CN114306632B

CN114306632B - 一种与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药、制备及应用

Info

Publication number: CN114306632B
Application number: CN202210003545.2A
Authority: CN
Inventors: 余家会; 韦清瑜; 吕伟; 何洋; 姜星
Original assignee: East China Normal University
Current assignee: East China Normal University
Priority date: 2022-01-04
Filing date: 2022-01-04
Publication date: 2023-11-17
Anticipated expiration: 2042-01-04
Also published as: CN114306632A

Abstract

本发明公开了一种与人血清白蛋白非共价结合的7‑乙基‑10‑羟基喜树碱衍生物前药、制备及应用。该前药具有式Ⅰ结构，分别以长链脂肪二酸的单羧基修饰7‑乙基‑10‑羟基喜树碱，或以长链脂肪二酸的单羧基甘氨酸衍生物修饰7‑乙基‑10‑羟基喜树碱制备。该前药中的长链脂肪酸可与人血清白蛋白进行非共价结合，形成超分子药物传递体系。该超分子前药在肿瘤EPR效应以及人血清白蛋白相关受体的介导下，可增加药物在肿瘤中的蓄积，减少毒副作用，提高抗肿瘤效果。

Description

一种与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药、制备及应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)衍生物前药、制备及应用。

背景技术

癌症一直是严重威胁人类健康的恶性疾病，随着科技的发展，在除了化疗放疗等传统疗法外，还发展了免疫疗法、光动力光热疗法，但其目前还处于研究阶段，所以，人们仍然将重点放于传统的应用最多最广泛的化学疗法。传统化疗，毒性大，肿瘤选择性低，药物理化性质也较差，限制了其临床应用，所以，对于低毒、具有肿瘤靶向性的新型化疗药物的需求不断增大，也成为了现在的主要开发趋势。

近年来，一些新型的药物载体被开发出来，作为化疗药物的运输载体，可以明显改善药物的理化性质，降低药物毒性，提高肿瘤靶向性，增加药物的抗肿瘤效力。除了像脂质体、壳聚糖等外源的药物载体可形成胶束、纳米粒子外，人血清白蛋白(HSA)被发现是一类具有很大潜力的药物载体。

人血清白蛋白(HSA)是人体中含量最多的一类蛋白质，浓度达35-50g/L，其本身就是很好的内源性蛋白质，减少了免疫原性，半衰期长达19天，而且HSA在体内是很多物质的天然载体，可运输一些脂肪酸、氨基酸、代谢物质等。HSA的三级结构呈心形，分为三个域，每个域又分为两个子域。其结构中有许多裸露的氨基酸残基以及折叠形成的疏水空腔，正是这些疏水空腔可以携带疏水分子，可逆结合形成超分子，改善药物性质。这些超分子前药就可以通过肿瘤中EPR效应以及一些白蛋白的特异性受体从而提高肿瘤蓄积。

7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)为天然药物喜树碱的活性衍生物，是上市药物伊立替康盐酸盐的活性代谢物质。其作用机理与喜树碱一致，抑制拓扑异构酶1，从而抑制DNA复制，导致细胞凋亡。但是，SN38的毒性比喜树碱小很多，而且抗肿瘤效力更高，但是SN38溶解性极低，无靶向性，极大的限制了临床应用。所以，基于上述，要开发出一种新的改善药物理化性质、降低毒性的超分子药物体系，从而提高药物应用，显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是为了改善小分子药物性质，提高肿瘤效力而提出的一种与人血清白蛋白非共价结合的SN38衍生物前药以及制备和应用。小分子药物通过连接的长链脂肪酸与人血清白蛋白进行非共价结合。静脉注射后，与白蛋白疏水作用结合形成超分子载药体系，增加药物半衰期即延长体内循环，提高抗肿瘤疗效。

本发明的第二个目的在于提供上述前药的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供上述药物的应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

一种与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药，具有通式Ⅰ所示结构：

其中，R₁为H或HOOC-(CH₂)_n-CO-；n代表重复单元次数；n＝4、14、16或18；

X₁为H、-CO-(CH₂)_n1-NH-、-CO-C(CH3)₂-NH-、[-CO-(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-]_n2、[-CO-CH₂-O-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-NH-]_n3和[-O-(CH2)2-]_n4O-中的任意0-3种；n₁＝1或2，n₂＝1或2，n₃＝2、3或4，n₄＝2、4、6或9；其中n₁、n₂、n₃和n₄代表重复单元次数；

R₂为HOOC-(CH₂)_n-CO-；n代表重复单元次数；n＝4、14、16或18。

所述的与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药，具有通式Ⅰ所示结构：

其中R₁为H或HOOC-(CH₂)_n-CO-；n＝16；

X₁为H、-CO-(CH₂)_n1-NH-或-CO-(CH₂)_n1-NH-和[-CO-CH₂-O-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-NH-]_n3和[-CO-(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-]_n2；n₁＝1；

n₂＝1；n₃＝2

R₂为HOOC-(CH₂)_n-CO-；n＝16。

一种上述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药的制备方法，特点是以长链脂肪二酸单羧基修饰7-乙基-10-羟基喜树碱的C-10位羟基，其制备过程如下式所示：

反应步骤包括：

a)酯化反应：氮气保护下，7-乙基-10-羟基喜树碱、十八烷二酸单叔丁酯、1-(3-二甲氨基丙基)3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)溶于溶剂中，反应4小时后，且反应体系澄清，得到化合物1；所述7-乙基-10-羟基喜树碱与十八烷二酸单叔丁酯摩尔比为1∶1.25；7-乙基-10-羟基喜树碱与EDCI摩尔比为1∶2.7；7-乙基-10-羟基喜树碱与DMAP摩尔比为1∶0.23；所述溶剂为无水二氯甲烷；

b)脱保护：化合物1溶于有机溶剂中，加入酸溶液，脱保护得到产物，反应时间为2小时，所述酸溶液为TFA∶有机溶剂体积比为3∶10的溶液；所述有机溶剂为二氯甲烷。

一种上述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药的制备方法，特点是以长链脂肪二酸单羧基修饰的7-乙基-10-羟基喜树碱的C-20位羟基，其制备过程如下式所示：

反应步骤包括：

a)BOC保护：氮气保护下，7-乙基-10-羟基喜树碱、Boc酸酐(Boc₂O)、吡啶溶于溶剂中，室温过夜得到化合物2-1，7-乙基-10-羟基喜树碱与Boc₂O摩尔比为1∶1.3；7-乙基-10-羟基喜树碱与吡啶摩尔比为1∶29；所述溶剂为无水二氯甲烷；

b)酯化反应：氮气保护下，化合物2-1、十八烷二酸单叔丁酯、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、EDCI和DMAP溶于溶剂中，加热过夜得到化合物2-2；所述化合物2-1与十八烷二酸单叔丁酯摩尔比为1∶1.5；化合物2-1与DIPEA摩尔比为1∶0.7；化合物2-1与EDCI摩尔比为1∶3.5；化合物2-1与DMAP摩尔比为1∶0.5；所述加热温度为40℃，所述溶剂为无水二氯甲烷；

c)脱保护：化合物2-2溶于有机溶剂中，加入酸溶液，脱保护得到终产物，反应时间为2小时，所述酸溶液为TFA∶有机溶剂体积比为1∶5的溶液；所述有机溶剂为二氯甲烷。

一种上述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药的制备方法，特点是以长链脂肪二酸的单羧基甘氨酸衍生物修饰的SN38的C-20位羟基，其制备过程如下式所示：

