스테롤일 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 이하 구조식을 갖는 화학 조성물을 포함하며:
Figure pct00035
상기 구조식에서, n은 약 3 내지 23이고; R은 지질이고; L은 연결기이고; X는 동일하거나 상이한 연결기이다. X는 약 14 내지 620의 분자량을 가질 수 있다. X는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 제시된 연결체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. n은 약 4 내지 23일 수 있다. n은 약 7 내지 23일 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 약 15 내지 210의 분자량을 가질 수 있다. 상기 PEG쇄의 말단은 메틸기일 수 있다. R은 표 1 또는 표 2에서 선택된 알킬기일 수 있다. R은 담즙산일 수 있다. R은 표 4에서 선택될 수 있다. R은 콜레스테롤일 수 있다. X는 옥시, 티올, 아미노, -COO-, -OCOO-, 숙시닐, 할로이드 및 표 3에 제시된 연결체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
실시예
이하 실시예는 본 발명을 더 설명하고 본 발명의 범위를 제한하지 않는 방법으로 구성되어야 한다.
실시예 1. 3-올레오일-1,2-비스(메톡시헥사틸렌글리콜)글리세롤의 합성
Part 1A: 3-벤질-1,2-비스(메톡시헥사틸렌글리콜)글리세롤
3목형 플라스크에 (±)-3-벤질옥시-1,2-프로판디올(1.2g, 6mmol), NaH(0.96g, 40mmol) 및 건조 THF(150mL)를 첨가했다. 이어서, 모노메톡시헥사에틸렌글리콜토실레이트(5.4g, 12mmol)의 건조 THF 용액(50mL)을 실온에서 상기 혼합물에 적상으로 첨가했다. 24시간 동안 상기 혼합물을 환류하고 실온으로 냉각했다. 냉각 메탄올을 반응 혼합물에 첨가하여 초과의 NaH를 퀀칭(quenching)했다. 상기 용매를 증발시키고 조생성물을 5%의 HCl(w/v)와 CH2Cl2로 추출했다. 상기 용매를 증발시키고 겔 투과 크로마토그래피로 추가 정제하여 85%의 무색 액체를 수득했다.
Part 1B: 3-히드록실-1,2-비스(메톡시헥사에틸렌글리콜)글리세롤
20mL의 n-헥산 내 5g의 3-벤질-1,2-비스(메톡시헥사에틸렌글리콜)글리세롤 용액에 5방울의 아세트산과 0.6g의 팔라듐 블랙을 첨가했다. 상기 혼합물을 약 60분 동안 30℃ 대기 중에서 순수 수소로 퍼지(purge)하여 3'-히드록시 상의 벤질 보호기를 제거했다. 상기 수소를 질소로 대체한 이후, 상기 용액을 4℃ 내지 6℃로 냉각하고 여과하여 촉매를 제거했다. 용매를 증발시켜 98%의 최종 산물을 수득했다.
Part 1C: 3-올레오일-1,2-비스(메톡시헥사에틸렌글리콜)글리세롤
무수의 CH2Cl2(400mL) 중의 1B로부터 얻은 산물 6.5g(10mmol), 3.1g(11mmol)의 올레산, 9.6g의 N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드(50mmol)와 촉매 양의 DMAP(0.6g, 5mmol)를 질소 하, 25℃에서 12시간 동안 교반한 다음, N,N'-디사이클로헥실우레아염을 침전시키고 여과하여 제거했다. 상기 여과된 액체를 감압하에서 증발시켜 화학 구조 15에 제시된 최종 산물을 89% 수득했다.
Figure pct00036
실시예 2. 1,2-디올레오일-rac-3-모노메톡시도데카에틸렌글리콜(mPEG-12)-글리세롤의 합성
이러한 합성의 일반적인 단계를 반응식8에 제시한다.
Figure pct00037
1mol의 헥사에틸렌글리콜을 0.15mol의 피리딘과 혼합하고 45℃ 내지 50℃로 가열하고 0.1mol의 트리틸클로라이드를 첨가했다. 상기 반응을 계속해서 교반하면서 밤새(약 16시간) 실행했고 실온으로 냉각하고 톨루엔으로 추출했다. 추출물을 물로 세정하고 이어서 헥산으로 추출하고 MgSO4로 건조했다. 상기 용매를 진공하에서 제거하고 라이트 옐로우 오일리 Tr-헥사에틸렌글리콜을 수득했다(70% 내지 85% 수율).
