JP2010504929A - 生体系への送達を高める手段及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)(i)グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、C末端のカルボキシレートで、エステル化又はチオエステル化されるか、(ii)1つ又は複数のAsp残基又はGlu残基が存在する場合、グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のAsp残基又はGlu残基の側鎖カルボキシレートがエステル化又はチオエステル化されるか、(iii)1つ又は複数のSer残基、Thr残基又はTyr残基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のSer残基、Thr残基又はTyr残基のヒドロキシル基がエステル化又はチオエステル化されるか、(iv)1つ又は複数のCys残基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のCys残基のスルフヒドリル基がエステル化又はチオエステル化されるか、及び/又は(v)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸で予めアミド化したN末端でエステル化され、該エステルは、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基と、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGのカルボキシル基との間で形成される、並びに/又は(b)Cys残基が存在する場合、1つ又は複数のジスルフィドを含有し、当該ジスルフィドが該Cys残基のスルフヒドリル基と、グアニジニウムアルカンチオールの間、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGとの間で形成される、ペプチド又はポリペプチドに関する。
在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のSer残基、Thr残基又はTyr残基のヒドロキシル基でエステル化又はチオエステル化されるか、(iv)1つ又は複数のCys残基のスルフヒドリル基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のCys残基のスルフヒドリル基でエステル化又はチオエステル化しされるか、及び/又は(v)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGのN末端でエステル化又はチオエステル化したペプチド又はポリペプチドであって、前記N末端はα−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸で予めアミド化され、前記エステルは、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基と、アルカン酸グアニジニウム又は該グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGのカルボキシル基との間で形成される、並びに/又は(b)Cys残基が存在する場合、1つ又は複数のジスルフィドを含有するペプチド又はポリペプチドであって、該ジスルフィドは、Cys残基のスルフヒドリル基と、グアニジニウムアルカンチオールとの間、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGとの間で形成されるペプチド又はポリペプチドに関するものである。
て、ペプチド又はポリペプチドの例えば細胞膜のような生物学的障壁の通過能が高まる。
カルボキシレートでエステル化したAsp又はGluを使用する。より長いペプチド及びポリペプチドの場合、この合成アプローチはあまり好ましくない。したがって、一方で天然のペプチド又はポリペプチド、又は薬理学的特性が改善されるペプチド又はポリペプチドと、もう一方で上記で規定のグアニジニウム基含有化合物(グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、アルカン酸グアニジニウム、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、グアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEG、並びにグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEG)とのモル比を制御することによって、均一な分布を得ることができる。必要であれば、変性条件を使用して、確実にエステル化される全ての官能基を等しく接近可能にすることができる。
HX−(CR1R2)n−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式I)
(式中、Xは、O又はSであり、
R1及びR2はそれぞれ独立して、H、ハロゲン、NH2、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
nは、2〜15の整数であり、
R3は、H又は炭素数が1〜5のアルキルであり、
R4及びR5は独立して、H、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、R4基又はR5基を受けるNは、ヘテロアリール環の環原子であり、及び/又はR4及びR5は共に、ヘテロアリール環を与えるように選択され得る)を有する。
HX−(CH2)n−NR−C(=NH)−NH2(式II)