反应步骤包括：

a)BOC保护：氮气保护下，7-乙基-10-羟基喜树碱、Boc₂O、吡啶溶于溶剂中，室温过夜得到化合物2-1；所述7-乙基-10-羟基喜树碱与Boc₂O摩尔比为1∶1.3；7-乙基-10-羟基喜树碱与吡啶摩尔比为1∶29；所述溶剂为无水二氯甲烷；

b)酯化反应：氮气保护下，化合物2-1、N-Boc-甘氨酸、EDCI和DMAP溶于溶剂中，室温过夜得到化合物3-1；所述化合物2-1与N-Boc-甘氨酸摩尔比为1∶2，化合物2-1与EDCI摩尔比为1∶1.2，化合物2-1与DMAP摩尔比为1∶1.5；所述溶剂为无水二氯甲烷；

c)脱保护：化合物3-1溶于有机溶剂中，加入酸溶液，脱保护得到化合物3-2，反应时间为2小时，所述酸溶液为TFA∶有机溶剂体积比为1∶5的溶液；所述有机溶剂为二氯甲烷；

d)酰胺化反应：氮气保护下，室温将十八烷二酸单叔丁酯、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(HATU)溶于溶剂中，室温搅拌三或四个小时，再依次加入化合物3-2、DIEA，室温反应过夜得到化合物3-3；所述化合物3-2与十八烷二酸单叔丁酯摩尔比为1∶1，化合物3-2与HATU摩尔比为1∶1.2，化合物3-2与DIEA摩尔比1∶2.8；所述有机溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺；所述搅拌时间为3小时；

e)脱保护：化合物3-3溶于有机溶剂中，加入酸溶液，脱保护得到终产物，反应时间为2小时，所述酸溶液为TFA∶有机溶剂体积比为1∶5的溶液；所述有机溶剂为二氯甲烷。

一种药物组合物，包括上述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药及其药学上可接受的大分子载体：所述大分子载体为人血清白蛋白及脂质体。

一种上述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药在制备人血清白蛋白非共价结合型超分子抗肿瘤药物中的应用。

本发明具有以下有益效果：

本发明合成一系列SN38衍生物前药，该系列前药由长链脂肪二酸的单羧基修饰SN38，或以长链脂肪二酸的单羧基甘氨酸衍生物修饰SN38而制备得到，该前药中的长链脂肪酸可以与人血清白蛋白进行非共价结合，通过肿瘤EPR效应以及白蛋白的相关受体进入肿瘤间质，实现药物蓄积。经实验证明，本发明前药可以与血清白蛋白进行非共价结合，体内半衰期有一定的延长，与SN38相比，理化性质也有一定的提高，抗肿瘤作用更加有效，副作用更小。

附图说明

图1为实施例的前药在PBS中的稳定性图；

图2为实施例的前药与小鼠血浆中白蛋白的体外结合荧光图；

图3为本发明实施例的前药在小鼠血浆中的稳定性曲线图。

具体实施方式

结合以下具体实施例和附图，本发明作进一步的详细说明，实施例不构成对本发明的限制。

实施例1

化合物10-C18-SN38的合成

化合物1的制备：

氮气保护条件下，0.5g(1.27mmol)SN38、0.59g(1.59mmol)十八烷二酸单叔丁酯、0.66g(3.44mmol)EDCI与0.04g(0.29mmol)DMAP溶于15mL无水二氯甲烷中，反应4小时。加入15mL二氯甲烷稀释，饱和氯化铵(NH₄Cl)溶液(15mL)、水(15mL)、饱和食盐水(15mL)洗，无水硫酸钠干燥，旋干。利用硅胶柱层析纯化，流动相为二氯烷：甲醇＝200：1-90：1。收集纯品为化合物1，旋干得0.48g淡黄色固体，收率为51.1％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝9.1Hz,1H),7.79(s,1H),7.66(d,J＝9.1Hz,1H),7.53(s,1H),5.74(s,2H),5.24(s,2H),3.14(q,J＝7.3Hz,2H),2.66(m,2H),2.20(m,2H),1.98–1.87(m,2H),1.85–1.80(m,2H),1.61–1.53(m,2H),1.44(s,9H),1.40-1.32(m,27H),1.03(t,J＝7.1Hz,3H).