0.1mol의 Tr-헥사에틸렌글리콜 및 0.101mol의 p-톨루엔술포닐클로라이드를 100mL의 메틸렌클로라이드에 혼합했다. 균일한 혼합물을 드라이아이스 아세톤욕(acetone bath) 내에서 0℃로 냉각하고 반응 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 격렬한 교반하에서 45g의 KOH를 소량 첨가했다. 상기 반응을 0℃에서 3시간 동안 연속적 교반하에서 실행했다. 상기 조생성물을 100mL의 메틸렌클로라이드로 희석한 다음, 120mL의 냉각수를 첨가했다. 유기층을 수집했고 수용액상을 메틸렌클로라이드(2×50mL)로 추출했다. 상기 혼합된 유기층을 물(100mL)로 세정하고 MgSO4로 건조했다. 상기 용매를 진공 제거하고 투명기름을 수득(87% 내지 99% 수율)했다.
3목형 플라스크에 1,2-이소프로필리덴-rac-글리세롤(0.1mol), NaH(0.4mol) 및 건조 THF(200mL)를 채웠다. Tr-헥사에틸렌글리콜토실레이트(0.1mol)의 건조 THF 용액(125mL)을 실온에서 상기 혼합물에 적상으로 첨가했다. 상기 혼합물을 24시간 동안 환류하고 실온으로 냉각했다. 냉각 메탄올을 상기 반응 혼합물에 첨가하여 초과 NaH를 퀀칭했다. 상기 용매를 증발시키고 상기 조생성물을 5%의 HCl(w/v) 및 CH2Cl2로 추출했다. 상기 조생성물을 더 정제하지 않았지만 다음 합성 단계에서 직접적으로 취해졌다.
상기 조생성물을 내고압성 유리플라스크에 옮기고 200mL의 건조 메틸렌클로라이드 및 탄소 상의 10%팔라듐(pd/C)(1.5g)을 첨가했다. 30℃ 대기에서 약 60분 동안 순수 수소를 퍼지함으로써 가수소 분해를 실행하여, 상기 헥사에틸렌글리콜 상의 보호기를 제거했다. 상기 수소를 질소로 대체한 후, 용액을 4℃ 내지 6℃로 냉각하고 여과하여 촉매를 제거했다. 용매를 증발시켜 95% 내지 98%의 최종 산물을 수득했다.
3목형 플라스크에 3-헥사에틸렌-글리콜-1,2-이소프로필리덴-rac-글리세롤(0.1mol), NaH(0.4mol) 및 건조 THF(500mL)를 혼합했다. 모노벤질헥사에틸렌글리콜토실레이트(0.11mmol)의 건조 THF 용액(200mL)을 실온에서 상기 혼합물에 적상으로 첨가했다. 상기 혼합물을 24시간 동안 환류한 다음 실온으로 냉각했다. 냉각 메탄올을 상기 반응 혼합물에 첨가하여 초과 NaH를 퀀칭했다. 상기 용매를 증발시키고 상기 조생성물을 5%의 HCl(w/v) 및 CH2Cl2로 추출했다. 상기 용매를 증발시키고 겔 투과 크로마토그래피로 추가 정제하여 82%의 3-모노메톡시도데카에틸렌글리콜-1,2-이소프로필리덴글리세롤을 수득했다.
10g의 3-모노메톡시도데카에틸렌글리콜-1,2-이소프로필리덴글리세롤을 산성 메탄올 용액(180mL MeOH: 20mL, 1M HCl)에서 3시간 동안 교반하여 상기 이소프로필리딘 보호기를 제거했다. 상기 혼합물을 탄산수소나트륨으로 중화하고 클로로폼(3×150mL)에서 추출하고 황산나트륨으로 건조했다. 상기 용매의 여과 및 증발로 산물인 3-모노메톡시도데카에틸렌글리콜-1,2-디히드록실-글리세롤(화학 구조 16)을 수득했다.
Figure pct00038
상기 PEG쇄 연장 반응에서, 출발 물질인 PEG 시약은 1개 내지 6개의 CH2CH2O 유닛을 포함하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 3개 내지 6개의 CH2CH2O 유닛을 가지고, 더욱 바람직하게는 4개 내지 6개의 CH2CH2O 유닛을 가진다. 글리세롤 및 상기 PEG-시약 간의 반응은 연결기가 존재하거나 없어도 발생할 수 있다. 바람직한 PEG-시약은 히드록실, 아미노, 카르복실, 이소시아네이트, 티올, 카보네이트 작용기를 가진다. 상기 독창적인 발명의 실시예에 사용되는 특히 바람직한 PEG-시약은 PEG-토실레이트, PEG-메실레이트 및 숙시닐-PEG를 포함한다. 상기 글리세롤 및 PEG-시약 간의 반응후에, 상기 보호기를 제거한다.
