MX2011012823A - Conjugados peg-lípido puros. - Google Patents

Abstract

Se divulga la síntesis del conjugado de polyethyleneglycol (PEG)-lípido. Tal síntesis comprende los pasos de agregar oligómeros de PEG pequeños a la columna vertebral de glicerol hasta que se alcance la longitud deseada de la cadena. Los polímeros resultantes de la síntesis están altamente mono dispersos. La presente invención provee varias ventajas tales como una síntesis simplificada, alto rendimiento de producto y bajo costo de los materiales de arranque. Es seguido el presente método de síntesis es adecuado para preparar un amplio rango de conjugados. En otro aspecto, la invención comprende conjugados PEG lípido teniendo una columna vertebral glicerol unidad de manera covalente a una o más cadenas PEG monodispersas y uno o más lípidos. Estos conjugados son especialmente útiles para formulaciones farmacéuticas.

Description

CONJUGADOS PEG-LÍPIDO PUROS [001] CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con la síntesis de polietilenglicol (PEG)-lípido conjugado. Más particularmente, la invención se relaciona con un método conveniente y económico de síntesis, y composiciones para preparar conjugados PEG-lípido con cadenas PEG sustancialmente mono dispersas.

RECLAMÓ DE PRIORIDAD [002] Esta solicitud reclama la prioridad de la solicitud de patente provisional de estados unidos No. 61/217, 627 titulada "CONJUGADOS PEG-LÍPIDO PUROS" y le presentada el 2 de junio del 2009, y a la solicitud de patente provisional estadounidense número 61/284. 065 "CONJUGADOS PU ROS PEG-LÍPIDO. Y presentada el 12 de diciembre del 2009.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN [003] Cuando se utiliza como un vehículo de liberación, los conjugados PEG-lípidos tienen la capacidad de mejorar el perfil farmacológico y la solubilidad de fármacos lipofílicos. Estos también proveen otras ventajas potenciales como efectos colaterales mínimos asociados con los tratamientos terapéuticos. [004] La distribución estrecha de pesos moleculares de los polímeros libertadores de fármacos es crucialmente importante para aplicaciones biomédicas, específicamente si es usado en inyecciones intravenosas. Por ejemplo, los glicéridos caprílico/cáprico PEG-8 son mezclas de monoesteres, diesteres, y triesteres de glicerol y monoesteres y diesteres de polietilenglicoles con un peso molecular relativo medio entre 200 y 400. Debido parcialmente a las reacciones observadas en animales, la aplicación de PEG-8 CCG para muchos fármacos insolubles en agua fue restringida y fue publicado un limite de dosis de aproximadamente seis por ciento de PEG-8 CCG para formulaciones de fármacos orales humanos. [005] Con las cadenas de PEG producidas a partir de polimerización de radicales libres, la distribución de los pesos moleculares no están controlados estrechamente para cárdenas que tiene un peso molecular entre alrededor de 200 y 1200 daltons y más. Típicamente, mucho menos que se 50% de los polímeros para en un bache tiene exactamente el peso molecular objetivo. Una distribución más estrecha puede ser lograda con cromatografía de exclusión de tamaño, la cual puede resultar en que la mayoría de los polímeros PEG tengan un peso molecular objetivo. Sin embargo esto es extremadamente difícil de lograr a mono distribución de PEG's purificados. [006] Las cadenas de PEG altamente puras, con hasta alrededor de doce subunidades están disponibles comercialmente. Sin embargo, estos PEG's son extremadamente caros y requieren pasos adicionales de síntesis para incorporarles formulaciones cosméticas y/o farmacéuticas.

BREVE DESCRIPCIÓN DEL INVENTO [007] Se divulga la síntesis de conjugados de polietilenglicol-lípido. Tal síntesis incorpora pasos de adición de pequeños oligómeros de PEG a una columna vertebral de glicerol hasta alcanzar el tamaño deseado en la cadena. Los polímeros resultantes de la síntesis están altamente mono-dispersos. La presente invención proporciona muchas ventajas tales como síntesis simplificada, alto rendimiento, y bajo costo de los materiales de arranque. El presente método de síntesis es deseable para preparar un amplio rango de conjugados. [008] Por otro lado, la invención comprende conjugados PEG-lípido con una columna vertebral de glicerol, covalentemente unida a una o dos cadenas PEG a mono-dispersas y uno o dos lípidos. Estos conjugados son especialmente útiles para formulaciones farmacéuticas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS [009] La figura 1 describe un cromatograma LC-MS de 1,2-dioleoil-rac-3-monometóxidodecaetilen glicol (mPEG-12)-glicerol. [010] La figura 2 describe un perfil PK mouse de soluciones de itraconazol IV.

La figura 3 describe un perfil PK mouse de soluciones de itraconazol oral.

LISTA DE ABREVIACIONES [011] la presente invención aquí divulgada usa la siguiente nomenclatura química: DAG-PEG: diacilglicerol-polietilenglicoles DMAP: N, N-dimetil-amino piridina mPEG: monometox polietilenglicol éter PEG 12: polietilenglicoles 600 PEG 23: polietilenglicoles 1000 PEG 27: polietilenglicoles 1200 GDM-12: 1,2-dlmiristoil-rac-glicerol-3-dodecaetilenglicol GDO-12: 1 ,2-dioleoil-rac-glicerol-3-dodecaetilenglicol GDC-12: 1 ,2-dicoloil-rac-glicerol-3-dodecaetilenglicol GD -600: GDO-600: 1 ,3-dioleoil-glicerol-2-dodecaetilenglicol GDC-600: 1 ,3-dicoloil- glicerol-2-dodecaetilenglicol GDS-12: 1 ,2-distearoil-rac-glicerol-3-dodecaetilenglicol GOB-12: 1 ,2-bis(dodecaetilenglicol)glicerol-3-oleate GMB-12: 1 ,2-bis(dodecaetilenglicol)glicerol-3-miristato DSB-12: 1 ,2-bis(dodecaetilenglicol)glicerol-3-estearato GOBH: 1,2-bis(hexaetilenglicol) glicerol-3-oleato GMBH: 1,2-bis(hexaet¡lenglicol) g I icerol-3-m iristate GCBH: 1 ,2-bis(hexaetilenglicol) glicerol 3-colato GCLBH: 1,2-bis(hexaetilenglicol) glicerol 3-colesterol GPBH: 1,2-bis(hexaetilenglicol) glicerol -3-palmitato GDO-23: 1,2-dioleoil-rac-glicerol-3-polietilen (1000) glicol , n = 23 GDO-27: 1 ,2- dioleoil-rac-glicerol-3-polietilen (1200) glicol , n = 27 GDM-23: 1,2-dimiristoil-rac-glicerol-3- polietilen (1000) glicol, n = 23 GDM-27: 1,2-dimiristoil-rac-glicerol-3- polietilen (1200) glicol, n = 27 GDS-23: 1,2-distearoil-rac-glicerol-3- polietilen (1000) glicol, n = 23 TPGS-VE: d-alpha-tocoferil polietilenglicol-1000 succinato GDO-X-PEG 12: 1,2-dioleoil-rac-glicerol-3-X-dodecaetilenglicol ("X" representa una unión/espaciador, i.e., tiol, el cual puede ser encontrada en la tabla 3) Ciclosporine: Ciclo[[(E)-(2S,3R,4R)-3-hidrox¡ -metil-2-(metilamino)-6-octenoil] -L-2-aminobutiril- N-metilglicil-N-metil-Lleucil-L-valil-N-metil-L-leucil-L-alanil-D-alanil-N-metil-L-leuci Nmetil-L-valil] POPC: palmitoil-oleail fosfatidilcolina DESCRIPCIÓN DETALLADA DEL INVENTO [012] Las modalidades de la presente invención están descritas aquí en el contexto de métodos de síntesis, intermediarios, y compuestos relacionados a la preparación de conjugados PEG-LÍPIDO con pesos moleculares definidos estrechamente. Aquellos técnicos con conocimientos medios en la materia pueden darse cuenta que la siguiente descripción detallada de la presente invención es ilustrativa solamente y no intenta de ninguna manera limitar. Otras modalidades de la presente invención pueden ser sugeridas por estos a aquellas personas con conocimientos medios en la materia, teniendo por ello el beneficio de la presente divulgación. Ahora se va a referenciar en detalle la implementación de la presente invención. [013] Con fines de claridad, no todas las características de las rutinas de la implementación descrita aquí no son mostradas ni descritas. Podrá ser apreciado por supuesto que cualquiera de tales implementaciones actuales, numerosas decisiones de implementaciones específicas pueden ser realizadas a fin de lograr los objetivos específicos del investigador, tales como conformidad con las aplicaciones y restricciones relacionadas con los negocios, y que sus objetivos específicos variarán de una a otra implementación y de un desarrollador a otro. Además, podrá ser apreciado que un esfuerzo en tales desarrollos puede ser complejo y consumidor de tiempo, pero nunca sería una rutina industrial para aquellos técnicos con conocimientos medios en la materia con los beneficios de esta divulgación. [014] Cuando se emplean conjugados PEG-LÍPIDO como vehículos dispensadores de fármacos, se hace enormemente necesario usar conjugados bien caracterizados y altamente puros. Por ejemplo, la patente estadounidense número 6. 610. 322, la cual es incorporada aquí como referencia, enseñar que variando la longitud del PEG y las cadenas acil afectan los parámetros de empacado de los conjugados que a su vez determinan si las composiciones de conjugados PEG-Lípido forman o no liposomas. Adicionalmente para afectar sus la estructura física de las composiciones farmacéuticas, la elección del tamaño de los lipidos y el PEG puede tener efectos significativos en la farmacocinética y estabilidad cuando se formulen los compuestos farmacéuticos específicos con los conjugados PEG-lípido. Por lo tanto, lotes uniformes de conjugados con cadenas de PEG monodispersas de un tamaño específico es son a menudo altamente preferidas sobre lotes que tienen un rango de longitudes de PEG. [015] La presente invención provee conjugados PEG-lípido de alta pureza con cadenas PEG monodispersas, y compuestos y métodos para la síntesis de estos conjugados PEG-Lípido partiendo de oligómeros PEG de peso molecular entre alrededor de 110 y alrededor de 300 daltons. La presente invención también probé métodos para la preparación de conjugados PEG-Lípido incluyendo vanos lipidos tales como ácidos grasos saturados e ¡nsaturados o ácidos biliares. Tales conjugados PEG Lípido pueden ser usados para la liberación de fármacos, especialmente para administración intravenosa de agentes pocos solubles en agua. [016] Generalmente, la invención incluye composiciones y métodos para sintetizar conjugados PEG-Lípido comprendiendo una columna vertebral de glicerol con una o dos cadenas de PEG monodispersas y uno o dos grupos de lipidos PEGados a la columna vertebral. Los grupos espaciadores o de unión pueden ser incluidos entre la columna vertebral y las cadenas PEG y/o grupos de lipidos. [017] Las variaciones de la invención incluye columnas vertebrales de glicerol con dos lipidos y una cadena PEG monodispersa (ambos isómeros), columna vertebral de glicerol con un lípido y dos cadenas PEG monodispersas (ambos isómeros), y columnas de glicerol con un lípido y una cadena monodispersa de PEG (todos isómeros) donde la tercera posición en la columna vertebral pueden consistir en varios compuestos o fracciones. [018] adicionalmente, la invención provee métodos para hacer isómeros 1 ,2 ó 1,3 glicerol, puros. El comercialmente disponible lípido diester 1,2 glicerol puede ser usado para formular muchos compuestos por medio de unir nuevas porciones a la posición disponible en la columna vertebral del glicerol. Sin embargo, ocurren transformaciones de posición durante almacenamiento de estos diesteres 1 ,2 glicerol resultando en la formación del isómero se más estables 1,3 glicerol, el cual puede estar presente en fracciones tan grandes como alrededor del 30%. La presente invención es la única posibilidad para producir y mantener la pureza de los enantiómeros 1 ,2 ó. 1 ,3 glicerol. Mientras los isómero 1 ,2 ó 1 ,3 puede algunas veces ser funcionalmente equivalente, la elección del isómero puede tener implicaciones en una gran variedad de procesos de liberación tales como transporte intracelular de moléculas lipofílicas así como su uso como vehículos en aplicaciones farmacéuticas. Por ejemplo, los isómeros pueden diferir en habilidad para estabilizar un compuesto durante su disolución y almacenamiento.

