BRPI0615745A2 - formulação de anticorpo anti-cd3 - Google Patents

Abstract

FORMULAçõES DE ANTICORPO ANTI-CD3 Esta invenção está relacionada a formulações e dosagens terapêuticas, diagnósticas e/ou profiláticas de anti-corpos anti-CD3, assim como aos métodos para usar tais formulações e dosagens.

Description

"FORMULAÇÕES DE ANTICORPO ANTI-CD3"

CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção se relaciona a formulações e dosa-gens de anticorpos anti-CD3 assim como os métodos para seuuso.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Anticorpos contra a molécula de sinalização CD3epsilon do complexo receptor do linfócito T se provaram ú-teis como imunossupressores e no tratamento de doenças auto-imunes. Assim, métodos melhorados de preparar anticorpos an-ti-CD3, métodos melhorados de purificar anticorpos anti-CD3e formulações farmacêuticas contendo anticorpos anti-CD3 se-riam úteis.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece formulação e dosagempara anticorpos monoclonais especificamente direcionadoscontra CD3. A invenção também fornece métodos para produziranticorpos monoclonais anti-CD3 e métodos para purificar an-ticorpos anti-CD3.

As formulações farmacêuticas de um anticorpo anti-CD3 descritas aqui incluem um agente de tamponamento de pHefetivo em uma faixa de 3,0 a 6,2; um sal; um surfactante equantidade farmaceuticamente efetiva de um anticorpo anti-CD3.

O sal é, por exemplo, cloreto de sódio; o surfac-tante é, por exemplo, um surfactante iônico, aniônico ouzwitterionico. Por exemplo, o surfactante é um surfactanteiônico como polisorbato, por exemplo, polisorbato 80. Oa-gente de tamponamento de pH inclui, por exemplo, acetato desódio. Em algumas modalidades, o agente de tamponamento depH é selecionado de citrato de sódio/ácido citrico e acetatode sódio/ácido acético.

0 agente de tamponamento de pH é efetivo em umafaixa de 10 mM a 50 mM. O agente de tamponamento de pH usadonas formulações descritas aqui mantém uma faixa de pH entre5,0 e 6,0. Por exemplo, o agente de tamponamento de pH man-tém uma faixa de pH entre 5,2 e 5,8. Em algumas modalidades,o agente de tamponamento de pH mantém uma faixa de pH entre5,4 e 5,6. Por exemplo, o agente de tamponamento de pH man-tém um pH de cerca de 5,5.

Nas formulações descritas aqui, o sal está presen-te em uma faixa de 100 mM a 140 mM. O surfactante é 0,02%peso/volume. A quantidade farmaceuticamente efetiva do anti-corpo anti-CD3 é formulada para fornecer uma quantidade pordose na faixa de 0,05 mg a 10 mg do anticorpo anti-CD3. Emalgumas modalidades, quantidade farmaceuticamente efetiva doanticorpo anti-CD3 é formulada para fornecer uma quantidadepor dose na faixa de 0,1 mg a 5,0 mg do anticorpo anti-CD3.Por exemplo, quantidade farmaceuticamente efetiva do anti-corpo anti-CD3 é formulada para fornecer uma quantidade pordose na faixa de 0,5 mg a 3,0 mg do anticorpo anti-CD3.

Nas formulações de anticorpo anti-CD3 descritasaqui, o anticorpo anti-CD3 é, por exemplo, 28F1 1, 27H5,23F10, 15C3, Orthoclone 0KT3, ΟΚΤ3γ1 (Η0ΚΤ3γ1) humano ouChAglyCD3.As formulações farmacêuticas de anticorpo anti-CD3fornecidas aqui incluem um agente de tamponamento de pH com-preendendo acetato de sódio efetivo na faixa de 3,0 a 6,2,cloreto de sódio, um surfactante compreendendo polisorbato euma quantidade farmaceuticamente efetiva de um anticorpo an-ti-CD3. O polisorbato é, por exemplo, polisorbato 80. Oa-gente de tamponamento de pH é efetivo em uma faixa de 10 mMa' 50 mM. O agente de tamponamento de pH usado nas formula-ções descritas aqui mantém uma faixa de pH entre 5,0 e 6,0.Por exemplo, o agente de tamponamento de pH mantém uma faixade pH entre 5,2 e 5,8. Em algumas modalidades, o agente detamponamento de pH mantém uma faixa de pH entre 5,4 e 5,6.Por exemplo, o agente de tamponamento de pH mantém um pH decerca de 5,5.

Nas formulações farmacêuticas descritas aqui, osal está presente em uma faixa de 100 mM a 140 mM. O surfac-tante é 0,02% peso/volume. A quantidade farmaceuticamenteefetiva do anticorpo anti-CD3 é formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,05 mg a 10 mg do anticorpoanti-CD3. Em algumas modalidades, quantidade farmaceutica-mente efetiva do anticorpo anti-CD3 é formulada para forne-cer uma quantidade por dose na faixa de 0,1 mg a 5,0 mg doanticorpo anti-CD3. Por exemplo, quantidade farmaceuticamen-te efetiva do anticorpo anti-CD3 é formulada para forneceruma quantidade por dose na faixa de 0,5 mg a 3,0 mg do anti-corpo anti-CD3. O anticorpo anti-CD3 é, por exemplo, 28F1 1,27H5, 23F10, 15C3, Orthoclone OKT3, 0ΚΤ3γ1 (ΗΟΚΤ3γ1) humanoou ChAglyCD3.Em uma modalidade das formulações de um anticorpoanti-CD3 fornecidas aqui, a formulação farmacêutica contémuma quantidade por dose de anticorpo anti-CD3 na faixa de0,5 mg a 3,0 mg, entre 1 e 3 mg de acetato de sódio, entre 5e 9 mg de cloreto de sódio e entre 0,1 e 0,3 microgramas dePolisorbato 80, de modo que a formulação seja ajustada para1,0 L com água. Por exemplo, a formulação farmacêutica con-tém 2,05 mg de acetato de sódio, 7,31 mg de cloreto de sódioe 0,216 microgramas de Polisorbato 80. 0 pH da formulaçãofarmacêutica e, por exemplo, 5,5.

Também são fornecidos aqui métodos para tratar umadoença auto-imune ou doença inflamatória em um sujeito pelaadministração a um sujeito em necessidade de uma dose efeti-va de um anticorpo anti-CD3 formulado para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,05 mg a 10 mg de anticorpoanti-CD3 por dia por um período de cinco dias. Por exemplo,a dose efetiva de um anticorpo anti-CD3 é formulada parafornecer uma quantidade por dose na faixa de 0,1 mg a 5,0 mgdo anticorpo anti-CD3 por dia por um período de cinco dias.Preferivelmente, a dose efetiva de um anticorpo anti-CD3 éformulada para fornecer uma quantidade por dose na faixa de0,5 mg a 3,0 mg do anticorpo anti-CD3 por dia por um períodode cinco dias. Nos métodos descritos aqui, a formulação doanticorpo anti-CD3 é administrado intravenosamente. Por e-xemplo, a formulação é administrada via infusão intravenosacontínua.

Também são fornecidos aqui métodos para tratar eprevenir rejeição a transplante em um sujeito pela adminis-tração ao sujeito, após ou simultaneamente ao transplante,um anticorpo anti-CD3 em uma dose efetiva e aumentar a dosea cada dia até que 50% ou mais de saturação de TCR-CD3 sejaalcançado, seguido de 5 doses diárias com a duração total dotratamento não excedendo oito dias. Nos métodos descritosaqui, a formulação de anticorpo anti-CD3é administrada in-travenosamente. Por exemplo, a formulação é administrada viainfusão intravenosa continua. Preferivelmente, a dose efeti-va de anticorpo anti-CD3 resulta em um nivel de liberação decitocina que seja menos de 3 na escala de toxicidade da OMS.

As formulações de anticorpo anti-CD3 fornecidasaqui são administradas em uma dose variando entre 0,05mg/dia e 10 mg/dia. Preferivelmente, a formulação de anti-corpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,1 mg/dia a5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, a formulação de anticor-po anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,5 mg/dia a3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3é administrada em uma dose selecionada de 0.5 mg/dia, 0.6mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0 mg/dia, 2.1mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5 mg/dia, 2.6mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e 3.0 mg/dia.

Exemplos de anticorpos monoclonais incluem 28F1 1,27H5, 23F10, e 15C3 fornecidos aqui, assim como OrthocloneOKT3, OKT3γΐ (ΗΟΚΤ3γ1) humano e ChAglyCD3. Preferivelmente,o anticorpo monoclonal é um anticorpo que se liga ao mesmoepitopo como 28F1 1, 27H5, 23F10 ou 15C3. também preferível-mente, os anticorpos são anticorpos totalmente humanos ("an-ticorpos huCD3") . 0 anticorpo anti-CD3 tem uma ou mais dasseguintes características: o anticorpo se liga às célulasCD3 positivas (CD3 + ) mas não às células CD3 negativas (CD3-o anticorpo anti-CD3 induz modulação antigênica que en-volve alteração (por exemplo, redução) do nível de expressãona superfície celular ou atividade de CD3 ou receptor delinfócito T (TcR); o anticorpo anti-CD3 inibe a ligação doanticorpo murino anti-anticorpo monoclonal 0KT3 humano aoslinfócitos T; ou o anticorpo anti-CD3 se liga a um epítopoCD3 que inclui total ou parcialmente a seqüência de aminoá-cido EMGGITQTPYKVSISGT (SEQ ID NO:57). O anticorpo anti-CD3compete com o anticorpo murino anti-CD3 OKT3 pela ligação aoCD3, e a exposição do anticorpo anti-CD3 remove ou mascaraCD3 e/ou TcR sem afetar a expressão na superfície celular deCD2, CD4 ou CD8.

A inibição da ligação do anticorpo murino anti-anticorpo monoclonal OKT3 humano aos linfócitos T é definidacomo uma redução na habilidade do anticorpo murino OKT3 paraformar um complexo com CD3 na superfície celular de um lin-fócito .

Um anticorpo CD3 contém uma cadeia pesada variávelpossuindo uma seqüência de aminoácido de SEQ ID NOS: 2, 6,10 ou 22 e uma cadeia leve variável possuindo a seqüência deaminoácidos de SEQ ID NOS: 4, 8, 16-20 ou 25-26. Preferivel-mente, as três cadeias pesadas CDRs incluem uma seqüência deaminoácido pelo menos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% ou maisidêntica a uma seqüência selecionada do grupo consistindo deGYGMH (SEQ ID NO:27); VIWYDGSKKYYVDSVKG (SEQ ID NO:28);QMGYWHFDL (SEQ ID NO:29); SYGMH (SEQ ID NO:33);IIWYDGSKKNYADSVKG (SEQ ID NO:34); GTGYNWFDP (SEQ ID NO:35);e AIWYNGRKQDYADSVKG (SEQ ID NO: 44) e uma cadeia leve comtrês CDR que incluem uma seqüência de aminoácido pelo menos90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica a uma seqüênciaselecionada do grupo consistindo de RASQS VSSYLA (SEQ IDNO:30); DASNRAT (SEQ ID NO:31); QQRSNWPPLT (SEQ ID NO:32);RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:36); GASSRAT (SEQ ID NO:37);QQYGSSPIT (SEQ ID NO:38); RASQGISSALA (SEQ ID NO:39);YASSLQS (SEQ ID NO:40); QQYYSTLT (SEQ ID NO:41); DASSLGS(SEQ ID NO: 42); WASQGISSYLA (SEQ ID NO: 43); QQRSNWPWT (SEQID NO:45); DASSLES (SEQ ID NO:46); e QQFNSYPIT (SEQ IDNO:47). O anticorpo se liga ao CD3.

Um anticorpo anti-CD3 fornecido aqui exibe pelomenos duas ou mais (isto é, duas ou mais, três ou mais, qua-tro ou mais, cinco ou mais, seis ou mais, sete ou mais, oitoou mais, nove ou mais, dez ou mais, onze ou mais) das se-guintes características: o anticorpo contém uma região decadeia pesada variável (Vh) codificada por um seqüência degene germinativo Vh DP50 humano, ou uma seqüência de ácidonucléico que é homóloga à seqüência de gene germinativo VhDP50 humano; o anticorpo contém uma região de cadeia levevariável (VL) codificada pela seqüência de gene germinativoVL L6 humano, ou uma seqüência de ácido nucléico homóloga àseqüência de gene germinativa VL L6 humana; o anticorpo con-tém um VL codificado por uma seqüência de gene germinativoVL L4/18a humano, ou uma seqüência de ácido nucléico homólo-ga à. seqüência de gene germinativa VL L4/18a humana; o anti-corpo inclui uma região VH CDRl compreendendo a seqüência deaminoácido YGMH (SEQ ID NO:58); o anticorpo inclui uma regi-ão VH CDR2 compreendendo a seqüência de aminoácido DSVKG(SEQ ID NO: 59); o anticorpo inclui uma região VH CDR2 com-preendendo a seqüência de aminoácido IWYX1GX2X3X4X5Y XôDSVKG(SEQ ID NO: 60); o anticorpo inclui uma região VH CDR3 com-preendendo a seqüência de aminoácido XaXbGYXcXdFDXe (SEQ IDNO: 61) ; o anticorpo inclui uma região VH CDR3 compreendendoa seqüência de aminoácido GTGYNWFDP (SEQ ID NO:62) ou a se-qüência de aminoácidos QMGYWHFDL (SEQ ID NO:63); o anticorpoinclui as seqüências de aminoácidos VTVSS (SEQ ID NO:64) emuma posição que é C-terminal à região CDR3, onde a posiçãoestá em uma região variável C-terminal da região CDR3; o an-ticorpo inclui a seqüência de aminoácido GTLVTVSS (SEQ IDNO:65) em uma posição que é C-terminal à região CDR3, onde aposição está em uma região variável C-terminal da regiãoCDR3; o anticorpo inclui a seqüência de aminoácidoWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:66) em uma posição que é C-terminal àregião CDR3, onde a posição está em uma região variável C-terminal da região CDR3; o anticorpo se liga a um epitopoque inclui total ou parcialmente inclui a seqüência de ami-noácido EMGGITQTPYKVSISGT (SEQ ID NO: 57); e o anticorpo in-clui uma mutação na cadeia pesada em um resíduo de aminoáci-do na posição 234, 235, 265 ou 297 ou suas combinações, eonde a liberação de citocinas de um linfócito T na presençado citado anticorpo é reduzida quando comparado à liberaçãode citocinas de um linfócito T na presença de um anticorpoque não inclui uma mutação na cadeia pesada na posição 234,235, 265 ou 297 ou suas combinações. O número de resíduos dacadeia pesada fornecidos aqui é aquele do EU index (veja Ka-bat et al, "Proteins of Immunological Interest", US Dept. ofHealth & Human Services (1983)), conforme mostrado, por e-xemplo, em U.S. Patent Nos. 5,624,821 e 5,648,260, os conte-údos dos quais estão incorporados aqui em sua totalidade porreferência.

O anticorpo anti-CD3 pode conter uma mutação deanticorpo. Tipicamente, a mutação está na região constante.A mutação resulta em um anticorpo que tem uma função efetoraalterada. Uma função efetora de um anticorpo é alterada mo-dificando, isto é, aumentando ou reduzindo, a afinidade doanticorpo para uma molécula efetora como um receptor Fc oucomponente complemento. Por exemplo, a mutação resulta em umanticorpo que é capaz de reduzir a liberação de citocina deum linfócito T. Por exemplo, a mutação está na cadeia pesadano resíduo de aminoácido 234, 235, 265 ou 297 ou suas combi-nações. Preferivelmente, a mutação resulta em um resíduo dealanina na posição 234, 235, 265 ou 297 ou suas combinações,ou um resíduo de glutamato na posição 235, ou sua combina-ção. 0 termo (citocina) se refere a todas as citocinas huma-nas conhecidas na área que se liga a receptores extracelula-res expressos na superfície da célula e modulam a função ce-lular, incluindo mas não se limitando a IL-2, INF-gama, TNF-a, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, e IL-13.

Preferivelmente, o anticorpo anti-CD3 fornecidoaqui contém uma ou mais mutações que evitam a liberação me-diada pela região constante da cadeia pesada de uma ou maiscitocinas in vivo.

Os anticorpos CD3 totalmente humanos fornecidosaqui incluem, por exemplo, uma mutação L234 L235 -> A234 E235 naregião Fc, de modo que a liberação da citocina pela exposi-ção ao anticorpo anti-CD3 seja significativamente reduzidaou eliminada. Conforme descrito abaixo no Exemplo 4, a muta-ção L234 L235 -> A234 E235 na região Fc dos anticorpos anti-CD3fornecidos aqui reduzem ou eliminam a liberação de citocinaquando os anticorpos anti-CD3 são expostos a leucócitos hu-manos, enquanto que as mutações descritas abaixo manem umasignificante capacidade de liberar citocina. Por exemplo,uma redução significativa na liberação de citocina é defini-da pela comparação da liberação de citocinas pela exposiçãoao anticorpo anti-CD3 possuindo uma mutação L234 L235 -> A234E235 na região Fc com o nivel de liberação de citocina pelaexposição a outro anticorpo anti-CD3 tendo uma ou mais dasmutações descritas abaixo. Outras mutações na região Fc in-cluem, por exemplo, L234 L235 -> A234 A235, L235 -> E235, N297 ->A297, e D265 -> A265 .

Alternativamente, o anticorpo anti-CD3 é codifica-do por um ácido nucléico que inclui uma ou mais mutações quesubstituem um resíduo de ácido nucléico por um resíduo deácido nucléico de linhagem germinativa. Por "resíduo de áci-do nucléico de linhagem germinativa" entende-se o resíduo deácido nucléico que ocorre naturalmente em um gene germinati-vo codificando uma região constante ou variável. Portanto,os anticorpos fornecidos aqui incluem uma ou mais mutaçõesque substituem um ácido nucléico com um resíduo de ácido nu-cléico germinativo. Genes germinativos de anticorpos inclu-em, por exemplo, DP50 (número de acesso: IMGT/EMBL/GenBank/DDBJ:L06618), L6 (número de acesso:

IMGT/EMBL/GenBank/DDBJ:XO1668) e L4/18a (número de acesso:EMBL/GenBank/DDBJ: Z00006).

A cadeia pesada de um anticorpo huCD3 é derivadade um gene V (variável) de linhagem germinativa como, porexemplo, o gene germinativo DP50. As seqüências de ácido nu-cléico e aminoácido para o gene germinativo DP50 incluem,por exemplo, as seqüências de ácido nucléico e aminoácidomostradas abaixo: tgattcatgg agaaatagag agactgagtg tgagtgaa-ca tgagtgagaa aaactggatt tgtgtggcat tttctgataa cggtgtccttctgtttgcag gtgtccagtg tcaggtgcag ctggtggagt ctgggggaggcgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca gcgtctggattcaccttcag tagctatggc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaaggggctggagt gggtggcagt tatatggtat gatggaagta ataaatacta tgca-gactcc gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctg-ta tctgcaaatg aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtgcgagagacac ag (SEQ ID NO: 67)

VQCQVQLVES GGGWQPGRS LRLSCAASGF TFSSYGMHWVRQAPGKGLEW VAVIWYDGSN KYYADSVKGR FTISRDNSKN TLYLQMNSLRAEDTAVYYCA R (SEQ ID NO: 68)

Os anticorpos huCD3 incluem uma região de cadeiapesada variável (VH) codificada por uma seqüência de gene delinhagem germinativa VH DP50 humano. Uma seqüência de genede linhagem germinativa VH DP50 é mostrada, por exemplo, naSEQ ID NO: 48 na Figura 5. Os anticorpos huCD3 fornecidosaqui incluem uma região VH que é codificada por uma seqüên-cia de ácido nucléico que é pelo menos 80 % homologo à se-qüência de gene de linhagem germinativa VH DP50. Preferivel-mente, a seqüência de ácido nucléico é pelo menos 90%, 95%,96%, 97% homologo à seqüência de gene de linhagem germinati-va VH DP50. A região VH do anticorpo huCD3 é pelo menos 80%à seqüência de aminoácido da região VH codificada pela se-qüência de gene de linhagem germinativa VH DP50. Preferivel-mente, a seqüência de aminoácido da região VH do anticorpohuCD3 é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa à seqüênciade aminoácido codificada pela seqüência de gene de linhagemgerminativa VH DP50, e mais preferivelmente, pelo menos 98%,99% homologa à seqüência codificada pela seqüência de genede linhagem germinativa VH DP50.

Os anticorpos huCD3 também incluem uma região decadeia leve variável (VL) codificada pela seqüência de genesgerminativos VL L6 ou L4/ 18a humano. A seqüência de genesgerminativos VL L6 humano é mostrada, por exemplo, na SEQ IDNO: 56 na Figura 6 e a seqüência de genes germinativos VLL4/18a humano na SEQ ID NO:53 na Figura 7. Alternativamente,os anticorpos huCD3 incluem uma região VL que é codificadapor uma seqüência de ácido nucléico que é pelo menos 80% ho-mologa às seqüências de gene germinativo VL L6 ou L4/18a.Preferivelmente, a seqüência de ácido nucléico é pelo menos90%, 95%, 96%, 97% homologa à seqüência de gene germinativoVL L6 ou L4/18a e mais preferivelmente, a seqüência de áci-do nucléico é pelo menos 98%, 99% homologa às seqüências degene germinativo VL- L6 ou L4/183. A região VL do anticorpohuCD3 é pelo menos 80% homologa à seqüência de aminoácido daregião VL codificada pela seqüência de gene germinativo VLL6 ou L4/18a. Preferivelmente, seqüência de aminoácido daregião VL do anticorpo huCD3 é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%homóloga à seqüência de aminoácido codificada pela seqüênciade gene germinativo VL L6 ou L4/18a e mais preferivelmente,pelo menos 98%, 99% homologa à seqüência de aminoácido codi-ficada pela seqüência de gene germinativo VL L6 ou L4/18a.

Os anticorpos huCD3 tem, por exemplo, seqüênciasde aminoácidos parcialmente conservadas que são derivadas dalinhagem germinativa DP50. Por exemplo, a região CDRl dosanticorpos huCD3 usadas aqui tem pelo menos a seqüência deaminoácidos contíguos YGMH (SEQ ID NO: 58).

0 CDR2 dos anticorpos anti-CD3 incluem, por exem-pio, pelo menos a seqüência de aminoácidos contíguos DSVKG(SEQ ID NO: 59). Por exemplo, a região CDR2 inclui a seqüên-cia de aminoácidos contíguos WYX1GX2X3X4X5YX6DSVKG (SEQ IDNO: 60), onde X1, X2, X3, X4, X5 e X6 representam qualquer ami-noácido. Por exemplo, X1, X2, X3 e X4, são aminoácidos hidro-fílicos. Em alguns anticorpos anti-CD3 usados aqui, Xi é as-paragina ou aspartato, X2 é arginina ou serina, X3 é lisinaou asparagina, X4 é lisina ou glutamina, X5 é aspartato, as-paragina ou tirosina, e/ou X^ é valina ou alanina. Por exem-plo, a região VH CDR2 inclui uma seqüência de aminoácido se-lecionada do grupo consistindo de AIWYNGRKQD YADSVKG (SEQ IDNO:69), IIWYDGSKKNYADSVKG (SEQ ID NO:70), VIWYDGSKKYYVDSVKG(SEQ ID NO:71) e VIWYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO:72).A região CDR3 dos anticorpos anti-CD3 contém, porexemplo, pelo menos a seqüência contígua de aminoácidosXAXjBGYXCXDFDXe (SEQ ID NO: 61), onde XA, Xb, Xe, XD, e XE re-presentam qualquer aminoácido. Em alguns anticorpos anti-CD3usados aqui, Xa e XB são aminoácidos neutros, X0 é um aminoá-cido aromático, e/ou enquanto Xe é um aminoácido hidrofóbi-co. Por exemplo, ΧΛ é glicina ou glutamina, XB é treonina oumetionina, Xc é asparagina ou triptofano, X0 é triptofano ouhistidina, e/ou Xe é prolina ou leucina. Por exemplo, a re-gião CDR3 inclui a seqüência de aminoácidos contíguosGTGYNWFDP (SEQ ID NO:62) ou a seqüência de aminoácidos con-tíguos QMGYWHFDL (SEQ ID NO: 63).

Os anticorpos anti-CD3 incluem a região framework2 (FRW2) que contém a seqüência de aminoácido WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:73) . Anticorpos anti-CD3 usadas aqui incluem umaregião framework 3 (FRW3) que contém a seqüência de aminoá-cido RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA (SEQ ID NO:74).

Alguns anticorpos anti-CD3 incluem a seqüência deaminoácido contíguos VTVSS (SEQ ID NO: 64) em uma posiçãoque é C-terminal à região CDR3. Por exemplo, o anticorpocontém a seqüência de aminoácidos GTLVTVSS (SEQ ID NO:65) emuma posição que é C-terminal à região CDR3. Outros anticor-pos anti-CD3 incluem a seqüência de aminoácidos contíguosWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 66) em uma posição que é C-terminalà região CDR3. 0 resíduo de arginina na SEQ ID NO:66 é mos-trado, por exemplo, nas seqüências VH para o anticorpo 28F11huCD3 (SEQ ID N0:2) e o anticorpo 23F10 huCD3 (SEQ ID N0:6).Em outro aspecto, a invenção fornece métodos paratratar, prevenir ou aliviar um sintoma de uma doença rela-cionada ao sistema imune pela administração de uma formula-ção de anticorpo anti-CD3 a um sujeito. As formulações deanticorpo anti-CD3 fornecidas aqui são administradas em umadose variando na faixa de 0,05 mg/dia e 10 mg/dia. Preferi-velmente, a formulação de anticorpo anti-CD3 é administradaem uma dose entre 0,1 mg/dia a 5,0 mg/dia, e mais preferi-velmente, a formulação de anticorpo anti-CD3 é administradaem uma dose entre 0,5 mg/dia e 3,0 mg/dia. Por exemplo, aformulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma doseselecionada de 0.5 mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0 mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5 mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8mg/dia, 2.9 mg/dia, e 3.0 mg/dia. Por exemplo, a formulaçãode anticorpo anti-CD3 é administrada a um paciente sofrendode ou predisposto à doença do intestino inflamatório, coliteulcerativa, doença de Crohn, esclerose múltipla, artritereumatóide ou diabetes do tipo I. A formulação é administra-da, por exemplo intravenosamente. Outras vias de administra-ção estão contempladas. Por exemplo, as formulações de anti-corpo anti-CD3 são administrados subcutaneamente, oralmente,parenteralmente, nasalmente, intramuscularmente ou qualquercombinação destas rotas de administração.

Em outro aspecto, a invenção fornece métodos paratratar ou prevenir rejeição de transplante pela administra-ção a um sujeito de um anticorpo anti-CD3 em uma dose vari-ando entre 0,05 mg/dia e 10 mg/dia após transplante e aumen-tando a dose a cada dia até o nivel de 50% ou mais de satu-ração é alcançado, seguido de 5 doses diárias com a duraçãototal do tratamento não excedendo oito dias. Preferivelmen-te, a formulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em umadose entre 0,1 mg/dia e 5,0 mg/dia e mais preferivelmente, aformulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma doseentre 0,5 mg/dia e 3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose selecionada de0.5 mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia,1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia,1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia,2.0 mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia,2.5 mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia,e 3.0 mg/dia.

Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 éusada para tratar ou prevenir rejeição renal após transplan-te de órgão ou tecido. A formulação é administrada profila-ticamente (por exemplo, antes de um episódio de rejeição a-guda para prevenir um episodio) e/ou a formulação é usadacomo um tratamento para um episodio de rejeição aguda após otransplante. A formulação é administrada, por exemplo, in-travenosamente. Outras rotas de administração também sãocontempladas. Por exemplo, as formulações de anticorpo anti-CD3 são administrados subcutaneamente, oralmente, parente-ralmente, nasalmente, intramuscularmente ou qualquer combi-nação destas rotas de administração.As formulações de anticorpo anti-CD3 fornecidasaqui são armazenadas em recipientes apropriados, como fras-cos, de modo que a dose por recipiente da formulação de an-ticorpo anti-CD3 está na faixa de 1 a 10 mg/recipiente. Porexemplo, a dose por recipiente da formulação de anticorpoanti-CD3 está na faixa de 3,5 a 4,5 mg/recipiente, por exem-plo, a dose por recipiente é de 4 mg/recipiente.

Opcionalmente, o sujeito é administrado com um se-gundo agente como, mas não se limitando a, compostos anti-inflamatórios ou compostos imunossupressores. Compostos ade-quados incluem, mas não se limitam a metotrexato, ciclospo-rina A (incluindo, por exemplo, microemulsão de ciclospori-na) , tracolimos, corticosteróides, estatina, interferon tipoI, Remicade (Infliximab), Enbrel (Etanercept) e Humira (Ada-limumab) . Por exemplo, sujeitos com diabetes do Tipo I oudiabetes autoimune latente em adultos (LADA), também são ad-ministrados com um segundo agente, como, por exemplo, GLP-Iou um composto de descanso para célula beta (isto é, um com-posto que reduz ou inibe a liberação de insulina, como abri-dores de canal de potássio).

Em outro aspecto, a invenção fornece métodos depurificar um anticorpo anti-CD3 por uma cromatografia de a-finidade, cromatografia de troca iônica e cromatografia dehidroxiapatita. Por exemplo, a cromatografia de afinidade écromatografia de proteína A. A cromatografia de troca iônicaé, por exemplo, cromatografia de troca aniônica.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOSFiguras 1A-1D são uma serie de representações daseqüência de nucleotideos e seqüências de aminoácidos paraas regiões variável leve e variável pesada do anticorpo doanticorpo huCD3 28F11, onde os CDRs estão marcados com cai-xas .

Figuras 2A-2D são uma serie de representações daseqüência de nucleotideo e seqüências de aminoácidos para asregiões variável leve e variável pesada do anticorpo huCD323F10.

Figuras 3A-3D são uma serie de representações daseqüência de nucleotideo e seqüências de aminoácidos para asregiões variável leve e variável pesada do anticorpo huCD327H5. A figura 3E é um alinhamento de cinco cadeias leves doclone 27H5, onde um asterisco (*) representa um aminoácidoconservado; dois pontos ( : ) representam uma mutação conser-vativa; e um ponto (.) representa uma mutação semi-conservativa.

Figuras 4A-4D são uma serie de representações daseqüência de nucleotideo e seqüências de aminoácidos para asregiões variável leve e variável pesada do anticorpo huCD315C3.

Figura 5 é um alinhamento ilustrando as regiões decadeia pesada variável de dos anticorpos huCD3 5C3, 27H5 e28F11 assim como da seqüência de linhagem germinativa DP-50,a seqüência de junção pesada humana 5-02 e a seqüência dejunção pesada humana 2. As regiões CDR estão indicadas emcada seqüência.Figura 6 é um alinhamento das regiões variáveisVkIII do 15C3 (cadeia leve variável 1, isto é, "VL1") e an-ticorpos huCD3 28F11, assim como a seqüência germinativa L6,a seqüência de junção kappa 4 humana e a seqüência de junçãokappa 1 humana. As regiões CDR estão indicadas em cada se-qüência .

Figura 7 é um alinhamento das regiões variáveisVkI do 15C3 (cadeia leve variável 2, isto é, "VL2") e anti-corpos huCD3 27H5 VL2, assim como a seqüência germinativaL4/18a, a seqüência de junção kappa 4 humana e a seqüênciade junção kappa 5 humana. As regiões CDR estão indicadas emcada seqüência.

Figura 8 é um alinhamento dás regiões variáveisVkI do anticorpo huCD3 27H5 VLl e DPK22, assim como a se-qüência de junção kappa 5 humana. As regiões CDR estão indi-cadas em cada seqüência.

DESCRIÇÃO DETALHADA

A presente invenção fornece formulações e dosagenspara anticorpos monoclonais, por exemplo, anticorpos mono-clonais totalmente humanos, específicos contra a cadeia CD3epsilon (CD3e). Os anticorpos totalmente humanos fornecidosaqui são chamados de anticorpos huCD3.

As formulações fornecidas aqui tem um pH na faixade 3,0 a 7,0. Preferivelmente, a formulação tem um pH nafaixa de 5,0 a 6,0, e mais preferivelmente, a formulação temum pH na faixa de 5,2 a 5,8, e mais preferivelmente, a for-mulação tem um pH na faixa de 5,4 a 5,6. Por exemplo, em umamodalidade, a formulação tem um pH de 5,5.Os anticorpos anti-CD3 usados aqui se ligam a umCD3 que inclui total ou parcialmente os resíduos de aminoá-cido da posição 27 a posição 43 da subunidade CD3 epsilonhumana processada (isto é, sem a seqüência líder). A seqüên-cia de aminoácido da sub-unidade CD3 epsilon humana é mos-trada, por exemplo, no GenBank Accession Nos. NP_000724;AAA52295; P07766; A32069; CAA27516; e AAH49847. Por exemplo,o anticorpo anti-CD3 se liga ao epítopo CD3 que inclui to-talmente ou parcialmente a seqüência de aminoácido deEMGGITQTPYKVSISGT (SEQ ID NO: 57). Um anticorpo monoclonalhuCD3 exemplar que se liga a este epítopo é o anticorpo28F11 fornecido aqui. 0 anticorpo 28F11 inclui uma regiãovariável da cadeia pesada (SEQ ID NO:2) codificada pela se-qüência de ácido nucléico mostrado na SEQ ID N0:1, e uma re-gião variável da cadeia leve (SEQ ID N0:4) codificada pelaseqüência de ácido nucléico mostrada na SEQ ID NO:3 (Figuras1A-1D).

Os aminoácidos englobando as regiões de determina-ção da complementaridade (CDR) conforme definido por Chothiaet al. 1989, E. A. Kabat et al. , 1991 estão mostradas emcaixas nas Figuras IB e ID e nas Figuras 5 e 6 (veja, Cho-thia, C, et al, Nature 342:877-883 (1989); Kabat, EA, et al,Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Editi-on, US Department of Health and Human Services, US Govern-ment Printing Office (1991)). Os CDRs de cadeia pesada doanticorpo 28F11 tem as seguintes seqüências: GYGMH (SEQ IDNO:27) VIWYDGSKKYYVDSVKG (SEQ ID NO:28) e QMGYWHFDL (SEQ IDNO:29) . Os CDRs de cadeia leve do anticorpo 28F11 tem as se-guintes seqüências: RASQSVSSYLA (SEQ ID NO:30) DASNRAT (SEQID NO:31) e QQRSNWPPLT (SEQ ID NO:32).

Conforme mostrado nas Figuras 2A-2D, o anticorpo23F10 inclui uma região variável da cadeia pesada (SEQ IDNO:6) codificada pela seqüência de ácido nucléico da SEQ IDNO:5, e uma região variável de cadeia leve (SEQ ID NO:8) co-dificada pela seqüência de ácido nucléico da SEQ ID NO:7. Osaminoácidos englobando o CDR conforme definido por Chothiaet al. 1989, E.A. Kabat et al., 1991 estão mostradas nas Fi-guras 2B, 2D. Os CDRs de cadeia pesada do anticorpo 23F10tem a seguintes seqüências: GYGMH (SEQ ID NO:27)VIWYDGSKKYYVDSVKG (SEQ ID NO:28) e QMGYWHFDL (SEQ ID NO:29).Os CDRs de cadeia leve do anticorpo 23F10 tem a seguintesseqüências: RASQSVSSYLA (SEQ ID NO:30) DASNRAT (SEQ IDNO:31) and QQRSNWPPLT (SEQ ID NO:32).

Conforme mostrado nas Figuras 3a-3D, o anticorpo27H5 inclui uma região variável de cadeia pesada (SEQ IDNO:10) codificada pela seqüência de ácido nucléico de SEQ IDNO: 9 e uma região variável de cadeia leve selecionada dasseqüências de aminoácido das SEQ ID NOS:16-20 e codificadapelas seqüências de ácido nucléico das SEQ ID NO:11-15. Osaminoácidos englobando o CDR conforme definido por Chothiaet al. 1989, E.A. Kabat et al., 1991 estão mostradas nas Fi-guras 3B, 3D, 5 e 7-8. Os CDRs de cadeia pesada do anticorpo27H5 tem as seguintes seqüências: SYGMH (SEQ ID NO:33),IIWYDGSKKNYADSVKG (SEQ ID NO:34) e GTGYNWFDP (SEQ ID NO:35).Os CDRs de cadeia leve do anticorpo 27H5 tem as seguintesseqüências: RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO:36); GASSRAT (SEQ IDNO: 37); QQYGSSPIT (SEQ ID NO:38); RASQGISSALA (SEQ IDNO:39); YASSLQS (SEQ ID NO:40); QQYYSTLT (SEQ ID NO:41);DASSLGS (SEQ ID NO:42); e WASQGISSYLA (SEQ ID NO:43).

Conforme mostrado nas Figuras 4A-4D, o anticorpo15C3 inclui uma região variável de cadeia pesada (SEQ IDNO:22) codificada pela seqüência de ácido nucléico de SEQ IDNO: 21 e uma região variável de cadeia leve selecionada dasseqüências de aminoácido das SEQ ID NOS:25-26 e codificadapelas seqüências de ácido nucléico das SEQ ID NO:23-24. Osaminoácidos englobando o CDR conforme definido por Chothiaet al. 1989, E.A. Kabat et al., 1991 estão mostradas nas Fi-guras 4B, 4D, e 5-7. Os CDRs de cadeia pesada do anticorpo15C3 tem as seguintes seqüências: SYGMH (SEQ ID NO:33)AIWYNGRKQDYADSVKG (SEQ ID NO:44) e GTGYNWFDP-(SEQ ID NO:35).Os CDRs de cadeia leve do anticorpo 15C3 tem as seguintesseqüências: RASQSVSSYLA (SEQ ID N0:30); DASNRAT (SEQ IDNO:31); QQRSNWPWT (SEQ ID N0:45); RASQGISSALA (SEQ IDNO:39); DASSLES (SEQ ID NO:46); QQFNSYPIT (SEQ ID NO:47).

Anticorpos anti-CD3 usados aqui também incluem umaseqüência de aminoácido de cadeia pesada variável que é pelomenos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica a seqüên-cia de aminoácido da SEQ ID NO: 2, 6, 10 ou 22 e/ou um se-qüência de aminoácido de cadeia leve variável que é pelo me-nos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% ou mais idêntica a seqüência25 de aminoácido da SEQ ID NO: 4, 8, 16-20 ou 25-26.

Alternativamente, o anticorpo monoclonal é um an-ticorpo que se liga ao mesmo epitopo como 28F11, 27H5, 23F10ou 15C3.A menos que seja definido de outra maneira, ostermos científicos e técnicos usados em conexão com a pre-sente invenção devem ter o mesmo significado que é normal-mente conhecido pelos profissionais da área. Além disso, a menos que seja necessário pelo contexto, termos singularesdevem incluir pluralidades e termos plurais devem incluirsingular. Geralmente, nomenclaturas utilizadas em conexãocom, e técnicas de, cultura de células e tecidos, biologiamolecular, hibridização e química de proteína e oligo ou po-linucleotídeos descritas aqui são aquelas bem conhecidas enormalmente usadas na área. Técnicas padrões são usadas paraDNA recombinante, síntese de oligonucleotídeos e transforma-ção e cultura de tecido (por exemplo, eletroporação, Iipo-fecção). Reações enzimáticas e técnicas de purificação sãorealizadas de acordo com as especificações do fabricante oucomo geralmente são realizadas na área ou conforme descritoaqui. As técnicas de procedimentos seguintes são geralmenterealizadas de acordo com métodos convencionais bem conheci-dos na área e conforme descrito em várias referências geraisou mais específicas que são citadas e discutida no decorrerda presente especificação. Veja, por exemplo, Sambrook etal. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spiing Harbor, Ν. Y.

(1989) ) . As nomenclaturas utilizadas em conexão com, e osprocedimentos e técnicas de laboratório de química analíti-ca, química orgânica sintética e química medicinal e farma-cêutica descrita aqui são aquelas bem conhecidas e normal-mente usada na área. Técnicas padrões são usadas para sínte-ses químicas, análises químicas, preparação farmacêutica,formulação e liberação, e tratamento de pacientes.

Conforme utilizado de acordo com o presente rela-to, os seguintes termos, a menos que indicado de maneira di-ferente, deve ter o seguinte significado:

Conforme usado aqui, o termo "anticorpo" se referea moléculas de imunoglobulinas e frações ativas imunologica-mente de moléculas de imunoglobulina (Ig), isto é, moléculasque contenham um sítio de ligação ao antígeno que se ligueespecificamente (imuno-reaja com) um antígeno. Tais anticor-pos incluem, mas não se limitam a, policlonal, monoclonal,quimérico, de cadeia única, fragmentos Fab, Fab' e Ftab-)2, euma biblioteca de expressão Fab. "Se liga especificamente"ou "imuno-reage com" significa que"o anticorpo reage com umou mais determinantes antigênicos do antígeno desejado e nãoreage (isto é, liga) com outros polipeptídios ou se liga comuma afinidade muito mais baixa (Kd>10~6) com outros polipep-tídios .

A unidade estrutural básica do anticorpo sabida-mente compreende um tetrâmero. Cada tetrâmero é composto dedois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, cada parpossuindo uma cadeia "leve" (cerca de 25 kDa) e uma "pesada"(cerca de 50-70 kDa). A fração amino-terminal de cada cadeiainclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais a-minoácidos primariamente responsáveis pelo reconhecimento doantígeno. A fração carboxi-terminal de cada cadeia define aregião constante primariamente responsável pela função efe-tora. As cadeias leves humanas são classificadas como cadei-as leve kappa e lambda. As cadeias pesadas são classificadascomo um, delta, gama, alfa ou epsilon, e define o isotipo doanticorpo como IgM, IgD, IgA, e IgE, respectivamente. Nascadeias leve e pesada, as regiões variáveis e constantes sãounidas por uma região "J" de cerca de 12 ou mais aminoáci-dos, com a cadeia pesada também incluindo uma região "D" decerca de mais 10 aminoácidos. Veja, no geral, FundamentalImmunology Ch. 7 (Paul, W., ea. , 2nd ed. Raven Press, Ν. Y.(1989)). As regiões variáveis de cada par cadeia leve/pesadaformam o sitio de ligação do anticorpo.

0 termo "anticorpo monoclonal" (MAb) ou "composi-ção de anticorpo monoclonal", conforme usado aqui, se referea uma população de moléculas de anticorpo que contenham ape-nas uma espécie molecular de molécula de anticorpo consis-tindo do produto único de um gene de cadeia leve e um produ-to único de um gene de cadeia pesada. Em particular, as re-giões de determinação de complementaridade (CDRs) do anti-corpo monoclonal são idênticas em todas as moléculas da po-pulação. MAbs contém um sitio de ligação ao antigeno capazde imunoreagir com um epitopo particular do antigeno carac-terizado por uma afinidade de ligação única por ele.

Em geral, as moléculas de anticorpo obtidas de hu-manos se relacionam a qualquer uma das classes IgG, IgM, I-gA, IgE e IgD, que diferem uma das outras pela natureza dacadeia pesada presente na molécula. Certas classes tambémtem sub-classes, como IgGl, IgG2, e outras. Além disso, emhumanos, a cadeia leve pode ser uma cadeia kappa pu uma ca-deia lambda.Conforme usado aqui, o termo "epítopo" incluiqualquer proteína determinante capaz de se ligar especifica-mente a uma imunoglobulina, um scFv ou um receptor de linfó-cito Τ. 0 termo "epítopo" inclui qualquer proteína determi-nante capaz de se ligar especificamente a uma imunoglobulinaou receptor de linfócito T. Determinantes epitópicos usual-mente consistem de grupos de moléculas de superfície quimi-camente ativas como aminoácidos, cadeias laterais de carboi-drato e usualmente tem características estruturais tridimen-sionais específicas, assim como características de carga es-pecíficas. Um anticorpo se liga especificamente a um antíge-no quando a constante de dissociação é ^ 1 μΜ; preferivel-mente ^ IOOnM e mais preferivelmente ^ 10 nM.

Conforme usado aqui, os termos "ligação imunológi-ca" e "propriedades de ligação imunológica" se referem àsinterações não covalentes do tipo que ocorre entre uma molé-cula de imunoglobulina e um antígeno para o qual a imunoglo-bulina é específica. A força ou afinidade das interações deligação imunológicas pode ser expressa em termos de constan-te de dissociação (Kd) da interação, onde um Kd menor repre-senta uma afinidade maior. As propriedades de ligação imuno-lógicas dos polipeptídios selecionados são quantificados u-sando métodos bem conhecidos na área. Um destes métodos faza medição da razão sítio de ligação ao antígeno/ formação edissociação do complexo antigênico, onde estas taxas depen-dem das concentrações dos parceiros dos complexos, a afini-dade da interação e os parâmetros geométricos que igualmenteinfluencia a razão em ambas as direções. Portanto, a "cons-tante da razão on" (Kon) e a "constante da razão off" (Koff)podem ser determinadas pelo cálculo das concentrações e ta-xas verdadeiras de associação e dissociação (Veja Nature 361:186- 87 (1993)) . A razão Koff /Kon permite o cancelamento detodos os parâmetros não relacionados com a afinidade, e éigual à constante de dissociação Kd. (Veja, Davies et al.(1990) Annual Rev Biochem 59:439-473). Um anticorpo da pre-sente invenção se liga especificamente a um epitopo CD3quando a constante de equilíbrio da ligação (Kd) é ^ 1 μΜ;preferivelmente ^ IOOnM, mais preferivelmente < 10 nM e maispreferivelmente ^ 100 pM a cerca de 1 pM, conforme medidopelos ensaios como ensaio de ligação radioligado ou ensaiossimilares conhecidos pelos profissionais da área.

Os profissionais da área reconhecerão que é possí-vel determinar, sem experimentação indevida, se um anticorpomonoclonal tem a mesma especificidade que um anticorpo mono-clonal humano usado aqui (por exemplo, anticorpo monoclonal28F1 1, 27H5, 23F10 ou 15C3) determinando se o primeiro im-pede que o ultimo se ligue a um polipeptídio antigênico CD3.Se o anticorpo monoclonal humano sendo testado compete comum anticorpo monoclonal humano usado aqui, conforme mostradopor uma redução na ligação do anticorpo monoclonal humanousado aqui, então os dois anticorpos monoclonais se ligam aomesmo epitopo ou a um epitopo muito próximo. Outra forma dedeterminar se um anticorpo monoclonal humano tem especifici-dade de um anticorpo monoclonal humano usado aqui é pré-incubar o anticorpo monoclonal humano usado aqui com o poli-peptídio antigênico CD3 com o qual é normalmente reativo, eentão adicionar o anticorpo monoclonal humano sendo testadopara determinar se o anticorpo monoclonal humano sendo tes-tado é inibido na sua habilidade de se ligar ao polipeptidioantigênico CD3. Se o anticorpo monoclonal humano sendo tes-tado four inibido, então, provavelmente, ele tem a mesma, oufuncionalmente equivalente, especificidade do anticorpo mo-noclonal humano usado aqui.

0 termo "identidade seqüência" significa que duasseqüências de polinucleotideos ou aminoácidos são idênticas(isto é, nucleotideo-a-nucleotideo ou residuo-a-residuo) najanela de comparação. 0 termo "porcentagem de seqüência deidentidade" é calculado comparando duas seqüências alinhadasotimamente na janela de comparação, determinando o número deposições nas quais a base de ácido nucléico (por exemplo, A,T, C, G, U ou I)ou resíduo idêntico ocorre em ambas as se-qüências para gerar o número de posições que combinam, divi-dindo o número de posições que combinam pelo número total deposições na janela de comparação (isto é, o tamanho da jane-la) , e multiplicando o resultado por 100 para gerar a por-centagem de identidade de seqüência. 0 termo "identidadesubstancial" conforme usado aqui denota uma característicade uma seqüência de polinucleotídeo ou aminoácido, onde opolinucleotídeo ou aminoácido compreende uma seqüência quetem pelo menos 85% de identidade de seqüência, preferivel-mente pelo menos 90 a 95% de identidade de seqüência, maisusualmente pelo menos 99% de identidade de seqüência quandocomparado com uma seqüência de referência em uma janela decomparação de pelo menos 18 posições de nucleotídeos (6 ami-noácidos), freqüentemente em uma janela de pelo menos 24-28posições de nucleotideos (8-16 aminoácidos), onde a porcen-tagem da identidade de seqüência é calculada comparando aseqüência de referência com a seqüência que pode incluir de-leções ou adições que totalizam 20% ou menos da seqüência dereferência na janela de comparação. A seqüência de referên-cia pode ser um sub-grupo de uma seqüência maior.

Conforme usado aqui, vinte aminoácidos convencio-nais e suas abreviações seguem uso convencional. Veja mmu-nology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub e D.R. Gren,Eds., Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991)). Estere-oisomeros (por exemplo, D-aminoácidos) dos vinte aminoácidosconvencionais, aminoácidos não naturais como aminoácidos a-a- disubstituidos, N-alquil aminoácidos, ácido láctico eoutros aminoácidos não convencionais também podem ser compo-nentes adequados para os polipeptidios da presente invenção.Exemplos de aminoácidos não convencionais incluem: A-hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetillisina,ε -N-acetillisina, 0-fosfoserina, N- acetilserina, N- fomi-ilmetionina, 3-metilhistidina, 5-hidroxilisina, o-N-metilarginina, e outros aminoácidos e iminoácidos similares(por exemplo, 4-hidroxiprolina). Na notação de polipeptidiousada aqui, a direção esquerda é a direção amino-terminal ea direção direita é a direção carboxi-terminal, de acordocom o uso e convenção padrão.

Substituições de aminoácidos conservativas se re-fere aos resíduos intercambiáveis que possuem cadeias late-rais semelhantes.Por exemplo, um grupo de aminoácidos possu-indo cadeia lateral alifática é glicina, alanina, valina,leucina e isoleucina; um grupo de aminoácidos possuindo ca-deias laterais alifática hidroxila é serina e treonina; umgrupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais contendo a-mida é asparagina e glutamina; um grupo de aminoácidos pos-suindo cadeias laterais aromáticas é fenilalanina, tirosinae triptofano; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias la-terais básicas é lisina, arginina e histidina; e um grupo deaminoácidos contendo cadeia lateral sulfeto é cisteina e me-tionina. Grupos de substituição conservativa de aminoácidosão: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, Iisi-na-arginina, alanina-valina, glutâmico-aspártico e asparagi-na-glutamina.

Conforme discutido aqui, pequenas variações nasseqüências de aminoácidos de anticorpos ou moléculas de imu-noglobulina são contemplados como sendo englobada pela pre-sente invenção, de modo que as variações na seqüência de a-minoácido mantém pelo menos 75%, mais preferivelmente pelomenos 80%, 90%, 95% e mais preferivelmente 99%. Em particu-lar, as substituições de aminoácido conservativas são con-templadas. As substituições conservativas são aquelas queacontecem dentro da família de aminoácidos que estão rela-cionados a suas cadeias laterais. Aminoácidos geneticamentecodificados são geralmente divididos em famílias: (1) amino-ácidos ácidos são aspartato, glutamato; (2) aminoácidos bá-sicos são lisina, arginina, histidina; (3) aminoácidos nãopolares são alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina,fenilalanina, metionina, triptofano e (4) aminoácidos pola-res não carregados são glicina, asparagina, glutamina, cis-teína, serina, treonina, tirosina. Os aminoácidos hidrofíli-cos incluem arginina, asparagina, aspartato, glutamina, glu-tamato, histidina, lisina, serina e treonina. Os aminoácidoshidrofóbicos incluem alanina, cisteina, isoleucina, leucina,metionina, fenilalanina, prolina, triptofano, tirosina e va-Iina. Outras famílias de aminoácidos incluem (i) serina etreonina, que são a família hidróxido-alifático; (ii) aspa-ragina e glutamina, que são a família contendo amida, (iii)alanina, valina, leucina e isoleucina, que são a família a-lifática, e (IV) fenilalanina, triptofano e tirosina, quesão a família aromático.

0 termo "agente" é usado aqui para chamar um com-posto químico, uma mistura de compostos químicos, uma macro-molécula biológica ou um extrato feito de materiais biológi-cos .

0 termo paciente inclui sujeitos humanos e veteri-nários .

A invenção também inclui fragmentos anti-CD3 Fv,Fat,, Fab1 e F(ab')2, anticorpos de cadeia única anti-CD3,anticorpos anti-CD3 biespecíficos, anticorpos anti-CD3 hete-roconjugados, anticorpos triespecíficos, imunoconjugados eseus fragmentos.

Anticorpos biespecíficos são anticorpos que temespecificidade de ligação para pelo menos dois antígenos di-ferentes. No caso presente, uma das especificidades de liga-ção é para CD3. 0 segundo alvo de ligação é qualquer outroantigeno, e vantajosamente é uma proteína de superfície ce-lular ou receptor ou sub-unidade do receptor.

Administração e Formulações TerapêuticasDeve ficar claro que a administração de entidadesterapêuticas de acordo com a invenção será administrada comcarreadores específicos, excipientes e outros agentes quesão incorporados em formulações para fornecer transferência,liberação, tolerância e equivalente melhorados. Várias for-mulações apropriadas podem ser encontradas no formulário co-nhecido por todos os químicos farmacêuticos: Remington1SPharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company,Easton, PA (1975)), particularmente o capítulo 87 de Blaug,Seymour. Estas formulações incluem, por exemplo, pó, pastas,óleos, colóides, ceras, lipídios vesículas contendo lipídios(catiônico ou aniônico) (como Lipofectin™) , conjugados deDNA, pastas de absorção anidro, emulsão oleo-em-água e água-em-óleo, emulção carbo-cera (polietilenoglicol de vários pe-sos moleculares), géis semi-sólidos e misturas semi-sólidascontendo carbocera. Qualquer das misturas anteriores podeser apropriada em tratamentos e terapias de acordo com apresente invenção, de modo que o ingrediente ativo na formu-lação não seja inativado pela formulação e a formulação sejafisiologicamente compatível e tolerável com a rota de admi-nistração. Veja também, Baldrick P. "Pharmaceutical excipi-ent development: the need for preclinical guidance." Regul.Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. "Lyophiliza-tion and development of solid protein pharmaceuticals." Int.J. Pliarm. 203(1-2): 1-60 (2000), Charman WN "Lipids, Iipo-philic drugs, and oral drug delivery-some emerging con-cepts." J Pharm Sci.89(8):967-78 (2000), Powell et al. "Com-pendium of excipients for parenteral formulations" PDA JPliarm Sci Technol. 52:238-311 (1998) e as citações delespara informação adicional relacionada às formulações, exci-pientes e veículos bem conhecidos pelos químicos farmacêuti-cos .

As formulações são, preferivelmente, substancial-mente puras. Conforme usado aqui, "substancialmente pura"significa uma espécie objeto que é a espécie predominantepresente (isto é, em termos molares, é mais abundante do quequalquer outra espécie individual na composição) , e preferi-velmente uma fração substancialmente pura é uma composiçãoonde a espécie objeto compreende pelo menos 50% (em termosmolares) de todas as espécies macromoleculares presentes.

Geralmente, uma composição substancialmente puravai compreender mais de cerca de 80% de todas as espéciesmacromoleculares presentes na composição, mais preferivel-mente mais de 80%, 90%, 95% e 99%. Mais preferivelmente, aespécie objeto é purificada para homogeneidade essencial(espécies contaminantes não pode ser detectada na composiçãopelos métodos de detecção convencional) onde a composiçãoconsiste essencialmente de uma espécie macromolecular única.

As formulações terapêuticas fornecidas aqui, queincluem um anticorpo anti-CD3 usados aqui, são usados paratratar ou aliviar um sintoma associado com uma doença rela-cionada ao sistema imune, como,por exemplo, uma doença auto-imune ou uma doença inflamatória.Doenças auto-imune incluem, por exemplo, Síndromeda imunodeficiência adquirida (AIDS, que é uma doença viralcom um componente auto-imune), alopecia areata, espondiliteanquilosante, sindrome anti-fosfolipidica, doença auto-immune de Addison, anemia hemolitica auto-imune, hepatiteauto-imune, doença do ouvido interno auto-imune (AIED), sin-drome linfoproliferativa auto-imune (ALPS) , púrpura trombo-citopênica auto-imune (ATP), doença de Behcet, cardiomiopa-tia,dermatite celíaca hepetiforme, sindrome da disfunção i-mune fadiga crônica (CFIDS), polineuropatia demielizante in-flamatória crônica (CIPD), penfigoide cicatricial, doença daaglutinação fria, sindrome crest, doença de Crohn, doença deDegos, dermatomiosite juvenil, lúpus discóide, crioglobuli-nemia mista essencial, fibromialgia-fibromiosotis, doença deGraves, sindrome de Guillain-Barre, tiroidite de Hashimoto,fibrose pulmonar idiopática, púrpura trambocitopênica idio-pática (ITP), Neuropatia IgA, diabetes mellitus dependentede insulina (diabetes do tipo I), artrite crônica juvenil(doença de Still), artrite reumatóide juvenil, doença deMénière, doença do tecido conjuntivo mista, esclerose múlti-pla, miastenia grave, anemia perniciosa, poliartrite nodosa,policondrite, sindrome poliglandular, polimialgia reumática,polimiosite e dermatomiosite,agamaglobulemia primária, cir-rose biliar primária, psoriase, artrite psoriática, fenômenode Raynaud, sindrome de Reiter, febre reumática, artritereumatóide, sarcoidose, esclerodermia (esclerose sistêmicaprogressiva (PSS), também conhecida como esclerose sistêmica(SS)), sindrome de Sjogren, sindrome de Stiff-man, lúpussistêmico eritomatoso, artrite de Takayasa, artrite tempo-ral/artrite de célula gigante, colite ulcerativa, uveite,vitiligo e granulomatose de Wegener.

Doenças inflamatórias, incluindo, por exemplo, do-enças inflamatórias crônicas e agudas. Exemplos de doençasinflamatórias incluem Mal de Alzheimer, asma, alergia atópi-ca, alergia, aterosclerose, asma brônquica, eczema, glomeru-lonefrite, enxerto vs. doença do hospedeiro, anemias hemolí-ticas, osteoartrite, sepse, infarto, transplante de órgãos etecidos, vasculite, rinopatia diabética e lesão pulmonar in-duzida por ventilação.

As formulações do anticorpo anti-CD3 são adminis-tradas a um sujeito sofrendo de uma doença relacionada aosistema imune, como uma doença auto-imune ou uma doença in-flamatória. Um sujeito sofrendo de uma doença auto-imune ouuma doença inflamatória é identificado pelos métodos conhe-cidos na área. Por exemplo, sujeitos sofrendo de uma doençaauto-imune como a doença de Crohn, colite ulcerativa ou do-ença do intestino inflamatório, são identificadas usandoqualquer um de uma variedade de testes clínicos e/ou labora-toriais como, exame físico, exame radiológico, e análise desangue, urina e fezes para avaliar o estado do sistema imu-ne. Por exemplo, pacientes sofrendo de esclerose múltiplasão identificados, por exemplo usando imagem de ressonânciamagnética em busca da presença de lesões no sistema nervosocentral (SNC) que estejam disseminadas no tempo e espaço(isto é, ocorre em diferentes partes do SNC pelo menos comum espaço de três meses). Pacientes sofrendo de artrite reu-matóide são identificados usando, por exemplo, testes desangue e/ou raio χ ou outra avaliação de imagem. Pacientessofrendo de diabetes do tipo I são identificados, por exem-plo, quando qualquer três destes testes são positivos, se-guido de um segundo teste positivo em um dia diferente: (1)glicose plasmática no jejum maior ou igual a 126mg/dl comsintomas de diabetes; (2) glicose plasmática casual (medidaem qualquer momento do dia) maior ou igual a 200 mg/dl comos sintomas de diabetes ou (3) teste de tolerância a glicoseoral (OGTT) superior ou igual a 200mg/dl medido em um inter-valo de duas horas (o OGTT é dado em uma espaço de tempo detrês horas).

Administração da formulação do anticorpo anti-CD3a um paciente sofrendo de uma doença relacionada ao sistemaimune como uma doença auto-imune ou uma doença inflamatóriaconsiderada bem sucedida se qualquer um de uma variedade deresultados clínicos é obtido. Por exemplo,na administraçãoda formulação do anticorpo anti-CD3 a uma paciente sofrendode uma doença relacionada ao sistema imune como uma doençaauto-imune ou uma doença inflamatória considerada bem suce-dida se os sintomas associados com a doença forem aliviados,reduzidos, inibidos ou não progredirem para um estado pior.A administração da formulação do anticorpo anti-CD3 a umapaciente sofrendo de uma doença relacionada ao sistema imunecomo uma doença auto-imune ou uma doença inflamatória consi-derada bem sucedida se a doença, por exemplo, uma doença au-to-imune, entrar em remissão ou não progredir para um estadopior.As formulações de anticorpo anti-CD3 fornecidasaqui são usadas no tratamento, diagnóstico e/ou prevenção dadoença do intestino inflamatório (IBD). IBD é a inflamação eirritação crônica do tecido no trato gastrointestinal (GI).

IBD está associado com sintomas como cólica e dor abdominal,diarréia, sangramento retal, febre e contagem de leucócitoselevada. As formulações de anticorpo anti-CD3 fornecidas a-qui são administradas a um sujeito sofrendo de, diagnostica-do com ou predisposto a IBD. As formulações de anticorpo an-ti-CD3 fornecidas aqui são administradas em uma dose que ésuficiente para aliviar pelo menos um sintoma de IBD, paratratar IBD, para prevenir IBD e/ou para evitar que IBD pro-grida a outro estado da doença no sujeito. Por exemplo, aformulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma doseda faixa de 0,05 mg/dia e 10 mg/dia. Preferivelmente, a for-mulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose en-tre 0,5 mg/dia a 5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, a for-mulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose en-tre 0,1 mg/dia a 3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose selecionada de0.5 mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia,1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia,1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia,2.0 mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia,2.5 mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia,e 3.0 mg/dia.

Em outra modalidade, as formulações de anticorpoanti-CD3 fornecidas aqui são usadas no tratamento, diagnós-tico /ou prevenção de colite ulcerativa. Colite ulcerativa éuma irritação e inflamação crônica do colon. Colite ulcera-tiva está associada com sintomas como anemia, fadiga, perdade peso, perda de apetite, sangramento retal, perda de flui-do corporal e nutrientes, lesões na pele, dor nas juntas edeficiência de crescimento (especialmente em crianças). Asformulações de anticorpo anti-CD3 fornecidas aqui são admi-nistradas a um sujeito sofrendo de, diagnosticado com oupredisposto a colite ulcerativa. As formulações de anticorpoanti-CD3 fornecidas aqui são administradas em uma dose que ésuficiente para aliviar pelo menos um sintoma de colite ul-cerativa, para tratar colite ulcerativa, para prevenir coli-te ulcerativa e/ou para evitar que colite ulcerativa progri-da a outro estado da doença no sujeito. Por exemplo, a for-mulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose dafaixa de 0,05 mg/dia e 10 mg/dia. Preferivelmente, a formu-lação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre0,1 mg/dia a 5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, a formula-ção de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre0, 5 mg/dia a 3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação de anti-corpo anti-CD3 é administrada em uma dose selecionada de 0.5mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e3.0 mg/dia.Em outra modalidade, as formulações de anticorpoanti-CD3 fornecidas aqui são usadas no tratamento, diagnós-tico /ou prevenção de doença de Crohn. A doença de Crohn éuma irritação e inflamação crônica nos intestinos. A doençade Crohn está associada com sintomas como dor abdominal, di-arréia, perda de peso, perda de apetite, febre, suor notur-no, dor retal e sangramento retal. As formulações de anti-corpo anti-CD3 fornecidas aqui são administradas a um sujei-to sofrendo de, diagnosticado com ou predisposto a doença deCrohn. As formulações de anticorpo anti-CD3 fornecidas aquisão administradas em uma dose que é suficiente para aliviarpelo menos um sintoma de doença de Crohn, para tratar doençade Crohn, para prevenir doença de Crohn e/ou para evitar quedoença de Crohn progrida a outro estado da doença no sujei-to. Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 é admi-nistrada em uma dose da faixa de 0,05 mg/dia e 10 mg/dia.Preferivelmente, a formulação de anticorpo anti-CD3 é admi-nistrada em uma dose entre 0,1 mg/dia a 5,0 mg/dia, e maispreferivelmente, a formulação de anticorpo anti-CD3 é admi-nistrada em uma dose entre 0,5 mg/dia a 3,0 mg/dia. Por e-xemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 é administrada emuma dose selecionada de 0.5 mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia,0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia,1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia,25 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0 mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia,2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5 mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia,2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, é 3.0 mg/dia.Em outra modalidade, formulações de anticorpo an-ti-CD3 fornecidas aqui são usadas no tratamento, diagnósticoe/ou prevenção da esclerose múltipla (MS). MS é a uma doençacrônica e inflamatória que afeta o sistema nervoso central(SNC) . Os sintomas de MS incluem, por exemplo, mudança nassensações, problemas visuais, fraqueza muscular, depressão,dificuldades com a coordenação e fala e dor. As formulaçõesde anticorpo anti-CD3 fornecidas aqui são administradas a umsujeito sofrendo de, diagnosticado com ou predisposto a MS.As formulações de anticorpo anti-CD3 fornecidas aqui são ad-ministradas em uma dose que é suficiente para aliviar pelomenos um sintoma de MS, para tratar MS, para prevenir MSe/ou para evitar que MS progrida a outro estado da doença nosujeito. Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 éadministrada em uma dose da faixa de 0,05 mg/dia e 10mg/dia. Preferivelmente, a formulação de anticorpo anti-CD3é administrada em uma dose entre 0,1 mg/dia a 5,0 mg/dia, emais preferivelmente, a formulação de anticorpo anti-CD3 éadministrada em uma dose entre 0,5 mg/dia a 3,0 mg/dia. Porexemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 é administradaem uma dose selecionada de 0.5 mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0 mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5 mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e 3.0 mg/dia.

Em outra modalidade, formulações de anticorpo an-ti-CD3 fornecidas aqui são usadas no tratamento, diagnósticoe/ou prevenção da diabetes miellitus dependente de insulina(diabetes do Tipo I) . Diabetes do Tipo I é a uma doença ca-racterizada pela persistente hiperglicemia (níveis altos deaçúcar no sangue) resultante da secreção inadequada do hor-mônio insulina. Diabetes do tipo I é caracterizada pela per-da das células beta produtoras de insulina das ilhotas deLangerhans do pâncreas. Diabetes do tipo I é uma doença au-to-imune, na qual o sistema imune do próprio corpo ataca ascélulas beta nas ilhotas de Langerhans do pâncreas, destru-indo-as ou danificando-as suficientemente para reduzir oueliminar a produção de insulina. Os sintomas da diabetes doTipo I incluem, por exemplo, sede aumentada, aumento da fre-qüência da urina, perda de peso apesar do crescente apetite,náusea, vômito, dor abdominal e fadiga. As formulações deanticorpo anti-CD3 fornecidas aqui são administradas a umsujeito sofrendo de, diagnosticado com ou predisposto a dia-betes do Tipo I. As formulações de anticorpo anti-CD3 forne-cidas aqui são administradas em uma dose que é suficientepara aliviar pelo menos um sintoma de diabetes do Tipo I,para tratar diabetes do Tipo I, para prevenir diabetes doTipo I e/ou para evitar que diabetes do Tipo I progrida aoutro estado da doença no sujeito. Por exemplo, a formulaçãode anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose da faixa de0,05 mg/dia e 10 mg/dia. Preferivelmente, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,1mg/dia a 5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,5mg/dia a 3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação de anticorpoanti-CD3 é administrada em uma dose selecionada de 0.5mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e3.0 mg/dia.

Em outra modalidade, formulações de anticorpo an-ti-CD3 fornecidas aqui são usadas no tratamento, diagnósticoe/ou prevenção da artrite reumatóide (RA). Artrite reumatói-de é a uma doença que causa inflamação crônica das juntas.Artrite reumatóide também pode causar inflamação dos tecidosem volta das juntas, assim como outros órgãos no corpo. RAestá associadas com sintomas de MS fadiga, falta de apetite,febre baixa, dor nos músculos e juntas e enrijecimento. Asformulações de anticorpo anti-CD3 fornecidas aqui são admi-nistradas a um sujeito sofrendo de, diagnosticado com oupredisposto a RA. As formulações de anticorpo anti-CD3 for-necidas aqui são administradas em uma dose que é suficientepara aliviar pelo menos um sintoma de RA, para tratar RA,para prevenir RA e/ou para evitar que RA progrida a outroestado da doença no sujeito. Por exemplo, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose da faixa de0,05 mg/dia e 10 mg/dia. Preferivelmente, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,1mg/dia a 5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,5mg/dia a 3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação de anticorpoanti-CD3 é administrada em uma dose selecionada de 0.5mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e3.0 mg/dia.

A presente invenção também fornece métodos paratratar ou aliviar um sintoma associado com uma doença rela-cionada ao sistema imune ou um sintoma associado com a re-jeição de um órgão transplantado. Por exemplo, as formula-ções usadas aqui são usadas para tratar ou aliviar um sinto-ma de qualquer uma das doenças auto-imune e doença inflama-tórias citadas aqui.

As formulações terapêuticas usadas aqui também sãousadas como agentes imunossupressores em órgãos ou tecidostransplantados. Conforme usado aqui, "agente imunosupressor"se refere a um agente cuja ação no sistema imune leva a re-dução imediata ou retardada da atividade de pelo menos umavia envolvida em uma resposta imune, seja esta resposta é deocorrência natural ou acionada artificialmente, seja estaresposta ocorre como parte do sistema imune inato, do siste-ma imune adaptativo ou ambos. As formulações de anticorpoanti-CD3 imunosupressoras são administradas a um sujeito an-tes, durante e/ou após o transplante de órgão ou tecido. Porexemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 fornecida aqui éusada para tratar ou prevenir rejeição após o transplante deórgão ou tecido. Por exemplo, a formulação de anticorpo an-ti-CD3 é administrada em uma dose da faixa de 0,05 mg/dia e10 mg/dia. Preferivelmente, a formulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,1 mg/dia a 5,0mg/dia, e mais preferivelmente, a formulação de anticorpoanti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,5 mg/dia a 3,0mg/dia. Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 éadministrada em uma dose selecionada de 0.5 mg/dia, 0.6mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0 mg/dia, 2.1mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5 mg/dia, 2.6mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e 3.0 mg/dia.

Preferivelmente, as formulações de anticorpo anti-CD3 terapêutico fornecidas aqui são administradas a um su-jeito intravenosamente ou subcutaneamente. Outras vias deadministração estão contempladas. Por exemplo, as formula-ções de anticorpo anti-CD3 são administrados subcutaneamen-te, oralmente, parenteralmente, nasalmente, intramuscular-mente ou qualquer combinação destas rotas de administração.

Em uma modalidade, as formulações de anticorpo an-ti-CD3 usadas aqui são administradas em conjunto com um se-gundo agente como, por exemplo, GLP-I ou um composto de des-canso para célula beta (isto é, um composto que reduz ou i-nibe a liberação de insulina, como abridores de canal de po-tássio). Exemplos de compostos GLP-I adequados são descritosem, por exemplo, pedido de patente publicado U.S.20040037826, e composto de descanso para célula beta sãodescritos em pedido de patente U.S. 20030235583, cada um dosquais está incorporado aqui como referência em sua totalida-de .

Em outra modalidade, as formulações de anticorpoanti-CD3 usadas para tratar uma doença relacionada ao siste-ma imune são usadas em combinação de qualquer um de uma va-riedade de compostos anti-inflamatórios ou compostos imunos-supressores. Compostos adequados incluem, mas não se limitama metotrexato, ciclosporina A (incluindo, por exemplo, mi-croemulsao de ciclosporina), tracolimos, corticosteróides,estatina, interferon tipo I, Remicade (Infliximab), Enbrel(Etanercept) e Humira (Adalimumab).

Por exemplo, no tratamento de artrite reumatóide,as formulações de anticorpo anti-CD3 usadas aqui podem serco-administradas com corticosteróides, metotrexato, ciclos-15 porina A, estatina, Remicade (Infliximab), Enbrel (Etaner-cept) e/ou Humira (Adalimumab).

No tratamento de uveite, as formulações de anti-corpo anti—CD3 pode ser administrada em conjunção com, porexemplo, corticosteróides, metotrexato, ciclosporina A, ci-20 clofosfamida e/ou estatina. De modo semelhante, paciente comuma doença como a doença de Crohn ou psoriase podem ser tra-tados com uma combinação de uma composição de anticorpo an-ti-CD3 usada aqui e Remicade (Infliximab) e/ou Humira (Ada-limumab).

25 Pacientes com esclerose múltipla podem receber uma

combinação da composição de anticorpo anti-CD3 usada aqui emcombinação com, por exemplo, acetato de glatirâmero (Copaxo-na) , Interferon beta-la (Avonex), interferon beta-la (Re-bif) , interferon beta-lb (Betaseron ou Betaferon), mitoxan-trona (Novantrone), dexametasona (Decadron), metilpredniso-lona (Depo-Medrol), e/ou prednisona (Deltasone) e/ou estati-nas.

Em uma modalidade, as formulações de anticorpo an-ti-CD3 usadas aqui são administradas em conjunto com um se-gundo agente como, por exemplo, GLP-I ou composto de descan-so para célula beta, conforme descrito acima.

Em outra modalidade, as formulações de anticorpoanti-CD3 usadas aqui são administradas em conjunto com qual-quer um de uma variedade de compostos anti-inflamatóriose/ou imunossupressores. Compostos anti-inflamatórios e/ouimunossupressores adequados para o uso com anticorpos anti-CD3 usados aqui incluem, mas não se limitam a, metotrexato,ciclosporina A (incluindo, por exemplo, microemulsao de. ci-closporina), tacrolimus, corticosteróides e estatinas.

Em ainda outra modalidade usada aqui, uma composi-ção de anticorpo anti-CD3 é administrada a um indivíduo hu-mano pela detecção da presença de anticorpos auto-reativosno indivíduo humano. Tais anticorpos auto-reativos são co-nhecidos na área com afinidade de ligação a uma ou mais pro-teínas expressas endogenamente no indivíduo humano. Em umaspecto usado aqui, o indivíduo humano é testado para a pre-sença de anticorpos auto-reativos especificamente envolvidosem uma ou mais doenças auto-imunes são bem conhecidos na á-rea. Em uma modalidade específica, um paciente humano é tes-tado para a presença de anticorpos contra insulina, ácidoglutâmico descarboxilase e/ou proteína IA-2 e subsequente-mente administrado com um anticorpo anti-CD3 pela detecçãopositiva de um ou mais destes anticorpos auto-reativos.

Em outra modalidade usada aqui, uma composição deanticorpo anti-CD3 é administrada a sujeitos humanos paraprevenir, reduzir ou diminuir o recrutamento de células imu-nes nos tecidos humanos. Um anticorpo anti-CD3 usado aqui éadministrado a um sujeito em necessidade para evitar e tra-tar condições associadas com recrutamento de células imunesanormal ou desregulado em locais do tecido em doenças huma-nas.

Em outra modalidade usada aqui, uma composição deanticorpo anti-CD3 é administrada a sujeitos humanos paraprevenir, reduzir ou diminuir o extravasamento e diapedésede células imunes nos tecidos humanos. Portanto, os anticor-pos anti-CD3 usados aqui são administrados para evitar e/outratar condições associadas com infiltração de células imu-nes anormal ou desregulado em locais do tecido em doençashumanas.

Em outra modalidade usada aqui, uma composição deanticorpo anti-CD3 é administrada a sujeitos humanos paraprevenir, reduzir ou diminuir os efeitos mediados pela libe-ração de citocinas no corpo humano. O termo "citocina" serefere a todas as citocinas humanas conhecidas na área quese ligam aos receptores extracelulares na superfície celulare assim, modulam a função celular, incluindo mas não se li-mitando a IL-2, IFN-g, TNF-a, IL-4, IL- 5, IL-6, IL-9, IL-10, e IL-13.Em outra modalidade usada aqui, uma composição deanticorpo anti-CD3 é administrada a sujeitos humanos paraprevenir, reduzir ou diminuir os efeitos mediados pela libe-ração de receptores de citocinas no corpo humano. 0 termo"receptor de citocina" se refere a todos os receptores decitocina conhecidos na área que se ligam a uma ou mais cito-cina, conforme definido aqui, incluindo, mas não se limitan-do aos receptores das citocinas mencionadas anteriormente.Assim, um anticorpo anti-CD3 usado aqui é administrado paratratar e/ou prevenir condições mediadas pela ativação ou li-gação anormal de um ou mais receptores de citocinas no corpohumano. É previsto, também, que a administração d anticorpoanti_CD3 in vivo vai reduzir a sinalização intracelular me-diada pelo receptor de citocina no sujeito humano.

Em um aspecto usado aqui, uma composição do anti-corpo anti-CD3 é administrada a um sujeito humano pela redu-ção da função da célula beta pancreática aqui. Em uma moda-lidade, o indivíduo é testado para a função da célula beta,secreção de insulina ou níveis de peptídeo c como é conheci-do na área. Subseqüentemente, constatando-se a redução su-ficiente de um dos indicadores, o sujeito humano é adminis-trado com um regime de dose do anticorpo anti-CD3 para pre-venir mais progressos da destruição auto-imune da função dacélula beta.

Formulações de diagnóstico e profiláticas

As formulações de anticorpo anti-CD3 (também cha-mada de composições de anticorpo) fornecidas aqui são usadasem formulações diagnosticas e profiláticas. Em uma modalida-de, uma formulação Mab anti-CD3 fornecida aqui é administra-da a pacientes em risco de desenvolver uma das doenças auto-imune mencionadas anteriormente. A predisposição do pacientea uma ou mais das doenças auto-imunes mencionadas acima podeser determinada usando marcadores genotipicos, sorológicosou bioquímicos. Por exemplo, a presença em particular de au-to-anticorpos sorológicos dos subtipos HLA (contra insulina,GAD65 e IA-2) são indicativos de diabetes do Tipo I.

Em outra modalidade fornecida aqui, uma formulaçãode anticorpo anti-CD3 é administrada a indivíduos humanosdiagnosticados com um ou mais das doenças auto-imunes men-cionadas anteriormente. Pelo diagnóstico, um anticorpo anti-CD3 é administrado para reduzir ou reverter os efeitos daauto-imunidade. Em um destes exemplos, um indivíduo humanodiagnosticado com diabetes do tipo I é administrado com dosesuficiente de um anticorpo anti-CD3 para restaurar a funçãopancreática e minimizar o dano da infiltração auto-imune nopâncreas. Em outra modalidade, um indivíduo humano diagnos-ticado com artrite reumatóide é administrado com um anticor-po anti-CD3 para reduzir infiltração da célula imune e des-truição das juntas dos membros.

Preferivelmente, as formulações do anticorpo anti-CD3 terapêuticas, diagnosticas e/ou profiláticas fornecidasaqui são administradas a um sujeito intravenosamente ou sub-cutaneamente. Outras vias de administração estão contempla-das. Por exemplo, as formulações de anticorpo anti-CD3 sãoadministrados subcutaneamente, oralmente, parenteralmente,nasalmente, intramuscularmente ou qualquer combinação destasrotas de administração.

Todas as publicações e documentos de patentes ci-tados aqui estão incorporados como referência de modo quecada uma destas publicações ou documentos foi especificamen-te e individualmente indicada para ser incorporada aqui comoreferência. A citação das publicações e documentos de paten-te não tem a intenção de admitir que qualquer uma seja per-tinente na área, nem constitui admissão dos conteúdos ou da-tas das mesmas. A invenção descrita aqui para fins de des-crição deixará claro para os profissionais da área que a in-venção pode ser praticada em uma variedade de modalidades eque a descrição e exemplos abaixo são para fins de ilustra-ção e não limitações das reivindicações que se seguem.

EXEMPLOS

Os seguintes exemplos, incluindo os experimentosconduzidos e resultados obtidos são fornecidos apenas parafins ilustrativos e não devem ser construídos como limitan-tes da presente invenção.

EXEMPLO 1: Desenvolvimento da Formulação e Análise

No estudo de formulação fornecido aqui, a estabi-lidade de um anticorpo anti-CD3 em 20 formulações foi moni-torado em temperaturas definidas durante um período de trêsmeses. As formulações estudadas compreendem agentes de tam-ponamento acetato, citrato e fosfato mantendo uma faixa depH de 4,0 a 8,0 e incluem excipientes selecionados Tween 80,manitol, EDTA, cloreto de sódio e sacarose. As formulaçõesinvestigadas no estudo são mostradas na tabela abaixo:<table>table see original document page 52</column></row><table><table>table see original document page 53</column></row><table>

Uma variedade de métodos indicando estabilidadeforam usados para monitorar as diferentes propriedades físi-cas e químicas do produto. Estes métodos foram selecionadosdaqueles usados para teste de liberação em lote da integri-dade do produto e incluíam pH, concentração de proteína, a-parência visual, cromatografia de permeação em gel (GPHPLC), SDS PAGE (redutora e não redutora) e isoeletrofocali-zação. A estabilidade do produto foi avaliada em cada formu-lação na temperatura de armazenamento de 5 í 3°C e as tempe-raturas de armazenamento elevadas de 25 ± 3°C e 40 ± 3°C. Astemperaturas elevadas foram usadas para fornecer dados deestabilidade acelerada em cada formulação, que foram usadaspara apoiar a seleção ou formulação determinada dos dados emtempo real. Além disso, amostras foram armazenadas à 20 í5°C para investigar o efeito do congelamento-descongelamentona estabilidade da molécula.

Para investigar mais o efeito da formulação natendência do produto para agregar, amostras foram agitadaspor 48 horas em temperatura ambiente.

Os resultados gerados neste estudo para cada en-saio indicaram formulações candidatas onde nenhuma mudançamarcante ocorreu na temperatura de armazenagem pretendida ena temperatura aumentada onde as modificações eram pequenasquando comparado ao estudo inicial. Resumindo, os resultadosdo estudo sugeriram que as formulações de acetato F2, F3, F4e F5 em pH 5,5 eram as formulações candidatas mais apropria-das para o anticorpo anti-CD3. Subseqüentemente, acetato desódio 25 mM/ cloreto de sódio 125 mM/ Tween 80 0,02%, pH5,5foi selecionado como a formulação de tampão final para o an-ticorpo anti-CD3. As formulações fornecidas aqui tem um pHna faixa de 3,0 a 7,0. Preferivelmente, a formulação tem umpH na faixa de 5,0 a 6,0, e mais preferivelmente, a formula-ção tem um pH na faixa de 5,2 a 5,8, e mais preferivelmente,a formulação tem um pH na faixa de 5,4 a 5,6. Por exemplo,em uma modalidade, a formulação tem um pH de 5,5.

Exemplo 2: Dosagem para formulações de anticorpoanti-CD3

0 processo de seleção de dose descrito aqui foiusado para identificar doses que iriam englobar a janela te-rapêutica para as formulações de anticorpos anti-CD3 a sertestado em estudos maiores. Ao mesmo tempo, a dose inicial aser testada foi escolhida para não provocar mal aos pacien-tes .

Como alguns anticorpos monoclonais anti-CD3 des-critos aqui, por exemplo, 8F11, 15C3, 27H5 e 23F10, não fa-zem reação cruzada com espécies laboratoriais de CD3 "pa-drão", dados toxicológicos e de eficiência não podem ser ob-tidos em toxicologia e farmacologia pré-clinica. Especifica-mente, estudos GLP demonstraram que não há reação cruzadacom CD3 de camundongo, rato, coelho, macaco rhesus, macacocinomolgus e babuinos para alguns dos anticorpos monoclonaisanti-CD3 descritos aqui. 0 processo de seleção de dose foi,portanto, guiada pelos dados obtidos in vitro em linfócitosT humanos, comparando um anticorpo anti-CD3 que não faz rea-ção cruzada com as espécies CD3 de laboratório (isto é, um"anticorpo CD3 sem reação cruzada") com outros anticorposanti-CD3 atualmente marcados, usando a informação publicadanos anticorpos anti-CD3 que estão atualmente em desenvolvi-mento ou no mercado (veja, por exemplo, Orthoclone marketedsheet; Woodle Transplantation 1999; Friend Transplantation1999; Herald NEJM 2002; Keymeulen NEJM 2005):

• Doses clinicamente usadas para Orthoclone 0KT3,1ιΟΚΤ3γ1 (Ala-Ala) e ChAgIy CD3 foram efetivas em doses entre5 e 25 mg por injeção, para obter 80% ou mais modulação dasmoléculas de CD3 da superfície de linfócitos T e produzir umnível médio de soro de >800ng/mL;

• 0 tamanho do tratamento para Orthoclone 0KT3,hOKT3yl (Ala-Ala) e ChAgIy CD3 varia entre 10-14, 7-14 e 6dias consecutivos, respectivamente.Estudos in vitro avaliando a modulação dos re-ceptores CD3 e TCR nos linfócitos T humanos consistentementedemonstraram que o IC50 de um anticorpo anti-CD3 sem reaçãocruzada é 2-3 vezes maior que para Orthoclone;

Estudos in vitro para avaliar questões de segu-rança como CRS (sindrome da liberação de citocina) consis-tentemente demonstram que anticorpos anti-CD3 sem reaçãocruzada induzem pouco ou nenhum TNFa, IFNy, IL-6 ou IL-2quando comparado com Ortoclone após incubação com leucócitosdo sangue periférico humano. A indução de citocina por umanticorpo anti-CD3 sem reação cruzada é várias ordens demagnitude menos que para Orthoclone.

Portanto, para avaliar a eficiência terapêuticaimunológica e preliminar na janela terapêutica, pacientesreceberão 5 doses diárias consecutiva de um anticorpo anti-CD3 sem reação cruzada. 0 tamanho da dose, por cinco diasconsecutivos, em pacientes será entre 0,5 mg/dia e 5,0mg/dia, que é significativamente menor que a dose efetiva deOrthoclone, mas vai induzir um CRS mínimo, se algum. Prefe-rivelmente, o tamanho da dose, por cinco dias consecutivos,está entre 0,7 mg/dia e 2 mg/dia. Por exemplo, o tamanho dadose, por cinco dias consecutivos, é 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia,0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia,1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia,1.9 mg/dia, ou 2.0 mg/dia.

O tamanho da dose fornecido aqui resulta em CRSsignificativamente menos severo, baseado nos dados in vitro.EXEMPLO 3: Produção e Purificação das Formulaçõesde Anticorpo anti-CD3

Um diagrama de fluxo mostrando as etapas no pro-cesso geral de produção para anticorpos anti-CD3 é fornecidoabaixo. Os detalhes das etapas do processo e os controlesinternos do processo aplicados em cada etapa são apresenta-dos em formato tabular nas Tabelas 2-4.

Diagrama de fluxo do processo de produção para anticorpo anti-CD3

<table>table see original document page 57</column></row><table><table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table><table>table see original document page 60</column></row><table><table>table see original document page 61</column></row><table><table>table see original document page 62</column></row><table>

1-Necessário apenas se mais de um ciclo for reali-zado e os perfis de eluição não forem comparáveis apenas poranálise visualNo fim de cada etapa do processo de purificação eno momento de distribuir no recipiente do produto purifica-do, o produto do processo é filtrado 0,2 μπι. Para cada etapade purificação, o tempo entre a remoção do produto do arma-zenamento 5±3°C, a realização da etapa de purificação e oretorno do produto filtrado 0,2 μπι processado para a câmarafria não deve exceder 36 horas.

A composição do tampão da formulação final é a se-guinte:

Componente do Tampão ConcentraçãoAcetato de sódio 25 mMCloreto de sódio 125 mMPolisorbato 80 0,02% v/v

<table>table see original document page 63</column></row><table>

Materiais brutos usados no processo de produçãopara anticorpo anti-CD3Meio CM34, que contém soluções base, é usado du-rante a montagem do banco de células. 0 banco de célulasprincipal inicial é criopreservado em um meio CM34 suplemen-tado com sulfóxido de dimetil.

Meio CM41, contendo soluções e produtos químicosbase, é usado durante a preparação do inoculo. Adicionalmen-te, Suplemento E, que contém sais, é adicionado ao meio ba-sal antes do uso.

Meio CM42, que contém as soluções base, produtosquímicos e aminoácidos, é usado durante a etapa de fermenta-ção. 0 meio CM42 é suplementado com nutrientes SF31, SF32 eSuplemento E. Estes nutrientes contém pós base, sais, amino-ácidos, glicose, vitaminas, produtos químicos e elementostraço. Todos os aminoácidos usados nos meios e formulaçõesde nutrientes são derivados de fontes não animais.

EXEMPLO 4: Regime de tratamento para uso de formu-lações de anticorpo anti-CD3 no tratamento de doenças auto-imunes

Uma formulação de anticorpo anti-CD3, ou placeboequivalente, é administrada por infusão intravenosa nos diasde estudo 1 a 5, em uma dose na faixa de 0,05 mg/dia e 10mg/dia ou placebo. Preferivelmente, a formulação de anticor-po anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,1 mg/dia a5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, a formulação de anticor-po anti-CD3 é administrada em uma dose entre 0,5 mg/dia a3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3é administrada em uma dose selecionada de 0.5 mg/dia, 0.6mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia, 1.0 mg/dia, 1.1mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia, 1.5 mg/dia, 1.6

mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia, 2.0 mg/dia, 2.1

mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia, 2.5 mg/dia, 2.6

mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia, e 3.0 mg/dia.

Se um nível de dose é associado com uma modulaçãosignificativa do complexo CD3 nos linfócitos T e/ou com umasíndrome de liberação de citocina significativa, um ou maisnível de dose menor é testado no lugar de um ou mais nívelde dose maior. O nível de dose desejado da formulação do an-ticorpo anti-CD3 resulta em um nível de liberação de citoci-na que é menor do que 3 na escala de liberação de citocinada OMS. Os critérios para nível 3 na escala de sintomas daliberação de citocina segundo a OMS são mostrados na Tabelaabaixo.

TABELA 5: CRITÉRIOS DA ESCALA DE TOXICIDADE DA OMSSINTOMAS SEMELHANTES A GRIPE (sintomas da libera-ção de citocina)

<table>table see original document page 65</column></row><table><table>table see original document page 66</column></row><table>EXEMPLO 5: Regime de tratamento para uso das for-

mulações de anticorpo anti-CD3 no tratamento de rejeição atransplante

Uma formulação de anticorpo anti-CD3 é administra-da diariamente até que seja observado revestimento TCR-CD3/saturação superior a 50%. Por exemplo, a formulação deanticorpo anti-CD3 é administrada diariamente até que o ní-vel observado de revestimento TCR-CD3/saturação seja superi-or a 60%, superior a 70%, superior a 80%. A dose inicial es-tá na faixa de 0,05 mg/dia e 10 mg/dia. Preferivelmente, aformulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma doseentre 0,1 mg/dia a 5,0 mg/dia, e mais preferivelmente, aformulação de anticorpo anti-CD3 é administrada em uma doseentre 0,5 mg/dia a 3,0 mg/dia. Por exemplo, a formulação de15 anticorpo anti-CD3 é administrada em uma dose selecionada de0.5 mg/dia, 0.6 mg/dia, 0.7 mg/dia, 0.8 mg/dia, 0.9 mg/dia,1.0 mg/dia, 1.1 mg/dia, 1.2 mg/dia, 1.3 mg/dia, 1.4 mg/dia,1.5 mg/dia, 1.6 mg/dia, 1.7 mg/dia, 1.8 mg/dia, 1.9 mg/dia,2.0 mg/dia, 2.1 mg/dia, 2.2 mg/dia, 2.3 mg/dia, 2.4 mg/dia,2.5 mg/dia, 2.6 mg/dia, 2.7 mg/dia, 2.8 mg/dia, 2.9 mg/dia,e 3.0 mg/dia. Se a saturação de TCR-CD3 é menor de 50%, adose é aumentada a cada dia até que o alvo de revestimen-to/saturação seja alcançado. Uma vez que o alvo esteja al-cançado, a dose é mantida por 5 dias mas para uma duraçãomáxima do tratamento não superior a 8 dias.

A formulação de anticorpo anti-CD3 é administradapor infusão intravenosa (iv) . Preferivelmente, a infusão ivé uma infusão continua em um período de tempo entre 30 minu-tos e 3 horas, e mais preferivelmente entre 1 hora e 2 ho-ras. Por exemplo, a formulação de anticorpo anti-CD3 é admi-nistrada por infusão contínua por 2 horas a cada dia. Osprofissionais da área perceberão que o tempo de infusão ivcontínua está diretamente relacionado a dose da formulaçãoadministrada e o volume da bolsa iv. O cálculo do tempo ne-cessário para a infusão contínua para um dado nível de dosee volume da bolsa de iv está dentro das habilidades de umprofissional da área.

OUTRAS MODALIDADES

Embora a invenção tenha sido descrita em conjuntocom sua descrição detalhada, a descrição acima tem a inten-ção de ilustrar e não limitar o escopo da invenção, que édefinido pelo escopo das reivindicações, em anexo. Outrosaspectos, vantagens e modificações estão dentro do escopodas reivindicações abaixo.Listagem de seqüência

<110> NovXmtnune SA, et al.<120> Formulações de anticorpo anti-CD3

<130> 23135-410-061

<150> 60/716.311<151> 2005-09-12

<160> 74

<170> PatentIn version 3.2

<210> 1

<211> 354

<s212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

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<210> 2

<211> 118

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala. Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Gly Tyr20 25 30

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Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Ãsp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp. His Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr100 105 110

Leu Val Thr Vãl Ser Ser115

<210> 3<211> 324<212> DNA

<213> Homo sapiens ·

<400> 3

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<210> 4

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<212> PRT

<213 > Homo sapiens

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<210> 14

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<210> 15 .<211> 318<212> DNA<213> Homo sapiens

<400> 15 ·

gacatcgaga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgct gggccagtca gggcattagc'agttatttag cctggtatca gcaaaaacçà 120gcaaaagccc ctaagctctt catctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccctcacttt cggcggaggg 300accaaggtgg agatcaaa 318<210> 16

<211> 108

<212> PRT

<213> Homosapiens

<400> 16

Glu Ile Val Leu Thr Glix Ser Pro Arg Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lye Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Asp65 70 75 80

Piro .Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro85. 90 95

He Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys. 100 105

<210> 17<211> 106 :

<212> PRT ·.·'

<213? Homo sapièns

<400> 17

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15'

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile35 40 45

Tyr

Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Tbr Leu Thr Xle Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Xle Lys100 105

<2Ϊ0> 18

<211> 106

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 18

Asp Ile Vai Met Thr Gln Sér Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15

Aep Arg Val Thr Jle Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Ser Léu Gly Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Iló Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cye Glii Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105

<210> 19

<211> 106

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400>

19Asp Xle Gln Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Prò Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60

Ser Gly Sér Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105

<210>.<211><2Í2><213 >

<400> 20

Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 1 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile35 '40 45

Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80

20106PRT

' Homo sapiéns

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr85 90 : 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105

<210> 21

<211> 354

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 21 >

çaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccágc ccgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgtag cgtctggatt cacctteagt agctatggca tgcacfcgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtgg^agct atatggtata atggaàgaaa acaagactat . 180

gcagactccg tgaagggc.cg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 24Ó

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attàctgtac gaggggaact. 300

gggtacaatt ggttcgacçc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210 > 22

<211> 118

<212> PRT ·

<213> Homo sapiens

<400> 22

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Airgi 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 i 45

Ala Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala, Asp Ser Val50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Thr Arg Gly Thur GIy Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln GlylThr100 10.5 lio

Leu Val Thr Val Ser Ser115

<210> 23

<211> 321

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 23

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctçcagggga aagagccacc /" 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 12 0

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggçcactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 24Ό

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcág cgtagcaact ggccgtggac gttcggçcaa 3Ó0

gggaccaagg tggaaatcaa a 32i

<210> 24

<211>321

<212> DKA

<213 > Horao sapiens

<400> 24

gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtatgaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gàtetãtgat gççtccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 2 4 Ó

gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accctatcac cttcggccaa 300

gggacacgac tggagattaa a 32i

<210> 25

<211> 107

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 25

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu ser Pro Gly15 10 15Glu Axg AIa Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr20 25 30

Beu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg. Leu Leu Ile35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly50 55 60

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val100

<210><211><212><213>

<400> 26

Ala Ile Gln Leu Thr Glxi Ser Pró Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 ' 10 ■ 15

Asp Arg VaI Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Alá20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Bys Leu Leu Ile35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile85 90 95

Ser Gly Ser Gly65

Glu Ile Lye105

26

107

PRT

Homo sapiensThr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys100 105

<210><2 Ili<212><213>

<400> 27

Gly Tyr Gly Met His1 5

<210> 28

<211> 17

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 28

Val Xle Trp Tyr Asp Gly Ser .Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Vai. Lys

1 5 . " ; ■ 10 15

Gly

<210> 29 '

<211> 9

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 29

Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp tiéu:• 1 5

<210> 30

<211> 11

<212 >. PRT

<213> Homo sapiens

<400> 30

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala1 5 10

317

PRT

275.

PRT

Homo sapiens

<210><211><212><213> Homo sapiens<400? 31

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr1 5

<210><211><212 ><213>

<400> 32

Gln. Glii Arg Ser Abii Trp Pro Pro Leu Thr1 5 10

<210> 33

<211> 5

<2X2> PRT

<213;» Homo sapiens

<40Ò> 33

Ser Tyr Gly Met His1 5

<210> 34

<211> 17

<212> PRT

<213» Homo sapiens

<400> 34

Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15

Gly

<210><211><212><213>

<400>

3210PRT

Homo sapiens

359

PRT

Homo sapiens35

Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro1 5<210> 36

<211> 12

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 36

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala1 5 10

<210> 37

<211> 7

<212 > PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3 7

Gly Ala Ser Ser Arg Alá Thr1 5

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 38

Gln Gln Tyr Giy Ser Ser Pro Xle Thr1 . 5

<210> 39

<211> 11 .

<212 > PRT ;

<213> Homo sapiens

<400> 39

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala1 5 10

<210> 40

<211> 7

<212> PRT

<213?· Homo sapiens

<400? 40

Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser1 5

<210> 41<211> 8

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 41

Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr1 5

<210> 42

c211> 7

<212> PRT

<213> Horoo sapiens

<4Õ0> 42

Asp Ala Ser Ser Leu Gly Ser1 5

<210><211><212><213>

<400> 43

Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala1 5 10

<210> 44

<211> 17

<212> PRT

<213 > Homo sapiens

<400> 44

Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15

Gly

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 45

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp Thr1 5

4311PRT

Homo sapiens<210> 49

<211> 16

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 49

Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10 15

<210> 50

<211> 17

<212 > PRT

<213> Homo sapiens

<400> 50

Tyr Trp Tyx Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leii Val Thr Val Ser1 5 10 15

Ser

<210> 51

<211> 12

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 51

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys1 5 10

<210> 52

<211> 12

<212?· PRT

<213> Homo sapiens

<400> 52

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys1 5 10

<210> 53

<211> 95

<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 53

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala20 25 30

Leti Àla Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie35 40 45

Tyr Ãsp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro85 90 . 95

<210> 54

<211> 12

<212> PRT ·

<213> Homo sápiens

<400> 54

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 55

<211> 96

<212> PRT

<213> Hotno sapiens

<400> 55

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 '25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly He Pro Asp Arg Phe Ser50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu. Thr Xle Ser Arg Leu Glu65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser ProB5 90 95

<210> 56

<211> 95

<2X2> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 56

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 ; 5 10 · 15

Glu - Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 'Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr20 25 . 30

Leu Alá Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln- Ala Pro Arg Leu Leu Ile35 ■ 40 - ' 45

Tyr Asp Ala Ser Ásn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro55 . 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser ASn Trp Pro85 90* 95

<210> 57

<211> 17

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 57

Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly1 5 10 I5

Thr<210><211><212><213>

<4OO> 58

Tyr Gly Met His1

<210> 59

<211> 5

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 59

Asp Ser Val Lys Gly1 5

<210><211><212><213>

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> onde χ έ qualquer aminoácido

<22O> . .

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(9)

<223> onde χ é qualquer aminoácido V

<220>

<221> MISC_FEATÜRE<222> (11)..(11)<223 > onde χ é qualquer aminoácido

<4Ò0> 60

Ile Trp Tyr Xaa Gly Xaa Xàa Xaa Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

619

PRT

Homo sapiexis

584

PRT

Homo sapiens

6016PRT

Homo sapiens

<2l0><211><212><213><220>

<221> MISC_FEATÜRE

<222> (1)..(2>

<223> onde χ é qualquer aminoácido

<220>

<221> MISC_FEATÜRE

<222> (5) - - (6)

<223> onde χ é qualquer aminoácido

<220>

<221> MIS C_FEATÜRE

<222> (9). . (9)

<223> onde χ é qualquer aminoácido

<400> 61

Xaa Xaa Gly Tyr Xaa Xaa Phe Asp Xaa

1 5

<210> 62

<211> 9

<212> PRT

<2Í3> Homo sapieiis

<400> 62

Gly Thr Gly Tyr Aèn Trp Phe Asp Pro1 5

<210> 63

<2X1> 9

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<40 0> 63

Gln Met Gly Tyr Trp His Phé Asp Leu

<210> 64

<211> 5

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 64

Val Thr Val Ser Ser1 5

<210> 65<211> 8

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<4Ò0> 65

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser1 5

<210> 66

<211> 11

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 66

Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser1 5 10

<210> 67<211> 4X2<212> DNA .<213> Homo sapiens

<400> 67 .··..,./".■■:'·.'..'■

fcgattcatgg agaaatagag agactgagtg tgagtgaaca tgagtgagaa aaactggatt 60.

tgtgtggcat tttctgataa eggtgrtcctt. ctgtttgcag gtgtccagtg tcaggtgcag 120ctggtggágt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca 180gcgtctggat tcaccttcag tagctátggc átgcactggg tccgccaggc tccaggcaag 240gggctggagt gggtggcagt tatatggtat gatggaagta ataaatacta tgcagactcc 300gtgaagggcc gattcaccat ctccágagac aattccaaga ácacgctgtá tctgcaaatg 360aacagcctga gagccgagga cacggctgtg tattactgtg cgagagacac ag _ 412

<210> 68

<211> 50

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 68

Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln1 5 10 15

Pro Gly Arg

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe20 25 30Ser Ser Tyr GXy Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Beu35 40 45

GlU Trp50

<210> 69

<211> 17

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<40 0> 69

Ala Ile Trp Tyr Asn Gly Arg Lys Gln Asp Tyr Ala Ksp Ser Val Lys1 5 10 15

Gly

<230 > 70

<211> 17

<212> PRT

<213 > Homo sapiens

<400> 70

Ile Ile Trp Tyr Asp Gly .Set Lys Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15

Gly

<210> 71

<211> 17

<212> PRT

<213 > Homo sapiens

<400> 71

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Vál Asp Ser Val Lys15 10 15

Gly

<210> 72<211> 17<212 > PRT

<213> Homo sapiens

<400> 72

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15

Gly

<210> 73

<211> 13

<212> PRT

<213> Horao sapiens

<400> 73

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val1 5 10

<210> 74

<211> 31

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 74

Arg Phe Thx Xle Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn THr Lèu Tyr Leu Gln1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala20 25 30

Claims (40)

1. Formulação farmacêutica de um anticorpo anti-CD3 CARACTERIZADO por consistir essencialmente de:a. um agente de tamponamento de pH efetivo na fai-xa de 3,0 a 6,2;b. um sal;c. um surfactante; ed. uma quantidade farmaceuticamente efetiva de umanticorpo anti-CD3.

2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do sal ser cloreto de sódio.

3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do citado surfactante ser um surfac-tante iônico, aniônico ou zwitteriônico.

4. Formulação, de "acordo com a reivindicação 3,CARACTERIZADA pelo fato do citado surfactante iônico ser umpolisorbato.

5. Formulação, de acordo com a reivindicação 4,CARACTERIZADA pelo fato do citado polisorbato ser polisorba-to 80.

6. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH serefetivo em uma faixa de 10 mM a 50 mM.

7. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um pH na faixa de 5,0 a 6,0.

8. Formulação, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um pH na faixa de 5,2 a 5,8.

9. Formulação, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um pH na faixa de 5,4 a 5,6.

10. Formulação, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um pH de 5,5.

11. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH com-preender acetato de sódio.

12. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do sal estar na faixa de 100 mM a140 mM.

13. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do surfactante estar numa concentra-ção de 0,02% peso/volume.

14. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato da quantidade farmaceuticamente efe-tiva do anticorpo anti-CD3 ser formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,05 mg a 10 mg do anticorpoanti-CD3.

15. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato da quantidade farmaceuticamente efe-tiva do anticorpo anti-CD3 ser formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,lmg a 5,0 mg do anticorpoanti-CD3.

16. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato da quantidade farmaceuticamente efe-tiva do anticorpo anti-CD3 ser formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,5mg a 3,0 mg do anticorpoanti-CD3.

17. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato do anticorpo anti-CD3 ser 28F11,-27H5, 23F10, 15C3, Orthoclone 0KT3, 0ΚΤ3γ1 (Η0ΚΤ3γ1) humanoou ChAglyCD3.

18. Formulação farmacêutica de um anticorpo anti-CD3 CARACTERIZADO por consistir essencialmente de':a. um agente tamponante de pH, compreendendo ace-tato de sódio, efetivo na faixa de 3,0 a 6,2;b. cloreto de sódio;c. um surfactante compreendendo um polisorbato; ed. uma quantidade farmaceuticamente efetiva de umanticorpo anti-CD3.

19. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato do citado polisorbato ser polisorbato 80.

20. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento ser eficazem uma faixa de 10 mM a 50 mM.

21. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um faixa de pH entre 5,0 e 6,0.

22. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um faixa de pH entre 5,2 e 5,8.

23. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um faixa de pH entre 5,4 e 5,6.

24. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,CARACTERIZADA pelo fato do agente de tamponamento de pH for-necer um pH de 5,5.

25. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato do sal estar na faixa de 100 mM a 140 mM.

26. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato do surfactante estar numa concentra-ção de 0,02% peso/volume.

27. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato da quantidade farmaceuticamente efe-tiva do anticorpo anti-CD3 ser formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,05 mg a 10 mg do anticorpoanti-CD3.

28. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato da quantidade farmaceuticamente efe-tiva do anticorpo anti-CD3 ser formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,1 mg a 5,0 mg do anticorpoanti-CD3.

29. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato da quantidade farmaceuticamente efe-tiva do anticorpo anti-CD3 ser formulada para fornecer umaquantidade por dose na faixa de 0,5 mg a 3,0 mg do anticorpoanti-CD3.

30. Formulação, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADA pelo fato do anticorpo anti-CD3 ser 28F11,-27H5, 23F10, 15C3, Orthoclone 0KT3, 0ΚΤ3γ1 (Η0ΚΤ3γ1) humanoou ChAglyCD3.

31. Formulação farmacêutica de um anticorpo anti-CD3 CARACTERIZADA por compreender:a. Uma quantidade efetiva por dose do anticorpoanti-CD3 na faixa de 0,5 mg a 3,0 mg;b. Acetato de sódio entre 1 mg e 3 mg;c. Cloreto de sódio entre 5 mg e 9 mg; ed. Polisorbato 80 entre 0,1 microgramas e 0,3 mi-crogramas,onde a citada formulação é ajustada para 1,0 mLcom água.

32. -Formulação farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 31, CARACTERIZADA pelo fato da citada formulaçãocompreender 2,05 mg de acetato de sódio, 7,31 mg de cloretode sódio e 0,216 microgramas de Polisorbato 80.

33. Formulação farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 31, CARACTERIZADA pelo fato da citada formulaçãoter um pH de 5,5.

34. Uso de um anticorpo anti-CD3, CARACTERIZADOpelo fato de ser na preparação de um medicamento para trataruma doença auto-imune ou doença inflamatória, formulado parafornecer uma quantidade por dose na faixa de 0,05 mg a 10 mgde anticorpo anti-CD3 por dia, por um período de cinco dias.

35. Uso, de acordo com a reivindicação 34,CARACTERIZADO pelo fato de que o medicamento é formulado pa-ra fornecer uma quantidade por dose na faixa de 0,1 mg a 5,0mg do anticorpo anti-CD3 por dia por um período de cinco di-as.

36. Uso, de acordo com a reivindicação 34,CARACTERIZADO pelo fato de que o medicamento é formulado pa-ra fornecer uma quantidade por dose na faixa de 0,5 mg a 3,0mg do anticorpo anti-CD3 por dia por um período de cinco di-as.

37. Uso, de acordo com a reivindicação 34,CARACTERIZADO pelo fato do medicamento ser para uso intrave-noso.

38. Uso de um anticorpo anti-CD3, CARACTERIZADO-15 pelo fato de ser na preparação de um medicamento para tratarou prevenir rejeição a transplante.

39. Uso, de acordo com a reivindicação 38,CARACTERIZADO pelo fato do medicamento ser para uso intrave-noso.

40. Uso, de acordo com a reivindicação 38,CARACTERIZADO pelo fato de que o medicamento resulta em umnível de liberação de citocina que é menor do que 3 na esca-la de toxicidade da OMS.