具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果,旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点,不作为对本案可实施范围的限定。
实施例1
化合物2的合成
步骤1:
向化合物2-1(3.00 g)的叔丁醇(20 mL)溶液中依次加入 1-癸醇(3.23 g)和碳酸铯(11.1 g)。溶液在室温下搅拌4小时后,点板(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有新点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%乙酸乙酯(体积百分比)的石油醚溶液)纯化得到化合物2-2(3.93 g,69%收率)。
步骤2:
向化合物2-2(3.00g)的THF(20 mL)和水的溶液中加入氢氧化锂(860 mg),将混合物在60℃搅拌16小时。TLC显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,将水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30 mL)萃取2次,合并有机层,浓缩得到化合物2-3(2.10 g,95%收率)。
步骤3:
将化合物2-3(2.0 g)溶于DCM(20 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,2.0g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,1.3 g)和5-溴-1-戊醇(1.5 g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与2-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物2-4(2.8 g,87%收率)。
步骤4:
将化合物2-5(5.0 g)溶于二氯甲烷(70 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,4.48g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,3.57 g)和8-溴辛酸(4.78 g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与2-5标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(60g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速30ml/min)得到无色油状液体化合物2-6(8.0 g,88.9%收率)。下述实施例1-6,8-10,11-13,16-18的2-6化合物均采用此方法合成。
步骤5:
向化合物2-6(8.0 g)和乙醇胺(1.59 g)的乙腈溶液(50 mL)溶液中加入碳酸钾(7.19 g)。将混合物在70℃搅拌2小时。TLC显示化合物2-6完全消失,有一个极性变大的点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(25 g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-10% 20min,10-10% 5min,流速20ml/min)得到无色油状液体化合物2-7(4.2 g,54.9%收率)。
步骤6:
将化合物2-4(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物2-7(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物2(700 mg,73%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.80 (s, 1H), 4.16 – 4.01 (d, J =3.2 Hz, 2H), 3.75 – 3.45 (m, 6H), 2.78 – 2.68 (dd, J = 8.2, 5.8 Hz, 2H), 2.61– 2.51 (m, 2H), 2.50 – 2.45 (m, 4H), 2.31 – 2.16 (m, 2H), 1.70 – 1.69 (s,1H), 1.68 – 1.66 (s, 1H), 1.58 – 1.57 (s, 2H), 1.57 – 1.55 (d, J = 3.4 Hz,2H), 1.55 – 1.51 (m, 6H), 1.50 – 1.48 (s, 2H), 1.38 – 1.35 (d, J = 1.0 Hz,4H), 1.35 – 1.30 (m, 20H), 1.30 – 1.27 (m, 20H), 1.19 – 1.17 (m, 3H), 0.91 –0.88 (m, 9H)。
实施例2
化合物3的合成
步骤1:
向化合物3-1(3.00 g)的叔丁醇(20 mL)溶液中依次加入 1-癸醇(4.45 g)和碳酸铯(15.3 g)。混合物在室温下搅拌4小时后,点板(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有新点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,将粗产品通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%乙酸乙酯(体积百分比)的石油醚溶液)纯化得到化合物3-2(3.1 g,46%收率)。
步骤2:
向化合物3-2(3.00g)的THF(20 mL)和水的溶液中加入氢氧化锂(860 mg)将混合物在60℃搅拌16小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,将水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30 mL)萃取2次,合并有机层,浓缩得到化合物3-3(2.50 g,92%收率)。
步骤3:
将化合物3-3(2.0 g)溶于DCM(20 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,2.0g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,1.3 g)和5-溴-1-戊醇(1.5 g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与3-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物3-4(2.6 g,83%收率)。
步骤4:
将化合物3-4(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物2-7(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物3(750 mg,80%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.14 – 4.02 (d, J =2.6 Hz, 2H), 3.73 – 3.46 (m, 6H), 2.61 (s, 1H), 2.59 – 2.50 (m, 2H), 2.49 –2.45 (m, 4H), 2.29 – 2.18 (m, 2H), 1.71 – 1.63 (m, 4H), 1.60 – 1.50 (m, 12H),1.49 (s, 2H), 1.38 – 1.36 (d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.35 – 1.30 (m, 20H), 1.30 –1.26 (m, 20H), 0.92 (s, 3H), 0.91 – 0.87 (s, 9H)。
实施例3
化合物4的合成
步骤1:
向化合物4-1(3.00 g)的叔丁醇(20 mL)溶液中依次加入 1-癸醇(4.6 g)和碳酸铯(16.1 g)。混合物在室温下搅拌4小时后,点板(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有新点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,将粗产品通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%乙酸乙酯(体积百分比)的石油醚溶液)纯化得到化合物4-2(3.0 g,47.3%收率)。
步骤2:
向化合物4-2(3.00g)的THF(20 mL)和水的溶液中加入氢氧化锂(860 mg)将混合物在60℃搅拌16小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,将水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30 mL)萃取2次,合并有机层,浓缩得到化合物4-3(2.50 g,92%收率)。
步骤3:
将化合物4-3(2.0 g)溶于DCM(20 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,2.1g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,1.4 g)和5-溴-1-戊醇(1.6 g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与3-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物4-4(2.6 g,84%收率)。
步骤4:
将化合物4-4(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物2-7(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 %(甲醇在DCM/MeOH溶液中的体积百分含量,后同) 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物4(610 mg,65.7% 收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.80 – 4.74 (s, 1H), 4.15 – 4.01 (d,J = 2.6 Hz, 2H), 3.73 – 3.44 (m, 6H), 2.56 – 2.50 (m, 3H), 2.49 – 2.45 (m,4H), 2.29 – 2.18 (m, 2H), 1.71 – 1.47 (m, 18H), 1.41 – 1.26 (m, 46H), 0.96 –0.92 (m, 3H), 0.99 (s, 9H)。
实施例4
化合物6的合成
步骤1:
向化合物6-1(19.0 g)的叔丁醇(20 mL)溶液中依次加入 1-癸醇(3.0 g)和碳酸铯(12.4 g)。混合物在室温下搅拌4小时后,点板(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有新点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,将粗产品通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%乙酸乙酯(体积百分比)的石油醚溶液)纯化得到化合物6-2(2.1 g,43%收率)。
步骤2:
向化合物6-2(2.1g)的THF(20 mL)和水(10 mL)的溶液中加入氢氧化锂(584 mg)将混合物在60℃搅拌16小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30 mL)萃取2次,合并有机相,浓缩得到化合物6-3(1.6 g,85%收率)。
步骤3:
将化合物6-3(2.0 g) 溶于DCM(20 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,2.0g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,1.3 g)和5-溴-1-戊醇(1.5 g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与6-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物6-4(2.5 g,82%收率)。
步骤4:
将化合物6-4(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物2-7(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物6(742 mg,75%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.68 –3.57 (d, J = 5.0 Hz, 4H), 3.55 – 3.46 (s, 2H), 2.61 – 2.43 (m, 8H), 2.28 –2.17 (s, 2H), 1.73 – 1.63 (d, J = 3.9 Hz, 4H), 1.60 – 1.46 (m, 12H), 1.39 –1.23 (m, 40H), 0.96 – 0.84 (s, 9H)。
实施例5
化合物7的合成
步骤1:
向化合物2-1(3.00 g)的叔丁醇(20 mL)溶液中依次加入辛醇(3.1 g)和碳酸铯(11.0 g)。溶液在室温下搅拌4小时后,点板(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有新点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%乙酸乙酯(体积百分比)的石油醚溶液)纯化得到化合物7-2(3.6 g,69%收率)。
步骤2:
向化合物7-2(3.00g)的THF(20 mL)和水的溶液中加入氢氧化锂(860 mg)将混合物在60℃搅拌16小时。TLC显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,将水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30 mL)萃取2次,合并有机层,浓缩得到化合物7-3(2.0 g,94%收率)。
步骤3:
将化合物7-3(2.0 g)溶于DCM(20 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,2.0g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,1.3 g)和5-溴-1-戊醇(1.5 g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与7-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10g正相柱,PE/EA, 0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物7-4(2.5 g,74%收率)。
步骤4:
将化合物7-4(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物2-7(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱, DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物7(750 mg,75%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 2.2 Hz,2H), 3.78 – 3.37 (m, 6H), 2.75 (s, 1H), 2.55 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 2.49 – 2.43(m, 4H), 2.30 – 2.16 (m, 2H), 1.71 – 1.65 (m, 2H), 1.64 (s, 2H), 1.60 – 1.50(m, 10H), 1.49 (s, 2H), 1.37(d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.35 – 1.30 (m, 20H), 1.30 –1.26 (m, 16H), 1.22 – 1.14 (m, 3H), 0.99 (s, 9H)。
实施例6
化合物14的合成
步骤1:
向化合物14-1(3.0 g)和三乙胺(5.3 g)的二氯甲烷(50 mL)溶液中在冰浴条件下加入对甲苯磺酰氯(7.4 g)。将混合物室温下搅拌3小时后,将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用稀盐酸和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化得到化合物14-2(6.0 g,86%收率)。
步骤2:
冰浴条件下,向叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷 (2.0 g) 的DMF (20 mL) 溶液中加入NaH(680 mg, 60%),将混合物0 oC下搅拌半小时后,将14-2缓缓加入溶液中,溶液在80 oC下搅拌两小时。待溶液降至室温后,加入饱和氯化铵溶液淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化得到化合物14-3(2.5 g,80%收率)。
步骤3:
冰浴条件下,向14-3 (2.5 g) 的无水四氢呋喃 (20 mL) 溶液中加入1M TBAF 溶液,将溶液升至室温,在室温下搅拌两小时,加入饱和氯化铵溶液,加水稀释后,乙酸乙酯萃取,合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-60%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化得到化合物14-4(1.4 g,96%收率)。
步骤4:
向化合物14-4(1.4 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,1.07g),7-溴庚酸(2.01 g)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,2.01g),反应混合物25℃搅拌12小时,将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物14-5(2.10g,68%收率)。
步骤5:
将化合物14-5(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物2-7(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物14(820 mg,81%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.64 (d,J = 5.0 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.53 (s, 2H), 2.55 (s, 2H), 2.48 (s, 4H), 2.24(s, 4H),1.71 – 1.65 (m, 4H), 1.58 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 1.53 (s, 4H), 1.51 (s,2H), 1.38 – 1.35 (m, 6H), 1.35 – 1.33 (m, 8H), 1.32 (d, J = 1.0 Hz, 4H), 1.32– 1.31 (m, 10H), 1.29 (s, 4H), 1.29 (s, 2H), 1.29 – 1.27 (m, 8H), 0.97 – 0.82(m, 9H).
实施例7
化合物17的合成
步骤1:
向化合物2-1(5.00 g)的叔丁醇(40 mL)溶液中依次加入正己醇(2.90 g)和碳酸铯(27.8g)。溶液在室温下搅拌4小时后,点板(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示有新点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%乙酸乙酯(体积百分比)的石油醚溶液)纯化得到化合物17-2(3.14 g,39.8%收率)。
步骤2:
向化合物17-2(3.00g)的THF(20 mL)和水(20 mL)的溶液中加入氢氧化锂(1.03g)将混合物在60℃搅拌16小时。TLC显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,将水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30mL)萃取2次,合并有机层,浓缩得到化合物17-3(1.80 g,88.7%收率)。
步骤3:
将化合物17-3(2.0 g)溶于DCM(20 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,3.1g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,2.0 g)和7-溴-1-庚醇(2.3g)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与2-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10 g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物17-4(2.8 g,74%收率)。
步骤4:
向化合物44-5 (2.00 g)的DCM(15 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,200 mg)和7-溴-1-庚醇(1.51 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.62 g),反应混合物25℃搅拌1小时。TLC显示起始化合物44-5完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的石油醚溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物44-6(2.4 g,74%收率)。
步骤5:
向化合物44-6(2.0 g)和乙醇胺(530 mg)的乙腈溶液(50 mL)溶液中加入碳酸钾(1.80 g)。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物44-6完全消失,有一个极性变大的点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(25 g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-10% 20min,10-10% 5min,流速20ml/min)得到无色油状液体化合物17-5(1.0 g,53.8%收率)。
步骤6:
将化合物17-4(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(191 mg),K2CO3(527 mg)和化合物17-5(673 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比17-5极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物17(725 mg,70%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.15 – 4.03 (m, 4H), 3.56 – 3.45 (m,6H), 2.75 (s, 1H), 2.55 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 2.48 (d, J = 1.0 Hz, 4H), 2.29(s, 1H), 1.65 (s, 4H), 1.50 – 1.46 (m, 10H), 1.40 – 1.38 (s, 4H), 1.36 (d, J= 0.6 Hz, 2H), 1.34 (d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.32 (d, J = 1.0 Hz, 10H), 1.32 –1.30 (m, 10H), 1.28 (d, J = 1.2 Hz, 12H), 1.18 (s, 3H), 0.94 – 0.84 (m, 9H).
实施例8
化合物28的合成
步骤1:
向化合物2-6(2.0 g)和N,N-二乙基乙二胺(755 mg)的乙腈溶液(50 mL)溶液中加入碳酸钾(1.2 g)。将混合物在70℃搅拌3小时。有一个极性变大的点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min)得到无色油状液体化合物28-1(900 mg,30%收率)。
步骤2:
将化合物28-1(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(146 mg),K2CO3(406 mg)和化合物7-4(425 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有新点生成。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物7(94 mg,11%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 2.2 Hz,2H), 3.73 – 3.60 (m, 4H), 2.75 (s, 1H), 2.69 – 2.57 (m, 8H), 2.51 – 2.40 (m,4H), 2.31 – 2.17 (m, 2H), 1.72 – 1.65 (m, 4H), 1.60 – 1.50 (m, 10H), 1.48 (s,2H), 1.36 (d, J = 0.6 Hz, 4H), 1.35 – 1.30 (m, 20H), 1.30 – 1.26 (m, 16H),1.19 (s, 3H), 1.00 (s, 6H), 0.90 (s, 9H)。
实施例9
化合物29的合成
步骤1:
将化合物1-癸硫醇(2.28 g)和KOH(2.20 g)溶于乙醇(20 ml),室温搅拌。然后称取化合物29-1(2.00 g)分批加入到上述反应体系中,室温下搅拌过夜。TLC(PE/EA=3/1,磷钼酸)有新点生成。反应混合液加200ml 水,滴加浓HCl调pH至3附近。用600ml乙酸乙酯萃取上述混合液,有机相Na2SO4干燥后减压蒸发。加适量DCM和硅胶拌样,纯化(30 g正相柱, PE/EA, 0-0 % 10min,0-2% 20min,2-2% 5min,流速30ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到白色固体29-2(950 mg,30%收率)。
步骤2:
将化合物29-2(950 mg)溶于DCM(10 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,924 mg),4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和5-溴-1-戊醇(708 mg)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与29-2标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10 g正相柱, PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到无色油状液体化合物29-3(1.45 g,95%收率)。
步骤3:
将化合物29-3(750 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(170 mg),K2CO3(350 mg)和化合物2-7(559 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释与2-7标样对照点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到淡黄色油状液体化合物29(850 mg)。
1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 4.86 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 6.8Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.61 (dt, J =11.8, 6.4 Hz, 4H), 2.51 (dd, J = 14.4, 6.8 Hz, 6H), 2.28 (t, J = 7.6 Hz, 2H),1.70 – 1.55 (m, 6H), 1.50 (dd, J = 16.6, 10.9 Hz, 8H), 1.40 – 1.21 (m, 46H),0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H)。
实施例10
化合物30的合成
步骤1:
向化合物30-1 (2.00 g)的DMF(15 mL)溶液中依次加入1-癸硫醇(2.10 g)和氢氧化钠(1.20 g),反应混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示起始化合物30-1完全消失。将反应液倒入H2O(50 mL),加EA(20 mL)萃取1次,水相用2M 稀盐酸调节pH为3,加EA(20 mL)萃取3次,合并有机相,用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到化合物30-2(1.70 g,54%收率)。
步骤2:
向化合物30-2 (1.70 g)的DCM(15 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,160 mg)和5-溴戊醇(1.31 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.56 g),反应混合物25℃搅拌2小时。TLC显示起始化合物30-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的石油醚溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物30-3(1.54 g,57%收率)。
步骤3:
向化合物30-3 (1.5 g)的乙醇(15 mL)溶液中加入乙醇胺 (783 mg),混合物在70℃搅拌12小时。TLC显示起始化合物30-3有少量剩余。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%CH3OH(体积百分比)的二氯甲烷溶液,甲醇中加1%氨水)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物30-4(824 mg,58%收率)。
步骤4:
向化合物30-4 (724 mg)的DMF(7 mL)溶液中依次加入七烷-9-基8-溴辛酸酯(1.03 g ),NaI(278 mg)和K2CO3(770 mg),反应混合物在50℃反应12小时。TLC显示起始化合物30-4有少量剩余。将反应液倒入H2O(50 mL),加EA(20 mL)萃取3次,合并有机相,有机相用饱和食盐(20 mL)洗2次,有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%CH3OH(体积百分比)的二氯甲烷溶液,甲醇中加1%氨水)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物30(1.02g,71%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (dd, J = 12.4, 6.0 Hz, 1H),4.09 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H),2.73 – 2.38 (m, 12H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.68 – 1.18 (m, 61H), 0.87(t, J = 6.8 Hz, 9H)。