0.1mol의 3-모노메톡시도데카에틸렌글리콜-1,2-디히드록실-글리세롤을 250mL의 클로로폼 내의 질소하에서 연속적으로 교반했다. 0.21mol의 올레오일클로라이드를 250mL의 클로로폼으로 용해하고 디히드록시아세톤의 균일한 혼합물에 첨가한 후에, 15mL의 무수 피리딘을 첨가했다. 상기 반응을 실온에서 연속적으로 교반하면서 30분 동안 진행했다. 상기 혼합물을 균일화시키고 상기 혼합물에서 올레오일클로라이드가 더 이상 검출되지 않을 때 반응을 완료했다. 다량의 용매를 진공 제거했다. 잔류물을 메틸렌클로라이드로 희석하고 동량의 소금물을 첨가했다. 유기층을 수집했고 수용액상을 메틸렌클로라이드로 반복해서 추출하고 상기 유기층을 혼합하고 물(50mL)로 다시 세정하고 황산 나트륨으로 건조하고 추가 증발시켜서 투명기름(화학 구조 17)을 수득(70% 내지 80% 수율)했다. 이것의 액상 크로마토그래프-질량 분석(LC-MS) 크로마토그램을 도 1에 제시한다: (a) 샘플을 4.6×50mm Inertsil C8 칼럼에 주입하고 테트라히드로푸란 및 H2O(4/6,v/v)의 혼합물 하에서 용출하며, 질량 분석법으로 모니터링했고, (b) 1.45 분에 용출된 물질의 MS 스펙트럼이며, [M-1]+은 모화합물(parent compound)의 이온이다.
Figure pct00039
실시예 3. 1,3-디올레오일-rac-2-모노메톡시도데카에틸렌글리콜(mPEG-12)-글리세롤의 합성
이러한 합성의 일반적인 단계를 이하 반응식으로 제시한다(반응식9):
Figure pct00040
질소 하에서 0.033mol의 디히드록시아세톤을 150mL의 클로로폼 중에 계속해서 교반했다. 0.06mol의 올레오일클로라이드를 150mL의 클로로폼으로 용해하고 이러한 균일한 디히드록시아세톤 혼합물에 첨가하고, 이어서 10mL의 무수 피리딘을 첨가했다. 계속적인 교반하에서 반응을 실온에서 30분 동안 진행했다. 상기 혼합물을 균일화시키고 상기 혼합물에서 올레오일클로라이드가 더 이상 검출되지 않을 때 반응을 완료했다. 다량의 용매를 진공 제거했다. 잔류물을 물로 세정한 다음 에틸아세테이트로 추출했다. 상기 수용액상을 에틸아세테이트로 반복해서 추출하고 상기 유기층을 혼합하고 물로 다시 세정하고 황산 나트륨으로 건조하고 증발시켰다. 수득한 오일 산물을 메탄올로 재결정화하여 융점이 43℃ 내지 44℃인 3-(옥타덱-10-에노일옥시)-2-옥소프로필옥타덱-9-에노에이트(75% 내지 80% 수율)를 수득했다.
상기 1,3-디올레이트(0.02mol)을 150mL의 테트라히드로푸란(THF) 및 10mL의 물로 용해시켰다. 상기 균일한 용액을 빙욕에서 5℃로 냉각시켰다. 수소화붕소나트륨(THF 내 0.026mol) 용액을 소량 첨가했다. 약 1mL의 빙초산을 첨가함으로써 30분 후에 보로하이드라이드의 초과량을 제거하고, 이어서 상기 용액을 클로로폼으로 희석하고 황산 마그네슘으로 건조했다. 융점이 20℃ 내지 22℃이고 2-히드록시-3-(옥타덱-10-에노일옥시)프로필 옥타넥-9-에노에이트(80% 내지 90% 수율)의 침상형 결정으로 부분 결정화된 오일을 취득했다.
상기 중간체로부터, 1,3-디올레오일-rac-글리세롤-rac-2-모노메톡시-도데카에틸렌글리콜(mPEG-12)-글리세롤(화학 구조 18)을 반응 후에 제조했고 실시예 1 및 실시예 2에 설명된 바와 같이 실행했다.
Figure pct00041
실시예 4: 1,2-디미리스토일-rac-3-도데카프로필렌글리콜(PPG-12)-글리세롤
이러한 합성의 일반적인 단계를 이하 반응식에 제시한다(반응식10):
Figure pct00042
1.5mol의 테트라프로필렌글리콜을 0.23mol의 피리딘과 혼합하고 45℃ 내지 50℃로 가열하고 0.15mol의 트리틸클로라이드를 첨가했다. 상기 반응을 계속적인 교반하에서 밤새도록(약 16시간) 수행한 뒤, 실온으로 냉각하고 톨루엔으로 추출했다. 상기 추출물을 물로 세정한 다음 헥센으로 추출하고 MgSO4로 건조했다. 상기 용매를 진공 제거했다. 밝은 황색의 오일형 Tr-테트라프로필렌글리콜을 얻었다(75% 내지 85% 수율).
0.1mol의 Tr-테트라프로필렌글리콜 및 0.101mol의 p-톨루엔술포닐클로라이드를 100mL의 메틸렌클로라이드에 혼합했다. 상기 균일한 혼합물을 드라이아이스 아세톤욕 내에서 0℃로 냉각하고 반응 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 격렬한 교반하에서 45g의 KOH를 소량 첨가했다. 상기 반응을 0℃에서 4시간 동안 계속적인 교반하에서 완료했다. 상기 조생성물을 100mL의 메틸렌클로라이드로 희석한 다음, 120mL의 냉각수를 첨가했다. 유기층을 수집했고 수용액상을 메틸렌클로라이드(2×50mL)로 추출했다. 혼합된 유기층을 물(100mL)로 세정하고 MgSO4로 건조했다. 용매를 진공 제거하고 투명기름을 수득(85% 내지 95% 수율)했다.
3목형 플라스크에 1,2-이소프로필리덴-rac-글리세롤(0.1mol), NaH(0.4mol) 및 건조 THF(200mL)를 채웠다. Tr-테트라프로필렌글리콜토실레이트(0.1mol)의 건조 THF 용액(125mL)을 실온에서 상기 혼합물에 적상으로 첨가했다. 상기 혼합물을 24시간 동안 환류한 다음 실온으로 냉각했다. 냉각 메탄올을 상기 반응 혼합물에 첨가하여 초과 NaH를 퀀칭했다. 상기 용매를 증발시키고 상기 조생성물을 5%의 HCl(w/v) 및 CH2Cl2로 추출했다. 상기 조생성물을 더 정제하지 않았지만 다음 합성 단계에서 직접적으로 취해졌다.
상기 조생성물을 내고압성 유리플라스크에 옮기고 200mL의 건조 메틸렌클로라이드 및 탄소 상 10%팔라듐(1.5g)을 첨가했다. 30℃ 대기에서 약 60분 동안 순수 수소를 제거함으로써 가수소분해를 실행하여, 상기 헥사에틸렌글리콜 상의 보호기를 제거했다. 상기 수소를 질소로 대체한 후, 용액을 4℃ 내지 6℃로 냉각하고 여과하여 촉매를 제거했다. 용매를 증발시켜 95% 내지 98%의 최종 산물을 수득했다.
3목형 플라스크에 3-테트라프로필렌-글리콜-1,2-이소프로필리덴-rac-글리세롤(0.1mol), NaH(0.4mol) 및 건조 THF(500mL)를 혼합했다. Tr-테트라프로필렌글리콜토실레이트(0.11mmol)의 건조 THF 용액(200mL)을 실온에서 혼합물에 적상으로 첨가했다. 상기 혼합물을 24시간 동안 환류한 다음 실온으로 냉각했다. 냉각 메탄올을 상기 반응 혼합물에 첨가하여 초과 NaH를 퀀칭했다. 용매를 증발시키고 상기 조생성물을 5%의 HCl(w/v) 및 CH2Cl2로 추출했다.
상기 에테르화 단계를 한번 더 반복했다. 용매를 증발시키고 겔 투과 크로마토그래피에 의해 추가 정제하여 약 80%의 3-트리틸-도데카프로필렌글리콜-1,2-이소프로필리덴글리세롤을 수득했다.
10g의 3-도데카프로필렌글리콜-1,2-이소프로필리덴글리세롤을 산성 메탄올 수용액(180mL MeOH: 20mL, 1M HCl)에서 3시간 동안 교반하여 이소프로필리딘 보호기를 제거했다. 혼합물을 탄산수소나트륨으로 중화하고 클로로폼(3×150mL)에서 추출하고 황산나트륨으로 건조했다. 상기 용매의 여과 및 증발로 산물인 3-트리틸-도데카프로필렌글리콜-1,2-디히드록실-글리세롤(화학 구조 19)을 수득(75% 내지 80% 수율)했다.
Figure pct00043
상기 PEG쇄 연장 반응에서, 상기 출발 물질인 PEG시약은 1개 내지 6개의 CH2(CH3)CH2O 유닛을 포함하는 것이 바람직하고, 3개 내지 6개의 CH2CH2O 유닛이 보다 바람직하고, 4개 내지 6개의 CH2CH2O 유닛이 더욱 바람직하다. 글리세롤과 PEG-시약 간의 반응은 연결기가 존재하거나 없어도 발생할 수 있다. 이러한 실시예에서, 바람직한 PEG-시약은 히드록실, 아미노, 카르복실, 이소시아네이트, 티올, 카보네이트 작용기를 가진다. 상기 독창적인 발명의 실시예에 사용되는 특히 바람직한 PEG-시약은 PEG-토실레이트, PEG-메실레이트 및 숙시닐-PEG를 포함한다. 상기 글리세롤 및 PEG-시약 간의 반응 후에, 상기 보호기를 제거한다.
질소하에서 0.1mol의 3-트리틸에도데카프로필렌글리콜-1,2-디히드록시-글리세롤을 250mL의 클로로폼 에서 계속해서 교반했다. 0.21mol의 미리스틱클로라이드를 250mL의 클로로폼으로 용해하고 이러한 균일한 디히드록시아세톤 혼합물에 첨가하고 이어서 15mL의 무수 피리딘을 첨가했다. 계속적인 교반하에서 실온에서 30분 동안 반응을 진행했다. 상기 혼합물을 균일화시키고 상기 혼합물에서 올레오일클로라이드가 더 이상 검출되지 않을 때 반응을 완료했다. 다량의 용매를 진공 제거하고 추가적인 정제화 없이 다음 단계로 이동했다.
상기 조생성물을 내고압성 유리플라스크에 옮기고 200mL의 건조 메틸렌클로라이드 및 10%의 팔라듐을 탄소(1.5g)에 첨가했다. 30℃ 대기에서 약 60분 동안 순수 수소를 제거함으로써 수소분해를 실행하여 상기 헥사에틸렌글리콜 상의 보호기를 제거했다. 상기 수소를 질소로 대체한 후, 용액을 4℃ 내지 6℃로 냉각하고 여과하여 촉매를 제거했다. 용매를 증발시켜 95% 내지 98%의 최종 산물을 수득했다.
상기 잔류물을 메틸렌클로라이드로 희석하고 동량의 소금물을 첨가했다. 유기층을 수집했고 수용액상을 메틸렌클로라이드로 반복해서 추출하고 상기 유기층을 혼합하고 물(50mL)로 다시 세정하고 황산 나트륨으로 건조하고 추가로 증발시켜서 유기상 산물(화학 구조 20)을 수득(70% 내지 85%)했다.
Figure pct00044
예를 들면, 폴리머쇄 연장 반응에서 출발 시약은 메틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 또는 1개 내지 6개의 반복 유닛으로 이루어진, 보다 바람직하게는 3개 내지 6개의 반복 유닛을 갖는, 더욱 바람직하게는 4개 내지 6개의 반복 유닛을 갖는 이들의 혼합물일 수 있다. 글리세롤과 상기 시약 간의 반응은 연결기가 존재하거나 없어도 발생할 수 있다. 이러한 실시예에서, 바람직한 중합 시약은 히드록실, 아미노, 카르복실, 티올, 이소시아네이트, 카보네이트 작용기를 가진다. 상기 독창적인 발명의 실시예에 사용되는 특히 바람직한 시약은 토실레이트, 메실레이트 및 숙시닐 활성 중간체를 포함한다. 상기 글리세롤 및 중합-시약 간의 반응 후에, 상기 보호기를 제거한다. 이러한 실시예 중 하나를 화학 구조 21에 제시한다.
