CN109475625A - 用于治疗脊髓性肌肉萎缩症的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本公开大体上涉及预防脊髓性肌肉萎缩症、降低发展脊髓性肌肉萎缩症的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症的方法，所述方法包括向受试者施用补体途径的抑制剂。

Description

用于治疗脊髓性肌肉萎缩症的组合物和方法
相关申请
本申请要求于2016年5月9日提交的美国临时申请62/333,348的权益，其特此通过引用被整体并入。
背景
神经退行性疾病是神经系统的衰竭性紊乱，其影响世界范围内大约3000万个体。在死亡率和受累者的护理成本两方面，神经退行性疾病的治疗是挑战性的，并且也是一种日益增长的健康问题。神经系统是身体的脆弱元件，并且具有有限的从急性损伤(如中风和脊髓损伤)或退行性疾病两者再生的能力。神经退行性疾病可以以脑和脊髓中神经元亚型的进行性丢失为特征，并且可以是散发性的或家族性的。神经退行性疾病症状的发作可以在任何时间出现，并且更常出现在中年或老年期。鉴于群体增加的寿命预期，这些疾病的发生率将增加。需要新的疗法来治疗神经退行性疾病。
脊髓性肌肉萎缩症(SMA)是一种临床异质性常染色体隐性神经肌肉疾病，其以脊髓中α运动神经元的变性为特征，造成进行性近端肌无力和麻痹。SMA主要在婴幼儿中被诊断，并且在成人中较少频率被诊断。预计的发生率为6000个活产中1个至10000个活产中1个，以及1/40-1/60的携带者频率。SMA代表了最致命的儿科病理学。SMA患者通常患有以近端肢体肌肉中为主的肌肉无力和萎缩。SMA表型通常与两个基因(运动神经元存活基因1(SMN1)和SMN2)的表达水平有关，其中表型由SMN1中的纯合子突变产生。基于发作年龄和实现的运动功能，表型被分类为四个严重程度的等级。
目前，唯一被批准的SMA的治疗是生物药物Spinraza(nusinersen)。Spinraza是一种基于内含子剪接沉默子N1(ISS-N1)靶标的反义药物。通过注射到脊髓周围的液体中施用Spinraza。然而，Spinraza的大多数临床试验已经集中于有症状的婴幼儿和已经被诊断患有SMA的儿童的治疗，此时许多变化已经发生在运动神经元中。此外，在动物研究中观察到神经系统中的毒性(神经毒性)。因此，存在对于新的疗法以预防SMA、降低发展SMA的风险、和治疗SMA的需要。
概述
本公开大体上针对预防脊髓性肌肉萎缩症(SMA)、降低发展脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的方法，所述方法包括向受试者施用补体途径的抑制剂。
尽管神经退行性疾病中存在多种病因，但是全部神经元中存在的一种细胞共性是突触。功能性突触的变性对于理解整体神经变性的主要机制是至关重要的。证据表明，神经肌肉突触中的缺陷是SMA疾病最早的病理指标之一。另一个实例是阿尔茨海默病(AD)，其中已经证明突触丢失先于神经元丢失。通过使神经元与补体途径的抑制剂或拮抗剂接触来抑制突触丢失。例如，抑制剂可以阻断补体级联的激活，可以阻断神经元中特定补体蛋白的表达，干扰诱导补体激活的信号分子，上调神经元中补体抑制剂的表达，或以另外的方式干扰突触丢失中补体的作用。防止突触丢失(例如在成人脑中)的能力对于在各种各样的神经退行性病况中维持正常神经元功能具有重要意义。
因此，补体激活途径的抑制可以是有前景的用于预防脊髓性肌肉萎缩症、降低发展脊髓性肌肉萎缩症的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症的治疗策略，例如，使用抗体抑制补体激活的早期阶段(包含补体激活途径)。具体地，抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、和抗-C1s抗体可以防止自身抗体触发补体激活的经典途径，并且防止由补体因子的神经元表达造成的突触丢失。
本公开内容大体上针对通过抑制补体激活预防脊髓性肌肉萎缩症、降低发展脊髓性肌肉萎缩症的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症的方法，例如，通过抑制补体因子C1q、C1r、或C1s(例如，通过与这些补体因子中的一个或更多个结合的抗体(如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等)的施用)。
人类补体最初被定义为血浆的热不稳定成分，其“补充”体液系统并且辅助细菌的抗体依赖性杀死。现在已知补体是在血液中循环或附连至膜表面的超过30种蛋白质的严格调节的蛋白水解网络，其协调哺乳动物先天性免疫中的关键作用，特别是因为其与炎症和身体对入侵生物体的防御相关。补体蛋白由许多细胞类型产生并且具有多种协同功能。例如，补体参与自身抗原和凋亡细胞的清除，形成向适应性免疫的桥梁，并且还在组织再生和肿瘤生长中发挥重要作用。为了实行这些功能，补体系统依赖于可溶性蛋白和细胞表面结合蛋白的相互作用，所述可溶性蛋白和细胞表面结合蛋白与病原体细胞表面相互作用以标记它们用于通过吞噬细胞的摧毁。补体系统由主要通过肝脏产生的大量不同的血浆蛋白组成。这些蛋白中的一些是一类被称为酶原的蛋白酶，所述蛋白酶自身通过蛋白水解裂解被激活。这些酶原可以以无活性形式广泛地分布直到检测到入侵病原体。因此，补体系统通过触发的酶级联反应被激活。
补体激活通过三个途径被引发：经典途径、旁路途径和凝集素途径。全部三个途径通过模式识别蛋白的表面结构的检测被引发。此外，全部三个途径通过共同的交集(补体C3)汇合。C3是急性期反应物。尽管少量也通过激活的单核细胞和巨噬细胞产生，但是肝脏是主要的合成位点。细胞内发现大约200kD的单链前体(pro-C3)；cDNA显示其包括1663个氨基酸。这通过蛋白水解裂解被加工成α亚基和β亚基，在成熟蛋白质中，所述α亚基和所述β亚基通过二硫键连接。Pro-C3含有22个氨基酸残基的信号肽、β链(645个残基)和α链(992个残基)。2个链通过4个精氨酸残基(不存在于成熟蛋白质中)连接。
经典途径通过补体蛋白C1q直接与表面结合抗体(IgM和IgG)的斑的结合，以及还与细胞、突触和微生物的表面上的C-反应性蛋白、血清淀粉样蛋白P、正五聚蛋白3和其他已知和未知的结合位点的结合被激活。
凝集素途径通过甘露糖结合凝集素(MBL)与两种命名为MASP-1和MASP-2的血清丝氨酸蛋白酶结合而被激活。MBL是一种急性期蛋白，并且其在补体途径中的功能类似于C1q，其在结构上类似。MBL与细胞或病原体的碳水化合物表面结合后，MASP-1和MASP-2与MBL结合，并且该结合引起C4和C2的裂解和激活。MASP-1蛋白和MASP-2蛋白在结构上与C1r和C1s相似，并且模拟它们的活性。与经典补体途径类似，凝集素补体途径也需要C4和C2用于C3的激活和级联中更下游的其他末端成分。
补体途径的激活生成补体蛋白的生物活性片段，例如，C3a过敏毒素、C4a过敏毒素和C5a过敏毒素以及sC5b-9膜攻击复合物(MAC)，其介导涉及白细胞趋化性、巨噬细胞的激活、中性粒细胞、血小板、肥大细胞和内皮细胞、增加的血管通透性，细胞溶解和组织损伤的炎性活性。与细胞表面抗原结合的抗体也可以激活补体系统，在外来细胞的膜中产生孔，或者其可以通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)介导细胞破坏。在该过程中，具有Fc受体的细胞毒性细胞与靶标细胞上的抗体的Fc区结合并且促进细胞的杀死。与外来细胞结合的抗体也可以作为调理素，使具有Fc受体或C3b受体的吞噬细胞能够结合并且吞噬抗体包被的细胞。
C1q是460kDa的大型多聚体蛋白，由18个多肽链(6个C1q A链，6个C1q B链和6个C1q C链)组成。C1r和C1s补体蛋白与C1q尾区结合以形成C1复合物(C1qr2s2)。C1q复合物与细胞的表面或与抗体Fc区的补体结合域的结合诱导C1q中的构象改变，所述构象改变导致C1r中的自催化酶活性的激活，然后其切割C1s以生成活性丝氨酸蛋白酶。一旦激活，C1s切割C4，产生C4b，C4b转而与C2结合。C2被C1s切割，产生与C4b结合的被激活的形式C2a，并且形成经典途径的C3转化酶(C4b2a)。最终该途径导致裂解和杀死感染的细胞的膜攻击复合物的形成。
C3是每个补体途径的主要成分，并且对于先天性和适应性免疫应答两者中的补体系统是至关重要的。C3b是补体系统的主要效应分子之一，并且在氨基酸Cys(988)和Glu(991)之间的C3b的裂解造成高反应性硫酯的释放，其使C3b能够经由转乙酰作用与细胞表面结合(根据不含信号肽的成熟蛋白质序列编号)。此外，附加的结合位点的裂解允许C3b与数种调节蛋白和/或补体蛋白相互作用，附加的结合位点包括CR1(CD35)或因子H(两者都是通过蛋白酶因子I裂解的辅因子)的结合位点。因子I切割在Arg(1281)和Ser(1282)以及Arg(1298)和Ser(1299)之间的C3b，由此生成片段C3f和C3bi。C3bi能够保持附连于病原体的表面，在该处其被CR3(CD11b/CD18)识别，其在巨噬细胞和杀伤细胞上被表达。随后，CR3介导病原体的吞噬作用和破坏。与CR1结合，因子I可以附加地在氨基酸Arg(932)和Glu(933)之间切割，从而形成C3dg和C3c。C3dg也能够保留在表面上以被CR2(CD21)识别，其在B-淋巴细胞和树突细胞(DC)上被表达。
C4是以大约350μg/ml的浓度存在于血浆中的～200kDa的三链糖蛋白。C4作为经典补体途径激活序列中的第二补体蛋白起作用。适当的抗体与底物的结合导致C1复合物的结合和激活。激活的C1转而从C4α链的N-末端切割C4a。这样的裂解暴露内部硫酯，其连接C4α亚基的C4d区内991和994位点处的氨基酸。一旦暴露，该高反应性基团经历亲核攻击以与靶标底物形成共价键。C4、C4b的主要片段在C4a的裂解和释放后与靶标底物共价结合，并且作为经典途径的C2的受体起作用。C2与C4b结合并且转而被活性C1切割以继续补体级联。
补体的非特异性在于其可以攻击外来入侵者和宿主细胞两者。在正常条件下，通过各种各样的流动相和膜结合补体调节蛋白(如C1抑制剂(C1-Inh))保护宿主细胞(包含神经元)免受潜在的补体介导的损坏。C1-INH使C1r和C1s从活性C1复合物解离，其保护宿主细胞免受来自膜攻击复合物的裂解或损坏。保护免受潜在的补体介导的损坏的其他蛋白质包含C4b结合蛋白(C4BP)、因子H(FH)、补体受体1(CR1；CD35)、补体受体Ig(CRIg)、衰变加速因子(DAF；CD55)、膜辅因子蛋白(MCP；CD46)和CD59。然而，这些成分的缺乏或者响应于某些病理状态的补体的过度激活可以挫败该保护机制。这样的失衡的激活已经与越来越多的疾病和病理紊乱有关。
例如，各种各样的补体成分通过神经元和神经胶质细胞在体外和在体内被表达。虽然其在脑中的功能是未知的，但是在脑损伤之后或在神经退行性疾病病理过程期间，这些补体蛋白中的许多的表达通过血清或炎性细胞因子被上调。培养基中的星形细胞已经被报道表达C1q、C1r、C1s、C4、C2和C3，以及更多的末端补体蛋白。神经元已经被报道表达C4和C3。C1q被证明在神经元突触中被表达，并且标记这些突触用于消除。参见，例如，美国专利公布号2012/0195880和2012/328601。虽然选择性突触丢失是正常脑发育的必要的方面(“突触修剪”)，但过度的突触丢失(特别是在成熟的或老化的脑中)造成神经变性和认知减退。升高的突触补体积累有助于在正常的老化中和神经退行性疾病进展中的突触丢失。相反，降低补体表达是神经保护性的。受突触丢失影响的神经元可以是中枢神经系统神经元，或外周神经系统神经元。
中和补体因子(如C1q、C1r、或C1s)的活性可以阻断补体激活、防止突触丢失和减缓如脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的紊乱中的神经退行性疾病进展。本文公开了与中和SMA中的补体因子(如C1q、C1r、或C1s)相关的方法。
本公开中提及的全部序列通过引用从WO 2015/006504、美国临时专利申请号62/075793、美国临时专利申请号62/261376、WO 2014/186599、美国专利号8,877,197(其中的每个由于其公开的抗体和相关的组合物特此以引用方式被并入)被并入。
在某些方面，本文公开预防SMA、降低发展SMA的风险、或治疗SMA的方法，所述方法包括向受试者施用补体途径的抑制剂。
本文公开抑制SMA中突触丢失的方法，所述方法包括向患有不利的突触丢失的患者施用抗体，如抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体。方法还可以包括神经祖细胞或神经发生增强剂的施用。在某些优选的实施方案中，抗体与C1q、C1r、或C1s结合，并且抑制补体激活。
全长抗体可以通过使用重组DNA工程技术被制备。这样的工程化形式包含例如通过对天然抗体的氨基酸序列的插入、缺失或改变从天然抗体可变区产生的那些。该类型的特定实例包含含有来自一个抗体的至少一个CDR和可选的一个或更多个骨架氨基酸以及来自第二抗体的可变区域的残余部分的那些工程化的可变区域。编码抗体的DNA可以通过缺失除了编码全长抗体的DNA的期望的部分外的全部被制备。通过重组大体上或专有地编码人恒定区的DNA和编码大体上或排他地源自非人哺乳动物的可变区的序列的可变区的DNA，可以制备编码嵌合抗体的DNA。通过重组编码大体上或专有地源自相应的人抗体区的恒定区和可变区(而非互补决定区(CDR))的DNA和编码大体上或专有地源自非人哺乳动物的CDR的DNA，可以制备编码人源化抗体的DNA。
编码抗体的DNA分子的适合的来源包含表达全长抗体的细胞，如杂交瘤。例如，可以从表达编码抗体重链和/或轻链的表达载体的宿主细胞分离抗体。
抗体片段也可以通过使用涉及编码抗体可变区和恒定区的DNA的操作和再表达的重组DNA技术制备。标准分子生物学技术可以被用于按照所期望的修饰、添加或缺失另外的氨基酸或域。对可变区或恒定区的任何改变仍然被本文所使用的术语‘可变’区和‘恒定’区所包括。在一些情况下，PCR被用于通过紧跟着编码CH1的链间半胱氨酸的密码子引入终止密码子来生成抗体片段，使得CH1域的翻译在链间半胱氨酸处终止。用于设计适合的PCR引物的方法是本领域公知的，并且抗体CH1域的序列是容易获得的。在一些实施方案中，可以使用定点诱变技术引入终止密码子。
本公开的抗体可以源自任何抗体同种型(“类”)(包含例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)及其子类(包含例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。在某些优选的实施方案中，抗体的重链和轻链来自鼠科IgG1。
在一些实施方案中，抑制剂是抗体，如抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体。抗-C1q抗体可以抑制C1q与自身抗体之间、或C1q与C1r之间、或C1q与C1s之间的相互作用。抗-C1r抗体可以抑制C1r和C1q之间、或C1r和C1s之间的相互作用。抗-C1r抗体可以抑制C1r的催化活性，或者抗-C1r抗体可以抑制pro-C1r到活性蛋白酶的加工。抗-C1s抗体可以抑制C1s和C1q之间、或C1s和C1r之间、或C1s和C2或C4之间的相互作用，或者抗-C1s抗体可以抑制C1s的催化活性，或者其可以抑制pro-C1s到活性蛋白酶的加工。在一些情况下，抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体引起C1q、C1r、或C1s从循环或组织的清除。
本文公开的抗体可以是单克隆抗体，例如，结合哺乳动物C1q、C1r、或C1s(优选地人C1q、C1r、或C1s)的单克隆抗体。抗体可以是小鼠抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、或抗体片段。本文公开的抗体也可以穿过血脑屏障(BBB)。抗体可以激活BBB受体介导的转运系统，如利用胰岛素受体、转铁蛋白受体、瘦素受体、LDL受体、或IGF受体的系统。抗体可以是具有足够人序列的嵌合抗体，其适合于向人施用。抗体可以是糖基化的或非糖基化的；在一些实施方案中，抗体是糖基化的，例如，通过CHO细胞中翻译后修饰产生的糖基化模式。
本公开的抗体也可以与治疗剂共价连接，如抗炎蛋白质、神经治疗剂、抗病毒药、抗寄生物药、抗菌药、内分泌药物、代谢药物、有丝分裂毒素(mitotoxin)、化学疗法药物、或siRNA，跨BBB或胎盘的转运对于所述治疗剂是期望的。抗体与例如神经治疗剂之间的共价连接可以是抗体的任何适合的部分与治疗剂之间的连接，只要其允许抗体-药剂融合穿过血脑屏障并且允许治疗剂在中枢神经系统中保留其活性的治疗有用的部分。例如，共价连接可以在抗体的一个或更多个轻链与治疗剂之间。在肽神经治疗剂(例如，神经营养素，如脑源性神经营养因子，BDNF)的情况下，肽可以通过其羧基或氨基末端共价连接至抗体的轻链(LC)或重链(HC)的羧基或氨基末端。
可以连接至本公开的抗体的其他神经治疗剂包含选自下列的神经营养素：脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养素-4/神经营养素-5、成纤维细胞生长因子(FGF)-2和其他FGF、神经营养素(NT)-3、红细胞生成素(EPO)、肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)-α、TGF-β、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)、睫状神经营养因子(CNTF)、神经胶质源性神经营养因子(GDNF)、神养蛋白(neurturin)、血小板源性生长因子(PDGF)、人表皮生长因子受体调节蛋白(heregulin)、神经调节素(neuregulin)、artemin、persephin、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子(CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF、导蛋白(netrins)、心肌营养素-1、刺猬因子(hedgehogs)、白血病抑制因子(LIF)、中期因子(midkine)、多效蛋白、骨形态生成蛋白(BMP)、导蛋白、鞘脂活化蛋白(saposins)、轴突导蛋白(semaphorins)或干细胞因子(SCF)。
抗体可以是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体，例如，第一抗原选自C1q、C1r、和C1s，和/或第二抗原是允许抗体穿过血-脑屏障的抗原，如选自转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导域、TAT、Syn-B、穿透蛋白(penetratin)、聚精氨酸肽、angiopep肽、或ANG1005的抗原。
本公开的抗体可以结合C1q、C1r、或C1，并且抑制C1q、C1r、或C1的生物活性。例如，(1)C1q与自身抗体结合，(2)C1q与C1r结合，(3)C1q与C1s结合，(4)C1q与磷脂酰丝氨酸结合，(5)C1q与正五聚蛋白-3结合，(6)C1q与C-反应蛋白(CRP)结合，(7)C1q与球形C1q受体(gC1qR)结合，(8)C1q与补体受体1(CR1)结合，(9)C1q与B-淀粉样蛋白结合，或(10)C1q与钙网蛋白结合。在其他的实施方案中，C1q的生物活性是(1)经典补体激活途径的激活，(2)抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性的激活，(3)CH50溶血，(4)突触丢失，(5)B-细胞抗体产生，(6)树突细胞成熟，(7)T-细胞增殖，(8)细胞因子产生，(9)小神经胶质细胞激活，(10)阿瑟氏反应，(11)突触或神经末梢的吞噬作用，或(12)补体受体3(CR3/C3)表达细胞的激活。
在一些实施方案中，CH50溶血包括人CH50溶血、小鼠CH50溶血和/或大鼠CH50溶血。在一些实施方案中，抗体能够中和从至少约50％到至少约95％的CH50溶血。抗体也可以能够以小于150ng、小于100ng、小于50ng或小于20ng的剂量中和至少50％的CH50溶血。
测量补体活性的其他体外测定包含用于测量补体成分的分裂产物或在补体激活期间形成的复合物的ELISA测定。经由经典途径的补体激活可以通过遵循血清中C4d和C4的水平来测量。可以通过评估循环中Bb或C3bBbP复合物的水平在ELISA中测量旁路途径的激活。体外抗体介导的补体激活测定也可以被用于评价C1q、C1r、或C1s产生的抑制。
本公开的抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人源化抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段。
本公开的抗体也可以是抗体片段，如Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、双体、或单链抗体分子。
本文公开了向受试者施用第二药剂(如第二抗体或第二抑制剂)的方法。抗体可以是抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体。抑制剂可以是抗体依赖性细胞毒性、旁路补体激活途径的抑制剂；和/或自身抗体与自身抗原之间相互作用的抑制剂。在替代性实施方案中，第二药剂可以是反义药物，如nusinersen。第二药剂优选与抗体联合施用。
在一些实施方案中，提供确定受试者的发展脊髓性肌肉萎缩症的风险的方法，所述方法包括：(a)向受试者施用抗体(即抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体)，其中抗体与可检测标记物偶联；(b)检测可检测标记物以测量受试者中C1q、C1r、或C1s的量或位置；以及(c)将C1q、C1r、或C1s中的一个或更多个的量或位置与参照比较，其中基于C1q、C1r、或C1s中的一个或更多个的量或位置与参照的比较，表征发展脊髓性肌肉萎缩症的风险。可检测标记物可以包括核酸、寡核苷酸、酶、放射性同位素、生物素或荧光标记物。在一些情况下，可以使用生物素酰基化方法用辅酶(如生物素)标记抗体。当生物素被用作标记物时，通过添加蛋白质(如抗生物素蛋白或其细菌对应物抗生蛋白链菌素，其中两者中的任何一个可以与可检测标记(如上文提及的染料、荧光标记(如荧光素)、放射性同位素或酶(如过氧化酶))结合)完成抗体的检测。在一些实施方案中，抗体是抗体片段(例如，Fab片段、Fab’-SH片段、Fv片段、scFv片段或F(ab’)2片段)。
本文公开的抗体也可以被偶联至标记基团，例如，放射性同位素、放射性核素、酶促基团、生物素基团、核酸、寡核苷酸、酶或荧光标记物。标记基团可以经由任何合适长度的间隔臂偶联至抗体，以降低潜在的空间位阻。用于标记蛋白质的各种各样的方法是本领域已知的，并且可以被用于制备这样的被标记的抗体。
预期了各种各样的施用途径。这样的施用方法包含但不限于局部、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、鞘内、鼻内和病灶内施用。肠胃外输注包含肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。对于中枢神经系统病况的治疗，抗体可以适应于在非侵入性外周施用途径(如静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内或甚至口服施用)之后穿过血-脑屏障。
本公开也提供通过下列检测个体中突触的方法：a)向受试者施用来自任何实施方案的抗体，其中所述抗体被偶联至可检测标记物；(b)检测可检测标记物以测量受试者中抗体的量或位置；(c)将抗体的量或位置与参照比较，其中基于相比于参照的抗体量的比较，表征发展与补体激活有关的疾病的风险。例如，可检测标记物可以包括核酸、寡核苷酸、酶、放射性同位素、生物素或荧光标记物(例如，荧光素、罗丹明、花青染料或BODIPY)。可以使用用于X射线、CT、MRI、超声、PET和SPECT的显像剂检测可检测标记物。
应被理解的是，本文描述的各种各样的实施方案的性质中的一个、一些或全部可以被组合，以形成本文提供的组合物和方法的其他实施方案。与本发明有关的实施方案的全部组合被本发明具体包含，并且在本文中被公开，就好像各个和每个组合被单独地且明确地公开一样。此外，各种各样的实施方案及其元素的全部子组合也被本发明具体包含，并且在本文中被公开，就好像各个和每个这样的子组合被单独地且明确地在本文中被公开一样。本文提供的组合物和方法的这些方面和其他方面对于本领域技术人员而言将变得显而易见。