(式中、Xは、O又はSであり、
nは、2〜10の整数であり、
Rは、H又は炭素数が1〜5のアルキルである)を有する。
HOOC−(CR1R2)n−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式III)
(式中、R1及びR2はそれぞれ独立して、H、ハロゲン、NH2、炭素数が1〜5のアル
キル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
nは、2〜15の整数であり、
R3は、H又は炭素数が1〜5のアルキルであり、
R4及びR5は独立して、H、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、R4基又はR5基を受けるNは、ヘテロアリール環の環原子である可能性があり、及び/又はR4及びR5は共に、ヘテロアリール環を与えるように選択され得る)を有する。
HOOC−CH2−N(CH3)−C(=NH)−NH2(クレアチン)
HOOC−CH2−NH−C(=NH)−NH2(グアニジニノ酢酸)
HOOC−CHR1−(CH2)n-1−N(R2)−C(=NH)−NH2(式IV)
(式中、R1は、H又はNH2であり、
nは、2〜10の整数であり、
R2は、H又は炭素数が1〜5のアルキルである)を有する。
HX−CH2CH2(OCH2CH2)k−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式V)
(式中、kは、1〜12の整数であり、X、R3、R4及びR5は、上記で規定されるようなものである)を有する。
HOOC−CH2CH2(OCH2CH2)k−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式VI)
(式中、kは、1〜12の整数であり、X、R3、R4及びR5は、上記で規定されるようなものである)を有する。代替的に、当該グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGは、以下の式:
HOOC−CH2(OCH2CH2)k−N(R3)−C(=NR4)−NHR5
を有する。
ようにヒドロキシル基によってエステル化できる状態にある所望の(例えばペプチド又はポリペプチドの)化合物が生成される。
HO(CH2CH2O)iC(=O)−(CR1R2)n−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式VIII)
HO(CH2)jOC(=O)−(CR1R2)n−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式IX)
トは、脂肪族アルコールによってエステル化し、及び/又は(b)α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸によってアミド化しない場合、N末端のアミノ基は、脂肪酸によってアミド化する。用語「アミド化された」又は「アミド化」は、カルボキシレートとアミノ基との間のアミド結合−CO−NH−の形成を表す。
端又は3’末端の2’ヒドロキシル基、及び(iv)内部の2’ヒドロキシル基でエステル化する、(b)グアニジニウムアルカノール、又はグアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEGによって、1つ、複数又は全てのホスフェートでエステル化する、及び/又は(c)グアニジニウムアルカノール、又はグアニジニウム基で置換されたPEGによって、2’ヒドロキシル基をアセタールに変換する、核酸にも関する。
また、末端ホスフェートのエステル化には、2当量の脂肪族アルコールも想定される。また、グアニジニウムアルカノール又は脂肪族アルコールのいずれかである1当量だけのアルコールを末端ホスフェートと連結させることができる。
されたPEGに準用される。
associated RNA))、snoRNA(核小体低分子RNA)及びsnRNA(核内低分子RNA)を含む。好ましくは、「RNA」に言及する実施の形態は、mRNAに関する。同時に、上記で言及される特定の形態を含む、他の形態のRNAが、各実施の形態で意図的に想定される。さらにRNAウイルスのRNAの場合等では、ゲノムRNAが含まれる。
る。一般的に、ミセルは略球状である。ミセルの形状及び大きさは、その界面活性剤分子の分子幾何構造と、界面活性剤濃度、温度、pH及びイオン強度等の溶液条件とに応じたものである。
(a)Xは、−(C=O)であり、Yは、O又はSであり、
(b)Xは、−O又は−Sであり、Yは、(C=O)又は(CHRa)−Oであり、
(c)X−Yは、−S−Sであり、又は
(d)Xは、−O−P(=O)ORPであり、Yは、O又はSであり、且つ
Jはそれぞれ独立して、H、ハロゲン、NH2、炭素数が1〜15のアルキル、及び[CHR]o−NR’−CH(NHR’’)−NH−R’’’から選択され、
R、R’、R’’、R’’’、Ra及びRpはそれぞれ独立して、H、炭素数が1〜15のアルキル、及び置換又は非置換のアリールから選択され、R及びR’、R’及びR’’、及び/又はR’’及びR’’’は共に、環状構造を形成するように選択されてもよく、
アルキルは置換されてもよく、
mは、0〜10の整数であり、Jが[CHR]o−NR’−CH(NHR’’)−NH−R’’’の場合は、mは1であり、
oは、1〜15の整数であり、且つ
pは、0又は1であり、pが0の場合は、R’を受けるNの自由原子価は、Hで満たされる)を与える、修飾する工程を含む、ポリマー、リポソーム又はミセルの生物学的障壁通過能を高める方法を提供する。
Thr残基又はTyr残基のヒドロキシル基で、(iv)アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、存在する場合、1つ又は複数のCys残基のスルフヒドリル基で、及び/又は(v)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸で予めアミド化したN末端で形成する工程であって、エステルが、当該α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基と、当該アルカン酸グアニジニウム又は当該グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGのカルボキシル基との間で形成される、形成する工程、及び/又は(b)1つ又は複数のジスルフィドを形成する工程であって、当該ジスルフィドが、存在する場合、Cys残基のスルフヒドリル基と、グアニジニウムアルカンチオールとの間、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGとの間で形成される、形成する工程を含む、ペプチド又はポリペプチドの生物学的障壁通過能を高める方法も提供する。
セタールのアルデヒド成分は、ホルムアルデヒド以外のアルデヒドである可能性があり、一般式Ra−CHO(Raは本明細書で以下に規定される)を有する。
カップリングさせることができる。精製後、TFA処理によってビス−Boc基を取り除き、所望の化合物を生成する。
融合(即ち細胞貫通)ペプチドを使用しない、SCF(幹細胞因子)の20−merペプチド阻害剤の送達
標的ペプチド(SCFのER送出に必要):
グアニジニウム基をエステル結合を介してグルタミン酸側鎖に化学的に組み込み、4つの炭素のアルキル鎖(ブチル)によってカルボン酸から分離した。グアニジニウム保護基はビス−Z(N,N’ビスベンジルオキシカルボニル)である。
使用前駆体:Fmoc−Glu(OブチルグアニジニウムビスZ)−OH。
樹脂:Boc−Val−Pam樹脂RAPPポリマー。0.59mmol/g。0.2mmol規模の合成。
カップリング剤:前駆体にはBOP、及び残余はHCTU。
Fmoc−Glu(OビスZグアニジニウムブチル)−OH
出発材料:Fmoc−Glu−OtBu
DMEM含有10%血清においてカバーガラス上でCos−7細胞を一晩平板培養した。分析のために、本発明者らは、PBS(リン酸緩衝生理食塩水)中で1mMのペプチドを懸濁し、完全培地中で最終濃度に希釈した。本発明者らは、15分後又は30分後、PBSで1回細胞を洗浄し、10分間パラホルムアルデヒド(4%)で固定し、PBS中で画像を撮影した。
副反応(ラクタム形成)を避け、(ii)全てのBoc化学反応を利用して、鎖集合を単純化した。この場合、6−アミノ−1−ヘキサノールから始まり、Boc固相ペプチド合成できる状態にあるアミノ酸が得られる:
49.9mg(1mmol、1当量)のNaHを、乾燥THF 10mL中、窒素下で懸濁した。298.3mg(1mmol、1当量)の1−(6−ヒドロキシエチル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンの乾燥THF溶液10mLを10分滴下した。溶液を室温で1時間撹拌し、0.12mL(1mmol、1当量)の臭化ベンジルを滴下した。反応物を室温で2時間30分撹拌し、TLCで確認した。44.9mg(1mmol、1当量)のNaHを添加した。5時間30分(総反応時間)後では、TLCは、ほとんど前進が見られず、反応物を一晩撹拌させた。水を幾らか添加し、有機溶媒を真空下で取り除いた。水相をエーテルで3回抽出した。有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、蒸発させ、430.0mgの無色油を得た。シリカ上のフラッシュクロマトグラフィ(溶離液 AcO
Et:ペンタン 1:9、Rf=0.26)でこの油を精製し、無色油として315.5mg(0.8mmol)の1−(2−(ベンジルオキシ)エチル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンを得た(収率=80%)。
4mL(52mmol、65当量)のTFAを、315.5mg(0.8mmol、1当量)の1−(2−(ベンジルオキシ)エチル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンに添加し、室温で3時間撹拌した。溶液を蒸発させ、淡橙色油として336.9mg(1.1mmol)の2−グアニジノエチルベンゾエートトリフラート塩を得た(収率=110%)。
164.5mg(0.4mmol、1当量)の2−グアニジノエチルベンゾエートトリフラート塩を幾らかのアセトン中に溶解した。4MのNaOH溶液4mLを添加した。86.1mg(0.44mmol、1.1当量)のトルエン−4−スルホニル−クロリドをアセトン中に溶解し、反応混合物に添加した。反応物を室温で2時間撹拌し、この反応物を6MのHCl溶液で中性にした。アセトンを真空下で取り除いた。水相をAcOEtで3回抽出した。有機相を無水Na2SO4で乾燥し、蒸発させ、174.8mgの無色油を得た。白色結晶が週末にわたって(over week end)形成された。これらの結晶をAcOEtで洗浄し、周囲の油を取り除いた。83.8mg(0.24mmol)のN−(N−(2−(ベンジルオキシ)エチル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミドを白色結晶として回収した(収率=60%)。
83.8mg(0.24mmol)のN−(N−(2−(ベンジルオキシ)エチル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミドをMeOH中、窒素下で溶解した。活性炭上の10%パラジウムを数mg添加した。3回真空水素通気を行った後、反応物をH2雰囲気下で激しく撹拌した。2時間後では、TLC(溶離液 AcOEt:ペンタン
