CN110548006B - 一种科罗索酸脂质体及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属医药技术和纳米医学技术领域，涉及一种科罗索酸脂质体及其制备方法和用途。该脂质体以科罗索酸替代胆固醇作为脂质体膜材组分，与磷脂组合制成载药量高和稳定性好的科罗索酸脂质体，该脂质体中同时兼具脂质体膜材和治疗药物的双重作用。本脂质体能解决科罗索酸吸收差、生物利用度低和难以有效递送等问题，明显改善科罗索酸降糖、抗炎和抗肿瘤的疗效。该脂质体可根据需求装载多种抗肿瘤药物用于抗肿瘤治疗，实现多药靶向共递送，增效减毒、避免多药耐药及协同抗肿瘤作用；其中，制得的盐酸多柔比星‑科罗索酸脂质体的抗癌效果和安全性显著优于上市的盐酸多柔比星脂质体注射液。

Description

一种科罗索酸脂质体及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术和纳米医学技术领域，具体涉及一种科罗索酸脂质体及其制备方法和用途。
技术背景
现有技术公开了科罗索酸(corosolic acid，CA)，即2α-羟基熊果酸，是存在于大叶紫薇、枇杷、金莲花等植物中的三萜类化合物。研究发现，CA具有降血糖、减肥、抗肿瘤、抗炎、抗病毒和抗心血管疾病等作用，其中，降糖、抗炎、抗肿瘤活性研究最为深入；CA具有类似胰岛素的生理作用，被称为“植物胰岛素”，其作为防治肥胖症和2型糖尿病新药，已进入美国FDA的Ⅲ期临床药效学评价；CA对多种炎症具有显著的抑制作用，抗炎作用强于抗炎药吲哚美辛和吡罗昔康；CA具有诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤组织的炎症反应、抑制肿瘤相关巨噬细胞的募集，抑制肿瘤干细胞及MDSC的增殖，改善肿瘤微环境等作用；特别是，当CA与化疗药物联用时，能够显著提高抗肿瘤疗效，表现出增效减毒和抗多药耐药的协同治疗作用，这些特性已在多柔比星、5-氟尿嘧啶、顺铂、紫杉醇、喜树碱、索拉菲尼等抗肿瘤药物中得到验证。由此可看出，CA在治疗糖尿病，炎症和抗肿瘤等方面具有明确的治疗效果；然而，CA存在的如，水溶性差，生物利用度低，体内半衰期短等缺陷极大限制了其临床应用。
资料记载了脂质体是由磷脂和胆固醇为膜材制备的具有脂质双分子层结构的纳米尺度或微米尺度的封闭囊泡。作为药物优良的载体，脂质体可将脂溶性药物包封于脂质双分子层内，水溶性药物包封于内水相。脂质体药物具有生物相容性好；提高药物体内外稳定性；降低药物体内清除速度，延长药物作用时间；改善药物生物利用度；使药物具有定向分布的靶向性，进而增强药理作用，降低药物毒性等诸多优点。药物的装载是脂质体制备中的关键问题之一，载药量有限和药物易泄漏常常是脂质体制剂新药开发中面临的难题，由于胆固醇的存在及膜稳定性的需要，脂质体所包封的药物种类与载药量常常受限。
基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种科罗索酸脂质体及其制备方法和用途。
发明内容
本发明的目的在于基于现有技术的现状，提供一种科罗索酸脂质体CALP及其制备方法和用途。
本发明能解决科罗索酸水溶性差、生物利用度低和体内循环半衰期短等导致其临床应用受限的问题，特别是，该科罗索酸脂质体CALP可作为抗肿瘤药物的载体，制成靶向抗肿瘤的CALP，实现科罗索酸CA(corosolic acid，CA，)与抗肿瘤药物的联合靶向递送和协同治疗，进而拓展科罗索酸脂质体CALP在肿瘤靶向治疗领域中的应用。
本发明所述的科罗索酸(corosolic acid，CA，)其结构如式Ⅰ所示。
Figure BDA0001678321650000021
本发明基于科罗索酸CA可完全替代脂质体中胆固醇的作用以及在脂质体中兼具膜材和治疗药物的双重功能的研究实践，能极大地增加科罗索酸在脂质体中的含量，并与磷脂一起形成稳定的科罗索酸脂质体(corosolic acid liposomes,CALP)，尤其由于科罗索酸CA具有胆固醇样的结构，因此具有稳定和调节脂质体膜流动性的作用；并使制得的脂质体可根据临床需求进一步装载多种药物，制成高载药量罗索酸脂质体CALP制剂；该CALP可通过口服、注射或局部等多种途径给药，具有高效、稳定、安全、缓释和靶向的特性。
