CN102665685A - 纯的peg-脂质缀合物 - Google Patents

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Abstract

公开了聚乙二醇(PEG)-脂质缀合物的合成。此类合成包括将小的PEG低聚物逐步添加到甘油主链直到获得期望的链大小。合成得到的聚合物是高度单分散的。本发明提供了几种优势，比如简化的合成，高产物收率及起始材料低成本。本合成方法适合用于制备大范围的缀合物。在另一方面，本发明包括具有共价连接到一个或两个单分散的PEG链和一个或两个脂质的甘油主链的PEG脂质缀合物。这些缀合物对于药物制剂是特别有用的。

Description

纯的PEG-脂质缀合物
发明领域
本发明涉及聚乙二醇(PEG)-脂质缀合物的合成。更具体地，本发明涉及用于制备具有大体上单分散的PEG链的PEG-脂质缀合物的方便且经济的合成方法及组合物。
优先权的要求
本申请要求享有名称为“PURE PEG-LIPID CONJUGATES(纯的PEG-脂质缀合物)”且于2009年6月2号提交的美国临时专利申请第61/217,627号；及名称为“PURE PEG-LIPID CONJUGATES(纯的PEG-脂质缀合物)”且于2009年12月12号提交的美国临时专利申请第61/284,065号的优先权。
发明背景
当用作递送载体(delivery vehicle)时，PEG-脂质缀合物具有改善亲脂性药物的药理学分布型(pharmacology profile)与溶解度的能力。其还提供其他的潜在优势，比如最小化与治疗性处理相关的副作用和毒性。
药物递送聚合物的狭窄的分子量分布对于生物医学的应用是至关重要的，尤其是如果用于静脉注射。例如，PEG-8辛酸/癸酸的甘油酯是具有200-400的平均相对分子量的甘油的单酯、二酯和三酯与聚乙二醇的单酯和二酯的混合物。部分由于在动物中所观察到的过敏反应，对于很多水不溶性药物来说PEG-8CCG的应用受到了限制且大约6％的PEG-8CCG的剂量限定是针对人口服药物制剂发布的。
对于产自游离基聚合的PEG链，对于具有约200-1,200道尔顿及以上的分子量的链，分子量分布没有严密地控制。典型地，在一个批次中远少于50％的聚合物恰好具有目标分子量。较狭窄的分布可用尺寸排阻色谱法来实现，这可得到多达更多的具有目标分子量的PEG聚合物。然而，实现纯化的PEG的单-分布是极其困难的。
具有多达约12个亚单元的高度纯的PEG链是市场上可买到的。然而，这些PEG的链是极其昂贵的且需要额外的合成步骤将其包含到药物和/或化妆品制剂中。
发明概述
公开了聚乙二醇(PEG)-脂质缀合物的合成。此类合成涉及将小的PEG低聚物逐步添加到甘油主链直到获得期望的链大小。合成得到的聚合物是高度单分散的。本发明提供数个优势，比如简化的合成，高产物收率及起始原料低成本。本合成方法适合用于制备大范围的缀合物。
在又一方面，本发明包括具有共价连接到一个或两个单分散的PEG链及一个或两个脂质的甘油主链的PEG脂质缀合物。这些缀合物对于药物制剂是特别有用的。
附图简述
图1描述了1，2-二油酰-消旋-3-单甲氧基十二乙二醇(mPEG-12)-甘油。
图2描述了伊曲康唑静脉注射(IV)溶液的小鼠的PK曲线。
图3描述了伊曲康唑口服溶液的小鼠的PK曲线。
缩写列表
本文使用以下的化学术语公开本发明：
DAG-PEG：二酰基甘油-聚乙二醇
DMAP：N，N-二甲氨基吡啶
mPEG：单甲氧基聚乙二醇醚
PEG 12：聚乙二醇600
PEG 23：聚乙二醇1000
PEG 27：聚乙二醇1200
GDM-12：1，2-二肉豆蔻酰-消旋-甘油-3-十二乙二醇
GDO-12：1，2-二油酰-消旋-甘油-3-十二乙二醇
GDC-12：1，2-二胆酰-消旋-甘油-3-十二乙二醇
GDM-600：GDO-600：1，3-二油酰-甘油-2-十二乙二醇
GDC-600：1，3-二胆酰-甘油-2-十二乙二醇
GDS-12：1，2-二硬脂酰-消旋-甘油-3-十二乙二醇
GOB-12：1，2-二(十二乙二醇)甘油-3-油酸酯
GMB-12：1，2-二(十二乙二醇)甘油-3-肉豆蔻酸酯
DSB-12：1，2-二(十二乙二醇)甘油-3-硬脂酸酯
GOBH 1，2-二(六乙二醇)甘油-3-油酸酯
GMBH 1，2-二(六乙二醇)甘油-3-肉豆蔻酸酯
GCBH：1，2-二(六乙二醇)甘油3-胆酸酯
GCLBH：1，2-二(六乙二醇)甘油3-胆固醇
GPBH：1，2-二(六乙二醇)甘油-3-棕榈酸酯
GDO-23：1，2-二油酰-消旋-甘油-3-聚乙二醇(1000)，n＝23
GDO-27：1，2-二油酰-消旋-甘油-3-聚乙二醇(1200)，n＝27
GDM-23：1，2-二肉豆蔻酰-消旋-甘油-3-聚乙二醇(1000)，n＝23
GDM-27：1，2-二肉豆蔻酰-消旋-甘油-3-聚乙二醇(1200)，n＝27
GDS-23：1，2-二硬脂酰-消旋-甘油-3-聚乙二醇(1000)，n＝23
TPGS-VE：d-α-生育酚聚乙二醇-1000琥珀酸酯
GDO-X-PEG 12：1，2-二油酰-消旋-甘油-3-X-十二乙二醇(“X”代表接头/间隔基，即，可见于表3的硫(thiol))
环孢霉素：环[[(E)-(2S，3R，4R)-3-羟基-4-甲基-2-(甲氨基)-6-辛酰]-L-2-氨基丁基-N-甲基甘氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-L-丙氨酰-D-丙氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-N-甲基-L-缬氨酰]
POPC：棕榈酰基-油酰基磷脂酰胆碱
发明详述
在本文中，本发明的实施方式是在与制备具有狭窄限定的分子量的PEG-脂质缀合物相关的合成方法、中间体及化合物的背景下描述的。本领域的普通技术人员将认识到本发明的以下详细描述只是阐述性的而不是想要以任何方式进行限制。本发明的其他实施方式将容易地向此类技术人员表明其具有本公开内容的益处。现在将详细参考本发明的实现方式。
为了清晰，未显示和描述本文所描述的实现方式的所有常规特征。当然，将理解在任意此类实际实现方式的开发中，为了实现开发者的特定目标，必须做很多实现方式特定的决定，比如符合与应用和商业相关的限制条件，并且理解这些特定目标从一个实现方式到另一个实现方式及从一个开发者到另一个开发者是不同的。而且，将理解此类开发努力可能是复杂且耗时的，但是尽管如此，对于本领域的普通技术人员来说，依据本公开内容的益处，这种努力将是常规设计任务。
当采用PEG-脂质缀合物作为药物递送载体时，使用充分表征且高度纯的缀合物变得越来越重要。例如，本文通过引用的方式并入的美国专利第6,610,322号教导了改变PEG和酰基链的长度影响缀合物的堆积参数(packing parameter)，反过来堆积参数决定PEG-脂质缀合物的组合物是否能形成脂质体。除了影响药物制剂的物理结构外，当用PEG-脂质缀合物配制特定的药物化合物时，脂质和PEG大小的选择可显著影响药物代谢动力学和稳定性。因此，具有特定大小的单分散的PEG链的缀合物的统一批次通常要高度优选于具有一系列PEG长度的批次。
本发明提供具有单分散的PEG链的高纯度PEG-脂质缀合物，及从分子量在约110-300道尔顿之间变化的PEG低聚物开始合成这些PEG-脂质缀合物的化合物和方法。本发明还提供用于制备PEG-脂质缀合物的方法，所述PEG-脂质缀合物包括多种脂质，比如饱和或不饱和的脂肪酸或胆汁酸。此类PEG-脂质缀合物可用于药物递送，特别是用于难溶于水的剂的静脉施用。
一般地，本发明包括用于合成PEG-脂质缀合物的组合物及方法，所述PEG-脂质缀合物包含甘油主链与键合到该主链的一个或两个单分散的PEG链和一个或两个脂质基团。间隔基或接头基团可被包括在主链与PEG链和/或脂质基团之间。
本发明的变化形式包括具有两个脂质和一个单分散的PEG链(两者均为同分异构体)的甘油主链、具有一个脂质和两个单分散的PEG链(两者均为同分异构体)的甘油主链及具有一个脂质和一个单分散的PEG链(所有均为同分异构体)的甘油主链，其中主链上的第三个位置可以是多种的化合物或部分。
另外，本发明提供方法以制备纯的1，2或1，3甘油同分异构体。通过将新的部分连接到甘油主链上可利用的位置，市场上可买到的1，2甘油脂质二酯可用于配制很多化合物。然而，在这些1，2甘油二酯的存放过程中发生位置的转换，导致更稳定的1，3甘油同分异构体的形成，这可用分数表达多达约30％。本发明是生产并保持1，2或1，3甘油同分异构体的对映体纯度的唯一的可能性。虽然1，2或1，3同分异构体可能有时是功能等价的，但是同分异构体的选择可能与多种的递送过程有关，比如亲脂性分子的胞内运输及其在药物应用中用作载体。例如，在增溶和存放过程中，同分异构体在稳定化合物的能力方面可能不同。化学结构1图示了两个此类同分异构体在空间构象上的差异。
Figure BDA0000128829800000061
化学结构1：(1)1，2-二肉豆蔻酰-甘油-3-十二乙二醇及(2)1，3-二肉豆蔻酰-甘油-3-十二乙二醇的3D图。
具有多达1200道尔顿的单分散的PEG链的缀合物对于各种药物递送应用是有用的。约300-600道尔顿的PEG链的缀合物用于配制液体剂量形式比如用于静脉注射或口服溶液是特别有用的。约600-1,200道尔顿的PEG链的缀合物用于固体剂量形式比如胶囊是特别有用的。上面的组合用于制备难溶于水的剂的固体剂量形式是有用的，其中上面的缀合物(典型地具有约300-600道尔顿的PEG链)的液体形式用作溶剂及上面的缀合物(典型地具有约600-1,200道尔顿的PEG链)的固体形式用作凝固剂。
本发明包括为制备单分散的PEG-脂质缀合物提供方便且经济的合成方法且为将脂质缀合到聚合物提供多种直线的键基团。本发明提供数个优势，比如简化的合成、高产物收率及起始原料的低成本(由于市场上可买到的PEG低聚物极其昂贵，使得其成本抑制了类似的PEG-脂质缀合物的大规模生产)。另外，本合成方法优选用于制备大范围的PEG-间隔基-脂质缀合物。
单分散的PEG链的合成涉及首先将PEG的短链(具有1-6个亚单元)连接到受保护的甘油主链。通过反复的醚化作用，延长PEG链。一个实例显示在反应方案1中。
Figure BDA0000128829800000071
反应方案1：3-单甲氧基十二乙二醇(mPEG-12)-甘油的合成
在反应方案1中，通过保护(例如，通过苯)PEG低聚物的第一末端并生成反应性第二末端(例如，通过如所示的甲苯磺酰基)制备第一反应性PEG低聚物(b)。然后，该第一反应性低聚物与具有两个受保护的-OH基团的甘油(a)结合。甘油上的保护性基团被选择成在除去第一反应性低聚物的第一末端上的受保护基团的条件下是稳定的。低聚物的反应性第二末端与甘油的游离-OH键合以形成甘油-低聚物中间体(c)。然后，除去中间体的低聚物部分的第一末端上的保护基以暴露反应性-OH基团(d)。将第二反应性PEG低聚物(e)加入到中间体中以形成连接到甘油主链的延长的PEG链(f)。在反应方案1中，第二反应性PEG低聚物在其第一末端上受末端的甲基保护，因为12亚单元PEG链是期望的。如果更长的链是期望的，第二反应性PEG低聚物上的保护性基团被选择成对于PEG链的进一步延长是可容易除去的，例如通过再次将(b)用作第二低聚物。一旦实现了期望的链长度，除去甘油主链的受保护基团以形成产品(g)。然后，具有单分散的PEG链的产品(g)可进一步反应以将期望的脂质添加到甘油主链上。类似地合成可始于短的PEG链或从两个三乙二醇或在三乙二醇与单甲氧基三乙二醇之间的醚化作用来制备六乙二醇。在这个路线中，合成中将涉及额外的两个步骤。
在反应方案1中，为暴露游离羟基而除去苄基保护基可通过任意合适的试剂来实现。例如，在通过重复醚化过程来延伸PEG链之前，在钯催化剂的存在下通过氢化作用可除去苄基。
如反应方案1中所举例的甘油主链上的PEG链的合成之后，从甘油上除去保护基，得到2个游离的羟基。如下面的反应方案2所示，在N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)存在下在惰性溶剂中，游离的羟基可与脂肪酸反应。
Figure BDA0000128829800000081
反应方案2：1，2-二肉豆蔻酰-消旋-3-PEG 12-甘油的合成
反应方案3图示了待用于反应方案2的活化脂质的制备方法。在这个方法中，用合适的活化剂活化脂肪酸的羧基。例如，可使用所示的草酰氯。
Figure BDA0000128829800000091
反应方案3：肉豆蔻酰氯的形成
虽然上文阐述了一种合成具有单一单分散的PEG链的特定PEG-脂质缀合物的方法，本发明更广泛地教导了制备大范围的PEG-脂质缀合物的方法和材料。
第一反应性PEG低聚物优选地包括3-7个CH2CH2O单元，及更优选地具有4-7个CH2CH2O单元，尽管该低聚物可以是至多12个单元的任意长度。另外的反应性PEG低聚物还优选地包括3-7个CH2CH2O单元，及更优选地具有4-7个CH2CH2O单元，尽管该另外的低聚物可以是至多12个单元的任意长度。
本发明的PEG-脂质缀合物每一个均具有一个或两个单分散的PEG链。除非另外说明，在特定的缀合物中大于50％的PEG链具有相同的分子量。更优选地，大于70％具有相同的分子量。最优选地，大于90％具有相同的分子量。同样除非另外说明，优选地PEG链由约6-27个聚合物亚单元组成。更优选地PEG链由约7-27个聚合物亚单元组成。最优选地PEG链由约7-23个聚合物亚单元组成。
在合成1，2-二肉豆蔻酰-消旋-3-PEG 12-甘油的情况下，保护甘油使得PEG链在3位形成。(参见反应方案1，化合物(a))将理解采用替换的甘油衍生物作为起始成分将得到在不同位置具有PEG链的缀合物。例如，保护甘油的1和3位置将得到PEG链在2位(R)。可用于此类合成的甘油衍生物如化学结构2所示。
Figure BDA0000128829800000092
化学结构2
如果具有两个PEG链的缀合物是期望的，可使用如化学结构3或化学结构4所示的甘油衍生物。在这些结构中，R表示以后可被替换的保护基或可包括最终结构的酰基脂质。对于这些缀合物，PEG链一前一后地生长且长度相同。具有两个PEG链的缀合物在某些情况下是特别有用的，因为它们作为分支的PEG缀合物起作用。
Figure BDA0000128829800000101
化学结构3    化学结构4
在甘油主链和PEG链之间包含非氧基接头基团可能是令人期望的。例如，对于不稳定键是有用的应用可采用硫接头。其他有用的接头记录在表3中及在本说明书的其他地方。对于主链与PEG链之间具有替代性接头的缀合物的合成，接头基团首先连接到受保护的甘油主链(例如，化合结构3)。然后，将第一反应性PEG低聚物连接到接头的游离端部，且如所期望的延伸PEG。可选地，在接头键合到主链之前，第一反应性PEG低聚物可连接到接头上。在具有接头的实施方式中，优选的PEG-试剂具有羟基、氨基、羧基、异氰酸酯、硫醇、碳酸酯官能团。用于本发明的方法的这个实施方式的特别优选的PEG-试剂包括PEG-甲苯磺酸酯、PEG-甲磺酸酯和琥珀酰-PEG。
在甘油主链和脂质基团之间包含相同的接头基团可能也是期望的。为了获得此类缀合物，在连接到主链之前接头可与脂质键合，或在脂质连接到接头之前可将接头键合到主链上。
前面的方法描述了PEG链生长在受可除去的保护基保护的主链上。然后，PEG在适当的位置后，将一个或多个脂质基团连接到主链上。然而，在生长PEG链之前，将一个或两个脂质用作主链上的保护基也是可能的。对于不具有在PEG连接与延长的过程中需要保护的反应性基团的烃基链，这种替代方法是特别有用的。由于胆汁酸倾向于具有很多在PEG连接与延长的过程中会产生问题的侧基，因此当期望的是类固醇酸缀合物时，这种方法的有用性要小很多。
虽然上面所描述的合成方法对于很多包括本发明的化合物的制备是有用的，在某些情况下，采用其他的方法可能是必需的或更为方便的。例如，如果具有一个胆汁酸和两个27亚单元PEG链的缀合物是期望的，此类缀合物可通过在将单分散的PEG链连接到甘油主链之前合成单分散的PEG链来构建。类似地，通过使用连接到甘油主链之前所合成的PEG链来制备包括较小的PEG的本发明的许多化合物是可能的。
本发明的其他化合物的合成可能还需要特别地考虑。在主链与酰基或PEG(有时)之间具有接头的缀合物还将优选地通过在将单分散的PEG链连接到主链之前建造单分散的PEG链来制备，这取决于考虑，比如在接头中的键的性质。
本发明的缀合物包括那些具有连接到甘油主链的单一脂质和单一单分散的PEG链的缀合物，其中主链上的第三个位置被从羟基到活性剂的其他部分占据。值得注意的是，尽管位置的转换发生在如上所述具有游离羟基的1，2甘油二酯的存放过程中，但由于移动PEG链需要大量的能量(因为空间、分子大小及极性不同于脂质)，如果PEG链长于约6个亚单元，对于具有连接到具有游离羟基的甘油主链上的单一脂质和单一单分散的PEG链的缀合物来说，重排的可能性更小。同样，1，3同分异构体通常要比1，2同分异构体稳定。
遵循上面所描述的原理，可合成具有一个或两个单分散的PEG链的大范围的PEG-脂质缀合物。许多进一步的具体的实施方式在下文中描述。
用于PEG-脂质缀合物的合成的合适的脂质包括胆汁酸(类固醇酸)以及烃基链。因此，本发明包括多种通过本脂质相合成方法所制备的PEG-脂质缀合物。类固醇酸-PEG缀合物可作为靶向部分用于将基于脂质的药物递送到特定的细胞或作为自乳化的药物递送体系(SEDDS)被包含到脂质体中。
胆汁酸(类固醇酸)构成了一个分子大家族，包括类固醇结构，所述类固醇结构具有四个环、在羧酸处由5个或8个碳侧链封端，和不同数量的羟基的存在和方向。这四个环从左到右标记为A、B、C和D，同时D环与其他三个环相比少一个碳。一种示例胆汁酸如化学结构5所示。所有的胆汁酸都有侧链。当对着可与氨基乙磺酸或甘氨酸进行酰胺连接的羧基时，中心的羟基可用葡糖苷酸或硫酸酯化，这对于自胆汁醇形成水溶性胆汁盐是必需的。
Figure BDA0000128829800000121
R1和R2可以是羟基或质子
化学结构5
目前关于胆汁盐的物理-化学的性质，只研究了一些结构的修饰。一项专利公布(WO02083147)公开了胆汁盐脂肪酸缀合物，其中胆汁酸或胆汁盐在24位(羧基)缀合合适的氨基酸，且不饱和的C＝C键与一个或两个具有14-22个碳原子的脂肪基团结合。该缀合物打算用作药物组合物，用于减少血液中的胆固醇，用于治疗脂肪肝、高血糖症和糖尿病。另一项专利(WO2003212051)公开了阿昔洛韦-胆汁酸前药，其中胆汁酸与化合物之间可使用接头基团。
在一个一般的实施方式中，本发明提供根据通式I的PEG-脂质缀合物。式I所示的两个变型之间的差别在于聚合物和脂质链沿着甘油主链的相对位置。
式I
还有数个式I的替代实施方式。在式I的一个变化形式中，R1和R2可以是相同的或不同的并选自表1或表2所列出的饱和的和/或不饱和的烃基；X是-O-C(O)-、-O-、-S-、-NH-C(O)-或选自表3的接头；及P是PEG链。
在式I的另一个变化形式中，R1和R2中一个为烃基，另一个为H。在式I的这些实施方式中，R1或R2中的至少一个是具有6-22个碳原子的饱和的或不饱和的烃基。在优选的实施方式中，R1和R2是相同的且包括6-22个碳原子及更优选地12-18个碳原子。术语“烃基(alkyl)”包含饱和的或不饱和的脂肪酸。
本发明还提供根据通式II的PEG-脂质缀合物。
式II
此外，还有数个式II的替代性的实施方式。在式II的一个变化形式中，R是表1或表2所列的烃基；X是-O-C(O)-、-O-、-S-、-NH-C(O)-或选自表3的接头；及P1和P2是相同的PEG链。通过提供两个分支的PEG链，根据式II的缀合物可提供胜过具有单一更长的PEG链的缀合物的优势。
表1：用于本发明的饱和的脂质：
  常用名   IUPAC名   化学结构   缩写   熔点(℃)
  酪酸的   丁酸   CH3(CH2)2COOH   C4:0   -8
  羊油酸的   己酸   CH3(CH2)4COOH   C6:0   -3
  羊脂酸的   辛酸   CH3(CH2)6COOH   C8:0   16-17
  羊蜡酸的   癸酸   CH3(CH2)8COOH   C10:0   31
  月桂酸的   十二烷酸   CH3(CH2)10COOH   C12:0   44-46
  肉豆蔻酸的   十四烷酸   CH3(CH2)12COOH   C14:0   58.8
  棕榈酸的   十六烷酸   CH3(CH2)14COOH   C16:0   63-64
  硬脂酸的   十八烷酸   CH3(CH2)16COOH   C18:0   69.9
  花生酸的   二十烷酸   CH3(CH2)18COOH   C20:0   75.5
  山嵛酸的   二十二烷酸   CH3(CH2)20COOH   C22:0   74-78
表2：用于本发明的不饱和的脂质：
Figure BDA0000128829800000141
表3：用于本发明的其他接头：
Figure BDA0000128829800000142
Figure BDA0000128829800000161
Figure BDA0000128829800000171
本发明的PEG-脂质缀合物还包括脂质部分含有一个或两个胆汁酸的化合物。这些缀合物除了胆汁酸代替烃基之外具有与式I和式II所示的相同结构。对于胆汁酸缀合物，变化形式和优选的实施方式与PEG-烃基缀合物的描述是相同的。由于胆汁酸的亲脂性类似于烃基，胆汁酸缀合物还享有类似的物理性质且通常适合于一些与PEG-烃基缀合物相同的用途。
化学结构6显示了本发明的具有连接到甘油主链的单一PEG链及两个胆汁酸的两个变型。
Figure BDA0000128829800000172
化学结构6
在化学结构6中，Y1和Y2可以是相同的或不同的且是OH或H或CH3，或是被选择成与表4所示的胆汁酸一致。类似地，具有不同侧链的胆汁酸(如表4所示)可缀合到甘油主链上。表4列出了在实施本发明上有用的胆汁酸及其衍生物。
表4：用于本发明的胆汁酸(类固醇酸)及其类似物
Figure BDA0000128829800000181
Figure BDA0000128829800000191
Figure BDA0000128829800000201
本发明的又一种变化包括符合式I的化合物，其中R1或R2中的一个是胆汁酸且另一个是烃基。脂质聚合物缀合物的这种变化的实例如化学结构7所示。
Figure BDA0000128829800000202
化学结构7
在化学结构3中，Y1和Y2是相同的或不同的且是OH或H或CH3，或被选择成与表4所示的胆汁酸一致。同样，胆汁酸的侧链可根据表4所示的结构进行改变。R是选自表1和表2的饱和/或不饱和的烃基。
通式II的化合物的又一个优选的实施方式是根据化学结构8的PEG-胆汁酸缀合物。
Figure BDA0000128829800000203
化学结构8
在化学结构8中，Y1和Y2是OH或H或CH3，或根据表4所示的胆汁酸来选择。同样，胆汁酸的侧链可根据表4所示的结构进行改变。
通式II的化合物的又一个进一步优选的实施方式是根据化学结构9所示的结构中的任一个的PEG-胆固醇缀合物。
Figure BDA0000128829800000211
化学结构9
本发明的又一实施方式图示在反应方案4中。在这种方法中，在N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)的存在下在二氯甲烷中将任意合适的胆汁酸(比如胆酸)与3-mPEG-12-甘油反应生成1，2-二胆酰-消旋-3-mPEG 12-甘油终产物。将理解可使用很多不连续长度的单分散PEG链。
Figure BDA0000128829800000212
反应方案4：1，2-二胆酰-消旋-3-mPEG 12-甘油的合成
反应方案5所代表的本发明的又一实施方式分别涉及DL-1，2-异亚丙基甘油中间体与脂肪酸反应生成I或与胆固醇反应生成II。通过任意期望的方法除去异丙基分别提供中间产物III和IV。
Figure BDA0000128829800000221
反应方案5：PEG-脂质缀合物中间体的合成。
所描述的方法可用于制备多种新颖的PEG-脂质缀合物。例如，方法可用于制备含有任意脂肪酸链的纯的形式的3-PEG-1，2-烃基甘油。优选的脂肪酸在约C6-C22的碳链长度的范围内变动，更优选地约10至约C18。
所描述的方法可用于制备多种新颖的PEG-脂质缀合物。例如，方法可用于制备含有任意胆汁酸链的纯的形式的3-PEG-1，2-二类固醇酸-甘油。
所描述的方法可用于制备多种新颖的分支PEG-脂质缀合物。例如，方法可用于制备含有任意脂肪酸链的纯的形式的3-烃基-1，2-二PEG-甘油。优选的脂肪酸在约C6-C22的碳链长度的范围内变动，更优选地约C10至约C18(反应方案6)。
反应方案6：3-肉豆蔻酰-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油的合成
反应方案6得到具有一个甘油主链、一个脂质基团及两个单分散PEG链的化合物。然而，值得注意的是如反应方案1所示例化的PEG链的延伸可用其他的低聚物比如三乙二醇或如前面部分所描述的在三乙二醇和单甲氧基三乙二醇之间来完成。
所描述的方法可用于制备多种新颖的分支PEG-脂质缀合物。例如，方法可用于制备含有纯的形式的类固醇酸-甘油的纯的形式的3-类固醇酸-1，2-二PEG-甘油，所述类固醇酸-甘油含有任意胆汁酸链(反应方案7)。
Figure BDA0000128829800000241
反应方案7：3-胆酰-1，2-二(甲氧基六琥珀酰乙二醇)-3-胆酸酯(3-choloyl-1，2-bis(methoxyhexaethylenesuccinyl glycol)-3-cholate)的合成
本发明的PEG-脂质的一个优选的用途是脂质体和其他含脂质制剂的制备。根据本发明，药物组合物可包括一种或多种的基因载体、反义分子、蛋白质、肽、生物活性的脂质或药物。例如，活性剂可包括一种或多种的药物(比如一种或多种的抗癌药物或其他抗癌剂)。典型地，亲水的活性剂将直接添加到制剂中且疏水的活性剂在与其他成分混合之前将通过PEG-脂质溶解。
可出现在本发明的制剂中的合适的活性剂包括一种或多种的基因载体、反义分子、蛋白质、肽、生物活性的脂质或药物，如前面所描述的那样。本发明的PEG-脂质可用于施用在PEG低聚物的存在下静脉使用更安全的活性剂。
与本发明相容的优选的活性剂包括作用于周围神经、肾上腺素能受体、胆碱能受体、骨骼肌、心血管系统、平滑肌、血液循环系统、突触点、神经效应器交叉点、内分泌与激素系统、免疫系统、生殖系统、骨骼系统、消化与排泄系统、组胺系统及中枢神经系统。合适的剂可选自，例如，蛋白质、酶、激素、核苷酸、多核苷酸、核蛋白质、多糖、糖蛋白、脂蛋白、多肽、类固醇、萜类化合物、类维生素A、抗-溃疡H2受体拮抗剂、抗溃疡药物、低血钙剂(hypocalcemic agent)、保湿剂、化妆品等。活性剂可以是止痛药、麻醉药、抗心律失常剂、抗生素、抗过敏剂、抗真菌剂、抗癌剂(例如，米托蒽醌、紫杉烷类、紫杉醇、喜树碱及喜树碱衍生物(例如，SN-38)，吉西他滨、蒽环类抗生素(anthacycline)、反义寡核苷酸、抗体、细胞因子、免疫毒素等)、抗高血压剂(例如，二氢吡啶类、抗抑郁药、环氧化酶-2抑制剂)、抗凝血剂、抗抑郁药、抗糖尿病剂、抗癫痫剂、抗炎皮质类固醇、用于治疗阿尔兹海默病或帕金森病的试剂、治溃疡剂、抗原生动物剂、抗焦虑药、甲状腺剂、甲状腺剂(thyroid)、抗病毒药、减食欲剂、二膦酸盐类、心脏收缩剂、心血管剂、皮质类固醇、利尿剂、多巴胺能剂、胃肠剂、止血剂、高胆固醇血症剂、抗高血压剂、免抑制疫剂、抗痛风剂、抗疟疾剂、抗偏头痛剂、抗毒蕈碱剂、抗炎剂，比如用于治疗风湿病、关节炎、牛皮癣、炎症性肠病、克罗恩氏病的剂或用于治疗包括多发性硬化的脱髓鞘病的剂，眼用剂；疫苗(例如，抗流感病毒、肺炎、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、霍乱毒素B-亚单位、伤寒、恶性疟原虫(plasmodium falciparum)、白喉、破伤风、单纯疱疹病毒、结核、HIV、百日咳博德特菌、麻疹、腮腺炎、风疹、细菌类毒素、痘苗病毒(vaccinea virus)、腺病毒、SARS病毒、金丝雀病毒、卡介苗、肺炎克雷伯菌疫苗等)、组胺受体拮抗剂、催眠药、肾保护剂、脂质调节剂、肌肉迟缓剂、精神安定剂、亲神经剂、阿片样物质激动剂与拮抗剂、拟副交感神经药、蛋白酶抑制剂、前列腺素、镇静剂、性激素(例如，雄激素、雌激素等)、兴奋剂、拟交感神经药、血管舒张药与叶黄素及这些种类的合成类似物。治疗剂可以是对肾毒性的(比如环孢菌素和两性霉素B)或心脏毒性的(比如两性霉素B和紫杉醇，依托泊苷(etopside)、细胞因子、核酶、干扰素、寡核苷酸、siRNA、RNAis及上述药物的官能衍生物)。
化学治疗剂很适于本发明方法的使用。含有化学治疗剂的本发明的PEG-脂质制剂可直接注射到肿瘤组织来将化学治疗剂直接递送到癌细胞。在某些情况下，尤其是在肿瘤切除后，脂质体制剂可直接植入到所导致的凹处或可作为涂层应用到剩余的组织。
除了合适的水溶性或水不溶性赋形剂外，本发明的PEG-脂质可用于制备多种剂量形式，包括片、胶囊、丸剂、颗粒、栓剂、溶液、混悬剂及乳剂、糊剂、软膏剂、凝胶剂、乳膏、洗剂、滴眼剂、粉剂及喷雾剂。
本发明的PEG-脂质缀合物可用于将活性剂递送到体内的靶细胞。例如，组合物可口服地、通过注射(例如，静脉地、皮下地、肌内地、肠胃外地、腹腔内地、通过直接注射到需要治疗的肿瘤或部位，等等)、通过吸入、通过粘膜递送、局部地和/或直肠地或通过已知的或已发展的方法来递送。含有PEG化的二磷脂酰甘油的制剂还可局部施用，例如，作为乳膏、皮肤油膏、干性皮肤软化剂、湿润剂等。
对于体内使用，本发明提供如本文所描述的含有一个或多个的活性剂的组合物用于制备治疗疾病的药物的用途。换言之，本发明提供用于治疗疾病的如本文所描述的含有一种或多种活性剂的组合物的使用方法。典型地，疾病出现在人或动物患者中。在优选的实施方式中，疾病是癌症，在这种情况下，本发明的组合物包括一种或多种的抗癌剂作为活性剂。例如，根据本发明，如本文所描述的组合物可单独地使用或辅助其他治疗(例如，化疗或放射治疗)使用来治疗癌症，比如头、颈、脑、血液、乳房、肺、胰腺、骨、脾脏、膀胱、前列腺、睾丸、结肠、肾脏、卵巢及皮肤的那些癌症。包括一种或多种的抗癌剂的本发明的组合物特别地优选用于治疗白血病，比如急性白血病(例如，急性淋巴细胞性白血病或急性髓细胞性白血病)。卡波济氏肉瘤也可使用本发明的组合物和方法来治疗。
以下的结构进一步阐述本发明。
Figure BDA0000128829800000271
化学结构10
在化学结构10中，“X”是包括氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素(haloid)的接头及表3所示的那些接头。“n”是重复单元的数目。这些结构代表在甘油主链上生长单一单分散的PEG链的中间体，因此n通常是约6-21。通过以较小的链比如通过接头直接连接到甘油上的三乙二醇或四乙二醇为起始的连续醚化延伸PEG链。PEG链上的末端基团可以是但不限于甲基。
Figure BDA0000128829800000272
化学结构11
在化学结构11中，“X”是包括氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素的接头及表3所示的那些接头。“n”是重复单元的数目。这些结构代表在甘油主链上生长两个单分散的PEG链的最终步骤。“R”是烃基比如饱和的脂肪酸(表1)或不饱和的脂肪酸(表2)或胆酰基或类似物(表4)。末端基团除了甲基以外可被包括在PEG链上。
化学结构12
在化学结构12中，“X”是包括氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素的接头及表3所示的那些接头。“n”是重复单元的数目。这些结构代表在甘油主链上生长两个单分散的PEG链的最终步骤。类似的，通过以较小的链比如通过接头直接连接到甘油上的三乙二醇或四乙二醇为起始的连续醚化延伸PEG链。“R”是烃基比如饱和的脂肪酸(表1)或不饱和的脂肪酸(表2)或胆酰基或类似物(表4)。末端基团除了甲基以外可被包括在PEG链上。
化学结构13
在化学结构13中，“X”和“L”是相同的或不同的接头，包括氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素及表3所示的那些接头。“n”是重复单元的数目。这些结构代表在甘油主链上生长两个单分散的PEG链的最终步骤，因此n通常是约5-12。“R”是烃基比如饱和的脂肪酸(表1)或不饱和的脂肪酸(表2)或胆酰基及其类似物(表4)。末端基团除了甲基以外可被包括在PEG链上。
本发明的实施方式在本文中是在制备包括用于增加溶解度和改善活性剂的递送的纯化的PEG-脂质缀合物的药物组合物的背景下描述的。本文一般地描述了用于配制药物产品的近似优选的组合物，尽管不同的药物典型地具有不同的最佳配方。
对于静脉注射溶液，优选的药物浓度是0.1％-30％。更优选的是1-10％。最优选的是1-5％。PEG-脂质与药物的优选比例(PEG-脂质/药物)是1-20。更优选的是1-10。最优选的是1-5。
对于口服溶液，优选的药物浓度是1％-40％。更优选的是2.5-30％。最优选的是5-30％。PEG-脂质与药物的优选比例(PEG-脂质/药物)是0.5-20。更优选的是1-5。最优选的是1-3。
对于眼用制品，优选的药物浓度是0.01-5％。更优选的是0.05-2％。最优选的是0.1-2％。PEG-脂质与药物的优选比例(PEG-脂质/药物)是1-20。更优选的是3-15。最优选的是5-10。
对于局部溶液，优选的药物浓度是0.05-5％。更优选的是0.1-5％。最优选的是0.1-2％。PEG-脂质与药物的优选比例(PEG-脂质/药物)是1-20。更优选的是3-15。最优选的是5-10。
对于口服胶囊，优选的药物胶囊容量是10mg-250mg。更优选的是25mg-200mg。最优选的是25mg-100mg。PEG-脂质与药物的优选比例(PEG-脂质/药物)是1-10。更优选的是1-5。最优选的是2-5。
对于局部制品，优选的药物浓度是0.05-5％。更优选的是0.1-5％。最优选的是0.5-2％。PEG-脂质与药物的优选比例(PEG-脂质/药物)是1-50。更优选的是3-20。最优选的是5-10。
尽管前面的讨论集中于具有甘油主链且包括PEG链的聚合物-脂质缀合物，本发明进一步包括替代主链和聚合物。3-氨基-1，2-丙二醇、3-溴-1，2-丙二醇、3-氯-1，2-丙二醇、3-氟-1，2-丙二醇、DL-甘油酸、天冬氨酸、谷氨基酸及1，2，4-丁三醇可用作替代性主链以合成类似的PEG-脂质缀合物。化学结构14图示了采用天冬氨酸作为主链的本发明的缀合物。为了制备这个缀合物，由于氨基酸中已经有两个羧基，因此起始材料将是油酰醇而不是油酸。用琥珀酸酯接头将PEG连接到主链上。在此类替代性实施方式中，PEG链(或替代性聚合物链)总是单分散的。
Figure BDA0000128829800000301
化学结构14：1，4-二油酰-2-(mPEG-12-琥珀酰氨基)-天冬氨酸酯
丙二醇和亚甲二醇低聚物可用作乙二醇低聚物的替代选择。同样，生成这些基本的结构单元的共聚物或嵌段共聚物是可能的。
本文所描述的合成方法可以以任意合适方式改进。例如，用于本方明的方法的PEG-试剂可以是任意PEG衍生物，这种衍生物能与中心甘油的羟基或氨基或3-氨基-1，2-丙二醇基或类似物或任意接头的官能团反应。
在本发明的方法中用于PEG-脂质缀合的反应的溶剂包括任意溶剂，优选地极性非质子溶剂比如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、吡啶、四氢呋喃(THF)、二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、二噁烷及类似物。
在一方面，本发明是制备限定长度的PEG链的方法，该方法包括(a)选择具有甘油保护基的甘油衍生物，该衍生物在第一组条件下是稳定的且在第二组条件下可转换成游离羟基；(b)选择具有1-12个亚单元的起始PEG低聚物，其中起始PEG低聚物在其第一末端具有低聚物保护基及所述低聚物保护基在第一组条件下转换成羟基，及其中起始PEG低聚物在其第二末端具有反应性基团，所述反应性基团与具有游离羟基的化合物形成键；(c)甘油衍生物与起始PEG低聚物反应形成甘油-PEG缀合物；(d)通过将缀合物暴露于第一组条件，除去低聚物保护基；(e)重复步骤(f)、(g)及(h)额外的0-6次，其中步骤如以下所描述；(f)选择具有2-11个亚单元的延伸的PEG低聚物，其中延伸的PEG低聚物在其第一末端具有低聚物保护基及所述低聚物保护基在第一组条件下转换成羟基，及其中延伸的PEG低聚物在其第二末端具有反应性基团，所述反应性基团与具有游离羟基的化合物形成键；(g)甘油-PEG缀合物与延伸的PEG低聚物反应形成延长的甘油-PEG缀合物；(h)通过将缀合物暴露于第一组反应条件，除去低聚物保护基；(i)通过步骤(j)或步骤(k)和(l)终止PEG链，其中步骤如下所描述；(j)将末端基添加到延长的甘油-PEG缀合物的游离羟基上；或(k)选择具有2-11个亚单元的末端PEG低聚物，其中末端PEG低聚物在其第一末端具有末端基，及末端的PEG低聚物在其第二末端具有反应性基团，所述反应性基团与具有游离羟基的化合物形成键；及(l)甘油-PEG缀合物或延长的甘油-PEG缀合物与末端PEG低聚物反应；及(m)将终止的甘油-PEG缀合物暴露于第二组条件下。末端基可以是甲基。第一组条件可以是催化还原。第二组条件可以是暴露于酸。甘油衍生物可以是如反应方案1(a)所示的式所代表的化合物。甘油衍生物可以是如反应方案2所示的式所代表的化合物。甘油衍生物可以是如反应方案3所示的式所代表的化合物。甘油衍生物可以是如反应方案4所示的式所代表的化合物。甘油保护基可以是烃基。方法可进一步包括步骤：(n)除去甘油保护基；及(o)将脂质基团键合到甘油主链上。
在又一方面，本发明是包括PEG-脂质缀合物的化学组合物，PEG-脂质缀合物包括：甘油主链；脂质基团，其共价连接到甘油主链上；及PEG链，其共价连接到甘油主链上，其中PEG链具有约200-1200道尔顿的分子量，及其中在组合物中缀合物分子的大于约75％的PEG链具有相同的分子量。在组合物中缀合物分子的大于约90％的PEG链具有相同的分子量。PGE链可具有大于约600道尔顿的分子量。脂质可以是烃基。烃基可选自表1和表2中的烃基。组合物还可包括共价连接到甘油主链上的第二脂质。第二脂质可以是烃基。第二烃基可选自表1和表2中的烃基。脂质可以是胆汁酸。胆汁酸可选自表4中的胆汁酸。胆汁酸可以是胆固醇。组合物还包括甘油主链与PEG链之间的接头基团。接头可选自组成为-S-、-O-、-N-、-OCOO-及表3中的接头的组。组合物还可包括共价连接到甘油主链上的第二PEG链。甘油主链与第二PEG链之间的键可选自组成为-O-C(O)-、-O-、-S-及-NH-C(O)-的组。甘油主链与第二PEG链之间的键可选自表3。
在又一方面，本发明包括根据第89段的组合物，其中甘油主链被选自组成为3-氨基-1，2-丙二醇、3-溴-1，2-丙二醇、3-氯-1，2-丙二醇、3-氟-1，2-丙二醇、DL-甘油酸、天冬氨酸、谷氨酸及1，2，4-丁三醇的组的主链替代。
在又一方面。本发明包括根据权利要求第89段的组合物，其中PEG链被选自组成为聚亚甲二醇、聚丙二醇及共聚物的组的聚合物替代，所述共聚物包括至少两个选自组成为亚甲二醇、丙二醇和乙二醇的组的单体。
在又一方面，本发明包括以下的化合物：如反应方案1(a)所示的式所代表的化合物；如化学结构2所示的式所代表的化合物；如化学结构3所示的式所代表的化合物；如化学结构4所示的式所代表的化合物；1，2-异亚丙基-甘油-3-乙二醇、1，2-异亚丙基-甘油-3-二乙二醇、1，2-异亚丙基-甘油-3-三乙二醇、1，2-异亚丙基-甘油-3-四乙二醇、1，2-异亚丙基-甘油-3-五乙二醇及1，2-异亚丙基-甘油-3-六乙二醇、1，2-异亚丙基-甘油-3-七乙二醇及1，2-异亚丙基-甘油-3-八乙二醇的分子；及1，3-二酰基甘油-2-乙二醇、1，3-二酰基甘油-2-二乙二醇、1，3-二酰基甘油-2-三乙二醇、1，3-二酰基甘油-2-四乙二醇、1，3-二酰基甘油-2-五乙二醇、1，3-二酰基甘油-2-六乙二醇、1，3-二酰基甘油-2-七乙二醇及1，3-二酰基甘油-2-八乙二醇的分子。
在又一方面，本发明包括用于增加活性剂的生物利用度和/或溶解度的方法，所述方法包括：配制具有一种或多种本发明的PEG脂质缀合物的活性剂并向动物或人施用所述以PEG-脂质缀合物为基础的制剂。
在又一方面，本发明包括具有下式的化合物：
其中n是约7-12；及其中X是接头基团。X可具有约16-200的分子量。X可选自组成为氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素及表3所列的那些接头的组。PEG链的末端可具有约15-210的分子量。PEG链的末端可以是甲基。PEG链的末端可以是保护基。PEG链的末端可以是羟基。
在又一方面，本发明包括具有下式的化合物：
Figure BDA0000128829800000331
其中n是约3-23；R是脂质；及其中X是接头基团。X可具有约14-620的分子量。X可选自组成为氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素及表3所列的那些接头的组。n可以是约4-12。更优选地，n可以是约7-12。PEG链的末端可具有约15-210的分子量。PEG链的末端可以是甲基。R可以是选自表1和表2的烃基。R可以是胆汁酸。R可以是选自表4的胆汁酸。R可以是胆固醇。
在又一方面，本发明包括具有下式的化合物：
Figure BDA0000128829800000332
其中n是约3-23；R是脂质；R是脂质；及其中X是相同或不同的接头基团。X可具有约14-620的分子量。X可选自组成为氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素及表3所列的那些接头的组。n可以是约4-23。n优选地是约7-23。PEG链的末端可具有约15-210的分子量。PEG链的末端可以是甲基。R可以是选自表3和表4的烃基。R可以是胆汁酸。R可选自表4。R可以是胆固醇。
在又一方面，本发明包括具有下式的化合物：
其中n是约3-23；R是脂质；R是脂质；L是接头基团；及其中X是相同或不同的接头基团。X可具有约14-620的分子量。X可选自组成为氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素及表3所列的那些接头的组。n可以是约4-23。n可以是约7-23。PEG链的末端可具有约15-210的分子量。PEG链的末端可以是甲基。R可以是选自表1或表2的烃基。R可以是胆汁酸。R可选自表4。R可以是胆固醇。X可选自组成为氧、硫醇、氨基、-COO-、-OCOO-、琥珀酰、卤素及表3所列的那些接头的组。
实施例
下面的实施例是进一步阐述本发明且不应以任意的方式构成其范围的限制。
实施例1.3-油酰基-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油的合成
1A部分：3-苄基-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油
将(±)-3-苄氧基-1，2-丙二醇(1.2g，6mmol)、NaH(0.96g，40mmol)及干燥的THF(150mL)加入到三颈烧瓶中。然后在室温下，将单甲氧基六乙二醇甲苯磺酸酯(5.4g，12mmol)的干燥THF溶液(50mL)滴加到混合物中。混合物回流24小时并冷却至室温。将冰冷的甲醇加入到反应混合物中以使过量的NaH猝灭。蒸发溶剂并用5％HCl(w/v)和CH2Cl2萃取粗产物。蒸发溶剂并通过凝胶渗透色谱进一步纯化以得到85％的无色液体。
1B部分：3-羟基-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油
将5滴醋酸和0.6g的钯黑加入到在20mL正己烷中的5g 3-苄基-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油的溶液中。30℃下，在大气中通过向混合物吹扫纯氢气约60分钟以除去3’-羟基上的苄基保护基。氢气被氮气取代后，将溶液冷却至4-6℃并通过过滤除去催化剂。蒸发溶剂以得到98％的终产物。
1C部分：3-油酰基-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油
25℃下，在氮气下，将6.5g的来自1B的产物(10毫摩尔)、3.1g油酸(11毫摩尔)、9.6g的N，N′-二环己基碳二亚胺(50毫摩尔)及催化量的DMAP(0.6g，5毫摩尔)在无水CH2Cl2(400mL)中搅拌12小时，之后N，N′-二环己基脲盐沉淀并通过过滤除去。减压下蒸发滤液以得到化学结构15所示的89％的终产物。
Figure BDA0000128829800000351
化学结构15：3-油酰基-1，2-二(甲氧基六乙二醇)甘油
实施例2.1，2-二油酰-消旋-3-单甲氧基十二乙二醇(mPEG-12)-甘油
用于该合成的大体步骤图示在反应方案8中。
Figure BDA0000128829800000352
反应方案8：1，2-异亚丙基-甘油-3-单甲氧基十二乙二醇酯的合成
1摩尔的六乙二醇与0.15摩尔的吡啶混合并加热到45-50℃，并加入0.1摩尔的三苯甲基氯。在连续搅拌下进行反应过夜(大约16小时)，然后冷却至室温并用甲苯萃取。萃取液用水洗涤，然后用己烷萃取，并以MgSO4干燥。真空除去溶剂，得到淡黄色油状的三苯甲基-六乙二醇(产率70-85％)。
将0.1mole摩尔的三苯甲基-六乙二醇与0.101摩尔的对-甲苯磺酰氯混合在100mL的二氯甲烷中。均匀的混合物在干冰丙酮浴中冷却至0℃，并且在剧烈搅拌下分次加入45g的KOH，同时保持反应温度在5℃以下。在0℃下连续搅拌3小时，反应完成。粗产物用100mL的二氯甲烷稀释，然后加入120mL的冰水。收集有机层，且用二氯甲烷(2x50mL)萃取水相。用水(100mL)洗涤合并的有机层，并以MgSO4干燥。真空除去溶剂得到清澈的油(87-99％)。
将1，2-异亚丙基-消旋-甘油(0.1mol)、NaH(0.4mol)及干燥的THF(200mL)填充到三颈瓶中。室温下，将三苯甲基-单甲氧基六乙二醇甲苯磺酸酯(0.1mol)的干燥THF溶液(125mL)滴加到混合物中。混合物回流24小时并冷却至室温。将冰冷的甲醇加入到反应混合物中以使过量的NaH猝灭。蒸发溶剂并用5％HCl(w/v)和CH2Cl2萃取粗产物。未进一步纯化粗产物，而是直接用于合成的下一步。
将上述的粗产物转移至耐高压的玻璃烧瓶及200mL的干燥二氯甲烷和10％的钯碳(1.5g)。在30℃下，在大气中通过吹扫纯氢气进行大约60分钟的氢解反应以除去六乙二醇上的保护基。氢气被氮气取代后，将溶液冷却至4-6℃并通过过滤除去催化剂。蒸发溶剂得到95-98％的终产物。
在三颈烧瓶中，混合3-六乙二醇基-1，2-异亚丙基-消旋-丙三醇甘油(0.1mol)和NaH(0.4mol)及干燥的THF(500mL)。室温下，将一苄基六乙二醇甲苯磺酸酯(0.11mmol)的干燥THF溶液(200mL)滴加到混合物中。混合物回流24小时，然后冷却至室温。将冰冷的甲醇加入到反应混合物中以使过量的NaH猝灭。蒸发溶剂并用5％HCl(w/v)和CH2Cl2萃取粗产物。蒸发溶剂并通过凝胶渗透色谱进一步纯化以得到82％的3-单甲氧基六乙二醇-1，2-异亚丙基甘油。
通过在酸性的甲醇溶液中(180mL MeOH：20mL，1M HCl)搅拌10g的3-单甲氧基十二乙二醇-1，2-异亚丙基甘油3小时除去异亚丙基保护基。用碳酸氢钠中和混合物，并在氯仿(3x150mL)中萃取，硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂得到3-单甲氧基十二乙二醇-1，2-二羟基-甘油(化学结构16)产物(75-80％)。
Figure BDA0000128829800000371
化学结构16：3-单甲氧基十二乙二醇-1，2-二羟基-甘油
在上述的PEG链延长反应中，起始的PEG试剂优选地含有1-6个CH2CH2O单元，及更优选地具有3-6个CH2CH2O单元，及更优选地具有4-6个CH2CH2O单元。甘油和PEG-试剂之间的反应可在有或无接头基团的存在下发生。优选的PEG-试剂具有羟基、氨基、羧基、异氰酸酯、硫醇、碳酸酯官能团。用于本发明的方法的这个实施方式的特别优选的PEG-试剂包括PEG-甲苯磺酸酯、PEG-甲磺酸酯和琥珀酰-PEG。在甘油与PEG-试剂之间的反应之后，除去保护基。
在氮气下，0.1摩尔的3-单甲氧基十二乙二醇-1，2-二羟基-甘油在250mL的氯仿中持续搅拌。用250mL的氯仿溶解0.21摩尔的油酰氯并加入到二羟基丙酮的这种非均质混合物中，随后加入15mL的无水吡啶。室温下，在持续地搅拌下，反应进行30分钟。混合物变得均匀且当混合物中无可检测到的油酰氯时反应完成。真空下除去本体溶剂。用二氯甲烷稀释残余物并加入等体积的盐水溶液。收集有机层，用二氯甲烷反复萃取水相，合并有机层，并用水(50mL)再次洗涤，硫酸钠干燥，进一步蒸发得到(70-80％)油状产物(化学结构17)。其液相色谱-质谱(LC-MS)图显示在图1中：(a)将样品注入到4.6x50mm Inertsil C8柱上，用四氢呋喃和水的混合物(4/6，v/v)洗脱，用质谱进行监测及(b)MS谱的洗脱峰是在1.45分钟，其中[M-1]+是母体化合物的离子。
Figure BDA0000128829800000372
化学结构17：1，2-二油酰-消旋-3-单甲氧基十二乙二醇(mPEG-12)甘油
实施例3.1，2-二油酰-消旋-3-单甲氧基十二乙二醇(mPEG-12)甘油
用于该合成的大体步骤图示在以下的方案中(反应方案9)：
Figure BDA0000128829800000381
反应方案9：1，3-二油酰-2-甘油酯的合成
0.033摩尔的二羟基丙酮在氮气下在150mL的氯仿中持续搅拌。用150mL的氯仿溶解0.06摩尔的油酰氯并加入到二羟基丙酮的这种非均质混合物中，随后加入10mL的无水吡啶。室温下，在持续地搅拌下，反应进行30分钟。混合物变得均匀且当混合物中无可检测到的油酰氯时反应完成。真空下除去本体溶剂。残余物用水洗涤，然后用乙酸乙酯萃取。用乙酸乙酯反复萃取水相，合并有机层，再次用水洗涤，硫酸钠干燥并蒸发。得到的油状产物从甲醇中重结晶得到具有43-44℃的熔解温度的3-(十八-10-烯酰氧)-2-氧代丙基十八-9-烯酸酯(产率75-80％)。
用150mL的四氢呋喃(THF)和10mL的水溶解1，3-二油酸酯(0.02摩尔)。非均质溶液在冰浴中冷却至5℃。将硼氢化钠溶液(0.026mol，在THF中)分次加入。30分钟后，通过加入大约1mL的冰醋酸破坏过量的硼氢化物，然后用氯仿稀释溶液，并用水洗涤，硫酸镁干燥。得到部分结晶成具有20-22℃的熔解温度的2-羟基-3-(十八-10-烯酰氧)丙基十八-9-烯酸酯(产率80-90％)的针状晶体的油。
从上述的中间产物，在如实施例1和实施例2所描述的反应与步骤后，制得1，3-二油酰-消旋-甘油-消旋-2-单甲氧基-十二乙二醇(mPEG-12)-甘油(化学结构18)。
Figure BDA0000128829800000391
化学结构18：1，3-二油酰-消旋-2-单甲氧基十二乙二醇(mPEG-12)-甘油
实施例4.1，2-二肉豆蔻酰-消旋-3-十二丙二醇(PPG-12)-甘油
用于该合成的大体步骤图示在以下的方案中(反应方案10)：
Figure BDA0000128829800000401
反应方案10：1，2-异亚丙基-甘油-3-三苯甲基-十二丙二醇
1.5摩尔的四丙二醇与0.23摩尔的吡啶混合加热到45-50℃并加入0.15摩尔的三苯甲基氯。在连续搅拌下进行反应过夜(大约16小时)，然后冷却至室温并用甲苯萃取。萃取液用水洗涤，然后己烷萃取，MgSO4干燥。真空下除去溶剂。得到淡黄色油状三苯甲基-四丙二醇(产率75-85％)。
0.1摩尔的三苯甲基-四丙二醇与0.101摩尔的对-甲苯磺酰氯混合在100mL的二氯甲烷中。均匀的混合物在干冰丙酮浴中冷却至0℃，在剧烈搅拌下分次加入45g的KOH，同时保持反应温度在5℃以下。在0℃下连续搅拌4小时，反应完成。粗产物用100mL的二氯甲烷稀释，然后加入120mL的冰冷的水。收集有机层，然后用二氯甲烷(2x50mL)萃取水相。用水(100mL)洗涤合并的有机层，且MgSO4干燥。真空除去溶剂得到清澈的油(85-95％)。
将1，2-异亚丙基-消旋-甘油(0.1mol)和NaH(0.4mol)及干燥的THF(200mL)填充到三颈烧瓶中。室温下，将三苯甲基-四丙二醇甲苯磺酸盐(0.1mol)的干燥THF溶液(125ml)滴加到混合物中。混合物回流24小时，然后冷却至室温。将冰冷的甲醇加入到反应混合物中以使过量的NaH猝灭。蒸发溶剂并用5％HCl(w/v)和CH2Cl2萃取粗产物。未进一步纯化粗产物，而是直接用于合成的下一步。
将上述的粗产物及200ml的干燥二氯甲烷和10％钯碳(1.5g)转移至耐高压的玻璃烧瓶。在30℃下，在大气中通过吹扫纯氢气进行大约60分钟的氢解反应以除去六乙二醇上的保护基。氢气被氮气取代后，将溶液冷却至4-6℃并通过过滤除去催化剂。蒸发溶剂得到95-98％的终产物。
将3-四丙烯醇-1，2-异亚丙基-消旋-甘油(0.1摩尔)、NaH(0.4摩尔)及干燥的THF(500mL)加入到三颈烧瓶中。室温下，将三苯甲基-四丙二醇甲苯磺酸酯(0.11摩尔)的干燥THF溶液(200mL)滴加到混合物中。混合物回流24小时并冷却至室温。将冰冷的甲醇加入到反应混合物中以使过量的NaH猝灭。蒸发溶剂并用5％HCl(w/v)和CH2Cl2萃取粗产物。
再次重复上面的醚化步骤。蒸发溶剂并通过凝胶渗透色谱进一步纯化以得到约80％的3-三苯甲基-十二丙二醇-1，2-异亚丙基甘油。
通过在酸性的甲醇溶液中(180mL MeOH：20mL，1M HCl)搅拌10g的3-十二丙二醇-1，2-异亚丙基甘油3小时除去异亚丙基保护基。用碳酸氢钠中和混合物，并在氯仿(3×150mL)中萃取，硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂得到3-三苯甲基-十二丙二醇-1，2-二羟基-甘油(化学结构19)产物(75-80％)。
化学结构19：3-三苯甲基-十二丙二醇-1，2-二羟基-甘油
在上述的PEG链延长反应中，起始的PEG试剂优选地含有1-6个CH2(CH3)CH2O单元，及更优选地具有3-6个CH2CH2O单元，及更优选地具有4-6个CH2CH2O单元。甘油和PEG-试剂之间的反应可在有或无接头基团的存在下发生。在该实施方式中，优选的PEG-试剂具有羟基、氨基、羧基、异氰酸酯、硫醇、碳酸酯官能团。用于本发明的方法的这个实施方式的特别优选的PEG-试剂包括PEG-甲苯磺酸酯、PEG-甲磺酸酯和琥珀酰-PEG。甘油与PEG-试剂之间的反应之后，除去保护基。
在氮气下，0.1摩尔的3-三苯甲基-十二丙二醇-1，2-二羟基-甘油在250mL的氯仿中持续搅拌。用250mL的氯仿溶解0.21摩尔的肉豆蔻酰氯并加入到二羟基丙酮的这种非均质混合物中，随后加入15mL的无水吡啶。室温下，在持续地搅拌下，反应进行30分钟。混合物变得均匀且当混合物中无可检测到的油酰氯时反应完成。真空除去本体溶剂并未进一步纯化而转移至下一个步骤。
将上述的粗产物转移至耐高压的玻璃烧瓶及200mL的干燥二氯甲烷和10％钯碳(1.5g)。在30℃下，在大气中通过吹扫纯氢气进行大约60分钟的氢解反应以除去六乙二醇上的保护基。氢气被氮气取代后，将溶液冷却至4-6℃并通过过滤除去催化剂。蒸发溶剂得到95-98％的终产物。
用二氯甲烷稀释上述残余物并加入等体积的盐水溶液。收集有机层，并用二氯甲烷反复萃取水相，合并有机层，用水(50mL)再次洗涤，硫酸钠干燥，进一步蒸发得到(70-85％)油状产物(化学结构20)。
Figure BDA0000128829800000431
化学结构20：1，2-二肉豆蔻酰-消旋-3-十二丙二醇(mPPG-12)-甘油
例如，在聚合物链延长反应中，起始试剂可以是1-6个重复单元的亚甲二醇或乙二醇或丙二醇或三者的混合物，及更优选地具有3-6个重复单元，及更优选地具有4-6个重复单元。甘油和试剂之间的反应可在有或无接头基团的出现下发生。在该实施方式中，优选的聚合试剂具有羟基、氨基、羧基、硫醇、异氰酸酯、碳酸酯官能团。用于本发明的方法的这个实施方式的特别优选的PEG-试剂包括甲苯磺酸酯、甲磺酸酯和琥珀酰活化的中间体。甘油与聚合-试剂之间的反应之后，除去保护基。此类实例之一如化学结构21所示。
化学结构21：1，2-二油酰-消旋-3-单甲氧基四乙二醇-三丙二醇-四乙二醇甘油醚
实施例5：固体剂量组合物
将液体PEG-脂质缀合物加入到装有螺旋桨类型的混合叶片的不锈钢器皿中。连续混合下，加入药物物质。在55-65℃下，连续混合直到药物在视觉上分散在脂质中。在单独的容器中，具有约30℃以上的熔解温度的PEG-脂质缀合物加热熔解或溶解在乙醇中并加入到带混合的器皿中。连续混合直到获得完全均匀的溶液。如果需要，通过真空除去乙醇。当溶液温暖时，将溶液填充到胶囊壳或初步设计的包装结构(模具)中。将填充的胶囊或模具置于制冷下(2-8℃)直到冷却时奶油状的混合物固化。样品配方在表5中描述。
表5
  成分   ％
  药物物质   15
  液体PEG-脂质缀合物   40
  固体PEG-脂质缀合物   45
乙醇   ＜1
液体缀合物可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH。固体脂质缀合物可以是GDS-12、DSB-12、GDO-23、GDO-27、GDM-23、GDM-27和GDS-23。药物可以是莫达非尼或硝苯地平或埃索美拉唑或雷帕霉素或其他活性剂。
实施例6：固体剂量组合物
将液体PEG-脂质缀合物(具有低于约15℃的熔点)加入到装有螺旋桨类型的混合叶片的不锈钢器皿中。连续混合下，加入药物物质。在55-65℃下，连续混合直到药物在视觉上分散在脂质中。在单独的容器中，将TPGS-VE溶解在乙醇中并加入到带有混合的器皿中。连续混合直到获得完全均匀的溶液。通过真空除去乙醇。当溶液温暖时，将溶液填充到胶囊壳或初步设计的包装结构(模具)中。将填充的胶囊或模具置于制冷下(2-8℃)。冷却时，奶油状的混合物固化。样品配方在表6中描述。
表6
  成分   ％
  药物物质(活性的)   15
  脂质PEG-脂质缀合物   40
  TPGS-VE   45
  乙醇   ＜1
液体缀合物可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH。药物可以是莫达非尼或硝苯地平或埃索美拉唑或雷帕霉素或其他活性剂。
实施例7：口服溶液组合物
将PEG-脂质加入到装有混合器螺旋桨的器皿中。连续混合下，加入药物物质。连续混合直到药物在视觉上分散在脂质中。将预先-溶解的赋形剂缓慢加入到具有充分混合的器皿中。连续混合直到获得完全均匀的溶液。样品配方在表7中描述。
表7
  成分   mg/mL
药物物质(活性的) 30.0
  PEG脂质   100
  乳酸   50
氢氧化钠 参见下面
盐酸 参见下面
苯甲酸钠 2.0
  人造调味剂   5.0
  净化水   足量1mL
脂质可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH或其任意组合。氢氧化钠用于制备在净化水中的10％w/w的溶液。目标pH是在4.0-7.0的范围内。如果需要，用NaOH调节pH。药物可以是莫达非尼或硝苯地平或埃索美拉唑或雷帕霉素或其他活性剂。
实施例8：环孢霉素眼科组合物
将PEG-脂质加入到装有混合器螺旋桨的器皿中。连续混合下，加入环孢霉素药物物质。连续混合直到药物在视觉上分散在脂质中。将预先-溶解的赋形剂和无菌净化水缓慢加入到具有充分混合的器皿中。连续混合直到获得完全均匀的溶液。样品配方在表8中描述。
表8
  成分   mg/100mL
环孢霉素 50mg
  PEG脂质   500
氢氧化钠 参见下面
盐酸 参见下面
氯化钠 900
  无菌净化水   足量100mL
脂质可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH或其中。氢氧化钠用于制备在净化水中的10％w/w的溶液。目标pH是在6.0-7.4的范围内。如果需要，用NaOH调节pH。
实施例9：注射溶液组合物
注射溶液按照实施例7进行制备，除了目标pH是在6.0-8.0范围内之外。样品配方在表9中描述。
表9
  成分   mg/mL
  药物物质(活性的)   10.0
  PEG脂质   100
氢氧化钠 参见下面
  乳酸   20
  净化水   足量1mL
脂质可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH或其任意组合。氢氧化钠用于制备在净化水中10％w/w的溶液。目标pH是在6.5-7.4的范围内。如果需要，用NaOH调节pH。药物可以是包括泊沙康唑、伏立康唑及伊曲康唑的三唑类或雷帕霉素或环孢霉素或他克莫司或或硝苯地平或紫杉醇或多西他赛或吉非替尼或异丙酚或利福平或地西泮或奈非那韦或其他活性剂。
实施例10：伊曲康唑制剂的药代动力学分布型与生物利用度
将三只雄性小鼠(B6D2F1)的组用于研究。药代动力学(PK)是在静脉团注伊曲康唑的0小时、0.08小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、16小时及24小时后或在口服饲喂伊曲康唑的0小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、16小时及24小时后所获得的肝素化的小鼠血浆的样品中进行的。使用HPLC-MS/MS方法分析样品。为了测定每一种药物的水平，首先用样品预处理将药物从血浆中分离出来。用乙腈除去样品中的蛋白质。然后用等度HPLC-MS/MS方法将药物从任意潜在干扰中分离出来。通过MS检测与多反应监测(MRM)模式测量药物水平。使用WinNonlin程序(版本5.2，Pharsight)的房室模型分析来分析PK数据。
图2显示了具有(1)在10mM的磷酸钠缓冲液(pH7.4)中的GDO-12(药物与脂质的比率为1∶10)及(2)在10mM的磷酸钠缓冲液(pH7.4)中的10％Cremophor-5％MeOH的伊曲康唑制剂的小鼠的PK分布型。药物是静脉施用且剂量强度为20mg/kg。DAG-PEG制剂(1)与商品(2)的AUC分别为5441μg·小时/mL及986μg·小时/mL。
图3显示了具有(1)在10mM的磷酸钠缓冲液(pH7.4)中的GDO-12(药物与脂质的比率为1∶10)及(2)在10mM的磷酸钠缓冲液(pH7.4)中的10％Cremophor-5％MeOH的伊曲康唑制剂的小鼠的PK分布型。药物是口服施用且剂量强度为20mg/kg。对于PEG-DAG(1)和(2)的制剂，相对生物利用度(基于AUC0-24小时)分别为63％和45％。
实施例11：局部乳膏组合物
将PEG脂质加入到装有螺旋桨类型的混合叶片的不锈钢器皿中。连续混合下，加入药物物质。在60-65℃下，连续混合直到药物在视觉上分散在脂质中。混合下，加入有机酸、胆固醇和甘油。混合下，加入乙醇和乙基氧基二乙二醇(ethyoxydiglycol)。混合下，最后加入卡波姆ETD 2020、净化水及三乙胺。连续混合直到获得完全均匀的乳膏。配方在表10中描述。
表10
  成分   ％
  药物物质(活性的)   1.0
  PEG脂质   5.0
  卡波姆ETD 2020   0.5
  乙基氧基二乙二醇   1.0
  乙醇   5.0
  甘油   1.0
  胆固醇   0.4
  三乙胺   0.20
  有机酸   10
  氢氧化钠   参见下面
  净化水   足量100
脂质可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH或GDS-12或其任意组合。有机酸可以是乳酸或丙酮酸或乙醇酸。如果需要，用NaOH调节pH。目标pH是在3.5-7.0的范围内。药物可以是伊曲康唑、泊沙康唑、伏立康唑或equaconazole、特比萘芬、阿莫罗芬、萘替芬、布替萘芬、苯甲酸、环吡酮、托萘酯、十一碳烯酸、氟胞嘧啶、灰黄霉素、卤普罗近、碳酸氢钠或氟轻松。
实施例12：局部溶液组合物
按照实施例11制备局部溶液，样品配方在表11中描述。
表11
  成分   ％
  药物物质(活性的)   1.0
  PEG脂质   5.0
  α-生育酚   0.5
  有机酸   10.0
  乙醇   5.0
  苯甲酸钠   0.2
  氢氧化钠   参见下面
  净化水   足量100
脂质可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH或其任意组合。有机酸可以是乳酸或丙酮酸或乙醇酸。如果需要，用NaOH调节pH。目标pH是在3.5-7.0的范围内。药物可以是伊曲康唑、泊沙康唑、伏立康唑或equaconazole、特比萘芬、阿莫罗芬、萘替芬、布替萘芬、苯甲酸、环吡酮、托萘酯、十一碳烯酸、氟胞嘧啶、灰黄霉素、卤普罗近、碳酸氢钠或氟轻松。
实施例13：阿奇霉素眼科组合物
将PEG-脂质加入到装有混合器螺旋桨的器皿中。连续混合下，加入阿奇霉素药物物质。连续混合直到药物在视觉上分散在脂质中。将预先-溶解的赋形剂和无菌净化水缓慢加入到具有充分混合的器皿中。连续混合直到获得完全均匀的溶液。样品配方在表12中描述。
表12
  成分   mg/mL
阿奇霉素 15mg
  PEG脂质   150
  氢氧化钠   参见下面
  盐酸   参见下面
  氯化钠   9
  无菌净化水   足量1mL
脂质可以是GDM-12、GDO-12、GDC-12、GDM-600、GDO-600、GDC-600、GOB-12、GMB-12、GOBH、GMBH、GCBH、GCBH或GPBH或其任意组合。氢氧化钠用于制备在净化水中的10％w/w的溶液。目标pH是在7.0-7.8的范围内。如果需要，用NaOH调节pH。
阿奇霉素的优选的浓度是0.5-3％，更优选的是0.5-2％，最优选的是1-2％。PEG-脂质与药物的优选比率(PEG-脂质/环孢霉素)是1-20，更优选的是3-15，最优选的是5-10。

Claims (16)

1.一种包括PEG-脂质缀合物的化学组合物，所述PEG-脂质缀合物包括：
甘油主链；
脂质基团，其共价连接到所述甘油主链上；及
PEG链，其共价连接到所述甘油主链上，其中所述PEG链具有约200至1200道尔顿的分子量，其中在所述组合物中所述缀合物分子的大于约75％的PEG链具有相同的分子量。
2.如权利要求1所述的组合物，其中在所述组合物中所述缀合物分子的大于约90％的PEG链具有相同的分子量。
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述PEG链具有大于约600道尔顿的分子量。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述脂质是烃基。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述烃基选自表1和表2中的烃基。
6.如权利要求1所述的组合物，还包括共价连接到所述甘油主链的第二脂质。
7.如权利要求6所述的组合物，其中所述第二脂质是烃基。
8.如权利要求7所述的组合物，其中所述烃基选自表1和表2中的烃基。
9.如权利要求6所述的组合物，其中所述脂质是胆汁酸。
10.如权利要求7所述的组合物，其中所述胆汁酸选自表4中的胆汁酸。
11.如权利要求6所述的组合物，其中所述脂质是胆固醇。
12.如权利要求1所述的组合物，还包括所述甘油主链与所述PEG链之间的接头基团。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述接头选自组成为-S-、-O-、-N-、-OCOO-及表3中的接头的组。
14.如权利要求1所述的组合物，还包括共价连接到所述甘油主链的第二PEG链。
15.如权利要求1所述的组合物，其中所述甘油主链与所述PEG链之间的键选自组成为-O-C(O)-、-O-、-S-及-NH-C(O)-的组。
16.如权利要求1所述的组合物，其中所述甘油主链与所述PEG链之间的键选自表3。
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