La estructura química 1 ilustra la diferencia en la conformación esférica de dos de tales isómeros.

Estructura química 1 : dibujos 3D de 1 (1) 1 ,2-dimiristoil-glicerol-3-dodecaetilenglicol y (2) 1,3 dimiristoil-glicerol-3-dodecaetilenglicol. [019] Los conjugados que tienen cadenas PEG monodispersa hasta de 1200 altos son útiles para varias aplicaciones de liberación de fármacos. Los conjugados donde las cadenas PEG miden entre alrededor de 300 y 600 daltons son especialmente útiles para formular formas de dosificación liquida tales como soluciones para inyección intravenosa o para ingestión oral. Los conjugados donde las cadenas PEG miden alrededor de entre 600 y 1200 daltons son especialmente útiles para formas de dosificación sólidas tales como cápsulas. Una combinación de estas es útil para hacer una forma de dosificación sólida para agentes pobremente solubles agua en los cuales una forma líquida de los conjugados arriba citados, generalmente con cadenas PEG entre alrededor de 300 a 600 Daltons, es usada como un solvente y la forma sólida de los conjugados ya citados, típicamente con cadenas PEG entre alrededor de 600 a 1200 daltons, es usada como un solidificante. [020] La presente invención incluye proveer métodos de síntesis convenientes y económicos para preparar conjugados PEG-lípido monodíspersos y proveer varios grupos de unión lineales para conjugar un lípido a un polímero. La presente invención provee varias ventajas tales como una síntesis simplificada, gran rendimiento del producto y bajo costo de los materiales de arranque puesto que los oligomeros PEG disponibles comercialmente son extremadamente caros, hacerlos significa un costo prohibitivo para producción a gran escala de conjugados PEG lípido similares. Además, el presente método de síntesis es preferible para preparar un amplio rango de conjugados PEG-espaciador-lípido. [021] La síntesis de cadenas PEG monodispersas incluye al comienzo, unir una cadena corta de PEG (con 1 a 6 subunidades) a una columna vertebral de glicerol protegida. La cadena PEG es llevada a una longitud específica por eterificación. Un ejemplo está mostrado en el Esquema de Reacción 1.

Esquema de reacción 1: síntesis de 3-monometoxidodecaetilenglicol (mPEG-12)-glicerol. [022] En el esquema de reacción uno un primer reactivo oligómero PEG (b) es preparado protegiendo (por ejemplo, por benceno) un primer término de un oligómero PEG y creando un segundo término reactivo (por ejemplo, por un grupo tosil como se muestra). El primer oligómero reactivó es entonces combinado con un glicerol que tiene dos grupos -OH protegidos (a). El grupo protector en el glicerol es seleccionado para ser estable bajo condiciones que remueve el grupo protegido en el primer término del primer oligómero reactivo. En segundo término reactivo del oligómero se une con él -OH libre del glicerol para formar un intermediario glicerol-oligómero (c). El grupo protector en la primera terminal de la porción del oligómero del intermediario es entonces removido para exponer un grupo -OH reactivo (d). Un segundo oligómero PEG reactivo (e) es adicionado al intermediario para formar una cadena PEG extendida unida a la columna vertebral del glicerol (f). En el esquema de reacción 1 , en segundo oligómero PEG reactivó está protegido en su terminal primera por un grupo metil terminal, porque se desea una cadena PEG de 12 subunidades. Si se desean cadenas más largas, el grupo protector en el segundo reactivo oligómero PEG es seleccionado de manera que pueda fácilmente ser removido para extensiones adicionales de. la cadena PEG, por ejemplo usando (b) otra vez como el segundo oligómero. Una vez que se logró la longitud deseada de la cadena, los grupos protegidos de la columna vertebral de glicerol son removidos para formar el producto (g). El producto (g) que tiene una cadena PEG monodispersa, puede entonces ser reaccionada adicionalmente para añadir los lipidos deseados en la columna vertebral de glicerol. Similarmente la síntesis puede empezar con una cadena PEG corta o preparar el hexaetilenglicol a partir de la eterificación de dos trietilenglicoles o entre un trietilenglicol y un monometoxi trietilenglicol. En esta ruta, se incluirán dos pasos más en la síntesis. [023] En el esquema de reacción 1, la remoción de los grupos protectores bencil para exponer un grupo hidroxil libre puede ser lograda por cualquier reactante adecuado. Por ejemplo, el grupo bencil puede ser removido por hidrogenación en presencia de un catalizador de paladio antes que la cadena PEG sea extendida por repetición del proceso de eterificación. [024] Siguiendo la síntesis de una cadena PEG en una columna vertebral de glicerol como fue ejemplificada en el esquema de reacción 1, el grupo protector es removido del glicerol, el cual resulta en dos grupos hidroxil libres. El grupo hidroxil libre puede ser reaccionado cón un ácido graso en la presencia de N, N-dimetilamino piridina (D AP) en un solvente inerte como mostrado abajo en el esquema de reacción 2.

Esquema de reacción 2: Síntesis de 1,2- dimiristoil-rac-3-PEG 12-glicsrol [025] El esquema de reacción 3 describe una manera de la preparación de un lípido activado para ser usado en el esquema de reacción 2. En este método, el grupo carboxil de los ácidos grasos es activado con un agente de activación adecuado. Por ejemplo el cloruro oxalil puede ser usado como se muestra.

Esquema de reacción 3, Formación del Miristoil cloruro [026] Mientras a continuación se ilustra un método para sintetizar un conjugado PEG-lípido particular con una única cadena PEG monodispersa, la invención más ampliamente enseña métodos y materiales para hacer un rango amplio de conjugados PEG-lipido. [027]" El primer oligómero PEG reactivo comprende preferiblemente entre 3:07 unidades CH2CH20, y más preferiblemente tiene entre 4 y 7 unidades CH2CH20, sabiendo que el oligómero puede ser de cualquier longitud hasta 12 unidades. Oligómeros reactivos adicionales también preferiblemente comprenden entre 3:07 unidades CH2CH20, y más preferiblemente entre 4 y 7 unidades CH2CH20, siempre y cuando los oligómeros adicionales fueran de cualquier longitud hasta un límite de 12 unidades. [028] Los conjugados PEG-lípido de la presente invención cada uno tiene uno o dos cadenas PEG monodispersas. Mientras no se nota de otra manera, más del 50 por ciento de las cadenas PEG en un conjugado particular tiene el mismo peso molecular. Más preferiblemente, más del 75 por ciento tiene el mismo peso molecular. Lo más preferiblemente es que más del 90 % tenga el mismo peso molecular. También mientras no se note de otra manera, preferiblemente las cadenas PEG están comprendidas de entre alrededor de 6 y 27 subunidades de polímero. Más preferiblemente las cadenas PEG están comprendidas entre alrededor de 7 y 27 su unidades de polímeros. Lo más preferiblemente es que las cadenas PEG estén comprendidas de entre alrededor de 7 a 23 su unidades de polímeros. [029] En el caso de la síntesis del 1 ,2-dimiristoil-rac-PEG 12-glicerol, el glicerol está protegido de manera que la cadena PEG está formada en la tercera posición. (Ver Esquema de Reacción uno, compuesto (a). Puede ser apreciado que empleando derivados de glicerol alternativos como componente de arranque resultará en conjugados que tienen la cadena PEG en posición diferente. Por ejemplo, protegiendo las posiciones uno y tres de glicerol resultará en una cadena PEG en la segunda posición (R). Un derivado de glicerol que puede ser usado para tal síntesis está mostrado en la Estructura Química 2.

Estructura Química [030] Si se desea un conjugado con dos cadenas PEG, pueden ser usados los derivados del glicerol como se muestra en la estructura química 3 o en la estructura química 4. En estas estructuras, R indicar un grupo protector que puede ser reemplazado más tarde, o un lípido acil que puede comprender la estructura final. Para estos conjugados, las cadenas PEG son crecidas en tándem y serán idénticas en longitud. Los conjugados teniendo dos cadenas PEG son particular en mente útiles en algunas circunstancias, de acuerdo a como los conjugados PEG están unidos.

Estructura química 3 Estructura química 4 [031] Podría ser deseable incorporar grupos enlazadores diferentes al oxil entre la columna vertebral del glicerol y la(s) cadena(s) PEG. Por ejemplo, una enlazador tiol se puede emplear para aplicaciones donde una unión lábil es útil. Otros enlazadores útiles están anotados en la tabla 3 y en otros lados de esta descripción. Para síntesis de conjugados que tengan enlazadores alternativos entre la columna vertebral y la cadena(s) PEG, el grupo enlazador es primero unido a una columna vertebral de glicerol protegida (por ejemplo la estructura química 3). Entonces el primer oligómero PEG reactivo es unido al extremo y libre del elemento de unión y el PEG es extendido tanto como se desee. Alternativamente, el primer oligómero PEG que activo puede ser unido al enlazador antes de unir el enlazador a la columna vertebral. En modalidades con enlazadores, los reactante es PEG preferidos tienen grupos funcionales hidroxil, amino, carboxil, isocianato, tiol, y carbonato. Los reactantes-PEG preferidos para ser usados en esta modalidad del método inventivo incluye PEG tosilato, PEG mesilato y succinil PEG. [032] Podría ser también deseable incorporar el mismo grupo enlazador entre la columna vertebral de glicerol y el grupo lípido(s). Para obtener tales conjugados, el enlazador puede estar unido con el LÍPIDO antes de unirse a la columna vertebral, o el enlazador puede ser unido a la columna vertebral antes de unir el lípido. [033] En los siguientes métodos describen el crecimiento de la cadena PEG en una columna vertebral que está protegida por un grupo de protección removible. Entonces, después de que el PEG estaba en su lugar, el grupo o grupos lípido son unidos a la columna vertebral. Sin embargo, es también posible usar uno o dos lípidos como un grupo o grupos protector en la columna vertebral antes de hacer crecer la cadena PEG. Este método alternativo es especialmente útiles con cadenas alkil que no tienen grupos reactivos que necesita ser protegido durante la unión y la extensión PEG. Es mucho menos útil cuando son deseados los conjugados ácidos esteroides, como los ácidos biliares tienden a tener muchos grupos laterales que crean salidas durante la extensión y la unión PEG. [034] Mientras los método de síntesis descritos arriba son útiles para ser muchos compuestos comprendidos en la invención, en algunos casos podría ser necesario o más conveniente emplear otros métodos. Por ejemplo, si es deseado un conjugado tiene un ácido biliar y dos cadenas PEG de 27 unidades, tal conjugado puede ser construido sintetizando las cadenas PEG monodispersas antes de unir todas a la columna vertebral de glicerol. Similarmente, es posible hacer muchos de los compuestos de la invención incluyendo PEG más pequeños usando cadenas PEG sintetizadas antes de unir las a la columna vertebral del glicerol. [035] La síntesis de otros compuestos de la invención pueden también requerir consideraciones especiales. Los conjugados que tienen enlazadores entre la columna vertebral y los grupos acilos o PEG algunas veces también serán hechos construyendo las cadenas PEG monodispersas antes de unir las a la columna vertebral, dependiendo de consideraciones tales como la naturaleza de los ligandos en los enlazadores. [036] Los conjugados de la invención incluye en aquellos con un único lipido y una única cadena PEG monodispersa unida a una columna vertebral de glicerol, donde la tercera posición en la columna vertebral está ocupada por otra fracción elegida entre un grupo hidroxilo y un agente activo. Cabe señalar que, mientras transformación posicional ocurre, durante almacenamiento de 1,2 glycerol diesteres con grupos hidroxil los libres como se nota, la posibilidad de R arreglo será más pequeña para conjugados con un lipido simple y una cadena PEG monodispersa única unida a una columna vertebral de glicerol con un grupo hidroxil libre sea la cadena PEG es más larga que alrededor de seis su unidades, puesto que se requiere gran cantidad de energía para mover una cadena PEG (a causa de que el estérico, el tamaño molecular y la polaridad difieren de la de un lipido). También, los isómeros 1 ,3 son generalmente más estables que los isómeros 1,2. [037] Siguiendo los principios descritos arriba, pueden ser sintetizados una gran variedad de conjugados PEG-lípido teniendo una o más cadenas PEG monodispersas. Una gran variedad de modalidades especificas son descritas a continuación. [038] Los lípidos apropiados para síntesis de los conjugados PEG lípido incluye ácidos biliares (ácidos esteroidales) así como cadenas de alquilo. Por lo tanto, la presente invención incluye una variedad de conjugados PEG-lípido preparados por el presente método de síntesis en fase líquida. Los conjugados acilos esteroidales-PEG pueden ser incorporados en liposomas como una fracción objetivo para liberación de fármacos fase lipídica en células especificas o en sistemas de liberación de fármacos auto-emulsificantes (SEDDS). [039] Los ácidos biliares (acilos esteroides) constituyen una familia muy abundante de moléculas, compuestos de una estructura de esferoide con 4 anillos, una cadena lateral de cinco u ocho carbonos terminando en un ácido carboxilico, y la presencia y orientación de diferentes números grupos hidroxil. Los 4 anillos están etiquetados de izquierda a derecha A, B, C y O, con el con el anillo D más pequeño en un carbono que los otros tres. Un ácido biliar ejemplar es mostrado en la Estructura Química 5. Todos los ácidos biliares tienen cadenas laterales. Cuando subtienden un grupo carboxil que puede estar unido a una amida con taurina o glicina, los grupos hidroxilo nucleares pueden ser este criticados con glucouronidos o sulfato los cuales son esenciales para la formación de sales de bilis soluble en agua a partir de bilis disueltas en alcohol.