具体地说，本发明所提供的CALP，其结构是由磷脂和CA组成脂质体的脂质双分子膜(如图1.1所示)，所述的靶向抗肿瘤的CALP，是以CALP为药物载体，脂溶性和水溶性抗肿瘤活性药物，分别被包封于脂质双分子层和内水相中(如图1.2所示)。
本发明的科罗索酸脂质体，其中所述的磷脂为天然磷脂、半合成磷脂和/或合成磷脂中的一种或多种，其中天然磷脂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂，半合成磷脂为氢化大豆磷脂(HSPC)，合成磷脂为磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷酯酰丝氨酸(PS)或聚乙二醇化磷脂中的一种或多种；
所述的磷脂酰胆碱包括二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二芥酰基卵磷脂(DEPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(POPC)和硬脂酰溶血卵磷脂(S-LysoPC)；
所述的磷脂酰甘油包括二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、1,2-棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)；所述的磷脂酰乙醇胺包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)；
所述的磷酯酰丝氨酸包括二油酰基磷脂酰丝氨酸(DOPS)和二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(DMPS)；
所述的聚乙二醇化磷脂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000(DSPE-MPEG2000)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇5000(DSPE-MPEG5000)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-氨基(DSPE-PEG2000-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-氨基(DSPE-PEG5000-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-羧基(DSPE-PEG2000-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-羧基(DSPE-PEG5000-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-琥珀酰亚胺(DSPE-PEG2000-NHS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-琥珀酰亚胺(DSPE-PEG5000-NHS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺(DSPE-PEG2000-Mal)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-马来酰亚胺(DSPE-PEG5000-Mal)。
本发明所述的CALP，可采用目前已知的脂质体制备方法制成稳定的科罗索酸脂质体，以下所述的任意一种方法均可制成CALP，但不限于以下方法。
(1)薄膜分散法：将磷脂与科罗索酸溶于有机溶剂中，得到的脂质溶液在35℃～80℃下减压旋转蒸发，除去有机溶剂后成膜，加入水性介质，于20℃～80℃水浴中旋转或震摇水化，得粗制的脂质体悬液，经高压均质、超声或挤压法制得小单室脂质体，再采用超滤法、离心法、透析法或体积排阻色谱法，去除游离药物，得粒径均匀的科罗索酸纳米脂质体悬液；
(2)注入法：将磷脂与科罗索酸溶于有机溶剂中，得到的脂质溶液缓慢注入到35℃～80℃的水性介质中，不断搅拌，挥去有机溶剂，得粗制的脂质体悬液，经高压均质、超声或挤压法制得小单室脂质体，再采用超滤法、离心法、透析法或体积排阻色谱法，去除游离药物，得粒径均匀的科罗索酸纳米脂质体悬液；