实施例11
化合物35的合成
步骤1:
向化合物35-1 (2.00 g)的DMF(15 mL)溶液中依次加入1-辛硫醇(2.10 g)和氢氧化钠(1.20 g),反应混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示起始化合物35-1完全消失。将反应液倒入H2O(50 mL),加EA(20 mL)萃取1次,水相用2M 稀盐酸调节pH为3,加EA(20 mL)萃取3次,合并有机相,用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到化合物35-2(1.80 g,56.6%收率)。
步骤2:
将化合物35-2(1000 mg)溶于DCM(10 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,924 mg),4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和5-溴-1-戊醇(708 mg)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与35-2标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10 g正相柱, PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到无色油状液体化合物35-3(1.30 g,79.2%收率)。
步骤3:
将化合物35-3(750 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(170 mg),K2CO3(350 mg)和化合物2-7(559 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释与35-3标样对照点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比35-3极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱, DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到淡黄色油状液体化合物35(830 mg,56.9%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (dd, J = 12.4, 6.0 Hz, 1H),4.09 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H),2.73 – 2.38 (m, 12H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.68 – 1.18 (m, 61H), 0.87(t, J = 6.8 Hz, 9H)。
实施例12
化合物36的合成
步骤1:
将化合物1-辛硫醇(2.50 g)和NaOH(2.20 g)溶于乙醇(20 ml),室温搅拌。然后称取化合物36-1(2.00 g)分批加入到上述反应体系中,室温搅拌过夜。TLC(PE/EA=3/1,磷钼酸)监测有新点生成。反应混合液加200ml水,滴加浓HCl调pH至3附近。用600ml 乙酸乙酯萃取上述混合液,有机相Na2SO4干燥后减压蒸发。加适量DCM和硅胶拌样,纯化(30 g正相柱,PE/EA,0-0 % 10min,0-2% 20min,2-2% 5min,流速30ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到白色固体36-2(1.09 g,40.2%收率)。
步骤2:
将化合物36-2(1000 mg)溶于DCM(10 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,924 mg),4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和5-溴-1-戊醇(708 mg)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与36-2标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10 g正相柱, PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到无色油状液体化合物36-3(1.20 g,74.7%收率)。
步骤3:
将化合物36-3(750 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(170 mg),K2CO3(350 mg)和化合物2-7(559 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释与2-7标样对照点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱, DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到淡黄色油状液体化合物35(830 mg,56.9%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (dd, J = 12.4, 6.0 Hz, 1H),4.09 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H),2.73 – 2.38 (m, 14H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.68 – 1.18 (m, 57H), 0.87(t, J = 6.8 Hz, 9H).
实施例13
化合物41的合成
步骤1:
向化合物41-1 (2.00 g)的DMF(15 mL)溶液中依次加入1-癸硫醇(2.30 g)和氢氧化钠(1.20 g),反应混合物在40℃搅拌4小时。TLC显示起始化合物41-1完全消失。将反应液倒入H2O(50 mL),加乙酸乙酯(20 mL)萃取1次,水相用2M稀盐酸调节pH为3,加乙酸乙酯(20mL)萃取3次,合并有机相,用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到化合物41-2(1.80 g,56.6%收率)。
步骤2:
将化合物41-2(1000 mg)溶于DCM(10 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,1.05 g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,560 mg)和8-溴辛酸(1.02 g)分批加入反应体系,室温搅拌2h。取少量反应液稀释与41-2标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(15g正相柱, PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min)得到无色油状液体化合物41-3(1.5 g,77%收率)。
步骤3:
将化合物41-3(700 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(170 mg),K2CO3(350 mg)和化合物2-7(559 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释与2-7标样对照点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比2-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱, DCM/MeOH,0.1% 氨水, 0-0 % 10min, 0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),得到淡黄色油状液体化合物41(600 mg,44.8%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.86 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 4.09 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.61 (dt,J = 11.8, 6.4 Hz, 4H), 2.51 (dd, J = 14.4, 6.8 Hz, 6H), 2.28 (t, J = 7.6 Hz,2H), 1.70 – 1.55 (m, 6H), 1.50 (dd, J = 16.6, 10.8 Hz, 8H), 1.40 – 1.21 (m,50H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H)。
实施例14
化合物44的合成
步骤1:
向化合物44-1 (2.00 g)的DMF(15 mL)溶液中依次加入1-辛硫醇(2.63 g)和氢氧化钠(1.44 g),反应混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示起始化合物44-1完全消失。将反应液倒入H2O(50 mL),加EA(20 mL)萃取1次,水相用2M 稀盐酸调节pH为3,加EA(20 mL)萃取3次,合并有机相,用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到化合物44-2(1.63 g,53%收率)。
步骤2:
向化合物44-2 (1.63 g)的DCM(15 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,172 mg)和5-溴戊醇(1.41 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.75 g),反应混合物25℃搅拌1小时。TLC显示起始化合物44-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的石油醚溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物44-3(1.65 g,62%收率)。
步骤3:
向化合物44-3 (1.5 g)的乙腈(15 mL)溶液中加入乙醇胺 (960 mg) 和碳酸钾(1.15 g), 溶液在70℃搅拌12小时。TLC显示起始化合物44-3有少量剩余。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%CH3OH(体积百分比)的二氯甲烷溶液,甲醇中加1%氨水)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物44-4(800 mg,56%收率)。
步骤4:
向化合物44-5 (2.00 g)的DCM(15 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,200 mg)和7-溴-1-庚醇(1.51 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.62 g),反应混合物25℃搅拌1小时。TLC显示起始化合物44-5完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的石油醚溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物44-6(2.40 g,74%收率)。
步骤5:
向化合物44-4 (800 mg) 的DMF (7 mL) 溶液中依次加入44-6 (1.12 g ),NaI(332 mg)和K2CO3(918 mg),反应混合物在50℃反应12小时。TLC显示起始化合物44-4有少量剩余。将反应液倒入H2O(50 mL),加EA(20 mL)萃取3次,合并有机相,有机相用饱和食盐(20mL)洗2次,有机相用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-10%CH3OH(体积百分比)的二氯甲烷溶液,甲醇中加1%氨水)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物44(950 mg,58%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 3.2 Hz,2H), 3.72 – 3.55 (m, 2H), 3.05 – 2.86 (m, 2H), 2.84 (s, 1H), 2.59 – 2.41 (m,8H), 2.31 – 2.17 (m, 2H), 1.72 – 1.64 (m, 4H), 1.62 – 1.60 (s, 2H), 1.59 –1.51 (m, 8H), 1.55(s, 2H), 1.39 – 1.35 (m, 6H), 1.33 (d, J = 3.0 Hz, 6H),1.31 (d, J = 3.0 Hz, 12H), 1.31 – 1.28 (m, 4H), 1.30-1.26(m, 12H), 1.24 (s,3H), 0.94 – 0.82 (m, 9H)。
实施例15
化合物46的合成
步骤1:
将化合物1-庚硫醇(2.1 g)和NaOH(1.0 g)溶于DMF(20 ml),室温搅拌。然后称取化合物46-1(2.00 g)分批加入到上述反应体系中,60 oC下搅拌过夜。TLC(PE/EA=3/1,磷钼酸)有新点生成。反应混合液加200ml 水,滴加浓HCl调pH至3附近。用600ml 乙酸乙酯萃取上述混合液,有机相Na2SO4干燥后减压蒸发。加适量DCM和硅胶拌样,纯化(30 g正相柱,PE/EA,0-0 % 10min,0-2% 20min, 2-2% 5min,流速30ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到无色油状液体46-2(1.5 g,62%收率)。
步骤2:
向化合物46-2(1.5 g)的THF(20 mL)和水的溶液中加入氢氧化锂(360 mg)将混合物在60℃搅拌16小时。TLC显示有极性变大的点生成。将反应混合物浓缩去除四氢呋喃,加水稀释后,用乙酸乙酯(30 mL)萃取1次,将水相用稀盐酸调节pH=2,用乙酸乙酯(30 mL)萃取2次,合并有机层,浓缩得到化合物46-3(1.2 g,88%收率)。
步骤3:
将化合物46-3(1.2 g)溶于DCM(10 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,1.01 g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,534 mg)和6-溴正己醇(792 mg)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与46-3标样对照点板(PE/EA=10/1, 磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(10g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到无色油状液体化合物46-4(1.6g,84%收率)。
步骤4:
向化合物46-4(1.6 g)和乙醇胺(447 mg)的乙腈溶液(50 mL)溶液中加入碳酸钾(1.52 g)。将混合物在85℃下回流2小时。TLC显示化合物46-4完全消失,有一个极性变大的点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(25 g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-10% 20min,10-10% 5min,流速20ml/min)得到无色油状液体化合物46-5(870 mg,57%收率)。
步骤5:
将化合物46-6(2.0 g)溶于DCM(10 ml),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,1.79 g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,950 mg)和6-溴正己醇(1.41 mg)分批加入反应体系,室温搅拌3h。取少量反应液稀释与46-6标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(25g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到无色油状液体化合物46-7(2.8 g,86%收率)。
步骤6:
将化合物46-5(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(180 mg),K2CO3(497 mg)和化合物46-7(502 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比46-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物46(700 mg,77%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.10 (m, 4H), 3.64 (m, 3H), 2.61 –2.42 (m, 8H), 2.29 (s, 1H), 1.98 –1.90 (m, 2H), 1.67 – 1.61 (m, 6H), 1.59 –1.45 (m, 8H), 1.43 (s, 4H), 1.41 – 1.37 (m, 4H), 1.37 – 1.33 (m, 10H), 1.33 –1.30 (m, 14H), 1.30 – 1.26 (m, 12H), 0.95 – 0.83 (m, 12H)。
实施例16
化合物48的合成
步骤1:
向化合物2-6(8.0 g)和丙醇胺(1.9 g)的乙腈溶液(50 mL)溶液中加入碳酸钾(7.19 g)。将混合物在85℃下回流2小时。TLC显示化合物2-6完全消失,有一个极性变大的点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(40g正相柱,PE/EA,0-0 % 5min,0-10% 20min,10-10% 5min,流速20ml/min)得到无色油状液体化合物48-1(5.0 g,63.3%收率)。
步骤2:
将化合物35-3(750 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(170 mg),K2CO3(350 mg)和化合物48-1(620 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释与48-1标样对照点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有比48-1极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),点板监测,将纯产物部分馏分蒸发,得到淡黄色油状液体化合物48(650 mg,69%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.09 (d, J = 3.2 Hz,2H), 3.65 – 3.56 (m, 2H), 3.00 – 2.88 (m, 3H), 2.56 – 2.40 (m, 8H), 2.31 –2.17 (m, 2H), 1.73 – 1.63 (m, 6H), 1.62 (d, J = 1.0 Hz, 2H), 1.59 – 1.50 (m,8H), 1.58 (s, 2H), 1.40 – 1.35 (m, 6H), 1.34 – 1.30 (m, 18H), 1.30 – 1.27 (m,16H), 1.24 (s, 3H), 0.95 – 0.82 (m, 9H)。
实施例17
化合物55的合成
步骤1:
向化合物2-6(4.0 g)和N,N-二甲基乙二胺(1.53 g)的乙腈溶液(50 mL)溶液中加入碳酸钾(3.59 g)。将混合物在85℃下搅拌回流3小时。TLC显示化合物2-6完全消失,有一个极性变大的点生成。将反应液过滤,所得滤液浓缩后的粗产品,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(25 g正相柱,0.1% NH3H2O, MeOH/DCM,0-0 % 5min,0-10% 20min,10-10% 5min,流速20ml/min)得到无色油状液体化合物55-1(1.3 g,32%收率)。
步骤2:
向溴乙醇(2.00 g)的DMF(15 mL)溶液中依次加入化合物55-2(1.93 g)和氢氧化钠(1.20 g),反应混合物在40℃搅拌4小时。TLC显示起始化合物55-2完全消失。将反应液倒入H2O(50 mL),加乙酸乙酯(20 mL)萃取1次,水相用2M稀盐酸调节pH为3,加乙酸乙酯(20mL)萃取3次,合并有机相,用无水硫酸钠干燥。抽滤,浓缩得到化合物55-3(1.56 g,62.3%收率)。
步骤3:
将化合物55-3(872 mg)溶于DCM(10 mL),室温搅拌,依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,1.05 g),4-二甲氨基吡啶(DMAP,560 mg)和8-溴辛酸(1.02 g)分批加入反应体系,室温搅拌2h。取少量反应液稀释与55-3标样对照点板(PE/EA=10/1,磷钼酸),观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发,加适量硅胶和DCM拌样、纯化(15g正相柱, PE/EA,0-0 % 5min,0-5% 20min,5-5% 5min,流速15mL/min)得到无色油状液体化合物55-4(1.27 g,70%收率)。
步骤4:
将化合物55-1(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(146 mg),K2CO3(406 mg)和化合物55-4(393 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌3h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有新点生成。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min,7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物55(108 mg,14%收率)。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.23 (s, 2H), 2.80 (s,2H), 2.60 (s, 2H), 2.57 (s, 2H), 2.52 (s, 2H), 2.45 (s, 4H), 2.30 (s, 6H),2.27 (s, 2H), 2.24 (s, 2H), 1.71 – 1.66 (m, 2H), 1.62 (s, 2H), 1.58 – 1.57(d, J = 6.8 Hz, 4H), 1.54 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.53 – 1.50 (m, 4H), 1.37 (d,J = 1.0 Hz, 6H), 1.35 – 1.30 (m, 24H), 1.30 – 1.25 (m, 16H), 0.96 – 0.81 (m,9H)。
实施例18
化合物57的合成
步骤1:
将化合物55-1(500 mg)溶于乙腈(10 ml),室温搅拌。然后依次称取NaI(146 mg),K2CO3(406 mg)和化合物29-3(422 mg)分批加入到上述反应体系中,在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板(DCM/MeOH=10/1,1d 氨水,磷钼酸),观察到有新点生成。反应液冷却至室温后减压蒸发,加适量DCM和硅胶拌样,纯化(25 g正相柱,DCM/MeOH,0.1% 氨水,0-0 % 10min,0-7.5% 20min, 7.5-7.5% 5min,流速25ml/min),浓缩得到淡黄色油状液体化合物57(103 mg,12%收率)
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.78 (s, 1H), 4.12 (s, 2H), 2.96 –2.77 (m, 2H), 2.62 – 2.56 (m, 6H), 2.50 (s, 2H), 2.45 (d, J = 2.2 Hz, 4H),2.30 (s, 6H), 2.24 (s, 2H), 1.71 – 1.66 (m, 2H), 1.65 (s, 2H), 1.62 (s, 2H),1.58 (s, 2H), 1.57 – 1.50 (m, 6H), 1.49 (s, 2H), 1.38 (d, J = 0.8 Hz, 6H),1.34 – 1.30 (m, 18H), 1.30 – 1.26 (m, 20H), 0.94 – 0.82 (m, 9H)。
实施例19
将荧光素酶mRNA稀释于10-100 mM,pH 4.0的柠檬酸缓冲液中;将各脂质组分(本发明所示阳离子脂质:DSPC:胆固醇:PEG脂质(DMG-PEG2000))按照摩尔比50:10:38.5:1.5溶于乙醇。
将3 mL mRNA缓冲液和1 mL脂质溶液分别装入两个5 mL注射器,安装于微流控注射泵上,将芯片连接到注射器,设定注射泵流速,点击注射泵的开始按键,以流速比3:1的方式注入芯片。观察芯片出口的产品颜色,弃去前5滴乳白色液滴(约为100 μL)后,后端样品收集到EP管中。将收集到的产品放入透析袋中,隔10 mM PBS(pH 7.4)透析6小时(截留分子量:100 KDa),随后超滤浓缩至理想浓度,再将脂质纳米颗粒经0.22 μm无菌过滤器过滤,保存于4℃。
按照Ribogreen试剂盒说明,测试计算产品的包封率;于马尔文公司的Zetasizernano仪器上使用标准检测方法进行粒径与多分散系数(PDI)检测、Zeta电位分析。
本实施例所制备得到的负载mRNA的LNP的粒径、PDI和包封率的检测结果如表1所示。结果表明,该配方下的脂质和mRNA形成的纳米颗粒包封率较高、粒径均一,为100 nm左右,符合核酸递送载体的基本特征。
表1、不同阳离子脂质制备的纳米颗粒表征结果
*DLin-MC3-DMA为商业核酸递送系统Onpattro的阳离子脂质。
**表1的Lipid M出自《Optimization of Lipid Nanoparticles forIntramuscular Administration of mRNA Vaccines》Mol Ther Nucleic Acids 2019Vol. 15 Pages 1-11,为SM-102的同类脂质。
实施例20 利用纳米脂质颗粒组合物尾静脉注射递送荧光素酶mRNA在体内表达效果测定
在6-8周龄的BALB/c小鼠通过尾静脉注射含5 μg mRNA的LUC-mRNA-脂质纳米颗粒(LUC-mRNA对应的核苷酸序列见专利公开CN114380724A的SEQ ID NO:1),制备方法同实施例19。在特定时间点小鼠尾静脉注射D-Luciferin Potassium Salt 100 μg,使用PerkinElmer小动物成像系统进行检测。Fluc通常用于哺乳动物细胞培养物中以测量基因表达和细胞活力,其在底物荧光素存在下发射出生物性荧光。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120 nt,假尿嘧啶完全取代。检测结果如图1,其中本发明设计的化合物组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA至肝脏的水平大部分等效或者优于DLin-MC3-DMA;部分化合物优于Lipid M。
实施例21 利用纳米脂质颗粒组合物肺部雾化递送荧光素酶mRNA在体内表达效果测定
6-8周龄的BALB/c小鼠通过雾化方式,进行肺部递送入含有5 μg mRNA的LUC-mRNA-脂质纳米颗粒,制备方法同实施例19。在特定时间点小鼠尾静脉注射D-LuciferinPotassium Salt 100 μg,使用PerkinElmer小动物成像系统进行检测。检测结果如图2,其中化合物7,35组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA表达的荧光水平优于Lipid M和SM-102。
实施例22 利用纳米脂质颗粒组合物递送新型冠状病毒mRNA疫苗
使用6周BALB/c小鼠,于0、14天肌肉注射给与不同纳米脂质颗粒组合物递送的mRNA新冠肺炎疫苗(Omicron抗原mRNA,对应的核苷酸序列见专利公开CN114380724A的SEQID NO:6)进行免疫,第28天(二次免疫后第14天)采血,通过酶联免疫吸附测定中和抗体滴度,评价不同纳米脂质颗粒组合物递送的mRNA新冠肺炎疫苗对SARS-CoV-2病毒毒株感染的保护效果。结果如图3所示,由结果可知,化合物35组成的纳米脂质颗粒组合物递送新冠mRNA的引起的中和抗体滴度为140万,而Lipid M的为93万左右。
实施例23 不同脂质组分和比例的纳米脂质颗粒组合物表征
为研究不同辅助脂质和脂质比例下的成药性,对化合物35展开了实验设计。尝试将不同结构脂质(DOPE、DSPC)、不同脂质比例(阳离子45~55%,PEG脂质1.5~2.5%,结构脂质8~22%,胆固醇20.5~45.5%)、不同氮磷比(5~10)的脂质混合物,和Luc mRNA通过微流控法(方法同实施例19)混合制备纳米颗粒。结果见表2所示。
表2、不同脂质比例(摩尔比例)制备的纳米颗粒表征结果
从表2结果可知,在该范围内的脂质混合物和mRNA形成的纳米颗粒粒径均一、包封率高、成药性好。