9:1)による変化が見られず、活性炭上のパラジウムを出発量の約5倍添加した。反応物を一晩撹拌した。反応が完了まで余程遠くなければ、TLCによって、より極性のある生成物の形成が示された。1mLの酢酸を添加した。1時間後に反応が完了した。反応物をセライトで濾過し、溶媒を蒸発させ、白色固体として62.8mg(0.24mmol)のN−(N−(2−ヒドロキシエチル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミドを得た(収率=100%)。
62.8mg(0.24mmol、1当量)のN−(N−(2−ヒドロキシエチル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミド及び82.7mg(0.24mmol、1当量)のBoc−L−グルタミン酸1−ベンジルエステルを乾燥ジクロロメタン中、窒素下で溶解した。7.45mg(0.05mmol、0.2当量)のDMAP及び55.3mg(0.26mmol、1当量)のDCCを添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。白色析出物が現れ、それを濾過で取り除いた。溶媒を真空下で蒸発させ、184.1mgの白色固体を得た。この白色固体をジクロロメタン中に溶解し、分取TLC(溶離液 純AcOEt、Rf=0.65)で精製した。83.2mg(0.14mmol)のベンゾイン1−イミノ−13,13−ジメチル−1−(4−メチルフェニルスルホンアミド)−6,11−ジオキソ−5,12−ジオキサ−2,10−ジアザテトラデカン−9−カルボン酸無水物を無色油として回収した(収率=60%)。1H−NMR(500MHz,CDCl3):δ=1.12(m,1H),1.41(s,9H),1.86(m
,1H),2.18(m,1H),2.39(m,5H),3.41(m,1H),3.61(m,1H),4.01(m,1H),4.26(m,1H),4.35(m,1H),5.17(q,J=11.98Hz,2H),5.33(d,J=8.83Hz,1H),6.49(m,2H),7.22(d,J=8.20Hz,2H),7.34(m,5H),7.77(d,J=8.19Hz,2H).
7.255g(24.99mmol、1当量)の1,3−ジ−Boc−2−メチルイソチオ尿素、4.101g(34.98mmol、1.4当量)の6−アミノ−1−ヘキサノール及び614.5mg(5mmol、0.2当量)のDMAPを140mLのジクロロメタンに溶解した。反応物を室温で撹拌した後、TLC(溶離液 AcOEt:ペンタン 3:7)を行った。約60時間後、反応が完了した。溶媒を真空下で蒸発させた(フードの下でNaOCl溶液中で気体発生、MeSHの蒸発)。得られた油をジクロロメタン中に溶解し(白色フレークは依然として存在する)、1MのKHSO4溶液で3回、及びブラインで1回洗浄した。有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させ、10.43gの無色油を得た。シリカ上のフラッシュクロマトグラフィ(溶離液 AcOEt:ペンタン 1:1、Rf=0.43)でこの油を精製し、無色油(一晩で白色固体になった)として8.447g(23.50mmol)の1−(6−ヒドロキシへキシル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンを得た(収率=94%)。1H−NMR(500MHz,CDCl3):δ=1.42(m,5H),1.52(s,10H),1.53(s,10H),1.58(t,J=6.94Hz,2H),1.64(m,2H),3.61(m,2H),3.65(t,J=6.64Hz,2H).
1.300g(32.49mmol、1.3当量)の水素化ナトリウムを、170mLの乾燥THF中、窒素下で懸濁した。乾燥THF中に溶解した8.983g(24.99
mmol、1当量)の1−(6−ヒドロキシへキシル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンを懸濁液に滴下した。反応物を室温で45分間撹拌した。3.6mL(29.99mmol、1.2当量)の臭化ベンジルを10分滴下した。反応物を室温で一晩撹拌した。TLCで反応物を確認したら、反応は完了していなかった。0.833g(20.82mmol)の水素化ナトリウムを添加した。1時間後、TLCが変わらなかったので、0.810g(20.24mmol)の水素化ナトリウムを添加した。3時間後、TLCに進展が見られなかったので、1.396g(34.89mmol)の水素化ナトリウム及び1.6mL(13.33mmol)の臭化ベンジルを添加した。反応物を一晩撹拌したが、TLCは依然として変わらなかった。溶液が透明になるまで水を添加することで反応を停止させた。THFを真空下で取り除いた。水相をエーテルで3回抽出した。有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、蒸発させ、15.44gの淡黄色油を得た。シリカ上のフラッシュクロマトグラフィ(溶離液 AcOEt:ペンタン 1:9、Rf=0.43)でこの油を精製し、無色油として3.78gの1−(2−(ベンジルオキシ)ヘキシル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンを得た(収率=34%)。1H−NMR(500MHz,CDCl3):δ=1.39(m,5H),1.50(s,9H),1.51(s,9H),1.61(m,5H),3.45(m,4H),4.50(m,2H),7.28(m,1H),7.34(m,4H).