Figure pct00045
실시예 5: 고체 제형 조성물
액상 PEG-지질 컨쥬게이트를 프로펠러형 혼합 블레이드가 탑재된 스테인레스 스틸 용기에 첨가했다. 상기 약물을 계속해서 혼합하면서 첨가했다. 상기 약물이 상기 지질 내로 분산되어 보일 때까지 55℃ 내지 65℃의 온도에서 혼합을 계속한다. 분리된 용기에서, 융점이 약 30℃를 초과하는 PEG-지질 컨쥬게이트를 가열하여 용융시키거나 에탄올에 용해시키고, 혼합하며 상기 스테인레스 스틸 용기에 첨가했다. 용액이 충분히 균일한 용액이 될 때까지 혼합을 계속한다. 필요에 따라서는 에탄올을 진공으로 제거했다. 상기 용액이 따뜻해졌을 때, 용액을 캡슐쉘 또는 사전에 지정된 포장 형태(몰드)에 충전했다. 크림형 혼합물이 냉각되어 굳어질 때까지 충전된 캡슐 또는 몰드를 냉장(2℃ 내지 8℃)에 둔다. 샘플 제형을 표 5에 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00046
상기 지질 컨쥬게이트는 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH 또는 GPBH일 수 있다. 상기 고체 지질 컨쥬게이트는 GDS-12, DSB-12, GDO-23, GDO-27, GDM-23, GDM-27 및 GDS-23일 수 있다. 상기 약물은 모다피닐, 니페디핀, 에소메프라졸, 라파마이신 또는 다른 활성제일 수 있다.
실시예 6: 고체 제형 조성물
액상 PEG-지질 컨쥬게이트(15℃ 미만의 융점을 가짐)를 프로펠러형 혼합 블레이드가 탑재된 스테인레스 스틸 용기에 첨가했다. 상기 약물을 계속해서 혼합하면서 첨가했다. 상기 약물이 상기 지질 내로 분산되어 보일 때까지 55℃ 내지 65℃의 온도에서 혼합을 계속했다. 분리된 용기에서, TPGS-VE를 에탄올에 용해했고, 혼합하며 상기 스테인레스 스틸 용기에 첨가했다. 용액이 충분히 균일한 용액이 될 때까지 혼합을 계속한다. 에탄올을 진공으로 제거했다. 상기 용액이 따뜻해졌을 때, 용액을 캡슐 쉘 또는 사전에 지정된 포장 형태(몰드)에 충전했다. 상기 충전된 캡슐 또는 몰드를 냉장(2℃ 내지 8℃)에 둔다. 크림형 혼합물을 냉각시켜 굳게 한다. 샘플 제형을 표 6에 나타낸다.
[표 6]
Figure pct00047
상기 지질 컨쥬게이트는 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH 또는 GPBH일 수 있다. 상기 약물은 모다피닐, 니페디핀, 에소메프라졸, 라파마이신 또는 다른 활성제일 수 있다.
실시예 7: 내복액 조성물
PEG-지질을 혼합 프로펠러가 탑재된 용기에 첨가했다. 상기 약물을 계속해서 혼합하면서 첨가했다. 상기 약물이 상기 지질 내로 분산되어 보일 때까지 혼합을 계속했다. 미리 용해된 부형제를 충분히 혼합하면서 상기 용기에 천천히 첨가했다. 용액이 충분히 균일한 용액이 될 때까지 혼합을 계속했다. 샘플 제형을 표 7에 나타낸다.
[표 7]
Figure pct00048
상기 지질은 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GPBH 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 수산화 나트륨은 정제수 중의 10중량% 용액을 제조하는데 사용된다. 목표 pH는 4.0 내지 7.0이다. 필요에 따라서, NaOH는 pH를 조절하는데 사용된다. 상기 약물은 모다피닐, 니페디핀, 에소메프라졸, 라파마이신 또는 다른 활성제일 수 있다.
실시예 8: 사이클로스포린 안과 조성물
PEG-지질을 혼합 프로펠러가 탑재된 용기에 첨가했다. 상기 사이클로스포린 약물을 계속해서 혼합하면서 첨가했다. 상기 약물이 상기 지질 내로 분산되어 보일 때까지 혼합을 계속했다. 기용해된 부형제 및 멸균 정제수를 충분히 혼합하면서 상기 용기에 천천히 첨가했다. 용액이 충분히 균일한 용액이 될 때까지 혼합을 계속했다. 샘플 제형을 표 8에 나타낸다.
[표 8]
Figure pct00049
상기 지질은 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GPBH 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 수산화 나트륨은 정제수 중의 10중량% 용액을 제조하는데 사용된다. 목표 pH는 6.0 내지 7.4이다. 필요에 따라서, NaOH는 pH를 조절하는데 사용된다.
실시예 9: 주사 용액 조성물
목표 pH 범위가 6.0 내지 8.0인 것을 제외하고는 상기 주사 용액을 실시예 7과 같이 제조했다. 샘플 제형을 표 9에 나타낸다.
[표 9]
Figure pct00050
상기 지질은 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GPBH 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 수산화 나트륨은 정제수 중의 10중량% 용액을 제조하는데 사용된다. 목표 pH는 6.5 내지 7.4이다. 필요에 따라서 NaOH는 pH를 조절하는데 사용된다. 상기 약물은 포사코나졸, 보리코나졸, 이트라코나졸, 라파마이신, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 니페디핀, 파클리탁셀, 도세탁셀, 게피티닙, 프로포폴, 리팜핀, 디아제팜, 넬피나비르 또는 다른 활성제를 포함하는 트리아졸일 수 있다.
실시예 10: 약물 동역학(Pharmacokinetic) 프로파일 및 이트라코나졸 제형의 생물학적 이용가능성
마우스 세 마리의 군을 본 연구에 사용했다. 제조된 헤파린 처리한 마우스 플라즈마 샘플에게 일반적인 일 회분의 IV 주입 후 0시간, 0.08시간, 0.25시간, 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 16시간 및 24시간에 또는 경구로 이트라코나졸을 투여한 후 0시간, 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 16시간 및 24시간에 약물 동역학(PK)를 실시했다. HPLC-MS/MS 방법을 이용하여 샘플을 분석했다. 약물 각각의 레벨을 결정하기 위해서, 먼저 상기 약물을 샘플 기처리한 플라즈마로부터 분리시켰다. 아세토니트릴을 사용하여 샘플 중의 단백질을 제거하였다. 이어서, 이소크라틱(isocratic) HPLC-MS/MS 방법을 사용하여 임의의 잠재적 간섭으로부터 상기 약물을 분리했다. 약물 레벨을 멀티플 리액션 모니터링(Multiple Reaction Mornitoring) 방식을 이용하는 MS 검출로 측정했다. 구분되는 분석 모델로 WinNonlin 프로그램(5.2 버젼, Pharsight)을 이용하여 PK 데이타를 분석했다.
도 2는 (1) 10mM의 인산 나트륨 버퍼(pH 7.4) 내의 GDO-12(약물 대 지질비 1:10) 및 (2) 10mM의 인산 나트륨 버퍼(pH 7.4) 내의 10% 크레모포-5% MeOH를 포함한 이트라코나졸 제형의 마우스 PK 프로파일을 제시한다. 상기 약물을 정맥내 투여했고 투여량은 20mg/kg이었다. AUC는 상기 DAG-PEG 제형(1) 및 상업적 산물(2) 각각에 대하여 5441μg?hr/mL 및 986μg?hr/mL였다.
도 3은 (1) 10mM의 인산 나트륨 버퍼(pH 7.4) 내의 GDO-12(약물 대 지질비 1:10) 및 (2) 10mM의 인산 나트륨 버퍼(pH 7.4) 내의 10% 크레모포-5% MeOH를 포함한 이트라코나졸 제형의 마우스 PK 프로파일을 제시한다. 상기 약물을 경구 투여했고 투여량은 20mg/kg이었다. 상대적인 이용가능성(AUC0 ~24시간에 기초)은 PEG-DAG 제형(1) 및 상업적 산물(2) 각각에 대하여 63% 및 45%였다.
실시예 11: 국부 크림 조성물
PEG-지질을 프로펠러형 혼합 블레이드가 탑재된 스테인레스 스틸 용기에 첨가했다. 상기 약물을 계속해서 혼합하면서 첨가했다. 상기 약물이 지질 내로 분산되어 보일 때까지 60℃ 내지 65℃의 온도에서 혼합을 계속했다. 유기산, 콜레스테롤 및 글리세린을 혼합하여 첨가했다. 에탄올 및 에틸옥시디글리콜을 혼합하여 첨가했다. 최종적으로 카르보폴 ETD 2020, 정제수 및 트리에틸아민을 혼합하여 첨가했다. 균일한 크림이 얻어질 때까지 충분히 혼합을 계속한다. 상기 제형을 표 10에 나타낸다.
[표 10]
Figure pct00051
Figure pct00052
상기 지질은 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GPBH, GDS-12 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 유기산은 락트산, 피루브산 또는 글리콜산일 수 있다. 필요에 따라서 NaOH는 pH를 조절하는데 사용된다. 목표 pH는 3.5 내지 7.0이었다. 상기 약물은 이트라코나졸, 포사코나졸, 보리코나졸, 이쿠아코나졸, 테르비나핀, 아모롤핀, 나프티핀, 부테나핀, 벤조산, 시클로피록스, 톨나프테이트, 운데실렌산, 플루사이토사인, 그리세오풀빈, 할로프로진, 소듐비카르보네이트 또는 풀루오시놀론 아세토나이드일 수 있다.
