CN101679523A - 新型全人源抗vap-1单克隆抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了新型全人源抗VAP－1抗体及其片段。还给出了编码抗VAP－1抗体或其片段的核酸，以及为了重组表达抗VAP－1抗体而并入这些核酸的表达载体和宿主细胞。还公开了包括所述抗体的药物组合物及其治疗用途。

Description

新型全人源抗VAP-1单克隆抗体
发明领域
本发明涉及能够编码识别人类内皮细胞粘附蛋白VAP-1的全人源单克隆抗体的核酸序列，并且具体涉及一种全人源单克隆抗体，称为BTT-1023，其识别VAP-1的功能表位。
背景技术
本文所用的出版物和其他材料被纳入参考，用于阐明发明背景，特别是在实践方面提供更多细节。
一般来说，完整的抗体通常都具有Y形结构，由两个相同的轻链和两个相同的重链组成。这4个多肽亚基以下列方式进行装配，两个重链连在一起，并且每个重链都通过二硫键连有一轻链。构成抗体的每个多肽由一个可变区和一个恒定区组成。
可变区位于Y形抗体的臂部，决定抗体的抗原结合特异性。该区域包含用于抗原与其抗体连接的短氨基酸序列。这些区域被称为互补决定区(CDR)。可变区的其余部分对于形成抗原结合口袋的整体构象是很重要的。
抗体的恒定区位于重链的基底，决定抗体通过与特定受体的相互作用激活免疫反应的能力。这些区域通常是高度保守的，其可变性限于五个基本的同种型IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。
血管粘附蛋白-1(VAP-1)是一种在血管内皮细胞上表达的非典型的、能诱导炎症的粘附分子，其在血管内皮细胞上介导白细胞在生理剪切下滚动，在这种作用中，作为正常免疫监视过程的一部分，VAP-1通过次级淋巴组织的高内皮微静脉(HEV)对淋巴细胞的再循环起作用。
但是，在炎症情况下，VAP-1促进白细胞向发炎组织浸润，从而形成和维持炎症反应。这种浸润本身对慢性炎症性疾病如类风湿性关节炎、炎性肠病、银屑病和许多自身免疫病以及其他炎性疾病是有损害的。在其他情况下，在由心肌梗塞、中风和其他疾病造成严重组织损伤后，促炎细胞进入组织中的大量浸润会造成在这些急性炎性反应所见的组织破坏。通过用阻断抗体阻止VAP-1功能来减少细胞进入炎症部位的浸润，很可能能够消除炎症，并且改善这些疾病的临床症状。
美国专利US5580780描述了一种单克隆抗体(mAb)1B2，其能识别VAP-1并且能够在冷冻切片检测中阻断淋巴细胞与扁桃腺HEV的结合。单克隆抗体1B2是一种鼠源IgM抗体，为对VAP-1特异的。
使用鼠源单克隆抗体作为治疗物的潜力有限，因为人类的免疫系统会将鼠源抗体识别为外源物质，并且产生人的抗鼠抗体(HAMA)将它们从身体中清除。在需要重复给药的时候，这种免疫反应是应用鼠源抗体进行长期治疗的主要限制。临床上使用鼠源抗VAP-1抗体可能只能局限于使用免疫抑制剂的患者，从而较不易产生HAMA反应，也只能局限于那些可以只给药一次抗体的治疗方案，如急性梗塞或急性呼吸窘迫综合症的局部缺血再灌注损伤。
在治疗中使用鼠源IgM抗VAP-1抗体的另一个缺点是这种抗体不利的动力学特性，也是就说，其半衰期短，这致使它们不适合用于慢性病，例如类风湿性关节炎、炎性肠病、银屑病和许多其他疾病。
在本领域内已知有几种产生免疫原性较低的单克隆抗体的方法。优选的方法包括“人源化”抗体。常用策略为制造嵌合单克隆抗体、人源化的单克隆抗体或全人源单克隆抗体。嵌合单克隆抗体中，其抗体可变区是鼠源的，恒定区是人源的。在嵌合抗体中，通常啮齿类抗体分子大约有70％替换为相应的人类序列，同时保留具有具体特异性和亲和性的鼠类抗原结合位点。人源化的抗体中，其抗体可变区可为鼠源的，但是已经突变，使其更类似于人类抗体，并且可能具有人源的恒定区。全人源抗体中，其抗体的可变区和恒定区都是人源的。
国际专利公开WO03/093319公开了一种嵌合抗VAP-1单克隆抗体BTT-1002，其与相应的鼠源抗体相比，具有降低免疫原性的潜力。但是，作为一种嵌合抗体，BTT-1002仍然具有相应于直接来源于原始小鼠抗体且未经修饰的抗体可变区的蛋白质序列。当对人类给药时，这种抗体仍然有可能被识别为外源抗体且具有免疫原性。其药理学性质，例如消除半衰期和功能特性，可能也会由于其免疫原性和由于针对其产生的抗体而受到影响。
因此，在本领域需要具有降低的免疫原性和改进的药理学活性的全人源抗VAP-1抗体。
发明概述
本发明广泛地涉及新的全人源抗VAP-1抗体、该抗体的制备方法以及该抗体的用途。本发明还涉及编码所述抗VAP-1抗体的多核苷酸。
本发明的目的是提供用于体内诊断和/或治疗的全人源单克隆抗体，其具有降低的引发患者免疫反应的可能性，并且具有利于治疗目的的药理学性质。
本发明的另一目的是提供全人源抗VAP-1抗体的重链和轻链，或其片段。
本发明另一目的是提供编码全人源抗VAP-1抗体的核酸或其片段，以及并入这些核酸以用于重组表达抗VAP-1抗体的表达载体和宿主细胞。
本发明的另一个实施方案涉及通过重组生产方法制备本发明全人源抗VAP-1抗体的方法。
本发明还公开了包含该抗体的药物组合物及其治疗用途。
附图简述
下面本发明将参照附图通过优选实施方案进行更详细的说明，其中附图为：
图1至图5为抗VAP-1抗体8C10(图1A-B)、8A4(图2A-B)、3F10(图3A-B)、5F12(图4A-B)和4B3(图5A-B)可变区的核苷序列及相应的氨基酸序列。可变轻链(VL)(A)和可变重链(VH)(B)的氨基酸序列由克隆的cDNA演绎而来。每个氨基酸链中的三个CDR以粗体表示，其相应的核苷序列以下划线表示。
图6为8C10、8A4、3F10、5F12和4B3 VH重链可变区的蛋白质序列比对，显示其共有序列(图6A)。图6B、图6C和图6D为显示具有共有序列的VH重链CDR 1至3的比对。图6E为8C10、8A4、3F10、5F12和4B3VL轻链可变区的蛋白质序列比对，显示其共有序列。图6F、图6G和图6H为显示具有共有序列的VL轻链CDR 1至3的比对。
图7通过BTT-1023染色的Ax VAP-1细胞对比对照染色的细胞的FACS(荧光激活细胞分类)分析，显示重组全人源抗体r8C10(BTT-1023)与Ax细胞上的VAP-1的结合，其中Ax细胞在细胞表面上表达人VAP-1。
图8说明了BTT-1023对体外白细胞迁移的影响。图中显示的是经过BTT-1023或对照抗体处理后，穿过内皮细胞单层迁移的外周血单核细胞(PBMC)的数量。误差条为平均值的标准误差，N＝6。
发明详述
本发明涉及全人源，优选为通过重组生产的，特异性识别人血管粘附蛋白-1(VAP-1)的单克隆抗体(mAb)。本发明的全人源单克隆抗体与相应的人源化抗体和相比具有减小的免疫原性，因此适用于治疗许多自身免疫性疾病，结缔组织、皮肤、胃肠道、中枢神经系统和肺系的炎性病症和疾病，例如慢性关节炎、炎性肠病和慢性皮肤病。全人源VAP-1抗体还能进一步用于体内和体外的诊断应用，包括炎症部位的体内免疫闪烁成像。
本文所用术语“保守序列变体”，意在包括不显著改变本发明全人源抗VAP-1抗体结合性质的核苷酸和氨基酸序列修饰。保守核苷酸序列变体包括源于遗传密码简并和沉默突变的变体。核苷酸的替代、缺失和增加也包含在内。保守氨基酸序列变体包括源于本领域所熟知的相似氨基酸替代的变体。氨基酸的缺失和增加也包含在内。
本发明包含的那些多肽和聚核苷酸，与下面描述的全人源抗VAP-1抗体或抗体的编码聚核苷酸具有至少80％的同一性，或至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
本发明提供全人源抗VAP-1抗体重链，其包含至少一种CDR共有序列，其中CDR共有序列选自：
a)序列X1X2X3X4X5(SEQ ID NO 1)，其中
X1为小的极性或碱性氨基酸，例如S、N或R，
X2为芳香性或小的极性氨基酸，例如Y或S，
X3为小的疏水性或芳香性氨基酸，例如A、G或W，
X4为疏水性氨基酸，例如M或I，及
X5为小的极性或碱性氨基酸，例如H或S；
b)序列X1X2X3X4X5GX6X7X8X9X10X11DSVX12G(SEQ ID NO 2)，
其中
X1为小氨基酸，例如V、A或N，
X2为小的脂肪族氨基酸，例如I或L，
X3为芳香性、碱性或疏水性氨基酸，例如W、G或K，
X4为芳香性或脂肪族疏水性氨基酸、或极性氨基酸，例如F、Q、V或Y，
X5为小的酸性氨基酸或小氨基酸，例如D或G，
X6为小的氨基酸或脂肪族氨基酸，例如S、G或I，
X7为极性氨基酸，例如N、E或Y，或者没有氨基酸，
X8为极性氨基酸，例如E、K或T，
X9为极性氨基酸，例如Y、D或N，
X10为芳香性氨基酸，例如Y或H，
X11为小的疏水性氨基酸，例如V或A，并且
X12为带电的碱性氨基酸，例如K或R；并且
c)序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12DY(SEQ ID NO 3)，其中
X1为带电的酸性氨基酸，例如D或E，
X2为小的或疏水性氨基酸，例如A、G、K、P或Y，
X3为芳香性氨基酸或小的氨基酸，例如W、F、G或N，
X4为芳香性氨基酸或小的氨基酸，例如F或G，或者没有氨基酸，
X5为小氨基酸，例如G或S，或者没有氨基酸，
X6为小氨基酸，例如G，或没有氨基酸，
X7为小的极性氨基酸，例如T，或没有氨基酸，
X8为极性芳香性氨基酸，例如Y，或没有氨基酸，
X9为带电的酸性氨基酸，或芳香性氨基酸，例如E或F，或者没有氨基酸，
X10为芳香性氨基酸或小氨基酸，例如F、G、S、V或W，
X11为小氨基酸或极性芳香性氨基酸，例如Y或G，并且
X12为芳香性或脂肪族疏水性氨基酸，例如F或I。
更特别的，本发明提供全人源抗VAP-1抗体重链，其包含：第一CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：4至8及其保守序列变体，和/或第二CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：9至13及其保守序列变体，和/或第三CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：14至18及其保守序列变体。本发明所述特别抗体重链包含可变区，其选自SEQ ID NO：19至23及其保守序列变体。
本发明还提供全人源抗VAP-1抗体轻链，其包含至少一种CDR共有序列，其中CDR共有序列选自：
a)序列RASQX1X2SX3X4X5LA(SEQ ID NO 24)，其中
X1为小氨基酸，例如G或S，
X2为脂肪族氨基酸，例如I或V，
X3为小极性或正电荷氨基酸，例如S或R，
X4为小极性氨基酸，例如S，或没有氨基酸，并且
X5为小疏水性或芳香性疏水性氨基酸，例如A、F、W或Y；
b)序列X1ASX2X3X4X5(SEQ ID NO 25)，其中
Xi为小的酸性氨基酸或小氨基酸，例如D或G，
X2为小极性氨基酸，例如S或N，
X3为脂肪族或正电荷氨基酸，例如L或R，
X4为小氨基酸或极性氨基酸，例如A，E或Q，并且
X5为极性或正电荷氨基酸，例如S，T或R；及
c)序列QQ X1X2X3X4PX5T(SEQ ID NO 26)，其中
X1为芳香性或正电荷氨基酸，例如F、Y或R，
X2为小氨基酸，例如N、G或S，
X3为小极性氨基酸，例如S或N，
X4为芳香性或小极性氨基酸，例如Y、F、W或S，并且
X5为脂肪族或正电荷氨基酸，例如L或R。
更特别的，本发明提供全人源抗VAP-1抗体轻链，包含：第一CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：27至31及其保守序列变体，和/或第二CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：32至36及其保守序列变体，和/或第三CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：37至41及其保守序列变体。本发明所述特别抗体轻链包含可变区，其选自SEQ ID NO：42至46及其保守序列变体。
本发明的另一个方面提供包括根据本发明所述重链和轻链的全人源抗VAP-1抗体。本发明的抗体分子与链可包括：完全天然抗体分子，其具有全长重链和轻链；其片段，如Fab、Fab′、F(ab′)2或FV片段；轻链或重链单体或二聚体；或单链抗体，例如单链Fv，其中的重链和轻链可变区由多肽接头连接；或任何其他重组的、或CDR接枝分子。同样，重链和轻链可变区可结合其他适当的抗体区域。
本领域众所周知，CDR3区域独立于CDR1和/或CDR2区域，该CDR3区域能够独自确定抗体对同源抗原(cognate antigen)的结合特异性，并且可以基于共有的CDR3序列，预见性地生成多种具有相同结合特异性的抗体。
因此，本公开提供的单克隆抗体包括一个或多个源自人类或非人类动物的抗体重链和/或轻链的CDR3区域，其中该单克隆抗体能够特异性结合VAP-1。在某些方面，本公开提供的单克隆抗体包括一个或多个源自非人类抗体的重链和/或轻链CDR3区域，例如小鼠或大鼠抗体，其中该单克隆抗体能够特异性结合VAP-1。在一些实施方案中，这种发明的抗体包含一个或多个源自非人类抗体的重链和/或轻链CDR3区域，这样的抗体与相应的亲本非人类抗体(a)能竞争结合；(b)保留了其功能特性；(c)结合到同样的表位；和/或(d)具有类似的结合亲和性。
在其他方面，本公开提供的单克隆抗体包括一个或多个源自人类抗体的重链和/或轻链CDR3区域，例如，从非人类动物中获得的人类抗体，其中该人类抗体能够特异性结合VAP-1。在其他方面，本公开提供的单克隆抗体包括一个或多个源自第一人类抗体的重链和/或轻链CDR3区域，例如，从非人类动物得到的人类抗体，其中该第一人类抗体能够特异性结合VAP-1，并且其中该源自第一人类抗体的CDR3区域替换了人类抗体中缺乏对VAP-1的结合特异性的CDR3区域，以产生能够特异性结合VAP-1的第二人类抗体。在一些实施方案中，这种发明的抗体包含的一个或多个源自第一人类抗体的重链和/或轻链CDR3区域，这样的抗体与相应的亲本第一人类抗体(a)能竞争结合；(b)保留功能特性；(c)结合到同样的表位；和/或(d)具有类似的结合亲和性。
本公开的抗体还可具有抗VAP-1抗体的各种物理性质的特征。基于这些物理性质，可以利用各种化验检测和/或区分不同类的抗体。
在一些实施方案中，本公开的抗体可以在轻链或重链可变区包含一个或多个糖基化位点。如本领域内熟知的，在可变区中存在的一个或多个糖基化位点可以导致增强的抗体免疫原性，或者由于改变了抗原结合而改变抗体的药物动力学。已知糖基化发生在含有N-X-S/T序列的基序。可使用Glycoblot分析检测可变区糖基化，其切割抗体以产生Fab，然后利用测量高碘酸盐氧化作用和席夫碱形成的试验检测糖基化。另外，可使用戴安薄层色谱(Dionex light chromatography)(Dionex-LC)测试可变区糖基化，其将来自Fab的糖化物切割成单糖并分析各自的糖含量。在某些实例中，不包含可变区糖基化的抗VAP-1抗体是优选的。要实现这一点，可以通过选择可变区中不包含糖基化基序的抗体，也可以通过使用本本领域熟知的标准技术突变糖基化基序内的残基。
在优选的实施方案中，本公开的抗体不包含天冬酰胺异构位点。脱酰胺基或异天冬氨酸作用可以分别对N-G或D-G序列发生影响。可以使用等产量线分析法测量异天冬氨酸的产生，其采用反相高效液相色谱法测试异天冬氨酸。
每个抗体会有一个特有的等电点(pI)，但是一般地，抗体会落入6至9.5的pH范围之间。IgG1抗体的pI的通常落入7-9.5pH值范围，IgG4抗体的pI通常落入6-8的pH值范围。抗体可以有此范围之外的pI。可以使用毛细管等电聚焦法测试等电点，正如本领域所熟知，该方法产生pH梯度，并可以利用激光聚焦提高精度。在某些实例中，包含落入正常范围内的pI值的抗VAP-1抗体是优选的。要实现这一点，可以通过选择具有正常范围内pI的抗体，也可以通过使用本本领域熟知的标准技术使带电的表面残基突变。
每个抗体会有一个指示热稳定性的解链温度。较高的热稳定性表明抗体在体内更大的整体稳定性。可使用诸如差示扫描量热法的技术测量抗体解链温度。TM1指示抗体开始解折叠的温度。TM2指示抗体完全解折叠的温度。一般来说，本公开抗体的TM1优选为大于60℃，优选为大于65℃，更加优选为大于70℃。可选地，可使用本领域熟知的圆二色谱测量抗体的热稳定性。
在优选的实施方案中，选取不会迅速降解的抗体。如本领域内熟知的，可以使用毛细管电泳(CE)和基质辅助激光解吸电离质谱法(MALDI-MS)测量抗VAP-1抗体的断裂。
在另一优选的实施方案中，选择具有最小聚集效应的抗体。聚集可能导致触发不必要的免疫反应和/或改变的或不利的药代动力学特性。一般地，可以接受的抗体聚集是25％或更少，优选地是20％或更少，更优选地是15％或更少，更优选地是10％或更少，甚至更优选地是5％或更少。可以通过本领域内熟知的若干技术测量聚集，包括尺寸排阻柱(SEC)高效液相色谱(HPLC)，和光散射，以识别单体、二聚体、三聚体和多聚体。
根据本发明的抗体优选地为IgG型和更优选地为IgG4型。不过，其他抗体同种型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgM和IgE包括在内。
在一些实施方案中，根据本发明的抗体包括重链和轻链可变区，其氨基酸序列与本文描述的优选抗体的氨基酸序列同源，其中该抗体保留了本发明抗VAP-1抗体期望的功能特性。
例如，本发明提供了分离的单克隆抗体，或其抗原结合部分，包含重链可变区和轻链可变区，其中：(a)该重链可变区包含氨基酸序列，其与选自于SEQ ID NO：19至23的氨基酸序列至少有80％的同源性；(b)该轻链可变区包含的氨基酸序列与选自于SEQ ID NO：42至46的氨基酸序列至少有80％的同源性；(c)抗体以1×10-7或更低的Kd结合人类VAP-I。
在另一实施方案中，该VH和/或VL氨基酸序列与上述序列可以85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源。具有VH和VL区域的抗体与上述序列的VH和VL区域具有高(即80％或更高)同源性，其可以通过诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)编码SEQ ID NO：19至23和42至46的核酸而获得，接着对所编码的改变的抗体测试其保留的功能。
本文所使用的两个氨基酸序列之间的百分比同源性等于两个序列之间的百分比同一性。该两个序列之间的百分比同一性是这些序列共同的相同位点数量的函数(即％同源性＝相同位点#/总的位点#×100)，考虑到缺口数量，和每一个缺口的长度，需要引入这些进行这两个序列的最佳比对。可以通过使用本领域熟知的标准方法，进行序列比较和测定两个序列之间的百分比同一性。
在一些实施方案中，本发明的抗体可以被设计为在Fc区域内包含修改，通常是改变抗体的1个或多个功能特性，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗原依赖的细胞毒性。此外，本发明的抗体可以被化学修饰(如，可以将一个或多个化学基团连接于抗体)，或被修饰以改变其糖基化，从而再改变抗体的一个或多个功能特性。
例如，可以通过替代选自于氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的至少有一个氨基酸残基而改变该Fc区域(Fc区域中残基的编号为Kabat的EU指数的编号)，这些氨基酸残基可以被替代成不同的氨基酸残基，这样该抗体对效应配体(effector ligand)有改变的亲和力，但保留了亲本抗体的抗原结合能力。针对其改变了亲和力的效应配体可以是例如Fc受体或补体的CI部分。这种方法在，例如美国专利5,624,821和5,648,260中有更详细的描述。
本发明设想对本文的抗体的另一个修饰是聚乙二醇化。抗体可被聚乙二醇化从而，例如，增加抗体的生物(如血清)半衰期。为了使抗体聚乙二醇化，该抗体或其片段通常在适合于一个或多个聚乙二醇(PEG)集团连接到该抗体或抗体片段的条件下，与PEG反应，如聚乙二醇的活性酯或醛衍生物。优选地，该聚乙二醇化是通过与活性的PEG分子(或类似的活性水溶性聚合物)进行酰化反应或烷基化反应而实现。本文中所使用的术语“聚乙二醇”意在包括曾被用于衍生其他蛋白质的任何形式的聚乙二醇，例如单(CI-CIO)烷氧基或芳氧基聚乙二醇或者聚乙二醇马来酰亚胺。在某些实施方案中，该待聚乙二醇化的抗体是糖基化的抗体。蛋白质聚乙二醇化的方法是本领域内众所周知的并且可用于本发明的抗体。
在优选的实施方案中，本发明提供了特异的全人源抗VAP-1抗体8C10、8A4、3F10、4B3和5F12。在其他优选的实施方案中，本发明提供了重组全人源抗VAP-1抗体，如重组8C10、8A4、3F10、4B3和5F12。在重组r8C10(BTT-1023)中，该重链由SEQ ID NO：47中所描述的氨基酸序列组成，轻链由SEQ ID NO：48中所描述的氨基酸序列组成。
表1.全人源抗VAP-1氨基酸序列
  SEQ ID NO   序列描述
  1   重链CDR1共有
  2   重链CDR2共有
  3   重链CDR3共有
4 8C10重链CDR1
  5   8A4重链CDR1
  6   3F10重链CDR1
  7   5F12重链CDR1
  8   4B3重链CDR1
  9   8C10重链CDR2
  10   8A4重链CDR2
  11   3F10重链CDR2
  12   5F12重链CDR2
  13   4B3重链CDR2
14 8C10重链CDR3
  15   8A4重链CDR3
  16   3F10重链CDR3
  17   5F12重链CDR3
  18   4B3重链CDR3
  19   8C10重链可变区
  20   8A4重链可变区
  21   3F10重链可变区
  22   5F12重链可变区
  23   4B3重链可变区
  24   轻链CDR1共有
  25   轻链CDR2共有
  26   轻链CDR3共有
  27   8C10轻链CDR1
  28   8A4轻链CDR1
  29   3F10轻链CDR1
  30   5F12轻链CDR1
  31   4B3轻链CDR1
  32   8C10轻链CDR2
  33   8A4轻链CDR2
  34   3F10轻链CDR2
  35   5F12轻链CDR2
  36   4B3轻链CDR2
  37   8C10轻链CDR3
  38   8A4轻链CDR3
  39   3F10轻链CDR3
  40   5F12轻链CDR3
  41   4B3轻链CDR3
  42   8C10轻链可变区
  43   8A4轻链可变区
  44   3F10轻链可变区
  45   5F12轻链可变区
  46   4B3轻链可变区
  47   重组r8C10重链
  48   重组r8C10轻链
优选地，全人源抗VAP-1抗体的制备是通过免疫小鼠，其中该天然的小鼠免疫球蛋白基因被灭活并且功能上被人类免疫球蛋白基因所有组成部分的全部或部分所取代。将这种小鼠用VAP-1抗原免疫，并然后使用标准的程序从小鼠产生生产人类抗体的杂交瘤。然后识别产生与VAP-1抗原有反应性的单克隆抗体的克隆的杂交瘤细胞，并扩展以产生纯化的全人源单克隆抗体。
其他制造人类抗体的方法包括，将动物抗体的特异性转移至人免疫球蛋白。例如，用VAP-1抗原免疫小鼠，并然后使用标准的程序从小鼠产生生产抗体的杂交瘤细胞。然后识别产生与VAP-1抗原有反应性的单克隆抗体的克隆的杂交瘤细胞，并扩展以产生纯化的全人源单克隆抗体。测定抗体重链和轻链可变区的cDNA序列并识别互补决定区(CDR)。该重链和轻链的CDR氨基酸序列被用来替换匹配的人类抗体的CDR氨基酸序列，以此方式将啮齿动物抗VAP-1抗体的特异性转移到人类抗体。由此产生的抗VAP-1抗体在此意义上是全人源的，因为虽然原始的CDR氨基酸序列是源于啮齿动物的，但是在人源性抗体中能够产生相同的氨基酸序列，且并不能被正确定义为是对啮齿类特异的。
为了产生生产本发明的人类单克隆抗体的杂交瘤，可将源自免疫小鼠的脾细胞和/或淋巴节细胞分离，并适当的无限增殖化细胞系融合，如小鼠骨髓瘤细胞系。可以筛选由此产生的生产抗原特异性抗体的杂交瘤。例如，可用50％PEG令源自免疫小鼠的脾淋巴细胞单细胞悬浮液融合六分之一数量的P3X63-Ag8.653非分泌性小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL1580)。以约2×105将细胞在平底微滴定板中铺板，随后在含有20％的胚胎克隆血清(fetal Clone Serum)、18％的“653”条件培养基、5％三甲氧唑辛(IGEN)、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、5mM HEPES、0.055mM 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素和1×HAT(Sigma；该HAT在融合后24小时加入)的选择性培养基中培养两周。大约两周后，细胞可以在以HT取代HAT的培养基中培养。然后可以通过ELISA对各孔筛选人类单克隆IgM和IgG抗体。一旦发生杂交瘤大量生长，则通常可在10-14天后观察培养基。该分泌抗体的杂交瘤可以重新铺板，再次筛选，且如果仍然呈人类IgG阳性，则该单克隆抗体可通过有限稀释亚克隆至少两次。然后可以在体外培养该稳定的亚克隆以在组织培养基中产生少量的抗体用于表征。为了纯化人类单克隆抗体，可以将选定的杂交瘤在2升的转瓶中培养以用于单克隆抗体纯化。在用蛋白质A琼脂糖(Pharmacia，piscataway，NJ.)进行亲和层析前，可以过滤和浓缩上清液。可以通过凝胶电泳和高效液相色谱法检查洗脱的IgG，以确保纯度。缓冲液可交换为PBS，并且使用消光系数1.43以OD280确定浓度。可以将该单克隆抗体分装并存储在-80℃。
还可以从噬菌体展示文库中生产全人源抗体，噬菌体展示文库利用遗传改造的噬菌体在重组噬菌体表面展示和生产人类抗体蛋白质，通过筛选选择对任何给定靶标具有高亲和性和特异性的单链抗体，并然后可以从该噬菌体分离抗体序列以产生重组全人源抗体。这种分离人类抗体的噬菌体展示方法是本领域内已确立的。
也可以使用SCID小鼠制备根据本发明的全人源单克隆抗体，其中人类免疫细胞已经在该SCID小鼠中重建，以致进行免疫时可以产生人类抗体响应。这种小鼠在例如美国专利5,476,996和5,698,767中描述。
当需要时，编码抗体的轻链和重链可变区的DNA，可被分离和融合到编码任何需要的人类、或修饰的人类恒定区的DNA，以便产生的DNA构建体可插入到表达载体并转染至合适的表达宿主以产生重组全人源抗体。这样，也可以使用例如本领域内众所周知的重组DNA技术和基因转染方法的组合，在宿主细胞转染瘤中生产根据本发明的抗体。
例如，要表达该抗体或其抗体片段，可通过标准的分子生物学技术(如利用表达目标抗体的杂交瘤的PCR扩增或cDNA克隆)获得编码部分或全长轻链和重链的DNA，且该DNA可以被插入表达载体，使该基因有效地连接于转录和翻译控制序列。上下文中，术语“有效地连接”是为了表示，抗体基因以这样的方式连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列起到他们预期的调节抗体基因转录和翻译的功能。选择与使用的表达宿主细胞相容的表达载体和表达调控序列。该抗体轻链基因和抗体重链基因可以插入到不同的载体，或者更通常地，这两种基因都被插入到同一个表达载体中。通过标准方法(例如，连接抗体基因片段和载体上的互补性限制位点，或者，如果不存在限制位点，进行平端连接)将该抗体基因插入到表达载体中。本文所述的该抗体的轻链和重链可变区可用于产生任何抗体同类型的全长抗体基因，其通过已这样的方式将它们插入到已经编码期望的同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体，使得VH片段有效连接到载体中的重链恒定(CH)片段，VK片段有效连接到载体中的轻链恒定(CL)片段。此外或可选地，该重组表达载体可以编码促进宿主细胞分泌抗体链的信号肽。该抗体链基因可以被克隆到载体中，使得信号肽符合读框地连接抗体链基因的氨基端。该信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即源自非免疫球蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因之外，本发明的重组表达载体还携带控制抗体链基因在宿主细胞中表达的调控序列。如本领域众所周知的，术语“调控序列”意在包括控制抗体链基因转录或翻译的启动子、增强子和其他表达调控元件(例如，多腺苷酸化信号)。本领域内的技术人员能意识到，表达载体的设计(包括选择调控序列)，可取决于这些因素，如被转化的宿主细胞的选择、所需的蛋白质的表达水平等。哺乳动物宿主细胞表达优选的调控序列包括指导哺乳动物细胞中蛋白质高水平表达的病毒元件，如源自巨细胞病毒(CMV)猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(AdMLP)和多瘤病毒的启动子和/或增强子。另外，可以使用非病毒调控序列，如泛素启动子或β-球蛋白启动子。再者，由不同来源的序列组成的调控元件，例如SRalpha启动子体系，它包含了源自SV40早期启动子的序列和1型人类T细胞白血病病毒的长末端重复序列。
除了抗体链基因和调控序列，本发明的重组表达载体可载有另外的序列，诸如控制载体在宿主细胞中复制的序列(例如，复制起点)和可选择的标记基因。如本领域众所周知，该可选择的标记基因便于筛选已经转入了载体的宿主细胞。例如，选择标记基因通常为已经转入了载体的宿主细胞提供了对如G418、潮霉素或甲氨蝶呤的抗药性。优选的选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于二氢叶酸还原酶缺陷型宿主细胞的甲氨蝶呤的筛选/扩增)和neo基因(用于G418筛选)。
为表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转入宿主细胞。“转染”一词的各种形式是意在涵盖通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的各种技术，如电穿孔、磷酸钙沉淀、经DEAE-葡聚糖转染等。虽然从理论上在原核和真核宿主细胞中都可以表达本发明的抗体，但是在真核细胞中(最优选在哺乳动物宿主细胞中)表达抗体是最优选的，因为这样的真核细胞，特别是哺乳动物细胞，比原核细胞更倾向于组装和分泌正确折叠的且为免疫活性的抗体。已有报道，抗体基因的原核表达对产生高产的活性抗体是无效的。
表达本发明重组抗体的优选的哺乳动物宿主细胞包括，中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括该本领域熟悉的二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体被转入哺乳动物宿主细胞，通过培养宿主细胞足够长的时间以使抗体在宿主细胞中表达而产生抗体，或者更优选地，将抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中。可以使用标准的蛋白质纯化的方法从培养基中回收抗体。
本发明的另一个方面提供了，编码全人源抗VAP-1抗体重链可变区的DNA分子，其包括第一DNA序列，选自于SEQ ID NO：49至53及其保守序列变体，和/或第二DNA序列，选自于SEQ ID NO：54至58及其保守序列变体，和/或第三DNA序列，选自于SEQ ID NO：59至63及其保守序列变体，所述DNA序列分别编码CDR区域1至3。根据一具体方面，本发明提供了编码重链可变区的DNA分子，并包括选自于SEQ ID NO：64至68及其保守序列变体的DNA序列。
本发明的另一方面还提供了编码全人源抗VAP-1抗体轻链可变区的DNA分子，其包括第一DNA序列，选自于SEQ ID NO：69至73及其保守序列变体，和/或第二DNA序列，选自于SEQ ID NO：74至78及其保守序列变体，和/或第三DNA序列，选自于SEQ ID NO：79至83及其保守序列变体，所述DNA序列分别编码CDR区域1至3。根据一具体方面，本发明提供了编码轻链可变区的DNA分子，并包括选自于SEQ ID NO：84至88及其保守序列变体的DNA序列。
在一个实施方案中，本发明提供了编码重组全人源抗VAP-1抗体的DNA分子，例如重组8C10、8A4、3F10、4B3和5F12。在重组r8C10(BTT-1023)中，由包含SEQ ID NO：89中描述的多核苷酸序列的DNA编码该重链，并且由包含SEQ ID NO：90中描述的多核苷酸序列的DNA编码该轻链。
表2.全人源抗VAP-1核苷酸序列
  SEQ ID NO   序列描述
  49   8C10重链CDR1
  50   8A4重链CDR1
  51   3F10重链CDR1
  52   5F12重链CDR1
  53   4B3重链CDR1
54 8C10重链CDR2
  55   8A4重链CDR2
  56   3F10重链CDR2
  57   5F12重链CDR2
  58   4B3重链CDR2
  59   8C10重链CDR3
  60   8A4重链CDR3
  61   3F10重链CDR3
  62   5F12重链CDR3
  63   4B3重链CDR3
  64   8C10重链可变区
  65   8A4重链可变区
  66   3F10重链可变区
  67   5F12重链可变区
  68   4B3重链可变区
  69   8C10轻链CDR1
  70   8A4轻链CDR1
  71   3F10轻链CDR1
  72   5F12轻链CDR1
  73   4B3轻链CDR1
  74   8C10轻链CDR2
  75   8A4轻链CDR2
  76   3F10轻链CDR2
  77   5F12轻链CDR2
  78   4B3轻链CDR2
  79   8C10轻链CDR3
  80   8A4轻链CDR3
  81   3F10轻链CDR3
  82   5F12轻链CDR3
  83   4B3轻链CDR3
  84   8C10轻链可变区
  85   8A4轻链可变区
  86   3F10轻链可变区
  87   5F12轻链可变区
  88   4B3轻链可变区
  89   重组r8C10重链
  90   重组r8C10轻链
本发明还提供了包含上述核苷酸序列的表达载体。适当的表达载体包括的载体包含在哺乳动物宿主细胞中对蛋白质的表达及分泌重要的元件。该载体可包括编码人类重链恒定区、或轻链恒定区、或两者兼而有之的DNA。重链和轻链二者可以都用同样的载体表达，或者可选的，可以使用含有或轻或重链恒定区的不同载体。
在根据本发明的一个实施方案中，该表达载体包括人类IgG4的重链恒定区，其通过用亮氨酸235取代丙氨酸，而修饰以减少FcγRI结合以及抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，如美国专利5,624,821中所描述。Fc区域中的残基编号为Kabat的EU指数的编号。
本发明还提供了宿主细胞，其转化了根据本发明的表达载体。可以用任何合适的宿主细胞/载体系统来表达编码全人源抗体重链和轻链的DNA序列。可以使用细菌，如大肠杆菌，和其他微生物系统，特别是用于诸如Fab和F(ab′)2片段的抗体片段的表达，尤其是Fv片段和单链抗体片段如单链Fv片段。真核生物的例如植物、酵母或哺乳动物宿主细胞表达系统或转基因植物和动物，可被用于生产更大的抗体产品，包括完整的抗体分子，和/或糖基化的产品，如果需要的话。适当的哺乳动物宿主细胞包括如上所述的CHO(中国仓鼠卵巢)细胞和骨髓瘤或杂交瘤细胞系。优选的宿主细胞是CHO细胞。
本发明的另一个方面意在提供生产重组全人源抗VAP-1抗体的方法，该方法包括，在适当的启动子和分泌信号的控制下，用包括编码根据本发明的全人源抗体重链和轻链DNA序列的表达载体转染宿主细胞，以及在每个链被表达的条件下繁殖所述宿主细胞，以及从培养物中分离所述被表达和装配的全人源抗VAP-1抗体或其具有生物活性的衍生物。可以构建载体的一般方法、转染方法和培养方法是本领域内熟知的。
本发明还提供了药物组合物，其包括可药用载体或稀释剂，及作为活性成分的根据本发明的全人源抗VAP-1抗体。本发明的组合物包括根据本发明的全人源抗VAP-1抗体，其数量上足以对抗(全部或部分)病人的天然VAP-1对需要这种对抗的病人中的VAP-1生物配体的结合，特别是对存在于白细胞的VAP-1配体的结合。
治疗炎症相关疾病的临床领域的普通技术人员可以容易地确定，根据本发明的全人源抗VAP-1抗体的给药数量和方案。一般来说，全人源抗VAP-1抗体治疗的剂量会不同，其取决于考虑以下考虑：年龄、性别和待治患者的整体健康状况；同步治疗种类，如果有的话；治疗的频率和预期效果的性质；组织损害的程度；症状的持续时间；以及由医生个人调整的其他变量。可以在一种或多种应用中实施所需的剂量，以取得预期的结果。可以以单位剂量形式供给根据本发明的药物组合物。
可以用任何适当的药理载体施用根据本发明的药物组合物用于治疗。可以以任何影响预防、缓解、预防或治疗VAP介导的人类或动物患者医学病症的形式施用它们。
用于肠胃外给药和局部给药时，根据本发明的全人源抗VAP-1抗体药物组合物包括无菌水或非水溶剂、悬液和乳剂。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油、鱼油、和可注射的有机酯。水性载体包括水、水-乙醇溶液，其中包括盐和缓冲的一般肠胃外载体，其包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖溶液、葡萄糖加氯化钠溶液、含有乳糖的林格氏液、或非挥发性油。静脉载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，如那些基于林格氏葡萄糖等的电解质补充剂。根据本发明的水性组合物可能包括适当的缓冲剂，如取决于靶定pH值范围的钠和钾的磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、碳酸盐或氨基乙酸缓冲液。利用氯化钠作为渗涨度调节剂也是很有用的。组合物可能包括其它赋形剂，如稳定化试剂或防腐剂。实用的稳定赋形剂包括表面活性剂(聚山梨酯20 & 80、泊咯沙姆407)、聚合物(聚乙二醇，聚乙烯吡咯酮)、糖类(蔗糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖)、醇(山梨醇，甘油丙二醇，乙二醇)、适当的蛋白质(白蛋白)、合适的氨基酸(甘氨酸，谷氨酸)、脂肪酸(乙醇胺)、抗氧化剂(抗坏血酸，半胱氨酸等)、螯合剂(EDTA盐类、组氨酸、天门冬氨酸)或金属离子(钙、镍、镁、锰)。有用的防腐剂有苯甲醇、氯代丁醇、苯扎氯铵，也可使用对羟基苯甲酸酯类。
可以以浓缩的形式或者以粉末的形式以根据需要重构提供根据本发明的药物组合物。在这类情况下，对用于注射/输注溶液的粉剂，可以使用上述赋形剂。在冷冻干燥的情况下，某些冷冻保护剂是优选的，其包括聚合物(聚乙烯吡咯酮、聚乙二醇、葡聚糖)、糖(蔗糖、葡萄糖、乳糖)、氨基酸(甘氨酸、精氨酸、谷氨酸)和白蛋白。如果重构溶液被添加到包装，其可以包括如：注射用纯净水或氯化钠溶液或葡聚糖和葡萄糖溶液。
本发明的组合物适用于诊断或治疗涉及炎症反应的任何疾病，其中VAP-1粘附起到介导白细胞从血液到炎症位置的迁移和浸润的作用。因此，该组合物可用于诊断或治疗炎性关节炎和结缔组织疾病，如反应性关节病、传染病后的关节病、炎性多关节病、全身结缔组织疾病、炎症性脊椎病、肌炎、滑膜炎、赖特尔病、血清阳性类风湿性关节炎、其它类风湿关节炎、关节外类风湿病、牛皮癣关节病和肠病性关节病、少年关节炎、未明示的(unspecified)关节炎、结节性多动脉炎和相关疾病、其他坏死性血管病变、皮多肌炎(dermatopolymyositis)、全身性硬化症、涉及全身性结缔组织的其他疾病、强直性脊柱炎和其它炎症性脊椎病。此外，炎症性肠疾病诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎、皮肤病如大疱病、皮炎、丘疹鳞屑性病、红斑、萎缩性硬化性苔癣、外阴干皱症、盘状红斑狼疮、硬斑病、天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎、未明示的接触性皮炎、牛皮癣、多形性红斑、其他炎症性疾病如多发性硬化症、神经炎症、炎性肌病、急性播散性脑脊髓炎、中枢神经系统血管炎、Sjógrens综合症、糖尿病、系统性红斑狼疮、哮喘和炎性肝脏疾病、格雷夫斯病和甲状腺炎、动脉粥样硬化、眼睛炎症包括葡萄膜炎、虹膜炎、虹膜睫状体炎、酒精性肝炎、同种异体移植、异种移植、肾小球肾炎、再灌注损伤和心肌梗死和中风后的急性炎症疾病可能适合用本发明的组合物进行诊断或治疗。
根据本发明的治疗上有用的全人源抗VAP-1抗体可以以化学方法或者通过基因工程与其他因子缀合，这些因子提供将抗体靶向所需功能位点的作用。另外，其他化合物可以以化学方法或者通过基因工程与根据本发明的抗体结合，从而为抗体提高或提供其他性能，尤其是对于VAP-1结合介导的有害效果，提高抗体促进对该有害效果的缓解的能力的性能。
根据本发明的全人源抗VAP-1抗体可以以化学方法或者通过基因工程标记，以提供可检测的抗体。这种标记抗体可成为人体炎症部位成像，特别是炎症部位的体内免疫闪烁成像的有用工具。这种类型的影像可取代目前使用的较繁琐和昂贵的白细胞成像方法。为了成像目的，抗体片段的使用将比用于抗炎疗法的完整抗体更适合，且源自全人源性抗体的片段也应该比它们的嵌合或小鼠等同物安全。
在另一个方面，本发明是涉及对需要这种治疗的人类患者在人体内通过施用有效水平的根据本发明的全人源抗VAP-1抗体，来减少或治疗人类体内炎症的方法。术语“治疗”或“处理”意在包括为受治疗者施用全人源抗VAP-1抗体，其目的可以包括预防、改善、预防或治疗VAP-1粘附事件介导的疾病。属于本发明的方法主题的特定的抗VAP-1抗体，是本发明的纯化的重组全人源抗VAP-1抗体。
全人源抗VAP-1抗体的“有效水平”是指对VAP-1介导事件的有害影响至少有所改善的水平。本发明的抗体的有效量是，足以阻断或部分阻断白细胞的内皮结合，从而抑制白细胞浸润炎症位点，在该位点这种浸润是有害的或不期望的。治疗炎症相关疾病的临床领域普通技术人员能很容易地确定该全人源抗VAP-1抗体的给药量和方案。优选地，根据本发明的全人源抗VAP-1抗体在血管内的供给间隔范围是，每星期一次至每3个月一次之间，剂量范围为001至20mg/kg，更优选是在0.1到10mg/kg的范围内，最优选是0.5至5mg/kg。可选地，根据本发明的全人源抗VAP-1抗体皮下供给间隔范围是，每星期一次至每3个月一次之间，剂量范围为0.1至20mg/kg，更优选是在0.2到10mg/kg的范围内，最优选是0.5至5mg/kg。
下列实施例是为了进一步更详细地阐明本发明，但并不是要限制本发明的范围。本领域的技术人员，即熟悉炎症性疾病及其治疗方法的临床医生，能很容易理解其它的应用和用途。
实施例
实施例1
表达人类抗VAP-1单克隆抗体的杂交瘤的分离
用人免疫球蛋白转基因小鼠品系(HuMAb小鼠
Figure A20088002090400281
Medarex Inc)产生表达人类抗VAP-1单克隆抗体的杂交瘤细胞。该HuMAb小鼠
Figure A20088002090400282
包含编码未重排的人类重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微卫星基因座(miniloci)，连同灭活内源性μ和κ链基因座的靶向突变(见例如，Lonberg，等(1994)Nature 368(6474)：856-859)。因此，小鼠表现出小鼠IgM或κ表达的减少，且响应免疫时，引入的人类重链和轻链转基因经过类别转换和体细胞突变以产生高亲和力的人IgGκ单克隆抗体。HuMab鼠的制备和使用，以及这些鼠携带的基因组修改，描述于例如美国专利5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,789,650、5,877,397、5,661,016、5,814,318、5,874,299和5,770,429，所有都属于Lonberg和Kay；美国专利5,545,807，属于Surani等；PCT公布WO 92/03918、WO93/12227、WO 94/25585、WO 97/13852、WO 98/24884和WO 99/45962，所有都属于Lonberg和Kay；和PCT公布WO 01/14424，属于Korman等。
用重组人类VAP-1(rh VAP-1)免疫该转基因小鼠后，小鼠产生特异于人类VAP-1的人类IgG抗体。
免疫方案如下：通过多重腹腔和皮下注射纯化自CHO细胞的rhVAP免疫小鼠，该CHO细胞稳定地转染了包含人VAP-1cDNA的表达质粒并表达人VAP-1(Smith等，J.Exp.Med.(1998)188：17-27)，rhVAP-1混合全弗氏佐剂，然后使用的rhVAP-1混合不完全弗氏佐剂或rhVAP-1与Ribi佐剂混合。使用固定化rh VAP-1和荧光微体积测定技术(FMAT)，利用稳定地转染了包含人VAP-1cDNA的表达质粒并表达人VAP-1的CHO细胞，通过抗体捕获ELISA分析源自免疫小鼠的血清样本进行免疫情况监测。在脾脏切除前，对静脉注射和腹腔施行最后加强注射rhVAP-1。
使用聚乙二醇(PEG)作为融合剂，通过将P3X63Ag8.653骨髓瘤细胞(ATCC CRL 1580)与上述免疫小鼠的脾细胞融合，得到表达人类抗VAP-1单克隆抗体的杂交瘤。通过ELISA法初步筛选具有κ轻链的人IgG抗体存在的杂交瘤上清液。然后用ELISA法对于rh VAP-1筛选人类IgG阳性细胞，通过FMAT针对对在稳定地转染了包含人VAP-1cDNA的表达质粒的CHO细胞表面表达的VAP-1的结合，来筛选人类IgG阳性细胞。选中五个人类抗VAP-1 IgG1杂交瘤克隆，即5F12、4B3、3F10、8A4和8C10。
实施例2
全人源抗体5F12、4B3、3F10、8A4和8C10的VAP-1结合性质
利用时间分解免疫荧光分析法定量检验5F12、4B3、3F10、8A4和8C10对rhVAP-1的结合。将微量滴定板涂布rhVAP-1，然后用牛血清白蛋白溶液封闭。随后添加2至4320ng/ml之间的量抗体以结合rhVAP-1，并通过缀合铕的鼠抗人抗体(PerkinElmer Inc.)检测该结合的抗体。通过在615nm测量时间分解荧光(Victor3多标签计数器，PerkinElmer Inc)检测该标签。荧光计数直接与结合其靶标的抗体多少相关联。然后对照参考的标准曲线分析样本数据。该数据显示，5F12、4B3、3F10、8A4和8C10结合rh VAP-1，亲和力(Kd)如表3所示。
表3.5F12、4B3、3F10、8A4和8C10mAb与rhVAP-1的结合
  mAb   Kd(nM)
  8C10   0.21
  3F10   0.25
  4B3   0.31
  8A4   0.28
  5F12   0.65
实施例3
全人源抗体5F12、4B3、3F10、8A4和8C10的可变区的cDNA的制备、克隆和测序
为了构建重组抗体，将实施例1中获得的编码抗体的人类重链和轻链可变区的cDNA分离，并克隆至质粒载体进行序列分析。
通过下面的方法，从表达抗VAP-1的杂交瘤细胞5F12、4B3、3F10、8A4和8C10得到人类免疫球蛋白(Ig)重链可变(VH)和轻链可变区(VL)的cDNA克隆。使用来自Qiagen的RNeasy试剂盒，从5×106杂交瘤细胞制备总RNA。通过反转录RNA制备VL和VH cDNA，接着使用“SMARTRACE cDNA扩增试剂盒”和来自BD Biosciences Clontech的高保真“Advantage-HF 2PCR试剂盒”进行“cDNA末端快速扩增(RACE)”程序。然后将PCR扩增产物纯化、克隆到载体pCR4-TOPOTA(Invitrogen)，并转化至大肠杆菌菌株TOP10(Invitrogen)。对5F12、4B3、3F10、8A4和8C10各自的VL和VH质粒克隆的小量提取DNA进行测序，且核苷酸极其推导的相应的蛋白质序列如图1至图6所示。
实施例4
表达重组r8C10mAb的哺乳动物表达载体的构建
将8C10可变区插入适当的哺乳动物表达载体，该载体包含适当的重链和轻链恒定区，如下所述，以便在CHO细胞中产生功能性重组r8C10抗体(即BTT-1023)。
已知抗体的Fc区域确定抗体/抗原复合物指导免疫反应的能力。目的是生产治疗性抗体，该抗体能阻止白细胞结合血管内皮，而不是引起任何效应功能。因此，在表达载体使用了人类IgG4重链恒定区，其通过用氨基酸亮氨酸235取代丙氨酸而被修饰，以减少FcγRI结合和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，如美国专利5624821中所述。用PCRSupermix(Invitrogen)扩增8C10VL和VH cDNA，以在5′端包含适当的克隆位点和最佳Kozak共有序列。设计的正向和反向PCR引物，以具有适当的限制性克隆位点。分别包含天然VL和VH信号序列的PCR产物，被纯化并克隆到携带人κ轻链恒定区和人γ4重链的质粒载体中，其中γ4重链载有丝氨酸228突变为脯氨酸和亮氨酸235突变为丙氨酸，并被称为plCO-g4PA(VAP1.8C10)，随后将产生的质粒转化到大肠杆菌TOP10细胞中。对质粒的VL和VH区域进行测序以确定克隆的PCR产物的完整性。
PCR扩增该8C10轻链，以在5′端含有HindIII克隆位点和最佳Kozak共有序列，以及在3′端含有EcoRI克隆位点，其利用plCO-g4PA(VAP1.8C10)质粒作为模板和PCR Supermix。包括天然8C10轻链信号序列的PCR产物，被HindIII和EcoRI消化，纯化并克隆到表达载体pEE12.4的HindIII和EcoRI位点，产生质粒2116，其中pEE12.4获得自Lonza Biologies。将该2116质粒转化到DH5αMax Efficiency(Invitrogen公司)感受态大肠杆菌细胞中。
PCR扩增8C10重链，以在5′端含有HindIII克隆位点和最佳Kozak共有序列，以及在3′端含有EcoRI克隆位点，其利用plCO-g4PA(VAP1.8C10)质粒作为模板和PCR Supermix。包括天然8C10重链信号序列的PCR产物，被HindIII和EcoRI消化。包含8C10重链的片段被纯化并克隆到Lonza载体pEE6.4中的HindIII和EcoRI位点，产生质粒2117，其中pEE6.4获得自Lonza Biologies。将该2117质粒转化到DH5αMaxEfficiency感受态细胞中。用Sal I和Not I消化质粒2116和2117，并用T4DNA连接酶连接从每个酶切中得到的最大片段，产生质粒2118[2118-pEE12.4-VAP1(8C10)]。将质粒2118转化到DH5αMax efficiency感受态细胞中。对整个编码重链和轻链的DNA进行测序，以确定序列准确性和完整性。
实施例5
重组全人源抗体BTT-1023在CHO细胞中的表达
由CHO细胞生产全人源抗体BTT-1023如下。用Pvul线性化2118-pEE12.4-VAP1(8C10)质粒DNA。通过电穿孔将该DNA转染至由Lonza Biologies得到的CHOK1SV细胞中。然后，将这些细胞以50μL/孔铺于96孔板(2.5×103细胞/孔)中，在限定化学成分(CD)的CHO(目录编号#04-0119，Gibco Invitrogen Inc)转染后培养基(不含L-谷氨酰胺的CD CHO+1×GS(谷氨酰胺合成酶)补剂+2.16mg/L胸苷)中。然后随后将板在150μL/孔的CD CHO选择培养基(不含L-谷氨酰胺的CD CHO+1×GS补剂+2.16mg/L胸苷+66.6M MSX(氨基亚砜蛋氨酸(Methionine Sulfoximine))或133.3μM MSX)中培养24小时，MSX最后的总浓度在50μM或100μM。利用人IgG夹心ELISA法测定由MSX抗性菌落生产的抗体水平。挑选生产高水平抗体的菌落，在CD CHO扩展培养基(不含L-谷氨酰胺的CD CHO+1×GS补剂+2.16mg/L胸苷+50μM MSX或100μM MSX)中进行扩展，首先置于24孔板，然后置于方瓶(T-flask)。在摇瓶中扩展这些细胞，然后制备5小瓶转染瘤细胞库(TCB)。从50μM MSX板中挑选细胞系15B7，并将其保持在含50μM MSX的CD CHO扩展培养基中。通过培养该上述转染的CHO细胞产生抗体，以产生条件性培养基，可以使用标准技术从其中纯化BTT-1023，以从培养上清中纯化单克隆抗体。
实施例6
重组全人源抗体BTT-1023的结合特性
用时间分解免疫分析法，定量考察rhVAP-1与BTT-1023的结合。将微量滴定板涂布rhVAP-1，然后用牛血清白蛋白溶液封闭。随后将2至4320ng/ml之间的量的BTT-1023添加以结合VAP-1，并通过铕缀合的鼠抗人抗体(PerkinElmer Inc.)检测该结合的BTT-1023。通过在615nm测量时间分解荧光(Victor3多标签计数器，PerkinElmer Inc)检测该标签。荧光计数直接与结合其靶标的BTT-1023的多少相关联。然后对照参考的标准曲线分析样本数据。数据显示，BTT-1023结合到重组人VAP-1的亲和力(Kd)为0.38nM。
使用Biacore表面等离子体共振法的实时直接结合分析法分析rhVAP-1与BTT-1023的结合动力学。固定在抗生蛋白链菌素包被的芯片(BiacoreAB)上的生物素化的蛋白质G′(Sigma)被用于从流动相中捕获BTT-1023。每次运行包含两个连续的阶段：注射BTT-1023mAb和注射配体结合分析物(rh VAP-1)。对于饱和浓度的mAb(配体)，用固定量的rh VAP-1作为分析物。使用BIAlite设备(Biacore AB)进行实验，使用Biacore软件进行数据分析。数据显示，重组人VAP-1结合BTT-1023的亲和力(Kd)为0.13nM。
通过免疫荧光染色和流式细胞仪分析全人源BTT-1023对VAP-1的结合。对于流式细胞仪，使用源自鼠内皮细胞系(Ax细胞)的转化细胞，其表达人VAP-1cDNA(Smith等，J.Ex.Med.(1998)188：17-27)。这些被培养在175cm3烧瓶中，处于RPMI 1640培养基(Sigma)中，其中补加20％FCS(胎牛血清)、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、10μMβ-ME(β-巯基乙醇)、1％非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和0.75mg/ml GeneticinTM。为了释出这些细胞，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤两次，并在10毫升细胞解离缓冲液(GibeoBRL)中在37℃孵育3分钟。加入10毫升的培养基后，将细胞离心(5分钟，1000g，在室温下)，以106细胞/ml悬浮于洗涤缓冲液[PBS、0.1％(w/v)BSA(牛血清白蛋白)、0.1％(v/v)叠氮钠]并在冰上保存。
将细胞悬浮液(100微升/孔)转入96孔板，将细胞离心(4分，1000g，10℃)，100μl等份的抗体溶液加入孔中。经过30分钟的冰浴，以150μl洗涤缓冲液/孔洗涤细胞两次，然后用100μl 39μg/ml的FITC缀合的(异硫氰酸荧光素)抗人IgG(Fc特异的，Sigma)在冰上孵育30分钟。最后，按前面洗涤这些细胞，并通过加入含1％(v/v)甲醛的100μl洗涤缓冲液而固定，并保持在4℃，直至在流式细胞仪中分析。对照样本只用FITC-缀合的抗人IgG二级抗体染色。
在FACScanTM(Becton Dickinson)上分析所有流式细胞仪样本。对于每个样本，收集至少10000门控事件(gated events)的数据并用Lysys II软件计算荧光的几何平均通道。
与人VAP-1特异结合的BTT-1023以表面表达VAP-1的经转染Ax细胞的染色显示。(图7)
实施例7
BTT-1023的功能特点
使用体外迁移分析来检测，BTT-1023抑制白细胞通过内皮单层迁移的功能能力。为了在其表面表达重组人VAP-1而转染大鼠内皮细胞单层，该大鼠内皮细胞单层被培养在Transwell仪器(Becton Dickinson)的上层培养室。新鲜分离的人外周血单核细胞置于在顶部培养室，并允许其向底部培养室的单核细胞趋化肽fMLP(N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸，100nM)迁移2小时。该单分子层经过BTT-1023处理，或经过BTT-1008(具有人恒定区的非结合的阴性对照抗体(Kirton等，Eur.J.Immunol.(2005)35：3119-30))处理，或经过BTT-1002(已知阻断VAP-1介导的粘附和迁移的阳性对照嵌合抗VAP-1mAb)处理。从底部培养室收集迁移过单层的细胞，并在显微镜下计数。BTT-1023将迁移通过内皮细胞单层的细胞显著减少至10ng ml-1，并将迁移阻断在1μg ml-1。阴性对照抗体BTT-1008在1μg ml-1已经无效，而阳性对照BTT-1002还完全地将迁移阻止在1μgml-1，如图8所示。
实施例8
重组全人源抗体BTT-1023相对于嵌合抗体BTT-1002改进的药代动力学特性
对两个雌性狨(非人灵长类)各静脉团注25mg/kg BTT-1023。给药10分钟、1、3、6、24、48、72和144小时后，收集血液样本进行BTT-1023浓度分析。
用于定量分析物(BTT-1002或BTT-1023)在狨血清中浓度的时间分解免疫荧光分析，利用生物素缀合的分析物特异性兔多克隆抗体作为抗生物素蛋白链菌素涂布的微滴定板上的捕获单元。这种多克隆抗体是通过用BTT-1002或BTT-1023多次免疫兔，收集血清和亲和纯化得到的抗BTT-1002或抗BTT-1023多克隆抗体而产生。利用铕缀合的二级抗体检测结合的分析物。通过测量时间分解荧光(Victor3多标签计数器，PerkinElmer Inc.)在615nm检测该标签。荧光计数与样本中存在的分析物多少直接相关。然后对比参照标准曲线分析样本数据。
采用非房室模型分析(non-compartmental analysis)确定药物代谢动力学参数。从利用BTT-1002进行的类似研究中得到数据，其中对两只雌狨中的每一只进行40mg/kg的静脉施用，当与该数据相比较时，全人源VAP-1抗体显示出改良的药物代谢动力学特性，包括改良的随时间推移的血清浓度(AUC)性质及延长的消除半衰期(表4)。
表4.BTT-1023与BTT-1002药代动力学特性对比
剂量(mg/kg) AUC(0-最后)(ug＊h/Ml) AUC(0-∞)(ug＊h/ML) t1/2(h)   Vd(ml/kg)
  BTT-1023，25   33200   55100   120   71
  BTT-1023，25   20600   23900   53   69
  BTT-1002，40   19100＊   19100＊   25＊   75＊
＊n＝2的平均值
实施例9
全人源抗体的药物组合物
包括根据本发明的全人源抗VAP-1抗体的药物组合物的实例，适合用于肠胃外给药，其作为注射或作为输注的溶液或者作为这种溶液的浓缩剂。
1毫升中组成成分的百分数
抗VAP-1抗体                 0.1-10％
氯化钠或氯化钾              0.5-1.5％
二水合磷酸氢二钠            0.1-2％
磷酸二氢钾或钠              0.1-2％
蔗糖                        0.5-10％
聚山梨酯20或80              0.01-1％
注射用水                    至1毫升
1毫升中组成成分的百分数
抗VAP-1抗体                 0.1-10％
氯化钠                      0.5-1.5％
EDTA/DTPA                   0.01-1.5％
甘露醇                      0.1-5％
聚山梨酯20或80              0.01-1％
二水合柠檬酸钠              0.5-5％
注射用水至        1毫升
实施例10
全人源抗体在体内炎症模型中的疗效
全人源VAP-1抗体在恒河猴胶原诱发性关节炎中的治疗疗效
在恒河猴中胶原诱发性关节炎(CIA)的模型中评估全人源抗体的效果，其针对收集关于BTM 023抗体在关节炎适应症中有效性的数据。
研究选择MHC A26阴性的成年恒河猴，其具有CIA发病率为99％，用牛II型胶原蛋白免疫。将10个动物分为5个动物一组的两组。通过在动物的背部10个点上注射弗氏完全佐剂中的3-5mg牛胶原诱发关节炎。使用这种方法免疫3-5周后关节炎在临床上明显且通常持续7-9周。
当连续两个记录检测到CRP水平＞20mg/L时，开始四个星期的全人源抗体静脉注射治疗，每星期两次剂量在1和50mg/kg之间。给对照动物施以载体溶液。使用综合临床体评分(0＝无关节炎临床征兆，0.5＝发烧(＞0.5℃)，1＝冷漠、活动减少和食欲减退，2＝体重下降、四肢和/或关节发热、疼痛但没有软组织肿胀(STS)，3＝中度发红和关节STS、四肢灵活性正常，4＝严重红肿和关节STS，伴有关节僵直，5＝关节炎严重到建议安乐死)，和CfA严重程度评分(软组织肿胀的严重程度、灵活性和骨擦音以-到+++的尺度计分：-无，±不确定，+中度，++严重，+++极端严重)评价动物的健康状况。所有这些参数结果是CIA严重程度的综合临床分数，这是一个半定量衡量。
全人源VAP-1抗体在治疗人源化VAP-1鼠的胶原蛋白抗体诱发性关节炎中的疗效
在内皮表达人VAP-1的转基因小鼠中，全人源抗体对胶原蛋白抗体诱发性关节炎的疗效可以被评价。通过注射抗体混合物，接着3天后腹膜内注射脂多糖诱发迅速发展的关节炎。在第1、3和7天给小鼠静脉注射剂量为3、10或30mg kg-1的全人源抗体。对照动物接受载体。可以显示出，与对照相比，关节炎评分在统计上的显著降低证明关节炎疾病的减少。
VAP-1抗体在治疗牛皮癣的人源化小鼠模型中的疗效
近来对人源化异种移植模型确立和验证已经为增加对这一疾病的了解和测试新药物疗法提供了有用的工具(Nickoloff BJ.Expert OpIn.Investig.Drugs.(1999)8：393-401)。
在此模型中，将源于牛皮癣患者的非损伤全厚度皮肤活组织检验，移植到约7-9周龄的重症联合免疫缺陷(SCID)麻醉小鼠，如前所述(Wrone-Smith T.等.J.Clin.Invest.(1996)98：1878-1887)。在诱发疾病前，允许这些动物从外科手术恢复至少2-3周。从取自活检并用抗原SEB(金黄色葡萄球菌肠毒素B)活化的血液样本分离人外周血单核细胞(PBMC)。向异种移植物中静脉注射或真皮内注射活化的PBMC，诱发疾病。
进行静脉注射或皮下注射全人源VAP-1抗体或载体。不同持续时间的预防和治疗的剂量方案都是可能的。此外，在全人源VAP-1抗体治疗后，可静脉注射标记的人T细胞，以便更详细调查对细胞浸润的影响。
在治疗期结束时，处死小鼠并将移植物连同周围的小鼠皮肤切除并在福尔马林中固定或者在氮中速冻。进行组织学和免疫组织化学，以便评定病理变化，像表皮厚度的变化、细胞浸润的变化、以及粘附分子表达的变化。可以显示出，与对照相比，评分在统计上的显著降低证明牛皮癣病的减少。
全人源VAP-1抗体在治疗炎性肝病中的治疗效果，其中该炎性肝病由对VAP-1人源化小鼠施用CCl4引起
在由施用CCl4引起的小鼠肝纤维症模型中评定全人源VAP-1抗体对炎性肝病和纤维化影响。对在内皮表达人VAP-1的转基因小鼠腹腔注射12周的0.25ul/g CCl4，每周两次。广泛的肝脏炎症和瘢痕发展超过12个星期，但随着停止注射CCl4，瘢痕彻底消退。利用这一模型，全人源抗体静脉内给药或者腹腔注射用药剂量在1至25mg/kg之间，每周两次，以防止损伤和消除现有纤维症，其效果的研究通过肝脏中的病理和组织学变化计分。可以显示出，与对照相比，得分在统计上的显著降低证明疾病的减少。
VAP-1抗体在麻醉兔急性心肌梗死模型中的治疗效果
对机械通气的麻醉新西兰白兔进行左侧胸廓切开术。暴露心脏，分离并闭合左冠状动脉(LCA)。闭合开始25分钟后，静脉注射全人源VAP-1抗体。抗体给药5分钟后，除去闭合，然后再灌注该区域达6小时。用过量所使用的麻醉剂杀死动物，切除心脏并用生理盐水洗涤。再次闭合LCA，并用单星蓝或伊文思蓝灌注通过心脏，染色心肌但留下风险区域未被染色。冷冻心脏并将左心室切分为薄切片。用图像分析系统测定总切面和危险区域。然后将各切片用1％的氯化三苯四唑(TTC)溶液的磷酸盐缓冲溶液孵育随后在10％的中性缓冲的福尔马林中孵育。有生机的心肌被TTC孵育染成红色，且因此梗塞面积通过测量不染色组织面积确定，并被表示为确定的危险面积百分比。可以显示出，与对照相比，危险面积百分数在统计上的显著降低证明组织损伤的减少。
VAP-1抗体在兔mBSA诱发性关节炎中的治疗效果
溶解在生理盐水中的甲基化牛血清白蛋白(mBSA)与等体积的弗氏完全佐剂混合，并制成乳液。通过两次皮内注射该乳剂免疫新西兰白兔，该两次相距14天。第二次免疫大约10天之后，从该动物收集血清，并施行皮内注射mBSA溶液。选择显示出阳性皮肤反应的动物，并基于抗mBSAIgG的血清滴度将它们随机分入治疗组。
第二次免疫后14天，仅在mBSA溶液注入右膝关节腔内之前进行静脉注射或皮下注射VAP-1抗体或载体。向每个动物的左膝注射生理盐水。在整个研究中每周一次或两次实施VAP-1抗体或阴性对照注射。
在整个研究中从诱发之日(0天)起，通过日常观察和触诊观察兔的行为和外观，并在指定的时间间隔记录体重。通过对比发炎的(右侧)和非发炎的(左侧)膝盖，在预先确定的时间点评价膝关节肿胀。
在研究的实验部分结束时(21天)处死动物。收集滑液以便测定总的白血球数量和蛋白质含量。从每个动物的膝盖关节处解剖滑膜并在膝盖骨的位置将其纵向分成两个样本。将一个在液氮中深冷冻以便测定VAP-1抗体和VAP-1表达，并将另一滑膜样本和剩余膝关节组织固定在10％的中性缓冲福尔马林中以便用苏木素和伊红(HE)和磷钨酸苏木精(PTAH)染色。用HE染色片评价炎症反应，和PTAH-染色片评价纤维蛋白在滑膜表面的沉积。可以显示出，与对照相比，得分在统计上的显著降低证明关节炎疾病的减少。
总之，这些实施例表明，全人源抗VAP-1抗体保留了抗VAP-1抗体特异的VAP-1识别性能(实施例2和6)，阻断了白细胞通过内皮的VAP-1依赖性迁移(实施例7)，并且与先前的抗VAP-1单克隆抗体相比具有改善的药代动力学特性(实施例8)。
对本领域的技术人员来说显而易见的是，随着技术的进步，发明的概念可以以不同的方式实施。该发明及其具体实施方案并不限于上述的例子，而可以在权利要求范围内变化。
序列表
<110>生物结治疗公司
<120>新型全人源抗VAP-1单克隆抗体
<130>2062101PC
<160>90
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>S，N或R
<220>
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<220>
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<223>A，G或W
<220>
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<400>1
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5
<210>2
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<212>PRT
<213>智人
<220>
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<223>N，E，Y或无氨基酸
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<223>K或R
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Ser Val Xaa
1               5                   10                  15
Gly
<210>3
<211>14
<212>PRT
<213>智人
<220>
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<223>F，G，S，V或W
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<223>Y或G
<220>
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<223>F或I
<400>3
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Tyr
1               5                   10
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Ser Tyr Ala Met His
1               5
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<213>智人
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1               5
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<212>PRT
<213>智人
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Ser Tyr Ala Met His
1               5
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<211>5
<212>PRT
<213>智人
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Arg Ser Gly Ile His
1               5
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<212>PRT
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Ser Tyr Gly Met His
1               5
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<212>PRT
<213>智人
<400>9
Val Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>10
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>10
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Arg
1               5                   10                  15
Gly
<210>11
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>11
Val Leu Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>12
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>12
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ile Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>13
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>13
Ala Ile Gly Val Gly Gly Gly Thr Tyr His Val Asp Ser Val Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>14
<211>8
<212>PRT
<213>智人
<400>14
Asp Ala Trp Ser Tyr Phe Asp Tyr
1               5
<210>15
<211>14
<212>PRT
<213>智人
<400>15
Asp Tyr Phe Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Phe Tyr Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>16
<211>8
<212>PRT
<213>智人
<400>16
Asp Gly Trp Gly Tyr Phe Asp Tyr
1               5
<210>17
<211>8
<212>PRT
<213>智人
<400>17
Glu Lys Asn Trp Gly Ile Asp Tyr
1               5
<210>18
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>18
Asp Pro Gly Phe Gly Glu Val Tyr Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210>19
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>19
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Phe Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Ala Trp Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>20
<211>123
<212>PRT
<213>智人
<400>20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ash Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Arg Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Tyr Phe Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Phe Tyr Phe Asp Tyr
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser
        115                 120
<210>21
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>21
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Leu Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu Asp Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Trp Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>22
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>22
Gln Val Gln Leu Val Asp Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Arg Ser
            20                  25                  30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ile Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Lys Asn Trp Gly Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>23
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>23
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Pro Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Val Gly Gly Gly Thr Tyr His Val Asp Ser Val Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Pro Gly Phe Gly Glu Val Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>24
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>G或S
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>I或V
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>S或R
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(9)..(9)
<223>S或无氨基酸
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>A，F，W或Y
<400>24
Arg Ala Ser Gln Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Leu Ala
1               5                   10
<210>25
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>D或G
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>S或N
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>L或R
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>A，E或Q
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>S，T或R
<400>25
Xaa Ala Ser Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5
<210>26
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>F，Y或R
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>N，G或S
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>S或N
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>Y，F，W或S
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>L或R
<400>26
Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1               5
<210>27
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>27
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ala Leu Ala
1               5                   10
<210>28
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>28
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>29
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>29
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ala Leu Ala
1               5                   10
<210>30
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>30
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>31
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<400>31
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala
1               5                   10
<210>32
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>32
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1               5
<210>33
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>33
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>34
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>34
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Arg
1               5
<210>35
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>35
Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>36
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>36
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1               5
<210>37
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>37
Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1               5
<210>38
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>38
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1               5
<210>39
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>39
Gln Gln Phe Asn Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>40
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>40
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg Thr
1               5
<210>41
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>41
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr
1               5
<210>42
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>42
Val Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Gly Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>43
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>43
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>44
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>44
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Phe Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>45
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>46
<211>108
<212>PRT
<213>智人
<400>46
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
            20                  25                  30
Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
                85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210>47
<211>463
<212>PRT
<213>智人
<400>47
Met Glu Phe Gly Leu Asn Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Asp
1               5                   10                  15
ValGln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
           20                  25                  30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Phe Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Phe Asp Gly Ser Asn Glu Asn Tyr Val
65                  70                  75                  80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
                85                  90                  95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Trp Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
        115                 120                 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gl y Pro Ser Val
    130                 135                 140
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
145                 150                 155                 160
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
                165                 170                 175
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
            180                 185                 190
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
        195                 200                 205
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
    210                 215                 220
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
225                 230                 235                 240
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Ala Gly Gly Pro Ser Val
                245                 250                 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
            260                 265                 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
        275                 280                 285
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
    290                 295                 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
305                 310                 315                 320
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
                325                 330                 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
            340                 345                 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
        355                 360                 365
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
    370                 375                 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
385                 390                 395                 400
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
                405                 410                 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
            420                 425                 430
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
        435                 440                 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
    450                 455                 460
<210>48
<211>236
<212>PRT
<213>智人
<400>48
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1               5                   10                  15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Val Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
        35                  40                  45
Gln Gly Ile Ser Arg Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Gly Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val
65                  70                  75                  80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
                85                  90                  95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
            100                 105                 110
Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
        115                 120                 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
    130                 135                 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145                 150                 155                 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
            180                 185                 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
        195                 200                 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
    210                 215                 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>49
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>49
agctatgcca tgcac                     15
<210>50
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>50
aactattgga tgagc                     15
<210>51
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>51
agctatgcca tgcac                     15
<210>52
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>52
cggtctggca tacac                     15
<210>53
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>53
agctatggaa tgcac                                            15
<210>54
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>54
gttatatggt ttgatggaag taatgaaaac tatgtagact ccgtgaaggg c    51
<210>55
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>55
aacataaagc aagatggaag tgagaagtac tatgtggact ctgtgagggg c    51
<210>56
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>56
gttttatggt ttgatggaag taatgaagac tatgcagact ccgtgaaggg c    51
<210>57
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>57
gttatatggt atgatggaat ttataagtac tatgcagact ccgtgaaggg c    51
<210>58
<211>48
<212>DNA
<213>智人
<400>58
gctattggtg ttggtggtgg cacataccat gtagattccg tgaagggc 48
<210>59
<211>24
<212>DNA
<213>智人
<400>59
gatgcctgga gctactttga ctac                           24
<210>60
<211>42
<212>DNA
<213>智人
<400>60
gattactttg gttcggggac ttatttcttc tactttgact ac       42
<210>61
<211>24
<212>DNA
<213>智人
<400>61
gatggctggg gatactttga ctac                           24
<210>62
<211>24
<212>DNA
<213>智人
<400>62
gagaagaact ggggaattga ctac                           24
<210>63
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>63
gatcctgggt tcggggaggt ctactttgac tat                                33
<210>64
<211>351
<212>DNA
<213>智人
<400>64
caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc   60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcttt agctatgcca tgcactgggt ccgccagact  120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtttg atggaagtaa tgaaaactat  180
gtagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat  240
ctgcaaatga acaccctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatgcc  300
tggagctact ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a           351
<210>65
<211>369
<212>DNA
<213>智人
<400>65
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc   60
tcctgtgcag cctctggatt cattttcagt aactattgga tgagctgggt ccgccaggct  120
ccagggaaag ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaagtactat  180
gtggactctg tgaggggccg attcaccgtc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat  240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagggattac  300
tttggttcgg ggacttattt cttctacttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc  360
ttctcctca                                                          369
<210>66
<211>351
<212>DNA
<213>智人
<400>66
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc   60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatgcca tgcactgggt ccgccaggct  120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt ttatggtttg atggaagtaa tgaagactat  180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca actccaagaa cacgctgtat  240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatggc  300
tggggatact ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a           351
<210>67
<211>351
<212>DNA
<213>智人
<400>67
caggtgcagc tggtggactc tgggggagac gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc   60
tcctgtgcag cgtctggatt cagtttcagt cggtctggca tacactgggt ccgccaggct  120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaattta taagtactat  180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat  240
ctgcaaatga acagcctgag ggccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagaag  300
aactggggaa ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a           351
<210>68
<211>357
<212>DNA
<213>智人
<400>68
gaggttcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacatc cgggggggtc cctgagactc   60
tcctgtgcag gctctggatt ccccgtcagt agctatggaa tgcactgggt tcgccaggct  120
ccaggaaaag gtctggagtg ggtatcagct attggtgttg gtggtggcac ataccatgta  180
gattccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaactc cttgtatctt  240
caaatgaaca gcctgagagc cggggacatg gctgtgtatt actgtgcaag agatcctggg  300
ttcggggagg tctactttga ctattggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca     357
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gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc   60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct    120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc    180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct    240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga    300
gggaccaagg tggagatcaa a                                              321
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gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc    60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agagctttag cctggtatca gcagaaacca   120
gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccaatt tggaaagagg ggtcccatca   180
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gaggattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt tcccgctcac tttcggcgga   300
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gagaaagccc ctaagtccct gatctatggt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagatttcactctca ccatcagcag cctgcagcct   240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctcggac gttcggccaa  300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                            321
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ccaaaaccca aggacactct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg   840
gacgtgagcc aggaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg   900
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagttcaaca gcacgtaccg tgtggtcagc   960
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc  1020
aacaaaggcc tcccgtcctc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga  1080
gagccacagg tgtacaccct gcccccatcc caggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc  1140
ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat  1200
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc  1260
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cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta g             711

Claims (32)

1.抗VAP-1抗体重链多肽，其特征在于是全人源的。
2.根据权利要求1所述的多肽，其中包括至少一种CDR氨基酸序列，其选自于：由SEQ ID NO：4至8及其保守序列变体组成的第一组，和/或由SEQ ID NO：9至13及其保守序列变体组成的第二组，和/或由SEQ ID NO：14至18及其保守序列变体组成的第三组。
3.根据权利要求2所述的多肽，其包括氨基酸序列，选自于SEQ ID NO：19至23及其保守序列变体。
4.根据权利要求3所述的多肽，其包括在SEQ ID NO 47中描述的氨基酸序列或其保守序列变体。
5.抗VAP-1抗体轻链多肽，其特征在于是全人源的。
6.根据权利要求5所述的多肽，其中包括至少一种CDR氨基酸序列，其选自于，由SEQ ID NO：27至31及其保守序列变体组成的第一组，和/或由SEQ ID NO：32至36及其保守序列变体组成的第二组，和/或由SEQ ID NO：37至41及其保守序列变体组成的第三组。
7.根据权利要求6所述的多肽，其包括氨基酸序列，选自于SEQ ID NO：42至46及其保守序列变体。
8.根据权利要求7所述的多肽，其包括在SEQ ID NO 48中描述的氨基酸序列或其保守序列变体。
9.抗VAP-1抗体，其特征在于是全人源的。
10.根据权利要求9所述的抗体，包括根据权利要求1至4任一项所述的重链多肽，和根据权利要求5至8任一项所述的轻链多肽。
11.根据权利要求9和10任一项所述的抗体，其中所述抗体片段是Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链Fv。
12.根据权利要求8至11任一项所述的抗体，其中所述抗体选自于8C10、8A4、3F10、5F12和4B3。
13.根据权利要求8至12任一项所述的抗体，其中所述抗体是重组抗体。
14.根据权利要求13所述的抗体，其中所述抗体是BTT-1023。
15.分离的编码全人源抗VAP-1抗体重链的核酸分子。
16.根据权利要求15所述的核酸分子，其包括至少一种编码CDR的DNA序列，该DNA序列选自于，由SEQ ID NO：49至53及其保守序列变体组成的第一组，和/或由SEQ ID NO：54至58及其保守序列变体组成的第二组，和/或由SEQ ID NO：59至63及其保守序列变体组成的第三组。
17.根据权利要求16所述的核酸分子，其包括核苷酸序列，选自于SEQ ID NO：64至68及其保守序列变体。
18.根据权利要求17所述的核酸分子，其包括在SEQ ID NO89中描述的核苷酸序列或其保守序列变体。
19.分离的编码全人源抗VAP-1抗体轻链的核酸分子。
20.根据权利要求19所述的核酸，其包括至少一种编码CDR的DNA序列，该DNA序列选自于，由SEQ ID NO：69至73及其保守序列变体组成的第一组，和/或由SEQ ID NO：74至78及其保守序列变体组成的第二组，和/或由SEQ ID NO：79至83及其保守序列变体组成的第三组。
21.根据权利要求20所述的核酸分子，其包括核苷酸序列，选自于SEQ ID NO：84至88及其保守序列变体。
22.根据权利要求21所述的核酸分子，其包括在SEQ ID NO90中描述的核苷酸序列或其保守序列变体。
23.表达载体，其包括根据权利要求15至22任一项所述的核酸序列。
24.宿主细胞或有机体，其包括根据权利要求23所述的表达载体。
25.生产全人源抗VAP-1抗体的方法，其包括步骤a)用至少一种根据权利要求24所述的表达载体转化适合的宿主，b)在利于表达的条件下培养所述的宿主，以及c)从培养基中纯化装配好的全人源抗体。
26.药物组合物，包含根据权利要求8至14任一项所述的全人源抗VAP-1抗体。
27.治疗或诊断有需要的患者的VAP-1介导的炎性疾病的方法，所述方法包括向所述患者提供有效量的根据权利要求26所述的药物组合物。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述的炎性疾病选自于关节炎和结缔组织疾病、炎性肠疾病、皮肤病、多发性硬化症、炎症性神经病、炎性肌病、急性播散性脑脊髓炎、中枢神经系统血管炎、Sjógrens综合症、糖尿病、系统性红斑狼疮、哮喘、炎症性肝病、格雷夫斯病和甲状腺炎。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述的关节炎和结缔组织疾病选自于反应性关节病、感染后关节病、炎性多发性关节病、系统性结缔组织病、炎性脊椎病、肌炎、滑膜炎、赖特氏症、血清阳性类风湿性关节炎、其他类风湿性关节炎，关节外类风湿病、牛皮癣和肠病性关节病、少年关节炎、未明示的关节炎、结节性多动脉炎和相关疾病、其他坏死性血管病变、皮多肌炎，系统性硬化症，涉及全身性结缔组织的其他疾病，强直性脊柱炎和其它炎性脊椎病。
30.根据权利要求28所述的方法，其中所述的炎性肠病选自于克罗恩氏病和溃疡性结肠炎。
31.根据权利要求28所述的方法，其中所述的皮肤病选自于大疱性疾病、皮炎、丘疹鳞屑性疾病、红斑、萎缩硬化性苔癣、外阴干皱症、盘状红斑狼疮、硬斑病、天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎、未明示的接触性皮炎、牛皮癣、多形性红斑。
32.根据权利要求27所述的方法，其中所述的炎性疾病选自于动脉粥样硬化、眼部炎症包括葡萄膜炎、虹膜炎、虹膜睫状体炎、酒精性肝炎、同种异体移植，异种移植，肾小球肾炎，再灌注损伤以及心肌梗塞和中风后的急性炎症。
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ZA (1) ZA200907220B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104628853A (zh) * 2015-02-06 2015-05-20 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 人源抗炭疽保护性抗原PA的抗体IgG及其应用
CN111537740A (zh) * 2020-05-22 2020-08-14 长春生物制品研究所有限责任公司 一种森林脑炎病毒IgM抗体检测试剂盒及其应用
CN111727201A (zh) * 2017-10-18 2020-09-29 再生生物股份有限公司 完全人源翻译后修饰的抗体治疗剂

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI20075278A0 (fi) * 2007-04-20 2007-04-20 Biotie Therapies Corp Uudet täysin ihmisperäiset anti-VAP-1 monoklonaaliset vasta-aineet
MX2011010570A (es) 2009-05-08 2011-10-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-egfl7 humanizados y metodos de uso de los mismos.
UA112154C2 (uk) * 2009-09-08 2016-08-10 Біоті Терапіс Корп. Застосування повністю людського анти-vap-1-антитіла для лікування фіброзних станів
TWI594764B (zh) * 2010-04-12 2017-08-11 生化治療公司 治療用途
ES2702246T3 (es) * 2012-03-26 2019-02-28 Sanofi Sa Formulaciones de agente de unión IgG4 estables
US9592289B2 (en) 2012-03-26 2017-03-14 Sanofi Stable IgG4 based binding agent formulations
ES2702183T3 (es) * 2013-03-15 2019-02-27 Mayo Found Medical Education & Res Identificación y monitorización de inmunoglobulinas monoclonales por masa molecular
WO2014199171A1 (en) 2013-06-12 2014-12-18 Proximagen Limited New therapeutic uses of enzyme inhibitors
BR112016023046A8 (pt) 2014-04-04 2021-05-11 Mayo Found Medical Education & Res kit compreendendo anticorpos e agentes redutores
WO2015189534A1 (en) 2014-06-12 2015-12-17 Proximagen Limited Vap-1 inhibitors for treating muscular dystrophy
US10690676B2 (en) 2014-07-29 2020-06-23 Mayo Roundation for Medical Education and Research Quantifying monoclonal antibody therapeutics by LC-MS/MS
JP6968058B2 (ja) 2015-09-24 2021-11-17 メイヨ・ファウンデーション・フォー・メディカル・エデュケーション・アンド・リサーチ 質量分析法による免疫グロブリン遊離軽鎖の同定
AU2016366635A1 (en) 2015-12-07 2018-06-21 Benevolentai Cambridge Limited VAP-1 inhibitors for treating pain
EP3455371B1 (en) 2016-05-09 2023-01-18 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Tissue-specific exosomes as biomarkers
EP3523647B1 (en) 2016-09-07 2024-06-26 Mayo Foundation for Medical Education and Research Identification and monitoring of cleaved immunoglobulins by molecular mass
US11427634B2 (en) * 2017-05-05 2022-08-30 Vaccinex, Inc. Human anti-semaphorin 4D antibody
US11946937B2 (en) 2017-09-13 2024-04-02 Mayo Foundation For Medical Education And Research Identification and monitoring of apoptosis inhibitor of macrophage

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003093319A1 (en) * 2002-04-29 2003-11-13 Biotie Therapies Corporation Novel humanized anti-vap-1 monoclonal antibody

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
DK0814159T3 (da) 1990-08-29 2005-10-24 Genpharm Int Transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5580780A (en) * 1992-06-09 1996-12-03 Jalkanen; Sirpa Vascular adhesion protein-(VAP-1) and VAP-1-specific antibodies
ATE184315T1 (de) * 1992-06-09 1999-09-15 Biotie Therapies Oy Neuartiges endothelzell-molekül, das die bindung von lymphozyten im menschen vermittelt
CA2161351C (en) 1993-04-26 2010-12-21 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CN1269829A (zh) * 1997-05-23 2000-10-11 拜奥泰治疗有限公司 有胺氧化酶活性的血管粘着蛋白－1
US6984720B1 (en) 1999-08-24 2006-01-10 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies
CA2481334A1 (en) * 2002-04-01 2003-10-16 Anthony C. Stevens Tissue-specific endothelial membrane proteins
FI20075278A0 (fi) 2007-04-20 2007-04-20 Biotie Therapies Corp Uudet täysin ihmisperäiset anti-VAP-1 monoklonaaliset vasta-aineet

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003093319A1 (en) * 2002-04-29 2003-11-13 Biotie Therapies Corporation Novel humanized anti-vap-1 monoclonal antibody

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
沈倍奋等: "《重组抗体》", 31 May 2005, 科学出版社 *
白汉玉: "全身性结缔组织病的某些进展", 《临床医学杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104628853A (zh) * 2015-02-06 2015-05-20 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 人源抗炭疽保护性抗原PA的抗体IgG及其应用
CN104628853B (zh) * 2015-02-06 2017-10-10 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 人源抗炭疽保护性抗原PA的抗体IgG及其应用
CN111727201A (zh) * 2017-10-18 2020-09-29 再生生物股份有限公司 完全人源翻译后修饰的抗体治疗剂
CN111537740A (zh) * 2020-05-22 2020-08-14 长春生物制品研究所有限责任公司 一种森林脑炎病毒IgM抗体检测试剂盒及其应用

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