4.61(10.3mmol、1当量)の1−(2−(ベンジルオキシ)ヘキシル)−N,N’−ジ−Boc−グアニジンを49mL(669mmol、65当量)のTFA中に溶解した。反応物を室温で3時間撹拌した。TFAを真空下で取り除き、6.06gの茶色油を得た(収率=162%)。
6.06g(10.3mmol、1当量)の粗2−グアニジノへキシルベンゾエートトリフラート塩をアセトン中に溶解し、50mLの4M NaOH溶液を添加した。2.377g(12.4mmol、1.2当量)のトルエン−4−スルホニル−クロリドをアセトン中に溶解し、反応混合物に添加した。溶液全体に茶色油が現れたら、分解が完了するまでアセトンを添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。37%HCl溶液を添加することによって、反応物を中性にした(リトマスでpH=6)。アセトンを真空下で取り除き、水相をAcOEtで3回抽出した。有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、溶媒を蒸発させ、5.23gの淡黄色油を得た。シリカ上のフラッシュクロマトグラフィ(溶離液 AcOEt:ペンタン 6:4、Rf=0.52)でこの油を精製し、無色油として3.20g(7.9mmol)のN−(N−(6−(ベンジルオキシ)ヘキシル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミドを得た(収率=77%)。1H−NMR(500MHz,CDCl3):δ=1.27(m,5H),1.44(m,2H),1.55(m,2H),2.38(s,3H),3.11(s,2H),3.44(t,J=6.62Hz,3H),4.48(s,2H),6.30(s,3H),7.22(d,J=8.20,2H),7.28(m,1H),7.33(m,2H),7.73(d,J=8.19Hz,2H).
3.20g(7.9mmol)のN−(N−(6−(ベンジルオキシ)ヘキシル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミドをMeOH中、窒素下で溶解した。数mgの活性炭上の10%パラジウムを添加した。1mLの酢酸を添加した。3回真空水素通気を行った後、反応物をH2雰囲気下で激しく撹拌した。反応物を室温で3時間激しく撹拌して、TLCで確認した。変化が見られなかったので、2mLの酢酸を添加した。1時間後、TLCで変化が見られなかったので、より多くの活性炭上の10%パラジウムを添加した。3日後、TLCで完全な変化が見られ、溶液をセライトで濾過し、溶媒を乾燥させ、淡黄色油として2.480gのN−(N−(6−ヒドロキシヘキシル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミドを得た(収率=100%)。
2.48g(7.9mmol、1当量)のN−(N−(6−ヒドロキシへキシル)カルバミミドイル)−4−メチルベンゼンスルホンアミド及び2.67g(7.9mmol、1当量)のBoc−L−グルタミン酸1−ベンジルエステルを乾燥ジクロロメタン中、窒素下で溶解した。198.9mg(1.58mmol、0.2当量)のDMAP及び1.810g(8.7mmol、1.1当量)のDCCを室温で添加した。反応物を一晩撹拌したら、白色析出物が現れた。濾過によって析出物を取り除き、溶媒を蒸発させ、5.99gの混合黄色油/固体化合物を得た。シリカ上のフラッシュクロマトグラフィ(溶離液
純AcOEt、Rf=0.71)でこの化合物を精製し、4.83gの淡黄色油を得た(収率=97%)。
103.6mg(0.16mmol)の1−ベンジル5−(6−(3−トシルグアニジノ)ヘキシル)2−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)ペンタンジオエートをMeOH中、窒素下で溶解した。活性炭上の10%パラジウムを数mg添加した。3回真空水素通気を行った後、反応物をH2雰囲気下で2日間激しく撹拌した。反応物をセライトで濾過し、溶媒を蒸発させ、74.4mgの無色油を得た(収率=86%)。
Claims (42)
- (a)
(i)グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、C末端のカルボキシレートでエステル化又はチオエステル化されるか、
(ii)1つ又は複数のAsp残基又はGlu残基が存在する場合、グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のAsp残基又はGlu残基の側鎖カルボキシレートで、エステル化又はチオエステル化されるか、
(iii)1つ又は複数のSer残基、Thr残基又はTyr残基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のSer残基、Thr残基又はTyr残基のヒドロキシル基で、エステル化又はチオエステル化されるか、
(iv)1つ又は複数のCys残基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のCys残基のスルフヒドリル基で、エステル化又はチオエステル化される
及び/又は
(v)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸で予めアミド化したN末端でエステル化され、エステルはα−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基と、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGのカルボキシル基との間で形成される、
並びに/又は
(b)Cys残基が存在する場合、Cys残基のスルフヒドリル基と、グアニジニウムアルカンチオールとの間、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGとの間で形成される1つ又は複数のジスルフィドを含有する、
ペプチド又はポリペプチド。 - 前記グアニジニウムアルカノール又はグアニジニウムアルカンチオールが、以下の構造を有する、請求項1に記載のペプチド又はポリペプチド。