本文讨论的出版物仅为了其在本申请的提交日之前的公开内容而被提供。本文中的任何内容均不应被解释为承认本发明无权凭借在先发明而先于这样的出版物。此外，提供的出版日期可以与实际出版日期不同，其可能需要单独确认。
附图说明
图1描述了抗-C1q抗体作为针对突触丢失的保护剂。抗体经由外周施用被给予。
图2描述了当抗-C1q被施用时，改进的肌肉活性、运动以及延长的存活。
图3描述了用M1抗体处理(自出生后第0天至第12天，每两天腹腔内注射100mg/KgM1抗体)的SMNΔ7小鼠展现出生存期的提高和体重增加。
图4描述了SMN缺陷的SMNΔ7小鼠，并且示出C1q如何标记运动神经上的突触以及以较小的程度标记发育正常(WT)的突触。在出生后第4天，L4级腰椎中的运动神经元示出用C1q标记(红色)，并且突触示出用突触素标记(绿色)。
图5描述了用抗体M1处理的SMNΔ7小鼠，示出救援运动神经元上的本体感受突触。脊髓中的运动神经元(红色)和用vGlut1标记的突触(白色)。M1导致SMA小鼠中本体感受突触的救援。
图6由两幅图片(A)和(B)组成。图6示出脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的概观。患者在运动神经元存活基因1(SMN1)中具有常染色体隐性突变，导致全长SMN蛋白水平不足(图6A)。SMN-Δ7小鼠模型接近地概括了最严重的SMA患者的临床情况(图6B)。突变小鼠表达人SMN2的2转基因拷贝(SMN-Δ7)。SMA小鼠在出生后存活～2周，并且展现出严重的运动功能障碍和姿态缺陷以及脊柱反射缺陷(图6B)。
图7由两幅图片(A)和(B)组成。图7示出SMA中的运动回路功能障碍。图7A示出在运动神经元的选择性丢失之前，如何在SMA运动神经元上发生感觉本体感受突触的显著丢失。两个事件均导致脊柱反射的功能障碍。图7B示出运动神经元突触(蓝色)和感觉神经元突触(绿色)。
图8描述了C1q优选标记SMA中的兴奋性突触。在SMA中，C1q频繁地标记胞体和邻近树突两者上SMN缺陷的运动神经元上的VgluT1突触。然而，抑制性突触很少被标记。免疫反应实验揭示了WT脊髓和SMA脊髓(L1)两者中C1q的存在。在WT中，C1q很少标记感觉突触。
图9示出C3也标记SMA中的兴奋性突触。C3频繁地标记SMA运动神经元上的VgluT1突触。这样的结果证明，SMN缺陷的兴奋性突触被C1q和C3两者标记，表明了补体级联激活。
图10示出小神经胶质细胞介导SMA中的突触消除。针对小神经胶质细胞免疫反应性的形态学实验揭示了小神经胶质细胞内部的VGluT1突触。这样的结果表明，小神经胶质细胞介导SMA运动神经元中的突触消除。
图11示出小神经胶质细胞是C1q的主要来源。在该图中，全部IBA1+细胞是C1q阳性的和TMEM119阳性的。这样的结果表明小神经胶质细胞是脊髓中C1q的主要来源。此外，BA1+TMEM119-细胞的缺乏表明SMA的小鼠模型中不存在浸润性巨噬细胞。
图12由五幅图片(A)、(B)、(C)、(D)和(E)组成。图12示出C1q的体内阻断改进SMA表型并且救援VGluT1突触。相比于未经SMA处理的幼畜，用抗-C1q抗体处理造成适度的但是显著提高的生存期和体重增加。经SMA处理的幼畜显著地改进其正位反射。重要的是，这些行为改进与突触救援有关。VGluT1突触在SMA运动神经元的邻近树突和胞体两者上被救援。
图13由三幅图片(A)、(B)和(C)组成。图13示出被救援的VGluT1突触是功能性突触。为了测试被救援的本体感受突触的功能，进行离体脊髓制备以刺激背根并且记录脊柱反射。WT小鼠展现强烈的单突触反应，以灰色突出显示(图13B)。反射在SMA小鼠中明显降低。用C1q中和抗体(Ab)的处理显著地改进单刺激后的反射幅度。为了独立于活的运动神经元的数量挑战突触的功能，以较高的频率刺激背根神经元。20Hz的刺激造成WT小鼠中～60％的抑制，并且在SMA小鼠中几乎完全抑制(图13B)。用抗-C1q抗体处理造成与WT小鼠中观察到的几乎相同的抑制，为经救援的突触是功能性的提供了进一步的证据。
详细说明
本公开大体上涉及预防脊髓性肌肉萎缩症、降低发展脊髓性肌肉萎缩症的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症的方法，所述方法包括向受试者施用补体途径的抑制剂。
适合的抗体包含与补体成分C1q、C1r、或C1s结合的抗体。这样的抗体包含单克隆抗体、其同源物、类似物、及经修饰的形式或衍生形式，包含Fab、F(ab’)2、Fv和单链抗体。
优选的抗体是单克隆抗体，其可以通过用下列两者之一免疫啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、和豚鼠)被培育：(1)天然补体成分(例如，C1q、C1r、或C1s)，所述天然补体成分源自来自人血浆或血清的纯化的补体成分的酶消化，或(2)由真核系统或原核系统表达的重组补体成分或其衍生片段。其他动物可以被用于免疫，例如，非人灵长类动物、表达人免疫球蛋白的转基因小鼠、和用人B-淋巴细胞移植的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠。
多克隆抗体和单克隆抗体在免疫系统对病原体的响应中被天然生成为免疫球蛋白(Ig)分子。在人血清中具有8mg/ml的浓度的主要形式，～150-kDa的IgG1分子由两个相同的～50-kDa的重链和两个相同的～25-kDa的轻链组成。
可以通过将来自经免疫的动物的B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合经由常规方法生成杂交瘤。此外，可以通过筛选来自噬菌体展示系统中的人B-淋巴细胞的重组单链Fv或Fab文库生成抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体。MAb对人C1q、C1r、或C1s的特异性可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、或其他免疫化学技术被测试。
可以使用未致敏的兔或豚鼠的旁路补体途径的RBC、或致敏的鸡或绵羊的经典补体途径的RBC通过溶血测定评估在筛选过程中被鉴别的抗体补体激活的抑制活性。对经典补体途径展现特异性的抑制活性的那些杂交瘤通过有限稀释被克隆。抗体被纯化，用于通过上文描述的测定表征对人C1q、C1r、或C1s的特异性。
基于抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体的可变区的分子结构，可以使用分子建模和合理的分子设计生成和筛选模拟抗体的结合区的分子结构并且抑制C1q、C1r、或C1s的活性的小分子。这些小分子可以是肽、模拟肽、寡核苷酸、或有机化合物。模拟分子可以被用作神经性疾病、炎性疾病、或自身免疫疾病中补体激活的抑制剂。可替代地，人们可以使用本领域通常使用的大规模筛选方法从组合化合物的文库分离适合的小分子。
如本文所公开的，抗体的适合的暴露可以是血清的10μg/ml和500μg/ml之间。实际的血清暴露可以遵循用于确定最佳剂量的常规方法学在临床试验中被确定，即施用各种各样的剂量并且确定哪个剂量提供适合的疗效而没有不期望的副作用。
在重组DNA技术出现之前，切割多肽序列的蛋白水解酶(蛋白酶)被用于分割抗体分子的结构以及确定分子的哪部分负责其各种各样的功能。蛋白酶木瓜蛋白酶的限制性消化将抗体分子切割成三个片段。两个片段(被称为Fab片段)是相同的并且含有抗原结合活性。Fab片段对应于抗体分子的两个相同的臂，其中的每个由与重链的VH域和CH1域配对的完整的轻链组成。其他片段不含有抗原结合活性，但是最初观察到容易结晶，并且由于此原因，被命名为Fc片段(可结晶片段)。
Fab分子是具有缺少恒定域CH2和CH3的重链的Ig分子的人工～50-kDa的片段。两个异嗜性(VL-VH和CL-CH1)域相互作用构成Fab分子的两链结构的基础，所述两链结构通过CL和CH1之间的二硫桥被进一步稳定。Fab和IgG具有相同的抗原结合位点，所述抗原结合位点通过六个互补决定区(CDR)(来自VL和VH各三个(LCDR1、LCDR2、LCDR3和HCDR1、HCDR2、HCDR3))形成。CDR限定抗体的高变抗原结合位点。在LCDR3和HCDR3中发现了最高序列变异，在天然免疫系统中，LCDR3和HCDR3分别通过VL基因和JL基因或VH基因、DH基因和JH基因的重排生成。LCDR3和HCDR3通常形成抗原结合位点的核心。连接并且显示六个CDR的保守区被称为骨架区。在可变域的三维结构中，骨架区形成通过外侧的高变CDR环以及通过内侧的保守的二硫桥连接的两个相对的反向平行的β-折叠的夹层(sandwich)。
本文公开用于保护或治疗遭受突触丢失的不利影响(如，脊髓性肌肉萎缩症)的个体的方法。正常发育中的未成熟的星形细胞产生诱导神经元表达特定补体蛋白的信号，从而开启发育窗口，在发育窗口期间发生突触消除。发育中的这样的蛋白质的表达反映了发育性突触发生的时期，其在胚胎脑和成人脑中处于关闭，但是当突触修剪和突触消除出现后，在出生后脑中处于高水平。
这些发现对于各种各样临床病况(特别是其中涉及突触丢失的神经退行性病况，如脊髓性肌肉萎缩症)具有广泛的意义。通过使神经元与补体途径的抑制剂或拮抗剂接触抑制突触丢失。例如，抑制剂可以阻断补体级联的激活，可以阻断神经元中特定补体蛋白的表达，可以干扰诱导补体激活的信号分子，可以上调神经元中补体抑制剂的表达，并且以另外的方式干扰突触丢失中补体的作用。防止突触丢失(例如，在成人脑中)的能力对于在各种各样的神经退行性病况中维持正常的神经元功能具有重要的意义。
抗-补体C1q抗体
适合的抑制剂包含用于预防脊髓性肌肉萎缩症、降低发展脊髓性肌肉萎缩症的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症的方法的结合补体C1q蛋白的抗体(即，抗-补体C1q抗体，本文也称作抗-C1q抗体和C1q抗体)以及编码这样的抗体的核酸分子。
下列十四段中提及的全部序列通过引用从WO 2015/006504(由于其公开的抗体和相关的组合物，其特此以引用方式被并入)被并入。
本文公开施用抗-C1q抗体的方法，所述抗-C1q抗体包括轻链可变域和重链可变域。抗体可以至少与人C1q、小鼠C1q、或大鼠C1q结合。抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、或人抗体。轻链可变域包括由保藏有登录号PTA-120399的杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体M1的HVR-L1、HVR-L2、和HVR-L3。重链可变域包括由保藏有登录号PTA-120399的杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体M1的HVR-H1、HVR-H2、和HVR-H3。
在一些实施方案中，轻链可变域和重链可变域的氨基酸序列包括HVR-L1的SEQ IDNO:5、HVR-L2的SEQ ID NO:6、HVR-L3的SEQ ID NO:7、HVR-H1的SEQ ID NO:9、HVR-H2的SEQID NO:10、和HVR-H3的SEQ ID NO:11中的一个或更多个。
抗体可以包括轻链可变域氨基酸序列和重链可变域氨基酸序列，所述轻链可变域氨基酸序列与SEQ ID NO:4至少85％相同，所述重链可变域氨基酸序列与SEQ ID NO:8至少85％相同。
本文公开施用抑制C1q和自身抗体之间的相互作用的抗-C1q抗体的方法。在一些实施方案中，抗-C1q抗体抑制C1q和突触之间的相互作用。在优选的实施方案中，抗-C1q抗体引起C1q从循环或组织的清除。
抗-C1q抗体可以与C1q蛋白结合，并且与选自下列的氨基酸残基内的C1q蛋白的一个或更多个氨基酸结合：(a)SEQ ID NO:1的氨基酸残基196-226(SEQ ID NO:16)，或对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基196-226(GLFQVVSGGMVLQLQQGDQVWVEKDPKKGHI)(SEQ ID NO:16)的C1q蛋白A链(C1qA)的氨基酸残基；(b)SEQ ID NO:1的氨基酸残基196-221(SEQ ID NO:17)，或对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基196-221(GLFQVVSGGMVLQLQQGDQVWVEKDP)(SEQ IDNO:17)的C1qA的氨基酸残基；(c)SEQ ID NO:1的氨基酸残基202-221(SEQ ID NO:18)，或对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基202-221(SGGMVLQLQQGDQVWVEKDP)(SEQ ID NO:18)的C1qA的氨基酸残基；(d)SEQ ID NO:1的氨基酸残基202-219(SEQ ID NO:19)，或对应于SEQ IDNO:1的氨基酸残基202-219(SGGMVLQLQQGDQVWVEK)(SEQ ID NO:19)的C1qA的氨基酸残基；和(e)SEQ ID NO:1的氨基酸残基Lys 219和/或Ser 202，或对应于SEQ ID NO:1的Lys 219和/或Ser 202的C1qA的氨基酸残基。
在一些实施方案中，抗体还与选自下列的氨基酸残基内的C1q蛋白的一个或更多个氨基酸结合：(a)SEQ ID NO:3的氨基酸残基218-240(SEQ ID NO:20)，或对应于SEQ IDNO:3的氨基酸残基218-240(WLAVNDYYDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQ ID NO:20)的C1q蛋白C链(C1qC)的氨基酸残基；(b)SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-240(SEQ ID NO:21)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-240(YDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQ ID NO:21)的C1qC的氨基酸残基；(c)SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-232(SEQ ID NO:22)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-232(YDMVGIQG)(SEQ ID NO:22)的C1qC的氨基酸残基；(d)SEQ ID NO:3的氨基酸残基Tyr 225，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基Tyr 225的C1qC的氨基酸残基；(e)SEQ ID NO:3的氨基酸残基174-196(SEQ ID NO:23)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基174-196(HTANLCVLLYRSGVKVVTFCGHT)(SEQ ID NO:23)的C1qC的氨基酸残基；(f)SEQ IDNO:3的氨基酸残基184-192(SEQ ID NO:24)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基184-192(RSGVKVVTF)(SEQ ID NO:24)的C1qC的氨基酸残基；(g)SEQ ID NO:3的氨基酸残基185-187，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基185-187(SGV)的C1qC的氨基酸残基；(h)SEQ IDNO:3的氨基酸残基Ser 185，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基Ser 185的C1qC的氨基酸残基。
在某些实施方案中，抗-C1q抗体与SEQ ID NO:1中示出的人C1qA的氨基酸残基Lys219和Ser 202、或对应于SEQ ID NO:1中示出的Lys 219和Ser 202的人C1qA的氨基酸，以及SEQ ID NO:3中示出的人C1qC的氨基酸残基Tyr 225、或对应于SEQ ID NO:3中示出的Tyr 225的人C1qC的氨基酸残基结合。在某些实施方案中，抗-C1q抗体与SEQ ID NO:1中示出的人C1qA的氨基酸残基Lys 219、或对应于SEQ ID NO:1中示出的Lys 219的人C1qA的氨基酸残基，以及SEQ ID NO:3中示出的人C1qC的氨基酸残基Ser 185、或对应于SEQ ID NO:3中示出的Ser 185的人C1qC的氨基酸残基结合。
在一些实施方案中，抗-C1q抗体与C1q蛋白结合，并且与选自下列的氨基酸残基内的C1q蛋白的一个或更多个氨基酸结合：(a)SEQ ID NO:3的氨基酸残基218-240(SEQ IDNO:20)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基218-240(WLAVNDYYDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQID NO:20)的C1qC的氨基酸残基；(b)SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-240(SEQ ID NO:21)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-240(YDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQ ID NO:21)的C1qC的氨基酸残基；(c)SEQ ID NO:3的氨基酸残基225-232(SEQ ID NO:22)，或对应于SEQ IDNO:3的氨基酸残基225-232(YDMVGIQG)(SEQ ID NO:22)的C1qC的氨基酸残基；(d)SEQ IDNO:3的氨基酸残基Tyr 225，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基Tyr 225的C1qC的氨基酸残基；(e)SEQ ID NO:3的氨基酸残基174-196(SEQ ID NO:23)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基174-196(HTANLCVLLYRSGVKVVTFCGHT)(SEQ ID NO:23)的C1qC的氨基酸残基；(f)SEQ ID NO:3的氨基酸残基184-192(SEQ ID NO:24)，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基184-192(RSGVKVVTF)(SEQ ID NO:24)的C1qC的氨基酸残基；(g)SEQ ID NO:3的氨基酸残基185-187，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基185-187(SGV)的C1qC的氨基酸残基；(h)SEQID NO:3的氨基酸残基Ser 185，或对应于SEQ ID NO:3的氨基酸残基Ser 185的C1qC的氨基酸残基。
在一些实施方案中，本公开的抗-C1q抗体抑制C1q和C1s之间的相互作用。在一些实施方案中，抗-C1q抗体抑制C1q和C1r之间的相互作用。在一些实施方案中，抗-C1q抗体抑制C1q和C1s之间以及C1q和C1r之间的相互作用。在一些实施方案中，抗-C1q抗体抑制C1q和另一种抗体(如自身抗体)之间的相互作用。在优选的实施方案中，抗-C1q抗体引起C1q从循环或组织的清除。在一些实施方案中，抗-C1q抗体以小于2.5:1；2.0:1；1.5:1；或1.0:1的化学计量抑制各个相互作用。在一些实施方案中，抗-C1q抗体在大约等摩尔浓度的C1q和抗-C1q抗体的情况下抑制相互作用，如C1q-C1s相互作用。在其他实施方案中，抗-C1q抗体以小于20:1；小于19.5:1；小于19:1；小于18.5:1；小于18:1；小于17.5:1；小于17:1；小于16.5:1；小于16:1；小于15.5:1；小于15:1；小于14.5:1；小于14:1；小于13.5:1；小于13:1；小于12.5:1；小于12:1；小于11.5:1；小于11:1；小于10.5:1；小于10:1；小于9.5:1；小于9:1；小于8.5:1；小于8:1；小于7.5:1；小于7:1；小于6.5:1；小于6:1；小于5.5:1；小于5:1；小于4.5:1；小于4:1；小于3.5:1；小于3:1；小于2.5:1；小于2.0:1；小于1.5:1；或小于1.0:1的化学计量与C1q结合。在某些实施方案中，抗-C1q抗体以从20:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1q。在某些实施方案中，抗-C1q抗体以从6:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1q。在某些实施方案中，抗-C1q抗体以从2.5:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1q。在一些实施方案中，抗-C1q抗体抑制C1q和C1r之间、或C1q和C1s之间、或C1q和C1r以及C1s两者之间的相互作用。在一些实施方案中，抗-C1q抗体抑制C1q和C1r之间、C1q和C1s之间、和/或C1q和C1r以及C1s两者之间的相互作用。在一些实施方案中，抗-C1q抗体与C1q A链结合。在其他实施方案中，抗-C1q抗体与C1q B链结合。在其他实施方案中，抗-C1q抗体与C1q C链结合。在一些实施方案中，抗-C1q抗体与C1q A链、C1q B链和/或C1q C链结合。在一些实施方案中，抗-C1q抗体与C1q A链、C1q B链、和/或C1qC链的球状域结合。在其他实施方案中，抗-C1q抗体与C1q A链、C1q B链、和/或C1q C链的胶原蛋白样域结合。
在本公开的抗体抑制两种或更多种补体因子之间的相互作用(如C1q和C1s的相互作用，或C1q和C1r之间的相互作用)的情况下，相对于其中没有本公开抗体的对照，在存在抗体的情况下发生的相互作用可以降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％。在某些实施方案中，相对于其中没有本公开抗体的对照，在存在抗体的情况下发生的相互作用降低至少30％至至少99％的范围的量。
在一些实施方案中，相对于其中没有本公开抗体的对照，本公开的抗体以至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％，或以至少30％至至少99％范围内的量抑制C2或C4裂解。用于测量C2或C4裂解的方法是本领域公知的。对于C2或C4裂解，本公开的抗体的EC50值可以是小于3μg/ml；2.5μg/ml；2.0μg/ml；1.5μg/ml；1.0μg/ml；0.5μg/ml；0.25μg/ml；0.1μg/ml；0.05μg/ml。在一些实施方案中，本公开的抗体在大约等摩尔浓度的C1q和相应的抗-C1q抗体的情况下抑制C2或C4裂解。
在一些实施方案中，相对于其中没有本公开抗体的对照，本公开的抗体以至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％，或以至少30％至至少99％范围内的量抑制自身抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性(CDC)。对于自身抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性的抑制，本公开的抗体的EC50值可以是小于3μg/ml；2.5μg/ml；2.0μg/ml；1.5μg/ml；1.0μg/ml；0.5μg/ml；0.25μg/ml；0.1μg/ml；0.05μg/ml。
在一些实施方案中，相对于没有本公开抗体的对照，本公开的抗体以至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％，或以至少30％至至少99％范围内的量抑制补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDCC)。用于测量CDCC的方法是本领域公知的。对于CDCC抑制，本公开的抗体的EC50值可以是小于3μg/ml；2.5μg/ml；2.0μg/ml；1.5μg/ml；1.0μg/ml；0.5μg/ml；0.25μg/ml；0.1μg/ml；0.05μg/ml。在一些实施方案中，本公开的抗体抑制CDCC但不抑制抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。
人源化抗-补体C1q抗体
本公开的人源化抗体与经典补体途径的C1复合物中的补体因子C1q和/或C1q蛋白特异性结合。人源化抗-C1q抗体可以与人C1q、人和小鼠C1q、与大鼠C1q、或人C1q、小鼠C1q和大鼠C1q特异性结合。
下列十六段中提及的全部序列通过引用从美国临时专利申请号62/075793(由于其公开的抗体和相关的组合物，其特此以引用方式被并入)被并入。
在一些实施方案中，人重链恒定区是人IgG4重链恒定区，包括SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或者具有与SEQ ID NO:37至少70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％同源性的氨基酸序列。人IgG4重链恒定区可以包括具有一个或更多个修饰和/或根据Kabat编号的氨基酸置换的Fc区。在这样的情况下，Fc区包括在248位点处亮氨酸到谷氨酸的置换，其中这样的置换抑制Fc区与Fc受体相互作用。在一些实施方案中，Fc区包括在241位点处丝氨酸到脯氨酸的置换，其中这样的置换防止抗体中的臂转换。
人IgG4(S241P L248E)重链恒定域的氨基酸序列是：
抗体可以包括重链可变域和轻链可变域，其中所述重链可变域包括选自SEQ IDNO:31-34中的任何一个的氨基酸序列，或者具有与选自SEQ ID NO:31-34中的任何一个的氨基酸序列至少约90％同源性的氨基酸序列。在某些这样的实施方案中，轻链可变域包括选自SEQ ID NO:35-38中的任何一个的氨基酸序列，或者具有与选自SEQ ID NO:35-38中的任何一个的氨基酸序列至少约90％同源性的氨基酸序列。
重链可变域变体1(VH1)的氨基酸序列是：
VH1的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
重链可变域变体2(VH2)的氨基酸序列是：
VH2的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
重链可变域变体3(VH3)的氨基酸序列是：
VH3的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
重链可变域变体4(VH4)的氨基酸序列是：
VH4的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
kappa轻链可变域变体1(Vκ1)的氨基酸序列是：
Vκ1的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
kappa轻链可变域变体2(Vκ2)的氨基酸序列是：
Vκ2的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
kappa轻链可变域变体3(Vκ3)的氨基酸序列是：
Vκ3的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
kappa轻链可变域变体4(Vκ4)的氨基酸序列是：
Vκ4的高变区(HVR)以加粗的以及加下划线的文本描述。
在一些实施方案中，本公开的人源化抗-C1q抗体包含重链可变区和重链恒定区，所述重链可变区含有Fab区，所述重链恒定区含有Fc区，其中Fab区与本公开的C1q蛋白特异性结合，但是Fc区不能结合C1q蛋白。在一些实施方案中，Fc区来自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，Fc区不能诱导补体活性，和/或不能诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在一些实施方案中，Fc区包括一个或更多个修饰，包含(不限于)氨基酸置换。在某些实施方案中，本公开的人源化抗-C1q抗体的Fc区包括在根据Kabat编号规则248位点处或对应于根据Kabat编号规则248位点的位点处，和/或在根据Kabat编号规则241位点处或对应于根据Kabat编号规则241位点的位点处的氨基酸置换。在一些实施方案中，在248位点处或对应于248位点的位点处的氨基酸置换抑制Fc区与Fc受体相互作用。在一些实施方案中，在248位点处或对应于248位点的位点处的氨基酸置换是亮氨酸到谷氨酸的置换。在一些实施方案中，在241位点处或对应于241位点的位点处的氨基酸置换防止抗体中的臂转换。在一些实施方案中，在241位点处或对应于241位点的位点处的氨基酸置换是丝氨酸到脯氨酸的置换。在某些实施方案中，本公开的人源化抗-C1q抗体的Fc区包括SEQ ID NO:37的氨基酸序列，或者具有与SEQ ID NO:47的氨基酸序列至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、或至少约95％同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的人源化抗-C1q抗体可以与C1q蛋白结合，并且与选自下列的氨基酸残基内的C1q蛋白的一个或更多个氨基酸结合：(a)SEQ ID NO:39的氨基酸残基196-226(SEQ ID NO:42)，或对应于SEQ ID NO:39的氨基酸残基196-226(GLFQVVSGGMVLQLQQGDQVWVEKDPKKGHI)(SEQ ID NO:42)的C1q蛋白A链(C1qA)的氨基酸残基；(b)SEQ ID NO:39的氨基酸残基196-221(SEQ ID NO:43)，或对应于SEQ ID NO:39的氨基酸残基196-221(GLFQVVSGGMVLQLQQGDQV WVEKDP)(SEQ ID NO:43)的C1qA的氨基酸残基；(c)SEQ ID NO:39的氨基酸残基202-221(SEQ ID NO:44)，或对应于SEQ ID NO:39的氨基酸残基202-221(SGG MVLQLQQGDQVWVEKDP)(SEQ ID NO:44)的C1qA的氨基酸残基；(d)SEQ IDNO:39的氨基酸残基202-219(SEQ ID NO:45)，或对应于SEQ ID NO:39的氨基酸残基202-219(SGGMVLQLQQGDQVWVEK)(SEQ ID NO:45)的C1qA的氨基酸残基；以及(e)SEQ ID NO:39的氨基酸残基Lys 219和/或Ser 202，或对应于SEQ ID NO:39的Lys 219和/或Ser 202的C1qA的氨基酸残基。
在一些实施方案中，人源化抗-C1q抗体还可以与选自下列的氨基酸残基内的C1q蛋白的一个或更多个氨基酸结合：(a)SEQ ID NO:41的氨基酸残基218-240(SEQ ID NO:46)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基218-240(WLAVNDYYDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQ IDNO:46)的C1q蛋白C链(C1qC)的氨基酸残基；(b)SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-240(SEQID NO:48)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-240(YDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQ IDNO:48)的C1qC的氨基酸残基；(c)SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-232(SEQ ID NO:49)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-232(YDMVGIQG)(SEQ ID NO:49)的C1qC的氨基酸残基；(d)SEQ ID NO:41的氨基酸残基Tyr 225或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基Tyr 225的C1qC的氨基酸残基；(e)SEQ ID NO:41的氨基酸残基174-196(SEQ ID NO:50)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基174-196(HTANLCVLLYRSGVKVVTFCGHT)(SEQ ID NO:50)的C1qC的氨基酸残基；(f)SEQ ID NO:41的氨基酸残基184-192(SEQ ID NO:30)，或对应于SEQ IDNO:41的氨基酸残基184-192(RSGVKVVTF)(SEQ ID NO:30)的C1qC的氨基酸残基；(g)SEQ IDNO:41的氨基酸残基185-187，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基185-187(SGV)的C1qC的氨基酸残基；(h)SEQ ID NO:41的氨基酸残基Ser 185，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基Ser 185的C1qC的氨基酸残基。
在某些实施方案中，本公开的人源化抗-C1q抗体可以与如SEQ ID NO:39中所示的人C1qA的氨基酸残基Lys 219和Ser 202或对应于如SEQ ID NO:39中所示的Lys 219和Ser202的人C1qA的氨基酸，以及如SEQ ID NO:41中所示的人C1qC的氨基酸残基Tyr 225或对应于如SEQ ID NO:41中所示的Tyr 225的人C1qC的氨基酸残基结合。在某些实施方案中，抗-C1q抗体与如SEQ ID NO:39中所示的人C1qA的氨基酸残基Lys 219或对应于如SEQ ID NO:39中所示的Lys 219的人C1qA的氨基酸残基，以及如SEQ ID NO:41中所示的人C1qC的氨基酸残基Ser 185或对应于如SEQ ID NO:41中所示的Ser 185的人C1qC的氨基酸残基结合。
在一些实施方案中，本公开的人源化抗-C1q抗体可以与C1q蛋白结合，并且与选自下列的氨基酸残基内的C1q蛋白的一个或更多个氨基酸结合：(a)SEQ ID NO:41的氨基酸残基218-240(SEQ ID NO:46)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基218-240(WLAVNDYYDMVGIQGSDSVFSGF)(SEQ ID NO:46)的C1qC的氨基酸残基；(b)SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-240(SEQ ID NO:48)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-240(YDMVGI QGSDSVFSGF)(SEQ ID NO:48)的C1qC的氨基酸残基；(c)SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-232(SEQ IDNO:49)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基225-232(YDMVGIQG)(SEQ ID NO:49)的C1qC的氨基酸残基；(d)SEQ ID NO:41的氨基酸残基Tyr 225，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基Tyr 225的C1qC的氨基酸残基；(e)SEQ ID NO:41的氨基酸残基174-196(SEQ ID NO:50)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基174-196(HTANLCVLLYRSGVKVVTFCGHT)(SEQ IDNO:50)的C1qC的氨基酸残基；(f)SEQ ID NO:41的氨基酸残基184-192(SEQ ID NO:50)，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基184-192(RSGVKVVTF)(SEQ ID NO:50)的C1qC的氨基酸残基；(g)SEQ ID NO:41的氨基酸残基185-187，或对应于SEQ ID NO:41的氨基酸残基185-187(SGV)的C1qC的氨基酸残基；(h)SEQ ID NO:41的氨基酸残基Ser 185，或对应于SEQ IDNO:41的氨基酸残基Ser 185的C1qC的氨基酸残基。
抗-补体C1s抗体
适合的抑制剂包含结合补体C1s蛋白的抗体(即，抗-补体C1s抗体，本文也称作抗-C1s抗体和C1s抗体)以及编码这样的抗体的核酸分子。补体C1s是有吸引力的靶标，因为其在补体级联的上游，并且具有窄范围的底物特异性。此外，获得特异性结合C1s的激活形式的抗体(例如，但不限于，单克隆抗体)是可能的。
下列两段中提及的全部序列通过引用从WO 2014/186599(由于其公开的抗体和相关的组合物，其特此以引用方式被并入)被并入。
在某些方面，本文公开施用抗-C1s抗体的方法。抗体可以是鼠科抗体、人源化抗体、或嵌合抗体。在一些实施方案中，轻链可变域包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，并且重链包括由2013年5月15日ATCC保藏的杂交瘤细胞系或其子代(ATCC登录号PTA-120351)产生的鼠科抗-人C1s单克隆抗体5A1的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。在其他实施方案中，轻链可变域包括HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，并且重链可变域包括由2013年5月15日ATCC保藏的杂交瘤细胞系或其子代(ATCC登录号PTA-120352)产生的鼠科抗-人C1s单克隆抗体5C12的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。
在一些实施方案中，抗体与C1s或C1s前酶特异性结合并且抑制C1s或C1s前酶的生物活性，如C1s与C1q的结合、C1s与C1r的结合、或C1s与C2或C4的结合。生物活性可以是C1s的蛋白水解酶活性、C1s前酶到活性蛋白酶的转变、或C2或C4的蛋白水解裂解。在某些实施方案中，生物活性是经典补体激活途径的激活、抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性的激活、或C1F溶血。
下列六十二段中的全部序列通过引用从Van Vlasselaer美国专利号8,877,197(由于其公开的抗体和相关的组合物，其特此以引用方式被并入)被并入。
本文公开施用特异性结合包括补体成分C1s的IV域和V域的区内的表位的人源化单克隆抗体的方法。在一些情况下，抗体抑制C1s与补体成分4(C4)的结合和/或不抑制C1s的蛋白酶活性。在一些实施方案中，方法包括施用以高的抗体亲抗原性结合C1复合物中补体成分C1s的人源化单克隆抗体。
本文公开施用具有抗体轻链可变区的互补决定区(CDR)中的一个或更多个和/或抗体重链可变区的CDR中的一个或更多个的抗-C1s抗体的方法，所述抗体轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:57，所述抗体重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:58。抗-C1s抗体可以结合人或大鼠补体C1s蛋白。在一些实施方案中，抗-C1s抗体抑制至少一种被补体C1s蛋白裂解的底物的裂解。
在某些实施方案中，抗体包括：a)具有选自SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、和SEQ ID NO:56的氨基酸序列的互补决定区(CDR)；和/或b)具有选自SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR。
抗体可以包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:51的CDR-L1、具有氨基酸序列SEQ IDNO:52的CDR-L2、具有氨基酸序列SEQ ID NO:53的CDR-L3、具有氨基酸序列SEQ ID NO:54的CDR-H1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:55的CDR-H2、以及具有氨基酸序列SEQ ID NO:56的CDR-H3。
在其他实施方案中，抗体可以包括具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的可变区的轻链CDR、和/或具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的可变区的重链CDR。
抗体可以是特异性结合补体成分C1s的人源化抗体，其中抗体与包括抗体轻链可变区的CDR中的一个或更多个和/或抗体重链可变区的CDR中的一个或更多个的抗体竞争结合表位，所述抗体轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:67，所述抗体重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:68。
在其他情况下，抗体可以是特异性结合补体C1s的人源化抗体，其中抗体选自：a)特异性结合补体C1s蛋白内的表位的人源化抗体，其中抗体与包括具有选自SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、和SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR的抗体竞争结合表位；以及b)特异性结合补体C1s蛋白内的表位的人源化抗体，其中抗体与包括具有选自SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:64、SEQID NO:65、和SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况下，抗体与包括重链CDR和轻链CDR的抗体竞争结合表位，所述重链CDR和所述轻链CDR包括：a)SEQID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:55、和SEQ ID NO:56；或b)SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、和SEQ IDNO:66。
抗体可以包括存在于不同的多肽中的轻链区和重链区。抗体可以包括Fc区。
本文公开包括轻链可变区和重链可变区的抗-C1s抗体，所述轻链可变区的氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO:57是90％相同的，所述重链可变区包括与氨基酸序列SEQ IDNO:58是90％相同的氨基酸序列。
抗-C1s抗体可以选自抗原结合片段、Ig单体、Fab片段、F(ab’)2片段、Fd片段、scFv、scAb、dAb、Fv、单域重链抗体、单域轻链抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、或多特异性抗体。
本文公开施用竞争结合由抗体IPN003(本文也称为“IPN-M34”或“M34”或“TNT003”)结合的表位的抗体(例如，包括抗体IPN003的可变域的抗体，如抗体IPN003)的方法。
在一些实施方案中，方法包括施用特异性结合补体C1s蛋白内的表位的抗体。在一些实施方案中，分离的抗-C1s抗体结合激活的C1s蛋白。在一些实施方案中，分离的抗-C1s抗体结合C1s的无活性形式。在其他情况下，分离的抗-C1s抗体结合激活的C1s蛋白和C1s的无活性形式两者。
在一些实施方案中，方法包括施用抑制C4的裂解的单克隆抗体，其中分离的单克隆抗体不抑制C2的裂解。在一些实施方案中，方法包括施用抑制C2的裂解的单克隆抗体，其中分离的单克隆抗体不抑制C4的裂解。在一些情况下，分离的单克隆抗体是人源化的。在一些情况下，抗体抑制经典补体途径的成分。在一些情况下，被抗体抑制的经典补体途径的成分是C1s。本公开也提供通过向有需要的个体施用抑制C4的裂解的分离的单克隆抗体或包括分离的单克隆抗体的药物组合物，治疗补体介导的疾病或紊乱的方法，其中分离的单克隆抗体不抑制C2的裂解。
在一些实施方案中，方法包括施用抑制经由C1s的C2或C4的裂解(即，抑制C1s-介导的C2或C4的蛋白水解裂解)的单克隆抗体。在一些情况下，单克隆抗体是人源化的。在一些情况下，抗体通过抑制C2或C4与C1s的结合来抑制经由C1s的C2或C4的裂解；例如，在一些情况下，抗体通过抑制C2或C4与C1s的C2结合位点或C4结合位点的结合来抑制C1s-介导的C2或C4的裂解。因此，在一些情况下，抗体起竞争性抑制剂的作用。本公开也提供通过向有需要的个体施用分离的单克隆抗体，治疗脊髓性肌肉萎缩症的方法，所述分离的单克隆抗体抑制经由C1s的C2或C4的裂解(即，抑制C1s-介导的C2或C4的蛋白水解裂解)。
在一些实施方案中，方法包括施用抑制经由C1s的C4的裂解的单克隆抗体，其中抗体不抑制经由C1s的补体成分C2的裂解；即，抗体抑制C1s-介导的C4的裂解，但是不抑制C1s-介导的C2的裂解。在一些情况下，单克隆抗体是人源化的。在一些情况下，单克隆抗体抑制C4与C1s的结合，但是不抑制C2与C1s的结合。在一些实施方案中，方法包括通过向有需要的个体施用抑制经由C1s的C4的裂解的分离的单克隆抗体来治疗补体介导的疾病或紊乱的方法，其中抗体不抑制经由C1s的补体成分C2的裂解；即，抗体抑制C1s-介导的C4的裂解，但是不抑制C1s-介导的C2的裂解。在方法的一些实施方案中，抗体是人源化的。
在一些实施方案中，方法包括施用特异性结合包括C1s的IV域和V域的区内的表位的人源化单克隆抗体。例如，人源化单克隆抗体特异性结合图1中描述以及SEQ ID NO:70中列出的氨基酸序列的氨基酸272-422内的表位。在一些情况下，人源化单克隆抗体特异性结合图1中描述以及SEQ ID NO:70中列出的氨基酸序列的氨基酸272-422内的表位，并且抑制C4与C1s的结合。在一些实施方案中，方法包括通过向有需要的个体施用特异性结合图1中描述以及SEQ ID NO:70中列出的氨基酸序列的氨基酸272-422内的表位，并且抑制C4与C1s的结合的人源化单克隆抗体，治疗补体介导的疾病或紊乱。
在一些实施方案中，方法包括施用特异性结合包括C1s的IV域和V域的区内的构象表位的人源化单克隆抗体。例如，人源化单克隆抗体特异性结合图1中描述以及SEQ ID NO:70中列出的氨基酸序列的氨基酸272-422内的构象表位。在一些情况下，人源化单克隆抗体特异性结合图1中描述以及SEQ ID NO:70中列出的氨基酸序列的氨基酸272-422内的构象表位，并且抑制C4与C1s的结合。在一些实施方案中，方法包括脊髓性肌肉萎缩症，方法包括向有需要的个体施用特异性结合图1中描述以及SEQ ID NO:70中列出的氨基酸序列的氨基酸272-422内的构象表位，并且抑制C4与C1s的结合的人源化单克隆抗体。
在一些实施方案中，方法包括施用结合C1复合物中的补体成分C1s的单克隆抗体。C1复合物由6分子的C1q、2分子的C1r和2分子的C1s组成。在一些情况下，单克隆抗体是人源化的。因此，在一些情况下，人源化单克隆抗体结合C1复合物中的补体成分C1s。在一些情况下，抗体以高的抗体亲抗原性结合C1复合物中存在的C1s。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体(例如，特异性结合补体C1s蛋白中的表位的主题抗体)包括：a)轻链区，所述轻链区包括IPN003抗体的一个、两个、或三个VL CDR；和b)重链区，所述重链区包括IPN003抗体的一个、两个、或三个VH CDR；其中VH CDR和VL CDR如Kabat所定义的(参见，例如表1；和Kabat 1991)。
在其他实施方案中，抗-C1s抗体(例如，特异性结合补体C1s蛋白中的表位的主题抗体)包括：a)轻链区，所述轻链区包括IPN003抗体的一个、两个、或三个VL CDR；和b)重链区，所述重链区包括IPN003抗体的一个、两个、或三个VH CDR；其中VH CDR和VL CDR如Chothia所定义的(参见，例如表1，和Chothia 1987)。
表2中提供IPN003抗体的CDR氨基酸序列以及VL和VH氨基酸序列。表2还提供分配给氨基酸序列中的每个的SEQ ID NO。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体(例如，特异性结合补体C1s蛋白中的表位的主题抗体)包括：a)轻链区，所述轻链区包括选自SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、和SEQ ID NO:53的一个、两个、或三个CDR；和b)重链区，所述重链区包括选自SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、和SEQ ID NO:56的一个、两个、或三个CDR。在这些实施方案中的一些中，抗-C1s抗体包含人源化VH骨架区和/或人源化VL骨架区。
SEQ ID NO.51:SSVSSSYLHWYQ；
SEQ ID NO.52:STSNLASGVP；
SEQ ID NO.53:HQYYRLPPIT；
SEQ ID NO.54:GFTFSNYAMSWV；
SEQ ID NO.55:ISSGGSHTYY；
SEQ ID NO.56:ARLFTGYAMDY。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括具有选自SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、和SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、和SEQ ID NO:53。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、和SEQ ID NO:56。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:51的CDR-L1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:52的CDR-L2、具有氨基酸序列SEQ ID NO:53的CDR-L3、具有氨基酸序列SEQ ID NO:54的CDR-H1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:55的CDR-H2、以及具有氨基酸序列SEQ ID NO:56的CDR-H3。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ IDNO:57中列出的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
SEQ ID NO.57：
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ IDNO:58中列出的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
SEQ ID NO.58：
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:57 90％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:58 90％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:57。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:58。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:57 90％相同的氨基酸序列，所述重链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:58 90％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:57，所述重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:58。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体特异性结合补体C1s蛋白内的表位，其中所述抗体与包括抗体轻链可变区的轻链CDR和抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位，所述抗体轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:57，所述抗体重链可变区包括氨基酸序列SEQID NO:58。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括抗体轻链可变区的轻链CDR和抗体重链可变区的重链CDR，所述抗体轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:57，所述抗体重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:58。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体(例如，特异性结合补体C1s蛋白中的表位的主题抗体)包括：a)轻链区，所述轻链区包括选自SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、和SEQ ID NO:53的一个、两个、或三个CDR；以及b)重链区，所述重链区包括选自SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、和SEQ ID NO:66的一个、两个、或三个CDR。
SEQ ID NO.62:TASSSVSSSYLH；
SEQ ID NO.63:STSNLAS；
SEQ ID NO.53:HQYYRLPPIT；
SEQ ID NO.64:NYAMS；
SEQ ID NO.65:TISSGGSHTYYLDSVKG；
SEQ ID NO.66:LFTGYAMDY。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括具有选自SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQID NO:53、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、和SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、和SEQ ID NO:53。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、和SEQ ID NO:66。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:62的CDR-L1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:63的CDR-L2、具有氨基酸序列SEQ ID NO:53的CDR-L3、具有氨基酸序列SEQ ID NO:64的CDR-H1、具有氨基酸序列SEQ ID NO:65的CDR-H2、以及具有氨基酸序列SEQ ID NO:66的CDR-H3。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ IDNO:67中列出的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
SEQ ID NO.67：
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ IDNO:68中列出的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
SEQ ID NO.68：
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:67 90％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:68 90％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:67。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:68。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:67 90％相同的氨基酸序列，所述重链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:68 90％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:67 95％相同的氨基酸序列，所述重链可变区包括与氨基酸序列SEQ ID NO:68 95％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:67，所述重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:68。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体特异性结合补体C1s蛋白内的表位，其中所述抗体与包括抗体轻链可变区的轻链CDR和抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位，所述抗体轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:67，所述抗体重链可变区包括氨基酸序列SEQID NO:68。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括抗体轻链可变区的轻链CDR和抗体重链可变区的重链CDR，所述抗体轻链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:67，所述抗体重链可变区包括氨基酸序列SEQ ID NO:68。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ IDNO:67中列出的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗-C1s抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ IDNO:68中列出的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
抗-C1s抗体可以包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO:79中列出以及图2中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VH变体1)。
抗-C1s抗体可以包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO:80中列出以及图3中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VH变体2)。
抗-C1s抗体可以包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO:81中列出以及图4中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VH变体3)。
抗-C1s抗体可以包括重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ ID NO:82中列出以及图5中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VH变体4)。
抗-C1s抗体可以包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:83中列出以及图6中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VK变体1)。
抗-C1s抗体可以包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:84中列出以及图7中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VK变体2)。
抗-C1s抗体可以包括轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:85中列出以及图8中描述的氨基酸序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％相同的氨基酸序列(VK变体3)。
抗-C1s抗体可以包括重链可变区，相对于IPN003亲代抗体FR氨基酸序列，所述重链可变区包括表3(图9)中描述的骨架(FR)氨基酸置换中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个。
定义
如本文说明书中所使用的，“一(a)”或“一(an)”可以意为一个(种)或更多个(种)。如本文的一条或多条权利要求中所使用的，当与词语“包括”共同使用时，词语“一(a)”或“一(an)”可以意为一个(种)或超过一个(种)。例如，对“抗体”的提及是从一种到多种抗体的提及。如本文所使用的，“另一个(种)”可以意为至少第二个(种)或更多个(种)。
如本文所使用的，与另一种化合物或组合物“联合”施用包含同时施用和/或在不同的时间施用。联合施用还包括作为共制剂施用或作为单独的组合物施用，包含以不同的给药频率或间隔，以及使用相同的施用途径或不同的施用途径。因此，接受联合治疗的受试者可以受益于不同治疗剂的组合效果。
术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换地使用。本文的术语“抗体”以最广泛的意义使用，并且特别涵盖了单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，以及抗体片段(只要其展现期望的生物活性)。
基本的4-链抗体单元是由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。VH和VL配对在一起形成单个抗原结合位点。对于抗体的不同类的结构和性质，参见，例如，Basic and Clinical Immunology,8th Ed.,Daniel P.Stites,Abba I.Terr和Tristram G.Parslow(eds.),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,page 71and Chapter 6。
来自任何脊椎动物物种的L链基于其恒定域的氨基酸序列可以被分配为两种明显不同的类型(称为kappa(“κ”)和lambda(“λ”))中的一种。根据其重链(CH)的恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被分配为不同的类或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有被命名为alpha(“α”)、delta(“δ”)、epsilon(“ε”)、gamma(“γ”)和mu(“μ”)的重链。基于CH序列和功能的相对较小的差异，γ和α类被进一步分为亚类(同种型)，例如，人表达下列亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。免疫球蛋白的不同类的亚单元结构和三维构型是众所周知的，并且在例如Abbas et al.,Cellular and MolecularImmunology,4th ed.(W.B.Saunders Co.,2000)中被大体上描述。
“天然抗体”通常是约150000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成。每个轻链通过一个共价二硫键与一个重链连接，而不同的免疫球蛋白同种型的重链中的二硫键的数量不同。每个重链和轻链还具有规则间隔排列的链内二硫桥。每个重链在一端具有可变域(VH)，后面接着是多个恒定域。每个轻链在一端具有可变域(VL)，并且在其的另一端具有恒定域；轻链的恒定域与重链的第一恒定域对齐，并且轻链可变域与重链的可变域对齐。特定氨基酸残基被认为在轻链可变域和重链可变域之间形成交界面。
“分离的”分子或细胞是被鉴别的并且从至少一种污染分子或细胞被分离的分子或细胞，所述“分离的”分子或细胞通常在其被产生的环境中与所述至少一种污染分子或细胞缔合。优选地，分离的分子或细胞不和与产生环境相关的全部组分缔合。分离的分子或细胞所处的形式不同于其在自然界中被发现时所处的形式或状态。因此，分离的分子不同于细胞中天然存在的分子；分离的细胞不同于组织、器官或个体中天然存在的细胞。在一些实施方案中，分离的分子是本公开的抗-C1s抗体、抗-C1q抗体、或抗-C1r抗体。在其他实施方案中，分离的细胞是产生本公开的抗-C1s抗体、抗-C1q抗体、或抗-C1r抗体的宿主细胞或杂交瘤细胞。
“分离的”抗体是已经被鉴别、分离和/或从其产生环境的组分中被回收(例如，天然的或重组的)的抗体。优选地，分离的多肽不与来自其产生环境的全部其他污染组分缔合。来自其产生环境的污染组分(如重组转染细胞所导致的污染组分)是通常将干扰抗体的研究、诊断或治疗应用的材料，且其可以包含酶、激素、和其他蛋白质溶质或非蛋白质溶质。在某些优选的实施方案中，多肽将被纯化：(1)至按抗体重量计大于95％(如由例如Lowry法测定)，并且在一些实施方案中，至按重量计大于99％；(2)达到通过使用转杯式测序仪(spinning cup sequenator)足以获得N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)达到同质性(在非还原条件或还原条件下通过SDS-PAGE使用考马斯亮蓝，或优选地银染色)。分离的抗体包含重组T-细胞内的原位抗体，因为抗体天然环境的至少一种组分将不存在。然而，分离的多肽或抗体通常将通过包含至少一个纯化步骤的方法被制备。
抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端域。重链和轻链的可变域可以分别被称为“VH”和“VL”。这些域通常是抗体的最可变的部分(相对于同类的其他抗体)并且含有抗原结合位点。
术语“可变”指抗体之间可变域的某些区段在序列上广泛地不同的事实。V域介导抗原结合，并且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性不是均匀分布在可变域的整个跨度内。相反，在轻链可变域和重链可变域两者中，可变性集中在三个被称为高变区(HVR)的区段内。可变域的更高度保守的部分被称为骨架区(FR)。天然重链和轻链的可变域每个包括四个FR区，其主要采用β-折叠构型，通过形成环状连接的三个HVR连接，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每个链中的HVR通过FR区保持相互靠近，并且与来自其他链的HVR一起促使形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat et al.,Sequences ofImmunological Interest,Fifth Edition,National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但是展现出各种效应子功能，如抗体依赖性细胞毒性中抗体的参与。
如本文所使用的，术语“CDR”或“互补决定区”旨在意为重链多肽和轻链多肽两者的可变区内发现的非连续的抗原结合位点。CDR已经由Kabat et al.,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat et al.,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequencesof proteins of immunological interest”(1991)(本文中也称为Kabat 1991)；由Chothia et al.,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)(本文中也称为Chothia 1987)；和MacCallum et al.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)描述，其中当彼此比较时，定义包含氨基酸残基的重叠和子集。不过，指代抗体或移植抗体或其变体的CDR的任一定义的应用旨在在本文所定义和使用的术语的范围内。包括如上文引用的参考文献中的每个所定义的CDR的氨基酸残基作为对照在下文表1中列出。表2中列出的CDR根据Kabat 1991被定义。
表1
CDR定义
1残基编号遵循上述Kabat et al.的命名法
2残基编号遵循上述Chothia et al.的命名法
3残基编号遵循上述MacCallum et al.的命名法
表2
如本文所使用的，术语“CDR-L1”、“CDR-L2”和“CDR-L3”分别指轻链可变区中的第一CDR、第二CDR和第三CDR。如本文所使用的，术语“CDR-H1”、“CDR-H2”和“CDR-H3”分别指重链可变区中的第一CDR、第二CDR和第三CDR。如本文所使用的，术语“CDR-1”、“CDR-2”和“CDR-3”分别指任一链的可变区的第一CDR、第二CDR和第三CDR。
如本文所使用的，术语“单克隆抗体”指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，该群体的单个抗体是相同的，除了可以少量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)。单克隆抗体是高度特异性的，其针对单一抗原位点。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体是有利的，因为其通常通过杂交瘤培养被合成，不被其他免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示抗体的特征以基本上同质的抗体群体获得的，而不被解读为需要通过任何特定的方法产生抗体。例如，有待根据本公开被使用的单克隆抗体可以通过多种技术被制造，包含，例如，杂交瘤方法(例如，Kohler and Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo et al.,Hybridoma,14(3):253-260(1995)、Harlow etal.,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2ded.1988)；Hammerling et al.,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见，例如，美国专利号4,816,567)、噬菌体展示技术(参见，例如，Clackson et al.,Nature,352:624-628(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu et al.,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Leeet al.,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 101(34):12467-472(2004)；和Lee et al.,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))和用于在具有编码人免疫球蛋白序列的部分或全部的人免疫球蛋白基因座或基因的动物中产生人抗体或类人抗体的技术(参见，例如，WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits et al.,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits et al.,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann et al.,Year inImmunol.7:33(1993)；美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425和5,661,016；Marks et al.,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild et al.,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；和Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”被可互换地使用来指处于其基本上完整的形式，与抗体片段不同的抗体。特别地，全抗体包含具有包含Fc区的重链和轻链的那些。恒定域可以是天然序列恒定域(例如，人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可以具有一种或更多种效应子功能。
“抗体片段”包括完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包含Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段和Fv片段；双体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；Zapata et al.,Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；由抗体片段形成的单链抗体分子和多特异性抗体。
抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段(称为“Fab”片段)和剩余的“Fc”片段，命名反映了易于结晶的能力。Fab片段由整个L链和H链的可变区域(VH)，以及一个重链的第一恒定域(CH1)一起组成。对于抗原结合，每个Fab片段都是单价的，即其具有单个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生单个大的F(ab’)2片段，其大致对应于具有不同抗原结合活性的两个二硫键连接的Fab片段并且仍然能够交联抗原。Fab’片段不同于Fab片段之处在于CH1域的羧基末端处具有少量附加的残基，其包含来自抗体铰链区的一个或更多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定域的一个或多个半胱氨酸残基携带游离的巯基的Fab’的命名。F(ab’)2抗体片段最初作为Fab'片段对被产生，所述Fab’片段对之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
Fc片段包括通过二硫键结合在一起的两个H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能由Fc区中的序列决定，该区还被在某些类型的细胞上发现的Fc受体(FcR)识别。
本文中的术语“Fc区”被用于定义免疫球蛋白重链的C末端区(包含天然序列Fc区和变体Fc区)。虽然免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但人IgG重链Fc区通常被定义为从Cys226位点处的氨基酸残基，或从Pro230延伸至其羧基末端。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可以被去除，例如，在抗体的产生或纯化期间，或通过重组工程化编码抗体的重链的核酸。相应地，完整抗体的组成可以包括去除全部K447残基的抗体群体、未去除K447残基的抗体群体和具有K447残基和不具有K447残基的抗体的混合物的抗体群体。用于本公开抗体中的适合的天然序列Fc区包含人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
“天然序列Fc区”包括与在自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包含天然序列人IgG1Fc区(非A同种异型和A同种异型)；天然序列人IgG2Fc区；天然序列人IgG3Fc区；和天然序列人IgG4Fc区以及其天然存在的变体。
“变体Fc区”包括凭借至少一个氨基酸修饰(优选地一个或更多个氨基酸置换)与天然序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。优选地，相比于天然序列Fc区或母体多肽的Fc区，变体Fc区具有至少一个氨基酸置换，例如在天然序列Fc区或在母体多肽的Fc区中从约一个到约十个氨基酸置换，并且优选地从约一个至约五个氨基酸置换。本文的变体Fc区将优选地与天然序列Fc区和/或与母体多肽的Fc区具备至少约80％的同源性，并且最优选地与其具备至少约90％的同源性，更优选地与其具备至少约95％的同源性。
“Fc受体”或“FcR”描述与抗体的Fc区结合的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)，并且包含FcγRI亚类、FcγRII亚类和FcγRIII亚类的受体(包含这些受体的等位变体和选择性剪接形式)，FcγRII受体包含FcγRIIA(“激活受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，FcγRIIA和FcγRIIB具有相似的氨基酸序列(主要在其胞浆域中不同)。激活受体FcγRIIA在其胞浆域中含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(“ITAM”)。抑制受体FcγRIIB在其胞浆域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(“ITIM”)。(参见，例如，M.Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。Ravetch andKinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)；Capel et al.,Immunomethods 4:25-34(1994)和de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中对FcR进行了综述。其他FcR(包含将在未来被鉴别的那些)被本文的术语“FcR”所包括。FcR也可以增加抗体的血清半衰期。
可以测定人FcRn高亲和力结合多肽在体内与FcRn的结合和血清半衰期，例如，在表达人FcRn的转基因小鼠或转染的人细胞系中，或在被施用了具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中。WO 2004/42072(Presta)描述了具有与FcR增强或减弱的结合的抗体变体。还参见，例如，Shields et al.,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
“Fv”是含有完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该片段由处于紧密、非共价方式缔合的一个重链可变区域和一个轻链可变区域的二聚体组成。从这两个域的折叠发散出六个高变环(3个环来自H链，3个环来自L链)，六个高变环提供抗原结合的氨基酸残基，并且赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使单个可变域(或Fv的一半，其只包括三个对抗原特异性的HVR)也具有识别和结合抗原的能力(虽然与整个结合位点相比，亲和力较低)。
“单链Fv”也简称为“sFv”或“scFv”，是包括VH和VL抗体域的抗体片段，所述VH和VL抗体域连接到单个多肽链上。优选地，sFv多肽还包括VH域和VL域之间的多肽接头，其使得sFv能够形成对于抗原结合而言期望的结构。对于sFv的综述，参见Plückthun in ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
抗体的“功能片段”包括完整抗体的一部分，其通常包含完整抗体的抗原结合区或可变区，或抗体的F区，所述F区保留或具有修饰的FcR结合能力。抗体片段的实例包含线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“双体(diabodies)”指小抗体片段，其制备是通过用VH域和VL域之间的短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(参见前述段落)，使得实现V域的链间而不是链内配对，从而产生双价片段，即，具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双体是两个“交叉的”sFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH域和VL域存在于不同的多肽链上。双体在例如EP 404,097；WO 1993/011161；WO/2009/121948；WO/2014/191493；Hollinger et al.,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 90:6444-48(1993)中被更详细地描述。
如本文所使用的，“嵌合抗体”指这样的抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而一个或多个链的残余部分与源自另一个物种或属于另一个抗体类或亚类的抗体中的对应序列以及这样的抗体的片段相同或同源，只要其展现出期望的生物活性(美国专利号4,816,567；Morrison et al.,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA,81:6851-55(1984))。本文感兴趣的嵌合抗体包含抗体，其中抗体的抗原结合区源自通过例如用感兴趣的抗原免疫猕猴产生的抗体。如本文所使用的，“人源化抗体”是“嵌合抗体”的子集。
非人(例如，鼠科)抗体的“人源化”形式是含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一些实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受者抗体)，其中来自受者的HVR的残基被具有期望的特异性、亲和力和/或容量的来自非人物种(如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物)的HVR(供者抗体)的残基替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的FR残基被对应的非人残基替代。此外，人源化抗体可以包括未在受者抗体中或在供者抗体中发现的残基。可以进行这些修饰以进一步改善抗体性能，如结合亲和力。通常，人源化抗体将包括基本上全部的至少一个以及典型地两个可变域，可变域中全部的或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白序列的高变环，并且全部的或基本上全部的FR区是人免疫球蛋白序列的FR区，虽然FR区可以包含改进抗体性能(如结合亲和力、异构化、免疫原性等)的一个或更多个单个的FR残基置换。FR中的这些氨基酸置换的数量通常在H链上不超过6个，并且在L链上不超过3个。人源化抗体还将可选地包括免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常是人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。更多细节参见，例如，Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。另外参见，例如，Vaswani and Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle andGross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)和美国专利号6,982,321和7,087,409。
“人抗体”是具有这样的氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列对应于由人产生的抗体和/或已经使用任何用于制造如本文所公开的人抗体的技术制造的抗体的氨基酸序列。人抗体的此定义明确地排除了包括非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术(包含噬菌体展示文库)生产人抗体。Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。在Cole et al.,MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boerner et al.,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)中也描述了可用于制备人单克隆抗体的方法。另外参见van Dijk and van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)。可以通过向转基因动物施用抗原来制备人抗体，所述转基因动物已经被改造以响应抗原激发产生这样的抗体，但其内源性基因座已经被破坏，例如，免疫的xenomice(参见，例如，关于XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584)。另外参见，例如，关于经由人B细胞杂交瘤技术生成人抗体的Li et al.,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。
当在本文中使用时，术语“高变区”、“HVR”或“HV”指在序列中是高变的和/或形成结构确定的环的抗体可变域的区。通常，抗体包括六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，并且三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3显示出六个HVR的最大差异，并且H3尤其被认为在赋予抗体精确特异性中发挥独特的作用。参见，例如，Xu et al.,Immunity 13:37-45(2000)；Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo,ed.,HumanPress,Totowa,NJ,2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在的骆驼抗体(camelidantibody)在缺少轻链的情况下是功能性的以及稳定的。参见，例如，Hamers-Casterman etal.,Nature 363:446-448(1993)和Sheriff et al.,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
有多种HVR描述在使用中并且被包括在本文中。是Kabat互补决定区(CDR)的HVR是基于序列可变性的，并且是最常用的(上述Kabat et al.)。相反，Chothia指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR体现了Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并且被Oxford Molecular’s AbM抗体建模软件所使用。“Contact”HVR基于对可获得的复合物晶体结构的分析。来自这些HVR中的每个的残基如下所示。
HVR可以包括“延长的HVR”，如下所示：在VL中24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及在VH中26-35(H1)、50-65或49-65(优选的实施方案)(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些延长的HVR定义中的每个，根据上述Kabat et al.对可变域的残基编号。
“骨架”或“FR”残基是除本文定义的HVR残基之外的那些可变域残基。
短语“可变域残基Kabat编号”或“氨基酸位置Kabat编号”及其变形，指在上述Kabat et al.中被用于抗体编译的重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用该编号系统，实际的线性氨基酸序列可以含有对应于可变域的FR或HVR的缩短或插入的较少的或附加的氨基酸。例如，重链可变域可以包含在H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和在重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。对于给定的抗体，残基的Kabat编号可以通过将抗体序列的同源区与“标准”Kabat编号的序列比对来确定。
当提及可变域中的残基(大约是轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat et al.,Sequences of Immunological Interest.5thEd.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，上述Kabat et al.中报道的EU索引)。“如Kabat中的EU索引”指人IgG1EU抗体的残基编号。除非本文中另外规定，对抗体的可变域中的残基编号的提及意为依据Kabat编号系统的残基编号。除非本文中另外规定，对抗体的恒定域中的残基编号的提及意为依据EU编号系统的残基编号(例如，参见，美国专利公布号2010-280227)。
如本文所使用的，“受体人骨架”是包括源自人免疫球蛋白骨架或人共有骨架的VL骨架或VH骨架的氨基酸序列的骨架。“源自”人免疫球蛋白骨架或人共有骨架的受体人骨架可以包括与其相同的氨基酸序列，或者其可以含有预先存在的氨基酸序列改变。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸改变的数量是10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、或2个或更少。在预先存在的氨基酸改变存在于VH中的情况下，优选的那些改变仅发生在位点71H、73H和78H中的三个、两个或一个处；例如，那些位点处的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一些实施方案中，VL受体人骨架在序列上与VL人免疫球蛋白骨架序列或人共有骨架序列相同。
“人共有骨架”是代表人免疫球蛋白VL或VH骨架序列的选择中最普遍存在的氨基酸残基的骨架。通常，人免疫球蛋白VL或VH骨架序列的选择来自可变域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中所述的亚组。实例包含，对于VL，亚组可以是如上述Kabat et al.中的亚组kappa I、kappa II、kappa III或kappa IV。此外，对于VH，亚组可以是如上述Kabat et al.中的亚组I、亚组II或亚组III。
在特定位置处的“氨基酸修饰”指特定残基的置换或缺失，或特定残基附近的至少一个氨基酸残基的插入。特定残基“附近的”的插入意为在其一个至两个残基内的插入。插入可以是特定残基的N末端或C末端。本文中优选的氨基酸修饰是置换。
“亲和力成熟的”抗体是在其一个或更多个HVR中具有一个或更多个改变的抗体，与不具备那些一个或多个改变的亲代抗体相比，所述改变造成抗体对抗原的亲和力提高。在一些实施方案中，亲和力成熟的抗体对于靶标抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体通过本领域已知的程序产生。例如，Marks et al.,Bio/Technology10:779-783(1992)描述了通过VH域和VL域改组的亲和力成熟。HVR和/或骨架残基的随机诱变由例如Barbas et al.Proc Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994)；Schier et al.Gene169:147-155(1995)；Yelton et al.J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson et al.,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)和Hawkins et al,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)描述。
如本文所使用的，术语“特异性识别”或“特异性结合”指在包含生物分子的异质分子群体存在的情况下，对于确定靶标的存在是决定性的可测量的和可重现的相互作用(如靶标和抗体之间的吸引或结合)。例如，与靶标或表位特异性或优先结合的抗体是这样的抗体，相比于所述抗体与其他靶标或靶标的其他表位的结合，所述抗体以较大的亲和力、抗体亲抗原性、更容易地和/或以更长的持续时间结合该靶标或表位。还被理解地是，例如，与第一靶标特异性或优先结合的抗体(或部分)可以或可以不与第二靶标特异性或优先结合。同样地，“特异性结合”或“优先结合”不一定要求(尽管其可以包含)排外的结合。与靶标特异性结合的抗体可以具有至少约103M-1或104M-1，有时约105M-1或106M-1，在其他情况中约106M-1或107M-1，约108M-1至109M-1，或约1010M-1至1011M-1或更高的缔合常数。各种免疫测定方式可以被用于选择与特定蛋白质进行特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定被常规用于选择与蛋白质进行特异性免疫反应的单克隆抗体。对于可以被用于确定特异性免疫反应性的免疫测定方式和条件的描述，参见，例如，Harlow and Lane(1988)Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Publications,New York。
如本文所使用的，“一致性”表示在对齐的序列中的任何特定位置，氨基酸残基在序列间是相同的。如本文所使用的，“相似性”表示在对齐的序列中的任何特定位置，氨基酸残基在序列间属于相似的类型。例如，亮氨酸可以置换异亮氨酸或缬氨酸。可以通常彼此置换的其他氨基酸包含，但不限于：
-苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳族侧链的氨基酸)；
-赖氨酸、精氨酸和组氨酸(具有碱性侧链的氨基酸)；
-天门冬氨酸和谷氨酸(具有酸性侧链的氨基酸)；
-天门冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺侧链的氨基酸)；以及
-半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫侧链的氨基酸)。
一致性和相似性程度可以被容易地计算(参见例如，Computational MolecularBiology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing.Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993；Computer Analysis of Sequence Data,Part 1,Griffin,A.M.,andGriffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in MolecularBiology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；和Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991)。
如本文所使用的，补体蛋白和第二蛋白质之间的“相互作用”包括(不限于)蛋白质-蛋白质相互作用、物理相互作用、化学相互作用、结合、共价结合和离子结合。如本文所使用的，当抗体破坏、降低或完全消除两个蛋白质之间的相互作用时，抗体“抑制”两个蛋白质之间的“相互作用”。当本公开的抗体或其片段与两个蛋白质中的一个结合时，抗体或其片段“抑制”两个蛋白质之间的“相互作用”。
“阻断”抗体、“拮抗剂”抗体、“抑制性”抗体或“中和”抗体是抑制或降低其结合的抗原的一种或更多种生物活性(如与一种或更多种蛋白质的相互作用)的抗体。在一些实施方案中，阻断抗体、拮抗剂抗体、抑制性抗体或“中和”抗体基本上或完全地抑制抗原的一种或更多种生物活性或相互作用。
抗体“效应子功能”指归于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性，并且随抗体同种型而不同。
如本文所使用的，术语“亲和力”指两个作用者(agent)(例如，抗体和抗原)的可逆的结合的平衡常数，并且被表示为解离常数(KD)。亲和力可以比抗体对不相关氨基酸序列的亲和力大至少1倍，大至少2倍，大至少3倍，大至少4倍，大至少5倍，大至少6倍，大至少7倍，大至少8倍，大至少9倍，大至少10倍，大至少20倍，大至少30倍，大至少40倍，大至少50倍，大至少60倍，大至少70倍，大至少80倍，大至少90倍，大至少100倍，或大至少1000倍，或更大。抗体对靶标蛋白的亲和力可以是，例如，从约100纳摩尔(nM)到约0.1nM，从约100nM到约1皮摩尔(pM)，或从约100nM到约1飞摩尔(fM)或更多。如本文所使用的，术语“抗体亲抗原性”指在稀释后，两个或更多个作用者的复合物对解离的抵抗力。对于抗体和/或抗原结合片段，术语“免疫反应性”和“优先结合”在本文中被可互换地使用。
术语“结合”指两个分子之间由于，例如共价相互作用、静电相互作用、疏水相互作用和离子相互作用和/或氢键相互作用(包含相互作用如盐桥和水桥)的直接缔合。例如，主题抗-C1s抗体与补体C1s蛋白内的表位特异性结合。“特异性结合”指具有至少约10-7M或更大(例如，5×10-7M、10-8M、5×10-8M以及更大)的亲和力的结合。“非特异性结合”指具有小于约10-7M的亲和力的结合，例如，具有10-6M、10-5M、10-4M等的亲和力的结合。
如本文所使用的，术语“kon”意指抗体与抗原的缔合的速率常数。
如本文所使用的，术语“koff”意指抗体从抗体/抗原复合物上解离的速率常数。
如本文所使用的，术语“KD”意指抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
如本文所使用的，对于肽、多肽或抗体序列，“氨基酸序列一致性百分比(％)”和“同源性”指在对序列进行比对，并且引入缺口(如果必要)以实现最大序列一致性百分比，并且不考虑任何保守置换作为序列一致性的一部分之后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为确定氨基酸序列一致性百分比目的的比对可以以本领域技术之内的各种方式实现，例如，使用公众可获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当的参数，包含实现在所比较的序列的全长上的最大程度的对齐所需要的任何本领域已知的算法。
“生物样品”包括从个体获得的各种各样的样品类型，并且可以被用于诊断或监测测定。定义包括生物来源的血液和其他液体样品、固态组织样品(如活检标本或组织培养物或源自其的细胞)以及其子代。定义还包含在获得后已经被以任何方式操纵的样品，如通过用试剂处理、溶解或某些组分(如多核苷酸)的富集。术语“生物样品”包括临床样品，并且也包含培养物中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物流体和组织样品。术语“生物样品”包含尿液、唾液、脑脊髓液、间质液、眼内液、滑液、血液成分(如血浆和血清)等。术语“生物样品”也包含固态组织样品、组织培养物样品和细胞样品。
“分离的”核酸分子是被鉴别的并且从至少一种污染核酸分子分离的核酸分子，所述“分离的”核酸分子通常在其被产生的环境中与所述至少一种污染核酸分子缔合。优选地，分离的核酸不和与产生环境有关的全部组分缔合。编码本文的多肽和抗体的分离的核酸分子所处的形式不同于其在自然界中被发现时所处的形式或状态。因此，分离的核酸分子不同于细胞中天然存在的编码本文的多肽和抗体的核酸。
如本文所使用的，术语“载体(vector)”意指能够转运已经与其连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体(vector)是“质粒”，其指环状双链DNA，附加的DNA区段可以被连接到其中。另一种类型的载体(vector)是噬菌体载体(vector)。另一种类型的载体(vector)是病毒载体(vector)，其中附加的DNA区段可以被连接到病毒基因组中。某些载体(vector)能够在其被引入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体(vector)和游离型哺乳动物载体(vector))。其他载体(vector)(例如，非游离型哺乳动物载体(vector))在被引入到宿主细胞时，可以被整合到宿主细胞基因组中，并且从而与宿主基因组一同被复制。此外，某些载体(vector)能够指导与其可操作地连接的基因的表达。这样的载体(vector)在本文中被称为“重组表达载体(vector)”，或者被简单地称为“表达载体(vector)”。通常，在重组DNA技术中有用的表达载体(vector)常常是质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体(vector)”可以可互换地被使用，因为质粒是载体(vector)的最常用形式。
如在文本中可互换地使用的，“多核苷酸”或“核酸”指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包含DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基，和/或其类似物，或者可以通过DNA聚合酶或RNA聚合酶或者通过合成反应被并入到聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包括经修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸及其类似物。对核苷酸结构的修饰(如果存在)可以在聚合物组装之前或之后被赋予。核苷酸序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以包括合成后进行的一个或多个修饰，如缀合至标记物。其他类型的修饰包含，例如，“帽”，用类似物置换天然存在的核苷酸中的一个或更多个，核苷酸间修饰如，例如，具有不带电荷的键(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和具有带电荷的键(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、含有悬垂部分(pendantmoiety)的那些，如，例如，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化型金属等)的那些、含有烷化剂的那些、具有经修饰的键(例如，α异头核酸等)的那些，以及一种或多种多核苷酸的未经修饰形式。此外，通常存在于糖类中的任何羟基基团可以被，例如，膦酸酯基团、磷酸酯基团替代，被标准保护基团保护，或者被活化以制备与附加的核苷酸的附加的键，或者可以被缀合至固体支持物或半固体支持物。5’和3’末端的OH可以被磷酸化或者可以被胺或从1到20个碳原子的有机加帽基团部分取代。其他羟基还可以被衍生化为标准保护基团。多核苷酸还可以含有本领域通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包含，例如，2’-O-甲基-核糖，2’-O-烯丙基-核糖，2’-氟-核糖或2’-叠氮基-核糖，碳环糖类似物，α-异头糖，差向异构糖(如阿拉伯糖、木糖或来苏糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖)，无环类似物，和碱性核苷类似物(如甲基核苷)。一个或更多个磷酸二酯键可以被替代性的连接基团替代。这些替代性的连接基团包含，但不限于，其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酯(thioate)”)、P(S)S(“二硫代酯(dithioate)”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)OR’、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”)替代的实施方案，其中每个R或R’独立地是H或取代的或未取代的可选地含有醚(-O-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基的烷基(1-20个C)。多核苷酸中全部的键无需是相同的。前述的描述适用于本文提及的全部多核苷酸(包含RNA和DNA)。
“宿主细胞”包含可以作为或已经作为用于整合多核苷酸插入的一个或多个载体(vector)的受者的个体细胞或细胞培养物。宿主细胞包含单一宿主细胞的子代，并且该子代由于自然的、偶然的或故意的突变可能未必与原始亲代细胞完全相同(在形态上或在基因组DNA互补上)。宿主细胞包含用本公开的一种或多种多核苷酸在体内转染的细胞。
如本文所使用的，“载体(carrier)”包含在采用的剂量和浓度下对于暴露于其的细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载体(carrier)、赋形剂或稳定剂。通常生理学上可接受的载体(carrier)是水性pH缓冲溶液。生理学上可接受的载体(carrier)的实例包含缓冲液(如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸)；包含抗坏血酸的抗氧化剂；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)；氨基酸(如甘氨酸、谷氨酰胺、天门冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；单糖、二糖和其他碳水化合物(包含葡萄糖、甘露糖或糊精)；螯合剂(如EDTA)；糖醇(如甘露糖醇或山梨糖醇)；成盐平衡离子(如钠)；和/或非离子表面活性剂(如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM)。
术语“神经营养素”指在脑中是神经保护性的神经营养因子。这些因子适合于在本公开的组合物和方法中使用，并且包含脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养素-4/神经营养素-5、成纤维细胞生长因子(FGF)-2和其他FGF、神经营养素(NT)-3、红细胞生成素(EPO)、肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)-α、TGF-β、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)、睫状神经营养因子(CNTF)、神经胶质源性神经营养因子(GDNF)、神养蛋白、血小板源性生长因子(PDGF)、人表皮生长因子受体调节蛋白、神经调节素、artemin、persephin、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子(CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF、导蛋白、心肌营养素-1、刺猬因子、白血病抑制因子(LIF)、中期因子、多效蛋白、骨形态生成蛋白(BMP)、鞘脂活化蛋白、轴突导蛋白和干细胞因子(SCF)。
术语“预防”是本领域公认的，并且当与病况(如SMA)关联使用时，在本领域中被很好地理解，并且包含组合物的施用，相对于未接受组合物的受试者，所述组合物的施用降低受试者中的医学病况的一种或更多种症状的频率或严重程度，或延迟受试者中的医学病况的一种或更多种症状的发作。因此，SMA进展的预防包含，例如，相对于未接受疗法的对照群体，降低接受疗法的患者群体中神经变性的平均量，例如，按统计学和/或临床显著的量。类似地，神经退行性疾病进展的预防包含相对于未接受疗法的患者，降低接受疗法的患者将发展伤病(如认知减退和/或记忆丧失)的可能性，或延迟伤病的发作。
如本文所使用的，术语“受试者”指活的哺乳动物，并且可以与术语“患者”可互换地使用。哺乳动物的实例包含，但不限于，哺乳动物类的任何成员：人(包含胎儿)，非人灵长类动物(如黑猩猩以及其他类人猿和猴类)；家畜(如牛、马、绵羊、山羊、猪)；家养动物(如兔、狗和猫)；实验室动物(包含啮齿动物，如大鼠、小鼠和豚鼠)等。该术语不指示特定的年龄或性别。
如本文所使用的，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包含降低、防止或逆转病况的症状、临床病征或潜在的病理以稳定或改善受试者的病况，或以降低受试者的病况将恶化到就好像受试者未接受治疗的可能性。
针对主题治疗方法，术语化合物的“治疗有效的量”指制剂中的一种或多种化合物的量，当制剂作为期望的给药方案的一部分被施用(至哺乳动物(优选地人))时，其根据用于待治疗的紊乱或病况的临床可接受的标准或美容目的，例如，以适用于任何医学治疗的合理的利益/风险比，缓和症状、减轻病况或减缓疾病病况的发作。本文的治疗有效的量可以根据因素(如患者的疾病状况、年龄、性别和体重，以及抗体在个体中引起期望的应答的能力)变化。
如本文所使用的，在本文所描述的治疗方法之前，“具有”发展特定疾病、紊乱或病况的“风险”的个体可以具有或不具有可检测到的疾病或疾病的症状，并且可以已经表现出或可以不表现出可检测到的疾病或疾病的症状。如本领域已知的，“具有风险”指示个体具有一种或更多种风险因素，所述风险因素是与特定疾病、紊乱或病况的发展相关联的可测量的参数。相比于没有这些风险因素中的一种或更多种的个体，具有这些风险因素中的一种或更多种的个体具有更高的发展特定疾病、紊乱或病况的可能性。
慢性”施用指以连续模式而不是急性模式施用一种或多种药品，以便在延长的时间段内维持最初的治疗效果(活性)。“间歇”施用指不是连续施用而没有中断，而是实质上是循环的/周期性的治疗。
除非另外限定，否则本文所使用的全部技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文所描述的那些相似或等同的任何方法或材料也可以被用在本发明的实践或测试中，但是现在描述优选的方法和材料。本文提到的全部出版物均通过引用被并入本文，以公开和描述与所引用的出版物相关的方法和/或材料。如，例如Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 3dedition(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel,et al.eds.,(2003))；theseries Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.):PCR 2:A Practical Approach(M.J.MacPherson,B.D.Hames and G.R.Taylor eds.(1995))，Harlow and Lane,eds.(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney,ed.(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,ed.,1984)；Methods in MolecularBiology,Humana Press；Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,ed.,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney),ed.,1987)；Introduction toCell and Tissue Culture(J.P.Mather and P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell andTissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,and D.G.Newell,eds.,1993-8)J.Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir andC.C.Blackwell,eds.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller andM.P.Calos,eds.,1987)；PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis et al.,eds.,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan et al.,eds.,1991)；ShortProtocols in Molecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janewayand P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:A Practical Approach(D.Catty.,ed.,IRL Press,1988-1989)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd and C.Dean,eds.,Oxford University Press,2000)；Using Antibodies:ALaboratory Manual(E.Harlow and D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti and J.D.Capra,eds.,Harwood AcademicPublishers,1995)；和Cancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita etal.,eds.,J.B.Lippincott Company,1993)中所描述的广泛使用的方法。
核酸、载体(vector)和宿主细胞
可以使用重组方法和组合物产生适用于本公开的方法中的抗体，例如，如美国专利号4,816,567中描述的。在一些实施方案中，提供具有编码本公开的任何抗体的核苷酸序列的分离的核酸。这样的核酸可以编码含有抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体的VL/CL的氨基酸序列和/或含有抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体的VH/CH1的氨基酸序列。在一些实施方案中，提供含有这样的核酸的一种或更多种载体(vector)(例如，表达载体(vector))。还可以提供含有这样的核酸的宿主细胞。宿主细胞可以含有(例如，已经用下列载体转导)：(1)含有核酸的载体(vector)，所述核酸编码含有抗体的VL/CL的氨基酸序列和含有抗体的VH/CH1的氨基酸序列，或(2)含有核酸的第一载体(vector)(所述核酸编码含有抗体的VL/CL的氨基酸序列)，和含有核酸的第二载体(vector)(所述核酸编码含有抗体的VH/CH1的氨基酸序列)。在一些实施方案中，宿主细胞是真核的，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。
本文公开制造抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体的方法。方法包含在适合于抗体的表达的条件下，培养含有编码抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体的核酸的本公开的宿主细胞。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
对于本公开的人源化抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体的重组产生，编码抗体的核酸被分离，并且插入到一个或更多个载体(vector)中用于进一步克隆和/或在宿主细胞中表达。这样的核酸可以容易地被分离并且使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)测序。
含有本文所描述的编码本公开的任何抗体、或其片段多肽(包含抗体)的核酸序列的适合的载体(vector)包含(不限于)克隆载体(vector)和表达载体(vector)。适合的克隆载体(vector)可以根据标准技术构建，或者可以从本领域可获得的大量克隆载体(vector)中选择。虽然所选择的克隆载体(vector)可以根据预期使用的宿主细胞而变化，但是有用的克隆载体(vector)通常具有自我复制的能力，可以具备特定限制性内切酶的单一靶标，和/或可以携带可以用于选择含有该载体(vector)的克隆的标记基因。适合的实例包含质粒和细菌病毒，例如，pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA、和穿梭载体(vector)(如pSA3和pAT28)。这些和许多其他克隆载体(vector)是从商业供应商(如BioRad、Stratagene和Invitrogen)可获得的。
含有感兴趣的核酸的载体(vector)可以通过多种适当手段中的任何一种被引入到宿主细胞中，包含电穿孔，采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其他物质转染；基因枪法(microprojectile bombardment)；脂质体转染；和感染(例如，在载体(vector)是感染性病原体如牛痘病毒的情况下)。引入载体(vector)或多核苷酸的选择将通常取决于宿主细胞的特征。在一些实施方案中，载体(vector)含有核酸，所述核酸含有编码本公开的抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体的一个或更多个氨基酸序列。
用于克隆或表达编码抗体的载体(vector)的适合的宿主细胞包含原核细胞或真核细胞。例如，本公开的抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体可以在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于细菌中抗体片段和多肽的表达(例如，描述在大肠杆菌中抗体片段的表达的美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523；和Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),pp.245-254)。在表达之后，抗体可以从可溶级分中的细菌细胞糊状物(cell paste)中被分离，并且可以被进一步纯化。
抗体筛选
可以根据调控突触丢失的能力筛选候选抗体。这样的筛选可以使用体外模型、基因改造的细胞或动物、或纯化的蛋白质进行。各种各样的测定可以被用于该目的，如体外培养系统。例如，体外培养系统可以包含向皮质神经元的培养物中添加神经胶质细胞，随后计算从神经元去除和/或通过神经胶质细胞摄取的突触的数量。
例如，也可以在用淀粉样-β寡聚体的大脑内注射挑战的动物中、或在用与SMA有关的人家族性突变基因修饰的动物中、或在具有SMA的诱导形式的动物中，通过评估抗体在正常发育或老化期间调控突触丢失的能力，体内测试候选抗体的功能活性。
也可以使用基于计算机的模拟、通过结合测定等鉴别候选抗体。可以使用各种各样的体外模型确定是否抗体与补体结合，或以另外的方式影响补体活性。可以通过在容许突触丢失的环境中接触神经元来测试这样的候选抗体。还可以在体内模型中测试这样的抗体对突触丢失的作用。
通过向培养物中的神经元施用候选抗体以及在不存在或存在抗体的情况下测定突触的存在来定量突触丢失。在本公开的一些实施方案中，神经元是例如视网膜神经节细胞(RGC)的主要培养物。经纯化的RGC群体通过常规方法(如序列免疫包被筛选法(sequential immunopanning))获得。细胞被培养在适合的介质中，所述介质将通常包括适当的生长因子，例如，CNTF；BDNF等。神经细胞(例如，RCG)被培养足以允许强烈的突起长出的一段时间，并且然后与候选抗体培养约1天至1周的时间段。可以在活星形细胞饲养物上培养神经元，以便诱导突触丢失的信号传导。培养星形细胞饲养层的方法是本领域已知的。例如，皮质神经胶质细胞可以被沉积在不允许神经元存活的介质中，并且移除不黏连的细胞。
对于突触的定量，培养基被固定、阻断和洗涤，然后用突触蛋白特异性抗体(例如，突触结合蛋白等)染色，并且用适当的试剂显影。可以用显微镜进行染色分析。在一些实施方案中，用相机和图像采集软件调整荧光发射的数字图像，以去除像素值范围的未使用部分，并且调整使用的像素值以利用整个像素值范围。对应的通道图像可以被合并以创建含有作为单独色彩通道的两个单通道图像的彩色(RGB)图像。使用滚动球背景差分算法可以鉴别共定位点，以从每个图像通道去除低频背景。将图像中的全部突触结合蛋白、PSD-95以及共定位点的数量、平均面积、平均最小和最大像素强度以及平均像素强度记录用于分析。
通常，多个测定混合物以不同的抗体浓度并行运行，以获得对不同浓度的差别应答。通常，这些浓度中的一个作为阴性对照，即处于零浓度或低于检测水平。
药物组合物和施用
本公开的抗体可以以药物组合物的形式被施用。
可以通过将具有期望的纯度的抗体与可选的药学上可接受的载体(carrier)、赋形剂或稳定剂混合制备本公开的抗体的治疗制剂用于存储(以冻干的制剂或水性溶液的形式)(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.[1980])。可接受的载体(carrier)、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对受者是无毒性的，并且包含缓冲液(如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸)；抗氧化剂(包含抗坏血酸和甲硫氨酸)；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯类，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天门冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐平衡离子，如钠；金属复合物(例如，锌蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
脂质转染或脂质体也可以被用于将抗体或抗体片段递送到细胞中，其中与靶标蛋白的结合域特异性结合的表位或最小的片段是优选的。
抗体也可以被分别包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如，羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中，胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中或粗乳剂中。这样的技术被公开在Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中。
将被用于肠胃外施用的制剂必须是无菌的。这经由通过无菌过滤膜的过滤容易实现。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的适合的实例包含含有抗体的固体疏水聚合物的半透过性基质，所述基质处于成形物品的形式，例如膜或微胶囊。持续释放基质的实例包含聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸γ乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物(如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸)能够使分子释放超过100天，但是某些水凝胶在较短的时间段释放蛋白质。
本公开的抗体和组合物通常通过各种各样的途径被施用，所述途径包含(但不限于)局部、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、鼻内和病灶内施用。肠胃外施用途径包含肌内、静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、或皮下施用。本公开的抗体和组合物可以包含向发育中的胎儿施用(例如，血管内施用等)。
根据期望的制剂，药物组合物也可以包含稀释剂的药学上可接受的非毒性载体(carrier)，其被定义为通常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的运载体(vehicle)。选择稀释剂以使得不影响组合的生物活性。这样的稀释剂的实例是蒸馏水、缓冲水、生理盐水、PBS、林格氏溶液、葡萄糖溶液和汉克氏溶液。此外，药物组合物或制剂可以包含其他载体(carrier)、佐剂或非毒性、非治疗性、非免疫原性稳定剂、赋形剂等。组合物还可以包含附加的物质以接近生理条件，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂、湿润剂和去垢剂。
组合物也可以包含各种各样的稳定剂中的任何一种，如以抗氧化剂为例。当药物组合物包含多肽时，多肽可以与各种众所周知的增强多肽的体内稳定性，或者以另外的方式增强其药理学性质(例如，增加多肽的半衰期、降低其毒性、增强药代动力学和/或药效动力学特性、增强溶解性或摄取)的化合物复合。这样的修饰或复合剂的实例包含硫酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐。组合物的多肽也可以与增强它们的体内特性的分子复合。这样的分子包含，例如，碳水化合物、聚胺类、氨基酸、其他肽、离子(例如，钠、钾、钙、镁、锰)和脂类。关于适合用于各种各样类型的施用的制剂的进一步指导可以在Remington’sPharmaceutical Sciences,Mace Publishing Company,Philadelphia,PA.,17th ed.(1985)中找到。关于药物递送方法的简述，参见Langer,Science 249:1527-1533(1990)。
活性成分的毒性和治疗疗效可以根据标准制药学程序在细胞培养物和/或实验动物中被确定，包含，例如，确定LD50(对群体的50％致死的剂量)和ED50(在群体的50％中治疗上有效的剂量)。毒性作用和治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且其可以表示为比值LD50/ED50。展现出大的治疗指数的化合物是优选的。
从细胞培养和/或动物研究获得的数据可以被用在配制用于人的剂量范围中。活性成分的剂量通常排列在包含具有低毒性的ED50的循环浓度范围内。根据采用的剂型和利用的施用途径，剂量可以在该范围内变化。
本文所描述的药物组合物可以以多种不同的方式被施用。实例包含经由口、鼻内、直肠、局部、腹膜内、静脉内、肌内、皮下(subcutaneous)、皮肤下(subdermal)、经皮、鞘内和颅内方法施用含有药学上可接受的载体(carrier)的组合物。
对于口服施用，活性成分可以以固体剂型(如胶囊剂、片剂和粉剂)，或者以液体剂型(如酏剂、糖浆剂和混悬剂)被施用。一种或多种活性组分可以与无活性成分和粉状载体(carrier)(如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉、纤维素或纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸、糖精钠、滑石、碳酸镁)一起被包封在明胶胶囊中。可以被添加以提供期望的颜色、味道、稳定性、缓冲能力、分散性或其他已知的期望的特征的附加的无活性成分的实例是红色氧化铁、硅胶、十二烷基硫酸钠、二氧化钛和可食用白墨。类似的稀释剂可以被用于制作压缩片剂。片剂和胶囊剂两者都可以被制造成持续释放产品，以在数小时时间段内提供药品的连续释放。压缩片剂可以被包覆糖衣或膜，以掩盖任何令人不快的味道，并且保护片剂免受空气的影响，或者可以包覆肠溶衣，用于在胃肠道中选择性分解。口服施用的液体剂型可以含有着色剂和风味剂，以增加患者的接受程度。
适合于肠胃外施用的制剂包含水性和非水性的、等渗的无菌注射液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期的受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可以包含悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。
用于配制药物组合物的组分优选地是高纯度的，并且基本上不含可能有害的污染物(例如，至少国家食品(National Food，NF)级，通常至少分析级，并且更典型地至少药用级)。此外，预期用于肠胃外使用的组合物通常是无菌的。从这个意义上来说，给定的化合物必须在使用前被合成，得到的产物通常基本不含任何可能的有毒物，特别是任何内毒素，其可能存在于合成或纯化过程中。肠胃外施用的组合物也是通常基本上是等渗的并且在GMP条件下制造。
本公开的组合物可以使用任何医学上适当的程序被施用，例如血管内(静脉内、动脉内、毛细血管内)施用、注射进入脑脊髓液、玻璃体内、局部、腔内或直接注射在脑中。根据已知的技术，鞘内施用可以通过使用Ommaya储液囊被实行。(F.Balis et al.,AmJ.Pediatr.Hematol.Oncol.11,74,76(1989))。
在治疗剂被局部施用在脑中的情况下，用于施用本公开的治疗组合物的一种方法是通过任何适合的技术沉积进入或靠近位点(如通过直接注射(如果需要，通过注射器的立体定位辅助)或通过将Ommaya储液囊的尖端放置进腔或包囊内)用于施用。可替代地，对流增强(convection-enhanced)递送导管可以被直接植入位点内、植入天然的或手术创建的包囊内、或植入正常的脑物质内。这样的对流增强的药物组合物递送装置大大改进了组合物遍及脑物质的扩散。这些递送装置的植入导管利用高流速微输注(具有在约0.5μl/分钟至15.0μl/分钟的范围的流量)而非扩散流，以将治疗组合物递送至脑和/或肿瘤块。这样的装置在美国专利号5,720,720中被描述，其通过引用被全部并入本文。
给予特定患者的治疗组合物的有效量可以取决于各种各样的因素，其中的数种将因患者而异。有能力的临床医师将能够确定施用至患者的治疗剂的有效量。药剂的剂量将取决于治疗、施用途径、治疗剂的性质、患者对治疗剂的敏感度等。利用LD50动物数据以及其他信息，临床医师可以根据施用途径确定个体的最大安全剂量。利用普通技能，有能力的临床医师将能够在常规临床试验过程中优化特定治疗组合物的剂量。组合物可以在一系列超过一次的施用中被施用至受试者。对于治疗组合物，有时候有规律的定期的施用将是必需的，或者可以是期望的。治疗方案将随着药剂变化；例如，一些药剂可以在每天一次或每天两次的基础上长时间段被服用，而更多选择性药剂可以在更加确定的时间过程内被施用，例如一天、两天、三天或更多天，一周或更多周，一个月或更多个月等，每天一次、每天两次、半周一次、每周一次被服用等。
制剂可以被优化用于在脑中的保留和稳定性。当药剂被施用到颅区室中时，药剂被保留在该区室中，并且不扩散或者以另外的方式穿过血脑屏障是期望的。稳定化技术包含交联、多聚化或连接至基团(如聚乙二醇、聚丙烯酰胺、中性蛋白质载体(carrier)等)，以便实现分子量的增加。
用于增加保留的其他策略包含在可生物降解或可生物蚀解的植入物中包埋药剂。治疗活性剂的释放速率由通过聚合物基质的转运速率和植入物的生物降解控制。药物通过聚合物屏障的转运也将被下列因素影响：化合物溶解度；聚合物亲水性；聚合物交联程度；聚合物在吸收水时的膨胀，以便使聚合物屏障对药物更具有渗透性；植入物的几何形状等。植入物与选择作为植入位点的区域的尺寸和形状尺寸规格相当。植入物可以是颗粒、片、贴片、板、纤维、微胶囊等，并且可以具有与所选择的插入位点相容的任何尺寸或形状。
植入物可以是整体的，即具有遍及聚合物基质均匀分布的活性剂，或者是包封的，其中活性剂的储液囊被聚合物基质包封。待采用的聚合物组合物的选择将随施用位点、期望的治疗时间段、患者耐受性、待治疗的疾病的性质等而变化。聚合物的特性将包含植入位点处的可生物降解性、与感兴趣药剂的相容性、包封的容易度、在生理环境中的半衰期。
可以采用的可生物降解的聚合物组合物可以是有机酯或醚，当其降解时产生生理学上可接受的降解产物(包含单体)。酸酐、酰胺、原酸酯等自身或与其他单体的组合可以发挥作用。聚合物可以是缩合聚合物。聚合物可以是交联的或未交联的。尤其感兴趣的是羟基脂肪族羧酸的聚合物(均聚物或共聚物)和多糖。感兴趣的聚酯中包含D-乳酸、L-乳酸、外消旋乳酸、乙醇酸、聚己酸内酯及其组合的聚合物。通过采用L-乳酸盐或D-乳酸盐，获得缓慢生物降解的聚合物，而外消旋物大幅度增加降解。尤其感兴趣的是乙醇酸和乳酸的共聚物，其中通过乙醇酸与乳酸的比例控制生物降解速率。最快降解的共聚物具有大致等量的乙醇酸和乳酸，其中任一种均聚物对降解都更有抵抗力。乙醇酸和乳酸的比例也将影响植入物的脆性，其中对于较大的几何形状，较大弹性的植入物是期望的。藻酸钙和功能化纤维素(特别是羧甲基纤维素酯，其特征是不溶于水，分子量为约5kD至500kD等)在感兴趣的多糖中。也可以在主题公开的植入物中采用可生物降解的水凝胶。水凝胶通常是共聚物材料，其特征是吸收液体的能力。可以采用的示例性可生物降解水凝胶在Heller in:Hydrogels inMedicine and Pharmacy,N.A.Peppes ed.,Vol.III,CRC Press,Boca Raton,Fla.,1987,pp 137-149中被描述。
试剂盒
本公开也提供包括填充有药物组合物的成分中的一种或更多种的一个或更多个容器的药物包装或试剂盒。与这样的一个或多个容器有关的可以是由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的公告，所述公告表明制造、使用或销售机构批准用于人施用。
本公开的试剂盒可以包含一个或更多个容器，所述容器包括经纯化的抗-C1q抗体、抗-C1r抗体或抗-C1s抗体以及按照本领域已知的方法使用的说明。通常，这些说明包括根据本领域已知的任何方法施用抑制剂以治疗或诊断疾病的描述。试剂盒还可以包括基于个体是否患有SMA以及SMA的阶段的鉴别来选择适合于治疗的个体的描述。
说明通常包含关于用于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。本公开的试剂盒中提供的说明通常是在标签或包装说明书上的书面说明(例如，试剂盒中包含的纸页)，但是机器可读的说明(例如，存储磁盘或光盘上携带的说明)也是可接受的。
标签或包装说明书表明组合物被用于治疗SMA。说明可以被提供以用于实施本文所描述的任何方法。
本公开的试剂盒优选地被配置在适合的包装中。适合的包装包含(但不限于)小瓶、瓶、广口瓶、软包装(例如，密封的聚酯薄膜(Mylar)或塑料袋)等。还预期与特定装置(如吸入器、鼻施用装置(例如，喷雾器)或输液装置(如微型泵))组合使用的包装。试剂盒可以具有无菌的存取口(例如容器可以是具有可以被皮下注射针头刺穿的塞子的静脉溶液袋或小瓶)。容器也可以具有无菌的存取口(例如，容器可以是具有可以被皮下注射针头刺穿的塞子的静脉溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是经典补体途径的抑制剂。容器还可以包括第二药学活性剂。
试剂盒可以可选地提供附加的组分，如缓冲液和说明性信息。通常，试剂盒包括容器以及在容器上的或者与容器有关的标签或一个或多个包装说明书。
补体的抑制
已知许多分子抑制补体的活性。除了已知的化合物外，适合的抑制剂可以通过本文所描述的方法被筛选。如上文所描述的，正常细胞可以产生阻断补体活性的蛋白质，例如，CD59、C1抑制剂等。在本公开的一些实施方案中，通过上调编码这样的多肽的基因的表达抑制补体。
阻断补体激活的分子的修饰也是本领域已知的。例如，这样的分子包含(不限于)经修饰的补体受体，如可溶性CR1。CR1的最常见的同种异型的成熟蛋白质含有1998个氨基酸残基：1930个残基的胞外域，25个残基的跨膜区和43个残基的胞浆域。整个胞外域由被称作短一致性重复序列(SCR)或补体控制蛋白重复序列(CCPR)的30个重复单元组成，每个重复单元由60个至70个氨基酸残基组成。近期的数据表明C1q与人CR1特异性结合。因此，CR1识别全部三种补体调理素，即C3b、C4b和C1q。缺少跨膜域与和胞浆域的重组人CR1的可溶性形式(sCR1)已经被产生并且被证明保留了天然CR1的全部已知的功能。在缺血/再灌注损伤的动物模型中sCR1的心脏保护作用已经被证实。已经描述了人C1q受体(C1qR)的数个类型。这些包含普遍分布的60kDa至67kDa的受体，因为其结合C1q的胶原样(collagen-like)域而被称作cC1qR。该C1qR变体被证明是钙网蛋白；一种调控单核细胞吞噬作用的126kDa的受体。gC1qR不是膜结合分子，而是对C1q的球形区具有亲和力的分泌的可溶性蛋白，并且可以作为补体激活的液相调节剂。
衰变加速因子(DAF)(CD55)由四个SCR加上能够进行大量的O-连接糖基化的丝氨酸/苏氨酸富集域组成。DAF通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚附连至细胞膜，并且通过DAF结合C4b和C3b的能力，其通过解离C3和C5转化酶起作用。DAF的可溶性形式(sDAF)已经被证明抑制补体激活。
C1抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂的“丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serpin)”家族的成员)是防止液相C1激活的高度糖基化的血浆蛋白。C1抑制剂通过阻断C1r和C1s的活性位点并且使其从C1q解离来调节补体激活的经典途径。
补体激活的肽抑制剂包含C5a，并且其他抑制性分子包含脱氧半乳聚糖(Fucan)。
突触丢失
突触是在两个神经元之间或在神经元和肌肉细胞之间的神经肌肉接点(NMJ)处形成的非对称的通讯连接。化学性突触经由神经递质的分泌实现细胞与细胞的通讯，而在电性突触中，信号通过缝隙连接(容许离子电流流动的特化的细胞间通道)传递。除了离子之外，调控突触功能的其他分子(如ATP和第二信使分子)可以通过缝隙连接孔扩散。在成熟的NMJ处，突触前膜和突触后膜通过含有形成基膜的胞外蛋白的突触间隙被分开。突触小泡在突触前释放位点被聚集，递质受体在突触后膜处的连接褶中被聚集，并且神经胶质突起围绕神经末梢。
突触发生是动态的过程。在发育期间，通常形成比最终将要保留的突触更多的突触。因此，过量的突触输入的消除是突触回路成熟中的关键步骤。突触消除是涉及突触前伴侣和突触后伴侣之间的相互作用的竞争性过程。在CNS中，与NMJ一样，通过可以涉及共活性输入(coactive input)的选择性稳定和具有无关活性的输入的消除的过程，突触回路的发育的活性依赖性重构发生。通过涉及突触的快速消除的动态过程，突触回路的解剖细化在个体轴突和树突层面上发生。随着轴突分支和重构，突触形成并且利用快速发生的突触消除剥离。
除了正常的发育丢失之外，突触丢失是许多神经退行性疾病(包含SMA)常见的早期病理学事件，并且与认知障碍最相关。例如，在患有临床前期阿尔茨海默病(AD)的患者的脑中，和在转基因动物模型中的研究已经证明，突触损坏发生在疾病进展早期。脑中该突触连接的早期破坏造成神经元功能障碍，神经元功能障碍转而导致在数种神经退行性疾病中观察到的痴呆和/或运动障碍的典型症状。
涉及AD和其他神经退行性疾病的数种分子在突触功能中发挥重要的作用。例如，AβPP在中枢和外周突触点具有优先的定位。在转基因小鼠中，AβPP的突变形式的异常表达不仅造成淀粉样蛋白沉积，而且造成广泛的突触损坏。该突触病理发生在早期，并且与可溶性Aβ1-42的水平而非与斑块形成有关。其中基因产物已经被证明与突触复合体密切有关的其他神经退行性疾病包含亨廷顿病(HD)和肌强直性营养不良(DM)。亨廷顿蛋白(Huntingtin)(HTT)是具有与突触小泡蛋白突触素的分布非常类似的分布的膜结合蛋白。人脑中的研究在一些神经元的核周体、神经毡、膨体(varicosity)以及依据点状染色可能是神经末梢中检测到HTT。丝氨酸/苏氨酸激酶(DMK)(其是DM基因的基因产物)已经被发现定位在骨骼肌的神经肌肉接点的突触后以及心脏组织的闰盘的突触后。也在小脑、海马体、中脑和髓质中的突触点发现了DMK。
本文所公开的抗体可以被用于抑制突触丢失SMA。抑制突触丢失造成突触的维持或降低的丢失，但是减少将会以另外的方式发生。
血脑屏障
如本文所使用的，“血-脑屏障”(BBB)指外周循环与脑和脊髓之间的屏障。BBB由脑毛细血管内皮质膜内的紧密连接形成。这样的紧密连接的形成创建了极为紧密的屏障，其限制分子(甚至如尿素般小、分子量60Da的分子)转运入脑部。脑内的血-脑屏障、脊髓内的血-脊髓屏障、以及视网膜内的血-视网膜屏障是中枢神经系统(CNS)内邻近的毛细血管屏障，并且被统称为血-脑屏障或BBB。本公开提供包含抗体的组合物和方法，所述抗体与BBB受体介导的转运系统结合、偶联至跨BBB转运对其是期望的药剂(例如，神经治疗剂)。本公开的组合物和方法可以利用能够通过选择的内源性BBB受体介导的转运系统转运，并且也能够附连至期望的药剂的任何适合的结构。
BBB已经被证明具有允许数种大分子从血液转运至脑的特异性受体；这些转运体适合作为本公开的组合物的转运体。在本公开中有用的内源性BBB受体介导的转运系统包含转运胰岛素、转铁蛋白、胰岛素样生长因子1和胰岛素样生长因子2(IGF1和IGF2)、瘦素和脂蛋白的那些。在一些实施方案中，本公开利用能够经由内源性胰岛素BBB受体介导的转运系统(例如，人内源性胰岛素BBB受体介导的转运系统)穿过BBB的结构。
用于通过血脑屏障(BBB)的药物递送的一个策略需要通过渗透手段(如甘露糖醇或白三烯)或通过使用血管活性物质(如缓激肽)以生物化学的方式破坏BBB。使用BBB开放以靶向特定药剂的可能性也是一种选择。当组合物通过血管内注射被施用时，BBB破坏剂可以与本公开的治疗组合物共同施用。穿过BBB的其他策略可能需要使用内源性转运系统，包含载体(carrier)介导的转运体(如葡萄糖和氨基酸载体(carrier))，胰岛素或转铁蛋白的受体介导的转胞吞作用以及主动外排转运体(如p-糖蛋白)。主动转运部分也可以被缀合至本公开的抗体以便利跨过血管的上皮壁的转运。可替代地，BBB之后的药物递送可以被推进，例如通过药剂的直接鞘内递送至脑脊髓液，如通过Ommaya储液囊。
脊髓性肌肉萎缩症
本公开的抗体可以在预防SMA、降低发展SMA的风险、或治疗SMA的本方法中是有用的，所述方法包括施用补体途径的抑制剂(例如，抑制剂，如抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体)。本公开的抗体也可以在抑制SMA中的突触丢失中有用。
突触丢失是认知减退的显著相关物，认知减退是神经退行性疾病的重要标志。例如，小神经胶质细胞修剪发育的突触并且调节突触的可塑性和功能。小神经胶质细胞-突触相互作用的破坏促成突触丢失和功能障碍，包含神经退行性疾病中的认知障碍。此外，小神经胶质细胞上表达的免疫相关分子或受体(如补体蛋白或补体受体以及分形趋化因子受体)的破坏造成胎儿期脑发育和出生后脑发育两者中突触异常和线路(wiring)异常，暗示了小神经胶质细胞使突触连接成形。
脊髓性肌肉萎缩症(SMA)是主要在婴幼儿中并且较不频繁在成人中被诊断的临床异质性常染色体隐性神经退行性紊乱。
补体途径和小神经胶质细胞吞噬活性的异常激活可以介导SMA中的突触丢失。例如，如本文所公开的，C1q的阻断可以作为预防脊髓性肌肉萎缩症(SMA)、降低发展脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的方法中的补体抑制剂。SMA的小鼠模型中的免疫组织化学测定揭示了，C1q与运动神经元上的兴奋性突触而非抑制性突触异常相关。C1q和C3也标记易损的运动神经元上的本体感受(VGluT1+)突触。突触消除是由反应性小神经胶质细胞(其是SMN缺陷的脊髓中C1q的主要来源)的吞噬活性介导的。通过用单克隆抗-C1q抗体体内阻断C1q的免疫疗法救援注定被消除的突触并且预防早期突触丢失。行为和形态学分析揭示了本体感受突触的显著救援、改进的正位时间、姿态和生存期。采用脊髓离体制备的功能性测定证明了，从消除救援的突触是功能性的，为SMA是运动回路的疾病提供了进一步的证据。
SMA是由运动神经元存活基因(SMN)的缺失/突变引起的。在人类中，存在两个SMN基因，编码普遍存在的蛋白质(全长SMN或FL-SMN)的端粒SMN1及其着丝粒同系物SMN2(主要生成并非功能性的缺少外显子7的蛋白质(Δ7-SMN))：实际上，SMN2基因产生有限量的可以调控SMA严重程度的功能性蛋白质。这表明存在五种主要临床SMA类型(0、I、II、III、IV)，其特征在于不同的发作年龄和疾病严重程度。SMA的标志是运动神经元的丢失和异常的姿态反射。
0型SMA或胎儿期SMA是SMA的最严重形式的提议名称。受影响的婴幼儿通常在出生时出现明显的无力和先天性多发性关节弯曲。患有0型SMA的婴幼儿通常在6个月之前死亡。
I型(先前被称作韦-霍病)包括病例的约60％。症状在出生时或生命的前几个月内出现。患有I型的婴幼儿具有严重的无力、是低张的、无法在无协助的情况下坐起、具有吞咽困难、无腱反射、并且具有受损的吸吮反射和呼吸并发症。大多数人患有舌自发性收缩。呼吸衰竭导致的死亡通常发生在婴幼儿的第二个生日前。
II型SMA是SMA的中间形式。症状通常在6个月和12个月之间的年龄是明显的，并且以无力、低的肌肉张力、姿势性手指震颤和爬行及行走障碍为特征。患有II型的个体没有腱反射。受II型影响的那些人通常可以在被放置后维持独立的坐姿、在具有协助的情况下可能有能力行走、并且可以存活至青春期和青年期。正如I型，呼吸衰竭通常是患有II型的儿童死亡的原因。
III型是SMA的较温和的形式，并且具有2岁后出现的症状。下肢最常受并发症的影响，所述并发症包含脊柱侧凸、肌腱缩短、和呼吸系统并发症。受SMA III影响的那些人通常可以不受协助行走。患有III型的个体有可能存活至成年期。
SMA IV型是成年发作的具有与III型类似的表型的病况。SMA的该类型是不常见的。
胃肠道并发症在患有SMA的个体中是常见的，并且不清楚这是由于不活动和营养缺乏还是存在主要缺陷是胃肠活动性。患有I型SMA的婴幼儿通常具有延长的喂食时间并且迅速地疲倦。该喂食的降低可以是进行性无力的第一病征，并且可以导致发育停滞和误吸。胃肠道功能障碍包含由于延髓功能障碍导致的喂食和吞咽困难，并且表现为舌无力、张口困难、以及头部控制差。其他相关问题包含胃肠道反流、胃排空延迟和便秘。这些并发症也见于由于其他原因不能坐或站立的个体中，并且在患有SMA的可走动个体中较少见。
无力和活动性受损可以使SMA患者易有许多肌肉骨骼问题。早期识别和适当的治疗对维持功能、预防肺活量的退化和提高生活质量是有帮助的。在患有SMA的不可走动的个体中，挛缩是常见的，并且定期的伸展和支撑计划以保持灵活性和预防挛缩是疗法的主要目标。手动轮椅和机动轮椅可以早在18个月至24个月大的时候开始。能够承受一些重量并且具有一些躯干控制的儿童可以使用具有踝足矫正器的站立式支架或移动式机架。
脊柱侧凸发生在几乎全部患有SMA的不可走动的个体中。未经治疗时，脊柱侧凸引起胸廓畸形，伴有后续的呼吸限制。脊柱融合和支撑是脊柱侧凸的治疗选择；然而，不存在对于其疗效的明确的共识。
治疗方法
通过施用抑制补体激活的药剂，原本将要被丢失的突触可以被维持。这样的药剂包含抗-C1q抗体抑制剂、抗-C1r抗体抑制剂、或抗-C1s抗体抑制剂。其他药剂可以包含上调天然补体的表达的抑制剂、或下调神经元、星形细胞、小神经胶质细胞、皮内细胞、少突神经胶质细胞中C1q、C1r或C1s合成的药剂、阻断补体激活的药剂、阻断补体激活信号的药剂等。这样的药剂可以单独使用或与一种或更多种其他疗法(如，反义药物疗法)组合使用，用于治疗脊髓性肌肉萎缩症(参见下文“组合治疗”部分)。例如，本文所描述的抗体可以与反义药物SPINRAZATM(nusinersen)联合施用。
本文公开的药剂的施用(无论单独或与本文所公开的其他药剂组合)对预防SMA、降低发展SMA的风险、或治疗SMA(例如，在患有脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的患者中)是有用的。在某些实施方案中，本文所公开的方法降低患有SMA的患者的死亡率和/或延长患有SMA的患者的寿命。
方法促进与突触丢失有关的病况(如SMA)中神经元功能的改进的维持。相对于未经治疗的患者，神经连接的维持提供神经退行性疾病中功能的改进。突触丢失的预防可以包括在1天、2天、3天、4天、5天、6天或至少一周的时间段内，相对于缺乏这样的治疗的对照至少可测量的改进，例如突触数量的至少10％的改进、至少20％的改进、至少50％的改进或更多。
本公开的药剂可以以减少突触丢失同时最小化任何副作用的剂量被施用。预期组合物可以被获得并且在医师的指导下被用于在体内使用。治疗制剂的剂量可以根据疾病的性质、施用频率、施用方式、从宿主清除药剂等广泛变化。
给予特定患者的治疗组合物的有效量可以取决于各种各样的因素，其中的数种可以因患者而异。利用普通技能，有能力的临床医师将能够在常规临床试验过程中调整特定治疗组合物或显像组合物的剂量。
治疗剂(例如，补体抑制剂、基因表达激活剂等)可以被并入用于通过与适当的药学上可接受的载体(carrier)或稀释剂组合治疗施用的各种各样的制剂，并且可以被配制成固态、半固态、液态或气态形式的制剂，如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球和气雾剂。照此，化合物的施用可以以各种各样的方式实现，包含口、颊、直肠、肠胃外、腹膜内、皮内、经皮、鞘内、鼻、气管内等施用。活性剂在施用后可以是全身性的，或通过区域性施用、壁内施用的使用或植入物的使用可以是局域的，所述植入物起作用以维持植入位点处的活性剂量。
组合治疗
本公开的补体抑制剂可以(不限于)与任何附加的治疗(如免疫抑制疗法或反义药物疗法)联合使用，用于治疗脊髓性肌肉萎缩症。
在一些实施方案中，本公开的抗体与补体激活的旁路途径抑制剂组合施用。这样的抑制剂可以包含(不限于)：因子B阻断抗体；因子D阻断抗体；阻断C3的裂解的CD59、DAF、CR1、CR2、Crry或Comstatin-样肽的可溶、膜结合、加标签或融合蛋白形式；非肽C3aR拮抗剂如SB 290157；眼镜蛇毒液因子或非特异性补体抑制剂如甲磺酸萘莫司他(FUTHAN；FUT-175)、抑肽酶、K-76单羧酸(MX-1)和肝素(参见，例如，T.E.Mollnes&M.Kirschfink,Molecular Immunology 43(2006)107–121)。在一些实施方案中，本公开的抗体和自身抗体与其自身抗原之间相互作用的抑制剂组合施用。这样的抑制剂可以包含纯化的自身抗原的可溶形式，或者抗原模拟物如肽或RNA衍生的模拟表位(包含AQP4抗原的模拟表位)。可替代地，这样的抑制剂可以包含识别自身抗原并且防止自身抗体的结合而不触发经典补体途径的阻断剂。这样的阻断剂可以包含，例如，自身抗原结合RNA适配体或在其Fc域缺乏功能性C1q结合位点、C1r结合位点、或C1s结合位点的抗体(例如，Fab片段或者被另外工程化不结合C1q、C1r、或C1s的抗体)。
在一些实施方案中，本文所公开的抗体可以与反义药物联合施用。反义药物可以经由剪接校正恢复完全功能蛋白的表达。这样的反义药物可以包括与编码人SMN1或SMN2pre-mRNA的核酸互补的反义寡核苷酸(例如，反义药物可以包括与编码人SMN2pre-mRNA的核酸的内含子7互补的反义寡核苷酸)。例如，本公开的抗体可以与反义药物SPINRAZATM(nusinersen)联合施用。
本公开的方法可以与细胞或组织移植组合用于中枢神经系统，其中这样的移植物包含神经祖细胞，如在胎儿组织、神经干细胞、胚胎干细胞或预期用于神经修复或增强的其他细胞和组织中发现的神经祖细胞。神经干细胞和前体细胞可以参与正常发育方面，包含沿着已建立的迁移途径迁移至播散性CNS区、响应于微环境信号而分化成多种发育适当的和区域适当的细胞类型、以及与宿主祖代及其子代的非破坏性非致瘤性的散布。人NSC能够在这些播散性位置体内表达外来转基因。因此，这些细胞应用于SMA的治疗。
通过引用并入
本文所引用的专利、公布的专利申请以及非专利参考文献中的每个以引用方式被整体并入。
等同物
本领域技术人员将识别、或仅仅使用常规实验能够确定本文所描述的本发明的具体实施方案的许多等同物。这样的等同物旨在由下列权利要求涵盖。

Claims (71)

1.一种预防脊髓性肌肉萎缩症(SMA)、降低发展脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的风险、或治疗脊髓性肌肉萎缩症(SMA)的方法，所述方法包括向受试者施用补体途径的抑制剂。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抑制剂是抗体。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述抗体是抗-C1q抗体。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述抗-C1q抗体抑制C1和自身抗体之间或C1q和C1r之间、或C1q和C1s之间的相互作用。
5.如权利要求2所述的方法，其中所述抗-C1q抗体促进C1q从循环或组织的清除。
6.如权利要求3-5中任一项所述的方法，其中所述抗体是具有从100nM至0.005nM的范围或小于0.005nM的解离常数(KD)的抗-C1q抗体。
7.如权利要求3-6中任一项所述的方法，其中所述抗体是以从20:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1q的抗-C1q抗体。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述抗体是以从6:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1q的抗-C1q抗体。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述抗体是以从2.5:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1q的抗-C1q抗体。
10.如权利要求2所述的方法，其中所述抗体是抗-C1r抗体。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述抗-C1r抗体抑制C1r和C1q之间或C1r和C1s之间的相互作用，或者其中所述抗-C1r抗体抑制C1r的催化活性或抑制pro-C1r到活性蛋白酶的加工。
12.如权利要求10或11所述的方法，其中所述抗体是具有从100nM至0.005nM的范围或小于0.005nM的解离常数(KD)的抗-C1r抗体。
13.如权利要求10-12中任一项所述的方法，其中所述抗体是以从20:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1r的抗-C1r抗体。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述抗体是以从6:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1r的抗-C1r抗体。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述抗体是以从2.5:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1r的抗-C1r抗体。
16.如权利要求10至15中任一项所述的方法，其中所述抗-C1r抗体促进C1r从循环或组织的清除。
17.如权利要求2所述的方法，其中所述抗体是抗-C1s抗体。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述抗-C1s抗体抑制C1s和C1q之间或C1s和C1r之间或C1s和C2或C4之间的相互作用，或者其中所述抗-C1s抗体抑制C1s的催化活性或者抑制pro-C1s到活性蛋白酶的加工。
19.如权利要求17或19所述的方法，其中所述抗体是具有从100nM至0.005nM的范围或小于0.005nM的解离常数(KD)的抗-C1s抗体。
20.如权利要求17-19中任一项所述的方法，其中所述抗体是以从20:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1s的抗-C1s抗体。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述抗体是以从6:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1s的抗-C1s抗体。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述抗体是以从2.5:1至1.0:1的范围或小于1.0:1的结合化学计量结合C1s的抗-C1s抗体。
23.如权利要求17至22中任一项所述的方法，其中所述抗-C1s抗体促进C1s从循环或组织的清除。
24.如权利要求2-22中任一项所述的抗体，其中所述抗体与C1q特异性结合并且中和C1q的生物活性。
25.如权利要求24所述的抗体，其中所述生物活性是(1)C1q与自身抗体结合，(2)C1q与C1r结合，(3)C1q与C1s结合，(4)C1q与磷脂酰丝氨酸结合，(5)C1q与正五聚蛋白-3结合，(6)C1q与C-反应性蛋白(CRP)结合，(7)C1q与球形C1q受体(gC1qR)结合，(8)C1q与补体受体1(CR1)结合，(9)C1q与β-淀粉样蛋白结合，(10)C1q与钙网蛋白结合，(11)C1q与凋亡细胞结合，或(12)C1q与神经细胞膜组分结合。
26.如权利要求24或25所述的抗体，其中所述生物活性是(1)经典补体激活途径的激活，(2)抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性的激活，(3)CH50溶血，(4)突触丢失，(5)B细胞抗体产生，(6)树突细胞成熟，(7)T-细胞增殖，(8)细胞因子产生，(9)小神经胶质细胞激活，(10)阿瑟氏反应，(11)突触或神经末梢的吞噬作用，或(12)补体受体3(CR3/C3)表达细胞的激活。
27.如权利要求26所述的方法，其中CH50溶血包括人CH50溶血、小鼠CH50溶血、大鼠CH50溶血、狗CH50溶血、恒河猴CH50溶血、和/或食蟹猴CH50溶血。
28.如权利要求26或权利要求27所述的方法，其中所述抗体能够中和从至少约50％到至少约90％的CH50溶血。
29.如权利要求26-38中任一项所述的方法，其中所述抗体能够以小于150ng、小于100ng、小于50ng、或小于20ng的剂量中和至少50％的CH50溶血。
30.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人源化抗体、嵌合抗体、多特异性抗体、或其抗体片段。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述抗体是抗体片段，并且所述抗体片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、双抗体、或单链抗体分子。
32.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体被偶联至标记基团。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述标记基团是光学标记、放射性同位素、放射性核素、酶促基团、生物素基团、核酸、寡核苷酸、酶、或荧光标记。
34.如权利要求2所述的方法，其中所述抗体是抗-C1复合物抗体，可选地其中所述抗-C1复合物抗体抑制C1r或C1s激活或防止C1r或C1s对C2或C4作用的能力。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述抗-C1复合物抗体与C1复合物内的组合表位结合，其中所述组合表位包括C1q和C1s两者的氨基酸；C1q和C1r两者的氨基酸；C1r和C1s两者的氨基酸；或C1q、C1r和C1s中的每个的氨基酸。
36.如权利要求2-35中任一项所述的方法，其中所述抗体抑制C4的裂解，并且不抑制C2的裂解。
37.如权利要求2-35中任一项所述的方法，其中所述抗体抑制C2的裂解，并且不抑制C4的裂解。
38.如权利要求2-37中任一项所述的方法，其中所述抗体结合哺乳动物C1q、C1r或C1s。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述抗体结合人C1q、C1r、或C1s。
40.如权利要求2-33中任一项所述的方法，其中所述抗体结合哺乳动物C1复合物。
41.如权利要求2-40中任一项所述的方法，其中所述抗体穿过血脑屏障。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述抗体被共价连接至治疗剂。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述治疗剂包括抗炎蛋白质、神经治疗剂、抗病毒药、抗寄生物药、抗菌药、内分泌药物、代谢药物、有丝分裂毒素、化学疗法药物或siRNA。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述神经治疗剂是选自下列的神经营养素：脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养素-4/神经营养素-5、成纤维细胞生长因子(FGF)-2和其他FGF、神经营养素(NT)-3、红细胞生成素(EPO)、肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)-α、TGF-β、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)、睫状神经营养因子(CNTF)、神经胶质源性神经营养因子(GDNF)、神养蛋白、血小板源性生长因子(PDGF)、人表皮生长因子受体调节蛋白、神经调节素、artemin、persphin、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子(CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF、导蛋白、心肌营养素-1、刺猬因子、白血病抑制因子(LIF)、中期因子、多效蛋白、骨形态生成蛋白(BMP)、鞘脂活化蛋白、轴突导蛋白、或干细胞因子(SCF)。
45.如权利要求2-43中任一项所述的方法，其中所述抗体是双特异性抗体，所述双特异性抗体识别第一抗原和第二抗原。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述第二抗原是转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导域、TAT、Syn-B、穿透蛋白、聚精氨酸肽、angiopep肽或ANG1005。
47.一种抑制患有脊髓性肌肉萎缩症的患者中突触丢失的方法，所述方法包括施用如权利要求2-43中任一项所限定的抗体。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述脊髓性肌肉萎缩症与突触的丢失或丢失神经连接有关。
49.如权利要求47或权利要求48所述的方法，其中所述脊髓性肌肉萎缩症与依赖于补体受体3(CR3)/C3或补体受体CR1的突触丢失有关。
50.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述脊髓性肌肉萎缩症与病理活性依赖性突触修剪有关。
51.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述脊髓性肌肉萎缩症与通过小神经胶质细胞的突触吞噬作用有关。
52.如任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括联合施用反义药物。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述反义药物包括与编码人SMN1或SMN2pre-mRNA的核酸互补的反义寡核苷酸。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述反义寡核苷酸与编码人SMN2pre-mRNA的核酸的内含子7互补。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述反义药物是nusinersen。
56.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体以从至少30％至至少99.9％的范围的量抑制经典补体激活途径。
57.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体抑制由C1q结合引发的旁路补体激活途径。
58.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体以从至少30％至至少99.9％的范围的量抑制旁路补体激活途径。
59.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体抑制补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDCC)。
60.如权利要求59所述的方法，其中所述抗体以从至少30％至至少99.9％的范围的量抑制补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDCC)激活途径。
61.如权利要求59或60所述的方法，其中所述抗体抑制自身抗体和补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDCC)。
62.如任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括施用第二抗体，所述第二抗体选自抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、和抗-C1s抗体。
63.如任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的抑制剂。
64.如任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的经典补体激活途径的抑制剂。
65.如任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的旁路补体激活途径的抑制剂。
66.如任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的自身抗体与所述自身抗体的相应的自身抗原之间的相互作用的抑制剂。
67.一种确定受试者发展脊髓性肌肉萎缩症的风险的方法，所述方法包括：
(a)向所述受试者施用抗-C1q抗体、抗-C1r抗体、或抗-C1s抗体，其中所述抗-C1q抗体、所述抗-C1r抗体、或所述抗-C1s抗体被偶联至可检测标记物；
(b)检测所述可检测标记物以测量所述受试者中C1q、C1r、或C1s的量或位置；以及
(c)将C1q、C1r、或C1s中的一个或更多个的量或位置与参照比较，其中基于所述C1q、C1r、或C1s中的一个或更多个的量或位置与所述参照的比较，表征发展脊髓性肌肉萎缩症的风险。
68.如权利要求67所述的方法，其中所述可检测标记物包括核酸、寡核苷酸、酶、放射性同位素、生物素或荧光标记物。
69.如权利要求77所述的方法，其中使用用于X射线、CT、MRI、超声、PET和SPECT的显像剂检测所述可检测标记物。
70.如权利要求67所述的方法，其中所述荧光标记物选自荧光素、罗丹明、花青染料或BODIPY。
71.一种包括如权利要求3、10、或17中任一项所述的抗体和包装说明书的试剂盒，所述包装说明书包括使用所述抗体以治疗或预防脊髓性肌肉萎缩症的说明。
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