R1 y R2 pueden ser hidroxil o protón Estructura Química 5 [040] En forma normal solamente unas pocas modificaciones en la estructura han sido estudiadas con respecto a las propiedades físico químicas de la sales de bilis. Una publicación de patente (WO 02083147) divulga conjugados de ácidos grasos sal biliar en la cual un ácido biliar o sal biliar es conjugada en la posición 24 (carboxil) con un aminoácido apropiado, y la ligadura C=C insaturada es conjugada con uno o dos radicales de ácido graso con 14 a 22 átomos de carbono. Estos conjugados pretenden ser usados como una composición farmacéutica para la reducción de colesterol en sangre, por el tratamiento de hígado graso, hiperglicemia y diabetes. Otra solicitud de patente la US 20032120) divulga el pro fármaco Aciclovir-ácido biliar en el cual un grupo en las ante puede ser usado entre la sido biliar y compuestos. [041] En una modalidad general, la presente invención provee conjugados PEG-lípido acordes con la Fórmula General I. La diferencia entre las dos variantes mostradas en la fórmula uno es la posición relativa de las cadenas del polímero y el lípido a lo largo de la columna vertebral del Formula I [042] Existen muchas modalidades alternativas de la Fórmula I. En una variación de la fórmula uno, R1 y R2 pueden ser el mismo o diferente y estar seleccionado del grupo formado por los grupos alquil saturados o insaturados listados en la tabla 1 o en la tabla 2; X es -O-C(O)-, -O-, - S-, -NH-C-(0)-o una enlazador seleccionado de la tabla 3; y P es una cadena PEG. [043] En otra variación de la fórmula I, R1 o R2 es un grupo alquil y el otro es H. En estas modalidades de la fórmula uno, al menos R uno u R dos es un grupo alquil saturado o insaturados que tiene entre 6:22 átomos de carbono y más preferiblemente entre 12 y 18 átomos de carbono. El término "alquil" abarca ácidos grasos saturados o insaturados. [044] La presente invención también probé conjugados PEG-lípido acordes con la fórmula General II: Formula II [045] Una vez más, existen varias modalidades alternativas de la fórmula II. En una variación de la fórmula II, R es un grupoalquil listado en la tabla 1 o tabla 2; X es -O-C(O)-, -O-, -S-, -NH-C-(O)-o un enlazador seleccionado de la tabla 3; y P1 y P2 son la misma cadena PEG, Al proveer dos cadenas PEG enlazadas, los conjugados de acuerdo con la fórmula II pueden proveer de ventajas sobre los conjugados que tienen una única cadena PEG. [046] Tabla 1: Lípidos saturados a ser usados en la invención [047] Tabla 2: Lípidos Insaturados para ser usados en la presente invención [048] Tabla 3: Enlazadores adicionales para usarse en la invención [049] Los conjugados PEG-lípido de la presente invención también incluyen compuestos donde la porción del lipido comprende uno o dos ácidos biliares. Estos conjugados tienen la misma estructura que la mostrada en la fórmula I y formula II, excepto que los grupos alquüos están remplazados por los ácidos biliares. Por conjugados de ácidos biliares, variaciones y modalidades preferidas son los mismos que los descritos para los conjugados PEG-alquilo. Debido a que los ácidos biliares son similarmente lipofílicos a los grupos alquilo, los conjugados de ácidos biliares también comparte similares propiedades físicas y son generalmente adecuados para algunos de los mismos usos que los conjugados PEG-alquilo. [050] La estructura química seis muestra dos variantes de la presente invención teniendo una cadena PEG única y dos ácidos biliares unidos a la columna vertebral del glicerol.

Estructura Química 6 [051] En la estructura química 6, Y1 y Y2 pueden ser iguales o diferentes y son OH o H o CH3, o estar seleccionado de acuerdo con los ácidos biliares mostrados en la tabla 4. Similarmente, los ácidos biliares con cadenas laterales diferentes (como se muestra la tabla 4) puedes ser conjugados a la columna vertebral del glicerol. La tabla 4 lista los ácidos biliares y sus derivados que son útiles para llevará a cabo la presente invención. [052] Tabla 4: Ácidos biliares (ácido de esferoides) y sus análogos para uso en la presente invención Nombre Estructura Química Otro nombre [053] Todavía otra variación de la invención incluye compuestos de acuerdo a la fórmula uno donde tanto R1 como R2 es una solo biliar y el otro es un grupo alquilo. Un ejemplo de esta variación de conjugado polímero lípido es mostrado en la estructura química 7.

Estructura Química 7 [054] En la estructura química 3, Y1 y Y2 son iguales o diferentes y son OH o H o CH3 o seleccionado de acuerdo con el ácido biliar mostrado en la tabla 4. También, la cadena lateral del ácido biliar puede variar de acuerdo con la estructura mostrada en la tabla 4. R es un grupo alquilo saturado o insaturado seleccionado a partir de la tabla 1 y la tabla 2. [055] Otra modalidad referida para el compuesto de la fórmula general II es un conjugado PEG-ácido biliar acth corte a la Estructura Química 8.

Estructura Química 8 [056] En la estructura química 8, Y1 y Y2 son OH o H o CH3 o seleccionada acordes con los ácidos biliares mostrados en la tabla 4. También, la cadena lateral del asido biliar puede ser variada acorde a la estructura mostrada en la tabla 4. [057] Otra modalidad adicional preferida para el compuestos de la fórmula general II es un conjugado PEG-colesterol acorde a cualquiera de las estructuras mostradas en la Estructura Química 9 Estructura Química 9 [058] otra modalidad de la presente invención está representada en el esquema de reacción 4. En este método, cualquier ácido biliar adecuado, tal como un ácido cólico es reaccionado con 3-mPEG-12-glicerol en la presencia de ?,?-dimetilamino piridina (DMAP) en diclorometano para producir el producto final de 1,2-dicoloil-rac-3-mPEG-glicerol. Sera apreciado que pueden ser usadas las cadenas PEG monodispersas de muchas longitudes discretas.

Esquema de reacción 4: síntesis de 2-dicoloil-rac-3-mPEG 12-glicerol [059] Otra modalidad de la presente invención, representada en el esquema de reacción cinco, comprende reacción del DL-1 ,2-y su propilideneglicerol con ácidos grasos para dar I o con colesterol para dar II, respectivamente. La remoción de los grupos y su propi los por cualquier método deseado proveer productos intermedios III y IV respectivamente.