실시예 12: 국부 용액 조성물
상기 국부 용액을 표 11과 같이 제조했고, 샘플 제형을 표 11에 나타내었다.
[표 11]
Figure pct00053
상기 지질은 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GPBH 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 유기산은 락트산, 피루브산 또는 글리콜산일 수 있다. 필요에 따라서 NaOH는 pH를 조절하는데 사용된다. 목표 pH는 3.5 내지 7.0이었다. 상기 약물은 이트라코나졸, 포사코나졸, 보리코나졸, 이쿠아코나졸, 테르비나핀, 아모롤핀, 나프티핀, 부테나핀, 벤조산, 시클로피록스, 톨나프테이트, 운데실렌산, 플루사이토사인, 그리세오풀빈, 할로프로진, 소듐비카르보네이트 또는 풀루오시놀론 아세토나이드일 수 있다.
실시예 13: 아지트로마이신 안과 조성물
PEG-지질을 혼합 프로펠러가 탑재된 용기에 첨가했다. 상기 아지트로마이신 약물을 계속해서 혼합하면서 첨가했다. 상기 약물이 지질 내로 분산되어 보일 때까지 혼합을 계속했다. 기-용해된 부형제 및 멸균한 정제수를 충분히 혼합하면서 상기 용기에 천천히 첨가했다. 용액이 충분히 균일한 용액이 될 때까지 혼합을 계속했다. 샘플 제형을 표 12에 나타낸다.
[표 12]
Figure pct00054
상기 지질은 GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GPBH 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 필요에 따라서 NaOH는 정제수 중의 10중량% 용액을 제조하는데 사용된다. 목표 pH는 7.0 내지 7.8이다. 필요에 따라서 NaOH는 pH를 조절하는데 사용된다.
아지트로마이신의 바람직한 농도는 0.5% 내지 3%이고, 보다 바람직하게는 0.5% 내지 2%이고, 가장 바람직하게는 1% 내지 2%이다. PEG-지질 대 상기 약물(PEG-지질/사이클로스포린)의 바람직한 비율은 1 대 20이고, 보다 바람직하게는 3 대 15이고, 가장 바람직하게는 5 대 10이다.

Claims (16)

  1. PEG-지질 컨쥬게이트를 포함하는 화학 조성물로서, 상기 PEG-지질 컨쥬게이트는:
    글리세롤 백본(backbone);
    상기 글리세롤 백본에 공유결합된 지질군; 및
    상기 글리세롤 백본에 공유결합된 PEG쇄를 포함하되,
    상기 PEG쇄는 약 200Da 내지 1,200Da의 분자량을 갖고, 조성물 중의 약 75%를 초과하는 컨쥬게이트 분자의 PEG쇄는 동일한 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물 중의 약 90%를 초과하는 컨쥬게이트 분자의 PEG쇄는 동일한 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 PEG쇄는 약 600Da을 초과하는 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 지질은 알킬기인 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 알킬기는 표 1 및 표 2의 알킬기들에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 글리세롤 백본에 공유결합된 제 2 지질을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 제 2 지질은 알킬기인 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 알킬기는 표 1 및 표 2의 알킬기들에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  9. 제 6 항에 있어서,
    상기 지질은 담즙산인 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  10. 제 7 항에 있어서,
    상기 담즙산은 표 4의 담즙산들에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  11. 제 6 항에 있어서,
    상기 지질은 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  12. 제 1 항에 있어서,
    상기 글리세롤 백본과 상기 PEG쇄 사이의 연결기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  13. 제 12 항에 있어서,
    상기 연결기는 -S-, -O-, -N-, -OCOO- 및 표 3의 연결기들로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  14. 제 1 항에 있어서,
    상기 글리세롤 백본에 공유결합된 제 2 PEG쇄를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  15. 제 1 항에 있어서,
    상기 글리세롤 백본과 상기 PEG쇄 사이의 연결체는 -O-C(O)-, -O-, -S- 및 -NH-C(O)-로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
  16. 제 1 항에 있어서,
    상기 글리세롤 백본과 상기 PEG쇄 사이의 연결체는 표 3에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화학 조성물.
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