KR20080002819A - 신규 리포좀 조성물 - Google Patents

신규 리포좀 조성물

Info

Publication number
KR20080002819A
KR20080002819A KR1020077023219A KR20077023219A KR20080002819A KR 20080002819 A KR20080002819 A KR 20080002819A KR 1020077023219 A KR1020077023219 A KR 1020077023219A KR 20077023219 A KR20077023219 A KR 20077023219A KR 20080002819 A KR20080002819 A KR 20080002819A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
liposome
target
lipid
phosphatidyl ethanolamine
dicarboxylic acid
Prior art date
Application number
KR1020077023219A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101352490B1 (ko
Inventor
가즈시 오카다
다다유키 이부키
동현 김
다다시 후지사와
Original Assignee
메비오팜 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메비오팜 가부시키가이샤 filed Critical 메비오팜 가부시키가이샤
Publication of KR20080002819A publication Critical patent/KR20080002819A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101352490B1 publication Critical patent/KR101352490B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/282—Platinum compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 명세서는 약물을 캡슐화하는 표적 리포좀, 및 이들의 제형을 포함하는 지질-함유 조성물과 지질-함유 조성물을 만들고 사용하는 방법을 제공하며, 암 및 다른 질병의 치료에서 표적 리포좀의 사용을 포함한다.

Description

신규 리포좀 조성물{NOVEL LIPOSOME COMPOSITIONS}
암을 포함하는 많은 질병에 대한 치료의 효능은 지난 몇십 년 동안 극적으로 향상되어왔다. 그러나, 많은 치료 처방은, 예를 들어, 탈모, 메스꺼움, 구토, 피로 등을 포함하는 해로운 부작용을 갖는 약물의 사용을 수반할 수도 있다. 일부 치료 처방은 또한 생리적 조건하에서 안정하지 않은 약물, 예를 들어, 투여에서 쉽게 가치가 떨어지거나 다른 것으로 변환되는 바이오-치료제(예를 들어, 유전자 또는 유전자 산물) 및/또는 다른 약물의 사용을 수반할 수도 있고 그런 까닭에 원하는 치료 결과를 달성하기 전에 이들의 효능을 잃는다. 이러한 불안정은 또한 투여를 위한 저장 및 제조를 위한 약물을 더 까다롭고 값비싸게 만든다.
다수의 약물 조합 치료, 전달 방법과 치료 처방과 거의 100가지의 개별적인 약물을 포함하는 많은 항암제의 종류가 있다. 항암제는 화합물의 종류 및 치료되는 질병 상태와 같은 몇몇의 기준에 따라 분류될 수도 있다. 어떤 약제는 다른 방법의 분류를 제공하는, 세포 주기에서 암세포의 급속한 분할 및 표적의 특정 상태를 이용하기 위해 개발되었다. 약제는 또한 형태 및 이들의 부작용의 심각성 또는 전달 방법에 따라서 그룹화될 수 있다. 그러나, 항암제에 기초한 가장 흔한 비-바이오치료의 분류는 화학적 화합물의 분류에 의하며, 이는 이러한 화합물의 작용의 메커니즘을 폭넓게 포함한다.
참고 문헌에 의하면, 항암제의 분류에서 약간의 차이점이 있다. 화합물의 종류는 다음과 같은 Physician's Desk Reference에 기술되어 있다: 알칼로이드; 알킬화제; 항종양 항생제; 대사길항제; 호르몬 및 호르몬 유사체; 면역조절제; 광민감제; 및 다방면의 다른 약제.
알칼로이드류의 화합물은 또한 그들의 세포 주기상이 구체적이기 때문에, 유사분열 억제제로서 언급될 수도 있으며, 유사분열을 억제하거나 유사분열에 필요한 효소를 억제하도록 돕는다. 그것들은 식물성 알칼로이드 및 다른 천연 생성물로부터 일반적으로 유도되고 세포 주기의 M-기 동안에 작용한다. 이러한 종류의 화합물은 급성 림프모구백혈병, 호지킨 및 비호지킨 림프종; 신경아세포종 및 폐암, 유방암 및 고환암과 같은 종양 형성을 치료하는데 종종 사용된다
알킬화제는 하기의 부분류를 포함하는 대분류의 화학요법의 약제로 보완되며, 이것 각각은 다수의 개별적인 약제를 포함한다: 알킬 설포네이트; 아지리딘; 에틸엔이민 및 메틸멜라민; 질소 머스타드; 니트로소우레아; 및 백금 화합물을 포함하는 다른 것들. 알킬화제는 세포의 DNA를 직접 알킬화함으로써 종양세포를 공격하고 그 결과 DNA가 복제 무능력이 되도록하는 원인이 된다. 이런 종류의 화합물은 만성 백혈병, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 다발성 골수종 및 어떤 폐암, 유방암 및 난소암을 포함하는 다양한 질병을 치료하는데 흔히 사용된다.
니트로소우레아는 종종 알킬화제로서 분류되고, 유사한 작용 메커니즘을 갖지만, DNA를 직접 알킬화하는 대신, 그것들은 복제 실패의 원인이 되는 DNA 수선 효소를 억제한다. 이러한 화합물은 혈액뇌장벽을 가로지를 수 있는 이점이 있고 그런 까닭에 뇌종양을 치료하는데 사용될 수 있다.
항종양 항생물질은 항균제 및 세포독성 작용을 가지며 또한 화학적으로 효소를 억제하고 세포막을 변환함으로써 DNA를 방해한다. 그것들은 특정 세포 주기 상태가 아니며 다양한 암을 치료하는데 널리 사용된다.
항암제의 대사길항제류는 DNA 및 RNA의 성장을 방해하며 세포 주기의 S-기에서 명확하다. 그것들은 화합물의 종류에 의해 추가적으로 파괴될 수 있고, 화합물은 폴산 유사체, 퓨린 유사체, 및 피리미딘 유사체를 포함한다. 그것들은 종종 만성 백혈병, 유방암, 난소암 및 위암의 치료에 사용된다.
항암제, 코르티코스테로이드 호르몬 및 성 호르몬으로서 사용되는 두 분류의 호르몬 또는 호르몬 유사체가 있다. 일부 코르티코스테로이드 호르몬이 암세포를 죽이고 종양의 성장을 늦추고, 림프종, 백혈병 등의 치료에 사용될 수 있는 반면, 성호르몬 기능은 주로 유방암, 전립선암 및 자궁내막암의 성장을 늦춘다. 안드로겐, 항아드레날린, 항안드로겐, 항에스트로겐, 아로마타아제 억제제, 에스트로겐, 황체호르몬방출호르몬(LHRH) 유사체 및, 프로게스틴을 포함하는 호르몬 및 호르몬 유사체의 수많은 부분류가 있다.
추가적으로 항암제의 소분류는 면역요법으로서 분류된다. 이들은 종양(암의) 세포를 더 효율적으로 공격하기 위해 면역 체계를 자극하도록 의도되는 약제이다. 이 치료는 다른 치료와의 조합에 종종 사용된다.
또한, 캄포텍틴(campothectins)과 같은 다수의 화합물이 있으며, 이는 일반적으로 '기타' 항암제로서 리스팅되고 다양한 종양 형성을 치료하는데 사용될 수 있다.
항암제의 조합은 또한 수많은 암의 치료에 이용된다. 예를 들어, 직장암의 치료를 위한 Sanofi Syntholabo markets ELOXATINTM(주사용 옥살리플라틴)는 5-플루오로우라실 및 류보코린과 조합으로 사용한다. 이들 약물의 조합은 직장암의 치료에서 외과적 수술과 함께 부수적으로 종종 사용된다. 옥살리플라틴은 DNA 복제와 전사를 모두 억제함으로써 작용하는 것으로 믿어지는 알킬화제이다. 다른 백금제와는 다르게, 옥살리플라틴은 감소된 저항 발달의 가능성을 증명하였다. 옥살리플라틴은 미국 특허 번호 4,169,846; 5,338,874; 5,298,642; 5,959,133; 5,420,319; 5,716,988; 5,290,961; 및 Wilkes GM. "New therapeutic options in colon cancer: focus on oxaliplatin " Clin J Oncol Nurs. (2002) 6:131-137에 추가적으로 기술되어 있다.
항암제의 과잉이 있는 동안, 이들 화합물의 이점은 종종 약제에 의해 만들어진 부작용의 심각성에 의해 중대하게 된다. 이러한 비교는 치료 지침으로서 종종 언급되며, 기질이 환자에 허용될 수 없게 독성인 투여량과 비교하여 암세포의 파괴를 이루기 위해 요구되는 투여량 사이의 균형을 기술한다. 대부분의 항암제의 약점은 치료 지침의 상대적으로 작은 범위이다(예를 들어, 암세포에서 좁은 투여 범위는 환자에게 허용될 수 없는 독성 없이 파괴된다). 이러한 특징은 약제가 유용한 곳에서, 빈도 및 투여량을 제한하고, 암이 완전히 제거될 수 있기 전에 종종 부작용은 견딜 수 없게 된다.
대부분의 암 화학요법에서 경험되는 심각한 부작용은 이러한 약물의 비-특이적 성질의 결과이며, 건강한 세포와 암세포 사이를 구별하지 않고, 대신에 모두를 파괴한다. 어떤 세포 주기 특이성 약물은 이러한 효과를 줄이기 위한 시도를 하며, 세포주기의 표적 단계는 세포 복제와 분화에 포함된다. 그러나, 이러한 약물은, 암세포와 건강한 세포 사이의 구별을 하지 않고 정상 세포 분화를 겪는다. 이러한 형태의 화합요법으로부터 위험에서 대부분의 세포는 혈구, 모낭 세포, 및 복제 및 소화관의 세포를 포함하는 세포 분화를 종종 겪는다.
항암제의 가장 흔한 부작용은 메스꺼움 및 구토이다. 많은 비율의 환자가 골수 이상, 또는 뼈 골수의 억제로부터 고통받으며, 적혈구 세포, 백혈구 세포 및 혈소판을 생산한다. 이러한 그리고 다른 부작용들은 또한 백혈구의 파괴 및 결핍과 동시에 일어나는 면역 체계의 억제에 의해 악화되며, 면역이 약해졌을 때 발생하는 감염의 위험과 관계된다.
넓은 범위의 항암제에서 흔한 다른 부작용은 다음을 포함한다: 탈모; 식욕 상실; 체중 감소; 미각의 변화; 구내염 및 식도염(염증 및 상처); 변비; 설사; 피로; 심장 이상; 신경계 변화; 폐 손상; 생식 세포 손상; 간 손상; 신장 및 비뇨계 손상.
부작용의 넓은 범위는 대부분의 항암제와 관련되어 있고 질병으로 이미 쇠약해진 환자들에서 그것들의 심각성 및 어쩌면 제대로 발휘되지 못하는 면역은 치료의 효능을 유지하는 동안 일부 부작용을 완화할 수 있는 것에 의하는 메커니즘을 연구하는 연구원들을 이끌어왔다. 이러한 문제에 대한 몇몇의 접근들이 있었다. 그것들은 조합 화합요법을 포함하며, 다양한 항암제가 함께 투여된다; 항암제의 부작용과 싸우기 위한 항암제와 함께 처방되는 부가적인 약제인 보조치료제; 방사선 및/또는 수술과 조합하는 화학요법인, 병합치료; 및 다르게는 리포좀에서 항암제의 캡슐화와 같은, 항암제의 투여를 위한 전달 비히클.
리포좀은 인지질 및 이들의 유도체가 물에서 분산될 때 형성된다. 물 속의 분산에서 인지질은 "리포좀"이라 불리는 폐쇄 소포를 형성하며, 이는 수성 핵을 캡슐화하는 지질 이중층에 의한 특성을 갖는다. 다양한 리포좀은 의학 과학, 제약 과학 및 생화학 분야에서 사용을 위한 약물, 효소 및 유전자 서열과 같은 내포된 치료제를 위한 담체로서 사용되었다.
리포좀 조성물의 예는 미국 특허 번호 4,983,397; 6,476,068; 5,834,012; 5,756,069; 6,387,397; 5,534,241 ; 4,789,633; 4,925,661; 6,153,596; 6,057,299; 5,648,478; 6,723,338; 6,627218; 미국 특허 출원 공개번호: 2003/0224037; 2004/0022842; 2001/0033860; 2003/0072794; 2003/0082228; 2003/0212031; 2003/0203865; 2004/0142025; 2004/0071768; 국제 특허 출원 WO 00/74646; WO 96/13250; WO 98/33481; Papahadjopolulos D, Allen TM, Gbizon A, et al. "Sterically stabilized liposomes: Improvements in pharmacokinetics and antitumor therapeutic efficacy" Proc Natl Acad Sci U.S.A. (1991) 88: 11460-11464; Allen TM, Martin FJ. "Advantages of liposomal delivery systems for anthracyclines " Semin Oncol (2004) 31: 5-15 (suppl 13). Weissig et al. Pharm. Res. (1998) 15: 1552-1556을 포함한다.
리포좀을 발현하는 초기 단계에서, 난황 인지질 및 대두 인지질과 같은 자연적으로 발생하는 세포막의 인지질이 사용되었다. 그러나, 정맥주사로 투여되는 경우에, 이러한 인지질을 이용하는 리포좀은 간 또는 비장의 세망내피계로 포함될 가능성이 있으며, 짧은 혈액 정체 시간의 문제의 원인이 되고 그로 인해 약물의 효능을 감소시킨다. 그 후에, 이 문제를 해결하기 위한 수단으로서, 오직 포화 결합만을 함유하는 지질 부분인 합성 인지질이 리포좀 막을 단단하게 하기 위한 리포좀 막의 구성체로서 사용되었다.
리포좀의 순환 반감기를 연장시키고 세망내피계에 의한 흡입을 피하기 위한 노력에서, 발명자들은 폴리에틸렌 글리콜 또는 다른 친수성 중합체의 포함에 의해 변형되는 리포좀(예를 들어, 하나 이상의 구성체 지질이 PEG 부착에 의해 변형되는 PEG 리포좀)을 발현시켰다. PEG-변형된 리포좀은 또한 종종 "차폐된" 리포좀으로서 언급된다. DoxilTM(독소루비신 HCl 리포좀 주사)은 세망내피계(RES)를 피하기 위해 이용되는 보조 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 갖는 리포좀으로 둘러싸인 독소루비신이며, 약물 순환 시간을 연장시키는데 이용된다. Vail DM, Amantea MA, Colbern GT, et al, "Pegylated Liposomal Doxorubicin: Proof of Principle Using Preclinical Animal Models and Pharmacokinetic Studies." Semin Oncol. (2004) 31 (Suppl 13): 16-35 참조. 그러나, 연장된 혈액 정체(예를 들어, 수족구 증후군, 말초계에서 Doxil®의 부작용)에 의해 원인이 되는 부작용이 문제로서 인식되었다.
리포좀의 예는 U.S. Pat. No. 4,983,397; 5,013,556; 6,316,024; 6,056,973; 5,945,122; 5,891,468; 6,126,966; 5,593,622, 5,676,971; 6,586,559; and 5,846,458 미국 특허 출원 공개 번호 2003/0224037; 2004/0022842; 2003/0113262; 2002/0136707; 국제 특허 출원 WO 99/30686; WO 02/41870 Aliminana et al, Prep. Biochem. Biotech. (2004) 34(1): 77-96를 포함한다. 리포좀은 또한 미국 특허 번호 6,228,391; 6,197,333; 6,046,225; 5,292,524; 및 미국 특허 출원 공개 번호 20050271588; 20040213833; 20040029210; 20030175205; 20030162748; 20030130190; 20030059461; 및 20020034537에 기술되어 있다.
추가적으로 PEG-변형된 리포좀에서, 연구원들은 다양한 다른 유도체화된 지질을 개발하였다. 이러한 유도된 지질은 또한 리포좀에 포함될 수 있다. 예를 들어, 참조: International Patent Application WO 93/01828; Park YS, Maruyama K, Huang L. "Some negatively charged phospholipids derivatives prolong the liposome circulation in vivo." Biochimica et Biophysica Acta (1992) 1108: 257-260; AhI et al, Biochimica Biophys. Acta (1997) 1329: 370-382.
추가적인 지질 조성물은 미국 특허 번호 6,936,272; 6,897,196; 6,077,834; 및 미국 특허 출원 공개 번호 20050136064; 20040234588; 20030215490; 20030166601; 및 20010038851에 기술되어 있다.
추가적으로 PEG를 갖는 리포좀 및 다른 친수성 중합체의 변형에서, 발명자들은 또한 리포좀을 개발하였고 특정 세포 형태를 위한 표적 인자(또한 표적 리간드로서 언급됨)를 포함함으로써 구체적인 표적 특정 세포 형태를 목표로 하였다. 표적 인자/리간드의 예는 아시알로당단백질, 폴레이트, 트랜스페린, 항체 등을 포함한다. 일부 경우에서 하나 이상의 구성체 지질은 표적 인자의 부착에 의해 변형될 수 있다.
지질 조성물의 예는 미국 특허 번호 5,049,390; 5,780,052; 5,786,214; 6,316,024; 6,056,973; 6,245,427; 6,524,613; 6,749,863; 6,177,059; 6,530,944; 미국 특허 출원 공개 번호 2004/0022842; 2003/0224037; 2003/143742; 2003/0228285; 2002/0198164; 2003/0220284; 2003/0165934; 2003/0027779; 국제 특허 출원 번호 WO 95/33841; WO 95/19434; WO 2001037807; WO 96/33698; WO 2001/49266; WO 9940789; WO 9925320; WO 9104014; WO 92/07959; EP 1369132; JP 2001002592; Iinuma H, Maruyama K, et al, "Intracellular targeting therapy of cisplatin-encapsulated transferrin-polyethylene glycol liposome on peritoneal dissemination of gastric cancer" Int J Cancer (2002) 99 130-137; Ishida O, Maruyama K, Tanahashi H, Iwatsuru M, Sasaki K, et al, "Liposomes bearing polyethylene gly col-coupled transferrin with intracellular targeting property to the solid tumors in vivo. " Pharmaceutical Research (2001) 18: 1042- 1048; Holmberg et al, Biochem. Biophys. Res. Comm. (1989) 165(3): 1272-1278; Nam et al, J. Biochem. Mol. Biol (1998) 31(1): 95-100; Nag et al, J. Drug Target. (1999) 6(6): 427-438를 포함하는 표적 인자를 포함한다.
특히, Iinuma et al.은 리포좀의 표면에 부착된 트랜스페린(Tf)으로, Tf-PEG-리포좀을 발현하였다. Iinuma et al.은 종양 세포의 표면에 결합된 많은 수의 리포좀을 보여주었고, PEG-리포좀과 비교할 때 Tf-PEG-리포좀에 대해 종양 세포에 의한 리포좀의 더 많은 흡수가 있었다(Inuma et al, ibid; Ishida et al, ibid).
그러나, 리포좀 조성물의 사용을 포함하는 약물 및 표지된 화합물 전달 분야에서 최근의 진보에도 불구하고, 여전히 치료 또는 진단 효과를 달성하는 특정 세포 및/또는 조직에 약물 및 표지된 화합물의 전달을 위한 개선된 리포좀 조성물의 필요가 있다. 특히 암 분야에서, 개선된 특이성 및 감소된 독성을 갖는 약물 제형은 건강한 세포에 부작용 없이 치료적 이점을 보장하고 또한 치료되는 환자에 대해 해로운 부작용을 야기하지 않을 필요가 있다. 유사하게, 표지된 화합물은 질병, 특히 초기 단계에서 생명을 위협하는 질병(예를 들어, 높은 특이성 및/또는 높은 민감성을 가짐),을 검출하는데 사용될 수 있고 또한 치료의 질 및 성공을 유효하게 향상시키는 질병의 심함/정도를 정확하게 모니터 할 수 있다.
발명의 개요
본 발명은 신규 지질-함유 조성물(리포좀(예를 들어, 표적 리포좀, 블랭크 리포좀), 지질 혼합물 및 지질-함유 조성물을 포함)과 관련이 있으며, 약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 포함할 수도 있고, 또는 약물 또는 표지된 화합물을 포함하는 제형의 제조에 사용될 수도 있으며, 여기서 지질-함유 조성물은 약물 또는 표지된 화합물로부터 부작용을 줄이는 이점을 주고/또는 또한 약물 또는 표지된 화합물의 효능의 감소 및/또는 손실을 예방한다. 본 발명은 또한 본원에 기술된 지질-함유 조성물을 만들고 사용하는 방법을 포함한다. 본 발명의 어떤 측면에서, 지질-함유 조성물은 암을 치료하거나 진단하는데 사용될 수도 있다(예를 들어, 유방암, 위암, 직장암, 결장암, 췌장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 뇌종양, 간암, 신장암, 전립선암, 방광암, 난소암, 또는 혈액암(예를 들어, 백혈병, 림프종, 다발성 골수종 등).
어떤 구체예에서 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딘 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 표적 리포좀이 제공되며, 여기서 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
; 그리고
제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되며,
,
상기식에서, R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 여기서 표적 리간드는 완전한 항체가 아니다.
다른 구체예에서, 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 블랭크 리포좀이 제공되며, 여기서 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 그리고 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
; 그리고
존재하는 경우, 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이며, m과 p는 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 폴리에틸렌 글리콜, 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않으며 여기서 표적 리간드는 완전한 항체가 아니다.
표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 어떤 구체예에서 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 p는 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이며, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤이다. 표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 어떤 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일이고, m과 p는 3이며, 하나 이상의 인지질은 DMPC이고 추가적인 지질은 콜레스테롤이다.
표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 어떤 구체예에서, m과 p는 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, m 및 p는 동일하고 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m 및 p는 동일하며 3이다. 어떤 구체예에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R1과 R2는 동일하고, R5와 R6는 동일하다. 다른 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이다. 어떤 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일이다.
추가적인 구체예에서 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 인지질 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 인지질 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질의 혼합물을 포함하는 지질 혼합물이 제공되며, 여기서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
, 그리고
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
상기식에서 R1, R2, R3 및 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m 및 n은, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않는다.
지질 혼합물의 어떤 구체예에서, m 및 n은 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, m과 n은 동일하며 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m과 n은 동일하며, 3이다.
지질 혼합물의 어떤 구체예에서, R1, R2, R3 및 R4는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R1과 R2는 동일하며, R3와 R4는 동일하다. 어떤 구체예에서, m과 n은 3이고, 여기서 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤이다. 지질 혼합물의 어떤 구체예에서, R1, R2, R3 및 R4는 올레오일이며, m과 n은 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC이고 추가적인 지질은 콜레스테롤이다.
추가적인 구체예에서 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 지질 혼합물을 제공하며, 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
, 그리고
표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 여기서 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m 및 p는, 독립적으로 1 내지 10의 정수이고; 여기서 혼합물을 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않으며, 여기서 표적 리간드는 완전한 항체가 아니다.
지질 혼합물의 특정 구체예에서, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재하고, m과 p는 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m 및 p는 동일하고 2 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, m과 p는 동일하고 3이다.
지질 혼합물의 특정 구체예에서, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 존재하며, R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R1과 R2는 동일하며, R5와 R6는 동일하다. 추가적 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 동일하다. 일부 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이다. 어떤 구체예에서 R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 p는 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 지질 혼합물의 어떤 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일이고, m과 p는 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC이고, 추가적인 지질은 콜레스테롤이고 표적 리간드는 트랜스페린이다.
어떤 구체예에서, 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 선택적으로 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 리포좀을 포함하는 리포좀-함유 조성물이 제공되며, 여기서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
, 그리고
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시한다.
(화학식 2)
상기식에서, R1, R2, R3와 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 n은, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고 여기서, 조성물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않는다.
리포좀-함유 조성물의 일부 구체예에서 m과 n은 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m과 n은 동일하며 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m과 n은 동일하며 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m과 n은 동일하며 3이다.
리포좀-함유 조성물의 일부 구체예에서, R1, R2, R3와 R4는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 특정 구체예에서, R1과 R2는 동일하며, R3와 R4는 동일하다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3와 R4는 동일하다. 어떤 구체예에서, R1, R2, R3와 R4는 올레오일 또느 스테아로일이다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3 및 R4는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 n은 3이고 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC이다. 어떤 구체예에서, R1, R2, R3 및 R4는 올레오일이고, m과 n은 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC이고 추가적인 지질은 콜레스테롤이다.
리포좀-함유 조성물의 추가적인 구체예에서 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 리포좀을 포함하는 리포좀-함유 조성물이 제공되며, 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
, 그리고
표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 포함하고; 그리고 여기서 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
,
상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 조성물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 여기서 표적 리간드는 완전한 항체가 아니다.
어떤 리포좀-함유 조성물에서, 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재하고, m과 p는 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 특정 구체예에서, m과 p는 동일하며 2 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서 m과 p는 동일하며 3이다.
어떤 리포좀-함유 조성물에서, 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재하며, R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 특정 구체예에서, R1과 R2는 동일하며, R5와 R6는 동일하다. 어떤 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 동일하다. 일부 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이다. 특정 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 어떤 구체예에서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일이고, m과 p는 3이고, 하나 이상의 인지질이 DMPC이고, 추가적인 지질은 콜레스테롤이고 표적 리간드는 트랜스페린이다.
리포좀-함유 조성물의 추가적 구체예에서 약물이 포함된다. 어떤 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 존재하는 경우, R1, R2 및 R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이며, 존재하는 경우, m과 p는 3이고, 존재하는 경우, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 약물은 옥살리플라틴이고, 존재하는 경우, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 어떤 구체예에서, 추가적 조성물은 약 1 내지 약 20%의 퍼센트 당(v/v)의 농도에서 당을 포함한다. 어떤 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 존재하는 경우, R1, R2 및 R5와 R6는 올레오일이고, 존재하는 경우, m과 p는 3이고, 존재하는 경우, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 약물은 옥살리플라틴이며, 존재하는 경우, 표적 리간드는 트랜스페린이다.
리포좀-함유 조성물의 추가적 구체예에서 표지된 화합물이 포함된다. 어떤 구체예에서, 표지된 호합물은 방사성 부분을 포함한다.
표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 지질 혼합물 및 지질-함유 조성물의 어떤 구체예에서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재한다. 특정 구체예에서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체이다.
표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 지질 혼합물 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜산, 포스파티딜세린 또는 포스파티딜글리세롤이다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린이다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 포화된 지방산 부분을 포함한다. 어떤 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC이다. 이러한 특정 구체예에서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재한다. 그리고 이들에서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체이다. 특정 구체예에서, DMPC과 콜레스테롤, DSPC과 콜레스테롤, POPC와 콜레스테롤, 또는 DPPC와 콜레스테롤이 포함된다. 어떤 구체예에서는, DMPC와 콜레스테롤이다.
존재하는 경우, 표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리피드 혼합물 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 표적 리간드는 표적 세포와 관련되어 있다. 일부 구체예에서, 표적 리간드는 표적 세포의 세포 표면 수용체와 관련되어 있다. 특정 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 당 사슬 또는 모노클로널 항체의 단편이다. 어떤 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산 또는 당 사슬이다. 다른 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산 또는 당 사슬이다. 일부 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 특정 구체예에서, 트랜스페린은 홀로형이지만 아포형은 아니다. 일부 구체예에서, 트랜스페린은 홀로형이다.
표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 어떤 구체예에서, 리포좀의 평균 직경은 약 50nm 내지 약 250nm이다. 다르게는, 리포좀의 평균 직경은 약 90nm 내지 약 200nm이다.
표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 특정 구체예에서, 리포좀의 제타전위는 음이다. 어떤 구체예에서, 제타 전위는 약 -75mV 내지 약 -90mV이다. 다르게는, 제타 전위는 약 -80mV 내지 약 -85mV이다.
리포좀-함유 조성물의 어떤 구체예에서, 표적 리포좀 및 블랭크 리포좀, 제형은 추가적으로 용액을 포함한다.
표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 약물이 존재한다.
표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이다. 어떤 구체예에서 여기서 약물을 옥살리플라틴이고, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 어떤 구체예에서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤이다.
어떤 구체예에서, 약물은 항암제이다. 특정 구체예에서, 약물은 세포독성의 약물이다. 일부 구체예에서, 약물은 토포이소머라아제 I 억제제이다. 특정 구체예에서, 토포이소머라아제 I 억제제는 토포테칸 또는 이리노테칸이다. 다른 구체예에서, 약물은 빈카 알칼로이드이다. 특정 구체예에서, 빈카 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈류로신, 빈로디신, 빈오렐빈 또는 빈데신이다. 일부 구체예에서, 약물은 핵산이다. 어떤 구체예에서, 핵산은 역배열의 올리고뉴클레오티드 또는 리보짐이다. 일부 구체예에서, 약물은 알킬화제이다. 특정 구체예에서, 약물은 탁산이다. 다른 구체예에서, 약물은 대사길항제이다. 어떤 구체예에서, 약물은 항종양 항생물질이다. 일부 구체예에서, 약물은 호르몬 치료 약물이다. 일부 구체예에서, 약물은 분자 표적 약물이다.
표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 일부 구체예에서, 약물은 백금 화합물이다. 특정 구체예에서, 백금 화합물은, 비플라틴, 시스플라틴, 카르보플라틴, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 제니플라틴, 엔로플라틴, 로바플라틴 또는 스피로플라틴이다. 일부 구체예에서, 백금 화합물은 옥살리플라틴이다.
일부 구체예에서 약물은 옥살리플라틴이며, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 p는 3이고, 표적 리간드는 트랜스페린이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤이다. 어떤 구체예에서 약물은 옥살리플라틴이며, R1, R2, R5와 R6는 올레오일이고, m과 p는 3이고, 표적 리간드는 트랜스페린이며, 하나 이상의 인지질은 DMPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤이다. 특정 구체예에서, 표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물은 다른 지질 성분이 없다.
일부 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고, 옥살리플라틴은 트레할로스, 말토오스, 수크로오스, 만노오스, 락토오스, 만니톨, 글리세롤 및 덱스트로오스로 구성되는 군으로부터 선택되는 당의 수성 용액에 용해된다. 어떤 구체예에서, 당은 약 1 내지 약 20% 퍼센트 당(v/v)의 농도에 존재한다. 특정 구체예에서, 옥살리플라틴의 농도는 리포좀 내에서 약 0.1mg/ml 내지 약 25mg/ml이다. 다른 구체예에서, 옥살리플라틴의 농도는 리포좀 내에서 약 0.5mg/ml 내지 약 10mg/ml이다. 또 다른 구체예에서, 옥살리플라틴의 농도는 약 0.5mg/ml 내지 약 3mg/ml이다.
표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 표지된 화합물이 존재한다. 어떤 구체예에서, 표지된 화합물은 방사성 부분을 포함한다. 특정 구체예에서, 방사성 부분은 125I를 포함한다.
표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 리포좀 내에 포함된 표적 리간드의 농도는 약 1.0mg/ml 내지 약 3.0mg/ml이다. 다르게는, 리포좀 내에 포함된 표적 리간드의 농도는 약 1.0mg/ml 내지 약 2.5mg/ml이다.
표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서 약물이 존재하며 옥살리플라틴이고, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 특정 구체예에서, 트랜스페린은 홀로형이다. 일부 구체예에서, 3가 철이온은 약 0.4 내지 약 3.0μg/ml의 농도에 있다. 다른 구체예에서, 3가 철이온은 약 0.4 내지 약 1.5μg/ml의 농도에 있다.
표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리포좀 혼합물 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 리포좀, 지질 혼합물 또는 리포좀-함유 조성물은 양이온성 지질을 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 리포좀, 지질 혼합물 또는 리포좀-함유 조성물은 음이온성 지질을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 리포좀, 지질 리포좀, 지질 혼합물 또는 리포좀-함유 조성물은 음이온성 지질 또는 양이온성 지질을 포함하지 않는다.
표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 지질 혼합물 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 제형은 추가적으로 용액을 포함한다. 어떤 구체예에서, 지질 혼합물은 용액이 없다. 특정 구체예에서, 용액은 수성 용액 또는 수성 용액의 혼합물 및 물과 혼화 가능한 용액이다.
표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 지질 혼합물 및 리포좀-함유 조성물의 특정 구체예에서, 제형은 추가적으로 수크로오스를 포함한다.
본 발명의 추가적 측면에서 본원에 기술된 지질-함유 조성물의 약학적 제형이 제공된다. 리포좀-함유 조성물, 표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 특정 구체예에서, 본원에 기술된 바와 같은 리포좀-함유 조성물, 표적 리포좀 또는 블랭크 리포좀 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 또는 보존제를 포함한다.
본 발명의 다른 측면에서 본원에 기술된 지질-함유 조성물을 포함하는 키트가 제공된다. 리포좀-함유 조성물, 표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 어떤 구체예에서, 본원에 기술된 바와 같은 리포좀-함유 조성물, 표적 리포좀 또는 블랭크 리포좀, 사용을 위한 패키징 및 지침을 포함한다.
키트의 어떤 구체예에서, 본원에 기술된 바와 같은 리포좀 함유 조성물, 표적 리포좀 또는 블랭크 리포좀은 첫번째 용기에 함유되며 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 또는 보존제가 두번째 용기에 함유된다.
특정 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 약학적 조성물을 포함하는 키트, 사용을 위한 패키지 및 지침이 제공된다.
본 발명의 다른 측면에서 본원에 기술된 지질-함유 조성물의 제조 방법이 제공된다.
특정 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 하기의 단계를 포함하는 표적 리포좀의 제조 방법이 제공된다:
a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 선택적으로 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 약물 또는 표지된 화합물을 (a)단계에서 형성된 지질 혼합물에 첨가하는 단계;
c) 리포좀을 형성하는 단계.
방법의 추가적인 구체예에서 단계(c)의 리포좀을 정제하는, 단계 (d)가 제공된다. 특정 구체예에서, 단계 (b)의 약물은 혼합 이전에 수성 용액이다. 어떤 구체예에서, 단계 (c)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 일부 구체예에서, 단계 (c)는 압출성형을 포함한다.
다른 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 하기의 단계를 포함하는 표적 리포좀의 제조 방법이 제공된다
a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계
여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
(화학식 2)
,
(상기식에서 R3과 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이며, n은, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이다);
b) 약물 또는 표지된 화합물을 단계(a)에서 형성된 지질 혼합물에 첨가하는 단계;
c) 리포좀을 형성하는 단계; 그리고,
d) N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르에 표적 리간드를 연결하는 단계.
상기-기술된 방법의 어떤 구체예에서, 방법은 또한 단계(d)의 리포좀을 정제하는, 단계(e)를 포함한다.
특정 구체예에서, 단계 (b)의 약물은 혼합에 이전에 수성 용액에서 존재한다. 일부 구체예에서, 단계 (c)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 어떤 구체예에서, 단계 (c)는 압출성형을 포함한다. 특정 구체예에서, 단계 (c)는 교반을 포함한다.
어떤 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 하기의 단계를 포함하는 블랭크 리포좀의 제조 방법이 제공된다
a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계; 그리고
b) 리포좀을 형성하는 단계.
블랭크 리포좀을 제조하는 방법의 어떤 구체예에서, 방법은 단계(b)의 리포좀을 정제하는, 단계(c)를 추가적으로 포함한다.
특정 구체예에서, 단계(b)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 일부 구체예에서, 단계 (b)는 압출성형을 포함한다.
다른 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 하기의 단계를 포함하는 블랭크 리포좀의 제조 방법이 제공된다
a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계
여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
(화학식 2)
,
(상기식에서 R3과 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고, n은, 독립적으로 1 내지 10의 정수이다);
b) 리포좀을 형성하는 단계;
c) N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르에 표적 리간드를 연결하여 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 형성한다.
블랭크 리포좀을 제조하는 방법의 어떤 구체예에서, 방법은 단계(c)의 리포좀을 정제하는 단계(d)를 추가적으로 포함한다.
특정 구체예에서, 단계(b)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 일부 구체예에서, 단계 (b)는 압출성형을 포함한다.
다른 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물의 제조 방법이 제공되며, 하나 이상의 인지질, 적어도 하나의 추가적인 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하는 단계를 포함한다.
추가적인 구체예에서 지질-함유 조성물의 제조 방법이 제공되며 여기서 본원에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며, 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하는 단계를 포함한다.
다른 구체예에서, 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물의 제조 방법이 제공되며, 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 혼합하는 단계를 포함한다.
추가적인 구체예에서 지질-함유 조성물의 제조 방법이 제공되며, 여기서 본원에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며, 하나 이상의 인지질, 적어도 하나의 추가적인 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 혼합하는 단계를 포함한다.
또한 본원에 기술된 하기의 단계를 포함하는 리포좀-함유 조성물의 제조 방법이 제공된다
a) 존재하는 경우, 하나 이상의 인지질 지질, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 또는 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 존재하는 경우, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 약물을 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 추가하는 단계;
c) 리포좀을 형성하는 단계.
다양한 지질-함유 조성물(표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리포좀-함유 조성물)의 제조 방법의 어떤 구체예에서, 약물이 존재하며, 약물은 수성 용액이다. 어떤 구체예에서, 단계 a)는 유기 용매의 존재에서 수행된다. 일부 구체예에서, 수성 용액은 당을 추가적으로 포함한다. 어떤 구체예에서, 수성 용액은 또한 물과 혼화 가능한 유기 용매를 포함할 수도 있다.
다른 구체예에서 하기의 단계를 포함하는 리포좀-함유 조성물의 제조 방법이 제공된다,
a) 하나 이상의 인지질 지질, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및,
존재하는 경우, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 또는 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 존재하는 경우, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여, 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 표지된 화합물을 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 첨가하는 단계
c) 리포좀을 형성하는 단계.
다양한 지질-함유 조성물(표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리포좀-함유 조성물)의 제조 방법의 어떤 구체예에서, 표지된 화합물이 존재하며, 표지된 화합물은 수성 용액에 존재한다. 어떤 구체예에서, 단계 a)는 유기 용매의 존재에서 수행된다. 어떤 구체예에서 수성 용액은 또한 물에 혼화 가능한 유기 용매를 포함할 수도 있다.
어떤 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 하기의 단계를 포함하는 리포좀-함유 조성물의 제조 방법이 제공되며, 여기서 리포좀-함유 조성물은 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 포함된다,
a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여, 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 용매를 단계(a)에서 형성된 혼합물에 첨가하여 리포좀-함유 조성물을 형성하는 단계.
특정 구체예에서, 혼합하는 단계 (a)는 유기 용매의 존재에서 수행된다. 특정 구체예에서 단계(b)에서 용매는 수성 용액 또는 수성 용액 및 물에 혼화 가능한 용매의 혼합물이다.
어떤 구체예에서, 단계(b)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 일부 구체예에서, 단계 (b)는 압출성형을 포함한다.
지질-함유 조성물의 제조 방법의 특정 구체예에서, 단계(a)에서 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재한다.
지질 함유 조성물의 제조 방법의 일부 구체예에서, 단계(a)에서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르가 존재한다.
지질 함유 조성물의 제조 방법의 일부 구체예에서, 단계(a)에서 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재한다.
본 발명의 추가적인 측면에서 본원에 기술된 지질-함유 조성물을 사용하는 치료 또는 진단 방법이 제공된다.
특정 구체예에서 a) 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀을 암을 치료하기 위한 유효량으로 환자에 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 표적 리포좀은 약물을 포함하고, 약물은 항암제이다.
치료 또는 진단 방법의 어떤 구체예에서, 환자는 포유동물이다. 특정 구체예에서 환자는 인간이다.
치료 방법의 어떤 구체예에서, 암은 유방암, 위암, 결장암, 직장암, 췌장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 뇌종양, 간암, 신장암, 전립선암, 방광암, 난소암, 또는 혈액암이다.
치료 방법의 일부 구체예에서, 단계 (a)는 조합되는 방식의 암 치료의 이전, 동시에 또는 후에 수행된다. 특정 구체예에서, 조합되는 방식의 암 치료는 화합요법, 방사선 요법, 또는 외과적 수술을 포함한다.
치료 방법의 특정 구체예에서, 단계(a)는 보조적 암 치료의 이전, 동시에 또는 후에 수행된다. 특정 구체예에서, 보조 암치료는 탈모, 구토, 면역 억제, 메스꺼움, 설사, 발진, 감각 장애, 빈혈, 피로, 구내염, 또는 수족구 증후군을 감소시키기 위한 하나 이상의 약제의 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 단계(a)는 하나 이상의 추가적인 항암제의 투여의 이전, 동시 또는 후에 수행된다. 어떤 구체예에서, 하나 이상의 추가적인 항암제는 5-플루오로우라실, 류코보린, 카페시타빈, UFT/LV(테가푸르-우라실 및 류코보린), 이리노테칸, 항 EGFR 항체, 항-VEGF 항체, 티로신 키나아제 억제제 또는 이들의 조합을 포함한다.
치료 방법의 일부 구체예에서, 표적 리포좀은 비경구 투여를 통해 투여된다. 특정 구체예에서, 비경구 투여는 주사 또는 정맥 주사를 통한다.
또한 하기의 단계를 포함하는 진단 방법이 제공된다,
a) 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀을 필요한 환자에 검출을 위한 유효량에서 투여하며, 여기서 표적 리포좀은 표지된 화합물을 포함하는 단계;
b) 표지된 화합물을 검출하는 단계.
진단 방법의 추가적인 구체예에서, 방법은 단계(c)를 추가적으로 포함하며, 검출된 표지된 화합물의 수준과 제시간 이전에 검출된 표지된 화합물의 양의 비교한다.
진단 방법의 추가적인 구체예에서, 단계(b)는 감마선 계측기를 통한 검출을 포함한다.
본 발명의 추가적인 측면에서, 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 제공되며, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
,
상기식에서 R5와 R6는 각각, 독립적으로 아실기이고 p는 1 내지 10의 정수이고, 트랜스페린은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된다.
트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 어떤 구체예에서, p는 2 내지 4의 정수이다. 특정 구체예에서, p는 3이다.
트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 일부 구체예에서, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 특정 구체예에서, R5와 R6는 동일하다. 일부 구체예에서, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이다. 어떤 구체예에서, R5와 R6는 올레오일이고 p는 3이다.
또한 추가적인 측면에서 본원에 기술된 바와 같은 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
어떤 구체예에서 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 혼합물을 포함하는 지질 혼합물이 제공되며, 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
, 그리고
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
(화학식 2)
,
상기식에서 R1, R2, R3과 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 n은, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 그릴콜을 포함하지 않는다.
어떤 구체예에서 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 및 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물을 포함하는 리포좀-함유 조성물이 제공되며, 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
; 그리고
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되하고,
(화학식 2)
,
상기식에서, R1, R2, R3과 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고; m과 n은, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 여기서 혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않는다.
리포좀-함유 조성물 및 지질 혼합물의 특정 구체예에서, m과 n은 각각, 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 어떤 구체예에서, m과 n은 동일하고 2 내지 4의 정수이다. 다른 구체예에서, m과 n은 동일하며 3이다.
리포좀-함유 조성물 및 지질 혼합물의 일부 구체예에서, R1, R2, R3과 R4는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R1과 R2는 동일하고, R3와 R4는 동일하다. 특정 구체예에서, R1, R2, R3 및 R4는 동일하다. 일부 구체예에서, R1, R2, R3과 R4는 올레오일이다.
리포좀-함유 조성물 및 지질 혼합물의 특정 구체예에서, 중성 지질: N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민:N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 몰농도 비는 95:4:1이다.