化合物10-C18-SN38的制备：

将0.48g(0.64mmol)化合物1加入到50mL的单口瓶内，溶于30％三氟醋酸(3mL)/二氯甲烷(10mL)，室温下搅拌2小时。减压旋干，用无水乙醚重沉淀进行纯化，抽滤，得到化合物10-C18-SN38黄色固体0.33g，收率75％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.18(d,J＝9.1Hz,1H),7.95(s,1H),7.62(d,J＝9.1Hz,1H),7.32(s,1H),5.43(s,2H),5.30(s,2H),3.21–3.13(m,2H),2.66(t,J＝7.2Hz,2H),2.17(t,J＝7.2Hz,2H),1.68(dd,J＝14.1,6.9Hz,2H),1.46(s,4H),1.35–1.18(m,27H),0.89(t,J＝7.1Hz,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ174.95,172.89,172.38,157.26,152.34,150.49,149.67,146.93,146.32,145.70,131.70,128.93,127.51,126.09,119.45,115.63,97.11,72.84,65.73,49.98,34.12,30.78,29.51,29.12,24.95,24.71,22.71,14.27,8.22.

实施例2

化合物20-C18-SN38的合成

化合物2-1的制备：

氮气保护条件下，1.51g(3.84mmol)SN38、1.09g(4.99mmol)Boc₂O与9mL(112.87mmol)无水吡啶溶于无水二氯甲烷22mL中，室温搅拌过夜。用0.5M稀盐酸(HCl)溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠(NaHCO₃)溶液(10mL)、饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸干，得化合物2-1黄色固体1.85g，收率98％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.24(d,J＝9.2Hz,1H),7.89(s,1H),7.66(d,J＝6.1Hz,2H),5.75(d,J＝16.3Hz,1H),5.34–5.25(m,3H),3.87(s,1H),3.16(q,J＝7.5Hz,2H),1.96–1.85(m,2H),1.62(s,9H),1.40(t,J＝7.5Hz,3H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H).

化合物2-2的制备：

氮气保护下，0.5g(1.02mmol)化合物2-1、0.56g(1.52mmol)十八烷二酸单叔丁酯、0.1g(0.74mmol)DIPEA、0.68g(3.55mmol)EDCI和0.06g(0.52mmol)DMAP溶于无水二氯甲烷中，加热至40℃过夜。减压蒸干，柱层析纯化。流动相为二氯甲烷∶甲醇＝180∶1。收集纯品，减压蒸干，得到0.81g化合物2-2，为黄色粘稠状物质，收率为94％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.99(d,J＝9.6Hz,1H),7.38(s,1H),7.41(s,1H),6.92(s,1H),5.48(s,2H),5.30(s,2H),3.01(m,2H),2.45(m,4H),2.18(m,2H),1.46(m,4H),1.23–1.18(m,46H),0.91(t,J＝7.1Hz,3H)。

化合物20-C18-SN38的制备：

将0.81g(0.96mmol)化合物2-2加入到50mL的单口瓶内，溶于20％三氟醋酸(4mL)/二氯甲烷(20mL)，室温下搅拌2小时。减压旋干，用无水乙醚重沉淀进行纯化，抽滤，得到化合物20-C18-SN38黄色固体0.55g，收率84％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.98(d,J＝8.9Hz,1H),7.39(d,J＝7.7Hz,2H),6.93(s,1H),5.48(s,2H),5.26(s,2H),3.12–3.02(m,2H),2.50–2.39(m,2H),2.17(dd,J＝14.6,7.3Hz,4H),1.59–1.44(m,4H),1.30–1.05(m,27H),0.92(t,J＝7.1Hz,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ174.96,172.46,167.77,157.30,157.07,148.96,147.39,145.91,144.10,143.24,131.93,128.73,128.34,122.84,118.39,105.21,94.22,76.07,66.77,49.91,34.12,33.62,30.70,29.46,29.12,24.93,22.74,13.81,7.99。

实施例3

化合物20-Gly-C18-SN38的合成：

化合物2-1的制备：

氮气保护条件下，1.51g(3.84mmol)SN38、1.09g(4.99mmol)Boc₂O与9mL(112.87mmol)无水吡啶溶于无水二氯甲烷22mL中，室温搅拌过夜。用0.5M HCl溶液(10mL)、饱和NaHCO₃溶液(10mL)、饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸干，得化合物2-1黄色固体1.85g，收率98％。

化合物3-1的制备：

氮气保护下，0.5g(1.02mmol)化合物2-1、0.36g(2.03mmol)N-Boc-甘氨酸、0.23g(1.22mmol)EDCI和0.19g(1.52mmol)DMAP溶于10mL无水二氯甲烷中，室温过夜。加入二氯甲烷10mL稀释，饱和NH₄Cl溶液10mL、饱和食盐水10mL洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，得到0.64g化合物3-1，收率97％，不经纯化，直接投下一步。

化合物3-2的制备：

将0.5g(0.77mmol)化合物3-1加入到50mL的单口瓶内，溶于30％三氟醋酸(6mL)/二氯甲烷(20mL)，室温下搅拌2小时。减压旋干，用无水乙醚重沉淀进行纯化，抽滤，得到化合物3-2黄色固体0.37g，收率88％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.25(d,J＝9.1Hz,1H),7.90(s,1H),7.68(d,J＝9.2Hz,1H),7.25(s,1H),5.70(s,1H),5.41(s,2H),5.24(s,2H),3.15(q,J＝7.4Hz,2H),2.30–2.14(m,2H),1.62(s,2H),1.40(m,3H),0.99(t,J＝7.4Hz,3H).

化合物3-3的制备：

氮气保护下，室温将0.32g(0.86mmol)十八烷二酸单叔丁酯、0.39g(1.0mmol)HATU溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌3小时后，再依次加入0.49g(0.86mmol)化合物3-2、0.42mL(2.41mmol)DIEA，室温反应过夜。将溶剂N,N-二甲基甲酰胺减压蒸干，加入20mL二氯甲烷稀释，用0.1M HCl溶液10mL、饱和食盐水10mL洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，柱层析纯化，流动相为二氯甲烷：甲醇＝115：1-95：1。得到化合物3-3纯品0.53g，收率77％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.25(d,J＝9.0Hz,1H),7.83(s,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),7.21(s,1H),5.70(d,J＝17.1Hz,1H),5.41(d,J＝17.2Hz,1H),5.30(s,2H),5.25(s,2H),3.15(q,J＝7.2Hz,2H),2.66(t,J＝7.4Hz,2H),2.19(dd,J＝14.8,7.4Hz,4H),1.82(m,4H),1.44(s,9H),1.26(s,27H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H).

化合物20-Gly-C18-SN38的制备：

将0.53g(0.67mmol)化合物3-3加入到50mL的单口瓶内，溶于20％三氟醋酸(4mL)/二氯甲烷(20mL)，室温下搅拌2小时。减压旋干，用无水乙醚重沉淀进行纯化，抽滤，得到化合物3-2浅黄色固体0.45g，收率91％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.34(s,1H),8.02(d,J＝8.8Hz,1H),7.42(s,1H),7.40(s,1H),7.04(s,1H),5.76(s,2H),5.49(s,2H),5.27(s,2H),3.06(t,J＝12.2Hz,2H),2.14(dt,J＝14.8,7.2Hz,6H),1.47(d,J＝6.1Hz,4H),1.29–1.14(m,28H),0.92(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例4

化合物的PBS稳定性实验

将上述化合物配制为5mM母液，用pH6.5或pH7.4的PBS缓冲液稀释成终浓度为50uM的溶液，在37℃恒温孵育。取样时间点为0-24小时，每一小时取样一次，用HPLC测定，实验结果见附图中图1。三种化合物前药在pH7.4的PBS溶液中稳定性较高。在pH6.5的PBS溶液中20-Gly-C18-SN38和10-C18-SN38在24小时内仍然保持在100％左右，而20-C18-SN38则有一定的下降，但仍然维持在50％以上。