Esquema de reacción 5: síntesis de intermediarios de conjugados PEG-lipido [060] El método descrito puede ser usado para preparar una gran variedad de conjugados PEG lípido novedosos. Por ejemplo, los métodos pueden ser usados para preparar 3-PEG-1.2-alquilglicerol en forma pura conteniendo cualquier cadena de ácido graso. Los ácidos grasos preferidos tienen una longitud de cadena de carbonos de entre alrededor de C6 a C22, preferiblemente entre alrededor de 10 y alrededor de C18. [061] Los métodos descritos pueden ser usados para preparar una gran variedad de conjugados nuevos PEG-lipido. Por ejemplo, los métodos pueden ser usados para preparar ácido 3-PEG-1.2-diesteroil-glicerol en forma pura conteniendo cualquier cadena de ácido biliar. [062] Los métodos descritos pueden ser usados para preparar una gran variedad de conjugados PEG-lipido con ramas. Por ejemplo, los métodos pueden ser usados para preparar 3-alquilgl-1 ,2bisPEG-glicerol en forma pura conteniendo cualquier cadena de ácido graso. Los ácidos grasos preferidos se encuentran dentro del rango de longitud de cadena de carbonos de alrededor de C6 a C22, preferiblemente entre alrededor de C10 y alrededor de C18 (Esquema de Reacción 6) Esquema de reacción 6: síntesis de 3-miristoil-1,2-bis(metoxihexaetilen glicol) glicerol [063] El esquema de reacción seis resulta en un compuesto que tiene una columna vertebral de glicerol, un grupo lipido, y dos cadenas PEG monodispersas. Sin embargo, es fácilmente notado que extendiendo la cadena PEG como se ejemplificada en el esquema de reacción uno puede ser hecho con otros oligómeros tales como trietilenglicol o entre trietilenglicol y monotrietilenglicol como se describe en la sección precedente. [064] Los métodos descritos pueden ser usados para preparar una gran variedad de conjugados PEG-lípidos rameados. Por ejemplo, los métodos pueden ser usados para preparar ácido 3-esteroid-1 ,2-bisPEG-glicerol en forma pura conteniendo ácidos esteroides-glicerol en forma pura conteniendo cualquier cadena de ácido biliar Esquema de Reacción 7 Esquema de Reacción 7: síntesis de 3-coloil-1 ,2-bis(metoxihexaetilenesuccinil glicol)-3-colato [065] Un uso preferido de los PEG-lípido inventivos es en la preparación de liposomas y otras formulaciones que contienen lipidos. Acorde con la presente invención, una composición farmacéutica puede incluir uno o más vectores genéticos, moléculas anti sentido, en proteínas, péptidos, lipidos reactivos o fármacos. Por ejemplo, el agente activo puede incluir uno o más fármacos (tales como una o más drogas anticáncer o otros agentes anti-cáncer). Típicamente los agentes activos hidrofílicos serán adicionados directamente a la formulación y los agentes activos hidrofóbicos serán disueltos por PEG-lípido antes de mezclarlos con los otros ingredientes. [066] Agentes activos adecuados que pueden ser presentados en las formulaciones inventivas se incluyen uno o más vectores genéticos, moléculas acth y sentido, proteínas, péptidos, lípidos vio activos o fármacos, tales y como han sido descritas arriba. Los PEG lipido inventivos pueden ser usados para administrar a agentes activos que son seguros en la presencia de oligómeros PEG para uso intravenoso. [067] Los agentes activos preferidos que son compatibles con la presente invención incluyen agentes que actúan en los nervios periféricos, receptores adrenérgicos, receptores colinérgicos, músculos esqueléticos, sistema cardiovascular, músculos lisos, sistema circulatorio sanguíneo, sitios sinapticos, sitios de junción neuroefector, sistemas endocrinos y hormonal, sistema inmunológico, el sistema reproductivo, el sistema esquelético, el sistema alimentario y excretor, el sistema vista amino, y el sistema nervioso central. Los agentes adecuados pueden ser seleccionados a partir de, por ejemplo, proteínas, enzimas, hormonas, nucleótidos, poli nucleótidos, núcleo proteínas, polisacáridos, gluco proteínas, glico proteínas, lipoproteínas, Paul y péptidos, esteroides, terpenoides, retínoides, antagonistas receptor H2 anti úlcera, fármacos anti úlcera, agentes hipocalcemicos, humectantes, cosméticos, etc. Los agentes activos pueden ser analgésicos, anestésicos, agentes antiarrítmicos, antibióticos, agentes ante alérgicos, agentes anti colnérgicos, agentes anti cáncer (por ejemplo, mitoxantron, taxanos, paquitlaxel, Campotecin y derivados campotecin (por ejemplo SN-38), gemcitabina, antaciclinas, oligonucleótidos anti sentido, anticuerpos, citotoxinas, inmunotoxinas, etcétera.), agentes anti hipertensivos (por ejemplo dihidropiridinas, antidepresivos, agentes antidiabétes, agentes anti epilépticos, corticoesteroides antiinflamatorios, agentes para tratar las enfermedades Alzheimers o Parkinson's agentes anti úlcera, agentes anti protozoarios, ansiolíticos, tiroides, anti tiroides, antivirales, anoréticos, bifosfonatos, agentes inotrópicos cardiacos agentes cardiovasculares, corticoesteroides, diuréticos, agentes dopaminergicos, agentes gastrointestinales, hemostáticos, agentes hipercolesterol, agentes anti hipertensivos, agentes ¡nmunosupresivos, agentes anti gota, ante malaria, agentes anti migraña, agentes antimuscarínicos, agentes antiinflamatorios, tales como agentes para tratar reumatología, artritis, psoriasis, enfermedad del estómago inflamado, enfermedad de Crohn, o agentes para tratar enfermedades de desmielización incluyendo esclerosis múltiple, agentes oftálmicos; vacunas (por ejemplo contra lípidos de la influenza, neumonía, hepatitis a, hepatitis B, hepatitis C, subnidades B de la toxina del cólera, tifoidea, plasmodium falcíparum, difteria, tétanos, virus del herpes simple, tuberculosis, VIH, bórdetela pertusis, measles, mumps, rubéola, toxoides bacteriales, virus vaccínea, adenovirus, virus SARS, virus canarios, bacillus Guerín calmette, vacuna neumonía klebsiela, etc.), antagonista de receptores histamina, hipnóticos, agentes protectores de los ríñones, agentes reguladores de lípidos, relajantes musculares, neurolépticos, agentes neurotrópicos, agonistas y antagonistas opioides, parasimpáticomiméticos, inhibidores de proteasas, prostaglandinas, sedantes, hormonas sexuales (por ejemplo andrógenos, estrógenos, etcétera), estimulantes, sinpatomiméticos, vasodilatadores y xantinas y análogos sintéticos de estas especies. Los agentes terapéuticos pueden ser nefrotóxicos, tales como Ciclosporinas y anfotericina B, o cambio tóxicos, tales como anfotericina B y paclitaxel, en top sido, citoquinas, Ribosimas, interferones, olivo nucleótidos, siRNAs, RNAis y derivados funcionales de los siguientes. [068] Los agentes quimioterapéuticos son bastante adecuados para usarse en este método inventivo. Las formulaciones PEG-lípido inventivas que contienen agentes quimioterapéuticos pueden ser inyectados directamente en el tejido del tumor para la liberación del agente quimioterapéutico directamente en las células del cáncer. En algunos casos, después de la extirpación de un tumor, las formulaciones de liposomas pueden ser implantadas directamente en la cavidad resultante o puede ser aplicada a los tejidos remanentes como un recubrimiento. [69] Los PEG-lípido en la presente invención pueden ser usados para preparar varias formas de dosificación incluyendo tabletas, cápsulas, pildoras, gránulos, supositorios, soluciones, suspensiones y emulsiones, pastas, ungüentos, geles, cremas, lociones, gotas para los ojos, polvos y espráis en adición a excipientes solubles o insolubles en agua. [070] Los conjugados PEG-lípido inventivos pueden ser usados para la liberación de agentes activos en células blanco en vivo. Por ejemplo, la composición puede ser liberada oralmente, por inyección (por ejemplo intravenosa, subcutánea, parenteral, intraperitoneal, por inyección directa en los tumores o sitios que necesitan el tratamiento), por inhalación, por liberación de la mucosa, localmente, y/o rectalmente o por tantos métodos como son conocidos o desarrollados. Las formulaciones conteniendo PEGilate cardiolipina puede también ser administrada tópicamente, por ejemplo como una crema, un ungüento de la piel, suavizante de piel seca, humectante, etc. [071] Para uso en vivo, la invención provee el uso de una composición como aquí se describe con teniendo uno o más agentes activos para preparar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad. En otras palabras, la invención provee un método de uso de una composición tal y como se describe aquí, conteniendo uno o más agentes activos, para tratar una enfermedad. Típicamente, la enfermedad está presente en un paciente animal o humano. En una modalidad referida, la enfermedad es cáncer, en cuyas circunstancias, la composición inventiva comprende uno o más agentes anti cáncer como agentes activos. Es seguido por ejemplo, en concordancia con la INVENCION, la composición como se describe aqui puede ser empleada sola o junto con otros medicamentos (por ejemplo quimioterapia o radioterapia) para tratar cánceres tales como aquellos de la cabeza, cuello, cerebro, sangre, pecho, pulmones, páncreas, hueso, bazo, vejiga, próstata, testículos, colon, riñon, ovarios y piel. Las composiciones de la presente invención, que comprenden uno o más agentes anti cáncer, son especialmente preferidos para tratar leucemias, tal como leucemia aguda (por ejemplo, leucemia linfocítica aguda o leucemia mielocítica aguda). El sarcoma de Kaposis también puede ser tratado usando las composiciones y métodos de la presente invención. [072] Las siguientes estructuras adicionales ilustra la presente invención.

Estructura Química 10 [073] En la química estructura X es un enlazador que incluye oxi, tiol, amino, -COO-, -OCOO-, succinil, haloide y aquellos listados en la tabla 3. n es el número de unidades repetidas. Estas estructuras representan intermediarios en crecimiento de una cadena PEG monodispersa única en una columna vertebral de glicerol, entonces n está generalmente entre alrededor de 6 y 21. La cadena PEG es extendida a través de una eterificación secuencial empezando con una cadena pequeña tal como un trietilenglicol o de trietilenglicol directamente unidos al glicerol vía un enlazador. El grupo terminal en la cadena PEG puede ser, pero no está limitado a, un grupo metilo.

Estructura Química 11 [074] En la estructura química 11, X es enlazador incluyendo oxi, tiol, amino, -COO-.-OCOO-, succinil, haloide y aquellos listados en la tabla 3."n" es el número de unidades repetidas. Estas estructuras representan el paso final en el crecimiento de dos cadenas PEG monodispersas en una columna vertebral de glicerol. La R es un grupoalquil tal como un ácido graso saturado (Tabla 1 ) o insaturado (Tabla 2) o un grupo colil o análogo (tabla 4). Los grupos terminales aparte del metilo pueden estar incluidos en las cadenas PEG.

Estructura Química 12 [075] en la estructura química dos en equis es el enlazador que incluye oxi, tiol, amino, -COO-,-OCOO-, succinil, haloide y aquellos listados en la tabla 3. "n" es el número de unidades repetidas. Estas estructuras representan el paso final en el crecimiento de dos cadenas PEG monodispersas en una columna vertebral de glicerol. Similarmente la cadena PEG es extendida a través de una etenficación secuencial empezando con cadena pequeña tal como un triethylene glicol o un tetra etilenglicol directamente unido al glicerol vía un enlazador. La R es un grupoalquil tal como un ácido graso saturado (Tabla 1) o insaturado (Tabla 2) o un grupo colil o análogo (tabla 4). Los grupos termínales aparte del metilo pueden estar incluidos en las cadenas PEG.

Estructura Química 13 [076] En la estructura química 13 X y L es el mismo o diferente enlazador incluyendo oxi, tiol, amino, -COO-,-OCOO-, succinil, haloide y aquellos listados en la tabla 3. "n" es el número de unidades repetidas. Estas estructuras representan el paso final en el crecimiento de dos cadenas PEG monodispersas en una columna vertebral de glicerol., Entonces "n" esta generalmente ubicada entre alrededor de 5 y 12. La R es un grupoalquil tal como un ácido graso saturado (Tabla 1) o insaturado (Tabla 2) o un grupo colil o análogo (tabla 4). Los grupos terminales aparte del metilo pueden estar incluidos en las cadenas PEG. [077] las modalidades de la presente invención están descritas aquí en el contexto de la preparación de composiciones farmacéuticas incluyendo conjugados PEG-lípido purificado para incrementar la solubilidad y el mejoramiento de la liberación de agentes activos. Las composiciones aproximativas preferibles para la formulación de productos farmacéuticos están descritos aquí en forma General, sin embargo fármacos típicamente diferentes tendrán formulaciones óptimas diferentes. [078] Para las soluciones IV, la concentración preferible del fármaco es de 0.1% a 30%. Más preferiblemente es de 1 a 10%. Y más preferiblemente entre 1 y 5%. La relación preferible entre el PEG-lípido y el fármaco (PEG-lípido/fármaco) es 1 a 20. Más preferiblemente 1 a 10. Y la más preferible 1 a 5. [079] Para soluciones orales, la concentración preferible de fármacos se localiza entre 1 y 40%. Más preferiblemente entre 2.5 y 30%. La concentración más preferible se ubica entre 5 y 30%. La relación preferible entre el PEG-lípido y el fármaco (PEG-lípido/fármaco) es entre 0.5 y 20. Más preferiblemente 1 a 5. Y la más preferible 1 a 3. [080] Para preparaciones oftálmicas, la concentración preferible de fármacos se localiza entre 0.01 y 5%. Más preferiblemente entre 0.05 y 2%. La concentración más preferible se ubica entre 0.1 y 2%. La relación preferible entre el PEG-lípklo y el fármaco (PEG-lipido/fármaco) es entre 1 y 20. Más preferiblemente 3 a 15. Y la más preferible 5 a 10. [081] Para soluciones tópicas, la concentración preferible de fármacos se localiza entre 0.05 y 5%. Más preferiblemente entre 0.1 y 5%. La concentración más preferible se ubica entre 0.1 y 2%. La relación preferible entre el PEG-lipido y el fármaco (PEG-lípido/fármaco) es entre 1 y 20. Más preferiblemente 3 a 15. Y la más preferible 5 a 10. [82] Para cápsulas orales, el contenido del fármaco en la cápsula es preferiblemente 10 a 250 miligramos. Más preferiblemente entre 25 y 200 miligramos. Y el contenido más preferible es 25 a 100 miligramos. La relación preferible entre el PEG-lipido y el fármaco (PEG-lípido/fármaco) es entre 1 y 10. Más preferiblemente 1 a 5. Y la más preferible 2 a 5. [083] Para preparaciones tópicas, la concentración preferible de fármacos se localiza entre 0.05 y 5%. Más preferiblemente entre 0.1 y 5%. La concentración más preferible se ubica entre 0.1 y 2%. La relación preferible entre el PEG-lípido y el fármaco (PEG-lípido/fármaco) es entre 1 y 50. Más preferiblemente 3 a 20. Y la más preferible 5 a 10. [84] Mientras que la anterior discusión fue dirigida a conjugados polímero-lípido que tienen una columna vertebral de glicerol e incluyen cadenas PEG, la invención incluye además columnas vertebrales y polímeros alternativos. Los 3-amino-1, 2-propanediol, 3-bromo-1, 2-propanediol, 3-cloro-1, 2-propanediol, 3-fluoro-1 , 2-propanediol, ácido DL-glicérico, ácido aspártico, ácido glutámico y 1 ,2,4-butanetriol pueden ser usados como columnas vertebrales alternativas para sintetizar conjugados PEG-lípido similares. La estructura química 14 ilustra un conjugado de la invención empleando ácido aspártico como una columna vertebral. Para preparar este conjugado, el material de arranque será el alcohol oleoil en lugar del ácido oleico puesto que ya hay dos grupos carboxílicos en el aminoácido. Un enlazador succinato ha sido utilizado para unir el PEG a la columna vertebral. En tal modalidad alternativa, la cadena PEG (o cadena de polímero alternativo) siempre es mono dispersos.

Estructura química 14: aspartato 1,4-dioleoíl-2-(m PEG-12-succinil amino) [085] Los oligómeros propilenglicol y glicol metileno pueden ser usados como alternativa a los oligómeros etilenglicoles. También, es posible crear co-polímeros o co-polímeros en bloque para estos bloques de construcción básicos. [086] El método de síntesis descrito puede ser modificado en cualquier manera adecuada. Por ejemplo, los PEG-reactantes para uso en el método inventivo puede ser cualquier derivado PEG, el cual es capaz de reaccionar con un grupo hidroxil o amino de glicerol central o grupo 3-amino-1,2-propanediol o semejante o el grupo funcional de cualquier enlazador. [087] El solvente para la reacción de conjugación PEG-lípido en el método inventivo incluye cualquier solvente preferiblemente un solvente aprotico polar tal como el N.N-dimetilformamida (DMF), dimetilsulfoxido (DMSO), piridina, tetrahidrofurano (THF), diclorometano, cloroformo, 1,2-diccloroetano, dioxano y lo semejante. [088] En un aspecto, la invención es un método de preparación de una cadena PEG de una longitud definida, el método comprende a) seleccionar un derivativo del glicerol con un grupo protector del glicerol que sea estable bajo un primer juego de condiciones y convertible a grupos hidroxil libre bajo un segundo juego de condiciones; b) a seleccionar un oligómero PEG inicial con entre uno y doce su unidades, donde el oligómero inicial PEG tiene un grupo de protección de oligómero en su primera terminal y en dicho grupo protector de oligómero convierte a un grupo hidroxilo bajo el primer juego de condiciones, y donde el oligómero PEG tiene un grupo reactivo en su segunda terminal, dicho grupo reactivo forma a una ligadura con un compuesto que tiene un grupo hidroxil libre; c) reaccionar el derivativo glicerol con el oligómero PEG inicial para formar un conjugado glicerol-PEG; d) remover el grupo protector del oligómero exponiendo el conjugado al primer juego de condiciones; e) repetir los pasos . g) y h) entre cero y seis veces adicionales, donde los pasos son como los descritos abajo; f) seleccionar un oligómero PEG que tenga entre dos y once subunidades, donde el oligómero PEG extendedor tiene un grupo reactivo en su segunda terminal, dicho grupo reactivo formar una ligadura con un compuesto que tiene un grupo hidroxil libre; g) reaccionar el conjugado glicerol PEG con el extendedor oligómero PEG para formar un conjugado glicerol PEG extendido; h) remover el grupo protector del oligómero exponiendo el conjugado al primer juego de condiciones; i) terminar la cadena PEG sea por el paso j) o pasos k) y I), donde los pasos son como se escribe a continuación; j) adicionar un grupo terminal al grupo hidroxil libre del conjugado glicerol PEG extendido; o k) seleccionar un oligómero PEG terminal con dos a once subunidades, donde el oligómero terminal P G tiene un grupo reactivo en su segunda terminal, dicho grupo reactivo forma una ligadura con un compuesto que tiene un grupo hidroxil libre; y I) hacer reaccionar el conjugado glicerol- PEG o el conjugado glicerol PEG extendido con el oligómero PEG terminal; y m) exponer el conjugado glicerol- PEG terminado al segundo set de condiciones. El grupo terminal puede ser un grupo metilo. El primer set condiciones puede ser una reducción catalítica. El segundo set de condiciones puede ser exposición al ácido a. El derivativo glicerol puede ser un compuesto representado por la fórmula mostrada como Estructura Química 2. El derivativo del glicerol puede ser un compuesto representado por la fórmula mostrada como Estructura Química 3. El derivativo del glicerol puede ser un compuesto representado por la fórmula mostrada en la estructura química 4. El grupo protector del glicerol puede ser un grupo alquilo. El método puede además comprender el paso de: n) remover el grupo protector glicerol; y o) ligar un grupo lípido a la espina dorsal del glicerol [089] En otro aspecto, la invención es una composición química que incluye un conjugado PEG lípido, el conjugado PEG lípido comprende: una columna vertebral de glicerol; un grupo lípido unido covalentamente a la espina dorsal de glicerol; y una cadena PEG unida covalentamente a la espina dorsal del glicerol, donde la cadena PEG tiene un PM entre aproximadamente 200 y 1200 daltons, y donde más es de alrededor de 75 por ciento de las cadenas PEG de las moléculas conjugadas en la composición tienen el mismo PM. Más del 90 por ciento de las cadenas PEG de las cadenas conjugadas en la composición pueden tener el mismo PM. La cadena PEG puede tener un PM más grande que alrededor de 600 daltons. El lípido puede ser un grupo alquilo. El grupo alquilo puede ser seleccionado a partir de los grupos alquilos de la tabla 1 y 2. La composición puede comprender además un segundo lípido unido con enlace covalente a la columna vertebral del glicerol. El segundo lípido puede ser un grupo alquilo. El segundo grupo alquilo puede seleccionarse a partir de los grupos alquilos en la tabla 1 y tabla 2.

El lípido puede ser un ácido biliar. El ácido biliar puede ser seleccionado a partir de los ácidos biliares en la tabla 4. El ácido biliar puede ser colesterol. La composición puede comprender además un grupo enlazador entre la columna vertebral glicerol y la cadena PEG. El enlazador puede ser seleccionado a partir del grupo consistente de -S-, -O-, -N-, -OCOO-, y los enlazadores de la tabla 3. La composición puede además comprender una segunda cadena PEG unida por enlace covalente con una columna vertebral glicerol. El enlace entre la columna vertebral del glicerol y la segunda cadena PEG es seleccionada a partir del grupo consistente de -O-C(O)-, -O-, -S-, y -NH-C(O)-. El enlace entre la columna vertebral del glicerol y la segunda cadena PEG puede ser seleccionada a partir de la tabla tres. [090] En otro aspecto, la invención incluye las composiciones acordes al párrafo inmediato anterior, donde la columna vertebral de glicerol es reemplazada por una columna vertebral seleccionada partir del grupo consistente de 3-amino-1 , 2-propanediol, 3-bromo-1, 2-propanediol, 3-cloro-1 , 2-propanediol, 3-fluoro-1 , 2-propanediol, ácido DL-glicérico, ácido aspártico, ácido glutámico, and 1 , 2, 4-butanetriol. [091] En otro aspecto, la invención incluye las composiciones acordes al párrafos 089, donde las cadenas PEG son remplazadas por polímero seleccionados a partir del grupo consistente de polimetilenglicol, polipropilenglicol, y copolímeros comprendidos de al menos dos de los monómeros seleccionados a partir del grupo consistente de metilenglicol, propilenglicol y etilenglicoles. [092] En otro aspecto, la invención incluye los siguientes compuestos: el compuesto representado por la fórmula mostrada en el esquema de reacción a); el compuesto representado por la fórmula mostrada como estructura química 2; el compuesto representado por la fórmula mostrada como estructura química 3; el compuestos representado por la fórmula mostrada como estructura química 4; las moléculas 1,2- isopropilidene-glicerol-3-etilenglicol, 1,2- isopropilidene-glícerol-3- díetilen glicol, 1,2- isopropiliden-glicerol-3-trietilen glicol, 1,2- isoprapilidene-glicerol-3-tetraetileno glicol, 1,2-isopropilidene-glicerol-3-pentaetilen glicol and 1,2- ¡sopropiliden-glicerol-3-hexaetilen glicol, 1 ,2- isopropiliden-glicerol-3-heptaetilen glicol and 1,2-isopropiliden-glicerol-3-octaetilen glicol; y las moléculas 1 ,3-diacilglicerol-2-etilen glicol, 1 ,3-diacilglicerol-2-d¡et¡len glicol, 1,3- diacilglicerol-2-trietilen glicol, 1,3-diacilglicerol-2-tetraetilen glicol, 1,3-diacilglicerol-2-pentaetilen - glicol, 1 ,3-diacilglicerol-2-hexaetlen glicol, 1 ,3-diacilglicerol-2-heptaetilen glicol and 1 ,3- diacilglicerol-2-octaetilen glicol. [093] En otro aspecto, la invención incluye un método para incrementar la biodisponibilidad y/o solubilidad del agente activo, dicho método comprendiendo: formular el agente activo con uno o más de los conjugados PEG-lípido de la presente invención y administrar dicha formulación basada en un conjugado PEG-lípido a una animal o humanos. [094] En otro aspecto, la invención incluye un compuesto químico con la siguiente fórmula: Donde n es entré alrededor de 7 y 12; y donde X es un grupo enlazador, X puede tener un PM entre alrededor de 16 y 200. Tx puede ser seleccionado a partir del grupo consistente de oxi, tiol, amino, -COO-,-OCOO-, succinil, haloide y aquellos listados en la tabla 3. La terminal de la cadena PEG puede tener un PM entre alrededor de 15 y 210. La terminal de la cadena PEG puede ser un grupo metilo. La terminal de la cadena PEG puede ser un grupo protector. La terminal de la cadena PEG puede ser un grupo hidroxilo. [095] En otro aspecto, la invención incluye un compuesto químico con la siguiente fórmula: Donde n es entre alrededor de 3 y 23; R es un lípido; y donde X es un grupo enlazador. X puede tener un PM entre alrededor de 14 y 620. X puede ser seleccionado partir del grupo consistente de oxi, tiol, amino, -COO-.-OCOO-, succinil, haloide y aquellos listados en la tabla 3. Más preferiblemente, la n puede estar entre alrededor de siete y 12. La terminal de la cadena PEG puede tener un PM entre alrededor de quince y 210. La terminal de la cadena PEG puede ser un grupo metilo. R puede ser un grupo alquilo seleccionado a partir de la tabla uno o la tabla dos. R puede ser un ácido biliar. R puede ser un ácido biliar es seleccionado a partir de la tabla 4. R puede ser colesterol. [096] En otro aspecto, la invención incluye un compuesto químico que tiene la siguiente fórmula: Donde N es un entero entre alrededor de 3 y 23; R es un lípido; y donde X es el mismo o diferente grupo enlazador. X puede tener un PM entre alrededor de 14 y 620. X puede ser seleccionado partir del grupo consistente de oxi, tiol, amino, -COO-,-OCOO-, succinil, haloide y enlazadores mostrados en la tabla 3. La n puede estar entre alrededor de 4 y 23. n es preferentemente entre alrededor de 7 y 23. La terminal de la cadena PEG puede tener un PM entre alrededor de quince y 210. La terminal de la cadena PEG puede ser un grupo metilo. R puede ser un grupo alquilo seleccionado en la tabla 3 o tabla 4. R puede ser una solo biliar. R puede ser seleccionado a partir de la tabla 4. R puede ser un colesterol. [097] En otro aspecto, la invención incluye un compuesto químico con la fórmula: Donde n está entre alrededor de 3 y 23; R es un lípido; L es un grupo enlazador; y donde X es el mismo o diferente grupo enlazador. X puede tener un PM entre alrededor de 14 y 620. X equis puede ser seleccionado a partir del grupo consistente de oxi, tiol, amino, -COO-,-OCOO-, succinil, haloide y enlazadores mostrados en la tabla 3. n puede estar entre alrededor de 4 y 23. n puede estar entre alrededor de 7 y 23. La terminal de las cadenas PEG pueden tener un peso molecular entre alrededor de 15 y 210. La terminal de las cadenas PEG puede ser un grupo metilo. R puede ser un grupo alquilo seleccionado a partir de la tabla 1 o tabla 2. R puede ser un ácido biliar. R puede ser seleccionado a partir de la tabla 4 y R puede ser colesterol. Tx puede ser seleccionado del grupo consistente de oxi, tiol, amino, -COO-,-OCOO-, succinil, haloide y enlazadores mostrados en la tabla 3.