리포좀-함유 조성물 및 지질 혼합물의 일부 구체예에서, 중성 지질은 DMPC 및 콜레스테롤이고, DMPC : 콜레스테롤 : (N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 + N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르)의 몰농도비는 50:45:5이다. 이들의 어떤 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 NHS-NG-DOPE이다.
어떤 구체예에서 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물을 포함하는 표적 리포좀이 제공되며, 여기서 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 그리고, 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
; 그리고
제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
,
상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 여기서 표적 리간드는 완전한 항체가 아니다.
특정 구체예에서 중성 포스파티딜 콜린, 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 트랜스페닐-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 옥살리플라틴을 포함하며, 여기서 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 카르복실산 아미드 결합에 의해 연결된 트랜스페린을 포함하고; 그리고 여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
(화학식 1)
; 그리고
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고, 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
,
상기식에서 R1, R2, R5 및 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고, 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않는다. 어떤 구체예에서, 표적 리포좀은 실질적으로 EDC 및/또는 DCC가 없다.
표적 리포좀의 어떤 구체예에서, m과 p는 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, m과 p는 동일하고 2 내지 4의 정수이다. 특정 구체예에서, m과 p는 동일하고 3이다.
표적 리포좀의 일부 구체예에서, R1, R2, R5와 R6은 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 어떤 구체예에서 R1과 R2는 동일하고, R5와 R6은 동일하다. 특정 구체예에서, R1, R2, R5와 R6은 동일하다. 일부 구체예에서 R1, R2, R3과 R4는 올레오일 또는 스테아로일이다. 어떤 구체예에서, R1, R2, R3 및 R4는 올레오일이다.
표적 리포좀의 어떤 구체예에서, 표적 리간드는 표적 세포와 관련되어 있다. 특정 구체예에서, 표적 리간드는 표적 세포의 세포 표면의 수용체와 관련되어 있다. 일부 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 당 사슬 또는 모노클로날 항체의 단편이다. 어떤 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 또는 당 사슬이다. 특정 구체예에서, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 이들의 일부 구체예에서, 트랜스페린은 홀로형이지만 아포형은 아니다. 다른 구체예에서, 트랜스페린은 아포형이다.
지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 어떤 구체예에서, 제형은 음이온 지질을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 제형은 양이온 지질을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 제형은 양이온 지질 또는 음이온 지질을 포함하지 않는다. 어떤 구체예에서, 제형은 포스파티딜 글리세롤 또는 이들의 유도체를 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 제형은 난 포스파티딜콜린을 포함하지 않는다.
지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 일부 구체예에서, 적어도 두개의 다른 중성 지질은 하나 이상의 인지질 및 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체이다. 일부 구체예에서, 적어도 두 개의 다른 중성 지질의 적어도 하나는 인지질이다. 지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 어떤 구체예에서, 적어도 두개의 다른 중성 지질은 포스파티딜 콜린과 콜레스테롤이다. 특정 구체예에서, 적어도 두개의 다른 중성 지질 중 하나는 DMPC, DSPC 또는 DPPC이다. 일부의 구체예에서, 적어도 두개의 다른 중성 지질 중 하나는 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체이다. 특정 구체예에서, 적어도 두 개의 다른 중성 지질은 DMPC와 콜레스테롤, DSPC와 콜레스테롤, 또는 DPPC와 콜레스테롤이다. 특정 구체예에서, 적어도 두개의 다른 중성 지질은 DMPC와 콜레스테롤이다.
표적 리포좀의 일부 구체예에서 리포좀의 평균 직경은 약 50nm 내지 약 250nm이다. 어떤 구체예에서, 리포좀의 평균 직경은 약 90nm 내지 약 200nm이다. 특정 구체예에서, 리포좀의 평균 직경은 약 100nm 내지 약 140nm이다.
표적 리포좀의 어떤 구체예에서 리포좀의 제타 전위는 음이다. 특정 구체예에서, 제타 전위는 약 -75mV 내지 약 -90 mV이다. 일부 구체예에서, 제타 전위는 약 -80mV 내지 약 -85 mV이다.
지질 혼합물의 일부 구체예에서, 지질-함유 조성물 및 표적 리포좀, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE(여기서 NG-DOPE는 올레오일인 R1과 R2와 평형상태이고 m은 3이다)이며, 존재하는 경우, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 NHS-NG-DOPE(여기서, NHS-NG-DOPE는 올레오일인 R3과 R4와 평형상태이고 m은 3이다)이고 또는, 여기서 존재하는 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 TF-NG-DOPE(여기서 TF-NG-DOPE는 올레오일인 R5와 R6과 평형상태이고 p는 3이다)이다.
리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 일부 구체예에서, 제형은 용액을 추가적으로 포함한다.
표적 리포좀의 어떤 구체예에서, 중성 지질:N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민:표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 몰농도 비는 약 95:4:1이다.
표적 리포좀의 어떤 구체예에서, DMPC:콜레스테롤:(N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민+표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민)의 몰농도 비는 50:45:5이다.
리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 특정 구체예에서, 표지된 화합물이 존재한다. 어떤 구체예에서, 표지된 화합물은 방사성동위원소 부분을 포함한다. 특정 구체예에서, 표지된 호합물은 125I를 포함한다.
리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 일부 구체예에서, 약물이 존재한다. 특정 구체예에서, 약물은 항암제이다. 일부 구체예에서, 약물을 세포독성 약물이다. 어떤 구체예에서, 약물은 토포이소머라아제 I 억제제이다. 특정 구체예에서, 토포이소머라아제 I 억제제는 토포테칸 또는 이리노테칸이다. 다른 구체예에서, 약물은 빈카 알칼로이드이다. 일부 구체예에서, 빈카 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈류로신, 빈로디신, 빈오렐빈 또는 빈데신이다. 다른 구체예에서, 약물은 핵산이다. 이들의 일부 구체예에서, 핵산은 역배열의 올리고뉴클레오티드 또는 리보짐이다. 특정 구체예에서, 약물은 백금 화합물이다. 어떤 구체예에서, 백금 화합물은 비플라틴, 시스플라틴, 카르보플라틴, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 제니플라틴, 엔로플라틴, 로바플라틴 또는 스피로플라틴이다. 특정 구체예에서, 백금 화합물은 옥살리플라틴이다. 일부 구체예에서 약물은 알킬화제이다. 특정 구체예에서, 약물은 탁산이다. 다른 구체예에서, 약물은 대사길항제이다. 어떤 구체예에서, 약물은 항종양 항생물질이다. 일부 구체예에서, 약물은 호르몬 치료 약물이다. 특정 구체예에서, 약물은 분자 표적 약물이다.
특정 구체예에서, 옥살리플라틴이 존재하며, 옥살리플라틴은 트레할로스, 말토오스, 수크로오스, 만노오스, 락토오스, 만니톨, 글리세롤 및 덱스트로오스로 구성되는 군으로부터 선택되는 당의 수성 용액에 용해된다. 어떤 구체예에서, 당은 약 1 내지 약 20% 퍼센트 당(v/v)의 농도에서 존재한다. 일부 구체예에서, 옥살리플라틴의 농도는 리포좀 내에서 약 0.1mg/ml 내지 약 25mg/ml이다. 다른 구체예에서, 옥살리플라틴의 농도는 리포좀 내에서 약 0.5mg/ml 내지 약 10mg/ml이다. 또 다른 구체예에서, 옥살리플라틴의 농도는 약 0.5mg/ml 내지 약 3mg/ml이다.
특정 구체예에서 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재하며, 리포좀 내에 포함된 표적 리간드의 농도는 약 1.0mg/ml 내지 약 3.0mg/ml이다. 어떤 구체예에서, 리포좀 내에 포함된 표적 리간드의 농도는 약 1.0mg/ml 내지 약 2.5mg/ml이다.
어떤 구체예에서, 표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재하며, 표적 리간드는 트랜스페린이다. 일부 구체예에서, 트랜스페린은 홀로형이지만 아포형은 아니다. 어떤 구체예에서, 트랜스페린은 홀로형이다. 일부 구체예에서, 3가 철이온은 약 0.4 내지 약 3.0μg/ml의 농도에서 존재한다. 다른 구체예에서, 3가 철이온은 약 0.4 내지 약 1.5μg/ml의 농도에서 존재한다.
지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물 및 표적 리포좀의 일부 구체예에서, 제형은 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 이외의 지질 혼합물이 없다. 특정 구체예에서, 제형은 포스파티딜 콜린, 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 이외의 지질 조성물이 없다.
다른 구체예에서 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀 또는 리포좀-함유 조성물 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하는 약학적 제형이 제공된다.
이제 다른 측면에서 본원에 기술된 하나 이상의 지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물 또는 표적 리포좀을 함유하는 키트, 패키징 및 사용을 위한 설명서가 제공된다.
어떤 구체예에서, 키트는 표적 리포좀을 포함한다. 특정 구체예에서, 표적 리포좀은 첫번째 용기에 함유되고 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 또는 보존제는 두번째 용기에 함유된다.
다른 방법으로 기술되지 않는다면, 본원에 기술된 지질-함유 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 치료 및 진단 방법에 사용을 위해 의도되고 본원에 기술된 약학적 조성물 및 키트에 포함될 수도 있다. 본원에 기술된 지질-함유 조성물(지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물을 포함), 리포좀(표적 리포좀, 블랭크 리포좀 등)은 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 본원에 기술된 바와 같은 제조 방법에 의해 만들어질 수도 있다.
다른 측면에서 본원에 기술된 지질-함유 조성물을 만들기 위한 방법이 제공되며, 적어도 두개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하는 단계를 포함하고,
어떤 구체예에서 본원에 기술된 리포좀-함유 조성물의 제조 방법이 제공되며, 하기의 단계를 포함한다,
a) 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 약무을 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 첨가하는 단계;
c) 리포좀을 형성하는 단계.
어떤 구체예에서, 단계 (a)를 혼합하는 것은 유기 용매의 존재에서 수행된다.
일부 구체예에서, 단계(b)에서 약물은 혼합 이전에 수성 용액에서 존재한다.
어떤 구체예에서, 단계(c)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 특정 구체예에서, 단계(c)는 압출성형을 포함한다.
추가적인 구체예에서 하기의 단계를 포함하는 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀의 제조 방법이 제공된다,
a) 적어도 두 개의 다른 중성 지방, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 약물 또는 표지된 화합물을 단계(a)에서 형성된 지질 혼합물에 첨가하는 단계;
c) 리포좀을 형성하는 단계; 그리고,
d) N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르에 표적 리간드를 연결하는 단계.
상기 방법의 어떤 구체예에서, 방법은 단계(d)의 리포좀을 정제하는 단계(e)를 추가적으로 포함한다. 특정 구체예에서, 단계(b)의 약물은 혼합 이전에 수성 용액에서 존재한다. 어떤 구체예에서 단계(c)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다. 어떤 구체예에서, 단계(c)는 압출성형을 포함한다.
표적 리포좀의 제조 하기의 단계를 포함하는 추가적인 방법이 또한 제공된다
a) 포스파티딜 콜린, 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체, 및 N-(ω)-디카르복실산 유도된 포스파티딜 에탄올아민을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계;
b) 옥살리플라틴을 단계(a)에서 형성된 지질 혼합물에 첨가하는 단계;
c) 리포좀을 형성하는 단계;
d) N-(ω)-디카르복실산 유도된 포스파티딜 에탄올아민의 부분을 기능화하여 N-(ω)-디카르복실산 유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 형성하는 단계;
e) N-(ω)-디카르복실산 유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르에 트랜스페린을 연결하는 단계.
어떤 구체예에서, 방법은 단계(e)의 리포좀을 정제하는 단계(f)를 추가적으로 포함한다.
방법의 특정 구체예에서 단계(b)의 약물은 혼합 이전에 수성 용액에서 존재한다.
방법의 일부 구체예에서 단계(c)는 초음파처리 또는 교반을 포함한다.
본 발명의 추가적인 측면에서 약제의 제조에서 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물 및 이들의 제형의 사용이 제공된다. 특히, 약제의 제조는 본원에 기술된 바와 같은 질병의 치료 또는 진단에서 사용을 위한 것이다. 추가적으로, 본원에 다양하게 기재된, 이들의 약학적 조성물은 또한 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 본원에 기술된, 방법에 따르는 질병의 치료 및 진단에서 사용을 위한 약제의 제조에서 사용을 위한 것으로 또한 의도된다.
발명의 추가적인 측면에서 암을 치료하기 위한 방법은 a) 암을 치료하기 위한 유효량에서 이를 필요로 하는 환자에 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 약물은 항암제이다.
일부 구체예에서, 환자는 포유동물이다. 특정 구체예에서, 환자는 인간이다.
어떤 구체예에서, 암은 유방암, 위암, 결장암, 직장암, 췌장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 뇌종양, 간암, 신장암, 전립선암, 방광암, 난소암, 혈액암이다.
치료 방법의 일부 구체예에서, 단계(a)는 조합된 방식의 암치료 이전, 동시 또는 후에 수행된다. 특정 구체예에서, 조합된 방식의 암치료는 화학요법, 방사선 요법, 또는 외과적 수술을 포함한다.
치료 방법의 일부 구체예에서, 단계(a)는 보조적 암 치료 이전, 동시 또는 후에 수행된다. 특정 구체예에서, 보조 암치료는 하나 이상의 약제의 투여를 포함하며 탈모, 구토, 면역억제, 메스꺼움, 설사, 발진, 감각 장애, 빈혈, 피로, 구내염, 또는 수족구 증후군을 포함한다. 어떤 구체예에서, 단계 (a)는 하나 이상의 추가적인 항암제 투여 이전, 동시 또는 후에 수행된다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 추가적인 항암제는 5-플루오로우라실, 류코보린, 카페시타빈, UFT/LV(테가푸르-우라실 및 류코보린), 이리노테칸, 항 EGFR 항체, 항-VEGF 항체, 티로신 키나아제 억제제 또는 이들의 조합을 포함한다.
치료 방법의 어떤 구체예에서, 표적 리포좀은 비경구 투여를 통해 투여된다. 특정 구체예에서, 비경구 투여는 주사 또는 정맥주사를 통한다.
도 1은 표적 리포좀의 개략적인 표현을 보여준다.
도 2는 표적 리포좀을 사용하는 종양 세포를 표적화하는 활성 약물의 개략적인 표현을 보여준다.
도 3은 옥살리플라틴을 함유하는 표적 리포좀의 제안된 활성 방식의 개략적인 표현을 보여준다.
도 4는 표적 리포좀에 대한 생산 과정 A의 개략적인 설명을 보여준다.
도 5는 표적 리포좀의 생산 과정 B의 개략적인 기술을 보여준다.
도 6은 다양한 옥살리플라틴 농도에서 AsPC-I 세포 상의 옥살리플라틴의 세포독성을 보여준다.
도 7은 정상 백혈구 및 종양-유도된 세포 라인의 세포 표면상에서 존재하는 트랜스페린 수용체의 수를 보여준다.
도 8은 실시예 6에서 제조되고 QELS에 의해 획득된 리포좀-함유 혼합물에 대한 크기 분포의 결과를 보여준다; A)입구 1, B)입구 2, C)입구 3, D)입구 4, E)입구 5, F)입구 6.
도 9는 혈액 내 리포좀의 농도를 보여주며, 여기서 (◆)는 실시예 6에서 제조된 Tf-PEG-리포좀을 나타내고, (■)는 실시예 5에서 제조된 Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀을 나타내고, (▲)는 실시예 6에서 제조된 Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀을 나타낸다.
도 10은 암 조직에서 리포좀의 농도를 보여주며; 여기서 (◆)는 실시예 6에서 제조된 Tf-PEG-리포좀을 나타내고, (■)는 실시예 5에서 제조된 Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀을 나타내고, (▲)는 실시예 6에서 제조된 Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀을 나타낸다.
도 11은 정맥 주사 후에, 실시예 13에서 기술되는 바와 같이 제조되는, NG-PE 리포좀의 종양 조직 내 축적을 보여주며, 여기서 NGPE 리포좀은 125I로 표지된 티라미닐 인슐린을 캡슐화하여 결장 26 종양-함유 마우스에 주사하였다. 데이터는 평균으로서 보여진다. 데이터는 평균±SD(n=5)로서 보여진다. (□)0mol%(-); (■)1mol%(＋)Tf-NG-DOPE. * 유효부분은 0 mol% (-)과 다름
도 12는 종양 성장 비 대 최초 치료 후의 일수를 플롯팅 함으로써 종양 성장에서 리포좀의 억제 효능을 보여주며, 여기서 (◆)는 실시예 9에서 제조된 Tf-PEG-리포좀을 나타내고; (■)는 Tf 없이 실시예 6에서 제조된 PEG-리포좀을 나타내고; (▲)는 실시예 8에서 제조된 Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀을 나타내고; (○)는 Tf 없이 실시예 8에서 제조된 NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀을 나타내고; (＊)는 실시예 9에서 제조된 Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀을 나타내고; (●)는 Tf없이 실시예 9에서 제조된 PEG-NG-DSPE 리포좀을 나타내고; (＋)는 l-OHP 용액을 나타내고; 그리고 (-)는 치료 없음을 나타낸다.
도 13은 혈액 내에서 검출된 약물 투여량의 백분율에서 다양한 농도의 NG-PE(NG-DSPE)의 효과를 보여주며, 여기서 NG-DSPE의 농도(총 지질 함유의 %)는 다음과 같고: (◆)0%, (■)1%;(▲)3%;(x)6%;(o)12%; 그리고 다음의 지질을 갖는다:(●)MPB 6%;(＋)PDP 6%.
도 14는 Tf가 있거나 없는 다양한 디카르복실산 링커를 갖는 리포좀의 혈액 정체를 보여준다; (◆)Tf-NGPE, (■)Tf-NSPE, (▲)TF-MPB;(x) NGPE(Tf 없음), (＊)MPB(Tf 없음).
도 15는 전기이동에 의한 리포좀의 대표적인 분석을 보여준다; 레인 6(트랜스페린-N-글루타릴-디테아로일 포스파티딜 에탄올아민-리포좀(Tf-NG-DSPE 리포좀)); 레인 5(트랜스페린-폴리에틸렌글리콜-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민-리포좀(Tf-PEG-DSPE 리포좀))가 보여진다. 레인 1-4는 각각 h-아포-Tf(240 ng), h-아포-Tf (120ng), h-아포-Tf(60ng), 및 h-아포-Tf(30 ng)를 함유한다.
도 16은 리포좀으로 포함된 비-NG-DSPE를 갖는 Tf-NG-DSPE 리포좀 및 비-NG-DSPE를 갖지 않는 Tf-NG-DSPE 리포좀에 트랜스페린 결합의 양을 보여준다. 레인 1-3은, 각각, h-아포-Tf(400ng), h-아포-Tf (200ng), 및 h-아포-Tf (50ng)를 함유한다.
도 17은 5 mg/kg에서 (■)NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀 및 5 mg/kg에서 (●)Tf-PEG 리포좀의 투여 후 혈액에서 옥살리플라틴의 축적을 보여준다.
도 18은 마우스 결장 26 종양 내 5 mg/kg에서 (■)NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀 및 5 mg/kg에서 (●)Tf-PEG 리포좀의 투여 후 결장의 26 종양에서 옥살리플라틴의 축적을 보여준다.
도 19는 결장의 26개 종양 함유 마우스에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 항종양 효과를 보여주며, 여기서 (●)는 비히클 대조구(9% 수크로오스)를 나타내고; (▲)는 5 mg/kg에서 l-OHP 용액을 나타내고, (◆)는 5 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고 (■)는 5 mg/kg에서 Tf-PEG를 나타낸다.
도 20은 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 HCT-116 인간 결장 종양 이종이식 함유 마우스에서 항종양 효과를 보여주고, (●)는 비히클 대조구(30OmM (10.27 %) 수크로오스)를 나타내고; (○)는 블랭크 리포좀(약물 없음)을 나타내고, (▲)는 15 mg/kg에서 l-OHP 용액을 나타내고, (◆)는 10 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고 (■)는 15 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH를 나타낸다. 모든 리포좀은 0.103mL/10g 체중의 주사 부피를 갖는 정확한 체중으로 투여된다.
도 21은 HT-29 인간 결장 종양 이종이식-함유 마우스의 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀에서 항종양 효과를 보여주며, 여기서 (●)는 비히클 대조구(30OmM(10.27%)수크로오스)를 나타내며, (▲)는 15 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고, (■)는 10 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고, 그리고 (◆)는 6.7 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타낸다.
도 22는 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 MKN45 위 인간 종양 이종이식-함유 마우스에서 항종양 효과를 보여주며, 여기서 (●)는 비히클 대조군(30OmM (10.27%) 수크로오스)을 나타내며, (▲)는 15mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고, (■)는 10mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고, 그리고 (◆)는 6.7 mg/kg에서 NG-DOPE:Tf-NG- DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타낸다.
도 23은 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 COLO 205 인간 종양 이종이식-함유 마우스에서 항종양 효과를 보여주며, 여기서 (●)는 비히클 대조군(9% 수크로오스)을 나타내고; (▲)는 5 mg/kg q4d x3 (16일), 10 mg/kg q2d x2 (47일), 2 mg/kg q2d x 6 (51일)에서 l-OHP 용액을 나타내고; (◆)는 5mg/kg q4d x3 (16일), 10 mg/kg q2d x2 (47일), 2 mg/kg q2d x 6 (51일)에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타내고; 그리고 (■)는 10 mg/kg q4d x3 (16일), 15 mg/kg q2d x2 (47일), 4 mg/kg q2d x 6 (51일)에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 나타낸다.
도 24는 2-머캅토에탄올로 환원 후 SDS-PAGE의 패턴을 보여주며, 레인 1은 분자량 마커이고, 레인 2는 홀로-트랜스페린이고, 레인 3-5는 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀이고, 그리고 레인 6은 Tf-NG-DOPE이다.
도 25는 시스템 적응의 대표적인 HPLC 크로마토그램을 보여준다.
본원에 기술된 지질-함유 조성물(표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리포좀-함유조성물, 지질 혼합물, 등), 및 지질-함유 조성물을 만들고 사용하는 방법이 제공된다. 특히, 본원에서 제공된 지질-함유 조성물, 및 리포좀은 약학적 제형의 제조 및 암을 포함하는 다양한 질병의 치료 또는 진단에서 사용에 적합하다. 약학적 제형을 포함하는 조성물은, 환자에게 전달되는 약물 또는 표지된 화합물과 관련된 감소된 부작용을 갖는, 더 효과적인 치료 및 진단 처방을 제공한다. 증가된 효능 및 감소된 부작용은 약물 제형의 치료 지수를 증가시켰고 암을 포함하는 다양한 질병의 성공적인 치료를 위한 기회를 제공하며, 또한 효능을 증가시키고 진단과 관련되는 부작용을 감소시킨다. 부작용 감소와 동시에 발생하는 약물 제형의 증가된 특이성은 더 많은 수 및 범위의 치료되어야 하는 환자에 치료적 이점을 보장해야만 하며, 따라서 생명을 보호 또는 연장시키고 치료가 필요한 환자의 삶의 질을 개선시킨다. 부작용 감소와 동시에 발생하는 표지된 화합물 제형의 증가된 특이성은 성공적으로 진단될 수 있는, 예를 들어, 진단 제형을 견딜 수 있고, 또한 진단의 정확성을 증가시킬 수 있는, 환자를 많이 증가시키고, 질병의 초기 진단에 대한 허용 및 질병의 심각함을 더 효과적으로 모니터링(예를 들어, 치료가 있거나 또는 없는 진행 또는 퇴화)하는 것을 포함한다.
본원에 기술된 조성물에서 지질-함유 조성물의 약학적 제형이 포함된다. 본원에 기술된 지질 함유 조성물은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 약물 및 표지된 화합물을 캡슐화한 리포좀을 포함하고 예를 들어, 암(예를 들어, 유방암, 위암, 직장암, 또는 결장암)을 포함하는 치료 또는 진단을 필요로 하는 질병 또는 다른 질환의 치료 또는 진단에 사용될 수 있다.
통상적인 항암제가 정맥주사로 투여될 때, 전신은 약물 비-선택성에 의해 노출되고 영향을 받는다. 그 결과, 많은 부작용이 발생하고, 암이 표적화 되지 않고/또는 순환 과정 동안 약물 효과는 상실될 수도 있다. 투여에 앞서 리포좀 조성물에서 약물의 캡슐화는, 정상 세포에서 약물의 부작용을 감소시키는 것, 약물이 불안정할 수도 있는 곳에서 약물이 표적 병변 세포에 도달할 때까지 보호하는 것, 약물이 병변 세포에 전달할 수 있도록 순환계에서 약물의 존재를 연장시키는 것, 및/또는 특정 표적 병변 세포에 약물의 전달을 용이하게 하는 것을 포함하는, 하나 이상의 이점을 야기할 수도 있다. 더 특이적인 약물의 표적 및 RES에서 흡수에 의한 약물의 손실 감소는 또한 투여되어야 하는 약물의 양을 감소시키며 그것에 의해 또한 치료의 비용을 감소시키고 본원에 기술된 다른 이점을 포함한다.
유사하게, 많은 표지된 화합물은 부작용을 가지고/또는 투여와 진단 사이의 시간에서 변질될 수도 있다(예를 들어, 진단 기술이 수행되는 시간-예를 들어, 방사성동위원소 검출, 자기 공명 화상법, 초음파 등.). 본원에 기술된 지질-함유 조성물에서 표지된 화합물의 포함은, 예를 들어, 검출의 경계가 표지된 화합물의 더 낮은 투여량에서 이루어질 수도 있고, 약제의 부작용을 감소시키고, 및/또는 진단에서 한정 시간대를 연장하는 것이 실행될 수 있는 것과 같은, 표지된 화합물의 효능을 증가시킨다.
지질-함유 조성물은 또한 표적 리간드로 변형된 지질(예를 들어, 표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리포좀-함유 조성물, 지질 혼합물) 또는 다른 유도체를 포함한다. 예를 들어, 표적 인자를 포함하는 리포좀의 조성물(예를 들어, 트랜스페린, 폴산염 등) 및 유도된 지질(예를 들어, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민)은 혈장에서 약물 순환 시간의 연장을 통해 그리고 종양 세포에서 표적 인자-특이적 수용체를 표적화함으로써 항암제(예를 들어, 옥살리플라틴 등)의 안정성 및 효능을 개선시키도록 개발되었다. 이것은 생물학적 이용가능성 및 종양-표적화를 개선하였고, 많은 약물과 관련된 부작용, 특히 대부분의 항암제와 관련된 심각한 부작용을 줄이는 반면 개선된 안정성 및 증가된 항종양 활성, 이것을 필요로 하는 환자에 대해 더 큰 효과적인 치료의 가능성을 야기하였다. 유사하게, 이러한 유도 및 표적 인자는 또한 표지된 화합물의 전달을 위해 표적 특정 부위(예를 들어, 기관, 조직 등)에 사용될 수도 있다.
본 발명은 또한 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 제공하며, 이것은 본원에 기술된 지질-함유 조성물 및 이들의 제형에서 사용될 수 있다.
본원에 기술된 바와 같은, 리포좀을 포함하는, 지질-함유 조성물은, 당업자에게 공지된 리포좀 제조를 위한 방법 뿐 아니라 본원에 기술된 방법에 의해 만들어질 수도 있고 본 명세서에서 제공되는 기술의 관점에서 적절하다. 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 본원에 기술된 리포좀 및 리포좀-함유 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 약학적 제형 및/또는 키트를 포함하는 약학적 제형 및/또는 키트에서 제한 없이 포함될 수 있으며, 추가적으로, 이는, 본 명세서에서 제공된 기술의 관점에서 당업자에게 자명하다. 유사하게 리포좀 및 리포좀-함유 조성물을 포함하는 리포좀 및 리포좀-함유 조성물 및 약학적 제형은 제한 없이 사용될 수도 있으며, 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 치료 또는 진단의 방법에서 본 명세서를 통하여 제공된 설명과 일치하고 본원에 기술된 기술을 고려하여 당업자의 실행과 일치한다.
약물(옥살리플라틴)을 포함하는 대표적인 표적 리포좀은 도 1에 개략적으로 표시한다. 제안된 흡입의 메커니즘 및 표적 리포좀의 활성 방법은 도 2 및 도 3에서 제공한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "표적 리포좀"은 일반적으로 적어도 하나 이상의 인지질(들), NωPE, TF-NωPE를 포함하는 성분을 갖는 리포좀을 의미하며, 또한 본원에 기술된 바와 같은 약물 또는 표지된 화합물을 포함한다. 명세서를 통하여 기술된 바와 같은 각각의 이들 성분은, 본원에 제공된 기술에 따르는 본 발명의 표적 리포좀으로 포함될 수 있다. 본원에 매우 상세히 기술된, 블랭크 리포좀은 또한 그것들이 TF-변형된 NωPEs를 포함할 수 있는 것에서 "표적화"될 수 있지만, 일반적으로 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않는다.
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민
본원에 기술된 지질-함유 조성물은 하기의 화학식 1에 따르는, 적어도 하나의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 포함하며:
(화학식 1)
상기식에서 R1과 R2는, 독립적으로, 아실기이고, m은 1 내지 10의 정수이다.
본원에 기술된 바와 같은, 용어 "N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민" 및 그것의 유사체는, 본원에서 제공된 바와 같은 화학식 1에 의해 포함되는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 의미한다. 유사하게 약어 NωPE은 화학식 1(예를 들어, Nω-DOPE, Nω-DSPE, NG- DOPE, 등)에 의해 포함되는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 의미하는데 사용되고, 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 예를 들어, NG-PE는 화학식 1의 N-글루타릴 포스파티딜 에탄올아민(들)을 의미한다.
본원에 기술된 지질-함유 조성물(표적 리포좀을 포함)에서 포함된 포스파티딜 에탄올아민(들)만은 하기에 상세히 기술되는 화학식 1의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 화학식 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 또는 화학식 3의 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민인 것으로 의도된다. 본원에 사용되는 바와 같은, 용어 "비-유도된 포스파티딜 에탄올아민" 및 이들의 유도체는, 포스파티딜 에탄올아민, 세미-합성 포스파티딜 에탄올아민(들), 합성 포스파티딜 에탄올아민(들) 및/또는 이들의 유도체를 의미하며 화학식 1, 화학식 2, 또는 화학식 3에 의해 포함되지 않는다.
R1 및 R2로 표시되는 아실기의 다양성은, 당업자에게 통상적으로 이해되는 바와 같은, 화학식 1에서 사용될 수도 있다.
일부 구체예에서, 아실기는 12-22개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 지방 카르복실산으로부터 유도된다. 대표적인 아실 기는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 라우르산, 트리데카논산, 미리스틴산, 펜타데카논산, 팔미트산, 마르가르산, 스테아르산, 노나데칸산, 아라킨산, 헨아이코산, 베헨산, 2-라우롤산, 5-라우롤산, 11-라우롤산, 5-미리스토일산, 미리스토일산, 2-팔미토일산, 7-팔미토일산, 시스-9-팔미토일산, 트랜스-9-팔미토일산, 페트로셀린산, 페트로셀리딘산, 올레산, 엘라이드산, 바센산, 곤돈산(gondoic acid), 트랜스-곤돈산, 에루신산, 리놀산, 리노엘라이드산, α-엘레오스테아르산, β-엘레오스테아르산, 리놀렌산, 수도엘레오스테아르산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 또는 도코사헥사엔산을 포함한다.
어떤 구체예에서, 아실기는 14-18 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 지방 카르복실산으로부터 유도된다. 이러한 형태의 대표적인 아실기는 이에 제한되는 것은 아니지만, 올레산(18 탄소), 팔미트산(16 탄소), 스테아르산(18 탄소), 또는 미리스트산(14 탄소)로부터 유도된 것을 포함한다. 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 대응하는 아실기는 각각, 올레오일, 팔미토일, 스테아로일, 및 미리스토일이다.
다른 구체예에서, 아실기는 14-18, 14-20, 14-22, 16-18, 16-20, 16-22, 18-20, 18-22, 12, 14, 16, 18, 20 또는 22 개의 탄소를 갖는 포화 또는 불포화 지방 카르복실산으로부터 유도된다. 어떤 구체예에서, 아실기는 짝수의 탄소를 갖는 포화 또는 불포화 지방 카르복실산으로부터 유도된다.
일부 구체예에서, 아실기는 올레산(올레오일), 스테아르산(스테아로일), 팔미트산(팔미토일), 리놀렌산(리놀레오일, 18탄소), 또는 미리스트산(미리스토일)으로 부터 유도된다. 다른 구체예에서, 아실기는 올레산(올레오일)로부터 유도된다. 어떤 구체예에서, 아실기는 스테아린산(스테아로일)로부터 유도된다. 또 다른 구체예에서, 아실기는 팔미트산(팔미토일)로부터 유도된다. 다른 구체예에서, 아실기는 미리스트산(미리스토일)로부터 유도된다.
일부 구체예에서, 아실기는 이에 제한되는 것은 아니지만, 팔미트산(16탄소), 스테아르산(18탄소), 또는 미리스트산(14탄소)와 같은, 포화 지방 카르복실산으로부터 유도된다.
다른 구체예에서, 아실기는 이에 제한되는 것은 아니지만, 올레산(올레오일, 18탄소), 리놀산(리놀레오일, 18탄소) 또는 리놀렌산(리놀렌오일, 18 탄소)와 같은 불포화 지방 카르복실산으로부터 유도된다. 일부 구체예에서, 아실기는 리놀렌산으로부터 유도된다.
어떤 구체예에서, m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다. 다른 구체예에서, m은 1-8, 1-6, 1-5, 1-7, 1-3, 1-2, 2-8, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-4, 3-5, 또는 3-6의 정수이다. 일부 구체예에서, m은 2-4의 정수이다. 다른 구체예에서, m은 1,2, 또는 3이다.
어떤 구체예에서, m은 1 내지 4의 정수이다. 당업자에게 통상적으로 인식되는 바와 같이, m=1은 포스파티딜 에탄올아민(PE)의 말론산 유도체에 대응하며, 한편, m= 2, 3, 또는 4는 PE의 숙신산, 글루타르산, 및 아디핀산 유도체를 각각, 나타낸다. 일부 구체예에서, m은 3(글루타르산)이다.
어떤 구체예에서, R1과 R2는 동일한 아실기이다. 다른 구체예에서, R1과 R2는 다른 아실기이다. 어떤 구체예에서, R1과 R2는 올레오일, 스테아로일, 팔미토일, 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R1과 R2는 올레오일이다. 다른 구체예에서, R1과 R2는 스테아로일이다. 특정 구체예에서, R1과 R2는 팔미토일이다. 다른 구체예에서, R1과 R2는 미리스토일이다.
일부 구체예에서, 화학식 1의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DOPE (즉, 여기서 R1과 R2는 올레오일이고 m은 3이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디스테아오일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DSPE (즉, 여기서 R1과 R2는 스테아로일이고 m은 3이다)). 다른 구체예에서, N-글루타릴-디미리스토일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DMPE (즉, 여기서 R1과 R2는 미리스토일이고 m은 3이다)). 다른 구체예에서, N-글루타릴-디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DPPE (즉, 여기서 R1과 R2는 팔미토일이고 m은 3이다))이다. 다른 구체예에서, N-숙신일-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(NS-DSPE (즉, 여기서 R1과 R2는 스테아로일이고 m은 2이다)). 다른 구체예에서, N-아디핀일-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(NA-DSPE (즉, 여기서 R1과 R2는 스테아로일이고 m은 4이다)). 어떤 구체예에서 화학식 1의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE 또는 NG-DSPE이다.
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 제조
본원에 기술된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 포스파티딜 에탄올아민의 아미노기에 디카르복실산을 결합함으로써 획득될 수 있다.
본원에 기술된 목적을 위해 사용되는 포스파티딜 에탄올아민 및 이들의 유도체를 포함하는 인지질은, 높은 순도이어야 하고, 완벽하게 균질해야만 한다. 높은 순도의 인지질을 제조하기 위해 공지된 방법은 완충액으로부터 지질의 추출 및 컬럼 크로마토그래피를 사용하는 정제를 포함한다. 예를 들어, N-숙시닐 디팔미토일포스파티딜에탄올아민의 제조 방법은 국제 특허 출원 공개번호 WO93/01828(JPAH7-501316) 및 미국 특허 번호 5,804,552 및 5,554,728에 기술되어 있고, 그것들 전체가 참고로써 본원에 포함된다. 이러한 생산 방법은 반응 혼합물의 실리카-겔 60 컬럼크로마토그래피에 의한 반응 혼합물로부터 포스파티딜 유도체의 정제를 포함한다. 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE)는 실온에서 질소 기체하에 16시간 동안 트리에틸아민 촉매를 갖는 숙신산 무수물로 반응된다.
N-(ω-카르복시)아실아미도-포스파티딜 에탄올아민 인지질 유도체의 다른 생산 방법은 일본 공개 특허 JP A 2001-261688에 기술되어 있으며, 반응 혼합물에 pH 3.5-7.5의 완충용액을 첨가한 후에 액체 층을 분리하는 것에 의한 정제를 포함하고, 그것 전체가 참고로써 본원에 포함되어 있다. 이 경우에, PE는 4℃에서 1시간 동안 트리에틸아민 알칼리 촉매를 갖는 디카르복실산 무수물과 반응된다. 이 방법은 모든 포스파티딜 에탄올아민에 대해 잘 작용하지 않을 수도 있다.
DOPE(디올레오일-포스파티딜 에탄올아민)는 또한 상업적으로 얻을 수 있고 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 간단히 말해서, 레시틴(API 출발 물질)은 화학적으로 가수분해되어 글리세롤-포스포-콜린을 발생시킬수 있고 침전에 의해 분리된다. 지질은 그 후 활성화된 올레산을 사용하여 알킬화되고, DOPC(디올레오일-포스파티딜 콜린)는 순상 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리되고 이온 교환 컬럼을 통해 통과하여 정제된다. DOPE는 포스포리파아제 D를 사용하는 에탄올아민과 반응함으로써 DOPC에 의해 제조될 수 있다.
N-(ω-카르복시)아실아미도-포스파티딜에탄올아민 인지질 유도체는 또한 기술된 바와 같은 방법, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,534,899으로 제조될 수 있으며, 그것 전체가 본원에 포함되어 있다. 간단히 말해서, 디카르복실산 무수물은 포스파티딜에탄올아민과 같은 인지질과 반응하여 디카르복실산-유도된 포스파티딜에탄올아민을 얻는다.
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르
본원에 기술된 바와 같은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 하기의 화학식 2로 표시되며:
(화학식 2)
상기식에서 R3과 R4는, 독립적으로, 아실기이고, n은 1 내지 10의 정수이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르" 및 그것의 유사체는 본원에 제공된 바와 같은, 화학식 2에 의해 포함되는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 의미한다. 유사하게 약어 SuccNωPE는 화학식 2에 의해 포함되는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(예를 들어, SuccNω-DOPE, SuccNω-DSPE, SuccNG-DOPE,등)를 언급하는데 사용될 수 있고, 예를 들어, NHS-NG-PE는 다른 방법으로 기술되지 않는다면, NHS와 반응함으로써 형성된 화학식 2의 N-글루타릴 포스파티딜 에탄올아민(들)의 숙신이미딜 에스테르를 의미한다.
당업자에게 잘 이해되는 바와 같이 그리고 R1과 R2에 대해 상기 기술된 바와 같이, R3과 R4에 의해 나타나는 아실기의 넓은 다양성이 사용될 수도 있다. 본원에서 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 화학식 1에 대한 아실기(예를 들어, R1 및 R2)의 본원에 제공된 설명이 화학식 2에 대한 아실기(예를 들어, R3 및 R4)에 동등하게 적용될 수 있음이 특별히 의도된다. 특히, 표제 "N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민" 부분에서 상기 설명을 포함한다.
어떤 구체예에서, R3과 R4는 동일한 아실기이다. 다른 구체예에서, R3과 R4는 다른 아실기이다. 어떤 구체예에서, R3과 R4는 올레오일, 스테아로일, 팔미토일, 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R3과 R4는 올레오일이다. 다른 구체예에서, R3과 R4는 스테아로일이다. 어떤 구체예에서, R3과 R4는 팔미토일이다. 다른 구체예에서, R3과 R4는 미리스토일이다.
어떤 구체예에서, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다. 다른 구체예에서, n은 1-8, 1-6, 1-5, 1-7, 1-3, 1-2, 2-8, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-4, 3-5, 또는 3-6로부터의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 2-4의 정수이다. 다른 구체예에서, n은 1, 2 또는 3이다.
어떤 구체예에서, n은 1 내지 4의 정수이다. 당업자에게 인식된 바와 같이, n=1은 포스파티딜 에탄올아민(PE)의 말론산 유도체에 대응하며, 한편, n= 2, 3, 또는 4는 각각 PE의 숙신산, 글루타르산, 및 아디핀산 유도체를 나타낸다. 일부 구체예에서, n은 3이다(글루타르산).
일부 구체예에서, 화학식 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DOPE)의 숙신이미딜 에스테르이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DSPE)의 숙신이미딜 에스테르이다. 어떤 구체예에서 화학식 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 NG-DOPE 또는 NG-DSPE의 숙신이미딜 에스테르이다.
일부 구체예에서, 화학식 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르이다(SuccNG-DOPE (즉, 여기서 R3과 R4는 올레오일이고 n은 3이다)). 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(SuccNG-DSPE (즉, 여기서 R3과 R4는 스테아로일이고 n은 3이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디미리스토일 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(SuccNG-DMPE (즉, 여기서 R3과 R4는 미리스토일이고 n은 3이다))이다. 다른 구체예에서, N-글루타릴-디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(SuccNG-DPPE (즉, 여기서 R3과 R4는 팔미토일이고 n은 3이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(SuccNS-DSPE (예를 들어, 여기서 R3과 R4는 스테아로일이고 n은 2이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-아디피닐-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(SuccNA-DSPE (즉, 여기서 R3과 R4는 스테아로일이고 n은 2이다))이다. 어떤 구체예에서 화학식 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNG-DOPE 또는 SuccNG-DSPE이다.
일부 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DOPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNω-DOPE이다. 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω- DSPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNω-DSPE이다. 또 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DOPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNω-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DSPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNω-DOPE이다. 어떤 이러한 구체예에서, 숙신이미딜 에스테르는 NHS일 수도 있다(예를 들어, NHS-Nω-DOPE, NHS-Nω-DSPE, 등).
일부 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE이고, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNG-DOPE이다. 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DSPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNG-DSPE이다. 또 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNG-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DSPE이고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 SuccNG-DOPE이다. 이들의 어떤 구체예에서, 숙신이미딜 에스테르는 NHS 일 수도 있다(예를 들어, NHS-NG-DOPE, NHS-NG-DSPE, 등).
N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 제조
본원에 기술된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 본원에 기술된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 유도체에 의해 획득될 수 있고, 당업계에서 공지되고 본원에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 제조는 또한 실시예를 포함하는 하기에서 더욱 상세하게 기술된다. 본 명세서에서 제공되는 기술의 관점에서, 당업자는 또한 본원에 기술된 방법을 변형시킬 수도 있을 것이다.
본 발명의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 제조 방법은 다음과 같다:
본원에 기술된 바와 같은 화학식 2로 표시되는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 1당량에 약 0.7-1.3 당량의 NHS가 첨가되었고, 활성 수소를 갖지 않는 유기 용매에서 용해되었다. 혼합물은 그 후 약 0.7-1.3 당량의 카르보디이미드 화합물과 0-50℃에서, 약 1-7일 동안 반응되었다.
활성 수소를 갖지 않는 대표적인 유기 용매는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 에스테르(예를 들어, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 등), 지방 탄화수소(예를 들어, 헥산, 헵탄, 등), 방향족 탄화수소(예를 들어, 톨루엔, 크실렌, 등), 할로겐화된 탄화수소(예를 들어, 클로로포름, 디클로로메탄, 디클로로에탄, 등), 에테르(예를 들어, THF, 디옥산, 디에틸 에테르, 등), 시클릭 탄화수소(예를 들어, 시클로헥산, 등), DMF 및 DMSO를 포함한다. 유기 용매는 또한 탈수화 될 수도 있다.
화합물이 카르보디이미드기(-N=C=N-)를 갖는 동안 카르보디이미드 화합물의 다양성이 사용될 수 있다. 예를 들어, 카르보디이미드 화합물은, 이에 제한되는 것은 아니지만, N,N'-디시클로헥실-카르보디이미드(DCC), N,N'-디이소프로필-카르보디이미드, N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드(EDC)등과 같은 카르보디이미드 기를 포함한다. 어떤 구체예에서, DCC가 사용된다. 다른 것에서 EDC가 사용된다.
상기-기술된 반응은 또한 부산물의 생산을 최소화하거나 제거하는 조건하에서 수행될 수도 있다. 원치않는 부산물은 우레아 화합물(예를 들어, N,N'-디시클로헥실우레아, N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)우레아, 등), N-아세틸 우레아 화합물, 카르복시무수물 화합물 및 5-옥사졸론 화합물을 포함한다. 부산물의 형성을 싫어하거나 최소화하는 조건 및 물질은 1) 유기 용매에서 카르보디이미드 화합물을 서서히 용해하고, 2) 반응 등에 의한 열 발생을 예방하기 위해 0℃ 이하에서 반응을 수행하는 것이다. 반응을 최적화하고 부산물의 생산을 최소화 하기 위한 다른 수단은 당업계에서 당업자에게 통상적인 기술, 특히 본원에 제공된 기술의 관점에서 이해될 것이다.
카르보디이미드 화합물을 용해시킬 수 있는 유기 용매는, 상기 기술된 활성 수소를 갖지 않는, 유기 용매와 같다. 활성 수소가 없는 카르보디이미드 및 유기 용매를 용해하는데 사용되는 용매는 동일할 수도 있고 다를 수도 있다.
반응의 진행은 얇은 막 크로마토그래피(TLC) 시스템, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 및/또는 증발 광 산란 검출기에 의해 모니터될 수 있다. 반응의 진행을 모니터링하기 위한 방법은 또한 당업자에게 공지될 것이다.
정제는 클로로포름 및 메탄올의 혼합물을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있다. 추가적인 정제 방법이 당업자에게 공지될 것이다.
완전히 탈수된 유기 용매 및 강한 산성 또는 강한 알칼리의 부존재에서, 본원에 기술된 바와 같은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 보통 안정하다.
표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민
표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하며, 여기서 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
(화학식 3)
,
상기식에서 R5와 R6는, 독립적으로, 아실기이고, p는 1 내지 10의 정수이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민" 및 그것의 유사체는 화학식 3에 의해 포함되는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 의미하며 본원에 제공된 바와 같은 표적 인자로 변형된다. 유사하게 약어 TF-NωPE는 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민(예를 들어, TF-Nω-DOPE, TF-Nω-DSPE, TF-NG-DOPE, 등)을 의미하고, 예를 들어, TF-NG-PE는 화학식 3의 N-글루타릴 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 의미한다.
R5와 R6으로 나타나는 아실기의 다양성은 당업자에게 통상적인 기술 및 R1과 R2에 대해 상기 기술된 바와 같은 것으로 이해된다. 본원에 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 화학식 1(예를 들어, R1과 R2)에 대하여 아실기의 본원에 제공된 설명은 화학식 3(예를 들어, R5와 R6)에 대한 아실기에 동등하게 적용될 수 있는 것으로 명백히 의도된다. 특히, 표제 "N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민" 부분에서 상기 기술을 포함한다.
어떤 구체예에서, R5와 R6는 동일한 아실기이다. 다른 구체예에서, R5와 R6는 다른 아실기이다. 어떤 구체예에서, R5와 R6는 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일이다. 일부 구체예에서, R5와 R6는 올레오일이다. 다른 구체예에서, R5와 R6는 스테아로일이다. 어떤 구체예에서, R5와 R6는 팔미토일이다. 다른 구체예에서, R5와 R6는 미리스토일이다.
어떤 구체예에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다. 다른 구체예에서, p는 1-8, 1-6, 1-5, 1-7, 1-3, 1-2, 2-8, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-4, 3-5, 또는 3-6의 정수이다. 일부 구체예에서, p는 2-4의 정수이다. 다른 구체예에서, p는 1, 2 또는 3이다.
어떤 구체예에서, p는 1 내지 4의 정수이다. 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, p=1은 포스파티딜 에탄올아민(PE)의 말론산 유도체에 대응하고, 한편 p=2, 3 또는 4는 각각 PE의 숙신산, 글루타르산, 및 아디핀산의 유도체를 나타낸다. 일부 구체예에서, p는 3이다(글루타르산).
일부 구체예에서, 화학식 3의 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 표적 인자-변형된 N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민(TF-NG-DOPE)이다. 다른 구체예에서, 그것은 표적 인자-변형된 N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(TF-NG-DSPE)이다. 어떤 구체예에서, 화학식 3의 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 TF-NG-DOPE 또는 TF-NG-DSPE이다.
일부 구체예에서, 화학식 3의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DOPE (즉, 여기서 R5와 R6는 올레오일이고 p는 3이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DSPE (즉, 여기서 R5와 R6는 스테아로일이고 p는 3이다)이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디미리스토일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DMPE (즉, 여기서 R5와 R6는 미리스토일일고 p는 3이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-글루타릴-디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(NG-DPPE (즉, 여기서 R5와 R6는 팔미토일이고 p는 3이다))이다. 다른 구체예에서, 그것은 N-숙신일-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(NS-DSPE (즉, 여기서 R5와 R6는 스테아로일이고 p는 2이다))이다. 다른 구체예에서, N-아디피닐-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(NA-DSPE (즉, 여기서 R5와 R6는 스테아로일이고 p는 4이다))이다. 어떤 구체예에서, 화학식 3의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE 또는 NG-DSPE이다.
어떤 구체예에서 표적 리간드는 트랜스페린(Tf)이며, 하기에 더 상세히 기술되고, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 본원에 기술된 바와 같은, 화학식 3의 트랜스페린-변형된 N(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 포함된다.
일부 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DOPE이고 표적 리간드는 트랜스페린(Tf)이고, 그리고 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Tf-Nω-DOPE이다. 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DSPE이고 표적 리간드는 트랜스페린(Tf)이고, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 Tf-Nω-DSPE이다. 또 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DOPE이고 표적 리간드는 트랜스페린(Tf)이고, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Tf-Nω-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Nω-DSPE이고 표적 리간드는 트랜스페린(Tf)이고, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 Tf-Nω-DOPE이다. 어떤 이들 구체예에서, m은 3일 수도 있고 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1에 따르는 NG-PE이다.
일부 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE이고 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 TF-NG-DOPE이다. 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DSPE이고, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 TF-NG-DSPE이다. 또 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE이고, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 TF-NG-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DSPE이고 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 TF-NG-DOPE이다.
표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 본원에서 더욱 상세하게 기술되는 바와 같은 표적 리간드 및 다른 반응물과 반응함으로써 SuccNωPE 로부터 제조될 수도 있다. TF-NωPE는 본원에 기술된 지질-함유 조성물의 다른 지질 성분를 갖는 혼합물에 앞서 제조될 수도 있고(그리고 선택적으로 정제됨) 또는 지질-함유 조성물에 포함되는 미리 제조된 SuccNωPE의 반응으로부터 제조될 수도 있다.
추가적인 지질 성분
본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물은 또한 본원에 기술된 NωPEs, SuccNωPEs 및/또는 TF-NωPEs에 더하여 하나 이상의 추가적인 지질 성분을 포함한다. 그러나, 추가적인 지질 성분의 다양성이 사용될 수 있으며, 용어 "추가적인 지질 성분(들)"은 비-의도된 포스파티딜 에탄올아민(PEs) 또는 화학식 1, 2 또는 3과 같은 PEs의 유도체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가적인 지질 성분은 인지질 또는 하나 이상의 인지질일 수도 있다. 어떤 구체예에서, 하나 이상의 추가적인 지질 성분은 적어도 두 개의 중성 지질을 포함할 수도 있다. 다른 구체예에서, 하나 이상의 인지질이 존재할 수도 있고, 선택적으로, "추가적인 지질"(이는 인지질은 아니다)일 수도 있다. 그러나, 중성 지질의 다양성이 사용될 수 있고, 적어도 두 개의 중성 지질은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민(PEs) 또는 화학식 1, 2, 또는 3에서와 같은 PEs의 유도체를 포함하는 것을 의도하지 않는다. 본원에 사용된 것과 같은 용어 "인지질"은 화학식 1, 2, 또는 3에서와 같은 PEs 또는 이들의 유도체를 포함하여야 한다. 유사하게, 용어 "추가적인 지질"은 화학식 1, 2, 또는 3에서와 같은 PEs 또는 이들의 유도체를 포함하는 것으로 의도되지 않으며 또는 다른 인지질을 포함하지 않는다.
특정 구체예에서, 인지질(들)은 본원에 기술된 지질-함유 조성물 및 제형에 사용될 수도 있다. 예를 들어, 하나 이상의, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4개의 인지질; 또는 2, 3, 또는 4개의 인지질. 특정 구체예에서, 하나의 인지질이 있다. 어떤 구체예에서 조성물의 지질 성분은 하나의 인지질, NωPE 및 SuccNωPE (또는 TF-변형된 NωPE, 여기서 표적 인자를 갖는 반응이 수행된다)로 제한된다.
특정 구체예에서, 두 개 이상의 중성 지질이 본원에 기술된 지질-함유 조성물 및 제형에 사용될 수도 있다. 예를 들어, 적어도 두 개, 적어도 세 개, 적어도 네 개의 중성 지질; 또는 2, 3, 또는 4 개의 중성 지질. 특정 구체예에서 2개의 중성 지질이 있다. 어떤 구체예에서 조성물의 지질 성분은 2개의 중성 지질, NωPE, 및 SuccNωPE(또는 TF-변형된 NωPE, 여기서 표적 인자를 갖는 반응이 수행된다)로 제한된다.
일부 구체예에서, 여기서 추가적인 지질 성분(들)은 인지질을 포함하며, 인지질은 포스파티딜콜린일 수도 있고, 자연적으로 발생하는, 반-합성 또는 합성 포스파티딜콜린(예를 들어, DSPC, DMPC 등)을 포함한다. 일부 구체예에서, 포스파티딜콜린은 비-자연적으로 발생하는 포스파티딜콜린(예를 들어, 난 포스파티딜콜린이 아님)이다. 특정 구체예에서, 포스파티딜콜린은 아실 포스파티딜콜린(예를 들어, DMPC, DPPC, POPC, DSPC, 등)이다. 일부 구체예에서, 인지질은 양이온이다. 다른 구체예에서 인지질은 음이온이다. 또 다른 구체예에서, 인지질은 중성이다. 다른 구체예에서, 하나 이상의 인지질(들)은 음이온이 아니다. 다른 구체예에서, 하나 이상의 인지질(들)은 양이온이 아니다. 어떤 구체예에서 하나 이상의 인지질이 존재하며, 음이온 및 중성 지질이 포함될 수도 있다. 대표적인 인지질은 이에 제한되는 것은 아니지만, 포스파티딜콜린(PCs), 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 등을 포함한다. 일부 구체예에서, 지질-함유 조성물은 포스파티딜세린 또는 포스파티딜글리세롤을 포함하지 않는다.
어떤 구체예에서, 적어도 두 개의 중성 지질의 적어도 하나는 인지질 일 수도 있다. 일부 구체예에서, 인지질은 포스파티딜콜린일 수도 있으며, 자연적으로 발생하는, 반-합성 또는 합성 포스파티딜콜린(예를 들어, DSPC, DMPC, 등)을 포함한다. 일부 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 비-자연적으로 발생하는 포스파티딜 콜린(예를 들어, 난 포스파티딜 콜린이 아님)이다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 아실 포스파티딜 콜린(예를 들어, DMPC, DPPC, POPC, DSPC, 등)이다.
일부 구체예에서, 적어도 두 개의 중성 지방의 적어도 하나는 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체(예를 들어, 콜레스테롤 풀루란, 양으로 대전된 콜레스테롤(예를 들어, DC-Chol))일 수도 있고, 방사성 동위원소의 부분(예를 들어, 3H, 14C, 125I, 131I, 등)을 포함하고, 기능 부분(예를 들어, 형광 부분 등)을 갖는다.
어떤 구체예에서, 여기서 지질-함유 조성물은 하나 이상의 인지질을 포함하며, 조성물은 추가적인 지질로서 추가적인 중성, 비-인지질을 추가적으로 포함할 수도 있다. 예를 들어, 상기 기술된 바와 같은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체.
본원에 기술되는 지질-함유 조성물에서 사용을 위한 인지질(비-PEs)은 합성, 반-합성 및 자연적으로 발생하는 인지질을 포함한다. 대표적인 인지질은 이에 제한되는 것은 아니지만, 포스파티딜콜린(PC), 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤 등을 포함한다. 다른 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린(PC) 또는 포스파티딘산을 포함하고 포스파티딜세린 또는 포스파티딜글리세롤을 포함하지 않는다.
일부 구체예에서, 인지질은 포스파티딜콜린이다. 어떤 구체예에서, 포스파티딜콜린은 예를 들어, 디스테아로일 포스파티딜 콜린(DSPC), 디미리스토일 포스파티딜콜린(DMPC), 디팔미토일 포스파티딜콜린(DPPC), 팔미토일 올레오일 포스파티딜콜린(POPC), 난 포스파티딜콜린(EPC), 수소화된 소야 포스파티딜콜린(HSPC), 등 일 수도 있다. 특정 구체예에서, 적어도 하나의 인지질은 포스파티딜콜린이다. 이들의 어떤 구체예에서, 포스파티딜콜린은 DMPC이다. 다른 구체예에서, 포스파티딜콜린은 DSPC이다. 다른 구체예에서, 포스파티딜콜린은 DPPC이다. 다른 구체예에서, 포스파티딜콜린은 POPC이다. 다른 구체예에서, 포스파티딜콜린은 EPC이다. 다른 구체예에서, 포스파티딜콜린은 HSPC이다. 일부 구체예에서, 하나의 인지질이 포함되며, DMPC, DSPC, DPPC, POPC, EPC 또는 HSPC이다. 특정 구체예에서 단일 인지질(비-PE 인지질)을 포함하는 지질-함유 조성물이 있고, 인지질은 DMPC이다. 다른 구체예에서 지질-함유 조성물은 단일 인지질(비-PE 인지질)을 포함하고, 인지질은 DSPC이다. 다른 구체예에서, 지질-함유 조성물은 단일 인지질(비-PE 인지질)을 포함하고, 인지질은 DPPC이다. 다른 구체예에서 지질-함유 조성물은 단일 인지질(비-PE 인지질)을 포함하고, 인지질은 POPC이다. 다른 구체예에서 지질-함유 조성물은 단일 인지질(비-PE 인지질)을 포함하며, 인지질은 EPC이다. 다른 구체예에서 지질-함유 조성물은 단일 인지질(비-PE 인지질)을 포함하고, 인지질은 HSPC이다.
어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 적어도 하나의 인지질 및, 선택적으로 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체와 같은 추가적인 지질을 포함할 수도 있다. 특정 구체예에서, 추가적인 지질 조성물(들)은 단일 인지질 및 콜레스테롤이다. 어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 적어도 하나의 포스파티딜콜린 및 콜레스테롤을 포함한다. 특정 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 단일 포스파티딜콜린 및 콜레스테롤을 포함한다. 어떤 구체예에서 콜레스테롤이 포함되며, 인지질은 DSPC, DMPC, DPPC, POPC, EPC 또는 HSPC이다. 일부 구체예에서, 추가적인 지질 조성물(들)은 콜레스테롤 및 DMPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DSPC를 포함한다. 어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DMPC 또는 DSPC 중의 하나이다. 어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DMPC이다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DSPC이다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DPPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 POPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 EPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 HSPC를 포함한다. 어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DMPC, DSPC, DPPC, POPC, EPC 또는 HSPC 중의 하나를 포함한다. 어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DMPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DSPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 DPPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 POPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 EPC를 포함한다. 다른 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 콜레스테롤 및 HSPC를 포함한다.
특정 구체예에서, 하나의 인지질이 있고 인지질은 HSPC 또는 EPC가 아니다.
특정 구체예에서, 하나 이상의 인지질이 있다. 어떤 구체예에서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜 콜린을 포함한다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 인지질 및 콜레스테롤(또는 콜레스테롤 유도체)이 포함된다. 어떤 구체예에서, 인지질은 포스파티딜 콜린이고 조성물은 추가적으로 콜레스테롤(또는 콜레스테롤 유도체)을 포함한다. 특정 구체예에서, 포스파티딜콜린은 포화 지방산(예를 들어, DMPC, DSPC 또는 DPPC) 부분을 포함하는 포스파티딜콜린이다. 어떤 구체예에서 포스파티딜콜린은 난 포스파티딜콜린이다. 특정 구체예에서, 포스파티딜콜린은 HSPC가 아니다.
특정 구체예에서, 두 개의 중성 지질이 있다. 일부 구체예에서, 두 개의 중성 지질은 콜레스테롤(또는 콜레스테롤 유도체) 및 포스파티딜 콜린이다. 특정 구체예에서, 포스파티딜콜린은 포화 지방산(예를 들어, DMPC, DSPC 또는 DPPC) 부분을 포함하는 포스파티딜콜린이다. 어떤 구체예에서 포스파티딜콜린은 난 포스파티딜콜린이 아니다.
본원에 기술된 바와 같은 추가적인 지질 성분(들)은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어 Avanti Polar Lipids, Inc. (Alabaster, AK), Northern Lipid Inc. (캐나다), Lipoid GmbH (독일), NOF Corporation (일본), Nippon Fine Chemical Co., Ltd (일본)를 포함하는 많은 제조업자로부터 상업적으로 이용가능하다.
약물
약물의 다양성은 본 발명의 지질-함유 조성물, 예를 들어, 화합물 또는 유전자에 포함될 수도 있다. 어떤 구체예에서, 약물은 항암제, 예를 들어, 리포좀에서 캡슐화를 위해 적당한 항암제일 수도 있다. 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물, 및 이들의 제형에 포함되는 약물의 양은 본원에 제공된 기술에 대해 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있고 선택된 약물 및 조성물 또는 제형을 위해 의도된 사용에 의존하며, 본원에서 추가적으로 기술되는 바와 같이, 약물과 치료되어야 하는 환자 모두에 특이적인 평가 요소를 획득한다.
어떤 구체예에서, 약물은, 예를 들어, 항암 특성을 갖는 서열에 대해 코딩하는 핵산인 핵산일 수도 있다. 예를 들어, 이에 제한 되는 것은 아니지만, 역배열의 올리고뉴클레오티드, 리보짐 등.
일부 구체예에서, 당업자 및 의료 종사자에게 공지된 것을 포함하는 항암제는 세포독성일 수 있다. 대표적인 항암제는 토포이소머라아제 I 억제제, 빈카 알칼로이드, 알킬화제(백금 화합물을 포함), 탁산 및 당업자에게 공지된 다른 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 항암 약물은 이에 제한 되는 것은 아니지만, 토포이소머라아제 I 억제제, 토포테칸, 이리노테칸 등일 수도 있다.
항암 약물은 또한 빈카 알칼로이드, 예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈류로신, 빈로디신, 빈오렐빈, 빈데신 등일 수도 있다.
추가적으로, 항암 약물은 또한 백금 화합물 일 수도 있다. 백금 화합물의 비-제한 예는 비플라틴, 시스플라틴, 카르보플라틴, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 제니플라틴, 엔로플라틴, 로바플라틴, 스피로플라틴 등을 포함한다.
옥살리플라틴(트랜스 1-1,2-디아미노시클로헥산 백금(II)시스-옥살라토 복합체)는 백금이며, 더 구체적으로는, 유기백금, 하기에 보여지는 화학식에 따라 표시되는 구조를 갖는 복합체이다. 옥살리플라틴은 또한 하기와 같이 알려져 있다: 디아미노시클로헥산 플라티늄, DACH-플라티늄, 및 시스-[(1R, 2R)-1,2-시클로헥산디아민-N,N'][옥살라토(2)-O,O']플라티늄(C8H14N2O4Pt; MW 397.4 g/mol). 앞서 언급된 바와 같이, 옥살리플라틴은 EloxatinTM에서 활성의 약학적 성분이다.
옥살리플라틴은 시스플라틴과 유사한 치료적 활성 및 상대적으로 낮은 신장독성 및 구토유발성(구토)을 갖기 때문에 항암제로서 유용하다. 옥살리플라틴에 대한 생산 과정은 당업계에서 공지되어 있다(예를 들어, JP-A-9-40685; 미국 특허 번호 4,169,846, 5,338,874; 5,959,133; 5,298,642; 및 5,290,961(이들 전체가 본원에 포함된 명세서임)). 옥살리플라틴은 Chaney SG et at. "Recognition and processing of cisplatin- and oxaliplatin- DNA adducts." Crit Rev Oncol Hematol. (2005) 53:3-11 (그것들 전체가 참고로서 본원에 포함됨)에서 추가적으로 기술된다.
어떤 구체예에서, 리포좀 내에 캡슐화된 옥살리플라틴 농도는 약 1mg/ml이며, 예를 들어, 약 0.8mg/ml이다.
일반적으로, 본 발명의 리포좀 조성물은 약 1 내지 약 50μg의 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 1 내지 약 150μg TF/mg 지질을 함유한다. 예를 들어, 약 10 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 10 내지 약 150μg TF/mg 지질.
어떤 구체예에서, 조성물은 약 1 내지 약 45μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 40μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 35μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 30μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 25μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 20μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 15μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 10μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1 내지 약 5μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 45μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 35μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 25μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 20μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 15μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5 내지 약 10μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 1μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 2μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 4μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 5μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 10μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 15μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 20μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 30μg 옥살리플라틴/mg 지질, 약 40μg 옥살리플라틴/mg 지질, 또는 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질을 함유한다.
어떤 구체예에서, 조성물은 약 1 내지 약 145μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 120μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 115μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 100μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 90μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 70μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 60μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 50μg TF/mg 지질, 약 1 내지 약 25μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 150μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 140μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 125μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 100μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 80μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 50μg TF/mg 지질, 약 10 내지 약 25μg TF/mg 지질, 약 1μg TF/mg 지질, 약 5μg TF/mg 지질, 약 10μg TF/mg 지질, 약 25μg TF/mg 지질, 약 40μg TF/mg 지질, 약 50μg TF/mg 지질, 약 70μg TF/mg 지질, 약 100μg TF/mg 지질, 약 120μg TF/mg 지질, 약 140μg TF/mg 지질 또는 약 150μg TF/mg 지질을 함유한다.
일부 구체예에서, 약 0.5 내지 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 1 내지 약 150μg TF/mg 지질. 일부 구체예에서, 약 5 내지 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 10 내지 100μg/mg. 어떤 구체예에서, 약 2 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 3 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 4 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 2 내지 약 40μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 3 내지 약 40μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 4 내지 약 40μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 2 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 10 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 3 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 10 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 4 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 10 내지 약 150μg TF/mg 지질; 약 5 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 100μg TF/mg 지질; 약 5 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 100μg TF/mg 지질; 또는 약 0.5 내지 약 50μg 옥살리플라틴/mg 지질 및 약 5 내지 약 100μg TF/mg 지질.
어떤 구체예에서, 리포좀 제형 내 옥살리플라틴 농도는 0.8 +/- 10%mg/ml이다.
어떤 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고, 옥살리플라틴은 용액에서 용해될 수도 있다(예를 들어, 수성 용액). 일부 구체예에서, 용액은 당(예를 들어, 트레할로오스, 말토오스, 수크로오스, 락토오스, 만노오스, 만니톨, 글리세롤, 덱스트로오스, 프룩토오스 등)을 포함한다. 당의 농도는 여러 가지의 백분율에 있을 수도 있다. 예를 들어 약 0.1-12%; 0.5-12%, 1%-12%, 2%-8%, 2%-6%, 2%-5%, 2%-4%, 2%-5%, 2%-6%, 2%-8%, 2%-9%, 2%-10%, 4%-10%, 4%-9%, 4%-8%, 4%-6%, 3%-4%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9% 또는 약 10%의 당 농도(v/v). 어떤 구체예에서 용액은 당을 포함하며 수성이다. 옥살리플라틴이 용해된 용액은 또한 당업자에게 공지된 것을 포함하는, 추가적인 성분을 함유할 수 있는 것으로 의도된다.
어떤 구체예에서, 당 농도는 약 5%, 약 7%, 약 8%, 약 9% 또는 약 10%이다. 다른 구체예에서, 당 농도는 약 5% 내지 약 10%이다. 일부 구체예에서, 당은 덱스트로오스이고 옥살리플라틴 용액 내 덱스트로오스의 농도는 약 5%이다. 일부 구체예에서, 당은 덱스트로오스이고, 옥살리플라틴 용액 내 덱스트로오스의 농도는 약 9%이다. 어떤 구체예에서, 당은 수크로오스이고, 옥살리플라틴 용액 내 수크로오스의 농도는 약 9%이다. 어떤 구체예에서, 당은 수크로오스이고, 옥살리플라틴 용액 내 수크로오스의 농도는 약 10%이다.
일부 구체예에서, 용액 내 당의 농도는 예를 들어, 약 50mg/ml 내지 약 150mg/ml, 약 50mg/ml 내지 약 130mg/ml, 약 50mg/ml 내지 약 120mg/ml, 약 50mg/ml 내지 약 100mg/ml, 약 80mg/ml 내지 약 100mg/ml, 약 90mg/ml 내지 약 150mg/ml, 약 90mg/ml 내지 약 130mg/ml, 약 60mg/ml, 약 80mg/ml, 약 90mg/ml, 약 100mg/ml, 약 110mg/ml, 약 105mg/ml, 약 120mg/ml, 약 140mg/ml일 수도 있다.
용액은 또한 이에 제한 되는 것은 아니지만, 염, 완충액, 당 알코올 등과 같은 당업자에게 공지된 다른 성분을 함유할 수도 있다. 어떤 구체예에서, 용해된 옥살리플라틴에서 용액은 인산 나트륨(예를 들어, 1염기 및/또는 2염기 인산 나트륨)을 함유한다.
어떤 구체예에서, 인산 나트륨의 농도는 약 5 내지 약 15mM일 수도 있다. 예를 들어, 약 5 내지 약 12mM, 약 5 내지 약 10mM, 약 5 내지 약 7mM, 약 7 내지 약 12mM, 약 7 내지 약 15mM, 약 9 내지 약 12mM, 약 5mM, 약 7mM, 약 10mM, 약 12mM 또는 약 15mM일 수도 있다.
어떤 구체예에서, 당 용액은 약 1.0 내지 약 1.5mg/ml 인산 나트륨을 추가적으로 포함할 수도 있다. 예를 들어, 약 1.2 내지 약 1.5mg/ml, 약 1.0 내지 약 1.7mg/ml, 약 1.0 내지 약 2mg/ml, 약 1.0 내지 약 2.5mg/ml, 약 1.0 내지 약 3mg/ml, 약 0.5 내지 약 3.5mg/ml 인산 나트륨.
일부 구체예에서, 용액 pH는 약 6.5 내지 약 7.5, 약 6.7 내지 약 7.5, 약 7 내지 약 7.5, 약 7, 약 7.5, 약 6.8, 또는 약 6.5일 것이다.
일부 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고, 약 9%의 수크로오스의 용액에 함유된다. 일부 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고, 약 1mg/ml의 옥살리플라틴 농도에서 약 9%의 용액에 함유된다. 일부 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고, 약 105mg/ml의 수크로오스 용액에 함유된다. 일부 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고 약 1mg/ml의 리포좀 용액 내 옥살리플라틴 농도에서 약 105mg/ml의 수크로오스 용액에 함유된다. 어떤 이들 구체예에서, 용액은 인산 나트륨을 추가적으로 함유한다. 어떤 구체예에서, 옥살리플라틴은 약 0.8 +/- 10%mg/ml의 리포좀 용액의 농도에 있다.
표지된 화합물
표지된 화합물의 다양성은 또한 본 발명의 지질-함유 조성물에 포함될 수도 있다. 일반적으로, 표지된 화합물은 생체내 진단 과정을 수행하는데 유용한 약제일 수도 있다.
본원에 기술된 바와 같은 약물의 포함 및 사용에서와 같이, 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물, 및 이들의 제형에 포함되는 표지 화합물의 양은 본원에 제공된 기술에 관한 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있고 선택된 표지된 화합물 및 조성물 또는 제형을 위해 의도된 사용에 의존하며, 본원에서 추가적으로 기술되는 바와 같이, 표지된 화합물과 진단되어야 하는 환자 모두에 특이적인 평가 인자를 획득한다.
대표적인 표지된 화합물은, 예를 들어, 방사성 동위원소(예를 들어, 3H, 14C, 67Ga, 111In, 125I, 131I, 133Xe, 등)를 포함하는 물질, 형광부분(예를 들어, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트 등)을 포함하는 물질, 효소(예를 들어, 퍼옥시다아제, 알칼린 포소하타아제(alkaline phosohatase) 등) 포함 물질 뿐 아니라 당업자에게 공지된 표지된 화합물을 포함한다.
당업자에 의해 평가될, 표지된 화합물의 선택 및 진단에 사용된 방법은 조사된 기관(예를 들어, 간, 췌장, 전립선 등), 조직(예를 들어, 악성 또는 비악성 또는 조직 형태(예를 들어, 유방 등))에 의존할 것이다. 예를 들어, 125I를 포함하는 지질-함유 조성물(예를 들어, 표적 리포좀, 리포좀-함유 조성물 등)은 감마선 계측기에 의해 다양한 암(예를 들어, 유방암, 위암, 직장암, 결장암 등)의 존재를 확인하고 심각성을 결정하는데(예를 들어, 치료의 시작, 치료 과정 동안, 치료 후) 특히 유용하다.
표적 인자
다른 방법으로 기술되지 않는다면, 용어 "표적 인자" 및 "표적 리간드"는 본원에서 교대로 사용될 수도 있다.
본원에 사용된 지질-함유 조성물은 특정 표적 세포와 연관된 표적 인자(즉, TF-NωPE)로 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 포함하는 특징을 갖는다. 용어 "표적 인자"는 표적 세포의 표면에 존재하는 수용체 또는 표면 항원에 결합될 수 있는 부분을 의미한다. 어떤 구체예에서, 표적 인자는 특정 표적 세포 상 세포 표면 수용체에 관련되어있다. 표적 인자는 종종 지질-함유 조성물의 지질 성분에 부착될 수 있는 단백질 또는 펩티드이다.
가장 효과적으로는, 표적 인자는 약물 또는 표지된 화합물의 전달을 위한 표적화된 세포(예를 들어, 병원성 세포)에서만 존재하는 표적 수용체 또는 항원에서 선택되고 그리고 건강한 세포에서는 존재하지 않는다. 또 다르게는, 많은 수의 수용체 또는 항원은 비표적화된(예를 들어, 건강한) 세포와 비교하여 표적 세포(예를 들어, 병원성 또는 질환 세포)에서 발현된다. 바람직하게는, 표적 인자가 결합된 수용체 또는 항원은 빈번히 발생하지 않는 표적 세포를 갖는 결합과 같은 건강 세포에서 존재하지 않거나 적은 수로 존재한다. 다시 말해서, 표적 인자는 표적 세포(예를 들어, 병원성, 병든, 등)에 본원에 기술된 바와 같이 리포좀을 선택적으로 전달하는 것이 필요하다. 표적 세포에 캡슐화된 약물의 선택적인 전달은 비표적 세포 상에서 캡슐화된 약물 또는 표지 화합물의 효과에 기인하는 부작용의 발생을 감소시키며, 그 때문에 또한 조성물 또는 이들의 제형이 환자에 투여됨으로써 감소하는 부작용이 경험된다.
대표적인 표적 세포는, 이에 제한 되는 것은 아니지만, 트랜스페린, 폴산, 폴산염, 히알루론산, 당 사슬(예를 들어, 갈락토오스, 만노오스 등), 모노클로널 항체의 단편, 알시알로클리코단백질 등 뿐 아니라 당업자에게 공지된 다른 표적 인자를 포함한다.
특정 구체예에서, 표적 인자는 세포 표면 수용체(예를 들어, 트랜스페린, 폴산염, 폴산, 아시알로글리코단백질 등)과 연관된 단백질 또는 펩티드이다.
다른 구체예에서, 표적 인자는 항원(예를 들어 모노클로널 항체의 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fc 등))과 관련되어 있다. 완전한 또는 전체 모노클로널 항체를 포함하는 표적 인자는 의도되지 않는다. 본원에 사용된 용어 "전체 항체" 또는 "완전한 항체" 및 이들의 유사체는 일반적으로 항체 IgG의 면역 글로불린을 의미한다. 모노클로널 항체의 단편, 예를 들어, 펩신 등과 같은 프로테아제 소화를 사용함으로써 획득된 단편은 일반적으로 모노클로널 항체의 분해 산물을 의미한다.
어떤 구체예에서, 표적 인자는 항체(예를 들어, 모노클로널 항체의 단편, 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fc, 등이 아님)와 관련되지 않는다.
어떤 구체예에서, 표적 인자는 트랜스페린이다.
트랜스페린(Tf)은 80,000의 분자량을 갖는 철 결합 단백질이며, 간세포에서 합성되고 혈액에서 발견된다. 트랜스페린은 각 세포의 표면에 Tf 수용체를 통한 세포에 철(Fe)를 공급한다. 트랜스페린 수용체는 종양 형태와 상관없이 정상 조직과 비교하여 더 많은 양의 종양 조직에서 일반적으로 발현된다. 종양 세포 세포막은 트랜스페린 수용체가 세포 증식을 유지하기 위해 과발현하는 것으로 알려져 있다. Shindelman JE, Ortmeyer AE, Sussman HH. "Demonstration of the transferrin receptor in human breast cancer tissue. Potential marker for identifying dividing cells." Int J Cancer. (1981) 27(3):329-34; Lloyd JM, O'Dowd T, Driver M, Tee DE. "Demonstration of an epitope of the transferrin receptor in human cervical epithelium- a potentially useful cell marker." J Clin Pathol. (1984) 37(2):131-5; 및 Habeshaw JA, Lister TA, Stansfeld AG, Greaves MF. "Correlation of transferrin receptor expression with histological class and outcome in non- Hodgl[upsilon]n lymphoma." Lancet. (1983) 1(8323): 498-501 참조. 트랜스페린에 치료제의 결합은 트랜스페린 수용체를 통해 종양 세포로의 약물의 흡수를 향상시킬 것이다. 작용 메커니즘에 제한되지 않는 한편, 본원에 기술된 바와 같은 트랜스페린 리포좀의 가능한 흡수 경로는 도 2 및 3에서 개략적으로 표시된다. 트랜스페린은 상업적으로 이용가능하고 또는 예를 들어, 미국 특허 번호 5,026,651 에 기술된 바와 같이, 재조합적으로 생산될 수 있고, 그것 전체가 참고로서 본원에 포함된다.
이론으로 속박되지 않는 동안에, NωPE에 트랜스페린(Tf)의 결합은 NωPE을 갖는 일차 아민의 반응에 의해 일어나며 지질 고정과 단백질 사이의 카르복실산 아미드 결합의 형성을 야기한다.
어떤 구체예에서, 표적 리포좀 생산물에서 존재하는 전체 지질에 대한 Tf의 몰농도 비는 대략 0.00014:1 mol/mol (Tf:전체 지질) (0.015, wt/wt)이다. 다른 구체예에서, Tf:전체 지질의 몰농도 비는 약 0.016 내지 약 0.029:약 126내지 약 158 mM/mM.
지질-함유 조성물
본원에 기술된 지질-함유 조성물은 유도된 지질, 추가적인 지질을 포함하는 표적 리포좀 및 캡슐화된 약물 또는 표지된 약물 뿐 아니라 표적 리포좀을 제조하는데 사용되는 중간체를 포함하며, 본원에 기술된 바와 같은 지질 혼합물 및 리포좀-함유 조성물을 포함하고, 여기서 지질-함유 조성물(표적 리포좀을 포함)은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 이에 제한되는 것은 아니지만, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 지질-함유 조성물은 또한 Tf를 포함하는 리포좀을 포함하지만, 약물 또는 표지된 화합물(예를 들어, 블랭크 리포좀)을 포함하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "친수성 중합체" 및 이것의 유사체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 폴리머를 의미하며 다른 폴리에톡시화된 중합체는 리포좀의 순환 반감기를 향상시키기 위한 시도에서 리포좀을 막기 위한 리포좀 분야에서 사용된다. 이 용어는 친수성 중합체 뿐 아니라 리포좀을 갖는 비-공유적으로 연결된 친수성 중합체를 포함하며 어떤 방법에서 리포좀(예를 들어, PEG-변형된 지질, 등)의 특정 성분에 결합 또는 공유적으로 결합되는 것이 의도된다. 이러한 친수성 중합체는 또한 다르게는 이 분야에서 "수용성" 중합체로서 언급된다. 추가적인 친수성 중합체는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 폴리비닐 알코올, 폴리아세트산, 폴리글리콜 산, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴아미드, 폴리글리세롤, 폴리옥사졸린 등을 포함한다.
본원에 기술된 바와 같은, 용어 "지질 혼합물" 및 이들의 유사체는 본원에 기술된 바와 같은 지질 성분의 혼합물을 의미하며, 여기서 지질 혼합물은 용액, 예를 들어, 수성 용액(예를 들어, 물, 완충액 또는 물 및 물과 혼화 가능한 용매의 혼합물(예를 들어, 당(예를 들어, 트레할로오스, 수크로오스, 락토오스, 만노오스, 덱스트로오스, 프룩토오스 등), 당 알코올(예를 들어, 트레할로오스, 수크로오스, 락토오스, 만노오스, 덱스트로오스, 프룩토오스, 등), 당 알코올(예를 들어, 소르비톨, 말티톨, 락티톨, 글리세롤, 만니톨, 등), 알코올(예를 들어, 에탄올, t-부탄올, 등) 등)) 또는 유기 용매를 포함하지 않는다.
용어 "리포좀-함유 조성물" 및 이것의 유사체는 지질의 혼합물 및 선택적으로, 약물(들) 또는 표지된 약물을 의미하며, 수성 용액에서(예를 들어, 물, 완충액예를 들어, 아세트산염 완충액, 인산염 완충액, 시트르산염 완충액, 보론산염 완충액, 타르타르산염 완충액, 등) 또는 물 및 물과 혼화 가능한 용매의 혼합물) 혼합(예를 들어, 한 번 이상의 교반, 진탕 등)에 의해 포함된다. 수성 용액은 또한 하나 이상의 당(예를 들어, 트레할로오스, 말토오스, 수크로오스, 락토오스, 만노오스, 덱스트로오스, 프룩토오스 등), 당 알코올(예를 들어, 소르비톨, 말티톨, 락티톨, 만니톨, 글리세롤 등), 알코올(예를 들어, 에탄올, t-부탄올, 등)등과 같은 추가적인 성분을 포함할 수도 있다. 그리고 수성 용액은 또한 유기 용매((예를 들어, 에스테르(예를 들어, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트 등), 지방 탄화수소(예를 들어, 헥산, 헵탄, 등), 방향족 탄화수소(예를 들어, 톨루엔, 크실렌, 등), 할로겐화된 탄화수소(예를 들어, 클로로포름, 디클로로메탄, 디클로로에탄 등), 에테르(예를 들어, THF, 디옥산, 디에틸 에스테르, 이소프로필 에테르, 등), 시클릭 탄화수소(예를 들어, 시클로헥산 등), DMF, DMSO, 등) 또는 이들의 혼합물)을 포함할 수도 있다. 리포좀-함유 조성물은 지질의 비-균질성 혼합물, 수성 용액을 일반적으로 함유할 것이고, 리포좀은 100-10,000nm 및 평균 직경 500-2,000nm의 편평한 분산을 갖는다. 대표적인 리포좀-함유 조성물의 특징은 실시예에서 추가적으로 제공된다.
어떤 구체예에서, 지질-함유 조성물은 친수성 중합체를 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 지질-함유 조성물은 PEG를 포함하지 않는다.
일부 구체예에서, 중간체 지질 혼합물은 적어도 두 개의 다른 중성 지질 또는 하나 이상의 인지질, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 포함하며, 여기서 지질 성분은 본원에서 더 상세히 기술되고 여기서 혼합물은 비-유도된 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 선택적으로, 본원에 기술된 바와 같은 수성 용액은 지질 성분과 혼합되어 리포좀-함유 조성물을 형성할 수도 있다. 어떤 구체예에서, 지질 혼합물은 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 지질-혼합물은 리포좀-함유 조성물 또는 리포좀 제형을 형성하기 위해 처리될 수도 있다.
일부 구체예에서, 중간체 지질 혼합물은 적어도 두 개의 다른 중성 지질 또는 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 약물 또는 표지된 약물을 포함하며, 여기서 지질 성분 및 약물/표지된 화합물은 본원에서 더 상세히 기술되고 여기서 혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 선택적으로, 본원에 기술된 바와 같은 수성 용액은 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위해 지질 성분과 혼합될 수도 있으며, 예를 들어, 약물 또는 표지된 화합물은 약물/표지된 화합물의 수성용액으로서 첨가된다. 어떤 구체예에서, 리포좀-함유 조성물은 리포좀을 형성하기 위해 처리될 수 있다(예를 들어, 한 번 이상의 압출성형, 크기 배제 크로마토그래피 등, 또는 당업계에서 공지된 방법).
일부 구체예에서, 지질 혼합물은 하나 이상의 인지질 또는 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 포함하며, 여기서 지질 성분은 본원에서 더욱 상세히 기술되며 여기서 혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 혼합물은 또한 실질적으로 비-NHS 출발 물질, 부산물 및/또는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC, 등), 아실화된 우레아 화합물, 등)의 합성과 관련된 분해산물이 없을 수도 있다. 선택적으로, 본원에 기술된 바와 같은 수성 용액은 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위해 지질 조성물과 혼합될 수도 있다.
일부 구체예에서, 중간체 지질 혼합물은 하나 이상의 인지질 또는 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 포함하며, 여기서 지질 성분은 본원에 더욱 상세히 기술되어 있고 여기서 혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 폴리머가 없다. 혼합물은 또한 실질적으로 비-NHS 출발 물질, 부산물 및/또는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 분해 산물(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC 등), 아실화된 우레아 화합물, 등) 일 수도 있다. 선택적으로, 본원에 기술된 바와 같은 수성 용액은 지질-함유 조성물을 형성하기 위해 지질 조성물과 혼합될 수도 있다. 일부 구체예에서, 지질 혼합물은 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않는다. 지질 혼합물은 리포좀-함유 조성물 또는 리포좀 제형을 형성하도록 처리될 수도 있다.