(3)冻融法：按上述(1)和(2)法制得粗制的科罗索酸脂质体，将其置于－40℃～－196℃的冰箱或液氮中冷冻后，再取出于室温下融化，重复此操作5～15次，经高压均质、超声或挤压法制得小单室脂质体，再采用超滤法、离心法、透析法或体积排阻色谱法，去除游离药物，得粒径均匀的科罗索酸纳米脂质体悬液。
本发明所涉及的CALP，其中磷脂与科罗索酸的质量比为1:0.05～1:0.8，较佳比例为1:0.1～1:0.5。
本发明所涉及的CALP，较佳的处方组成为90～110mg的HSPC，20～40mg的DSPE-MPEG2000和20～50mg的CA。
在本发明所提供的CALP的制备方法中，所采用的有机溶剂为醇类、烷烃、酮类、醚类、卤代烃中的一种或多种；所采用的水性介质为纯水、磷酸盐缓冲液、枸橼酸缓冲液、酒石酸缓冲液、硫酸铵溶液、生理盐水或5％葡萄糖溶液中的一种；所采用的超声操作为水浴超声或探头超声，超声功率为80W～200W，超声时间为1～25分钟。
本发明提供了所述的CALP在制备治疗和预防糖尿病、肥胖、心血管疾病、慢性炎症和肿瘤药品中的用途。
本发明所述的CALP，可作为抗肿瘤药物的载体，包载抗肿瘤药物后进一步制成靶向抗肿瘤的CALP；所述的抗肿瘤药物包括盐酸多柔比星(DOX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)或喜树碱(CPT)，抗肿瘤药物与科罗索酸的质量比为1:1～1:50。
本发明所述的靶向抗肿瘤的CALP，其特征在于，CALP包载抗肿瘤药物的方法为被动载药法或主动载药法(pH梯度法或硫酸铵梯度法)，即按照上述任意一种制备CALP的操作步骤可制成DOX/CALP、5-FU/CALP、PTX/CALP或CPT/CALP。
本发明所述的DOX/CALP，其制备处方组成为90～110mg的HSPC，20～40mg的DSPE-MPEG2000，20～50mg的CA和10～30mg的DOX；所述的DOX/CALP的制备方法为硫酸铵梯度法。
本发明所述的CALP，稳定性良好，体外细胞实验测定结果证实，CALP具有抑制巨噬细胞迁移、抑制炎症因子分泌的特性；体内研究证实，糖尿病小鼠口服灌胃给药后，降低小鼠血糖的水平显著优于游离CA，表明CALP可有效提高CA的口服生物利用度。
采用硫酸铵梯度法制备装载盐酸多柔比星的CALP(DOX/CALP)，并按上市制剂DOXIL(盐酸多柔比星脂质体)处方同法制备DOX/LP(见具体实施例4)，体外稳定性与释放实验测定结果表明，DOX/CALP与DOX/LP的粒径和包封率无显著区别，并且两者具有极为相似的缓释特性，在血清中均能保持稳定，96小时药物泄露率低于10％；体外细胞实验结果表明，与DOX/LP相比，DOX/CALP更易被细胞摄取，抗肿瘤细胞的活性更大；体内实验表明，DOX/CALP具有与DOX/LP一致的药动学性质，呈现显著的长循环特征；抗肿瘤药效研究证明，尾静脉注射DOX/CALP的荷瘤小鼠生存期显著长于DOX/LP，证明其疗效较DOX/LP有显著提升。
本发明所提供的科罗索酸脂质体具有以下显著优点：
(1)以具有明确药理活性的科罗索酸替代胆固醇作为脂质体膜材组分，可制成载药量高和稳定性好的CALP，其中CA同时兼具了脂质体膜材和治疗药物的双重作用；该CALP适用于口服、注射或局部等多种给药途径，与游离CA相比，口服CALP生物利用度更高；注射CALP生物半衰期更长、靶向分布特征显著、药效更持久、安全性更高；局部给药CALP吸收更完全、药效更持久。因此，CALP可实现CA的体内有效递送，切实提高游离药物降糖、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等方面的治疗效果；
(2)根据治疗需求，以CALP为药物载体，可进一步包封多种抗肿瘤药物，制备CA和抗肿瘤药物的多药共载脂质体，该共载脂质体具有肿瘤组织靶向共递送、增效减毒、避免多药耐药及协同抗肿瘤的优势。
(3)特别是，由于CA能显著提高DOX的抗肿瘤疗效，将DOX装载于CALP内，所制备的DOX/CALP其抗癌效果和安全性显著优于市售的盐酸多柔比星脂质体(DOXIL)。
附图说明
图1.1为CALP的结构示意图，图1.2为装载脂溶性和/或水溶性药物的靶向抗肿瘤的CALP结构示意图。
图2为糖尿病小鼠口服给药CA和CALP后的小鼠空腹血糖浓度变化曲线，其中CA/LP按实施例1制备(以下相同)，结果表明，CALP降糖效果呈现剂量依耐性，在较高治疗剂量下，可将血糖降低到接近正常水平，与同剂量游离CA相比，CALP的降糖效果更明显，证明科罗索酸脂质体可显著提高药物的生物利用度。
