JP6051758B2 - ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソーム - Google Patents
ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソーム Download PDFInfo
- Publication number
- JP6051758B2 JP6051758B2 JP2012229620A JP2012229620A JP6051758B2 JP 6051758 B2 JP6051758 B2 JP 6051758B2 JP 2012229620 A JP2012229620 A JP 2012229620A JP 2012229620 A JP2012229620 A JP 2012229620A JP 6051758 B2 JP6051758 B2 JP 6051758B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polyethylene glycol
- formula
- group
- diacylglycerol
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 title claims description 75
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims description 75
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims description 47
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 title claims description 15
- -1 polyethylene Polymers 0.000 title claims description 14
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 title claims description 11
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 title claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 claims description 17
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 16
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 8
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 8
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 5
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 19
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 8
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 125000003374 diacylglycerol group Chemical group 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 4
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 0 CC1OC(C)(C)*C1 Chemical compound CC1OC(C)(C)*C1 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 3
- NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N (2s)-2-[[4-[2-(2,4-diaminoquinazolin-6-yl)ethyl]benzoyl]amino]-4-methylidenepentanedioic acid Chemical compound C1=CC2=NC(N)=NC(N)=C2C=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CC(=C)C(O)=O)C(O)=O)C=C1 NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 2
- 235000021319 Palmitoleic acid Nutrition 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N cis-palmitoleic acid Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 229940105990 diglycerin Drugs 0.000 description 2
- GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N diglycerol Chemical compound OCC(O)COCC(O)CO GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- SUBJHSREKVAVAR-UHFFFAOYSA-N sodium;methanol;methanolate Chemical compound [Na+].OC.[O-]C SUBJHSREKVAVAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- NUZWLKWWNNJHPT-UHFFFAOYSA-N 1, 8, 9-Anthracenetriol Natural products C1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2O NUZWLKWWNNJHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005862 Angiotensin II Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- UZPWKTCMUADILM-UHFFFAOYSA-N CC1C=CCCC1 Chemical compound CC1C=CCCC1 UZPWKTCMUADILM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002538 Polyethylene Glycol 20000 Polymers 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 125000004036 acetal group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012644 addition polymerization Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- YUTJCNNFTOIOGT-UHFFFAOYSA-N anthracene-1,8,9-triol Chemical compound C1=CC(O)=C2C(O)=C3C(O)=CC=CC3=CC2=C1 YUTJCNNFTOIOGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- QEJYJQHAIFZUHZ-UHFFFAOYSA-L copper phosphoric acid sulfate Chemical compound [Cu+2].OP(O)(O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O QEJYJQHAIFZUHZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940115080 doxil Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOZCGIRYBYLSKC-UHFFFAOYSA-N nonatriacontane-19,20,21-triol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCC KOZCGIRYBYLSKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- NTTOTNSKUYCDAV-UHFFFAOYSA-N potassium hydride Chemical compound [KH] NTTOTNSKUYCDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000105 potassium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003613 toluenes Chemical class 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/26—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds
- C08G65/2603—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen
- C08G65/2615—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen the other compounds containing carboxylic acid, ester or anhydride groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/26—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds
- C08G65/2603—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen
- C08G65/2606—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen containing hydroxyl groups
- C08G65/2609—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen containing hydroxyl groups containing aliphatic hydroxyl groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
- C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen
- C08G65/332—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof
- C08G65/3322—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof acyclic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G2650/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G2650/28—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule characterised by the polymer type
- C08G2650/52—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule characterised by the polymer type obtained by dehydration of polyhydric alcohols
- C08G2650/54—Polyglycerols
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
本発明は、ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソームに関する。
リポソームはリン脂質から構成される脂質二重膜によって形成される、数10nm-数100nmのカプセルであり、その中に薬剤を安定に内包することができる。このようなリポソームの一つにその表面をポリエチレングリコール(PEG)で修飾させたPEGリポソームがある。PEGリポソームは、表面のPEG鎖が形成する水和層とPEG鎖自体の立体障害により、オプソニンのような血清たんぱくや、単核細胞系に属する細胞との相互作用が抑制され、高い血中滞留性を実現することができる。特に高い血中滞留性が要求される抗がん剤のデリバリーにおいては、PEGリポソームであるDOXIL（登録商標）が上市されており、その有用性が実証されている。
一方、近年、研究が盛んに行われているsiRNA等の核酸デリバリー分野でもPEG化リポソームは有力なキャリアの一つとして考えられている。siRNAは病原タンパク質の産生を抑制する核酸医薬品であり、副作用が少なく、大量合成が容易であるという利点があり、次世代の高機能医薬品として期待が高まっている。しかし、siRNAは体内の酵素によって、血中で容易に分解されるため、siRNA単独の使用は困難であり、siRNAをデリバリーするDDS技術が不可欠である。siRNAのリポソームによるデリバリーにおいては、一般に核酸を安定化させるために、リポソームにカチオン性脂質等を過剰量添加し核酸と静電的なコンプレックスを形成させ、更に細胞への取り込みを増大させるために、コンプレックス全体での電荷をカチオン性としている。
PEGリポソームの構成材料の1つとしては、リン脂質PEGが使われるが、これはアニオン性を示すリン酸基を有しており、薬物の種類によっては内包に悪影響を与えることがある(特許文献1、非特許文献1)。特に上記のsiRNAを含む、全体としてカチオン性を示すコンプレックスの内包には望ましくない場合があり、そのため電荷を持たない脂質PEGが注目され、この脂質PEGをリポソームの構成材料に用いたときにリポソームが優れた安定性、体内動態を示すという報告がなされている(非特許文献2)。
THE JOURNAL OF PHARMACOLOGY ANDEXPERIMENTAL THERAPEUTICS Vol.328 No.1 321-330
Molecular Therapy Vol.17 No.5 872-879
PEG鎖1本の非電荷脂質PEGはsiRNAのキャリアとして実績を残しているが、リポソームの安定性を含め、未だ幾つかの課題が残っている。特にリポソームの安定性を更に向上させることは、医療業での利用上、特に重要である。
本発明の課題は、２本のPEG鎖を有する、ジアシルグリセロールと結合した、高純度で、かつリポソームの安定性を向上させる、ポリエチレングリコール誘導体を提供することである。
開発者らは、分岐型ポリエチレングリコールを用いることにより、直鎖型より高いリポソームの安定性を有する、ジアシルグリセロールと結合したポリエチレングリコールを開発した。
更には分岐型ポリエチレングリコールの導入に、特徴的な構造を有する、ジオール化合物からエチレンオキサイド付加させることを主な特徴とする製法を用いることにより、安定なエーテルリンカーを有しかつ非常に高純度な、ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール誘導体を開発した。
すなわち、本発明は、式（１）で表されるジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールに係るものである。
（式（１）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
Ｒ２は炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。
Ｘは分岐型ポリエチレングリコールとジアシルグリセロールのリンカー部位であり、式（２）で表される。
（式（２）中、Ｙはエーテル結合を表す。ｌ＝０、ｍ＝０である。）
（式（１）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
Ｒ２は炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。
Ｘは分岐型ポリエチレングリコールとジアシルグリセロールのリンカー部位であり、式（２）で表される。
（式（２）中、Ｙはエーテル結合を表す。ｌ＝０、ｍ＝０である。）
また、本発明は、後述の工程（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）を含むことを特徴とする、式（３）で表されるジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールの製造方法に係るものである。
（式（３）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
Ｒ２は炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
（式（３）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
Ｒ２は炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
本発明の技術によって得られた、ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール誘導体は、ジアシルグリセロールと結合した直鎖型ポリエチレングリコールと比較して、有意に高い、リポソームの安定性を実現した。
また、本分岐型ポリエチレングリコール誘導体は、DDS素材として望ましい極めて高い純度で製造することが可能となった。
本発明におけるジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールとは、2本のポリエチレングリコール鎖を有する構造とジアシルグリセロールを有する構造がリンカーを介して結合した化合物であり、直鎖型のポリエチレングリコールと比較して、安定性に優れたリポソームを作製することができる。
上記のジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールは前記式（１）で表される。
Ｘは、分岐型ポリエチレングリコールとジアシルグリセロールのリンカー部位であり、前記式（２）で表される。
Ｙは、エーテル結合である。ｌ、mはリンカー部位のアルキル基の炭素数を表し、l=0、m=0である。
式（１）中のＲ１は、炭素数１〜７の炭化水素基を表す。Ｒ１の炭素数は、４以下が更に好ましく、１以下が一層好ましい。炭化水素基は、好ましくはアルキル基、芳香族基であり、特に好ましくはアルキル基である。具体的な炭化水素基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、第三ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、ベンジル基が挙げられる。最も好ましくはメチル基である。
式（１）中のＲ２は、炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。Ｒ２の炭素数は、１３〜１７が好ましく、１７が更に好ましい。Ｒ２は、飽和及び不飽和炭化水素であってよく、また直鎖又は分岐鎖であってよい。また、Ｒ２は脂肪酸Ｒ２ＣＯＯＨ由来のものであるが、Ｒ２ＣＯとしては、飽和及び不飽和の直鎖又は分岐鎖の脂肪酸由来のアシル基が挙げられる。具体的には、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトイレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸が好ましい。
(中間体の合成)
本発明の中間体は次のように製造できる。まず、ジグリセリンとアセトンを反応させ、有機溶剤と水を用いた抽出精製により、式（４）で表される１,2-イソプロピリデンジグリセリンを得ることができる。この化合物は公知である。
本発明の中間体は次のように製造できる。まず、ジグリセリンとアセトンを反応させ、有機溶剤と水を用いた抽出精製により、式（４）で表される１,2-イソプロピリデンジグリセリンを得ることができる。この化合物は公知である。
次いで、工程（Ａ）〜（Ｃ）によって中間体を得る。
工程（Ａ）: ソジウムメチラート、金属ナトリウム、金属カリウムまたはt-ブトキシカリウムを触媒とし、式（４）で表される化合物にエチレンオキサイドを付加し、下記式（５）のポリエチレングリコール誘導体を得る。
（式（５）において、nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
工程（Ａ）: ソジウムメチラート、金属ナトリウム、金属カリウムまたはt-ブトキシカリウムを触媒とし、式（４）で表される化合物にエチレンオキサイドを付加し、下記式（５）のポリエチレングリコール誘導体を得る。
（式（５）において、nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
このようにエチレンオキシド付加重合反応を用いることで、高収率で、かつカラム精製することなく、工業的に適した方法で、高純度の分岐型ポリアルキレングリコール誘導体を製造することができる。
このエチレンオキサイド付加重合体は次のような方法で製造することができる。トルエン、もしくは無溶媒中、金属ナトリウムや金属カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム-t-ブトキシドのアルカリ条件下、オキシエチレンを重合させて得ることができる。
このエチレンオキサイド付加重合体は次のような方法で製造することができる。トルエン、もしくは無溶媒中、金属ナトリウムや金属カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム-t-ブトキシドのアルカリ条件下、オキシエチレンを重合させて得ることができる。
工程（Ｂ）： 式（５）のポリエチレングリコール誘導体中のエチレンオキサイド基末端水酸基の水素原子を炭化水素基に置換することによって、下記式（６）のポリエチレングリコール誘導体を得る。
（式（６）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
（式（６）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
ここで、例えば、Ｒ１がメチル基である化合物は、式（８）の構造式を有する。
工程（Ｃ）： 式（６）のポリエチレングリコール誘導体をｐＨ1.0-3.0で酸加水分解し、式（７）のポリエチレングリコール誘導体を中間体として得る。
（式（７）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
（式（７）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
すなわち、環状アセタール基の脱保護は、酢酸、リン酸、塩酸、硫酸等の酸にてpH1.0-3.0に調整して水溶液中で反応させ、式（７）で表される化合物を得る。脱保護時のpHが低すぎるとポリアルキレングリコール鎖の分解、グリセロールの2,3位のエーテル結合の切断によるポリアルキレングリコール鎖の遊離が起きる。
ここで、例えば、Ｒ１がメチル基である中間体は、式（９）の構造式を有する。
（中間体から式（３）の化合物の合成）
次の工程（Ｄ）によって、式（７）のポリエチレングリコール誘導体中の末端水酸基と脂肪酸とを脱水縮合させ、式（３）の分岐型ポリエチレングリコールを得る。
すなわち、２個の水酸基を有する式（７）で表される化合物と脂肪酸を、触媒を用いて縮合させて、式（３）で表されるジアシルグリセロールがエーテルを介して結合した分岐型ポリエチレングリコール誘導体が得られる。
次の工程（Ｄ）によって、式（７）のポリエチレングリコール誘導体中の末端水酸基と脂肪酸とを脱水縮合させ、式（３）の分岐型ポリエチレングリコールを得る。
すなわち、２個の水酸基を有する式（７）で表される化合物と脂肪酸を、触媒を用いて縮合させて、式（３）で表されるジアシルグリセロールがエーテルを介して結合した分岐型ポリエチレングリコール誘導体が得られる。
用いる脂肪酸Ｒ２ＣＯＯＨとしてはカプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトイレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等の飽和及び不飽和の直鎖又は分岐鎖の脂肪酸が挙げられる。
（リポソーム）
本発明の脂質PEG誘導体を含むリポソームは、核酸、医薬、生理活性物質を内包させることができる。これらの核酸、医薬の種類は特に限定されていない。本発明の脂質PEGのリポソームへの配合量は遺伝子の発現や医薬を発効させるのに十分な量であればよい。
本発明の脂質PEG誘導体を含むリポソームは、核酸、医薬、生理活性物質を内包させることができる。これらの核酸、医薬の種類は特に限定されていない。本発明の脂質PEGのリポソームへの配合量は遺伝子の発現や医薬を発効させるのに十分な量であればよい。
核酸としては、RNA、DNA、オリゴヌクレオチド等が挙げられる。例えば、siRNA、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、酵素、サイトカイン等がある。
核酸を内包する場合の1つの例示的な実施形態において、リポソームは、本発明の脂質PEG誘導体と、中性脂質(例えば、ジアシルフォスファチジルコリン)と、ステロール(例えば、コレステロール)と、カチオン性脂質(例えば、アミン性脂質)との混合物を含む。
本発明の脂質PEG誘導体を含むリポソームの形態は特に限定されないが、例えば、脂質混合物をクロロホルム等の有機溶剤に溶解し、エバポレーターによって脱溶剤し乾固させた形態や、脂質混合物を水系溶剤に分散した形態、水系溶剤に分散したリポソームを凍結乾燥させた形態が挙げられる。
水系溶剤を使用するときは、単なる水を用いてもよいし、少量のアルコール等を含む混合溶剤であってもよい。好ましくは、局方注射用水、蒸留水等が用いられる。この時、水系溶剤に生理活性物質や、タンパク質、緩衝物質や各種の塩、血漿等を溶解させ、溶液状としたものであってもよい。
脂質混合物を水系溶剤に分散した形態としては、特に限定されないが、分散液をホモジナイザーや高圧噴射乳化機等を使用して乳化させたり、エクストラルーダーやリポナイザー等により粒径の揃ったリポソームとして得ることが出来る。
脂質混合物と核酸、医薬との混合物が水系溶媒に分散した形態の製造方法としては公知の方法で行うことができ、適宜選択することができる。製造方法としてはこれらに限定されないが、例えば、脂質混合物と核酸、医薬の混合物を水系溶剤に添加し、ホモジナイザー等の乳化機、超音波乳化機、高圧噴射乳化機等により乳化させる方法、脂質乾燥物に核酸、医薬を含む水系溶剤を添加して乳化する方法、水系溶媒に分散したリポソームに核酸、医薬を含む水系溶媒を添加する方法、水系溶剤に分散させたリポソームに核酸、医薬を含む水系溶媒を添加する方法が挙げられる。
リポソームの大きさ(粒子径)を制御したい場合には、さらに孔径のそろったメンブランフィルターを用いて、高圧力下でエクストルーダー等を使用して押し出し濾過等を行ってもよい。また、リポソームの粒子径は、５０〜５００ｎｍが好ましく、５０〜３００ｎｍが更に好ましい。
以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明する。なお、例中の化合物の分析、同定には1H NMR、GPC及びTOF-MSを用いた。
＜1H-NMRの分析方法＞
1H-NMR分析では、日本電子データム(株)製JNM-ECP400、JNM-ECP600を用いた。NMR測定値における積分値は理論値である。
1H-NMR分析では、日本電子データム(株)製JNM-ECP400、JNM-ECP600を用いた。NMR測定値における積分値は理論値である。
＜GPCの分析方法＞
GPC分析では、GPCシステムとしてSHODEX GPC STSTEM-11を用い、下記条件にて測定を行った。
展開溶媒：テトラヒドロフラン
流速：１ｍＬ/min
カラム：SHODEX KF-801, KF-803, KF-804(I.D. 8mm×30cm)
カラム温度：40℃
検出器:RI ×8
サンプル量：1mg/g,
100μL リファレンスにはトリエチレングリコール、PEG4000、PEG20000を用いた。
GPC測定値には、高分子量不純物と低分子不純物を、溶出曲線の変曲点からベースラインを垂直に切って除いたメーンピークの解析値、及び溶出開始点から溶出終了点までのピーク全体での解析値を併記した。
Mnは数平均分子量、Mwは重量平均分子量、Mpはピークトップ分子量を表す。
GPC分析では、GPCシステムとしてSHODEX GPC STSTEM-11を用い、下記条件にて測定を行った。
展開溶媒：テトラヒドロフラン
流速：１ｍＬ/min
カラム：SHODEX KF-801, KF-803, KF-804(I.D. 8mm×30cm)
カラム温度：40℃
検出器:RI ×8
サンプル量：1mg/g,
100μL リファレンスにはトリエチレングリコール、PEG4000、PEG20000を用いた。
GPC測定値には、高分子量不純物と低分子不純物を、溶出曲線の変曲点からベースラインを垂直に切って除いたメーンピークの解析値、及び溶出開始点から溶出終了点までのピーク全体での解析値を併記した。
Mnは数平均分子量、Mwは重量平均分子量、Mpはピークトップ分子量を表す。
＜TOF-MSの分析方法＞
TOF-MS分析では、Bruker製 autoflexIII)を用いた。サンプルのマトリックスに1,8,9-Anthracenetriol、リファレンスにAngiotensin II[M+H]1+
Mono 分子量1046.5418、Somatostain
28[M+H]1+Mono 分子量3147.4710を用いた。
TOF-MS分析では、Bruker製 autoflexIII)を用いた。サンプルのマトリックスに1,8,9-Anthracenetriol、リファレンスにAngiotensin II[M+H]1+
Mono 分子量1046.5418、Somatostain
28[M+H]1+Mono 分子量3147.4710を用いた。
(実施例1)
式（１）の化合物の合成(Ｒ１＝メチル基、Ｒ２＝炭素数17の炭化水素、1本当たりのポリエチレングリコール鎖の分子量約1000の場合)
式（１）の化合物の合成(Ｒ１＝メチル基、Ｒ２＝炭素数17の炭化水素、1本当たりのポリエチレングリコール鎖の分子量約1000の場合)
(式（４）の化合物の合成)
温度計、窒素吹き込み管、撹拌機を付した3000mL丸底フラスコへジグリセリン807g、アセトン1614g(5.7mol eq.)、トリフルオロ酢酸(1mol%)を加え、25℃で3時間反応させた。反応後、トリエチルアミン(5mol%)で中和を行い、アセトンを濃縮した。その後、ヘキサン(1600g)水(1600g)を添加し、ヘキサン/水抽出をした。ヘキサン層を除去し、新たなヘキサン(1600g)を加え、ヘキサン/水抽出をした。この抽出を合計5回行った。ヘキサン層を除去した後、水層に食塩533gを溶解させ、クロロホルム(1600g)を加え、25%食塩水/クロロホルム抽出をした。水層を除去し、新たな25%食塩水を加え、25%食塩水/クロロホルム(1600g)抽出をした。この抽出を合計5回行った。クロロホルム層を濃縮した。濃縮液に窒素を吹き込みながら40℃にて減圧乾燥をし、式（４）で表される1,2-イソプロピリデンジグリセリン147g(モル収率 27%)を得た。
1H-NMR(DMSO, 内部標準TMS) δ(ppm):
1.26, 1.31(3H, 3H, s C(CH3)2)
3.30−3.66(8H, m C(CH3)2OCHH,
-CH 2-O-CH 2-, CH 2OH,
CH(OH))
3.96-3.98(1H, t, C(CH3)2OCHH)
4.14-4.17(1H, m, C(CH3)2OCH)
4,46-4.48(1H, t, CH2OH)
4.62-4.63(1H, m, CH(OH))
温度計、窒素吹き込み管、撹拌機を付した3000mL丸底フラスコへジグリセリン807g、アセトン1614g(5.7mol eq.)、トリフルオロ酢酸(1mol%)を加え、25℃で3時間反応させた。反応後、トリエチルアミン(5mol%)で中和を行い、アセトンを濃縮した。その後、ヘキサン(1600g)水(1600g)を添加し、ヘキサン/水抽出をした。ヘキサン層を除去し、新たなヘキサン(1600g)を加え、ヘキサン/水抽出をした。この抽出を合計5回行った。ヘキサン層を除去した後、水層に食塩533gを溶解させ、クロロホルム(1600g)を加え、25%食塩水/クロロホルム抽出をした。水層を除去し、新たな25%食塩水を加え、25%食塩水/クロロホルム(1600g)抽出をした。この抽出を合計5回行った。クロロホルム層を濃縮した。濃縮液に窒素を吹き込みながら40℃にて減圧乾燥をし、式（４）で表される1,2-イソプロピリデンジグリセリン147g(モル収率 27%)を得た。
1H-NMR(DMSO, 内部標準TMS) δ(ppm):
1.26, 1.31(3H, 3H, s C(CH3)2)
3.30−3.66(8H, m C(CH3)2OCHH,
-CH 2-O-CH 2-, CH 2OH,
CH(OH))
3.96-3.98(1H, t, C(CH3)2OCHH)
4.14-4.17(1H, m, C(CH3)2OCH)
4,46-4.48(1H, t, CH2OH)
4.62-4.63(1H, m, CH(OH))
(工程（Ａ）)
1,2-イソプロピリデンジグリセリン 50g(0.24mol)、脱水トルエン202g、ナトリウムメトキシド28%メタノール溶液3.56g(0.018mol, 7.5mol%)を5Lオートクレーブに仕込み、60℃に昇温した後、窒素を吹き込みながら、真空度を100mHgにし、脱メタノールを30分間行った。系内を窒素置換後、100℃に昇温し、 0.5MPa以下の圧力でエチレンオキサイド499g(11.3mol)を加えた後、2時間30分間反応を続けた。減圧にて未反応のエチレンオキサイドガスを除去後、70℃に冷却して、下記式（１０）の化合物を得た。
1,2-イソプロピリデンジグリセリン 50g(0.24mol)、脱水トルエン202g、ナトリウムメトキシド28%メタノール溶液3.56g(0.018mol, 7.5mol%)を5Lオートクレーブに仕込み、60℃に昇温した後、窒素を吹き込みながら、真空度を100mHgにし、脱メタノールを30分間行った。系内を窒素置換後、100℃に昇温し、 0.5MPa以下の圧力でエチレンオキサイド499g(11.3mol)を加えた後、2時間30分間反応を続けた。減圧にて未反応のエチレンオキサイドガスを除去後、70℃に冷却して、下記式（１０）の化合物を得た。
1H-NMR(CDCl3, 内部標準TMS) δ(ppm):
1.36, 1.41(3H, 3H, s C(CH3)2)
3.44-3.75(200H, m, -CH 2O（CH 2CH 2O）nH, CHO(CH 2CH 2O)nH,
C(CH3)2OCHH
-CH 2OCH 2-),
4.03-4.06(1H, t, C(CH3)2OCHH),
4.25(1H, m, C(CH3)2OCH)
GPC分析；
＜メインピーク＞
数平均分子量(Mn):1996
重量平均分子量(Mw):2058
多分散度:1.031
ピークトップ分子量(Mp):2067
＜ピーク全体＞
数平均分子量(Mn):1922 重量平均分子量(Mw):2019
多分散度:1.051
TOF-MS 2312.9
(工程（Ｂ）)
温度計、窒素吹き込み管、撹拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した500mL丸底フラスコへ上記式（１０）の化合物を100g(43mmol)、2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0,10g(0.45mmol)、トルエン300gを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。40℃に冷却後、トリエチルアミン15.1g(149mmol)、メタンスルホン酸クロリド14.0g(122mmol)を加え、40℃にて3時間反応させた。その後、ナトリウムメトキシド28%メタノール溶液50.4g(260mmol)加え、13時間反応させた。続いて、窒素を吹き込みながら減圧にして脱メタノールを40℃にて行った。トルエン100g、2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0,1g(0.45mmol)を加えた後、ろ過を行った。トルエンを濃縮後、500mL丸底フラスコに移送し、フラスコ内のトルエン量が約300gになるまで、加熱還流させ、水分を除去した。40℃に冷却後、トリエチルアミン15.1g(149mmol)、メタンスルホン酸クロリド14.0g(122mmol)を加え、40℃にて3時間反応させた。その後、ナトリウムメトキシド28%メタノール溶液50.4g(260mmol)加え、4時間反応させた。続いて、窒素を吹き込みながら減圧にして脱メタノールを40℃にて行った。トルエン100g、2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0,10g(0.45mmol)を加えた。25%食塩水500gを用いて、50℃にてトルエン/水抽出をした。この水洗を合計2回行った。トルエン層をろ過後、濃縮をした。内容量が600ｇになるようにトルエンを添加し、10℃以下に冷却をした後にヘキサン600gを添加し、10℃以下にて晶析をした。結晶をろ別後、ヘキサン800g、,2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0.16g(0.73mmol)を加え、結晶を洗浄し、下記式（１１）の化合物84g (収率84%)を得た。
温度計、窒素吹き込み管、撹拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した500mL丸底フラスコへ上記式（１０）の化合物を100g(43mmol)、2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0,10g(0.45mmol)、トルエン300gを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。40℃に冷却後、トリエチルアミン15.1g(149mmol)、メタンスルホン酸クロリド14.0g(122mmol)を加え、40℃にて3時間反応させた。その後、ナトリウムメトキシド28%メタノール溶液50.4g(260mmol)加え、13時間反応させた。続いて、窒素を吹き込みながら減圧にして脱メタノールを40℃にて行った。トルエン100g、2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0,1g(0.45mmol)を加えた後、ろ過を行った。トルエンを濃縮後、500mL丸底フラスコに移送し、フラスコ内のトルエン量が約300gになるまで、加熱還流させ、水分を除去した。40℃に冷却後、トリエチルアミン15.1g(149mmol)、メタンスルホン酸クロリド14.0g(122mmol)を加え、40℃にて3時間反応させた。その後、ナトリウムメトキシド28%メタノール溶液50.4g(260mmol)加え、4時間反応させた。続いて、窒素を吹き込みながら減圧にして脱メタノールを40℃にて行った。トルエン100g、2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0,10g(0.45mmol)を加えた。25%食塩水500gを用いて、50℃にてトルエン/水抽出をした。この水洗を合計2回行った。トルエン層をろ過後、濃縮をした。内容量が600ｇになるようにトルエンを添加し、10℃以下に冷却をした後にヘキサン600gを添加し、10℃以下にて晶析をした。結晶をろ別後、ヘキサン800g、,2,6-ジtert-ブチル-p-クレゾール0.16g(0.73mmol)を加え、結晶を洗浄し、下記式（１１）の化合物84g (収率84%)を得た。
1H-NMR(CDCl3, 内部標準TMS) δ(ppm):
1.36, 1.41(3H, 3H, s C(CH3)2)
3.38(6H, s, -CH2O（CH2CH2O）nCH 3 , -CHO（CH2CH2O）nCH 3,)
3.44-3.75(200H,m, -CH 2（CH 2CH 2O）nCH3, CHO(CH 2CH 2O)nCH3,
C(CH3)2OCHH
-CH 2OCH 2-),
4.03-4.06(1H, t, C(CH3)2OCHH),
4.23-4.26(1H, m, C(CH3)2OCH)
GPC分析；
＜メインピーク＞
数平均分子量(Mn):2119 重量平均分子量(Mw):2181
多分散度:1.029 ピークトップ分子量（Mp）:2181
＜ピーク全体＞
数平均分子量(Mn):2108 重量平均分子量(Mw):2232
多分散度:1.059
(工程（Ｃ）)
1Lビーカーに上記式（１１）の化合物40g(17mmol)、注射用水500gを入れ、式（１１）の化合物を溶解させた後、85%リン酸水溶液を添加し、溶液のpHを1.8に調整した。続いて、昇温して50℃にて1時間30分間、酸加水分解を行った。加水分解後、400g/L水酸化ナトリウム水溶液を用いて、pH7.0に中和した。クロロホルム200gを添加し、水/クロロホルム抽出をした。この抽出を2回行った。その後、クロロホルム層を濃縮し、トルエン200gに溶解し、硫酸マグネシウム12gを添加し、25℃にて脱水を行った。ろ過後、容器を120gのトルエンで洗浄後、トルエン溶液を10℃以下まで冷却した。続いてヘキサン240gを添加し、10℃以下にて晶析を行った。結晶をろ別後、ヘキサン240gを加え、結晶を洗浄し、下記式（１２）の化合物34g(収率85%)を得た。
1H-NMR(CDCl3, 内部標準TMS) δ(ppm):
δ3.38(6H, s, -CH2O（CH2CH2O）nCH 3 , -CHO（CH2CH2O）nCH 3,)
3.49-3.85(202H, m, -CH 2O（CH 2CH 2O）nCH3, CHO(CH 2CH 2O)nCH3,
-CH 2OCH 2-, CH 2OH-CH(OH
)-),
GPC分析；
＜メインピーク＞
数平均分子量(Mn):2062 重量平均分子量(Mw):2120
多分散度:1.028 ピークトップ分子量（Mp）:2115
＜ピーク全体＞
数平均分子量(Mn):2070 重量平均分子量(Mw):2178
多分散度:1.052
(工程（Ｄ）)
温度計、窒素吹き込み管、撹拌機、及び冷却管を付した100mL丸底フラスコへステアリン酸4.0g(14mmol)、トルエン32gを仕込み、40℃まで昇温させ、ステアリン酸を溶解させた。続いて、ジシクロへキシルカルボジイミド2.3g(11mmol)、上記式（１２）の化合物8.0g(3.5mmol)、N,N-ジメチル-4-アミノピリジン0.425g(3.5mmol)を添加した後、60℃に昇温した。60℃にて1時間30分間反応させた後、ろ過、濃縮を行った。その後、アセトニトリル40gに溶解し、ヘキサン160gを添加し、ヘキサン/アセトニトリル抽出を行う。ヘキサン層を除去して、新たなヘキサン160gを添加し、再度へキサン/アセトニトリル抽出を行う。この抽出を合計5回行う。アセトニトリル層を濃縮した後、酢酸エチル45gに溶解し、吸着剤「キョワード700」(協和化学工業株式会社製)にてN,N-ジメチル-4-アミノピリジンを吸着処理により除去した。ろ過後、濃縮を行い、下記式（１３）の化合物7.2g(モル収率73%)を得た。
温度計、窒素吹き込み管、撹拌機、及び冷却管を付した100mL丸底フラスコへステアリン酸4.0g(14mmol)、トルエン32gを仕込み、40℃まで昇温させ、ステアリン酸を溶解させた。続いて、ジシクロへキシルカルボジイミド2.3g(11mmol)、上記式（１２）の化合物8.0g(3.5mmol)、N,N-ジメチル-4-アミノピリジン0.425g(3.5mmol)を添加した後、60℃に昇温した。60℃にて1時間30分間反応させた後、ろ過、濃縮を行った。その後、アセトニトリル40gに溶解し、ヘキサン160gを添加し、ヘキサン/アセトニトリル抽出を行う。ヘキサン層を除去して、新たなヘキサン160gを添加し、再度へキサン/アセトニトリル抽出を行う。この抽出を合計5回行う。アセトニトリル層を濃縮した後、酢酸エチル45gに溶解し、吸着剤「キョワード700」(協和化学工業株式会社製)にてN,N-ジメチル-4-アミノピリジンを吸着処理により除去した。ろ過後、濃縮を行い、下記式（１３）の化合物7.2g(モル収率73%)を得た。
1H-NMR(CDCl3, 内部標準TMS) δ(ppm):
δ0.86-0.90(6H, t, -CHCO2CH2CH2(CH2)14CH 3 ,
-CH2CO2CH2CH2(CH2)14CH 3),
1.15-1.35(56H, m, -CHCO2CH2CH2(CH 2)14CH3,
-CH2CO2CH2CH2(CH 2)14CH3),
1.55-1.65((4H, m -CHCO2CH2CH 2(CH2)14CH3,
-CH2CO2CH2CH 2(CH2)14CH3),
2.27-2.32（4H, m , -CHCO2CH 2CH2(CH2)14CH3,
-CH2CO2CH 2CH2(CH2)14CH3）,
3.38(6H, s, -CH2O（CH2CH2O）nCH 3, -CHO（CH2CH2O）nCH 3 ),
3.49-3.85(199H, m, -CH 2O（CH 2CH 2O）nCH3, CHO(CH 2CH 2O)nCH3,
-CH 2OCH 2-,)
4.11-4.16(1H, m, -CHHCO2CH2CH2(CH2)14CH3)
4.31-4.34(1H, d, -CHHCO2CH2CH2(CH2)14CH3)
5.18-5.20(1H, m, -CHCO2CH2CH2(CH2)14CH3)
得られた式（１３）の化合物は、TLC(薄層クロマトグラフィー:クロロホルム/メタノール=85/15、90/10)にて展開後、ヨウ素発色にて確認したところ、純度は98%以上であった(リファレンスとして分子量2,000の末端メトキシのポリエチレングリコールを使用)。
残存脂肪酸の分析は、TLC(薄層クロマトグラフィー:クロロホルム/メタノール=99/5)にて、展開し、リン酸硫酸銅の発色にて分析した。その結果、残存ステアリン酸は0.05%以下であった。
