CN117964514A - 可电离脂质化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供可电离脂质化合物及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明提供的可电离脂质化合物为具有式(1)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体，其属于单尾链多头基类脂质，具有良好的表面活性和安全性，可用于递送治疗剂的脂质组合物，其制备得到的脂质纳米颗粒可以在细胞中和动物体内表现出良好有效性和安全性。

Description

可电离脂质化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及可电离脂质化合物及其制备方法和应用。
背景技术
近年来，随着多个基因治疗产品被用于各种应用，核酸已经引起了大家的关注。基因治疗可分为三个主要途径：1)利用CRISPR-Cas技术编辑变异基因；2)通过插入功能性基因拷贝来实现基因表达的上调，使用的分子包括DNA质粒(pDNA)、小环DNA(mcDNA)、合成mRNA、环状RNA和自扩增RNA(saRNA)；3)用小干扰RNA(siRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、短发夹RNA(shRNA)和microRNA(miRNA)等分子下调基因表达。
核酸是一种带有大量负电荷、高分子量和亲水性的大分子物质，它们在细胞膜上的渗透性很差且在体内的稳定性低，易被宿主迅速清除，因此将核酸运送到细胞内的活性部位是基因治疗中最具有挑战性部分。尤其是在递送RNA分子时，因为RNA分子通常具有短期活性，在细胞内的保留率低，需要更频繁地给药，因此有效载荷和载体的毒性是两个非常重要的衡量指标。载体本身需要克服细胞外和细胞内的障碍，为血液中的核酸酶活动提供保护，加强和协助细胞的吸收，并在进入细胞后促进内体逃逸。
目前，用于核酸递送的非病毒载体涵盖了多种类型，如脂质、聚合物、肽、蛋白质和无机材料等。脂质纳米颗粒因其安全性、灵活性和高效性而被认为是最为先进的非病毒载体之一。例如，第一个获得批准的siRNA药物Patisiran和第一个mRNA疫苗都采用了脂质纳米颗粒作为其载体。传统用于核酸药物递送的脂质纳米颗粒配方通常包含四个主要部分，分别是可电离脂质(或阳离子脂质)、辅助脂质、PEG脂质和胆固醇。这些成分在递送过程中各自扮演着重要角色。例如，可电离脂质的结构和功能尤为重要，其电荷属性决定了其与带负电荷的核酸药物结合的能力，这种结合不仅有助于保护核酸免受降解，还能中和核酸的负电荷，从而实现核酸的成功递送；磷脂作为“辅助脂质”有助于提高内质体的释放和转染效率；胆固醇有助于增强稳定性；而PEG脂质则促进均质脂质纳米颗粒的形成，通过预防与血液成分的相互作用以及被清除，提高了稳定性和循环时间。这些成分的比例对递送效果至关重要，并且可以根据递送不同核酸(如siRNA和mRNA)的需求进行调整和定制。值得一提的是，可电离脂质是一种具有pH响应性质的新型功能性材料。在低pH环境下，会发生质子化反应，使脂质更容易与带负电荷的内体膜相互作用，从而促使内体破坏和核酸释放的融合过程，进而实现高效递送。因此，可电离脂质的结构和功能在递送和溶酶体逃逸方面都具有非常重要的作用，因此其设计和优化至关重要。
基于此，本发明提供一种可电离脂质化合物及其制备方法和应用，本发明提供的可电离脂质化合物属于单尾链多头基类脂质具有良好的安全性，可用于制备递送治疗剂的脂质组合物，其制备得到的脂质纳米颗粒可以在细胞中和动物体内表现出良好有效性和安全性。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供可电离脂质化合物及其制备方法和应用。本发明提供的可电离脂质化合物属于单尾链多头基类脂质具有良好的安全性，可用于制备递送治疗剂的脂质组合物，其制备得到的脂质纳米颗粒可以在细胞中和动物体内表现出良好有效性和安全性。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种可电离脂质化合物，所述可电离脂质化合物为式(1)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：
其中A1为NH或O；
Ra选自C6-C24烷基、C6-C24烯基、C6-C24的环烷基；所述C6-C24烷基、C6-C24烯基、C6-C24的环烷基为直链或支链结构；Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基、C2-C12烯基、C1-C12炔基、C3-C12环烷烃基、C6-C12的芳烃基、C1-C12烷基醇、C1-C12的杂环基、烷基胺；
所述烷基胺为其中，Ra’为C1-C12烷基，所述Rb’和Rb”各自独立的选自H、C1-C6烷基胺、Rc”选自被未取代或被氨基取代的C1-C6烷基，Rc”’为H、或-Rc’-A1’-Rc”-NH2；
条件是，当A1’为-CO-NH-、-NH-CO-或-CO-O-时，Rc’为C1-C6烷基；当A1’为-CO-时，Rc’不存在。
第二方面，本发明还提供了一种可电离脂质化合物，其特征在于，所述可电离脂质化合物为式(1)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：
Ra选自C6-C24烷基醇、C6-C24短链聚氧乙烯；所述C6-C24烷基醇、C6-C24短链聚氧乙烯为直链或支链结构；Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基、C2-C12烯基、C1-C12炔基、C3-C12环烷烃基、C6-C12的芳烃基、C1-C12烷基醇、C1-C12的杂环基、烷基胺；
所述烷基胺为其中，Ra’为C1-C12烷基，所述Rb’和Rb”各自独立的选自H、C1-C6烷基胺、Rc”选自被未取代或被氨基取代的C1-C6烷基，Rc”’为H、或-Rc’-A1’-Rc”-NH2；
条件是，当A1’为-CO-NH-、-NH-CO-或-CO-O-时，Rc’为C1-C6烷基；当A1’为-CO-时，Rc’不存在。
在一项优选的实施方案中，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇、烷基胺。
在一项优选的实施方案中，条件是，当Ra为直链的C6-C24烷基时，A1不为NH，或Rb和Rc不为C1-C12烷基醇；当Ra为C6-C24烷基醇时，A1不为O，或Rb和Rc不为C6-C24烷基。
在一项优选的实施方案中，条件是：当Ra为C6-C24烯基时，A1为NH，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇；
当Ra为支链的C6-C24烷基时，A1为NH，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇、烷基胺；
Ra为直链的C6-C24烷基时，A1为NH或O，Rb和Rc各自独立地选自烷基胺；
当Ra为直链的C6-C24烷基时，A1为O，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇；
当Ra为C6-C24短链聚氧乙烯时，A1为NH或O，Rb和Rc各自独立地选自烷基胺；
或当Ra为C6-C24烷基醇时，A1为NH或O，Rb和Rc各自独立地选自烷基胺。
在一项优选的实施方案中，Ra选自下面的化合物结构：
在一项优选的实施方案中，Rb和Rc选自下面的化合物结构：
Rd选自C1-C6的烷烃或环烷烃。
在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自下列化合物中的至少一种：
第三方面，本发明提供了前述可电离脂质化合物的制备方法，包括如下反应步骤：
Ra”-NH2①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成可电离脂质化合物③：
其中，Ra”-NH2为Ra-NH2或
Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为―Rc’―A1’―Rc”―NH2。
第四方面，本发明提供了前述可电离脂质化合物的制备方法，包括：
1)Ra”-NH2①与α,β-不饱和羰基化合物④反应生成化合物⑤；
2)化合物⑤与亲核试剂⑥反应生成可电离脂质化合物③；
其中，亲核试剂⑥为Rb-NH2或Rb-OH；Ra”-NH2选自Ra-NH2或
Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为-Rc’-A1’-Rc”-NH2；Z2为离去基团，Z2与NH2反应得到A1。
第五方面，本发明提供了前述可电离脂质化合物的制备方法，包括：
1)Ra”-NH2①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成化合物⑦；
2)化合物⑦与α,β-不饱和羰基化合物⑧反应生成化合物⑨；
3)化合物⑨与亲核试剂⑩反应生成可电离脂质化合物
其中，Ra”-NH2为Ra-NH2，Z3为离去基团，A3与Z3反应得到A1。
上文所述的离去基团是指在亲核反应或缩合反应中离去部分，包括但不限于：H、
OH、H2O、卤素(例如F,Cl，Br和I)、氰酸负离子、无机酸(例如硝酸、硫酸、磷酸)、羧酸(例如乙酸、三氟乙酸和苯甲酸等)、磺酸(例如甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸和对硝基苯磺酸等)、二氧化碳(CO2)、氮气(N2)、咪唑、烷氧基(R-O-)、氨基(-NHR，其中R为H去掉的烷基或芳基)、苯氧基、叔碳正离子(例如叔丁基正离子)、被不饱和系统或杂原子稳定的碳正离子或上文所述的各种保护基。
在一项优选的实施方案中，式1a-式1c中，至少一种亲核试剂与至少一种α,β-不饱和羰基化合物的β位碳原子发生麦克加成反应，生成含碳碳键、碳氧键、碳氮键、碳硫键或碳硒键的带有两分叉的所述可电离脂质化合物。
在一项优选的实施方案中，式1a-式1b还包括以通过式1a-式1b反应得到的带有端氨基的式(1)的化合物作为原料，按照式1a中步骤1或式1b中步骤1-2进行迭代反应的步骤；
所述带有端氨基的式(1)的化合物为
其中，Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为-Rc’-A1’-Rc”-NH2。
在一项优选的实施方案中，式1a-式1c反应式还包括以通过式1a-式1c反应式得到带有端氨基的式(1)的化合物作为原料，与反应的步骤；
所述带有端氨基的式(1)的化合物为
其中，Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为-Rc’-A1’-Rc”-NH2。
在一项优选的实施方案中，反应过程中所用原料还含有保护基团，反应步骤中包括保护和/或脱保护的步骤。
第四方面，本发明提供了前述可电离脂质化合物在乳化剂、助悬剂、分散剂、增溶剂、润滑剂、增稠剂、抑菌剂或防腐剂中的应用。
第五方面，本发明提供了前述可电离脂质化合物在制备化妆品组合物中的应用。
第六方面，本发明提供了前述的可电离脂质化合物在制备脂质组合物中的应用，其特征在于，所述可电离脂质化合物用作药物递送载体。
第七方面，本发明提供了一种脂质组合物，包括前述可电离脂质化合物。
在一项优选的实施方案中，所述脂质组合物的脂质组分包含其他脂质，所述其他脂质包括磷脂、胆固醇以及PEG缀合脂质。
在一项优选的实施方案中，所述脂质组合物的脂质组分还包含其他可电离脂质，所述可电离脂质化合物与所述其他可电离脂质的摩尔比为1:0.05-100。
在一项优选的实施方案中，所述其他可电离脂质选自下列化合物中的至少一种：
在一项优选的实施方案中，可电离脂质组分与其他脂质的摩尔比为1:0.2-10；所述脂质组合物的活性成分包括治疗剂和/或预防剂；所述活性成分占处方总量的0.1-50％(w/w)。
在一项优选的实施方案中，所述治疗剂和/或预防剂是核酸；所述核酸是DNA或RNA。
第八方面，本发明提供了前述脂质组合物在制备治疗哺乳动物的疾病的药物中的应用。
在一项优选的实施方案中，所述疾病以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征；所述疾病选自感染性疾病、癌症、增生性疾病、遗传性疾病、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管疾病、肾血管疾病、代谢性疾病。
第九方面，本发明提供了一种药物组合物，包含前述的脂质组合物和药学上可接受的载体。
在一项优选的实施方案中，所述的药物活性化合物选自抗炎化合物、类固醇、他汀类药物、雌二醇、BTK抑制剂、S1P1激动剂、糖皮质激素受体调节剂和抗组胺药物。相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供的可电离脂质化合物具有良好的表面活性剂，可用于制备脂质纳米颗粒，用作药物递送载体。
2、本发明的可电离脂质化合物适合用于制备脂质组合物，采用实施例的化合物制备得到的mRNA的脂质组合物的Zeta电位为-20mV-20mV、分散系数为＜0.5、粒径为10-200nm、包封率＞60％。
3、本发明的可电离阳离子脂质化合物制备的mRNA和/或其他核酸类物质(如siRNA，microRNA，pDNA等)的脂质纳米颗粒在体外细胞和动物体内均呈现出生物活性，并且具有低毒性。表明本发明提供的脂质纳米颗粒作为药物载体具有良好安全性和有效性。
附图说明
图1为化合物6008制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在HEK293T细胞的荧光素酶活性。
图2为化合物6020制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒小鼠静脉给药后6h/12h全身活体成像图。
具体实施方式
本发明的合成工艺可以容许多个官能团，因此可以使用各种被取代的起始物质。这些工艺大体上提供了在整个工艺结束或快结束时所希望的最终化合物，不过在某些情况下可能需要将该化合物进一步转化成其药学上可接受的盐。本发明的化合物可以使用可商购的起始物质、文献中已知的化合物，或由易于制备的中间物，通过采用标准合成方法和本领域技术人员已知或技术人员根据本文的传授内容显而易见的程序，以多种方式制备。用于制备有机分子的标准合成方法和程序以及官能团转化和操作可以从相关科学文献或从本领域的标准教科书获得。以下有关合成方法的描述被设计用于说明而非限制用于制备本发明化合物的通用程序。
具有本文所描述各式的本发明化合物可以根据相应的通用合成路线中所说明的工艺，由可市售的起始物质或可以使用文献工艺制备的起始物质制备。各通用合成路线中的变量(例如R1、R2和R3等)如本文所定义。本领域的普通技术人员应注意到，在本文所描述的反应工序和合成方案中，某些步骤的次序可以变化，如保护基的引入和移除。
在本文所描述的反应方案中，可以产出多种立体异构体。当未指示特定立体异构体时，这应理解为包括由该反应产出的所有可能的立体异构体。本领域普通技术人员应认识到，所述反应可以被优化以优先得到一种异构体，或可以设计出新的方案以产出单一异构体。如果产出混合物，则可以使用如制备型薄层色谱法、制备型HPLC、制备型手性HPLC或制备型SFC等技术分离异构体。
实施例1可电离脂质化合物的合成
1.化合物6001的制备
结构式：
分子量：499.43
将0.8g油胺和0.8g羟乙基丙烯酰胺加入6.4mL乙醇中，搅拌加热至70℃，3.5h后补加0.8g羟乙基丙烯酰胺，继续反应16h后过反向柱得化合物6002。
将0.7g化合物6002、0.4g钯碳和28mL四氢呋喃加入反应瓶搅拌，用氢气置换并用氢气球保压，16h后过滤，正向过柱(甲醇-DCM体系)，得200mg化合物6001。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(t,J＝5.5Hz,2H),3.79-3.68(m,4H),3.42(dd,J＝10.0,5.4Hz,4H),2.89(t,J＝6.0Hz,4H),2.55(dt,J＝11.8,6.8Hz,6H),1.54(s,2H),1.27(d,J＝11.2Hz,32H),0.91(t,J＝6.8Hz,3H)。
2.化合物6002的制备
结构式：
分子量：497.42
将0.8g油胺和0.8g羟乙基丙烯酰胺加入6.4mL乙醇中，搅拌加热至70℃，3.5h后补加0.8g羟乙基丙烯酰胺，继续反应16h后，浓缩有机溶剂，过反向柱，冻干，得化合物6002共400mg。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(s,2H),5.38(dd,J＝13.0,7.4Hz,2H),3.79-3.66(m,4H),3.41(dd,J＝10.1,5.4Hz,4H),2.82-2.72(m,4H),2.44(dd,J＝15.1,9.2Hz,6H),2.10-1.99(m,4H),1.46(s,2H),1.29(s,24H),0.90(t,J＝6.8Hz,3H)。
3.化合物6003的制备
结构式：
分子量：445.34
将4.00g十四胺，6.53g丙烯酸羟乙酯和80mL叔丁醇加入反应瓶搅拌升温至70℃，29h后浓缩有机溶剂，过反向柱，冻干，得1.5g化合物6003。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.29(t,J＝7.5Hz,4H),3.89-3.75(m,4H),2.81(t,J＝6.2Hz,4H),2.50(ddd,J＝23.2,14.1,7.1Hz,6H),1.46(s,2H),1.28(s,24H),0.91(t,J＝6.3Hz,3H)。
4.化合物6004的制备
结构式：
分子量：553.48
将0.8g油胺，1.5g丙烯酸正丁酯和5.6mL正丁醇加入反应瓶搅拌升温至100℃，4h后补加1mL丙烯酸正丁酯，继续反应1h后过正相柱(石油醚-乙酸乙酯体系)，加入0.4g氢氧化钠，1mL水，10mL甲醇搅拌水解30min，加1mL浓盐酸和10mL甲醇得混合溶液调pH至中性，旋干，DCM溶解，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干溶剂，加入10mLDCM，1.06g 4-氨基-1-丁醇，0.81gHOBT和2.3g EDCI，室温反应18h，浓缩有机溶剂后，过反向柱，冻干，得240mg化合物6004。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J＝16.6Hz,2H),5.44-5.31(m,2H),3.72(d,J＝16.5Hz,4H),3.31(d,J＝5.6Hz,4H),3.17(s,4H),2.84(s,2H),2.69(s,4H),2.09-2.01(m,4H),1.67(d,J＝2.7Hz,10H),1.37-1.26(m,24H),0.91(t,J＝6.8Hz,3H)。
5.化合物6005的制备
结构式：
分子量：597.54
将25.00g 11-二十一酮，62.05g醋酸铵和500mL甲醇加入反应瓶搅拌，加入6.55g氰基硼氢化钠，反应16h后，加250mL水和250mL DCM，分液，水相用50mLDCM萃取合并有机相，过正相柱(甲醇-DCM体系)，得化合物6005-A共21.00g。
将21.00g化合物6005-A，58mL丙烯酸正丁酯和100mL正丁醇胶乳反应瓶搅拌升温至100℃，补加10mL丙烯酸正丁酯，16h后过柱(石油醚-乙酸乙酯体系)，得化合物6005-B31.00g。
将31.00g化合物6005-B和6.55g氢氧化钠，310mL甲醇，31mL水配成得溶液加入反应瓶搅拌，20min后加入150mLTHF，搅拌升温至50℃，30min后加入16.13g浓盐酸和160mL甲醇配成得溶液搅拌，30min后旋干溶剂，加300mLDCM溶解，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干得27.00g油状物化合物6005-C。
将27.00g化合物6005-C、25.00g 4-氨基-1-丁醇，41.85g EDCI，14.74g HOBT和310mLDCM加入反应瓶搅拌，18h后浓缩有机溶剂，过柱(甲醇-DCM体系)，除去过量的4-氨基-1-丁醇化合物，得6.80g化合物6005。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.70(t,J＝5.6Hz,4H),3.28(t,J＝5.6Hz,4H),2.74(t,J＝6.0Hz,4H),2.40-2.45(m，1H),2.34(t,J＝6.4Hz,4H),1.63-1.65(m,8H),1.25-1.35(m,36H),0.91(t,J＝6.4Hz,6H)。
6.化合物6006的制备
结构式：
分子量：553.48
将1.00g油胺，0.47g羟乙基丙烯酰胺和8mL乙醇加入反应瓶搅拌升温至70℃，13h后旋干溶剂过柱(甲醇-DCM体系)，得中间体1共800mg。加入1.5mL丙烯酸正丁酯和5mL正丁醇搅拌升温至100℃，3h后旋干溶剂过柱(甲醇-DCM体系)。加入0.4g氢氧化钠和10mL甲醇，1mL水配成的溶液，搅拌1h，加入1mL浓盐酸和8mL甲醇配成的溶液，搅拌30min，旋干溶剂加100mL DCM溶解，无水硫酸镁干燥，过滤，旋干，加入0.45g 6-氨基-1-己醇，0.27g HOBT,0.78g EDCI和10mLDCM搅拌，14h后浓缩有机溶剂，过柱(甲醇-DCM体系)，得化合物6006共300mg。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(s,1H),6.95(s,1H),5.43-5.28(m,2H),3.74-3.67(m,2H),3.64(t,J＝6.3Hz,2H),3.39(dd,J＝10.0,5.3Hz,2H),3.24(dd,J＝12.9,6.7Hz,2H),2.74(t,J＝5.8Hz,4H),2.48-2.42(m,2H),2.41-2.33(m,4H),2.01(dd,J＝13.6,6.8Hz,4H),1.66-1.17(m,34H),0.89(t,J＝6.7Hz,3H)。
7.化合物6007
结构式：
分子量：953.78
在室温下，向三口瓶中，加入化合物十八烷基胺(50g)，加入MeOH(200mL)搅拌混合后，冰水浴降温至5摄氏度，再缓慢滴加入丙烯酸甲酯(31.5g)，搅拌混合，恢复室温，反应液在室温下反应4h；减压浓缩，进行柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)，得到产物2(68g)。在室温下，向单口瓶中加入产物2(15.0g,)、MeOH(100mL)和乙二胺(1.0g)，升温至60℃，保持该温度反应过夜；减压浓缩，加入30mL甲苯，加热至60℃溶解，缓慢降至室温，减压蒸干得化合物3(15g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物3(2g)，加入MeOH(20mL)搅拌溶解后，然后再缓慢加入丙烯酸甲酯(2.5g)搅拌混合，升温至60℃，过夜；停止反应，反应液减压浓缩,通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1-20:1)得到化合物4(2.5g)。在室温下，向单口瓶中加入化合物4(2.3g)，乙二胺(20mL)，室温条件下反应过夜；停止反应，直接减压浓缩，得化合物6007(24mg)。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.87(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.36(m,8H),3.33(s,8H),3.27-3.16(m,2H),3.06-2.90(m,4H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),1.90(dtdd,J＝21.2,14.0,9.5,6.9Hz,4H),1.73(p,J＝7.7Hz,4H),1.49(tdd,J＝9.2,7.9,7.1,4.0Hz,4H),1.31(s,28H),0.92(t,J＝6.8Hz,3H)。
8.化合物6008-6018
化合物6009的合成
结构式：
在室温下，将新鲜重结晶的十六胺(0.03mol)的甲醇(20mL)溶液，在氮气环境下，滴加到搅拌的甲基丙烯酸甲酯(6mL)的甲醇(20mL)中的溶液中，反应过夜。将反应物在室温下旋干，残余物溶解在氯仿中，并用0.1MNaOH溶液洗涤两次。收集氯仿溶液并用无水氯化钙干燥。然后通过柱色谱分离得到无色油状物。1H-NMR(300MHz,CDCl3):0.78(t,3H)，1.16(s,30H)，2.38(m,6H)，2.71(t,4H)，3.57(m,6H)。
然后将上述无色油状物(11.05g)在甲醇(20ml)中的溶液加入到室温下剧烈搅拌的1，2-二氨基乙烷(75g)在甲醇(100ml)中的溶液中。完全加入后，混合物在室温下再搅拌24小时。减压除去溶剂，保持温度不高于40℃。用甲苯和甲醇(9:1)的共沸混合物除去过量的1，2-二氨基乙烷。剩余的甲苯用甲醇共沸蒸馏去除。最后得到白色粉末(10.5g)，用氯仿和环己烷反复重结晶，最终得到白色固体。1H-NMR(300MHz,CDCl3):0.88(t,3H)，1.25(s,30H)，1.84(s,4H)，2.38(m,6H)，2.73(m,4H)，2.82(m,4H)，3.29(m,4H)，7.47(s,2H)。
6008与6009制备方法不同仅在于：采用等摩尔量的十四胺替代十六胺。6010-6017参照6009的制备方法，采用等摩尔量的相应的Ra-NH2替代十六胺制备得到。
6018参照6007的制备方法，采用等摩尔量的相应的Ra-NH2替代十八烷基胺制备得到。
9.化合物6019
结构式：
分子量：753.66
在室温下，向单口瓶中加入化合物2483-46-7(3g)，加入DCM(50mL)搅拌混合后，再加入18807-71-1(2.5g)、DCC(2.7g)、DMAP(1.6g)，搅拌混合,在室温下反应过夜；减压浓缩、柱层析纯化(DCM：MeOH＝5:1)，得到产物3(4g)。在室温下，向三口瓶中，加入产物3(5.0g)、MeOH(50mL)和Pd/C(1.0g)，置换氢气，升温至50℃，搅拌1h；停止反应，反应液降至室温，过滤，滤液旋干，得产物4(3.5g)。在室温下，向单口瓶中，加入原料5(1.2g)，加入DMF(50mL)搅拌溶解后，然后再加入产物4(3.3g)、HATU(3.2g)、TEA(0.9g)搅拌混合，室温条件下反应过夜；加入水(500mL)和EA(500mL),分液萃取，有机相Na2SO4干燥，减压浓缩，粗产物通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1-10:1)得固体6(380mg)。在室温下，向单口瓶中，加入固体6(380mg)，HCl/Dioxane(4M)(1.6mL)，室温条件下反应2h；减压浓缩，纯化，得化合物6019(220mg)。1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.87(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.36(m,8H),3.33(s,8H),3.27-3.16(m,2H),3.06-2.90(m,4H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),1.90(dtdd,J＝21.2,14.0,9.5,6.9Hz,4H),1.73(p,J＝7.7Hz,4H),1.49(tdd,J＝9.2,7.9,7.1,4.0Hz,4H),1.31(s,28H),0.92(t,J＝6.8Hz,3H)。
10.化合物6020
结构式：
分子量：810.19
在室温下，向三口瓶中，加入化合物十八烷基胺(50g)，加入MeOH(200mL)搅拌混合后，冰水浴降温至5摄氏度，再滴加入丙烯酸甲酯(31.5g)，搅拌混合，恢复室温，反应4h；停止反应，直接减压浓缩，柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)，得到产物2(68g)。在室温下，向单口瓶中加入产物2(15.0g,)、MeOH(100mL)和乙二胺(1.0g)，升温至60℃，保持该温度反应过夜；停止反应，反应液减压浓缩，加入30mL甲苯，加热至60℃溶解，缓慢降至室温，过滤，减压蒸干得化合物3(15g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物3(1.3g)，加入DMF(20mL)搅拌混合后，再加入35897-34-8(3.6g)、EDCI(3.0g)、HOBt(2.1g)，DIEA(2.0g)，搅拌混合,在室温下反应过夜；加入水(200mL)直接减压冻干，得化合物4(4g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物4(100mg)和HCl/Dioxane(4M)(2mL)，室温条件下反应1h；停止反应，反应液减压浓缩纯化得化合物6020。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.90(t,J＝6.4Hz,2H),3.57-3.34(m,10H),3.24(dt,J＝16.1,8.0Hz,8H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),2.03-1.58(m,10H),1.31(s,30H),1.01-0.82(m,3H)。
11.化合物6021
结构式：
分子量：1182.79
室温下，向单口瓶中，加入化合物2(3.5g，合成工艺同化合物6020中产物2)，加入MeOH(20mL)搅拌混合后，加入TREN(23.0g)，搅拌混合，升温至60℃，搅拌过夜，减压浓缩，所得粗品进行冻干，得到产物3(25g)；在室温下，向单口瓶中，加入产物3(22.0g)、DCM(200mL)，降温至0℃，缓慢滴加(Boc)2O(71.7g)，滴完恢复至室温，反应3h，加水(200mL)萃灭，再加入DCM(100mL)分液萃取，有机相硫酸钠干燥，减压浓缩，过柱纯化，得黄色油状物4(5.8g)。在室温下，向单口瓶中，加入黄色油状物4(1.4g)，冰水浴下缓慢加入HCl/Dioxane(4M)(15mL)搅拌混合，加完恢复至室温，反应0.5h，减压浓缩,得到化合物5(800mg)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物5(1.0g)，(S)-2,6-二叔丁氧羰基氨基己酸(2.6g)，EDCI(1.4g)，HOBt(1.0g)，DIEA(1.0g)和溶剂DMF(10mL)，室温条件下反应过夜，加入100mL水和100mL EA，分液萃取，EA相用饱和食盐水100mL洗一次，减压浓缩，柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到化合物6(1.1g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物6(1.2g)，HCl/Dioxane(4M)(10mL)和溶剂DCM(10mL)，室温条件下反应过夜，减压浓缩，纯化，得到化合物6021(220mg)。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.96(t,J＝6.6Hz,4H),3.75(dt,J＝14.0,6.6Hz,4H),3.62-3.45(m,12H),3.36-3.33(m,14H),3.25-3.17(m,2H),3.04-2.90(m,8H),2.83(t,J＝6.9Hz,4H),2.05-1.82(m,8H),1.73(p,J＝7.7Hz,10H),1.53(qd,J＝8.3,7.7,4.3Hz,8H),1.30(s,28H),0.97-0.87(m,3H)。
12.化合物6023
结构式：
分子量：670
在室温下，向三口瓶中，加入化合物十二烷基胺(10g)，加入MeOH(100mL)搅拌混合后，冰水浴降温至5℃，缓慢滴加入丙烯酸甲酯(10.2g)，搅拌混合，恢复至室温，反应液在室温下反应4h后停止反应，减压浓缩，柱层析纯化(PE:EA＝20:1-10:1)，得到产物2(19g)。在室温下，向单口瓶中，加入产物2(19.0g)、MeOH(200mL)和乙二胺(127.7g)，升温至60℃，保持该温度反应过夜，减压浓缩，得化合物3(20g)，取500mg纯化，冻干得化合物6023-1(218mg)。在室温下，向单口瓶中，加入原料6023-1(1.4g)，加入DCM(20mL)搅拌溶解后，再加入(S)-2,6-二叔丁氧羰基氨基己酸(3.4g)，EDCI(1.9g)，DMAP(1.2g)搅拌混合，保持室温，反应过夜，分液萃取，干燥，减压浓缩。得到化合物4(3.0g)。在室温下，向单口瓶中，加入化合物4(2.8g),HCl/1,4-Dioxane(4M)(20mL)，室温条件下反应2h；减压浓缩，纯化，冻干得化合物6023(123mg)。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.88(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.36(m,8H),3.36-3.33(m,2H),3.31-3.14(m,4H),3.04-2.93(m,4H),2.77(t,J＝6.5Hz,4H),2.00-1.82(m,4H),1.82-1.66(m,6H),1.50(qd,J＝8.2,7.8,4.2Hz,4H),1.45-1.25(m,18H),0.96-0.87(m,3H)。
13.化合物6024
结构式：
分子量：870.24
在室温下，向单口瓶中，加入产物6023-1(1.4g，合成方法同化合物6023中的6023-1)，加入MeOH(20mL)搅拌溶解后，再缓慢加入丙烯酸甲酯(2.8g)搅拌混合，升温至60℃，该温度下反应过夜，减压浓缩,得到化合物4(2.0g)；在室温条件下，向单口瓶中，加入化合物4(2.4g)，乙二胺(20mL)，室温条件下反应过夜；减压浓缩，纯化，得化合物6024(191mg)。1HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ3.69(t,J＝6.0Hz,4H),3.60-3.48(m,20H),3.42(t,J＝6.1Hz,4H),3.25-3.19(m,2H),3.12(t,J＝5.8Hz,8H),2.83(t,J＝6.5Hz,12H),1.78(tt,J＝11.0,6.4Hz,2H),1.51-1.18(m,20H),0.91(t,J＝6.7Hz,3H)。
14.化合物6026
结构式：
分子量：443.67
参考化合物6019的合成路线合成化合物6026，区别仅在于：采用等摩尔量的化合物1替代6019的原料5、采用等摩尔量的N-(叔丁氧羰基)乙醇胺替代化合物6019的中间体4。1H NMR(300MHz,DMSO)δ：4.51(t,J＝7.3Hz,4H),3.76(t,J＝6.1Hz,4H),3.18(t,J＝6.7Hz,4H),3.01(t,J＝5.8Hz,2H),2.49(t,J＝7.1Hz,4H),1.36-1.26(m,24H),0.89(t,J＝6.2Hz,3H).
化合物6025-6034参照前述化合物的合成途径获得，不同在于采用羟乙基胺替代相应的乙二胺，并先对羟乙基胺的氨基用Fmoc或Boc等保护基进行保护，反应完成后按照常规方法脱去保护基即可。
实施例2脂质纳米颗粒的制备
将荧光素酶mRNA(Luciferase mRNA)稀释于50mM pH4.0枸橼酸钠缓冲溶液中，mRNA溶液浓度为135μg/ml；按可电离脂质化合物(实施例1中制备的可电离脂质化合物)：其他可电离脂质：DSPC：胆固醇：2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二十四烷基乙酰胺(ALC-0159)摩尔百分比15：35：10：38.5：1.5比例配制脂质混合乙醇溶液；将mRNA溶液与脂质混合溶液以3：1体积比例在纳米药物制备设备混合后，经超滤过滤即得荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒，具体见表1。
表1脂质纳米颗粒的制备
对比例1
将荧光素酶mRNA(Luciferase mRNA)稀释于50mM pH4.0枸橼酸钠缓冲溶液中，mRNA溶液浓度为135μg/ml；SM102：其他可电离脂质(ALC-0315)：DSPC：胆固醇：2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二十四烷基乙酰胺(ALC-0159)摩尔百分比15：35：10：38.5：1.5比例配制脂质混合乙醇溶液；将mRNA溶液与脂质混合溶液以3：1体积比例在纳米药物制备设备混合后，经超滤过滤即得荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒。
对比例2
将荧光素酶mRNA(Luciferase mRNA)稀释于50mM pH4.0枸橼酸钠缓冲溶液中，mRNA溶液浓度为135μg/ml；SM102：DSPC：胆固醇：2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二十四烷基乙酰胺(ALC-0159)摩尔百分比50：10：38.5：1.5比例配制脂质混合乙醇溶液；将mRNA溶液与脂质混合溶液以3：1体积比例在纳米药物制备设备混合后，经超滤过滤即得荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒。
实施例3脂质纳米颗粒的粒径、Zeta电位和包封率测定
1.粒径和多分散系数(PDI)测定：采用Malvern ZetaSizer Nano ZS90通过动态光散射测定实施例2中脂质纳米颗粒的样品溶液的平均粒径及PDI。测量角为90°，分散剂折射率为1.330，测试温度为25℃。
2.Zeta电位：采用Malvern ZetaSizerNano ZS90，基于电泳光散射技术(ELS)测定实施例2中脂质纳米颗粒的样品溶液的Zeta电位，分散剂折射率：1.330，测试温度：25℃。
3.包封率：按照制造商的使用说明，用Quant-it Ribogreen RNA定量测定试剂盒(ThermoFisher Scientific，UK)，测定实施例2中脂质纳米颗粒中荧光素酶mRNA的包封率。各脂质纳米颗粒的平均粒径、PDI、Zeta电位和包封率数据见表2。
表2脂质纳米颗粒的表观pKa、粒径、PDI、Zeta电位和包封率汇总表
化合物编号 粒径nm PDI 电位mV 包封率％
6001 107.2 0.140 -3.06 100
6002 52.81 0.108 3.47 97.8
6003 65.54 0.112 -10.5 89.1
6004 48.72 0.07 3.34 96.5
6005 58.67 0.190 2.93 97.7
6006 74.43 0.067 -9.82 80.6
6007 62.94 0.122 2.82 89.4
6015 54.43 0.036 10.1 80.7
6019 79.50 0.146 0.76 80.3
6020 90.01 0.098 -10.0 85.6
6023 42.84 0.071 9.42 90.2
6024 42.44 0.088 10.8 84.5
6026 51.34 0.110 5.41 86.4
对比例1 90.45 0.201 5.60 79.5
对比例2 80.02 0.178 4.82 80.5
实施例4脂质纳米粒的体外细胞活性评价
采用HEK-293T细胞进行各脂质纳米颗粒组合物以及对比例脂质纳米颗粒组合物体外转染效率评价。将HEK293T细胞用DMEM+10％FBS培养基进行常规培养，确保细胞处于对数生长期；转染前一天，以合适的细胞密度接种到96孔培养板上，生长过夜。转染时，细胞融合度要达到70-90％；用DMEM将各示例性化合物制备的脂质纳米颗粒组合物分别稀释成4个不同剂量浓度，加入96孔细胞培养板中，使每孔浓度分别达到400ng、200ng、100ng和50ng，用Lipofectamine 2000转染荧光素酶质粒为阳性参照(PC)。在37℃，5％的CO2培养箱中孵育24h后，向孔中加入底物，用酶标仪测定荧光素酶活性，结果见表3，化合物6006制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在HEK293T细胞的荧光素酶活性见附图1。
表3荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在HEK293T细胞的荧光素酶活性
从表2可以看出，采用实施例的可电离脂质化合物制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在HEK 293T细胞(剂量：100ng，96孔板)中表达荧光素酶的荧光强度＞106RLU，且优于对比例1-2，表明采用本发明的可电离脂质化合物制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在体外细胞中呈现出良好的生物活性，并且具有低细胞毒性。
从附图1可以看到，在不同剂量(50-400ng)下，化合物6006所制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在HEK 293T细胞中表达荧光素酶的荧光强度>107RLU，并且随着剂量提高荧光强度提高，表明随剂量提高荧光素酶的表达量相应增加，所制备脂质纳米粒具有良好的mRNA递送能力和安全性。
实施例5脂质纳米粒的体内活性评价
采用6-8周龄雌性Balb/c小鼠进行脂质纳米颗粒组合物体内转染效率和安全性评价。通过尾静脉注射给予化合物6008、6015、6019-6021、6023、6024及对比例1制备的脂质纳米颗粒，单次剂量0.3mpk，在给药后的特定时间点(如6h、24h)使用PerkinElmer小动物成像系统进行动物的活体成像，测定生物发光信号，结果见表4，化合物6020制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒小鼠静脉给药后6h/12h全身活体成像见附图2。
表4化合物制备的脂质纳米颗粒的体内/外活性评价汇总表
从表3可以看出，在给予化合物6008、6015、6019-6021、6023、6024制备的脂质纳米颗粒6h后，小鼠全身荧光信号均值大于108p/s，且优于对比例1，表明包含化合物的荧光素酶mRNA脂质纳米粒诱导了荧光素酶的体内有效表达。同时小鼠在给予实施例2制备的各脂质纳米颗粒后，未见活动异常等毒性反应。表明采用本发明的可电离阳离子脂质化合物制备的荧光素酶mRNA脂质纳米颗粒在动物体内呈现出生物活性，并且具有低毒性。
本发明方案不仅限于上述技术手段所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本发明领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (27)

1.一种可电离脂质化合物，其特征在于，所述可电离脂质化合物为式(1)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：
其中A1为NH或O；
Ra选自C6-C24烷基、C6-C24烯基、C6-C24的环烷基；所述C6-C24烷基、C6-C24烯基、C6-C24的环烷基为直链或支链结构；Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基、C2-C12烯基、C1-C12炔基、C3-C12环烷烃基、C6-C12的芳烃基、C1-C12烷基醇、C1-C12的杂环基、烷基胺；
所述烷基胺为其中，Ra’为C1-C12烷基，所述Rb’和Rb”各自独立的选自H、C1-C6烷基胺、Rc”选自被未取代或被氨基取代的C1-C6烷基，Rc”’为H、或-Rc’-A1’-Rc”-NH2；
条件是，当A1’为-CO-NH-、-NH-CO-或-CO-O-时，Rc’为C1-C6烷基；当A1’为-CO-时，Rc’不存在。
2.一种可电离脂质化合物，其特征在于，所述可电离脂质化合物为式(1)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：
Ra选自C6-C24烷基醇、C6-C24短链聚氧乙烯；所述C6-C24烷基醇、C6-C24短链聚氧乙烯基为直链或支链结构；Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基、C2-C12烯基、C1-C12炔基、C3-C12环烷烃基、C6-C12的芳烃基、C1-C12烷基醇、C1-C12的杂环基、烷基胺；
所述烷基胺为其中，Ra’为C1-C12烷基，所述Rb’和Rb”各自独立的选自H、C1-C6烷基胺、Rc”选自被未取代或被氨基取代的C1-C6烷基，Rc”’为H、或-Rc’-A1’-Rc”-NH2；
条件是，当A1’为-CO-NH-、-NH-CO-或-CO-O-时，Rc’为C1-C6烷基；当A1’为-CO-时，Rc’不存在。
3.如权利要求1-2任一项所述的可电离脂质化合物，其特征在于，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇、烷基胺。
4.如权利要求3所述的可电离脂质化合物，其特征在于，条件是，当Ra为直链的C6-C24烷基时，A1不为NH，或Rb和Rc不为C1-C12烷基醇；当Ra为C6-C24烷基醇时，A1不为O，或Rb和Rc不为C6-C24烷基。
5.如权利要求3所述的可电离脂质化合物，其特征在于，条件是：当Ra为C6-C24烯基时，A1为NH，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇；
或当Ra为支链的C6-C24烷基时，A1为NH，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇、烷基胺；
或Ra为直链的C6-C24烷基时，A1为NH或O，Rb和Rc各自独立地选自烷基胺；
或当Ra为直链的C6-C24烷基时，A1为O，Rb和Rc各自独立地选自C1-C12烷基醇；
或当Ra为C6-C24短链聚氧乙烯时，A1为NH或O，Rb和Rc各自独立地选自烷基胺；
或当Ra为C6-C24烷基醇时，A1为NH或O，Rb和Rc各自独立地选自烷基胺。
6.如权利要求1-2任一项所述的可电离脂质化合物，其特征在于，Ra选自下面的化合物结构：
7.如权利要求1-2任一项所述的可电离脂质化合物，其特征在于，Rb和Rc选自下面的化合物结构：
Rd选自C1-C6的烷烃或环烷烃。
8.如权利要求1-2任一项所述的可电离脂质化合物，其特征在于，所述式(1)的化合物选自下列化合物中的至少一种：
9.如权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物的制备方法，其特征在于，包括如下反应步骤：
Ra”-NH2①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成可电离脂质化合物③：
其中，Ra”-NH2为Ra-NH2或
Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为-Rc’-A1’-Rc”-NH2。
10.如权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物的制备方法，其特征在于，包括：
1)Ra”-NH2①与α,β-不饱和羰基化合物④反应生成化合物⑤；
2)化合物⑤与亲核试剂⑥反应生成可电离脂质化合物③；
其中，亲核试剂⑥为Rb-NH2或Rb-OH；Ra”-NH2选自Ra-NH2或
Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为-Rc’-A1’-Rc”-NH2；Z2为离去基团，Z2与NH2反应得到A1。
11.如权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物的制备方法，其特征在于，包括：
1)Ra-NH2①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成化合物⑦；
2)化合物⑦与α,β-不饱和羰基化合物⑧反应生成化合物⑨；
3)化合物⑨与亲核试剂⑩反应生成可电离脂质化合物；
其中，Z3为离去基团，A3与Z3反应得到A1。
12.如权利要求9-11任一项所述的制备方法，其特征在于，式1a-式1c中，至少一种亲核试剂与至少一种α,β-不饱和羰基化合物的β位碳原子发生麦克加成反应，生成含碳碳键、碳氧键、碳氮键、碳硫键或碳硒键的带有两分叉的所述可电离脂质化合物。
13.如权利要求9-11任一项所述的制备方法，其特征在于，式1a-式1c反应式还包括以通过式1a-式1c反应式得到带有端氨基的式(1)的化合物作为原料，与反应的步骤；
所述带有端氨基的式(1)的化合物为
其中，Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为―Rc’―A1’―Rc”―NH2。
14.如权利要求9或10所述的制备方法，其特征在于，式1a-式1b还包括以通过式1a-式1b反应得到的带有端氨基的式(1)的化合物作为原料，按照式1a中步骤1或式1b中步骤1-2进行迭代反应的步骤；
所述带有端氨基的式(1)的化合物为
其中，Rb’和Rb”同时为H，或者Rb’和Rb”同时为C1-C6胺，或者Rb’和Rb”同时为―Rc’―A1’―Rc”―NH2。
15.如权利要求9-11任一项所述的制备方法，其特征在于，反应过程中所用原料还含有保护基团，反应步骤中包括保护和/或脱保护的步骤。
16.如权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物在乳化剂、助悬剂、分散剂、增溶剂、润滑剂、增稠剂、抑菌剂或防腐剂中的应用。
17.如权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物在制备化妆品组合物中的应用。
18.如权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物在制备脂质组合物中的应用，其特征在于，所述可电离脂质化合物用作药物递送载体。
19.一种脂质组合物，其特征在于，包括权利要求1-8任一项所述的可电离脂质化合物。
20.如权利要求19所述的脂质组合物，其特征在于，所述脂质组合物的脂质组分包含其他脂质，所述其他脂质包括磷脂、胆固醇以及PEG缀合脂质。
21.如权利要求20所述的脂质组合物，其特征在于，所述脂质组合物的脂质组分还包含其他可电离脂质，所述可电离脂质化合物与所述其他可电离脂质的摩尔比为1:0.05-100。
22.如权利要求21所述的脂质组合物，其特征在于，所述其他可电离脂质选自下列化合物中的至少一种：
23.如权利要求20所述的脂质组合物，其特征在于，可电离脂质组分与其他脂质的摩尔比为1:0.2-10；所述脂质组合物的活性成分包括治疗剂和/或预防剂；所述活性成分占处方总量的0.1-50％(w/w)。
24.如权利要求23所述的脂质组合物，其特征在于，所述治疗剂和/或预防剂是核酸；所述核酸是DNA或RNA。
25.如权利要求19-24任一项所述的脂质组合物在制备治疗哺乳动物的疾病的药物中的应用，其特征在于，所述疾病以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征；所述疾病选自感染性疾病、癌症、增生性疾病、遗传性疾病、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管疾病、肾血管疾病、代谢性疾病。
26.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求19-24任一项所述的脂质组合物和药学上可接受的载体。
27.如权利要求26所述的所述药物组合物，其特征在于，还包括药物活性化合物，所述的药物活性化合物选自抗炎化合物、类固醇、他汀类药物、雌二醇、BTK抑制剂、S1P1激动剂、糖皮质激素受体调节剂和抗组胺药物。
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