HX−(CR1R2)n−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式I)
式中、Xは、O又はSであり、
R1及びR2はそれぞれ独立して、H、ハロゲン、NH2、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
nは、2〜15の整数であり、
R3は、H又は炭素数が1〜5のアルキルであり、
R4及びR5は独立して、H、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、R4基又はR5基を受けるNは、ヘテロアリール環の環原子であってもよく、及び/又はR4及びR5は共に、ヘテロアリール環を与えるように選択されてもよい。 - 前記グアニジニウムアルカノール又はグアニジニウムアルカンチオールが、以下の構造を有する、請求項1又は2に記載のペプチド又はポリペプチド。
HX−(CH2)n−NR−C(=NH)−NH2(式II)
式中、Xは、O又はSであり、
nは、2〜10の整数であり、
Rは、H又は炭素数が1〜5のアルキルである。 - 前記アルカン酸グアニジニウムが、以下の構造を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
HOOC−(CR1R2)n−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式III)
式中、R1及びR2はそれぞれ独立して、H、ハロゲン、NH2、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
nは、2〜15の整数であり、
R3は、H又は炭素数が1〜5のアルキルであり、
R4及びR5は独立して、H、炭素数が1〜5のアルキル、アリール、及びヘテロアリールから選択され、R4基又はR5基を受けるNは、ヘテロアリール環の環原子であってもよく、及び/又はR4及びR5は共に、ヘテロアリール環を与えるように選択されてもよい。 - 前記アルカン酸グアニジニウムが、以下の構造を有する、請求項1〜4のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
HOOC−CHR1−(CH2)n-1−N(R2)−C(=NH)−NH2(式IV)
式中、R1は、H又はNH2であり、
nは、2〜10の整数であり、
R2は、H又は炭素数が1〜5のアルキルである。 - nが4〜9、好ましくは4〜6である、請求項2〜5のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
- 前記グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又は前記グアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGがそれぞれ、以下の構造を有する、請求項2〜6のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
HX−CH2CH2(OCH2CH2)k−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式V)
式中、kは、1〜12の整数であり、X、R3、R4及びR5は、請求項2で規定される通りである。 - 前記グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGが、以下の構造を有する、請求項2〜7のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
HOOC−CH2CH2(OCH2CH2)k−N(R3)−C(=NR4)−NHR5(式VI)
式中、kは、1〜12の整数であり、X、R3、R4及びR5は、請求項4で規定される通りである。 - kが1〜3である、請求項2〜8のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
- −C(=NR4)−NHR5が、ピリミジン−2−イル、キナゾリン−2−イル、イミジダゾール−2−イル又はベンズイミダゾール−2−イルである、請求項2又は4〜9のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
- (a)前記C末端のカルボキシレートが、前記のようにエステル化又はチオエステル化しない場合、脂肪族アルコールによってエステル化し、及び/又は
(b)前記N末端のアミノ基が、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸によってアミド化されない場合、脂肪酸でアミド化する、請求項1〜10のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。 - 前記脂肪族アルコール及び/又は前記脂肪酸は、炭素数が5〜15、好ましくは炭素数が9である、請求項11に記載のペプチド又はポリペプチド。
- 存在する場合、任意のArg残基を含むグアニジニウム基の数が、4〜20、より好ましくは7〜15、及び最も好ましくは9であり、少なくとも1つのグアニジニウム基が、請求項1〜10のいずれか一項に規定される通りの、グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、アルカン酸グアニジニウム、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、グアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEG、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGに含まれる、請求項1〜12のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
- 前記ペプチド又はポリペプチドが、ペプチド−PNAキメラの一部である、請求項1〜13のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド。
- 核酸であって、
(a)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、以下の位置の1つ又は複数:
(i)5’末端の5’ヒドロキシル基、
(ii)3’末端の3’ヒドロキシル基、
(iii)5’末端又は3’末端の2’ヒドロキシル基、及び
(iv)内部の2’ヒドロキシル基
でエステル化され、
(b)グアニジニウムアルカノール、又はグアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEGによって、1つ、複数又は全てのホスフェートでエステル化され、及び/又は
(c)グアニジニウムアルカノール、又はグアニジニウム基で置換されたPEGによって、2’ヒドロキシル基がアセタールに変換される、核酸。 - グアニジニウムアルカノールによってエステル化されない場合、1つ又は複数の末端ホスフェートは、脂肪族アルコールによってエステル化される、請求項15に記載の核酸。
- 前記核酸が、DNA、RNA又はsiRNAである、請求項15又は16に記載の核酸。
- 生理的条件下で切断可能な官能基によって、リポソーム又はミセルと連結された、1つ又は複数のグアニジニウム基を有するリポソーム又はミセル。
- 前記官能基がエステル基である、請求項18に記載のリポソーム又はミセル。
- (a)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のヒドロキシル基で、及び/又は
(b)グアニジニウムアルコール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、ホスフェート及びカルボキシレート等の1つ又は複数の酸性基でエステル化された、請求項18又は19に記載のリポソーム又はミセル。 - 前記リポソーム又はミセルの第1級アミノ基が、グアニジニウム基に変換された、請求項18〜20のいずれか一項に記載のリポソーム又はミセル。
- 前記ヒドロキシル基が、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、モノ−アシルグリセロール、及びジ−アシルグリセロールから選択される、前記リポソーム又はミセルに含まれる脂質のヒドロキシル基、又は該リポソーム又はミセルに含まれる
PEG部分の末端ヒドロキシル基である、請求項20又は21に記載のリポソーム又はミセル。 - 前記第1級アミノ基が、ホスファチジルエタノールアミン又はPEG部分の第1級アミノ基であり、該PEG部分の末端ヒドロキシル部分が、第1級アミノ基に置換された、請求項21又は22に記載のリポソーム又はミセル。
- 前記グアニジニウムアルカノール又はグアニジニウムアルカンチオールが、請求項2、3、6又は10のいずれか一項に規定される通りのグアニジニウムアルカノール又はグアニジニウムアルカンチオールである、請求項14〜17のいずれか一項に記載の核酸或いは請求項18〜23のいずれか一項に記載のリポソーム又はミセル。
- 前記アルカン酸グアニジニウムが、請求項4〜7のいずれか一項に規定される通りのアルカン酸グアニジニウムである、請求項14〜17のいずれか一項に記載の核酸或いは請求項16〜22のいずれか一項に記載のリポソーム又はミセル。
- 前記グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又は前記グアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGが、請求項7又は9に規定される通りのものである、請求項14〜17のいずれか一項に記載の核酸或いは請求項18〜23のいずれか一項に記載のリポソーム又はミセル。
- 前記グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGが、請求項8又は9に規定される通りのものである、請求項14〜17のいずれか一項に記載の核酸或いは請求項18〜23のいずれか一項に記載のリポソーム又はミセル。
- 請求項1〜13又は18のいずれか一項に記載のペプチド又はポリペプチド、及び/又は請求項14〜17又は24〜27のいずれか一項に記載の核酸、及び/又は請求項18〜27のいずれか一項に記載のリポソーム又はミセルを含む薬学的組成物。
- 1つ又は複数のカルボキシル基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基及び/又はホスフェート基を有する、ポリマー、リポソーム又は、ミセルの生物学的障壁通過能を高める方法であって、これらの該基の少なくとも1つを修飾して式VIIの化合物を生成する工程を含む方法。
式中、それぞれの式VIIに関して独立して、
(a)Xは、−(C=O)であり、Yは、O又はSであり、
(b)Xは、−O又は−Sであり、Yは、(C=O)又は(CHRa)−Oであり、
(c)X−Yは、−S−Sであり、又は
(d)Xは、−O−P(=O)ORPであり、Yは、O又はSであり、且つ
Jはそれぞれ独立して、H、ハロゲン、NH2、炭素数が1〜15のアルキル、及び[CHR]o−NR’−CH(NHR’’)−NH−R’’’から選択され、
R、R’、R’’、R’’’、Ra及びRpはそれぞれ独立して、H、炭素数が1〜15のアルキル、及び置換又は非置換のアリールから選択され、R及びR’、R’及びR’’、及び/又はR’’及びR’’’は共に、環状構造を形成するように選択されてもよく、
アルキルは置換されてもよく、
mは、0〜10の整数であり、Jが[CHR]o−NR’−CH(NHR’’)−NH−R’’’の場合は、mは1であり、
oは、1〜15の整数であり、且つ
pは、0又は1であり、pが0の場合は、R’を受けるNの自由原子価は、Hで満たされる。 - 前記ポリマーが、ペプチド、ポリペプチド又は核酸である、請求項29に記載の方法。
- (a)
(i)グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、C末端のカルボキシレートで、エステル又はチオエステルを形成する工程
(ii)1つ又は複数のAsp残基又はGlu残基が存在する場合、グアニジニウムアルカノール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のAsp残基又はGlu残基の側鎖カルボキシレートで、エステル又はチオエステルを形成する工程
(iii)1つ又は複数のSer残基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウムによって、1つ又は複数のSer残基、Thr残基又はTyr残基のヒドロキシル基で、エステル又はチオエステルを形成する工程
(iv)1つ又は複数のCys残基が存在する場合、アルカン酸グアニジニウム又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、1つ又は複数のCys残基のスルフヒドリル基で、エステル又はチオエステルを形成する工程
及び/又は
(v)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、α−ヒドロキシ酸又はβ−ヒドロキシ酸で予めアミド化したN末端で、該α−ヒドロキシ酸又は該β−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基と、該アルカン酸グアニジニウム又は該グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGのカルボキシル基との間でエステル又はチオエステルを形成する工程、並びに/又は
(b)1つ又は複数のジスルフィドを形成する工程であって、該ジスルフィドが、存在する場合、Cys残基のスルフヒドリル基と、グアニジニウムアルカンチオールとの間、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGとの間で形成される
工程を含む、ペプチド又はポリペプチドの生物学的障壁通過能を高める方法。 - 前記生物学的障壁が、細胞膜、粘膜及び血液脳関門から選択される、請求項29〜31のいずれか一項に記載の方法。
- (a)前記C末端が、請求項31に規定される通りにエステル化しない場合、脂肪族アルコールによって、該C末端のカルボキシレートでエステル又はチオエステルを形成する工程、及び/又は
(b)脂肪酸によって、前記N末端のアミノ基をアミド化する工程をさらに含む、請求項31又は32に記載の方法。 - 前記脂肪族アルコール及び/又は前記脂肪酸は、炭素数が5〜15、好ましくは炭素数が9である、請求項33に記載の方法。
- 存在する場合、任意のArg残基の数を含む、エステル、チオエステル、アセテート、ジスルフィド及び/又はホスフェートエステルの形成時のグアニジニウム基の数が、5〜20、より好ましくは7〜15、及び最も好ましくは9である、請求項29〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 核酸の生物学的障壁通過能を高める方法であって、
(a)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、以下の位置の1つ又は複数:
(i)5’末端の5’ヒドロキシル基、
(ii)3’末端の3’ヒドロキシル基、
(iii)5’末端又は3’末端の2’ヒドロキシル基、及び
(iv)内部の2’ヒドロキシル基
でエステルを形成する工程、
(b)グアニジニウムアルカノール、又はグアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEGによって、1つ又は複数のホスフェートでエステルを形成する工程、及び/又は
(c)2’ヒドロキシル基と、グアニジニウムアルカノールとの間、又はグアニジニウム基で置換されたPEGとの間でアセタールを形成する工程を含む、核酸の生物学的障壁通過能を高める方法。 - 脂肪族アルコールによって、1つ又は複数の末端ホスフェートをエステル化することをさらに含む、請求項36に記載の方法。
- リポソーム又はミセルの生物学的障壁通過能を高める方法であって、
(a)アルカン酸グアニジニウム、又はグアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGによって、該リポソーム又はミセルの1つ又は複数のヒドロキシル基でエステルを形成する工程、及び/又は
(b)グアニジニウムアルコール、グアニジニウムアルカンチオール、グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又はグアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGによって、ホスフェート又はカルボキシレート等の1つ又は複数の酸性基でエステルを形成する工程、及び/又は
(c)前記リポソーム又はミセルの第1級アミノ基をグアニジニウム基に変換する工程を含む、リポソーム又はミセルの生物学的障壁通過能を高める方法。 - 前記グアニジニウムアルカノール又はグアニジニウムアルカンチオールが、請求項2、3、6又は7のいずれか一項に規定される通りのグアニジニウムアルカノール又はグアニジニウムアルカンチオールである、請求項31〜38のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アルカン酸グアニジニウムが、請求項4〜7のいずれか一項に規定される通りのアルカン酸グアニジニウムである、請求項31〜39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記グアニジニウム基で置換されると共に遊離ヒドロキシル基を有するPEG、又は前記グアニジニウム基及びスルフヒドリル基で置換されたPEGが、請求項7又は9に規定される通りのものである、請求項31〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 前記グアニジニウム基及びカルボキシル基で置換されたPEGが、請求項8又は9に規定される通りのものである、請求項31〜41のいずれか一項に記載の方法。
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