实施例5

化合物的蛋白结合荧光

将上述化合物配制为5mM母液，用pH7.4的PBS缓冲液或小鼠血浆稀释成终浓度为5uM，2.5mL溶液，在37℃恒温孵育30min后，取样，进行荧光测定。实验结果见附图中图2。三种化合物前药在缓冲液中由于淬灭效应，荧光强度较低，而当加入小鼠血浆后，由于化合物与白蛋白的结合，使化合物荧光强度有不同程度的增加，证明了化合物与白蛋白的结合。

实施例6

化合物的小鼠血浆稳定性实验

将上述化合物前药配制成5mM母液，小鼠血浆在37℃预热30min。用小鼠血浆将化合物前药稀释至浓度为50uM，在37℃恒温孵育。取样时间点：0、1小时、2h、4小时、6小时、8小时、19小时、24小时。取40uL上述血浆，加入160uL冷乙腈溶液，涡旋，4℃低温离心，9000rpm，30min。取上清液用HPLC进行检测。实验结果见附图中图3。三种前药在37℃小鼠血浆中呈现不同的稳定性。化合物10-C18-SN38在很短的时间内裂解释放药物分子SN38，半衰期小于1小时；化合物20-C18-SN38裂解释放较稳定，难以裂解为药物分子SN38，半衰期为14小时；而化合物20-Gly-C18-SN38呈现出时间依赖性的降解，半衰期为5小时，比10-C18-SN38前药显示出较好的稳定性，而与20-C18-SN38相比，能更加快速的裂解出药物分子发挥疗效。

实施例7

上述三种化合物对A549、HepG2、MG-63、HT-29、MIAPaCa-2细胞株的增殖抑制活性实验即细胞毒性实验

为评价化合物对肿瘤细胞增殖能力的影响，采用MTT法，选用A549、HepG2、MG-63、HT-29、MIA PaCa-2细胞株，72小时后观察测定化合物对肿瘤细胞的增殖抑制并计算IC₅₀。

表1为SN38、上市药物伊立替康以及三种前药化合物对A549、HepG2、MG-63、HT-29、MIA PaCa-2细胞株的增殖抑制活性。

从表格可以看出，在上述五种肿瘤细胞系中，20-C18-SN38与20-Gly-C18-SN38的抗肿瘤活性明显比SN38更低，10-C18-SN38与SN38相当。

Claims

1.一种与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药，其特征在于，具有下式所示结构：

2.一种权利要求1所述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药的制备方法，其特征在于，以长链脂肪二酸单羧基修饰7-乙基-10-羟基喜树碱的C-10位羟基，其制备过程如下式所示：

反应步骤包括：

3.一种权利要求1所述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药的制备方法，其特征在于，以长链脂肪二酸单羧基修饰的7-乙基-10-羟基喜树碱的C-20位羟基，其制备过程如下式所示：

反应步骤包括：

4.一种权利要求1所述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药的制备方法，其特征在于，以长链脂肪二酸的单羧基甘氨酸衍生物修饰的SN38的C-20位羟基，其制备过程如下式所示：

反应步骤包括：

d)酰胺化反应：氮气保护下，室温将十八烷二酸单叔丁酯、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(HATU)溶于溶剂中，室温搅拌3个小时，再依次加入化合物3-2、DIEA，室温反应过夜得到化合物3-3；所述化合物3-2与十八烷二酸单叔丁酯摩尔比为1∶1，化合物3-2与HATU摩尔比为1∶1.2，化合物3-2与DIEA摩尔比1∶2.8；所述有机溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺；

5.一种药物组合物，包括权利要求1所述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药及其药学上可接受的大分子载体：所述大分子载体为人血清白蛋白及脂质体。

6.一种权利要求1所述与人血清白蛋白非共价结合型7-乙基-10-羟基喜树碱衍生物前药在制备人血清白蛋白非共价结合型超分子抗肿瘤药物中的应用。