KR20090094043A

KR20090094043A - 리포좀 제형 및 이를 제조하는 방법

Info

Publication number: KR20090094043A
Application number: KR1020097015712A
Authority: KR
Inventors: 춘레이 리; 진수 왕; 카이시아 왕; 얀희 리; 동민 셴; 옌민 구오; 리 쟝; 란 쟝
Original assignee: 스자좡 파마 그룹 중치 파마슈티컬 테크놀로지 (스자좡) 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2006-12-29
Filing date: 2007-12-29
Publication date: 2009-09-02
Also published as: CA2673924C; US10028913B2; EP2123260B1; JP2015180652A; RU2009126983A; ES2401526T3; JP2013177397A; CU20090114A7; US20110002977A1; CO6190601A2; BRPI0720733A2; CN101209243B; EP2123260A1; US20160235671A1; CU23980B1; AU2007341803B2; RU2494729C2; JP2010514708A; AU2007341803A1; AU2007341803A2

Abstract

본 발명은 다원자가의 이온 약물을 포함하는 리포좀성 약제학적 제재, 리포좀성 약제학적 제재의 제조과정 및 질병 치료에 있어서 이들의 사용에 관한 것으로서, 리포좀은 30-80 ㎚의 크기를 가지며, 인지질 이중층은 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질을 포함하며, 따라서 리포좀의 상전이 온도는 체온보다 높다.

Description

리포좀 제형 및 이를 제조하는 방법 {LIPOSOME FORMULATION AND PROCESS FOR PREPARATION THEREOF}

본 발명은 리포좀성 제재 및 약물을 캡슐화(encapsulation)한 리포좀성 약제학적 제재에 관한 것으로서, 특히 미톡산트론(mitoxantrone)의 리포좀성 약제학적 제재에 관한 것이다. 더 나아가 본 발명은 리포좀의 제조방법, 리포좀성 약제학적 제재 및 이들의 사용에 관한 것이다.

리포좀은 많은 약물, 특히 항종양(antitumor) 약물(그중에서도 화학요법 약물)의 운반체로 사용될 수 있다. 리포좀은 정상조직 내에서 약물의 분배를 감소시킬 수 있지만, 종양조직 내에서는 약물의 축적을 증가시킬 수 있기 때문에 약물의 치료 지수(therapeutic index)를 개선시킬 수 있다. 리포좀이 종양을 수동적으로 목표로 삼을 수 있는 이유는 종양 조직의 생리적 특성과 관련이 있다. 종양 혈관은 급속한 성장으로 인하여 100~780 ㎚에 달하는 세공을 가질 수 있으나, 반면에 정상 혈관의 내피 세포는 약 2 ㎚의 전형적인 간격을 갖는다. 그러므로, 만약 리포좀이 혈액 내에서 상대적으로 오랜 기간 동안 순환할 수 있고 200 ㎚보다 작은 크기를 가질 수 있다면, 리포좀은 종양 부위에 수동적으로 축적될 수 있는데, 그 이유는 작은 크기를 갖는 리포좀이 정맥 주사를 통하여 투여된 후에, 그것들은 정상조직에는 들어가지 못하지만 종양 부위의 혈관에 침투하여 치료 부위에 도달할 수 있기 때문이다.

그러나, 리포좀의 치료상의 이점을 획득하기는 쉽지 않으며, 다음의 네 가지 요건이 충족되어야만 한다: (1) 약물은 좋은 캡슐화 효율 및 충분한 약물 적재로 리포좀 내에 캡슐화될 수 있다; (2) 약물은 생체 밖에서의 저장 기간 동안 리포좀으로부터 방출되지 않을 것이다; (3) 리포좀성 약물의 혈액 순환 동안 주목할만한 약물 누출이 없다; 및 (4) 약물은 효과적으로 방출될 수 있고 그렇기 때문에 리포좀이 종양 부위에 축적되어 있을 때 치료 효과가 나타나도록 한다. 현재의 리포좀 기술에 관해서는, 이전의 세 가지 문제점들이 잘 해결되어 왔으며, 따라서 리포좀성 약물의 생체 내에의 합리적인 방출이 더욱 주의를 끈다. 리포좀성 약물의 개발을 위해 해결되어야 할 하나의 결정적인 기술적 문제는 종양 부위를 타겟(target)으로 한 후에 리포좀성 약물의 합리적 방출을 효과적으로 통제하는 것이다. 이는 미톡산트론과 같은 몇몇 약물에 있어서는 특히 중요하다.

대두 경화 포스파티딜콜린(hydrogenated soybean phophatidylcholine, 이하 HSPC)과 콜레스테롤을 인지질 이중층으로 사용하고 300 mM 구연산(citric acid) 구배에 의해 약물을 적재하여 제조된, 약 100 ㎚의 크기를 갖는 리포좀 제형은 유리 미톡산트론만큼 효과가 좋지 않다는 것이 캐나다의 리포좀 연구 그룹에 의해 밝혀졌다. 리포좀의 치료 효과를 향상시키기 위하여, 그 그룹은 최종적으로 인지질 이중층의 조성을 디미리스토일 포스파티딜콜린(dimyristoil phophatidylcholine, DMPC) 및 콜레스테롤로 바꾸었으며, 향상된 치료지수를 가진 조제약을 획득하였다. 그러나 디미리스토일 포스파티딜콜린의 상전이 온도(phase transition temperature)가 약 21℃이기 때문에 약물의 누출은 저장기간 동안 증가할 수도 있으며, 따라서 제제는 안정하지 않을 수 있다(Liposomal formulations of mitoxantrone , US5,858,397).

미국의 Neopharm Corporation은 미톡산트론의 리포좀 제형을 개발하기 위해 다른 기술을 사용하였는데, 음전하를 운반하는 카디오리핀(cardiolipin)이 인지질 이중층에 첨가되었다. 카디오리핀 및 미톡산트론 사이의 강한 상호작용 때문에 미톡산트론이 인지질 이중층 내에 수동 적재 방법으로 삽입될 수 있었다. 이러한 수동 적재 기술은 능동 적재 기술과는 다르다. 능동 적재 기술에 의하여, 약물은 침전의 형태로 리포좀 내부의 액상에 쌓일 것이다. Neopharm의 제품에 대한 임상연구 1단계는 리포좀 약물이 유리 약물과 비교해볼 때 부차적인 감염의 가능성을 증가시킬 수 있다는 것을 나타내었다. 상기 제품의 개발은 안전을 고려하여 중지되었다(Liposomal preparations of mixantrone, CN01817424.8).

Pacific Institute of Materia Medica(Changchou, China) 또한 미톡산트론의 리포좀성 제재에 대한 특허를 출원하였다(A liposomal injection of mitoxantrone or mitoxantrone hydrochloride and the process for making the same, CN200410041612.1). 상기 출원에서, 전통적인 pH값 구배 방법이 약물 적재에 사용되었다. 상기 출원은 특별한 비율을 갖는 제형을 보호하려고만 하고, 리포좀의 치료 효능과 독성에 있어서 인지질의 조성, 내부의 액상 내 완충염의 종류, 리포좀의 크기, 약물/리포좀 비율 등과 같은 요인의 효과를 공개하지 않는다.

West China School of Pharmacy, Sichuan University의 Zhirong Zhang 등도 미톡산트론의 리포좀성 제재를 연구하였다. 그들은 약 60 ㎚의 리포좀을 조제하기 위해 0℃의 상전이 온도를 갖는 대두 포스파티딜콜린(EPIKURON 200이란 상표명으로 시판됨)을 사용하였다. 상기 논문에서는, 획득한 리포좀성 제재의 독성과 치료 효능에 대한 고려 없이 단지 약물 동태만이 연구되었다. 관련 내용을 “장기의 순환을 하는 미톡산트론 리포좀의 제재와 그것의 약물 동태(Preparation of long circulating mitoxantrone liposomes and its pharmacokinetics)", Zhirong Zhang, Botao Yu and Yisong Duan, Acta pharmaceutica Sinica, 2002, vol. 37, No.6; 막의 안팎에서 생기는 황산암모늄의 구배로 장기의 순환을 하는 미톡산트론 리포좀의 제재에 대한 연구(Studies on preperation of long circulating mitoxantrone liposomes with transmembrane ammonium sulfate gradients), Zhirong Zhang, Botao yu, Yisong Duan과 Yuan Huang, Chinese Pharmaceutical Journal, 2002 Vol. 37, No.12; 및 미톡산트론 리포좀의 제재 기술에 대한 연구(Study on the preperation techniques of mitoxantrone liposomes), Yisong Duan, West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2001 Vol.16,No.02.에서 볼 수 있다.

상기의 연구들에서, 리포좀 분야에서 약 100 ㎚의 크기를 가진 리포좀이 가장 좋은 목표 설정 효율을 가질 것이라는 일치된 의견이 있기 때문에(Pharmacol. Rev. 1999 51: 691-744.), 리포좀의 크기는 일반적으로 80-150 ㎚의 범위 내에서 조절된다. 그러나 상기에서 언급했듯이, 리포좀은 그것의 효과를 발휘하기 위하여 훌륭한 타겟팅 효율을 가져야만 될 뿐만 아니라, 리포좀으로부터 충분한 방출도 가져야만 한다.

상기 지적한 바와 같이, 선행 분야에 따르면, 약물이 효과적으로 종양으로 전달되도록 하기 위하여 혈액순환 동안 약물의 누출을 본질적으로 피해야 하지만, 이러한 요구는 또한 약물이 종양 부위에 타겟되었을 때 리포좀으로부터 약물의 방출에 있어서 곤란을 야기한다. 리포좀을 만들기 위한 전통적인 과정에 있어, 약물은 일반적으로 능동 적재 기술에 의해 캡슐화되고, 리포좀 내부로 캡슐화된 약물은 생활성(bioactivity)이 없는 교질 침전 형태로 존재하여, 그 결과 약물이 리포좀으로부터 효과적으로 방출되었을 때만 생활성을 갖는 치료 약물로 변할 수 있다. 만약 약물의 방출 속도가 너무 느리면, 약물은 비록 종양 부위에 효과적으로 타겟팅이 되었음에도 불구하고 거의 그것의 치료 작용을 미칠 수 없으며, 치료 효과는 심지어 캡슐화되지 않은 약물보다 못할 수 있다.

그러므로, 좋은 타겟 능력을 갖는 약물을 운반하고 타겟 조직 내에서 효과적으로 약물을 방출할 수 있는 리포좀성 제재 및 이에 상응하는 리포좀성 약제학적 제재를 위한 분야에서 긴급한 요구가 있다.

도 1은 쿤밍 생쥐(Kunming mouse)에서 PLM060의 생체 내 약물 동태와 그것에 대하여 유리 미톡산트론의 생체 내 약물 동태를 비교한 것으로서, 여기서 PLM은 페길화된(PEGylated) 미톡산트론 리포좀을 나타내고, FM은 유리 미톡산트론을 나타내며, 횡 좌표는 시간(시, hour)을 나타내며 세로 좌표는 미톡산트론의 플라즈마 수준(㎍ mitoxantrone/mL plasma)을 나타낸다.

도 2는 생쥐 종양 내 PLM60과 FM의 프로파일을 나타내는데, 여기서 PLM60은 페길화된 미톡산트론 리포좀을 나타내고, FM은 유리 미톡산트론을 나타내고, 횡 좌표는 시간(시, hour)을 나타내고 세로 좌표는 종양조직에서 미톡산트론의 농도(㎍ mitoxantrone/g tumor tissue)를 나타낸다.

도 3은 서로 다른 제형의 생쥐에서 생체 내 약물 동태를 비교한 것으로서, 횡 좌표는 시간을 나타내고 세로 좌표는 미톡산트론의 플라즈마 수준(㎍ mitoxantrone/mL plasma)을 나타내며, 서로 다른 제형의 투여량 모두 4 ㎎/㎏이다.

본 발명가는 놀랍게도 다수의 해리가능기(dissociable group)와 다원자가의 반대이온으로 조밀한 침전을 형성하는 경향을 가지는 어떠한 약물들은, 효과적으로 향상된 치료지수를 갖는 소형 단일상(unilamellar) 리포좀성 제재를 형성하도록 처리될 수 있음을 우연히 발견하였다. 따라서 상기의 기술적 문제를 해결할 수 있었다.

그러므로, 한 관점에서, 본 발명은 인지질 이중층에서 체온보다 높은 상전이 온도(Tm)를 갖는 인지질을 포함하는 대략 30~80 ㎚ 크기의 리포좀성 제재를 제공하므로, 리포좀의 상전이 온도는 체온보다 높다. 상기 인지질의 예로서 포스파티딜콜린, 대두 경화 포스파티딜콜린, 난황 경화 포스파티딜콜린(egg-york phophatidylcholine), 디팔미토일 포스파티딜콜린(dipalmitoyl phophatidylcholine, DPPC) 또는 디스테로일 포스파티딜콜린(diestearoyl phophatidylcholine, DSPC) 또는 이들의 조합 등이 포함되나 이들에 한정되는 것은 아니다.

하나의 실시 예에서, 인지질 이중층에서 체온보다 더 높은 상전이 온도를 갖는 인지질은 50-100 mol/mol%, 바람직하게는 55-95 mol/mol%, 및 더 바람직하게는 인지질 총량의 55-95 mol/mol%를 나타낸다.

선택적으로, 본 발명의 리포좀성 제재의 인지질 이중층은 더 나아가 부가적인 인지질, 예를 들면 디미스트로일 포스파티딜콜린(dimyristoyl phophatidylcholine, DMPC) 등과 같이 체온보다 더 높지 않은 상전이 온도를 갖는 인지질을 포함한다. 리포좀성 제재의 상전이 온도값이 체온보다 낮은 값으로 현저하게 감소되지 않는다면, 본 발명의 리포좀성 제재 내 인지질의 양은 당업자에 의해 인습적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 리포좀성 제재는 또한 리포좀 막의 유동성을 조절하기 위해 콜레스테롤을 선택적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 리포좀성 제재는 또한 부가적인 첨가제, 특히 생체 내에서 리포좀에 더 나은 작용을 주기 위해 리포좀의 표면 특성을 한층 더 변경하기 위한 첨가제를 선택적으로 포함할 수 있다. 이러한 첨가제들은 예를 들어, 친수성 중합체로 치환된 지질 등을 포함한다.

다른 관점에서, 본 발명은, 특히 다원자가 이온의 약물과 같은 관심 있는 약물을 포함하는 리포좀성 약제학적 제재를 본 발명의 리포좀성 제재 내에서 제공한다. 그러므로, 본 발명은 30-80 ㎚의 크기를 갖는 리포좀성 약제학적 제재에 관한 것으로서, 상기: (1) 리포좀성 약제학적 제재는 활성 성분으로써 다원자가 이온의 약물을 포함한다; (2) 인지질 이중층은 리포좀의 상전이 온도가 체온보다 높도록 하기 위하여 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질을 포함한다; 그리고 선택적으로 (3) 리포좀성 약제학적 제재는 부가적인 약물 및/또는 리포좀성 약제학적 제재 내에서 수용할 수 있는 부가적인 첨가제들을 포함한다. 바람직하게는, 리포좀성 약제학적 제재의 크기의 주요 피크들(main peaks)은 35-75 ㎚ 주위, 특히 약 40-60 ㎚ 주위에 집중되어 있다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 상기의 리포좀성 약제학적 제재를 조제하기 위한 방법을 제공하는데, 다음의 단계들을 포함한다: (1) 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질과 선택적으로 부가적인 인지질 및/또는 콜레스테롤을 사용하여 리포좀을 준비하는 단계; 및 (2) 상기 리포좀 안으로 특히 다원자가 이온의 약물과 같은 관심 있는 약물을 캡슐화하는 단계.

본 발명은 또한 치료를 필요로 하는 대상에 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재를 투여하는 것을 포함하는, 질병의 치료 방법을 제공한다. 바람직하게는, 그 대상은 포유동물, 특히 인간이다.

일반적으로 리포좀은 인지질과 콜레스테롤을 막 물질로 하여 형성된다. 이 두 가지 성분들은 리포좀 이중층을 형성하기 위한 기본적인 물질일 뿐 아니라 매우 중요한 생리적 기능을 갖는다.

리포좀성 막의 물리적 성질은 온도와 밀접하게 관련되어 있다. 온도가 상승하면 지질 이중층의 아실 곁 사슬(acyl side chain)은 정돈된 배열에서 정돈되지 않은 배열로 형태를 바꾼다. 이러한 변화는 지질막의 물리적 성질의 많은 변화를 초래할 수 있다. 예를 들어, "겔(gel)" 상태가 "액정(liquid crystal)" 상태로 변할 수 있으며, 막의 횡 단면이 증가할 수 있으며, 이중층의 두께가 감소할 수 있으며, 막 유동성이 증가할 수 있다. 이와 같은 변화가 일어날 때의 온도를 상전이 온도라 한다. 지질 막의 상전이 온도는 열분석기(Differential Scanning Calorimertry), 전자스핀공명(Electron Spins Resonance, ESR) 등에 의해 측정될 수 있다. 리포좀 막의 상전이 온도는 인지질의 종류에 달려있다. 일반적으로 아실 곁 사슬이 길수록, 상전이 온도가 더 높다; 그리고 그 역도 같다. 예를 들어, 디미리스토일 포스파티딜콜린의 상전이 온도는 24℃이고, 반면에 디팔미토일 포스파티딜콜린과 디스테로일 포스파티딜콜린의 상전이 온도는 각각 41℃와 58℃이다. 막 유동성은 리포좀의 중요한 특성이다. 상전이 온도에서 막 유동성은 증가할 것이고, 리포좀 내에서 캡슐화된 약물은 최대 방출 속도를 가질 것이다. 그러므로 막 유동성은 리포좀의 안정성에 직접적으로 영향을 미친다.

한 실시 예에서, 본 발명은 약 30-80 ㎚의 크기를 갖는 리포좀 제재와 인지질 이중층에서 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질을 제공하는데, 따라서 리포좀의 상전이 온도는 체온보다 높다.

바람직하게는, 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재는 포스파티딜콜린과 같이 상대적으로 높은 상전이 온도를 갖는 인지질을 사용하여 조제된다. 만약 포스파티딜콜린의 상전이 온도가 체온보다 높으면, 탄화수소 사슬의 길이는 바람직하게는 적어도 16 탄소 이상이다. 바람직하게는 본 발명의 인지질은 대 두경화 포스파티딜콜린, 난황 경화 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 디스테로일 포스파티딜콜린, 또는 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 리포좀성 제재에서, 인지질 이중층에서 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질은 모든 인지질의 총량에 대하여 약 50-100 mol/mol%, 바람직하게는 약 55-95 mol/mol%, 더욱 바람직하게는 약 60-90 mol/mol%를 나타낸다. 선택적으로, 그 인지질 이중층은 부가적인 인지질, 예를 들어, 디미리스토일 포스파티딜콜린 등과 같이 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질을 포함할 수 있다. 리포좀성 제재의 상전이 온도가 체온보다 떨어지지 않는다면 이러한 인지질은 리포좀 내에 어떠한 적절한 양으로든 존재할 것이다. 적절한 양은 당업자에 의한 전통적인 기술에 따라 결정될 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 리포좀성 제재는 콜레스테롤을 더 포함할 수 있다. 콜레스테롤은 막 유동성 조절 기능을 갖는다. 리포좀 막이 50%(mol/mol)의 콜레스테롤을 포함할 때, 리포좀 막의 상 전이는 사라질 것이다. 콜레스테롤은 Papahadjopoulos 등에 의해 “유동성 완충제(fluidity buffer)”로 불리는데, 그 이유는 상전이 온도 이하의 인지질에 콜레스테롤을 부가하면 막의 정돈된 배열을 감소시킬 수 있고 막 유동성을 증가시킬 수 있는 반면, 상전이 온도 이상의 인지질에 콜레스테롤을 부가하면 막의 정돈된 배열을 증가시킬 수 있고 막 유동성을 감소시킬 수 있기 때문이다. 본 발명의 리포좀성 제재 내에서 콜레스테롤의 양은 리포좀의 조성의 총량에 대하여 2-60 mol/mol%, 5-55 mol/mol% 또는 10-50 mol/mol%일 수 있다. 보다 구체적으로, 콜레스테롤의 양은 리포좀의 조성의 총량에 대하여 15-45 mol/mol%, 예를 들면 20-40 mol/mol%일 수 있다. 본 발명의 리포좀 내 콜레스테롤의 양은 당업자에 의한 전통적인 기술에 따라 쉽게 결정될 수 있다.

본 발명의 리포좀 내 인지질 이중층은 또한 부가적인 첨가제, 특히 리포좀에 생체 내 더 나은 작용을 주기 위해 한층 더 변형된 리포좀의 표면 특성을 위한 첨가제를 포함할 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 이러한 첨가제들은 예를 들면, 친수성 중합체로 치환된 지질 물질을 포함하며, 그것들에 대한 예는 PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민(DSPE-PEG), PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 글리세롤(DSPG-PEG), PEG로 치환된 콜레스테롤(chol-PEG), 폴리비돈(polyvidone)으로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민(DSPE-PVP), PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 글리세롤(DSPG-PVP), 혹은 PEG로 치환된 콜레스테롤(chol-PVP)이다. 상기 첨가제는 또한 특별한 항체 또는 리간드로 치환된 막 물질일 수 있다. 본 발명의 리포좀 내 이러한 첨가제의 양은 당업자에 의한 전통적인 기술에 따라 결정될 수 있다. 예를 들어 인지질의 몰수에 대하여 0.1-20 mol/mol%, 바람직하게는 0.3-18 mol/mol%, 더욱 바람직하게는 0.5-15 mol/mol%, 특히 0.8-12mol/mol%, 예를 들면 1-10 mol/mol%, 또는 2-8 mol/mol%, 2.5-7 mol/mol%, 3-6 mol/mol% 등과 같을 수 있다. PEG로 치환된 지질들을 첨가제로 사용한 경우들에 있어, PEG 부분의 분자량은 예를 들면, 400-20000 달톤(Dalton), 바람직하게는 600-15000 달톤, 더 바람직하게는 800-10000 달톤, 특히 1000-8000 달톤, 예를 들면 1200-5000 달톤이다. 본 발명에서 PEG의 사용은 당업자에 의해 전통적으로 다져진 길에 따라 쉽게 결정될 수 있다.

본 발명의 리포좀성 제재는 소형 단일상 리포좀성 제재이고, 적당한 크기를 가져야 한다. 바람직하게는, 제재의 크기는 30-80 ㎚, 더욱 바람직하게는 35-70 ㎚, 특히 바람직하게는 40-60 ㎚이다. 리포좀의 크기는 입자 크기 분석기(particle size analyzer), 전자현미경(electron microscope) 또는 다른 수단들에 의해 측정되어질 수 있다. 본 발명에서 리포좀 입자는 리포좀 그 자체의 성질과 제조과정의 특성으로 인해, 완전히 똑같은 크기는 아니지만, 경간의 크기 범위를 갖는다는 것이 이해되어야 한다. 그러므로, 본 발명의 리포좀성 제재에서, 그것들이 본 발명의 리포좀성 제재나 약제학적 제재의 특성에 명백히 영향을 미치지 않는다면, 전술한 크기 범위를 벗어나는 리포좀 입자들의 존재는 제외되지 않을 수 있다.

본 발명에서 리포좀은, 예를 들면 막 분산 방법(film dispersion method), 주사 방법(injection method), 초음파 분산 방법(ultrasonic dispersion method), 동결-건조 방법(freeze-drying method), 동결-해동 방법(freeze-thaw method) 등과 같은 다양한 적절한 방법들에 의해 측정될 수 있다. 리포좀 제조에 사용되었던 시동 장치에 따르면, 그 수단들은: (1) 건조 지질 막, 지질 분말에 근거한 방법; (2) 유화제에 근거한 방법; (3) 혼합된 교질 입자들에 근거한 리포좀 조제 방법; 그리고 (4) 에탄올, 인지질과 물의 삼중 혼합물에 근거한 리포좀 제조 방법으로 분류될 수 있다. 약물의 캡슐화는 수동 적재 방식 또는 능동 적재 방식 중 어떤 것에 의하든 실행될 수 있다. 이러한 방법들은 리포좀에 대한 많은 논문들에서 찾을 수 있다.

리포좀성 제재의 제조 중 또는 그 후에, 많은 적절한 방법들이 리포좀 내에 약물을 캡슐화하고 리포좀성 약제학적 제재를 형성하는데 사용될 수 있다. 적절한 방법들은 예를 들어 능동 적재 방식과 수동 적재 방식을 포함한다. 능동 적재 방식은 일반적으로 구배 방법에 의해 수행되어진다. 예를 들어 황산암모늄(ammonium sulfate) 구배 방법, 즉, 황산암모늄 수용액을 사용하여 우선 황산암모늄을 리포좀 내, 외부의 측면에 포함하는 리포좀을 준비한 후에, 리포좀 외부의 황산암모늄을 제거함으로써 리포좀의 내, 외부 사이에 황산암모늄의 농도 구배를 형성한다. 리포좀 내부의 NH₄ ⁺는 NH₃와 H⁺로 해리되어 리포좀 내외부 측면 사이에 H⁺의 농도 차(즉, pH 구배)를 가져오므로, 리포좀 외부의 약물이 분자 상태로 리포좀 내부의 액상으로 들어간 후에 이온 상태로 바뀌고, 그 때문에 그 약물은 리포좀 외부의 액상으로 돌아오지 못해서 리포좀은 약물의 누출이 적고 더욱 안정하다. 수동 적재 방식은 유기용매주사 방법(organic solvent injection method), 막분산 방법(film dispersion method), 동결-해동 방법(freeze-thaw method) 등에 의해 수행될 수 있다.

본 발명에서는, 어떠한 적절한 약물 성분이든 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재 내에 활성 약제학적 성분은 다원자가 이온 약물이다. “다원자가 이온 약물”이라는 용어는 약물이 4.5 ~ 9.5 pKa 해리 상수를 갖는 둘 또는 그 이상의 해리가능기을 갖는 것을 의미하는데, 따라서 약물은 pKa 범위 내에서 더 많은 양전하를 갖거나 더 많은 음전하를 갖는다. 바람직하게는, 상기 해리 상수는 5.0-9.5의 범위 내이다. 더욱 바람직하게는, 상기 해리 상수는 5.5-9.5의 범위 내이다. 특히 바람직하게는, 상기 해리 상수는 6.0-9.0, 특히 6.5-9.0의 범위 내이다. 이온 약물의 해리가능기 각각의 pKa 값은 당업자에 의해 전통적인 기술에 따라 쉽게 결정될 수 있다.

본 발명 내에서, 다원자가 이온 약물은 항암제, 예를 들어, 다음과 같은 암: 폐암(비소세포 폐암과 같은), 췌장암, 유방암, 직장암 또는 다발성 골수종, 간암, 자궁경부암, 위암, 전립선암, 신암 및/또는 방광암의 예방 또는 치료에 유용한 약물들을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 그러므로 본 발명의 하나의 실시 예에서, 다원자가 이온 약물은 하나의 다원자가 이온 항암제이다. 바람직하게는 그 다원자가 이온 약물은 미톡산트론, 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine) 또는 빈블라스틴(vinblastine)이다. 더욱 바람직하게는 상기 다원자가 이온 약물은 미톡산트론이며 선택적으로, 예컨대 빈크리스틴, 비노렐빈 또는 빈블라스틴 등과 같은 항암제가 될 수 있는 부가적인 약물 중 하나 또는 그 이상과 조합될 수 있다.

본 발명에서. 다원자가 이온 약물은 또한 상기 약물들의 하나 또는 둘 또는 그 이상의 조합, 예를 들면, 두 개의 항암제의 조합, 면역강화제와 같은 부가적인 약물과 하나 또는 그 이상의 항암제의 조합, 그리고 둘 또는 그 이상의 다른 종류의 약물들의 조합이 될 수 있음을 특히 주의할 필요가 있다.

본 발명의 리포좀성 약물은 또한 상기에서 언급한 다원자가 이온 약물 이외에도 하나 또는 그 이상의 부가적인 비다원자가(non-multivalent) 이온 약물을 선택적으로 포함할 수 있고, 이는 상기 언급한 것과 같이 다원자가 이온 약물과의 조합 내에서 행해질 수 있다는 것 또한 주의되어야 한다. 병용 투여(combinatory administration)는 한 제재 내 모든 성분들의 투여를 포함하고, 또한 독립된 단위 투약 형태로 병용 투여하는 것도 포함한다.

여기에 언급된 활성 성분으로서의 약물은 그것의 원형만을 포함하는 것이 아니라 그것의 유도체, 예를 들면, 활성 대사 산물은 물론이고, 용매 화합물(수화물과 알코올 부가 생성물과 같은), 프로드러그(prodrug) 및 다른 생리적으로 수용가능한 유도체 또한 포함한다는 것이 이해되어야 한다. 약물의 유도체, 프로드러그 그리고 다른 생리적으로 수용가능한 유도체뿐만 아니라 활성 대사산물도 당업자에게 잘 알려져 있다.

본 발명의 리포좀성 약제학적 제재는 더 나아가 활성 성분의 전하에 대하여 반대의 전하를 갖는 둘 또는 그 이상의 다원자가 반대 이온을 포함할 수 있다. 다원자가 반대 이온의 예는 다음의 포화 또는 불포화 유기산: 구연산(citric acid), 타르타르산(tartaric acid), 푸마르산(fumaric acid), 옥살산(oxalic acid), 말론산(malonic acid), 숙신산(succinic acid), 말산(malic acid), 말레산(maleic acid) 등의 산 음이온과 같은 유기산 음이온; 황산염 음이온, 인산염 음이온 기타 이와 같은 무기산 음이온을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 그 중 구연산 음이온, 황산염 음이온 또는 인산염 음이온이 바람직하다. 나아가 전술한 다원자가 반대 이온은 또한 시스틴 및 그와 같은 아미노산이 될 수 있다. 어떠한 특별한 이론에 얽매일 것 없이 다원자가 반대 이온은 리포좀 내 캡슐화된 관심 있는 약물(예를 들어, 다원자가 이온 약물)과 함께 불용성의 침전을 형성할 수 있다는 것은 당연한 것으로 여겨지고, 그것에 의하여 리포좀 내에 다원자가 이온 약물의 존재는 안정화된다.

본 발명의 리포좀성 약제학적 제재는 나아가 자당(sucrose), 히스티딘(histidine), 산화방지제(antioxidants), 안정제(stabilizers), 분산제(dispersants), 방부제(preservatives), 희석제(diluents), 용매(solvents), 삼투압을 위한 염 등과 같은 약제학 분야에 일반적으로 알려진 부가적인 첨가제와 운반체를 선택적으로 포함한다.

한 실시 예에서, 본 발명은: 먼저 상기에서 언급한 바와 같이 본 발명의 리포좀성 제재를 준비하고, 이어서 리포좀성 제재와 함께 관심 있는 약물을 적절한 조건으로 배양하는 것을 포함하는, 본 발명의 리포좀성 약제학적 제제를 조제하는 방법을 제공한다. 더욱 명확하게는, 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재를 조제하는 방법은 다음의 단계들을 포함한다: (1) 리포좀 제조에 적합한 지질 첨가제를 삼차 부틸(tert-butyl) 알코올 또는 시클로헥산과 같은 적절한 유기 용매에서 용해시키고, 동결건조된 분말(lyophilized powder)을 얻기 위해 감압 하에 동결건조한다; (2) 빈 리포좀을 만들기 위해 관심 있는 약물 활성 성분의 반대 이온을 포함하는 용액으로 동결건조된 분말을 수화시킨다; (3) 리포좀의 내, 외부 측면 사이에 반대이온 구배를 형성하기 위해 투석(dialysis) 또는 컬럼 크로마토그래피(column chromatography) 등과 같은 적절한 방법에 의해 리포좀 외부의 반대 이온을 제거한다; (4) 리포좀 약물을 얻기 위해 약물을 리포좀과 배양한다. 인지질, 콜레스테롤, 첨가제 등에 대한 서술은 리포좀성 제재에 대한 위를 참조한다.

바람직하게는, 지질은 인지질, 특히 상대적으로 높은 상전이 온도를 갖는 지질, 예를 들면, 포스파티딜콜린, 대두 경화 포스파티딜콜린, 난황 경화 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 디스테로일 포스파티딜콜린, 또는 이들의 조합이다. 상기 지질은 또한 상당한 양, 예를 들어, 2-60 mol/mol%, 5-55 mol/mol% 또는 10-50 mol/mol%의 콜레스테롤을 선택적으로 포함할 수 있다. 보다 명확하게는, 콜레스테롤의 양은 리포좀 내 모든 성분들의 총몰수에 대하여 15-45 mol/mol%, 예를 들면, 20-40 mol/mol%가 될 수 있다. 당업자는 획득될 리포좀의 상전이 온도와 필요한 속성에 대한 특정한 요건에 의존하는 콜레스테롤의 양을 결정할 수 있다.

일단 리포좀성 약제학적 제재가 준비되면, 리포좀 내 약물의 캡슐화 효율은 전통적인 기술에 의해 측정될 수 있다. 리포좀의 캡슐화 효율 측정 방법은 여과(ultrafiltration), 투석(dialysis), 컬럼 크로마토그래피(column chromatography), 미니컬럼 원심분리(minicolumn centrifugation) 등을 포함한다. 여과는 실험 장치에 대한 높은 요구로 인해 사용되지 않는다; 컬럼 크로마토그래피는 희석이 많은 양의 용리제(eluent)를 요하고, 약물의 함유량은 매우 낮아서, 함유량 측정을 수행하기가 어려우며, 더욱이 많은 양의 용리제의 희석은 리포좀 내 약물의 누출 또한 야기할 수 있고, 투석에 대한 캡슐화 효율은 더 낮고(아마도 희석 후 리포좀의 파손 때문) 투석 시간은 길기 때문에, 그 방법은 적절하지 않다는 것을 실험 데이터로부터 알 수 있으므로 사용되지 않는다. 미니컬럼 원심분리에 의한 캡슐화 효율의 측정은 다음과 같은 이점을 가진다: 단시간 소비, 리포좀 용액에 대한 작은 희석률, 비싼 기구의 불필요.

본 발명의 리포좀성 약제학적 제재는 충분한 캡슐화 효율과 충분한 약물 적재뿐만 아니라, 또한 생체 밖에서의 저장기간 동안 리포좀으로부터 약물의 방출이 없고, 혈액 순환 동안 독성을 증가시킬 리포좀으로부터 주목할만한 약물의 누출이 없음을 보증한다. 본 발명의 리포좀 약물의 중요한 주목할만한 효과는 약물의 방출속도가 효과적으로 촉진되고, 리포좀의 치료 지수가 향상되고, 반감기가 두드러지게 연장되고, 독성이 이 분야의 최신 제품과 비교하였을 때 두드러지게 감소되며, 따라서 약물의 유효한 치료효과가 달성된다는 것이다. 예를 들면, 대두 경화 포스파티딜콜린 및 디팔미토일 포스파티딜콜린을 사용하여 조제된 리포좀성 약제학적 제재들에 대한 독성은 두드러지게 감소되며, 그것들의 치료지수는 눈에 띄게 향상된다. 그와는 반대로, 만약 인지질 이중층이 디미리스토일 포스파티딜콜린으로 구성되면, 약물의 방출은 지나치게 빠를 것이고 주목할만한 독성을 야기할 것이며, 안전성조차 유리 약물보다 못할 것이다. 만약 약물/지질 비율이 고정되면, 소형의 단일상 리포좀성 제재는 더 큰 단일상 리포좀 제재와 비교해볼 때, 아마도 작은 입자 크기를 갖는 약물 제재가 포함된 리포좀 입자를 더 포함할 것이기 때문에, 본 발명의 소형 단일상 리포좀성 제재는 약물의 방출을 촉진시킬 수 있다는 것은 확실한 이론에 의할 것 없이 당연한 것으로 여겨진다. 작은 입자 크기의 약물 제재는 상대적으로 대단히 한정된 표면 부위를 가질 것이므로, 동일 조건 하에 더욱 빠른 용해 속도를 가질 것이다.

더욱이, 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재는 목표 조직, 특히 종양 내에서 약물의 효과적인 방출을 달성하기 위해 적절한 인지질을 사용하여 제조되어야 한다. 바람직하게는, 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재의 인지질 이중층은 상대적으로 높은 상전이 온도를 갖는 인지질로 구성된다. 실험 동안, 만약 대두 경화 포스파티딜콜린 및 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 그 밖에 유사한 것이 제재에서 사용되었다면, 제재의 독성은 두드러지게 감소할 것이고, 치료 지수는 주목할만하게 향상될 것임을 알게 되었다. 만약 인지질 이중층이 디미리스토일 포스파티딜콜린으로 구성되면, 약물의 방출은 너무 빠를 것이고 주목할만한 독성을 야기할 것이며, 안정성조차 캡슐화되지 않은 약물만 못할 것이다.

본 발명의 리포좀성 약제학적 제재는 그것을 필요로 하는 환자에게 그 분야에서 일반적으로 사용되는 투여경로로 투여될 수 있다. 본 발명의 한 실시 예에서, 리포좀 약물은 비경구투여를 위한 제재로 제형화된다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시 예에서, 리포좀 약물은 주사에 의해 투여된다.

본 발명은 또한 질병, 특히 환자 내에 있는 종양의 치료 방법을 제공하고, 그 방법은 치료를 요하는 환자에게 본 발명의 리포좀성 약제학적 제재를 투여하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 리포좀성 약제학적 제재의 치료 효과를 강화하기 위해 열치료법(방사성 열치료법(radioactive thermotherapy method)과 같은) 또한 종양 환자에게 공동으로 적용될 수 있다. 본 발명에서, 환자는 포유동물, 바람직하게는 인간이 될 수 있다.

본 발명은 또한 종양환자의 치료를 위한 의약의 제조에 있어 상기 언급한 리포좀성 제재 또는 리포좀성 약제학적 제재의 사용에 관한 것이다.

본 발명은 다음의 실시 예들에 의해 더 설명되는데, 이는 단지 대표적인 예일 뿐, 본 발명은 이에 한정되지는 않는다.

파트 ( Part ) 1: 리포좀의 제조

실시 예 1

리포좀 제조의 일반적인 방법

1. 일반적인 방법 1

인지질(예를 들면, 대두 경화 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 디미리스토일 포스파티딜콜린 및 콜레스테롤(1:1에서 10:1의 몰 비율)은 투명한 용액을 만들기 위해 삼차 부틸 알코올 또는 시클로헥산과 같은 유기용매에서 용해된다. 그 용액은 동결건조된 분말을 획득하기 위해 전통적인 동결건조로 처리된다. 동결건조된 분말은 60-65℃에서 (50-1000 mM) 황산암모늄 용액, 구연산 용액 또는 전이 금속 황산염(예를 들어, 니켈 황산염) 용액으로 수화되고, 불균질 다층(multilamellar) 소포체(vesicles)를 획득하기 위해 약 1시간 동안 흔들어진다. 획득된 소포체의 크기는 리포좀을 획득하기 위해 고압 나노 유화장치(microfluidizer) 또는 고압 압출기(high pressure extrusion apparatus)에 의해 감소된다. 획득된 리포좀의 샘플은 0.9% NaCl 용액으로 200배 희석되고, NanoZS에 의해 검출된다. 리포좀 외부의 완충 용액은 동적인 막의 안팎 구배를 형성하기 위해 한외여과(ultrafiltration) 장치에 의해 제거된다. 염산 미톡산트론 용액(10mg/mL)이 적절한 리포좀/약물 비율로 빈 리포좀에 첨가되고, 약물의 적재가 60-65℃에서 행해진다. 약 1시간 동안 배양 후, 캡슐화 효율(encapsulation efficiency, EE) 측정을 위해 겔 배제 크로마토그래피(gel exclusion chromatography)가 사용된다.

2. 일반적인 방법 2

인지질(예를 들어, 대두 경화 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 디미리스토일 포스파티딜콜린) 및 콜레스테롤(1:1에서 10:1의 몰 비율)이 혼합되고, 동시에 폴리에틸렌 글리콜로 치환된 디스테로일 포스파티딜에탄올아민이 인지질 몰에 따라 0.1-20%로 첨가된다. 획득된 혼합물은 투명한 용액을 만들기 위해 삼차 부틸 알코올 또는 시클로헥산과 같은 유기 용매에서 용해된다. 그 용액은 동결건조된 분말을 획득하기 위해 전통적인 동결건조로 처리된다. 동결건조된 분말은 60-65℃에서 (50-1000 mM) 황산암모늄 용액, 구연산 용액 또는 전이금속 황산염(예를 들면, 니켈 황산염) 용액으로 수화되고, 불균질 다층 소포체를 획득하기 위해 약 1시간 동안 흔들어진다. 획득된 소포체의 크기는 리포좀을 얻기 위해 고압 나노 유화장치 또는 고압 압출기에 의해 감소된다. 획득된 리포좀의 샘플은 0.9% NaCl 용액으로 200배 희석되고, NanoZS에 의해 검출된다. 리포좀 외부의 완충 용액은 동적인 막의 안팎 구배를 형성하기 위해 한외여과 장치에 의해 제거된다. 염산 미톡산트론 용액(10 mg/mL)이 적절한 리포좀/약물 비율로 빈 리포좀에 첨가되고, 약물의 적재가 60-65℃에서 행해진다. 약 1시간 동안 배양 후, 캡슐화 효율 측정을 위해 겔 배제 크로마토그래피가 사용된다.

실시 예 2

미톡산트론 리포좀 PLM60 의 제조

투명한 용액을 만들기 위해 95% 삼차 부틸 알코올에서 3:1:1의 중량비로 HSPC, 콜레스테롤 그리고 DSPE-PEG2000이 용해되었다. 그 용액은 동결건조된 분말을 획득하기 위해 전통적인 동결건조로 처리되었다. 동결건조된 분말은 60-65℃에서 황산암모늄 용액(300 mM)으로 수화되었고 96 mg/mL의 인지질의 최종농도를 갖는 불균질 다층 소포체를 획득하기 위해 약 1시간 동안 흔들어졌다. 리포좀을 획득하기 위해 소포체의 크기는 고압 나노 유화장치에 의해 감소되었다. 획득된 리포좀의 샘플은 0.9% NaCl 용액으로 200배 희석되었고, 약 60 ㎚의 평균크기를 갖고 40 ㎚내지 60 ㎚사이에서 주요 피크를 갖는, NanoZS에 의해 검출되었다. 리포좀 외부의 황산암모늄 용액은 동적인 막의 안팎 구배를 형성하기 위해 한외여과 장치에 의해 제거되었고, 250 mM의 자당과 50 mM의 글리신(glycine)으로 된 용액으로 치환되었다. 염산미톡산트론 용액(10 mg/mL)이 16:1의 리포좀/약물 비율로 빈 리포좀에 첨가되었고, 약물의 적재가 60-65℃에서 행해졌다. 약 1시간 동안 배양 후, 캡슐화 효율이 겔 배제 크로마토그래피에 의해 100%로 측정되었다. 획득된 리포좀을 PLM60으로 명명하였다.

실시 예 3

미톡산트론 리포좀 PLM85 의 제조

투명한 용액을 만들기 위해 95% 삼차 부틸 알코올에서 3:1:1의 중량비로 HSPC, 콜레스테롤 및 DSPE-PEG2000이 용해되었다. 상기 용액은 동결건조된 분말을 획득하기 위해 전통적인 동결건조로 처리되었다. 상기 동결건조된 분말은 60-65℃에서 황산암모늄 용액(300 mM)으로 수화되었고 96 mg/mL의 인지질의 최종농도를 갖는 불균질 다층 소포체를 획득하기 위해 약 1시간 동안 흔들어졌다. 리포좀을 획득하기 위해 소포체의 크기는 고압 압출기에 의해 감소되었다. 획득된 리포좀의 샘플은 NaCl 용액으로 200배 희석되었고, 약 85 ㎚의 평균크기를 갖는 NanoZS에 의해 검출되었다. 리포좀 외부의 황산암모늄 용액은 동적인 막의 안팎 구배를 형성하기 위해 한외여과 장치에 의해 제거되었고 250 mM의 자당과 50 mM의 글리신으로 된 용액으로 치환되었다. 염산 미톡산트론 용액(10 mg/mL)이 16:1의 리포좀/약물 비율로 빈 리포좀에 첨가되었고, 약물의 적재가 60-65℃에서 행해졌다. 약 1시간 동안 배양 후, 캡슐화 효율이 겔 배제 크로마토그래피에 의해 100%로 측정되었다. 획득된 리포좀을 PLM85로 명명하였다.

실시 예 4

미톡산트론 리포좀 PLM100 의 제조

실시 예 3에서 설명된 것과 같은 방법이 염산미톡산트론 리포좀 PLM100의 제조에 사용되었고, 제형은 PLM60 및 PLM85와 동일하나, 리포좀의 크기는 100 ㎚였다.

실시 예 5

미톡산트론 리포좀 PLM60 - dppc 의 제조

DPPC, 콜레스테롤 및 DSPE-PEG2000이 중량비 3:1:1로 혼합되었고, 다른 단계는 실시 예 2와 동일하였다. 획득된 리포좀을 PLM60-dppc로 명명하였다.

실시 예 6

미톡산트론 리포좀 PLM60 - dmpc 의 조제

DMPC, 콜레스테롤 및 DSPE-PEG2000이 중량비 3:1:1로 혼합되었고, 다른 단계는 실시 예 2와 동일하였다. 획득된 리포좀을 PLM60-dmpc로 명명하였다.

실시 예 7

미톡산트론 리포좀 PLM60 - dmpc -0.1의 제조

DMPC, 콜레스테롤 및 DSPE-PEG2000이 중량비 3:1:0.1로 혼합되었고, 다른 단계는 실시 예 2와 동일하였다. 획득된 리포좀을 PLM60-dmpc-0.1로 명명하였다.

실시 예 8

아드리아마이신( adriamycin ) 리포좀 PLD60 의 제조

약물 적재의 단계 동안 미톡산트론 대신 아드리아마이신으로 치환되었고, 다른 단계는 실시 예 2와 동일하였다. 획득된 리포좀을 PLD60으로 명명하였다.

파트 2: 서로 다른 리포좀 제형의 약물 방출

실시 예 9

아드리아마이신( adriamycin ) 리포좀 PLD60 과 미톡산트론 리포좀 PLM60 간 약물 방출의 차이

본 실시 예에서, 미톡산트론과 아드리아마이신은 pH 구배 하에 적재되었다. 만약 일정한 농도의 염화암모늄이 방출 배지에 첨가되었다면, 유리 암모니아 분자들은 구배의 도움으로 리포좀의 내부 측면으로 확산될 것이므로, 내부 측면의 pH는 상승될 것이고 내부 측면의 양성자화된 약물은 막을 통과하여 확산할 수 있는 중성 형태로 바뀔 것이다. 상기 과정은 한편으로는 리포좀의 내부 측면 내에서 침전의 용해를 촉진시킬수 있을 것이다. 약물 방출의 속도는 침전의 용해 및 리포좀의 막투과성 모두에 의해 조절되었다. 약물 방출에 대한 조건은 다음과 같았다. 리포좀은 방출 배지로 25배 희석되었다. 상기 방출 배지는 7.4의 pH와 각각 2, 10 및 40 mM의 염화암모늄 농도를 갖는 등장성이었다. 상기 희석된 리포좀은 투석관 내에 위치하였고, 투석은 37℃에서 400 mM의 방출 배지에 의해 2 mL 희석된 리포좀에 대하여 수행되었다. 샘플들은 분석을 위해 96시간 이후까지 서로 다른 시간대에서 획득되었다.

획득된 자료로 회귀분석을 실시하였다. 2, 10 및 40 mM의 염화암모늄을 갖는 상기 방출 배지에서, PLD60의 약물 방출 반감기는 각각 94.3, 31.9 및 11.2 시간이었다. PLM60에 관하여는, 세 개의 방출 배지에서 두드러진 방출은 관찰되지 않았다. PLD60 및 PLM60이 조성과 크기에서 차이가 없기 때문에, 그들의 약물 방출의 동적 특성의 차이는 그들의 약제학적 특징의 차이에 기인할 수 있다. 아드리아마이신과 미톡산트론은 모두 안드라사이클린(anthracycline) 항생물질들이고, 그것들의 차이는 미톡산트론이 생리적 pH에서 두개의 해리가능기(pKa = 8.15)을 포함하는 반면, 아드리아마이신은 생리적 pH에서 하나의 해리가능기을 포함하고 있다는 것에 있다. 상기 예는 능동 적재 방법이 사용되었을 때 미톡산트론처럼 다중 해리가능기를 갖는 약물이 반대 이온들과 함께 복합 침전물을 형성할 수 있어서, 생체 밖에서 약물의 방출이 두드러지게 감속되는 것을 설명한다. 반면, 아드리아마이신과 같이 단일 해리가능기를 갖는 약물은 작은 크기의 리포좀이 사용되면 원형질이 없는 방출 배지에서조차 너무 빠르게 방출될 수 있다.

실시 예 10

서로 다른 크기를 갖는 미톡산트론 리포좀의 방출 작용

서로 다른 크기를 갖는 미톡산트론 리포좀의 방출 작용을 비교하기 위해 두 개의 방출조건이 적용되었다.

방출 조건 1: 리포좀은 방출 배지로 25배 희석되었다. 방출 배지는 50%의 인간 원형질을 포함하였고, 글루코오스에 의해 등장성으로 조절되었으며 pH 7.4였다. 다른 조건들은 실시 예 9와 동일하였다. 획득된 자료는 회귀분석을 실시하였다. 그 결과 PLM60의 방출 반감기가 56.4 시간이었으나, 반면에 PLM85는 동일 조건하에 두드러지게 방출되지 않았다.

방출 조건 2: 방출 배지는 50%의 인간 원형질을 포함하였고 20 mM의 염화암모늄이 사용되었으며, 다른 조건들은 실시 예 9와 동일하였다. 획득된 자료는 회귀분석을 실시하였다. 그 결과 PLM60의 방출 반감기는 26.2시간이었으나, 반면에 PLM85의 방출 반감기는 36.7시간이었다.

본 실시 예는 리포좀의 크기를 감소시킴으로써 약물의 방출이 두드러지게 강화될 수 있음을 충분히 나타냈다.

실시 예 11

서로 다른 막 구성을 갖는 미톡산트론 리포좀의 방출 거동

실시 예 9에서 서술하였던 것과 동일한 방출 조건이 사용되었다. 그 결과 PLM60-DPPC의 방출 반감기는 116시간이었으며, PLM60-DMPC의 방출 반감기는 26시간이었고, PLM60-DMPC-0.1의 방출 반감기는 15시간이었다. 본 실시 예는 더 낮은 상전이 온도를 갖는 인지질의 사용이 약물 방출을 촉진시킬 수 있음을 나타내었다. 그러나, 만약 약물의 방출이 과도하게 촉진되면, 약물의 독성 또한 과도하게 증가할 수 있고, 이는 더 나아가 다음의 실시 예들에서 확인되었다.

파트 3: 생체 내 약물 동태

실시 예 12

쿤밍 생쥐에서의 PLM60 의 약물 동태 거동 및 PLM60 과 유리 미톡산트론 사이의 비교

본 실시 예는 약 20g의 체중을 갖는 수컷의 쿤밍 생쥐에서 수행되었다. 서로 다른 미톡산트론 용량 수준을 생쥐의 미정맥(tail vein)을 통하여 주사하였다. PLM60의 투여량은 1, 2, 및 4 ㎎/㎏이었으며, 유리 미톡산트론(free mitoxantrone, FM)의 투여량은 2 ㎎/㎏이었다. 플라즈마(plasma) 샘플은 서로 다른 시간대에서 획득되었다. 플라즈마 샘플을 처리하고 검출하는 방법은 다음의 논문에 설명되었다: Methods in enzymology, Vol: 391, p176-185. 결과를 표 1 및 도 1에 나타내었는데, 미톡산트론의 반감기가 리포좀의 캡슐화에 의해 현저하게 늘어난 것을 명백하게 나타내었다. 같은 투여량에서, PLM60은 혈액 순환 내의 체류 시간이 유리 미톡산트론의 32배였으며, AUC는 유리 미톡산트론의 3700배였다. 투여량에 대한 AUC의 도는 PLM60이 생체 내 선형의 약물동태를 갖는다는 것을 나타내었다.

표 1: 쿤밍 생쥐에서의 PLM60 및 FM 의 약물 동태

실시 예 13

종양을 갖는 생쥐에서의 PLM60 및 유리 미톡산트론 의 조직 분포

종양을 갖는 생쥐에서 PLM60 및 유리 미톡산트론 사이의 조직 분포에 있어서 명백한 차이가 있었다. 본 실시 예에서는 체중이 약 20g인 수컷의 쿤밍 생쥐가 사용되었다. 생쥐를 오른쪽 상박의 안쪽으로 S-180 육종 세포를 5×10⁵의 양으로 접종하였다. 종양이 0.4-0.7g으로 자랐을 때 생쥐의 정맥을 통하여 약물을 주입하였다. 약물을 투여한 후에, 생쥐를 여러 시간대별로 실험하였으며, 미톡산트론의 농도를 측정하기 위하여 조직들을 적출하였다. 조직들은 심장, 간, 비장, 허파, 신장, 장, 골수 및 종양을 포함하였다. 결과는 PLM60이 종양 조직에 매우 명확한 목표를 갖는다는 것을 보여준다. 상세한 데이터는 표 2 및 도 2에 나타내었다.

표 2. 정상 생쥐에서의 PLM60 및 FM 의 조직 분포 데이터

실시 예 14

서로 다른 리포좀 제형의 약물 동태 비교

본 실시 예에 사용된 동물은 실시 예 12의 그것과 유사하다. 4 ㎎/㎏에서의 PLM60-DPPC, PLM60-DMPC-0.1 및 PLM60-DMPC를 생쥐의 미정맥(tail vein)을 따라 주사하였다. 데이터를 표 3 및 도 3에 나타내었다. 데이터는 리포좀 약물의 약물 동태가 리포좀 막의 조성에 따라 현저하게 변화한다는 것을 보여준다. 생체 내 PLM60-DPPC, PLM60-DMPC-0.1 및 PLM60-DMPC의 MRT 값은 각각 14.22, 7.914 및 10.123 시간이었다. PLM60-DPPC 및 PLM60-DMPC 사이의 차이는 인지질의 탄화수소 사슬의 길이에 달려 있는데, 이들은 각각 16개 및 14개의 탄소를 갖고 있었다. 아실 사슬의 길이는 인지질 이중층의 막 투과성에 상당한 영향을 미칠 수 있었다. DPPC의 상전이 온도는 41℃이었으며, DMPC의 상전이 온도는 23℃였다. PLM60-DMPC-0.1 및PLM60-DMPC 사이의 차이는 페길화(PEGylation)의 정도에 있었다. 플라즈마에서의 리포좀 약물의 방출은 두 가지 요소에 달려 있다: 하나는 인지질 이중층을 통한 리포좀 약물의 방출이며 다른 하나는 리포단백질 및 세망내피계(reticuloendothelial system, RES)에 의한 제거이다. PLM60-DMPC-0.1의 페길화가 완전하지 않기 때문에, 플라즈마 구성 요소에 의한 방출이 더 영향을 미쳤다.

표 3. 생쥐에서의 서로 다른 리포좀 제형의 생체 내 약물 동태 비교

파트 . 4: 서로 다른 제형의 독성 비교

실시 예 15

PLM60 및 FM 사이의 급성 독성 비교

18-22g의 체중을 갖는 100마리의 쿤밍 생쥐(반은 암컷이고 반은 수컷)를 10개의 그룹으로 나누었으며, 각각의 그룹에는 10마리의 생쥐가 반은 암컷, 반은 수컷이 되도록 하였다. 1-5 그룹의 생쥐에는 서로 다른 투여 수준의 FM을 투여하였으며, 반면에 6-10 그룹의 생쥐는 균등한 투여 수준의 리포좀 약물을 투여하였다. 체중의 변화를 관찰하였으며 각각의 동물들의 사망 시간을 기록하였다. 사망한 동물들을 해부하여 검시하였다. 모든 그룹의 결과들을 표 4에 나타내었는데, PLM60의 급성 독성이 FM보다 상당히 낮은 것을 알 수 있었다.

표 4. 쿤밍 생쥐에서의 PLM60 과 FM 의 급성 독성 비교

실시 예 16

서로 다른 리포좀 제형에서의 급성 독성 비교

18-22g의 체중을 갖는 90마리의 수컷 Balb/c 생쥐를 각각의 그룹을 10마리로 하여 9개의 그룹으로 나누었다. 그룹 1의 생쥐는 6 ㎎/㎏에서 FM을 투여하였으며, 반면에 나머지 8개의 그룹에서는 6 및 12 ㎎/㎏에서 각각 PLM60, PLM60-DPPC, PLM60-DMPC-0.1 및 PLM60-DMPC를 투여하였다. 체중 변화를 관찰하였으며 각각의 동물들의 사망 시간을 기록하였다. 사망한 동물들을 해부하여 검시하였다. FM 그룹 및 리포좀 약물 그룹의 사망한 생쥐의 결과들을 표 5에 나타내었다. 본 실시 예의 결과, 급성 독성의 순서는 다음과 같았다: PLM60 ＜ PLM60-DPPC ＜ PLM60-DMPC-0.1 FM ＜ PLM60-DMPC. 본 실시 예에서 또한 약물의 방출이 작은 단일상 소포체 및 PLM60-DMPC와 같은, 낮은 상전이 온도을 갖는 인지질을 이중층의 구성요소로서 사용함으로써 더 가속화될 수 있었으며, 그 때문에 생체 내에서 독성을 더 야기한 것을 확인하였다. 불완전한 페길화를 갖는 리포좀의 독성은 더 완전한 페길화를 갖는 리포좀보다 낮았다는 것을 주목해야 한다. 이는 혈액 순환동안 리포단백질의 작용 및 면역 시스템의 공격 하에서. 불완전한 페길화를 갖는 PLM60-DMPC-0.1은 PLM60-DMPC과 비교하여 먼저 약물을 방출하였고 중요한 조직 내에 갑자기 방출하지 않았으며, 그 때문에 낮은 독성을 나타내었으나, PLM60-DMPC-0.1의 독성은 여전히 유리 미톡산트론의 독성과 거의 균등한 채로 있었기 때문일 수 있다.

표 5: 서로 다른 리포좀의 급성 독성 비교

실시 예 17

서로 다른 크기를 갖는 리포좀 제형의 독성 비교

18-22g의 체중을 갖는 수컷의 C57 생쥐를 PLM60, PLM85 및 PLM100의 독성 비교에 사용하였다. 약물의 투여량은 9 ㎎/㎏이었다. 결과를 보면 세 개의 리포좀 제형에 의한 체중의 다양성은 균등하였는데, 이로써 세 개의 제형이 실험 조건 하의 독성에 있어서 현저한 차이가 나타나지 않았다는 것을 확인하였다. FM 그룹의 생쥐에서, 체중은 30% 이상 감소하였으며 약 20%의 생쥐가 사망하였다.

파트 5: 생체 내 항 종양( anti - tumor ) 효과

실시 예 18

S-180 육종에서의 PLM60 및 FM 의 처리 효과 비교

7일 전에 S180 종양 세포를 접종한 복수의 종양을 갖는 생쥐를 참수하고, 유백의 점성을 갖는 복수액(ascitic fluid)을 추출하여 RPMI 1640 배지에 희석하였다. 희석 후에, 종양 세포의 수를 2.5×10⁶ cells/㎖로 조절하였다. 약 5×10⁵개의 종양 세포를 포함하는 0.2mL의 종양세포 현탁액을 18-22g의 체중을 갖는 수컷의 KM 생쥐의 전지 상박 안쪽 조직으로 접종하였다. 접종 후에, 잔여 종양 세포 현탁물에서의 세포를 광학 현미경 하에서 계수하였는데, 살아 있는 종양 세포는 95% 이상이었다. 접종한 생쥐의 수는 80 마리였다.

접종 후 7일째에, 지름이 약 5 ㎜인 종양을 제거한 39마리의 생쥐를 선택하고 종양의 체적 및 체중에 의해 5 그룹으로 나누었는데, 각 그룹은 대조군으로 7 마리, 각각 8마리씩 4 ㎎/㎏ PLM60 그룹, 6 ㎎/㎏ PLM60 그룹, 4 ㎎/㎏ FM 그룹 및 6 ㎎/㎏ FM 그룹으로 나누었다. 생쥐들은 정맥 내 주사로 투여되었다.

투여 후에 생쥐들은 정상적으로 사육되었다. 종양의 지름은 1주일에 3번 버니어 캘리퍼(vernier caliper)로 측정하였으며, 그때에 체중도 측정하였다. 종양의 체적(TV)은 다음의 공식으로 측정하였다: V = 1/2 × a × b², 여기서 a 및 b는 각각 체장 및 폭을 나타낸다. 종양의 체적은 측정 결과를 이용하여 계산하였다. 접종 후 21일째 되는 날 생쥐를 참수하였으며, 종양을 제거하여 체중을 측정하였다. 종양 저해율(%)은 다음의 공식으로 계산하였다: 종양 저해율 = (1 - 약물 그룹의 평균 종양 무게 / 대조 그룹의 평균 종양 무게) × 100%. 실험 결과는 t-test에 의해 검정하였다.

표 6은 S180 고체 종양의 성장이 4 ㎎/㎏ PLM60 그룹 및 6 ㎎/㎏ PLM60 그룹에서 현저하게 억제되는 것을 보여준다.

표 6: S180 고체 종양 무게에서의 PLM60 의 효과

실시 예 19

L1210 복수 모델에서의 PLM60 및 FM 의 치료 효과

7일 전에 L1210 복수 종양 세포를 접종한 복수의 종양을 갖는 BDF1 생쥐를 참수하고, 무균 상태에서 유백의 점성을 갖는 복수액을 추출하고 RPMI 1640 배지에 희석하였다. 희석 후에, 종양 세포의 수를 2.5×10⁶cells/㎖로 조절하였다. 약 5.0 ×10⁵종양 세포를 포함하는 0.2 ㎖의 종양 세포 현택액을 생 후 7-8주 된 암컷의 BDF1 생쥐의 복강 내로 접종하였다. 접종 후에, 잔여 종양 세포 현탁물에서의 세포를 광학 현미경 하에서 계수하였는데, 살아 있는 종양 세포는 95% 이상이었다.

24시간 후에, 생쥐를 체중에 의해 8개의 그룹으로 나누었으며, 2, 4 및 6 ㎎/㎏에서의 FM, 그리고 2, 4, 6 및 8 ㎎/㎏에서의 PLM60을 생쥐의 미정맥을 통하여 각각 20 ㎖/㎏의 양으로 투여하였다. 투여 후에 생쥐들은 정상적으로 사육되었다. 1주일에 3번 체중을 측정하였으며, 각각의 생쥐들의 사망시간을 관찰하고 기록하였으며, 생존기간을 계산하였다. 평균생존기간(mean survival time, MST) 및 중앙생존기간(median survival time)은 각 그룹의 생존기간을 평가하여 구하였다. 본 실험의 관찰은 접종 후에 60일 동안 계속되었다.

데이터는 SPSS 11.5 통계 소프트웨어로 분석하였다. 본 결과에서 모든 투여 그룹은 대조 그룹과 비교하여 생존기간이 현저히 증가한 것을 보였으며, PLM60 그룹(8 ㎎/㎏)은 같은 투여량에서의 FM 그룹과 비교하여 치료의 현저한 향상을 나타내었다. 결과를 표 7에 나타내었다.

표 7: BDF1 생쥐의 생존기간에서 L1210 복수 종양의 효과

실시 예 20

L1210 간 전이 모델에서의 PLM60 및 FM 의 치료 효과

7일 전에 L1210 복수 종양 세포를 접종한 복수의 종양을 갖는 BDF1 생쥐를 참수하고, 무균 상태에서 유백의 점성을 갖는 복수액을 추출하고 RPMI 1640 배지에 희석하였다. 희석 후에, 종양 세포의 수를 2.5×10⁵cells/㎖로 조절하였다. 약 5.0 × 10⁴개의 종양 세포를 포함하는 0.2 ㎖의 종양 세포 현탁액을 생후 7-8주 된 수컷의 BDF1 생쥐의 복강 내로 접종하였다. 접종 후에, 잔여 종양 세포 현탁액에서의 세포를 광학 현미경 하에서 계수하였는데, 살아 있는 종양 세포는 95% 이상이었다. 총 62마리의 생쥐를 접종하였다.

24시간 후에, 생쥐를 그룹을 나누어 투여하였다. 투여 후에 생쥐들은 정상적으로 사육되었다. 1주일에 3번 체중을 측정하였으며, 각각의 생쥐들의 사망시간을 매일마다 관찰하고 기록하였으며, 생존기간을 계산하였다. 본 실험의 관찰은 접종 후 60일 동안 계속되었다.

본 결과에서 대조 그룹의 모든 생쥐는 접종 후 11일부터 14일 사이에 사망하였으며, FM 투여 수준의 세 그룹 내의 모든 생쥐는 접종 후 11일부터 17일 사이에 사망하였으며, 2 ㎎/㎏ PLM60 그룹의 모든 생쥐는 접종 후 15일부터 29일 사이에 사망하였으며, 6 ㎎/㎏ PLM60 그룹에서는 한 마리의 생쥐만이 접종 후 39일째에 사망하였으며, 8 ㎎/㎏ PLM60 그룹에서는 생쥐의 사망이 관찰되지 않았다.

데이터는 SPSS 11.5 통계 소프트웨어로 분석하였다. 본 결과에서 6 ㎎/㎏ FM 그룹 및 모든 리포좀 약물 그룹은 대조 그룹과 비교하여 생쥐의 생존기간에 있어서 현저한 증가를 나타내었다. 같은 투여량 수준에서, 리포좀 상의 미톡산트론은 유리 미톡산트론과 비교하여 생쥐의 생존기간에 있어서 현저한 증가를 나타내었다. 결과를 표 8에 나타내었다.

표 8: BDF1 생쥐의 생존기간에 있어서 L1210 의 정맥 내 접종의 효과

실시 예 21

L1210 복수 종양에 있어서 서로 다른 크기를 갖는 리포좀 상의 미톡산트론 의 치료 효과

실험 설계 및 데이터 프로세스 모드는 실시 예 19와 같다. 대조 그룹, FM 그룹, PLM60 그룹, PLM85 그룹 및 PLM100 그룹을 포함하는 5개의 그룹을 설정하였다. 각 그룹의 생쥐의 약물 투여량은 4 ㎎/㎏이었다. 결과를 표 9에 나타내었다. 본 결과에서 작은 크기를 갖는 리포좀이 더 나은 치료 효과를 나타내었다.

표 9. BDF1 생쥐의 생존기간에서 L1210 복수 종양의 효과

본 발명의 몇몇 바람직한 실시 예를 상기에 설명하였으나, 이러한 실시 예들이 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 또한 본 명세서에 설명되고 도시된 것 이외에, 당업자들은 본 발명의 명세서를 읽은 후에 본 발명의 다른 변형, 변이 및 변화를 확실하게 이해할 것이며, 이러한 모든 것들은 본 발명의 보호 범위에 포함되어야만 한다. 모든 특허, 여기에 인용된 공개 특허 출원 및 공보들은 그들의 전문이 본문에 통합된 것과 같이 참고사항에 수록되었다.

Claims

리포좀성 제재에 있어서, 상기 리포좀성 제재는 약 30-80 ㎚이며 인지질 이중층에서의 체온보다 높은 상전이 온도를 갖는 인지질을 포함하며, 그로 인하여 리포좀의 상전이 온도는 체온보다 높으며, 인지질은 포스파티딜콜린, 대두 경화 포스파티딜콜린, 난황 경화 포스타티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 디스테로일 포스파티딜콜린 또는 이들의 조합으로부터 바람직하게 선택되는 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1항에 따른 리포좀성 제재에 있어서, 상기 인지질 이중층에서의 체온보다 높은 상전이 온도을 갖는 인지질은 인지질의 총량에 관하여 50-100 mol/mol%를 나타내며, 바람직하게는 55-95 mol/mol%, 및 더 바람직하게는 60-90 mol/mol%를 나타내는 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1항에 따른 리포좀성 제재에 있어서, 상기 인지질 이중층은 체온보다 높지 않은 상전이 온도을 갖는 인지질, 디미리스토일 포스파티딜콜린 및 그 밖의 여러 가지와 같은 부가적인 인지질을 선택적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1항에 따른 리포좀성 제재에 있어서, 리포좀성 제재 내의 성분의 총량에 관하여 5-55 mol/mol%, 특히 10-50 mol/mol%, 특별히 15-45 mol/mol%, 더욱 특별히 20-40 mol/mol%와 같은 2-60 mol/mol% 양의 콜레스테롤을 선택적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1항에 따른 리포좀성 제재에 있어서, 인지질의 몰 수에 대하여(양은 바람직하게는 리포좀에 대하여 약 1-30 mol/mol%, 3-28 mol/mol%, 5-25 mol/mol% 또는 8-20 mol/mol%, 특히 10-20 mol/mol%) 바람직하게는 0.3-18 mol/mol%, 0.5-15 mol/mol%, 0.8-12 mol/mol%, 1-10 mol/mol%, 2-8 mol/mol%, 2.5-7 mol/mol% 또는 3-6 mol/mol% 등과 같은 0.1-20 mol/mol%의 양에서, 예를 들면 PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민(DSPE-PEG), PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 글리세롤(DSPG-PEG), PEG로 치환된 콜레스테롤(chol-PEG), 폴리비돈으로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민(DSPE-PVP), PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 글리세롤(DSPG-PVP), 또는 PEG로 치환된 콜레스테롤(chol-PVP), 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있는 친수성 중합체로 치환된 지질과 같은, 예를 들면 리포좀성 제재의 표면 특성을 더 변형하기 위한 추가적인 첨가제를 선택적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1항에 따른 리포좀성 제재에 있어서, 크기가 35-75 ㎚, 바람직하게는 40-70 ㎚, 특히 40-60 ㎚인 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1항에 따른 리포좀성 제재에 있어서, 무게 비 3:1:1인 대두 경화 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민을 포함하는데, PEG로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민은 바람직하게는 PEG2000으로 치환된 디스테로일 포스파티딜 에탄올아민인 것을 특징으로 하는 리포좀성 제재.
제 1 내지 7항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 약물은 바람직하게는 다원자가 이온 약물을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 약물은 4.5-9.5, 바람직하게는 5.0-9.5, 더욱 바람직하게는 5.5-9.5, 특히 6.0-9.0, 특별히 6.5-9.0의 해리 상수 pKa를 갖는 둘 또는 그 이상의 해리가능기를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 상기 다원자가의 이온 약물은 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈 또는 빈블라스틴 또는 이들의 조합과 같은 항암제이며, 바람직하게는 미톡산트론인 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8 내지 10항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 상기 약물은 리포좀성 약물의 총 중량에 관하여, 0.1-50wt%, 바람직하게는 0.5-40wt%, 더욱 바람직하게는 1-35wt%, 특히 바람직하게는 3-30wt% 또는 5-25wt% 또는 8-20wt%인 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8 내지 10항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 선택적으로 하나 또는 그 이상의 부가적인 약학 성분 및/또는 약학적으로 수용가능한 운반체 및/또는 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 상기 리포좀은 내부에 예를 들면, 구연산, 타르타르산, 푸마르산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 말산 및 말레산 등의 포화 또는 불포화 유기산의 산 음이온과 같은 유기산 음이온; 황산염 음이온, 인산염 음이온과 같은 무기산 음이온; 또는 시스틴과 같은 아미노산의 이온 형태; 바람직하게는 구연산 음이온, 황산염 음이온 또는 인산염 음이온과 같은 반대 이온, 바람직하게는 다원자가의 반대 이온을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 13항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 상기 다원자가의 반대 이온은 활성 약물 성분에 반대되는 둘 또는 그 이상의 전하를 운반하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8 내지 10항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물에 있어서, 상기 리포좀은 포스파티딜콜린, 대두 경화 포스파티딜콜린, 난황 경화 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 또는 디스테로일 포스파티딜콜린, 또는 이들의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물.
제 8 내지 15항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물의 제조방법에 있어서, (1)체온보다 높은 상전이 온도을 갖는 인지질 및 선택적으로 부가적인 인지질 및/또는 콜레스테롤을 사용하여 리포좀을 제조하는 단계; (2)관심 약물, 특히 리포좀 내에서 다원자가의 이온 약물을 캡슐화하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀성 약물의 제조방법.
환자에 있어서 질병, 특히 종양의 치료방법에 있어서, 치료가 필요한 환자에게 제 8 내지 15항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물을 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는, 환자에 있어서 질병, 특히 종양의 치료방법.
제 17항에 따른 방법에 있어서, 방사성 열치료과 같은 열치료에 의해 환자를 치료하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
종양 환자의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 제 1 내지 7항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 제재 또는 제 8 내지 15항 중 어느 한 항에 따른 리포좀성 약물의 사용.