일부 구체예에서, 중간체 지질 혼합물은 하나 이상의 인지질 또는 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 및 약물 또는 표지된 화합물을 포함할 수도 있으며, 여기서 지질 및 약물/표지된 화합물 조성은 본원에서 더욱 상세히 기술되고 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴레에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 혼합물은 또한 실질적으로 비-NHS 출발 물질, 부산물 및/또는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 분해 산물(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC 등), 아실화된 우레아 화합물, 등)일 수도 있다. 선택적으로, 본원에 기술된 바와 같은 수성 용액은 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위해 지질 성분과 혼합될 수도 있다.
어떤 구체예에서, 중간체 지질-함유 조성물은 하나 이상의 인지질 또는 적어도 두 개의 다른 중성 지방, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 및 캡슐화된 약물을 포함하며, 여기서 지질 및 약물 조성물은 본원에서 더욱 상세히 기술되고 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 폴리머가 없다. 리포좀은 또한 실질적으로 비-NHS 출발 물질, 부산물 및/또는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 분해 산물(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC 등), 아실화된 우레아 화합물 등)이 없을 수도 있다. 일부 구체예에서, 지질 혼합물은 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않는다. 지질 혼합물은 리포좀 함유 조성물 또는 리포좀 제형을 형성하기 위해 처리될 수도 있다.
어떤 구체예에서, 지질 혼합물은 하나 이상의 인지질 또는 적어도 두 개의 다른 중성 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적-인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 약물 또는 표지환된 화합물을 포함하며, 여기서 지질, 표적 인자 및 약물/표지된 화합물 성분은 본원에서 더욱 상세히 기술되며 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친핵성 중합체가 없다. 지질 혼합물의 일부 구체예에서, 리포좀은 실질적으로 비-NHS 출발 물질, 부산물, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 분해 산물(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC 등), 아실화된 우레아 화합물 등)이 없다. 특정 구체예에서, 지질 혼합물은 리포좀-함유 조성물(예를 들어, 약물 또는 표지된 화합물은 수성 용액으로서 첨가된다). 선택적으로, 본원에 기술된 수성 용액은 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위해 지질 성분으로 혼합될 수도 있다.
어떤 구체예에서, 표적 리포좀은 하나 이상의 인지질 또는 적어도 두 개의 다른 중성 지질을 함유하는 리포좀, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물을 포함하며, 여기서 지질, 표적 인자 및 약물 또는 표지된 화합물 성분은 본원에서 더욱 상세하게 기술되고 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 표적 리포좀의 일부 구체예에서, 리포좀은 실질적으로 비-NHS 출발 물질, 부산물 또는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 분해 산물(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC 등), 아실화된 우레아 화합물, 등)이 없다. 그러나, 일부 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 표적 리포좀의 초기 단계(예를 들어, NHS-NG-PEs(예를 들어, NHS-NG-DOPE, NHS-NG-DSPE, 등), 예를 들어, 숙신이미딜 에스테르의 가수분해에 앞서 존재할 수도 있으며, 최종 제형에서 예를 들어, NHS 및 NG-DOPE를 얻을 수도 있다. 어떤 구체예에서, SuccNωPE는 리포좀의 내부로 포함되지 않고, TF-NωPE가 미리 형성되고 출발 물질로서 사용될 때 리포좀 또는 리포좀-함유 조성물은 또한 NHS가 없거나 또는 실질적으로 없을 수 있다. 특정 구체예에서, 표적 리포좀은 실질적으로 DCC 및 EDC가 없다. 어떤 구체예에서, 표적 리포좀은 실질적으로 DCC가 없다.
추가적으로, 본원에 기술된 바와 같은 각각의 리포좀-함유 조성물은 리포좀을 제조하기 위해 처리될 수 있다. 리포좀의 제조는 당업계에 공지되어 있고, 추가적으로 본원에 기술된 방법, 예를 들어, 하기에 더욱 상세하게 기술되는 제조 방법 A 및 B에 대해 기술되는 바와 같이 수행될 수 있다. 리포좀-함유 조성물로부터 리포좀에 대한 제조 방법은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 압출성형, 초음파처리, 역상 소포, 동결융해, 크기 배제 크로마토그래피, 한외여과 등, 및 이들의 조합을 포함한다. 본원에 기술된 리포좀-함유 조성물로부터 형성된 리포좀은 약물 또는 표지된 약물을 포함할 수도 있고 또는 약물 또는 표지된 약물이 없을 수도 있다(예를 들어, 본원에서 또한 "블랭크 리포좀"으로서 언급되는 리포좀). 특정 구체예에서, 리포좀-함유 조성물, 리포좀(블랭크 리포좀을 포함) 및 표적 화합물은 약학 제형으로서 제형화될 수도 있고, 추가적으로, 치료 또는 진단 방법 및/또는 본원에 기술된 키트에서 사용될 수도 있다.
용어 "실질적으로 없는"은 이 분야에서 사용되는 통상의 분석 방법에 의해 검출될 수 없는 또는 최소한으로 검출되는 수준을 의미한다. 예를 들어, 당업자에게 공지된 다른 분석 방법 뿐만 아니라 HPLC(예를 들어, European Phmaracopoeia 5th Ed. 참조), TLC, 기체 크로마토그래피 등 .
예를 들어, 지질-함유 조성물은 전체 지질 함량에 대한 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 특정 출발 물질, 부산물 또는 분해 산물의 중량으로 약 0.1%보다 적게, 약 0.5%보다 적게, 약 1%보다 적게, 약 2%보다 적게, 약 3%보다 적게, 약 4%보다 적게, 약 5%보다 적게 또는 약 6%보다 적게 함유할 수도 있다. 특정 구체예에서, 조성물은 약 10%보다 적게, 약 7%보다 적게, 약 5%보다 적게, 약 3%보다 적게, 약 2%보다 적게 또는 약 1%보다 적게 전체 불순물(예를 들어, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르의 합성과 관련된 출발 물질, 부산물 및 분해 산물의 % 합계)을 함유할 것이다.
일부 구체예에서, 표적 리포좀은 리포좀 함유 포스파티딜콜린(예를 들어, 중성, 음이온 또는 양이온), 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물을 포함하고, 여기서, 지질, 표적 인자 및 약물 성분은 본원에 더욱 상세하게 기재되며 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 중성 포스파티딜 콜린이다.
특정 구체예에서, 표적 리포좀은 포스파티딜 콜린(예를 들어, 중성, 음이온 또는 양이온), 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물을 포함하며, 여기서 지질 성분 및 약물 또는 표지된 화합물은 본원에서 더욱 상세하게 기재되고 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 중성 포스파티딜 콜린이다.
특정 구체예에서, 표적 리포좀은 포스파티딜 콜린(예를 들어, 중성, 음이온 또는 양이온), 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체를 함유하는 리포좀, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 캡슐화된 옥살리플라틴을 포함하고, 여기서 지질 성분은 본원에서 더욱 상세하게 기술되고 여기서 리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 중합체가 없다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 중성 포스파티딜 콜린이다.
어떤 구체예에서, 본원에 기술된 지질-함유 조성물(표적 리포좀 및 블랭크 리포좀), 및 이것의 제형은 유도 포스파티딜글리세롤, 스핑고신, 세라마이드, 콜레스테롤 유도체 또는 디카르복실산 유사체를 추가적으로 함유할 수도 있다. 이러한 디카르복실산-유도체는 본원에 기술된 바와 같이 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 당업자에게 공지된 제조 방법에 따라 제조될 수도 있다.
일부 구체예에서, 본원에 기술된 지질-함유 조성물(표적 리포좀 및 블랭크 리포좀을 포함), 및 이것의 제형은 음이온 지질(예를 들어, 포스파티딜세린, 포스파티딜인시토솔, 포스파티딜글리세롤 등) 또는 양이온 지질(예를 들어, 스핑고신, DOTAP, DOTMA, DC-CHOL, 등)을 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 조성물은 음이온 지질이 없다. 다른 구체예에서, 조성물은 양이온 지질이 없다. 어떤 구체예에서, 조성물은 양이온 및 음이온 지질이 없다.
일부 구체예에서, 지질-함유 조성물, 조성물은 약물을 포함한다. 다른 구체예에서, 지질-함유 조성물은 표지된 화합물을 포함한다.
지질-함유 조성물의 어떤 구체예에서, 약물은 옥살리플라틴이고, 표적 인자(TF)는 트랜스페린(Tf)이고 지질 성분은 다음을 포함한다: DMPC 또는 DSPC, 및 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 여기서 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 카르복실산 아미드 결합에 의해 연결된 트랜스페린을 포함한다.
일부 구체예에서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 NG-DOPE 또는 NG-DSPE이다.
특정 구체예에서, 지질-함유 조성물의 지질 조성물은 DMPC, 콜레스테롤, NG-DOPE 및 TF-변형된 NG-DOPE이다. 다른 구체예에서, 지질 조성물은 DSPC, 콜레스테롤, NG-DOPE 및 TF-변형된 NG-DOPE이다. 또 다른 구체예에서, 지질 조성물은 DMPC, 콜레스테롤, NG-DSPE, 및 TF-변형된 NG-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, 지질 성분은 DSPC, 콜레스테롤, NG-DSPE, 및 TF-변형된 NG-DSPE이다. 어떤 이들 구체예에서, 표적 인자(TF)는 트랜스페린이고 약물은 옥살리플라틴이다.
특정 구체예에서, 지질 성분은 DPPC, 콜레스테롤, NG-DOPE 및 TF-변형된 NG-DOPE이다. 다른 구체예에서, 지질 성분은 POPC, 콜레스테롤, NG-DOPE 및 TF-변형된 NG-DOPE이다. 또 다른 구체예에서, 지질 성분은 DPPC, 콜레스테롤, NG-DSPE 및 TF-변형된 NG-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, 지질 성분은 POPC, 콜레스테롤, NG-DSPE 및 TF-변형된 NG-DSPE이다. 어떤 이러한 구체예에서, 표적 인자(TF)는 트랜스페린이고 약물은 옥살리플라틴이다.
특정 구체예에서, 지질 성분은 HSPC, 콜레스테롤, NG-DOPE 및 TF-변형된 NG-DOPE이다. 다른 구체예에서, 지질 성분은 EPC, 콜레스테롤, NG-DOPE 및 TF-변형된 NG-DOPE이다. 또 다른 구체예에서, 지질 성분은 HSPC, 콜레스테롤, NG-DSPE, 및 TF-변형된 NG-DSPE이다. 어떤 다른 구체예에서, 지질 성분은 EPC, 콜레스테롤, NG-DSPE, 및 TF-변형된 NG-DSPE이다. 어떤 이들 구체예에서, 표적 인자(TF)는 트랜스페린이고 약물은 옥살리플라틴이다.
지질 성분비
일반적으로, 출발 물질 NG-DOPE의 몰농도 퍼센트는 전체 지질 함량과 비교하여, 약 2.5%mole% 내지 약 4.5mol% 사이에서 존재할 것이다. 추가적으로, 출발 물질 NHS-NG-DOPE의 몰농도 퍼센트는 전체 지질 함량과 비교하여 약 0.5 mole% 내지 약 2.5mol% 사이에서 존재할 것이다: 일부 구체예에서, NG-DOPE 대 NHS-NG-DOPE의 상대적인 몰비는 약 3.4:1일 것이다. 어떤 구체예에서, NG-DOPE 대 NHS-NG-DOPE의 상대적인 몰% 비는 약 4:1일 것이다. 특정 구체예에서, 중성 인지질과 중성 지질이 존재하는 곳에서, 몰비(예를 들어, DMPC:Chol:NG-DOPE:NHS-NG-DOPE)는 43.0:38.5:3.42:1일 수 있으며 또한 몰%로 50:45:4:1로서 발현될 수 있다.
어떤 구체예에서, NωPE 대 SuccNωPE에 추가적인 지질(들)의 상대적인 몰%(예를 들어, 적어도 두 개의 중성 지질:NωPE:SuccNωPE 또는 하나 이상의 인지질:NωPE:SuccNωPE 또는 (하나 이상의 인지질+중성지질(들)):NωPE:SuccNωPE)는 약 98% 내지 약 87 몰% 추가적인 지질: 약 1몰% 내지 약 12 몰% NωPE:약 0.5몰% 내지 약 1 몰% SuccNωPE; 여기서 모든 성분의 총 mol%는 100mol%이다. 예를 들어, 추가적인 지질:NωPE:SuccNωPE은 대략 95:4:1, 90:9:1, 92:7:1, 93:6:1 등 일 수도 있다.
특정 구체예에서, 추가적인 지질은 인지질 및 콜레스테롤, 콜레스테롤 유도체와 같은 다른 지질을 포함하며 각 지질 성분에 대한 mol%의 범위는 약 30mol% 내지 약 64%이고, 여기서 전체 추가적인 지질은 약 98mol% 내지 약 87mol%이다.
어떤 구체예에서, 추가적인 지질은 두 개의 다른 중성 지질이고, 각 중성 지질의 mol%의 범위는 약 30mol% 내지 약 64%이고, 여기서 전체 중성 지질은 약 98mol% 내지 약 87mol%이다.
대표적인 구체예에서, 하나의 추가적인 지질은 포스파티딜 콜린이고 두번째 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체이며, 포스파티딜 콜린의 mol%는 약 30 내지 약 70mol%(예를 들어, 약 50 내지 약 64mol%, 약 40 내지 약 65mol%, 약 40 내지 약 60mol%, 약 50 내지 약 62mol%, 약 55 내지 약 60mol%, 약 35 내지 55mol%, 약 30mol%, 약 40mol%, 약 45mol%, 약 50mol%, 약 55mol%, 약 60mol%, 약 65mol%, 약 70mol%)이고 그리고 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체는 약 30 내지 약 60mol%(예를 들어, 약 32 내지 약 45mol%, 약 32 내지 약 42mol%, 약 32 내지 약 40mol%, 약 40 내지 약 60mol%, 약 35 내지 약 55mol%, 약 35 내지 약 60mol%, 약 45 내지 약 60mol%, 약 35 내지 약 45mol%, 약 30mol%, 약 35mol%, 약 40mol%, 약 45mol%, 약 50mol%, 약 55mol%, 또는 약 60mol%)이다. 일부 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 약 50mol%, 약 52mol%, 약 55mol%, 약 58mol%, 약 60mol%, 약 62mol%이고 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체는 약 30mol%, 약 32mol%, 약 34mol%, 약 35mol%, 약 37mol%, 약 38mol%, 약 40mol%, 약 42mol%, 약 43mol%, 약 45mol%이다.
특정 구체예에서, NωPE의 mol%는 약 1 내지 약 11mol%, 약 1 내지 약 10mol%, 약 1 내지 약 8mol%, 약 1 내지 약 6mol%, 약 1 내지 약 5mol%, 약 1 내지 약 4mol%, 약 1 내지 약 3mol%, 약 1 내지 약 2mol%, 약 2 내지 약 10mol%, 약 2 내지 약 5mol%, 약 1mol%, 약 2mol%, 약 3mol%, 약 4mol%, 약 5mol%, 약 7mol%, 약 8mol%, 약 9mol%, 약 10mol%, 약 11mol%, 또는 약 12mol%이다.
어떤 구체예에서, 첫번째 추가적인 지질: 두번째 추가적인 지질:NωPE:SuccNωPE의 상대적인 mol%는 예를 들어, 50:45:4:1이다. 일부 구체예에서, 첫번째 추가적인 지질은 포스파티딜콜린(예를 들어, DMPC, DOPC, DPPC, DSPC 등)이고 제 2의 추가적인 지질은 콜레스테롤이다. 일부 구체예에서, NωPE의 PE는 DOPE 또는 DSPE이다. 특정 구체예에서, NωPE는 NG-DOPE 또는 NG-DSPE이다. 일부 구체예에서, 지질은 DMPC:Chol:NG-DOPE:NHS-NG-DOPE이고 이들의 상대적인 mol%는 50:45:4:1이다. 다른 구체예에서, 지질은 DSPC:Chol:NG-DSPE:NHS-NG-DSPE이고 이들의 상대적인 mol%는 50:45:4:1이다. 다른 구체예에서, 지질은 DSPC:Chol:NG-DSPE:NHS-NG-DSPE이고 이들의 상대적인 mol%는 62:33:4:1이다.
일부 구체예에서, NωPE 및 TF-NωPE(NωPE + TF-NωPE)의 전체 mol%는 전체 지질 함량의 2 내지 약 13mol%이다. 예를 들어, 약 2 내지 약 12mol%, 약 2 내지 약 10mol%, 약 2 내지 약 8mol%, 약 2 내지 약 6mol%, 약 2 내지 약 4mol%, 약 2mol%, 약 3mol%, 약 4mol%, 약 5mol%, 약 6mol%, 약 7mol%, 약 8mol%, 약 9mol%, 약 10mol%, 약 11mol%, 또는 약 12mol%.
일반적으로, TF-NωPE의 전체 mol%는 전체 지질 함량에 대해 약 0.002 내지 약 0.2mol%이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, TF-NωPE의 전체 mol%는 약 0.002 내지 약 0.15 mol%이고, TF-NωPE의 전체 mol%는 약 0.002 내지 약 0.1mol%, 약 0.002 내지 약 0.05 mol%, 약 0.01 내지 약 0.03 mol%, 약 0.005 내지 약 0.2 mol%, 약 0.007 내지 약 0.2 mol%, 약 0.007 내지 약 0.05 mol%, 약 0.01 내지 약 0.025 mol%, 약 0.015 내지 약 0.025 mol%, 약 0.01 내지 약 0.2 mol%, 약 0.02 내지 약 0.2 mol%, 약 0.04 내지 약 0.2 mol%, 약 0.06 내지 약 0.2 mol%, 약 0.08 내지 약 0.2 mol%, 약 0.002 내지 약 0.008 mol%, 약 0.01mol%, 약 0.02 mol%, 약 0.03mol%, 약 0.025mol%, 약 0.015mol%, 약 0.06mol%, 약 0.08mol%, 약 0.1mol%, 약 0.15mol%, 또는 약 0.2mol%이다.
리포좀 및 리포좀 -함유 조성물의 특징
성분 비(예를 들어, 지질비, 지질에 대한 약물/표지된 화합물의 비 등)에 의한 지질-함유 조성물을 특성화하는 것에 추가적으로, 본원에 기술된 바와 같은 리포좀-함유 조성물은 또한 표준 분석 방법을 사용하여 특성화 될 수도 있고(예를 들어, 물리화학적 특성 등), 당업자에 의해 평가될 것이다. 이러한 분석 방법은 이에 제한 되는 것은 아니지만, 평균 직경, 캡슐화된 부피, 네트전위(제타 전위), 봉입된(즉, 캡슐화된) 약물의 양, 입자 크기, 다양한 조건(예를 들어, 시험관내에서 투여를 위해 준비되는 바와 같은 저장에서), 삼투압, 결합된 표적 인자의 양 등을 포함한다. 이러한 특징에 대한 대표적인 분석 방법은 실시예에서 설명되며, 당업자에게 알려진 추가적인 방법은 조성물을 특징화하는데 사용될 수도 있다.
당업자에 의해 인식되는 바와 같은, 리포좀의 약물 함량은, 당업계에서 통상적인 실행되는 바와 같은, 그리고, 추가적으로 실시예에서 기술된 바와 같은, 적당한 조절을 갖는 HPLC 분석에 대한 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 적절한 조절을 사용하여, 캡슐화된 약물의 일치는 당업자들에 의해 실행되는 바와 같은 또한 어떤 약물들(예를 들어, 백금 함유 약물)에 대한 HPLC 또는, ICS-MS(유도결합 플라즈마 분광기)와 같은 분석 방법에 의해 결정될 수 있다.
어떤 구체예에서, 약물(예를 들어, 옥살리플라틴 등)의 양 또는 리포좀 내에 캡슐화된 표지된 화합물 또는 리포좀-함유 조성물은 리포좀 내에서 약 0.1mg/ml 내지 약 15mg/ml일 수도 있다. 예를 들어, 약물 농도는 리포좀 내에서 약 0.5mg/ml 내지 약 15mg/ml, 약 0.5mg/ml 내지 약 10mg/ml, 약 0.1mg/ml 내지 약 10mg/ml, 약 0.5mg/ml 내지 약 5mg/ml; 약 0.5mg/ml 내지 약 3mg/ml, 약 0.5mg/ml 내지 약 2mg/ml, 약 0.5mg/ml 내지 약 1.5mg/ml, 약 0.8mg/ml 내지 약 3mg/ml, 약 0.8mg/ml 내지 약 2mg/ml, 약 0.8mg/ml 내지 약 1.5mg/ml, 약 0.7mg/ml 내지 약 3mg/ml, 약 0.7mg/ml 내지 약 2mg/ml, 약 0.7mg/ml 내지 약 1.7mg/ml, 약 0.7mg/ml 내지 약 1.5mg/ml, 약 0.7mg/ml 내지 약 1.4mg/ml, 약 0.7mg/ml 내지 약 1.3mg/ml, 약 0.5mg/ml, 약 0.7mg/ml, 약 0.8mg/ml 내지 약 0.9mg/ml, 약 1mg/ml, 약 1.1mg/ml, 약 1.2mg/ml, 약 1.3mg/ml, 약 1.4mg/ml, 약 1.5mg/ml, 약 1.6mg/ml, 약 2mg/ml, 약 3mg/ml, 약 4mg/ml, 약 5mg/ml, 약 6mg/ml, 약 7mg/ml, 약 8mg/ml, 약 9mg/ml, 약 10mg/ml, 또는 약 15mg/ml일 수도 있다.
전단면에서 전위는 리포좀의 제타 전위라고 불린다. 당업자에게 알려진 바와 같이, 리포좀의 제타 전위는 예를 들어, 레이저-도플러 전기영동 방법과 함께 ELS-6000 (Otsuka Electronics, 일본) 또는 다른 기기 및 당업자에 이용가능한 프로토콜에 의해 측정되는 바와 같은 적당한 기기를 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, J. Colloid and Interface ScL, 39, 670-675(1972), nition.com/en/products/zeecom_s.htm, 등.
어떤 구체예에서, 본원에 기술된 바와 같은 리포좀(표적 리포좀 및 리포좀-함유 조성물의 리포좀을 포함)은 전반적으로 음의 제타 전위를 나타낼 것이다. 일부 구체예에서, 제타 전위는 약 -10 mV 내지 약 -200mV이다. 예를 들어, 약 -50 mV 내지 약 -150mV, 약 -50 mV 내지 약 -130mV, 약 -60 mV 내지 약 -120mV, 약 -50 mV 내지 약 -100mV, 약 -75 mV 내지 약 -90mV, 약 -80 mV 내지 약 -90mV, 약 -80 mV 내지 약 -85mV, 약 -85 mV 내지 약 -90mV, 약 -75 mV 내지 약 -85mV, 약 -70 mV 내지 약 -90mV, 약 -75 mV, 약 -80mV, 약 -85mV, 약 -83mV, 약 -90mV, 약 -100mV, 약 -120mV.
소형 리포좀의 정맥 주사 후에, 그것들은 간 동양혈관의 작은 구멍을 통과하고 신속히 간세포와 접촉하게 된다. 중간 크기의 리포좀은 혈액 구획 내에서 정체되고 상당한 시간동안 순환할 수 있다. 그러나, 거대 리포좀은 간의 작은 구멍을 통해 더 천천히 통과하고, 쿠퍼세포에 의해 신속히 들어올려진다. 따라서 리포좀의 크기는 생체 내 행동을 결정하기 위해 매우 중요하다. 예를 들어, Liu et at, Biochim. Biophys. Acta (1992) 1104(1):95-101 ; Harashima et al, J. Drug Target. (1995) 3(4):253-261; (전체가 참고로써 본원에 포함됨) 등 참조.
리포좀 입자 크기는 광자 상관 분광학(PCS; 동적 광산란 또는 준탄성광산란(QELS))을 사용하는 다양한 알고리즘을 사용함으로써 상관 기능으로부터 얻어질 수 있다. 이러한 기술에 의해 얻어진 입자 크기는 PCS에 의해 결정된 평균 직경과 유사하다. PCS는 크기 분포를 기술하기 위하여 표준 편차 및 χ2를 사용한다. PCS 시스템에서, χ2는 시스템이 유니모달(Gaussian 분포)이든지 멀티모달(Nicomp 분포)이든지 간에 결정한다. 평균 입자 크기는 가중된 측정 강도를 사용하여 결정될 수 있고 χ2≤5이라면 Gaussian 분포로부터 보고된다. χ2 > 5이라면, Nicomp 분포 내 원칙적인 피크의 평균. 적당한 하드웨어, 예를 들어, Nicomp QELS Particle Sizer, PSS Model 380ZLS, S/N 0103301; pssnicomp.com/zetaspec.htm으로서 이러한 분석은 당업자에게 친숙할 것이다.
리포좀, 특히 표적 리포좀의 어떤 구체예에서, 본원에 기술된 리포좀 평균 직경은 약 50 내지 약 275nm일 것이다. 예를 들어, 리포좀 평균 직경은 약 50 내지 약 200nm, 약 50 내지 약 265nm, 약 50 내지 약 250nm, 약 50 내지 약 225nm, 약 50 내지 약 175nm, 약 50 내지 약 150nm, 약 50 내지 약 120nm, 약 50 내지 약 100nm, 약 75 내지 약 250nm, 약 75 내지 약 200nm, 약 75 내지 약 175nm, 약 75 내지 약 150nm, 약 75 내지 약 120nm, 약 75 내지 약 100nm, 약 90 내지 약 100nm, 약 90 내지 약 120nm, 약 90 내지 약 150nm, 약 90 내지 약 200nm, 약 95 내지 약 100nm, 약 95 내지 약 120nm, 약 95 내지 약 125nm, 약 95 내지 약 130nm, 약 95 내지 약 150nm, 약 95 내지 약 175nm, 약 90nm, 약 95nm, 약 100nm, 약 120nm, 약 130nm, 또는 약 150nm일 수도 있다. 특정 리포좀 조성물에 대해, 표적 리포좀은 동일한 조성물로 형성된 리포좀 보다 직경에서 대략 약 15 내지 약 25nm 더 클 것이지만 표적 인자는 포함되지 않는다.
본원에 기술된 리포좀(예를 들어, 표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 리포좀-함유 조성물 내 리포좀)은 또한 리포좀 내에 포함된 표적 리간드의 농도에 의해 특징을 가질 수 있다. 선택된 표적 리간드에 의존하여, 표적 리간드를 정량하는 다양한 수단은 당업자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 실시예에서 기술된 바와 같은, 리포좀의 트랜스페린(Tf) 함량은 적당한 대조군과 비교되는 리포좀의 전기영동 이동(예를 들어, SDS-PAGE에 의한 측정)의 사용에 의해 결정될 수 있다.
간단히 말해서, 리포좀 내 트랜스페린 함량의 변환은 리포좀에 결합된 트랜스페린의 함량 및/또는 일치에 대한 두 가지 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 우선, SDS-PAGE에 의해 분석되는 바와 같은 트랜스페린 리포좀의 전기영동 이동은 결합된 트랜스페린, 예를 들어, TF-NωPE의 이동 형태와 비교될 수 있다. 게다가, 결합된 트랜스페린의 전기영동 이동은 또한 참고 표준으로 트랜스페린이 없는 것과 비교될 수 있다. 리포좀 내 트랜스페린의 일치에 대한 추가적인 지지는 ELISA, 표적 리포좀에 항-트랜스페린 항체의 특이적 결합을 증명하는 연구-단계 제형을 사용하여 획득될 수 있다. 트랜스페린-표적 리포좀의 농도는 BCA와 같은 색도계 단백질 정량 분석, 당업자에게 공지된 분석을 사용하여 측정될 수 있다. 본원 기술에 대한 당업자는 또한 표적 인자의 다양한 양을 결정하기 위한 유사한 방법 및 다른 당업계에서 공지된 방법을 인식할 것이다.
간략하게, 리포좀 내 트랜스페린의 양은 BCA(bicinchoninic acid) 분석 시양을 사용하여 분석될 수 있다. 알칼리 조건 하에서 단백질에 의해 구리(II)는 구리(I)로 환원된다. 생성된 구리(I) 이온은 수용성의, BCA로 강하게 착색된 복합체를 형성한다. 전체 극미립자-결합 단백질은 BCA 시약을 갖는 극미립자 현탁액의 공지된 양의 반응에 의해 측정된다. 일단 착색 형성이 일어나면, 극미립자는 여과에 의해 제거되고 색은 분광학적으로 측정된다.
일부 구체예에서, 리포좀 내에 포함된 표적 리간드의 농도는 약 0.5mg/ml 내지 약 5.0mg/ml, 약 0.5mg/ml 내지 약 2.0mg/ml, 약 1.0mg/ml 내지 약 2.0mg/ml, 약 1.0mg/ml 내지 약 3.0mg/ml, 약 1.0mg/ml 내지 약 2.5mg/ml, 약 1.0mg/ml 내지 약 2.0mg/ml, 또는 약 1.3mg/ml 내지 약 2.5mg/ml일 것이다.
제 1철이온의 역할은 종양 세포 표면에 트랜스페린의 결합에서 매우 중요하다. 그런까닭에, Tf를 포함하는 표적 리포좀의 제1철이온 함량은 리포좀을 특성지우는 다른 중요한 방법이다. 제1철이온 함량을 결정하기 위한 많은 방법이 당업자에게 공지될 동안, 한 가지 방법은 IPS-MS이다.
리포좀이 트랜스페린을 함유하는 곳에서, 리포좀의 제 1철이온 함량은, 예를 들어, 약 0.25μg/mL 내지 약 3μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.25 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.25 μg/mL 내지 약 1.5μg/mL, 약 0.25 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 2μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 약 0.5 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.5 μg/mL 내지 약 1.4μg/mL, 또는 약 0.5 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL일 수도 있다.
표적 리포좀 및 블랭크 리포좀을 포함하는 리포좀은 또한 주어진 온도에서 이들의 삼투압에 의해 특징화될 수도 있다. 주어진 온도에서 삼투압은 당(수크로오스) 용액의 몰농도에 의존한다. 그리고 그것은 또한 전체 이온 밀도 및 용액 내 분자 크기에 의존한다. 정상적으로 삼투압은 삼투압계로서 공지된 기기를 사용하여 측정될 수 있고, 이는 당업자에 의해 인식될 바와 같은 적당한 압력 단위에서 삼투압을 측정한다.
어떤 구체예에서, 리포좀, 특히 표적 리포좀 및 블랭크 리포좀의 삼투압은 실온에서, 약 310 내지 약 410mOsm/kg일 것이다. 예를 들어, 삼투압은 실온에서 약 310 내지 약 400mOsm/kg, 약 300 내지 약 380mOsm/kg, 약 320 내지 약 360mOsm/kg, 약 315 내지 약 375mOsm/kg, 약 320 내지 약 375mOsm/kg, 약 315 내지 약 370mOsm/kg, 약 320 내지 약 370mOsm/kg, 약 360mOsm/kg, 약 350mOsm/kg, 약 340mOsm/kg, 약 370mOsm/kg 또는 약 380mOsm/kg일 것이다.
본원에 기술된 다양한 조건(예를 들어, 저장을 위한 조건, 투여 및/또는 시험관 내 조건을 위한 준비)하에서, 본원에 기술된 바와 같은 다양한 조건과 관련된 특정 기간 동안 모니터링 될 때, 삼투압은 약 25%보다 적게, 약 20%보다 적게, 약 15%보다 적게 변경될 수도 있다. 예를 들어, 360 +/- 50 mOsm/kg.
지질-함유 조성물의 생산
치료, 명명, 효능, 안정성, 및 품질 보장의 과정에서 환자에 투여를 위한 약물 및 표지된 화합물에 대한 세 가지 주요 요구가 있다. 증명된 효능 및 안정성에도 불구하고, 치료에서 약물의 사용 가능성은 제조 및 배포되는 동안 그것의 질(예를 들어, 순도, 균질성, 투여의 재현성, 시간 경과에 따른 안정성 등)이 지속적으로 보장될 수 없다면 손상된다. 약물 또는 표지된 화합물의 제조 방법은 고품질을 지속적으로 보장하지 않으며, 약물은 또한 약물이 투여되는 환자에 부작용의 가능성을 증가시킨다. 약물 또는 표지된 화합물의 수명을 통해, 제조되고 배포된 생성물이 규정승인을 처음으로 받는 생성물로서 동일한 표준을 만나는 것은 중요하다. 따라서, 고품질의 약물 또는 표지된 화합물을 지속적으로 제조하기 위한 가능성은 안정한 약물 또는 표지된 화합물 생성물을 제조하기 위해 필요하며 약물 또는 표지된 화합물은 통상적이고 용이하게 제조될 수 있고 정제물은 상업성 및 안정성 측면에서 이점이 있다. 여기서, 예를 들어, 표지된 화합물의 효능은 특정 진단 방법(예를 들어, 표지된 화합물의 활성(예를 들어, 감마선 계측기 등에 의해 보여지는 능력))이 일 군에서 다른 군으로의 받아들일 수 없는 수준에 의해 또는 저장하는 동안 손상되지 않는 것과 관련한 특정 질병 또는 질환의 진단에서 유용하게 되는 그것의 능력을 의미한다.
하기의 기술은 본원에 기술된 조성물의 제조를 위한 일반적인 방법이며 고질(예를 들어, 높은 순도, 균질성 등)의 표적 리포좀(및 이것의 중간체) 및 블랭크 리포좀을 지속적으로 제조하는데 사용될 수 있다. 이러한 방법은 또한 도 4(제조 방법 A) 및 5(제조 방법 B)에서 개략적으로 표시된다.
본원에 기술된 바와 같은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 리포좀, 중합체 미셀, 마이크로- 및 나노-스피어, 에멀젼 및 수용성 중합체와 같은 인지질 복합체의 성분으로서 유용하다. 이러한 PE 유도체의 제조는 본원에 기술되어 있고 이들 제조를 위한 방법은 또한 앞서 언급한 바와 같이, 당업계에 공지되어 있다.
특히, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 또한 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물의 성분으로서 유용하다. 예를 들어, 당업자에게 공지된 다양한 방법은 지질 성분으로부터 리포좀 제형에 사용될 수도 있다(예를 들어, 초음파처리, 교반, 압출성형, 탈수화 등). 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2004/0142025에 기술된 바와 같고 이는 그것 전체가 참고로써 본원에 포함되어 있다.
실시예에 포함되는 본원에 기술된 일반적 방법의 사용은 표적 리포좀을 제조하기 위해 또한 본원에 기술된 바와 같은 다른 지질-함유 조성물(예를 들어, 지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물, 블랭크 리포좀, 및 중간체 리포좀)의 제조를 위한 방법을 포함한다
제조 방법 A
제조 방법 A는 도 4에서 개략적으로 묘사된다.
A: Nω PE : SuccN ω PE :추가적인 지질 혼합물(중간체 1)의 제조
본원에 기술된 바와 같은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민(SuccNωPE)의 숙신이미딜 에스테르 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민(NωPE)은 추가적인 지질(들)((예를 들어, 적어도 하나의 인지질(들)(예를 들어, PC(예를 들어, DMPC, DSPC 등), PI, 스핑고미엘린, 포스파티드 산 등) 및 적어도 하나의 다른 추가적인 지질(예를 들어, 콜레스테롤))과 혼합되고, 그 후 적당한 용매(예를 들어, 에탄올, t-BuOH, 클로로포름, 이소프로필에테르, 등)에 용해된다. 용매의 양은 일반적으로 1 내지 100v/w(전체 지질 무게 대비)이다. 어떤 구체예에서, 이것은 2 내지 20v/w이다.
앞선 단락에서 기술된 바와 같이 사용되는 SuccNωPE 및 NωPE는 본원에 기술된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조되고 정제될 수 있다. 표적 리포좀 및 이들의 중간체의 제조를 위해 본원에 기술된 다른 조성물 뿐 아니라 SuccNωPE 및 NωPE는 충분한 순도 및 균질함에 있어야 하고 환자에 표적 리포좀의 투여에 대한 조절 지침내에서 및 우수 실험실 운영기준(GLP) 및 우수 의약품 제조관리 기준(GMP)에 따라 표적 리포좀의 감소를 위한 충분한 순도 및 균질함을 궁극적으로 얻는다.
추가적인 지질(들)(하나 이상의 인지질에 추가)은 인지질과 조합하여 사용되고, 다른 추가적인 지질(들)에 대한 인지질(들)의 비율은 약 2:1이다. SuccNoPE 유도체의 인지질에 대한 혼합비율은 (NHS-NGPE + NGPE) 대 (CHOL +인지질)의 전체 농도/비율의 약 1 내지 약 12%(1:99 내지 12:88), 또는 약 3-6% (3:97 내지 6:94)이다. 예를 들어, 대표적인 비율은 50:45:4:1(예를 들어, PC:Chol:NG-PE:NHS-NG-PE), 예를 들어, 1g의 혼합물 내에서 17.5mg의 NHS-NG-DOPE, 63.1mg의 NG-DOPE, 312mg의 Chol 및 607mg의 인지질을 포함한다.
B: 약물:Nω PE : SuccN ω PE :추가적 지질 혼합물(중간체 2)의 제조
NωPE:SuccNωPE:단계 A에서 제조된 추가적 지질 혼합물은 그 후 약물:NωPE:SuccNωPE:추가적 지질 혼합물(중간체 2)을 얻기 위해 약물 또는 캡슐화된 표지된 화합물(예를 들어, 항암제(예를 들어, 옥살리플라틴, 토포이소머라아제 I 억제제, 빈카 알칼로이드 등))을 함유하는 수성 용액(예를 들어, 완충액 등)과 혼합된다.
여기서 약물은 옥살리플라틴(l-OHP)이고, 옥살리플라틴 용액의 농도는 대략 9% 수크로오스 용액에서 약 8mg/ml이다. 예를 들어, 표적 리포좀 내 옥살리플라틴의 농도는 약 0.8mg/ml +/- 10%이다.
C: 약물:Nω PE : SuccN ω PE :추가적인 지질 리포좀(중간체 3)의 제조
단계 B에서 획득된 약물:NωPE:SuccNωPE:추가적인 지질 리포좀(중간체 2)은 그 후 초음파처리되거나 교반 후에 용매의 증발시켜 약물:NωPE:SuccNωPE:추가적인 지질 리포좀(중간체 3)을 형성한다. 초음파처리, 교반 및 증발을 수행하기 위한 위한 방법 및 조건 그리고 이들 단계를 수행하기 위한 수단은 당업자들에 의해 잘 이해되어지며 또한 실시예에서 추가적으로 기술된다. 예를 들어, 역상 소포(REV) 방법에 의한 제조 방법, 미국 특허 번호 4,235,871(그것 전체가 참고로써 포함됨) 참조. 당업자에게 공지된 단순한 수화 방법 및 에탄올 주입 방법과 같은 일반적인 리포좀 제조 방법이 또한 사용될 수 있다.
상기 기술된 바와 같이 형성된 약물:NωPE:SuccNωPE:추가적인 지질 리포좀은 그 후 크기별로 압출성형되고 약물:NωPE:SuccNωPE:추가적인 지질 리포좀은 분리된다. 선택적으로, 초음파여과는 그 후 리포좀 용액을 농축시키는데 사용될 수 있다.
리포좀은 l-OHP(약물), DMPC(추가적인 지질/인지질(중성)), 콜레스테롤(CHOL, 추가적인 지질/중성 지질), N-글루타릴-DOPE(NG-DOPE) 및 NHS-NG-DOPE을 함유하며, 약 0.2 마이크로미터(200nm)의 평균 직경을 갖는 리포좀은 분리될 수 있다. 유사한 크기의 리포좀은 또한 l-OHP(약물), DSPC(추가적 지질/인지질(중성), 콜레스테롤, N-글루타릴-DSPE(NG-DSPE) 및 NHS-NG-DSPE를 함유하는 리포좀에 대해 획득될 수 있다. 리포좀 성분의 대표적인 표적 양은, 예를 들어, 약 40mg/mL DMPC(추가적인 지질/포스파티딜 콜린/인지질/중성 지질), 약 20mg/mL CHOL(추가적인 지질/중성 지질) 및 약 5mg/mL NG-DOPE(NG-PE 및 NHS-NG-PE의 조합된 양)이다. 지질 성분에 대한 대표적인 비율은 50:45:5(추가적인 지질 1(예를 들어 포스파티딜 콜린):추가적인 지질 2(예를 들어 CHOL):NG-PE(예를 들어, NG-DOPE+NHS-NG-DOPE)이다.
D: 약물:Nω PE : TF -Nω PE :추가적인 지질 리포좀(표적 리포좀 )
단계 C에서 기술된 바와 같은 약물:NωPE:TF-NωPE:추가적인 지질 리포좀은 그 후 약물:NωPE:TF-NωPE:추가적인 지질 리포좀(또한 "표적 리포좀"으로서 언급됨)을 제조하기 위한 선택의 표적 인자와 함께 기능화될 수 있다.
표적 인자(TF)의 부착(예를 들어, 표적 인자를 갖는 중간체 리포좀(중간체 3)의 기능화)은 표적 인자를 갖는 숙신이미딜 부분의 반응에 의해 SuccNωPE에 표적 인자를 공유 결합함으로써 수행된다. 적당한 반응 조건을 통해, 리포좀의 노출된 표면 상(지질 이중층의 외부에서, 여기서, 약물 또는 표지된 화합물은 리포좀의 내부에서 캡슐화된다)의 숙신이미딜기는 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 (TF-NωPE)을 형성하기 위해 공유적으로 변형될 수 있다. 리포좀에 표적 인자의 부착은 약물:NωPE:TF-NωPE:추가적 지질 리포좀(표적 리포좀)의 형성을 야기한다.
더 구체적으로, 적당한 조건하에서, 본원에 기술된 바와 같은 SuccNωPE의 숙신일 카르복실 부분은 기능화된다. 만약 표적 인자가 아미노기(들)를 갖는다면, 표적 인자 상에서 아미노 기는 숙신이미딜 카르복실 부분과 반응되고 카르복실산 아미드 결합을 형성한다. 이 반응에 대해 적당한 조건은 실시예를 포함하는 본원에서 추가적으로 기술되며, 또한 당업자에 의해 잘 이해될 것이다. 당업자는 본원의 주어진 기술에서 부적당한 실험 없이 표적 인자 및 리포좀의 특정 조합을 위한 조건을 생략하기 위한 반응 조건을 변형 시킬 수 있을 것이다.
본원에 기술되고 당업자에게 공지된 바와 같은 다양한 표적 인자는 상업적으로 얻어질 수 있고 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.
예를 들어, 트랜스페린이 표적 인자로서 선택될 때, 트랜스페린은, 예를 들어, Celliance Corp., GA, USA로부터 정제 단백질로서 상업적으로 얻어질 수 있다. 트랜스페린은 또한 당업계에서 용이하게 이해되는 재조합 방법(예를 들어, 원핵세포(E.coli 등)을 사용함으로써, 진핵세포(CHO, BHK 등)을 사용함으로써, 등)을 사용하여 획득될 수 있다. 용이하게 이해되는 바와 같이, 트랜스페린은 아포 또는 홀로형 내 표적 리포좀에서 획득되고 사용될 수 있다. 또 다르게는, 아포-트랜스페린을 포함하는 표적 리포좀은 홀로-트랜스페린 유도된 리포좀을 포함하는 표적 리포좀을 얻기 위해 시트르산 철, 염화철(III) 등과 같은 철 화합물로 처리될 수 있다.
