KR20110063456A

KR20110063456A - Ｉｎｈｂｂ 에피토프 펩티드 및 이를 포함하는 백신

Info

Publication number: KR20110063456A
Application number: KR1020117005944A
Authority: KR
Inventors: 타쿠야 츠노다; 류지 오사와; 사치코 요시무라
Original assignee: 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤
Priority date: 2008-08-19
Filing date: 2009-08-14
Publication date: 2011-06-10
Also published as: EP2326718A4; US20120321649A1; US8759481B2; US20160200764A1; MX2011001880A; US8623829B2; US9067973B2; TW201008574A; CA2734515A1; EP2326718A1; RU2011110504A; US8383590B2; US20140248300A1; AU2009283762A1; US20130189291A1; US20100040641A1; CN102186977A; US9284349B2; JP2012500001A; SG193214A1

Abstract

암에 대한 펩티드 백신이 본 명세서에 기재된다. 구체적으로, 본 발명은 CTLs을 유도하는 INHBB로부터 유래된 에피토프 펩티드(epitope peptide)를 기재하고 있다. 또한, 본 발명은 상기 펩티드로 펄스된 HLA-A02 양성 표적 세포를 특이적으로 인식하는 확립된 CTLs을 제공한다. 또한, 항원 제시 세포를 유도하는 방법뿐만 아니라, 상기 펩티드 중 어느 하나를 제시하는 항원 제시 세포 및 엑소솜을 제공한다. 추가로, 본 발명은 엑소솜 및 항원 제시 세포뿐만 아니라, INHBB 폴리펩티드 또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 활성 성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 더욱이, 본 발명은 CTLs을 유도하는 방법, INHBB 폴리펩티드, 상기 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리펩티드를 제시하는 엑소솜 또는 항원 제시 세포, 또는 본 발명의 약학적 제제를 사용하여, 항-종양 면역력을 유도하는 방법뿐만 아니라, 암의 치료 및/또는 예방, 및/또는 이의 수술 후 재발의 방지를 위한 방법을 제공한다.

Description

ＩＮＨＢＢ 에피토프 펩티드 및 이를 포함하는 백신{INHBB EPITOPE PEPTIDES AND VACCINES CONTAINING THE SAME}

우선권

본 발명은 그 전체의 내용이 본 명세서에 참조로서 통합되는, 2008년 8월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 제 61/089,973호에 기반한다.

기술 분야

본 발명은 생명과학 분야에 관한 것이며, 보다 구체적으로 암 치료 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 암 백신, 및 종양 예방 및 치료를 위한 약물로써 매우 효과적인 신규한 펩티드에 관한 것이다.

CD8 양성 세포독성 T 림프구(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)는 주조직적합성 복합체(MHC, maj또는 histocompatibility complex) 클래스 I 분자에서 발견되는 종양 관련 항원(TAA)으로부터 유래된 에피토프(epitope) 펩티드를 인식한 후, 상기 종양 세포를 사멸시킨다는 것이 입증되었다. TAA의 첫 번째 예로서, 멜라노마 항원(MAGE) 패밀리가 발견된 후, 주로 면역학적인 접근을 통해 많은 다른 TAA가 발견되었다(비특허문헌 1: Boon T, Int J 암 1993 May 8, 54(2): 177-80; 비특허문헌 2: Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1996 Mar 1, 183(3): 725-9). 몇몇의 상기 TAA들은 지금 현재 면역치료 표적으로서, 임상 개발이 진행중이다.

강력하고, 특이적인 항종양 면역 작용을 유도할 수 있는 신규한 TAA의 동정은 다양한 암 종류를 위한 펩티드 백신 전략의 임상 활용 및 개발을 추가로 보장한다(비특허문헌 3: Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996 Oct 16, 88(20): 1442-55; 비특허문헌 4: Butterfield LH et al., Cancer Res 1999 Jul 1, 59(13): 3134-42; 비특허문헌 5: Vissers JL et al., Cancer Res 1999 Nov 1, 59(21): 5554-9; 비특허문헌 6: van der Burg SH et al., J Immunol 1996 May 1, 156(9): 3308-14; 비특허문헌 7: Tanaka F et al., Cancer Res 1997 Oct 15, 57(20): 4465-8; 비특허문헌 8: Fujie T et al., Int J Cancer 1999 Jan 18, 80(2): 169-72; 비특허문헌 9: Kikuchi M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 459-66; 비특허문헌 10: Oiso M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 387-94). 현재까지, 이러한 종양 관련 항원 유래 펩티드를 이용한 임상 시험에 관한 다수의 보고가 있었다. 불행히도, 매우 낮은 객관적 반응률이 현재까지 이러한 암 백신 시험에서 관찰되었다(비특허문헌 11: Belli F et al., J Clin Oncol 2002 Oct 15, 20(20): 4169-80; 비특허문헌 12: Coulie PG et al., Immunol Rev 2002 Oct, 188: 33-42; 비특허문헌 13: Rosenberg SA et al., Nat Med 2004 Sep, 10(9): 909-15).

최근에, HLA 클래스 I-결합 펩티드 서열을 예상할 수 있는 알고리즘(algorithms)이 개발되었다(비특허문헌 14: Journal of Immunological Methods, (1995), Vol.185, pp.181-190, 비특허문헌 15: J. Immunol., (1994), Vol.152, pp.163-175, 비특허문헌 16: protein science, (2000), Vol.9, pp.1838-1846). 하지만, 예상되는 에피토프 펩티드가 자연적으로 표적 세포에서 제시되고 HLA 분자가 표적 세포 표면에 발현될 수 있는지를 측정하는 것이 어렵다. 더구나, 알고리즘에서, 예를 들어 BIMAS(bimas.dcrt.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform) (비특허문헌 17: Parker KC, et al., (1994) J Immunol.;152(1):163-75.; 비특허문헌 18: Kuzushima K, et al., (2001) Blood.;98(6):1872-81.)는 정확한 HLA 분자 결합 펩티드보다 적게 제시할 수 있다(비특허문헌 19: Bachinsky MM, et. al., Cancer Immun. 2005 Mar 22;5:6.). 따라서, TAA 스크리닝은 도전적이고 어려운 것으로 남아있다.

인히빈(inhibin)은 알파 써브유닛(INHA)과 두 개의 베타 써브유닛(beta-A 또는 beta-B) 중 하나를 포함하는 이종이량체 당단백질이다. 인히빈(inhibn), 베타(beta) B(INHBB)는 반대되는 생물학적 효과를 갖고 밀접하게 관련된 당당백질인 두 개의 인히빈(inhibin) 및 액티빈(activin) 둘 다의 써브유닛(subunit)이다. 23,040 유전자를 포함하는 게놈 와이드 cDNA 마이크로어레이를 이용한 유전자 발현 프로파일의 분석을 통해서, INHBB가 최근에 비소세포폐암(NSCLC), 신장 세포 암종(특허문헌 1: WO2005/019475; 특허문헌 2: WO2007/013575) 및 식도암(특허문헌 3: WO2004/031413, 특허문헌 4: WO2005/019475, 특허문헌 5: WO2007/013575, 및 특허문헌 6: WO2007/013671 참조, 이의 공개된 내용은 본 명세서에 참조로 통합된다)과 같은 다양한 암에서 상향 조절되는 것으로 나타났다. 따라서, INHBB는 암 면역치료를 위한 흥미로운 표적이 될 수 있고, 그로부터 유래된 CTL 유도용 에피토프 펩티드는 해당 분야에서 그 표적에 의해 찾아진다.

WO2005/019475 WO2007/013575 WO2004/031413 WO2005/019475 WO2007/013575 WO2007/013671

Boon T, Int J Cancer 1993 May 8, 54(2): 177-80 Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1996 Mar 1, 183(3): 725-9 Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996 Oct 16, 88(20): 1442-55 Butterfield LH et al., Cancer Res 1999 Jul 1, 59(13): 3134-42 Vissers JL et al., Cancer Res 1999 Nov 1, 59(21): 5554-9 van der Burg SH et al., J Immunol 1996 May 1, 156(9): 3308-14 Tanaka F et al., Cancer Res 1997 Oct 15, 57(20): 4465-8 Fujie T et al., Int J Cancer 1999 Jan 18, 80(2): 169-72 Kikuchi M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 459-66 Oiso M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 387-94 Belli F et al., J Clin Oncol 2002 Oct 15, 20(20): 4169-80 Coulie PG et al., Immunol Rev 2002 Oct, 188: 33-42 Rosenberg SA et al., Nat Med 2004 Sep, 10(9): 909-15 Journal of Immunological Methods, (1995), Vol.185, pp.181-190 J. Immunol., (1994), Vol.152, pp.163-175 protein science, (2000), Vol.9, pp.1838-1846 Parker KC, et al., (1994) J Immunol.;152(1):163-75. Kuzushima K, et al., (2001) Blood.;98(6):1872-81. Bachinsky MM, et al., Cancer Immun. 2005 Mar 22;5:6.

발명의 요약

본 발명은 면역 치료에 적합한 표적의 발견에 부분적으로 근거한다. TAA가 면역관용을 자주 유도하고, 따라서, 낮은 면역원성을 유도하기 때문에, 적절한 표적의 탐색이 매우 중요하다. INHBB가 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양의 암 조직에서 상향 조절되어 확인된다는 것을 인식한 뒤, 본 발명은 추가 분석을 위해 GeneBank 등록 번호(GenBank Accession No.) NM_002193(서열번호: 15)의 유전자에 의해 암호화되는 인간(Homo sapiens)의 인히빈, 베타 B(inhibin, beta B, INHBB) 단백질(서열번호: 16)을 표적으로 삼았다. 구체적으로, 상응되는 분자에 대하여 특이적으로 CTL을 유도하는 에피토프 펩티드를 포함하는 INHBB 유전자 산물들이 연구를 위해 선택되었다. 건강한 기증자로부터 획득한 말초단핵세포(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)는 INHBB로부터 유래된 HLA-A*0201 결합 후보 펩티드를 이용하여 자극되었다. 각각의 후보 펩티드로 펄스된 HLA-A02 양성 표적 세포를 특이적으로 인식하는 CTL이 확립되었으며, 종양 세포의 표면에서 발현되는 INHBB에 대하여 강력하고 특이적인 면역 반응을 유도할 수 있는 HLA-A02 제한적 에피토프 펩티드가 동정되었다. 이러한 결과들은 INHBB가 강력한 면역원성이며, 이의 에피토프가 종양 면역 치료법을 위해 효과적인 표적이라는 것을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 목적은 CTL 유도성을 갖는, 서열번호 1 내지 14로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열뿐만 아니라, CTL 유도성을 갖는 펩티드를 제공하는 것이다. 또한, 본 발명은 변형된 펩티드가 원래의 CTL 유도성을 유지하는 한, 하나, 둘 또는 다수의 아미노산이 치환 또는 첨가된, 변형된 펩티드를 고려한다. 개체에 투여되었을 때, 본 발명의 펩티드는 항원 제시 세포의 표면에 제시되며, 그런 다음 각각의 펩티드를 표적으로 하는 CTL을 유도한다. 따라서, 본 발명의 목적은 항원 제시 세포를 유도하는 방법뿐만 아니라, 본 발명의 펩티드 중 어느 하나를 제시하는 항원 제시 세포 및 엑소솜(exosome)을 제공하는 것이다.

항종양 면역 반응은 INHBB 폴리펩티드를 제시하는 엑소솜 및 항원 제시 세포뿐만 아니라, 상기 본 발명의 INHBB 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 투여에 의해서 유도된다. 따라서, 본 발명의 또 다른 목적은 그 활성 성분으로 엑소솜 및 항원 제시 세포뿐만 아니라, 본 발명의 폴리펩티드 또는 이들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 약학적 제제를 제공하는 것이다. 본 발명의 약학적 제제는 백신으로서 유용성을 밝힌다.

더구나, 본 발명의 다른 목적은 INHBB 폴리펩티드, INHBB 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, INHBB 폴리펩티드를 제시하는 엑소솜(exosome) 또는 항원 제시 세포 또는 본 발명의 약학적 제제를 투여하는 단계를 포함하는, CTLs 유도 방법, 항-종양 면역을 유도하는 방법뿐만 아니라, 암(종양)의 치료 및/또는 예방(즉, 방지), 및/또는 이의 수술 후 재발의 방지를 위한 방법을 제공하는 것이다. 아울러, 본 발명의 CTLs은 또한 암에 대한 백신으로서의 용도를 밝힌다. 암의 예로는 이에 한정되지 않으나, 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양을 포함한다.

상기 본 발명의 요약 및 하기의 발명의 상세한 설명 모두는 내용을 예시한 것이며, 본 발명 또는 본 발명의 다른 내용이 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 다양한 측면 및 활용은 도면의 간단한 설명 및 본 발명의 상세한 설명 및 이에 따른 바람직한 실시예를 고려하면, 당업자에게 명백해질 수 있다:
[도 1] 도 1은 INHBB로부터 유래된 펩티드로 유도된 CTLs의 IFN-감마 ELISPOT 분석 결과를 나타내는, 일련의 그림, (a) 내지 (n)를 포함한다. INHBB-A02-9-213(서열번호: 1)로 자극된 웰 번호 #4(a), INHBB-A02-9-174(서열번호: 2)로 자극된 웰 번호 #5 및 #7(b), INHBB-A02-9-257(서열번호: 3)로 자극된 웰 번호 #8(c), INHBB-A02-9-313(서열번호: 4)로 자극된 웰 번호 #1 및 #8(d), INHBB-A02-9-139(서열번호: 5)로 자극된 웰 번호 #1, #4 및 #8(e), INHBB-A02-9-8(서열번호: 6)로 자극된 웰 번호 #4(f), INHBB-A02-9-250(서열번호: 7)로 자극된 웰 번호 #5(g), INHBB-A02-10-179(서열번호: 8)로 자극된 웰 번호 #5(h), INHBB-A02-10-237(서열번호: 9)로 자극된 웰 번호 #3(i), INHBB-A02-10-313(서열번호: 10)로 자극된 웰 번호 #5(j), INHBB-A02-10-173(서열번호: 11)로 자극된 웰 번호 #3 및 #7(k), INHBB-A02-10-256(서열번호: 12)로 자극된 웰 번호 #4(l), INHBB-A02-10-162(서열번호: 13)로 자극된 웰 번호 #7(m) 및 INHBB-A02-10-85(서열번호: 14)로 자극된 웰 번호 #7(n)에 있는 CTLs은 각각 대조군에 비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타낸다. 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 웰에 있는 표적 세포를 나타내고, "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포를 나타낸다.
도 2는 IFN-감마 ELISA 분석에서 INHBB-A02-9-174 (서열번호: 2)로 자극된 CTL 라인을 확립한 결과를 나타내는 선 그래프를 묘사한다. 상기 묘사된 결과는 상기 펩티드의 자극에 의해서 확립된 CTL 라인이 대조군에 비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타낸다는 것을 증명한다. 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 표적 세포를 나타내고, "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포를 나타낸다.

비록, 본 명세서에 기재된 어떠한 방법 및 재료와 유사하거나 동등한 방법 및 재료는 본 발명의 실시예를 수행 또는 검사하는데 사용될 수 있으나, 바람직한 방법, 도구, 및 재료는 여기에 기재된다. 그러나, 본 재료 및 방법이 기재되기 이전에, 본 발명은 명세서에 기재된 특정 사이즈, 모양, 부피, 재료, 방법, 프로토콜 등에 한정되지 않으며, 이들은 통상적인 실험 및 최적화에 부합하여 변형될 수 있다. 또한, 본 발명의 상세한 설명에서 사용되는 용어는 특정한 버전 또는 내용을 기술하기 위한 목적이나, 오직 첨부된 청구항으로 제한되는 본 발명의 범위로 제한하려는 의도는 아니다.

본 명세서에서 언급된 개별 공개, 특허 또는 특허 출원의 내용은 그 전체가 명세서에 참조로서 통합된다. 그러나, 본 명세서의 어느 것도 본 발명은 이전 발명으로 인하여 선행되는 문헌의 자격이 없다는 인정으로서, 만들어지지 않는다.

충돌이 일어날 경우, 정의를 포함한 본 명세서에 따른다. 추가로, 상기 재료, 방법, 및 실시예만 설명될 수 있으나, 제한하려는 의도는 아니다.

I. 정의

본 발명에서 사용되는 단어는 별도로 명시되지 않는 한, 단수를 의미한다.

본 발명에서 호환적으로 사용되는 용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 의미한다. 상기 용어는 1개 이상의 아미노산 잔기로 된 아미노산 중합체가 변형된 잔기, 또는 천연 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연 아미노산에 상응하는 인공 화학 모방체와 같은 비천연 잔기에 적용된다.

본 발명에서 사용되는 용어 "아미노산"은 천연 아미노산과 합성 아미노산, 및 천연 아미노산과 마찬가지로 기능하는 아미노산 유사체(analog) 및 아미노산 모방체(mimetic)를 의미한다. 천연 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화되는 아미노산, 및 세포에서 번역 후 변형된 아미노산[예를 들면, 하이드록시프롤린(hydroxyproline), 감마-카복시글루탐산(gamma-carboxyglutamate) 및 O-포스포세린(O-phosphoserine)]이다. 상기 용어 "아미노산 유사체"는 천연 아미노산과 같은 기본적인 화학 구조(수소, 카복실기, 아미노기 및 R기에 결합하는 α탄소)를 가지고 있지만, 변형된 R기 또는 변형된 골격을 가지는 화합물을 의미한다[예를 들면, 호모세린(homoserine), 노르루신(norleucine), 메티오닌(methionine), 설폭사이드(sulfoxide), 메티오닌 메틸 설포니움(methionine methyl sulfonium)]. 상기 용어 "아미노산 모방체"는 서로 다른 구조를 갖지만, 일반적인 아미노산과 비슷한 기능이 있는 화학적 화합물을 의미한다.

아미노산은 IUPAC-IUB 생화학 명명위원회가 권장하는, 일반적으로 알려진 3문자 상징 또는 1문자 상징에 의해 기재되어 질 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "유전자", "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드" 및 "핵산"은 따로 명시되지 않는 한, 호환적으로 사용되며, 일반적으로 인정되는 1문자 코드에 의해 기재되는 아미노산과 유사하다.

별도로 명시되지 않는 한, 상기 용어 "암"은 예로 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양이 포함되는 INHBB 유전자를 과발현하는 암을 나타내지만, 이에 한정하지 않는다.

본 발명에서 사용된 용어 "세포독성 T 림프구", "세포독성 T 세포" 및 "CTL"은 따로 명시되지 않는 한, 호환적으로 사용되며, 따로 특별히 나타내지 않는 한, 비-자가 세포(예를 들면, 종양 세포, 바이러스 감염된 세포)를 인식하고 이러한 세포의 사멸을 유도하는 T 림프구의 하위 그룹을 나타낸다.

별도로 명시되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 이 발명이 속한 업계에서 전통적인 기술중 하나로 일반적으로 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.

II . 펩티드( Peptides )

INHBB로부터 유래한 펩티드가 세포 독성 T 세포(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)에 의해 인식되는 항원으로서 역할을 한다는 것을 증명하기 위하여, INHBB로부터 유래된 펩티드(서열번호: 16)가 일반적으로 HLA 대립 유전자로 알려진, HLA-A02에 의해 한정되는 항원 에피토프인지 여부를 분석하였다(Date Y et al., Tissue Antigens 47: 93-101, 1996; Kondo A et al., J Immunol 155: 4307-12, 1995; Kubo RT et al., J Immunol 152: 3913-24, 1994). INHBB로부터 유래된 HLA-A02 결합 펩티드 후보는 HLA-A02에 대한 그들의 결합 친화성을 바탕으로 동정되었다. 이러한 펩티드를 담지한 수지상 세포(dendritic cells, DCs)에 의해 T 세포를 생체 외에서 자극한 후, 서열번호: 1 내지 14 각각의 펩티드, 특히 하기 펩티드를 사용하여 CTLs을 성공적으로 확립하였다.

INHBB-A02-9-213(서열번호: 1),

INHBB-A02-9-174(서열번호: 2),

INHBB-A02-9-257(서열번호: 3),

INHBB-A02-9-313(서열번호: 4),

INHBB-A02-9-139(서열번호: 5),

INHBB-A02-9-8(서열번호: 6),

INHBB-A02-9-250(서열번호: 7),

INHBB-A02-10-179(서열번호: 8),

INHBB-A02-10-237(서열번호: 9),

INHBB-A02-10-313(서열번호: 10),

INHBB-A02-10-173(서열번호: 11),

INHBB-A02-10-256(서열번호: 12),

INHBB-A02-10-162(서열번호: 13)

및

INHBB-A02-10-85(서열번호: 14).

이렇게 확립된 CTLs은 각각의 펩티드로 자극된 표적 세포에 대해 강력한 특이적 CTL 활성을 보였다. 상기 결과는 INHBB가 CTL에 의해 인식되는 항원이고 상기 펩티드는 HLA-A02에 의해 한정되는 INHBB의 에피토프 펩티드임을 나타낸다.

INHBB 유전자는 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양과 같은, 대부분의 암 조직에서 과발현되므로, 이것은 면역치료의 효과적인 표적이다. 따라서, 본 발명은 CTL에 인식되는 INHBB 유래 에피토프에 상응하는 노나펩티드(9개의 아미노산 잔기로 이루어지는 펩티드) 및 데카펩티드(10개의 아미노산 잔기로 이루어지는 펩티드)를 제공한다. 본 발명의 노나펩티드 및 데카펩티드의 특별히 바람직한 실시예로는 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 이러한 펩티드를 포함한다.

일반적으로, Parker KC et al., J Immunol 1994 Jan 1,152(1): 163-75에 기재된 바와 같이, 인터넷상에서 현재 사용가능한 소프트웨어 프로그램을 이용하여 컴퓨터 상(in silico)에서 다양한 펩티드와 HLA 항원 사이의 결합 친화성을 산출하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, Parker KC et al., J Immunol 1994 Jan 1, 152(1): 163-75; 및 Kuzushima K et al., Blood 2001, 98(6): 1872-81를 참조로 하여 기재되어 있는 바에 따라, HLA 항원과의 결합 친화성을 측정할 수 있다. 결합 친화성을 측정하는 방법은, 예를 들면, Journal of Immunological Methods, 1995, 185: 181-190; 및 Protein Science, 2000, 9: 1838-1846에 기재되어 있다. 따라서, 본 발명은 이러한 공지된 프로그램을 이용하여 동정된 HLA 항원에 결합하는 INHBB의 펩티드를 포함한다. 본 발명의 상기 노나펩티드 및 데카펩티드는 상기 펩티드가 그 CTL 유도성을 유지하는 한, 부가적인 아미노산 잔기를 인접시킬 수 있다. CTL 유도성을 갖는 이러한 펩티드는 전형적으로는 약 40 아미노산 미만, 흔히 약 20 아미노산 미만, 보통 약 15 아미노산 미만이다. 본 발명의 노나펩티드 및 데카펩티드에 인접한 상기 특정 아미노산 서열(예로, 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택된 아미노산 서열로 구성된 펩티드)은 원래의 펩티드의 CTL 유도성을 손상시키지 않는 한 제한되지 않고 임의의 종류의 아미노산으로 구성될 수 있다. 따라서, 또한 본 발명은 CTL 유도성을 갖고, 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 제공한다. 일반적으로, 단백질에서 하나, 둘 또는 다수의 아미노산의 변형은 상기 단백질의 기능에 영향을 끼치지 않으며, 몇몇의 경우에는 심지어 본래 펩티드의 원하는 기능을 강화시킬 수 있다. 사실, 변형된 펩티드(즉, 본래의 참조 서열과 비교하여, 하나, 둘 또는 다수의 아미노산 잔기가 변형된(즉, 치환, 결실, 첨가 또는 삽입) 아미노산 서열로 구성되는 펩티드)는 본래 펩티드의 생물학적 활성을 유지한다고 알려지고 있다(Mark et al., Proc Natl Acad Sci USA 1984, 81: 5662-6; Zoller and Smith, Nucleic Acids Res 1982, 10: 6487-500; Dalbadie-McFarland et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79: 6409-13). 따라서, 하나의 실시예에서, 본 발명의 상기 펩티드는 CTL 유도성 및 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택되는 아미노산 서열에서 하나, 둘 또는 심지어 다수의 아미노산이 결실, 첨가, 삽입 및/또는 치환된 아미노산 서열을 모두 가질 수 있다.

당업자는 단일 아미노산 또는 아미노산의 일부 비율이 바뀌는, 아미노산 서열 각각의 삽입 또는 치환이 본래 아미노산 측쇄의 특성을 보존하는 결과를 내는 경향이 있음을 알고 있다. 이와 같이, 통상적으로 이들은 단백질의 변화가 본래 단백질과 유사한 특성 및 기능을 갖는 변형된 단백질을 만드는 "보존적 치환" 또는 "보존적 변형"이라고 일컫는다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 잘 알려져 있다. 보존되는 아미노산 측쇄 특성의 예는 예를 들어, 소수성 아미노산(A, I, L, M, F, P, W, Y, V), 친수성 아미노산(R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), 및 하기의 작용기 또는 공통적인 특성을 갖는 측쇄가 포함된다: 지방족 측쇄(G, A, V, L, I, P); 측쇄를 포함하는 수산기 그룹(S, T, Y); 측쇄를 포함하는 황 원자(C, M); 측쇄를 포함하는 카르복실산 및 아미드(amide)(D, N, E, Q); 측쇄를 포함하는 염기(R, K, H); 및 측쇄를 포함하는 방향족(H, F, Y, W). 아울러, 하기의 8개 그룹은 각각 보존적 치환으로서 당업계에서 서로 허용될 수 있는 아미노산을 포함한다:

1) 알라닌(A), 글라이신(G);

2) 아스파르트산(D), 글루타민산(E);

3) 아스파르긴(N), 글루타민(Q);

4) 아르기닌(R), 라이신(K);

5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V);

6) 페닐알라닌(F), 타이로신(Y), 트립토판(W);

7) 세린(S), 트레오닌(T); 및

8) 시스테인(C), 메티오닌(M)(예를 들면, Creighton, Proteins 1984 참조).

이러한 보존적으로 변형된 펩티드는 또한 본 발명의 펩티드로 간주된다. 그러나, 본 발명의 펩티드는 이에 한정되지 않으며 상기 변형된 펩티드가 본래 펩티드의 CTL 유도성을 유지하는 한, 비-보존적 변형을 포함할 수 있다. 더욱이, 변형된 펩티드는 CTL 유도성 펩티드의 다형성 변이, 종간 유사체(interspecies homologues), 및 INHBB의 대립 유전자를 제외하지 않는다.

필요한 CTL 유도성을 유지하기 위하여, 소수(예를 들어, 1, 2 또는 몇몇) 또는 적은 퍼센트의 아미노산을 변형(삽입, 첨가, 결실 및/또는 치환)할 수 있다. 본 명세서에서, 상기 용어 "몇몇"은 5개 미만의 아미노산, 예를 들어, 3개 또는 그 이하를 의미한다. 변형된 아미노산의 퍼센트는 바람직하게 20% 미만이며, 보다 바람직하게는 15% 미만이며, 그보다 더욱 바람직하게는 10% 미만 또는 1 내지 5%이다.

본 발명의 바람직한 펩티드의 상동성 분석은, INHBB-A02-9-213(서열번호: 1), INHBB-A02-9-174(서열번호: 2), INHBB-A02-9-257(서열번호: 3), INHBB-A02-9-313(서열번호: 4), INHBB-A02-9-139(서열번호: 5), INHBB-A02-9-8(서열번호: 6), INHBB-A02-9-250(서열번호: 7), INHBB-A02-10-179(서열번호: 8), INHBB-A02-10-237(서열번호: 9), INHBB-A02-10-313(서열번호: 10), INHBB-A02-10-173(서열번호: 11), INHBB-A02-10-256(서열번호: 12), INHBB-A02-10-162(서열번호: 13) 및 INHBB-A02-10-85(서열번호: 14)가 다른 공지의 인간 유전자 산물로부터 유래한 펩티드와 현저한 유사성을 가지고 있지 않다는 것을 확인하였다.

따라서, 이러한 펩티드가 면역치료를 위해 사용되었을 경우, 알려지지 않거나 원하지 않은 면역 반응을 발생시킬 수 있는 가능성은 매우 낮다. 따라서, 이러한 펩티드는 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암(SCLC) 및 연부 조직 종양과 같은, 암 세포에서 INHBB에 대한 종양 환자의 면역력을 유도하는데 매우 유용할 것으로 예상된다.

면역치료의 문맥으로 이용될 때, 본 발명의 펩티드는 세포 또는 엑소솜의 표면에 제시되며, 바람직하게는 HLA 항원과의 복합체로서 제시된다. 따라서, CTLs을 유도할 뿐만 아니라, 상기 HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성을 가진 펩티드를 선택하는 것이 바람직하다. 이러한 목적을 위해서, 상기 펩티드는 증가된 결합 친화성을 갖는 변형된 펩티드를 생산하기 위하여, 아미노산 잔기들의 치환, 삽입, 결실 및/또는 첨가를 통해서 변형될 수 있다. 자연적으로 나타난 펩티드와 더불어, HLA 항원에 결합함으로써 나타나는 펩티드 서열의 규칙성은 이미 알려져 있으며(J Immunol 1994, 152: 3913; Immunogenetics 1995, 41: 178; J Immunol 1994, 155: 4307), 이러한 규칙성에 기반한 변형은 상기 발명의 면역원성 펩티드에 도입될 수 있다. 예를 들면, HLA-A0201 결합을 증가시키기 위하여, N 말단의 두 번째 아미노산이 류신(leucine) 또는 메티오닌(methionine), 및/또는 C 말단의 아미노산이 발린(valine) 또는 류신(leucine)으로 치환하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 서열번호의 아미노산 서열의 N 말단으로부터 두 번째 아미노산이 류신(leucine) 또는 메티오닌(methionine)으로 치환, 및/또는 서열번호의 아미노산 서열에서 C 말단이 발린(valine) 또는 류신(leucine)으로 치환된, 서열번호: 1 내지 14의 아미노산 서열을 갖는 펩티드는 본 발명에 의해서 포함된다. 치환은 마지막 아미노산에서 뿐만 아니라, 펩티드의 잠재적 TCR 인지 위치에도 도입될 수 있다. 다수의 연구에서 예를 들어 CAP1, p53_(264-272), Her-2/neu_(369-377) 또는 gp100_(209-217)의 펩티드에서의 아미노산 치환은 본래와 동등하거나 또는 우수하다는 것을 보였다(Zaremba et al. Cancer Res. 57, 4570-4577, 1997, T. K. Hoffmann et al. J Immunol. (2002) Feb 1;168(3):1338-47., S. O. Dionne et al. Cancer Immunol immunother. (2003) 52: 199-206 및 S. O. Dionne et al. Cancer Immunology, Immunotherapy (2004) 53, 307-314).

또한, 본 발명은 상기 펩티드의 N 및/또는 C 말단에 하나 내지 두 개의 아미노산의 첨가를 고려한다. 또한 이러한 높은 HLA 항원 결합 친화성을 가지면서 CTL 유도성을 보유하는 변형된 펩티드는 본 발명에 포함된다. 그러나, 상기 펩티드 서열이 상이한 기능을 갖는 내인성 또는 외인성의 아미노산 서열의 일부와 동일할 경우, 특이적 물질에 대한 자가면역 질환 및/또는 알러지 증상과 같은 부작용이 유도될 수 있다. 따라서, 상기 펩티드의 서열과 일치하는 다른 단백질의 아미노산 서열과 일치하는 경우를 방지하기 위하여, 우선 이용가능한 데이타베이스를 이용하여 상동성 검색을 수행하는 것이 바람직하다. 목적 펩티드와 비교하여 1개 또는 2개 아미노산의 차이가 있는 펩티드조차 존재하지 않는다는 상동성 검색 결과가 확실해진다면, 상기 목적 펩티드는 이의 HLA 항원과의 결합 친화성, 및/또는 상기와 같은 부작용의 위험이 없는 CTL 유도성을 증가시키기 위하여 변형될 수 있다.

비록 상기 기재된 바와 같이 HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성을 갖는 펩티드는 매우 효과적일 것으로 예상되지만, 지표로서 높은 결합 친화성의 존재에 따라 선택된 상기 후보 펩티드들은 CTL 유도성의 존재에 대해 더욱 조사된다. 여기에서, 구문 "CTL 유도성"은 항원 제시 세포에 제시될 때, 세포독성 T 림프구(CTLs)를 유도하는 펩티드의 능력을 의미한다. 나아가, "CTL 유도성"은 상기 펩타이드의 CTL 활성 및/또는 CTL 증식 유도, 표적 세포의 CTL 용해 증진, 및 CTL IFN-감마 생성을 증가시키는 능력을 포함한다.

CTL 유도성의 확인은 인간 MHC 항원(예를 들면, B-림프구, 대식세포, 및 수지상 세포(DCs))을 운반하는 항원 제시 세포, 또는 더 구체적으로는 인간 말초 혈액 단핵 백혈구로부터 유래된 DCs를 유도하고, 상기 펩티드로 자극한 후, CD8-양성 세포와 혼합한 다음, 표적 세포에 대하여 CTL에 의해서 생성되고 방출된 IFN-감마를 측정하는 것에 의해서 수행된다. 반응 체계로서, 인간 HLA 항원을 발현하도록 제작된 형질전환 동물(예를 들어, BenMohamed L, Krishnan R, Longmate J, Auge C, Low L, Primus J, Diamond DJ, Hum Immunol 2000 Aug, 61(8): 764-79, Related Articles, Books, Linkout Induction of CTL response by a minimal epitope vaccine in HLA A*0201/DR1 transgenic mice: dependence on HLA class restricted T(H) response에 기재됨)이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 세포는 ⁵¹Cr 등으로 방사선 표지될 수 있으며, 세포독성 활성은 상기 표적세포로부터 방출되는 방사능으로부터 산출될 수 있다. 대안적으로, CTL 유도성은 고정화된 펩티드를 운반하는 항원 제시 세포(APCs)의 존재하에 CTL에 의해서 생성되고 방출되는 IFN-감마(IFN-gamma)를 측정하고, 항-IFN-감마 단일클론 항체를 이용하여 상기 배지 내의 억제 구간을 가시화함으로써 측정할 수 있다.

상기 기재한 바와 같이 상기 펩티드의 CTL 유도성 실험 결과, HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성을 갖는 펩티드들이 반드시 높은 CTL 유도성을 갖지 않는다는 것이 밝혀졌다. 그러나, 상기 확인되고 검사된 펩티드 가운데, 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 펩티드로부터 선택된 노나펩티드 또는 데카펩티드는, 특히 HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성뿐 아니라, 높은 CTL 유도성을 보인다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 이러한 펩티드들은 본 발명의 바람직한 실시예로서 시험된다.

또한, 상기 기재한 변형과 더불어, 본 발명의 펩티드는 결과적으로 연결된 펩티드가 본래 펩티드의 CTL 유도성을 유지하는 한, 다른 물질들과 연결될 수 있다. 적합한 물질들은 그 예로 펩티드, 지질, 당 및 당 사슬, 아세틸기(acetyl group), 천연 및 합성 폴리머 등을 포함하지만, 이에 한정하지 않는다. 상기 펩티드는 본래 펩티드의 생물학적 활성을 파괴시키지 않는 한, 글리코실화(glycosylation), 측쇄 산화, 또는 인산화(phosphorylation), 등과 같은 변형을 포함할 수 있다. 이러한 종류의 변형은 추가적인 기능을 부여하기 위하여(예를 들면, 표적화 기능, 및 전달 기능), 또는 상기 폴리펩티드를 안정화시키기 위하여 수행될 수 있다.

예를 들면, 폴리펩티드의 세포 내(in vivo) 안정성을 증가시키기 위하여, 당업계에는 D-아미노산, 아미노산 미메틱스(mimetics) 또는 비자연적인 아미노산을 도입할 수 있다는 것이 알려져 있다; 또한 이러한 개념은 본 발명의 폴리펩티드에 적용될 수 있다. 폴리펩티드의 안정성은 다양한 방법으로 분석될 수 있다. 예를 들어, 펩티드가수분해효소 및 인간 혈장 및 혈청과 같은, 다양한 생물학적 배지가, 안정성을 시험하기 위하여 사용될 수 있다(예를 들면, Verhoef et al., Eur J Drug Metab Pharmacokin 1986, 11: 291-302 참조).

추가로, 본 발명의 상기 펩티드들은 스페이서(spacer) 또는 링커(linker)를 통해 다른 펩티드들과 연결될 수 있다. 다른 펩티드들의 예들은 다른 TAA로부터 유래된 펩티드로 유도된 CTL을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 대안적으로, 본 발명의 둘 또는 다수의 펩티드들은 스페이서(spacer) 또는 링커(linker)를 통해 연결될 수 있다. 스페이서 또는 링커를 통해 연결된 상기 펩티드들은 동일하거나 서로 다를 수 있다. 스페이서 또는 링커는 특별히 제한되지 않지만, 펩티드인 것이 바람직하고, 펩티다제(psptidase), 프로테아제(protease) 및 프로테아좀(proteasome)과 같은 효소에 의해 절단될 수 있는 하나 또는 다수의 절단 위치를 갖는 펩티드인 것이 더욱 바람직하다. 링커 또는 스페이서의 예로는 AAY(P. M. Daftarian et al., J Trans Med 2007, 5:26), AAA, NKRK(R. P. M. Sutmuller et al., J Immunol. 2000, 165: 7308-7315) 또는, 하나에서 다수의 리신(lysine) 잔기(S. Ota et al., Can Res. 62, 1471-1476, K. S. Kawamura et al., J Immunol. 2002, 168: 5709-5715)를 포함하나, 이에 한정하지 않는다. 본 발명의 펩티드는 스페이서 또는 링커를 통해 다른 펩티드에 연결된 이러한 펩티드를 포함한다.

본 발명의 펩티드는 MHC 분자와 조합된 복합체로서 인간 MHC 항원을 수반하는 세포(예로, 항원 제시 세포) 또는 엑소솜의 표면에 존재한 다음, CTLs을 유도할 수 있다. 상기 세포 및 엑소솜은 당업계에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있으며, 예를 들면, 상기 세포가 본 발명의 펩티드로 접촉하여 준비될 수 있거나, 상기 엑소솜이 본 발명의 펩티드로 접촉된 세포로부터 엑소솜을 포함한 분획의 수집에 의해 준비될 수 있다(예로, 일본 특허 출원 코효(Kohyo) 공개번호 Hei 11-510507 및 WO99/03499 참조). 본 발명의 펩티드들은 MHC 분자와 조합된 복합체로 세포 또는 엑소솜의 표면에 존재하는 이러한 펩티드들을 포함한다.

또한, 명세서에서, 본 발명의 펩티드는 "INHBB 펩티드(들)" 또는 "INHBB 폴리펩티드(들)"로 기재될 수 있다.

Ⅲ. INHBB 펩티드의 제조

본 발명의 펩티드는 공지된 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 펩티드는 재조합 DNA 기술 또는 화학적 합성을 사용하여, 합성적으로 제조될 수 있다. 본 발명의 펩티드들은 각각 합성되거나, 둘 또는 이상의 펩티드로 구성되는 긴 폴리펩티드로서 합성될 수 있다. 다음으로, 상기 펩티드는 자연적으로 형성되는 숙주 세포 단백질 및, 이의 단편, 또는 다른 화학적 물질이 실질적으로 제거되도록 분리, 즉 정제 또는 분리될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 선별된 아미노산 서열을 기초로 한 화학 합성을 통해 얻어질 수 있다. 합성에 적용될 수 있는 종래 펩티드 합성 방법의 예들은 하기를 포함하나, 이에 한정하지 않는다:

(i) 펩티드 합성(Peptide Synthesis), Interscience, New York, 1966;

(ii) 단백질(The Proteins), Vol. 2, Academic Press, New York, 1976;

(iii) 펩티드 합성(Peptide Synthesis)(일본어), Maruzen Co., 1975;

(iv) 펩티드 합성의 기본 및 실험(일본어), Maruzen Co., 1985;

(v) 제약 개발(두 번째 권)(일본어), Vol. 14(펩티드 합성), Hirokawa, 1991;

(vi) WO99/67288; 및

(vii) Barany G. & Merrifield R.B., Peptides Vol. 2, "고체상 펩티드 합성(Solid Phase peptide synthesis)", Academic Press, New York, 1980, 100-118.

대안적으로, 본 발명의 펩티드는 펩티드를 생산하기 위한 모든 공지된 유전 공학 기술을 적용하여 획득될 수 있다(예를 들면, Morrison J, J Bacteriology 1977, 132: 349-51; Clark-Curtiss & Curtiss, Methods in Enzymology(eds. Wu et al.) 1983, 101: 347-62). 예를 들면, 우선, 발현할 수 있는 형태로 목적 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 벡터(예를 들면, 프로모터 서열에 상응하는 조절 서열의 하위 단계)가 제조되고 적합한 숙주 세포에 형질전환된다. 그리고 상기 숙주 세포는 관심있는 펩티드를 생산하기 위하여 배양된다. 또한, 상기 펩티드는 시험관 내 번역 체계(in vitro translation system)를 채택하여 시험관 내에서 생성될 수 있다.

IV . 폴리뉴클레오티드( Polynucleotides )

또한, 본 발명은 상기 언급된 본 발명의 임의의 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클리레오티드를 제공한다. 이들은 INHBB 유전자의 보존적으로 변형된 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드뿐만 아니라 자연적으로 발생되는 INHBB 유전자(GenBank 등록번호 NM_002193(서열번호: 15))로부터 유래되는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 이하, 구문 "보존적으로 변형된 뉴클레오티드 서열"은 동일하거나 필수적으로 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 서열을 의미한다. 유전자 코드의 퇴화도(degeneracy)로 인하여, 대다수의 기능적으로 동일한 핵산은 특정한 단백질을 암호화한다. 예를 들면, 코돈 GCA, GCC, GCG, 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 암호화한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해서 특정화되는 각 위치에서, 상기 코돈은 암호화되는 폴리펩티드를 변화시키지 않고 이에 상응되는 임의의 코돈으로 변화할 수 있다. 이러한 핵산 변이는 "침묵 변이(silent variation)"이며, 이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류이다. 또한, 본 명세서에서 펩티드를 암호화하는 모든 핵산 서열은 상기 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 기재한다. 일반적인 기술의 하나는 핵산 내의 각 코돈(예외 일반적으로 메티오닌(methionine)을 위한 유일한 코돈인 AUG, 및 트립토판(tryptophan)을 위한 유일한 코돈인, TGG)은 기능적으로 동일한 분자를 생산하기 위하여 변형되는 것을 인식할 수 있다. 따라서, 펩티드를 암호화하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각의 공개된 서열에 암시적으로 기재된다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 DNA, RNA, 및 이의 변이체로 구성될 수 있다. DNA는 A, T, C, 및 G와 같은 염기로 적절하게 구성되며, RNA에서는 T가 U로 치환된다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 아미노산 서열 사이에 삽입하거나 또는 삽입하지 않은 채로, 본 발명의 다양한 펩티드를 암호화할 수 있다. 예를 들면, 삽입하는 아미노산 서열은 폴리뉴클레오티드 또는 번역된 펩티드의 절단 위치(예, 효소 인식 서열)를 제공할 수 있다. 더욱이, 상기 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 펩티드를 암호화하는 코딩 서열에 대하여 임의의 추가적인 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 폴리뉴클레오티드는 상기 펩티드의 발현을 위하여 필요한 조절 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 마커 유전자 등이 있는 발현 벡터(플라스미드)일 수 있다. 일반적으로, 이러한 재조합 폴리뉴클레오티드는 예를 들면, 폴리머라아제(polymerase) 및 엔도뉴클레아제(endonuclease)를 이용한 종래의 재조합 기술을 통해 폴리뉴클레오티드의 조작에 의해서 제조될 수 있다.

재조합 및 화학적 합성 기술 모두는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 생산하는데 이용될 수 있다. 예를 들면, 폴리뉴클레오티드는 컴피턴트(competent) 세포로 형질감염되었을 때 발현될 수 있는, 적합한 벡터 내로 삽입함으로써 생산될 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오티드는 PCR 기술을 이용하여 증폭되거나 적합한 숙주에서 발현될 수 있다(예를 들면, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989 참조). 대안적으로, 폴리뉴클레오티드는 Beaucage SL & Iyer RP, Tetrahedron 1992, 48: 2223-311; Matthes et al., EMBO J 1984, 3: 801-5에 기재된 바와 같이, 고체상(solid phase) 기술을 이용하여 합성될 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 상기 벡터를 함유하는 숙주 세포 또한 본 발명에 포함된다.

V. 엑소솜( Exosome )

본 발명은 본 발명의 펩티드와 HLA 항원 사이에 형성된 복합체를 그 표면에 제시하는, 엑소솜으로 부르는 세포소낭(intracellular vesicles)을 추가로 제공한다. 엑소솜은 예를 들어, 일본 특허 출원 코효(Kohyo) 공개번호 Hei 11-510507 및 WO99/03499에 기재된 방법을 이용하여 제조될 수 있고, 치료 및/또는 예방을 위한 개체인 환자로부터 획득된 APCs를 이용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 엑소솜은 본 발명의 펩티드와 유사한 모양으로, 백신으로써 접종될 수 있다.

상기 복합체를 포함하는 HLA 항원의 타입(type)은 치료 및/또는 예방이 필요한 개체와 매치(match)되어야만 한다. 예를 들면, 일본 및 백인 인구에서는, HLA-A02가 일반적이다. 따라서, A02 타입의 이용은 이러한 인구들에서 효과적인 결과를 얻는데 유리하고, A0201과 같은 아형(subtype) 또한 이용될 수 있다. 일반적으로, 임상에서, 치료가 필요한 환자의 HLA 항원의 타입이 사전에 조사되고, 특정 항원에 대해 높은 수준의 결합 친화력을 갖거나, 항원 제시에 의해 CTL 유도성을 갖는 펩티드를 적절히 선택할 수 있다. 게다가, 높은 결합 친화성 및 CTL 유도성 모두를 갖는 펩티드를 얻기 위하여, 자연적으로 유발된 INHBB 부분 펩티드의 아미노산 서열을 기본으로 1, 2, 또는 다수 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 첨가가 이루어질 수 있다.

본 발명의 엑소솜을 위해 HLA 항원으로 A02 타입을 이용할 때는, 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택된 서열을 갖는 펩티드들이 유용하다.

VI . 항원 제시 세포( Antigen - presenting cells , APCs )

또한, 본 발명은 HLA 항원과 본 발명의 펩티드 사이에 형성된 복합체를 그 표면에 제시하고 있는 항원 제시 세포(antigen-presenting cell, APCs)를 제공한다. 본 발명의 펩티드와 접촉 또는 발현가능한 형태의 본 발명의 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드를 도입함으로써 획득되는 APCs는 치료 및/또는 예방의 대상이 되는 환자로부터 유래될 수 있으며, 그 자체로 백신으로서 투여되거나 또는 본 발명의 펩티드, 엑소솜, 또는 세포독성 T 세포를 포함하는 다른 약물과의 조합으로서 투여될 수 있다. 상기 APC는 특정 종류의 세포에 한정되지 않으나, 림프구에 의해서 인식되기 위하여 그들의 세포 표면에 단백질 항원을 제시하는 것으로 알려져 있는, 수지상 세포(DCs), 랑게르한스 세포(Langerhans cell), 대식세포, B 세포, 및 활성화된 T 세포를 포함한다. DC는 APCs 중에서 강력한 CTL 유도 활성을 갖는 대표적인 APC이기 때문에, DCs는 본 발명의 APCs로서 사용할 수 있다.

예를 들면, APC는 말초혈액 단핵구 백혈구로부터 유래된 DCs에 의해서 유도되고, 그런 다음 시험관 내, 생체 외(ex vivo), 또는 생체 내(in vivo)에서 본 발명의 펩티드와 접촉(자극)하여 수득될 수 있다. 본 발명의 펩티드가 상기 개체에 투여될 경우, 본 발명의 펩티드를 제시하는 APCs는 개체의 체내에서 유도된다. 구문 "APC 유도"는 HLA 항원과 본 발명의 펩티드 사이에 형성된 복합체를 세포 표면에 제시하기 위해 본 발명의 펩티드, 또는 본 발명의 상기 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드를 세포와 접촉(자극)하는 것을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩티드를 상기 APCs에 도입하여, 상기 APCs가 상기 펩티드를 제시할 수 있게 한 후, 상기 APCs는 백신으로서 개체에 투여될 수 있다. 예를 들면, 생체 외(ex vivo) 투여는 하기의 단계를 포함한다:

a: 첫 번째 개체로부터 APCs를 수집하는 단계;

b: 단계 a의 APCs와 펩티드를 접촉시키는 단계; 및

c: 펩티드가 담지된 APCs를 두 번째 개체에 투여하는 단계.

상기 첫 번째 개체 및 두 번째 개체는 동일한 개체일 수 있으며, 또는 다른 개체일 수도 있다. 대안적으로, 본 발명에 따르면, 항원 제시 세포를 유도하기 위한 약학적 조성물의 제조를 위한 본 발명의 펩티드의 용도가 제공된다. 또한, 본 발명은 항원 제시 세포를 유도하는 약학적 조성물을 제조하기 위해 본 발명의 펩티드와 약학적으로 허용가능한 수용체를 함께 혼합하거나 제형화하는 단계를 포함한, 방법을 제공한다. 나아가, 또한 본 발명은 항원 제시 세포를 유도하기 위한 본 발명의 펩티드를 제공한다. 상기 단계 (b)에서 획득한 APCs는 백신으로서 상기 개체에 투여될 수 있다.

본 발명의 하나의 측면에 따르면, 상기 본 발명의 APCs는 높은 수준의 CTL 유도성을 갖는다. "높은 수준의 CTL 유도성" 용어에 있어서, 상기 높은 수준이란 펩티드와 접촉하지 않거나 CTL을 유도할 수 없는 펩티드와 접촉한 APC에 의한 CTL 유도성 수준에 대한 상대적인 것이다. 이러한 높은 수준의 CTL 유도성을 갖는 APCs는 시험관 내(in vitro)에서 본 발명의 APCs 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 유전자를 전달하는 단계를 포함하는 방법에 의해서 제조될 수 있다. 상기 도입된 유전자는 DNAs 또는 RNAs 형태일 수 있다. 도입을 위한 방법의 예는, 리포펙타민(lipofection), 전기천공법(electroporation), 및 인산 칼슘(calcium phosphate) 방법과 같이, 당업계에서 일반적으로 수행되는 다양한 방법을 특정한 제한없이 이용될 수 있다. 보다 구체적으로, 이는 Cancer Res 1996, 56: 5672-7; J Immunol 1998, 161: 5607-13; J Exp Med 1996, 184: 465-72; Published Japanese Translation of International Publication No. 2000-509281에 기재된 바에 따라 수행될 수 있다. 상기 유전자를 APCs에 전달함으로써, 상기 유전자는 상기 세포 내에서 전사, 번역 등을 거치며, 그리고 나서 수득된 단백질은 MHC 클래스 Ⅰ 또는 클래스 Ⅱ에 의해 처리되고, 펩티드를 제시하기 위하여 제시 기작(presentation pathway)을 통해서 진행된다.

VII . 세포독성 T 세포( Cytotoxic T cell )

본 발명의 임의의 펩티드에 대해서 유도되는 세포독성 T 세포는 생체 내(in vivo)에서 암 세포를 표적으로 하는 면역 반응을 강화하며 따라서 펩티드 그 자체와 유사한 유형으로, 백신으로서 사용될 수 있다. 따라서, 또한, 본 발명은 본 발명의 임의의 펩티드에 의해 특이적으로 유도 또는 활성화되는 분리된 세포독성 T 세포를 제공한다.

이러한 세포독성 T 세포는 (1) 개체에 본 발명의 펩티드를 투여하고, 개체로부터 유래된 세포독성 T 세포를 수집하거나 또는 (2) 개체 유래된 APCs 및 CD8-양성 세포, 또는 말초혈액 단핵구 백혈구를 시험관 내(in vitro)에서 본 발명의 펩티드와 접촉(자극)하고, 세포독성 T 세포를 분리함으로써 수득될 수 있다.

본 발명의 펩티드를 제시하는 APCs로부터 자극됨으로써 유도되는, 상기 세포독성 T 세포는, 치료 및/또는 예방의 대상이 되는 환자로부터 유래될 수 있으며, 그 자체로 투여되거나, 또는 효과를 조절하기 위한 목적으로 본 발명의 펩티드 또는 엑소솜을 포함하는 다른 약물과 조합으로 투여될 수 있다. 상기 수득된 세포독성 T 세포는 본 발명의 펩티드를 제시하는 표적세포, 예를 들면, 유도에 사용된 동일한 펩티드에 대해 특이적으로 작용한다. 다른 말로, 상기 세포독성 T 세포는 표적 세포의 표면에서 HLA 항원과 본 발명의 펩티드 사이에 형성된 복합체를 T 세포 수용체와 함께 인지할 수 있고, 그 다음 표적 세포의 사멸을 유도하기 위해 표적 세포를 공격한다. 상기 표적 세포는 내인성으로 INHBB를 발현하는 세포이거나, 또는 상기 INHBB 유전자가 형질감염된 세포일 수 있다; 그리고 상기 펩티드에 의해서 자극되기 때문에 본 발명의 펩티드를 세포 표면에 제시하는 세포는 활성화된 CTL 공격의 표적으로서도 사용할 수 있다.

VIII . T 세포 수용체 (T cell receptor , TCR )

또한, 본 발명은 T 세포 수용체(TCR)의 서브유닛(subunit)을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 포함하는 조성물, 및 이를 이용한 방법을 제공한다. 상기 TCR 서브유닛은 INHBB를 제시하는 종양 세포에 대하여 T 세포의 특이성을 줄 수 있는 TCRs을 형성하는 능력을 가진다. 당업계에 공지된 방법을 사용하여, 본 발명의 하나 또는 다수의 펩티드들로 유도된 CTL에서 발현된 TCR의 알파(alpha-) 및 베타(beta-) 사슬의 핵산 서열이 동정될 수 있다(WO2007/032255 및 Morgan et al., J Immunol, 171, 3288(2003)). TCRs의 유도체는 높은 결합활성을 갖고 표적 세포에서 나타나는 INHBB 펩티드와 결합할 수 있으며, 선택적으로 생체 내(in vivo) 및 시험관 내(in vitro)에서 INHBB 펩티드를 제시하는 표적 세포를 효과적으로 사멸시키는 것을 매개할 수 있다.

상기 TCR 서브유닛을 암호화하는 핵산 서열은 예를 들면 레트로바이러스 벡터(retroviral vector)와 같은 적합한 벡터 내로 도입될 수 있다. 이러한 벡터들은 당업계에 잘 알려졌다. 상기 핵산 또는 이들을 포함하는 벡터는 T 세포, 예를 들면, 환자로부터 유래한 T 세포 내로 유용하게 전이될 수 있다. 유리하게, 본 발명은 우수한 암 세포 사멸 특성을 갖는 변형된 T 세포를 신속하고 용이하게 생성하게 할 수 있도록 환자 자신의 T 세포(또는 다른 포유류의 T 세포)를 신속하게 변형시키는 규격화된 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 HLA-A02의 문맥에서, 예를 들면, 서열번호: 1 내지 14의 INHBB 펩티드와 결합하는 TCR 서브유닛 폴리펩티드를 암호화하는 핵산으로 형질도입함으로써 제조되는 CTLs을 제공한다. 상기 형질도입된 CTLs은 생체 내의 암 세포로 귀소할 수 있으며, 공지된 시험관 내 배양 방법에 의해 증폭될 수 있다(예를 들면, Kawakami et al., J Immunol., 142, 3452-3461(1989)). 본 발명의 상기 T 세포는 치료 또는 보호를 필요로 하는 환자의 암을 치료 또는 방지하는데 유용한 면역원성 조성물을 제조하는데 사용될 수 있다(WO2006/031221).

IX . 약학적 제제 또는 조성물

방지 및 예방은 질환으로부터 사망 또는 질병률의 부담을 감소시킬 수 있는 임의의 활동을 포함한다. 방지 및 예방은 "첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 방지 단계"에서 발생할 수 있다. 첫 번째 방지 및 예방은 질병의 발생을 피할 수 있는 반면, 두 번째 및 세 번째 단계의 방지 및 예방은 기능 복구 및 질환 관련된 합병증을 감소시킴으로써 이미 확립된 질환의 부정적인 효과를 감소시킬 뿐만 아니라, 질병 및 위급한 증상의 발달의 방지 및 예방에 목표를 둔다. 대안적으로, 방지 및 예방은, 예를 들면, 종양의 증식 및 전이를 감소시키는, 신생혈관억제를 감소시키는, 특정 질환의 심화를 경감시키는 것을 목적으로 하는 다양한 종류의 예방적 치료법을 포함한다.

암 또는 종양의 치료 및/또는 예방, 및/또는 이의 수술후 재발의 방지는 암 세포의 수술적 제거, 암성 세포 성장의 억제, 종양의 퇴화 또는 퇴행, 암 발생의 차도 및 억제의 유도, 종양 감소, 및 전이의 감소 또는 억제와 같은 하기의 단계의 임의의 것을 포함한다. 효과적으로 암을 치료 및/또는 예방하는 것은 사망률을 감소시키고, 암을 가진 개인의 예후를 개선시키며, 혈액 내 종양 마커의 수준을 감소시키며, 암에 동반되는 지각할 수 있는 증상들을 감소시킨다. 예를 들면, 증상의 감소 또는 개선은 효과적으로 치료를 구성하며 및/또는 상기 예방은 10%, 20%, 30% 또는 그 이상의 감소, 또는 안정적인 질환을 포함한다.

INHBB 발현이 정상 조직에 비해서 다양한 암에서 상향 조절되므로, 본 발명의 펩티드 또는 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 암 또는 종양의 치료 및/또는 예방, 및/또는 수술 후 재발을 방지하기 위해서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방, 및/또는 이의 수술 후 재발 방지용 약학적 제제 또는 조성물을 제공하며, 이는 하나 또는 다수의 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 활성 성분으로 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩티드는 상기 엑소솜 또는 약학적 제제 또는 조성물로서 사용되는 APCs와 같은 세포의 임의의 표면에서 발현될 수 있다. 추가로, 상기 언급한 본 발명의 임의의 펩티드를 표적으로 하는 세포독성 T 세포는 또한 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물의 활성 성분으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 문맥에서, 구문 "펩티드의 표적화"는 표적 세포의 표면에서 HLA 항원과 펩티드 사이에 형성된 복합체를 T 세포 수용체가 인지(즉, 결합)한 후, 상기 표적 세포의 사멸을 유도하기 위해 표적 세포를 공격하는 것을 의미한다.

또한, 또 다른 실시예에서, 본 발명은 암의 치료를 위한 약학적 조성물 또는 약제를 제조하는데 있어서, 하기 중 선택되는 활성 성분의 용도를 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(b) 발현할 수 있는 형태로 본 명세서에 기재된 펩티드를 암호화하는 핵산,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포들.

대안적으로, 본 발명은 암을 치료하는데 사용하기 위한 하기 중 선택되는 활성 성분을 추가로 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포들.

대안적으로, 본 발명은 활성 성분으로서 하기 중 선택되는 활성 성분과 약학적 또는 생리학적으로 허용가능한 담체를 제형화하는 단계를 포함하는, 암을 치료하기 위한 약학적 조성물 또는 제제를 제조하는 방법 또는 과정을 추가로 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포.

또한, 또 다른 실시예에서, 본 발명은 하기 중 선택되는 활성 성분과 약학적 또는 생리학적으로 허용가능한 담체를 상기 활성 성분과 혼합하는 단계를 포함하는, 암을 치료하기 위한 약학적 조성물 또는 약제를 제조하기 위한 방법 또는 과정을 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포.

대안적으로, 상기 본 발명의 약학적 조성물 또는 약제는 암의 예방 및 이의 수술 후 재발을 방지하기 위한 방법 중 어느 하나 또는 둘 모두를 위해서 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 백신으로서의 용도를 확인하였다. 본 발명의 문맥에 있어서, 상기 구문 "백신"("면역원성 조성물"도 의미함)은 동물에 주사되어 항종양 면역력을 유도하는 기능을 갖는 물질을 일컫는다.

상기 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 암 또는 종양의 치료 및/또는 방지에 사용될 수 있으며, 및/또는 개체 또는 인간을 포함한 환자 및 특히 산업적으로 중요한 동물 또는 가축 동물인, 마우스, 쥐, 기니아 피그(guinea-pig), 토끼, 고양이, 개, 양, 염소, 돼지, 소, 말, 원숭이, 비비원숭이(baboon), 및 침팬지에 한정하지 않지만, 이를 포함하는 임의의 다른 포유류 동물에서 이의 수술 후 재발을 방지하는데 사용될 수 있다.

본 발명에 따르면, 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 각각, 강력하고 특이적인 면역 반응을 유도할 수 있는 HLA-A02 제한적 에피토프 펩티드 또는 후보자라는 것을 발견하였다. 따라서, 서열번호: 1 내지 14 중에서 선택되는 아미노산 서열인 이러한 임의의 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 특히 HLA 항원이 HLA-A02인 개체에 투여되는 것이 적합하다. 동일한 것이 이러한 임의의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물에 적용된다.

본 발명의 약학적 제제 또는 조성물에 의해서 치료될 수 있는 암 또는 종양은 INHBB가 관련된, 예를 들면, 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양을 포함하는 모든 종류의 암 또는 종양을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 추가로 상기 언급한 활성 성분, 암성 세포에 대하여 CTL을 유도할 수 있는 능력이 가진 다른 펩티드, 상기 다른 펩티드를 암호화하는 다른 폴리뉴클레오티드, 상기 다른 펩티드를 제시하는 다른 세포 등을 포함할 수 있다. 본 명세서에서, 암성 세포에 대하여 CTL을 유도할 수 있는 능력을 갖는 상기 다른 펩티드는 암 특이적 항원(예를 들면, 동정된 TAAs)에 의해서 예시화되나, 이에 한정되지 않는다.

만약 필요하다면, 본 발명의 상기 약학적 제제 또는 조성물은 예를 들면, 본 발명의 임의의 펩티드와 같이, 물질이 활성 성분의 항종양 효과를 저해하지 않는 한, 선택적으로 활성 성분으로서 다른 치료학적 물질을 포함할 수 있다. 예를 들면, 제형은 항염증성 약제 또는 조성물, 진통제, 화학요법제 등을 포함할 수 있다. 약제 자체 내의 다른 치료학적 물질을 포함하는 것에 추가로, 본 발명의 상기 약제는 또한 하나 또는 다수의 다른 약학적 제제 또는 조성물과 연속적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 약제 및 약학적 제제 또는 조성물의 양은 예를 들면, 어떤 종류의 약학적 제제(들) 또는 조성물(들)이 사용되었는지, 치료되어야 할 질환, 및 투여 일정 및 경로 등에 따른다.

특히, 본 명세서에 언급된 성분에 추가로, 본 발명의 상기 약학적 제제 또는 조성물은 논의가 되는 형태의 제형을 갖는 당업계의 종래 다른 제제 또는 조성물을 포함할 수 있다고 이해된다.

본 발명의 하나의 실시예에서, 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 제조의 물품 및 예를 들면, 암과 같은 치료될 질환의 병리학적인 조건을 치료하는데 유용한 물질을 포함하는 키트에 포함될 수 있다. 상기 제조의 물품은 라벨(label)을 갖는 본 발명의 임의의 약학적 제제 또는 조성물의 용기(container)를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 병, 바이얼(vial), 및 테스트 튜브를 포함한다. 상기 용기는 유리 또는 플리스틱과 같은, 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 상기 용기 위의 라벨은 상기 약제 또는 조성물이 하나 또는 다수 조건의 질병의 치료 또는 예방을 위해서 사용된다는 것을 나타내야 한다. 또한, 상기 라벨은 투여 등에 대한 지시를 나타낼 수 있다.

상기 기재된 용기에 추가적으로, 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물들을 포함하는 키트는 약학적으로 허용가능한 희석제가 들어 있는 두 번째 용기를 선택적으로 추가하여 포함할 수 있다. 이는 다른 버퍼, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 이용을 위한 지시가 있는 사용 설명서를 포함하는 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

상기 약학적 조성물은, 가능하다면, 활성 성분을 포함하는 하나 또는 다수의 유닛 복용량 형태를 포함하는 팩(pack) 또는 디스펜서(dispenser) 장치에 제시될 수 있다. 상기 팩은, 예를 들면, 금속 또는 브리스터 팩(blister pack)과 같은, 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서 장치는 투여를 위한 지시서와 수반될 수 있다.

(1) 활성 성분으로서 상기 펩티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물

본 발명의 상기 펩티드는 약학적 제제 또는 조성물로서, 만약 필요하다면, 종래의 제형 방법에 의해서 제형화된 것으로 직접적으로 투여될 수 있다. 후자의 경우, 본 발명의 펩티드에 추가로, 약물에 일반적으로 사용되는 담체, 첨가제 등을 특정한 제한 없이 포함할 수 있다. 이러한 담체의 예는 멸균수, 생리식염수, 인산 완충액, 배양액 등이 있다. 더욱이, 상기 약학적 제제 또는 조성물은 필요에 따라, 안정화제(stabilizer), 현탁액(suspension), 보존제(preservative), 계면활성제(surfactant) 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 제제 또는 조성물은 항암 목적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 생체 내(in vivo)에서 CTL을 유도하기 위하여, 본 발명의 펩티드 둘 또는 그 이상으로 구성된 조합으로서 제조될 수 있다. 상기 펩티드 조합은 칵테일(cocktail)의 형태를 취할 수 있으며 또는 표준 기술을 이용하여 서로 결합될 수 있다. 예를 들면, 상기 펩티드는 화학적으로 연결되거나 또는 단일 융합 폴리펩티드 서열로서 발현될 수 있다. 상기 조합 내의 펩티드는 동일하거나 다를 수 있다. 본 발명의 펩티드를 투여함으로써, 상기 펩티드는 APCs의 HLA 항원에 의하여 높은 농도로 제시된 뒤, 상기 나타난 펩티드와 HLA 항원 사이에 형성된 복합체에 대하여 특이적으로 반응하는 CTL이 유도된다. 대안적으로, 본 발명의 펩티드로 개체로부터 유래된 APCs(예를 들면, DCs)의 자극에 의해 수득될 수 있는, 본 발명의 임의의 펩티드를 그 세포 표면에 제시하는 APCs는 개체에 투여될 수 있고, 그 결과, CTLs이 개체내에서 유도되고, 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양과 같은, 암 세포에 대한 공격성이 증가할 수 있다.

또한, 본 발명의 펩티드를 활성 성분으로 포함하는, 암 또는 종양의 치료 및/또는 방지를 위한 약학적 제제 또는 조성물은, 세포의 면역력을 효과적으로 확립시킨다고 알려진 보조제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 약학적 제제 또는 조성물은 다른 활성 성분과 함께 투여될 수 있고, 과립으로 제조되어 투여될 수 있다. 보조제는 면역학적 활성을 갖는 단백질과 함께(또는 연속적으로) 투여되었을 때 상기 단백질에 대한 면역 반응을 강화시키는 화합물을 일컫는다. 본 명세서에서 보조제는 하기의 문헌에 기재된 바를 포함한다(Clin Microbiol Rev 1994, 7: 277-89). 적합한 보조제의 예로는 인산 알루미늄(aluminum phosphate), 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide), 명반(alum), 콜레라 독소(cholera toxin), 살모넬라 독소(salmonella toxin) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

더욱이, 상기 펩티드가 미세한 마이크로미터 직경의 비드에 결합되어 있는 리포솜(liposome) 제형, 과립 제형, 및 지질이 상기 펩티드에 결합되어 있는 제형이 일반적으로 사용될 수 있다.

일부 실시예에서, 상기 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 CTL을 개시하는(prime) 성분을 추가로 포함할 수 있다. 지질은 생체 내에서 바이러스 항원에서 CTL을 개시할 수 있는 제제 또는 조성물로서 확인되었다. 예를 들면, 팔미트산(palmitic acid) 잔기는 엡실론(epsilon) -및 라이신 잔기의 알파-아미노 그룹에 붙을 수 있으며, 그 뒤 본 발명의 펩티드에 연결될 수 있다. 상기 리피드 펩티드는 그런 다음 리포솜에 결합되거나, 또는 보조제에 유화되어 미셀(micelle) 또는 입자(particle)로 직접적으로 투여될 수 있다. CTL 반응의 리피드 제조의 또 다른 예로서, 트리팔미토일-S-글리세릴시스테인리세릴-세린(tripalmitoyl-S-glycerylcysteinlyseryl-serine, P3CSS)과 같은 E. coli 지질단백질은 적절한 펩티드에 공유 결합되었을 때, CTL을 개시하는데 사용될 수 있다(예를 들면, Deres et al., Nature 1989, 342: 561-4 참조).

투여의 방법은 경구, 피내, 피하, 정맥 등, 및 표적 위치에 근접한 곳에 전신 투여 또는 국소 투여할 수 있다. 상기 투여는 단일 투여 또는 다수의 투여에 의해서 부스팅되어 수행될 수 있다. 본 발명의 펩티드의 복용량은 치료되는 질병, 환자의 나이, 체중, 투여 방법 등에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 보통 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎, 예를 들면, 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎이며, 며칠 내지 몇 달에 한 번씩 투여될 수 있다. 당업자는 적합한 복용량을 적절하게 선택할 수 있다.

(2) 유효 성분으로서 폴리뉴클레오티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물

또한, 상기 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 본 명세서에 기재된 발현할 수 있는 형태의 펩티드를 암호화하는 핵산을 포함할 수 있다. 여기서, 상기 구문 "발현할 수 있는 형태"는 상기 폴리뉴클레오티드가 세포에 도입되었을 때, 항종양 면역력을 유도하는 폴리뉴클레오티드로서 생체 내(in vivo)에서 발현할 수 있음을 의미한다. 예시된 실시예에서, 관심있는 폴리뉴클레오티드의 핵산 서열은 상기 폴리뉴클레오티드의 발현에 필요한 조절 요소(regulatory element)를 포함한다. 상기 폴리뉴클레오티드(들)는 표적 세포의 게놈 내에 안정적으로 삽입되기 위하여 구비될 수 있다(예를 들면, 상동성 재조합 카세트 벡터에 대한 기술을 위한 Thomas KR & Capecchi MR, Cell 1987, 51: 503-12 참조). 예를 들면, Wolff et al., Science 1990, 247: 1465-8; 미국 특허 제 5,580,859; 5,589,466; 5,804,566; 5,739,118; 5,736,524; 5,679,647; 및 WO 98/04720을 참조한다. DNA 기반한 전달 기술의 예로는 "네이키드 DNA(naked DNA)", 촉진된(부피바카인(bupivacaine), 폴리머(polymer), 펩티드-매개) 전달, 양이온성 지질 복합체, 및 입자-매게("유전자 총(gene gun)") 또는 압력-매개 전달(예를 들면, 미국 출원 제 5,922,687호 참조)을 포함한다.

또한, 본 발명의 펩티드는 바이러스 또는 박테리아 벡터에 의해서 발현될 수 있다. 발현 벡터의 예는 백시니아(vaccinia) 또는 계두(fowlpox)와 같은 강화된 바이러스 숙주를 포함한다. 이러한 접근은, 예를 들면, 상기 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 발현하는 벡터와 같은, 백시니아 바이러스의 이용을 수반한다. 숙주에 도입한 후, 상기 재조합 백시니아 바이러스는 상기 면역원성 펩티드를 발현하고, 이로 인하여 면역 반응이 유발된다. 면역화 프로토콜에 있어서 유용한 백시니아 벡터 및 방법은 예를 들면, 미국 특허 제 4,722,848호에 기재된다. 또 다른 벡터의 예로 BCG(Bacille Calmette Guerin)를 포함한다. BCG 벡터는 Stover et al., Nature 1991, 351: 456-60에 기재된다. 치료학적 투여 또는 면역화에 유용한 다양한 다른 벡터, 예를 들면, 아데노(adeno) 및 아데노 관련(adeno-associated) 바이러스 벡터, 레트로바이러스(retroviral) 벡터, 살모넬라 티피(Salmonella typhi) 벡터, 무독화시킨 탄저균 독소(detoxified anthrax toxin) 벡터 등이 명백할 것이다. 예를 들면, Shata et al., Mol Med Today 2000, 6: 66-71; Shedlock et al., J Leukoc Biol 2000, 68: 793-806; Hipp et al., In Vivo 2000, 14: 571-85를 참조한다.

폴리뉴클레오티드의 개체로의 전달은, 상기 개체가 폴리뉴클레오티드를 운반하는 벡터에 직접적으로 노출시키는 직접적, 또는 세포가 우선 시험관 내에서 관심있는 폴리뉴클레오티드를 이용하여 형질전환된 후, 상기 세포를 개체에게 이식하는 간접적으로 이루어질 수 있다. 이러한 두 가지 접근은 각각 생체 내(in vivo) 및 생체 외(ex vivo) 유전자 치료법으로서 알려져 있다.

유전자 치료 방법에 대한 일반적인 리뷰는, Goldspiel et al., Clinical Pharmacy 1993, 12: 488-505; Wu and Wu, Biotherapy 1991, 3: 87-95; Tolstoshev, Ann Rev Pharmacol Toxicol 1993, 33: 573-96; Mulligan, Science 1993, 260: 926-32; Morgan & Anderson, Ann Rev Biochem 1993, 62: 191-217; Trends in Biotechnology 1993, 11(5): 155-215를 참조한다. 본 발명에서 또한 사용될 수 있는 재조합 DNA 기술 분야의 일반적으로 알려진 방법은 eds. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, 1993; 및 Krieger, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY, 1990에 기재된다.

투여의 방법은 경구, 피내, 피하, 정맥 주사 등을 할 수 있으며, 표적 위치에 근접한 곳에 전신 투여 또는 국소 투여의 용도를 발견한다. 상기 투여는 단일 투여 또는 다수의 투여에 의해서 부스팅되어 수행될 수 있다. 적합한 수용체 내 폴리뉴클레오티드 또는 본 발명의 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 형질전환된 세포의 양은 치료되는 질병, 환자의 나이, 체중, 투여 방법 등에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 보통 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎이며, 예를 들면, 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎이며, 며칠 내지 몇 달에 한 번씩 투여될 수 있다. 당업자는 적합한 복용량을 적절하게 선택할 수 있다.

X. 펩티드, 엑소솜 , APCs 및 CTLs 을 사용한 방법

본 발명의 펩티드 및 이러한 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 APCs 및 CTLs을 유도하는데 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 엑소솜 및 APCs는 CTLs을 유도하는데 사용될 수 있다. 상기 펩티드, 폴리뉴클레오티드, 엑소솜 및 APCs는 화합물이 이들의 CTL 유도성을 억제하지 않는 한, 임의의 다른 화합물과 조합으로 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 언급한 임의의 약학적 제제 또는 조성물은 CTLs을 유도하는데 사용될 수 있으며, 이에 추가적으로, 상기 펩티드 및 폴리뉴클레오티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물은 또한 하기 기재된 APCs를 유도하는데 사용될 수 있다.

(1) 항원 제시 세포(APCs)를 유도하는 방법

본 발명은 본 발명의 펩티드 또는 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 이용하여 APCs를 유도하는 방법을 제공한다. 상기 APCs의 유도는 "VI. 항원 제시 세포" 부분에 기재된 바에 따라 수행될 수 있다. 또한, 본 발명은 높은 수준의 CTL 유도성을 갖는 APCs를 유도하는 방법을 제공하며, 상기 유도성은 또한 "VI. 항원 제시 세포"의 항목하에 언급되었다.

바람직하게는, APCs를 유도하는 방법은 하기로부터 선택되는 적어도 하나의 단계를 포함한다:

a: 본 발명의 펩티드와 APCs를 접촉하는 단계, 및

b: 발현할 수 있는 형태의 본 발명의 폴리펩티드를 APCs내로 도입하는 단계.

이러한 APCs를 유도하는 방법은 시험관 내(in vitro) 또는 생체 외(ex vivo)로 수행되는 것이 바람직하다. 시험관 내(in vitro) 또는 생체 외(ex vivo)에서 상기 방법을 수행할 때, 유도되는 APCs는 처리한 개체 또는 HLA 항원이 상기 개체와 같은 다른 개체로부터 수득될 수 있다.

(2) CTLs을 유도하는 방법

더욱이, 본 발명은 본 발명의 펩티드, 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 엑소솜 또는 상기 펩티드를 제시하는 APCs를 사용하여 CTLs을 유도하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 세포 표면에서 상기 펩티드 및 HLA 항원의 복합체를 인식하는 T 세포 수용체(TCR) 서브유닛을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 사용하여 CTLs을 유도하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, CTLs을 유도하는 방법은 하기로부터 선택되는 적어도 하나의 단계를 포함한다:

a: CD8-양성 T 세포를 HLA 항원과 본 발명의 펩티드의 복합체를 그 표면에 제시하는 항원 제시 세포 및/또는 엑소솜과 접촉하는 단계, 및

b. 본 발명의 펩티드와 HLA 항원의 복합체를 인식하는 TCR 서브유닛을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 CD8 양성 T 세포내로 도입하는 단계.

본 발명의 펩티드를 개체에 투여하였을 때, CTL은 개체의 체내에서 유도되며, 상기 종양 세포를 표적하는 면역 반응의 힘을 강화시킨다. 대안적으로, 상기 펩티드 및 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 생체 외(ex vivo) 치료 방법으로 사용될 수 있으며, 이는 개체 유래 APCs, 및 CD8-양성 세포, 또는 말초혈액 단핵구 백혈구를 시험관 내에서 본 발명의 펩티드를 이용하여 접촉(자극)하고, CTL을 유도한 후, 상기 활성화된 CTL 세포는 개체로 돌아온다. 예를 들면, 상기 방법은 하기의 단계를 포함할 수 있다:

a: 개체로부터 APCs를 수집하는 단계;

b: 단계 a의 APCs와, 상기 펩티드를 접촉시키는 단계;

c: 단계 b의 APCs와 CD⁸ ⁺T 세포를 혼합하고, CTLs을 유도하기 위하여 공동 배양하는 단계; 및

d: 단계 c의 공동 배양으로부터 CD⁸ ⁺ T 세포를 수집하는 단계.

대안적으로, 본 발명에 따르면, CTLs을 유도하는 약학적 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 펩티드의 용도가 제공된다. 추가로, 본 발명은 본 발명의 펩티드와 약학적으로 허용가능한 수용체를 함께 혼합하거나 제형화하는 단계를 포함한, CTLs을 유도하는 약학적 제제 또는 조성물을 제조하기 위한 방법 또는 과정을 제공한다. 더욱이, 본 발명은 또한 CTLs을 유도하기 위한 본 발명의 펩티드를 제공한다.

단계 d에 의해 수득된 세포독성 활성을 갖는 상기 CD⁸ ⁺ T 세포는 백신으로서 개체에 투여될 수 있다. 또한, 상기 단계 c에서 상기 CD⁸ ⁺ T 세포와 혼합된 APCs는 상기 "VI. 항원 제시 세포" 부분에 기재된 바와 같이, 본 발명의 펩티드를 암호화하는 유전자를 APCs 내로 전이시킴으로써 제조될 수 있으나; 이에 한정되지 않고, 본 발명의 펩티드를 효과적으로 제시하는 임의의 APC 또는 엑소솜은 본 발명의 방법에 사용될 수 있다.

하기 실시예들은 본 발명을 예시하고, 당업자가 이를 만들고 사용하는 것을 도와주기 위하여 제시된다. 이러한 실시예는 본 발명의 범위를 어느 방법으로든 한정하려는 의도가 아니다.

실시예

재료 및 방법

세포주

T2(HLA-A02), 인간 B-림포블라스토이드 세포주, 및 COS7은 ATCC에서 구입하였다.

INHBB 로부터 유래된 펩티드의 후보자 선택

HLA-A*0201 분자에 결합하는 INHBB로부터 유래된 9머(9-mer) 및 10-머(10-mer) 펩티드는 결합 예측 소프트웨어 "BIMAS"(www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind)를 사용하여 측정되었으며, 이 알고리즘은 Parker KC et al.(J Immunol 1994, 152(1): 163-75) 및 Kuzushima K et al.(Blood 2001, 98(6): 1872-81)에 기재되어 있다. 이러한 펩티드는 표준 고체상 합성 방법에 따라 Sigma(Sapporo, Japan) 또는 Biosynthesis Inc.(Lewisville, TX)에 의해서 합성되었으며, 역상 고속액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatographym, HPLC)에 의해서 정제되었다. 상기 펩티드의 순도(>90%) 및 동정은 각각 분석적인 HPLC 및 질량분석법 분석에 의하여 측정되었다. 펩티드는 20 mg/㎖ 디메틸폭시화물(dimethylsulfoxide, DMSO)에 녹인 뒤 -80℃에 보관하였다.

시험관 내( In vitro ) CTL 유도

단핵구 유래 수지상 세포(DCs)는 인간 백혈구 항원(HLA)에 제시된 펩티드에 대하여 세포독성 T 림프구(CTL) 반응을 유도하기 위하여, 항원 지시 세포(APCs)로서 사용되었다. DCs는 하기 기재된 바와 같이 시험관 내에서 생성되었다(Nakahara S et al., Cancer Res 2003 Jul 15, 63(14): 4112-8). 구체적으로, 정상 지원자(HLA-A*0201 양성)로부터 피콜-플라크(Ficoll-Plaque)(Pharmacia) 용액에 의해서 분리된 말초 혈액 단핵구 세포(PBMCs)는 단핵구 분획을 강화시키기 위하여, 플라스틱 조직 배양 디쉬(Becton Dickinson)에 부착에 의해서 분리하였다. 상기 단핵구가 강화된 집단은 2% 열-불활성화 자가조직 유래의 혈청(AS)을 포함하는 AIM-V 배지(Invitrogen)에서 과립구-대식세포 콜리니-자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)(R&D System) 1000 U/㎖ 및 인터루킨(interleukin, IL)-4(R&D System) 1000 U/㎖의 존재하에 배양되었다. 배양 7일 후, 상기 사이토카인 유도된 DCs는 37℃에서 3시간 동안 베타 2-마이크로불린(beta2-microglobulin) 3 mcg/㎖의 존재하에 AIM-V 배지에서 20 mcg/㎖의 각각의 합성된 펩티드를 사용하여 펄스되었다. 상기 생성된 세포는 이러한 세포의 표면에, CD80, CD83, CD86 및 HLA 클래스 Ⅱ와 같은 DC-관련된 분자를 발현한다고 나타났다(결과는 보이지 않음). 그리고 이러한 펩티드 펄스된 DCs는 미토마이신 C(Mitomycin C, MMC)(30분 동안 30 mcg/㎖)에 의해서 비활성화되었으며 CD8 양성 분리 키트(Dynal)를 이용한 양성 선택에 의해서 획득된, 자가 조직의 CD8+ T 세포와 1:20의 비율로 혼합되었다. 이러한 배양은 48-웰 플레이트(Corning)에 셋팅되었다; 각각의 웰에는 1.5 × 10⁴ 펩티드 펄스된 DCs, 3 × 10⁵ CD8+ T 세포 및 10 ng/㎖ IL-7(R&D System)이 있는 0.5 ㎖ AIM-V/2% AS 배지가 포함되었다. 3일이 지난 후, 이러한 배양은 최종 농도가 20 IU/㎖이 되도록 IL-2(CHIRON)을 첨가하였다. 7일 및 14일에, 상기 T 세포는 상기 자가의 펩티드 펄스된 DCs를 사용하여 추가적으로 자극되었다. 상기 DCs는 상기 기재된 방법에 의해서 매번 제조되었다. CTL은 21일째 펩티드 자극 3회 이후, 펩티드 펄스된 T2 세포에 대하여 실험하였다(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001 Jan 5, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001 Apr 20, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006 May, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8): 498-506).

CTL 증폭 과정

CTLs은 Riddell et al.에 의해서 기재된 방법과 유사한 방법을 사용하여, 배양액에서 증폭되었다(Walter EA et al., N Engl J Med 1995 Oct 19, 333(16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996 Feb, 2(2): 216-23). 전체 5 × 10⁴CTLs은 항-CD3 단일클론 항체(Pharmingen) 40 ng/㎖의 존재하에서, MMC에 의해서 비활성화된 2 종류의 인간 B-림포블라스토이드(lymphoblastoid) 세포주를 이용하여 AIM-V/5% AS 배지 25 ㎖에 현탁하였다. 상기 배양 시작 이후 첫째 날, IL-2 120 IU/㎖을 상기 배양액에 첨가하였다. 상기 배양액은 5, 8 및 11일에, IL-2 30 IU/㎖을 포함하는 신선한 AIM-V/5% AS 배지가 공급되었다(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001 Jan 5, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001 Apr 20, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006 May, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8): 498-506).

특이적 CTL 활성

특이적 CTL 활성을 검사하기 위하여, 인터페론(IFN)-감마 효소-결합 면역스팟(ELISPOT) 분석 및 IFN-감마 효소-결합 면역흡착검사(ELISA)를 수행하였다. 구체적으로, 펩티드 펄스된 A24LCL 또는 T2(1 × 10⁴/웰)는 자극(stimulator) 세포로서 제조되었다. 48 웰에서 배양된 세포는 반응(responder) 세포로서 사용되었다. IFN-감마 ELISPOT 분석 및 IFN-감마 ELISA 분석은 제조사의 과정에 따라 수행되었다.

결과

암에서 INHBB 발현 강화

INHBB 발현은 하기의 암에서 유효하게 증가하였다: 상응하는 정상 조직과 비교하여, 담관세포암종 21종 중 10종, 식도암 12종 중 12종, NSCLC 13종 중 10종, 신장 암종 24종 중 22종, SCLC 암 14종 중 8종 및 연부 조직 종양 49종 중 45종.

HLA -A0201에 의해 제한된 INHBB 로부터 예측되는 펩티드를 이용한 T 세포 자극 및 INHBB 유래 펩티드로 자극된 CRL 라인 확립

INHBB로부터 유래된 펩티드에 대한 CTL은 "재료 및 방법"에 기재된 프로토콜에 따라 생성되었다. IFN-감마 ELISPOT 분석에 의해 결정된 검출할 수 있는 특이적 CTL 활성을 갖는 CTLs 결과는 도 1에 나타내었다.

INHBB-A02-9-213(서열번호: 1), INHBB-A02-9-174(서열번호: 2), INHBB-A02-9-257(서열번호: 3), INHBB-A02-9-313(서열번호: 4), INHBB-A02-9-139(서열번호: 5), INHBB-A02-9-8(서열번호: 6), INHBB-A02-9-250(서열번호: 7), INHBB-A02-10-179(서열번호: 8), INHBB-A02-10-237(서열번호: 9), INHBB-A02-10-313(서열번호: 10), INHBB-A02-10-173(서열번호: 11), INHBB-A02-10-256(서열번호: 12), INHBB-A02-10-162(서열번호: 13) 및 INHBB-A02-10-85(서열번호: 14)는 IFN-감마 ELISPOT 분석에 의해 대조군과 대비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타내었다. 더욱이, 서열번호: 2로 자극된 양성 웰 번호 #7의 세포가 증폭되고 CTL 라인이 확립되었다. 펩티드 펄스 하지 않은 표적에 대한 활성과 비교하여 펩티드 펄스된 표적에 대한 높은 특이적 CTL 활성을 갖는 CTL 라인은 IFN-감마 ELISA를 통해 측정하였다(도 2).

본 명세서의 결과들은 상기 CTL 라인이 펩티드 펄스 하지 않은 표적 세포에 비하여, 이에 상응하는 펩티드로 펄스된 표적 세포에 대하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타내었다는 것을 나타낸다. 본 발명의 문맥에서, CTL 라인을 확립할 수 있는 상기 펩티드들이 강력한 CTL 자극 펩티드로서 선별되었다.

결과적으로, INHBB로부터 유래된 신규한 HLA-A02 에피토프 펩티드가 동정되었으며, 암 면역 치료법으로서 활용될 수 있다는 것을 증명하였다.

본 발명은 신규한 TAAs, 구체적으로 강력하고 특이적인 항-종양 면역 반응을 유도하고, 다양한 암 형태에 적용가능한 는 INHBB로부터 유래한 TAAs에 대해서 기술하고 있다. 이러한 TAAs는 또한 예를 들면, 암, 보다 구체적으로, 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양과 같은, INHBB와 관련된 질환에 대한 펩티드 백신으로서 개발을 정당화한다.

본 발명은 명세서에서 상세하고, 이의 특이적인 실시예를 참조로 기재되어 있으나, 앞서 기술한 설명은 본질적으로 예시 및 설명이며, 본 발명과 이의 바람직한 실시예를 예시하는 바로 이해될 수 있다. 일반적인 실험을 통해, 당업자는 다양한 변화 및 변형이 본 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고 만들어질 수 있으며, 본 발명의 목적 및 한계는 첨부된 청구항에 의해서 정의된다는 것을 용이하게 인식할 수 있을 것이다.

<110> ONCOTHERAPY SCIENCE, INC. <120> INHBB EPITOPE PEPTIDES AND VACCINES CONTAINING THE SAME <130> 11fpi-02-01 <150> US 61/089,973 <151> 2008-08-19 <150> PCT/JP2009/003894 <151> 2009-08-14 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 1 Asn Met Val Glu Lys Arg Val Asp Leu 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 2 Val Gln Ala Ser Leu Trp Leu Tyr Leu 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 3 Glu Leu Ala Val Val Pro Val Phe Val 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 4 Arg Leu Ile Gly Trp Asn Asp Trp Ile 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 5 Arg Val Ser Glu Ile Ile Ser Phe Ala 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 6 Ala Leu Gly Ala Ala Cys Leu Leu Leu 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 7 Val Gln Cys Asp Ser Cys Gln Glu Leu 1 5 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 8 Trp Leu Tyr Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 9 Ala Leu Phe Glu Arg Gly Glu Arg Arg Leu 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 10 Arg Leu Ile Gly Trp Asn Asp Trp Ile Ile 1 5 10 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 11 Val Val Gln Ala Ser Leu Trp Leu Tyr Leu 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 12 Gln Glu Leu Ala Val Val Pro Val Phe Val 1 5 10 <210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 13 Phe Ile Ser Asn Glu Gly Asn Gln Asn Leu 1 5 10 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide <400> 14 Arg Leu Gln Met Arg Gly Arg Pro Asn Ile 1 5 10 <210> 15 <211> 3218 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (47)..(1267) <400> 15 actcggctcg cctcgcggcg ggcgccctcg tcgccagcgg cgcacc atg gac ggg 55 Met Asp Gly 1 ctg ccc ggt cgg gcg ctg ggg gcc gcc tgc ctt ctg ctg ctg gcg gcc 103 Leu Pro Gly Arg Ala Leu Gly Ala Ala Cys Leu Leu Leu Leu Ala Ala 5 10 15 ggc tgg ctg ggg cct gag gcc tgg ggc tca ccc acg ccc ccg ccg acg 151 Gly Trp Leu Gly Pro Glu Ala Trp Gly Ser Pro Thr Pro Pro Pro Thr 20 25 30 35 cct gcc gcg ccg ccg cca ccc ccg cca ccc gga tcc ccg ggt ggc tcg 199 Pro Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Ser Pro Gly Gly Ser 40 45 50 cag gac acc tgt acg tcg tgc ggc ggc ttc cgg cgg cca gag gag ctc 247 Gln Asp Thr Cys Thr Ser Cys Gly Gly Phe Arg Arg Pro Glu Glu Leu 55 60 65 ggc cga gtg gac ggc gac ttc ctg gag gcg gtg aag cgg cac atc ttg 295 Gly Arg Val Asp Gly Asp Phe Leu Glu Ala Val Lys Arg His Ile Leu 70 75 80 agc cgc ctg cag atg cgg ggc cgg ccc aac atc acg cac gcc gtg cct 343 Ser Arg Leu Gln Met Arg Gly Arg Pro Asn Ile Thr His Ala Val Pro 85 90 95 aag gcc gcc atg gtc acg gcc ctg cgc aag ctg cac gcg ggc aag gtg 391 Lys Ala Ala Met Val Thr Ala Leu Arg Lys Leu His Ala Gly Lys Val 100 105 110 115 cgc gag gac ggc cgc gtg gag atc ccg cac ctc gac ggc cac gcc agc 439 Arg Glu Asp Gly Arg Val Glu Ile Pro His Leu Asp Gly His Ala Ser 120 125 130 ccg ggc gcc gac ggc cag gag cgc gtt tcc gaa atc atc agc ttc gcc 487 Pro Gly Ala Asp Gly Gln Glu Arg Val Ser Glu Ile Ile Ser Phe Ala 135 140 145 gag aca gat ggc ctc gcc tcc tcc cgg gtc cgc cta tac ttc ttc atc 535 Glu Thr Asp Gly Leu Ala Ser Ser Arg Val Arg Leu Tyr Phe Phe Ile 150 155 160 tcc aac gaa ggc aac cag aac ctg ttt gtg gtc cag gcc agc ctg tgg 583 Ser Asn Glu Gly Asn Gln Asn Leu Phe Val Val Gln Ala Ser Leu Trp 165 170 175 ctt tac ctg aaa ctc ctg ccc tac gtc ctg gag aag ggc agc cgg cgg 631 Leu Tyr Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val Leu Glu Lys Gly Ser Arg Arg 180 185 190 195 aag gtg cgg gtc aaa gtg tac ttc cag gag cag ggc cac ggt gac agg 679 Lys Val Arg Val Lys Val Tyr Phe Gln Glu Gln Gly His Gly Asp Arg 200 205 210 tgg aac atg gtg gag aag agg gtg gac ctc aag cgc agc ggc tgg cat 727 Trp Asn Met Val Glu Lys Arg Val Asp Leu Lys Arg Ser Gly Trp His 215 220 225 acc ttc cca ctc acg gag gcc atc cag gcc ttg ttt gag cgg ggc gag 775 Thr Phe Pro Leu Thr Glu Ala Ile Gln Ala Leu Phe Glu Arg Gly Glu 230 235 240 cgg cga ctc aac cta gac gtg cag tgt gac agc tgc cag gag ctg gcc 823 Arg Arg Leu Asn Leu Asp Val Gln Cys Asp Ser Cys Gln Glu Leu Ala 245 250 255 gtg gtg ccg gtg ttc gtg gac cca ggc gaa gag tcg cac cgg ccc ttt 871 Val Val Pro Val Phe Val Asp Pro Gly Glu Glu Ser His Arg Pro Phe 260 265 270 275 gtg gtg gtg cag gct cgg ctg ggc gac agc agg cac cgc att cgc aag 919 Val Val Val Gln Ala Arg Leu Gly Asp Ser Arg His Arg Ile Arg Lys 280 285 290 cga ggc ctg gag tgc gat ggc cgg acc aac ctc tgt tgc agg caa cag 967 Arg Gly Leu Glu Cys Asp Gly Arg Thr Asn Leu Cys Cys Arg Gln Gln 295 300 305 ttc ttc att gac ttc cgc ctc atc ggc tgg aac gac tgg atc ata gca 1015 Phe Phe Ile Asp Phe Arg Leu Ile Gly Trp Asn Asp Trp Ile Ile Ala 310 315 320 ccc acc ggc tac tac ggg aac tac tgt gag ggc agc tgc cca gcc tac 1063 Pro Thr Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Cys Glu Gly Ser Cys Pro Ala Tyr 325 330 335 ctg gca ggg gtc ccc ggc tct gcc tcc tcc ttc cac acg gct gtg gtg 1111 Leu Ala Gly Val Pro Gly Ser Ala Ser Ser Phe His Thr Ala Val Val 340 345 350 355 aac cag tac cgc atg cgg ggt ctg aac ccc ggc acg gtg aac tcc tgc 1159 Asn Gln Tyr Arg Met Arg Gly Leu Asn Pro Gly Thr Val Asn Ser Cys 360 365 370 tgc att ccc acc aag ctg agc acc atg tcc atg ctg tac ttc gat gat 1207 Cys Ile Pro Thr Lys Leu Ser Thr Met Ser Met Leu Tyr Phe Asp Asp 375 380 385 gag tac aac atc gtc aag cgg gac gtg ccc aac atg att gtg gag gag 1255 Glu Tyr Asn Ile Val Lys Arg Asp Val Pro Asn Met Ile Val Glu Glu 390 395 400 tgc ggc tgc gcc tga cagtgcaagg caggggcacg gtggtggggc acggagggca 1310 Cys Gly Cys Ala 405 gtcccgggtg ggcttcttcc agcccccgcg ggaacggggg tacacggtgg gctgagtaca 1370 gtcattctgt tgggctgtgg agatagtgcc agggtgcggc ctgagatatt tttctacagc 1430 ttcatagagc aaccagtcaa aaccagagcg agaaccctca actgacatga aatactttaa 1490 aatgcacacg tagccacgca cagccagacg catcctgcca cccacacagc agcctccagg 1550 ataccagcaa atggatgcgg tgacaaatgg cagcttagct acaaatgcct gtcagtcgga 1610 gagaatgggg tgagcagcca ccattcccac cagctggccc ggccactctg aattgcgcct 1670 tccgagcaca cataaaagca caaagacaga gacgcagaga gagagagaga gccacggaga 1730 ggaaaagcag atgcaggggt ggggagcgca gctcggcgga ggctgcgtgt gccccgtggc 1790 ttttaccagg cctgctctgc ctggctcgat gtctgcttct tccccagcct gggatccttc 1850 gtgcttcaag gcctggggag cctgtccttc catgcccttg tcgagggaaa gagacccaga 1910 aaggacacaa cccgtcagag acctgggagc aggggcaatg accgtttgac tgtttgtggc 1970 ttgggcctct gacatgactt atgtgtgtgt gtgtttttgg ggtggggagg gagggagaga 2030 agagggggct aaatttgatg ctttaactga tctccaacag ttgacaggtc atccttgcca 2090 gttgtataac tgaaaaagga cttttctacc aggtatgacc ttttaagtga aaatctgaat 2150 tgttctaaat ggaaagaaaa aaagttgcaa tctgtgccct tcattgggga cattcctcta 2210 ggactggttt ggggacgggt gggaatgacc cctaggcaag gggatgagac cgcaggagga 2270 aatggcgggg aggaggcatt cttgaactgc tgaggatggg gggtgtcccc tcagcggagg 2330 ccaagggagg ggagcagcct agttggtctt ggagagatgg ggaaggcttt cagctgattt 2390 gcagaagttg cccatgtggg ccccagccat cagggctggc cgtggacgtg gcccctgccc 2450 actcacctgc ccgcctgccc gcccgcccgc atagcacttg cagacctgcc tgaacgcaca 2510 tgacatagca cttgccgatc tgcgtgtgtc cagaagtggc ccttggccga gcgccgaact 2570 cgctcgccct ctagatgtcc aagtgccacg tgaactatgc aatttaaagg gttgacccac 2630 actagacgaa actggactcg tacgactctt tttatatttt ttatacttga aatgaaatcc 2690 tttgcttctt ttttaagcga atgattgctt ttaatgtttg cactgattta gttgcatgat 2750 tagtcagaaa ctgccatttg aaaaaaagtt atttttatag cagcaaaaaa aaaaaaaaaa 2810 gaatacagtt aaatgtatta tacataattt tggaaccaaa gaggccaaca gatcagtttt 2870 aattttatta gacggtgagg ccatctgaga tgaggtggac gttctgagca gtcccttgag 2930 tggcctgcca acgtttcagg gtatgaatgg attttgttta ttcggtttga tgtgtctttt 2990 ccatccttac acacccagaa ggtagagtaa aaatgactat gatagaatgc aggtgtgtat 3050 ccttaaatcc tcatctttat gtttatttaa taaagctccc cttagattct gtttcataat 3110 aatttaaaac caaacaattt tcccatagac ttgctgttaa agtattgtac gtttgtgtac 3170 agtttaagaa aataaaagat tgagtgccac gggaaaaaaa aaaaaaaa 3218 <210> 16 <211> 407 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Asp Gly Leu Pro Gly Arg Ala Leu Gly Ala Ala Cys Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Ala Ala Gly Trp Leu Gly Pro Glu Ala Trp Gly Ser Pro Thr Pro 20 25 30 Pro Pro Thr Pro Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Ser Pro 35 40 45 Gly Gly Ser Gln Asp Thr Cys Thr Ser Cys Gly Gly Phe Arg Arg Pro 50 55 60 Glu Glu Leu Gly Arg Val Asp Gly Asp Phe Leu Glu Ala Val Lys Arg 65 70 75 80 His Ile Leu Ser Arg Leu Gln Met Arg Gly Arg Pro Asn Ile Thr His 85 90 95 Ala Val Pro Lys Ala Ala Met Val Thr Ala Leu Arg Lys Leu His Ala 100 105 110 Gly Lys Val Arg Glu Asp Gly Arg Val Glu Ile Pro His Leu Asp Gly 115 120 125 His Ala Ser Pro Gly Ala Asp Gly Gln Glu Arg Val Ser Glu Ile Ile 130 135 140 Ser Phe Ala Glu Thr Asp Gly Leu Ala Ser Ser Arg Val Arg Leu Tyr 145 150 155 160 Phe Phe Ile Ser Asn Glu Gly Asn Gln Asn Leu Phe Val Val Gln Ala 165 170 175 Ser Leu Trp Leu Tyr Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val Leu Glu Lys Gly 180 185 190 Ser Arg Arg Lys Val Arg Val Lys Val Tyr Phe Gln Glu Gln Gly His 195 200 205 Gly Asp Arg Trp Asn Met Val Glu Lys Arg Val Asp Leu Lys Arg Ser 210 215 220 Gly Trp His Thr Phe Pro Leu Thr Glu Ala Ile Gln Ala Leu Phe Glu 225 230 235 240 Arg Gly Glu Arg Arg Leu Asn Leu Asp Val Gln Cys Asp Ser Cys Gln 245 250 255 Glu Leu Ala Val Val Pro Val Phe Val Asp Pro Gly Glu Glu Ser His 260 265 270 Arg Pro Phe Val Val Val Gln Ala Arg Leu Gly Asp Ser Arg His Arg 275 280 285 Ile Arg Lys Arg Gly Leu Glu Cys Asp Gly Arg Thr Asn Leu Cys Cys 290 295 300 Arg Gln Gln Phe Phe Ile Asp Phe Arg Leu Ile Gly Trp Asn Asp Trp 305 310 315 320 Ile Ile Ala Pro Thr Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Cys Glu Gly Ser Cys 325 330 335 Pro Ala Tyr Leu Ala Gly Val Pro Gly Ser Ala Ser Ser Phe His Thr 340 345 350 Ala Val Val Asn Gln Tyr Arg Met Arg Gly Leu Asn Pro Gly Thr Val 355 360 365 Asn Ser Cys Cys Ile Pro Thr Lys Leu Ser Thr Met Ser Met Leu Tyr 370 375 380 Phe Asp Asp Glu Tyr Asn Ile Val Lys Arg Asp Val Pro Asn Met Ile 385 390 395 400 Val Glu Glu Cys Gly Cys Ala 405

Claims

세포독성 T 림프구(CTL) 유도성을 갖는, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 서열번호: 16으로부터 유래된 분리된 펩티드:
(a) 서열번호: 1 내지 14, 및
(b) 서열번호: 1 내지 14에서 1, 2, 또는 다수의 아미노산이 치환, 삽입, 결실 및/또는 첨가된 아미노산 서열.
제 1항에 있어서, 상기 펩티드가 15개 아미노산 잔기 이하로 구성된 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 2항에 있어서, 상기 펩티드는 노나펩티드(nonapeptide) 또는 데카펩티드(decapeptide)인 것을 특징으로 하는 펩티드.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 하기의 특성 중 하나 또는 둘 다를 갖는, 서열번호: 1 내지 14로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드:
(a) N-말단으로부터 두 번째 아미노산이 류신(leucine) 또는 메티오닌(methionine)의 군으로부터 선택되는 아미노산, 및
(b) C-말단 아미노산이 발린(valine) 또는 류신(leucine)의 군으로부터 선택되는 아미노산.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 하나 또는 다수의 펩티드를 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오티드.
(a) 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 하나 또는 다수의 펩티드;
(b) 상기 펩티드를 암호화하는 하나 또는 다수의 폴리뉴클레오티드;
(c) HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 그 표면에 제시하는, 하나 또는 다수의 항원-제시 세포 및/또는 엑소솜;
(d) 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드에 대해 유도된 하나 또는 다수의 CTLs; 및
(e) 이의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 활성 성분을
(i) 암의 치료;
(ii) 암의 예방;
(iii) 암의 수술 후 재발 방지; 및
(iv) 이의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 목적을 위해 제형화된 약학적으로 허용가능한 수용체와 조합으로 포함하는 약학적 제제.
제 6항에 있어서, HLA 항원이 HLA-A02인 개체에 투여하기 위해 제형화되는 것을 특징으로 하는 약학적 제제.
제 6항에 있어서, 상기 암은 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 제제.
제 6항에 있어서, 상기 약제는 백신으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 약학적 제제.
하기로 구성된 군으로부터 선택되는 단계를 포함하는, 높은 CTL 유도성을 갖는 항원-제시 세포를 유도하는 방법:
(a) 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드와 항원-제시 세포를 접촉하는 단계; 및
(b) 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 발현가능한 형태로 항원-제시 세포 내로 도입하는 단계.
하기로 구성된 군으로부터 선택되는 단계를 포함하는, CTL을 유도하는 방법:
(a) HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 제시하는 항원-제시 세포 및/또는 엑소솜을 CD8-양성 T 세포에 접촉하는 단계; 및
(b) HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 인지하는 TCR 써브유닛(subunit)을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 CD8-양성 T 세포내로 도입하는 단계.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 중 어느 하나를 표적화하는 분리된 CTL.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드에 의해 유도되는 분리된 CTL.
제 12항 또는 제 13항에 있어서, 상기 CTL은 세포에서 HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 인지할 수 있는 것을 특징으로 하는 CTL.
제 12항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CTL은 제 11항에 기재된 방법에 의해 유도된 것을 특징으로 하는 CTL.
HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 그 표면으로 제시하는, 분리된 항원-제시 세포.
제 16항에 있어서, 상기 항원-제시 세포는 제 10항의 방법에 의해 유도된 것을 특징으로 하는 항원-제시 세포.
제 16항 또는 제 17항에 있어서, 상기 HLA 항원은 HLA-A02인 것을 특징으로 하는 항원-제시 세포.
하기로 구성된 군으로부터 선택된 활성 성분을 포함하는, 개체 내 암에 대한 면역 반응 유도용 약제:
(a) 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 하나 또는 다수의 펩티드;
(b) 상기 펩티드를 발현가능한 형태로 암호화하는 하나 또는 다수의 폴리뉴클레오티드;
(c) HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 그 표면에 제시하는 하나 또는 다수의 항원-제시 세포 및/또는 엑소솜;
(d) 제1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드에 대해 유도된 하나 또는 다수의 CTLs; 및
(e) 이의 조합.
하기로 구성된 군으로부터 선택된 활성 성분을 포함하는 약제 및 약학적으로 허용가능한 수용체를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내 암에 대한 면역 반응을 유도하는 방법:
(a) 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 하나 또는 다수의 펩티드;
(b) 상기 펩티드를 발현가능한 형태로 암호화하는 하나 또는 다수의 폴리뉴클레오티드;
(c) HLA 항원 및 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드 사이에 형성된 복합체를 그 표면에 제시하는 하나 또는 다수의 항원-제시 세포 및/또는 엑소솜;
(d) 제1항 내지 제 4항 중 어느 한 항으로 기재되는 펩티드에 대해 유도된 하나 또는 다수의 CTLs; 및
(e) 이의 조합.
제 20항에 있어서, 상기 암은 담관세포암종, 식도암, 비소세포폐암 (NSCLC), 신장 암종, 소세포 폐암 (SCLC) 및 연부 조직 종양으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 20항 또는 제 21항에 있어서, 상기 개체는 HLA-A02인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항의 하나 또는 다수의 펩티드, 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 또는 제 16항 내지 제 18항 중 어느 한 항의 분리된 항원-제시 세포를 포함하는 CTL 유도용 약제.