图3.1为Transwell小室法评价CALP抑制巨噬细胞(RAW264.7)迁移图，图3.2为对8个视野内迁移过膜的细胞计数，结果显示，与未给药组(control组)相比，游离CA和CALP均可显著抑制巨噬细胞向肿瘤细胞的迁移，两组无明显差异。
图4为Western blot法测定CALP对4T1细胞炎症信号通路NF-κB的抑制程度，其中IKBα的表达量与NF-κB的抑制成负相关性，结果表明，CALP具备较强的NF-κB抑制作用，抑制程度与CA的浓度呈正相关性。
图5为DOX/LP、CALP和DOX/CALP血清中粒径变化曲线，其中，CA/LP按实施例1制备，DOX/LP按实施例4制备，DOX/CALP按实施例5制备(以下相同)，结果表明，96小时内，DOX/LP、CALP和DOX/CALP在血清中的粒径无明显变化，表明三种脂质体在血清中可长时间保持稳定性。
图6为DOX/LP和DOX/CALP的体外释放曲线，表明DOX/CALP与DOX/LP具有相似的缓慢释放特性，药物泄露率低于10％。
图7为DOX/CALP和DOX/LP的细胞摄取研究，结果显示，两种细胞，4T1乳腺癌细胞和RAW264.7巨噬细胞，摄取DOX/CALP的百分率均比DOX/LP组高出约一倍，表明DOX/CALP相比DOX/LP更易被细胞所摄取。
图8.1为科罗索酸脂质体对4T1细胞的毒性考察，图8.2为游离DOX和两种DOX脂质体对4T1细胞的毒性考察，结果表明CALP具有一定细胞毒性，当CA与DOX共存于脂质体内时，即DOX/CALP呈现最大的抗肿瘤活性，其IC50与游离药物无差别，且显著低于单载药的DOX/LP，由此证明DOX/CALP具有协同抗肿瘤作用。
图9为DOX、DOX/LP和DOX/CALP的体内药动学曲线，结果表明本发明所提供的DOX/CALP与DOX/LP具有相似的药动学性质，相比游离药物，呈现了体内长循环的特性。
图10为4T1荷瘤小鼠尾静脉分别注射DOX、DOX/LP、CALP和DOX/CALP后的生存曲线，其中，Blank LP为采用DOX/LP处方制备而成的不含DOX空白脂质体，结果表明DOX/CALP治疗组中荷瘤鼠的生存期最长，证明DOX/CALP可显著改善DOX/LP的抗肿瘤疗效。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明加以进一步说明，但是不限制本发明的内容。下列实施实例中未注明具体条件的实验方法，按常规方法和条件操作。
实施例1薄膜分散法制备CALP
称取100mg HSPC，33.3mg DSPE-MPEG2000，39mg科罗索酸，溶于氯仿/甲醇(4/1，v/v)中，得一澄清溶液；40℃水浴中旋转蒸发，去除有机溶剂，成膜，加入生理盐水，60℃旋转水化2小时，冰水浴中200W超声20分钟，通过葡聚糖凝胶柱洗脱得纯化的CALP脂质体悬液。脂质体粒径为90～95nm，CA含量为23.2％(w/w)。
实施例2注入法制备CALP
称取12mg DSPC，4mg DSPE-MPEG2000，4.8mg科罗索酸，溶于乙醇中，将该乙醇溶液匀速缓慢注入60℃的生理盐水中，1000rpm转速下不断搅拌，冰水浴中200W超声20分钟，10000rpm离心纯化，得CALP脂质体悬液。该法制备的CALP其粒径和CA含量与实施例1相近。
实施例3冻融法制备CALP
称取15mg DPPC，4mg DSPE-MPEG2000，4.8mg科罗索酸，溶于氯仿/甲醇(4/1，v/v)中，40℃水浴中旋转蒸发，去除有机溶剂成膜，加入生理盐水，40℃旋转水化2小时，得一粗制的脂质体悬液。将该悬液置于-80℃的冰箱中，12小时后取出置于室温下融化，再置于-80℃的冰箱中，12小时后再置于室温下，如此反复操作10次，随后挤压过100nm的聚碳酸酯膜，得CALP脂质体悬液。该法制备的CALP其粒径和CA含量与实施例1相近。
实施例4薄膜分散法-硫酸铵梯度载药法制备DOX/LP
称取100mg HSPC，33.3mg DSPE-MPEG2000，33.3mg胆固醇，溶于氯仿/甲醇(4/1，v/v)中，得一澄清溶液；40℃水浴旋转蒸发，去除有机溶剂成膜，加入250mM的硫酸铵溶液，60℃震摇水化2小时，冰水浴中200W超声20分钟后，通过葡聚糖凝胶柱洗脱，将外水相置换为pH 7.4的生理盐水，得到脂质体悬液。随后加入总量为20mg的盐酸多柔比星水溶液，65℃水浴震摇1小时后，通过葡聚糖凝胶柱洗脱，得纯化的多柔比星脂质体悬液。测得多柔比星的包封率为99.7％，载药量为10.6％，粒径为80～85nm。
实施例5薄膜分散法-硫酸铵梯度载药法制备DOX/CALP
称取100mg HSPC，33.3mg DSPE-MPEG2000，39mg科罗索酸，溶于氯仿/甲醇(4/1，v/v)中，40℃水浴中旋转蒸发，去除有机溶剂成膜，加入250mM的硫酸铵溶液，60℃震摇水化2小时，冰水浴中200W超声20分钟后，通过葡聚糖凝胶柱洗脱，将外水相置换为pH 7.4的生理盐水，得科罗索酸脂质体悬液。HPLC定量CA后，按CA:DOX＝2:1的质量比加入盐酸多柔比星溶液，60℃水浴震摇40分钟后，通过葡聚糖凝胶柱洗脱，得纯化的DOX/CALP。测得多柔比星的包封率为98.9％，载药量为10.4％。粒径为90～95nm。
实施例6乙醇注入法-被动载药法制备PTX/CALP
称取紫杉醇2mg，按实施例2的方法，与脂质及科罗索酸一起溶于有机溶剂中，其余方法一致。测得PTX的包封率为92.1％，载药量为8.1％，粒径为110～118nm。
实施例7薄膜分散法-被动载药法制备CTP/CALP
称取喜树碱12mg，按实施例1的方法，将CTP与脂质及科罗索酸一起溶于甲醇/氯仿(4/1，v/v)中，其余方法一致。测得CTP的包封率为90.1％，载药量为6.1％，粒径为100～105nm。
实施例8冻融法-主动载药法制备5-FU/CALP
称取5-氟尿嘧啶2mg，按实施例3的方法，将5-FU溶于水化介质中进行水化，其余方法一致。测得包封率为95.64％，载药量为7.43％，粒径为90～95nm。
以下实施实例中所选用的CALP均为采用薄膜分散法制备。
实施例9 CALP对糖尿病小鼠模型空腹血糖的影响
采用腹腔注射链尿佐菌素(STZ)辅以高糖高脂饮食的方法建立小鼠糖尿病模型，随后每周尾静脉取血，于血糖仪检测血糖值。选取血糖值高于11.1mmol/L的小鼠为糖尿病模型小鼠。随后分为高(10mg/kg)、中(5mg/kg)、低(1mg/kg)三个给药剂量组，每天口服给药一次，游离药物剂量为5mg/kg，连续灌胃给药。结果如图2所示。
实施例10 CALP对巨噬细胞迁移的抑制考察
取对数生长期的RAW264.7细胞，按2×106/小室置于Transwell上室，下室加入给药或未给药的4T1细胞无血清条件培养液，培养6小时后取出小室，用棉棒轻轻擦去上室未迁移过膜的细胞，然后用4％的多聚甲醇固定10分，DAPI染色10分。倒置荧光显微镜观察，每个小室随机取8个视野对细胞进行计数，结果如图3.1及图3.2所示。
实施例11 CALP对4T1细胞的NF-κB通路抑制考察
采用Western blot法进行考察。将4T1细胞铺于6孔板，待其生长至80％汇合度时，给予不同浓度的CALP，孵育24小时后采用Western blot法进行考察。其中，IKBα表达量越高，表明NF-κB抑制程度越高，结果如图4所示。
实施例12 CALP和DOX/CALP的血清稳定性考察
取DOX/LP、CALP与DOX/CALP，置于含10％胎牛血清与10％青霉素-链霉素的PBS溶液中(pH 7.4)，37℃恒温震荡孵育。于固定时间点测量粒径，考察其血清稳定性，结果如图5所示。
实施例13脂质体的体外释放测定
取DOX/LP、DOX/CALP于透析袋中，以pH 7.4的PBS缓冲溶液作为透析袋外液，37℃恒温振荡。于固定时间点，取透析袋外液，HPLC测定多柔比星的含量，计算累计释放百分率，结果如图6所示。
实施例14 DOX/CALP的体外摄取考察
分别取处于对数生长期的4T1与RAW264.7细胞，以40000个/孔接种于24孔板，待细胞生长至约80％汇合度时，分别加入含有50μg/ml DOX的DOX/CALP与DOX/LP，继续孵育2小时后用4℃的PBS(pH 7.4)清洗并消化，用流式细胞仪(Ex 561nm，Em 600nm)测定平均荧光强度与摄取率，结果如图7所示。
实施例15 CALP与DOX/CALP的体外毒性考察
取处于对数生长期的4T1细胞，1000个/孔接种于96孔板，37℃培养24小时后，分别加入不同浓度的DOX/LP、CALP、DOX/CALP以及游离DOX，其中，DOX/LP、CALP中各药物的量等同于DOX/CALP中各药物的量。继续培养48小时后每孔加入0.2mL含0.5mg/mL MTT的无血清培养液，继续孵育4小时后吸去培养液，加入0.2mL DMSO，待溶解均匀后用酶标仪测定吸光度值(λ＝570nm)，计算细胞活力的抑制情况，结果如图8.1及8.2所示。
实施例16 DOX/CALP的药动学考察
取SD大鼠随机分组，每组6只，分别经尾静脉注射DOX、DOX/LP与DOX/CALP，药物剂量相当于5mg DOX/kg体重，分别于不同时间眼部取血。处理血浆样品后，HPLC法测定DOX的浓度，结果如图9所示。
实施例17 DOX/CALP的体内药效学考察
取1×106个对数生长期的4T1细胞，分别接种于40只BABL/c雌性小鼠的第五对乳房一侧的乳脂垫中，建立原位乳腺癌模型，待肿瘤长至80～100mm3时，按每组8只分5组，分别尾静脉注射生理盐水、空白脂质体、CALP、DOX/LP和DOX/CALP，给药剂量为DOX 5mg/kg体重，CA mg/kg体重，每隔两天注射一次，共给药3次，绘制生存曲线，结果如图10所示。

Claims (17)

1.一种科罗索酸脂质体，其特征在于，由式Ⅰ结构的科罗索酸(corosolic acid，CA，)和磷脂组成脂质体的膜材，采用脂质体制备技术制成科罗索酸脂质体(corosolic acidliposomes,CALP)，
Figure FDA0003510895930000011
所述的磷脂为天然磷脂、半合成磷脂和/或合成磷脂中的一种或多种；
所述的天然磷脂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂；
所述的半合成磷脂为氢化大豆磷脂(HSPC)；
所述的合成磷脂为磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷酯酰丝氨酸(PS)或聚乙二醇化磷脂中的一种或多种。
2.按权利要求1所述的科罗索酸脂质体，其特征在于，所述的磷脂酰胆碱选自二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二芥酰基卵磷脂(DEPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(POPC)或硬脂酰溶血卵磷脂(S-LysoPC)。
3.按权利要求1所述的科罗索酸脂质体，其特征在于，所述的磷脂酰甘油包括二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、1,2-棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)。
4.按权利要求1所述的科罗索酸脂质体，其特征在于，所述的磷脂酰乙醇胺选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)或二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。
5.按权利要求1所述的科罗索酸脂质体，其特征在于，所述的磷酯酰丝氨酸选自二油酰基磷脂酰丝氨酸(DOPS)或二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(DMPS)。
6.按权利要求1所述的科罗索酸脂质体，其特征在于，所述的聚乙二醇化磷脂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000(DSPE-MPEG2000)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇5000(DSPE-MPEG5000)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-氨基(DSPE-PEG2000-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-氨基(DSPE-PEG5000-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-羧基(DSPE-PEG2000-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-羧基(DSPE-PEG5000-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-琥珀酰亚胺(DSPE-PEG2000-NHS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-琥珀酰亚胺(DSPE-PEG5000-NHS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺(DSPE-PEG2000-Mal)或二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-马来酰亚胺(DSPE-PEG5000-Mal)。
7.权利要求1所述的科罗索酸脂质体的制备方法，其特征在于，采用下述的薄膜分散法、注入法或冻融法制成CALP：
(1)薄膜分散法：将磷脂与科罗索酸溶于有机溶剂中，得到的脂质溶液在35℃～80℃下减压旋转蒸发，除去有机溶剂后成膜，加入水性介质，于20℃～80℃水浴中旋转或震摇水化，得粗制的脂质体悬液，经高压均质、超声或挤压法制得小单室脂质体，再采用超滤法、离心法、透析法或体积排阻色谱法，去除游离药物，得粒径均匀的科罗索酸纳米脂质体悬液；
(2)注入法：将磷脂与科罗索酸溶于有机溶剂中，得到的脂质溶液缓慢注入到35℃～80℃的水性介质中，搅拌，挥去有机溶剂，得粗制的脂质体悬液，经高压均质、超声或挤压法制得小单室脂质体，再采用超滤法、离心法、透析法或体积排阻色谱法，去除游离药物，得粒径均匀的科罗索酸纳米脂质体悬液；
(3)冻融法：按上述(1)和(2)法制得粗制的科罗索酸脂质体，将其置于－40℃～－196℃的冰箱或液氮中冷冻后，再取出于室温下融化，重复此操作5～15次，经高压均质、超声或挤压法制得小单室脂质体，再采用超滤法、离心法、透析法或体积排阻色谱法，去除游离药物，得粒径均匀的科罗索酸纳米脂质体悬液。
8.按权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的磷脂与科罗索酸的质量比为1:0.05～1:0.8。
9.按权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的磷脂与科罗索酸的质量比为1:0.1～1:0.5。
10.按权利要求7所述的制备方法，其特征在于，制备CALP的处方组成为90～110mg的HSPC，20～40mg的DSPE-MPEG2000和20～50mg的CA。
11.按权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂为醇类、烷烃、酮类、醚类、卤代烃中的一种或多种。
12.按权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的水性介质为纯水、磷酸盐缓冲液、枸橼酸缓冲液、酒石酸缓冲液、硫酸铵溶液、生理盐水或5％葡萄糖溶液中的一种。
13.按权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的超声操作为水浴超声或探头超声，超声功率为80W～200W，超声时间为1～25分钟。
14.权利要求1所述的科罗索酸脂质体在制备治疗或预防糖尿病、肥胖、心血管疾病、慢性炎症或肿瘤的药品中的用途。
15.按权利要求14的用途，其特征在于，所述的科罗索酸脂质体作为抗肿瘤药物的载体，包载抗肿瘤药物制成靶向抗肿瘤的药品；
所述的抗肿瘤药物选自盐酸多柔比星(DOX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)或喜树碱(CPT)；
所述的抗肿瘤药物与科罗索酸脂质体的质量比为1:1～1:50。
16.按权利要求15的用途，其特征在于，所述的科罗索酸脂质体包载抗肿瘤药物的方法为被动载药法或主动载药法即pH梯度法或硫酸铵梯度法，制成的靶向抗肿瘤的药品是DOX/CALP、5-FU/CALP、PTX/CALP或CPT/CALP。
17.按权利要求16的用途，其特征在于，所述的DOX/CALP的处方组成为90～110mg的HSPC，20～40mg的DSPE-MPEG2000，20～50mg的CA和10～30mg的DOX。
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