표적 인자와 같은 트랜스페린의 대표적인 양은, 예를 들어, 약 2mg/mL 트랜스페린이다. 이러한 양은 약 40mg/ml DMPC, 약 20mg/ml CHOL 및 약 5mg/ml NG-DOPE(NG-PE 및 NHS-NG-PE의 조합된 양)을 함유하는 대표적인 표적 리포좀에 대해 적당할 것이다.
표적 리포좀을 획득하기 위한 상기 기술된 바와 같은 표적 인자를 갖는 리포좀(중간체 3)의 기능상에서, 결과 리포좀은 선택적으로 본원에 기술된 정제 방법, 특히 상기 단계 C와 관련하여 기술되는 것을 포함하는 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 추가적으로 정제될 수 있다.
리포좀은 l-OHP(약물), DMPC, 콜레스테롤(CHOL), N-글루타릴-DOPE(NG-DOPE) 및 Tf-NG-DOPE를 함유하며, 약 0.05 마이크로미터 내지 약 0.2 마이크로미터(약 50nm 내지 약 200nm)의 평균 직경을 갖는 리포좀은 분리될 수 있다. 유사한 크기의 리포좀은 또한 l-OHP(약물), DSPC, 콜레스테롤, N-글루타릴-DSPE(NG-DSPE) 및 NHS-NG-DSPE를 함유하는 리포좀에 대해 획득될 수 있다.
상기 언급된 방법(편의를 위해 제조 방법 A로서 언급됨)에 의한 표적 리포좀의 제조는 높은 순도 및 균질함의 표적 리포좀을 복제 가능하게 제조한다. 특히, 표적 리포좀은 SuccNωPEs의 생성과 관련된 비-NHS 출발 물질(본원에 기술됨) 및 부산물(예를 들어, 아실화된 우레아 화합물 등)이 실질적으로 없다. 특히, 리포좀 형성 이전에 SuccNωPEs의 제조 및 정제는 리포좀을 얻으며 표적 리포좀은 SuccNωPEs를 형성하기 위해 NωPEs를 기능화하는데 사용되는 카르보디이미드 출발 물질(예를 들어, DCC, EDC 등)이 실질적으로 없다. 앞서 언급한 바와 같이, 약물 및 약물 또는 표지된 화합물을 포함하는 표적 리포좀을 포함하는 약물 또는 표지된 화합물은 치료 또는 진단 과정에서 환자에 투여를 위해 의도되고, 필수적으로 고품질이 되어야만 한다.
선택적으로, A(중간체 1)에서 기술된 지질 혼합물은 TF-NωPE을 함유하는 지질 혼합물을 형성하기 위한 표적 인자로 치료될 수 있다. 추가적으로, 이 지질 혼합물은 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위한 수성 용액과 혼합될 수도 있다. 결국, 리포좀-함유 조성물은 리포좀 제형을 제조하기 위해 처리될 수도 있다. 선택적으로, 수성 용액은 약물 또는 표지된 화합물을 포함할 수도 있다.
또 다른 제조 방법(방법 B)
제조 방법 B는 도 5에서 개략적으로 설명된다.
A. 약물의 제조:Nω PE :추가적인 지질 리포좀의 제조
본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀은 또한 적당한 용매(예를 들어, 에탄올, t-BuOH, 클로로포름, 이소프로필에테르 등)에 추가적인 지질 및 NωPE를 용해함으로써 제조될 수 있다. 수성 용액 내 결과 용액을 분산시키는 것은 약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 함유하며, 그 후 결과 분산의 초음파처리 또는 역상 소포를 수행하여 리포좀(약물:NωPE:중성 지질)을 형성한다. 리포좀 용액은 초음파처리에 의해 농축될 수도 있다.
비-제한적 실시예에서와 같이, 리포좀은 역상 소포(REV) 방법(참고로써 포함된 미국 특허 번호 4,235,871)에 의해 제조될 수 있다. 물론, 단순한 수화 방법 및 에탄올 주입 방법과 같은 일반적인 리포좀 조성물 방법 또한 사용될 수 있다.
지질 이중층에서 NωPE(들)을 안정적으로 보유하기 위해서, NωPE(들)은 제조되고 정제될 수 있고, 그 후 NωPE(들)은, 추가적인 지질(예를 들어, 인지질(들), 콜레스테롤 등)과 함께 당업자에게 공지된 방법에 따르는 리포좀을 제조하는데 사용된다.
비-제한적 실시예에서와 같이, 추가적인 지질(예를 들어, 하나 이상의 인지질(예를 들어, DSPC, DMPC 등)), 및 선택적으로 다른 추가적 지질(예를 들어, 콜레스테롤 등) 및 적어도 하나의 NωPE는 함께 혼합되고 유기 용매에 용해된다.
여기서 추가적인 지질은 인지질 및 콜레스테롤이고, 인지질 및 콜레스테롤의 혼합 비율은 예를 들어, 약 1:1, 예를 들어, 약 1.1:1, 약 1.2:1, 약 0.9:1(예를 들어, DMPC 및 콜레스테롤, 50:45(mol%)일 수도 있다. 전체 지질 함량의 비율로서 NωPE(들)의 함량은 예를 들어, 인지질에 대해 6%이다. 그 후, 결과 용액은 수성 완충액에서 옥살리플라틴의 용액과 함께 혼합된다. NωPE는 전체 지질 함량에서 약 0.8mol% 내지 12mol% 일 수 있다. 예를 들어, 약 1mol% 내지 10mol%, 약 1mol% 내지 8mol%, 약 1mol% 내지 6mol%, 약 1mol% 내지 5mol%, 약 1mol% 내지 4mol%, 약 1mol% 내지 3mol%, 약 1mol% 내지 2mol%, 약 2mol% 내지 12mol%, 약 2mol% 내지 10mol%, 약 3mol% 내지 8mol%, 약 1mol%, 약 2mol%, 약 3mol%, 약 4mol%, 약 5mol%, 약 6mol%, 약 8mol%, 약 10mol% 또는 약 12mol%.
용액 내 약물 또는 표지된 화합물의 농도는 본원에 기술된 바와 같이, 그리고, 특히 상기 제조 방법 A에 대해 기술된 바와 같을 수 있다. 유사하게, 약물 또는 표지된 화합물을 함유하는 용액은 본원에 기술된 바와 같은 용액 성분을 포함한다.
이 방법에 의해 제조된 l-OHP(약물), DSPC, 콜레스테롤 및 N-글루타릴-DSPE(NG-DOPE)를 포함하는 리포좀은 약 0.2μm의 평균 직경을 갖는 옥살리플라틴-함유 리포좀(예를 들어, 겔-여과, 크기 배제 크로마토그래피, 초음파처리, 초원심분리 등에 의함)을 제공하기 위해 분리될 수 있다.
B. 약물: SuccN ω PE :Nω PE :추가적인 지질 리포좀의 제조
단계 A 다음에, 단계 A(약물:NωPE:추가적인 지질 리포좀)에서 제조된 리포좀에서 존재하는 NωPE의 부분은 SuccNωPE(즉, 약물:SuccNωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀)을 포함하는 리포좀을 얻기 위해 기능화되고, 후에 TF-NωPE을 형성하기 위해 변형될 수 있다.
SuccNωPE을 형성하기 위해, NωPE의 말단에서 카르복실기는 숙신이미딜기를 형성하기 위해 변형된다. 이러한 기능화는 SuccNωPE(들)의 제조를 위해 기술된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, EDC, DCC 등) 및 N-히드록시설포숙신이미드(NHS)는 약물: SuccNωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀을 얻기 위한 리포좀의 존재에서 반응된다.
C. 약물: TF -Nω PE :Nω PE :추가적인 지질 리포좀의 제조
단계 B 후에, 단계 B에서 제조된 약물:SuccNωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀은 약물: TF-NωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀을 형성하기 위한 표적 인자와 함께 반응된다. 반응에 대한 방법 및 조건은 제조 방법 A, 단계 D에 대해 기술되는 바와 같다.
제조 방법 B에 의해 획득된 약물: TF-NωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀은 본원에 기술된 바와 같은 방법 및 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 정제되고 농축될 수 있다.
제조 방법의 비교
제조 방법 A는 제조 방법 B 이상의 몇몇 이점이 있으며, 두 가지 모두를 통해 약물:TF-NωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀들(표적 리포좀, 선택적으로 약물 또는 표지된 화합물을 함유)을 얻는데 사용될 수 있다. 가장 명백하게는, 방법 A에 의해 얻어진 리포좀은 SuccNωPEs의 제조와 관련된 불순물(예를 들어, 비-NHS 출발 물질 및/또는 부산물)이 없거나 또는 실질적으로 없을 것이다. 특히, 앞서 기술된 바와 같이, 제조 방법 A에 의해 제조된 표적 리포좀은 예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, EDC, DCC 등) 및 아실화된 우레아가 없거나, 또는 실질적으로 없을 것이다. 어떤 구체예에서, SuccNωPE는 리포좀 내부에 포함되지 않고, 리포좀 또는 리포좀-함유 조성물은 또한 NHS가 없거나 실질적으로 없을 수 있다. 추가적으로, 더 큰 규모의 반응은, 더 많은 제조 시간이 있다. 제조 방법 A에 대한 시간은 제조 방법 B보다 실질적으로 짧다.
제조 방법 B에 의해 제조되는 약물:TF-NωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀의 정제가 이러한 불순물의 양을 감소시킬 동안, 지질(예를 들어, 제조 방법 A의 단계 A에 앞서 제조되고 정제된 SuccNωPE)보다 리포좀(예를 들어, 제조 방법 B의 단계 B에서 얻어진 약물:SuccNωPE:NωPE:추가적인 지질 리포좀)을 정제하는 것은 더욱 어렵다. 일부의 SuccNωPE가 리포좀의 내부(예를 들어, 숙신이미딜 에스테르 기능은 지질 이중층의 내부에 있고 표적 인자를 갖는 반응에 접근불가능하다)지향적이기 때문에, 제조 방법 A에 의해 제조된 표적 리포좀은 그것에 포함된 일부 잔여 SuccNωPE을 가질 수도 있는 가능성이 있다.
제조 방법 A의 추가적인 이점은 최종 약물:TF-NωPE:NωPE:추가적인 지질에서 TF-NωPE 대 NωPE의 상대적인 함량이며, 리포좀은 제조 방법 A가 사용될 때 좀 더 정확하게 조절될 수 있다. 이러한 지질의 상대적인 양은 제조 방법 A의 단계 A에서 출발 물질로서 사용된 SuccNωPE 및 NωPE의 상대적인 양과 직접 연관되어 있다. 게다가, TF-변형된 SuccNωPE의 양은 또한 더욱 정확하게 조절 될 수 있다.
제조 방법 B가 사용될 때, NωPE 대 SuccNωPE의 상대적인 양은 방법 B 단계 B의 반응 효율성에 의존한다. 이 반응은 리포좀 내에서 존재하는 대략 10%의 NωPE에 대한 완료를 수행하는 것으로 믿어지지만, 실험적인 변화는 일 군에서 다른 군으로부터 기대될 수도 있다. 낮은 반응 효율성은, 부분적으로, 미리-형성된 리포좀의 입체적 장애물에 기인할 수도 있다. SuccNωPE이 분리된 NωPE(지질만)로부터 형성될 때, 훨씬 적은 입체적 장애물이 있으며 반응은 더 앞선 완료를 수행한다. 또한, 이어지는 SuccNωPE의 형성(지질에서만 형성)에서, 결과 생성물은 반응 혼합물로부터 정제될 수 있고, 따라서 다른 부산물 뿐 아니라 반응되지 않은 NωPE, 카르보디이미드 및 NHS를 제거하는 것은 반응 동안에 형성될 수도 있다.
리포좀은 본 명세서의 배경기술 부분에서 기술된 것과 같은 PEG 또는 다른 친수성 중합체를 포함하는 리포좀보다 더 균질하게 나타나는 방법(그리고 그런까닭에 더 많은 복제할 수 있는 약물/진단 생성물을 제조하는데 사용될 수 있다)에 의해 형성된다. 일반적으로, PEG 또는 다른 친수성 중합체가 리포좀의 순환 시간을 증가시키는데 사용될 때(예를 들어, RES에 의한 흡수로부터 리포좀을 보호한다), 그것들의 사용은 분자 크기의 분포를 갖는 리포좀을 야기한다=PEG 또는 친수성 중합체 자체의 넓은 분포에 기인. 이 분포는 제조와 관련된 어려움을 증가시키고(예를 들어, 복제 및/또는 정제) 또한 임상적 효능에서 변화성을 증가시킬 수도 있다. 방법 A 또는 B에 의해 제조된 표적 리포좀은 이들에 대하여 우수해야만 한다.
추가적인 제조 방법
지질 혼합물 및 리포좀-함유 조성물(리포좀을 제조하는데 사용될 수도 있다)은 또한 제조 방법 A 및 B의 변형에 의해 제조될 수도 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 추가적인 지질 조성물(들):NωPE:TF-NωPE 또는 추가적인 지질 조성물(들):NωPE:TF-NωPE:약물/표지된 화합물(여기서 "추가적인 지질 조성물(들)"은 하나 이상의 인지질(예를 들어, 하나 이상의 중성, 하나 이상의 음이온성, 하나 이상의 양이온성 인지질 또는 두 개 이상의 이들의 조합)을 의미한다)을 포함하는 지질 혼합물 및 리포좀-함유 조성물은, 선택적으로 본원에 기술된 바와 같은(예를 들어, 콜레스테롤 또는 이들의 유도체) 하나 이상의 추가적인 지질을 추가적으로 포함하고; 또는 본원에 기술된 바와 같은(예를 들어, 적어도 하나의 인지질(들)(예를 들어, PCs(예를 들어, DMPC, DSPC 등), PI, 스핑고미엘린, 포스파티딘산 등) 적어도 두 개의 다른 중성 지질 및 적어도 하나의 다른 중성 지질(예를 들어, 콜레스테롤)) 본 명세서의 기술에 대해 당업자들에 계획된 방법의 다른 변형 뿐 아니라, 하기에 기술된 제조 방법에 의해 제조될 수도 있다. 추가적인 지질, NωPE, TF-NωPE 및 존재하는 경우, 약물 또는 표지된 화합물 성분은 본 명세서를 통하여 기술되는 바와 같을 수도 있다. 유사하게, 성분의 상대적인 양은 또한 본 명세서를 통하여 기술하는 바와 같다.
어떤 구체예에서, 제조 방법 B의 첫번째 단계에서 제조된 지질 혼합물(적당한 유기 용매에서 추가적인 지질 및 NωPE을 용해함으로써 제조되는 지질 혼합물)은 NHS를 포함하기 위해 변형될 수도 있고 그 후 추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE 지질 혼합물을 제조하기 위한 TF와 함께 변형될 수도 있다. 이러한 지질 혼합물은 그 후 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위한 수성 용액(약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 함유)과 함께 혼합될 수 있다. 또 다르게는, 약물 또는 표지된 화합물은 리포좀-함유 조성물이 제조된 후에 포함될 수 있다. 일부 구체예에서, 수성 용액이 없는 약물 또는 수성 용액은 지질 혼합물에 포함될 수 있고, NHS 및 TF와 함께 변형 후에 형성되고, 추가적인 지질 조성물(들):NωPE:TF-NωPE:약물/표지된 화합물 지질 혼합물을 형성한다. 이러한 지질 혼합물은 그 후에 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위한 수성 용액과 함께 혼합될 수 있다.
일부 구체예에서, 제조 방법 B의 첫번째 단계에서 제조된 지질 혼합물(적당한 용매 내 추가적인 지질 성분(들) 및 NωPE을 용해함으로써 제조되는 지질 혼합물)은 리포좀-함유 조성물(추가적인 지질 성분(들):NωPE)을 형성하기 위한 수성 용액과 함께 혼합될 수도 있다. 이러한 리포좀-함유 조성물은 그 후 NHS 및 TF로 처리될 수도 있고 그 후 추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE:약물/표지된 화합물 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위한 약물 또는 표지된 화합물과 혼합될 수도 있다. 또 다르게는, 추가적인 지질 조성물(들):NωPE 리포좀-함유 조성물은 약물 또는 표지된 화합물과 함께 처리될 수도 있고 그 후 NHS 다음에 TF로 변형될 수도 있다.
일부 구체예에서, 제조 방법 B의 첫 번째 단계에서 제조된 지질 혼합물(적당한 용매 내 추가적인 지질 성분(들) 및 NωPE을 용해시킴으로써 제조되는 지질 혼합물)은 그 후 지질 혼합물(여기서 약물 또는 표지된 화합물은 수성 용액을 포함하지 않는다) 또는 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위해 약물 또는 표지된 혼합물(수성 용액을 선택적으로 포함)과 혼합될 수도 있다. 지질 혼합물이 형성되는 곳에서, 지질 혼합물은 그 후 추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE:약물/표지된 화합물 지질 혼합물을 형성하기 위해 NHS 및 TF와 함께 처리될 수 있고, 그 후 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위한 수성 용액과 함께 혼합될 수 있다. 또 다르게는, 리포좀-함유 조성물이 형성되는 곳에서(예를 들어, 약물 또는 표지된 화합물이 수성 용액에 포함될 때), 이러한 리포좀-함유 조성물은 또한 추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE:약물/표지된 화합물 리포좀-함유 조성물을 얻기 위해 이후에 NHS 및 TF와 함께 처리될 수 있다.
추가적인 또 다른 제조 방법에서, 방법 C, 각각의 성분은 지질 혼합물(C-1)(예를 들어, 성분:추가적인 지질 성분(들);NωPE; TF-NωPE 또는 성분:추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE:약물 또는 표지된 화합물)을 형성하기 위한 유기 용매 내에서 자발적으로 혼합되고, 여기서 혼합물 이전에 TF-NωPE가 제조되고 선택적으로 정제된다. 지질 혼합물 C-1은 그 후 리포좀-함유 조성물 C-2(추가적인 지질 성분(들):NωPE: TF-NωPE(약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 함유))를 형성하기 위해 수성 용액과 함께 혼합될 수 있다. 이렇게 형성된 리포좀-함유 조성물이 약물 또는 표지된 화합물을 함유하지 않으며, 약물 또는 표지된 화합물은 리포좀-함유 조성물(C2-A)의 형성 후에 첨가될 수도 있다. 또 다르게는, 수성 용액을 포함하는 약물 또는 표지된 혼합물이 초기의 출발 성분으로서 사용되는 곳에서, 리포좀-함유 조성물은 모든 출발 성분의 혼합으로 자발적으로 형성될 수 있다.
C-2(약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 함유) 또는 C2-A는 그 후 리포좀(C-3)을 형성하기 위해 처리될 수도 있다. C-3가 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않는 곳에서, 리포좀은 앞서 기술된 바와 같은(예를 들어, 추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE 리포좀) 블랭크 리포좀 일 것이다. C-3가 약물 또는 표지된 화합물을 포함하는 곳에서, 리포좀은 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀 일 것이다. C-3가 블랭크 리포좀인 곳에서, 약물 또는 표지된 화합물은 앞서 기술된 바와 같이, 표적 리포좀을 형성하기 위한 다음 단계에서 블랭크 리포좀에 추가된고, C-3의 제조 후 또는 지연 후 즉시 수행될 수도 있고, 기간동안 C-3 블랭크 리포좀의 저장을 포함할 수도 있다.
추가적인 또 다른 제조 방법에서, 방법 D, 각각의 성분은 지질 혼합물(D-1)(예를 들어, 조성물:추가적인 지질 성분(들);NωPE; 또는 성분:추가적인 지질 성분(들):NωPE:약물 또는 표지된 화합물)을 형성하기 위한 유기 용매에서 자발적으로 혼합된다. 지질 혼합물 D-1은 그 후 리포좀-함유 조성물 D-2(추가적인 지질 성분(들):NωPE:(약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 함유))를 형성하기 위해 수성 용액과 혼합될 수 있다. 리포좀-함유 조성물 D-2는 그 후 리포좀-함유 조성물 D-3(추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE(약물 또는 표지된 화합물))를 형성하기 위해 TF-NωPE와 혼합될 수 있고, 혼합물 이전에 TF-NωPE가 제조되고 선택적으로 정제된다. 이렇게 형성된 리포좀-함유 조성물은 약물 또는 표지된 혼합물을 함유하지 않고, 약물 또는 표지된 화합물은 리포좀-함유 조성물(D3-A)의 형성 후에 첨가될 수도 있다. 또 다르게는, 여기서 수성 용액을 포함하는 약물 또는 표지된 화합물은 초기의 출발 성분으로서 사용되고, 리포좀-함유 조성물은 모든 성분을 혼합하여 자발적으로 형성될 수 있다.
D-3(약물 또는 화합물을 선택적으로 함유) 또는 D3-A는 그 후 리포좀(D-4)를
형성하기 위해 처리될 수도 있다. 여기서 D-4는 약물 또는 표지된 화합물을 포함하지 않으며, 리포좀은 앞서 기술된 바와 같이(예를 들어, 추가적인 지질 성분(들):NωPE:TF-NωPE 리포좀) 블랭크 리포좀일 것이다. 여기서 D-4는 약물 또는 표지된 화합물을 포함하고, 리포좀은 본원에 기술된 바와 같이 표적 리포좀일 것이다. 여기서 D-4는 블랭크 리포좀이고, 약물 또는 표지된 화합물은 앞서 기술된 바와 같이, 표적 리포좀을 형성하기 위한 다음 단계에서, 블랭크 리포좀에 첨가될 수도 있고, D-4의 제조 후에 또는 지연 후에 즉시 수행될 수도 있고, 기간동안 D-4 리포좀의 저장을 포함할 수도 있다.
제조 방법 A에 의해 형성된 지질 혼합물, 리포좀-함유 조성물 및 리포좀에서와 같이, 출발 물질은 제조 방법 C 또는 방법 D의 개시 단계에 앞서 이러한 기질이 실질적으로 없는 한, 제조 방법 C 또는 방법 D에 의해 제조된 지질-함유 조성물은 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르(예를 들어, 카르보디이미드(예를 들어, DCC, EDC 등), 아실화된 우레아 화합물 등)와 관련된 비-NHS 출발 물질, 부산물 및/또는 분해 생성물이 실질적으로 없을 것이다. 여기서 SuccNωPE는 출발 물질로서 포함되지 않고(그런 까닭에 리포좀의 내부에 포함되지 않음), TF-NωPE가 출발 물질로서 수행되고 사용될 때와 같이, 리포좀 또는 리포좀-함유 조성물은 또한 NHS가 없거나 실질적으로 없다. 특정 구체예에서, 제조 방법 C 또는 D에의해 제조된 지질-함유 조성물은 DCC 및 EDC가 실질적으로 없다. 어떤 구체예에서, 제조 방법 C 또는 방법 D에 의해 제조된 지질-함유 조성물은 DCC가 실질적으로 없다.
어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 하나 이상의 인지질(예를 들어, 포스파티딜 콜린 등) 및 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체를 포함한다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 본원에 기술된 바와 같은, DMPC, POPC, DSPC 등이다. 어떤 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 DMPC 또는 DSPC이다. 특정 구체예에서, 추가적인 지질(들)은 인지질 및 콜레스테롤이다. 어떤 구체예에서, 인지질은 중성 인지질이다.
어떤 구체예에서, 추가적인 지질 성분(들)은 적어도 두 개의 다른 중성 지질을 포함하고, 이는 인지질(예를 들어, 포스파티딜 콜린 등) 및 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체를 포함한다. 특정 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 본원에 기술된 바와 같은 DMPC, POPC, DSPC 등이다. 어떤 구체예에서, 포스파티딜 콜린은 DMPC 또는 DSPC이다. 특정 구체예에서, 적어도 두 개의 다른 중성 지질은 인지질 또는 콜레스테롤이다.
일부 구체예에서, NωPE는 NG-PE이다. 특정 구체예에서, NωPE는 Nω-DOPE 또는 Nω-DSPE이다. 어떤 구체예에서, NωPE는 NG-DOPE 또는 NG-DSPE이다.
특정 구체예에서, TF는 예를 들어, 아시알로당단백질, 폴산염, 트랜스페린 등이다. 어떤 구체예에서, TF는 트랜스페린(Tf)이다. 일부 구체예에서, TF-NωPE는 Tf-NωPE(예를 들어, Tf-NG-DOPE 또는 Tf-NG- DSPE)이다.
특정 구체예에서, 약물은, 예를 들어, 항암제(예를 들어, 옥살리플라틴, 토포이소머라아제 I 억제제, 빈카 알칼로이드 등)이다. 다른 구체예에서, 지질 혼합물 또는 리포좀-함유 조성물은 표지된 화합물을 포함한다. 일부 구체예에서, 지질 혼합물 또는 리포좀-함유 조성물은 표지된 화합물 또는 약물을 포함하지 않는다.
앞서 언급된 바와 같이, 각각의 지질 혼합물은, 본원에 상세히 기술된 바와 같이, 리포좀-함유 조성물을 형성하기 위한 수성 용액과 함께 혼합될 수도 있고 각각의 리포좀-함유 조성물은 대응하는 리포좀(예를 들어, 표적 리포좀(예를 들어, 약물 또는 표지된 화합물을 포함), 중간체 리포좀, 블랭크 리포좀 등)을 형성하기 위해 처리될 수도 있다.
본원에 기술된 제조 방법의 변화에 대하여, NHS를 갖는 NωPE의 변형, TF를 갖는 NHS-NωPE의 변형, 지질 혼합물로부터 리포좀-함유 조성물의 제조, 및 리포좀-함유 조성물로부터 리포좀의 제조는 본 명세서에서 제공된 기술을 주어진 부적당한 실험없이 본원에 기술된 바와 같이 당업자에 의해 수행될 수도 있는 것으로 의도되며, 특히, 실시예에 나타나는 바와 같은 제조 방법 A 및 B의 상세한 설명을 포함한다.
약학적 제형
다른 측면에서, 본 발명은 필요로 하는 환자에 치료 또는 진단을 위한 약학적 제형을 제공하며, 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 보존제 또는 다른 비활성 성분을 포함하고, 앞선 것들의 조합, 당업자에게 공지된 것 및 본원에 추가적으로 기술된 것을 포함한다.
약학적 제형의 어떤 구체예에서, 지질-함유 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 표적 리포좀이다. 다른 구체예에서, 지질-함유 조성물은 리포좀-함유 조성물이다. 일부 구체예에서, 지질-함유 조성물은 리포좀-함유 조성물이다. 일부 구체예에서, 지질-함유 조성물은 블랭크 리포좀이다. 어떤 구체예에서, 조성물은 약물을 포함한다. 다른 구체예에서, 조성물은 표지된 화합물을 포함한다.
어떤 구체예에서, 담체는 하나 이상의 멸균수, 완충 용액 또는 염수, 희석액, 및 이들의 조합을 포함할 수도 있다.
약학적 제형은 하나 이상의 다른 염, 당, 단백질, 녹말, 젤라틴, 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜 등을 포함하며, 이들의 두 개 이상의 조합을 포함한다.
본 발명의 추가적인 측면은 의약의 제조에서, 본원에 기술된 바와 같은 조성물 및 이들의 제형의 사용을 포함한다. 특히 본원에 기술된 바와 같은 질병의 치료 또는 진단의 사용의 위한 약제의 제조. 추가적으로, 본원에 다양하게 기술된 활성 조성물 및 이들의 제형은 또한, 다른 방법으로 기술되지 않는다면, 본원에 기술된, 방법에 따라, 질환의 치료 또는 진단의 사용을 위한 약제의 제조에서 사용을 위해 의도된다.
조성물의 용도
투여
앞서 기술된 바와 같이, 한 가지 측면에서 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물을 함유하는 약물- 또는 표지된 화합물-(예를 들어, 표적 리포좀, 약물-/표지된 화합물-리포좀을 함유-조성물을 함유) 및 본원에 기술된 바와 같은 약학적 제형을 사용하는 치료 또는 진단의 방법이 제공된다.
한 가지 구체예에서, 방법은 본원에 기술된 질병의 치료에 앞서 치료적 접근으로서 수행될 수도 있다. 따라서, 특정 구체예에서,표지된 약물-함유 지질-함유 조성물 또는 약학적 제형은 인간을 포함하는, 이것을 필요로 하는 환자들에서 본원에 기술된 질병을 치료하는데 사용될 수도 있다. 방법은 일반적으로 질병을 치료하기 위해 효과적인 조성물 또는 본원에 기술된 제형을 환자에 투여하는 것을 포함한다.
다른 구체예에서, 방법은 본원에 기술된 질병의 진단에 앞서 진단적 접근으로서 수행될 수도 있다. 게다가, 특정 구체예에서, 표지된 화합물-함유 지질-함유 조성물 또는 약학적 제형을 함유는 인간을 포함하는, 이것을 필요로 하는 환자에 본원에 기술된 질병을 진단하는데 사용될 수도 있다. 방법은 일반적으로 질병의 진단에 효과적인 본원에 기술된 조성물, 또는 제형물의 양을 환자에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 투여는 일반적으로 질병을 검출하는 방법과 함께 시작된다.
일부 구체예에서, 환자는, 이에 제한 되는 것은 아니지만, 인간, 솟과, 말과, 고양이과, 갯과, 설치류 또는 영장류를 포함한다. 다른 구체예에서, 환자는 인간이다.
용어, "약학적으로 유효한 양" 또는 "치료적으로 유효한 양"은 특정된 질환, 질병 또는 병 또는 하나 이상의 그것의 증상을 치료하고/또는 질병 또는 질환의 발생을 예방하기에 충분한 조성물의 양을 의미한다. 암에 관하여, 약학적으로 또는 치료적으로 유효한 양은, 다른 것들 사이에서, 종양이 줄어드는 원인이 되고 또는 종양의 성장률을 감소시키는 충분한 양을 포함한다.
용어 "진단에 유효한 양" 또는 "진단적으로 유효한 양" 또는 "진단을 위해 유효한 양" 이들의 유사어는 특정 질병, 질환 또는 병 및/또는 하나 이상의 그것의 징후를 진단하기에 충분한 조성물의 양을 의미하며, 여기서 진단은 질병의 존재의 확인 및/또는 질병의 정도 또는 격함의 검출을 포함한다. 예를 들어, 암에 대하여, "진단적으로 유효한 양"은, 예를 들어, 하나 이상의 질병세포들, 종양(들) 또는 다른 암의 징후의 존재 및/또는 농도를 검출하기에 충분한 양을 포함한다. 종종, 진단은 질병이 없는 환자들을 위해 관찰된 기준선 또는 배경 검출 수준을 의미하는 것으로 수행될 것이다. 상기 배경기술 또는 기준 수준의 검출 수준(검출의 완화된 수준)은, 일부 경우에서, 존재의 표시 및 질병의 격렬함이다.
치료의 방법 및 약물-함유 지질-함유 조성물의 사용에 대해 사용될 때, "이것이 필요한" 환자는 치료되어야 하는 질병에 대해 진단되거나 미리 치료된 환자일 수도 있다. 진단 방법 및 조성물을 함유하는 표지된 화합물의 사용에 대해, "이것이 필요한" 환자는 질병을 갖는 것으로 의심되고, 질병에 대한 위험에 있고(예를 들어, 질병의 가족력, 질병에 대한 위험을 나타내는 라이프-스타일 요소(예를 들어, 폐암에 대한 위험 요소로서 흡연 등)) 또는 이전에 질병을 진단(예를 들어, 진단은 시간 및/또는 치료와 관련된 질병의 격렬함(예를 들어, 진행/퇴보)의 모니터링을 포함할 수 있다)받은 적이 있는 환자일 수도 있다.
어떤 구체예에서, 치료 또는 진단되어야 하는 질병은 암이다. 일부 구체예에서, 암은 위암, 결장암, 직장암 또는 유방암일 수도 있다. 어떤 구체예에서, 암은 결장암이다. 다른 구체예에서, 암은 유방암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 위암이다. 일부 구체예에서 암은 췌장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 뇌종양, 간암, 신장암, 전립선암, 방광암, 난소암, 또는 혈액암(예를 들어, 백혈병, 림프종, 다발성 골수종 등)이다.
본원에 기술된 제형을 포함하는 약물-함유 조성물은 단독으로 또는 다른 치료방법(예를 들어, 보조적 암치료, 조합된 방식의 치료법)과 관련하여(예를 들어, 이전, 동시에, 후에)사용될 수도 있다. 예를 들어, 다른 치료제(예를 들어, 본원에 기술된 것 및 당업자에게 공지된 것(예를 들어, 알킬화제, 탁산, 대사길항제, 항종양 항생물질, 식물성 알칼로이드, 호르몬 치료약물, 분자적 표적 약물 등)과 같은 암의 화학요법 약제), 외과적 수술, 및/또는 방사선 치료와 조합. 여기서 치료되어야 하는 질병은 암이고, 본원에 기술된 조성물은 본원에 기술되고 당업계에 공지된 바와 같은 하나 이상의 다른 항암제 또는 세포독성 화합물, 부작용 및/또는 이것의 임상적인 증상의 발생 및/또는 격렬함을 감소시키기 위한 하나 이상의 추가적인 약제, 외과적 수술(예를 들어, 종양 또는 림프절을 제거하는 것 등) 또는 방사선과 함께 투여될 수 있다. 여기서 하나 이상의 외과적 수술 또는 방사선은 치료 처방의 부분이고, 조성물은 방사선 치료 또는 외과적 수술 이전, 동시, 또는 후에 투여될 수도 있다. 마찬가지로, 본원에 기술된 바와 같은 조성물, 및 이것의 제형은 하나 이상의 항암제의 투여 이전, 동시, 또는 후에 투여될 수도 있다. 본원에 기술된표적 리포좀 및 이들의 제형은 또한 질병 또는 치료 처방과 관련된 증상을 완화하기 위한 약물(예를 들어, 구토, 탈모, 면역억제, 설사, 발진, 감각 장애, 빈혈, 피로, 구내염, 수족구 증후군 등을 감소시키기 위한 약물)과 함께(예를 들어, 이전, 동시, 후에) 투여될 수도 있다. 표적 리포좀은 치료 처방의 한 단계 이상(전체를 포함)에서 투여될 수도 있다(예를 들어, 수술 후 및 방사선 치료와 동시 및 후, 등).
본원에 기술된 제형을 포함하는, 표지된 화합물-함유 조성물은 단독 또는 치료방법(예를 들어, 보조적 암치료, 조합된 치료 방식)과 함께(예를 들어, 이전, 동시, 또는 후에) 사용될 수도 있다. 예를 들어, 조성물은 치료 과정을 모니터링 하는데 사용될 수도 있다. 예를 들어, 치료되어야 하는 질병이 치료 처방(치료 방법에 관해 상기 기술된 바와 같음) 이전, 후에 또는 동시에 검출가능하다면, 결정된다.
어떤 구체예에서, 조성물은 외과적 수술(종양 또는 림프절의 제거 등) 이전 또는 후에 투여된다. 다른 구체예에서, 조성물은 외과적 수술 후 및 방사선 치료 이전, 동시에 또는 후에 투여된다. 본원에 기술된 조성물의 투여와 함께 본원에 기술된 것을 포함하는, 하나 이상의 외과적 수술 및/또는 방사선 치료의 최적의 조합 및, 선택적으로, 추가적인 하나 이상의 화학치료적 약제는, 환자에 기초하는 의사가 참여하고 특정 환자에 영향을 주는 다양한 요소를 고려함으로써 결정될 수 있다.
특정 구체예에서, 약물-함유 조성물 또는 약학적 제형은 5-플루오로우라실 및/또는 류코보린의 하나 또는 모두의 조합에서 투여될 수도 있다. 다른 구체예에서, 약물-함유 조성물 또는 약학적 제형은 카페시타빈, UFT/LV(테가푸르-우라실 및 류코보린), 이리노테칸, 항 EGFR 항체(예를 들어, 세툭시맙 등), 항 VEGF 항체(예를 들어, 아바스틴 등), 티로신 키나아제 억제제(예를 들어, 에를로티닙)등과 같은 하나 이상의 항암제와 조합하여 투여될 수도 있다. 이러한 투여는 또한 방사선 치료 및/또는 외과적 수술을 포함하는 치료 처방과 조합될 수도 있다. 어떤 구체예에서, 표적 리포좀 내 캡슐화된 약물은 옥살리플라틴이다.
본원에 기재된 방법과 함께, 본 발명의 지질-함유 조성물 또는 약학적 제형은 비경구적으로 투여될 수도 있다. 비경구 투여는 볼루스 주사(IV), 주입(IV), 복강내 주사를 통해, 또는 국소 주사(두개내 주사와 같은)를 통해 수행될 수도 있다. 일부 구체예에서, 투여는 볼루스 주사 또는 연속적인 주입을 통한다.
지속정맥주입은 수 분 또는 수 시간에 걸쳐서 투여될 수도 있다. 예를 들어, 이에 제한 되는 것은 아니지만, 약 10분 내지 약 5시간, 약 15분 내지 약 4시간; 약 30분 내지 약 4시간; 약 45분 내지 약 4시간, 약 60분 내지 약 4시간, 약 45분 내지 약 3 시간, 약 60분 내지 약 2시간, 약 90분 내지 약 3시간, 약 90분 내지 약 2 시간, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 30분, 약 45분, 약 50분, 약 60분, 80분, 약 1.5시간, 약 2시간, 약 2.5시간, 약 3시간, 약 3.5시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 12시간, 약 24시간, 약 36시간, 또는 약 48시간.
제형 및 투여량
앞서 기술한 바와 같이, 본원에 기술된 바와 같은 지질-함유 조성물 및 약학적 제형은 본원에 기술된 사용 방법과 함께 본원에 기술된 바와 같은 질병의 치료 또는 진단을 위해 필요로 하는 환자에 투여될 수도 있다.
본원에 기술된 지질-함유 조성물 및, 본원에 기술된 특정 표적 리포좀은 의도된 결과를 달성하기 위해 유효한 양, 예를 들어, 치료되어야 하는 특정 질병을 치료 또는 예방하는데 유효한 양에서 일반적으로 사용될 것이다. 조성물(들)은 치료적 이점을 달성하기 위해 치료적으로 투여될 수도 있다. 치료적 이점은, 환자가 근본적인 질병으로 여전히 고생할 수도 있음에도 불구하고, 환자가 느낌 또는 상태에서 개선을 보고하는 것과 같은 치료되어야 하는 근본적인 질병의 근절 또는 개선 및/또는 근본적인 질병과 관련된 하나 이상의 증상의 근절 또는 개선을 의미한다. 치료적 이점은 또한 개선을 깨닫는 것과 상관없이, 질병의 진행의 정지 또는 늦춤을 포함한다.
일부 구체예에서, 치료되어야 하는 질병은 암이고, 유효한 양은 종양 성장을 감소시키기에 충분한 양이다(예를 들어, 치료 전 및/또는 후에 평균 종양 부피의 증가율에 의해 측정되는 바와 같음). 어떤 구체예에서, 유효한 양은 평균 종양 부피를 감소시키기에 충분한 양이다(예를 들어, 치료 후의 평균 종양 부피는 치료 전의 평균 종양 부피와 비교하여 감소된다).
캡슐화된 약물의 유효한 양을 투여하기 위하여 투여되는 조성물의 양은, 예를 들어, 치료되어야 하는 특정 질병, 투여 방법, 치료되어야 하는 질병의 격렬함 및 환자의 연령, 체중, 조성물의 생체적합성, 치료되어야 하는 환자에 의해 경험되는 부작용 등을 포함하는 다양한 요인에 의존할 것이다. 효과적인 투여량의 결정은 본원제 제공된 기술에 대한 당업자의 능력 내에서 용이하다.
어떤 구체예에서, 특정 시간 지점에서 투여되는 캡슐화된 옥살리플라틴의 투여는 약 1 내지 약 400mg/m2/일의 범위 안에 있을 것이다. 예를 들어, 약 1 내지 약 350mg/m2/일, 약 1 내지 약 300mg/m2/일, 약 1 내지 약 250mg/m2/일, 약 1 내지 약 200mg/m2/일, 약 1 내지 약 150mg/m2/일, 약 1 내지 약 100mg/m2/일, 약 5 내지 약 80mg/m2/일, 약 5 내지 약 70mg/m2/일, 약 5 내지 약 60mg/m2/일, 약 5 내지 약 70mg/m2/일, 약 5 내지 약 50mg/m2/일, 약 5 내지 약 40mg/m2/일, 약 5 내지 약 20mg/m2/일, 약 10 내지 약 80mg/m2/일, 약 10 내지 약 70mg/m2/일, 약 10 내지 약 60mg/m2/일, 약 10 내지 약 50mg/m2/일, 약 10 내지 약 40mg/m2/일, 약 10 내지 약 20mg/m2/일, 약 20 내지 약 40mg/m2/일, 약 20 내지 약 50mg/m2/일, 약 20 내지 약 90mg/m2/일, 약 30 내지 약 80mg/m2/일, 약 40 내지 약 90mg/m2/일, 약 40 내지 약 100mg/m2/일, 약 80 내지 약 150mg/m2/일, 약 80 내지 약 140mg/m2/일, 약 80 내지 약 135mg/m2/일, 약 80 내지 약 130mg/m2/일, 약 80 내지 약 120mg/m2/일, 약 85 내지 약 130mg/m2/일, 약 80 내지 약 120mg/m2/일, 약 85 내지 약 140mg/m2/일, 약 85 내지 약 135mg/m2/일, 약 85 내지 약 135mg/m2/일, 약 85 내지 약 130mg/m2/일, 또는 약 85 내지 약 120mg/m2/일의 범위 내. 특정 시간 지점에서 투여되는 투여량은 또한 약 130mg/m2/일, 약 120mg/m2/일, 약 100mg/m2/일, 약 90mg/m2/일, 약 85mg/m2/일, 약 80mg/m2/일, 약 70mg/m2/일, 약 60mg/m2/일, 약 50mg/m2/일, 약 40mg/m2/일, 약 30mg/m2/일, 약 20mg/m2/일, 약 15mg/m2/일, 또는 약 10mg/m2/일 일 수도 있다.
투여되는 투여량은 본원에 기술된 투여 범위보다 높은 수도 또는 낮을 수도 있고, 다른 요인, 조성물의 생체이용가능성, 부작용에 대한 환자의 인내력, 상기 논의된 투여 방법 및 다양한 요인에 의존한다. 투여량 및 간격은 처방하는 의사의 판단에 따라 치료 효과를 유지하기에 충분한 조성물의 혈장 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조절될 수도 있다. 당업자는 본원제 제공된 기술의 관점에서 부적절한 실험없이 유효한 국소 투여를 최대한 활용할 수 있다.
투여량은 또한 당업자에 의해 인식될 바와 같이 생체 내 동물 모델을 사용하여 측정될 수도 있다.
본원에 기술된 바와 같은 조성물의 복합 투여(예를 들어, 지속적 또는 볼루스)는 또한 시간, 일, 주, 또는 월의 과정에서 이것이 필요한 환자에 투여될 수도 있다. 예를 들어, 이에 제한 되는 것은 아니지만, 매일, 격일마다, 10일마다, 주마다, 월마다, 1주에 2회, 1주에 3회, 1개월에 2회, 1개월에 3회, 1개월에 4회, 1개월에 5회, 격월마다, 3개월에 1회, 4개월에 1회 등이다.
키트
조성물을 포함하는 약학적 제형을 포함하는, 본원에 기술된 조성물의 투여를 위한 키트가 또한 제공된다.
어떤 구체예에서 키트는 본원에 설명된 바와 같은 적어도 하나의 지질-함유 조성물, 또는 이들의 약학적 제형의 투여량(예를 들어, 치료 또는 진단을 위해 사용되는 바와 같음)을 포함할 수도 있다. 키트는 조성물의 사용을 위한 적당한 패키징 및/또는 설명서를 포함할 수도 있다. 키트는 또한 본원에 기술된 바 및 당업자에게 공지된 것과 같은 주사를 위한 주사기 또는 다른 장치와 같은 조성물, 또는 이들의 약학적 제형을 위한 전달 수단을 포함할 수도 있다.
일부 구체예에서 키트는 본원에 설명된 바와 같은, 블랭크 리포좀, 또는 이들의 약학적 제형의 투여량(예를 들어, 치료 또는 진단을 위해 사용되는 바와 같음)을 포함할 수도 있다. 키트는 조성물의 사용을 위한 적당한 패키징 및/또는 설명서를 추가적으로 포함할 수도 있다. 키트는 또한 본원에 기술된 것 및 당업자에게 공지된 것과 같은 주사를 위한 주사기 또는 다른 장치와 같은 조성물, 또는 이들의 약학적 제형을 위한 전달 수단을 포함할 수도 있다. 추가적으로, 어떤 구체예에서, 키트는 블랭크 리포좀에 포함되는 약물 또는 표지된 화합물의 투여량을 분리시키는 것을 함유할 수도 있다.
추가적으로, 지질-함유 조성물, 또는 이들의 약학 제형물은 키트의 형태에서 조립될 수도 있다. 키트는 지질-함유 조성물, 또는 이들의 약학적 제형 및 투여를 위한 조성물을 제조하기 위한 시약을 제공한다. 조성물은 건조 또는 동결건조된 형태에서, 또는 용액, 특히 멸균 용액에서 있을 수도 있다. 조성물이 건조 형태에 있을 때, 시약은 액체 제형을 제조하기 위한 약학적으로 허용가능한 희석제를 포함할 수도 있다. 이러한 희석제는 당업자에게 공지된 것, 예를 들어, 당 용액, 예를 들어, 덱스트로오스, 수크로오스 등을 포함한다. 어떤 구체예에서, 키트는 약 1% 내지 약 20%, 약 1% 내지 약 18%, 약 1% 내지 약 15%, 약 1% 내지 약 10%, 약 3% 내지 약 10%, 약 3% 내지 약 6%, 약 1% 내지 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 12%, 약 15%, 약 18%, 또는 약 20% 당의 당 용액을 포함할 수도 있다. 어떤 구체예에서, 지질-함유 조성물은, 예를 들어, 표적 리포좀, 블랭크 리포좀, 지질 혼합물, 또는 리포좀-함유 조성물(약물 또는 표지된 화합물을 선택적으로 함유)일 수도 있다.
키트는 또한 이에 제한 되는 것은 아니지만, 주사기, 피펫, 또는 당업자에게 공지된 다른 장치를 포함하는 조성물의 투여를 위한 장치를 함유할 수도 있다. 젖은 형태에 있을 때, 조성물은 앰플 또는 당업자에게 공지된 것을 포함하는 다른 멸균 봉인된 용기 내에 있을 수도 있다.
키트는 본원에 기술된 화합물과 함께 사용을 위한 다른 치료적 화합물을 포함할 수도 있다. 한 가지 구체예에서, 치료적 약제는 다른 항암제이다. 이들 약제는 분리된 형태에서, 또는 본 발명의 화합물과 혼합되어 제공될 수도 있으며, 제공된 이러한 혼합물은 조성물의 추가적인 치료제 및 본원에 기술된 제형의 유효성을 감소시키지 않는다. 유사하게 키트는 보조 치료를 위한 추가적인 약제를 포함할 수도 있다. 예를 들어, 약물의 부작용을 줄이기 위한 약제(예를 들어, 항-구토제, 항-탈모제, 면역-향상제 등).
키트는 조성물의 제조 및 투여, 조성물의 부작용, 및 다른 관련된 정보에 대한 적당한 설명서를 포함할 것이다. 설명서는 이에 제한되는 것은 아니지만, 인쇄물, 비디오테잎, 컴퓨터 판독가능한 디스크 또는 광디스크를 포함하는 적당한 형식으로 있을 수도 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 병을 겪고 있거나 본원에 기술된 질병에 감염되기 쉬운 환자를 치료하기 위한 키트가 제공되며, 본원에 설명된 바와 같은 지질-함유 조성물 또는 이들의 제형의 투여량을 포함하는 첫 번째 용기, 및 사용을 위한 설명서를 포함한다. 용기는 당업계에서 공지되어 있고 정맥 제형의 저장 및 전달을 위해 적당할 수도 있다. 어떤 구체예에서, 키트는 환자에 투여되어야 하는 조성물의 제조를 위한 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 보조제 등을 포함하는 두 번째 용기를 포함한다.
키트는 또한, 일주일, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3달, 4달, 5달, 6달, 7달, 8달, 9달 또는 그 이상과 같은 연장되는 기간 동안 환자를 위한 유효한 치료를 제공하기 위해 본원에 설명되는 바와 같은 조성물 또는 이들의 제형의 충분한 투여량을 함유하는 것으로 제공될 수도 있다.
키트는 또한 지질 함유 조성물 또는 이들의 제형의 복합 투여 및 사용을 위한 설명서를 포함할 수도 있고 약국, 예를 들어, 병원 약국 및 조제 약국에서 저장 및 사용을 위해 충분한 양으로 포함된다.
모든 특허, 특허 출원 및 공개는 그것들 전체가 참고로써 본원에 포함되는 것으로 언급된다.
본 발명은 참고적으로 하기의 실시예가 추가적으로 기술된다; 그러나, 이들 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
실시예 1: 옥살리플라틴에 대한 세포독성 시험
옥살리플라틴(l-OHP) 용액을 9% 수크로오스 용액(수크로오스/증류수)에 8mg/ml의 농도에서 옥살리플라틴을 용해시킴으로서 제조하였다. 세포 생존 능력을 상업적으로 이용가능한 세포독성 분석 키트(WST-I kit, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan)를 사용하여 결정하였다.
AsPC-1 세포(Dr. Hironobu Yanagie of Research Center for Advanced Science and Technology, the University of Tokyo, Japan에 의해 제공됨)를 10% FCS(소태아 혈청; SIGMA, USA)으로 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하였고, 5% CO2에서 48시간 동안 37℃에서 l-OHP 용액[200 x (1/2)(0-10)nM]의 농도로 처리하였다. 그 후 배지를 제거하였고 기질(WST-I, Cell Counting Kit, Dojindo Laboratories, Japan)을 세포에 첨가하여 37℃에서 5% CO2에서 2시간 동안 배양하여 착색된 생성물이 나타났다. 나타난 색을 Immuno Mini NJ-2300(Cosmo Bio Co., Ltd., Japan)에서 450nm의 흡광도(참고 파장:620nm)에서 측정하였다.
결과를 도 6에 나타내었다. l-OHP의 세포독성은 LD50>8μg/ml이 된다는 것을 확인하였다.
실시예 2: 세포 표면 상에서 트랜스페린 수용체 수의 결정
인간 정상적인 백혈구 및 인간 악성 종양-유도된 세포 라인(K562, MKN45P and HL60)을 실험에서 사용하였고 하기와 같은 것을 얻었다: K562:TKG0210 (Cell Resource Center for Biomedical Research, Institute of Department, Aging and Cancer, Tohoku University, Japan); MKN45P: Dr. Hisae Iinuma, Teikyo University School of Medicine, Japan; HL60:TKG0345 (Cell Resource Center for Biomedical Research, Institute of Department, Aging and Cancer, Tohoku University, Japan).
각각의 세포 표면 상에서 Tf(트랜스페린) 수용체의 수는 Scatchard 분석으로 결정하였다(Comp. Biochem. Physiol., 116B, 137-160 (1949), 마이크로소프트 엑셀 사용). 125I-표지된 Tf의 용액(Na-125I (PerkinElmer Japan Co., Ltd., Japan) 및 h-Tf(T-4132, SIGMA, USA)를 iodogen 방법에 의해 조합하였다(Biochem. Biophys. Res. Commun., 122, 319-325 (1984))을 4℃에서 [300 x (1/2)(0~9)nM] 범위의 다른 농도에서 각각의 세포 배지에 첨가하였고 1시간 동안 배양하였다.
125I-표지된 Tf의 농도를 Lowry 방법에 의한 단백질 정량 분석에 의해 결정하였고(J. Biol. Chem., 193, 265-270 (1951)) 감마선 계측기를 사용하여 방사능을 측정하였다(Auto Well Gamma System ARC-300, Aloka Co., Ltd., Japan). 간단하게, 용액을 세포를 침전시키기 위해 원심분리하였고, 세포 단편을 빙냉된 PBS로(180 x g (중력)), 3분 동안 세척하였고, 3회 반복한 후 감마선 계측기로 방사능을 측정하여 세포 표면에 결합된 Tf의 농도를 결정하였다. 세포의 수를 Lowry 방법(J. Biol. Chem., 193, 265-270 (1951))을 사용하는, 단백질 정량분석에 의해 결정하였다.
각 데이터 지점에 대해, 결합되지 않은 Tf의 농도를 알고 있는 첨가된 Tf의 농도로 부터 결합된 Tf 농도를 감함으로써 결정하였다. Scatchard 플롯을 가로축 상 결합된 Tf의 농도 및 세로축 상에 결합되지 않은 Tf의 농도에 대한 결합된 Tf의 농도 비를 플롯팅 함으로써 도해하였다. 결합된 Tf의 수(즉, 수용체의 수)를 본원에 전체가 참고로써 포함된 Proc. Natl. Acad. ScL USA, 80 2263-2266 (1983); J. Cell Physiol, 132, 492-500 (1987); Proc. Natl. Acad. ScL USA, 92 3318-3322 (1995); J. Pharm. ScL, 84, 216-220 (1995); Eur. J. Biochem., 186, 367-373 (1989); J. Biol, Chem., 258, 4715-4724 (1983)에서 기술된 바와 같이 그래프의 x 절편으로부터 결정하였다.
다른 세포 형태 내의 세포 표면에 결합된 125I-Tf의 수는 도 7에서 보여진다. 세포 라인의 세포 표면 상 트랜스페린(Tf) 수용체의 수는 인간 악성 종양으로부터 유도되었으며 정상 백혈구에서보다 유효하게 높다.
실시예 3: NHS -NG-DOPE의 제조
NG-DOPE (Avanti Polar Lipids, Inc., USA) ( Cat. No. 870242, MW 880.13))의 질량 200mg을 다리가 2개인 원뿔형 플라스크에서 무게를 재었다. 플라스크에 39.2 mg NHS (Sigma, USA, MW = 115.09)를 첨가하였다. 다음에, 5mL의 클로로포름/에틸 아세테이트(1:1(v/v), Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 일본)를 첨가하였고, 교반하여 NG-DOPE 및 NHS를 용해시키기 시작하였다. 약간의 혼탁함이 관찰되었다.
초기의 혼합 다음에 교반 바를 첨가하였고 플라스크를 조정하여 플라스크의 한 개의 다리를 통해 질소 기체를 서서히 불어 넣었고 고무마개로 밀봉하였다. 질소 기체 하의 교반을 교반 바 및 교반 플레이트를 사용하여 달성하였다. 두 번째 다리를 튜브로 밀봉하였다. 반응을 주변 온도(20-23℃)에서 수행하였다. 혼합물을 5 내지 10분 동안 교반하였다. 지질+NHS의 20μL 샘플을 TLC 대조군으로서 사용하기 위해 따로 두었다.
분리 플라스크에서, DCC(99%, Aldrich, USA, MW: 206.33g/mol) 용액을 5mL 에틸아세테이트에서 70 mg의 DCC에 용해함으로써 제조하였다. DCC를 재빨리 용액에 용해시켜 맑은 용액을 얻었다. 이렇게 제조된 DCC 용액을 그 후 10-15분 동안 액체/NHS 반응 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물은 DCC의 첨가로 더욱 혼탁하게 되었다.
다음과 같이, TLC를 대조군(지질/NHS)에서 그리고 지질/NHS/DCC의 시료 중 하나에서 참고를 위하여 시간 0에서 수행하였다. 샘플을 TLC 플레이트(aluminum sheet-silica gel 60F254 from EM Science (Gibbstown, NJ, USA) Cat No. SP05554M)에서 50μg (20mg/ml의 2.5μL) 스팟팅하였고, 건조시킨 후 전개조에 놓아 용매(70%클로로포름, 28%메탄올, 2% 물)를 이동시켰다. 용매 앞 부분을 표시한 후 TLC 플레이트를 암모늄 몰리브데이트(10% H2SO4 내의 5% 암모늄 몰리브데이트)에 담그었고 건조기로 건조시켰다.
지질/NHS/DCC 반응 혼합물을 질소 흐름 하에서 교반하여 생성물의 형성을 시간에 걸쳐서 모니터링 (Rf 0.3-0.4)하였다
18시간 후, NHS-NG-DOPE으로의 변환은 18시간 후의 완전한 변환이 아니었고, NHS(2mL의 에틸 아세테이트 26mg) 및 DCC(1mL의 에틸 아세테이트 47mg)를 더욱 첨가하였다. 반응 진행을 20시간째 TLC로 다시 테스트하였다.
반응을 질소 흐름 및 교반을 하면서 주변 온도에서 일주일 이상 진행시켰다(빛으로부터 보호됨). 일부 출발 물질이 정제 이전에 남아있었다.
정제: 반응 혼합물은 ~30분 동안 얼음 위에서 냉각된 반응이다. 냉각된 반응 혼합물을 그 후 Buckner 깔대기를 통해 여과하였고 그 후 2 x 5 mL 클로로포름으로 3회 세척하였다. 모든 획득한 액체를 수집하였고 회전 증발로 건조시켰다. 반-고체 페이스트를 증발 후에 얻었다. 페이스트를 그 후 2-3mL 클로로포름에서 재현탁하였다.
현탁된 페이스트의 정제를 위한 실리카겔을 클로로포름 내에서 수화된 4g 실리카(400 메시)를 사용하여 제조하였다. 실리카 겔을 콕 마개를 갖는 1cm x 28cm 컬럼에 팩킹하였다. 베드의 대략적인 크기는 1 cm x 14 cm이었다. 컬럼을 클로로포름으로 평형을 유지시켰다(중력 포장됨).
샘플을 평형상태의(그러나 건조되지는 않음) 실리카 겔 컬럼에 부하시켰다. 10mL의 클로로포름이 컬럼에 첨가되었다(5 x 2 mL). 5 x 2 mL 증류 부분이 수집되었다. 유량은 중력의 기능이지만, 5 x 10 mL 증류 부분이 10-20분 후에 수집되었고 증류 부분 1-5를 지정하였다.
다음에, 5OmL의 클로로포름/메탄올(90/10, vol/vol)을 컬럼(5 x 10 mL)에 첨가하였다. 그리고 5 x 10 mL 부분을 수집하였고 증류 부분 6-10을 지정하였다.
증류 부분 6-10의 수집 후에, 100mL 부피의 클로로포름/메탄올(5/1 (v/v))을 컬럼에 첨가하였다(10 x 10 mL). 그리고 추가적인 10 x 10 mL 증류 부분을 수집하였고 증류 부분 11-15를 지정하였다.
증류 부분 6-15를 상기 기술한 TLC에 의해 분석하였다(5μL의 시약 중 하나)
증류 부분 6-15의 TLC 다음에, 증류 부분 7-11을 고이게 하였고 얇은 막에 대해 회전 증발을 사용하여 건조시켰다. 증발 후에 최종 생성물을 130mg(65% 수율) 얻었고, 정제되지 않은 반응 생성물에 대한 TLC로써 결정함으로서 NOF로부터 얻어진 표준 생성물(NHS-NG-DOPE)(일본)과 비교하였다.
실시예 4: NHS -NG-DOPE의 제조
미리 제조되고 정제된 NG-DOPE(200mg)(NOF Corporation Japan) 및 NHS(N-히드록시설포숙신이미드; 34 mg)를 무게를 달고 2개의 구멍이 있는 5mL 원뿔형 플라스크에 넣었다. 한 개의 구멍을 고무마개로 밀봉하였고 남은 구멍을 통해 교반바를 첨가하였다.
플라스크를 그 후 진공상태에 놓았고 질소 기체를 서서히 흘리면서 채웠다(3회 반복). 플라스크를 그 후 질소 벌룬을 사용하여 질소 하에서 유지시켰다.
질소 하에 놓아둔 후, 플라스크에 2.5mL 건조 클로로포름을 첨가하였고, 그 후 교반바 및 교반 플레이트를 사용하여 교반하였다. 반응을 대략 30분 동안 주변 온도에서 수행하였고 교반하여 출발 물질을 용해시켰다. 지질+NHS의 20μL 샘플을 TLC 대조군/반응의 모니터링에서 사용을 위해 따로 두었다.
61mg의 DCC(1,3-디시클로헥실카르보디이미드) 용액을 2.5mL 제조된 건조 클로로포름(맑고, 재빨리 용해됨)에서 용해시켜 제조하였다. DCC 용액을 지질/NHS에 15분에 걸쳐서 적가하였다. 용액은 DCC의 첨가로 혼탁하게 변했다.
시간 0에서, 지질/NHS 및 지질/NHS/DCC에서 TLC(70% 클로로포름, 30% 메탄올, 5% 물)를 TLC 플레이트 상에 50mg의 클로로포름을 스팟팅함으로써 반응을 모니터링하는 것을 수행하였고, 건조시켜, 반응 챔버(70% 클로로포름, 30% 메탄올, 5% 물)에 두어 이동시켰다.
반응 혼합물을 질소 흐름하에서 교반을 계속하였고 생성물의 형성(Rf 0.3 - 0.4)을 시간에 걸쳐 모니터링 하였다.
반응을 2-3일의 시간에 걸쳐서 질소 흐름 및 교반을 하면서 주변 온도에서 진행시켰다.
반응 혼합물을 그 후 Bruchner 깔대기를 통해 여과하였고 2 x 5 mL 클로로포름으로 2회 세척하였다. 완전한 용액을 수집하였고 회전-증발에 의해 건조시켰다. 반-고체 페이스트를 얻었다.
반-고체 페이스트를 2 x 3 mL 클로로포름에서 재현탁하였고, 그 후 여과하고 건조시켰다. 이 과정을 3회 반복하였다. 마지막으로, 3회 후에 생성물을 2 x 3 mL 클로로포름에서 재현탁시켰다.
컬럼 실리카 겔을 클로로포름에서 실리카를 혼합함으로써 제조한 후 콕마개를 갖는 1 cm x 28 cm 컬럼 상에 채웠다. 컬럼 베드의 대략적인 크기는 1 cm x 14 cm이었다. 컬럼은 클로로포름(중력 포장됨)으로 평형상태가 유지되었다.
샘플을 평형상태(건조시키지 않음)의 실리카 겔 컬럼에 부하하였다. 그 후 100mL의 클로로포름을 컬럼에 첨가하였고 시약 중 하나를 100mL 증류 부분에서 수집하였다. 유량은 중력의 기능이다(증류 부분 1).
증류 부분 1. 100mL의 클로로포름/메탄올(90/10, vol/vol)을 컬럼에 첨가하였다. 수집된 100mL 증류 부분.(증류 부분 2)
200mL 클로로포름/메탄올(50/10, vol/vol)을 컬럼(20 x 10 mL)에 첨가하였다. 20 x 10 mL 증류 부분을 수집하였다.(증류 부분 3 - 23.)
증류 부분 1 내지 23을 TLC를 통한 시약 중 하나의 5mL를 사용하여 분석하였다.
22를 통해 증류 부분 9를 모았고 회전-증발 및 동결건조를 사용하여 얇은 막에 대해 건조시켰다. 이들 증류 부분으로부터 NHS-NG-DOPE의 최종 무게는 61.9 mg(27.9% 수율)이었다.
실시예 5: 지질 혼합물(NG-DOPE: Tf -NG-DOPE: DMPC :CH)의 지질 혼합물의 제조
583mg의 DMPC (NOF corporation, 일본), 299mg의 콜레스테롤(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan) 및 75.7mg의 NG-DOPE(NOF corporation, Japan)를 혼합하였고 45-50℃ t-BuOH (10 v/w vs. 지질 (1OmL))에서 용해시켰다.
결과 용액을 바이알에 부었고 약 8시간 동안 -40℃에서 선반에서 냉동시켰다. 약 0.1mmHg까지 감압하였고 -40 ℃ 내지 25 ℃ 단계의 온도로 상승시키면서 2일 동안 감소된 압력을 유지시켰고, 동결건조 과정으로부터 지질 혼합물을 얻었다.
상기 획득한 동결건조된 지질 혼합물의 분말을 20mg의 Tf-NG-DOPE과 혼합하였고(실시예 29에서 제조된 바와 같음) 분쇄하였다. 50:45:5 (DMPC:Chol:NG-DOPE+Tf-NG-DOPE)지질비를 갖는, 지질 혼합물의 균질한 분말을 획득하였다.
실시예 6: 리포좀 -함유 조성물의 제조
지질 혼합물을 하기의 상세와 같은 조성물로 앞의 실시예에 따라 제조하였다:
입구 1 : DMPC/Chol/NG-DOPE(155mg/79.4mg/16.1mg)
입구 2: DMPC/Chol/NG-DOPE(155mg/79.4mg/16.1mg)
입구 3: DMPC/Chol/NG-DOPE/NHS-NG-DOPE(l52mg/77.9mg/15.8mg/4.38mg)
입구 4 : DMPC/Chol/NG-DOPE/NHS-NG-DOPE(152mg/77.9mg/15.8mg/4.38mg)
입구 5 :DMPC/Chol/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE(148mg/76.0mg/15.4mg/4.8mg)
입구 6 :DMPC/Chol/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE(148mg/76.0mg/15.4mg/4.8mg)
입구 1, 3 및 5를 각각 수화하였고 300mM의 수성 수크로오스 용액(20 v/w 대 지질(5mL) (5mL의 수크로오스 용액(20 v/w)을 건조 지질 혼합물에 첨가하였고 교반하였다)과 함께 30분 동안 40-45℃에서 교반하였다. 입구 2, 4 및 6을 각각 수화하였고 l-OHP의 수성 용액(300mL 수크로오스 용액 내 8mg l-OHP/mL, 20 v/w vs. 지질(5mL))으로 30분 동안 40-45℃에서 교반하였다. 리포좀-함유 혼합물을 얻었다.
리포좀 직경을 QELS에 의해 결정하였고 결과를 도 8에서 나타내었다. 리포좀-함유 혼합물에서 존재하는 리포좀은 500-2,000nm의 평균 직경을 가지며 100-10,000nm 주위 크기의 넓은 분포를 가진다.
실시예 7: 옥살리플라틴 -함유 리포좀(NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH)의 제조
리포좀의 조성물은 다음과 같다:
디미리스토일 포스파티딜콜린(1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린:DMPC)(NOF Corporation, 일본)
콜레스테롤(CH) (Solvay Pharmaceuticals B.V., 네덜란드)
N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민(N-글루타릴-1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 나트륨 염: DOPE-CO-(CH2)3-COOH; 이하에서 NG-DOPE로 표시함) (NOF Corporation, 일본)
Succ-N-글루타릴-디올레오일 포스파티딜 에탄올아민(N-(숙신이미딜-글루타릴)-1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 나트륨 염: DOPE-CO-(CH2)3-CO-OSu; 이하에서 NHS-NG-DOPE로 표시함) (NOF Corporation, 일본)
DMPC:CH:NG-DOPE:NHS-NG-DOPE = 50:45:4:1 (m/m).
수성층에서와 같이, l-OHP (300 mM에서 수크로오스 용액에서 8mg/ml)의 수성 용액을 사용하였다.
DMPC, CH, NG-DOPE 및 NHS-NG-DOPE (50:45:4:1의 몰비율에서)의 혼합물을 4 v/w (전체 지질 무게 대비)의 가온한 에탄올/t-부탄올/물 용매에 용해시켰다. 지질 용액을 약 45℃에서 약 8mg/mL l-OHP를 함유하는 300mM 수크로오스 용액으로 주입시켜, 용매의 농도는 약 14%v/v가 되었다.
현탁액을 약 45℃에서 약 200-800 psi의 압력하에 5개의 1OOnm 필터로 겹쳐진 압출기(Cat. No. 112105, Whatman pic, UK)를 통해 통과시켰다. 100nm 근처의 평균 직경을 갖는, 리포좀을 얻었다. 리포좀 직경을 QELS를 사용하여 결정하였다.
6L의 인산 완충 염수, 6L의 트랜스페린(Cat. No. 4455, Selorogicals, GA, USA) 용액(20mg/ml), 및 18L의 리포좀 현탁을 혼합하였고 30℃에서 15-60분 동안 교반하였다. 이것은 4mg/ml의 트랜스페린 및 20mg/ml의 지질이 함유된 반응 혼합물을 야기하였다.
트랜스페린의 정량분석을 벤더에 의해 공급된 설명서에 따라서 BCA(bicinchoninic acid) 분석으로써 수행하였다.
트랜스페린의 포함 후 분자량의 증가를 SDS-PAGE(나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동)에 의해 연구하였다. NG-DOPE의 분석을 실리카겔 컬럼(YMC PVA 실리카 컬럼, 4.6 x 250 mm, 5μm)을 사용하는 증발 산란광 검출기(ELSD2000, Alltech, MD, USA)를 갖는 고-성능 액체 크로마토그래피로 수행하였다.
실시예 8: 옥살리플라틴 -함유 리포좀(NG-DSPE:TF-NG-DSPE:DSPC:CH)의 제조
리포좀의 조성물은 다음과 같다:
디스테아로일 포스파티딜콜린(1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린: DSPC)
콜레스테롤(CH)
N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민 (N-글루타릴-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 나트륨 염: DSPE-(CH2)3-COOH; 이하에서 NG-DSPE로써 표시함)
DSPC:CH:NG-DSPE = 2:1:0.2 (mol/mol).
수성층에서와 같이, l-OHP(9% 수크로오스 용액에서 8mg/ml)의 수성 용액을 실시예 1에서와 같이, 사용하였다.
2:1:0.2 (m/m)의 비율에서 DSPC (MC8080, NOF, 일본), 콜레스테롤(038-03005, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 일본) 및 NG-DSPE(Dr. Kazuo Maruyama, Teikyo University, Faculty of Pharmaceutical Scierces, 일본)의 혼합물을 클로로포름 및 이소프로필 에테르에 용해시켰다.
결과 용액에, l-OHP의 용액(9% 수크로오스 용액)을 첨가하였고, 그 후 결과 혼합물을 약 15-30 분 동안 초음파 처리하였다. 용액을 그 후 60℃에서 회전 증발함으로써 증발시켜 용매를 제거하였고 냉동/해동을 5회 반복하였다. 현탁액을 냉동(건조 얼음/아세톤 욕에 담금으로써)시켰고 해동(그대로 따뜻한 물에 담금으로써)시켰다. 이것을 5회 반복하였다.
그 후, 결과 생성물을 EXTRUDER 필터(400nm에서 2회 그 후 100nm에서 5회), (LipexTM Extruder, Model No. T-001, Northern Lipids Inc., Canada)를 사용하여 6O℃에서 크기를 재었고, 초원심분리(200,000 x g, 60분, 약 4℃)하였다. 침전물을 9% 수크로오스 용액 또는 MES 완충액(pH 5.5)(MES buffer. Cat. No. 345-01625, Dojindo Laboratories, Japan)에서 재현탁하여 l-OHP-캡슐화된 NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀을 얻었다.
이후에, l-OHP-캡슐화된 NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀을 트랜스페린(Tf)로 유도하였다. 이와 같이 획득한 l-OHP-캡슐화된 NG-DSPE 리포좀에, 1-에틸-3-(3-디메틸암모프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드(EDC; Cat. No. #22980, Pierce Biotechnology, Inc., USA) (상대적으로 지질 무게에 2.7%의 양) 및 N-히드록시설포숙신이미드(S-NHS; 038-0432, Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Japan)(상대적으로 지질 무게에 대해 7.3%의 양)를 첨가하였고, 혼합물을 10분 동안 실온에 두었다.
그 후, 결과 용액에, 트랜스페린(Tf)(상대적으로 지질 무게의 20%의 양)(Cat. No. T4132, SIGMA, USA)을 첨가하였고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 트랜스페린(Tf)의 1mM PBS(인산 완충 염수)용액((상대적으로 전체 반응 혼합물 부피의 20%의 양) 및 1mM PBS를 첨가하였고(상대적으로 전체 반응 혼합물 부피의 20%의 양), 그리고 1시간 동안 실온에서 결과 용액을 교반하였다.
이렇게 획득한 아포형 Tf-NG-DSPE 리포좀에, 10-40 당량(트랜스페린 대비)의 시트르산 철-시트르산 나트륨(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan)을 현탁액에 첨가하여 실온에서 15분 동안 교반하였다. 결과 용액을 상기와 같이 한외여과하였다. 침전물을 그 후 9% 수크로오스 용액에서 재현탁하였고, Tf-NG-DSPE 리포좀의 홀로-형을 얻었다. 용액을 한외여과(200,000 x g, 60 분, 약 4 ℃)하였고 그 후 침전물을 9% 수크로오스 용액에서 재현탁하였다.
트랜스페린의 정량 분석을 벤더의 설명서(Cat. No. 23227, BCA(TM) Protein Assay Kit, Pierce Biotechnology, Inc., USA)에 따라, BCA(bicinchoninic acid)분석에 의해 수행하였다.
유도에서 분자량의 증가를 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)에 의해 조사하였다. NG-DSPE의 분석을 실리카겔 컬럼(YMC PVA Silica Column, 4.6 x 250 mm, 5/xm)을 사용하여 증발광산란검출기(ELSD2000, Alltech, MD, USA)를 갖는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 수행하였다.
실시예 9: PEG 화된 옥살리플라틴 -함유 리포좀의 제조
실시예 8에서 다음의 실험적 프로토콜, DSPC:콜레스테롤:DSPE-PEG(2K)-OMe:DSPE-PEG(3.4K)-COOH 리포좀(Tf-PEG-리포좀)을 제조하였다. 이들 리포좀의 성분비는 다음과 같다: DSPC:콜레스테롤:DSPE-PEG(2K)-OMe:DSPE-PEG(3.4K)-COOH =2:1:0.16:0.03.
이것은 PEG-지질의 6% 몰 및 PEG-COOH-지질의 1% 몰을 함유하였고, 그리고 Tf는 PEG-COOH를 통해 리포좀에 결합된다.
또한 실시예 8의 방법에 의해 Tf/PEG-DSPE 리포좀이 만들어졌다(Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀).
이들 리포좀의 성분비는 다음과 같다: DSPC:콜레스테롤:DSPE-PEG(2K)-OMe:NG-DSPE = 2:1:0.16:0.03.
이들 리포좀은 PEG로부터 유도되고, Tf는 NG-DSPE를 통해 리포좀에 결합된다. PEG-유도된 리포좀은 또한 전체가 본원에 참고로써 포함된 미국 특허 공개 번호 2003/0224037 및 2004/0022842에 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다.
실시예 10: 블랭크 리포좀의 제조
DMPC, Chol(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan), NG-DOPE (NOF Corporation, Japan) 및 NHS-NG-DOPE (NOF Corporation, Japan) (50:45:4:1의 몰비에서; 각각 41Og의 DMPC, 211g의 Chol, 43g의 NG-DOPE 및 12g의 NHS-NG-DOPE)을 가온된 에탄올/t-부탄올/물 용매의 4 v/w (전체 지질 무게 대비)에 용해시켰다. 20L의 부피를 갖는 결과 현탁액을 45℃에서 교반하면서 배양하였고 압출기(Stevested Machinery & Engineering Ltd., Canada)를 통해 통과시켜 약 45℃에서 약 200-800 psi의 압력하에서 폴리카르보네이트 100nm 필터(Cat. No. 112105, Whatman pic, UK) 5개의 스태킹으로 겹쳤다. 이렇게 얻어진 리포좀은 100nm 근처에서 평균 직경을 갖는다. 리포좀 직경을 QELS에 의해 결정하였다.
리포좀 현탁액, PBS 완충액(pH 7.9) 및 트랜스페린의 PBS 용액(Cat. No. 4455, Selorogicals, GA, USA) (pH 7.0)을 3:1:1 (v/v)의 비율에서 혼합한 후 15-60분 동안 30 ℃에서 교반하였다. 대략 6L의 블랭크 리포좀을 그 후 획득하였다.
20g(약 19mL)의 리포좀 용액을 바이알에 부었고 -40 ℃에서 선반에서 약 8시간 동안 냉동시켰다. 약 0.1mmHg로 감압시켰고 2일에 걸쳐서 순차적으로 -40℃ 내지 25℃ 온도에서 온도를 상승시키면서 2일 동안 감소된 압력에서 유지하였다. 이 과정의 완료에서 약 3.5g의 동결건조된 블랭크 리포좀을 얻었다. 리포좀을 이후에 4℃에서 저장하였다.
실시예 11: 미리 제조된 블랭크 리포좀 내 옥살리플라틴의 캡슐화
l-OHP(8mg/ml, 300mM의 수크로오스 용액 내)의 수성 용액을 약 3.5g의 동결건조된 블랭크 리포좀에 첨가하였고 2시간 동안 40℃에서 교반함으로써 재수화하였다. 교반 후에, 리포좀의 l-OHP를 Sephadex G-25 (φl x 45cm)를 사용하여 자유 l-OHP로부터 분류함으로써 분리하였다. 리포좀 l-OHP 및 자유 l-OHP를 각각 VIS 600nm 및 UV 210nm에 의해 모니터링 하였다.
l-OHP 및 콜레스테롤의 양을 측정하였다. l-OHP 농도를 최종적으로 원래 콜레스테롤 농도에 대한 리포좀 부분을 응축한 경우에 대해 계산하였고, l-OHP의 수율을 리포좀의 l-OHP 농도와 비교함으로써 측정하였고 l-OHP 농도를 공급하였다.
원래 콜레스테롤 농도에 대한 리포좀 부분을 응축하는 경우에 대한 전체 l-OHP 농도는 210μg/mL이었다. 그리고 l-OHP의 수율은 2.6%이었다.
이것은 210μg/mL의 l-OHP가 동결건조된 블랭크 리포좀으로 캡슐화되었음을 암시한다.
실시예 12: 혈액 및 기관 내 리포좀 수준의 비교
비교적인 연구를 종양-함유 마우스 내 l-OHP-캡슐화된 Tf-변형된 리포좀 조성물의 기관 내 혈액 정체 및 축적을 평가하기 위하여 수행하였다. 5주된 수컷 BALB/c 마우스를 동물 모델로서 사용하였고, 결장 26 세포(결장암 마우스로부터 유도됨)를 종양 세포로서 사용하였다. 세포를 Laboratory of Biopharmaceutics, Teikyo University School of Pharmaceutical Sciences, Japan로부터 얻었다.
시험관 내에서 2차 배양된 결장 26 세포(2 x 106 세포)를 마우스의 등 부분 피하에 이식하였다. 약 8 내지 10mm의 직경을 갖는(평균 8 내지 10일 성장 후) 종양 함유 마우스를 결장암-함유 마우스로서 사용하였다. 실시예 5 및 6에서 제조된 각각의 리포좀 용액 또는 l-OHP(9% 수크로오스 용액 내 8mg/ml)를 꼬리 정맥에 주사하였다. 옥살리플라틴의 농도를 각 경우에 5 mg l-OHP/kg 체중에서 조절하였다. 리포좀으로서, Tf-NG-DSPE 리포좀((■); 실시예 5), Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀 (▲); 실시예 6) 및 Tf-PEG-DSPE 리포좀 ((◆); 실시예 6)를 사용하였다.
혈액, 혈장, 간, 비장, 신장, 심장, 폐 및 종양 조직을 투여 후 1, 3, 6, 24, 48 및 72시간에서 각 군에 대한 각각의 시점에서 3마리 마우스로부터 수집하였다. 혈액, 각각의 기관 및 종양 조직 내 Pt 농도를 원자흡광(AA)를 사용하여 결정하였고, l-OHP 농도를 계산하였고 투여량비(%)로서 보고하였다. 혈액 내 농도를 도 9에서 나타내었다.
실질적으로 동일한 혈액 정체를 보여주는 Tf-NG-DSPE 리포좀을 투여 후 3시간 까지 Tf-PEG-DSPE 리포좀 및 Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀과 비교하였다. 그러나, 6시간 후, Tf-NG-DSPE 리포좀은 약간의 혈액 정체를 나타냈지만, PEG 리포좀과 비교하여 더 빨리 사라졌다. 종양 조직 내 농도를 도 10에서 나타내었다. 시간의 경과 후 혈액 내 더 낮은 농도에서 정체되어야 함에도 불구하고, Tf-NG-DSPE 리포좀은 Tf-PEG- DSPE 리포좀 및 Tf/PEG-DSPE 리포좀으로서 종양 조직에 실질적으로 동일한 축적을 보여준다.
상기 결과로부터, 투여 후 혈액 내에서 약 6 시간의 정체 시간이 필요하며 마우스 내 유효한 수준 또는 더 높은 수준에서 종양 조직에 약물의 충분한 농도를 충분히 전달하는 것이 발견되었다. 이보다 긴 혈액 내 정체 시간은 정상 조직 상에서 부작용의 원인이 되는 가능성을 증가시킬 수도 있음이 고려된다.
실시예 13: 진단 리포좀의 제조 및 종양 조직 내 125 I의 축적
[125I]-티라미닐 인슐린(PBS 용액 내)이 l-OHP으로 대체되고 DMPC/CH/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE/[125I]-티라미닐 인슐린 리포좀이 얻어지는 것을 제외하고는 리포좀을 실시예 7에서와 같은 동일한 방법으로 제조하였다. 두 개의 리포좀 제형이 하기에서 보여지는 성분과 함께, 제조되었다. 리포좀 결핍 Tf-NG-DOPE은 리포좀의 비-표적 분포에 대한 대조군으로서 역할을 하였다.
표적 리포좀: DMPC/CH/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE(63.3/31.7/4/1(m/m))
비-표적 리포좀(대조군): DMPC/CH/NG-DOPE (63.3/31.7/5(m/m))
iodogen 방법(Biochem. Biophys. Res. Commun., 122, 319-325 (1984), 그것 전체가 참고로써 포함됨)을 사용하여 Na-125I(PerkinElmer Japan Co., Ltd., Japan) 및 티라미닐 인슐린(Dr. Kazuo Maruyama, Teikyo University, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Japan)을 조합함으로써 125I를 티라미닐 인슐린에 결합하였다. 125I-티라미닐 인슐린을 이렇게 얻었다. 약 1mg/mL의 농도에서 125I-티라미닐 인슐린/PBS(-) 용액을 그 후 실시예 7에 기술된 바와 같이 리포좀으로 캡슐화하였다.
100μl의 각각의 리포좀 용액을 실시예 12에서 기술된 뮤린 결장암-함유 마우스의 꼬리 정맥에 주사하였다. 종양 조직 및 꼬리를 5 마리의 마우스로부터 투여 후 1, 6, 24 및 48시간에서 각각의 군에 대한 각각의 시점에서 수집하였다. 종양 조직의 무게를 측정하였고 종양 조직 및 꼬리 내 방사능(단위: cpm)을 감마선 계측기(Aloka Auto Gamma System ARC-300, Japan)를 사용하여 측정하였다. 결과를 종양 조직 내 분포량(투여의 %/g-종양)=[(종양 조직 내 카운트 값)-(b.g.의 값)] x 100/[(Std.의 카운트 값)-(꼬리 내 카운트 값)] /(종양 조직의 무게(g))로서 측정하였다. 125I의 방사성 반감기는 대략 60일이다.
투여된 용액의 100μl의 방사능(기준: Std.)은 100%로서 정의하였고 빈 테스트 튜브의 카운트 값을 배경값(b.g.)로서 정의하였다. 결과를 도 11에 나타낸다. 비-표적 리포좀이 높은 축적을 나타내지 않는 반면, Tf-변형된 리포좀이 종양 세포에 높은 축적을 나타내는 것은 도 11로부터 명백하다. 이러한 결과는 리포좀 캡슐화 방사성 화합물이 종양 조직의 검출에 유용하다는 것을 증명한다.
실시예 14: 리포좀의 항암 효과의 비교
l-OHP-캡슐화된 Tf-변형된 리포좀 조성물(실시예 9에서 제조된 Tf-PEG-리포좀, 실시예 8에서 제조된 Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH 리포좀, 실시예 9에서 제조된 Tf/PEG-NG-DSPE 리포좀; 각 군에서 9 마리 마우스)에 대한 결장암 결장 26-함유 마우스에서 항암 효과를 평가하기 위한 비교 연구를 행하였으며 각각의 리포좀 조성물에 대해 트랜스페린은 결합되지 않았다((-)TF; 각 군에서 6마리 마우스).
종양-함유 마우스를 실시예 12에서와 같은 동일한 방법으로 제조하였다. 대조군에서와 같이, l-OHP(9% 수크로오스 용액 내 8mg/ml)용액을 사용하였다. l-OHP이 5 mg/kg의 투여량으로 투여된 날을 시작일로서 정의하였고, 제 4일에, l-OHP를 다시 5 mg/kg 투여량에서 투여하였다. 0일에 종양 크기를 1로서 정의하였고, 크기를 출발 크기에 기초한 비율로서 나타내었다. 종양의 크기를 0, 2, 5, 7, 10, 13, 15, 18 및 21일에 측정하였고, 생존일을 조사하였다.
결과를 도 12에서 나타낸다.
도 12에서 보여질 수 있는 바와 같이, 트랜스페린이 결합된 리포좀 조성물은 종양 성장에 억제 효과를 나타낸다. 반면에, 트랜스페린이 결합되지 않은 리포좀 조성물은 트랜스페린이 결합된 리포좀 조성물과 비교하여 종양 성장에서 약한 억제 효과를 가진다. 도 9 및 10에 설명된 결과로부터, 투여 후 혈액 내 약 6시간의 정체 시간이 필요하다는 것과 트랜스페린이 결합된 리포좀은 종양 성장에 억제 효과를 갖는다는 것을 발견하였고 종양 조직에 약물 축적의 농도는 유효하고 실질적으로 동일한 수준으로 하였다. 이보다 긴 혈액 내 정체 시간은 정상 조직에서 부작용의 원인이 될 수 있는 가능성을 증가시킬 수도 있다.
실시예 15: NG- DSPE 함량의 최적화
리포좀 내 NG-DSPE의 최적 혼합 비율을 결정하기 위하여, 캡슐화하지 않은 항암제에서 NG-DSPE의 혈액 정체를 정상 마우스에서 조사하였다. 캡슐화하지 않은 항암제 내 리포좀 조성물을 실시예 8에서와 같은 동일한 방법으로 제조하였으며, NG-DSPE의 다른 양과 함께, 수성층으로서 l-OHP 용액 대신에 물을 사용하였다.
리포좀의 구성하는 전체 지질 성분의 전체 몰농도 양은 100%로서 정의하였고 전체 지질 성분에 대한 NG-DSPE의 함량을 NG-DSPE의 비율(몰%)로서 나타내었다. 추가적으로, 구성체 지질로서 MPB 지질(MPV-DSPE) 또는 PDP 지질(PDP-DSPE)의 6% 몰을 함유하는 리포좀을 또한 제조하였다. MPB 리포좀을 지질의 에탄올아민의 아미노기에 대한 말레이미드-페닐부틸레이트(MPB)에 결합, 및 MPB(870013(16:0), Avanti Polar Lipids, Inc, USA)를 통해 리포좀에 Tf를 결합하여 리포좀을 형성함으로써 얻는다. PDP(870205(16:0, Avanti Polar Lipids, Inc, USA) 리포좀을 지질의 에탄올아민의 아미노기에 2-피리딜티오 프로피오네이트(PDP)를 결합, 및 PDP를 통해 리포좀에 Tf를 결합함으로써 얻는다
실험에서, 105 마리의 마우스(ICR 수컷, 생후 6주)(Tokyo Laboratory Animal Science Co., Ltd., Japan)를 사용하였다. 트레이서로서, 125I를 티라미닐-인슐린에 결합하였고, (실시예 13에서 기술한 바와 같이 제조됨)그리고 약 1mg/ml의 농도에서 이 인슐린 용액을 리포좀에서 캡슐화하였다. 각 경우에 대해 수집된 혈액 및 기관의 무게를 측정하였고, 리포좀 마커의 방사능(단위: cpm)을 감마선 계측기를 사용하여 측정하였다(Aloka Auto Gamma System ARC-300, Japan). 게다가, 꼬리 정맥에 각각 투여된 용액의 방사능을 측정하였다. 100μl 투여 용액의 방사능을 100%로서 정의하였고, 각각의 기관에 대한 값(투여량의 %)을 백분율로서 표시하였다. 총 혈액량을 전체 체중의 7.3%가 되도록 측정하였고 혈액내 리포좀 양을 전체 혈액 내 양으로서 표시하였다. 빈 테스트 튜브의 카운트 값을 배경 값(b.g.)으로서 정의하였고, 각 샘플에 대한 카운트 값으로부터 차감하였다.
혈액 내 분포량(%)=[(혈액의 카운트 값)-(b.g.의 값)]x(마우스의 체중(g)) x 0.073 x 100 / [(Std.의 카운트 값)-(꼬리의 카운트 값) x (혈액의 무게(g))].
결과를 도 13에 나타내었다. 6시간 후 혈액 내 농도에 관해서는, 지질 함량이 3%몰이거나 더 높을 때 NG-DSPE 리포좀은 높은 혈액 정체를 보여준다. 말레이미드-리포좀(MPB 6%)에 대해서와 같이, 혈액 정체는 낮았다.
실시예 16: 혈액 정체에서 Tf 및 디카르복실산의 효과
리포좀-결합 트랜스페린 및 디카르복실산(예를 들어, 글루타릴, 숙시닐, 등)의 존재 또는 부존재의 효과를 조사하기 위하여, 캡슐화되지 않은 항암제 내 트랜스페린-결합된 리포좀의 혈액 정체를 정상 마우스 내에서 조사하였다. 실험적 방법은 실시예 15에서 기술한 바와 같다.
글루타르산 대신에 결합된 숙신산에 인지질을 함유하는 리포좀을 제조하였다.
NG-DSPE(글루타르)를 하기와 같이 제조하였다. 질소 기체 흐름 하에 어두운 곳에서, DSPE(ME-8080, NOF Corporation, Japan)를 DSPE 부피의 10배의 탈수화된 클로로포름에서 현탁하였다. 그 후 1.3 당량의 트리에틸아민(208-02643, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan)을 첨가하였고, 글루타르산 무수물의 탈수화된 클로로포름 용액(G0071, Tokyo Chemical Industry, Japan) (DSPE와 동일한 부피의 탈수화된 클로로포름에 용해)을 실온에서 적가하였다. 완료 후, 용액을 30℃에서 2시간 동안 교반하여 반응시켰다.
그 후, 반응 용액을 아세테이트 완충액(pH 4.5)으로 3회 세척하였고, 유기층을 황산 마그네슘으로 탈수하였고, 수류 아스피레이터를 갖는 흡입여과로 여과하였다. 그 후, 여과물을 30℃에서 감소된 압력하에서 농축하였다. 그것이 유성이 되었을 때(DSPE 부피의 약 2배), 메탄올을 첨가하여 결정을 형성하였고, 그 후 여과하였다. 클로로포름에서 다시 용해시켰고, 이 과정을 두 번 반복하였다. 그 후, 결정을 실온에서 감소된 압력하에서 건조시켜, 백색 결정으로서 표적 생성물을 얻었다. NG-DSPE 리포좀을 실시예 8에서와 같은 방법에 의해 제조하였다.
결과를 도 14에 나타낸다. 디카르복실산(NG-DSPE: N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민, NS-DSPE: N-숙신일-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민)을 통해 결합된 리포좀은 높은 혈액 정체를 보여준다. 그러나, 말레이미드(MPB)에 의한 S-S 결합을 통해 결합된 트랜스페린에 리포좀의 경우에서, 동일한 리간드, 트랜스페린이 결합될 지라도, 혈액 정체는 낮다.
실시예 17: 리포좀의 전기영동 분석
리포좀을 특징화하기 위한 분석 방법의 한 가지 예로서, 전기영동의 예가 보여진다. 리포좀을 용해시켰고 2.5%의 SDS 및 5%의 2-머캅토에탄올을 함유하는 샘플 완충액 내 95℃에서 5분 동안 변성시켰다. 약 7.5% 내지 10% 폴리아크릴아미드 겔(Funakoshi, Easy gel (II), precast gel, Japan)을 사용함으로써, 5μl의 각각의 샘플을 겔 상에 적용하였고, 전기영동을 20mA의 정전류하에서 1 내지 2시간 동안 수행하였다.
전기 영동 후, 겔을 도은염색 키트(Wako Pure Chemical Industries, Silver Staining II Kit Wako, Japan)로 도은염색 하였다. 결과를 다음의 리포좀에 대한 도 15에서 나타낸다: 레인 6(트렌스페린-N-글루타릴-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민-리포좀(Tf-NG-DSPE 리포좀)); 레인 5 (트렌스페린-폴리에틸렌글리콜-디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민-리포좀(Tf-PEG-DSPE 리포좀))를 나타낸다. 레인 1-4는 각각 h-아포-Tf (240 ng), h-아포-Tf (120 ng), h-아포-Tf (60 ng), 및 h-아포-Tf (30 ng)를 함유한다.
비교예의 경우에, Tf-PEG-DSPE 리포좀은, 폴리에틸렌글리콜이 약간의 분자량 분포를 갖기 때문에 몇 개의 밴드를 갖는 복잡한 전기영동 이미지로 나타난다. Tf-NG-DSPE 리포좀의 경우에, 나타난 단일 밴드는 훨씬 용이하게 분석되며 리포좀을 정제하기 위한 능력을 향상시킨다. 본 발명에 따르는 리포좀 조성물에 대한, 이들 결과는, 분석적 분석 방법이 PEG-유도된 리포좀 조성물에 대한 것보다 더 간단하다는 것을 나타낸다.
실시예 18: 리포좀 조성물 상의 자유 PE 의 효과
리포좀 내 자유 포스파티딜 에탄올아민의 존재의 효과를 조사하기 위하여, Tf의 결합 능력을 Tf-NG-DSPE 리포좀에 대해 측정하였고 리포좀을 디스테아로일 포스파티딜 에탄올아민(DSPE)를 첨가함으로써 제조하였다(어떤 NG도 존재하지 않음). Tf-NG-DSPE 리포좀을 DSPC(64 부분), CH(32 부분) 및 NG-DSPE(4 부분)으로부터 제조하였고, Tf-NG-DSPE+DSPE 리포좀을 실시예 8에서와 같은 방법으로 DSPC(64부분), CH(32부분), NG-DSPE(4부분) 및 DSPE(10부분)으로부터 제조하였다.
이후에, 10 당량의 NHS 및 ECD/HCl 및 0.05 당량의 Tf를 사용함으로써 Tf를 NG-DSPE에 결합하였다. 그 후, 1mg의 지질에 대응하는 양에서 리포좀 샘플을 SDS-PAGE에 의해 분리하였고, 밴드를 실시예 17에서 기술한 바와 같이 도은염색함으로써 가시화하였다.
결과를 도 16에 나타낸다. NG-DSPE + DSPE 리포좀의 경우에서, DSPE의 10% 몰을 첨가하였고, Tf의 결합량을 어떤 비-NG-DSPE도 함유되지 않은 NG-DSPE 리포좀과 비교하여 유효하게 낮음을 발견하였다. Tf의 아미노기 및 DSPE의 아미노기가 반응에서 서로 경쟁하기 때문에 Tf는 NG-DSPE의 카르복실기에 결합될 수 있다.
실시예 19: 혈액과 기관 내 리포좀 수준의 비교
실시예 12에 기술된 프로토콜을 사용하여, 혈액 및 종양 내 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH(Tf-NG-DOPE:NG-DOPE)리포좀(실시예 7에서 제조됨) 및 Tf-PEG-DSPE 리포좀(실시예 9에서 제조됨)의 수준을 비교하였다. 혈액 내 정체된 리포좀의 양에 대한 결과를 도 17에서 설명하고 종양 내 검출된 리포좀의 양을 도 18에 나타낸다.
도 17 및 18에서 결과는 Tf-NG-DOPE:NG-DOPE 리포좀이 Tf-PEG-DSPE 리포좀보다 혈액 내에서 더 낮은 축적을 보여주는 반면(도 17), 그들이 종양에 더 많은 양의 옥살리플라틴을 전달할 수 있었음을 보여준다(도 18). 혈액 내 리포좀의 낮은 축적은 옥살리플라틴의 전신 부작용을 감소시키는 것 같다.
실시예 20: 결장 26 종양-함유 마우스 내 리포좀 항암 효과의 비교
실시예 14에 기술된 프로토콜을 사용하여, 마우스 내 결장 26 종양 상의 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀(실시예 7에서 제조됨) 및 Tf-PEG-DSPE 리포좀(실시예 9에서 제조됨)의 효과를 비교하였다. 결과를 도 19에서 설명한다.
도 19에서 보여질 수 있는 바와 같이, 리포좀은 모두 옥살리플라틴 용액과 비교하여 종양 성장의 억제를 보여주지만, 그러나, 실시예 19에서 기술한 바와 같이, 혈액(혈장) 내 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH의 더 적은 축적은 이러한 리포좀을 그것들이 투여되는 환자들이 더 잘 견디는 것을 의미할 것이다.
실시예 21: 이종이식 HCT-116 결장 종양 모델 상에서 리포좀 항암 효과
피하에 이식된 HCT-116 인간 결장 종양 이종이식에 대해 투여되었을 때 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀(실시예 7에서와 같이 제조)의 항암 효능. 테스트를 [Southern Research Institute, AL, USA]에서 참고 화합물로서 사용된 용액 내 옥살리플라틴과 함께 연구된, 수컷의 흉선이 없는 NCr-nu 마우스(02/A/08F17T9, Frederick Cancer Research and Development Center, MD, USA; 50 마리 마우스)에서 수행하였다. NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 항종양 활성을 도 20에서 요약한다.
NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 15 및 10mg/kg/주사의 투여량으로서 4일마다 4번 주사에 대해 (q4d x 4)정맥주사로 투여하였다. 옥살리플라틴은 15 mg/kg/주사의 투여량에서 동일한 스케줄로 투여하였다. 비히클(약 10.3% 수크로오스) 및 블랭크 리포좀 대조군을 동일한 스케줄에서 주사하였다.
4일마다 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀으로 치료에 따르는 HCT-116 결장 종양 모델에 대한 평균 종양 부피는 15mg/kg 군에 대한 대조군 종양 부피의 28.9% 그리고 10mg/kg 군에 대한 대조군 종양 부피의 35.9%이었다. NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 항종양 활성을 또한 HCT-116 모델에서 비-리포좀 옥살리플라틴과 비교하였으며, 4일마다 15 mg/kg (대조군 종양 부피의 28.9%)에서 투여될 때(4x), NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀은 상대적인 종양 부피에 대하여 더 큰 효능을 보였다. 비-리포좀 옥살리플라틴은 4일마다 15mg/kg에서 전달되어 대조군 종양 부피의 39.3%를 얻었다.
실시예 22: 이종이식 HT-29 결장 종양 모델에서 리포좀 항암 효과
피하에 이식된 HT-29 인간 결장 종양 이종이식에 대해 투여될 때 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀(실시예 7에서 제조됨)의 항암 효과. 테스트를 Panapharm Laboratories Co., Ltd., Japan에서 암컷의 흉선이 없는 BALB/cA Jcl-nu 마우스(CLEA Japan, Inc., Japan; 50 마우스)에서 수행하였고 결과를 도 21에서 요약하였다. 4마리 마우스의 군에 6.7, 10 또는 15mg/kg의 투여량에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀, 또는 비히클 대조군을 투여하였다. 비히클 및 6.7 및 10mg/kg 처치 군을 제10일, 제14일 및 제19일에 주사하였고 15mg/kg 처치 군을 제10일 및 제14일에 주사하였다.
NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 갖는 치료에 따르는 HT-29 결장 종양 모델에 대한 평균 종양 부피는 6.7mg/kg 군에 대해 대조군 종양 부피의 66.3% 및 10mg/kg 군에 대해 대조군 종양 부피의 39.5%이었다(p 값 < 0.01).
실시예 23: 이종이식 MKN45 위 종양 모델 상의 리포좀 항암 효과
피하에 이식된 MKN45 인간 위 종양 이종이식에 대해 투여될 때 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀(실시예 7에서 제조)의 항종양 효능. 테스트를 Panapharm Laboratories Co., Ltd., Japan에서 수행하였고 수컷의 흉선이 없는 BALB/cA Jcl-nu 마우스(CLEA Japan, Inc., Japan; 50 마우스)에서 연구하였으며 도 22에 요약하였다.
4 마리 마우스의 군에 6.7, 10 또는 15 mg/kg의 투여량에서 NG-DOPE:Tf-NG- DOPE:DMPC:CH 리포좀 또는 비히클 대조군을 투여하였다. 비히클 및 6.7 및 10mg/kg 처치군을 제7일, 제12일 및 제24일에 주사하였고 15mg/kg 처치군을 제7일 및 제24일에 주사하였다. NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 갖는 처리에 따르는 MKN45 위 종양 모델에 대한 평균 종양 부피는 6.7 mg/kg 군에 대해 대조군 종양 부피의 65.4%(p 값 < 0.05), 10 mg/kg 군에 대해 대조군 종양 부피의 49.6%(p 값 < 0.01), 및 15 mg/kg 군에 대해 대조군 종양 부피의 48.5%(p값 < 0.01; 17일마다 전달됨)이었다.
실시예 24: 이종이식 COLO 205 결장 종양 모델에서 리포좀 항종양 효과
피하에 이식된 COLO 205 인간 결장 종양 이종이식에 대해 투여될 때 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀(실시예 7에서 제조됨)의 항종양 효능. 테스트를 Southern Research Institute, AL, USA에서 수행하였고, 참고 화합물로서 사용된 용액 내 옥살리플라틴으로, 수컷의 흉선이 없는 NCr-nu 마우스(01/A/09F3T8, Federic Cancer Research and Development Center, MD, USA)에서 연구하였으며, 도 23에 요약한다.
40마리의 마우스에 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 4일마다 3번 주사를 위해 정맥 주사로 10 및 5 mg/kg/주사의 투여량에서 투여하였다. 옥살리플라틴을 동일한 스케줄에서 5 mg/kg/주사의 투여량에서 투여하였다. 대조군을 동일한 스케줄에서 주사하였다. 진행된 단계의 종양을 모든 군에 대해 제47일에 재치료를 시작하였다.
NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀을 15 및 10 mg/kg/주사의 투여량에서 두 번 주사에 대해 격일로 투여한 후, 4 및 2mg/kg/주사의 투여량에서 각각 6번 주사에 대해 격일로 치료하였다. 옥살리플라틴을 10 및 2mg/kg/주사의 투여량에서 동일한 스케줄로 투여하였다. 대조군을 동일한 스케줄에서 처리하였다.
처음에 10 및 5mg/kg의 투여량에서 투여된 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀, 진행된 단계의 그 이후의 치료로, 15 및 10 mg/kg의 투여량에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH으로 이전에 치료된 종양, 후에 다양한 치료 스케줄을 사용하는 4 및 2mg/kg의 투여량에서 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀으로 치료에 따르는 COLO 205 결장 종양 모델에 대한 평균 종양 부피는 대조군 종양 부피의 53.2%와 69.5% 사이였다(p값<0.05 또는 0.01).
실시예 25: 표적 리포좀 내 옥살리플라틴의 캡슐화
실시예 7에서와 같이 제조된 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH (Tf-NG-DOPE:NG-DOPE) 리포좀에서 캡슐화된 옥살리플라틴 부분을 측정하기 위하여, 다음의 과정을 사용하였다.
캡슐화의 범위를 3,000 MWCO(molecular weight cut-off) 스핀 컬럼(3OK MWCO cellulose ultrafilter 세포막 컬럼 membrane column, Cat. No. 42410, Millipore Corp., USA)을 샘플로 부터의 시약 중 하나를 통과시킴으로써 결정하였고 희석된 인산 수용액(pH 3.0) 내 1% 아세토니트릴의 정조성용출법으로 HPLC를 사용하여 용출액 내 옥살리플라틴 농도를 측정하였다.
옥살리플라틴의 수준을 캡슐화되지 않은(자유) 약물의 수준을 정량하기 위한 HPLC 분석을 사용하는 세포막 여과에 따라 결정하였다. 실시예 7에서와 같은, 3개의 일 군의 트랩핑 효능은 98%보다 컸다(표 1 참조).
리포좀 내 옥살리플라틴의 캡슐화 비율
로트 I II III
캡슐화의 % 98.8 99.6 99.1
실시예 26: 표적 리포좀의 pH
표적 리포좀의 pH는 증류수에 본 발명의 리포좀을 놓음으로써 결정될 수 있고 하기에 설명하는 바와 같은 표준 pH 미터로 측정할 수 있다.
NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀(실시예 7에서 제조)의 pH를 Ag/AgCl 겔-충전 전극을 갖는 pH 미터(VWR Model 8000)로 결정하였다. pH 7.17-7.23 범위의 4개 로트의 리포좀에 대한 pH 값을 하기의 표 2에서 나타낸다.
리포좀의 pH
로트 1 2 3 4
pH 7.17 7.17 7.23 7.20
다양한 pH에서 리포좀의 외형을 표 3에서 요약한다. 이 결과는 낮은 pH는 집적, 침강, 및 침전을 이끌 수도 있음을 나타내며, NG-DOPE 및 Tf의 양성자에 기인하여 이중층의 집적 및 트랜스페린의 변성이 일어날 수도 있다.
다양한 pH 값에서 리포좀의 조건
pH 관찰
7.19 액체, 반투명, 밝은 분홍
6.98 액체, 반투명, 어떤 첨가물도 없음과 비교하여 어떤 변화도 없음, 밝은 분홍
6.83 액체, 반투명, 어떤 첨가물도 없음과 비교하여 어떤 변화도 없음, 밝은 분홍
6.37 액체, 첨가물 상에 작은 백색 침전물, 어떤 첨가물도 없음과 비교하여 수분 내에 맑아짐, 밝은 분홍
5.53 액체, 첨가물 상에 백색 침전물, 수분 내 맑아지나 약간 혼탁함, 색은 연한 백색
5.07 액체, 작은 백색 침전물, 혼탁함, 색은 백색
4.33 증가된 점성, 백색 침전물의 유효량, 매우 혼탁, 색은 백색
3.72 매우 점착성 있음, 초원심분리 튜브가 바뀔 때 샘플이 이동하지 않음, 색은 혼탁한 백색, 불투명, 색은 백색
실시예 27: 표적 리포좀 내 트랜스페린의 결합된 트랜스페린 및 SDS-PAGE 형태의 확인
본 연구를 실시예 7에서 제조된 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀 내 NG- DOPE에 트랜스페린 결합을 확인하기 위해 수행하였다. 트랜스페린이 NG-DOPE에 결합되었을 때, 복합체는 본 방법에서 비-결합 트랜스페린보다 더 높은 분자량을 보여준다.
리포좀을 용해시켰고 2.5%의 SDS 및 5%의 2-머캅토에탄올을 함유하는 샘플 완충액에서 5분 동안 95℃에서 변성시켰다. 샘플을 그 후 5-10% 기울기 폴리아크릴아미드 겔에 적용하였고 그 후 그것들을 SDS의 존재에서 전기영동하였다. 이동된 단백질 밴드를 brilliant blue G-colloidal (B2025, SIGMA5 USA)을 사용하여 가시화하였다.
리포좀 내 트랜스페린을 NG-DOPE에 결합된 트랜스페린으로서 검출하였고, 완전한 트랜스페린의 것보다 더 높은 분자량을 보여주었다(도 24 참조). 낮은 분자량을 갖는 부수적인 밴드를 자유 트랜스페린으로서 검출하였다.
SDS-PAGE 상의 NG-DOPE에 결합된 트랜스페린에 대한 자유 트랜스페린의 비율을 Scion Image soft ware (freely available at www.microsoft.com.DirectX)를 사용하여 피크의 영역으로서 계산하였다. NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 전체 Tf에서 자유 Tf의 비율은 대략 4.7%이었다.
실시예 28: 삼투압 분석
주어진 온도에서 삼투압은 수크로오스 및 염화 나트륨 및 인산염 완충액과 같은 염에 의존한다. 용질에는 의존하지 않지만, 전체 이온 밀도 및 용액 내 분자의 크기에는 의존한다. 정상적인 삼투압은 삼투압계로서 알려진 기기를 사용하여 측정될 수 있으며, 적당한 압력 단위에서 삼투압을 측정한다.
실온에서 실시예 7에서와 같이 제조된 NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH 리포좀의 삼투압을 삼투압계(Vapro Vapor Pressure Osmometer Model5520,Wescor, Inc., USA)를 사용하여 측정하였다. 360-370mOsm/kg 범위의 리포좀의 3번의 제조에 대한 삼투질농도 값을 표 4에 나타낸다.
삼투질농도 압력
로트 A B C
삼투질농도(mOsm/Kg) 360 370 368
실시예 29: Tf -NG-DOPE의 분리
900mL의 EtOH를 100mL의 블랭크 리포좀(DMPC/Chol/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE)(동결건조에 앞서 실시예 10에 제조된 바와 같음)에 첨가하였고 완전히 교반하였다. 혼합물을 그 후 원심분리하였고(9,000 rpm, 10분, 20℃; CFl 6RX, Hitachi Koki Co., Ltd., Japan) 펠릿을 얻었다.
100mL의 EtOH를 그 후 이 펠릿에 첨가하였고 완전히 교반하였다. 혼합물을 다시 원심분리(9,000rpm, 10분, 20℃; CF16RX, Hitachi Koki Co., Ltd., Japan)하였고 황색이 도는 흰색(연한 오렌지색)의 펠릿을 얻었다. 이 세척 과정을 한 번 더 반복하였다.
상기에서 얻은 펠릿을 N2 기체로 30분 동안 건조시켰다. 건조시킨 물질을 그 후 10mL의 증류수에 용해시켰고 멸균 필터(0.22 μm) (Millipore Corp., USA)를 통해 통과시켰다.
여과물을 바이알에 부었고 약 8시간 동안 -40℃ 선반에서 냉동시켰다. 샘플을 약 0.1mmHg에서 감압하였고 -40℃ 내지 25℃ 단계별로 온도를 상승시키면서 2일 동안 감소된 압력하에서 유지하였다. 대략 444mg의 Tf-NG-DOPE(블랭크 리포좀의 트랜스페린 함량의 45%)를 이렇게 얻었다.
실시예 30: Tf -NG- DSPE 의 제조
200μL의 NHS(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan) 수성 용액(0.1 mol/L), 200μL의 EDC(N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드히드로클로라이드)(Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., Japan) 수성 용액(0.25 mol/L) 및 50mmol/L MES 완충액(pH 5.5) 내 2%(w/v)의 OG(n-옥틸-D-글루코피라노시드)(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan)를 함유하는 1mL의 NG-DSPE 용액(2mmol/L)을 혼합하였고 10분 동안 교반하였다.
Sephadex G-15 컬럼(1.5 cm x 20 cm, 50 mmol/L HEPES 완충액에서 0.1% (w/v)의 OG (pH 8.0), GE Healthcare Bio- Sciences Corp., USA)에 의해 잔여 시약을 제거하였고 약 1mL/튜브로 나뉘었다.
5mL의 1% 트랜스페린(Sigma, USA)수성 용액을 NG-DSPE를 함유하는 증류 부분에 적가하였고 4℃에서 20분 동안 서서히 교반하였다. 확인은 각 증류 부분의 MS 결정에 의한다.
반응 생성물을 그 후 TOYOPEARL HW-55S 컬럼(1.5 cm x 45 cm, 0.9% NaCl, Tosoh Bioscience LLC, US A)에 의해 약 1.7mL/튜브에 나누었다. Tf-NG-DSPE를 질량 분석법(MALDI-TOF/MS) 및 CBB(Coomasie Brilliant Blue, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japan)염색을 갖는 SDS- PAGE에 의해 측정하였다
관련 출원과의 상호 참조
본 출원은 본원에서 그 전체가 참고로서 인용되는 2005년 3월 10일에 출원된 일본 특허 출원 번호 2005-67469에 의거하여 우선권을 주장한다.

Claims (254)

  1. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 캡슐화된 약물 또는 표지된 화합물 및, 선택적으로 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 표적 리포좀으로서,
    표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고;
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되며
    (화학식 1)
    ; 그리고
    제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고
    (화학식 3)
    (상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이다); 그리고
    리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 표적 리간드는 완전한 항체가 아닌것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  2. 제 1항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  3. 제 2항에 있어서, 적어도 하나의 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  4. 제 1항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린 및 포스파티딜글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  5. 제 1항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  6. 제 1항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  7. 제 6항에 있어서, 포스파티딜콜린은 포화 지방산의 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  8. 제 6항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  9. 제 7항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  10. 제 9항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  11. 제 10항에 있어서, 리포좀은 DMPC 및 콜레스테롤, DSPC 및 콜레스테롤, POPC 및 콜레스테롤, 또는 DPPC 및 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  12. 제 10항에 있어서, 리포좀은 DMPC 및 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  13. 제 1항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 당 사슬, 및 모노클로널 항체의 단편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 표적 리간드.
  14. 제 13항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산 및 당 사슬로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  15. 제 14항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  16. 제 15항에 있어서, 트랜스페린은 홀로-형에서 존재하지만 아포-형에서 존재하지 않는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  17. 제 1항에 있어서, 리포좀의 평균 직경은 약 50nm 내지 약 250nm인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  18. 제 1항에 있어서, R1, R2, R5 및 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 p는 3인 것을 특징으로 하는 리포좀.
  19. 제 18항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 이는 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  20. 제 1항에 있어서, m과 p는 각각, 독립적으로, 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  21. 제 1항에 있어서, m과 p는 동일하고 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  22. 제 21항에 있어서, m과 p는 동일하고 3인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  23. 제 1항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  24. 제 1항에 있어서, R1과 R2는 동일하고, R5와 R6가 동일한 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  25. 제 1항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  26. 제 18항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  27. 제 26항에 있어서, 약물이 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  28. 제 27항에 있어서, 약물은 옥살리플라틴인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  29. 제 28항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  30. 제 26항에 있어서, 표지된 화합물이 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  31. 제 1항에 있어서, 약물은 항암제인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  32. 제 1항에 있어서, 약물은 세포독성 약물인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  33. 제 1항에 있어서, 약물은 토포이소머라아제 I 억제제인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  34. 제 33항에 있어서, 토포이소머라아제 I 억제제는 토포테칸 또는 이리노테칸인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  35. 제 1항에 있어서, 약물은 빈카 알칼로이드인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  36. 제 35항에 있어서, 빈카 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈류로신, 빈로디신, 빈오렐빈 또는 빈데신인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  37. 제 1항에 있어서, 약물은 핵산인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  38. 제 37항에 있어서, 핵산은 역배열의 올리고뉴클레오티드 또는 리보짐인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  39. 제 1항에 있어서, 약물은 백금 화합물인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  40. 제 39항에 있어서, 백금 화합물은 비플라틴, 시스플라틴, 카르보플라틴, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 제니플라틴, 엔로플라틴, 로바플라틴 또는 스피로플라틴인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  41. 제 40항에 있어서, 백금 화합물은 옥살리플라틴인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  42. 제 41항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일이고, m과 p는 3이고, 표적 리포좀은 트랜스페린이며, 하나 이상의 인지질은 DMPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  43. 제 1항에 있어서, 약물은 알킬화제인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  44. 제 1항에 있어서, 약물은 탁산인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  45. 제 1항에 있어서, 약물은 대사길항제인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  46. 제 1항에 있어서, 약물은 항종양 항생물질인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  47. 제 1항에 있어서, 약물은 호르몬 치료 약물인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  48. 제 1항에 있어서, 약물은 분자적 표적 약물인 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  49. 제 41항에 있어서, 옥살리플라틴은 트레할로오스, 말토오스, 수크로오스, 만노오스, 락토오스, 만니톨, 글리세롤 및 덱스트로오스로 구성되는 군으로부터 선택되는 당의 수성 용액에 용해되는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  50. 제 49항에 있어서, 당은 약 1 내지 약 20%의 퍼센트 당(v/v)의 농도에서 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  51. 제 41항에 있어서, 옥살리플라틴의 농도는 리포좀 내 약 0.1mg/ml 내지 약 25mg/ml에서 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  52. 제 15항에 있어서, 트랜스페린은 홀로-형에서 존재하는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  53. 제 1항에 있어서, 리포좀은 양이온성 지질을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  54. 제 1항에 있어서, 리포좀은 음이온성 지질을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 표적 리포좀.
  55. a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계;
    b) 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 약물 또는 표지된 화합물을 첨가하는 단계;
    c) 리포좀을 형성하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 1항의 표적 리포좀의 제조 방법.
  56. 제 55항에 있어서, 단계 (c)의 리포좀을 정제하기 위한 단계 (d)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제 55항에 있어서, 단계(b)에서 약물은 혼합 이전에 수성 용액에서 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 제 55항에 있어서, 단계 (c)는 초음파처리 또는 교반을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제 55항에 있어서, 단계 (c)는 압출성형을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  60. a) N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여, 지질 혼합물을 형성하는 단계
    [여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
    (화학식 2)
    ,
    상기식에서 R3과 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고,
    n은 독립적으로, 1 내지 10의 정수이다],
    b) 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 약물 또는 표지된 화합물을 첨가하는 단계;
    c) 리포좀을 형성하는 단계; 그리고
    d) N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르에 표적 리간드를 연결하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 1항의 표적 리포좀의 제조 방법.
  61. 제 60항에 있어서, 단계(d)의 리포좀을 정제하기 위한 단계(e)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 제 60항에 있어서, 단계(b)의 약물은 혼합에 이전에 수성 용액에서 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 제 60항에 있어서, 단계(c)는 초음파처리 또는 교반을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 제 60항에 있어서, 단계 (c)는 압출성형을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  65. a) 암을 치료하기에 유효한 양에서 이것이 필요한 환자에게 제 1항에 따르는 표적 리포좀을 투여하는 것으로, 여기서 표적 리포좀은 약물을 포함하고, 약물은 항암제인 것을 포함하는 암을 치료하기 위한 방법.
  66. a) 표지된 화합물을 포함하는 제 1항에 따르는 표적 리포좀을 검출을 위해 유효한 양으로 이것이 필요한 환자에 투여하는 단계; 그리고
    b) 표지된 화합물을 검출하는 단계를 포함하는 진단 방법.
  67. 제 1항에 따르는 표적 리포좀 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하는 약학적 제형.
  68. 트랜스페린-유도된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민으로서, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
    (화학식 3)
    (상기식에서 R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고 p는 1 내지 10의 정수이다)
    그리고 트랜스페린이 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결되어 있는 트랜스페린-유도된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  69. 제 68항에 있어서, p는 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  70. 제 69항에 있어서, p는 3인 것을 특징으로 하는 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  71. 제 69항에 있어서, R5와 R6은 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  72. 제 69항에 있어서, R5와 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  73. 제 69항에 있어서, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일인 것을 특징으로 하는 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  74. 제 69항에 있어서, R5와 R6는 올레올일 또는 스테아로일이고 p는 3인 것을 특징으로하는 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민.
  75. 제 69항 또는 제74항의 트랜스페린-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제 또는 보존제를 포함하는 약학적 제형.
  76. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 블랭크 리포좀으로서,
    표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 그리고
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
    (화학식 1)
    ; 그리고
    제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
    (화학식 3)
    ,
    (상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는, 독립적으로 1 내지 10이다); 그리고,
    리포좀은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 표적 리간드는 완전한 항체가 아닌 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  77. 제 76항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로하는 블랭크 리포좀.
  78. 제 77항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  79. 제 76항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린 및 포스파티딜글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  80. 제 76항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  81. 제 76항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  82. 제 81항에 있어서, 포스파티딜 콜린은 포화 지방산의 부분을 포함하는 것을 특징으로하는 블랭크 리포좀.
  83. 제 81항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  84. 제 83항에 있어서, 리포좀은 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  85. 제 84항에 있어서 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  86. 제 85항에 있어서, 혼합물은 DMPC와 콜레스테롤, DSPC와 콜레스테롤, POPC와 콜레스테롤 또는 DPPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  87. 제 86항에 있어서, 혼합물은 DMPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  88. 제 76항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 당 사슬, 및 모노클로널 항체의 단편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  89. 제 88항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산 및 당 사슬로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  90. 제 89항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  91. 제 88항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  92. 제 90항에 있어서, 트랜스페린은 홀로-형에서 존재하지만 아포-형에서는 존재하지 않는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  93. 제 76항에 있어서, 리포좀의 평균 직경은 약 50nm 내지 약 250nm인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  94. 제 76항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 p는 3인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  95. 제 94항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 이는 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  96. 제 76항에 있어서, m과 p는 각각, 독립적으로, 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  97. 제 76항에 있어서, m과 p는 동일하고 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  98. 제 97항에 있어서, m과 p는 동일하고 3인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  99. 제 76항에 있어서, R1, R2, R5와 R6은 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  100. 제 76항에 있어서, R1과 R2가 동일하고, R5와 R6가 동일한 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  101. 제 76항에 있어서, R1, R2, R5 및 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  102. 제 94항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  103. 제 94항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  104. 제 103항에 있어서, 트랜스페린은 홀로-형에서 존재하는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  105. 제 76항에 있어서, 리포좀은 양이온성 지질을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  106. 제 76항에 있어서, 리포좀은 음이온성 지질을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 블랭크 리포좀.
  107. a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 선택적으로 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계; 그리고
    b) 리포좀을 형성하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 76항의 블랭크 리포좀의 제조 방법.
  108. 제 107항에 있어서, 단계 (b)의 리포좀을 정제하기 위한 단계(c)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  109. 제 107항에 있어서, 단계 (b)는 초음파처리 또는 교반을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  110. 제 107항에 있어서, 단계 (b)는 압출성형을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  111. a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및 선택적으로 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여, 지질 혼합물을 형성하는 단계,
    여기서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
    (화학식 2)
    ,
    (상기식에서 R3과 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고,
    n은 독립적으로, 1 내지 10의 정수이다)
    b) 리포좀을 형성하는 단계; 그리고
    c) N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르에 표적 리간드를 연결하여 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 형성하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 76항의 블랭크 리포좀의 제조 방법.
  112. 제 111항에 있어서, 단계 (c)의 리포좀을 정제하기 위한 단계 (d)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  113. 제 111항에 있어서, 단계 (b)는 초음파처리 또는 교반을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  114. 제 111항에 있어서, 단계 (b)는 압출성형인 것을 특징으로 하는 방법.
  115. 제 111항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 방법.
  116. a) 제 76항의 블랭크 리포좀으로 약물을 캡슐화하는 단계를 포함하는 치료적 리포좀을 제조하는 방법.
  117. a) 제 76항의 블랭크 리포좀으로 표지된 화합물을 캡슐화하는 단계를 포함하는, 진단 리포좀을 제조하는 방법.
  118. a) 제 87항의 블랭크 리포좀으로 약물을 캡슐화하는 단계를 포함하는, 치료적 리포좀을 제조하는 방법.
  119. a) 제 87항의 블랭크 리포좀으로 표지된 화합물을 캡슐화하는 단계를 포함하는, 진단 리포좀을 제조하는 방법.
  120. 제 76항에 따르는 블랭크 리포좀 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제, 안정화제 또는 보존제를 포함하는 약학적 제형.
  121. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질의 혼합물을 포함하는 지질 혼합물로서,
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
    (화학식 1)
    , 그리고
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
    (화학식 2)
    ,
    (상기식에서 R1, R2, R3와 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 n은 독립적으로, 1 내지 10의 정수이다); 그리고,
    혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 포스파티딜 글리콜을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  122. 제 121항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  123. 제 122항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  124. 제 121항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린 및 포스파티딜글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 지질 혼합물.
  125. 제 121항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  126. 제 124항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  127. 제 126항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  128. 제 126항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  129. 제 128항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  130. 제 129항에 있어서, 혼합물은 DMPC와 콜레스테롤, DSPC와 콜레스테롤, POPC와 콜레스테롤, 또는 DPPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  131. 제 130항에 있어서, 혼합물은 DMPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  132. 제 121항에 있어서, m과 n은 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  133. 제 121항에 있어서, m과 n은 동일하고 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  134. 제 133항에 있어서, m과 n은 동일하고 3인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  135. 제 121항에 있어서, R1, R2, R3과 R4는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  136. 제 121항에 있어서, R1과 R2는 동일하고, R3와 R4가 동일한 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  137. 제 121항에 있어서, R1, R2, R3과 R4는 동일한 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  138. 제 137항에 있어서, R1, R2, R3과 R4는 올레오일 또는 스테아로일인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  139. 제 138항에 있어서, m과 n은 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  140. N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질의 혼합물을 포함하는 지질 혼합물로서,
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
    (화학식 1)
    , 그리고
    표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 그리고
    여기서 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고
    (화학식 3)
    ,
    (상기식에서 R1, R2, R5과 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는, 독립적으로 1 내지 10의 정수이다); 그리고,
    혼합물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 여기서 표적 리간드는 완전한 항체가 아닌 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  141. 제 140항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  142. 제 141항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  143. 제 140항에 있어서, 적어도 하나의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린 및 포스파티딜글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  144. 제 140항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  145. 제 143항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  146. 제 145항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  147. 제 145항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  148. 제 147항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  149. 제 148항에 있어서, DMPC와 콜레스테롤, DSPC와 콜레스테롤, POPC와 콜레스테롤, 또는 DPPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  150. 제 149항에 있어서, 혼합물은 DMPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  151. 제 140항에 있어서, m과 p는 각각 독립적으로 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  152. 제 140항에 있어서, m과 p는 동일하고 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  153. 제 152항에 있어서, m과 p는 동일하고 3인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  154. 제 140항에 있어서, R1, R2, R5과 R6는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  155. 제 140항에 있어서, R1과 R2는 동일하고, R5와 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  156. 제 140항에 있어서, R1, R2, R5과 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  157. 제 156항에 있어서, R1, R2, R5과 R6는 올레오일 또는 스테아로일인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  158. 제 140항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 당 사슬, 및 모노클로널 항체의 단편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  159. 제 158항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산 및 당 사슬로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  160. 제 159항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  161. 제 160항에 있어서, 트랜스페린은 홀로-형에서 존재하지만 아포-형에서는 존재하지 않는 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  162. 제 141항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 p는 3이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 지질 혼합물.
  163. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 121항의 지질 혼합물의 제조 방법.
  164. 하나 이상의 인지질, 적어도 하나의 추가적인 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르를 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 122항의 지질 혼합물의 제조 방법.
  165. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 140항의 지질 혼합물의 제조 방법.
  166. 하나 이상의 인지질, 적어도 하나의 추가적인 지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민을 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 140항의 지질 혼합물의 제조 방법.
  167. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 리포좀을 포함하는 리포좀-함유 조성물로서,
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
    (화학식 1)
    , 그리고
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르는 화학식 2로 표시되고,
    (화학식 2)
    (상기식에서 R1, R2, R3와 R4는 각각, 독립적으로, 아실기이고,
    m과 n은, 독립적으로 1 내지 10의 정수이다); 그리고,
    조성물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  168. 제 167항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  169. 제 168항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  170. 제 167항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린 및 포스파티딜글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  171. 제 167항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  172. 제 170항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  173. 제 172항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  174. 제 173항에 있어서, R1, R2, R3와 R4는 올레오일 또는 스테아로일이고, m과 n은 3인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  175. 제 173항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  176. 제 175항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  177. 제 176항에 있어서, 리포좀은 DMPC와 콜레스테롤, DSPC와 콜레스테롤, POPC와 콜레스테롤, DPPC와 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  178. 제 177항에 있어서, 리포좀은 DMPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  179. 제 167항에 있어서, m과 n은 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  180. 제 167항에 있어서, m과 n은 동일하고 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  181. 제 180항에 있어서, m과 n은 동일하고 3인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  182. 제 167항에 있어서, R1, R2, R3과 R4는 각각, 독립적으로, 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  183. 제 167항에 있어서, R1과 R2는 동일하고, R3와 R4가 동일한 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  184. 제 167항에 있어서, R1, R2, R3과 R4는 동일한 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  185. 제 184항에 있어서, R1, R2, R3과 R4는 올레오일 또는 스테아로일인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  186. 제 167항에 있어서, 용액을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  187. 제 186항에 있어서, 용액은 수성 용액 또는 수성 용액 및 물과 혼화 가능한 용매의 혼합물인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  188. 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 적어도 하나의 추가적인 지질을 포함하는 리포좀-함유 조성물로서,
    N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 1로 표시되고,
    (화학식 1)
    , 그리고
    표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민에 연결된 표적 리간드를 포함하고; 그리고
    제 2의 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민은 화학식 3으로 표시되고,
    (화학식 3)
    ,
    상기식에서 R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로, 아실기이고, m과 p는, 독립적으로, 1 내지 10의 정수이고; 그리고,
    조성물은 비-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않고, 표적 리간드는 완전한 항체가 아닌 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  189. 제 188항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  190. 제 189항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  191. 제 188항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린 및 포스파티딜글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  192. 제 188항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  193. 제 191항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  194. 제 193항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC, DSPC, POPC 또는 DPPC인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  195. 제 193항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  196. 제 195항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  197. 제 196항에 있어서, 리포좀은 DMPC와 콜레스테롤, DSPC와 콜레스테롤, POPC와 콜레스테롤 또는 DPPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  198. 제 197항에 있어서, 리포좀은 DMPC와 콜레스테롤을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  199. 제 188항에 있어서, m과 p는 각각 독립적으로, 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  200. 제 188항에 있어서, m과 p는 동일하고 2 내지 4의 정수인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  201. 제 200항에 있어서, m과 p는 동일하며 3인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  202. 제 188항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 각각, 독립적으로 올레오일, 스테아로일, 팔미토일 또는 미리스토일인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  203. 제 188항에 있어서, R1과 R2는 동일하고, R5와 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  204. 제 188항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 동일한 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  205. 제 188항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  206. 제 188항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산, 당 사슬, 모노클로널 항체의 단편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  207. 제 206항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린, 폴산, 히알루론산 및 당사슬로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  208. 제 206항에 있어서, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  209. 제 208항에 있어서, 트랜스페린은 홀로-형에서 존재하지만 아포-형에서는 존재하지 않는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  210. 제 194항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하며 콜레스테롤이고, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  211. 제 210항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  212. 제 188항에 있어서, 용액을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  213. 제 212항에 있어서, 용액은 수성 용액 또는 수성 용액 및 물과 혼화 가능한 용매의 혼합물인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  214. 제 189항에 있어서, R1, R2, R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 그리고 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  215. 제 167항, 제 168항, 제 173항, 제 188항, 제 189항 또는 제 194항 중 어느 한 항에 있어서 약물을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  216. 제 215항에 있어서, 약물은 항암제인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  217. 제 215항에 있어서, 약물은 세포독성 약물인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  218. 제 215항에 있어서, 약물은 토포이소머라아제 I 억제제인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  219. 제 218항에 있어서, 토포이소머라아제 I 억제제는 토포테칸 또는 이리노테칸인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  220. 제 215항에 있어서, 약물은 빈카 알칼로이드인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  221. 제 220항에 있어서, 빈카 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈류로신, 빈로디신, 빈오렐빈 또는 빈데신인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  222. 제 215항에 있어서, 약물은 핵산인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  223. 제 222항에 있어서, 핵산은 역배열의 올리고뉴클레오티드 또는 리보짐인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  224. 제 215항에 있어서, 약물은 백금 화합물인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  225. 제 224항에 있어서, 백금 화합물은 비플라틴, 시스플라틴, 카르보플라틴, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 제니플라틴, 엔로플라틴, 로바플라틴 또는 스피로플라틴인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  226. 제 225항에 있어서, 백금 화합물은 옥살리플라틴인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  227. 제 226항에 있어서, 존재할 때, 적어도 하나의 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  228. 제 227항에 있어서, 적어도 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  229. 제 227항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 중성 인지질인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  230. 제 229항에 있어서, 리포좀은 추가적인 지질을 포함하며, 지질은 콜레스테롤 또는 콜레스테롤 유도체인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  231. 제 226항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  232. 제 226항에 있어서, 옥살리플라틴의 농도는 리포좀 내에서 약 0.1mg/ml 내지 약 25mg/ml인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  233. 제 215항에 있어서, 약물은 알킬화제인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  234. 제 215항에 있어서, 약물은 탁산인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  235. 제 215항에 있어서, 약물은 대사길항제인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  236. 제 215항에 있어서, 약물은 항종양 항생제인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  237. 제 215항에 있어서, 약물은 호르몬 치료 약물인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  238. 제 215항에 있어서, 약물은 분자적 표적 약물인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  239. 제 226항에 있어서, 옥살리플라틴은 트레할로오스, 말토오스, 수크로오스, 락토오스, 만노오스, 만니톨, 글리세롤 및 덱스트로오스로 구성되는 군으로부터 선택되는 수성 용액에 용해되는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  240. 제 215항에 있어서, 존재할 때, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  241. 제 215항에 있어서, 하나 이상의 인지질은 DMPC 또는 DSPC이고, 존재하는 경우, R1, R2와 R5와 R6는 올레오일 또는 스테아로일이고, 여기서 존재하는, m과 p는 3이고, 여기서 존재하는, 적어도 하나의 추가적인 지질은 콜레스테롤이고, 약물은 옥살리플라틴이고, 존재하는, 표적 리간드는 트랜스페린인 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  242. 제 239항에 있어서, 당은 약 1 내지 약 20% 퍼센트 당 (v/v)의 농도에서 존재하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  243. 제 167항, 제 168항, 제 173항, 제 188항 또는 제 194항 중 어느 한 항에 있어서, 표지된 화합물을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  244. 제 243항에 있어서, 표지된 화합물은 방사성 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀-함유 조성물.
  245. a) 하나 이상의 인지질, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 그리고
    존재하는 경우, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 또는
    표적-인자 변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 및, 선택적으로, 존재하는 경우, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계; 그리고
    b) 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 약물을 첨가하는 단계; 그리고
    c) 조성물을 함유하는 리포좀을 형성하는 단계를 포함하는 제 215항의 리포좀-함유 조성물의 제조 방법.
  246. a) 하나 이상의 인지질, 및 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민, 그리고
    존재하는 경우, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르 또는 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 표적-인자, 및, 선택적으로, 존재하는 경우, 적어도 하나의 추가적인 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계; 그리고
    b) 단계 (a)에서 형성된 지질 혼합물에 표지된 화합물을 첨가하는 단계,
    c) 리포좀 함유 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 제 243항의 리포좀-함유 조성물의 제조 방법.
  247. a) 하나 이상의 인지질, N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민 및, 선택적으로, 적어도 하나의 지질을 혼합하여 지질 혼합물을 형성하는 단계; 그리고
    b) 단계(a)에서 형성된 혼합물에 용매를 첨가하여 리포좀-함유 조성물을 형성하는 단계들을 포함하는 제 188항의 리포좀-함유 조성물의 제조 방법.
  248. 제 247항에 있어서, 혼합 단계 (a)는 유기 용매의 존재 내에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  249. 제 247항에 있어서, 단계 (b) 내의 용매는 수성 용액 또는 수성용액과 물과 혼화 가능한 용매의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  250. 제 247항에 있어서, 단계 (b)는 초음파처리 또는 교반을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  251. 제 247항에 있어서, 단계 (b)는 압출성형을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  252. 제 245항에 있어서, 단계 (a)는 적어도 하나의 추가적인 지질이 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  253. 제 252항에 있어서, 단계 (a)에서 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민의 숙신이미딜 에스테르가 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  254. 제 252항에 있어서, 단계 (a)에서 표적 인자-변형된 N-(ω)-디카르복실산-유도된 포스파티딜 에탄올아민이 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
KR1020077023219A 2005-03-10 2006-03-08 신규 리포좀 조성물 KR101352490B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005067469A JP2006248978A (ja) 2005-03-10 2005-03-10 新規なリポソーム製剤
JPJP-P-2005-00067469 2005-03-10
PCT/US2006/008650 WO2006099169A2 (en) 2005-03-10 2006-03-08 Novel liposome compositions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20080002819A true KR20080002819A (ko) 2008-01-04
KR101352490B1 KR101352490B1 (ko) 2014-02-04

Family

ID=36992280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077023219A KR101352490B1 (ko) 2005-03-10 2006-03-08 신규 리포좀 조성물

Country Status (22)

Country Link
US (3) US7829113B2 (ko)
EP (1) EP1863448B1 (ko)
JP (2) JP2006248978A (ko)
KR (1) KR101352490B1 (ko)
CN (1) CN101170995B (ko)
AU (1) AU2006223329B2 (ko)
BR (1) BRPI0608297A2 (ko)
CA (1) CA2600446A1 (ko)
CY (1) CY1116075T1 (ko)
DK (1) DK1863448T3 (ko)
ES (1) ES2529453T3 (ko)
HK (1) HK1111625A1 (ko)
HU (1) HUE024290T2 (ko)
MX (1) MX2007010996A (ko)
NO (1) NO20075136L (ko)
NZ (1) NZ561569A (ko)
PL (1) PL1863448T3 (ko)
PT (1) PT1863448E (ko)
RU (1) RU2454229C2 (ko)
SI (1) SI1863448T1 (ko)
WO (1) WO2006099169A2 (ko)
ZA (1) ZA200708600B (ko)

Families Citing this family (89)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101376895B1 (ko) 2004-05-03 2014-03-25 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 약물 전달에 유용한 리포좀
JP2006248978A (ja) 2005-03-10 2006-09-21 Mebiopharm Co Ltd 新規なリポソーム製剤
CN101209243B (zh) * 2006-12-29 2010-12-08 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种脂质体药物及其制备方法
WO2009097011A1 (en) * 2007-08-17 2009-08-06 Celator Pharmaceuticals, Inc. Improved platinum drug formulations
WO2009036099A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Boston Biomedical, Inc. A novel group of stat3 pathway inhibitors and cancer stem cell pathway inhibitors
TWI468188B (zh) 2008-01-30 2015-01-11 Univ Tokushima Anti-cancer effect enhancers consisting of oxaliplatin liposomal preparations and anticancer agents comprising the formulation
CN102482666B (zh) * 2009-07-06 2017-02-08 变异生物技术公司 制备囊泡的方法和由其产生的制剂
US8956600B2 (en) * 2009-08-10 2015-02-17 Taiwan Liposome Co. Ltd. Ophthalmic drug delivery system containing phospholipid and cholesterol
US10143652B2 (en) * 2009-09-23 2018-12-04 Curirx Inc. Methods for the preparation of liposomes
US9402812B2 (en) * 2009-09-23 2016-08-02 Indu JAVERI Methods for the preparation of liposomes
WO2011102904A1 (en) * 2010-02-19 2011-08-25 Robert Shorr Imageable lipid-oil-water nanoemulsion therapeutic delivery system
RU2591823C2 (ru) 2010-03-19 2016-07-20 Бостон Байомедикал, Инк. Новые способы направленного воздействия на раковые стволовые клетки
WO2011128896A1 (en) * 2010-04-12 2011-10-20 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Iron oxide nanoparticles for use in treating non-infectious inflammatory disorders
KR101908445B1 (ko) 2010-11-12 2018-10-17 코어 파마슈티칼스 디벨롭먼트 컴퍼니 인크. 변형된 면역-조절 입자
WO2012153616A1 (ja) * 2011-05-10 2012-11-15 国立大学法人北海道大学 標的細胞移行能を有する脂質膜構造体、その製造方法および標的細胞において効果を示す物質のスクリーニング方法
WO2013011598A1 (ja) * 2011-07-15 2013-01-24 コニカミノルタホールディングス株式会社 溶解助剤を利用したリポソーム含有製剤およびその製造方法
EP3613852A3 (en) 2011-07-22 2020-04-22 President and Fellows of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
CA2858336A1 (en) * 2012-01-01 2013-07-04 Qbi Enterprises Ltd. Endo180-targeted particles for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents
AU2013202947B2 (en) 2012-06-13 2016-06-02 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan
US9717724B2 (en) 2012-06-13 2017-08-01 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies
RU2669346C2 (ru) 2012-06-21 2018-10-10 Норсвестерн Юниверсити Частицы, конъюгированные с пептидами
JP6230538B2 (ja) * 2012-08-10 2017-11-15 大鵬薬品工業株式会社 安定なオキサリプラチン封入リポソーム水分散液及びその安定化方法
AU2013360302C1 (en) 2012-12-12 2019-01-24 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Compositions and methods for treatment of cancer
CN103083239B (zh) * 2012-12-26 2015-11-25 中国人民解放军第四军医大学 一种蟾毒灵脂质体及其制备方法和应用
TWI718086B (zh) 2013-01-07 2021-02-11 英屬維爾京群島商遠東超級實驗室有限公司 通過干擾素的經皮和/或經粘膜給藥治療骨癌、皮膚癌、皮下癌、粘膜癌和/或粘膜下癌的方法和組合物
US9468681B2 (en) 2013-03-01 2016-10-18 California Institute Of Technology Targeted nanoparticles
CA2903254C (en) * 2013-03-13 2019-04-09 Mallinckrodt Llc Liposomal cisplatin compositions for cancer therapy
KR20230025948A (ko) 2013-03-13 2023-02-23 코어 파마슈티칼스 디벨롭먼트 컴퍼니 인크. 염증 치료용 면역-변형된 입자
US20140271820A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Mallinckrodt Llc Liposome oxaliplatin compositions for cancer therapy
SG11201508358RA (en) 2013-04-09 2015-11-27 Boston Biomedical Inc 2-acetylnaphtho[2,3-b]furan -4,9-dione for use on treating cancer
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
DK3033102T4 (da) 2013-08-13 2024-02-26 Univ Northwestern Peptidkonjugerede partikler
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
WO2016070129A1 (en) 2014-10-30 2016-05-06 President And Fellows Of Harvard College Delivery of negatively charged proteins using cationic lipids
US9228207B2 (en) 2013-09-06 2016-01-05 President And Fellows Of Harvard College Switchable gRNAs comprising aptamers
US9737604B2 (en) 2013-09-06 2017-08-22 President And Fellows Of Harvard College Use of cationic lipids to deliver CAS9
AU2014346559B2 (en) 2013-11-07 2020-07-09 Editas Medicine,Inc. CRISPR-related methods and compositions with governing gRNAs
US20150166982A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting pi3k point mutations
WO2015183357A2 (en) * 2014-02-21 2015-12-03 The Curators Of The University Of Missouri Compositions and methods for boron neutron capture therapy
US10077453B2 (en) 2014-07-30 2018-09-18 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
US10098813B2 (en) * 2014-09-03 2018-10-16 Sun Pharmaceutical Industries Limited Perfusion dosage form
US9816080B2 (en) 2014-10-31 2017-11-14 President And Fellows Of Harvard College Delivery of CAS9 via ARRDC1-mediated microvesicles (ARMMs)
US11318131B2 (en) 2015-05-18 2022-05-03 Ipsen Biopharm Ltd. Nanoliposomal irinotecan for use in treating small cell lung cancer
CA2990369A1 (en) 2015-06-24 2016-12-29 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Novel platinum (iv) complex
CA2992789A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Ipsen Biopharm Ltd. Combination therapy using liposomal irinotecan and a parp inhibitor for cancer treatment
EP3791876A1 (en) 2015-08-21 2021-03-17 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating metastatic pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan and oxaliplatin
JP6725520B2 (ja) 2015-09-14 2020-07-22 日本化薬株式会社 ６配位白金錯体の高分子結合体
MX2018004328A (es) 2015-10-16 2018-08-01 Ipsen Biopharm Ltd Composiciones farmaceuticas estabilizantes de camptotecina.
IL294014B1 (en) 2015-10-23 2024-03-01 Harvard College Nucleobase editors and their uses
WO2017087685A1 (en) * 2015-11-20 2017-05-26 The Regents Of The University Of California Deformable nano-scale vehicles (dnvs) for trans-blood brain barrier, trans-mucosal, and transdermal drug delivery
EP3395857B1 (en) 2015-12-22 2021-05-26 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of sulfoxide derivative-coordinated platinum(ii) complex
CN110590855B (zh) 2016-01-25 2023-05-12 沈阳药科大学 铂类配合物的制备方法及其含有该铂类配合物的脂质体与制备方法
CN109312341B (zh) * 2016-03-07 2024-02-27 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 微小rna及其使用方法
WO2017179614A1 (ja) * 2016-04-15 2017-10-19 富士フイルム株式会社 マイクロニードルアレイ
JP7019201B2 (ja) * 2016-08-02 2022-02-15 キュリアールエックス インコーポレーテッド リポソームの調製方法
AU2017306676B2 (en) 2016-08-03 2024-02-22 President And Fellows Of Harvard College Adenosine nucleobase editors and uses thereof
CA3033327A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 President And Fellows Of Harvard College Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
CA3033077C (en) 2016-08-12 2024-06-18 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha and gamma-d polyglutamated antifolates and uses thereof
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
CN110214180A (zh) 2016-10-14 2019-09-06 哈佛大学的校长及成员们 核碱基编辑器的aav递送
SG11201903615WA (en) 2016-11-02 2019-05-30 Ipsen Biopharm Ltd Treating gastric cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan, oxaliplatin, 5-fluoruracil (and leucovorin)
US11339209B2 (en) 2016-11-14 2022-05-24 Novartis Ag Compositions, methods, and therapeutic uses related to fusogenic protein minion
CA3045306A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Boston Biomedical, Inc. Naphthofuran derivatives, preparation, and methods of use thereof
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
US11898179B2 (en) 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
JP2020510439A (ja) 2017-03-10 2020-04-09 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ シトシンからグアニンへの塩基編集因子
KR20190130613A (ko) 2017-03-23 2019-11-22 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵산 프로그램가능한 dna 결합 단백질을 포함하는 핵염기 편집제
CN110869006A (zh) * 2017-05-12 2020-03-06 库里纳尔克斯有限公司 制备含药脂质体的方法
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
JP2020520923A (ja) 2017-05-17 2020-07-16 ボストン バイオメディカル， インコーポレイテッド がんを処置するための方法
WO2019023680A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 President And Fellows Of Harvard College METHODS AND COMPOSITIONS FOR EVOLUTION OF BASIC EDITORS USING PHAGE-ASSISTED CONTINUOUS EVOLUTION (PACE)
US11319532B2 (en) 2017-08-30 2022-05-03 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising Gam
US11795443B2 (en) 2017-10-16 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
EP3749317A4 (en) 2018-02-07 2022-06-22 L.E.A.F Holdings Group LLC PEMETREXED ALPHA-POLYGLUTAMATE AND ASSOCIATED USES
CA3090387A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated pralatrexate and uses thereof
CA3090875A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated lometrexol and uses thereof
CN108524450A (zh) * 2018-04-16 2018-09-14 温州医科大学 基于磁性热敏阳离子脂质体的奥沙利铂和mdc1-as共传递药物载体的制备及应用
CA3099440A1 (en) 2018-06-13 2019-12-19 California Institute Of Technology Nanoparticles for crossing the blood brain barrier and methods of treatment using the same
AU2019347666A1 (en) 2018-09-28 2021-03-25 President And Fellows Of Harvard College Cellular reprogramming to reverse aging and promote organ and tissue regeneration
JP2022512578A (ja) 2018-10-09 2022-02-07 ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア 有機溶媒不含かつ劣化剤不含のトランスフェクション・コンピテント・ベシクルを含む組成物及びシステム並びにそれらに関連する方法
CN111721841B (zh) * 2019-03-19 2022-07-12 海南长安国际制药有限公司 与洛铂有关物质的检测
EP3942040A1 (en) 2019-03-19 2022-01-26 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
CN110292563B (zh) * 2019-06-12 2021-07-16 兰州大学 基于叶酸热敏脂质体的阴离子载体诱导癌细胞凋亡的方法
EP4127175A2 (en) 2020-04-02 2023-02-08 Mirecule, Inc. Targeted inhibition using engineered oligonucleotides
MX2022014008A (es) 2020-05-08 2023-02-09 Broad Inst Inc Métodos y composiciones para la edición simultánea de ambas cadenas de una secuencia de nucleótidos de doble cadena objetivo.
CN112129871B (zh) * 2020-09-04 2021-06-15 斯微(上海)生物科技有限公司 复合磷脂脂质体中dope和m5两种磷脂含量的检测方法
CN112870164B (zh) * 2021-01-25 2021-12-17 山东大学 一种双靶向载药脂质体及其制备方法和应用
WO2023196851A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 President And Fellows Of Harvard College Reversing aging of the central nervous system

Family Cites Families (159)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6041077B2 (ja) 1976-09-06 1985-09-13 喜徳 喜谷 １，２‐ジアミノシクロヘキサン異性体のシス白金（２）錯体
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
GR75598B (ko) 1980-04-29 1984-08-01 Sanofi Sa
US4534899A (en) 1981-07-20 1985-08-13 Lipid Specialties, Inc. Synthetic phospholipid compounds
US4565696A (en) 1983-08-03 1986-01-21 The Regents Of The University Of California Production of immunogens by antigen conjugation to liposomes
US4789633A (en) 1984-04-19 1988-12-06 University Of Tennessee Research Corporation Fused liposome and acid induced method for liposome fusion
US4925661A (en) 1984-04-19 1990-05-15 Leaf Huang Target-specific cytotoxic liposomes
US5736155A (en) 1984-08-08 1998-04-07 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
EP0211042A1 (en) * 1985-01-18 1987-02-25 Cooper-Lipotech, Inc. Liposome composition and method
US4762915A (en) * 1985-01-18 1988-08-09 Liposome Technology, Inc. Protein-liposome conjugates
US5026651A (en) 1985-04-25 1991-06-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for the production of human transferrin
US4983397A (en) 1985-08-19 1991-01-08 Board Of Regents, University Of Texas System Pharmaceutical compositions consisting of acylated phospholipids
PH26160A (en) * 1985-08-19 1992-03-18 Univ Texas Pharmaceutical compositions consisting of acylated phospholipids
US5384127A (en) 1985-10-18 1995-01-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Stable liposomal formulations of lipophilic platinum compounds
JPH0714865B2 (ja) 1986-10-28 1995-02-22 武田薬品工業株式会社 リポソ−ム製剤およびその製造法
US5049390A (en) 1987-09-02 1991-09-17 Allergy Immuno Technologies, Inc. Liposome containing immunotherapy agents for treating IgE mediated allergies
US4853224A (en) 1987-12-22 1989-08-01 Visionex Biodegradable ocular implants
FR2631826B1 (fr) 1988-05-27 1992-06-19 Centre Nat Rech Scient Vecteur particulaire utile notamment pour le transport de molecules a activite biologique et procede pour sa preparation
JPH0720857B2 (ja) 1988-08-11 1995-03-08 テルモ株式会社 リポソームおよびその製法
DE69034042T2 (de) 1989-08-02 2003-07-17 Mitra Medical Technology Ab Lu System zur verwendung in einem verfahren zur therapeutischen und diagnostischen behandlung
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPH06504523A (ja) * 1990-10-09 1994-05-26 ネクスター・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド サクシニミジル部分を有するリン脂質類似体小胞
US5554728A (en) 1991-07-23 1996-09-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Lipid conjugates of therapeutic peptides and protease inhibitors
US6509032B1 (en) 1991-08-28 2003-01-21 Mcmaster University Cationic amphiphiles
US5292524A (en) 1991-09-06 1994-03-08 California Institute Of Technology Blood platelet loaded with diagnostic or therapeutic-containing liposome or reconstituted Sendai virus
JPH0776230B2 (ja) 1992-01-13 1995-08-16 田中貴金属工業株式会社 白金化合物の製造方法
JP2673331B2 (ja) 1993-01-12 1997-11-05 田中貴金属工業 株式会社 光学的に高純度なシス―オキザラート（トランス―１―１，２―シクロヘキサンジアミン）白金（▲ｉｉ▼）
JPH06287021A (ja) 1992-04-22 1994-10-11 Tanaka Kikinzoku Kogyo Kk 光学活性な白金錯化合物の光学的分割方法
US20030190638A1 (en) 1992-05-13 2003-10-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of screening for compounds that derepress or increase telomerase activity
US20030100489A1 (en) 1992-10-16 2003-05-29 Beach David H. Cell-cycle regulatory proteins, and uses related thereto
US5962316A (en) 1992-10-16 1999-10-05 Cold Spring Harbor Laboratory Cell-cycle regulatory proteins, and uses related thereto
WO1994026254A1 (en) 1993-05-17 1994-11-24 The Liposome Company, Inc. Incorporation of taxol into liposomes and gels
JP3025602B2 (ja) 1993-05-21 2000-03-27 デビオファーム エス．アー． 光学的に高純度なシス−オキザラート（トランス−ｌ−１，２−シクロヘキサンジアミン）白金（ＩＩ）錯体の製造方法
US5534241A (en) 1993-07-23 1996-07-09 Torchilin; Vladimir P. Amphipathic polychelating compounds and methods of use
DE69431236T2 (de) * 1993-10-06 2003-01-02 Amgen Inc Stabile protein-phospholipid zusammensetzungen und verfahren
WO1995016774A1 (en) 1993-12-17 1995-06-22 Spinal Cord Society Method for inducing dna synthesis in neurons
US6057299A (en) 1994-01-13 2000-05-02 Calydon, Inc. Tissue-specific enhancer active in prostate
US5830686A (en) 1994-01-13 1998-11-03 Calydon Tissue-specific enhancer active in prostate
JP3590983B2 (ja) * 1994-03-04 2004-11-17 日本油脂株式会社 リン脂質誘導体
CA2185810A1 (en) 1994-03-28 1995-10-05 Jo Klaveness Liposomes
EP0773921B1 (en) 1994-07-29 1999-12-01 Abbott Laboratories Process for the preparation of a substituted 2.5-diamino-3-hydroxyhexane
BR9508554A (pt) 1994-08-08 1997-11-25 Debiopharm Sa Preparação farmaceuticamente estável de oxaliplatina
AU707414B2 (en) * 1994-10-14 1999-07-08 Liposome Company, Inc., The Ether lipid liposomes and their therapeutic use
EP1369116A1 (en) 1994-11-11 2003-12-10 Debiopharm S.A. Oxalatoplatin and 5-fluorouracil for combination therapy of cancer
US5786214A (en) 1994-12-15 1998-07-28 Spinal Cord Society pH-sensitive immunoliposomes and method of gene delivery to the mammalian central nervous system
US5580899A (en) * 1995-01-09 1996-12-03 The Liposome Company, Inc. Hydrophobic taxane derivatives
US6008202A (en) 1995-01-23 1999-12-28 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
TW319763B (ko) 1995-02-01 1997-11-11 Epix Medical Inc
US5780052A (en) 1995-04-24 1998-07-14 Northeastern University Compositions and methods useful for inhibiting cell death and for delivering an agent into a cell
US5834012A (en) * 1995-05-03 1998-11-10 Roman Perez-Soler Lipid complexed topoisomerase I inhibitors
US20020022264A1 (en) 1995-05-26 2002-02-21 Sullivan Sean M. Delivery vehicles comprising stable lipid/nucleic acid complexes
US6825174B2 (en) 1995-06-07 2004-11-30 East Carolina University Composition, formulations & method for prevention & treatment of diseases and conditions associated with bronchoconstriction, allergy(ies) & inflammation
JPH09278785A (ja) 1996-04-10 1997-10-28 Tanaka Kikinzoku Kogyo Kk 白金化合物の製造方法
FR2740686B1 (fr) 1995-11-03 1998-01-16 Sanofi Sa Formulation pharmaceutique lyophilisee stable
US6428977B1 (en) 1995-12-20 2002-08-06 Curis, Inc. Signalin family of TGFβ signal transduction proteins, and uses related thereto
JP3735921B2 (ja) 1996-02-07 2006-01-18 三菱ウェルファーマ株式会社 ＧＰＩｂ・脂質複合体およびその用途
WO1997028817A1 (en) 1996-02-09 1997-08-14 Cheng Pi Wan Receptor ligand-facilitated delivery of biologically active molecules
AU2163797A (en) 1996-03-11 1997-10-01 Debiopharm S.A. Binuclear platinum complexes, method for preparing same and pharmaceutical compositions containing said complexes
US6197333B1 (en) 1996-03-28 2001-03-06 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Materials and methods for making improved liposome compositions
JP3154399B2 (ja) 1996-07-04 2001-04-09 デビオファーム エス．アー． 白金化合物の製造方法
WO1997042166A1 (fr) 1996-05-02 1997-11-13 Terumo Kabushiki Kaisha Derives amidines et vecteurs de medicaments les contenant
ES2208946T3 (es) 1996-08-23 2004-06-16 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Liposomas que contienen un compuesto de cisplatino.
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
TW520297B (en) * 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
IL130822A (en) 1996-10-15 2005-12-18 Elan Pharm Inc N-acyl phosphatidylethanolamine-mediated liposomaldrug delivery
IL130823A (en) * 1996-10-15 2005-12-18 Elan Pharm Inc Peptide-lipid conjugates, liposomes drug delivery
WO1998027209A1 (en) 1996-12-18 1998-06-25 Emory University Polycationic oligomers
EP1014990B1 (en) 1997-03-07 2006-09-06 Sanofi-Aventis U.S. LLC Antitumor combination of 3-amino-1,2,4-benzotriazine 1,4-dioxide/paclitaxel/platinum
JPH10253632A (ja) 1997-03-10 1998-09-25 Nissui Pharm Co Ltd 分析方法、キット及び装置
DE19709704C2 (de) 1997-03-10 1999-11-04 Michael Georgieff Verwendung einer flüssigen Präparation von Xenon zur intravenösen Verabreichung bei Einleitung und/oder Aufrechterhaltung der Anaesthesie
US6120751A (en) * 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US6524613B1 (en) 1997-04-30 2003-02-25 Regents Of The University Of Minnesota Hepatocellular chimeraplasty
US6272370B1 (en) 1998-08-07 2001-08-07 The Regents Of University Of Minnesota MR-visible medical device for neurological interventions using nonlinear magnetic stereotaxis and a method imaging
AU7984498A (en) 1997-06-25 1999-01-04 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Serum-free cell growth medium
AU742407B2 (en) 1997-07-15 2002-01-03 Regents Of The University Of California, The Isolated DNA encoding human calcium activated potassium channel
WO1999006576A1 (en) 1997-08-04 1999-02-11 Calydon, Inc. A human glandular kallikrein enhancer, vectors comprising the enhancer and methods of use thereof
ES2206996T3 (es) 1997-10-02 2004-05-16 Epix Medical Inc Metodo de formacion de imagenes para diagnostico con contraste mejorado para monitorizar terapias de intervencion.
US6749863B1 (en) 1997-11-19 2004-06-15 Georgetown University Targeted liposome gene delivery
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
US6573101B1 (en) 1998-02-12 2003-06-03 The Regents Of The University Of California Compositions for receptor/liposome mediated transfection and methods of using same
GB9804013D0 (en) 1998-02-25 1998-04-22 Sanofi Sa Formulations
US6245427B1 (en) 1998-07-06 2001-06-12 DüZGüNES NEJAT Non-ligand polypeptide and liposome complexes as intracellular delivery vehicles
BRPI9914508B8 (pt) 1998-10-14 2021-05-25 Debiopharm Sa bolsa flexível impermeável para uso médico contendo uma preparação farmacêutica de oxaliplatina sob a forma líquida
US6723338B1 (en) 1999-04-01 2004-04-20 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions and methods for treating lymphoma
US7311924B2 (en) 1999-04-01 2007-12-25 Hana Biosciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer
JP2003502025A (ja) 1999-05-17 2003-01-21 エイブイアイ バイオファーマ， インコーポレイテッド ｈｃＧワクチンを用いた癌の処置のための併用アプローチ
JP2001002592A (ja) 1999-06-18 2001-01-09 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 遺伝子導入用組成物
US6280054B1 (en) * 1999-07-02 2001-08-28 Zight Corporation Image generator having an improved illumination system
US6242188B1 (en) 1999-07-30 2001-06-05 Applied Gene Technologies, Inc. Sample processing to release nucleic acids for direct detection
EP1204241A1 (en) * 1999-08-09 2002-05-08 Fujitsu Limited Package control device and method
ES2206288T3 (es) 1999-08-30 2004-05-16 Debiopharm S.A. Preparacion farmaceutica estable de oxiliplatino para su administracion por via parenteral.
CA2733819A1 (en) 1999-12-30 2001-07-12 Judith K. Gwathmey Iron chelator delivery system
CA2395636A1 (en) 1999-12-30 2001-07-12 Novartis Ag Novel colloid synthetic vectors for gene therapy
WO2001051003A2 (en) * 2000-01-10 2001-07-19 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Use of lipid conjugates in the treatment of disease
US6530944B2 (en) 2000-02-08 2003-03-11 Rice University Optically-active nanoparticles for use in therapeutic and diagnostic methods
US7001735B2 (en) 2000-03-01 2006-02-21 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Glucose transporter/sensor protein and uses thereof
EP1262490B1 (en) 2000-03-02 2007-10-03 Mitsubishi Pharma Corporation GPib-LIPID BOND CONSTRUCT AND USE THEREOF
JP4449147B2 (ja) 2000-03-22 2010-04-14 日油株式会社 ホスファチジルエタノールアミン誘導体の製造方法
FR2806727A1 (fr) 2000-03-23 2001-09-28 Pf Medicament Molecule d'interet pharmaceutique comprotant en son extremite n-terminale un acide glutamique ou une glutamine sous forme de sel d'addition d'acide fort physiologiquement acceptable
PT1272160E (pt) 2000-04-12 2007-04-30 Liplasome Pharma As Sistemas de distribuição de fármacos com base lipídica para aplicação tópica.
JP2004511426A (ja) 2000-05-03 2004-04-15 ミュンヘン　バイオテク　アーゲー 活性化血管部位に関連する陽イオン性の診断薬、画像化剤、および治療薬
US20030059461A1 (en) 2000-06-06 2003-03-27 Sibtech, Inc. Molecular delivery vehicle for delivery of selected compounds to targets
US20030072794A1 (en) 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
DE60136747D1 (de) 2000-09-11 2009-01-08 Pasteur Institut Mitochondrialen membrane permeabilisierung durch hiv-1 vpr und screeningsverfahren
US20040234588A1 (en) 2000-09-21 2004-11-25 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Artificial lipoprotein carrier system for bioactive materials
DE60108405D1 (de) 2000-10-03 2005-02-17 Debiopharm Sa Plga/pla-typ mikrokugeln enthaltend eine wasserlösliche verbindung und herstellungsverfahren dafür
US20030129223A1 (en) 2000-10-11 2003-07-10 Targesome, Inc. Targeted multivalent macromolecules
EP1209469A1 (en) * 2000-11-22 2002-05-29 Vectron Therapeutics AG Production and use of a targeted diagnostic system
EP1341555A2 (fr) 2000-12-12 2003-09-10 Debiopharm S.A. Preparation pharmaceutique d'oxaliplatine pour administration par voie parenterale et procede d'obtention de ladite preparation
AU2037402A (en) 2000-12-12 2002-06-24 Australian Inst Marine Science Assay for paralytic shellfish toxin
US6897196B1 (en) 2001-02-07 2005-05-24 The Regents Of The University Of California pH sensitive lipids based on ortho ester linkers, composition and method
US6703524B2 (en) 2001-02-20 2004-03-09 Lkt Laboratories, Inc. Organoselenium compounds for cancer chemoprevention
SI1368022T1 (sl) 2001-03-02 2007-10-31 Debiopharm Sa Uporaba stekleničke, ki vsebuje raztopino oksaliplatina
FI113840B (fi) 2001-03-26 2004-06-30 Ctt Cancer Targeting Tech Oy Matriisi-metalloproteinaasi-inhibiittorien käyttö liposomien kohdentamisessa
US20040049022A1 (en) 2001-04-24 2004-03-11 Nyce Jonathan W. Composition & methods for treatment and screening
CA2445947A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Targeted Genetics Corporation Lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
WO2002089772A1 (en) 2001-05-09 2002-11-14 Inex Pharmaceuticals Corporation Anti-angiogenic therapy using liposome-encapsulated chemotherapeutic agents
US20030108986A1 (en) 2001-06-21 2003-06-12 Euroscreen, S.A. Compositions and methods comprising G-protein coupled receptors
US20040186172A1 (en) 2001-07-02 2004-09-23 Houssam Ibrahim Oxaliplatin active substance with a very low content of oxalic acid
US20030096299A1 (en) 2001-07-09 2003-05-22 Valerie Wittamer Natural ligand of G protein coupled receptor ChemR23 and uses thereof
CA2457148A1 (en) 2001-08-20 2003-02-27 Transave, Inc. Treatment of cancers by inhalation of stable platinum-containing formulations
DE10144252A1 (de) 2001-08-31 2003-03-27 Fraunhofer Ges Forschung Nanopartikel mit daran immobilisiertem biologisch aktivem TNF
AU2002330139A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Vanderbilt University In vivo panning for ligands to radiation-induced molecules
US7101985B2 (en) 2001-11-20 2006-09-05 Baylor College Of Medicine Methods and compositions in checkpoint signaling
JP4468617B2 (ja) 2001-12-04 2010-05-26 デビオファーム エス．アー． 抗癌剤の併用投与方法及び併用可能な抗癌剤
US6476068B1 (en) 2001-12-06 2002-11-05 Pharmacia Italia, S.P.A. Platinum derivative pharmaceutical formulations
CA2471504C (en) 2002-01-07 2014-05-20 Euroscreen S.A. Ligand for g-protein coupled receptor gpr43 and uses thereof
US20030220284A1 (en) 2002-02-22 2003-11-27 Patricia Yotnda Delivery of adenoviral DNA in a liposomal formulation for treatment of disease
AU2003278807A1 (en) 2002-03-01 2004-08-13 Bracco International B.V. Kdr and vegf/kdr binding peptides and their use in diagnosis and therapy
CN102174108B (zh) 2002-03-01 2016-06-29 免疫医疗公司 内在化抗-cd74抗体和使用方法
WO2003082907A1 (en) 2002-03-29 2003-10-09 Euroscreen Sa Ligands for g protein coupled receptor gpr7 and uses thereof
CA2391438A1 (en) 2002-05-01 2003-11-01 Procyon Biopharma Inc. Psp94 diagnostic reagents and assays
US20030228285A1 (en) 2002-05-03 2003-12-11 Mien-Chie Hung Bipartite T-cell factor (Tcf)-responsive promoter
US7460960B2 (en) 2002-05-10 2008-12-02 Epitome Biosystems, Inc. Proteome epitope tags and methods of use thereof in protein modification analysis
JP3415131B1 (ja) * 2002-06-03 2003-06-09 メビオファーム株式会社 リポソーム製剤
US20040022842A1 (en) 2002-06-03 2004-02-05 Mebiopharm Co., Ltd. Liposome preparations containing oxaliplatin
FR2840236B1 (fr) 2002-06-03 2005-02-04 Inst Francais Du Petrole Membrane zeolithique de faible epaisseur, sa preparation et son utilisation en separation
AU2003244766A1 (en) 2002-06-07 2003-12-22 Immunomedics, Inc. Neutrophil imaging methods in cyctic fibrosis
MXPA04012656A (es) 2002-06-14 2005-08-15 Immunomedics Inc Anticuerpo hpam4 monoclonal humanizado.
US7238786B2 (en) 2002-06-14 2007-07-03 Immunomedics, Inc. Monoclonal antibody cPAM4
US6790632B2 (en) 2002-06-17 2004-09-14 Stephen Eliot Zweig Membrane receptor reagent and assay
WO2004002453A1 (en) 2002-06-28 2004-01-08 Protiva Biotherapeutics Ltd. Method and apparatus for producing liposomes
CA2494310A1 (en) 2002-08-01 2004-02-12 Immunomedics, Inc. Alpha-fetoprotein immu31 antibodies and fusion proteins and methods of use thereof
US20040132652A1 (en) 2002-08-30 2004-07-08 Shire Biochem Inc. Pharmaceutical compositions
WO2004045519A2 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Kirk Sperber Induction of apoptosis by hiv-1 infected monocytic cells
CA2505918C (en) 2002-11-15 2011-02-01 Nipro Corporation A liposome having bound albumin and peg
KR20050105454A (ko) 2003-02-17 2005-11-04 메비오팜 가부시키가이샤 암 치료약
US20050003403A1 (en) 2003-04-22 2005-01-06 Rossi Edmund A. Polyvalent protein complex
CA2529027C (en) 2003-06-13 2013-09-10 Immunomedics, Inc. D-amino acid peptides
US7109304B2 (en) 2003-07-31 2006-09-19 Immunomedics, Inc. Humanized anti-CD19 antibodies
JP2005154282A (ja) 2003-11-20 2005-06-16 Mebiopharm Co Ltd ガス封入リポソームの製造法
US7582430B2 (en) * 2004-01-20 2009-09-01 United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Immunoliposome-nucleic acid amplification (ILNAA) assay
US7212869B2 (en) * 2004-02-04 2007-05-01 Medtronic, Inc. Lead retention means
CN1679957B (zh) 2004-03-15 2010-06-09 尼普洛株式会社 含脂质体的癌症治疗用药物组合物
JP2006248978A (ja) 2005-03-10 2006-09-21 Mebiopharm Co Ltd 新規なリポソーム製剤
WO2008030818A2 (en) 2006-09-05 2008-03-13 Mebiopharm Co., Ltd. Novel liposome compositions
JP5345792B2 (ja) 2008-02-19 2013-11-20 テイ・エス テック株式会社 車両用格納シート
JP5331648B2 (ja) 2009-10-22 2013-10-30 株式会社日立製作所 微粉炭ボイラの改造方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA2600446A1 (en) 2006-09-21
CN101170995B (zh) 2013-01-16
KR101352490B1 (ko) 2014-02-04
PL1863448T3 (pl) 2015-05-29
SI1863448T1 (sl) 2015-03-31
HK1111625A1 (en) 2008-08-15
JP2006248978A (ja) 2006-09-21
BRPI0608297A2 (pt) 2009-12-08
MX2007010996A (es) 2007-11-07
CY1116075T1 (el) 2017-02-08
AU2006223329A1 (en) 2006-09-21
JP5438317B2 (ja) 2014-03-12
DK1863448T3 (en) 2015-02-16
HUE024290T2 (en) 2016-01-28
US20110081404A1 (en) 2011-04-07
NZ561569A (en) 2011-03-31
CN101170995A (zh) 2008-04-30
US7829113B2 (en) 2010-11-09
PT1863448E (pt) 2015-02-10
RU2007137492A (ru) 2009-04-20
US8758810B2 (en) 2014-06-24
EP1863448B1 (en) 2014-11-26
WO2006099169A3 (en) 2007-02-22
AU2006223329B2 (en) 2011-11-17
JP2008538105A (ja) 2008-10-09
RU2454229C2 (ru) 2012-06-27
ES2529453T3 (es) 2015-02-20
ZA200708600B (en) 2009-01-28
EP1863448A2 (en) 2007-12-12
WO2006099169A2 (en) 2006-09-21
US20060222696A1 (en) 2006-10-05
US20140363491A1 (en) 2014-12-11
NO20075136L (no) 2007-12-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101352490B1 (ko) 신규 리포좀 조성물
Zalba et al. Cetuximab-oxaliplatin-liposomes for epidermal growth factor receptor targeted chemotherapy of colorectal cancer
JP7355394B2 (ja) カロテノイド組成物およびその使用
WO2008030818A2 (en) Novel liposome compositions
EP0804159B1 (en) Sphingosomes for enhanced drug delivery
US20160235671A1 (en) Liposomal pharmaceutical preparation and method for manufacturing the same
US9371364B2 (en) Dual-targeted therapeutic peptide for nasopharyngeal carcinoma, nanoparticles carrying same and uses thereof
US20210213051A1 (en) Combined pharmaceutical formulation comprising drug-containing liposome composition and platinum preparation
Qu et al. Targeted delivery of doxorubicin via CD147-mediated ROS/pH dual-sensitive nanomicelles for the efficient therapy of hepatocellular carcinoma
Mehrabian et al. Preparation, characterization, and biodistribution of glutathione PEGylated nanoliposomal doxorubicin for brain drug delivery with a post-insertion approach
US20210100791A1 (en) Combined pharmaceutical formulation comprising drug-containing liposome composition and immune checkpoint inhibitor
CN108926719B (zh) 用c(RGD-ACP-K)修饰的长循环脂质体
KR102540728B1 (ko) 면역세포-나노리포좀 복합체 및 이의 제조 방법
Nourizadeh et al. StatNano Applied and Industrial Series Nano-pharmaceutical Products
Vakili-Ghartavol et al. Preparation, Characterization, and Biodistribution of Glutathione PEGylated Nanoliposomal Doxorubicin for Brain Drug Delivery with A Post-insertion Approach

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee