KR20110036903A

KR20110036903A - Ｉｑｇａｐ３ 에피토프 펩티드 및 이를 포함하는 백신

Info

Publication number: KR20110036903A
Application number: KR1020117000473A
Authority: KR
Inventors: 타쿠야 츠노다; 류지 오사와; 사치코 요시무라; 토모히사 와타나베
Original assignee: 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤
Priority date: 2008-06-11
Filing date: 2009-06-10
Publication date: 2011-04-12
Also published as: IL209869A0; TW201000115A; JP2011523937A; AU2009258788A1; MX2010013680A; WO2009150835A1; RU2010154081A; EP2303909A1; CA2727485A1; CN102119169A; BRPI0915527A2; EP2303909A4; US20110200626A1

Abstract

암에 대한 펩티드 백신이 본 명세서에 기재된다. 구체적으로, 본 발명은 CTLs을 유도하는 IQGAP3로부터 유래된 에피토프 펩티드(epitope peptide)를 기재하고 있다. 또한, 본 발명은 상기 펩티드로 펄스된 HLA-A24 또는 HLA-A02 양성 표적 세포를 특이적으로 인식하는 확립된 CTLs을 제공한다. 또한, 항원 제시 세포를 유도하는 방법뿐만 아니라, 상기 펩티드 중 어느 하나를 제시하는 항원 제시 세포 및 엑소솜을 제공한다. 또한, 본 발명은 엑소솜 및 항원 제시 세포뿐만 아니라, IQGAP3 폴리펩티드 또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 활성 성분으로서 포함하는 약학적 제제를 제공한다. 더욱이, 본 발명은 CTLs을 유도하는 방법, IQGAP3 폴리펩티드, 상기 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리펩티드를 제시하는 엑소솜 또는 항원 제시 세포, 또는 본 발명의 약학적 제제를 사용하여, 항-종양 면역력을 유도하는 방법뿐만 아니라, 암(종양)의 치료 및/또는 예방(즉, 방지), 및/또는 이의 수술 후 재발의 방지를 위한 방법을 제공한다. 표적이 되는 암은, 이에 한정되지 않지만, 신장암, 식도암, 위암, 폐암, 유방암, 방광암 및 췌장암을 포함한다.

Description

ＩＱＧＡＰ３ 에피토프 펩티드 및 이를 포함하는 백신{IQGAP3 EPITOPE PEPTIDES AND VACCINES CONTAINING THE SAME}

우선권

본 출원은 2008년 6월 11일에 출원된, 미국 가 특허 출원 제 61/060,538호의 우선권을 주장하고, 그 전체 내용은 참조에 의해 본 발명에 통합된다.

기술 분야

본 발명은 생물과학 분야, 보다 구체적으로 암 치료 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 암 백신, 및 종양의 치료 및 예방을 위한 약물로 매우 효과적인 신규한 펩티드에 관한 것이다.

CD8 양성CTLs이 주조직적합성복합체(major histocompatibility complex, MHC) 클래스 I 분자에 존재하는 종양 관련 항원(tumor-associated antigens, TAAs)에서 유래한 에피토프 펩티드(epitope peptide)를 인지한 후, 종양 세포를 사멸시키는 것으로 입증되고 있다. TAAs의 첫번째 예로서 흑색종 항원(melanoma antigen, MAGE) 패밀리의 발견 이후, 다른 많은 TAAs가 면역학적 접근을 통해 발견되었으며(Boon T, Int J Cancer 54 : 177-80, 1993; Boon T, and van der Bruggen P., J Exp Med 183: 725-729, 1996; van der Bruggen P, et al, Science 254: 1643-1647, 1991; Brichard V, et al, J Exp Med 178: 489-495, 1993; Kawakami Y, et al, J Exp Med 180: 347-352, 1994). 이러한 TAAs 중 일부는 현재 면역치료의 표적으로써 임상 개발 과정에 있다.

강력하고 특이적인 항-종양 면역 반응을 유도하는 새로운 TAAs를 동정함으로써, 다양한 종류의 암에서 펩티드 백신 전략의 임상적인 응용의 무궁한 발전이 보장된다(Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996 Oct 16, 88(20): 1442-55; Butterfield LH et al, Cancer Res 1999 Jul 1, 59(13): 3134-42; Vissers JL et al., Cancer Res 1999 Nov 1, 59(21): 5554-9; Van der Burg SH et al., J Immunol 1996 May 1, 156(9): 3308-14; Tanaka F et al., Cancer Res 1997 Oct 15, 57(20): 4465-8; Fujie T et al., Int J Cancer 1999 Jan 18, 80(2): 169-72; Kikuchi M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 459-66; Oiso M et al., Int J Cancer 1999 May 5, 81(3): 387-94). 현재까지, 이러한 종양관련 항원 유래 펩티드를 이용한 몇몇의 임상 실험이 보고되고 있다. 불행하게도, 지금까지 암 백신 임상 실험에서는 낮은 객관적 반응률만을 관찰할 수 있었다(Belli F et al., J Clin Oncol 2002 Oct 15,20(20): 4169-80; Coulie PG et al., Immunol Rev 2002 Oct, 188: 33-42; Rosenberg SA et al., Nat Med 2004 Sep,10(9): 909-15).

암세포의 증식 및 생존에 필수적인 TAAs는, 이러한 TAAs의 사용이 치료적으로 유도된 면역 선택의 결과로서 TAAs의 결실, 돌연변이, 또는 억제에 기인하는 암세포의 면역 도피의 잘 알려진 위험을 최소화하기 때문에, 면역치료를 위한 표적으로서 효과적이다.

IQGAPs, GTP가수분해효소 활성 단백질(GTPase activating proteins)을 포함하는 IQ 모티프는, Cdc42, Rac 및 RhoA의 상호작용을 통해 많은 액틴 세포골격(actin cytoskeleton) 기반의 활성을 조절하는 것으로 알려져 있다. 모든 상기 IQGAP 패밀리 단백질은 RasGAP-관련 도메인, IQ 모티프, 및 칼포닌(calponin) 상동성 도메인을 포함한, 보존된 도메인을 포함한다. IQGAPs는 활성화된 Rac1 및 Cdc42의 이펙터(effector)로 알려져 있고 액틴 필라멘트(actin filament)와 직접적으로 상호작용한다. IQGAP1에 대한 염색체 1 상동체 서열에 대한 최근 연구는 IQGAP 패밀리의 신규한 구성원으로서 IQGAP3(GenBank 등록번호: NM_178229, 서열번호: 154를 암호화하는 서열번호: 153)을 동정하였다(Wang S et al., J Cell Sci 2007 Feb 15, 120: 567-77). 아울러, 23,040 유전자를 포함하는 게놈-와이드 cDNA 마이크로어레이를 사용한 유전자 발현 프로파일 분석을 통해, IQGAP3가 위암에서 상향-조절되는 신규한 분자로서 동정되었다(Jinawath N et al., AACR 2006). 사실, IQGAP3는 방광암(WO2006/085684), 신장암(WO2007/013575), 폐암(WO2004/031413 및 WO2007/013665), 식도암(WO2007/013671), 췌장암(WO2004/031412) 및 유방암과 같은 것을 포함하는, 몇몇의 암세포에서 상향 조절되는 것으로 알려져왔고, 상기 문헌은 본 명세서에 참조로서 통합된다. 인간 정상 조직에서의 발현 분석으로부터, IQGAP3 전사체는 정소, 소장 및 결장에서 약하게 검출되었다. 따라서, IQGAP3은 암 면역치료를 위한 적절한 표적으로 여겨지고 이로부터 유래된 에피토프 펩티드는 다양한 암 형태의 치료에 효과적인 암 면역치료법에 사용될 수 있을 것으로 예상된다.

발명의 개요

본 발명은 면역치료의 적절한 표적으로서 IQGAP3의 발견에 부분적으로 근거한다. TAA는 일반적으로 면역 체계에서 "자가"로 인식되며, 이로 인해서 종종 선천성 면역원성을 갖지 않는 것으로 인식되기 때문에, 적합한 표적의 발견은 매우 중요하다. IQGAP3가 방광, 신장, 폐, 식도, 위, 유방, 및 췌장과 같은 암 조직에서 과발현되는 것으로 파악하여, 본 발명은 추가 분석을 위해서 이런 세포분열 주기 관련 1(cell division-cycle-associated 1, CDA1) 단백질(IQGAP3)(GenBank 등록번호. NM_178229(서열번호: 153)의 유전자에 의해 암호화되는 서열번호: 154)을 표적으로 하였다. 구체적으로, 상응되는 분자에 대하여 특이적인 CTLs를 유도하는 에피토프 펩티드를 포함하는 IQGAP3 유전자 산물들이 선택되었다. 건강한 기증자로부터 수득한 말초단핵세포(Peripheral blood mononuclear cells, PBMC)는 IQGAP3로부터 유래된 HLA-A*24 및 HLA-A*02 결합 펩티드를 사용하여 자극되었다. 각각의 후보 펩티드로 펄스된 HLA-A24 또는 HLA-A02 양성 표적 세포를 특이적으로 인식하는 CTLs이 확립되었으며, 종양 혈관의 표면에서 발현되는 IQGAP3에 대하여 강력하고 특이적인 면역 반응을 유도할 수 있는 HLA-A24 또는 HLA-A02 제한적 에피토프가 동정되었다. 이러한 결과들은 IQGAP3가 강력한 면역원성이며, 이의 에피토프가 종양 면역치료를 위해서 효과적인 표적이라는 것을 나타낸다.

따라서, 본 발명의 목적은 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열뿐만 아니라, CTL 유도성을 갖는 펩티드를 제공한다. 또한, 본 발명은 변형된 펩티드가 원래의 CTL 유도성을 유지하는 한, 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150의 아미노산 서열에서 하나, 둘 또는 다수의 아미노산이 치환 또는 삽입된 아미노산 서열을 갖는, 변형된 펩티드를 고려한다.

개체에 투여되었을 때, 본 발명의 펩티드는 항원 제시 세포의 표면에 제시되며 그런 다음 각각의 펩티드를 표적으로 하는 CTLs을 유도한다. 따라서, 본 발명의 목적은 항원 제시 세포를 유도하는 방법뿐만 아니라, 본 발명의 펩티드 중 어느 것을 제시하는 항원 제시 세포 및 엑소솜을 제공하는 것이다.

항종양 면역 반응은 본 발명의 IQGAP3 폴리펩티드를 제시하는 엑소솜 및 항원 제시 세포뿐만 아니라, 상기 IQGAP3 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 투여에 의해서 유도된다. 따라서, 본 발명의 목적은 본 발명의 폴리펩티드 또는 이들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 활성 성분으로 포함하는 엑소솜 및 항원 제시 세포뿐만 아니라, 본 발명의 폴리펩티드 또는 이들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 약학적 제제를 제공하는 것이다. 본 발명의 약학적 제제는 백신으로서 특별한 유용성을 발견한다.

본 발명의 다른 목적은 IQGAP3 폴리펩티드, IQGAP3 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, IQGAP3 폴리펩티드를 제시하는 엑소솜(exosome) 또는 항원 제시 세포, 또는 본 발명의 약학적 제제를 투여하는 단계를 포함하는, CTLs 유도 방법, 종양 관련 내피에 대한 면역 반응 및, 항-종양 면역을 유도하는 방법뿐만 아니라, 암(종양)의 치료 및/또는 예방(즉, 방지), 및/또는 이의 수술 후 재발의 방지를 위한 방법을 제공하는 것이다. 아울러, 본 발명의 CTLs은 또한 암에 대한 백신으로서의 용도를 밝힌다.

본 발명은 방광암, 신장암, 폐암, 식도암, 유방암, 췌장암 및 위암을 포함한, 암과 같은, IQGAP3 과발현과 관련된 임의의 질환에 적용할 수 있다.

상기에 대하여 추가로, 본 발명의 다른 목적 및 특징은 하기의 발명의 상세한 설명을 함께 있는 도면과 실시예와 결합하여 읽을 때, 보다 명확해질 것이다. 그러나, 상기 본 발명의 요약 및 하기의 발명의 상세한 설명 모두는 내용을 예시한 것이며, 본 발명 또는 본 발명의 다른 내용이 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 본 발명은 다수의 구체적인 내용을 참조로 하여 본 명세서에 기재되어 있지만, 이러한 설명은 본 발명을 예시하는 것이며, 이는 본 발명의 제한으로 여겨지지 않는다. 다양한 변형 및 활용은 하기 첨부된 청구항에 기재된, 본 발명의 정신 및 범위에서 벗어나지 않으면서, 당업자에게 일어날 수 있다. 유사하게, 본 발명의 다른 목적, 특징, 이익 및 장점은 이러한 요약 및 하기 기재된 특정 내용에 분명하게 나타났으며, 당업자에게 명백할 수 있다. 이러한 목적, 특징, 이익 및 장점은 함께 따르는 실시예, 데이타, 도면 및 이로부터 이끌어낼 수 있는 모든 합리적인 추론, 본 명세서에 통합된 참조의 단독 또는 고려와 병합하여 명백해질 수 있다.

본 발명의 다양한 측면 및 활용은 도면의 간단한 설명 및 본 발명의 상세한 설명 및 이에 따른 바람직한 실시예를 고려하면, 당업자에게 명백해질 수 있다.
[도.1a] 도 1a 및 b는 IQGAP3로부터 유래된 펩티드로 유도된 CTLs의 IFN-감마 ELISPOT 분석 결과를 나타내는, 일련의 그림, (a)-(s)를 포함한다.
IQGAP3-A24-9-955(서열번호: 2)로 자극된 웰 번호 #3 및 #6 (a), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호: 4)로 자극된 웰 번호 #5 (b), IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7)로 자극된 웰 번호 #7 (c), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21)로 자극된 웰 번호 #2 (d), IQGAP3-A24-9-26(서열번호: 25)으로 자극된 웰 번호 #8 (e), IQGAP3-A24-9-137(서열번호: 29)로 자극된 웰 번호 #4 (f), IQGAP3-A24-9-63(서열번호: 32)으로 자극된 웰 번호 #8 (g), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호: 35)으로 자극된 웰 번호 #8 (h), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호: 37)로 자극된 웰 번호 #2 (i), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40)로 자극된 웰 번호 #2 (j), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호: 49)로 자극된 웰 번호 #5 (k), IQGAP3-A24-10-345(서열번호: 53)로 자극된 웰 번호 #7 (l), IQGAP3-A24-10-1614(서열번호: 55)로 자극된 웰 번호 #1 (m), IQGAP3-A24-10-191(서열번호: 56)로 자극된 웰 번호 #3 (n), IQGAP3-A24-10-314(서열번호: 57)로 자극된 웰 번호 #5 (o), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호: 62)으로 자극된 웰 번호 #5 (p), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호: 63)로 자극된 웰 번호 #7 (q) 및 IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67)로 자극된 웰 번호 #2 (r)에 있는 CTLs은 각각 대조군에 비하여 강력한 IFN-감마 생성능을 나타낸다. 반대로, 특이적 IFN-감마 생성은 펩티드 펄스된 표적 세포에 대하여 IQGAP3-A24-9-417(서열번호: 6)로 자극한 CTLs로부터는 검출되지 않았다 (s). 사각형 상자로 나타낸 상기 웰 안의 세포는 CTLs 라인을 확립하기 위하여 증폭하였다. 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타내며, "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타낸다.
[도.1b] 도 1b는 도 1a의 연속이다.
[도.2A] 도 2A, B, 및 C는 서열번호: 2 (a), 서열번호: 4 (b), 서열번호: 7 (c), 서열번호: 21 (d) , 서열번호: 25 (e), 서열번호: 29 (f), 서열번호: 32 (g), 서열번호: 35 (h), 서열번호: 37 (i), 서열번호: 40 (j), 서열번호: 49 (k), 서열번호: 53 (l), 서열번호: 55 (m), 서열번호: 56 (n), 서열번호: 57 (o), 서열번호: 62 (p), 서열번호: 63 (q) 및 서열번호: 67 (r)로 명명되는, 다양한 IQGAP3 펩티드로 자극된 CTL 라인의 확립의 IFN-감마 ELISA 분석 결과를 나타내는 일련의 선 그래프, (a)-(s)를 포함한다. 이러한 결과는 각각의 펩티드를 이용한 자극에 의해서 확립된 CTL 라인은 대조군에 비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타낸다는 것을 보여준다. 반대로, 특이적 IFN-감마 생성은 펩티드 펄스된 표적 세포에 대하여 서열번호: 6으로 자극한 CTL 라인으로부터 검출되지 않았다 (s). 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 표적세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타내며, "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타낸다.
[도.2B] 도 2B는 도 2A의 연속이다.
[도.2c] 도 2c는 도 2b의 연속이다.
[도 3] 도 3은 IQGAP3 및 HLA-A*2402가 외인성으로 발현되는 표적 세포에 대한 특이적 CTL 활성을 나타내는 선 그래프이다. HLA-A*2402 또는 전장의 IQGAP3 유전자로 형질전환된 COS7 세포를 대조군으로써 제조하였다. IQGAP3-A24-9-779 (서열번호: 7)로 확립된 상기 CTL 라인은 IQGAP3 및 HLA-A*2402 모두가 형질전환된 COS7 세포에 대하여 특이적 CTL 활성을 나타냈다(검정색 마름모꼴). 반대로, HLA-A*2402(삼각형) 또는 IQGAP3(원형) 중 하나를 발현하는 표적 세포에 대해서는 유의적인 특이적 CTL 활성이 검출되지 않았다.
[도.4a] 도 4a 및 b는 IQGAP3로부터 유래된 펩티드로 유도된 CTLs에 대한 IFN-감마 ELISPOT 분석 결과를 나타내는, 일련의 사진, (a)-(r)로 구성된다. IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75)으로 자극된 웰 번호 #6 및 6 (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85)으로 자극된 웰 번호 #6 (b), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101)으로 자극된 웰 번호 #1 (c), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111)로 자극된 웰 번호 #7 (d), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114)으로 자극된 웰 번호 #7 및 6 (e), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121)로 자극된 웰 번호 #5 (f), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125)로 자극된 웰 번호 #8 (g), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130)으로 자극된 웰 번호 #1 (h), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139)으로 자극된 웰 번호 #2 (i), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140)으로 자극된 웰 번호 #2 (j), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141)로 자극된 웰 번호 #2 (k), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142)으로 자극된 웰 번호 #2 (l), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143)로 자극된 웰 번호 #4 (m), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145)로 자극된 웰 번호 #6 (n), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148)로 자극된 웰 번호 #5 (o), IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)로 자극된 웰 번호 #3 (p) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99)로 자극된 웰 번호 #5 (q)에 있는 CTLs은 각각 대조군에 비하여 강력한 IFN-감마 생성능을 나타낸다. 반대로, 특이적 IFN-감마 생성은 펩티드 펄스된 표적 세포에 대하여 IQGAP3-A02-10-868(서열번호: 113)로 자극한 CTL로부터는 검출되지 않았다 (r). 사각형 상자로 나타낸 상기 웰 안의 세포는 CTL 라인을 확립하기 위하여 증폭하였다. 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타내며, "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타낸다. 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 상기 웰에 있는 세포를 나타내며, "-"는 상기 펩티드로 펄스되지 않은 세포를 나타낸다.
[도.4b] 도 4b는 도 4a의 연속이다.
[도.5a] 도 5a 및 b는, IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75) (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (b), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101) (c), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111) (d), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114) (e), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121) (f), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125) (g), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130) (h), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139) (i), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140) (j), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141) (k), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142) (l), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143) (m), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145) (n), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148) (o), IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150) (p) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99) (q)로 명명되는, 다양한 IQGAP3 펩티드로 자극된 CTL 라인의 IFN-감마 생성을 IFN-감마 ELISA 분석으로 검출된 결과를 나타내는, 일련의 선 그래프, (a)-(q)를 포함한다. 이러한 결과는 각각의 펩티드를 이용한 자극에 의해서 확립된 CTL 라인은 대조군에 비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타낸다는 것을 보여준다. 도면에서, "+"는 적합한 펩티드에 의해서 펄스된 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타내며 "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타낸다.
[도.5b] 도 5b는 도 5a의 연속이다.
[도.5c] 도 5c는 도 5b의 연속이다.
[도.6] 도 6은 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75) (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (b), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121) (c), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130) (d), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143) (e), 및 IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145) (f)로 명명되는, 다양한 IQGAP3 펩티드로 자극된 CTL 라인으로부터 제한적 희석에 의해 확립된 CTL 클론의 IFN-감마 생성을 나타낸, 일련의 선 그래프, (a)-(f)로 구성된다. 이러한 결과는 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75) (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (b), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121) (c), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130) (d), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143) (e), 및 IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145) (f)로 자극되어 확립된 상기 CTL 클론이 대조군과 비교하여 강력한 IFN-감마 생성을 보이는 것을 나타낸다. 도면에서, "+"는 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75) (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (b), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121) (c), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130) (d), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143) (e), 및 IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145) (f)로 펄스된 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타내고 "-"는 어떠한 펩티드로도 펄스되지 않은 표적 세포에 대한 IFN-감마 생성을 나타낸다.
[도.7] 도 7은 IQGAP3 및 HLA-A*0201을 외인성으로 발현하는 표적 세포에 대한 특이적 CTL 활성을 나타내는 선 그래프이다. HLA-A*0201 또는 전장의 IQGAP3 유전자로 형질전환된 COS7 세포를 대조군으로써 제조하였다. IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (a) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99) (b)로 확립된 상기 CTL 클론은 IQGAP3 및 HLA-A*0201 모두가 형질전환된 COS7 세포에 대하여 특이적 CTL 활성을 나타냈다(검정색 마름모꼴). 반면에, HLA-A*0201(삼각형) 또는 IQGAP3(원형) 중 하나를 발현하는 표적 세포에 대해서는 유의적인 특이적 CTL 활성이 검출되지 않았다.

비록, 본 명세서에 기재된 어떠한 방법 및 재료와 유사하거나 동등한 방법 및 재료는 본 발명의 실시예를 수행 또는 검사하는데 사용될 수 있으나, 바람직한 방법, 도구, 및 재료는 여기에 기재된다. 그러나, 본 재료 및 방법이 기재되기 이전에, 본 발명은 명세서에 기재된 특정 사이즈, 모양, 부피, 재료, 방법, 프로토콜 등에 한정되지 않으며, 이들은 통상적인 실험 및 최적화에 부합하여 변형될 수 있다. 또한, 본 발명의 상세한 설명에서 사용되는 용어는 특정한 버전 또는 내용을 기술하기 위한 목적이나, 오직 첨부된 청구항으로 제한되는 본 발명의 범위로 제한하려는 의도는 아니다.

본 명세서에서 언급된 공개, 특허 또는 특허 출원의 내용은 그 전체가 명세서에 참조로서 통합된다. 그러나, 본 명세서의 어느 것도 본 발명은 이전 발명으로 인하여 선행되는 문헌의 자격이 없다는 인정으로서, 만들어지지 않는다.

Ⅰ. 정의

별도로 명시되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적, 과학적 용어는 본 발명이 속한 당업자에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그러나, 충돌이 있는 경우, 정의를 포함한 본 명세서에 따른다.

본 발명에서 사용되는 단어는 별도로 명시되지 않는 한, 단수를 의미한다.

본 발명에서 호환적으로 사용되는 용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 의미한다. 상기 용어는 1개 이상의 아미노산 잔기로 된 아미노산 중합체가 변형된 잔기, 또는 천연 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연 아미노산에 상응하는 인공 화학 모방체와 같은 비천연 잔기에 적용된다.

본 발명에서 사용되는 용어 "아미노산"은 천연 아미노산과 합성 아미노산, 및 천연 아미노산과 마찬가지로 기능하는 아미노산 유사체(analog) 및 아미노산 모방체(mimetic)를 의미한다. 천연 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화되는 아미노산, 및 세포에서 번역 후 변형된 아미노산[예를 들면, 하이드록시프롤린(hydroxyproline), 감마-카복시글루탐산(gamma-carboxyglutamate) 및 O-포스포세린(O-phosphoserine)]이다. 상기 용어 "아미노산 유사체"는 천연 아미노산과 같은 기본적인 화학 구조(수소, 카복실기, 아미노기 및 R기에 결합하는 α탄소)를 가지고 있지만, 변형된 R기 또는 변형된 골격을 가지는 화합물을 의미한다[예를 들면, 호모세린(homoserine), 노르루신(norleucine), 메티오닌(methionine), 설폭사이드(sulfoxide), 메티오닌 메틸 설포니움(methionine methyl sulfonium)]. 상기 용어 "아미노산 모방체"는 서로 다른 구조를 갖지만, 일반적인 아미노산과 비슷한 기능이 있는 화학적 화합물을 의미한다.

아미노산은 IUPAC-IUB 생화학 명명위원회가 권장하는, 일반적으로 알려진 3문자 상징 또는 1문자 상징에 의해 기재된다.

본 발명에서 사용된 용어 "유전자", "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드" 및 "핵산"은 따로 명시되지 않는 한, 호환적으로 사용되며, 일반적으로 인정되는 1문자 코드에 의해 기재된다.

별도로 명시되지 않는 한, 상기 용어 "암"은 IQGAP3 유전자를 과발현하는 암을 나타내고, 예로는 방광암, 신장암, 폐암, 식도암, 위암, 유방암, 및 췌장암이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서 사용된 용어 "세포독성 T 림프구", "세포독성 T 세포" 및 "CTL"은 따로 명시되지 않는 한, 호환적으로 사용되며, 따로 특별히 나타내지 않는 한, 비-자가 세포(예를 들면, 종양 세포, 바이러스 감염된 세포)를 인식하고 이러한 세포의 사멸을 유도하는 T 림프구의 하위 그룹을 나타낸다.

Ⅱ. 펩티드( peptides )

IQGAP3로부터 유래한 펩티드가 세포 독성 T 세포(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)에 의해 인식되는 항원으로서 역할을 한다는 것을 증명하기 위하여, IQGAP3로부터 유래된 펩티드(서열번호: 154)가 전 세계적으로 HLA 대립 유전자로 알려진, HLA-A24 또는 HLA-A02에 의해 한정되는 항원 에피토프인지 여부를 분석하였다(Date Y et al, Tissue Antigens 47: 93-101, 1996; Kondo A et al, J Immunol 155: 4307-12, 1995; Kubo RT et al, J Immunol 152: 3913-24, 1994). IQGAP3으로부터 유래된 HLA-A24 및 HLA-A02 결합 펩티드 후보는 HLA-A24 및 HLA-A02에 대한 그들의 결합 친화성을 바탕으로 식별하였다. 이러한 펩티드를 담지한 수지상 세포(dendritic cells, DCs)에 의해 T 세포를 생체 외에서 자극한 후, 하기 펩티드를 사용하여 CTLs을 성공적으로 확립하였다.

IQGAP3-A24-9-955 (서열번호: 2),

IQGAP3-A24-9-1167 (서열번호: 4),

IQGAP3-A24-9-779 (서열번호: 7),

IQGAP3-A24-9-74 (서열번호: 21),

IQGAP3-A24-9-26 (서열번호: 25),

IQGAP3-A24-9-137 (서열번호: 29),

IQGAP3-A24-9-63 (서열번호: 32),

IQGAP3-A24-10-1600 (서열번호: 35),

IQGAP3-A24-10-1507 (서열번호: 37),

IQGAP3-A24-10-139 (서열번호: 40),

IQGAP3-A24-10-1097 (서열번호: 49),

IQGAP3-A24-10-345 (서열번호: 53),

IQGAP3-A24-10-1614 (서열번호: 55),

IQGAP3-A24-10-191 (서열번호: 56),

IQGAP3-A24-10-314 (서열번호: 57),

IQGAP3-A24-10-1363 (서열번호: 62),

IQGAP3-A24-10-1114 (서열번호: 63),

IQGAP3-A24-10-1207 (서열번호: 67),

IQGAP3-A02-9-146 (서열번호: 75),

IQGAP3-A02-9-553 (서열번호: 85),

IQGAP3-A02-9-1234 (서열번호: 99),

IQGAP3-A02-9-756 (서열번호: 101),

IQGAP3-A02-10-961 (서열번호: 111),

IQGAP3-A02-10-70 (서열번호: 114),

IQGAP3-A02-10-1174 (서열번호: 121),

IQGAP3-A02-10-548 (서열번호: 125),

IQGAP3-A02-10-903 (서열번호: 130),

IQGAP3-A02-10-953 (서열번호: 139),

IQGAP3-A02-10-1590 (서열번호: 140),

IQGAP3-A02-10-1424 (서열번호: 141),

IQGAP3-A02-10-416 (서열번호: 142),

IQGAP3-A02-10-67 (서열번호: 143),

IQGAP3-A02-10-1461 (서열번호: 145),

IQGAP3-A02-10-842 (서열번호: 148) 및

IQGAP3-A02-10-897 (서열번호: 150).

이렇게 확립된 CTLs은 각각의 펩티드로 자극된 표적 세포에 대해 강력한 특이적 CTL 활성을 보였다. 이러한 결과는 IQGAP3가 CTL에 의해 인식되는 항원이고 상기 펩티드는 HLA-A24 또는 HLA-A02에 의해 한정되는 IQGAP3의 에피토프 펩티드일 수 있음을 나타낸다.

IQGAP3 유전자는 위암, 신장암, 식도암, 폐암, 유방암, 방광암 및 췌장암과 같은, 대부분의 암 조직에서 과발현되므로, 이것은 면역치료의 효과적인 표적임을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 CTL에 인식되는 IQGAP3 유래 에피토프에 상응하는 노나펩티드(9개의 아미노산 잔기로 이루어지는 펩티드) 및 데카펩티드(10개의 아미노산 잔기로 이루어지는 펩티드)를 제공한다. 본 발명의 노나펩티드 또는 데카펩티드의 특별히 바람직한 실시예로는 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150 중에서 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 펩티드를 포함한다..

일반적으로, Parker KC et al., J Immunol 1994 Jan 1,152(1): 163-75에 기재된 바와 같이, 인터넷상에서 현재 사용가능한 소프트웨어 프로그램을 이용하여 컴퓨터 상(in silico)에서 다양한 펩티드와 HLA 항원 사이의 결합 친화성을 산출하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, Parker KC et al., J Immunol 1994 Jan 1, 152(1): 163-75; 및 Kuzushima K et al., Blood 2001, 98(6): 1872-81에 기재되어 있는 바에 따라, HLA 항원과의 결합 친화성을 측정할 수 있다. 결합 친화성을 측정하는 방법은, 예를 들면, Journal of Immunological Methods, 1995, 185: 181-190; 및 Protein Science, 2000, 9: 1838-1846에 기재되어 있다. 따라서, 본 발명은 이러한 공지된 프로그램에 의해 HLA 항원에 결합하는 것으로 확인된 IQGAP3의 펩티드를 포함한다.

본 발명의 상기 노나펩티드 및 데카펩티드는 상기 펩티드가 CTL 유도성을 유지하는 한, 부가적인 아미노산 잔기를 인접시킬 수 있다. CTL 유도성을 가진 이러한 펩티드는 전형적으로는 약 40 아미노산 미만, 흔히 약 20 아미노산 미만, 보통 약 15 아미노산 미만이다. 본 발명의 상기 노나펩티드 및 데카펩티드에 인접하는 특정 아미노산 서열(예를 들면, 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 또는 150 중에서 선택되는 아미노산 서열로 구성된 펩티드)은 원래의 펩티드의 CTL 유도성을 손상시키지 않는 한 제한되지 않고 임의의 종류의 아미노산으로 구성될 수 있다. 따라서, 또한 본 발명은 CTL 유도성 및 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 또는 150 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 제공한다.

일반적으로, 단백질에서 하나, 둘 또는 다수의 아미노산의 변형은 상기 단백질의 기능에 영향을 끼치지 않으며, 몇몇의 경우에는 심지어 본래 펩티드의 원하는 기능을 강화시킬 수 있다. 사실, 변형된 펩티드(즉, 본래의 참조 서열과 비교하여, 하나, 둘 또는 다수의 아미노산 잔기가 변형된(즉, 치환, 첨가, 결실 또는 삽입) 아미노산 서열로 구성되는 펩티드)는 본래 펩티드의 생물학적 활성을 유지한다고 알려지고 있다(Mark et al., Proc Natl Acad Sci USA 1984, 81: 5662-6; Zoller and Smith, Nucleic Acids Res 1982, 10: 6487-500; Dalbadie-McFarland et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79: 6409-13). 따라서, 하나의 실시예에서, 본 발명의 상기 펩티드는 CTL 유도성 및 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 또는 150 중에서 선택되는 아미노산 서열에서 하나, 둘 또는 심지어 다수의 아미노산이 삽입, 첨가, 결실 및/또는 치환된 아미노산 서열을 모두 가질 수 있다.

당업자는 단일 아미노산 또는 아미노산의 일부 비율이 바뀌는, 아미노산 서열 각각의 삽입 또는 치환이 본래 아미노산 측쇄의 특성을 보존하는 결과를 내는 경향이 있음을 알고 있다. 보통, 이들은 단백질의 변화가 본래 단백질과 유사한 기능을 갖는 변형된 단백질을 만드는 "보존적 치환" 또는 "보존적 변형"이라고 일컫는다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 잘 알려져 있다. 보존되는 아미노산 측쇄 특성의 예는 예를 들어, 소수성 아미노산(A, I, L, M, F, P, W, Y, V), 친수성 아미노산(R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), 및 하기의 작용기 또는 공통적인 특성을 갖는 측쇄가 포함된다: 지방족 측쇄(G, A, V, L, I, P); 측쇄를 포함하는 수산기 그룹(S, T, Y); 측쇄를 포함하는 황 원자(C, M); 측쇄를 포함하는 카르복실산 및 아미드(amide)(D, N, E, Q); 측쇄를 포함하는 염기(R, K, H); 및 측쇄를 포함하는 방향족(H, F, Y, W). 아울러, 하기의 8개 그룹은 각각 보존적 치환으로서 당업계에서 서로 허용될 수 있는 아미노산을 포함한다:

1) 알라닌(A), 글라이신(G);

2) 아스파르트산(D), 글루타민산(E);

3) 아스파르긴(N), 글루타민(Q);

4) 아르기닌(R), 라이신(K);

5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V);

6) 페닐알라닌(F), 타이로신(Y), 트립토판(W);

7) 세린(S), 트레오닌(T); 및

8) 시스테인(C), 메티오닌(M)(예를 들면, Creighton, Proteins 1984 참조).

이러한 보존적으로 변형된 펩티드는 또한 본 발명의 펩티드로 간주된다. 그러나, 본 발명의 펩티드는 이에 한정되지 않으며 상기 변형된 펩티드가 본래 펩티드의 CTL 유도성을 유지하는 한, 비-보존적 변형을 포함할 수 있다. 더욱이, 변형된 펩티드는 CTL 유도성 펩티드의 다형성 변이, 종간 유사체(interspecies homologues), 및 IQGAP3의 대립 유전자를 제외하지 않는다.

필요한 CTL 유도성을 유지하기 위하여, 소수(예를 들어, 1, 2 또는 몇몇) 또는 낮은 퍼센트의 아미노산을 변형(삽입, 첨가, 및/또는 치환)할 수 있다. 본 명세서에서, 상기 용어 "몇몇"은 5개 미만의 아미노산, 예를 들어, 4개 또는 3개 이하를 의미한다. 아미노산의 퍼센트는 바람직하게 20% 미만이며, 보다 바람직하게는 15% 미만이며, 그보다 더욱 바람직하게는 10% 미만 또는 1 내지 5%이다.

본 발명의 바람직한 펩티드의 상동성 분석은, IQGAP3-A24-9-955(서열번호: 2), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호: 4), IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21), IQGAP3-A24-9-26(서열번호: 25), IQGAP3-A24-9-137(서열번호: 29), IQGAP3-A24-9-63(서열번호: 32), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호: 35), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호: 37), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호: 49), IQGAP3-A24-10-345(서열번호: 53), IQGAP3-A24-10-1614(서열번호: 55), IQGAP3-A24-10-191(서열번호: 56), IQGAP3-A24-10-314(서열번호: 57), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호: 62), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호: 63), IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67), IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85), IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148) 및 IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)이 다른 공지의 인간 유전자 산물로부터 유래한 펩티드와 현저한 유사성을 가지고 있지 않다는 것을 확인하였다. 따라서, 이러한 펩티드가 면역치료를 위해 사용되었을 경우, 알려지지 않거나 원하지 않은 면역 반응을 발생시킬 수 있는 가능성은 매우 낮다. 따라서, 이러한 펩티드는 신장암, 식도암, 위암, 폐암, 유방암, 방광암 및 췌장암과 같은, 암 세포에서 IQGAP3에 대한 종양 환자의 면역력을 유도하는데 매우 유용할 것으로 예상된다.

면역치료의 문맥으로 이용될 때, 본 발명의 펩티드는 세포 또는 엑소솜의 표면에 제시되며, 바람직하게는 HLA 항원과의 복합체로서 제시된다. 따라서, CTLs을 유도할 뿐만 아니라, 상기 HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성을 가진 펩티드를 선택하는 것이 바람직하다. 이러한 목적을 위해서, 상기 펩티드는 증가된 결합 친화성을 갖는 변형된 펩티드를 생산하기 위하여, 아미노산 잔기들의 치환, 삽입, 결실 및/또는 첨가를 통해서 변형될 수 있다. 자연적으로 나타난 펩티드와 더불어, HLA 항원에 결합함으로써 나타나는 펩티드 서열의 규칙성은 이미 알려져 있으며(J Immunol 1994, 152: 3913; Immunogenetics 1995, 41: 178; J Immunol 1994, 155: 4307), 이러한 규칙성에 기반한 변형은 본 발명의 면역원성 펩티드에 도입될 수 있다. 예를 들면, HLA-A24 결합을 증가시키기 위하여, N 말단의 두 번째 아미노산을 페닐알라닌(phenylalanine), 타이로신(tyrosine), 메티오닌(methionine), 또는 트립토판(tryptophan)으로 치환, 및/또는 C 말단의 아미노산을 페닐알라닌(phenylalanine), 류신(leucine), 이소류신(isoleucine), 트립토판(tryptophan), 또는 메티오닌(methionine)으로 치환하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, N 말단의 두 번째 아미노산이 페닐알라닌(phenylalanine), 타이로신(tyrosine), 메티오닌(methionine), 또는 트립토판(tryptophan)으로 치환, 및/또는 C 말단의 아미노산이 페닐알라닌(phenylalanine), 류신(leucine), 이소류신(isoleucine), 트립토판(tryptophan), 또는 메티오닌(methionine)으로 치환된, 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63 67의 아미노산 서열을 갖는 펩티드는 본 발명에 의해서 포함된다. 반면에, 높은 HLA-A02 결합 친화성을 가진 펩티드는 N 말단의 두 번째 아미노산이 류신(leucine) 또는 메티오닌(methionine)으로 치환되고, C 말단의 아미노산은 발린(valine) 또는 류신(leucine)으로 치환된다. 따라서, N 말단의 두 번째 아미노산이 류신 또는 메티오닌으로 치환, 및/또는 C 말단의 아미노산이 발린 또는 류신으로 치환된, 서열번호 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 또는 150의 아미노산 서열을 갖는 펩티드는 본 발명에 의해서 포함된다. 치환은 마지막 아미노산 위치뿐만 아니라, 펩티드의 TCR 인식 가능 부위에서 도입될 수 있다. 다수의 연구에서 예를 들어 CAP1, p53_(264-272), Her-2/neu_(369-377) 또는 gp100_(209-217)의 펩티드에서의 아미노산 치환은 본래와 동등하거나 또는 우수하다는 것을 보였다(Zaremba et al. Cancer Res. 57, 4570-4577, 1997, T. K. Hoffmann et al. J Immunol.(2002) Feb 1;168(3):1338-47., S. O. Dionne et al. Cancer Immunol immunother.(2003) 52: 199-206, 및 S. O. Dionne et al. Cancer Immunology, Immunotherapy(2004) 53, 307-314).

또한, 본 발명은 상기 펩티드의 N 및/또는 C 말단에 하나 내지 두개의 아미노산의 첨가를 고려한다. 또한 이러한 높은 HLA 항원 결합 친화성을 가지면서 CTL 유도성을 보유하는 변형된 펩티드는 본 발명에 포함된다.

그러나, 상기 펩티드 서열이 상이한 기능을 갖는 내인성 또는 외인성의 아미노산 서열의 일부와 동일할 경우, 특이적 물질에 대한 자가면역 질환 및/또는 알러지 반응과 같은 부작용이 유도될 수 있다. 따라서, 상기 펩티드의 서열과 일치하는 다른 단백질의 아미노산 서열과 일치하는 경우를 방지하기 위하여, 우선 이용가능한 데이타베이스를 이용하여 상동성 검색을 수행하는 것이 바람직하다. 목적 펩티드와 비교하여 1개 또는 2개 아미노산의 차이가 있는 펩티드조차 존재하지 않는다는 상동성 검색 결과가 확실해진다면, 상기 목적 펩티드는 이의 HLA 항원과의 결합 친화성, 및/또는 상기와 같은 부작용의 위험이 없는 CTL 유도성을 증가시키기 위하여 변형될 수 있다.

비록 상기 기재된 바와 같이 HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성을 갖는 펩티드는 매우 효과적일 것으로 예상되지만, 지표로서 높은 결합 친화성의 존재에 따라 선택된 상기 후보 펩티드들은 CTL 유도성의 존재에 대해 더욱 조사된다. 여기에서, 구문 "CTL 유도성"은 항원 제시 세포에 제시될 때, 세포독성림프구(CTLs)를 유도하는 펩티드의 능력을 의미한다. 나아가, "CTL 유도성"은 상기 펩타이드의 CTL 활성 유도, CTL 증식, 표적 세포의 CTL 용해 증진, 및 CTL IFN-감마 생성을 증가시키는 능력을 포함한다.

CTL 유도성의 확인은 인간 MHC 항원(예를 들면, B-림프구, 대식세포, 및 수지상 세포(DCs))를 운반하는 항원 제시 세포, 또는 보다 구체적으로 인간 말초혈액 단핵구 백혈구로부터 유래된 DC의 유도 후, 상기 펩티드로 자극한 다음, CD8-양성 세포와 혼합한 후, 표적 세포에 대하여 CTL에 의해서 생성되고 방출된 IFN-감마를 측정하는 것에 의해서 수행된다. 반응 체계로서, 인간 HLA 항원을 발현하도록 제작된 형질전환 동물(예를 들어, BenMohamed L, Krishnan R, Longmate J, Auge C, Low L, Primus J, Diamond DJ, Hum Immunol 2000 Aug, 61(8): 764-79, Related Articles, Books, Linkout Induction of CTL response by a minimal epitope vaccine in HLA A*0201/DR1 transgenic mice: dependence on HLA class Ⅱ restricted T(H) response에 기재됨)이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 표적 세포는 ⁵¹Cr 등으로 방사선 표지될 수 있으며, 세포독성 활성은 상기 표적세포로부터 방출되는 방사능으로부터 산출될 수 있다. 대안적으로, CTL 유도성은 고정화된 펩티드를 운반하는 항원 제시 세포(APCs)의 존재하에 CTL에 의해서 생성되고 방출되는 IFN-감마(IFN-gamma)를 측정하고, 항-IFN-감마 단일클론 항체를 이용하여 상기 배지 내의 억제 구간을 가시화함으로써 측정할 수 있다.

상기 기재한 바와 같이 상기 펩티드의 CTL 유도성 검사 결과, HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성을 갖는 펩티드들은 반드시 높은 유도성을 갖지 않는다는 것이 밝혀졌다. 그러나, 상기 확인되고 검사된 펩티드 가운데, 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150의 아미노산 서열을 갖는 노나펩티드 또는 데카펩티드는, HLA 항원에 대한 높은 결합 친화성뿐만 아니라 특히 높은 CTL 유도성을 보이다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 이러한 펩티드들은 본 발명의 바람직한 실시예로서 시험된다.

또한, 상기 기재한 변형과 더불어, 본 발명의 펩티드는 결과적으로 연결된 펩티드가 본래 펩티드의 요구되는 CTL 유도성을 유지하는 한, 다른 물질들과 연결될 수 있다. 적합한 물질들의 예로는 하기를 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 펩티드, 지질, 당 및 당 사슬, 아세틸기(acetyl group), 천연 및 합성 폴리머 등. 상기 펩티드는 본래 펩티드의 생물학적 활성을 파괴시키지 않는 한, 글리코실화(glycosylation), 측쇄 산화, 또는 인산화(phosphorylation), 등과 같은 변형을 포함할 수 있다. 이러한 종류의 변형은 추가적인 기능을 부여하기 위하여(예를 들면, 표적화 기능, 및 전달 기능), 또는 상기 폴리펩티드를 안정화시키기 위하여 수행될 수 있다.

예를 들면, 폴리펩티드의 세포외(in vivo) 안정성을 증기시키기 위하여, 당업계에는 D-아미노산, 아미노산 미메틱스(mimetics) 또는 비자연적인 아미노산을 도입할 수 있다는 것이 알려져 있다; 또한 이러한 개념은 본 발명의 폴리펩티드에 적용될 수 있다. 폴리펩티드의 안정성은 다양한 방법으로 분석될 수 있다. 예를 들어, 펩티드가수분해효소 및 인간 혈장 및 혈청과 같은, 다양한 생물학적 배지가, 안정성을 시험하기 위하여 사용될 수 있다(예를 들면, Verhoef et al., Eur J Drug Metab Pharmacokin 1986, 11: 291-302 참조).

여기에서, 또한 본 발명의 펩티드는 "IQGAP3 펩티드(들)" 또는 "IQGAP3 폴리펩티드(들)"로서 기재될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 HLA 항원과 조합된 복합체로서 세포(예를 들면, 항원 제시 세포)의 표면 또는 엑소솜에 제시된 다음 CTL을 유도한다. 따라서, 세포 또는 엑소솜의 표면에 제시된 HLA 항원과 복합체를 형성하는 펩티드는 본 발명에 포함된다. 이러한 엑소솜은 바람직하게, 예를 들어 일본 특허 출원 코효(Kohyo) 공개번호 Hei 11-510507 및 WO99/0349에 기재된 방법을 이용하여 제조될 수 있으며, 치료 및/또는 예방의 대상이 되는 환자로부터 수득한 APC를 이용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 상기 펩티드를 제시하는 엑소솜 또는 세포는 백신으로서 접종될 수 있다.

상기 복합체에 포함되는 HLA 항원의 형태는 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 개체의 HLA 항원과 반드시 일치해야한다. 예를 들면, 일본 인구에 있어서, HLA-A24 및 HLA-A02가 일반적이며 따라서 일본인 환자의 치료를 위해서 적합하다. 일본인 및 백인에게 높게 발현되는 A24 및 A02 형태를 이용하는 것은 효과적인 결과를 얻는데 알맞으며, 또한 서브타입의 사용을 확인하였다. 전형적으로, 임상에서는, 치료를 필요로 하는 환자의 HLA 항원 형태가 우선 검사되고, 이는 특정 학원에 대한 높은 결합 친화성 또는 항원 제시에 의해서 CTL 유도성을 갖는 펩티드의 선택에 적합하게 이용할 수 있다.

바람직하게는 엑소솜 또는 세포에 대한 A24 및 A02 형태의 HLA 항원을 사용할 경우, 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 펩티드가 사용된다.

Ⅲ. IQGAP3 펩티드의 제조

본 발명의 펩티드는 공지된 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 펩티드는 재조합 DNA 기술 또는 화학적 합성을 사용하여, 합성적으로 제조될 수 있다. 본 발명의 펩티드는 각각 합성되거나, 둘 또는 이상의 펩티드로 구성되는 긴 폴리펩티드로서 합성될 수 있다. 상기 펩티드는 자연적으로 형성되는 숙주 세포 단백질 및, 이의 단편, 또는 다른 화학적 물질이 실질적으로 제거되도록 분리, 즉 정제될 수 있다. 합성에 적용할 수 있는, 종래 펩티드 합성 방법의 예는 하기를 포함하나, 이에 한정되지 않는다:

(ⅰ) 펩티드 합성(Peptide Synthesis), Interscience, New York, 1966;

(ⅱ) 단백질(The Proteins), Vol. 2, Academic Press, New York, 1976;

(ⅲ) 펩티드 합성(Peptide Synthesis)(일본어), Maruzen Co., 1975;

(ⅳ) 펩티드 합성의 기본 및 실험(일본어), Maruzen Co., 1985;

(ⅴ) 제약 개발(두 번째 권)(일본어), Vol. 14(펩티드 합성), Hirokawa, 1991;

(ⅵ) WO99/67288; 및

(ⅶ) Barany G. & Merrifield R.B., Peptides Vol. 2, "고상 펩티드 합성(Solid Phase peptide synthesis)", Academic Press, New York, 1980, 100-118.

대안적으로, 본 발명의 펩티드는 펩티드를 생산하기 위한 모든 공지된 유전 공학 기술을 적용하여 획득될 수 있다(예를 들면, Morrison J, J Bacteriology 1977, 132: 349-51; Clark-Curtiss & Curtiss, Methods in Enzymology(eds. Wu et al.) 1983, 101: 347-62). 예를 들면, 우선, 발현할 수 있는 형태로 목적 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 벡터(예를 들면, 프로모터 서열에 상응하는 조절 서열의 하위 단계)가 제조되고 적합한 숙주 세포에 형질전환된다. 그리고 상기 숙주 세포는 관심있는 펩티드를 생산하기 위하여 배양된다. 또한, 상기 펩티드는 시험관 내 번역 체계(in vitro translation system)를 채택하여 시험관 내에서 생성될 수 있다.

Ⅳ. 폴리뉴클레오티드( Polynucleotides )

또한, 본 발명은 상기 언급된 본 발명의 임의의 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클리레오티드를 제공한다. 이들은 IQGAP3 유전자의 보존적으로 변형된 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드뿐만 아니라 자연적으로 발생되는 IQGAP3 유전자(GenBank 등록번호 NM_178229(서열번호: 153))로부터 유래되는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 이하, 구문 "보존적으로 변형된 뉴클레오티드 서열"은 동일하거나 필수적으로 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 서열을 의미한다. 유전자 코드의 퇴화도(degeneracy)로 인하여, 대다수의 기능적으로 동일한 핵산은 특정한 단백질을 암호화한다. 예를 들면, 코돈 GCA, GCC, GCG, 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 암호화한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해서 특정화되는 각 위치에서, 상기 코돈은 암호화되는 폴리펩티드를 변화시키지 않고 이에 상응되는 임의의 코돈으로 변화할 수 있다. 이러한 핵산 변이는 "침묵 변이(silent variation)"이며, 이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류이다. 또한, 본 명세서에서 펩티드를 암호화하는 모든 핵산 서열은 상기 핵산의 모든 침묵 변이의 가능성을 기재한다. 일반적인 기술의 하나는 핵산 내의 각 코돈(예외 일반적으로 메티오닌(methionine)을 위한 유일한 코돈인 AUG, 및 트립토판(tryptophan)을 위한 유일한 코돈인, TGG)은 기능적으로 동일한 분자를 생산하기 위하여 변형되는 것을 인식할 수 있다. 따라서, 펩티드를 암호화하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각의 공개된 서열에 암시적으로 기재된다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 DNA, RNA, 및 이의 변이체로 구성될 수 있다. DNA는 A, T, C, 및 G와 같은 염기로 적절하게 구성되며, RNA에서는 T가 U로 치환된다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 아미노산 서열 사이에 삽입하거나 또는 삽입하지 않은 채로, 본 발명의 다양한 펩티드를 암호화할 수 있다. 예를 들면, 삽입하는 아미노산 서열은 폴리뉴클레오티드 또는 번역된 펩티드의 절단 위치(예, 효소 인식 서열)를 제공할 수 있다. 더욱이, 상기 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 펩티드를 암호화하는 코딩 서열에 대하여 임의의 추가적인 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 폴리뉴클레오티드는 상기 펩티드의 발현을 위하여 필요한 조절 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 마커 유전자 등이 있는 발현 벡터(플라스미드)일 수 있다. 일반적으로, 이러한 재조합 폴리뉴클레오티드는 예를 들면, 폴리머라아제(polymerase) 및 엔도뉴클레아제(endonuclease)를 이용한 종래의 재조합 기술을 통해 폴리뉴클레오티드의 조작에 의해서 제조될 수 있다.

재조합 및 화학적 합성 기술 모두는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 생산하는데 이용될 수 있다. 예를 들면, 폴리뉴클레오티드는 컴피턴트(competent) 세포로 형질전환되었을 때 발현될 수 있는, 적합한 벡터 내로 삽입함으로써 생산될 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오티드는 PCR 기술을 이용하여 증폭되거나 적합한 숙주에서 발현될 수 있다(예를 들면, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989 참조). 대안적으로, 폴리뉴클레오티드는 Beaucage SL & Iyer RP, Tetrahedron 1992, 48: 2223-311; Matthes et al., EMBO J 1984, 3: 801-5에 기재된 바와 같이, 고체상(solid phase) 기술을 이용하여 합성될 수 있다.

Ⅴ. 항원 제시 세포( Antigen - presenting cells , APCs )

또한, 본 발명은 HLA 항원과 본 발명의 펩티드 사이에 형성된 복합체를 그 표면에 제공하고 있는 항원 제시 세포(antigen-presenting cell, APCs)를 제공한다. 본 발명의 펩티드와 접촉 또는 본 발명의 펩티드를 암호화하는 발현가능한 형태의 뉴클레오티드를 도입함으로써 획득되는 APCs는 치료 및/또는 예방의 대상이 되는 환자로부터 유래될 수 있으며, 그 자체로 백신으로서 투여되거나 또는 본 발명의 펩티드, 엑소솜, 또는 세포독성 T 세포를 포함하는 다른 약물과의 조합으로서 투여될 수 있다.

상기 APC는 특정 종류의 세포에 한정되지 않으나, 림프구에 의해서 인식되기 위하여 그들의 세포 표면에 단백질 항원을 제시한다는 것으로 알려져 있는, 수지상 세포(DCs), 랑게르한스 세포(Langerhans cell), 대식세포, B 세포, 및 활성화된 T 세포를 포함한다. DC는 APCs 중에서 강력한 CTL 유도 활성을 갖는 대표적인 APC이기 때문에, DCs는 본 발명의 APCs로서 사용할 수 있다.

예를 들면, APC는 말초 혈액 단핵구로부터 유래된 DCs에 의해서 유도되고, 그런 다음 시험관 내, 생체 외(ex vivo), 또는 생체 내(in vivo)에서 본 발명의 펩티드와 접촉(자극)하여 수득될 수 있다. 본 발명의 펩티드가 상기 개체에 투여될 경우, 본 발명의 펩티드를 제시하는 APCs는 개체의 체내에서 유도된다. 구문 "APC 유도"는 HLA 항원과 본 발명의 펩티드 사이에 형성된 복합체를 세포 표면에 제시하기 위해 세포와 본 발명의 펩티드, 또는 본 발명의 상기 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드를 접촉(자극)하는 것을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩티드를 상기 APCs에 도입하여, 상기 APCs가 상기 펩티드를 제시할 수 있게 한 뒤, 상기 APCs는 백신으로서 개체에 투여될 수 있다. 예를 들면, 생체 외(ex vivo) 투여는 하기의 단계를 포함한다:

a: 첫 번째 개체로부터 APCs를 수집하는 단계;

b: 단계 a의 APCs와 펩티드를 접촉시키는 단계; 및

c: 펩티드가 담지된 APCs를 두 번째 개체에게 투여하는 단계.

상기 첫 번째 개체 및 두 번째 개체는 동일한 개체일 수 있으며, 또는 다른 개체일 수도 있다. 대안적으로, 본 발명에 따르면, 항원 제시 세포를 유도하기 위한 약학적 조성물의 제조를 위한 본 발명의 펩티드의 용도가 제공된다. 또한, 본 발명은 항원 제시 세포를 유도하는 약학적 조성물을 제조하기 위한 방법 또는 과정을 제공한다. 나아가, 또한 본 발명은 항원 제시 세포를 유도하기 위한 본 발명의 펩티드를 제공한다. 상기 단계 (b)에서 획득한 APCs는 백신으로서 상기 개체에게 투여될 수 있다.

본 발명의 하나의 측면에 따르면, 상기 APCs는 높은 수준의 CTL 유도성을 갖는다. "높은 수준의 CTL 유도성" 용어에 있어서, 상기 높은 수준이란 펩티드와 접촉하지 않거나 CTL을 유도할 수 없는 펩티드와 접촉한 APC에 의한 CTL 유도성 수준에 대한 상대적인 것이다. 이러한 높은 수준의 CTL 유도성을 갖는 APCs는 시험관 내(in vitro)에서 본 발명의 APCs 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 유전자를 전달하는 단계를 포함하는 방법에 의해서 제조될 수 있다. 상기 도입된 유전자는 DNAs 또는 RNAs 형태일 수 있다. 도입을 위한 방법의 예는, 리포펙타민(lipofection), 전기천공법(electroporation), 및 인산 칼슘(calcium phosphate) 방법과 같이, 당업계에서 일반적으로 수행되는 다양한 방법을 특정한 제한없이 이용될 수 있다. 보다 구체적으로, 이는 Cancer Res 1996, 56: 5672-7; J Immunol 1998, 161: 5607-13; J Exp Med 1996, 184: 465-72; Published Japanese Translation of International Publication No. 2000-509281에 기재된 바에 따라 수행될 수 있다. 상기 유전자를 APCs에 전달함으로써, 상기 유전자는 상기 세포 내에서 전사, 번역 등을 거치며, 그리고 나서 수득된 단백질은 MHC 클래스 Ⅰ 또는 클래스 Ⅱ에 의해 처리되고, 펩티드를 제시하기 위하여 제시 기작(presentation pathway)을 통해서 진행된다.

Ⅵ. 세포독성 T 세포( Cytotoxic T cell )

본 발명의 임의의 펩티드에 대해서 유도되는 세포독성 T 세포는 생체 내(in vivo)에서 종양 관련 내피를 표적으로 하는 면역 반응을 강화하며 따라서 펩티드 그 자체와 유사한 유형으로, 백신으로서 사용될 수 있다. 따라서, 또한, 본 발명은 본 발명의 임의의 펩티드에 의해 특이적으로 유도 또는 활성화되는 분리된 세포독성 T 세포를 제공한다.

이러한 세포독성 T 세포는 (1) 개체에게 투여 또는 (2) 시험관 내(in vitro)에서 본 발명의 펩티드와 개체 유래된 APCs, 및 CD8-양성 세포, 또는 말초혈액 단핵구 백혈구를 접촉(자극)함으로써 수득될 수 있다.

본 발명의 펩티드를 제시하는 APCs로부터 자극됨으로써 유도되는, 상기 세포독성 T 세포는, 치료 및/또는 예방의 대상이 되는 환자로부터 유래될 수 있으며, 그 자체로 투여되거나, 또는 효과를 조절하기 위한 목적으로 본 발명의 펩티드 또는 엑소솜을 포함하는 다른 약물과 조합으로 투여될 수 있다. 상기 수득된 세포독성 T 세포는 본 발명의 펩티드를 제시하는 표적세포, 또는 예를 들면, 유도에 사용된 동일한 펩티드에 대해 특이적으로 작용한다. 상기 표적 세포는 내인성으로 IQGAP3를 발현하는 세포이거나, 또는 상기 IQGAP3 유전자가 형질감염된 세포일 수 있다; 그리고 상기 펩티드에 의해서 자극되기 때문에 본 발명의 펩티드를 세포 표면에 제시하는 세포는 활성화된 CTL 공격의 표적으로서도 사용할 수 있다.

Ⅶ. T 세포 수용체 (T cell receptor , TCR )

또한, 본 발명은 T 세포 수용체(TCR)의 서브유닛(subunit)을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 조성물, 및 이를 이용한 방법을 제공한다. 상기 TCR 서브유닛은 IQGAP3를 제시하는 종양 세포에 대하여 T 세포의 특이성을 줄 수 있는 TCRs을 형성하는 능력을 가진다. 당업계에 공지된 방법을 사용하여, 본 발명의 하나 또는 다수의 펩티드로 유도된 CTL에서 발현하는 TCR을 구성하는 알파(alpha-) 및 베타(beta-) 사슬이 동정될 수 있다(WO2007/032255 및 Morgan et al., J Immunol, 171, 3288(2003)). TCRs의 유도체는 높은 결합활성을 갖는 IQGAP3 펩티드를 나타내는 표적 세포와 결합할 수 있으며, 선택적으로 생체 내(in vivo) 및 시험관 내(in vitro)에서 IQGAP3 펩티드를 제시하는 표적 세포를 효과적으로 사멸시키는 것을 매개할 수 있다.

상기 TCR 서브유닛을 암호화하는 핵산 서열은 예를 들면 레트로바이러스 벡터(retroviral vector)와 같은 적합한 벡터 내로 도입될 수 있다. 이러한 벡터들은 당업계에 잘 알려졌다. 상기 핵산 또는 이들을 포함하는 벡터는 T 세포, 예를 들면, 환자로부터 유래한 T 세포 내로 유용하게 전이될 수 있다. 유리하게, 본 발명은 우수한 암 세포 사멸 특성을 갖는 변형된 T 세포를 신속하고 용이하게 생성하게 할 수 있도록 환자 자신의 T 세포(또는 다른 포유류의 T 세포)를 신속하게 변형시키는 규격화된 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 HLA-A24 또는 HLA-A02의 문맥에서, 예를 들면, 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150의 IQGAP3 펩티드와 결합하는 TCR 서브유닛 폴리펩티드를 암호화하는 핵산으로 형질도입함으로써 제조되는 CTLs을 제공한다. 상기 형질도입된 CTLs은 생체 내의 암 세포로 귀소할 수 있으며, 공지된 시험관 내 배양 방법에 의해 증폭될 수 있다(예를 들면, Kawakami et al., J Immunol., 142, 3452-3461(1989)). 본 발명의 상기 T 세포는 치료 또는 보호를 필요로하는 환자의 암을 치료 또는 방지하는데 유용한 면역원성 조성물을 제조하는데 사용될 수 있다(WO2006/031221).

방지 및 예방은 질환으로부터 사망 또는 질병률의 부담을 감소시킬 수 있는 임의의 활동을 포함한다. 방지 및 예방은 "첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 단계"에서 발생할 수 있다. 첫 번째 방지 및 예방은 질병의 발생을 피할 수 있는 반면, 두 번째 및 세 번째 단계의 방지 및 예방은 기능 복구 및 질환 관련된 합병증을 감소시킴으로써 이미 확립된 질환의 부정적인 효과를 감소시킬 뿐만 아니라, 질병 및 위급한 증상의 발달의 방지 및 예방에 목표를 둔다. 대안적으로, 방지 및 예방은, 예를 들면, 종양의 증식 및 전이를 감소시키는, 특정 질환의 심화를 경감시키는 것을 목적으로 하는 다양한 종류의 예방적 치료법을 포함한다.

암의 치료 및/또는 예방, 또는 이의 수술후 재발의 방지는 암 세포의 수술적 제거, 암성 세포 성장의 억제, 종양의 퇴화 또는 퇴행, 암 발생의 차도 및 억제의 유도, 종양 감소, 및 전이의 감소 또는 억제와 같은 하기의 단계의 임의의 것을 포함한다. 효과적으로 암을 치료 및/또는 예방하는 것은 사망률을 감소시키고, 암을 가진 개인의 예후를 개선시키며, 혈액 내 종양 마커의 수준을 감소시키며, 암에 동반되는 지각할 수 있는 증상들을 감소시킨다. 예를 들면, 증상의 감소 또는 개선은 효과적으로 치료를 구성하며 및/또는 상기 예방은 10%, 20%, 30% 또는 이상의 감소 또는 안정적인 질환을 포함한다.

Ⅷ. 약학적 제제 또는 조성물

IQGAP3 발현은 정상 조직에 비해서 다수의 위암에서 과발현되므로, 본 발명의 펩티드 또는 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 암의 치료 및/또는 예방, 및/또는 이의 수술 후 재발을 방지하기 위해서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방, 및/또는 이의 수술 후 재발을 방지하는 약학적 제제 또는 조성물을 제공하며, 이는 하나 또는 다수의 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 활성 성분으로 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩티드는 상기 엑소솜 또는 약학적 제제 또는 조성물로서 사용되는 APCs와 같은 세포의 임의의 표면에서 발현될 수 있다. 추가로, 상기 언급한 본 발명의 임의의 펩티드를 표적으로 하는 세포독성 T 세포는 또한 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물의 활성 성분으로서 사용될 수 있다.

또한, 또 다른 실시예에서, 본 발명은 암 치료를 위한 약학적 조성물 또는 약제를 제조하는데 있어서, 하기 중 선택되는 활성 성분의 용도를 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(b) 발현할 수 있는 형태로 본 명세서에 기재된 펩티드를 암호화하는 핵산,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포.

대안적으로, 본 발명은 암을 치료하는데 사용하기 위한 하기 중 선택되는 활성 성분을 추가로 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포.

대안적으로, 본 발명은 활성 성분으로서 하기 중 선택되는 활성 성분과 약학적 또는 생리학적으로 허용가능한 담체를 제형화하는 단계를 포함하는, 암을 치료하기 위한 약학적 조성물 또는 제제를 제조하는 방법 또는 과정을 추가로 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포.

또한, 또 다른 실시예에서, 본 발명은 하기 중 선택되는 활성 성분과 약학적 또는 생리학적으로 허용가능한 담체를 상기 활성 성분과 혼합하는 단계를 포함하는, 암을 치료하기 위한 약학적 조성물 또는 약제를 제조하기 위한 방법 또는 과정을 제공한다:

(a) 본 발명의 펩티드,

(c) 본 발명의 APC, 및

(d) 본 발명의 세포독성 T 세포.

대안적으로, 상기 본 발명의 약학적 조성물 또는 약제는 암의 예방 및 이의 수술 후 재발을 방지하기 위한 방법 중 어느 하나 또는 둘 모두를 위해서 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 백신으로서의 용도를 확인하였다. 본 발명의 문맥에 있어서, 상기 용어 "백신"("면역원성 조성물"도 의미함)은 동물에 주사되어 항종양 면역력을 유도하는 기능을 갖는 물질을 일컫는다.

상기 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 암의 치료 및/또는 방지에 사용될 수 있으며, 및/또는 개체 또는 특히 인간 및 특히 산업적으로 중요한 동물 또는 이에 한정되지 않지만, 가축 동물인 마우스, 쥐, 기니아 피그(guinea-pig), 토끼, 고양이, 개, 양, 염소, 돼지, 소, 말, 원숭이, 비비원숭이(baboon), 및 침팬지를 포함하는 동물에서 이의 수술 후 재발을 방지하는데 사용될 수 있다.

본 발명에 따르면, 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63 및 67 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 또는 서열번호: 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150 중에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 HLA-A24 또는 HLA-A02 제한적 에피토프 펩티드 또는 강력하고 특이적인 면역 반응을 유도할 수 있는 후보자라는 것을 발견하였다. 따라서, 서열번호: 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63 및 67의 아미노산 서열을 갖는 이러한 임의의 폴리펩티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물은 특히 HLA 항원이 HLA-A24인 개체에 투여되는 것이 더욱 적합하다. 반면에, 서열번호: 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150의 아미노산 서열을 갖는 이러한 임의의 폴리펩티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물은 특히 HLA 항원이 HLA-A02인 개체에 투여되는 것이 더욱 적합하다. 동일한 것이 이러한 폴리펩티드의 어느 것을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물에 적용된다.

본 발명의 약학적 제제 또는 조성물에 의해서 치료되어야 하는 암은 IQGAP3가 관련된, 예를 들면, 신장암, 식도암, 위암, 폐암, 유방암, 방광암 및 췌장암을 포함하는 모든 종류의 암을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 추가로 상기 언급한 활성 성분, 암 세포에 대하여 CTL을 유도할 수 있는 능력이 있는 다른 펩티드, 상기 다른 펩티드를 암호화하는 다른 폴리뉴클레오티드, 상기 다른 펩티드를 제시하는 다른 세포 등을 포함할 수 있다. 본 명세서에서, 암 세포에 대하여 CTL을 유도할 수 있는 능력이 있는 상기 다른 펩티드는 암 특이적 항원(예를 들면, 동정된 TAA)에 의해서 예시화되나, 이에 한정되지 않는다.

만약 필요하다면, 본 발명의 상기 약학적 제제 또는 조성물은 예를 들면, 본 발명의 임의의 펩티드와 같이, 물질이 활성 성분의 항종양 효과를 제한하지 않는 한, 선택적으로 활성 성분으로서 다른 치료적 물질을 포함할 수 있다. 예를 들면, 제형은 항염증성 약제 또는 조성물, 진통제, 화학요법제 등을 포함할 수 있다. 약제 자체 내의 다른 치료적 물질을 포함하는 것 이외에, 본 발명의 상기 약제는 또한 하나 또는 다수의 다른 약학적 제제 또는 조성물과 연속적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 약제 및 약학적 제제의 양은 예를 들면, 어떤 종류의 약학적 제제(들) 또는 조성물(들)이 사용되었는지, 치료되어야 할 질환, 및 투여 일정 및 경로 등에 따른다.

특히, 본 명세서에 언급된 성분에 추가로, 본 발명의 상기 약학적 제제 또는 조성물은 논의가 되는 형태의 제형을 갖는 종래의 다른 제제 또는 조성물을 포함할 수 있다고 이해된다.

본 발명의 하나의 실시예에서, 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 제조의 물품 및 예를 들면, 암과 같은 치료될 질환의 병리학적인 조건을 치료하는데 유용한 물질을 포함하는 키트에 포함될 수 있다. 상기 제조의 물품은 라벨(label)을 갖는 본 발명의 임의의 약학적 제제 또는 조성물의 용기(container)를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 병, 바이얼(vial), 및 테스트 튜브를 포함한다. 상기 용기는 유리 또는 플리스틱과 같은, 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 상기 용기 위의 라벨은 상기 약제 또는 조성물이 하나 또는 다수 조건의 질병의 치료 또는 예방을 위해서 사용된다는 것을 나타내야 한다. 또한, 상기 라벨은 투여 등에 대한 지시를 나타낼 수 있다.

상기 기재된 용기에 추가적으로, 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물을 포함하는 키트는 약학적으로 허용가능한 희석제가 들어 있는 두 번째 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 버퍼, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 이용을 위한 지시가 있는 사용 설명서를 포함하는 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

상기 약학적 조성물은, 가능하다면, 활성 성분을 포함하는 하나 또는 다수의 유닛 복용량 형태를 포함하는 팩(pack) 또는 디스펜서(dispenser) 장치에 제시될 수 있다. 상기 팩은, 예를 들면, 금속 또는 브리스터 팩(blister pack)과 같은, 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서 장치는 투여를 위한 지시서와 수반될 수 있다.

(1) 활성 성분으로서 상기 펩티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물

본 발명의 상기 펩티드는 약학적 제제 또는 조성물로서, 만약 필요하다면, 종래의 제형 방법에 의해서 제형화된 것으로 직접적으로 투여될 수 있다. 후자의 경우, 본 발명의 펩티드에 추가로, 약물에 일반적으로 사용되는 담체, 첨가제 등을 특정한 제한 없이 포함할 수 있다. 이러한 담체의 예는 멸균수, 생리식염수, 인산완충액, 배양액 등이 있다. 더욱이, 상기 약학적 제제 또는 조성물은 필요에 따라, 안정화제(stabilizer), 현탁액(suspension), 보존제(preservative), 계면활성제(surfactant) 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 제제 또는 조성물은 항암 목적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 생체 내(in vivo)에서 CTL을 유도하기 위하여, 본 발명의 펩티드 둘 또는 그 이상으로 구성된 조합으로서 제조될 수 있다. 상기 펩티드 조합은 칵테일(cocktail)의 형태를 취할 수 있으며 또는 표준 기술을 이용하여 서로 결합될 수 있다. 예를 들면, 상기 펩티드는 화학적으로 연결되거나 또는 단일 융합 폴리펩티드 서열로서 발현될 수 있다. 상기 조합 내의 펩티드는 동일하거나 다를 수 있다. 본 발명의 펩티드를 투여함으로써, 상기 펩티드는 APCs의 HLA 항원에 의하여 높은 농도로 제시된 뒤, 상기 나타난 펩티드와 HLA 항원 사이에 형성된 복합체에 대하여 특이적으로 반응하는 CTL이 유도된다. 대안적으로, 본 발명의 임의의 펩티드를 그 세포 표면에 제시하는 APCs는 상기 개체로부터 APCs(예를 들면, DCs)를 제거함으로써 획득되며, 이는 본 발명의 펩티드에 의해서 자극되며, CTL은 이러한 APCs(예를 들면, DCs)를 개체에 재투여함으로써 개체 내에서 유도되며, 그 결과, 암 세포에 대한 공격성이 증가할 수 있다.

또한, 본 발명의 펩티드를 활성 성분으로 포함하는, 암의 치료 및/또는 방지를 위한 약학적 제제 또는 조성물은, 세포의 면역력을 효과적으로 확립시킨다고 알려진 보조제를 포함할 수 있다, 대안적으로, 상기 약학적 제제 또는 조성물은 다른 활성 성분과 함께 투여되거나 또는 과립으로 제조되어 투여될 수 있다. 보조제는 면역학적 활성을 갖는 단백질과 함께(또는 연속적으로) 투여되었을 때 상기 단백질에 대한 면역 반응을 강화시키는 화합물을 일컫는다. 본 명세서에서 보조제는 하기의 문헌에 기재된 바를 포함한다(Clin Microbiol Rev 1994, 7: 277-89). 적합한 보조제의 예로는 인산 알루미늄(aluminum phosphate), 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide), 명반(alum), 콜레라 독소(cholera toxin), 살모넬라 독소(salmonella toxin) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

더욱이, 상기 펩티드가 미세한 마이크로미터 직경의 비드에 결합되어 있는 리포솜(liposome) 제형, 과립 제형, 및 지질이 상기 펩티드에 결합되어 있는 제형이 일반적으로 사용될 수 있다.

일부 실시예에서, 상기 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 CTL을 개시하는(prime) 성분을 추가로 포함할 수 있다. 지질은 생체 내에서 바이러스 항원에서 CTL을 개시할 수 있는 제제 또는 조성물로서 확인되었다. 예를 들면, 팔미트산(palmitic acid) 잔기는 엡실론(epsilon) -및 라이신 잔기의 알파-아미노 그룹에 붙을 수 있으며, 그 뒤 본 발명의 펩티드에 연결될 수 있다. 상기 리피드 펩티드는 그런 다음 리포솜에 결합되거나, 또는 보조제에 유화되어 미셀(micelle) 또는 입자(particle)로 직접적으로 투여될 수 있다. CTL 반응의 리피드 제조의 또 다른 예로서, 트리팔미토일-S-글리세릴시스테인리세릴-세린(tripalmitoyl-S-glycerylcysteinlyseryl-serine, P3CSS)과 같은 E. coli 지질단백질은 적절한 펩티드에 공유 결합되었을 때, CTL을 개시하는데 사용될 수 있다(예를 들면, Deres et al., Nature 1989, 342: 561-4 참조).

투여의 방법은 경구, 피내, 피하, 정맥 등, 및 표적 위치에 근접한 곳에 전신 투여 또는 국소 투여할 수 있다. 상기 투여는 단일 투여 또는 다수의 투여에 의해서 부스팅되어 수행될 수 있다. 본 발명의 펩티드의 복용량은 치료되는 질병, 환자의 나이, 체중, 투여 방법 등에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 보통 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎, 예를 들면, 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎이며, 며칠 내지 몇 달에 한 번씩 투여될 수 있다. 당업자는 적합한 복용량을 적절하게 선택할 수 있다.

(2) 유효 성분으로서 폴리뉴클레오티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물

또한, 상기 본 발명의 약학적 제제 또는 조성물은 본 명세서에 기재된 발현할 수 있는 형태의 펩티드를 암호화하는 핵산을 포함할 수 있다. 여기서, 상기 구문 "발현할 수 있는 형태"는 상기 폴리뉴클레오티드가 세포에 도입되었을 때, 항종양 면역력을 유도할 수 있는 폴리뉴클레오티드로서 생체 내(in vivo)에서 발현하는 것을 의미한다. 예시된 실시예에서, 관심있는 폴리뉴클레오티드의 핵산 서열은 상기 폴리뉴클레오티드의 발현에 필요한 조절 요소(regulatory element)를 포함한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 표적 세포의 게놈 내에 안정적으로 삽입되기 위하여 구비될 수 있다(예를 들면, 상동성 재조합 카세트 벡터에 대한 기술을 위한 Thomas KR & Capecchi MR, Cell 1987, 51: 503-12 참조). 예를 들면, Wolff et al., Science 1990, 247: 1465-8; 미국 특허 제 5,580,859; 5,589,466; 5,804,566; 5,739,118; 5,736,524; 5,679,647; 및 WO 98/04720을 참조한다. DNA 기반한 전달 기술의 예로는 "네이키드 DNA(naked DNA)", 촉진된(부피바카인(bupivacaine), 폴리머(polymer), 펩티드-매개) 전달, 양이온성 지질 복합체, 및 입자-매게("유전자 총(gene gun)") 또는 압력-매개 전달(예를 들면, 미국 출원 제 5,922,687호 참조)을 포함한다.

또한, 본 발명의 펩티드는 바이러스 또는 박테리아 벡터에 의해서 발현될 수 있다. 발현 벡터의 예는 백시니아(vaccinia) 또는 계두(fowlpox)와 같은 강화된 바이러스 숙주를 포함한다. 이러한 접근은, 예를 들면, 상기 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드를 발현하는 벡터와 같은, 백시니아 바이러스의 이용을 수반한다. 숙주에 도입한 후, 상기 재조합 백시니아 바이러스는 상기 면역원성 펩티드를 발현하고, 이로인하여 면역 반응이 유발된다. 면역화 프로토콜에 있어서 유용한 백시니아 벡터 및 방법은 예를 들면, 미국 특허 제 4,722,848호에 기재된다. 또 다른 벡터는 BCG(Bacille Calmette Guerin)이다. BCG 벡터는 Stover et al., Nature 1991, 351: 456-60에 기재된다. 치료학적 투여 또는 면역화에 유용한 다양한 다른 벡터, 예를 들면, 아데노(adeno) 및 아데노 관련(adeno-associated) 바이러스, 레트로바이러스(retroviral) 벡터, 살모넬라 티피(Salmonella typhi) 벡터, 무독화시킨 탄저균 독소(detoxified anthrax toxin) 벡터 등이 명백할 것이다. 예를 들면, Shata et al., Mol Med Today 2000, 6: 66-71; Shedlock et al., J Leukoc Biol 2000, 68: 793-806; Hipp et al., In Vivo 2000, 14: 571-85를 참조한다.

폴리뉴클레오티드의 환자에게로의 전달은, 상기 환자가 폴리뉴클레오티드를 운반하는 벡터에 직접적으로 노출되는 직접적, 또는 세포가 우선 시험관 내에서 관심있는 폴리뉴클레오티드를 이용하여 형질전환된 후, 상기 세포를 환자에게 이식하는 간접적으로 될 수 있다. 이러한 두 가지 접근은 각각 생체 내(in vivo) 및 생체 외(ex vivo) 유전자 치료법으로서 알려져 있다.

유전자 치료 방법에 대한 일반적인 리뷰는, Goldspiel et al., Clinical Pharmacy 1993, 12: 488-505; Wu and Wu, Biotherapy 1991, 3: 87-95; Tolstoshev, Ann Rev Pharmacol Toxicol 1993, 33: 573-96; Mulligan, Science 1993, 260: 926-32; Morgan & Anderson, Ann Rev Biochem 1993, 62: 191-217; Trends in Biotechnology 1993, 11(5): 155-215를 참조한다. 본 발명에서 또한 사용될 수 있는 재조합 DNA 기술 분야의 일반적으로 알려진 방법은 eds. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, 1993; 및 Krieger, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY, 1990에 기재된다.

투여의 방법은 경구, 피내, 피하, 정맥 주사할 수 있으며, 표적 위치에 근접한 곳에 전신 투여 또는 국소 투여의 용도를 발견한다. 상기 투여는 단일 투여 또는 다수의 투여에 의해서 부스팅되어 수행될 수 있다. 적합한 수용체 내 폴리뉴클레오티드 또는 본 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 형질전환된 세포의 양은 치료되는 질병, 환자의 나이, 체중, 투여 방법 등에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 보통 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎이며, 예를 들면, 0.001 ㎎ 내지 1000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎이며, 며칠 내지 몇 달에 한 번씩 투여될 수 있다. 당업자는 적합한 복용량을 적절하게 선택할 수 있다.

Ⅸ. 펩티드, 엑소솜 , APCs 및 CTLs 을 사용한 방법

본 발명의 펩티드 및 이러한 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 APCs 및 CTLs을 유도하는데 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 엑소솜 및 APCs는 CTLs을 유도하는데 사용될 수 있다. 상기 펩티드, 폴리뉴클레오티드, 엑소솜 및 APCs는 화합물이 이들의 CTL 유도성을 억제하지 않는 한, 다른 화합물과 조합으로 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 언급한 임의의 약학적 제제 또는 조성물은 CTLs을 유도하는데 사용될 수 있으며, 이에 추가적으로, 상기 펩티드 및 폴리뉴클레오티드를 포함하는 약학적 제제 또는 조성물은 또한 하기 기재된 APCs를 유도하는데 사용될 수 있다.

(1) 항원 제시 세포(APCs)를 유도하는 방법

본 발명은 본 발명의 펩티드 또는 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 이용하여 APCs를 유도하는 방법을 제공한다. 상기 APCs의 유도는 "VI. 항원 제시 세포" 부분에 기재된 바에 따라 수행될 수 있다. 또한, 본 발명은 높은 수준의 CTL 유도성을 갖는 APCs를 유도하는 방법을 제공하며, 상기 유도성은 또한 "VI. 항원 제시 세포"의 항목하에 언급되었다.

(2) CTLs을 유도하는 방법

더욱이, 본 발명은 본 발명의 펩티드, 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 엑소솜 또는 상기 펩티드를 제시하는 APCs를 사용하여 CTLs을 유도하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 상기 펩티드 및 HLA 항원의 복합체를 인식하는 T 세포 수용체(TCR) 서브유닛을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 사용하여 CTLs을 유도하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, CTLs을 유도하는 방법은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 단계를 포함한다:

a. CD8-양성 T 세포를 HLA 항원과 본 발명의 상기 펩티드의 복합체를 표면에 제시하는 항원 제시 세포 및/또는 엑소솜과 접촉하는 단계, 및

b. 본 발명의 상기 펩티드와 HLA 항원의 복합체를 인식하는 TCR 서브유닛을 형성할 수 있는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 CD8 양성 T 세포에 도입하는 단계.

본 발명의 펩티드를 개체에 투여하였을 때, CTL은 개체의 체내에서 유도되며, 상기 종양 관련 내피를 표적하는 면역 반응의 힘을 강화시킨다. 대안적으로, 상기 펩티드 및 상기 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 생체 외(ex vivo) 치료 방법으로 사용될 수 있으며, 이는 개체 유래 APCs 및 CD8-양성 세포, 또는 말초혈액 단핵구 백혈구를 시험관 내에서 본 발명의 펩티드를 이용하여 접촉(자극)하고, CTL을 유도한 후, 상기 활성화된 CTL 세포는 개체로 돌아온다. 예를 들면, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:

a: 개체로부터 APCs를 수집하는 단계;

b: 단계 a의 APCs와, 상기 펩티드를 접촉시키는 단계;

c: 단계 b의 APCs와 CD⁸ ⁺T 세포를 혼합하고, CTLs을 유도하기 위하여 공동 배양하는 단계; 및

d: 단계 c의 공동 배양으로부터 CD⁸ ⁺ T 세포를 수집하는 단계.

대안적으로, 본 발명에 따르면, CTLs을 유도하는 약학적 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 펩티드의 용도가 제공된다. 더욱이, 본 발명은 또한 CTLs을 유도하기 위한 본 발명의 펩티드를 제공한다.

단계 d에 의해 수득된 세포독성 활성을 갖는 상기 CD⁸ ⁺ T 세포는 백신으로서 개체에 투여될 수 있다. 또한, 상기 단계 c에서 상기 CD⁸ ⁺ T 세포와 혼합된 APCs는 상기 "VI. 항원 제시 세포" 부분에 기재된 바와 같이, 본 발명의 펩티드를 암호화하는 유전자를 APCs에 전이시킴으로써 제조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명의 펩티드를 효과적으로 제시하는 모든 APC 또는 엑소솜은 본 발명의 방법에 사용될 수 있다.

하기 실시예들은 본 발명을 예시하고, 당업자가 이를 만들고 사용하는 것을 도와주기 위하여 제시된다. 이러한 실시예는 본 발명의 범위를 어느 방법으로든 한정하려는 의도가 아니다.

실시예

재료 및 방법

세포주

A24 림포블라스토이드 세포주(A24 lymphoblastoid cell line, A24LCL) 세포는 엡스테인 바(Epstein-bar) 바이러스를 HLA-A24 양성 인간 B 림프구에 형질전환함으로써 확립하였다. T2(HLA-A2) 인간 B-림포블라스토이드 세포주, 및 COS7은 ATCC로부터 구입하였다.

IQGAP3 로부터 유래된 펩티드의 후보자 선택

HLA-A*2402 및 HLA-A*0201 분자에 결합하는 IQGAP3로부터 유래된 9머(9-mer) 및 10-머(10-mer) 펩티드는 결합 예측 소프트웨어 "BIMAS"(http://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind)를 사용하여 측정되었으며, 이 알고리즘은 Parker KC et al.(J Immunol 1994, 152(1): 163-75) 및 Kuzushima K et al.(Blood 2001, 98(6): 1872-81)에 기재되어 있다. 이러한 펩티드는 표준 고체상 합성 방법에 따라 Sigma(Sapporo, Japan)에 의해서 합성되었으며, 역상 고속액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatographym, HPLC)에 의해서 정제되었다. 상기 펩티드의 순도(>90%) 및 펩티드의 동정은 각각 분석적인 HPLC 및 질량분석법 분석을 사용하여 확인하였다. 펩티드는 20 mg/㎖ 디메틸폭시화물(dimethylsulfoxide, DMSO)에 녹인 뒤 -80℃에 보관하였다.

시험관 내( In vitro ) CTL 유도

단핵구 유래 수지상 세포(DCs)는 인간 백혈구 항원(HLA)에 제시된 펩티드에 대하여 세포독성 T 림프구(CTL) 반응을 유도하기 위하여, 항원 지시 세포(APCs)로서 사용되었다. DCs는 하기 기재된 바와 같이 시험관 내에서 생성되었다(Nakahara S et al., Cancer Res 2003 Jul 15, 63(14): 4112-8). 구체적으로, 정상 지원자(HLA-A*2402 또는 HLA-A*0201 양성)로부터 피콜-플라크(Ficoll-Plaque)(Pharmacia) 용액에 의해서 분리된 말초단핵세포(PBMCs)는 단핵구 분획을 강화시키기 위하여, 플라스틱 조직 배양 디쉬(Becton Dickinson)에 부착에 의해서 분리하였다. 상기 단핵구가 강화된 집단은 2% 열-비활성화 자가조직 유래의 혈청(AS)를 포함하는 AIM-V 배지(Invitrogen)에서 과립구-대식세포 콜리니-자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)(R&D System) 1000 U/㎖ 및 인터루킨(interleukin, IL)-4(R&D System) 1000 U/㎖의 존재하에 배양되었다. 배양 7일 후, 상기 사이토카인 유도된 DCs는 37℃에서 3시간 동안 베타2-마이크로불린(beta2-microglobulin) 3 mcg/㎖의 존재하에 AIM-V 배지에서 20 mcg/㎖의 각각의 합성된 펩티드를 사용하여 펄스되었다. 상기 생성된 세포는 이러한 세포의 표면에, CD80, CD83, CD86 및 HLA 클래스 Ⅱ와 같은 DC-관련된 분자를 발현한다고 나타났다(결과는 보이지 않음). 그리고 이러한 펩티드 펄스된 DCs는 미토마이신 C(Mitomycin C, MMC)(30분 동안 30 mcg/㎖)에 의해서 비활성화되었으며 CD8 양성 분리 키트(Dynal)를 이용한 양성 선택에 의해서 획득된, 자가 조직의 CD8+ T 세포와 1:20의 비율로 혼합되었다. 이러한 배양은 48-웰 플레이트(Corning)에 셋팅되었다; 각각의 웰에는 1.5 × 10⁴ 펩티드 펄스된 DCs, 3 × 10⁵ CD8+ T 세포 및 10 ng/㎖ IL-7(R&D System)이 있는 0.5 ㎖ AIM-V/2% AS 배지가 포함되었다. 3일이 지난 후, 이러한 배양은 최종 농도가 20 IU/㎖이 되도록 IL-2(CHIRON)을 첨가하였다. 7일 및 14일에, 상기 T 세포는 상기 자가의 펩티드 펄스된 DCs를 사용하여 추가적으로 자극되었다. 상기 DCs는 상기 기재된 방법에 의해서 매번 제조되었다. CTL은 21일째 펩티드 자극 3회 이후, 펩티드 펄스된 A24LCL 세포에 대하여 실험하였다(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001 Jan 5, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001 Apr 20, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006 May, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8): 498-506).

CTL 증폭 과정

CTLs은 Riddell et al.에 의해서 기재된 방법과 유사한 방법을 사용하여, 배양액에서 증폭되었다(Walter EA et al., N Engl J Med 1995 Oct 19, 333(16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996 Feb, 2(2): 216-23). 전체 5 × 10⁴CTLs은 항-CD3 단일클론 항체(Pharmingen) 40 ng/㎖의 존재하에서, MMC에 의해서 비활성화된 2 종류의 인간 B-림포블라스토이드(lymphoblastoid) 세포주를 이용하여 AIM-V/5% AS 배지 25 ㎖에 현탁하였다. 상기 배양 시작 이후 첫째날, IL-2 120 IU/㎖을 상기 배양액에 첨가하였다. 상기 배양액은 5, 8 및 11일에, IL-2 30 IU/㎖을 포함하는 신선한 AIM-V/5% AS 배지가 공급되었다(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001 Jan 5, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001 Apr 20, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006 May, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8): 498-506).

CTL 클론의 확립

96 둥근 바닥 마이크로 타이터 플레이트(96 round-bottomed micro titer plate)(Nalge Nunc International)에 0.3, 1, 및 3 CTLs/웰이 되도록 희석하였다. CTLs은 5% AS가 포함된 총 150 mcl/웰의 AIM-V 배지에서 1 × 104 세포수/웰의 2 종류의 인간 B-림포블라스토이드 세포주, 항-CD3 항체 30 ng/㎖ 및 IL-2 125 U/㎖과 함께 배양하였다. 125 U/㎖ IL-2로 최종 농도를 맞추기 위하여 10일 뒤 50 mcl/웰의 IL-2를 상기 배지에 첨가하였다. CTL 활성은 14일째 날에 측정하였고, CTL 클론은 상기 기재된 방법을 사용하여 증폭하였다(Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004 Dec 15, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006 May, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005 Aug, 96(8): 498-506).

특이적 CTL 활성

특이적 CTL 활성을 검사하기 위하여, 인터페론(IFN)-감마 효소-결합 면역스팟(ELISPOT) 분석 및 IFN-감마 효소-결합 면역흡착검사(ELISA)를 수행하였다. 구체적으로, 펩티드 펄스된 A24 또는 T2LCL (1 × 10⁴/웰)은 자극(stimulator) 세포로서 제조되었다. 48 웰에서 배양된 세포는 반응(responder) 세포로서 사용되었다. IFN-감마 ELISPOT 분석 및 IFN-감마 ELISA 분석은 제조사의 과정에 따라 수행되었다.

표적 유전자 및 HLA -A24 중 어느 하나 또는 모두를 강하게 발현하는 세포의 확립

표적 유전자의 전사해독틀(open reading frame) 또는 HLA-A24를 암호화하는 cDNA는 PCR에 의해 증폭하였다. 상기 PCR-증폭된 산물을 pCAGGS 벡터내로 클로닝하였다. 플라스미드는, 상기 표적 유전자 및 HLA-A24가 없는 세포주인, COS7에 제조사의 제안된 과정에 따라 리포펙타민 2000(Invitrogen)을 사용하여 형질전환하였다. 형질전환한 후 2일 뒤, 상기 형질전환된 세포는 versene(Invitrogen)으로 수득하였고 CTL 활성 분석을 위한 표적 세포(5 × 10⁴세포수/웰)로서 사용하였다.

플라스미드 형질전환

표적 유전자의 전사해독틀 또는 HLA-A*0201을 암호화하는 cDNA는 PCR에 의해 증폭하였다. 상기 PCR-증폭된 산물을 pCAGGS 벡터내로 클로닝하였다. 플라스미드는, 상기 표적 유전자 및 HLA-A*0201 음성 세포주인, COS7에 제조사의 제안된 과정에 따라 리포펙타민 2000(Invitrogen)을 사용하여 형질전환하였다. 형질전환한 후 2일 뒤, 상기 형질전환된 세포는 versene(Invitrogen)으로 수득하였고 CTL 활성 분석을 위한 표적 세포(5 × 10⁴세포수/웰)로서 사용하였다.

결과

IQGAP3 로부터 유래된 HLA -A24 결합 펩티드의 예측

표 1은 높은 결합 친화성 순서대로 IQGAP3의 HLA-A*2402 결합 펩티드를 나타낸다. 표 1a는 IQGAP3로부터 유래된 9머 펩티드를 나타내고 표 1b는 10머 펩티드를 나타낸다. 에피토프 펩티드를 결정하기 위하여 잠재적인 HLA-A24 결합 활성을 갖는 총 68개의 펩티드들이 선별 및 검사되었다.

HLA -A*2402에 의해 제한된 IQGAP3 로부터 유래한 예측되는 펩티드에 의한 CTL 유도, 및 IQGAP3 유래 펩티드로 자극된 CTL 라인 확립

이러한 IQGAP3로부터 유래된 펩티드에 대한 CTL은 "재료 및 방법"에 기재된 프로토콜에 따라 생성되었다. 펩티드 특이적 CTL 활성은 IFN-감마 ELISPOT 분석(도 1a~r)에 의해 결정되었다. IQGAP3-A24-9-955(서열번호: 2) (a), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호: 4) (b), IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7) (c), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21) (d), IQGAP3-A24-9-26(서열번호: 25) (e), IQGAP3-A24-9-137(서열번호: 29) (f), IQGAP3-A24-9-63(서열번호: 32) (g), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호: 35) (h), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호: 37) (i), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40) (j), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호: 49) (k), IQGAP3-A24-10-345(서열번호: 53) (l), IQGAP3-A24-10-1614(서열번호: 55) (m), IQGAP3-A24-10-191(서열번호: 56) (n), IQGAP3-A24-10-314(서열번호: 57) (o), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호: 62) (p), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호: 63) (q) 및 IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67) (r)은 대조군 웰에 비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타냄을 보였다. 더욱이, IQGAP3-A24-9-955(서열번호:2)로 자극된 양성 웰 번호 #3 및 6 (a), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호:4)로 자극된 #5 (b), IQGAP3-A24-9-779(서열번호:7)로 자극된 #7 (c), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21)로 자극된 #2 (d), IQGAP3-A24-9-26(서열번호:25)로 자극된 #8 (e), IQGAP3-A24-9-137(서열번호:29)로 자극된 #4 (f), IQGAP3-A24-9-63(서열번호:32)으로 자극된 #8 (g), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호:35)으로 자극된 #8 (h), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호:37)로 자극된 #2 (i), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40)로 자극된 #2 (j), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호:49)로 자극된 #5 (k), IQGAP3-A24-10-345(서열번호:53)로 자극된 #7 (l), IQGAP3-A24-10-1614(서열번호:55)로 자극된 #1 (m), IQGAP3-A24-10-191(서열번호:56)로 자극된 #3 (n), IQGAP3-A24-10-314(서열번호:57)로 자극된 #5 (o), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호:62)으로 자극된 #5 (p), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호:63)로 자극된 #7 (q) 및 IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67)로 자극된 #2 (r)에 있는 세포는 증폭되어 CTL 라인을 확립하였다. 상기 CTL 라인의 CTL 활성은 IFN-감마 ELISA 분석에 의해 측정되었다(도 2a~r). 모든 CTL 라인이 펩티드 펄스 하지 않은 표적 세포에 비하여, 이에 상응하는 펩티드로 펄스된 표적 세포에 대하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타냄을 보였다. 반면에, 표 1의 펩티드들은 HLA-A*2402와 결합 활성을 가질 가능성이 있음에도 불구하고, 표 1에 나타낸 다른 펩티드를 이용한 자극에 의해서는 CTL 라인이 확립되지 않았다. 예를 들면, IQGAP3-A24-9-417(서열번호: 6)을 이용하여 자극된 CTL 반응의 전형적인 네거티브 데이타(negative data)는 도 1(s) 및 도 2(s)에 나타냈다. 상기 본 명세서의 결과는 IQGAP3로부터 유래되고 상기 펩티드로서 탐색된 18개의 펩티드가 강력한 CTL 라인을 유도할 수 있다는 것을 나타낸다.

IQGAP3 및 HLA -A*2402를 외인성으로 발현하는 표적 세포에 대한 특이적 CTL 활성

이러한 펩티드에 대해 발생한 상기 확립된 CTL 라인을 IQGAP3 및 HLA-A*2402 분자를 외인성으로 발현하는 표적 세포를 인식하는 그들의 능력에 대해 검사하였다. 전장의 IQGAP3 및 HLA-A*2402 분자 유전자(IQGAP3 및 HLA-A*2402 유전자를 외인성으로 발현하는 표적 세포에 대한 특이적 모델) 모두를 형질감염시킨 COS7 세포에 대하여 특이적 CTL 활성을 상기 이펙터 세포로서 상응하는 펩티드에 의해 발생된 CTL 주를 사용하여 시험하였다. 전장의 IQGAP3 유전자 또는 HLA-A*2402 중 하나로 형질전환된 COS7 세포는 대조군으로써 제작되었다. 도 3에 있어서, IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7)로 자극된 CTLs은 IQGAP3 및 HLA-A*2402를 모두 발현하는 COS7 세포에 대한 강력한 CTL 활성을 나타냈다. 반면에, 상기 대조군에 대해서는 유의적인 특이적 CTL 활성이 검출되지 않았다. 따라서, 이러한 데이터는 IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7)이 HLA-A*2402 분자와 함께 표적 세포에서 자연적으로 발현되고 상기 CTLs에 의해 인식된다는 것을 명확하게 나타낸다. IQGAP3로부터 유래된 이러한 펩티드를 IQGAP3가 발현되는 종양을 갖는 환자에 대한 암 백신에 활용될 수 있다.

항원 펩티드의 상동성 분석

IQGAP3-A24-9-955(서열번호: 2), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호: 4), IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21), IQGAP3-A24-9-26(서열번호: 25), IQGAP3-A24-9-137(서열번호: 29), IQGAP3-A24-9-63(서열번호: 32), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호: 35), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호: 37), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호: 49), IQGAP3-A24-10-345(서열번호: 53), IQGAP3-A24-10-1614(서열번호: 55), IQGAP3-A24-10-191(서열번호: 56), IQGAP3-A24-10-314(서열번호: 57), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호: 62), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호: 63) 및 IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67)로 자극된 CTLs은 유의적이고 특이적인 CTL 활성을 나타냈다. 이러한 결과는 IQGAP3-A24-9-955(서열번호: 2), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호: 4), IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21), IQGAP3-A24-9-26(서열번호: 25), IQGAP3-A24-9-137(서열번호: 29), IQGAP3-A24-9-63(서열번호: 32), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호: 35), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호: 37), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호:49), IQGAP3-A24-10-345(서열번호: 53), IQGAP3-A24-10-1614 (서열번호: 55), IQGAP3-A24-10-191(서열번호: 56), IQGAP3-A24-10-314(서열번호: 57), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호: 62), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호: 63) 및 IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67)의 서열이 인간 면역 체계를 민감하게 하는 것으로 알려진 다른 분자로부터 유래된 펩티드와 상동적인 사실 때문일 수 있다. 이러한 가능성을 배제하기 위하여, 상동성 분석은 이러한 펩티드 서열에 대하여 유의한 상동성을 가진 서열이 없다는 것을 밝힌 BLAST 알고리즘(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi)을 쿼리(query)로써 사용하여 수행하였다. 이러한 상동성 분석의 결과는 IQGAP3-A24-9-955(서열번호: 2), IQGAP3-A24-9-1167(서열번호: 4), IQGAP3-A24-9-779(서열번호: 7), IQGAP3-A24-9-74(서열번호: 21), IQGAP3-A24-9-26(서열번호: 25), IQGAP3-A24-9-137(서열번호: 29), IQGAP3-A24-9-63(서열번호: 32), IQGAP3-A24-10-1600(서열번호: 35), IQGAP3-A24-10-1507(서열번호: 37), IQGAP3-A24-10-139(서열번호: 40), IQGAP3-A24-10-1097(서열번호: 49), IQGAP3-A24-10-345(서열번호: 53), IQGAP3-A24-10-1614(서열번호: 55), IQGAP3-A24-10-191(서열번호: 56), IQGAP3-A24-10-314(서열번호: 57), IQGAP3-A24-10-1363(서열번호: 62), IQGAP3-A24-10-1114(서열번호: 63) 및 IQGAP3-A24-10-1207(서열번호: 67)의 서열은 유일하고, 따라서 본 출원인이 아는바, 이러한 분자들은 몇몇의 관련되지 않은 분자들에 대한 의도하지 않은 면역 반응을 유발할 가능성이 거의 없다는 것을 의미한다.

결과적으로, 신규한 IQGAP3으로부터 유래된 HLA-A24 에피토프 펩티드가 동정되었으며, 암 면역 치료법으로서 활용될 수 있다는 것을 나타냈다.

IQGAP3 로부터 유래된 HLA -A02 결합 펩티드의 예측

표 2a 및 2b는 높은 결합 친화성 순서대로 IQGAP3의 HLA-A02 결합 9머 및 10머 펩티드를 나타낸다. 에피토프 펩티드를 결정하기 위하여 잠재적인 HLA-A02 결합 활성을 갖는 총 84개의 펩티드들이 선별 및 검사되었다.

HLA -A*0201로 제한된 IQGAP3 로부터 예측된 펩티드를 사용한 CTL 유도

IQGAP3로부터 유래된 상기 펩티드에 대한 CTLs은 "재료 및 방법"에 기재된 프로토콜에 따라 생성되었다. 펩티드 특이적 CTL 활성은 IFN-감마 ELISPOT 분석(도 4a-q)에 의해 측정되었다. 그 결과 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75)으로 자극한 웰 번호 #6 및 6 (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85)으로 자극된 #6 (b), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101)으로 자극된 #1 (c), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111)으로 자극된 #7 (d), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114)으로 자극된 #7 및 6 (e), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121)로 자극된 #5 (f), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125)로 자극한 #8 (g), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130)으로 자극된 #1 (h), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139)으로 자극된 #2 (i), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140)으로 자극된 #2 (j), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141)로 자극된 #2 (k), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142)으로 자극된 #6 (l), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143)로 자극된 #4 (m), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145)로 자극된 #6 (n), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148)로 자극된 #5 (o), IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)로 자극된 #3 (p) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99)로 자극된 #5 (q)는 대조군 웰에 비하여 강력한 IFN-감마 생성을 나타냄을 보였다. 반면에, 표 2에 나타낸 다른 펩티드는 HLA-A*0201과 결합 활성을 가질 수 있음에도 불구하고, 상기 펩티드를 사용한 자극에 의한 강력한 IFN-감마 생성은 검출되지 않았다. 음성 데이터의 예와 같이, 펩티드-펄스된 표적 세포에 대한 IQGAP3-A02-10-868(서열번호: 113)로 자극된 CTL로부터 특이적 IFN-감마 생성은 관찰되지 않았다 (r).

IQGAP3 특이적 펩티드에 대한 CTL 라인 및 클론의 확립

IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75)으로 자극된 웰 번호 #6 및 6 (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85)으로 자극된 #6 (b), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101)으로 자극된 #1 (c), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111)로 자극된 #7 (d), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114)으로 자극된 #7 및 6 (e), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121)로 자극된 #5 (f), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125)로 자극된 #8 (g), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130)으로 자극된 #1 (h), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139)으로 자극된 #2 (i), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140)으로 자극된 #2 (j), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141)로 자극된 #2 (k), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142)으로 자극된 #2 (l), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143)로 자극된 #4 (m), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145)로 자극된 #6 (n), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148)로 자극된 #5 (o), IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)로 자극된 #3 (p) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99)로 자극된 #5에서 IFN-감마 ELISPOT 분석에 의해 검출된 펩티드 특이적 CTL 활성이 나타난 세포를 증폭하였고 CTL 라인을 확립하였다. 상기 CTL 라인의 CTL 활성은 IFN-감마 ELISA 분석에 의해 검출되었다(도 5a-q). 모든 CTL 라인은 펩티드 펄스하지 않은 표적 세포에 비하여 상응하는 펩티드로 펄스한 표적 세포에 대해 강력한 IFN-감마 생성을 보이는 것으로 나타났다. 더욱이, CTL 클론은 CTL 라인으로부터 제한적 희석에 의해 확립되었으며, 페티드 펄스된 표적 세포에 대한 CTL 클론부터의 IFN-감마 생성은 IFN-감마 ELISA 분석에 의해 측정되었다. 도 6에 있어서 강력한 IFN-감마 생성은 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75) (a), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (b), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121) (c), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130) (d), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143) (e) 및 IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145) (f)로 자극된 CTL 클론으로부터 측정되었다.

IQGAP3 및 HLA -A*0201을 외인성으로 발현하는 표적 세포에 대한 특이적 CTL 활성

이러한 펩티드에 대해 발생된 상기 확립된 CTL 라인은 IQGAP3 및 HLA-A*0201을 외인성으로 발현하는 표적 세포를 인식하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 전장의 IQGAP3 및 HLA-A*0201 분자 유전자 모두로 형질전환된 COS7 세포(IQGAP3 및 HLA-A*0201 유전자를 외인성으로 발현하는 표적 세포에 대한 특이적인 모델)에 대한 특이적 CTL 활성은 이펙터 세포로서 상응하는 펩티드에 의해 발생하는 상기 CTL 라인을 사용하여 검사하였다. 전장의 IQGAP3 유전자 또는 HLA-A*0201 중 어느 하나로 형질전환된 COS7 세포는 대조군으로써 제조되었다. 도 7에 있어서, IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (a) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99) (b)로 자극된 CTLs는 IQGAP3 및 HLA- A*0201을 모두 발현하는 COS7 세포에 대해 강력한 CTL 활성을 나타냈다. 반면에, 대조군에 대해서는 유의적인 특이적 CTL 활성이 검출되지 않았다. 다라서, 이러한 데이터는 IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) (a) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99) (b)의 펩티드가 HLA-A*0201 분자와 함께 표적 세포에서 외인성으로 진행되어 발현되고 상기 CTLs에 의해 인식된다는 것을 명확하게 나타낸다. 이러한 결과는 또한 IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85) 및 IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99)가 IQGAP3를 발현하는 종양을 가진 환자에 대한 암 백신으로서 활용할 수 있음을 나타낸다.

항원 펩티드의 상동성 분석

IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85), IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148) 및 IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)로 자극된 CTLs는 유의적이고 특이적인 CTL 활성을 나타냈다. 이러한 결과는 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75), IQGAP3-A02-9-553(서열번호: 85), IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호: 145), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148) 및 IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)의 서열이 인간 면역 체계를 민감하게한다고 알려진 다른 분자로부터 유래한 펩티드와 상동적이라는 사실 때문일 것이다. 이러한 가능성을 배제하기 위하여, 상동성 분석은 이러한 펩티드 서열에 대하여 유의한 상동성을 가진 서열이 없다는 것을 밝힌 BLAST 알고리즘(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi)을 쿼리(query)로써 사용하여 수행하였다. 이러한 상동성 분석의 결과는 IQGAP3-A02-9-146(서열번호: 75) , IQGAP3-A02-9-553 (서열번호: 85), IQGAP3-A02-9-1234(서열번호: 99), IQGAP3-A02-9-756(서열번호: 101), IQGAP3-A02-10-961(서열번호: 111), IQGAP3-A02-10-70(서열번호: 114), IQGAP3-A02-10-1174(서열번호: 121), IQGAP3-A02-10-548(서열번호: 125), IQGAP3-A02-10-903(서열번호: 130), IQGAP3-A02-10-953(서열번호: 139), IQGAP3-A02-10-1590(서열번호: 140), IQGAP3-A02-10-1424(서열번호: 141), IQGAP3-A02-10-416(서열번호: 142), IQGAP3-A02-10-67(서열번호: 143), IQGAP3-A02-10-1461(서열번호:145), IQGAP3-A02-10-842(서열번호: 148) 및 IQGAP3-A02-10-897(서열번호: 150)의 서열은 유일하고, 따라서 본 출원인이 아는바, 이러한 분자들은 몇몇의 관련되지 않은 분자들에 대한 의도하지 않은 면역 반응을 유발할 가능성이 거의 없다는 것을 의미한다.

결론적으로, IQGAP3로부터 유래된 신규한 HLA-A02 에피토프 펩티드는 신규한 항원으로서 확립되었고 추가적으로 암 면역치료를 위해 활용될 수 있음을 나타낸다.

산업상 이용가능성

본 발명은 신규한 TAAs에 대해서 기술하고 있으며, 구체적으로 강력하고 특이적인 항-종양 면역 반응을 유도하고 다양한 암 형태에 적용가능한 IQGAP3로부터 유래한 TAAs에 대해서 기술하고 있다. 이러한 TAAs는 또한 예를 들면, 암, 보다 구체적으로, 방광암, 신장암, 식도암, 위암, 폐암, 유방암, 방광암 및 췌장암과 같은, IQGAP3와 관련된 질환에 대한 펩티드 백신으로서 개발을 정당화한다.

본 발명은 명세서에서 상세하고, 이의 특이적인 실시예를 참조로 기재되어 있으나, 앞서 기술한 설명은 본질적으로 예시 및 설명이며, 본 발명과 이의 바람직한 실시예를 예시하는 바로 이해될 수 있다. 일반적인 실험을 통해, 당업자는 다양한 변화 및 변형이 본 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고 만들어질 수 있으며, 본 발명의 목적 및 한계는 첨부된 청구항에 의해서 정의된다는 것을 용이하게 인식할 수 있을 것이다.

<110> ONCOTHERAPY SCIENCE, INC. <120> IQGAP3 EPITOPE PEPTIDES AND VACCINES CONTAINING THE SAME <130> 10fpi-12-04 <150> US 61/060,538 <151> 2008-06-11 <160> 154 <170> PatentIn version 3.4 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 1 Arg Tyr Phe Asp Ala Leu Leu Lys Leu 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 2 Ala Tyr Gln His Leu Phe Tyr Leu Leu 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 3 Gly Tyr Gln Gly Leu Val Asp Glu Leu 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 4 Val Tyr Lys Val Val Gly Asn Leu Leu 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 5 Arg Tyr Gln Ala Thr Gly Leu His Phe 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 6 Met Tyr Gln Leu Glu Leu Ala Val Leu 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 7 Ile Tyr Leu Glu Trp Leu Gln Tyr Phe 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 8 Val Tyr Cys Ile His Ala Leu Ser Leu 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 9 Lys Tyr Gly Leu Gln Leu Pro Ala Phe 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 10 Gly Tyr Arg Gln Arg Lys Ile Tyr Leu 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 11 Gln Tyr Leu Arg Arg Leu His Tyr Phe 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 12 Ala Tyr Tyr Phe His Leu Gln Thr Phe 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 13 Phe Tyr Leu Leu Gln Thr Gln Pro Ile 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 14 Arg Phe Gln Leu His Tyr Gln Asp Leu 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 15 Lys Phe Glu Val Asn Ala Lys Phe Leu 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 16 Lys Phe Ala Glu His Ser His Phe Leu 1 5 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 17 Ile Phe Leu Leu Asn Lys Lys Phe Leu 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 18 Asp Phe Leu Ala Glu Ala Glu Leu Leu 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 19 Ala Phe Ser Lys Ile Gly Gly Ile Leu 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 20 Ala Phe Ser Gly Gln Ser Gln His Leu 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 21 Cys Phe Ala Pro Ser Val Val Pro Leu 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 22 Arg Tyr Val Ala Lys Val Leu Lys Ala 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 23 Lys Ala Gln Asp Asp Tyr Arg Ile Leu 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 24 Lys Leu Gln Ala Thr Leu Gln Gly Leu 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 25 Arg Gln Asn Val Ala Tyr Gln Tyr Leu 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 26 Arg Val Leu Arg Asn Leu Arg Arg Leu 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 27 Arg Ser Leu Thr Ala His Ser Leu Leu 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 28 Arg Tyr His Leu Leu Leu Val Ala Ala 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 29 Arg Val Val Tyr Cys Ile His Ala Leu 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 30 Arg Asn Leu Arg Arg Leu Glu Ala Leu 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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artificially synthesized peptide sequence <400> 43 Gln Tyr Phe Lys Ala Asn Leu Asp Ala Ile 1 5 10 <210> 44 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 44 Ile Tyr Leu Ala Lys Leu Ile Phe Gln Met 1 5 10 <210> 45 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 45 Gly Tyr Gln Arg Ala Leu Glu Ser Ala Met 1 5 10 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 46 Ala Tyr Glu Arg Leu Thr Ala Glu Glu Met 1 5 10 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 47 Gly Phe Val Ile Gln Leu Gln Ala Arg Leu 1 5 10 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 48 Lys Phe Leu Gly Val Asp Met Glu Arg Phe 1 5 10 <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 49 Pro Tyr Asp Val Thr Pro Glu Gln Ala Leu 1 5 10 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 50 Asp Phe Ala Asp Trp Tyr Leu Glu Gln Leu 1 5 10 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 51 Arg Tyr Val Ala Lys Val Leu Lys Ala Thr 1 5 10 <210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 52 Arg Ser Asn Gln Gln Leu Glu Gln Asp Leu 1 5 10 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 53 Lys Ala Gln Glu Leu Gly Leu Val Glu Leu 1 5 10 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 54 Arg Gly Gln Ser Ala Leu Gln Glu Ile Leu 1 5 10 <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 67 His Ala Leu Gly Ala Val Ala Gln Leu Leu 1 5 10 <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 68 His Phe Arg His Thr Asp Asn Ile Asn Phe 1 5 10 <210> 69 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 69 Tyr Leu Leu Leu Gln Leu Phe Lys Thr 1 5 <210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 70 Phe Leu Leu Ala Ile Thr Ser Ser Val 1 5 <210> 71 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 71 Ala Leu Ser Leu Phe Leu Phe Arg Leu 1 5 <210> 72 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 72 Gln Leu Leu Glu Lys Gly Val Leu Val 1 5 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 73 Trp Leu Gln Tyr Phe Lys Ala Asn Leu 1 5 <210> 74 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 74 Tyr Leu Ala Lys Leu Ile Phe Gln Met 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 75 Ser Leu Phe Leu Phe Arg Leu Gly Leu 1 5 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 76 Ile Leu Gly Lys Val Ile Gln Asp Val 1 5 <210> 77 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 77 Arg Leu His Tyr Phe Gln Lys Asn Val 1 5 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 78 Leu Leu Gln Thr Gln Pro Ile Tyr Leu 1 5 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 79 Leu Leu Ala Met Thr Asp Lys Phe Leu 1 5 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 80 Lys Leu Gln Ala Thr Leu Gln Gly Leu 1 5 <210> 81 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 81 Ser Met Tyr Gln Leu Glu Leu Ala Val 1 5 <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 82 Leu Leu Gln Leu Phe Lys Thr Ala Leu 1 5 <210> 83 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 83 Leu Leu Leu Ser Thr Lys Gln Leu Leu 1 5 <210> 84 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 84 Leu Leu Leu Glu His Gln Asp Cys Ile 1 5 <210> 85 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 85 Gly Leu Asp Asp Val Ser Leu Pro Val 1 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Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 92 Val Leu Glu Asp Lys Val Leu Ser Val 1 5 <210> 93 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 93 Gln Leu Gln Tyr Glu Gly Val Ala Val 1 5 <210> 94 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 94 Ala Met Leu His Ala Val Gln Arg Ile 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 95 Phe Met Glu Ala Val Ile Phe Ser Leu 1 5 <210> 96 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 96 Ala Gln Leu Pro Pro Val Tyr Pro Val 1 5 <210> 97 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 97 Arg Pro Ala Asp Thr Ala Phe Trp Val 1 5 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 98 Leu Leu Leu Gln Leu Phe Lys Thr Ala 1 5 <210> 99 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 99 Val Leu Asn Asp Tyr Leu Glu Glu Thr 1 5 <210> 100 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 100 Val Leu Ser Val His Thr Asp Pro Val 1 5 <210> 101 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 101 Phe Leu Arg Thr Trp Leu Pro Ala Val 1 5 <210> 102 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 102 Asn Leu Arg Glu Pro Leu Ala Ala Val 1 5 <210> 103 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 103 Gly Leu Ala Pro Gln Ile His Asp Leu 1 5 <210> 104 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 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Arg Arg Gln Tyr Leu 1 5 10 <210> 117 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 117 Leu Leu Leu Gln Leu Phe Lys Thr Ala Leu 1 5 10 <210> 118 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 118 Asn Leu Leu Ala Met Thr Asp Lys Phe Leu 1 5 10 <210> 119 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 119 Ala Leu Gln Glu Glu Ile Lys Ser Lys Val 1 5 10 <210> 120 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 120 Ala Met Thr Asp Lys Phe Leu Leu Ala Ile 1 5 10 <210> 121 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 121 Leu Leu Tyr Tyr Arg Phe Leu Asn Pro Ala 1 5 10 <210> 122 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 122 Leu 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<400> 128 Leu Leu Asn Gln Ser Gln Gln Asp Phe Leu 1 5 10 <210> 129 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 129 Lys Val Asn Val Asn Leu Leu Ile Phe Leu 1 5 10 <210> 130 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 130 Gly Leu Leu Val Lys Asn Arg Ile Thr Leu 1 5 10 <210> 131 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 131 Ser Leu Leu Leu Ser Thr Lys Gln Leu Leu 1 5 10 <210> 132 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 132 Phe Leu Ser Trp Asn Asp Leu Gln Ala Thr 1 5 10 <210> 133 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 133 Leu Gln Ala Arg Leu Arg Gly Phe Leu Val 1 5 10 <210> 134 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized 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artificially synthesized peptide sequence <400> 140 Gln Leu His Tyr Gln Asp Leu Leu Gln Leu 1 5 10 <210> 141 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 141 Ser Leu Thr Ala His Ser Leu Leu Pro Leu 1 5 10 <210> 142 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 142 Ser Met Tyr Gln Leu Glu Leu Ala Val Leu 1 5 10 <210> 143 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 143 Leu Leu Ala Lys Leu Gly His Cys Phe Ala 1 5 10 <210> 144 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 144 Leu Gln Leu Gln Tyr Glu Gly Val Ala Val 1 5 10 <210> 145 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 145 Gly Leu Val Asp Glu Leu Ala Lys Asp Ile 1 5 10 <210> 146 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 146 Lys Val Leu Ser Val His Thr Asp Pro Val 1 5 10 <210> 147 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 147 Lys Leu Thr Lys Arg Asn Lys Glu Gln Leu 1 5 10 <210> 148 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 148 Ile Leu Val His Ala Pro His Pro Pro Leu 1 5 10 <210> 149 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 149 Val Leu Val Glu Ile Glu Asp Leu Pro Ala 1 5 10 <210> 150 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 150 Ile Met Asp Ile Lys Ile Gly Leu Leu Val 1 5 10 <210> 151 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 151 Val Ile Gln Asp Val Leu Glu Asp Lys Val 1 5 10 <210> 152 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 152 Leu Leu Leu Ser Thr Lys Gln Leu Leu Ala 1 5 10 <210> 153 <211> 6069 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (76)..(4968) <400> 153 gtcctgtctg gcggtgccga cggtgagggg cggtggccca acggcgggag attcaaacct 60 ggaagaagga ggaac atg gag agg aga gca gcg ggc cca ggc tgg gca 108 Met Glu Arg Arg Ala Ala Gly Pro Gly Trp Ala 1 5 10 gcc tat gaa cgc ctc aca gct gag gag atg gat gag cag agg cgg cag 156 Ala Tyr Glu Arg Leu Thr Ala Glu Glu Met Asp Glu Gln Arg Arg Gln 15 20 25 aat gtt gcc tat cag tac ctg tgc cgg ctg gag gag gcc aag cgc tgg 204 Asn Val Ala Tyr Gln Tyr Leu Cys Arg Leu Glu Glu Ala Lys Arg Trp 30 35 40 atg gag gcc tgc ctg aag gag gag ctt cct tcc ccg gtg gag ctg gag 252 Met Glu Ala Cys Leu Lys Glu Glu Leu Pro Ser Pro Val Glu Leu Glu 45 50 55 gag agc ctt cgg aat gga gtg ctg ctg gcc aag cta ggc cac tgt ttt 300 Glu Ser Leu Arg Asn Gly Val Leu Leu Ala Lys Leu Gly His Cys Phe 60 65 70 75 gca ccc tcc gtg gtt ccc ttg aag aag atc tac gat gtg gag cag ctg 348 Ala Pro Ser Val Val Pro Leu Lys Lys Ile Tyr Asp Val Glu Gln Leu 80 85 90 cgg tac cag gca act ggc tta cat ttc cgt cac aca gac aac atc aac 396 Arg Tyr Gln Ala Thr Gly Leu His Phe Arg His Thr Asp Asn Ile Asn 95 100 105 ttt tgg cta tct gca ata gcc cac atc ggt ctg cct tcg acc ttc ttc 444 Phe Trp Leu Ser Ala Ile Ala His Ile Gly Leu Pro Ser Thr Phe Phe 110 115 120 cca gag acc acg gac atc tat gac aaa aag aac atg ccc cgg gta gtc 492 Pro Glu Thr Thr Asp Ile Tyr Asp Lys Lys Asn Met Pro Arg Val Val 125 130 135 tac tgc atc cat gct ctc agt ctc ttc ctc ttc cgg ctg gga ttg gcc 540 Tyr Cys Ile His Ala Leu Ser Leu Phe Leu Phe Arg Leu Gly Leu Ala 140 145 150 155 cct cag ata cat gat cta tac ggg aaa gtg aaa ttc aca gct gag gaa 588 Pro Gln Ile His Asp Leu Tyr Gly Lys Val Lys Phe Thr Ala Glu Glu 160 165 170 ctc agc aac atg gcg tcc gaa ctg gcc aaa tat ggc ctc cag ctg cct 636 Leu Ser Asn Met Ala Ser Glu Leu Ala Lys Tyr Gly Leu Gln Leu Pro 175 180 185 gcc ttc agc aag atc ggg ggc atc ttg gcc aat gag ctc tcg gtg gat 684 Ala Phe Ser Lys Ile Gly Gly Ile Leu Ala Asn Glu Leu Ser Val Asp 190 195 200 gag gct gca gtc cat gca gct gtt ctt gcc atc aat gaa gca gtg gag 732 Glu Ala Ala Val His Ala Ala Val Leu Ala Ile Asn Glu Ala Val Glu 205 210 215 cga ggg gtg gtg gag gac acc ctg gct gcc ttg cag aat ccc agt gct 780 Arg Gly Val Val Glu Asp Thr Leu Ala Ala Leu Gln Asn Pro Ser Ala 220 225 230 235 ctt ctg gag aat ctc cga gag cct ctg gca gcc gtc tac caa gag atg 828 Leu Leu Glu Asn Leu Arg Glu Pro Leu Ala Ala Val Tyr Gln Glu Met 240 245 250 ctg gcc cag gcc aag atg gag aag gca gcc aat gcc agg aac cat gat 876 Leu Ala Gln Ala Lys Met Glu Lys Ala Ala Asn Ala Arg Asn His Asp 255 260 265 gac aga gaa agc cag gac atc tat gac cac tac cta act cag gct gaa 924 Asp Arg Glu Ser Gln Asp Ile Tyr Asp His Tyr Leu Thr Gln Ala Glu 270 275 280 atc cag ggc aat atc aac cat gtc aac gtc cat ggg gct cta gaa gtt 972 Ile Gln Gly Asn Ile Asn His Val Asn Val His Gly Ala Leu Glu Val 285 290 295 gtt gat gat gcc ctg gaa aga cag agc cct gaa gcc ttg ctc aag gcc 1020 Val Asp Asp Ala Leu Glu Arg Gln Ser Pro Glu Ala Leu Leu Lys Ala 300 305 310 315 ctt caa gac cct gcc ctg gcc ctg cga ggg gtg agg aga gac ttt gct 1068 Leu Gln Asp Pro Ala Leu Ala Leu Arg Gly Val Arg Arg Asp Phe Ala 320 325 330 gac tgg tac ctg gag cag ctg aac tca gac aga gag cag aag gca cag 1116 Asp Trp Tyr Leu Glu Gln Leu Asn Ser Asp Arg Glu Gln Lys Ala Gln 335 340 345 gag ctg ggc ctg gtg gag ctt ctg gaa aag gag gaa gtc cag gct ggt 1164 Glu Leu Gly Leu Val Glu Leu Leu Glu Lys Glu Glu Val Gln Ala Gly 350 355 360 gtg gct gca gcc aac aca aag ggt gat cag gaa caa gcc atg ctc cac 1212 Val Ala Ala Ala Asn Thr Lys Gly Asp Gln Glu Gln Ala Met Leu His 365 370 375 gct gtg cag cgg atc aac aaa gcc atc cgg agg gga gtg gcg gct gac 1260 Ala Val Gln Arg Ile Asn Lys Ala Ile Arg Arg Gly Val Ala Ala Asp 380 385 390 395 act gtg aag gag ctg atg tgc cct gag gcc cag ctg cct cca gtg tac 1308 Thr Val Lys Glu Leu Met Cys Pro Glu Ala Gln Leu Pro Pro Val Tyr 400 405 410 cct gtt gca tcg tct atg tac cag ctg gag ctg gca gtg ctc cag cag 1356 Pro Val Ala Ser Ser Met Tyr Gln Leu Glu Leu Ala Val Leu Gln Gln 415 420 425 cag cag ggg gag ctt ggc cag gag gag ctc ttc gtg gct gtg gag atg 1404 Gln Gln Gly Glu Leu Gly Gln Glu Glu Leu Phe Val Ala Val Glu Met 430 435 440 ctc tca gct gtg gtc ctg att aac cgg gcc ctg gag gcc cgg gat gcc 1452 Leu Ser Ala Val Val Leu Ile Asn Arg Ala Leu Glu Ala Arg Asp Ala 445 450 455 agt ggc ttc tgg agc agc ctg gtg aac cct gcc aca ggc ctg gct gag 1500 Ser Gly Phe Trp Ser Ser Leu Val Asn Pro Ala Thr Gly Leu Ala Glu 460 465 470 475 gtg gaa gga gaa aat gcc cag cgt tac ttc gat gcc ctg ctg aaa ttg 1548 Val Glu Gly Glu Asn Ala Gln Arg Tyr Phe Asp Ala Leu Leu Lys Leu 480 485 490 cga cag gag cgt ggg atg ggt gag gac ttc ctg agc tgg aat gac ctg 1596 Arg Gln Glu Arg Gly Met Gly Glu Asp Phe Leu Ser Trp Asn Asp Leu 495 500 505 cag gcc acc gtg agc cag gtc aat gca cag acc cag gaa gag act gac 1644 Gln Ala Thr Val Ser Gln Val Asn Ala Gln Thr Gln Glu Glu Thr Asp 510 515 520 cgg gtc ctt gca gtc agc ctc atc aat gag gct ctg gac aaa ggc agc 1692 Arg Val Leu Ala Val Ser Leu Ile Asn Glu Ala Leu Asp Lys Gly Ser 525 530 535 cct gag aag act ctg tct gcc cta ctg ctt cct gca gct ggc cta gat 1740 Pro Glu Lys Thr Leu Ser Ala Leu Leu Leu Pro Ala Ala Gly Leu Asp 540 545 550 555 gat gtc agc ctc cct gtc gcc cct cgg tac cat ctc ctc ctt gtg gca 1788 Asp Val Ser Leu Pro Val Ala Pro Arg Tyr His Leu Leu Leu Val Ala 560 565 570 gcc aaa agg cag aag gcc cag gtg aca ggg gat cct gga gct gtg ctg 1836 Ala Lys Arg Gln Lys Ala Gln Val Thr Gly Asp Pro Gly Ala Val Leu 575 580 585 tgg ctt gag gag atc cgc cag gga gtg gtc aga gcc aac cag gac act 1884 Trp Leu Glu Glu Ile Arg Gln Gly Val Val Arg Ala Asn Gln Asp Thr 590 595 600 aat aca gct cag aga atg gct ctt ggt gtg gct gcc atc aat caa gcc 1932 Asn Thr Ala Gln Arg Met Ala Leu Gly Val Ala Ala Ile Asn Gln Ala 605 610 615 atc aag gag ggc aag gca gcc cag act gag cgg gtg ttg agg aac ccc 1980 Ile Lys Glu Gly Lys Ala Ala Gln Thr Glu Arg Val Leu Arg Asn Pro 620 625 630 635 gca gtg gcc ctt cga ggg gta gtt ccc gac tgt gcc aac ggc tac cag 2028 Ala Val Ala Leu Arg Gly Val Val Pro Asp Cys Ala Asn Gly Tyr Gln 640 645 650 cga gcc ctg gaa agt gcc atg gca aag aaa cag cgt cca gca gac aca 2076 Arg Ala Leu Glu Ser Ala Met Ala Lys Lys Gln Arg Pro Ala Asp Thr 655 660 665 gct ttc tgg gtt caa cat gac atg aag gat ggc act gcc tac tac ttc 2124 Ala Phe Trp Val Gln His Asp Met Lys Asp Gly Thr Ala Tyr Tyr Phe 670 675 680 cat ctg cag acc ttc cag ggg atc tgg gag caa cct cct ggc tgc ccc 2172 His Leu Gln Thr Phe Gln Gly Ile Trp Glu Gln Pro Pro Gly Cys Pro 685 690 695 ctc aac acc tct cac ctg acc cgg gag gag atc cag tca gct gtc acc 2220 Leu Asn Thr Ser His Leu Thr Arg Glu Glu Ile Gln Ser Ala Val Thr 700 705 710 715 aag gtc act gct gcc tat gac cgc caa cag ctc tgg aaa gcc aac gtc 2268 Lys Val Thr Ala Ala Tyr Asp Arg Gln Gln Leu Trp Lys Ala Asn Val 720 725 730 ggc ttt gtt atc cag ctc cag gcc cgc ctc cgt ggc ttc cta gtt cgg 2316 Gly Phe Val Ile Gln Leu Gln Ala Arg Leu Arg Gly Phe Leu Val Arg 735 740 745 cag aag ttt gct gag cat tcc cac ttt ctg agg acc tgg ctc cca gca 2364 Gln Lys Phe Ala Glu His Ser His Phe Leu Arg Thr Trp Leu Pro Ala 750 755 760 gtc atc aag atc cag gct cat tgg cgg ggt tat agg cag cgg aag att 2412 Val Ile Lys Ile Gln Ala His Trp Arg Gly Tyr Arg Gln Arg Lys Ile 765 770 775 tac ctg gag tgg ttg cag tat ttt aaa gca aac ctg gat gcc ata atc 2460 Tyr Leu Glu Trp Leu Gln Tyr Phe Lys Ala Asn Leu Asp Ala Ile Ile 780 785 790 795 aag atc cag gcc tgg gcc cgg atg tgg gca gct cgg agg caa tac ctg 2508 Lys Ile Gln Ala Trp Ala Arg Met Trp Ala Ala Arg Arg Gln Tyr Leu 800 805 810 agg cgt ctg cac tac ttc cag aag aat gtt aac tcc att gtg aag atc 2556 Arg Arg Leu His Tyr Phe Gln Lys Asn Val Asn Ser Ile Val Lys Ile 815 820 825 cag gca ttt ttc cga gcc agg aaa gcc caa gat gac tac agg ata tta 2604 Gln Ala Phe Phe Arg Ala Arg Lys Ala Gln Asp Asp Tyr Arg Ile Leu 830 835 840 gtg cat gca ccc cac cct cct ctc agt gtg gta cgc aga ttt gcc cat 2652 Val His Ala Pro His Pro Pro Leu Ser Val Val Arg Arg Phe Ala His 845 850 855 ctc ttg aat caa agc cag caa gac ttc ttg gct gag gca gag ctg ctg 2700 Leu Leu Asn Gln Ser Gln Gln Asp Phe Leu Ala Glu Ala Glu Leu Leu 860 865 870 875 aag ctc cag gaa gag gta gtt agg aag atc cga tcc aat cag cag ctg 2748 Lys Leu Gln Glu Glu Val Val Arg Lys Ile Arg Ser Asn Gln Gln Leu 880 885 890 gag cag gac ctc aac atc atg gac atc aag att ggc ctg ctg gtg aag 2796 Glu Gln Asp Leu Asn Ile Met Asp Ile Lys Ile Gly Leu Leu Val Lys 895 900 905 aac cgg atc act ctg cag gaa gtg gtc tcc cac tgc aag aag ctg acc 2844 Asn Arg Ile Thr Leu Gln Glu Val Val Ser His Cys Lys Lys Leu Thr 910 915 920 aag agg aat aag gaa cag ctg tca gat atg atg gtt ctg gac aag cag 2892 Lys Arg Asn Lys Glu Gln Leu Ser Asp Met Met Val Leu Asp Lys Gln 925 930 935 aag ggt tta aag tcg ctg agc aaa gag aaa cgg cag aaa cta gaa gca 2940 Lys Gly Leu Lys Ser Leu Ser Lys Glu Lys Arg Gln Lys Leu Glu Ala 940 945 950 955 tac caa cac ctc ttc tac ctg ctc cag act cag ccc atc tac ctg gcc 2988 Tyr Gln His Leu Phe Tyr Leu Leu Gln Thr Gln Pro Ile Tyr Leu Ala 960 965 970 aag ctg atc ttt cag atg cca cag aac aaa acc acc aag ttc atg gag 3036 Lys Leu Ile Phe Gln Met Pro Gln Asn Lys Thr Thr Lys Phe Met Glu 975 980 985 gca gtg att ttc agc ctg tac aac tat gcc tcc agc cgc cga gag gcc 3084 Ala Val Ile Phe Ser Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Ser Arg Arg Glu Ala 990 995 1000 tat ctc ctg ctc cag ctg ttc aag aca gca ctc cag gag gaa atc aag 3132 Tyr Leu Leu Leu Gln Leu Phe Lys Thr Ala Leu Gln Glu Glu Ile Lys 1005 1010 1015 tca aag gtg gag cag ccc cag gac gtg gtg aca ggc aac cca aca gtg 3180 Ser Lys Val Glu Gln Pro Gln Asp Val Val Thr Gly Asn Pro Thr Val 1020 1025 1030 1035 gtg agg ctg gtg gtg aga ttc tac cgt aat ggg cgg gga cag agt gcc 3228 Val Arg Leu Val Val Arg Phe Tyr Arg Asn Gly Arg Gly Gln Ser Ala 1040 1045 1050 ctg cag gag att ctg ggc aag gtt atc cag gat gtg cta gaa gac aaa 3276 Leu Gln Glu Ile Leu Gly Lys Val Ile Gln Asp Val Leu Glu Asp Lys 1055 1060 1065 gtg ctc agc gtc cac aca gac cct gtc cac ctc tat aag aac tgg atc 3324 Val Leu Ser Val His Thr Asp Pro Val His Leu Tyr Lys Asn Trp Ile 1070 1075 1080 aac cag act gag gcc cag aca ggg cag cgc agc cat ctc cca tat gat 3372 Asn Gln Thr Glu Ala Gln Thr Gly Gln Arg Ser His Leu Pro Tyr Asp 1085 1090 1095 gtc acc ccg gag cag gcc ttg agc cac ccc gag gtc cag aga cga ctg 3420 Val Thr Pro Glu Gln Ala Leu Ser His Pro Glu Val Gln Arg Arg Leu 1100 1105 1110 1115 gac atc gcc cta cgc aac ctc ctc gcc atg act gat aag ttc ctt tta 3468 Asp Ile Ala Leu Arg Asn Leu Leu Ala Met Thr Asp Lys Phe Leu Leu 1120 1125 1130 gcc atc acc tca tct gtg gac caa att ccg tat ggg atg cga tat gtg 3516 Ala Ile Thr Ser Ser Val Asp Gln Ile Pro Tyr Gly Met Arg Tyr Val 1135 1140 1145 gcc aaa gtc ctg aag gca act ctg gca gag aaa ttc cct gac gcc aca 3564 Ala Lys Val Leu Lys Ala Thr Leu Ala Glu Lys Phe Pro Asp Ala Thr 1150 1155 1160 gac agc gag gtc tat aag gtg gtc ggg aac ctc ctg tac tac cgc ttc 3612 Asp Ser Glu Val Tyr Lys Val Val Gly Asn Leu Leu Tyr Tyr Arg Phe 1165 1170 1175 ctg aac cca gct gtg gtg gct cct gac gcc ttc gac att gtg gcc atg 3660 Leu Asn Pro Ala Val Val Ala Pro Asp Ala Phe Asp Ile Val Ala Met 1180 1185 1190 1195 gca gct ggt gga gcc ctg gct gcc ccc cag cgc cat gcc ctg ggg gct 3708 Ala Ala Gly Gly Ala Leu Ala Ala Pro Gln Arg His Ala Leu Gly Ala 1200 1205 1210 gtg gct cag ctc cta cag cac gct gcg gct ggc aag gcc ttc tct ggg 3756 Val Ala Gln Leu Leu Gln His Ala Ala Ala Gly Lys Ala Phe Ser Gly 1215 1220 1225 cag agc cag cac cta cgg gtc ctg aat gac tat ctg gag gaa aca cac 3804 Gln Ser Gln His Leu Arg Val Leu Asn Asp Tyr Leu Glu Glu Thr His 1230 1235 1240 ctc aag ttc agg aag ttc atc cat aga gcc tgc cag gtg cca gag cca 3852 Leu Lys Phe Arg Lys Phe Ile His Arg Ala Cys Gln Val Pro Glu Pro 1245 1250 1255 gag gag cgt ttt gca gtg gac gag tac tca gac atg gtg gct gtg gcc 3900 Glu Glu Arg Phe Ala Val Asp Glu Tyr Ser Asp Met Val Ala Val Ala 1260 1265 1270 1275 aaa ccc atg gtg tac atc acc gtg ggg gag ctg gtc aac acg cac agg 3948 Lys Pro Met Val Tyr Ile Thr Val Gly Glu Leu Val Asn Thr His Arg 1280 1285 1290 ctg ttg ctg gag cac cag gac tgc att gcc cct gat cac caa gac ccc 3996 Leu Leu Leu Glu His Gln Asp Cys Ile Ala Pro Asp His Gln Asp Pro 1295 1300 1305 ctg cat gag ctc ctg gag gat ctt ggg gag ctg ccc acc atc cct gac 4044 Leu His Glu Leu Leu Glu Asp Leu Gly Glu Leu Pro Thr Ile Pro Asp 1310 1315 1320 ctt att ggt gag agc atc gct gca gat ggg cac acg gac ctg agc aag 4092 Leu Ile Gly Glu Ser Ile Ala Ala Asp Gly His Thr Asp Leu Ser Lys 1325 1330 1335 cta gaa gtg tcc ctg acg ctg acc aac aag ttt gaa gga cta gag gca 4140 Leu Glu Val Ser Leu Thr Leu Thr Asn Lys Phe Glu Gly Leu Glu Ala 1340 1345 1350 1355 gat gct gat gac tcc aac acc cgt agc ctg ctt ctg agc acc aag cag 4188 Asp Ala Asp Asp Ser Asn Thr Arg Ser Leu Leu Leu Ser Thr Lys Gln 1360 1365 1370 ctg ttg gcc gat atc ata cag ttc cat cct ggg gac acc ctc aag gag 4236 Leu Leu Ala Asp Ile Ile Gln Phe His Pro Gly Asp Thr Leu Lys Glu 1375 1380 1385 atc ctg tcc ctc tcg gct tcc aga gag caa gaa gca gcc cac aag cag 4284 Ile Leu Ser Leu Ser Ala Ser Arg Glu Gln Glu Ala Ala His Lys Gln 1390 1395 1400 ctg atg agc cga cgc cag gcc tgt aca gcc cag aca ccg gag cca ctg 4332 Leu Met Ser Arg Arg Gln Ala Cys Thr Ala Gln Thr Pro Glu Pro Leu 1405 1410 1415 cga cga cac cgc tca ctg aca gct cac tcc ctc ctg cca ctg gca gag 4380 Arg Arg His Arg Ser Leu Thr Ala His Ser Leu Leu Pro Leu Ala Glu 1420 1425 1430 1435 aag cag cgg cgc gtc ctg cgg aac cta cgc cga ctt gaa gcc ctg ggg 4428 Lys Gln Arg Arg Val Leu Arg Asn Leu Arg Arg Leu Glu Ala Leu Gly 1440 1445 1450 ttg gtc agc gcc aga aat ggc tac cag ggg cta gtg gac gag ctg gcc 4476 Leu Val Ser Ala Arg Asn Gly Tyr Gln Gly Leu Val Asp Glu Leu Ala 1455 1460 1465 aag gac atc cgc aac cag cac aga cac agg cac agg cgg aag gca gag 4524 Lys Asp Ile Arg Asn Gln His Arg His Arg His Arg Arg Lys Ala Glu 1470 1475 1480 ctg gtg aag ctg cag gcc aca tta cag ggc ctg agc act aag acc acc 4572 Leu Val Lys Leu Gln Ala Thr Leu Gln Gly Leu Ser Thr Lys Thr Thr 1485 1490 1495 ttc tat gag gag cag ggt gac tac tac agc cag tac atc cgg gcc tgc 4620 Phe Tyr Glu Glu Gln Gly Asp Tyr Tyr Ser Gln Tyr Ile Arg Ala Cys 1500 1505 1510 1515 ctg gac cac ctg gcc ccc gac tcc aag agt tct ggg aag ggg aag aag 4668 Leu Asp His Leu Ala Pro Asp Ser Lys Ser Ser Gly Lys Gly Lys Lys 1520 1525 1530 cag cct tct ctt cat tac act gct gct cag ctc ctg gaa aag ggt gtc 4716 Gln Pro Ser Leu His Tyr Thr Ala Ala Gln Leu Leu Glu Lys Gly Val 1535 1540 1545 ttg gtg gaa att gaa gat ctt ccc gcc tct cac ttc aga aac gtc atc 4764 Leu Val Glu Ile Glu Asp Leu Pro Ala Ser His Phe Arg Asn Val Ile 1550 1555 1560 ttt gac atc acg ccg gga gat gag gca gga aag ttt gaa gta aat gcc 4812 Phe Asp Ile Thr Pro Gly Asp Glu Ala Gly Lys Phe Glu Val Asn Ala 1565 1570 1575 aag ttc ctg ggt gtg gac atg gag cga ttt cag ctt cac tat cag gat 4860 Lys Phe Leu Gly Val Asp Met Glu Arg Phe Gln Leu His Tyr Gln Asp 1580 1585 1590 1595 ctc ctg cag ctc cag tat gag ggt gtg gct gtc atg aaa ctc ttc aac 4908 Leu Leu Gln Leu Gln Tyr Glu Gly Val Ala Val Met Lys Leu Phe Asn 1600 1605 1610 aag gcc aaa gtc aat gtc aac ctt ctc atc ttc ctc ctc aac aag aag 4956 Lys Ala Lys Val Asn Val Asn Leu Leu Ile Phe Leu Leu Asn Lys Lys 1615 1620 1625 ttt ttg cgg aag tg acagaggcaa agggtgctac ccaagcccct cttacctctc 5010 Phe Leu Arg Lys 1630 tggatgcttt ctttaacact aactcaccac tgtgcttccc tgcagacacc cagagctcag 5070 gactgggcaa ggcccaggga ttctcacccc ttccccagct gggaggagct tgcctgcctg 5130 gccacagaca gtgtatcttc taattggcta aagtgggcct tgcccagagt ccagctgtgt 5190 ggcttttatc atgcatgaca aacccctggc tttcctgcca gatggtagga catggacctt 5250 gacctgggaa agccattact cttgtgtctg ctactgccct cccacagtca ccccaatatt 5310 acaagcactg ccccagcggc ttgatttccc ctctgccttc cttctctctg cactcccaca 5370 aagccagggc caggctcccc atccctacct cccactgcat cagcagtggg tgttcctgcc 5430 cttcctgagt ctaggcagct ctgctgctgt gatctgcaca ccctccaacc tgggcaggga 5490 ctggggggat gcagtgtgtg ttagtgccca tgtggcattg tggcactgtt gccccccatg 5550 gcggcatggg caagatgacc ttccattagc ttcaagtctt gttctcttgt ctgtggtctg 5610 tttaatatgt gggtcactag ggtatttatt ctttctccca tccttacact ctggatcatt 5670 gtgcagactt aatcagggtt ttaacgcttt catttttttt tttttttttt tttttttgag 5730 ctcaaagaga gttctcattt tccctattca aactaatacc catgccgtgt tttttacctt 5790 ggatttaaag tcaccttagg ttggggcaac agattctcac tcatgtttaa gatcttgtta 5850 tttcagcttc ataagatcaa agaggagtct ttcccttttc tcttttaccc tcaggattct 5910 catcccttac agctgactct tccaggcaat ttccatagat ctgcagtcct gcctctgcca 5970 cagtctctct gttgtcccca catctaccca acttcctgta ctgttgccct tctgatgtta 6030 ataaaagcag ctgttactcc caaaaaaaaa aaaaaaaaa 6069 <210> 154 <211> 1631 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 154 Met Glu Arg Arg Ala Ala Gly Pro Gly Trp Ala Ala Tyr Glu Arg Leu 1 5 10 15 Thr Ala Glu Glu Met Asp Glu Gln Arg Arg Gln Asn Val Ala Tyr Gln 20 25 30 Tyr Leu Cys Arg Leu Glu Glu Ala Lys Arg Trp Met Glu Ala Cys Leu 35 40 45 Lys Glu Glu Leu Pro Ser Pro Val Glu Leu Glu Glu Ser Leu Arg Asn 50 55 60 Gly Val Leu Leu Ala Lys Leu Gly His Cys Phe Ala Pro Ser Val Val 65 70 75 80 Pro Leu Lys Lys Ile Tyr Asp Val Glu Gln Leu Arg Tyr Gln Ala Thr 85 90 95 Gly Leu His Phe Arg His Thr Asp Asn Ile Asn Phe Trp Leu Ser Ala 100 105 110 Ile Ala His Ile Gly Leu Pro Ser Thr Phe Phe Pro Glu Thr Thr Asp 115 120 125 Ile Tyr Asp Lys Lys Asn Met Pro Arg Val Val Tyr Cys Ile His Ala 130 135 140 Leu Ser Leu Phe Leu Phe Arg Leu Gly Leu Ala Pro Gln Ile His Asp 145 150 155 160 Leu Tyr Gly Lys Val Lys Phe Thr Ala Glu Glu Leu Ser Asn Met Ala 165 170 175 Ser Glu Leu Ala Lys Tyr Gly Leu Gln Leu Pro Ala Phe Ser Lys Ile 180 185 190 Gly Gly Ile Leu Ala Asn Glu Leu Ser Val Asp Glu Ala Ala Val His 195 200 205 Ala Ala Val Leu Ala Ile Asn Glu Ala Val Glu Arg Gly Val Val Glu 210 215 220 Asp Thr Leu Ala Ala Leu Gln Asn Pro Ser Ala Leu Leu Glu Asn Leu 225 230 235 240 Arg Glu Pro Leu Ala Ala Val Tyr Gln Glu Met Leu Ala Gln Ala Lys 245 250 255 Met Glu Lys Ala Ala Asn Ala Arg Asn His Asp Asp Arg Glu Ser Gln 260 265 270 Asp Ile Tyr Asp His Tyr Leu Thr Gln Ala Glu Ile Gln Gly Asn Ile 275 280 285 Asn His Val Asn Val His Gly Ala Leu Glu Val Val Asp Asp Ala Leu 290 295 300 Glu Arg Gln Ser Pro Glu Ala Leu Leu Lys Ala Leu Gln Asp Pro Ala 305 310 315 320 Leu Ala Leu Arg Gly Val Arg Arg Asp Phe Ala Asp Trp Tyr Leu Glu 325 330 335 Gln Leu Asn Ser Asp Arg Glu Gln Lys Ala Gln Glu Leu Gly Leu Val 340 345 350 Glu Leu Leu Glu Lys Glu Glu Val Gln Ala Gly Val Ala Ala Ala Asn 355 360 365 Thr Lys Gly Asp Gln Glu Gln Ala Met Leu His Ala Val Gln Arg Ile 370 375 380 Asn Lys Ala Ile Arg Arg Gly Val Ala Ala Asp Thr Val Lys Glu Leu 385 390 395 400 Met Cys Pro Glu Ala Gln Leu Pro Pro Val Tyr Pro Val Ala Ser Ser 405 410 415 Met Tyr Gln Leu Glu Leu Ala Val Leu Gln Gln Gln Gln Gly Glu Leu 420 425 430 Gly Gln Glu Glu Leu Phe Val Ala Val Glu Met Leu Ser Ala Val Val 435 440 445 Leu Ile Asn Arg Ala Leu Glu Ala Arg Asp Ala Ser Gly Phe Trp Ser 450 455 460 Ser Leu Val Asn Pro Ala Thr Gly Leu Ala Glu Val Glu Gly Glu Asn 465 470 475 480 Ala Gln Arg Tyr Phe Asp Ala Leu Leu Lys Leu Arg Gln Glu Arg Gly 485 490 495 Met Gly Glu Asp Phe Leu Ser Trp Asn Asp Leu Gln Ala Thr Val Ser 500 505 510 Gln Val Asn Ala Gln Thr Gln Glu Glu Thr Asp Arg Val Leu Ala Val 515 520 525 Ser Leu Ile Asn Glu Ala Leu Asp Lys Gly Ser Pro Glu Lys Thr Leu 530 535 540 Ser Ala Leu Leu Leu Pro Ala Ala Gly Leu Asp Asp Val Ser Leu Pro 545 550 555 560 Val Ala Pro Arg Tyr His Leu Leu Leu Val Ala Ala Lys Arg Gln Lys 565 570 575 Ala Gln Val Thr Gly Asp Pro Gly Ala Val Leu Trp Leu Glu Glu Ile 580 585 590 Arg Gln Gly Val Val Arg Ala Asn Gln Asp Thr Asn Thr Ala Gln Arg 595 600 605 Met Ala Leu Gly Val Ala Ala Ile Asn Gln Ala Ile Lys Glu Gly Lys 610 615 620 Ala Ala Gln Thr Glu Arg Val Leu Arg Asn Pro Ala Val Ala Leu Arg 625 630 635 640 Gly Val Val Pro Asp Cys Ala Asn Gly Tyr Gln Arg Ala Leu Glu Ser 645 650 655 Ala Met Ala Lys Lys Gln Arg Pro Ala Asp Thr Ala Phe Trp Val Gln 660 665 670 His Asp Met Lys Asp Gly Thr Ala Tyr Tyr Phe His Leu Gln Thr Phe 675 680 685 Gln Gly Ile Trp Glu Gln Pro Pro Gly Cys Pro Leu Asn Thr Ser His 690 695 700 Leu Thr Arg Glu Glu Ile Gln Ser Ala Val Thr Lys Val Thr Ala Ala 705 710 715 720 Tyr Asp Arg Gln Gln Leu Trp Lys Ala Asn Val Gly Phe Val Ile Gln 725 730 735 Leu Gln Ala Arg Leu Arg Gly Phe Leu Val Arg Gln Lys Phe Ala Glu 740 745 750 His Ser His Phe Leu Arg Thr Trp Leu Pro Ala Val Ile Lys Ile Gln 755 760 765 Ala His Trp Arg Gly Tyr Arg Gln Arg Lys Ile Tyr Leu Glu Trp Leu 770 775 780 Gln Tyr Phe Lys Ala Asn Leu Asp Ala Ile Ile Lys Ile Gln Ala Trp 785 790 795 800 Ala Arg Met Trp Ala Ala Arg Arg Gln Tyr Leu Arg Arg Leu His Tyr 805 810 815 Phe Gln Lys Asn Val Asn Ser Ile Val Lys Ile Gln Ala Phe Phe Arg 820 825 830 Ala Arg Lys Ala Gln Asp Asp Tyr Arg Ile Leu Val His Ala Pro His 835 840 845 Pro Pro Leu Ser Val Val Arg Arg Phe Ala His Leu Leu Asn Gln Ser 850 855 860 Gln Gln Asp Phe Leu Ala Glu Ala Glu Leu Leu Lys Leu Gln Glu Glu 865 870 875 880 Val Val Arg Lys Ile Arg Ser Asn Gln Gln Leu Glu Gln Asp Leu Asn 885 890 895 Ile Met Asp Ile Lys Ile Gly Leu Leu Val Lys Asn Arg Ile Thr Leu 900 905 910 Gln Glu Val Val Ser His Cys Lys Lys Leu Thr Lys Arg Asn Lys Glu 915 920 925 Gln Leu Ser Asp Met Met Val Leu Asp Lys Gln Lys Gly Leu Lys Ser 930 935 940 Leu Ser Lys Glu Lys Arg Gln Lys Leu Glu Ala Tyr Gln His Leu Phe 945 950 955 960 Tyr Leu Leu Gln Thr Gln Pro Ile Tyr Leu Ala Lys Leu Ile Phe Gln 965 970 975 Met Pro Gln Asn Lys Thr Thr Lys Phe Met Glu Ala Val Ile Phe Ser 980 985 990 Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Ser Arg Arg Glu Ala Tyr Leu Leu Leu Gln 995 1000 1005 Leu Phe Lys Thr Ala Leu Gln Glu Glu Ile Lys Ser Lys Val Glu Gln 1010 1015 1020 Pro Gln Asp Val Val Thr Gly Asn Pro Thr Val Val Arg Leu Val Val 1025 1030 1035 1040 Arg Phe Tyr Arg Asn Gly Arg Gly Gln Ser Ala Leu Gln Glu Ile Leu 1045 1050 1055 Gly Lys Val Ile Gln Asp Val Leu Glu Asp Lys Val Leu Ser Val His 1060 1065 1070 Thr Asp Pro Val His Leu Tyr Lys Asn Trp Ile Asn Gln Thr Glu Ala 1075 1080 1085 Gln Thr Gly Gln Arg Ser His Leu Pro Tyr Asp Val Thr Pro Glu Gln 1090 1095 1100 Ala Leu Ser His Pro Glu Val Gln Arg Arg Leu Asp Ile Ala Leu Arg 1105 1110 1115 1120 Asn Leu Leu Ala Met Thr Asp Lys Phe Leu Leu Ala Ile Thr Ser Ser 1125 1130 1135 Val Asp Gln Ile Pro Tyr Gly Met Arg Tyr Val Ala Lys Val Leu Lys 1140 1145 1150 Ala Thr Leu Ala Glu Lys Phe Pro Asp Ala Thr Asp Ser Glu Val Tyr 1155 1160 1165 Lys Val Val Gly Asn Leu Leu Tyr Tyr Arg Phe Leu Asn Pro Ala Val 1170 1175 1180 Val Ala Pro Asp Ala Phe Asp Ile Val Ala Met Ala Ala Gly Gly Ala 1185 1190 1195 1200 Leu Ala Ala Pro Gln Arg His Ala Leu Gly Ala Val Ala Gln Leu Leu 1205 1210 1215 Gln His Ala Ala Ala Gly Lys Ala Phe Ser Gly Gln Ser Gln His Leu 1220 1225 1230 Arg Val Leu Asn Asp Tyr Leu Glu Glu Thr His Leu Lys Phe Arg Lys 1235 1240 1245 Phe Ile His Arg Ala Cys Gln Val Pro Glu Pro Glu Glu Arg Phe Ala 1250 1255 1260 Val Asp Glu Tyr Ser Asp Met Val Ala Val Ala Lys Pro Met Val Tyr 1265 1270 1275 1280 Ile Thr Val Gly Glu Leu Val Asn Thr His Arg Leu Leu Leu Glu His 1285 1290 1295 Gln Asp Cys Ile Ala Pro Asp His Gln Asp Pro Leu His Glu Leu Leu 1300 1305 1310 Glu Asp Leu Gly Glu Leu Pro Thr Ile Pro Asp Leu Ile Gly Glu Ser 1315 1320 1325 Ile Ala Ala Asp Gly His Thr Asp Leu Ser Lys Leu Glu Val Ser Leu 1330 1335 1340 Thr Leu Thr Asn Lys Phe Glu Gly Leu Glu Ala Asp Ala Asp Asp Ser 1345 1350 1355 1360 Asn Thr Arg Ser Leu Leu Leu Ser Thr Lys Gln Leu Leu Ala Asp Ile 1365 1370 1375 Ile Gln Phe His Pro Gly Asp Thr Leu Lys Glu Ile Leu Ser Leu Ser 1380 1385 1390 Ala Ser Arg Glu Gln Glu Ala Ala His Lys Gln Leu Met Ser Arg Arg 1395 1400 1405 Gln Ala Cys Thr Ala Gln Thr Pro Glu Pro Leu Arg Arg His Arg Ser 1410 1415 1420 Leu Thr Ala His Ser Leu Leu Pro Leu Ala Glu Lys Gln Arg Arg Val 1425 1430 1435 1440 Leu Arg Asn Leu Arg Arg Leu Glu Ala Leu Gly Leu Val Ser Ala Arg 1445 1450 1455 Asn Gly Tyr Gln Gly Leu Val Asp Glu Leu Ala Lys Asp Ile Arg Asn 1460 1465 1470 Gln His Arg His Arg His Arg Arg Lys Ala Glu Leu Val Lys Leu Gln 1475 1480 1485 Ala Thr Leu Gln Gly Leu Ser Thr Lys Thr Thr Phe Tyr Glu Glu Gln 1490 1495 1500 Gly Asp Tyr Tyr Ser Gln Tyr Ile Arg Ala Cys Leu Asp His Leu Ala 1505 1510 1515 1520 Pro Asp Ser Lys Ser Ser Gly Lys Gly Lys Lys Gln Pro Ser Leu His 1525 1530 1535 Tyr Thr Ala Ala Gln Leu Leu Glu Lys Gly Val Leu Val Glu Ile Glu 1540 1545 1550 Asp Leu Pro Ala Ser His Phe Arg Asn Val Ile Phe Asp Ile Thr Pro 1555 1560 1565 Gly Asp Glu Ala Gly Lys Phe Glu Val Asn Ala Lys Phe Leu Gly Val 1570 1575 1580 Asp Met Glu Arg Phe Gln Leu His Tyr Gln Asp Leu Leu Gln Leu Gln 1585 1590 1595 1600 Tyr Glu Gly Val Ala Val Met Lys Leu Phe Asn Lys Ala Lys Val Asn 1605 1610 1615 Val Asn Leu Leu Ile Phe Leu Leu Asn Lys Lys Phe Leu Arg Lys 1620 1625 1630

Claims

서열번호 154의 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포독성 T 세포 유도성을 갖는 분리된 노나펩티드(nonapeptide) 또는 데카펩티드(decapeptide).
제 1항에 있어서, 상기 펩티드는, 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150의 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 노나펩티드 또는 데카펩티드.
하기로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포독성 T림프구(cytotoxic T lymphocyte, CTL) 유도성을 갖는 펩티드:
(a) 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150; 또는
(b) 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63, 67, 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150에서 1, 2, 또는 다수의 아미노산이 치환, 삽입, 결실 또는 첨가된 아미노산 서열.
제 3항에 있어서, 상기 서열번호 2, 4, 7, 21, 25, 29, 32, 35, 37, 40, 49, 53, 55, 56, 57, 62, 63 및 67로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드는 하기 특성 중 하나 또는 두 개를 갖는 것을 특징으로 하는 펩티드:
(a) 상기 서열번호의 아미노산 서열의 N 말단으로부터 두 번째 아미노산이 페닐알라닌(phenylalanine), 타이로신(tyrosine), 메티오닌(methionine), 및 트립토판(tryptophan)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산이거나 또는 이로 변형된 아미노산, 및
(b) 상기 서열번호의 아미노산 서열의 C 말단 아미노산이 페닐알라닌(phenylalanine), 류신(leucine), 이소류신(isoleucine), 트립토판(tryptophan), 및 메티오닌(methionine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산이거나 또는 이로 변형된 아미노산.
제 3항에 있어서, 상기 서열번호 75, 85, 99, 101, 111, 114, 121, 125, 130, 139, 140, 141, 142, 143, 145, 148 및 150으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드는 하기 특성 중 하나 또는 두 개를 갖는 것을 특징으로 하는 펩티드:
(a) 상기 서열번호의 아미노산 서열의 N 말단으로부터 두 번째 아미노산이 류신(leucine) 또는 메티오닌(methionine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산이거나 또는 이로 변형된 아미노산, 및
(b) 상기 서열번호의 아미노산 서열의 C 말단 아미노산이 발린(valine) 또는 류신(leucine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산이거나 또는 이로 변형된 아미노산.
하기로 구성된 군으로부터 선택되는 목적을 위해서 제형화된, 제 1항 내지 제 5항의 하나 또는 다수의 펩티드, 또는 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 약학적으로 하용가능한 담체와 조합으로 포함하는 약학적 조성물:
(ⅰ) 종양의 치료,
(ⅱ) 종양의 예방,
(ⅲ) 종양의 수술 후 재발 방지, 및
(ⅳ) 이의 조합.
제 6항에 있어서, HLA 항원이 HLA-A24 또는 HLA-A02인 개체에 투여되기 위해서 제형화된 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 7항에 있어서, 암 치료를 위해서 제형화된 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 8항에 있어서, 상기 조성물은 백신(vaccine)을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드를 HLA 항원과 조합하여 포함하는 복합체를 표면에 제시하는 엑소솜.
제 10항에 있어서, 상기 HLA 항원은 HLA-A24인 것을 특징으로 하는 엑소솜.
제 10항에 있어서, 상기 HLA 항원은 HLA-A2402인 것을 특징으로 하는 엑소솜.
제 10항에 있어서, 상기 HLA 항원은 HLA-A02인 것을 특징으로 하는 엑소솜.
제 10항에 있어서, 상기 HLA 항원은 HLA-A0201인 것을 특징으로 하는 엑소솜.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드를 이용하여 높은 CTL 유도성을 갖는 항원 제시 세포를 유도하는 방법.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드를 사용하여 CTL을 유도하는 방법.
제 15항에 있어서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 유전자를 항원 제시 세포에 도입하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 높은 CTL 유도성을 갖는 항원 제시 세포를 유도하는 방법.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 하나의 펩티드를 표적으로하는 분리된 세포독성 T 세포.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드를 이용하여 유도되는 분리된 세포독성 T 세포.
HLA 항원 및 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드의 복합체를 표면에 제시하는 분리된 항원 제시 세포.
제 20항에 있어서, 상기 세포는 제 15항 또는 제 17항의 방법에 의해 유도되는 것을 특징으로 하는 항원 제시 세포.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드, 이의 면역학적 활성 단편, 또는 상기 펩티드 또는 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 백신을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 암에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.