EJEMPLOS [098] Los siguientes ejemplos permiten una ilustración adicional de la invención y no son construidos para limitar el alcance del invento. [099] Ejemplo 1. Síntesis de 3-oleoil-1 ,2-bis (metoxyhexaetilenglicol) glicerol. [100] Parte 1A: 3-Bencil-1 ,2-bis (metoxyhexaetilenglicol) glicerol. [101] Se agregó entonces, a una matraz de tres cuellos, ±-3-benciloxi-1,2 propanediol (.2 g 6 mmol), NaOH (0.96 g, 40 mmol) y THF seco (150 mL) Se adicionó entonces gota a gota, una solución seca (50 mL) de monometoxihexaetilen glicol tosilato 5.4 g 12mmol) a temperatura ambiente. La mezcla fue puesta a reflujo por xxiv horas y enfriada a temperatura ambiente. Se adicionó metanol a la mezcla de la reacción para apagar el exceso de sosa. El solvente fue vapuleado y el producto culo fue extraído con 5% peso/volumen de ácido clorhídrico y CH2CI2. El solvente fue vapuleado y purificado adicionalmente por permeación en cromatografía de gel para cosechar 85% de líquido incoloro. [102] Parte 1 B:3-hidroxil-1 ,2-bis (metoxihexaetilen glicol) glicerol [103] Se agregó a una solución de cinco gramos de 3-bencil-1 ,2-bis (metoxi hexa ethilen glicol) glicerol en 20 mi de n-hexano, cinco gotas de ácido acético y 0.6 gramos de negro de paladio. La mezcla fue pulgada con hidrógeno puro a 30 °C por aproximadamente 60 minutos para remover el grupo protector bencil en el 3'-hidroxi. Después el hidrógeno fue remplazado por nitrógeno, la solución fue enfriada a una temperatura de 4 a 6*C y el catalizador fue removido por filtración. El solvente fue evaporado para cosechar 98% del producto final. [104] Parte 1C: 3-oleoil-1 ,2-bis (metoxihexaetilenglicol) glicerol [105] Se agitaron a 25 grados centígrados por doce horas en nitrógeno 6.5 gramos del producto obtenido en 1B (diez mmoles), 3.1 gramo de ácido oleico (11 mmoles), 9.6 gramos de ?,?'-diciclohexil carbódímida (50mmol) y una cantidad catalítica de DMAP (0.6 g, 5 mmoles) en cloruro de metilo anhidro (CH2CI2), después de lo cual las sales ?,?'-dicicloexilurea fueron precipitadas y removidas por filtración. Los filtrados fueron evaporados bajo presión reducida para cosechar 89 por ciento del producto final mostrado por la estructura química 15.

Estructura Química 15 3-óleoil-1 ,2-bis (metoxihexaetilen glicol) glicerol C [106] Ejemplo 2. Síntesis de 1,2-dioleoil-rac-mono metoxidodecaetilen glicol (mPEG-12)-glicerol [107] Los pasos generales para esta síntesis están mostrados en el Esquema de Reacción 8 Esquema de Reacción 8: síntesis de 1,2-isopropiliden-glicerol-3-monometoxi dodecaetilen ester [108] Un mol de hexaetilenglicol fue mezclado con 0.15 mol de pirídina y calentado a una temperatura de 45 a 50 °C y se adicionaron 0.1 mol de tritil cloruro. La reacción fue llevada a cabo durante toda la noche (aproximadamente diez y seis horas) bajo constante agitación y entonces enfriada hasta temperatura ambiente y extraída con tolueno. El extracto fue lavado con agua, entonces extraído con hexano y secado sobre sulfato de magnesio. El solvente fue removido a vacío y se obtuvo un ligero amarillo aceitoso tri-hexaetilen glicol (rendimiento de 70 a 85 %). [109] 0.1 mol de Tr-hexaetilen glicol y 0.101 mol de p-toluensulfonil cloruro fueron mezclados en 100 mi de cloruro de metiieno. La mezcla homogénea fue enfriada a 0 °C en un baño de acetona is adicionaron 45 gramos de hidróxido de potasio en pequeñas porciones bajo agitación vigorosa mientras se mantiene la temperatura de reacción por debajo de 5 °C. La reacción fue completada bajo agitación constante por tres horas a 0 °C. El producto crudo fue diluido con 100 mililitros de cloruro de metiieno, entonces se adicionó 120 mL de agua helada. La tap orgánicas recolectada, y la fase acuosa fue extraída con cloruro de metiieno (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron grabadas con agua (100 mL) y secado sobre sulfato de magnesio. El solvente fue removido a vacío para recuperar un aceite claro con un rendimiento de entre 87 a 99%. [110] Se depositaron en un frasco de tres cuellos, 1,2-isopropilideno-rac-glicerol (0.1 mol) y NaH (0.4 mol) y THF seco (200 mL). Se adicionó una solución seca de THF (125 mL) de Tr-hexaetilenglicol tosilato (0.1 mol) gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla fue puesta reflujo por 24 horas, y enfriada a temperatura ambiente. Se adicionó metanol helado a la mezcla la reacción para calmar el exceso de NaH. El solvente fue evaporado y el producto crudo fue extraído con 5% (p/v) de ácido clorhídrico y cloruro de metilo. El producto crudo no fue purificado adicionalmente sino que se llevó directamente a la siguiente etapa de síntesis. [111] El producto resultante del proceso descrito arriba fue transferido a un frasco de vidrio resistente a alta presión junto con 200 mi de cloruro de etileno seco y 10 % de paladio en Carbón (1.5). La hidrogenolisis fue llevada a cabo purgando hidrógeno puro a 30 °C a presión atmosférica por aproximadamente 60 minutos para remover el grupo protector en el hexaetilenglicol. Después el hidrógeno fue remplazado por nitrógeno, la solución fue enfriada hasta iv a 6 °C y el catalizador fue removido por filtración. El solvente fue vapuleado para recuperar el 95 a 98 % del producto final. [112] Se mezclaron en un frasco de tres bocas, 3-hexaetilenglicol-1 ,2-isopropilnideno-rac-glicerol (0.1 mol) y NaH (0.4 mol) y THF seco (500 mol). Se adicionó una solución seca de THF (200 mi) de mono bencil hexaetilenglicol tosilato (0.11 mmol) a la mezcla gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla fue puesta reflujo por 24 horas, y entonces enfriada a temperatura ambiente. Se le adicionó metanol helado a la mezcla de la reacción para calmar el exceso deNaH. El solvente fue evaporado y adicionalmente purificado por cromatografía de permeación de gel para recuperar con un rendimiento de 82 % de 3-monometoxi dodecaetilenglicol-1,2-isopropilideneglicerol. [113] El grupo protector isopropilideno fue removido por medio de agitación de diez gramos de 3-monometoxidodecaetilenglicol-1,2-isoprop¡l¡den glicerol durante tres horas en una solución a cívica de metanol (180 mL de MeOH : 20 mL, 1 M HCI). La mezcla fue neutralizada con carbonato hidróxido de sodio y extraído en cloroformo (3 x 150 mL) y secado sobre sulfato de sodio. Después de filtración evaporación del solvente se logró un rendimiento del producto de 75 a 80 % de 3-monotóxidodecaetilenglicol-1,2-di hidroxil glicerol (Estructura Química 16) Estructura Química 16: 3-monotóxidodecaetilenglicol-1,2-dihidroxil-glicerol [114] En la reacción de extensión de la cadena PEG indicada arriba, el reactivo PEG de arranque comprende preferiblemente de 1 a 6 unidades CH2CH20, y más preferiblemente de 3 a 6 unidades CH2CH20, y más preferiblemente de 4 a 6 unidades CH2CH20. La reacción entre glicerol y el reactivo-PEG puede ocurrir en la presencia o la ausencia de un grupo de enlace. Preferentemente los reactivos-PEG comprenden grupos funcionales hidroxil, amino, carboxyl, y isocianato, tiol y carbonato. Especialmente, los reactivos PEG preferidos para ser usado en esta modalidad del método de la invención su Incluyen PEG-tosilato, PEG-mesilato y PEG-succinil. Siguiendo la reacción entre glicerol y el reactivo-PEG, se remueven los grupos de protección. [115] Se mantuvieron en agitación 0.1 mol de 3-monometoxi dodecaetilen glicol-1 ,2-di hidroxil glicerol en atmósfera de nitrógeno en 250 mL de cloroformo. Se disolvieron 0.21 mol de cloruro de oleoil con 250 mL de cloroformo y fue adicionado al esta mezcla heterogénea de di hidroxi acetona siguiendo por adicionar 15 mL de piridina anhidra. La reacción se lleva a cabo por 30 minutos bajo agitación constante a temperatura ambiente. La mezcla se hace homogénea y la reacción fue completada cuando no se detecte cloruro de oleoil en la mezcla. El solvente crudo fue removido a vacío. El residuo fue diluido con cloruro de metileno y se adicionó igual volumen de solución salmuera. La capa orgánica se colecta da y la fase acuosa fue de repetidamente extraída con cloruro de metileno y la capa orgánicas fue combinada y lavada otra vez con agua (50 mL) y secada sobre sulfato de sodio, y evaporada adicionalmente para recuperar un producto aceitoso(70 a 80%) (Estructura Química 17). Su cromatografía líquida y espectómetría de masa (LC-MS) se muestra en la figura 1: a) la muestra fue inyectada en una columna 4.6 x 50 mm Inertsil C8 y el ruido bajo una mezcla de tetrahidrofurano y agua (4/6, V/V) monitoreando con un espectrómetro de masa y b) el espectro MS del pico eluido a 1.45 minutos donde [M-1]÷ es el ión del compuesto familiar.

Estructura química de 17: Síntesis de 1,2-dioleil-rac-monometoxi dodecaetilen glicol (mPEG-12) glicerol [116] Ejemplo 3. Síntesis de Síntesis de 1,3-dioleil-rac-monometoxi dodecaetilen glicol (mPEG-12) glicerol. [117] Los pasos generales para esta síntesis está mostrado en el siguientes esquema (Esquema de Reacción 9) Ácido oleico cloruro de pirídina 3-(octadec-10-enoiloxi)-2-oxopropil octadec-9-enoato 2-hidroxi-3-(octadec- 10-enoiloxiloropil octadec-9-enoato Esquema de Reacción 9: síntesis de 1 ,3-diooleoil-2-glicerol ester [118] Se mantuvo en constante agitación 0.33 mol de dihidroxiacetona en atmósfera de nitrógeno en 150 mL de cloroformo. Se disolvió 0.06 mol de cloruro de oleoil con150 mL de cloroformo y adicionado al esta mezcla heterogénea de y dihidroxiacetona y se añadió enseguida 10 mL de piridina anhidra. La reacción se sigue por 30 minutos bajo constante agitación a temperatura ambiente. La mezcla se hace homogénea y la reacción se completa cuando no se detecta cloruro de oleoil en la mezcla. El solvente crudo es removido a vacio. El residuo se lava con agua y se extraen con acetato de etilo. La fase acuosa es repetidamente extraída con acetato de tilo y la capas orgánicas fueron combinada y lavada una vez más con agua, secada sobre sulfato de sodio y evaporada. El producto aceitoso resultante fue R cristalizado del metanol para dar 3-(octadec-10-enoil oxi)-2- oxopropil octadec-9-enoato (% de rendimiento 75-80) con una temperatura de fusión de entre 43 y 44 grados centígrados. [119] El 1,3-dioleato (0.02 mol) fue disuelto con 150 mL de tetra hidra furano (THF) y 10 mL de agua. La solución heterogénea fue enfriada hasta 5 °C en un baño de hielo. Se añadió en pequeña porción una solución de do borohidruro de sodio (0.026 mol enTHF). Después de 30 minutos el exceso de borohidruro fue destruido por la adición aproximada de 1 mL de ácido acético glacial, la solución fue entonces diluida con cloroformo, y lavada con agua y secada sobre sulfato de magnesio. Un aceite se obtuvo con cristalización parcial en cristales como agujas de 2-hidraxi-3-(octadec-10-enoiloxi) propil octadec-9-enoato (rendimientos de entre 80 y 90%) con temperatura de fusión de 20-22 grados centígrados. [120] A partir del producto intermediario descrito arriba, se preparó 1,3-diooleoil-rac-glicerol-rac-2-monometoxi dodecaetilenglicol (mPEG-12)-glicerol (Estructura Química 18) después de la reacción y elaboró como esta descrito en el ejemplo 1 y 2.

Estructura Química 18 1 ,3-diooleoil-rac-2-monometoxi dodecaetilen glicol (mPEG-12)-glicerol [121] Ejemplo 4: 1,2-di miristoil-rac-3-dodecapropilenglicol (PPG-12)-glicerol [122] los pasos generales para esta síntesis está mostrado en el siguiente esquema (Esquema de Reacción 10): Esquema de Reacción 10: Síntesis de 1,2-isopropiliden-glicerol-3-tritil-dedocapropilenglicol [123] Se mezclaron 1.5 moles de tetra propilenglicol mezclado con 0.23 mol de piridina y calentado a 45- 50 °C y se adicionaron 0.15 mol de tritil cloruro. La reacción se llevó a cabo toda la noche (aproximadamente 16 horas) bajo agitación constante, entonces enfriada hasta temperatura ambiente y extraída con tolueno. El extracto fue lavado con agua, entonces extraída con hexano y secado sobre sulfato de magnesio. El solvente fue removido en vacío. Se obtuvo un aceitoso y ligero Tr-tetrapropilenglicol amarillo (rendimiento 75 a 85%). [124] Se mezclaron 0.1 mol de Tr-tetrapropilenglicol y 0.101 mol de p-tolueno de cloruro de sulfonilo en 100mL de cloruro de metileno. La mezcla homogénea fue enfriada a 0 °C en un baño de acetona helada seca y se le adicionó 45 g de hidróxido de potasio en pequeñas cantidades con agitación vigorosa manteniéndose la temperatura de reacción por debajo de 5 °C. La reacción fue completada bajo agitación constante por 4 horas a 0 °C. El producto crudo fue diluido con 100 mL de cloruro de metileno, añadiéndose entonces 120 mL de agua helada. La capa orgánica se colectada, y la fase acuosa fue extraída con cloruro de metileno (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron grabadas con agua (100 mL) y secado sobre sulfato de magnesio. El solvente fue removido a vacio para recuperar un aceite claro (con un rendimiento de 75 a 85%). [125] Se cargó en un frasco de tres bocas, 1 ,2-isopropiliden-rac-glicerol (0.1 mol) y NaH (0.4mol) y THF seco (200 mL). Se adicionó por goteo una solución seca de THF (125 mL) de Tr-tetra propilenglicol tosilato (0.1 mol) a la mezcla a temperatura ambiente. La mezcla fue puesta a reflujo durante xxiv horas y entonces enfriada a temperatura ambiente. Se adicionó metanol helado a la mezcla la reacción para calmar el exceso de NaH. El solvente fue evaporado y el producto crudo fue extraído con 5% de ácido clorhídrico (p/v) y CH2CI2. El producto crudo no tuvo ninguna purificación adicional sino que se llevó directamente al siguiente paso de síntesis. [126] El producto crudo del paso anterior fue transferido a un frasco de vidrio resistente a alta presión agregándole 200 mL de cloruro de metileno seco y 10% de paladio en carbón (1.5 g). La hidrogenolisis fue llevada a cabo purgando con hidrógeno puro a 30 CC por aproximadamente 60 minutos para remover el grupo protegido en el hexaetilenglicol. Después de que el hidrógeno fue remplazado por nitrógeno, la solución fue enfriada hasta 4 a 6 °C y el catalizador fu® removido por filtración. El solvente fue evaporado para recuperar 95 a 98 por ciento del producto final. [127] Se vació en un frasco de tres bocas, 3-tetrapropilenglicol-1,2 isopropiliden-rac-glicerol (0.1 mol) y NaH (0.4 mol) yTHF seco (500 mL). Se adicionó una solución seca de THF (200 mL) de Tr-tetrapropilenglicol tosilato (0.11 mmol) a la mezcla gota a gota a temperatura ambiente. La mezcla fue puesta reflujo por 24 horas, y enfriada hasta temperatura ambiente. Se adicionó metanol helado a la mezcla la reacción para calmar el exceso de NaH. El solvente fue evaporado y el producto crudo fue extraído con 5% de ácido clorhídrico (p/v) y cloruro de metilo. [128] La etapa de eterificación ser repetida una vez más. El solvente fue evaporado y una purificación adicional por cromatografía de permeación de gel para recuperar aproximadamente el 80% del 3-tritil- Dodecapropílenglicol-1 ,2-¡sopropilidenglicerol. [129] El grupo protector isopropilideno fue removido por agitado de diez gramos de 3-Dodecapropilenglicol-1,2-isopropiliden glicol por 3 horas en una solución de metanol acidificado (180 mL MeOH : 20 mL 1M de ácido clorhídrico). La mezcla fue neutralizada con carbonato ácido de sodio y extraída con cloroformo (3 x 150 mL) y secada sobre sulfato de sodio. La filtración evaporación del solvente rindió una cantidad de producto (75-80%) de 3-tritil-Dodecapropilenglicol-1 ,2-di hidroxil-glicerol (Estructura Química 19) Estructura Química 19: 3-tritil-Dodecapropilenglicol-1 ,2-di hidroxil-glicerol [130] En la reacción de extensión de cadena PEG vista arriba, el reactivo PEG de arranque comprende preferiblemente seis unidades de CH2(CH3)CH20, y más preferiblemente 3 a 6 unidades CH2(CH3)CH20, y todavía más preferentemente 4 a 6 unidades de CH2(CH3)CH20. La reacción entre el glicerol y el PEG-reactivó puede ocurrir en la presencia o la ausencia de un grupo enlazador. En esta modalidad, el PEG-reactivó tiene un grupo funcional elegido de entre hidroxil, amino, carboxil, isocianato, tiol y carbonato. Los PEG reactivos especialmente preferidos para su uso en esta modalidad del método inventivo incluye PEG-tosilato, PEG-mesilato y PEG-succinil. Siguiendo la reacción entre glicerol y el PEG-reactivo, los grupos protectores fueron removidos. [131] Se agitó constantemente en una atmósfera de nitrógeno O.lmol de 3-tritil Dodecapropilenglicol-1 ,2-di hidroxil-glicerol en 250 mL de cloroformo. Se disolvió 0.21 mol de cloruro mirístico en 250 mL de cloroformo y adicionado a esta mezcla homogénea de di hidroxil acetona y seguido por la adición de quince mi de pirídina anhidra. La reacción sigue por 30 minutos bajo constante agitación a temperatura ambiente. La mezcla se volvió homogénea y la reacción fue completada cuando no se detectaba cloruro de oleoil en la mezcla. El solvente crudo fue removido a vacío y transferido al siguiente paso sin purificación adicional. [132] El producto crudo de arriba fue transferido a un frasco de vidrio resistente a alta presión junto con 200 mL de cloruro de metileno seco y 10% de paladio en carbón (1.5g). La hidrogenolisis fue llevada a cabo purgando hidrógeno puro a 30 °C atmósfera abierta por aproximadamente 60 minutos para remover el grupo protector en el hexaetilenglicol. Después el hidrógeno fue remplazado por nitrógeno, la solución fue enfriada hasta iv a 6 °C y el catalizador fue removido por filtración. El solvente fue evaporado para cosechar 95 a 98 % del producto final. [133] El residuo de la etapa llevada a cabo arriba fue diluido con cloruro de metileno y se adicionó igual volumen de solución salmuera. La capa orgánica se colecta da y la fase acuosa fue extraída repetidamente con cloruro de metileno y la capa orgánicas fue combinada y lavada una vez más con agua (50 mL) y secada sobre sulfato de sodio, y evaporación es adicionales para cosechar un producto aceitoso (70-85%) (Estructura Química 20).

Estructura química 20: 1,2-dimiristoil-rac-Dodecapropilenglicol (mPPG-12)-glicerol [134] Por ejemplo, la reacción de extensión de la cadena de polímero en los reactantes de inicio, pueden ser metilenglicol o etilenglicol o propilenglicol o una mezcla de los tres a partir de 1 a 6 unidades repetidas, y más preferiblemente tiene 3 a 6 unidades repetidas, y lo más preferible tiene iv a seis unidades repetidas. Es seguido la reacción entre glicerol y el reactivo puede ocurrir en la presencia o la ausencia de un grupo de enlace. En esta modalidad, el reactivo de polimerización preferido tiene grupos funcionales de hidroxilo, amino, carboxilo, tiol, isocianato y carbonato. Específicamente el reactivo preferido para usarse en esta modalidad del método inventivo incluye tosilato, mesilato, y succínil. Siguiendo la reacción entre glicerol y los reactantes de polimerización, se removieron los grupos de protección. Uno de tales ejemplos es como el mostrado en la estructura química 21.

Estructura química 21: 1 ,2-dioleoil-rac-3-monometoxil tetra etilenglicol-tri propilenglicol-tetra etilenglicol glicerol éter [135] Ejemplo cinco: Composiciones de dosis sólidas [136] Se adiciona un conjugado PEG lipido liquido a un vaso de acero inoxidable equipado con propelas tipo hojas de licuadora. La sustancia fármaco se adiciona con mezclado constante. El mezclado continúa hasta que el fármaco está disperso visualmente en el lipido a una temperatura de entre 55 a 65 grados centígrados. En un contenedor separado, el conjugado PEG lipido con temperatura de fusión por arriba de aproximadamente 30 °C es fundido con calentamiento o disuelto en etanol y adicionado al recipiente con mezclado. El mezclado continúa hasta que se logra un una solución completamente homogénea. Sí es necesario, se remueve el etanol por vacio. La solución es rellenada dentro de las cápsulas o configuración de empacado pre-diseñado (moldes) cuando la solución está tibia. Los montes o cápsulas rellenos son puestos bajo refrigeración (dos a ocho grados centígrados) hasta que la mezcla parecida a una crema es solidifica da cuando se enfría. Una muestra la formulación está descrita en la tabla cinco [137] Tabla 5 Ingrediente % Fármaco 15 Conjugado PEG-lípido Líquido 40 Conjugado PEG-lípido Sólido 45 Etanol < 1 [138] El conjugado liquido puede ser a GD -12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH . El conjugado lípido sólido puede ser GDS-12, DSB-12, GDO-23, GDO-27, GDM-23, GDM-27 y GDS-23. El fármaco puede ser modafinil or nifedapina o esomeprazole or rapamycina u otro agente activo. [139] Ejemplo 6: Composiciones de dosis sólida. [140] Se adicionó Un conjugado PEG lípido líquido (teniendo un punto de fusión por debajo de alrededor de 15 °C) a un vaso de acero inoxidable equipado compro pelas tipo hojas de licuadora. El fármaco fue adicionado con mezclado constante. El mezclado continuo hasta que el fármaco estuvo visualmente disperso en el lípido a una temperatura entre 55 y 65 °C. En un contenedor separado, se disolvió TPGS-VE en etanol y adicionado al vaso con mezclado. El mezclado continuo hasta que se logró una completa dispersión logrando una solución homogénea. El etanol fue removido por vacío. La solución se rellena en las cápsulas o configuración del paquete diseñado (moldes) cuando la solución estuvo tibia. Las cápsulas como el tested rellenos fueron metidos la refrigeración (a una temperatura de entre 2 y 8o C). La mezcla con semejanza a crema fue solidificada cuando se enfrió. Una formulación demuestra que esta descrita en la tabla 6. [141] Tabla 6 [142] El conjugado líquido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH. El fármaco puede ser modafinil o nifedapino o esomeprazol o rapamicina u otro agente activo. [143] Ejemplo 7: Composiciones de soluciones orales [144] El PEG-lipido fue agregado a un vaso equipado con una propela mezcladora. El fármaco fue adicionado con mezclado constante. El mezclado continuo hasta que el fármaco estaba dispersó visualmente en el lipido. Los excipientes pre disueltos fueron adicionados lentamente al vaso con mezclado adecuado. El mezclado continuó hasta que se logró una solución completamente homogénea. Una formulación muestra esta descrito en la tabla siete [145] Tabla 7 [146] El lipido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH o cualquier combinación de estos. El hidróxido de sodio es usado para preparar una solución 10% p/p en agua purificada. El pH deseado está en un rango de entre 4.0 y 7.0. El NaOH es usado para ajustar el pH si es necesario. El fármaco puede ser modafinilo o nifedapino o esomeprazol o rapamicina u otro agente activo. [147] Ejemplo 8: Composiciones de ciclosporina oftálmicas [148] Se adicionó PEG-lípido a un vaso y quitado con una tropel a mezclador. La ciclosporina se adicionó con mezclado constante. El mezclado continuo hasta que el fármaco estuvo visualmente disperso en el lípido. Se adicionaron lentamente excipientes pre-disueltos y agua purificada estéril con un mezclado adecuado. El mezclado continúo hasta que la solución fue completamente homogénea. Una formulación de muestra está descrita en la tabla 8. [149] Tabla 8 [150] El lípido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH o una mezcla de estos. El hidróxido de sodio es usado para preparar una solución 10% p/p en agua purificada. El ph objetivo este un rango de 6.0 a 7.4. El NaOH es usado para ajustar el pH sí esto es necesario. [151] Ejemplo 9: Composiciones de Soluciones Inyectables [152] La solución inyectable fue preparada como en el ejemplo 7, excepto que el pH objetivo está ubicado en un rango de entre 6.0 y 8.0. Una formulación muestra está descrita en la tabla 9. [153] Tabla 9 [154] El lípido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH o cualquier combinación de éstos. El hidróxido de sodio es usado para preparar una solución de 10% w/w en agua purificada. El pH objetivo está en un rango de entre 6.5 to 7.4. El NaOH is usado para ajustar el pH si esto es necesario. El fármaco puede ser triazoles incluyendo posaconazol, voriconazol e itraconazol o rapamicina o ciclosporinas o tacrolimus o nifedipina o paclitaxel o docetaxel o gefitinib o propofol o rlfampin o diazepam o nelfinavir u otro agente activo. [155] Ejemplo 10: perfil fármaco simétrico y biodisponibilidad de formulaciones de itraconazol. [156] Se utilizaron grupos de tres ratones machos (B6D2F1) para el estudio. La farmacocinética (PK) fue desarrollada en muestras de plasma de ratones tratados con heparina obtenidas a las 0 horas, a las 0.08 horas, a las 0.25 horas, a las 0.5 horas, 1 hora después, 2 horas después, 4 horas después, 8 horas después, 16 horas después, y 24 horas después de que el bolo de la inyección iv o alimentación oral a las 0 horas, 0.5 horas, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 16 horas y 24 horas para itraconazol. Las muestras fueron analizadas usando un método HPLC- MS/ S. Para determinar el nivel de cada fármaco, el fármaco fue primero aislado del plasma con el pretratamiento muestra. El acetonitrilo ser usado para remover las proteínas en la muestra. Un método isocrático HPLC-MS/MS fue entonces usado para separar el fármaco de cualquier interferencia potencial. Los niveles de fármacos fueron medidos por detección MS con un modo de monitoreo de reacción múltiple (MRM). Los datos PK fueron analizados usando el modelo de análisis compartimental del programa WinNonlin (ver 5.2, Pharsight). [157] La figura 2 muestra los perfiles PK en los ratones cuando se aplicó formulaciones de itraconazol con 1) GDO-12 (relación 1 :10 fármaco a lípido) en 10 mM de buffer de fosfato de sodio (pH 7.4) y 2) 10% de Cremop or-5% MeOH en 10 mM de buffer de fosfato de sodio (pH 7.4). El fármaco fue administrado intravenosamente y la dosificación fue de 20 mg/kg. El AUC fue de 5441 pg.hr/mL y 986 \IQ hr/mL para las formulaciones DAG-PEG (1) y el producto comercial (2), respectivamente. [158] La figura 3 muestra los perfiles PK en los ratones cuando se suministró formulaciones de itraconazol con 1)GDO-12 (1 : 10 relación fármaco a lípido) en buffer de fosfato de sodio 10 mM (pH 7.4) y 2) 10% de Cremophor-5% MeOH en 10mM de buffer de fosfatos de sodio (pH 7.4). El fármaco fue administrado oralmente y el Valor de la dosis fue de 20 mg/kg. La biodisponibilidad relativa (basada en la AUCO-24 hr) fue 63% y 45% para las formulaciones de PEG-DAG 1) y 2), respectivamente. [159] Ejemplo 11: composición de Crema Tópica [160] Se colocó PEG-lípido en un vaso de acero inoxidable equipado compro pelas tipo hojas de licuadora. El fármaco fue adicionado con mezclado constante. El mezclado se continuó hasta que la droga estuvo dispersa visualmente en el lípido a una temperatura de entre 60 y 65° C. Se adicionaron un ácido orgánico, colesterol y glicerina con mezclado. Se adicionó metanol y etioxi diglicol con mezclado. Finalmente se adicionaron con mezclado carbopol ETD 2020, agua purificada y trietilamina. Se adicionó etanol y etioxidiglicol con mezclado. Finalmente fue adicionado carbopol ETD 2020, agua purificada y trietilamina con mezclado. El mezclado continuó hasta que se logró la completa homogeneidad de la crema. Una formulación está descrita en la tabla 10. [161] Table 10 [162] El lípido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH o GDS-12 o cualquier combinación de estas. El ácido orgánico puede ser ácido láctico o pirúvico o giicóiico. El hidróxido de sodio es utilizado para ajustar el pH si fuera necesario. El pH objetivo está ubicado entre 3.5 y 7.0. El fármaco puede ser itraconazol, posaconazol, voriconazol o equaconazol, Terbinafin, Amorolfin, Naftifin, Butenafin, ácido Benzoico, Ciclopirox, Tolnaftato, ácido Undecilenico, Flucytosina , Griseofulvin , Haloprogin, bicarbonato de Sodio o acetonida de Fluocinolona. [163] Ejemplo 12: Composición de solución tópica [164] La solución tópica fue preparada común el ejemplo 11, una formulación muestra está descrita en la tabla 11. [165] Tabla 11 [166] El lípido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GD -600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH o GDS-12 o cualquier combinación de estas. El ácido orgánico puede ser ácido láctico o pirúvico o glicólico. El hidróxido de sodio es utilizado para ajustar el pH si fuera necesario. El pH objetivo está ubicado entre 3.5 y 7.0. El fármaco puede ser itraconazol, posaconazol, voriconazol o equaconazol, Terbinafin, Amorolfin, Naftifin, Butenafin, ácido Benzoico, Ciclopirox, Tolnaftato, ácido Undecilenico, Flucytosina, Griseofulvin, Haloprogin, bicarbonato de Sodio o acetonida de Fluocinolona. [167] Ejemplo 13 Composiciones de Acitrómizina oftálmicos. [168] El PEG-lípido fue adicionado a un recipiente equipado con una propela mezcladora. La Acitrómizina fue adicionada con constante el mezclado. El mezclado continuo hasta que el fármaco se vio dispersado en el lipido. Se adicionó lentamente los excipientes predisueltos y agua purificada estéril con mezclado adecuado. El mezclado continuo Aza la completa homogeneización de la solución. Una muestra esta formulación está descrita en la tabla 12 [169] Tabla 12 [170] El lipido puede ser GDM-12, GDO-12, GDC-12, GDM-600, GDO-600, GDC-600, GOB-12, GMB-12, GOBH, GMBH, GCBH, GCBH o GPBH o cualquier combinación de éstos. El hidróxido de sodio es usado para preparar una solución 10% p/p En agua purificada. El pH objetivo está en un rango de entre 7.0 to 7.8. El NaOH es usado para ajustar el pH si es necesario. [171] La concentración preferible de azitromicina se ubica entre 0.5 y 3%, más preferiblemente entre 0.5 y 2%, lo más preferiblemente entre 1 a y 2%. La relación preferible a del PEG-lípido con respecto al fármaco (PEG-lipido/ciclosporina) está entre 1 y 20, más preferiblemente entre 3 y 15 y la más preferiblemente entre 5 y 10.

Claims (20)

REIVINDICACIONES

1. Una composición química incluyendo un conjugado PEG-lípido, el conjugado PEG-lipido comprende: una columna vertebral de glicerol; un grupo lípido unido por enlace covalente a la columna vertebral de glicerol; una cadena PEG unida por enlace covalente a la columna vertebral del glicerol, donde la cadena PEG tiene un peso molecular entre alrededor de 200 y 1200 daltons, donde más de alrededor de 75 % de las cadenas PEG de las moléculas del conjugado en la composición tienen el mismo peso molecular

2. En la composición de la reivindicación 1 , donde más del 90 % de las cadenas PEG de las moléculas conjugadas en la composición tienen el mismo peso molecular.

3. La composición de la reivindicación 2, donde la cadena PEG tiene un peso molecular mayor a alrededor de 600 daltons.

4. La composición de la reivindicación 1 , donde el lípido es un grupo alquilo.

5. La composición de la reivindicación 4, donde el grupo alquilo es seleccionado de entre los grupos alquilos contenidos en la Tabla 1 y en la Tabla 2.

6. La composición de la reivindicación 1, que comprende además un segundo lípido unido de manera covalente a la columna vertebral del glicerol.

7. La composición de la reivindicación 6, donde el segundo lípido es un grupo alquilo.

8. La composición de la reivindicación 7, donde el grupo alquilo es seleccionado de entre los grupos alquilos contenidos en la Tabla 1 y en la Tabla 2.

9. La composición de la reivindicación 6, donde el lípido es un ácido biliar.

10. La composición de la reivindicación 7, donde la sido biliar es seleccionado del conjunto de ácidos biliares contenidos en la tabla 4.

11. La composición de la reivindicación 6, donde lipido es colesterol.

12. La composición de la reivindicación 1, comprendiendo además un grupo enlazador entre la columna vertebral de glicerol y la cadena PEG.

13. La composición en la reivindicación 12, donde el enlazador es seleccionado de entre el grupo consistente de: -S-, -O-, -N-, -OCOO-, y los enlazadores contenidos en la tabla 3.

14. La composición de la reivindicación 1, comprendiendo además una segunda cadena PEG unida en forma covalente a la columna vertebral del glicerol.

15. La composición de la reivindicación 1, donde el enlace entre la columna vertebral de glicerol y la cadena del PEG es seleccionado a partir del grupo consistente de -O-C(O)-, -O-, -S-, and -NH- C(0),

16. La composición de la reivindicación 1, donde el enlace entre la columna vertebral de glicerol y la cadena PEG es seleccionada del contenido de la tabla 3.

17. Un liposomas que comprende: un conjugado PEG lípido donde el conjugado incluye una columna vertebral de glicerol, un grupo lípido unido de manera covalente a la columna vertebral de glicerol y una cadena PEG unida de manera covalente a la columna vertebral de glicerol, donde la cadena PEG tiene un peso molecular de entre alrededor de 200 y 1200 daltons, y donde más del 75 % de las cadenas PEG de las moléculas conjugadas en la en la composición tienen el mismo peso molecular; y un agente activo

18. El liposomas de la reivindicación 17, donde el agente activo de ciclosporina.

19. El liposomas de la reivindicación 17, donde el agente activo de propofol.

20. El liposomas de la reivindicación 17, donde el agente activo de docetaxel.