KR20080042905A

KR20080042905A - 항-ｃｄ３ 항체 조제물

Info

Publication number: KR20080042905A
Application number: KR1020087007421A
Authority: KR
Inventors: 그레그 엘슨; 얀 딘; 마리 코스코-빌브와
Original assignee: 노비뮨 에스 에이
Priority date: 2005-09-12
Filing date: 2006-09-12
Publication date: 2008-05-15
Also published as: BRPI0615745A2; UA92505C2; WO2007033230A3; WO2007033230A2; US20100209437A1; US20070065437A1; ZA200802051B; EA200800812A1; AU2006291005A1; CA2625815A1; EP1933868A2; EP2354162A1; NO20081124L; EA014025B1; SG174779A1; CN101309703A; AR057807A1; JP2009507838A; IL189876A0

Abstract

본 발명은 항-CD3 항체의 치료학적 조제물, 진단학적 조제물, 및/또는 예방학적 조제물, 및 항-CD3 항체의 제형 뿐만 아니라, 상기 조제물 및 제형을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

항-ＣＤ３ 항체 조제물{ANTI-CD3 ANTIBODY FORMULATIONS}

본 발명은 항-CD3 항체의 조제물 및 투약법(dosing) 뿐만 아니라, 그의 사용 방법에 관한 것이다.

T-세포 수용체 복합체의 CD3 엡실론 신호 분자에 대한 항체가 면역억제제로서 유용하며, 자가면역 질환의 치료에서 유용하다는 것이 입증되었다. 따라서, 항-CD3 항체를 제조하는 개선된 방법, 항-CD3 항체를 정제하는 방법, 항-CD3 항체를 함유하는 약학적 조제물이 유용할 것이다.

-본 발명의 요약-

본 발명은 CD3에 대해 특이적인 모노클로날 항체 조제물 및 투약법을 제공한다. 본 발명은 또한 항-CD3 모노클로날 항체를 제조하는 방법 및 항-CD3 항체를 정제하는 방법을 제공한다.

본원에 기재된 항-CD3 항체의 약학적 조제물은 3.0 내지 6.2 범위에서 효과적인 pH 완충제; 염; 계면활성제; 및 항-CD3 항체의 약학적 유효량을 포함한다.

염은 예를 들면, 염화나트륨이고; 계면활성제는 예로서, 이온성, 음이온성 또는 쯔비터이온성 계면활성제이다. 예를 들면, 계면활성제는 이온성 계면활성제, 예로서, 폴리소르베이트, 예컨대, 폴리소르베이트 80이다. pH 완충제로는 예를 들 면, 아세트산나트륨을 포함한다. 몇몇 실시태양에서, pH 완충제는 시트르산나트륨/시트르산, 및 아세트산나트륨/아세트산으로부터 선택된다.

pH 완충제는 10 mM 내지 50 mM 범위에서 효과적이다. 본원에 기술된 조제물에 사용되는 pH 완충제는 5.0 내지 6.0의 pH 범위를 제공한다. 예를 들면, pH 완충제는 5.2 내지 5.8의 pH 범위를 제공한다. 몇몇 실시태양에서, pH 완충제는 5.4 내지 5.6의 pH 범위를 제공한다. 예를 들면, pH 완충제는 pH 약 5.5를 제공한다.

본원에 기술된 조제물에서, 염은 10O mM 내지 140 mM의 범위로 존재한다. 계면활성제는 0.02% w/v이다. 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 항-CD3 항체를 단위 용량 당 0.05 mg 내지 10 mg 범위의 양으로 제공하도록 제형화된다. 몇몇 실시태양에서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 항-CD3 항체를 단위 용량당 0.1 mg 내지 5.0 mg 범위 의 양으로 제공하도록 제형화된다. 예를 들면, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량당 0.5 mg 내지 3.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체를 제공하도록 제형화된다.

본원에 기술된 항-CD3 항체 조제물에 있어서, 항-CD3 항체는 예컨대, 28F11, 27H5, 23F10, 15C3, 오르쏘클론 OKT3, 인간 OKT3γ1 (HOKT3γ1) 또는 ChAglyCD3이다.

본원에서 제공하는 항-CD3 항체의 약학적 조제물은 3.0 내지 6.2 범위에서 효과적인, 아세트산나트륨을 포함하는 pH 완충제, 염화나트륨, 폴리소르베이트를 포함하는 계면활성제, 및 항-CD3 항체의 약학적 유효량을 포함한다. 폴리소르베이트는, 예를 들면, 폴리소르베이트 80이다. pH 완충제는 10 mM 내지 50 mM 범위에서 효과적이다. 본원에 기술된 조제물에서 사용되는 pH 완충제는 5.0 내지 6.0의 pH 범위를 제공한다. 예를 들면, pH 완충제는 5.2 내지 5.8의 pH 범위를 제공한다. 몇몇 실시태양에서, pH 완충제는 5.4 내지 5.6의 pH 범위를 제공한다. 예를 들면, pH 완충제는 pH 약 5.5를 제공한다.

본원에 기술된 약학적 조제물에서, 염은 10O mM 내지 140 mM의 범위로 존재한다. 계면활성제는 0.02% w/v이다. 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량당 0.05 mg 내지 10 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체를 제공하도록 제형화된다. 몇몇 실시태양에서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량당 0.1 mg 내지 5.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체를 제공하도록 제형화된다. 예를 들면, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 항-CD3 항체를 단위 용량당 0.5 mg 내지 3.0 mg 범위의 양으로 제공하도록 제형화된다. 항-CD3 항체는 예컨대, 28F11, 27H5, 23F10, 15C3, 오르쏘클론 OKT3, 인간 OKT3γ1 (HOKT3γ1) 또는 ChAglyCD3이다.

본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물의 하나의 실시태양에서, 약학적 조제물은 단위 용량당 0.5 mg 내지 3.0 mg 범위의 양의 항-CD3 항체, 1 내지 3 mg의 아세트산나트륨, 5 내지 9 mg의 염화나트륨, 및 0.1 내지 0.3 ㎍의 폴리소르베이트 80을 포함하고, 조제물은 물을 사용하여 1.0 mL로 조정된다. 예를 들면, 약학적 조제물은 2.05 mg의 아세트산나트륨, 7.31 mg의 염화나트륨 및 0.216 ㎍의 폴리소르베이트 80을 함유한다. 약학적 조제물의 pH는 예컨대, 5.5이다.

본원에서는 자가면역 질병 또는 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 피험체에게 5일간의 기간 동안 1일 당 단위 용량당 0.05 mg 내지 10 mg 범위의 양으로 항- CD3 항체를 제공하도록 제형화된 항-CD3 항체의 유효량을 투여함으로써, 피험체에서 자가면역 질병 또는 염증성 질환을 치료하는 방법 또한 제공한다. 예를 들면, 항-CD3 항체의 유효량은 5일간의 기간 동안 하루 당 단위 용량당 0.1 mg 내지 5.0 mg 범위 내의 양으로 항-CD3 항체를 제공하도록 제형화된다. 바람직하게, 항-CD3 항체의 유효량은 5일간의 기간 동안 하루 당 단위 용량당 0.5 mg 내지 3.0 mg 범위 내의 양으로 항-CD3 항체를 제공하도록 제형화된다. 본원에 기술된 방법에서, 항-CD3 항체 조제물은 정맥 내로 투여된다. 예를 들면, 조제물은 연속적인 정맥 주입을 통해 투여된다.

본원에서는, 이식 후에 또는 그와 동시에 피험체에게 항-CD3 항체의 유효량을 투여하고, 그 후 매일 TCR-CD3 포화가 50% 이상이 될 때까지 상기 투여량을 증가시키면서 투여한 후, 5일간 1일 유효량을 후속 투약하고, 총 치료 과정은 최대 8일을 초과하지 않는 것을 포함하는, 피험체에서 이식 거부 반응을 치료 또는 예방하는 방법 또한 제공한다. 본원에 기술된 방법에서, 항-CD3 항체 조제물은 정맥 내로 투여된다. 예를 들면, 조제물은 연속적인 정맥 주입을 통해 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체의 유효량을 통해 사이토카인 방출 수준이 WHO 독성 분류 기준에 있어 3 미만이 된다.

본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위 내의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/ 일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

예시적인 모노클로날 항체로는 본원에서 제공된 28F11, 27H5, 23F10, 및 15C3 뿐만 아니라, 오르쏘클론 OKT3, 인간 OKT3γ1(HOKT3γ1) 및 ChAglyCD3을 포함한다. 바람직하게, 모노클로날 항체는 28F11, 27H5, 23F10 또는 15C3과 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 또한 바람직하게, 항체는 완전 인간 항체("huCD3 항체")이다. 항-CD3 항체는 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: 항체가 CD3 양성 (CD3+) 세포에 결합하지만, CD3 음성(CD3-) 세포에는 결합하지 않거나; 항-CD3 항체가 CD3 또는 T 세포 수용체(TcR)의 세포 표면 발현 수준 또는 활성의 변경(예컨대, 감소)을 포함하는 항원 조정을 유도하거나; 항-CD3 항체는, 뮤린 항-인간 0KT3 모노클로날 항체가 T-림프구에 결합하는 것을 저해하거나; 항-CD3 항체가, 전체적으로 또는 부분적으로 아미노산 서열 EMGGITQTPYKVSISGT(서열 번호 57)을 포함하는 CD3의 에피토프에 결합한다. 항-CD3 항체는 CD3에 결합하는 것에 대하여 뮤린 항-CD3 항체 OKT3과 경쟁하고, 항-CD3 항체에 노출시키는 것은 CD2, CD4 또는 CD8의 세포 표면 발현에는 영향을 미치지 않으면서, CD3 및/또는 TcR을 제거하거나 차폐시킨다.

뮤린 항-인간 OKT3 모노클로날 항체가 T-림프구에 결합하는 것을 저해하는 것은, 뮤린 OKT3 항체가 T-림프구 세포 표면 상의 CD3과 복합체를 형성할 수 있는 능력이 감소되는 것으로서 정의된다.

항-CD3 항체는 서열 번호 2, 6, 10 또는 22의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 서열 번호 4, 8, 16-20 또는 25-26의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변부를 함유한다. 바람직하게, 3개의 중쇄 CDR는 GYGMH(서열 번호 27); VIWYDGSKKYYVDSVKG(서열 번호 28); QMGYWHFDL(서열 번호 29); SYGMH(서열 번호 33); IIWYDGSKKNYADSVKG(서열 번호 34); GTGYNWFDP(서열 번호 35); 및 AIWYNGRKQDYADSVKG(서열 번호 44)로 구성된 군으로부터 선택되는 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 일치하는 아미노산 서열을 포함하고, 3개의 경쇄 CDR는 RASQSVSSYLA(서열 번호 30); DASNRAT(서열 번호 31); QQRSNWPPLT(서열 번호 32); RASQSVSSSYLA(서열 번호 36); GASSRAT(서열 번호 37); QQYGSSPIT(서열 번호 38); RASQGISSALA(서열 번호 39); YASSLQS(서열 번호 40); QQYYSTLT(서열 번호 41); DASSLGS(서열 번호 42); WASQGISSYLA(서열 번호 43); QQRSNWPWT(서열 번호 45); DASSLES(서열 번호 46); 및 QQFNSYPIT(서열 번호 47)의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 항체는 CD3에 결합한다.

본원에서 제공되는 항-CD3 항체는 하기 특징중 적어도 2개 이상(즉, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 11개 이상)을 나타낸다: 항체가 인간 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열, 또는 인간 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 상동성인 핵산에 의해 코딩되는 가변 중쇄 영역(V_H)을 함유하고; 항체가 인간 DP50 V_L 생식세포 유전자 서열, 또는 인간 DP50 V_L 생식세포 유전자 서열에 상동성인 핵산에 의해 코딩되는 가변 경쇄 영역(V_L)을 함유하고; 항체가 인간 L4/18a V_L 생식세포 유전자 서열, 또는 인간 L4/18a V_L 생식세포 유전자 서열에 상동성인 핵산 서열에 의해 코딩되는 V_L을 함유하고; 항체가 아미노산 서열 YGMH(서열 번호 58)를 포함하는 V_H CDR1 영역을 포함하고; 항체가 아미노산 서열 DSVKG(서열 번호 59)를 포함하는 V_H CDR2 영역을 포함하고; 항체가 아미노산 서열 IWYX₁GX₂X₃X₄X₅YX₆DSVKG(서열 번호 60)를 포함하는 V_H CDR2 영역을 포함하고; 항체가 아미노산 서열 X_AX_BGYX_CX_DFDX_E(서열 번호 61)를 포함하는 V_H CDR3 영역을 포함하고; 항체가 아미노산 서열 GTGYNWFDP(서열 번호 62) 또는 아미노산 서열 QMGYWHFDL(서열 번호 63)을 포함하는 V_H CDR3 영역을 포함하고; 항체가 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 위치(여기에서, 위치는 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 가변 영역내에 있다)에 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 64)를 포함하고; 항체가 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 위치(여기에서, 위치는 CDR3 영역에 대하여 가변 영역 C-말단 내에 있다)에 아미노산 서열 GTLVTVSS(서열 번호 65)을 포함하고; 항체가 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 위치(여기에서, 위치는 CDR3 영역에 대하여 가변 영역 C-말단 내에 있다)에 아미노산 서열 WGRGTLVTVSS(서열 번호 66)을 포함하고; 항체가 전제 적으로 또는 부분적으로 아미노산 서열 EMGGITQTPYKVSISGT(서열 번호 57)을 포함하는 에피토프에 결합한다는 것 및; 항체가 중쇄내 위치 234번, 235번, 265번 또는 297번, 또는 그의 조합된 위치의 아미노산 잔기에 돌연변이를 포함하며, 상기 항체 존재하에서 T-세포로부터의 사이토카인 방출은 중쇄내 위치 234번, 235번, 265번 또는 297번, 또는 그의 조합된 위치에서 돌연변이를 포함하지 않는 항체 존재하에서의 T-세포로부터의 사이토카인 방출과 비교할 때 감소된 것이다. 본원에서 제공되는 중쇄 잔기의 번호 체계는 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호(본원에 그 내용 전문이 참고로 인용된다)에 나타낸 바와 같은, EU 인덱스[(Kabat et al., "Proteins of Immunological Interest", US Dept. of Health & Human Services (1983)]를 참조할 수 있다)의 것이다.

항-CD3 항체는 아미노산 돌연변이를 함유할 수 있다. 전형적으로, 돌연변이는 불변 영역내에 있다. 돌연변이 결과 항체는 변경된 효과기 기능을 갖게 된다. 항체의 효과기 기능은 항체가 예로서, Fc 수용체 또는 보체 성분과 같은 효과기 분자에 대하여 갖는 친화성을 변경, 즉, 증진 또는 저하시킴으로써 변경된다. 예를 들면, 돌연변이 결과 T-세포로부터 사이토카인의 방출을 감소시킬 수 있는 항체가 얻어진다. 예를 들면, 돌연변이는 중쇄내 아미노산 잔기 234번, 235번, 265번 또는 297번, 또는 그의 조합에 존재한다. 바람직하게는, 돌연변이는 위치 234번, 235번, 265번 또는 297번에 알라닌 잔기, 또는 위치 235번에 글루타메이트 잔기를 가져오는 것, 또는 그의 조합이다. "사이토카인"이라는 용어는 세포 표면상에서 발현된 세포외 수용체에 결합하여 세포 기능을 조정하는, 당업계에 알려진 모든 인간 사이 토카인을 이르는 것으로, IL-2, IFN-감마, TNF-a, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-IO 및 IL-13을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

바람직하게, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체는 생체내에서 중쇄 불변 영역에 매개되는 하나 이상의 사이토카인(들)의 방출을 방지하는 하나 이상의 돌연변이를 함유한다.

본원에서 제공되는 전장의 인간 CD3 항체는 항-CD3 항체에의 노출시에 사이토카인 방출이 현저하게 감소 또는 제거되도록, 예를 들면, Fc 영역에 L²³⁴ L²³⁵ → A²³⁴ E²³⁵ 돌연변이를 포함한다. 하기 실시예 4에 기재된 바와 같이, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체의 Fc 영역내의 L²³⁴ L²³⁵ → A²³⁴ E²³⁵ 돌연변이는 항-CD3 항체가 인간 백혈구에 노출되었을 때 사이토카인 방출을 감소 또는 제거하는 반면, 하기에 기재하는 돌연변이는 상당량의 사이토카인 방출을 유지한다. 예를 들면, 사이토카인 방출의 상당한 감소는 Fc 영역에 L²³⁴ L²³⁵ → A²³⁴ E²³⁵ 돌연변이를 갖는 항-CD3 항체에 노출되었을 때의 사이토카인 방출 수준을, 하기에 기재하는 하나 이상의 다른 돌연변이를 갖는 다른 항-CD3 항체에 노출시켰을 때의 사이토카인 방출 수준과 비교하여 정의된다. Fc 영역에서의 다른 돌연변이는, 예를 들어, L²³⁴ L²³⁵ → A²³⁴ A²³⁵, L²³⁵ → E²³⁵, N²⁹⁷ → A²⁹⁷, 및 D²⁶⁵→ A²⁶⁵를 포함한다.

별법으로, 항-CD3 항체는 핵산 잔기를 생식세포 핵산 잔기로 대체하는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 핵산에 의해 코딩된다. "생식세포 핵산 잔기"란 불변 또는 가변 영역을 코딩하는 생식세포 유전자 내에 자연적으로 발생하는 핵산 잔기를 말한다. 따라서, 본원에서 제공되는 항체는 핵산을 생식세포 핵산 잔기로 대체하는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 생식세포 항체 유전자는, 예를 들면, DP50(기탁 번호: IMGT/EMBL/GenBank/DDBJ:L06618), L6(기탁 번호: IMGT/EMBL/GenBank/DDBJ:X01668) 및 L4/18a(기탁 번호: EMBL/GenBank/DDBJ:Z00006)을 포함한다.

huCD3 항체의 중쇄는, 예를 들면, DP50 생식세포 유전자와 같은 생식세포 V(가변) 유전자로부터 유래한다. DP50 생식세포 유전자의 핵산 및 아미노산 서열은, 예를 들면, 하기 핵산 및 아미노산 서열을 포함한다:

huCD3 항체는 인간 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변(V_H) 영역을 포함한다. DP50 V_H 생식세포 유전자 서열은, 예를 들면, 도 5의 서열 번호 48에 나타나있다. 본원에서 제공되는 huCD3 항체는 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 80% 이상 상동성인 핵산 서열에 의해 코딩되는 V_H 영역을 포함한다. 바람직하게, 핵산 서열은 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 90%, 95%, 96%, 97% 이상, 보다 바람직하게는, DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 98%, 99% 이상 상동성이다. huCD3 항체의 V_H 영역은 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 V_H 영역의 아미노산 서열에 80% 이상 상동성이다. huCD3 항체의 V_H 영역의 아미노산 서열은 DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열에 바람직하게는, 90%, 95%, 96%, 97% 이상, 보다 바람직하게는, DP50 V_H 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 서열에 98%, 99% 이상 상동성이다.

huCD3 항체는 또한 인간 L6 또는 L4/18a V_L 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변(V_L) 영역을 포함한다. 인간 L6 V_L 생식세포 유전자 서열은, 예를 들면, 도 6의 서열 번호 56에, 인간 L4/18a V_L 생식세포 유전자 서열은 도 7의 서열 번호 53에 나타나 있다. 별법으로, huCD3 항체는 L6 또는 L4/18a V_L 생식세포 유전자 서열에 80% 이상 상동성인 핵산 서열에 의해 코딩되는 V_L 영역을 포함한다. 바람직하게, 핵산 서열은 L6 또는 L4/18a VL 생식세포 유전자 서열에 90%, 95%, 96%, 97% 이상, 보다 바람직하게는, L6 또는 L4/18a VL 생식세포 유전자 서열에 98%, 99% 이상 상동성이다. huCD3 항체의 V_L 영역은 L6 또는 L4/18a V_L 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 V_L 영역의 아미노산 서열에 80% 이상 상동성이다. huCD3 항체의 V_L 영역의 아미노산 서열은 L6 또는 L4/18a VL 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열에 바람직하게는, 90%, 95%, 96%, 97% 이상, 보다 바람직하게는, L6 또는 L4/18a VL 생식세포 유전자 서열에 의해 코딩되는 서열에 98%, 99% 이상 상동성이다.

huCD3 항체는, 예를 들면, DP50 생식세포로부터 유래된 부분적으로 보존된 아미노산 서열을 갖는다. 예를 들면, 본원에서 사용되는 huCD3 항체의 CDR1 영역은 적어도 연속 아미노산 서열 YGMH(서열 번호 58)을 갖는다.

항-CD3 항체의 CDR2는 적어도 연속 아미노산 서열 DSVKG(서열 번호 59)을 포함한다. 예를 들면, CDR2 영역은 연속 아미노산 서열 IWYX₁GX₂X₃X₄X₅YX₆DSVKG(서열 번호 60)(여기에서, X₁, X₂, X₃, X₄, X₅ 및 X₆은 어떤 아미노산이어도 무방하다)을 포함한다. 예를 들면, X₁, X₂, X₃, 및 X₄는, 예를 들면, 친수성 아미노산이다. 본원에서 사용되는 몇몇 항-CD3 항체에서, X₁은 아스파라긴 또는 아스파르테이트이고, X₂는 아르기닌 또는 세린이고, X₃은 리신 또는 아스파라긴이고, X₄는 리신 또는 글루타민이고, X₅는 아스파르테이트, 아스파라긴 또는 티로신이고/거나, X₆은 발린 또는 알라닌이다. 예를 들면, V_H CDR2 영역은 AIWYNGRKQDYADSVKG(서열 번호 69), IIWYDGSKKNYADSVKG(서열 번호 70), VIWYDGSKKYYVDSVKG(서열 번호 71) 및 VIWYDGSNKYYADSVKG(서열 번호 72)로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.

항-CD3 항체의 CDR3 영역은, 예를 들면, 적어도 연속 아미노산 서열 X_AX_BGYX_CX_DF_DX_E(서열 번호 61)(여기서, X_A, X_B, X_C, X_D 및 X_E는 어떤 아미노산이어도 무방하다)을 함유한다. 본원에서 사용되는 몇몇 항-CD3 항체에서, X_A 및 X_B는 중성 아미노산이고, X_D는 방향족 아미노산이고/거나, X_E는 소수성 아미노산이다. 예를 들면, X_A는 글리신 또는 글루타민이고, X_B는 트레오닌 또는 메티오닌이고, X_C는 아스파라긴 또는 트립토판이고, X_D는 트립토판 또는 히스티딘이고/거나, X_E는 프롤린 또는 류신이다. 예를 들면, CDR3 영역은 연속 아미노산 서열 GTGYNWFDP(서열 번호 62) 또는 연속 아미노산 서열 QMGYWHFDL(서열 번호 63)을 포함한다.

항-CD3 항체는 아미노산 서열 WVRQAPGKGLEWV(서열 번호 73)을 함유하는 프레임워크 2 영역(FRW2)을 포함한다. 본원에서 사용되는 항-CD3 항체는 아미노산 서열 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA(서열 번호 74)을 함유하는 프레임워크 3 영역(FRW3)을 포함한다.

몇몇 항-CD3 항체는 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 위치에 연속 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 64)를 포함한다. 예를 들면, 항체는 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 위치에 연속 아미노산 서열 GTLVTVSS(서열 번호 65)를 포함한다. 다른 항-CD3 항체는 CDR3 영역에 대하여 C-말단인 위치에 연속 아미노산 서열 WGRGTLVTVSS(서열 번호 66)를 포함한다. 서열 번호 66중의 아르기닌 잔기는 예를 들면, 28F11 huCD3 항체(서열 번호 2) 및 23F10 huCD3 항체(서열 번호 6)에 대한 V_H 서열 중에 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 항-CD3 항체 조제물을 투여하여 면역-관련 질환의 증상을 치료, 예방 또는 경감시키는 방법을 제공한다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 크론병, 다발경화증, 류마티스 관절염 또는 I형 당뇨병을 앓거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 환자에게 투여된다. 조제물은 예컨대 정맥 내로 투여된다. 다른 투여 경로도 고려된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 피하, 경구, 비경구, 비내, 근육내, 또는 이들 투여 경로의 임의의 조합으로 투여된다.

또다른 측면에서, 본 발명은 이식 후에 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 항-CD3 항체를 피험체에게 투여하고, 그 후 TCR-CD3 포화 수준이 50% 이 상에 도달할 때까지 각 날마다 투여량을 증가시키고, 이후에 5일 동안 유효량을 투여하고, 치료 전 과정은 8일을 초과하지 않도록 함으로써 이식 거부 반응을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 기관 또는 조직 이식 후의 신장 거부를 치료하거나 예방하는데 사용된다. 조제물은 예방학적으로(예컨대, 급성 거부 에피소드 이전에 에피소드를 예방하기 위하여) 투여되고/거나, 조제물은 이식 후의 급성 거부 에피소드의 치료제로서 사용된다. 조제물은 예컨대 정맥 내로 투여된다. 다른 투여 경로도 고려된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 피하, 경구, 비경구, 비내, 근육내, 또는 이들 투여 경로의 임의의 조합으로 투여된다.

본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 적절한 용기 내에 저장됨으로써, 용기당 항-CD3 항체 조제물의 용량이 1 내지 10 mg/용기 범위로 있도록 할 수 있다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물 용기당 용량은 2 내지 5 mg/용기 범위로 있다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물 용기당 용량은 3.5 내지 4.5 mg/용기 범위로 있 고, 예컨대, 용기당 용량은 4 mg/용기이다.

임의로, 피험체에게 추가로 비제한적인 예로서, 소염 화합물 또는 면역억제 화합물과 같은 제2의 약제를 투여한다. 적합한 화합물은 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A(예를 들면, 사이클로스포린 마이크로에멀션 포함), 타크로리무스, 코르티코스테로이드, 스타틴, I형 인터페론, 레미케이드(인플릭시맙), 엔브렐(에타너셉트) 및 휴미라(아달리무맙)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, I형 당뇨병 또는 성인 잠복성 자가면역 당뇨병(LADA: Latent Autoimmune Diabetes in the Adult)이 있는 피험체에 예를 들면, GLP-1 또는 베타 세포 휴지 화합물(즉, 칼륨 채널 개방제와 같이, 인슐린 방출을 감소 또는 저해하는 화합물)과 같은 제2의 약제도 투여한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 친화 크로마토그래피, 이온-교환 크로마토그래피 및 수산화인회석 크로마토그래피에 의해 항-CD3 항체를 정제하는 방법을 제공한다. 예를 들면, 친화 크로마토그래피는 단백질 A 크로마토그래피이다. 이온 교환 크로마토그래피는 예컨대, 음이온 교환 크로마토그래피이다.

본 발명은 CD3 엡실론 쇄(CD3ε)에 특이적인 완전 인간 모노클로날 항체의 조제물 및 투약법을 제공한다. 본원에서 제공되는 완전 인간 항체는 huCD3 항체로 지칭된다.

본원에서 제공되는 조제물의 pH 범위는 3.0 내지 7.0이다. 바람직하게, 조제물의 pH 범위는 5.0 내지 6.0이고, 더욱 바람직하게, 조제물의 pH 범위는 5.2 내지 5.8이고, 및 가장 바람직하게, 조제물의 pH 범위는 5.4 내지 5.6이다. 예를 들면, 하나의 실시태양에서, 조제물의 pH는 5.5이다.

본원에서 사용되는 항-CD3 항체는 프로세싱된 인간 CD3 엡실론 서브유니트의 위치 27에서 43까지의 아미노산 잔기(즉, 리더 서열이 없는)를 전체적으로 또는 부분적으로 포함하는 CD3에 결합한다. 인간 CD3 엡실론 서브유니트의 아미노산 서열은, 예를 들면, 진뱅크 기탁 번호 NP_000724; AAA52295; P07766; A32069; CAA27516; 및 AAH49847에 나타나있다. 예를 들면, 항-CD3 항체는 전체적으로 또는 부분적으로 아미노산 서열 EMGGITQTPYKVSISGT(서열 번호 57)을 포함하는 CD3 에피토프에 결합한다. 이러한 에피토프에 결합하는 항-CD3 모노클로날 항체의 한 예는 본원에서 제공되는 28F11 항체이다. 28F11 항체는 하기 서열 번호 1의 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 영역(서열 번호 2) 및 하기 서열 번호 3의 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 영역(서열 번호 4)을 포함한다(도 1A 내지 1D).

문헌 [Chothia et al., 1989; E. A. Kabat et al., 1991]에 의해 정의된 바와 같은 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)을 포함하는 아미노산은 도 1B 및 1D, 도 5 및 6에서 박스 안에 표시되어 있다. (문헌 [Chothia, C. et al., Nature 342:877-883 (1989)]; [Kabat, E. A. et al., Sequences of Protein of Immunological Interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991)]을 참조할 수 있다). 28F11 항체의 중쇄 CDR은 서열 GYGMH(서열 번호 27), VIWYDGSKKYYVDSVKG(서열 번호 28) 및 QMGYWHFDL(서열 번호 29)을 갖는다. 28F11 항체의 경쇄 CDR은 서열 RASQSVSSYLA(서열 번호 30), DASNRAT(서열 번호 31) 및 QQRSNWPPLT(서열 번호 32)을 갖는다.

도 2A-2D에 나타낸 바와 같이, 23F10 항체는 서열 번호 5의 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 영역(서열 번호 6), 및 하기 서열 번호 7의 핵산 서열에 의해 코딩되는 경쇄 가변 영역(서열 번호 8)을 포함한다. 문헌 [Chothia et al., 1989; E. A. Kabat et al., 1991]에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 아미노산은 도 2B, 2D에서 박스 안에 표시되어 있다. 23F10 항체의 중쇄 CDR은 서열 GYGMH(서열 번호 27), VIWYDGSKKYYVDSVKG(서열 번호 28) 및 QMGYWHFDL(서열 번호 29)을 포함한다. 23F10 항체의 경쇄 CDR은 서열 RASQSVSSYLA(서열 번호 30), DASNRAT(서열 번호 31) 및 QQRSNWPPLT(서열 번호 32)을 포함한다.

도 3A-3D에 나타낸 바와 같이, 27H5 항체는 하기 서열 번호 9의 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 영역(서열 번호 10), 및 하기 서열 번호 11 내지 15의 핵산 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열 번호 16 내지 20으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 문헌 [Chothia et al. 1989, E.A. Kabat et al., 1991]에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 아미노산은 도 3B, 3D, 5, 및 7-8에서 박스 안에 표시되어 있다. 27H5 항체의 중쇄 CDR은 서열은 서열 SYGMH(서열 번호 33), IIWYDGSKKNYADSVKG(서열 번호 34) 및 GTGYNWFDP(서열 번호 35)를 포함한다. 27H5 항체의 경쇄 CDR은 서열 RASQSVSSSYLA(서열 번호 36); GASSRAT(서열 번호 37); QQYGSSPIT(서열 번호 38); RASQGISSALA(서열 번호 39); YASSLQS(서열 번호 40); QQYYSTLT(서열 번호 41); DASSLGS(서열 번호 42); 및 WASQGISSYLA(서열 번호 43)를 포함한다.

도 4A-4D에 나타낸 바와 같이, 15C3 항체는 하기 서열 번호 21의 핵산 서열에 의해 코딩되는 중쇄 가변 영역(서열 번호 22), 및 하기 서열 번호 23-24의 핵산 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열 번호 25-26으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 문헌 [Chothia et al. 1989, E.A. Kabat et al., 1991]에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 구성하는 아미노산은 도 4B, 4D, 및 5-7에서 박스 안에 표시되어 있다. 15C3 항체의 중쇄 CDR은 서열은 서열 SYGMH(서열 번호 33) AIWYNGRKQDYADSVKG(서열 번호 44) 및 GTGYNWFDP(서열 번호 35)를 포함한다. 15C3 항체의 경쇄 CDR은 서열 RASQSVSSYLA(서열 번호 30); DASNRAT(서열 번호 31); QQRSNWPWT(서열 번호 45); RASQGISSALA(서열 번호 39); DASSLES(서열 번호 46); QQFNSYPIT(서열 번호 47)를 포함한다.

본원에서 사용되는 항-CD3 항체는 또한 서열 번호 2, 6, 10 또는 22의 아미노산 서열과 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 일치하는 중쇄 가변 영역 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 4, 8, 16-20, 또는 25-26의 아미노산 서열과 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% 이상 일치하는 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체를 포함한다.

별법으로, 모노클로날 항체는 28F11, 27H5, 23F10 또는 15C3와 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.

달리 언급하지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 또한, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수의 의미를 포함하고, 또한 복수 용어는 단수의 의미를 포함한다. 일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자생물학, 단백질 및 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 화학 및 혼성화와 관련된 용어 및 기술은 당업계에 공지되어 통상적으로 사용되고 있는 것들이다. 재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 조직 배양 및 형질 전환(예를 들면, 전기천공, 리포펙션)을 위해 표준 기술이 사용된다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조자의 설명서에 따르거나, 당업계에서 통상적으로 수행되는 바에 따르거나, 본원에 기재된 바와 같이 수행한다. 상기 언급한 기술 및 과정은 일반적으로 당업계에 공지된 종래의 방법에 따르거나, 본원을 통해 인용되고 논의된 여러 종류의 일반적이고 보다 구체적인 참고문헌, 예컨대 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)]에 기재된 바에 따라 수행한다. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 의약 및 약제 화학과 관련하여 사용된 용어, 그 실험 과정 및 기술은 당업계에 공지되어 통상적으로 사용되고 있는 것들이다. 화학 합성, 화학 분석, 약제 제조, 제형화, 전달 및 환자의 치료를 위해 표준 기술이 사용된다.

본 발명의 개시 사항과 관련하여, 하기 용어들은, 달리 언급하지 않는 한, 다음과 같은 의미를 갖는다.

본원에서, "항체"라는 용어는 면역글로불린(Ig) 분자 및 면역글로불린 분자 의 면역학적으로 활성인 부분, 즉, 항원과 특이적으로 결합(면역반응)하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 의미한다. 그러한 항체는 폴리클로날, 모노클로날, 키메라, 단일쇄, F_ab, F_ab' 및 F₍ _ab' ₎₂ 단편, 및 F_ab 발현 라이브러리를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. "특이적으로 결합하다" 또는 "~과 면역반응하다"라는 것은 항체가 원하는 항원의 하나 이상의 항원 결정 부위와 반응하며, 다른 폴리펩티드와는 반응(즉, 결합)하지 않거나, 매우 낮은 친화도(K_d > 10^-6)로 결합하는 것을 의미한다.

기본적 항체 구조 단위는 사합체인 것으로 알려져 있다. 각 사합체는 각 쌍이 하나의 "경쇄"(약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄"(약 50-70 kDa)로 이루어진, 동일한 두 쌍의 폴리펩티드 쇄로 이루어진다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는, 약 100 내지 110개 이상의 아미노산으로 된 가변 영역을 포함한다. 각 쇄의 카복시-말단 부분은 주로 효과기 기능을 담당하는 불변 영역을 규정한다. 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되며, 각각 항체 이소타입 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE를 규정한다. 경쇄 및 중쇄내에서, 가변 영역과 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산으로 된 "J" 영역에 의해 연결되며, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산으로 된 "D" 영역을 포함한다. 일반적인 사항에 관해서, 문헌 [Fundamental Immunology, Ch. 7, Paul, W. et al., 2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989)]을 참조할 수 있다. 각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항원 결합 부위를 형성한다.

본원에서, "모노클로날 항체(MAb: monoclonal antibody)" 또는 "모노클로날 항체 조성물"이라는 용어는 유일한 경쇄 유전자 산물 및 유일한 중쇄 유전자 산물로 구성된 단 하나의 항체 분자 종을 함유하는 항체 분자의 집단을 지칭한다. 특히, 모노클로날 항체의 상보성 결정 영역(CDR)은 그 집단의 모든 분자에서 동일하다. MAb는 그에 대한 유일한 결합 친화도에 의해 특징화되는, 항원의 특정 에피토프에 면역반응할 수 있는 항원 결합 부위를 함유한다.

일반적으로, 인간으로부터 얻어지는 항체 분자는 분자 내에 존재하는 중쇄의 특성에 따라 서로 차이가 나는, IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD 부류중 어느 하나에 관련된 것이다. 특정 부류는 IgG1, IgG2 등과 같은 하위부류를 갖기도 한다. 또한, 인간에 있어서, 경쇄는 카파 쇄 또는 람다 쇄일 수 있다.

본원에서 사용되는 바, "에피토프"라는 용어는 면역글로불린, scFv, 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정 부위를 포함한다. "에피토프"라는 용어는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 결합할 수 있는 임의 단백질 결정 부위를 포함한다. 에피토프 결정 부위는 대개 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 화학적으로 활성인 표면 분자의 군으로 구성되며, 대개 특이한 3차원 구조적 특성 및 특이한 하전 특성을 갖는다. 항체는 해리 상수가 ≤ 1 μM; 바람직하게는, ≤ 100 nM, 및 가장 바람직하게는, ≤ 10 nM일 때, 항원에 특이적으로 결합한다고 한다.

본원에서 사용되는 바, "면역학적 결합" 및 "면역학적 결합 특성"이라는 용어는 면역글로불린 분자와 그것이 특이적인 항원 사이에 일어나는 형태의 비-공유결합 상호작용을 지칭한다. 면역학적 결합 상호작용의 강도 또는 친화도는 상호작용의 해리 상수(K_d)로 표현될 수 있는데, 여기에서, K_d가 작다는 것은 친화도가 크다는 것을 의미한다. 선택된 폴리펩티드의 면역학적 결합 특성은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 정량화된다. 그러한 방법 중의 하나는 항원-결합 부위/항원 결합체의 형성 및 해리 속도를 측정하는 것인데, 이러한 속도는 결합체 파트너의 농도, 상호 작용의 친화도, 및 양방향의 속도에 균등하게 영향을 주는 기하학적 파라미터에 따라 변한다. 따라서, "온(on) 속도 상수(K_on)" 와 "오프(off) 속도 상수(K_off)" 를 농도 및 실제 결합 및 해리 속도를 계산하여 결정할 수 있다(문헌 [Nature 361:186-87 (1993)]을 참조할 수 있다). K_off /K_on 비율은 친화도와 관련되지 않은 모든 파라미터를 소거할 수 있게 하며, 해리 상수 K_d와 같은 것이다(문헌 [Davies et al., (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473)]을 참조할 수 있다). 본 발명의 항체는 방사성 리간드 결합 검정 또는 당업자에 알려진 유사한 검정법으로 측정한 바, 평형 결합 상수(K_d)가 ≤1 μM, 바람직하게는, ≤ 100 nM, 보다 바람직하게는, ≤ 10 nM, 및 가장 바람직하게는, ≤ 100 pM 내지 약 1 pM일 때 CD3 에피토프에 특이적으로 결합한다고 한다.

인간 모노클로날 항체에 의해 본원에서 사용되는 인간 모노클로날 항체(예를 들면, 모노클로날 항체 28F11, 27H5, 23F10 또는 15C3)가 CD3 항원 폴리펩티드에 결합하는 것이 방해받는 것을 확인함으로써, 그 모노클로날 항체가 본 발명의 인간 모노클로날 항체와 동일한 특이성을 갖는지 여부를 과도한 실험없이도 결정할 수 있다는 것을 당업자는 잘 인식하고 있을 것이다. 본원에서 사용되는 인간 모노클로날 항체에 의한 결합의 감소로서 나타나는 바와 같이, 시험되는 인간 모노클로날 항체가 본원에서 사용되는 인간 모노클로날 항체와 경쟁하는 것이라면, 두 모노클로날 항체는 동일하거나 밀접하게 연관된 에피토프에 결합하는 것이다. 어떤 인간 모노클로날 항체가 본원에서 사용되는 인간 모노클로날 항체의 특이성을 가졌는지 여부를 결정하는 또다른 방법은, 본원에서 사용되는 모노클로날 항체를 그것이 통상적으로 반응성인 CD3 항원-폴리펩티드와 함께 사전-인큐베이션한 후, 시험하고자 하는 인간 모노클로날 항체를 가하여, 시험 모노클로날 항체가 그의 CD3 항원 폴리펩티드에 결합하는 능력에 있어서 저해를 받는지 여부를 결정하는 것이다. 시험되는 인간 모노클로날 항체가 저해를 받는다면, 그 모노클로날 항체는 본원에서 사용되는 모노클로날 항체와 동일하거나 기능적으로 등가의 에피토프 특이성을 갖는다.

"서열 일치"라는 용어는 두 개의 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열이 비교 윈도우에 걸쳐 동일(즉, 뉴클레오티드 대 뉴클레오티드 또는 아미노산 대 아미노산 방식으로)하다는 것을 의미하다. "서열 일치율"이라는 용어는 두 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교 윈도우에 걸쳐 비교하고, 두 서열 모두에서 동일한 핵산 염기(예를 들면, A, T, C, G, U 또는 I) 또는 잔기가 나타나 매칭을 이루는 위치의 수를 결정하고, 매칭된 위치의 수를 비교 윈도우내 위치의 총 수(즉, 윈도우 크기)로 나누고, 얻어진 값에 100을 곱하여 서열 일치율을 구함으로써 계산될 수 있다. 본원에서, "실질적으로 일치"라는 용어는 적어도 18개 뉴클레오티드(6개 아미노산) 위치의 비교 윈도우, 빈번하게는 적어도 24 내지 48개 뉴클레오티드(8 내지 16개 아미노산) 위치의 비교 윈도우에 걸쳐 기준 서열과 비교할 때, 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열이 85% 이상의 서열 일치율, 바람직하게는, 90 내지 95%의 서열 일치율, 보다 통상적으로는 99% 이상의 서열 일치율을 갖는 서열을 포함하는 경우의 특성을 이르는 것으로, 서열 일치율은 기준 서열을 비교 윈도우에 걸쳐 그의 20% 미만에 그치는 결실 또는 추가를 포함할 수 있는 서열과 비교하여 계산한다. 기준 서열은 보다 큰 서열의 하위군일 수 있다.

본원에서 사용되는 바, 20가지의 통상의 아미노산과 그의 약어는 종래의 방법에 따른 것이다. 문헌 [Immunology - A Synthesis, 2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991)]을 참조할 수 있다. 통상의 20개 아미노산의 입체이성체(예를 들면, D-아미노산), α-, α-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산과 같은 비천연 아미노산 및 기타 통상적이지 않은 아미노산이 본 발명의 폴리펩티드의 적합한 성분일 수 있다. 통상적이지 않은 아미노산의 예로는 4-하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트, ε-N,N,N-트리메틸리신, ε-N-아세틸리신, 0-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-하이드록시리신, σ-N-메틸아르기닌, 및 기타 유사한 아미노산 및 이미노산(예컨대, 4-하이드록시프롤린)이 있다. 본원에서 사용되는 폴리펩티드 명명법에서, 표준 사용법 및 규칙에 따라 왼쪽 방향은 아미노 말단 방향이고, 오른쪽 방향은 카복시 말단 방향이다.

보존적 아미노산 치환은 유사한 측쇄를 갖는 잔기로 상호교환하는 것을 지칭한다. 예를 들면, 지방족 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신이고; 지방족-하이드록실 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 세린 및 트레오닌이고; 아미드-함유 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 아스파라긴 및 글루타민이고; 방향족 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판이고; 염기성 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 리신, 아르기닌 및 히스티딘이고; 황-함유 측쇄를 갖는 아미노산의 군은 시스테인 및 메티오닌이다. 바람직한 보존적 아미노산 치환군은 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루탐산-아스파르트산, 및 아스파라긴-글루타민이다.

상기 논의된 바와 같이, 항체 또는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열에 있어서의 미소한 변화는, 그러한 아미노산 서열의 변화가 75% 이상, 보다 바람직하게는, 80%, 90%, 95%, 및 가장 바람직하게는, 99% 이상을 그대로 유지하는 것인 한, 본 발명의 범주에 드는 것으로 간주된다. 특히, 보존적 아미노산 치환이 고려된다. 보존적 치환은 아미노산의 측쇄에 있어서 서로 관련된 아미노산 족 내에서 일어나는 것이다. 유전적으로 코딩되는 아미노산은 일반적으로, (1) 아스파르테이트, 글루타메이트로 이루어진 산성 아미노산 패밀리; (2) 리신, 아르기닌, 히스티딘으로 이루어진 염기성 아미노산 패밀리; (3) 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판으로 이루어진 비-극성 아미노산 패밀리; 및 (4) 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신으로 이루어진 하전되지 않은 극성 아미노산 패밀리로 분류된다. 친수성 아미노산은 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르테이트, 글루타민, 글루타메이트, 히스티딘, 리신, 세린 및 트레오닌을 포함한다. 소수성 아미노산은 알라닌, 시스테인, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판, 티로신 및 발린을 포함한다. 기타 아미노산 패밀리로서, (i) 지방족-하이드록시 패밀리로서, 세린 및 트레오닌; (ii) 아미드-함유 패밀리로서, 아스파라긴 및 글루타민; (iii) 지방족 패밀리로서, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; (iv) 방향족 패밀리로서, 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신이 있다.

본원에서, "제제(agent)"라는 용어는 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대 분자, 또는 생물학적 물질로부터의 추출물을 나타낸다.

"환자"라는 용어는 인간 및 수의학적 피험체를 포함한다.

본 발명은 또한 F_v, F_ab, F_ab' 및 F₍ _ab' ₎₂ 항-CD3 단편, 단일쇄 항-CD3 항체, 이중특이적 항-CD3 항체 및 이종접합체 항-CD3 항체, 삼중특이적 항체, 면역접합체 및 그의 단편을 포함한다.

이중특이적 항체는 적어도 두 개의 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 항체이다. 본 발명의 경우에, 결합 특이성 중의 하나는 CD3에 대한 것이다. 제2의 결합 표적은 다른 어떠한 항원이라도 무방하나, 유리하게는 세포-표면 단백질 또는 수용체 또는 수용체 서브유니트이다.

치료제 투여 및 조제물

본 발명에 따른 치료제 실체의 투여는 적합한 담체, 부형제, 및 개선된 전도, 전달, 허용성 등을 제공하기 위하여 조제물에 혼입되는 기타 제제 등과 함께 투여될 것이다. 적절한 여러 형태의 조제물이 모든 약학 화학자에게 알려진 제형화 기술에 알려져 있다(문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), Chapter 87 by Blaug, Seymour]를 참조할 수 있다). 이러한 조제물에는, 예를 들면, 분제, 페이스트, 연고제, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소포체(예컨대, 리포펙틴™)를 함유하는 지질(양이온성 또는 음이온성), DNA 접합체, 무수 흡수성 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀션, 에멀션 카보왁스(각종 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 젤, 및 카보왁스를 함유하는 반-고체 혼합물이 포함된다. 조제물 중의 활성 성분이 조제물에 의해 불활성화되지 않고, 조제물이 투여 경로에 대하여 생리학적으로 상용성이고 허용가능하다면, 상기 혼합물 중 어느 것이나 본 발명에 따른 치료법 및 요법에 적합할 수 있다. 약학 화학자들에게 알려진 조제물, 부형제 및 담체 등에 관련된 추가의 정보를 위해 문헌 [Baldrick P., "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance." Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000)]; [Wang W., "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int. J. Pharm. 203(1- 2): 1-60 (2000)]; [Charman W. N. "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts." J Pharm Sci.89(8) :967-78 (2000)]; [Powell et al., "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)]과 여기에 인용된 문헌들을 참조할 수 있다.

조제물은 바람직하게, 실질적으로 순수하다. 본원에서, "실질적으로 순수한"이라는 것은 목적하는 종이 우세하게 존재하는 종이고(즉, 몰 기준으로 조성물중 다른 개별 종보다 풍부하고), 바람직하게, 실질적으로 순수한 분획이란 존재하는 모든 거대 분자 종중에서 목적하는 종이 (몰 기준으로) 약 50% 이상을 차지하는 조성물을 이른다.

일반적으로, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물내 존재하는 모든 거대 분자 종의 약 80%를 초과하는 양, 보다 바람직하게는, 약 85%, 90%, 95% 및 99%를 초과하는 양으로 포함할 것이다. 가장 바람직하게는, 목적하는 종은 조성물이 본질적으로 단일의 거대 분자종 만으로 이루어진, 본질적으로 균질한 상태(통상의 검출 방법으로는 조성물 중에 오염물 종을 검출해낼 수 없는 상태)로 정제된 것이다.

본원에서 사용되는 항-CD3 항체를 포함하는, 본원에서 제공되는 치료제는 면역-관련 질환, 예를 들면, 자가면역 질환 또는 염증성 질환과 관련된 증상을 치료하거나 경감시키기 위하여 사용된다.

자가면역 질환은, 예를 들면, 후천성 면역 결핍증(AIDS: Acquired Immunodeficiency Syndrome, 자가면역 성질을 갖는 바이러스성 질환), 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항-인지질 증후군, 자가면역 애디슨병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역내이 질병(AIED: autoimmune inner ear disease), 자가면역 림프구증식증(ALPS: autoimmune lymphoproliferative syndrome), 자가면역 혈소판감소성 자반병(ATP: autoimmune thrombocytopenic purpura), 베체트병, 심근증, 비열대성 스프루우-포진상 피부염, 만성 피로 면역 이상 증상(CFIDS: chronic fatigue immune dysfunction syndrome), 만성 염증성 탈수초성 다발신경증(CIPD: chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy), 반흔성 천포창, 한랭 응집소 질환, 크레스트 증후군, 크론병, 데고스병, 유년성 피부근염, 원판상 루프스, 원발성 혼합 한냉-글로블린증, 섬유근통-섬유근염, 그레이브스병, 길랑-바레증후군, 하시모토 갑상선염, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판감소성 자반병(ITP: idiopathic thrombocytopenia purpura), IgA 신장병증, 인슐린 의존성 당뇨병(I형 당뇨병), 유년성 만성 관절염(스틸병), 유년성 류마티스성 관절염, 메니에르병, 혼합 결합조직 병증, 다발성 경화증, 중증성 근무력증, 악성 빈혈, 결절성 다발동맥염, 다발연골염, 다분비선 증상, 류마티스성 다발성 근통, 다발근염 및 피부근염, 일차 무감마글로불린혈증, 일차 담낭 경변, 건선, 건선 관절염, 레이노드 현상, 라이터 증후군, 류마티스 열, 류마티스 관절염, 유육종증, 공피증(진행성 전신성 경화증(PSS: progressive systemic sclerosis), 전신성 경화증(SS: systemic sclerosis)으로도 알려짐), 쇼그렌 증후군, 근육강직 증후군, 전신성 홍반성 루프스, 타카야수 동맥염, 일시적 동맥염/거대 세포 동맥염, 궤양성 대장염, 포도막염, 백반증 및 베그너 육아종증을 포함한다.

염증성 질환은, 예를 들면, 만성 및 급성 염증 질환을 포함한다. 염증성 질환의 예로는 알츠하이머 병, 천식, 아토피 알러지, 알러지, 죽상동맥경화증, 기관지 천식, 습진, 사구체신염, 이식편 대 숙주 질환, 용혈성 빈혈, 골관절염, 패혈증, 뇌졸중, 조직 및 장기의 이식, 맥관염, 당뇨성 망막증 및 호흡기 유도 폐 손상을 포함한다.

항-CD3 항체 조제물은 면역-관련 질환, 예로서, 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 앓는 피험체에게 투여된다. 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 앓는 피험체는 당업계에 공지된 방법으로 확인된다. 예를 들면, 자가면역 질환, 예로서, 크론병, 궤양성 대장염 또는 염증성 장 질환을 앓는 피험체는 신체 검사, 방사선 검사, 및 면역 상태를 평가하는 혈액, 뇨 및 변 분석과 같은 다양한 임상적 및/또는 실험실 시험들중 임의의 것을 사용하여 확인된다. 예를 들면, 다발경화증을 앓는 환자는, 예컨대, 시간과 공간을 두고(즉, 3개월 이상의 간격을 두고 다른 부위에서 발생한다) 산재하는 중추 신경계(CNS: central nervous system) 병변의 존재를 영상화하는 자기 공명을 사용함으로써 확인된다. 류마티스 관절염을 앓는 환자는 예컨대, 혈액 시험 및/또는 x-선 또는 다른 영상 평가를 사용하여 확인된다. I형 당뇨병을 앓는 환자는 하기의 시험: (1) 당뇨 증상과 함께, 공복시 혈장 포도당이 126 mg/dl 이상인 경우; (2) 당뇨 증상과 함께, 수시(하루중 언제든지 검사시에) 혈장 포도당이 200 mg/dl 이상인 경우; 또는 (3) 2시간의 간격을 두고 측정하였을 때, 경구 포도당 부하 검사(OGTT: oral glucose tolerance test) 값이 200 mg/dl 이상인 경우(OGTT는 3-시간에 걸쳐 진행된다)중 임의의 3개에서 양성일 때, 다른 날의 2차 시험에서 양성인 것으로 확인된다.

임의의 각종 실험실 또는 임상적 결과가 달성된다면, 면역-관련 질환, 예로서, 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 앓는 환자에게 항-CD3 항체 조제물을 투여하는 것은 성공적인 것으로 간주된다. 예를 들면, 질환과 관련된 하나 이상의 증상이 경감되거나, 감소하거나, 저해되거나, 추가로 진행되지 못하거나, 즉, 상태를 악화시키지 못한다면, 면역-관련 질환, 예로서, 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 앓는 환자에게 항-CD3 항체 조제물을 투여하는 것은 성공적인 것으로 간주된다. 질환, 예컨대, 자가면역 질환이 완화되기 시작하거나, 추가로 진행되지 못하거나, 즉, 상태를 악화시키지 못한다면, 면역-관련 질환, 예로서, 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 앓는 환자에게 항-CD3 항체 조제물을 투여하는 것은 성공적인 것으로 간주된다.

본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 염증성 장질환(IBD: inflammatory bowel disorder)의 치료, 진단 및/또는 예방에 사용된다. IBD는 위장(GI: gastrointestinal)관내 조직의 만성 염증 및 자극이다. IBD는 증상, 예로서, 복부경련 및 복통, 설사, 직장 출혈, 열 및 백혈구 계산치 증가와 관련된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 IBD를 앓고 있거나, 그러한 질환으로 진단을 받았거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 피험체에게 투여된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 피험체에서 1종 이상의 IBD 증상을 경감시키거나, IBD를 치료하거나, IBD를 예방하고/하거나, IBD가 추가의 질환 상태로 진행되지 못하도록 하는데 충분한 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

또다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 궤양성 대장염의 치료, 진단 및/또는 예방에 사용된다. 궤양성 대장염은 결장의 만성 염증 및 자극이다. 궤양성 대장염은 증상, 예로서, 빈혈; 피로감; 체중 감소; 식욕 부진; 직장 출혈; 체액 및 영양소 손실; 피부 병변; 관절통; 및 성장 부전(특히, 소아의 경우)과 관련된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 궤양성 대장염을 앓고 있거나, 그러한 질환으로 진단을 받았거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 피험체에게 투여된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 피험체에서 1종 이상의 궤양성 대장염 증상을 경감시키거나, 궤양성 대장염을 치료하거나, 궤양성 대장염을 예방하고/거나, 궤양성 대장염이 추가의 질환 상태로 진행되지 못하도록 하는데 충분한 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위 내의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 범위 내의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 범위 내의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

또다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 크론병의 치료, 진단 및/또는 예방에 사용된다. 크론병은 장의 만성 염증 및 자극이다. 크론병은 증상, 예로서, 복통, 설사, 체중 감소, 식욕 감퇴, 열, 도한, 직장통, 및 직장 출혈과 관련된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 크론병을 앓고 있거나, 그러한 질환으로 진단을 받았거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 피험체에게 투여된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 피험체에서 1종 이상의 크론병 증상을 경감시키거나, 크론병을 치료하거나, 크론병을 예방하고/거나, 크론병이 추가의 질환 상태로 진행되지 못하도록 하는데 충분한 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

또다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 다발경화증(MS: multiple sclerosis)의 치료, 진단 및/또는 예방에 사용된다. MS는 중추 신경계(CNS)를 침범하는 만성, 염증성 질환이다. MS의 증상으로는, 예를 들면, 감각 변화, 시각 장애, 근무력, 우울증, 협응 및 언어 장애, 및 동통을 포함한다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 MS를 앓고 있거나, 그러한 질환으로 진단을 받았거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 피험체에게 투여된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 피험체에서 1종 이상의 MS 증상을 경감시키거나, MS를 치료하거나, MS를 예방하고/거나, MS가 추가의 질환 상태로 진행되지 못하도록 하는데 충분한 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

또다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 인슐린 의존성 당뇨병(I형 당뇨병)의 치료, 진단 및/또는 예방에 사용된다. I형 당뇨병은 인슐린 호르몬의 부적합한 분비로 인하여 유발되는 지속성 고혈당증(고혈당 수준)을 특징으로 하는 질환이다. I형 당뇨병은 췌장 랑게르한스섬의 인슐린-생산 베타 세포의 손실을 특징으로 한다. I형 당뇨병은, 인체 자가 면역계가 췌장 랑게르한스섬내 베타 세포를 공격하여 그를 파괴시키거나, 인슐린 생산을 감소 또는 소거하는데 충분할 정도로 손상시키는 자가면역 질환이다. I형 당뇨병의 증상으로는 예를 들면, 갈증 증가, 배뇨 증가, 식욕 증가에 반한 체중 감소, 구역, 고토, 복통, 및 피로감을 포함한다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 I형 당뇨병을 앓고 있거나, 그러한 질환으로 진단을 받았거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 피험체에게 투여된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 피험체에서 1종 이상의 I형 당뇨병 증상을 경감시키거나, I형 당뇨병을 치료하거나, I형 당뇨병을 예방하고/거나, MS가 추가의 질환 상태로 진행되지 못하도록 하는데 충분한 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

또다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 류마티스 관절염(RA: rheumatoid arthritis)의 치료, 진단 및/또는 예방에 사용된다. 류마티스 관절염은 관절의 만성 염증을 유발하는 자가면역 질환이다. 류마티스 관절염은 또한 관절 뿐만 아니라, 체내 다른 기관 주변 조직의 염증을 유발할 수 있다. 류마티스 관절염은 증상, 예로서, 피로감, 식욕 부진, 미열, 근육 및 관절 통증, 및 경직과 관련된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 RA를 앓고 있거나, 그러한 질환으로 진단을 받았거나, 그러한 질환으로 발전될 수 있는 소인을 갖는 피험체에게 투여된다. 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 피험체에서 1종 이상의 RA 증상을 경감시키거나, RA를 치료하거나, RA를 예방하고/거나, 크론병이 추가의 질환 상태로 진행되지 못하도록 하는데 충분한 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

본 발명은 또한 면역-관련 질환과 관련된 증상, 또는 기관 이식 후의 거부와 관련된 증상을 치료하거나 경감시키는 방법을 제공한다. 예를 들면, 본원에서 사용되는 조제물은 본원에서 제공되는 자가면역 질환 및 염증성 질환중 임의의 것의 증상을 치료하거나 경감시키는데 사용된다.

본원에서 사용되는 치료적 조제물은 또한 기관 또는 조직 이식에서 면역억제제로서 사용된다. 본원에서, "면역억제제"는 그가 면역계에 미치는 작용을 통해, 면역 반응이 자연적으로 발생되었든지 또는 인위적으로 유발되었든지, 면역 반응이 선천 면역계, 후천 면역계, 또는 2개 모두의 일부로서 발생하였든지 간에, 면역 반응에 관여하는 1종 이상의 경로의 활성을 즉시 또는 지연적으로 저하시키는 제제를 지칭한다. 이러한 면역억제 항-CD3 항체 조제물은 기관 또는 조직 이식 이전, 이식시 및/또는 그 이후에 투여된다. 예를 들면, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 조제물은 기관 또는 조직 이식 이후의 거부를 치료하거나 예방하기 위하여 사용된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 범위의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

바람직하게, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체의 치료 조제물은 피험체에게 정맥 또는 피하로 투여된다. 다른 투여 경로도 고려된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 피하, 경구, 비경구, 비내, 근육내, 또는 이들 투여 경로의 임의의 조합으로 투여된다.

하나의 실시태양에서, 본원에서 사용되는 항-CD3 항체 조제물은 예를 들면, GLP-1 또는 베타 세포 휴지 화합물(즉, 칼륨 채널 개방제와 같이 인슐린 방출을 감소시키거나 다른 식으로 억제하는 화합물)과 같은 제2의 약제와 함께 투여된다. 적합한 GLP-1 화합물의 예는 공개된 미국 출원 제20040037826호에, 적합한 베타 세포 휴지 화합물은 공개된 미국 출원 제20030235583호(이들의 내용 전체가 본원에서 인용된다)에 기재되어 있다.

또다른 실시 태양에서, 면역-관련 질환을 치료하는데 사용되는 항-CD3 항체 조제물은 공지된 각종 소염제 및/또는 면역억제 화합물과 병행하여 투여된다. 적합한 공지의 화합물은 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A(사이클로스포린 마이크로에멀션 포함), 타크로리무스, 코르티코스테로이드, 스타틴, 인터페론 베타, 레미케이드(인플릭시맙), 엔브렐(에타너셉트) 및 휴미라(아달리무맙)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다

예를 들면, 류마티스성 관절염의 치료시에, 항-CD3 항체 조제물을 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A, 스타틴, 레미케이드(인플릭시맙), 엔브렐(에타너셉트) 및/또는 휴미라(아달리무맙)와 함께 투여할 수 있다.

포도막염의 치료시에, 항-CD3 항체 조성물을, 예를 들면, 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A, 사이클로포스파미드 및/또는 스타틴과 함께 투여할 수 있다. 마찬가지로, 크론병 또는 건선을 앓고 있는 환자는 본원에서 사용되는 항-CD3 항체 조성물 및 레미케이드(인플릭시맙) 및/또는 휴미라(아달리무맙)의 배합물로 치료할 수 있다.

다발성 경화증이 있는 환자는 본원에서 사용되는 항-CD3 항체 조성물을, 예를 들면, 글라티라머 아세테이트(코팍손), 인터페론 베타-1a(아보넥스), 인터페론 베타-1a(레비프), 인터페론 베타-1b(베타세론 또는 베타페론), 미톡산트론(노반트론), 덱사메타손(데카드론), 메틸프레드니솔론(데포-메드롤), 및/또는 프레드니손(델타손) 및/또는 스타틴과 함께 투여받을 수 있다.

하나의 실시태양에서, 본원에서 사용되는 면역 억제 항-CD3 항체 조제물은 상기한 바와 같이, GLP-1 또는 베타 세포 휴지 화합물과 같은 제2의 약제와 함께 투여된다.

또다른 실시태양에서, 이들 면역 억제 항체 조제물은 공지의 각종 소염제 및/또는 면역 억제 화합물과 함께 투여된다. 본원에서 사용되는 항-CD3 항체와 함께 사용하기에 적합한 소염 및/또는 면역 억제 화합물은 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A(사이클로스포린 마이크로에멀션 포함), 타크로리무스, 코르티코스테로이드 및 스타틴을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다

본원에서 사용되는 또다른 실시태양에서, 항-CD3 항체 조성물은 인간 개체 내에서 자가-반응성 항체의 존재가 검출될 때 그 인간 개체에게 투여된다. 그러한 자가-반응성 항체는 그 인간 개체에서 내생적으로 발현되는 하나 이상의 단백질에 대한 결합 친화도를 갖는 항체로서 당업계에 공지되어 있다. 본원에서 사용되는 하나의 측면에서, 당업계에 잘 알려진 바와 같은 하나 이상의 자가 면역 질환에 특이적으로 관여하는 자가 반응성 항체의 존재에 대해 환자를 시험한다. 구체적인 실시태양에서, 인간 환자를 인슐린, 글루탐산 데카르복실라제 및/또는 IA-2 단백질에 대한 항체의 존재에 대해서 시험하고, 하나 이상의 그러한 자가-반응성 항체에 대해서 양성 검출 반응이 나오면 항-CD3 항체를 투여한다.

본원에서 사용되는 또다른 실시태양에서, 항-CD3 항체 조성물은 인간 조직으로의 면역세포의 충원을 방지, 감소 또는 저하시키기 위해 인간 피험체에게 투여된다. 본원에서 사용되는 항-CD3 항체는 인간 질병의 조직 부위 내로 비정상적이거나 조절되지 않은 면역 세포의 충원과 관련된 증상을 예방 또는 치료하기 위하여, 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다.

본원에서 사용되는 또다른 실시태양에서, 항-CD3 항체 조성물은 인간 조직 내로의 면역 세포의 과다 방출을 방지, 감소 또는 저하시키기 위해 인간 피험체에게 투여된다. 따라서, 본원에서 사용되는 항-CD3 항체는 인간 질병의 조직 부위 내로 비정상적이거나 조절되지 않은 면역 세포의 과다 방출과 관련된 증상을 예방 또는 치료하기 위하여, 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다.

본원에서 사용되는 또다른 실시태양에서, 항-CD3 항체 조성물은 인체 내의 사이토카인 방출에 의해 매개되는 효과를 방지, 감소 또는 저하시키기 위해 인간 피험체에게 투여된다. "사이토카인"이라는 용어는 당업계에 공지된 것으로 세포 표면상의 세포외 수용체에 결합함으로써 세포 기능을 조절하는 모든 인간 사이토카인을 지칭하며, IL-2, IFN-g, TNF-a, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 및 IL-13을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본원에서 사용되는 또다른 실시태양에서, 항-CD3 항체 조성물은 인체 내의 사이토카인 수용체의 방출에 의해 매개되는 효과를 방지, 감소 또는 저하시키기 위해 인간 피험체에게 투여된다. "사이토카인 수용체"라는 용어는 당업계에 공지된 것으로 본원에서 정의된 바와 같이, 하나 이상의 사이토카인(들)에 결합하는 모든 인간 사이토카인 수용체를 지칭하며, 상기 언급한 사이토카인의 수용체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 따라서, 본원에서 사용되는 항-CD3 항체는 인체내 하나 이상의 사이토카인 수용체(들)의 비정상적인 활성화, 결합 또는 결찰을 통해 매개되는 증상을 치료 및/또는 예방하기 위하여 투여된다. 추가로, 항-CD3 항체를 생체내 투여하는 것이 상기 인간 피험체내 사이토카인 수용체(들)에 의해 매개되는 세포내 신호화를 격감시킬 것이라는 것에도 주시하고 있다.

본원에서 사용되는 하나의 측면에서, 항-CD3 항체 조성물은 인간 피험체에 췌장 베타 세포 기능이 저하될 때 투여한다. 하나의 실시태양에서, 개체를 베타-세포 기능, 인슐린 분비, 또는 c-펩티드 수준에 대하여 당업계에 알려진 바와 같이 시험한다. 이어서, 상기한 표시자 중의 하나가 충분히 감소한 것으로 나타났을 때, 베타-세포 기능의 자가면역 파괴가 더욱 진행하는 것을 막기 위하여 충분한 양의 항-CD3 항체를 투여한다.

진단 및 예방용 조제물

본원에서 제공되는 항-CD3 MAb 조제물(본원에서 항체 조성물로서도 지칭함)을 진단 및 예방용 조제물로 사용한다. 하나의 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-CD3 MAb 조제물을 상기한 자가 면역 질환 중의 하나로 발전할 위험이 있는 환자에 투여한다. 환자가 하나 이상의 상기 자가 면역 질환을 나타내게 될 소인은 유전자형, 혈청학적 또는 생화학 마커를 사용하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 특정 HLA 하위 유형 및 혈청 자가 항체(인슐린, GAD65 및 IA-2에 대한)의 존재는 I형 당뇨병을 나타낸다.

본원에서 제공되는 또다른 실시태양에서, 하나 이상의 상기한 자가면역 질환으로 진단받은 인간 개체에게 항-CD3 항체를 투여한다. 진단시, 자가 면역의 효과를 완화시키거나 역전시키기 위하여 항-CD3 항체를 투여한다. 그러한 일례로, I형 당뇨병으로 진단받은 인간 개체에게 충분한 양의 항-CD3 항체를 투여하여 췌장 기능을 회복시키고, 췌장 내로의 자가면역 세포 침윤의 손상을 최소화한다. 또다른 실시태양에서, 류마티스성 관절염으로 진단받은 인간 개체에게 항-CD3 항체를 투여하여 관절 내로의 면역세포의 침윤과 파괴를 감소시킨다.

바람직하게, 본원에서 제공되는 항-CD3 항체 치료제, 진단제, 및/또는 예방제는 피험체에게 정맥 또는 피하로 투여된다. 다른 투여 경로도 고려된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 피하, 경구, 비경구, 비내, 근육내, 또는 이들 투여 경로의 임의의 조합으로 투여된다.

본원에 인용된 모든 간행물 및 특허 문헌은, 각 간행물이나 문헌에 대하여 그 내용이 본원에 참고로 인용된 것으로 구체적으로 또한 개별적으로 언급된 경우와 마찬가지로, 그 내용이 본원에 참고로 인용된다. 간행물과 특허 문헌을 인용한 것이 그들 중 어느 것이라도 선행 기술에 속한다는 것을 시인하는 것은 아닐 뿐더러, 그 내용 및 일자와 관련하여서도 아무 것도 시인하는 것이 아니다. 본 발명을 명세서를 통해 서면의 형식으로 기재하였지만, 본 발명이 각종 실시태양으로 실시될 수 있다는 점과, 상기 상세한 설명 및 하기 실시예는 단지 본 발명을 설명하기 위해 제시되었을 뿐 첨부된 청구 범위를 한정하려는 목적으로 제시된 것이 아님을 당업자는 잘 인식하고 있을 것이다.

수행된 실험 과정 및 수득된 결과를 포함하는 하기 실시예는 단지 본 발명을 예시할 목적으로 제공되는 것이므로, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1: 조제물 개발 및 분석

본원에서 제공되는 조제물 연구에서는 지정된 온도에서 20개의 조제물 중 항-CD3 항체의 안정성을 3개월간의 기간에 걸쳐 모니터하였다. 연구된 조제물은 pH 범위가 pH 4.0 내지 8.0인 아세트산염, 시트르산염, 및 인산염 완충제를 포함하고, 선택된 부형제, 트윈 80, 만닛톨, EDTA, 염화나트륨 및 수크로스를 포함하였다. 본 연구에서 연구된 조제물을 하기 표에 나타낸다.

표 1: 연구된 조제물

조제물 코드	조성	pH
F1	25 mM 아세트산나트륨/125 mM 염화나트륨	4.0
F2	25 mM 아세트산나트륨/125 mM 염화나트륨	5.5
F3	25 mM 아세트산나트륨/125 mM 염화나트륨/0.02% 트윈 80	5.5
F4	10 mM 아세트산나트륨/140 mM 염화나트륨	5.5
F5	10 mM 아세트산나트륨/100 mM 염화나트륨/2% 만닛톨	5.5
F6	25 mM 시트르산나트륨/125 mM 염화나트륨	5.5
F7	25 mM 시트르나트륨/125 mM 염화나트륨	6.0
F8	25 mM 시트르나트륨/125 mM 염화나트륨	6.5
F9	25 mM 시트르산나트륨/125 mM 염화나트륨/0.02% 트윈 80	6.0
F10	10 mM 시트르산나트륨/140 mM 염화나트륨	6.0
F11	10 mM 시트르산나트륨/100 mM 염화나트륨/2% 만닛톨	6.0
F12	25 mM 시트르나트륨/200 mM 수크로스	6.0
F13	50 mM 인산나트륨/100 mM 염화나트륨	6.0
F14	50 mM 인산나트륨/100 mM 염화나트륨	7.0
F15	50 mM 인산나트륨/100 mM 염화나트륨	8.0
F16	50 mM 인산나트륨/100 mM 염화나트륨/0.02% 트윈 80	7.0
F17	50 mM 인산나트륨/100 mM 염화나트륨/0.01% EDTA	7.0
F18	10 mM 인산나트륨/150 mM 염화나트륨	7.0
F19	10 mM 인산나트륨/100 mM 염화나트륨/2% 만닛톨	7.0
F20	25 mM 인산나트륨/200 mM 수크로스	7.0

산물의 물리화학적으로 상이한 성질을 모니터하기 위하여 안정성을 나타내는 여러 방법을 사용하였다. 이들 방법은 산물 무결성의 배치식 방출 시험을 위해 사용되는 것으로부터 선택되고, pH, 단백질 농도, 시각적 외형, 겔 침투 크로마토그래피(GP HPLC), SDS PAGE(환원 및 비환원) 및 등전성 포커싱을 포함한다. 산물의 안정성은 5 ± 3℃의 계획된 저장 온도와 25 ± 3℃ 및 40 ± 3℃의 승온된 저장 온도하의 각 조제물에서 평가하였다. 실시간 데이타로부터 결정되는 조제물 선택을 지지하기 위해 사용되는 것으로서, 각 조제물의 가속 안정성 데이타를 제공하기 위해 승온 온도가 사용된다. 추가로, 냉동-해동이 분자의 안정성에 미치는 효과를 조사하기 위하여 샘플을 -20 ± 5℃에 저장하였다.

조제물이, 응집하는 산물의 성향에 미치는 효과를 추가로 조사하기 위하여 주변 온도에서 48시간 동안 교반하여 샘플에 응력을 가하였다.

본 연구에서 각 검정법으로부터 얻은 결과는 계획된 저장 온도 또는 승온 온도하에서 어떤 현저한 변화도 발생하지 않았거나, 연구 출발점과 비교할 때 변화는 아주 작은 후보 조제물을 나타내었다. 종합적으로, 본 연구 결과에서는 pH 5.5의 아세테이트 조제물 F2, F3, F4 및 F5가 항-CD3 항체에 대하여 가장 적절한 후보 조제물이라는 것을 제안하였다. 이어서, 25 mM 아세트산나트륨/125 mM 염화나트륨/0.02% 트윈80(pH 5.5)을 항-CD3 항체를 위한 최종의 조제물 완충제로서 선택하였다. 본원에서 제공되는 조제물의 pH 범위는 3.0 내지 7.0이다. 바람직하게, 조제물의 pH 범위는 5.0 내지 6.0이고, 더욱 바람직하게, 조제물의 pH 범위는 5.2 내지 5.8이고, 가장 바람직하게, 조제물의 pH 범위는 5.4 내지 5.6이다. 예를 들면, 하나의 실시태양에서, 조제물의 pH는 5.5이다.

실시예 2: 항- CD3 항체 조제물 투약법

본원에서 사용되는 투여량 선택 과정을 사용하여 규모가 좀더 큰 연구에서 시험하고자 하는 항-CD3 항체 조제물에 대한 적정 약물 농도(therapeutic window)를 포함하는 투여량을 확인하였다. 동시에, 시험하고자 하는 초기 투여량은 환자에게 무해한 것으로 선택하였다.

본원에 기술된 몇몇 항-CD3 모노클로날 항체, 예컨대, 28F11, 15C3, 27H5 및 23F10은 "표준" 실험실용 종류의 CD3과는 교차-반응하지 않기 때문에, 독물성 및 임상전 약리성에서 독물성 및 효능 데이타는 얻을 수 없다. 구체적으로, GLP 연구를 통해 마우스, 래트, 래빗, 붉은털 원숭이, 사이노몰거스 원숭이, 및 개코 원숭이 CD3은 본원에 기술된 항-CD3 모노클로날 항체중 일부와는 교차-반응하지 않는다 는 것이 입증되었다. 따라서, 현재 개발중이거나 시판되고 있는 항-CD3 항체에 대하여 공개된 하기의 정보(예컨대, 문헌 [Orthoclone marketed sheet; Woodle Transplantation 1999]; [Friend Transplantation 1999]; [Herald NEJM 2002]; [Keymeulen NEJM 2005)]를 참조할 수 있다):

·T 세포 표면으로부터 CD3 분자를 80% 이상 조정하고, 평균 혈청 수준이 >800 ng/mL가 되도록 하는데, 오르쏘클론 OKT3, hOKT3γ1(Ala-Ala) 및 ChAglyCD3에 대하여 임상적으로 사용된 투여량은 1회 주사당 5 내지 25 mg 사이의 투여량에서 효과가 있었고;

· 오르쏘클론 OKT3, hOKT3γ1(Ala-Ala) 및 ChAglyCD3의 치료 기간 범위는 각각 10-14일, 7-14일 및 연속 6일이고;

· 비-교차-반응성 항-CD3 항체의 IC50이 오르쏘클론에 대한 것보다 2-3배 높다라는 것이 인간 T-세포상의 CD3 및 TCR 수용체의 조정을 평가하는 시험관내 연구를 통해 일관되게 입증되었고;

· 인간 말초 혈액 백혈구와 인큐베이션시킨 후, 오르쏘클론과 비교하였을 때, 비-교차-반응성 항-CD3 항체는 최소량의 TNFα, IFNγ, IL-6 또는 IL-2를 유도하거나, 그를 전혀 유도하지 않는다라는 것이 예로서, CRS(사이토카인 방출 증후: cytokine release syndrome)와 같은 안전성에 관한 문제를 평가하는 시험관내 연구를 통해 일관되게 입증되었다. 시험관내 검정법의 파라미터는 환자의 말초 혈액중 백혈구의 임상적인 노출을 모사한다. 비-교차-반응성 항-CD3 항체에 의한 사이토카인의 유도는 오르쏘클론에 대한 것보다 몇 차수(several orders of magnitude) 더 낮다라는 것을 사용하여 표준 실험실용 종류의 CD3과는 교차-반응하지 않는 항-CD3 항체(즉, "비-교차-반응성 CD3 항체")를 다른 현재 시판되는 항-CD3 항체와 비교함으로써 인간 T-세포에 대하여 시험관 내에서 얻은 데이타에 의해 투여량 선택 과정을 제시하였다.

그러므로, 적정 약물 농도에 관한 면역학적 및 예비 치료학적 효능을 평가하기 위하여 환자는 비-교차-반응성 항-CD3 항체를 5일간 매일 연속하여 투여받을 것이다. 환자에서 연이은 5일간의 투여 방침은 0.5 mg/일 내지 5.0 mg/일 사이가 될 것이며, 이는 오르쏘클론의 유효량보다 현저히 적으나, 설사 있다 해도 최소의 CRS를 유도할 것이다. 바람직하게, 연이은 5일간의 투여 방침은 0.7 mg/일 내지 2 mg/일 사이이다. 예를 들면, 연이은 5일간의 투여 방침은 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 또는 2.0 mg/일이다.

시험관내 데이타에 기초한 바, 본원에서 제공되는 투여 방침은 심각한 CRS를 현저히 감소시킨다.

실시예 3: 항- CD3 항체 조제물의 제조 및 정제

항-CD3 항체를 제조하는 전 공정 단계를 나타내는 흐름도를 하기에 제공한다. 공정 단계 및 공정의 각 단계에서 적용된 공정중 관리를 표 2-4에 표 형식으로 제시한다.

표 2: 세포 배양 및 수거

단계 번호	공정 단계	조건	공정중 관리
1	접종물 제조: ·플라스크 및 롤러 병	성장 배지 CM41	전체 및 생육성 세포수 및 생육율(%) 미생물 오염이 없는지에 관한 시각적 검사 온도 롤러/진탕기 요동기(rocker) 속도
	접종물 제조: ·셀백(Cellbags) (25ℓ)	성장 배지 CM41	전체 및 생육성 세포수 및 생육율(%) 미생물 성장 없음 온도 기류 요동 각도 요동율 세대수
2	발효: ·생산 발효조	성장 배지 CM42	매일: 전체 및 생육성 세포수 및 생육율(%) 미생물 성장 없음 온도 pH 용존 산소량 질소 가스 유량 질소 기압 이산화탄소 가스 유량 이산화탄소 기압 대기 유량 대기압 공급물 유량
2	공정처리되지 않은 벌크 ·생산 발효조		수거당일: 세균수(bioburden) 마이코플라스마 ·훽스트(Hoechst) 균주 ·배양물 바이러스 ·시험관내 바이러스 (MRC-5, VERO, CHO-K1) ·Q-PCR에 의한 마우스의 마이뉴트 바이러스(minute virus of mouse) 벌크 수거물 1 ml당 레트로바이러스 양 입자의 수(전자 현미경 검사)
3	수거/정화	여과에 의해 세포 및 세포 파편 제거
4	수거 후의 0.2 ㎛ 여과	정화된 상등액을 멸균된 용기내로 여과 5 ± 3℃에서 저장 최대 보유 시간 14일	세균수(여과전 및 여과후) 내독소(여과수) 단백질 A 역가(HPLC) 최종 필터의 무결성 시험

표 3: 정제 및 변형 반응

단계 번호	공정 단계	조건	공정중 관리
5	mab 선별 크로마토그래피에 의한 정제	온도 ≥ 12℃ 50 mM Na₃PO₄/250 mM NaCl, pH 7.0 완충제 및 50 mM Na₃PO₄/1.0 M NaCl, pH 7.0 완충제로 세척 10 mM 포름산나트륨, pH 3.5 완충제로 용출 최대 적재량 21 g/ℓ	pH 전도도 온도 단백질 농도 (단백질 A HPLC) 세균수 단백질 농도(A₂₈₀)
6	pH 처리	2.0 M 아세트산을 사용하여 3.7 ± 0.10으로 조정한 후, 트리스 염기를 사용하여 7.20 ± 0.20으로 재조정	단백질 농도(A₂₈₀) pH 세균수 SDS PAGE¹
7	농축 및 투석여과	대략 10.0 ± 1.0 g/ℓ로 농축시킨 후, 10 mM Na₃PO₄, pH 7.0 완충제로 투석여과	단백질 농도(A₂₈₀) pH 전도도 세균수
8	Q 세라믹 하이퍼 D F 크로마토그래피	온도 ≥ 12℃ 0.1 M 인산나트륨, pH 7.0으로 사전-평형화 10 mM Na₃PO₄, pH 7.0 완충제로 세척/용출 용출 후 10 mM Na₃PO₄/2.0 M NaCl, pH 7.0 완충제로 세척 최대 적재량 21 g/ℓ	pH 전도도 온도 단백질 농도(A₂₈₀) 세균수 SDS PAGE¹
9	수산화인회석 크로마토그래피	온도 ≥ 12℃ 0.1 M 인산나트륨, pH 6.5로 사전-평형화 15 mM Na₃PO₄, pH 6.5 완충제로 세척 15 mM Na₃PO₄/375 mM NaCl, pH 6.5 완충제 로 용출 최대 적재량 21 g/ℓ 용출후 0.5 M 인산나트륨, pH 6.5 완충제로 세척	pH 전도도 온도 단백질 농도(A₂₈₀) 세균수 SDS PAGE¹
10	플라노바(Planova) 20 N 바이러스 감소 여과	20 nm 카트리지 필터 19 ± 4℃, ≤0.98 bar 15 mM 인산나트륨/375 mM NaCl, pH 6.5 완충제로 세정	단백질 농도(A₂₈₀) 온도 입구 압력 사용 후 필터의 무결성 시험
11	농축 및 투석여과	농축, 이어서 25 mM 아세트산나트륨/125 mM NaCl, pH 5.5 완충제로 투석여과	단백질 농도(A₂₈₀) pH 전도도 세균수
12	부형제 첨가	10% 폴리소르베이트 80 최종 농도 6.0 ± 0.6 mg/ml	단백질 농도(A₂₈₀) pH 전도도
1 - 1회 초과로 순환 실시하고, 용출물의 프로파일을 시각적 분석으로 비교할 수 없을 때에만 필요하다

각각의 정제 공정 단계 종결시, 및 벌크 정제된 산물 용기내로 분배하는 시 점에 공정중 산물을 0.2 ㎛ 여과한다. 각 정제 단계의 경우, 5 ± 3℃ 저장으로부터 공정중 산물을 분리하고, 정제 단계를 실시하고, 공정처리된 0.2 ㎛의 여과 산물을 냉장실로 돌려보내는데 걸리는 소요 시간은 36시간을 초과하지 않아야 한다.

최종 조제물 완충제의 조성은 하기와 같다:

완충제 성분	농도
아세트산나트륨	25 mM
염화나트륨	125 mM
폴리소르베이트 80	0.02% v/v

표 4: 최종 여과 및 방출

단계 번호	공정 단계	조건	공정중 관리
13	최종의 0.2 ㎛ 여과 및 분배	주변 온도하에 여과. 검역소 저장 온도 5 ± 3℃	세균수 (여과전) 사용후 필터상의 무결성 시험
14	시험 및 방출	적용 불능	벌크 정제된 산물 설명서에 따라

항- CD3 항체 제조 공정에 사용된 원료

염기성 용액을 함유하는 CM34 배지를 세포 뱅킹시 사용한다. 초기의 마스터 세포 뱅크를 디메틸 설폭시드로 보충된 CM34 배지에서 저온저장한다.

염기성 용액 및 화학물질을 함유하는 CM41 배지를 접종물 제조시 사용한다. 추가로, 염을 함유하는 보충제 E를 사용전에 기초 배지에 첨가한다.

염기성 용액, 화학물질, 및 아미노산을 함유하는 CM42 배지를 발효 단계시 사용한다. CM42는 SF31, SF32 및 보충제 E 공급물로 보충된다. 이들 공급물은 염기성 분말, 염, 아미노산, 글루코스, 비타민, 화학물질 및 미량 원소를 함유한다. 배지 및 공급물 조제물에 사용된 모든 아미노산은 동물이 아닌 공급원으로부터 유도된 것이다.

실시예 4: 자가면역 질환 치료시 항- CD3 항체 조제물을 사용하는 치료 요법

0.05 mg/일 내지 10 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 또는 위약을 연구 1일째부터 5일째까지 정맥 주입하여 항-CD3 항체 조제물, 또는 부합되는 위약을 투여한다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다.

투여량 수준이 T-세포상의 CD4 복합체의 유의적인 조정 및/또는 유의적인 사이토카인 방출 증후와 관련이 있는 경우, 하나 이상의 고투여량 수준(들) 대신 하나 이상의 저투여량 수준(들)을 시험한다. 항-CD3 항체 조제물의 원하는 투여량 수준은 사이토카인 방출 수준이 사이토카인 방출에 관한 WHO 기준에서 "3" 미만이 되도록 한다. 사이토카인 방출 증상에 관한 수준 3에 대한 기준을 하기 표 5에 나타낸다.

표 5: WHO 독성 분류 기준

독감-양 증상(사이토카인 방출 증상)

감염 저혈압이 없을 때의 열(104.0℉)	없음	37.1-38.0℃ 98.7-100.4℉	38.1-40.0℃ 100.5-104.0℉	>40.0℃ (104.0℉) <24시간 동안	>40.0℃ ≥24시간
오한	없음	경미함 또는 단기간	뚜렷함, 또는 지속됨	--	--
근육통/ 관절통	정상	경미함	운동능 감소	불능	--
발한	정상	경미함 및 간헐적	잦음, 또는 흠뻑 젖음	--	--
무력권태	없음	경미함, 정상적인 활동을 지속적으로 할 수 있음	정상적인 일상 활동 장애, 또는 깨어있는 시간중 <50%를 침상에서 안정을 취함	깨어있는 시간중 >50%를 침대 또는 의자에서 보냄	침대에 매여 있음, 또는 자기간호
독감-양 증상	--	경미함	중간	중증	생명-위협
체중 증가	< 5%	5.0-9.9%	10.0-19.9%	≥ 20%	-
체중 감소	< 5%	5.0-9.9%	10.0-19.9%	≥ 20%	-

실시예 5: 이식 거부 반응 치료시 항- CD3 항체 조제물을 사용하는 치료 요법

50% 초과로 TCR-CD3 코팅/포화되는 것이 관찰될 때까지 항-CD3 항체 조제물을 매일 투여한다. 예를 들면, 관찰되는 CR-CD3 코팅/포화 수준이 60% 초과, 70% 초과 또는 80% 초과가 될 때까지 항-CD3 항체 조제물을 매일 투여한다. 초기 투여량은 0.05 mg/일 내지 10 mg/일 사이 범위이다. 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.1 mg/일 내지 5.0 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여되고, 더욱 바람직하게, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일 내지 3.0 mg/일 사이 범위 내의 투여량으로 투여된다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 1.1 mg/일, 1.2 mg/일, 1.3 mg/일, 1.4 mg/일, 1.5 mg/일, 1.6 mg/일, 1.7 mg/일, 1.8 mg/일, 1.9 mg/일, 2.0 mg/일, 2.1 mg/일, 2.2 mg/일, 2.3 mg/일, 2.4 mg/일, 2.5 mg/일, 2.6 mg/일, 2.7 mg/일, 2.8 mg/일, 2.9 mg/일, 및 3.0 mg/일로부터 선택되는 투여량으로 투여된다. TCR-CD3 포화가 50% 미만일 경우, 코팅/포화가 목적하는 바에 도달할 때까지 투여량을 매일 증가시킨다. 일단 목표치에 도달하면, 투약을 5일간 계속하지만, 총 치료 과정은 최대 8일을 초과하지 않는다.

항-CD3 항체 조제물을 정맥(iv) 주입하여 투여한다. 바람직하게, iv 주입은 30분 내지 3시간 사이, 더욱 바람직하게, 1시간 내지 2시간 사이라는 정해진 시간내에 연속되는 주입이다. 예를 들면, 항-CD3 항체 조제물은 매일 2시간 동안 연속된 iv 주입을 통해 투여된다. 연속된 iv 주입 시간이 조제물의 투여량과 iv 백의 용량과 직접적으로 관련이 있다는 것을 당업자는 이해할 것이다. 지정된 투여량 수준을 연속 주입하는데 필요한 시간과 백 용량을 계산하는 것은 당업계의 일반적인 기술에 속한다.

다른 실시태양

본 발명을 그의 상세한 설명과 함께 기술하였지만, 상기 기재는 첨부된 특허 청구 범위에 의해 정의되는 본 발명을 설명하기 위한 것이지 그의 범주를 한정하려는 것이 아니다. 다른 측면, 장점 및 변형이 첨부된 특허 청구의 범위 내에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> NovImmune SA, et al. <120> Anti-CD3 Antibody Formulations <130> 23135-410-061 <140> PCT/US2006/035615 <141> 2006-09-12 <150> 60/716,311 <151> 2005-09-12 <160> 74 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 caggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caagttcagt ggctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa gaaatactat 180 gtagactccg tgaagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacaaatg 300 ggctactggc acttcgatct ctggggccgt ggcaccctgg tcactgtctc ctca 354 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr 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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 gaaattgtgt tgacacagtc tccacgcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggac 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaa 324 <210> 12 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 gacatcctga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318 <210> 13 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 gacatcgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tgggaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318 <210> 14 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 gacatccaga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gcaaaagccc ctaagctctt catctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318 <210> 15 <211> 318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 gacatcgaga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gcaaaagccc ctaagctctt catctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318 <210> 16 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Arg Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Asp 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 17 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 18 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gly Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 19 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 21 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ccgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgtag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagct atatggtata atggaagaaa acaagactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtac gaggggaact 300 gggtacaatt ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 22 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 24 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtatgaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accctatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa a 321 <210> 25 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 26 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Gly Tyr Gly Met His 1 5 <210> 28 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu 1 5 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 32 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Thr 1 5 10 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 34 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 <210> 36 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr 1 5 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr 1 5 <210> 42 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Asp Ala Ser Ser Leu Gly Ser 1 5 <210> 43 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp Thr 1 5 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 48 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 49 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 15 <210> 50 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 1 5 10 15 Ser <210> 51 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 52 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 53 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro 85 90 95 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 55 <211> 96 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 <210> 56 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro 85 90 95 <210> 57 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly 1 5 10 15 Thr <210> 58 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Tyr Gly Met His 1 <210> 59 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Asp Ser Val Lys Gly 1 5 <210> 60 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> where X is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(9) <223> where X is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> where X is any amino acid <400> 60 Ile Trp Tyr Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 61 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(2) <223> where X is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(6) <223> where X is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> where X is any amino acid <400> 61 Xaa Xaa Gly Tyr Xaa Xaa Phe Asp Xaa 1 5 <210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 <210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu 1 5 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Val Thr Val Ser Ser 1 5 <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 <210> 66 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 67 <211> 412 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 67 tgattcatgg agaaatagag agactgagtg tgagtgaaca tgagtgagaa aaactggatt 60 tgtgtggcat tttctgataa cggtgtcctt ctgtttgcag gtgtccagtg tcaggtgcag 120 ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca 180 gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag 240 gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gatggaagta ataaatacta tgcagactcc 300 gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg 360 aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtg cgagagacac ag 412 <210> 68 <211> 50 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 1 5 10 15 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 20 25 30 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp 50 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 73 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 1 5 10 <210> 74 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30

Claims

a. 3.0∼6.2의 범위에서 효과적인 pH 완충제;

b. 염;

c. 계면활성제; 및

d. 항-CD3 항체의 약학적 유효량

으로 본질적으로 구성된 항-CD3 항체의 약학적 조제물.
제1항에 있어서, 염이 염화나트륨인 조제물.
제1항에 있어서, 계면활성제가 이온성, 음이온성 또는 쯔비터이온성 계면활성제인 조제물.
제3항에 있어서, 이온성 계면활성제가 폴리소르베이트인 조제물.
제4항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80인 조제물.
제1항에 있어서, pH 완충제가 1O mM∼50 mM의 범위에서 효과적인 조제물.
제1항에 있어서, pH 완충제가 5.0∼6.0의 pH 범위를 제공하는 조제물.
제7항에 있어서, pH 완충제가 5.2∼5.8의 pH 범위를 제공하는 조제물.
제7항에 있어서, pH 완충제가 5.4∼5.6의 pH 범위를 제공하는 조제물.
제7항에 있어서, pH 완충제가 pH 5.5를 제공하는 조제물.
제1항에 있어서, pH 완충제가 아세트산나트륨을 포함하는 조제물.
제1항에 있어서, 염이 100 mM∼140 mM의 범위로 존재하는 조제물.
제1항에 있어서, 계면활성제가 0.02% w/v로 존재하는 조제물.
제1항에 있어서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량당 0.05 mg∼10 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 조제물.
제1항에 있어서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량당 0.1 mg∼5.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 조제물.
제1항에 있어서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량당 0.5 mg∼3.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 조제물.
제1항에 있어서, 항-CD3 항체가 28F11, 27H5, 23F10, 15C3, 오르쏘클론 OKT3, 인간 OKT3γ1(HOKT3γ1) 또는 ChAglyCD3인 조제물.
a. 3.0∼6.2의 범위에서 효과적인, 아세트산나트륨을 포함하는 pH 완충제;

b. 염화나트륨;

c. 폴리소르베이트를 포함하는 계면활성제; 및

d. 항-CD3 항체의 약학적 유효량

으로 본질적으로 구성된 항-CD3 항체의 약학적 조제물.
제18항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80인 조제물.
제18항에 있어서, pH 완충제가 1O mM∼50 mM의 범위에서 효과적인 조제물.
제18항에 있어서, pH 완충제가 5.0∼6.0의 pH 범위를 제공하는 조제물.
제21항에 있어서, pH 완충제가 5.2∼5.8의 pH 범위를 제공하는 조제물.
제21항에 있어서, pH 완충제가 5.4∼5.6의 pH 범위를 제공하는 조제물.
제21항에 있어서, pH 완충제가 pH 5.5를 제공하는 조제물.
제18항에 있어서, 염이 100 mM∼140 mM의 범위로 존재하는 조제물.
제18항에 있어서, 계면활성제가 0.02% w/v로 존재하는 조제물.
제18항에 있어서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량 당 0.05 mg∼10 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 조제물.
제18항에 있어서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량 당 0.1 mg∼5.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 조제물.
제18항에 있어서, 항-CD3 항체의 약학적 유효량은 단위 용량 당 0.5 mg∼3.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 조제물.
제18항에 있어서, 항-CD3 항체가 28F11, 27H5, 23F10, 15C3, 오르쏘클론 OKT3, 인간 OKT3γ1(HOKT3γ1) 또는 ChAglyCD3인 조제물.
a. 단위 용량 당 0.5 mg∼3.0 mg 범위의 항-CD3 항체의 유효량;

b. 1 mg∼3 mg의 아세트산나트륨;

c. 5 mg∼9 mg의 염화나트륨; 및

d. 0.1 ㎍∼0.3 ㎍의 폴리소르베이트 80

을 본질적으로 포함하고, 물을 사용하여 1.0 mL로 조정된 항-CD3 항체의 약학적 조제물.
제31항에 있어서, 2.05 mg의 아세트산나트륨, 7.31 mg의 염화나트륨 및 0.216 ㎍의 폴리소르베이트 80을 포함하는 약학적 조제물.
제31항에 있어서, pH가 5.5인 약학적 조제물.
5일 동안 1일 단위 용량당 0.05 mg 내지 10 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 항-CD3 항체의 유효량을 자가면역 질병 또는 염증성 질환의 치료가 필요한 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 자가면역 질병 또는 염증성 질환을 치료하는 방법.
제34항에 있어서, 항-CD3 항체의 유효량은 5일 동안 1일 단위 용량 당 0.1 mg 내지 5.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 것인 방법.
제34항에 있어서, 항-CD3 항체의 유효량은 5일 동안 1일 단위 용량당 0.5 mg 내지 3.0 mg 범위의 양으로 항-CD3 항체가 제공되도록 제형화된 것인 방법.
제34항에 있어서, 정맥내 투여하는 방법.
피험체의 이식 거부 반응을 치료 또는 예방하는 방법으로서,

이식 이후 또는 그와 동시에 피험체에게 항-CD3 항체를 유효량으로 투여하는 단계, 상기 단계 후 TCR-CD3의 포화가 50% 이상이 될 때까지 각 날마다 상기 유효량을 증가시키는 단계, 및 5일 동안 유효량을 후속 투여하는 단계를 포함하고, 총 치료 과정은 8일을 넘지 않는 것인 피험체에서 이식 거부 반응을 치료 또는 예방하는 방법.
제38항에 있어서, 정맥내 투여하는 방법.
제38항에 있어서, 항-CD3 항체의 유효량은 사이토카인 방출 수준이 WHO 독성 분류 기준상 3 미만이 되도록 하는 것인 방법.