(リポソームとしの評価)
水添大豆ホスファジルコリン 6.059g(7.7mmol)、コレステロール1.0g(2.6mmol)をクロロホルムに溶解させた後、エバポレーターにより溶剤を留去し、さらに6時間真空乾燥させた。この脂質乾燥物0.07gを秤量し、水20mLを加えて、水和させ、湯浴につけながらボルテックスミキサーにて軽く撹拌した。この脂質分散液を0.2μmの孔径のポリカーボネートメンブレンフィルターを用いて、サイジングを行い、リポソーム液を調製した(0.2μm×2回)。該リポソーム液を5セット調製し、それぞれをリポソーム液(i)、(ii)とした。
水添大豆ホスファジルコリン 6.059g(7.7mmol)、コレステロール1.0g(2.6mmol)をクロロホルムに溶解させた後、エバポレーターにより溶剤を留去し、さらに6時間真空乾燥させた。この脂質乾燥物0.07gを秤量し、水20mLを加えて、水和させ、湯浴につけながらボルテックスミキサーにて軽く撹拌した。この脂質分散液を0.2μmの孔径のポリカーボネートメンブレンフィルターを用いて、サイジングを行い、リポソーム液を調製した(0.2μm×2回)。該リポソーム液を5セット調製し、それぞれをリポソーム液(i)、(ii)とした。
（実施例Ａ）
別に工程（Ｄ）で得られた式（１３）で表される、ジステアリルグリセロールと結合した、分岐型メチルポリエチレングリコール0.072g(2.57×10-2mmol)を水5mLに溶解させておき、分散液(5.1mM)を調製した。この分散液をリポソーム（i）に添加し、60℃で1時間撹拌し、分岐型ポリエチレングリコール修飾リポソーム（Ａ）を調整した(脂質濃度 4mM、 PEG濃度 1mM)。
別に工程（Ｄ）で得られた式（１３）で表される、ジステアリルグリセロールと結合した、分岐型メチルポリエチレングリコール0.072g(2.57×10-2mmol)を水5mLに溶解させておき、分散液(5.1mM)を調製した。この分散液をリポソーム（i）に添加し、60℃で1時間撹拌し、分岐型ポリエチレングリコール修飾リポソーム（Ａ）を調整した(脂質濃度 4mM、 PEG濃度 1mM)。
（比較例Ｂ）
下記式（１４）で表される化合物(ポリエチレングリコール分子量2000)を0,068g(2.57×10-2mmol)を水5mLに溶解させておき、分散液(5.1mM)を調製した。この分散液(ii)に添加し、60℃で1時間撹拌し、直鎖型ポリエチレングリコール修飾リポソーム(B)を調整した(脂質濃度 4mM、PEG濃度 1mM)。
下記式（１４）で表される化合物(ポリエチレングリコール分子量2000)を0,068g(2.57×10-2mmol)を水5mLに溶解させておき、分散液(5.1mM)を調製した。この分散液(ii)に添加し、60℃で1時間撹拌し、直鎖型ポリエチレングリコール修飾リポソーム(B)を調整した(脂質濃度 4mM、PEG濃度 1mM)。
(ポリエチレングリコール修飾リポソームの安定性の検討)
ポリエチレングリコール修飾リポソームの安定性を評価するため、実施例A、比較例Bで得られた2つのポリエチレングリコール修飾リポソームを、40℃の低温恒温器(LTI-700E: EYELA)に入れ、1、2、3ヶ月での安定性を評価した。結果を表に示す。
ポリエチレングリコール修飾リポソームの安定性を評価するため、実施例A、比較例Bで得られた2つのポリエチレングリコール修飾リポソームを、40℃の低温恒温器(LTI-700E: EYELA)に入れ、1、2、3ヶ月での安定性を評価した。結果を表に示す。
40℃でのポリエチレングリコール修飾リポソームの安定性評価の結果、本願発明のジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールを含む、実施例Aのポリエチレングリコール修飾リポソーム（Ａ）は、3ヶ月経過後も安定であった。
一方、従来の直鎖型ポリエチレングリコールを使用したポリエチレングリコール修飾リポソームは、2ヶ月で凝集していた。
以上より、本願発明のジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールを含むポリエチレングリコール修飾リポソームは、従来の直鎖型ポリエチレングリコールを使用したリポソームよりも安定性の高いことが明らかになった。
Claims (3)
- 式（１）で表されるジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール。
（式（１）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
Ｒ２は炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。
Ｘは分岐型ポリエチレングリコールとジアシルグリセロールのリンカー部位であり、式（２）で表される。
（式（２）中、Ｙはエーテル結合を表す。ｌ＝０、ｍ＝０である。） - 請求項１記載の分岐型ポリエチレングリコールを含む、ポリエチレングリコール修飾リポソーム。
- 下記の工程（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）を含むことを特徴とする、式（３）で表されるジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコールの製造方法。
（式（３）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
Ｒ２は炭素数９〜２１のアルキル基またはアルケニル基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
工程（Ａ）: 下記式（４）で表される化合物にエチレンオキサイドを付加し、下記式（５）のポリエチレングリコール誘導体を得る工程；
（式（５）において、nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
工程（Ｂ）： 式（５）のポリエチレングリコール誘導体中のエチレンオキサイド基末端水酸基の水素原子を炭化水素基に置換することによって、下記式（６）のポリエチレングリコール誘導体を得る工程；
（式（６）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
工程（Ｃ）： 式（６）のポリエチレングリコール誘導体をｐＨ1.0-3.0で酸加水分解し、式（７）のポリエチレングリコール誘導体を得る工程；
（式（７）中、Ｒ１は炭素数１〜７の炭化水素基である。
nはポリエチレングリコール鎖の平均付加モル数であり、10≦n≦100である。）
工程（Ｄ）： 式（７）のポリエチレングリコール誘導体中の末端水酸基と脂肪酸とを脱水縮合させ、前記式（３）の分岐型ポリエチレングリコールを得る工程。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012229620A JP6051758B2 (ja) | 2011-10-17 | 2012-10-17 | ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソーム |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2011227892 | 2011-10-17 | ||
| JP2011227892 | 2011-10-17 | ||
| JP2012229620A JP6051758B2 (ja) | 2011-10-17 | 2012-10-17 | ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソーム |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2013100492A JP2013100492A (ja) | 2013-05-23 |
| JP6051758B2 true JP6051758B2 (ja) | 2016-12-27 |
Family
ID=48224128
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012229620A Active JP6051758B2 (ja) | 2011-10-17 | 2012-10-17 | ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソーム |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8575380B2 (ja) |
| JP (1) | JP6051758B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103408748B (zh) * | 2013-08-13 | 2016-06-29 | 张家港威胜生物医药有限公司 | 一种水溶性紫檀芪衍生物的合成方法 |
| JP6805385B1 (ja) * | 2020-08-31 | 2020-12-23 | ジェイ−ネットワーク，インコーポレイテッド | 表皮内の保湿関連物質の発現増強剤 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5653020B2 (ja) * | 1973-10-03 | 1981-12-16 | ||
| JP3218755B2 (ja) * | 1992-11-12 | 2001-10-15 | 日本油脂株式会社 | グリセリンエーテルエステル |
| JPH07163381A (ja) * | 1993-12-13 | 1995-06-27 | Kao Corp | ジグリセリン−１，２−ジエステルの製造方法 |
| MXPA02000402A (es) | 1999-07-14 | 2002-07-30 | Alza Corp | Lipopolimeros neutros y composiciones liposomales que contienen los mismos. |
| CN102665685A (zh) * | 2009-06-02 | 2012-09-12 | 念·吴 | 纯的peg-脂质缀合物 |
-
2012
- 2012-10-17 US US13/653,624 patent/US8575380B2/en active Active
- 2012-10-17 JP JP2012229620A patent/JP6051758B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8575380B2 (en) | 2013-11-05 |
| US20130116461A1 (en) | 2013-05-09 |
| JP2013100492A (ja) | 2013-05-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112961065B (zh) | 一种可电离脂质分子及其制备方法及其在制备脂质纳米颗粒的应用 | |
| JP6182457B2 (ja) | カチオン性脂質を含有するドラックデリバリーシステムのための脂質ナノ粒子 | |
| EP2414322B1 (en) | Polyamine derivatives | |
| EP4282855A1 (en) | Ionizable lipid molecule, preparation method therefor, and application thereof in preparation of lipid nanoparticle | |
| CN110799492A (zh) | 用于递送核酸的新型羰基脂质和脂质纳米颗粒制剂 | |
| KR102498068B1 (ko) | 분기형 헤테로 단분산 폴리에틸렌 글리콜, 그 제조 방법, 및 그 결합체 | |
| CN114773217B (zh) | 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途 | |
| JP4714289B2 (ja) | リン脂質類似化合物 | |
| WO2023236976A1 (zh) | 一种脂质化合物及其制备方法与应用 | |
| CN116456967A (zh) | 可离子化脂质体、其制备及在基因递送中的应用 | |
| CN114105799B (zh) | 一种氨基脂质及其制备方法和应用 | |
| JP6051758B2 (ja) | ジアシルグリセロールと結合した分岐型ポリエチレングリコール、その製造方法およびポリエチレングリコール修飾リポソーム | |
| US10092655B2 (en) | Cationic lipid for nucleic acid delivery | |
| CN116082275B (zh) | 一种脾脏中高表达的阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途 | |
| JP5949036B2 (ja) | ポリオキシアルキレン修飾脂質およびその製造方法 | |
| CN113214171B (zh) | 两亲性树形分子、合成及其作为药物递送系统的应用 | |
| WO2012173784A1 (en) | Disubstituted maleic anhydrides with altered kinetics of ring closure | |
| JP7043411B2 (ja) | カチオン性脂質としての化合物 | |
| CN113292616B (zh) | 一种单糖配体功能化的阳离子脂质类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN117229160B (zh) | 三酯类阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途 | |
| CN116199646B (zh) | 一种基于Tris的可电离脂质及其制备方法与应用 | |
| CN116535381B (zh) | 具有五元环缩醛结构的阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途 | |
| CN117466768B (zh) | 阳离子脂质化合物及其制备方法和应用、以及mRNA递送系统 | |
| US8163869B1 (en) | Purification method of carboxyl group-containing polyoxyethylene derivative | |
| KR20240066080A (ko) | 아마이드 및 에스터 작용기를 갖는 지질 및 이의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20151008 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20160826 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160831 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161013 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161101 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161114 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6051758 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |