KR20060064566A - 살균 조성물, 방법 및 시스템 - Google Patents

살균 조성물, 방법 및 시스템 Download PDF

Info

Publication number
KR20060064566A
KR20060064566A KR1020057023375A KR20057023375A KR20060064566A KR 20060064566 A KR20060064566 A KR 20060064566A KR 1020057023375 A KR1020057023375 A KR 1020057023375A KR 20057023375 A KR20057023375 A KR 20057023375A KR 20060064566 A KR20060064566 A KR 20060064566A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
edta
solution
salt
concentration
tetrasodium
Prior art date
Application number
KR1020057023375A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101111453B1 (ko
Inventor
피터 카이트
데이비드 해튼
Original Assignee
타이코 헬스케어 그룹 엘피
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 타이코 헬스케어 그룹 엘피 filed Critical 타이코 헬스케어 그룹 엘피
Publication of KR20060064566A publication Critical patent/KR20060064566A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101111453B1 publication Critical patent/KR101111453B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N31/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
    • A01N31/02—Acyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/16—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using chemical substances
    • A61L2/18—Liquid substances or solutions comprising solids or dissolved gases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L29/00—Materials for catheters, medical tubing, cannulae, or endoscopes or for coating catheters
    • A61L29/14—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. lubricating compositions
    • A61L29/16—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/04—Amoebicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2202/00—Aspects relating to methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects
    • A61L2202/10—Apparatus features
    • A61L2202/11—Apparatus for generating biocidal substances, e.g. vaporisers, UV lamps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2202/00—Aspects relating to methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects
    • A61L2202/20—Targets to be treated
    • A61L2202/24—Medical instruments, e.g. endoscopes, catheters, sharps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/21—Acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/21—Acids
    • A61L2300/214—Amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Eyeglasses (AREA)

Abstract

본 발명은 한 가지 이상의 EDTA 염을 함유하는 살균 조성물에 관한 것이다. 이들 조성물은 광범위한 스펙트럼의 항미생물 및 항진균 활성과 항응고제 특성을 갖는다. 상기 살균 조성물은 또한 미생물 점액 또는 바이오필름을 통과하고 파괴하는 활성을 나타낸다. 이들은 인간 및 의료 사용에 안전하며, 감염 예방, 존재하거나 확립된 감염의 증식 감소 및/또는 제거를 위하여 사용될 수 있다.

Description

살균 조성물, 방법 및 시스템{ANTISEPTIC COMPOSITIONS, METHODS AND SYSTEMS}
본 발명은, 산업 위생적 및 환경 위생적 적용을 포함하는 일반적인 위생적 적용 뿐 아니라 다양한 의약적 적용으로 사용하기 위한 살균 조성물, 방법 및 시스템에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 항균, 항진균, 항바이러스 및 항아메바 성질을 가지며, 또한 항응고제로서의 역할도 할 수 있다. 에틸렌 디아민 테트라아세트산 (EDTA)(C10H12N2Na408)의 특정 염과 조성물을 소정의 농도와 pH 레벨로 사용하였다. 대표적인 적용예는 용액 형태 또는 바이오필름과 같은 복합체 형태로 표면에 존재하는 미생물 및/또는 진균체를 억제하거나, 감소시키거나, 제거하는 것을 포함한다. 대표적인 방법은 사물의 표면상에 살균 코팅제를 적용하여 감염 빈도를 감소시키고, 사물 및/또는 표면을 살균액을 사용하여 수세(flushing), 침지(soaking) 또는 헹굼(rinsing)하여 미생물 개체수의 증식을 억제하고, 미생물 개체군을 감소시키거나 제거하는 것을 포함한다.
감염은 의료 분야와 같이 위생 상태가 중요한 많은 분야에 있어서 심각한 문제이다. 문제성 감염은 박테리아, 진균, 아메바, 원생동물 및/또는 바이러스로부터 비롯될 수 있다. 항원 공격(Challenge)은 감염의 예방과 이미 확립된 감염의 감소 또는 제거 시에 모두 발생하게 된다. 감염된 환경은 사물의 표면, 유체 및 유체 도관, 및/또는 인간 또는 동물을 포함한다.
알코올 용액과 이소프로필 알코올 와이프는 일반적으로 표면을 살균하는데 사용되며, 항균 활성을 갖는 것으로 나타났다. 70% 이소프로판올 용액이 가장 효과적인 억제적 항미생물 효과 보여주었다. 상기 농도의 알코올 용액은 매우 비싸고 급속하게 증발되어, 그 효능을 실질적으로 감소시키고 비용을 증가시킨다. 더욱이, 이소프로판올 용액은 인간 피부를 포함한 표면상에 다양한 의약적 적용으로 사용될 수 있지만, 상기 농도의 알코올 용액은 인간에게 국부적 이외의 다른 의약 목적으로 적용할 수 없다.
의료 분야에 있어서, 다양한 유형과 원인의 감염은 일반적으로 빈번하게 오랜 병원 생활을 초래하며, 많은 입원 비용을 발생시킨다. 더욱 안 좋은 것은, 매년 90,000 이상의 환자가 병원내 감염(nosocomial infection) - 즉, 병원 또는 다른 의료 환경에서의 생긴 감염에 의하여 사망한다는 것이다. 병원내 감염의 감독은 병원 업무의 없어서는 안될 중요한 부분이 되었다. 20 여년 이상 전부터 질병통제센터 (Centers for Disease Control and Prevention, CDC)에 의한 연구는 병원내 감염의 발생을 감소시키는데 있어서의 이들 감독 활동의 효과를 보고하였다. 그러나, 병원내 감염의 문제점에 주의가 기울여짐에도 불구하고, 감염률은 현저하게 줄어들지 않고 있으며, 병원내 감염은 실질적인 위험과 실질적인 보건상 문제를 남긴다.
의학 및 수의학 분야에 있어서의 감염의 문제 근원 중 하나는 카테테르, 특 히, 유치 카테테르(in-dwelling catheter)에서 찾을 수 있다. 카테테르는 위독한 치료 환자의 처치에 필수적인 것이 되었으나, 그럼에도 카테테르 내부는 종종 주요 감염원이 되고 있다. 카테테르는 체액, 혈액 산물, 약물 및 영양분을 전달하기 위하여 사용되며, 혈액 투석, 혈액 여과, 복막투석, 혈액 샘플 검색, 환자 상태의 모니터링 등에도 또한 사용된다. 경피 카테테르는 종종 카테테르의 피부 관통에 의하여 감염되게 된다. 모든 병원내 혈류 감염의 70%가 중심 정맥 카테테르에서 발생한다는 것이 밝혀졌다. Daouicher et al . New Engl . J. Med. 340: 1-8 (1999).
특히, 일부 시술 동안에, 카테테르가, 예컨대 30일 이상과 같이 비교적 장기간 동안, 환자에게 이식되거나 이식된 상태로 남아있어야 한다. 정맥 (IV) 치료 카테테르와 비뇨기 카테테르는 통상적으로 상당한 기간 동안 이식된 채로 남아 있는다. 삽입 부위의 외상과 환자의 고통 때문에, 이러한 카테테르를 자주 제거하고 삽입할 수 없다. 카테테르 매개 (catheter-borne) 박테리아는 요로 감염의 일차적 감염원으로서 관련되어 있다. 임신 동안에 말초 삽입형 중심 정맥 카테테르 시술을 받은 환자는 감염 합병증에 대하여 상당한 위험을 갖는다는 것이 또한 밝혀졌다. Ogura et al . m.J. Obstet . Gynecol. 188 (5): 1223-5 (2003). 게다가, 중심 정맥 카테테르 감염은 카테테르 관련 패혈증을 일으키며, 가정에서의 비경구적 영양법 동안의 가장 빈번한 합병증으로 인용된다. Reimund et al . Clinical Nutrition, 21 (1): 33-38 (2002). 감염의 위험 때문에, 카테테르 삽입은 이러한 시술이 절대적으로 필요한 경우로 제한될 수 있다. 이는 환자의 건강을 심각하게 손상시킨다.
카테테르를 수반하는 대부분의 규정된 의약적 접근 시술 후, 카테테르를 식 염수로 수세한 후, 식염소 또는 헤파린 용액과 같은 액체를 충전시켜 카테테르 내부에서의 혈액 응고를 방지하고, 환자의 혈액이 카테테르 내부로 역류하는 것을 억제하고, 카테테르에 기체가 들어가는 것을 방지한다. 카테테르의 수세에 사용된 액체를 "고정 수세액 (lock-flush solution)"이라 칭하며, 수세 후 또는 사용하지 않는 동안에 카테테르를 충전시키기 위하여 사용된 액체를 "고정 용액 (lock solution)"이라 칭한다.
통상적으로, 카테테르는 생리 식염수 또는 혈액 응고 방지 활성을 제공하는 헤파린 용액으로 고정되었다. 헤파린과 식염수는 함께 사용되기도 한다. 생리 식염수는 일반적으로 단기간 말초 정맥내 카테테르를 고정하기 위하여 사용하지만, 항응고 또는 항미생물 활성을 갖지 않는다. 헤파린 용액은 일반적으로 혈관 카테테르를 고정하기 위하여 사용한다. 헤파린은 항응고 활성을 갖지만, 항미생물제로서의 기능을 갖지 않으며, 감염을 억제하거나 개선시키지 않는다. 또한, 고정 용액 내의 헤파린은 헤파린을 주입받은 환자 아집단에서 발생하는 심각한 출혈 합병증인 헤파린 유발 저혈소판증 (thrombocytopenia)을 발생시킬 수 있다.
타우로리딘 (taurolidine), 시트르산 및 스트르산나트륨을 함유하는 카테테르 고정 용액이 제안되었다. 최근 간행물 (Kidney International , Sept. 2002)은 70% 알코올 용액의 피하 카테테르 포트용 고정 용액으로서의 용도를 개시한다. 알코올은 항응고제가 아니고, 상기 용액의 혈류 진입과 관련된 위험이 있기 때문에, 알코올의 고정 용액으로서의 용도는 의심스럽다. 또한, 본 발명자들은 70% 알코올 용액이 어떠한 바이오필름에 대하여 제거 활성을 갖는다는 것을 보여주는 어떠한 증거도 알고 있는 바가 없다.
기존의 카테테르 감염을 특정 또는 광범위한 항생제를 사용하여 전신적으로 처치하는 것이 감염성 질환 센터의 최근 경향과 권장 사항이다. 감염을 예방하기 위하여 고정 용액 내에 항생제를 사용하는 것은 권장되지 않는다. 기존의 카테테르 감염을 처치하기 위하여 항생제를 사용하는 것은 다음과 같은 몇 가지 위험을 갖는다: (1) 항생제 내성 균주의 발생 위험; (2) 항생제가 독성 농도의 항생제 사용을 요구할 수 있는 고착 또는 심층 바이오필름, 박테리아를 사멸시키지 못할 위험; 및 3) 연장된 항생제 치료에 따른 고비용. 살균 물질 또는 항생 물질로 코팅된 카테테르를 사용할 수 있다. 그러나, 이러한 코팅된 카테테르는 상대적으로 단기간 동안의 제한된 보호만 제공할 뿐이다.
일반적으로, 부유 (free-floating) 생물체는 항생제에 취약할 수 있다. 그러나, 박테리아와 진균류는 표면상에서 군집하고 세포외 폴리머 물질 (EPS)이라 불리는 점액질의 보호 물질을 생산하여 바이오필름을 형성함으로써, 항생제에 대하여 불침투성이 될 수 있다. 미생물이 증식함에 따라, 50 가지 이상의 유전적 상향 조절 또는 하향 조절이 일어날 수 있으며, 이는 보다 항생제 내성이 강한 미생물 바이오필름을 생성하는 결과를 가져온다. 의사들이 직면하는 박테리아 감염의 2/3가 바이오필름에 의한 것이었다. Netting, Science News, 160: 28 (2001).
바이오필름 형성은 생물체의 수 많은 세포 생리학적 변화를 발생시키는 박테리아의 생활 주기에 있어서 유전적으로 제어되는 과정으로, 종종 플랑크톤 (부유 생물) 조건 하에서의 성장과 비교하여 증가된 항생제 내성 (100 내지 1000배)을 포 함한다. 생물체가 성장함에 따라, 과밀과 영양분 감소의 문제가 새로운 거주지와 자원을 찾기 위하여 생물체의 탈리(shedding)를 유발한다. 탈리된 새로운 생물체는 급속하게 자신들 원래의 부유 상태로 복귀하고, 일단 항생제에 대하여 다시 취약적으로 된다. 그러나, 상기 부유 생물체는 환자의 혈류에 진입하여, 예컨대, 발열과 보다 심각한 감염 관련 증상들과 같은 임상적 징후를 생성하는 혈류 감염을 유발한다. 바이오필름의 고착판 (sessile rafts)은 벗겨지고 심장판막과 같은 조직 표면에 부착하여, 바이오필름의 증식과 심장내막염과 같은 심각한 문제를 야기시킨다.
공업적 환경(설비)에서, 바이오필름의 형성은 매우 흔하며, 일반적으로 생물부착(biofouling)이라 불린다. 예컨대, 여과 장치와 같은 기계적 구조물 상에서의 바이오필름 성장은 식수 공급 시스템의 생물학적 오염의 일차적 원인이다. 공업적 환경에서의 바이오필름 형성은 물질 분해를 유발하여 처리 시스템 내의 열 이동의 기계적 차단물과 장애물과 오염물질을 생성할 수 있다. 바이오필름과 얻어진 오염물 또한 식품 제조 및 가공 설비에 있어서 일반적인 문제이다.
보다 복잡한 문제에 대하여, 통상적인 민갑성 테스트는, 바이오필름 상태의 생물체보다는, 부유 생물체의 항생제 민감성만을 측정한다. 그 결과로, 항생제 1회 분량을, 카테테르 등을 통하여, 상기 카테테르에 존재할 수 있는 바이오필름 상태의 생물체에 대하여 거의 원하는 효과를 갖지 않는 양으로 환자에게 투여한다. 바이오필름 생물체는 계속적으로 플랑크톤 생물체를 탈리시키거나, 잠복기에 들어가고 후에 명백한 재발 감염으로서 증식할 수 있다.
항생제를 사용하여 바이오필름을 박멸하기 위하여, 실험에 의하여 생물체의 특정 유전적 바이오필름 상태를 사멸시키기 위하여 요구되는 항생제 농도를 결정하여야 한다. 바이오필름 박멸을 위한 최소 농도를 정하기 위하여 매우 전문적인 장비가 필요하다. 더욱이, 현재 진단 프로토콜은 시간 소모적이고, 결과는 예컨대 5일 이상과 같이 많은 날이 지나야 얻을 수 있다. 이러한 기간 소요는 감염의 신속한 치료를 가능하게 할 수 없음이 명백하다. 이러한 지연과 감염에 대한 납득할만한 공포는 광범위한 스펙트럼의 항생제 과사용과 지속적인 불필요한 카테테르 제거 및 교체 시술을 초래한다. 광범위한 스펙트럼의 항생제의 과사용은 효과적으로 처치할 수 없는 항생제 내성 박테리아 균주의 발생을 초래할 수 있다. 불필요한 카테테르 제거와 교체는 고통스럽고, 비용이 많이 들며, 카테테르 삽입 부위의 조직에 외상과 손상을 일으킬 수 있다.
항생제 내성 균주의 발생 위험과 같은 항생제 사용의 합병증과 결부하여, 바이오 필름의 항생제 내성은 항생제 치료를 매력적이지 않은 선택으로 만든다. 그 결과로, 항생제 사용은 징후적(symptomatic) 감염에 제한되고, 예방 항생제는 통상적으로 오염 방지에 사용되지 않는다. 바이오필름은 대부분의 항생제에 대하여 선택적 표현형 내성 장벽으로서 작용할 수 있기 때문에, 카테테르 관련 감염을 근절하기 위하여 카테테르를 자주 제거하여야만 한다. 카테테르의 제거 및 교체는 시간 소모적이고, 환자에게 스트레스이며, 의약 시술을 복잡하게 만든다. 따라서, 생체로부터 카테테르를 제거할 필요 없이, 미생물, 특히 카테테르 내부에 서식하는 미생물을 사멸시키는 간편하고 효과적인 방법이 요구된다.
박테리아와 진균류의 감염 이외에도, 아메바 감염은 매우 심각하고 고통스러 울 뿐 아니라, 잠재적으로 생명을 위협한다. 예컨대, 아칸타메바 (Acanthameoba) 중 몇 가지 종은 인간에 감염하는 것으로 밝혀졌다. 가시아메바(Acanthamoeba)는 전세계적으로 발견되며, 토양과 먼지, 염수와 해수 뿐 아니라 민물에서도 발견된다. 이들은 가열 장치, 통풍 장치 및 공기 조절 장치, 가습기, 투석 장치, 및 콘택트렌즈 주변 기구 등에서 자주 발견된다. 미생물과 진균류 감염에 더하여, Acanthamoeba 감염은 다른 의료용 기구와 칫솔, 의치 및 다른 치과용 용품을 포함하는 치과용 기구 등과 관련하여 흔하게 발생하는 것일 수 있다. Acanthamoeba 감염은 종종 콘택트렌즈 및 인체와 접촉하게 되는 다른 의료용 기구의 부적절한 보관, 취급 및 소독에 기인하며, 이들은 벤 자리, 상처, 콧구멍, 눈 등을 통하여 피부에 들어갈 수 있다.
다양한 박테리아와 진균류를 포함하여, 문제성 감염을 일으키는 다수의 상이한 종류의 미생물이 존재한다. 그러나, 기존의 감염 제거 방법은 일반적으로 제한된 수의 상이한 미생물에 대하여 효과적인 해법들을 사용한다. Root et al. (Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 32: 1627-1633 (1988) )는 특정 카테테르 관련 Staphylococcus epidermidis 병원체 분리주에 대한 디소듐 EDTA의 생체외(in vitro) 사용을 개시한다.
EDTA는 통상적으로 금속 킬레이트제로서 사용되고, 다양한 목적을 위하여, 다른 활성 화합물과 함께 사용되어 왔다. EDTA는 주로 낮은 농도로, 혈액 검사물 수집 및 테스트를 위한 생체외 항응고제 및 항산화 상승제로서 사용되며, 또한, 예컨대, 약학적 제제의 보존제, 안정화제 또는 킬레이트제로서 용액에 첨가된다. EDTA는 다양한 형태로 존재할 수 있으며, 이들 중 일부는 디소듐 염, 트리소듐 염, 및 테트라소듐 염과 같은 소듐염 형태일 수 있으며, 다른 것은 철, 구리, 마그네슘 등과 같은 금속 킬레이트일 수 있다. 소정의 형태의 EDTA는 아쥬반트로서 다른 물질과 함께, 감염된 카테테르 처치를 위한 조성물 형태로 사용되어 왔다. 임상 설비 또는 인간 또는 동물에 조성물 형태로 사용되는 경우, 상기 용액은 일반적으로 생리적 또는 중성의 pH 범위로 조절된다.
EDTA의 소듐염이 아닌 형태(비소듐염)와 같은 첨가제와 알코올과의 배합물이 PCT 공개공보 WO 02/05188에 개시되어 있다. PCT 공개공보 WO 00/72906 A1는 항생제와 같은 항미생물제와 카테테르 수세를 위한 킬레이팅제로서 EDTA의 비소듐염일 수 있는 제2 제제와의 동결건조 혼합물을 기재하고 있다. 미국특허 제5,688,516호에는, 항응고제, EDTA와 같은 킬레이팅제 및 미노사이클린과 같은 항미생물제를 갖는 조성물이 의료용 기구의 코팅 및 카테테르 감염 억제용으로 기재되어 있다. 특정 실시예에 있어서, EDTA의 디소듐염 형태는 생리적 pH 7.4로 조절되고, 조성물 형태로 사용된다. PCT 공개공보 WO 99/09997는 항진균제와 EDTA와 같은 킬레이팅제와 조합하여, 진균류 감염을 치료하는 것이 개시되어 있다.
감염이 문제시되는 다른 분야에는 콘택트렌즈, 공막압편, 봉합재료, 인공수정체 등과 같이, 눈과 관련하여 사용되는 의료 기구 및 재료 등이 있다. 특히, 콘택트렌즈와 같은 의안의 소독 방법의 개발이 강조되어 왔다. 박테리아 바이오필름은 안구 감염에 참여할 수 있으며, 박테리아가 눈과 접촉하거나 눈속에 이식되어 있는 비생물적 표면에 잔존할 수 있도록 할 수 있다. 바이오필름은 또한 눈의 생물 적 표면에 형성될 수 있다. Zegans et al ., DNA Cell Biol., 21: 415-20 (2002). 각막염의 일부 형태는 렌즈 소독액을 오염시킬 수 있는 원생동물 아메바에 의하여 시작될 수 있다. 콘택트렌즈 소독을 위한, pH 6-8로 완충된, 알칼리염과 테트라소듐 EDTA의 안약 제제가 미국특허 제5,300,296호에 개시되어 있다. 미국특허 제5,998,488호는 EDTA와 사이클로덱스트린과 붕산과 같은 다른 물질과의 안약 조성물을 개시하고 있다.
치과 분야에 있어서, 치과용 도구 및 리테이너, 브리지, 의치 등과 같은 치과용 및 교정용 장치와 같이 입 속에 위치하는 물품들은, 특히, 보관 동안 및 입에 넣기 전에, 살균 상태를 유지할 필요가 있다. 그렇지 않으면, 감염이 혈류로 전달되어 심각하게 될 수 있다. 미국특허 제6,077,501는 다른 활성 성분과 함께 EDTA의 의치 세척 조성물에 있어서의 용도가 개시되어 있다.
물공급 또한 미생물 감염 또는 다른 유형의 감염에 의하여 감염되기 쉽다. 물저장 장치 뿐 아니라 물공급관 및 배수관(withdrawal conduit)은 자주 감염된다. 병원 및 치과 내의 체액 함유 배관의 내부 표면은 미생물 감염 및 성장에 적절한 환경을 제공하고, 미생물 부착과 방어성이 매우 큰 바이오필름 층의 형성은 종종 액체 저장과 공급 장치에서 문제가 되고 있다.
다양한 환경에서의 감염을 예방하고 박멸할 수 있는 개선된 방법과 조성물이 필요하다. 이러한 살균 용액은 광범위한 항미생물 특성을 가져야 한다. 특히, 상기 용액은 바이오필름을 통과하여 바이오필름 내의 생물체를 박멸시킬 수 있어야 한다. 상기 방법과 용액은 기존의 감염의 처치 뿐 아니라 예방 수단으로서 사용되기 에 충분히 안전한 것이어야 한다.
발명의 요약
본 발명은 소정의 농도와 생리적 pH보다 높은 pH를 갖는 한 가지 이상의 DTA의 염을 함유하거나, 상기 EDTA 염으로 구성되거나 필수적으로 구성된 살균 조성물을 제공한다. 본 발명자들은 소정의 EDTA 조성물이 강력한 살균 활성과 광범위한 스펙트럼의 항미생물제로서의 기능 뿐 아니라 많은 병원성 효모 균주에 대한 살진균제로서의 기능을 갖는다는 것을 발견하였다. 본 발명의 EDTA 조성물은 병원성 바이오필름 생물체의 사멸, 기존의 바이오필름의 감소 및 제거 뿐 아니라 바이오필름 형성의 방지에도 매우 효과적이다. 본 발명의 EDTA 조성물과 배합물은 항원생동물 활성과 항아메바 활성 모두를 추가로 나타낸다. 공개된 보고에 기초하여 볼 때, 본 발명의 EDTA 조성물은 또한 항바이러스 활성을 나타낼 것으로 기대된다.
본 발명의 EDTA 제제는 인체 투여시 안정하며, 생체적합성과 부식되지 않는 특성을 갖는다. 이는 또한 항응고 특성을 갖기 때문에 다양한 카테테르 관련 감염의 예방 및/또는 치료에 유용하다. 본 발명의 살균 용액은 다양한 유형의 카테테르용 고정 용액 (lock solution) 및 고정 수세액 (lock flushing solution), 의료용, 치과용 및 수의학용 장치, 기구 및 다른 물건, 표면 등의 살균을 위한 살균제 또는 살균 용액으로서의 사용을 포함하여 수많은 적용이 가능하다. 또한, 이들은 공업적 설비(setting), 식품 제조 및 취급 설비의 살균 적용도 가능하다.
본 발명의 살균 조성물은 감염의 예방, 또는 존재하는 또는 확립된 감염의 감소 및/또는 제거를 위하여 예방적으로 사용될 수 있다. 바람직하지 않은 미생물에 의한 사물 또는 표면의 감염의 예방 또는 처치 방법이 제공되며, 상기 방법은 표면 또는 물건을 본 발명의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 따라서, 본 발명의 조성물은, 바이오필름의 형성과 증식 억제, 원생동물 개체군의 성장과 증식 억제, 아메바 개체군의 성장과 증식 억제 및 아메바 감염, 특히 Acanthamoeba 감염의 예방을 포함하여, 미생물 개체군 및/또는 진균류 병원체의 성장과 증식을 억제하기 위하여 사용될 수 있다.
본 발명은, 또한 Acanthamoeba 개체군을 실질적으로 박멸하는 방법과 함께, 플랑크톤성 미생물 개체군 및 바이오필름 형태의 미생물 개체군 모두를 포함하는 미생물 개체군을 실질적으로 박멸하는 방법을 제공한다. 이러한 방법들은 감염된 물건 또는 표면, 또는 감염되기 쉬운 물건 또는 표면을 본 발명의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 다양한 방법에 사용되는 살균 조성물에 따라서, 다양한 개체군의 형성 및 증식의 억제, 및/또는 다양한 개체군의 실질적인 박멸에 필요한 접촉시간이 다양해질 수 있다. 다양한 조성물에 대한 적절한 접촉 시간이 실시예에 ㅈ제시되어 있으며, 통상적인 시험에 의하여서도 결정될 수 있을 것이다.
한 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 다음과 같은 특성 중 4 가지 이상, 바람직하게는 5 가지 이상을 갖는다: 항응고 특성; 플랑크톤 형태의 광범위한 스펙특럼의 박테리아에 대한 억제 및/또는 살균 활성; 진균 병원체 스펙트럼에 대한 억제 및/또는 살진균 활성; 고착 또는 바이오필름 형태의 광범위한 스펙트럼의 박테리아에 대한 억제 및/또는 살균 활성; 원생동물 감염에 대한 억제 활성; Acanthamoeba 감염에 대한 억제 활성; 환자와 접촉시 적절한 부피 이상에서의 생체적합성 및 안전성; 환자의 혈류 내에서 적절한 부피 이상에서의 생체 적합성 및 안전성; 및 공업적 물건 및 표면과의 친화성및 안전성.
적절한 EDTA 염을 본 발명의 조성물에 사용한다. EDTA의 쇼듐염이 통상적으로 입수가능하고, 일반적으로 사용되며, 상기 소듐염에는 디소듐염, 트리소듐염 및 테트라소듐염 등이 있으며, 소망하는 항균 특성, 살진균 특성, 항원생동물 특성 및/또는 항아메바 특성을 갖고 소망하는 용매에 충분히 용해성을 갖는다면, 암모늄, 디암모늄, 포타슘, 디포타슘, 구리 디소듐(cupric di-sodium), 마그네슘 디소듐, 철 소듐(ferric sodium) 및 이들의 조합 등과 같은 다른 EDTA염을 사용할 수 있다. EDTA 염의 다양한 조합을 사용할 수 있으며, 특정 적용에 대하여 바람직할 수 있다. 대부분의 구체예에 있어서, 본 발명의 조성물과 방법은 통상적인 항생제를 사용하지 않기 때문에, 항생제 내성 생물체의 발생을 일으키지 않는다는 것이 중요한 점이다.
본 발명의 살균 조성물은 용액 형태로 생리적 pH보다 높은 pH를 갖는 한 가지 이상의 EDTA의 염을 함유하거나, 상기 EDTA 염으로 구성되거나 필수적으로 구성된 것이다. 바람직하게는, 상기 조성물은 8.0 이상의 pH를 갖는다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 8.5 내지 12.5, 9.5 내지 11.5, 또는 10.5 내지 11.5 범위의 pH를 갖는다. 상기 EDTA 염은 일반적으로 0.01% w/v 이상의 양으로 존재한다. 바람직한 구체예에 있어서, 본 발명의 조성물은 한 가지 이상의 EDTA 염을 0.2% 내지 10% w/v, 보다 바람직하게는 0.2% 내지 6.0% w/v, 가장 바람직하게는 0.2% 내지 4.0% w/v의 양으로 함유한다.
특수한 구체예에 있어서, 본 발명의 조성물은 용매와 0. 01% 내지 10% w/v의 농도를 갖는 한 가지 이상의 EDTA 염을 포함하거나, 상기 EDTA 염으로 필수적으로 구성되며, 상기 용액은 9.0 이상의 pH를 갖고, 광범위한 스펙트럼의 박테리아에 대하여 항균 활성을 갖는다. 바람직하게는, 한 가지 이상의 EDTA 염은 트리소듐 EDTA 또는 테트라소듐 EDTA이다. 상기 용매는 일반적으로 물, 식염수, 알코올 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된다. 한 구체예에 있어서, 상기 용매는 물과 에탄올의 혼합물이다.
본 발명의 살균 조성물은 체액, 혈액 산물, 약물 및 영양분의 전달, 체액과 혈액의 배출, 투석, 환자 상태의 모니터링 등에 사용되는 혈관 카테테르를 포함하여, 다양한 종류의 유치 접근 카테테르(in-dwelling access catheter)용 고정용액 및 고정 수세액으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 살균 용액은 또한 비뇨기 카테테르, 비경유 내관(nasal tube), 인후 내관 등에 사용하기 위한 고정 용액 및 고정 수세액으로서 사용될 수 있다. 하기되는 일반적인 용액 파라미터는 이러한 목적에 적합한 것이다. 한 구체예에 있어서, 생리적 pH보다 높은 pH를 갖는 한 가지 이상의 EDTA의 염을 함유하거나, 상기 EDTA 염으로 구성되거나 필수적으로 구성된 살균 용액을 사용하여 혈관내 유치 접근 기구의 열림을 유지한다. 카테테르 및 비경유 내관, 인후 내관 등의 다른 의료용 내관의 살균 방법 또한 제공되며, 이는 상기 카테테르 또는 다른 의료용 내관을 본 발명의 살균 조성물과 접촉시키는 것을 수반한다.
또 다른 구체예에 있어서, 생리적 pH보다 높은 pH를 갖는 한 가지 이상의 EDTA의 염을 함유하거나, 상기 EDTA 염으로 구성되거나 필수적으로 구성된 본 발명의 살균 조성물이 의치 및 다른 치과용, 교정용 및/또는 치주용 장치, 콘택트렌즈 및 다른 안과용 기구, 의료용 및 수의학용 기구, 장치 등과 같은 의료용 기구의 살균 용액으로서 제공되고, 표면 및 물건의 살균을 위한 살균 용액으로서 제공된다. 이러한 장치의 살균 방법 또한 제공되며, 상기 방법은 장치를 본 발명의 살균 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 살균 조성물은, 칫솔과 같은, 치과용 장치, 교정용 장치 및 치주용 장치의 침지 용액으로서 사용 가능하며, 콘택트렌즈 및 다른 안과 기구 뿐 아니라 의료용 및 수의학용 기구, 장치 등의 침지 용액으로서 또한 사용 가능하다. 이러한 적용을 위하여, 본 발명의 살균 조성물은 일반적으로 용액으로서 제제화되거나, 적절한 용매의 첨가시 용액을 형성하는 건조 형태로 제공될 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 용액, 젤, 크림 및 살균제, 와이프, 항균 처치 등으로서의 국부 사용을 위하여 설계된 다른 제제에서의 사용을 위하여 제제화될 수 있다. 본 발명의 살균 조성물은 또한 붕대, 드레싱, ㅅ사상처 치료제 및 장치 등과 결합된 항균젝로서 사용 가능하다. 관련 구체예에 있어서, 붕대 및 드레싱과 같이 상처 치료에 있어서의 용도를 위한 피복물(coverings)이 제공되며, 상기 피복물은 한 가지 이상의 본 발명의 조성물이 주입되어 있다.
본 발명의 살균 조성물은 또한 물 저장 및 배급 시스템, 물 정화, 가습 및 제습 장치와 같은 공업 설비, 및 식품 제조, 취급 및 포장 설비에 사용되어, 부유형 및 고착형 모두의 미생물 개체군 뿐 아니라 많은 진균, 아메바 및 원생동물 개체군의 억제, 감소 또는 실질적으로 제거할 수 있다. 공업 장비와 표면을 본 발명의 살균 조성물과 접촉시키거나, 상기 조성물로 수세하거나, 상기 조성물에 침지히킬 수 있다. 지속적 방출 (time release) 살균 조성물 제제 또한 제공되며, 이는, 특히 자주 접근하기 어려운 위치에서의, 연장된 기간의 치료를 가능하게 한다.
발명의 상세한 설명
EDTA는 많은 조성물에서 낮은 농도로 사용되며, 안정화제 또는 보존제로서, 다른 활성 성분과 조합하여 사용된다. 본 발명의 살균 조성물은 일반적으로 높은 농도의 EDTA를 함유하며, 바람직하게는 용액 부피에 대한 중량 기준(w/v)으로 0.01% 이상의 EDTA 염(들)을 함유하며, EDTA 염(들)을 15% (w/v)까지 함유할 수 있다. 많은 적용에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 0.1% (w/v) 이상 및 10% (wv) 이하의 EDTA 염(들)을 함유하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.1% (w/v) 내지 8.0% (w/v) EDTA 염(들)을 함유하고, 가장 바람직하게는 0.1% 내지 6.0% EDTA 염(들)을 함유한다. 하기되는 대표적인 조성물은 수용액 내에 3.6 내지 4.4% (w/v) EDTA 염(들)을 함유하거나, 또는 물과 에탄올과의 혼합물 내에 0.01 내지 0.2% (w/v) EDTA 염(들)을 함유한다.
다양한 적용을 위하여 소망하는 EDTA 염(들) 농도는 사용된 EDTA 염 또는 염들의 조합, 처리될 감염의 종류 및 정도, 살균 조성물에 사용된 용매에 따라 달라질 수 있다. 예컨대, 에탄올을 함유하는 수성 용매가 사용되는 경우, 소망하는 수준의 활성을 나타내기 위하여 요구되는 EDTA 염(들)의 농도는 용매로서 물을 함유하는 조성물에 사용되는 EDTA 염(들)의 농도와 비교하여 감소할 수 있다. 한 가지 이상의 EDTA 염(들)을 함유하는 살균 조성물은, 아래에 제시된 실험 데이터에 나타난 바와 같이, 0.01% 내지 30% 또는 그 이상의 농도 범위에서 억제 효능 및/또는 살균 효능을 나타내었다. 억제, 살균, 살진균, 바이오필름 제거 및 다른 목적을 위하여 본 발명의 조성물에 있어서의 소망되는 EDTA 염(들)의 "유효(effective)" 농도는, 하기의 실시예에 기재된 바와 같이, 통상적인 실험에 의하여 결정될 수 있다.
영국 약전 (British Pharmacopoeia, BP)에는 디소듐 EDTA의 5% 용액이 4.0 내지 5.5의 pH를 갖는다고 명시되어 있다. BP에는 또한 트리소듐 EDTA 용액에 대해서는 7.0 내지 8.0 pH 범위가 명시되어 있다. 수용액에서의 다른 EDTA 염들에 대한 pH 값은 아래의 실시예 10에 나타내었다. 생리적 pH에서, EDTA의 소듐염은 디소듐 EDTA와 트리소듐 EDTA로서 존재하며, EDTA의 트리소듐염이 우세하다. 미국에서, 주입용으로 제조된 약학적 "디소듐(디소듐)" EDTA는 일반적으로 수산화나트륨을 사용하여 pH 6.5 내지 7.5으로 적정된 것이다. 상기 pH에서, EDTA 용액은 실질적으로 트리소듐 EDTA를 일차적으로 함유하고, 디소듐 염을 적은 비율로 함유한다. 의약적 또는 의료적 적용으로 사용되는 소듐염을 함유하는 다른 조성물은 일반적으로 실질적으로 생리적인 pH로 조정된다.
특정 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 생리적 pH보다 높은 pH의 용액 내의 소듐 EDTA 염 (또는 소듐 EDTA 염들의 조합)을 함유하거나, 상기 EDTA 염(들)으로 구성되거나, 필수적으로 구성되며, 상기 pH는, 바람직하게는 8.0 이상, 8.5 이상, 9 이상, 9.5 이상, 또는 10 이상이다. 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 pH 범위가 8.5 내지 12.5, 9.5 내지 11.5, 또는 10.5 내지 11.5인 용액 내의 소듐 EDTA 염 (또는 소듐 EDTA 염들의 조합)을 함유하거나, 상기 EDTA 염(들)으로 구성되거나, 필수적으로 구성된다. 본 발명에 사용되는 바로서, "EDTA 염" 이라는 용어는 디소듐염, 트리소듐염 또는 테트라소듐염과 같은 단독염 또는 다른 EDTA 염 형태 또는 이러한 염들의 조합을 의미할 수 있다. EDTA 염(들)의 조성물은 상기 조성물을 제제화하기 위하여 사용된 EDTA 염과 상기 조성물의 pH 모두에 따라서 달라진다. 소망하는 pH 범위 (상기에 설명됨)의 소듐 EDTA 염(들)을 함유하는 본 발명의 살균 조성물에 있어서, 소듐 EDTA 염(들)은 트리소듐염 형태 및 테트라소듐염 형태 모두가 우세하게 존재한다.
한 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 적어도 트리소듐 EDTA 염 및 테트라소듐 EDTA 염의 조합을 함유하거나, 이들로 구성되거나, 필수적으로 구성된 것이다. 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 적어도 트리소듐 EDTA 염 및 테트라소듐 EDTA 염의 조합을 함유하거나, 이들로 구성되거나, 필수적으로 구성된 것으로서, EDTA의 10% 이상이 테트라소듐염 형태인 조성물이다. 또 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 적어도 트리소듐 EDTA 염 및 테트라소듐 EDTA 염의 조합을 함유하거나, 이들로 구성되거나, 필수적으로 구성된 것으로서, 조성물 내의 50% 이상 또는 60% 이상의 EDTA가 트리소듐염 형태로 존재하는 조성물이다. 또 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 디소듐 EDTA, 트리소듐 EDTA 및 테트라소듐 EDTA의 조합을 함유하거나, 이들로 구성되거나, 필수적으로 구성된 것으로, 조성물 내의 10% 이하의 EDTA가 디소듐염 형태인 조성물이다.
EDTA 나트륨염을 제외하고 또는 EDTA 나트륨염에 추가하여 EDTA 염(들)을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 필수적으로 구성된 살균 조성물은 상이한 "유효(effective)" pH 범위를 갖는다. 억제, 살균, 살진균, 바이오필름 제거 및 다른 목적을 위한 본 발명의 살균 조성물 내의 소망하는 EDTA 염(들)에 대한 "유효" pH 범위는 통상적인 실험에 의하여 결정될 수 있다.
몇 가지 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 상기한 바와 같은 EDTA 염(들)로 구성되고, 살균 용액은 용매에 용해된 EDTA 염들로 구성되며, 상기 용매는 일반적으로 물 또는 식염수와 같은 수성 용매이다. 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 상기한 바와 같은 EDTA 염(들)로 필수적으로 구성되며, 상기 EDTA 염(들)은 일반적으로 물 또는 식염수와 같은 수성 용매에 용해된 형태이다. EDTA 염 또는 EDTA 염들의 조합으로 필수적으로 구성된 본 발명의 살균 조성물은 실질적인 항미생물 활성 및/또는 항진균 활성을 갖는 다른 활성 물질을 실질적으로 함유하지 않는다. 본 명세서에서, 실질적인 항미생물 활성 및/또는 항진균 활성은 pH 10.5의 농도 4.0%(wv)인 수용액 내의 EDTA 소듐염(들)의 항미생물 활성 및/또는 항진균 활성이 50% 이상인 것을 의미한다.
몇 가지 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 조성물은 정해진 pH 범위의 정해진 농도를 갖는 EDTA 염(들)을 함유하며, 상기한 EDTA 염들에 추가하여 활성 성분 등의 물질을 함유할 수 있다. 통상적인 항생제 및 살균제의 사용이 항생제 내성 및 항균제 내성 생물체의 발생이라는 심각한 결과를 초래하기 때문에 일반적으로 장려되지 않기는 하지만, 다른 항미생물 또는 살균 성분이 본 발명이 살균 조성물에 함유될 수 있다. 몇 가지 구체예에 있어서, 본 발명의 소정의 농도와 pH 범위를 갖는 EDTA 염(들)을 함유하는 살균 조성물은 실질적인 항미생물 활성 및/또는 항진균 활성을 갖는 다른 활성 물질을 실질적으로 함유하지 않는다.
EDTA 염(들)의 활성 및/또는 안정성에 해로운 영향을 미치지 않는다면, 다른 활성 및 비활성 성분이 또한 본 발명의 살균 조성물에 함유될 수 있다. 일부 적용을 위하여, 본 발명의 살균 조성물은 단백질 가수분해제를 함유할 수 있다. 국부 적용을 위하여 제제화된 살균 조성물은 예컨대, 다양한 크림, 에몰루먼트(emolument), 알로에 베라 등의 피부 관리 조성물 등을 포함할 수 있다. 용액 제제 형태로 제공되는 본 발명의 살균 조성물은 EDTA 염(들)의 활성 및/또는 안정성에 부정적으로 간섭하지 않는 다른 활성 및 비활성 성분을 추가로 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 용액 또는 건조 형태로 사용될 수 있다. 용액의 경우, EDTA 염(들)을 용매에 용해시키는 것이 바람직하고, 용매는 물 또는 식염수와 같은 수성 용액을 포함할 수 있으며, EDTA 염(들)이 용해될 수 있는 다른 생체적합성 용액일 수 있다. 알코올을 포함하는 다른 용매들 또한 사용 가능하다. 한 구체예에 있어서, 본 발명의 EDTA 염 조성물은 물과 에탄올의 혼합물 내에서 제제화된다. 이러한 용액은 매우 효과적이며, 물에서 농축 EDTA 염(들) 원액을 만든 후, 원하는 농도의 에탄올을 도입시켜 제조할 수 있다. EDTA 염 농도는 약 0.01% 내지 10% (w/v)인 것이 적절하며, 에탄올 농도가 약 0.1% 내지 약 10% (v/v)인 경우 효과적인 살균 조성물을 제공한다. 몇 가지 구체예에 있어서, 약 1% (v/v) 농도의 에탄올을 함유하는 물에 용해된 농도 2 mg/ml (0.2% w/v)의 EDTA 염용액은 광범위한 스펙트럼의 박테리아 균주에 대하여 매우 효과적이다. 소듐 EDTA 염을 사용하는 경우, 이들 살균 조성물의 pH 범위는 상기한 바와 같다. EDTA 염(들)을 가용화시킬 수 있고, 저장 및 사용동안 용액상태로 남아있을 수 있다면, 생체적합성 비수성 용매 또한 사용될 수 있다.
본 발명의 EDTA 용액은 멸균 및 비발열 형태로 제공되는 것이 바람직하며, 모든 편리한 방법으로 포장 가능하다. 몇 가지 구체예에 있어서, 본 발명의 살균 EDTA 조성물은 미리 충전된 주사기 또는 다른 의료 기구와 같이, 의료 기구와 결합되거나 의료 기구의 일부로서 제공될 수 있다. 상기 조성물은 멸균, 살균 상태하에서 제조되거나, 다양하고 적절한 모든 살균 기술을 사용하여, 제조 및/또는 포장 후 살균된 것일 수 있다. EDTA 용액의 단일 용도 또는 다용도 바이알, 주사기 또는 컨테이너를 제공할 수 있다. 본 발명의 시스템은 본 발명의 EDTA 용액을 포함하는 바이알, 주사기 또는 컨테이너를 포함한다.
본 발명의 조성물은 또한 "건조(dry)" 형태로 제공될 수 있으며, 배관과 도관의 표면 상의 실질적 건조 코팅, 또는 카테테르 또는 도관과 같은 공업 또는 의료 장치, 또는 컨테이너 등 내에 제공될 수 있다. 상기한 바와 같은 본 발명의 EDTA 조성물의 실질적인 건조 형태는 용매를 첨가하면 용액을 형성하도록 재구성될 수 있는 분말 또는 동결건조 형태로 제공될 수 있다. 또한, EDTA 조성물의 실질적 건조 형태는 코팅으로서 제공될 수 있으며, 젤 또는 다른 유형의 담체에 포함되거나, 또는 인캡슐레이션되거나, 또는 다른 방법으로 포장될 수 있으며, 표면상에 코팅으로서 제공되거나 컨테이너 내에 제공될 수 있다. 이와 같은 본 발명의 EDTA 조성물의 실질적 건조 형태는 용액의 존재시 상기 실질적 건조 조성물이 상기의 조성과 특성을 갖는 EDTA 용액을 형성하도록 제제화된다. 한 구체예에 있어서, 용액에 장기간 노출에 대하여 EDTA의 효과적인 지속적 방출을 달성할 수 있도록 하는 인캡슐레이션 기술 또는 저장 기술을 사용할 수 있다. 상기 구체예에서, 실질적 건조 EDTA 용액은 장기간 동안 및/또는 용액에 대한 다중적 노출에 대하여 살균 활성을 나타낼 수 있다.
EDTA를 함유하는 조성물은 의약적 사용과 인간에 투여와 관련하여 잘 확립된 안전성 양상을 갖는다. 인간의 고칼슘혈증(hypercalcemia) 치료를 위하여, 하루 기준으로, 디소듐 EDTA를 3000 mg의 분량으로 3 시간에 걸쳐서 주입하고, 이는 충분히 관용적이다. EDTA 염은 또한 다른 성분과 함께 의약적 적용 및 인간 보건 적용에 사용되는 많은 용액 내에 존재하고, 인간에 생체외(in vitro) 및 생체내(in vivo)적으로 사용하기에 안전하다는 것이 입증되었다. EDTA 염은 이미 합리적인 가격으로 입수 가능하고, 용액 내에서 연장된 기간동안 안정적이다.
본 발명의 살균 조성물의 제제화 및 생산은 일반적으로 간단한 공정으로 수행 가능하다. 한 구체예에 있어서, 한 가지 이상의 EDTA 염을 정제수와 같은 수성 용매에 소망하는 농도까지 용해시키고, EDTA 염 용액의 pH를 소망하는 pH로 조정함으로써, 소망하는 본 발명의 살균 조성물을 제제화할 수 있다. 이와 대체적인 구체예에 있어서, 한 가지 이상의 EDTA 염을 상기 EDTA 염 또는 염의 조합이 용해되어 농축되고 가용화된 EDTA 염 용액을 제공할 수 있는 용매에 용해시킴으로써, 소망하는 본 발명의 살균 조성물을 제제화할 수 있다. 그리고 나서, 추가적인 용매 또는 성분을 첨가할 수 있다. 또는, 상기 가용화된 EDTA 염 조성물을 용액 이외의 형태, 예컨대 국부 제제로 제제화할 수 있다. 그리고 나서, 상기 살균 용액을 오토클레이빙, UV 조사, 여과, 한외여과 및/또는 다른 방법 등의 통상적인 수단을 사용하여 멸균한다. EDTA 용액에 대한 바람직한 물삼투압 농도(osmolarity) 범위는 240 내지 500 mOsM/Kg이며, 보다 바람직하게는 300 내지 420 mOsm/Kg이다. 상기 용액은 USP 재료를 사용하여 제제화하는 것이 바람직하다.
트리소듐 염(들) 또는 테트라소듐 염(들) 또는 이들의 혼합물을 함유하거나, 수적으로 함유하거나, 이들로 구성된 살균 조성물은 다양한 적용에 있어서 바람직하고, 용이하게 입수 가능한 디소듐 EDTA와 같은 트리소듐 염 및 테트라소듐 염 이외의 다른 EDTA의 소듐염을 사용하여 제조하는 것도 가능하다. 디소듐 EDTA 용액은 용액의 pH가 본 발명의 조성물의 소망되는 pH 범위보다 낮은 범위를 갖는다. 그러나, 수산화나트륨, 아세트산나트륨 또는 다른 잘 알려진 pH 조절제와 같은 pH 조절 물질을 사용하여 pH를 소망하는 범위로 조절하면, 디소듐 염을 사용하여 제조된 EDTA 용액이 본 발명의 소망하는 조합 디소듐, 트리소듐 및/또는 테트라소듐 염 EDTA 조성물로 전환된다. 따라서, 사용 전에 조성물의 pH가 소망하는 범위로 조절된다면, 본 발명의 EDTA 조성물의 제조에 상이한 형태 및 조합의 EDTA 염을 사용할 수 있다. 한 구체예에 있어서, 디소듐 EDTA를 수용액에 중량/부피 기준으로 3% 내지 5%의 양으로 용해시키고, pH를 바람직한 범위인 pH 8.5 내지 12.0 범위로 조절하기에 충분한 양의 수산화나트륨을 첨가함으로써, 일차적으로 트리소듐 EDTA 및 테트라소듐 EDTA의 혼합물로 구성되는 살균 조성물을 제조할 수 있다.
상기한 바와 같은 한 가지 이상의 EDTA 염을 함유하거나, 이들로 구성되거나 또는 필수적으로 구성된 본 발명의 살균 조성물은 또한 다른 많은 적용에 있어서도 유용하다. EDTA 용액을 의료용, 치과용 및 수의학용 표면 또는 물건의 침지, 헹굼 또는 접촉을 위한 살균 용액으로서 사용할 수 있다. 본 발명의 EDTA 용액은, 예컨대, 콘택트렌즈와 다른 안과 기구의 보관 및/또는 소독; 의치, 브리지, 리테이너, 칫솔 등과 같은 치과용 장치의 보관 및/또는 소독; 의료용, 치과용 및 수의학용 장치 및 기구의 보관 및/또는 소독용으로 사용할 수 있다. 이들 적용에 있어서, 상기 장치 또는 표면을, 미생물 감염 및/또는 진균 감염을 실질적으로 제거하기에 충분한 시간동안, 본 발명의 EDTA 용액과 접촉시키거나, 상기 용액에 침지시킬 수 있다. 본 발명의 EDTA 조성물은 또한 수공급 라인 및 다른 유체 공급 라인을 소독하기 위하여 사용할 수 있다. 유체 공급 라인의 소독은 상기 라인을 본 발명의 EDTA 조성물로 간헐적으로 수세함으로써 수행할 수 있다. 이와 유사하게, 본 발명의 EDTA 조성물은 물공급 장치 및 보관 장치에서의 바이오필름, 및 미생물 (일부 바이러스와 원생동물 포함) 개체군과 진균류 개체군 제거를 위하여 사용할 수 있다.
도 1A-lD는, 한천 희석법을 사용하여 얻은, 디포타슘 EDTA, 디암모늄 EDTA, 디소듐 EDTA, 트리소듐 EDTA, 및 테트라소듐 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 EDTA 염 용액의 다양한 그람양성균 및 그람음성균에 대한 최소 억제 농도 (MIC)와 최소 살균 농도 (MBC)를 보여주는 것이다. 박테리아를 인간 환자의 카테테르 관련 감염으로부터 분리하였다. 실험적 기술은 실시예 1에 기재하였다.
도 2는 한천 희석법을 사용하여 얻은, 상이한 EDTA 제제의 다양한 진균류에 대한 MIC와 MBC를 나타낸 것이다. 실험적 기술은 실시예 1에 기재하였다. 진균들은 인간 환자 샘플로부터 수집하였다.
도 3A와 3B는 구리 디소듐 EDTA, 마그네슘 디소듐 EDTA 및 철 소듐 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 EDTA 염 용액의 그람양성균 및 그람음성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터를 나타낸 것이다. 박테리아는 인간 환자의 카테테르 관련 감염으로부터 분리하였다. 실험적 기술은 실시예 1에 기재하였다.
도 4A 내지 4C는 구리 디소듐 및 테트라 소듐 EDTA; 구리 디소듐 및 디포타슘 EDTA; 및 구리 디소듐 및 디암모늄 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 조합 EDTA 염용액의 그람양성균 및 그람음성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터를 보여주는 것이다. 박테리아는 인간 환자의 카테테르 관련 감염으로부터 분리하였다. 실험적 기술은 실시예 1에 기재하였다.
도 5A 내지 5C는 테트라소듐 EDTA와 디암모늄 EDTA; 테트라소듐 EDTA와 디포타슘 EDTA; 및 디암모늄 EDTA와 디포타슘 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 조합 EDTA 염용액의 그람양성균 및 그람음성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터를 보여주는 것이다. 박테리아는 인간 환자의 카테테르 관련 감염으로부터 분리하였다. 실험적 기술은 실시예 1에 기재하였다.
도 6은 실시예 2에 기재된 방법을 사용하여 측정한 다양한 생물체에 대한 최소 바이오필름 제거 농도 (MBEC)를 mg/ml 테트라소듐 EDTA (w/v)로 표현하여 나타 낸 것이다.
도 7은 테트라소듐 EDTA를 40 mg/ml(w/v)의 농도로 필수적으로 함유하는 살균 조성물을 사용하여 감염된 신장 혈액투석 카테테르를 처리하여 얻은 실험결과를 보여주는 것이다.
도 8은 테트라소듐 EDTA를 20 내지 100 mg/ml (w/v)의 농도로 필수적으로 함유하는 살균 조성물을 사용하여, 감염되 신장 혈액투석 카테테르, 하나의 동맥 카테테르 및 하나의 정맥 카테테르를 처리하여 얻은 결과를 보여주는 것이다.
본 발명의 EDTA 함유 조성물의 특성과 살균 조성물로서의 효능을 입증하기 위하여 상기 EDTA 함유 조성물을 사용하는 수많은 시험과 실험 과정을 수행하였다. 몇 가지 실험 과정을 아래에 상세히 기재하였다. 이들 과정과 실험 결과는 예시적 목적을 위하여 제공되는 것일 뿐이며, 어떠한 방법으로든 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다.
실시예 1
한천 희석법에 의하여 얻은 상이한 EDTA 제제의 미생물에 대한 최소 억제 농도 ( MIC ) 및 최소 살균 농도 ( MBC ) 데이터
하기하는 바와 같은 한천 희석법을 사용하여, 다양한 그람양성균 및 그람음성균 및 효모에 대한 최소 억제 농도 (MIC)와 최소 살균 농도 (MBC)를 몇 가지 상이한 EDTA 제제에 대하여 측정하였다. 다양한 미생물에 대한 MICs와 MBCs는 또한 EDTA 염(들)을 조합하여서도 시험하였다.
그람양성균과 그람음성균을 카테테르 관련 감염을 갖는 인간 환자로부터 분리하여, 상기 박테리아 균주들이 병원성 활성이 있고, 인간 카테테르 관련 박테리아 감염에 흔한 유형임을 확인하였다. 효모 생물체를 심한 패혈성 감염을 갖는 환자로부터 수집하였다. 상기 생물체는 Peter Kite 실험실 (University of Leeds)에서 분류하고 보관하였다.
관련 시약 등급 EDTA 염을 소망하는 EDTA 염 농도(w/v)가 될 때까지 증류수에 용해시킴으로써, 다양한 EDTA 염 용액과 조합 EDTA 염 용액을 제조하였다. 각각의 EDTA 염 또는 EDTA 염 조합에 대하여 농축 EDTA 염 용액 원액을 제조하고, 이를 사용하여 다양한 생물체에 대한 MIC와 MNC를 측정하였다. 디소듐 EDTA를 사용하기 보다는 테트라소듐 및 트리소듐 EDTA 염을 사용하고 상기 용액의 pH를 소망하는 pH 범위로 조절하여, 테트라소듐 및 트리소듐 EDTA 용액을 제조하였다. EDTA 염 용액을 사용 전에 살균하고, 4 ℃에서 보관하였다.
한천 희석법 프로토콜
한천( agar )의 제조
- 영양 한천 (nutrient agar) 2 리터를 증기욕에 넣고 약 1 시간 동안(녹을때까지) 둔다.
- 상기 한천을 50 ℃로 냉각시킨다.
- 20 개의 멸균 (125 mL) 유리병을 준비하고, 각각의 유리병에 영양 한천 100 mL씩을 할당한다. 여기에, 200 mg/mL의 원액을 사용하여, 테트라소듐 EDTA (또는 시험될 다른 EDTA 염 또는 EDTA 염 조합) 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 4,6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 및 100 mg/mL을 첨가한다.
- 멸균 페트리디쉬에 한천 20 mL를 붓고 응고하도록 둔다. 추가적 3 개의 플레이트에 붓는다. 상기 플레이트에 포함된 EDTA의 농도를 표시한다. 각각의 농도에 대하여 수행된다.
- 그리고 나서, 상기 플레이트를 필요시까지 4 ℃ 냉장고에서 보관한다.
상기 플레이트의 접종
- 23 그람음성균 개체와 19 그람양성균 개체 배양물을 영양배지에서 하룻밤동안 증식시킨다.
- 인산 완충 식염수 (PBS)을 사용하여, 각각의 배양물을 106 cfu/mL까지 희석시킨다.
- 자동 플레이트 접종기를 사용하여 각각의 플레이트를 21 생물체로 접종시킨다.
- 상기 플레이트를 37 ℃에서 하룻밤동안 배양한다.
- 다음날 성장에 대하여 + 또는 -로 채점한다.
- 멸균 여과지를 사용하여 상기 성장체를 처음 플레이트에서 신선한 Cled 한천 플레이트로 옮겨서, MBC를 측정한다.
- 상기 리플리카(replica) 복제 플레이트를 37 ℃에서 하룻밤동안 배양한다.
- 다음날, 성장에 대하여 + 또는 -로 채점한다. MIC와 MBC는 이들이 성장하지 않는 가장 낮은 농도로 기재하였다.
그 결과를 도 1A 내지 5C에 나타내었다. 도 1A-1D는 디포타슘 EDTA; 디암모늄 EDTA; 디소듐 EDTA; 트리소듐 EDTA 및 테트라소듐 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 EDTA 염 용액의 많은 그람양성균과 그람음성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터 (mg/ml EDTA 용액 (w/v)으로 표시)를 보여준다. 도 2는 테트라소듐 EDTA; 디포타슘 EDTA; 및 디암모늄 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 EDTA 염 용액의 효묘에 대한 MIC 및 MBC 데이터 (mg/ml EDTA 용액 (w/v)으로 표시)를 보여준다.
도 3A와 3B는 구리 디소듐 EDTA; 마그네슘 디소듐 EDTA; 및 철 소듐 EDTA 각각으로 필수적으로 구성되는 EDTA 염 용액의 그람양성균 및 그람음성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터 (mg/ml EDTA 용액 (w/v)으로 표시)를 보여준다.
도 4A 내지 4C는 구리 디소듐 EDTA와 테트라소듐 EDTA; 구리 디소듐 EDTA와 디포타슘 EDTA; 및 구리 디소 EDTA와 디암모늄 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 조합 EDTA 염 용액의 그람음성균 및 그람양성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터 (mg/ml EDTA 용액 (w/v)으로 표시)를 보여준다.
도 5A 내지 5C는 테트라소듐 EDTA와 디암모늄 EDTA; 테트라소듐 EDTA와 디포타슘 EDTA; 및 디암모늄 EDTA와 디포타슘 EDTA 각각으로 필수적으로 구성된 조합 EDTA 염 용액의 그람음성균 및 그람양성균에 대한 MIC 및 MBC 데이터 (mg/ml EDTA 용액 (w/v)으로 표시)를 보여준다.
EDTA 염 및 EDTA 염 조합 중 일부는 적당한 농도에서 광범위한 스펙트럼의 박테리아의 억제 및/또는 제거에 효과적이었다. 이전의 의약 테스팅과 사용에 의하여 소듐 EDTA이 인간 및 동물에 사용하기 위한 양호한 생체적합성 양상을 갖는다는 것이 입증되어 있는 반면, 다른 EDTA 염의 생체적합성은 입증된 바가 없다. 테트라소듐 EDTA 염 및 트리소듐 EDTA 염은 광범위한 스펙트럼의 병원성 박테리아에 대하여 가장 효과적인 것으로 보인다. 또한, 이들은 인간 또는 수의학적 용도를 위한 생체적합성이 입증되거나 용이하게 입증될 수 있고, 비용 효율이 높고 안정적이다. 테트라소듐 EDTA 염은 또한 항응고제로서의 활성도 가지며, 수성 용매에 매우 잘 녹는다. 이러한 사실과 상기한 바와 같은 실험적 개요를 기초로, 테트라소듐 EDTA 염 및 트리소듐 EDTA 염을 본 발명의 살균 조성물의 가장 유망한 후보자로 선택하였다.
실시예 2
변형된 Calgary 장치법( Calgary device method )을 사용하여 얻은 테 트라소듐 EDTA 의 미생물에 대한 바이오필름 제거 농도( MBEC )
바이오필름 형성은 박테리아 오염에 있어서 중요한 인자이다. 효과적인 살균 조성물은 바이오필름의 증식을 감소시키거나, 바이오필름의 형성을 예방 또는 억제하는 능력을 갖는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명자들은 상기 후보자 테트라소듐 EDTA 살균 용액을 시험하여 이것이 바이오필름 형성을 예방하거나 억제할 수 있는지 측정하였다. 변형 Calgary 장치법을 사용하여, 테트라소듐 EDTA의 다양한 미생물에 대한 최소 바이오필름 제거 농도 (minimum biofilm eradication concentration, MBEC)를 측정하였다. 상기 Calgary 법은 method is described in "Olsen et al ., Canadian Journal of Veterinary Research, 66: 86-92 (2002)" 및 미국특허 제6,599,714호에 개시되어 있다. 상기 방법과 결과는 하기하는 바와 같 다.
시약 등급 테트라소듐 EDTA 염을 소망하는 EDTA 염 농도 (w/v)가 될 때까지 증류수에 녹여서 테트라소듐 EDTA 염 용액을 제조하였다. 고착형태 또는 바이오필름 형태의 다양한 미생물에 대한 MBEC를 측정하기 위하여 테트라소듐 EDTA 염 농축 원액을 제조하였다. 테트라소듐 EDTA 용액을 사용 전 멸균시키고, 4 ℃에서 보관하였다.
방법
바이오필름 형성:
- 필요한 미생물의 오버나잇 배지 100 mL를 사용한다.
- 96 웰 마이크로타이터 트레이 내의 모든 웰에 200 uL를 피펫팅한다. 96 개의 핀을 사용하여 뚜껑(lid) 위에 놓는다. 오비탈 쉐이커 상에서 200 rpm의 속도 및 37 ℃의 온도에서 24시간동안 배양한다.
감수성 테스트:
- 상기와 같이 형성된 바이오필름을 사용한다.
- 뚜껑을 (핀을 사용하여) 필요한 농도의 시험 제제 250 uL를 함유하는 새로운 96 웰 마이크로타이터 트레이에 넣는다. 37 ℃에서 1 내지 24 시간동안 배양한다 (쉐이커 사용 안함).
- 1, 3, 6, 및 24 시간의 시간 간격에서, 스크류드라이버를 삽입하고, 핀을 웰 안으로 스냅핑하여 각 농도에 대하여 4 개의 핀을 뚜껑으로부터 제거한다.
- 각 농도에 대하여 3 개의 핀을 PBS 세척제 5 ml에 넣고 이와 반대로 한 번 수행한다.
- 상기 3 개의 핀을 PBS 3 mL에 넣고 15분동안 소니케이션한다. 2 pL를 CLED 플레이트 상에 도포하고 멸균 플라스틱 분무기를 사용하여 분무한다. 37 ℃에서 하루밤동안 배양한다. 다음날 콜로니 수를 센다.
- 남아있는 유리된 핀 (각 농도에 대하여)을 SEM용 4% 포르말 식염수 600 uL에 넣는다.
이러한 방법을 사용하여 측정되고 mg/ml 테트라소듐 EDTA (w/v)으로 표현된 다양한 미생물의 MBEC값을 도 6에 나타내었다. 상기 결과는 40 mg/ml 테트라소듐 EDTA (4% w/v)가 시험된 모든 미생물 개체군에 대하여 효과적인 바이오필름 제거 농도인 것으로 나타났다.
다양한 미생물에 대한 MBEC 실험에 의하여 얻어진 대표적인 데이터를 아래에 나타내었다. 모든 실험에 테트라소듐 EDTA를 사용하였으며, 각 시험은 3 번씩 수행하였다.
미생물: 250 E. coli
EDTA 농도 mg/ml 1 시간 후의 콜로니수/mL 3 시간 후의 콜로니수/mL 6 시간 후의 콜로니수/mL 24 시간 후의 콜로니수/mL
0 40152 53285 64234 6133
48175 62044 56934 4960
43796 61314 76642 5120
5 0 520 80 0
0 540 80 0
0 620 133 730
10 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
15 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
20 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
250 E. coli의 경우, MBEC = 10 mg/mL 테트라소듐 EDTA.
미생물: J26 Pseudomonas aeruginosa
EDTA 농도 mg/ml 1 시간 후의 콜로니수/mL 3 시간 후의 콜로니수/mL 6 시간 후의 콜로니수/mL 24 시간 후의 콜로니수/mL
0 86861 4400 92701 66667
89781 3060 79562 35036
94891 3080 83212 41606
5 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
10 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
15 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
20 0 0 0 0
0 0 0 0
0 0 0 0
J26P seudomortas aeruginosa의 경우, MBEC = < 5 mg/mL 테트라소듐 EDTA.
미생물: 292 Enterobacter cloacae
EDTA 농도 mg/ml 1 시간 후의 콜로니수/mL 3 시간 후의 콜로니수/mL 6 시간 후의 콜로니수/mL 24 시간 후의 콜로니수/mL
0 1.00E+06 103704 94444 91241
1.00E+06 118519 131481 116667
1.00E+06 107407 100000 131481
5 69343 35036 36496 0
67153 15974 32197 0
67153 19697 39416 0
10 38686 12035 80 0
42336 17803 219 0
40909 18561 0 0
15 8000 8133 379 0
8533 8133 219 0
7467 8267 133 0
20 13786 2840 0 0
12473 2820 0 0
14661 2600 0 0
292 Enterobacter cloacae의 경우, MBEC = < 5 mg/mL 테트라소듐 EDTA.
미생물: H. Esaterococcus sp.
EDTA 농도 mg/ml 1 시간 후의 콜로니수/mL 3 시간 후의 콜로니수/mL 6 시간 후의 콜로니수/mL 24 시간 후의 콜로니수/mL
0 5600 3520 4000 6133
8133 3980 3440 4720
6800 3920 3760 4640
5 1380 780 80 0
1160 580 100 0
1140 500 120 0
10 40 0 0 0
100 0 0 0
20 0 0 0
15 40 0 20 0
0 0 0 0
80 0 20 0
20 1480 730 160 0
1560 379 160 0
2000 320 140 0
H. Enterococcus sp.의 경우, MBEC = < 5 mg/mL 테트라소듐 EDTA.
미생물: J22 엔테로박터 클로아카에 ( Enterobacter cloacae )
EDTA 농도 mg/ml 1 시간 후의 콜로니수/mL 3 시간 후의 콜로니수/mL 6 시간 후의 콜로니수/mL 24 시간 후의 콜로니수/mL
0 124074 107407 105556 101852
116667 912141 105556 120370
112963 98540 92701 100000
5 6400 267 2040 0
5200 133 2160 0
8933 379 1820 0
10 3540 1920 267 80
3040 2900 160 1532
3760 2340 219 800
15 2620 1560 740 0
2100 1740 720 0
2720 1580 920 0
20 2040 80 960 0
2360 1460 840 0
1620 133 560 0
J22 Enterobacter cloacae의 경우, MBEC = 15mg/mL 테트라소듐 EDTA.
미생물: R81 Proteus vulgaris
EDTA 농도 mg/ml 1 시간 후의 콜로니수/mL 3 시간 후의 콜로니수/mL 6 시간 후의 콜로니수/mL 24 시간 후의 콜로니수/mL
0 62044 81752 112963 59259
55474 73723 103704 68519
54105 78832 107407 59124
5 3160 160 3460 0
4000 400 3120 0
4000 160 3140 0
10 1520 730 400 0
1920 533 1460 0
1900 438 160 0
15 2960 379 1100 0
2580 80 780 0
2560 400 1220 0
20 4560 400 1520 0
4480 320 1280 0
2820 240 720 0
R81 Proteus vulgaris의 경우, MBEC = <5 mg/mL 테트라소듐 EDTA.
실시예 3
환자 양성 카테테르 상의 생체외 ( in vitro ) 카테테르 고정 처리
후보자 테트라소듐 EDTA 용액 40 mg/ml (4% w/v)를사용하는 카테테르 고정 처리 과정을 개발하여, 다양한 미생물 감염에 대하여 양성으로 시험된 환자 혈액투석 카테테르 샘플에 사용하였다. 미생물 감염이 있는 것으로 측정된 카테테르를 테트라소듐 EDTA를 사용하는 카테테르 고정 처리시켰으며, 다양한 시점에서 콜로니 수를 세었다. 첫 번째 실험에서, 모든 카테테르를 4%(w/v) 테트라소듐 EDTA 용액으로 처리하였으며, 두 번째 실험에서는, 다양한 농도의 테트라소듐 EDTA 용액을 사용하여 카테테르를 처리하였다. 테트라소듐 EDTA 용액은 상기 실시예 1 및 2에 기재된 바와 같이 제조하고 보관하였다. 그 과정과 결과를 아래에 나타내었다.
방법:
- 각 관 내강 아래로 1 mL 멸균 인산 완충 식염수를 흘려서 감염이 의심되는 제거된 신장 혈액투석 카테테르를 스크리닝하였다. 혈액 한천 플래이트 상에 1 내지 10 uL 분량을 분사하고 배양하여 양적 배양을 수행하였다.
- 상기 카테테르는 스크리닝 후까지 우선 4 ℃에서 보관하고 외부 관내강을 알코올 와이퍼를 사용하여 살균하였다.
- 고정 처리 시험 전에, 스크리닝된 양성 카테테르를 5 mL 주사기를 사용하여 영양 배지로 고정시키고, 37 ℃에서 하룻밤동안 배양하여, 바이오필름 생존력 및 감염 미생물을 갖는 모든 관내 표면의 총 콜로니화 수를 확인하였다.
- 하룻밤 배양 후, 각 카테테르 관내강을 멸균 식염수 5 mL로 수세하고, 두 개의 1 cm 절편을 말단으로부터 잘라내고, 각각을 1M 멸균 염화칼슘 1 mL에 넣고 (시약의 중화를 위하여), 하나는 주사전자현미경 (SEM)에 사용하고, 다른 하나는 멸균 유니버살 용기에서의 배양에 사용하였다.
- 배양 과정을 위하여, 상기 유니버살 용기를 15 분동안 실온의 소니케이션 배쓰에 넣은 후, 20초동안 볼텍싱하였다.
- 혈액 한천 플레이트 상에 도포되고 멸균 플라스틱 L 모양 막대를 사용하여 분무된 분량 1 μl와 10 μl를 사용하여 양적 배양을 수행하였으며, 37 ℃에서 하룻밤동안 배양하고, 다음날 콜로니 수를 세었다.
- 적절한 농도의 테트랄소듐 EDTA 고정액을 사용하여 카테테르를 수세하고 고정시키고, 37 ℃에서 18 시간동안 배양하였다.
- 3, 6 및 18 시간 뱅양에서, 카테테르 말단에서 1 cm 절편 두 개를 잘라니고, 1M 멸균 염화칼슘 용액 1 mL에서 중화시켰다.
상기한 바와 같이, 각 시간 간격에서의 정량적 카운팅하고, 하나의 절편은 SEM용으로 남겨놓았다.
감염된 신장 혈액투석 카테테르 17 개를 테트라소듐 EDTA를 40 mg/ml (4% w/v) 농도로 함유하는 살균 조성물을 사용하여 처리하였다. 그 결과를 도 7에 나타내었다. 10 개의 추가적인 감염된 신장 혈액투석 카테테르와 하나의 동맥 카테테르와 하나의 정맥 카테테르를 테트라소듐 EDTA를 20 내지 100 mg/ml (2-10% w/v)의 농도로 함유하는 살균 조성물로 처리하였다. 그 결과를 도 8에 나타내었다.
상기 결과는 40 mg/ml (4% w/v) 테트라소듐 EDTA가 24 시간 처리 후 대부분의 미생물 개체군의 사멸, 또는 현저한 감소에 효과가 있다는 것이 보여준다. 이러한 테트라소듐 EDTA의 농도는 인간 또는 다른 동물과 관련하여 안전하며, 효과적인 것으로 생각되어, 본 발명의 살균 조성물 및 방법에 있어서의 바람직한 농도이다.
실시예 4
Acanthamoeba 에 대한 EDTA 의 효과 및 Acaiithamoeba 에 대한 테트라 소듐 EDTA 처리된 Klebsiella 의 효과
Acanthamoeba의 일부 종은 인간에 감염 가능하다. Acanthamoeba 감염은 주로 콘택트렌즈 및 인체에 접촉하는 의료 장치의 부적절한 보관의 결과이다. Acanthamoeba는 박테리아 개체군을 먹이로 하며, 많은 치료에 대하여 내성이 있다. 상기한 바와 같이 제조된 테트라소듐 EDTA의 Acanthamoeba 개체군에 대한 효과를 다음과 같이 시험하였다. 또한, 용매로서 Pages 식염수와 생리 식염수를 사용하여 테트라소듐 EDTA 조성물을 제조하였다. 또한, 다음의 방법을 사용하여 테트라소듐 EDTA 처리된 Klebsiella의 Acanthamoeba에 대한 효과를 실험적으로 테스트하였다.
Acantlaaazoeba 에 대한 테트라소듐 EDTA 의 효과:
방법:
- 테스팅 전에 신선한 혈액 한천 플레이트를 Klebsiella edwardsii와 함께 37℃에서 배양한다.
- 테트라소듐 EDTA (100 mg/mL) 원액을 사용하여, Page 식염수에 용해시켜, 농도 22 및 44 mg/mL로 만든다.
- 각 농도의 희석액 9 mL를 멸균 유리 시험관에 넣는다. 대조군으로서 사용하기 위하여, Page 식염수 9 mL를 다른 멸균 유리 시험관에 넣는다.
- 멸균 Page 식염수 6 mL에서 Klebsiella edwardsii 현탁액을 제조한다. McFarland 기준 5로 조절한다.
- 상기 현탁액 1 mL를 각 멸균 희석액과 대조군에 첨가한다. Klebsiella 현탁액의 희석 요인에 의하여, 각각의 농도가 20와 40 mg/mL로 되었다. 상기 대조군은 여전히 테트라소듐 EDTA를 함유하지 않는다. 모든 농축 공정을 생리 식염수 내애서 반복한다.
- 볼텍싱하여 혼합한다. 각 시험관은 이제 McFarland 0.5의 Klebsiella 현탁액을 함유한다.
- 전체 Acanthamoeba 플레이트를 스크래핑하고 연마하여, Page 식염수 5 mL 내에서 현탁시킨다. 볼텍싱한다.
- Acanthamoeba 현탁액 200 uL를 각각의 멸균 희석액과 대조군에 첨가한다.
- 상기 시험관을 30 ℃ 인큐베이터에 24 시간동안 둔다.
- 배양 후, 각 유니버살을 3000 rpm에서 10 분동안 원심분리한다.
- 상청액을 따라내고, 펠렛을 재현탁한다.
- 희석액과 대조군 10 uL를 Klebsiella 론 (lawn)과 함께 비영양 한천 플레이트 상에 넣는다 (두 번 수행). 각 플레이트 중심 아래의 그루브를 잘라서 이동을 방지하고, 양 측면에 시험된 희석액 10 uL를 놓는다.
- 흑색 마커팬으로 각 배양 위치를 표시한다.
- 플레이트를 30 ℃에서 72시간 동안 배양한다.
- 각 접종 위치에서 시작하여, X10 배율 접안렌즈 광학 현미경을 사용하는 플레이트의 직접적 가시화에 의하여 Acanthamoeba의 증식을 체크한다.
테트라소듐 EDTA와 함께 24시간 배양 후의 증식
테트라소듐 EDTA와 함께 24시간 배양시킨 후의 성장
(용액) 중 EDTA의 농도 mg/mL Acanthamoeba의 증식
0 (Pages 식염수) +++
0 (Pages 식염수) +++
20 (Pages 식염수) ++
20 (Pages 식염수) ++
40 (Pages 식염수0 -
40 (Pages 식염수) -
0 (생리식염수) +++
0 (생리식염수) +++
20 (생리식염수) ++
20 (생리식염수) ++
40 (생리식염수) -
40 (생리식염수) ++
테트라소듐 EDTA와 함께 24시간 배양 후의 증식 (반복)
EDTA의 농도 mg/mL Acanthamoeba의 증식
0 (Pages 식염수) +++
0 (Pages 식염수) +++
20 (Pages 식염수) ++
20 (Pages 식염수) ++ (영양형 존재)
40 (Pages 식염수0 -
40 (Pages 식염수) -
0 (생리식염수) +++
0 (생리식염수) +++
20 (생리식염수) -
20 (생리식염수) -
40 (생리식염수) +++
40 (생리식염수) ++ (영양형 존재)
테트라소듐 EDTA와 함께 48시간 배양 후의 증식
EDTA의 농도 mg/mL Acanthamoeba의 증식
0 (Pages 식염수) +++ (영양형 존재)
0 (Pages 식염수) +++ (영양형 존재)
20 (Pages 식염수) -
20 (Pages 식염수) -
40 (Pages 식염수0 -
40 (Pages 식염수) -
0 (생리식염수) +++
0 (생리식염수) +++
20 (생리식염수) -
20 (생리식염수) -
40 (생리식염수) -
40 (생리식염수) -
상기 결과는 Pages 식염수 및 생리 식염수 내의 20-40 mg/ml (2-4% w/v) 테트라소듐 EDTA가 48시간 노출 후 Acanthamoeba 개체군의 억제 또는 실질적 제거에 효과적이라는 것을 보여준다. 용매로서 물을 사용하여 제조된 테트라소듐 EDTA ㅈ조성물 또한 효과적이다 (데이터 기재하지 않음). 이러한 결과는 본 발명의 살균 조성물이 콘택트렌즈, 치과, 교정 및/또는 치주 장치를 포함하는 다양한 의료 기구용 침지 용액으로서 적용하기에 적합하다는 것을 의미한다. 본 발명의 살균 조성물은 또한 담수 및 해수 저장 및 배관 시스템, 가열, 환기 및 공기 정화 단위체, 가습기, 투석기 등을 포함하는 다른 적용에 있어서, Acanthamoeba 개체군을 실질적으로 제거하는데 효과가 있다.
Acanthamoeba는 박테리아 개체군을 먹이로 한다. 따라서, 본 발명자들은 본 발명의 살균 EDTA 조성물로 처리된 박테리아 개체군이 상기 처리된 박테리아 개체군에 대한 Acanthamoeba 섭식에 대하여 어떠한 효과를 갖는지를 시험하였다.
Acanthamoeba 에 대한 테트라소듐 EDTA 처리된 Klebsiella 의 효과
방법 :
- 시험전에 Klebsiella edwardsii를 포함하는 신선한 혈액 한천 플레이트를 37 ℃에서 18시간동안 배양한다.
- 테트라소듐 EDTA (100 mg/mL) 원액을 사용하여, Page 식염수 내의 농도22 및 44mg/mL를 만든다.
- 각 농도 9 mL를 멸균 유리 시험관에 넣는다. 대조군으로서, 멸균 Page 식염수 9 mL를 또 다른 시험관에 넣는다.
- 멸균 Page 식염수 6 mL에서 Klebsiella edwardsii 현탁액을 만든다. McFarland 기준 5로 조절한다.
- 각각의 멸균 희석액과 대조군에 현탁액 1 mL를 넣는다. Klebsiella 현탁액의 희석 요인 때문에, 각 농도는 20와 40mg/mL이 되었다. 상기 대조군은 여전히 테트라소듐 EDTA를 함유하고 있지 않다. 모든 농도를 생리식염수에서 반복수행 하였다.
- 볼텍싱하여 혼합한다. 각각의 시험관은 이제 McFarland 0.5의 Klebsiella 현탁액을 포함한다.
- 시험관을 37 ℃에서 하룻밤동안 배양한다.
- 다음날, 시험관을 300 rpm에서 10분동안 원심분리한다. 상청액을 따라 버리고; 신선한 식염수 또는 Page 식염수 10 mL를 첨가하고, 재현탁하고, 재원심분리한다. 상청액을 따라버리고, 식염수 또는 Page 식염수 1 mL에서 재현탁시킨다.
- 전체 Acanthamoeba 플레이트 표면을 스크래핑하고 Page 식염수 1.5 mL에서 재현탁시킨다. 볼텍싱한다
- 상기 Acanthamoeba 현탁액 200 uL를 식염수 9 mL를 포함하는 시험관 3개와 Page 식염수 3 mL를 포함하는 시험관 3개에 첨가한다. Klebsiella 배양에 사용된 EDTA 농도인 것처럼 각 시험관을 라벨링한다.
- 재현탁 Klebsiella 1 mL를 Klebsiella를 포함하는 적절한 시험관에 첨가한다.
- 상기 시험관을 30 ℃ 인큐베이터에 24시간동안 둔다.
- 다른 시험관 세트를 셋업하여 상기한 바와 같이 Klebsiella를 EDTA와 함께 37℃에서 배양한다
- 배양 후, Acanthamoeba를 포함하는 각각의 시험관을 3000 rpm에서 10분동안 원심분리한다.
- 상청액을 따르고, 펠렛을 재현탁시킨다.
- 각 희석액과 대조군 10 uL를 Klebsiella (EDTA와 함께 배양되지 않음) 론과 함께 비영양 한천 플레이트에 넣는다 (2회 반복). 각 플레이트 중앙 아래의 그루브를 절단하여 이동을 막고 각 말단에 시험될 희석액 10 uL를 넣는다.
- 흑색 마커팬으로 각 접종 위치를 표시한다.
- 플레이트를 30 ℃에서 배양한다.
- 각각의 접종 위치에서 시작하여, X10 배율 접안렌즈 광학 현미경을 사용하여 플레이트를 직접 가시화함으로써 Acanthamoeba의 증식을 체크한다.
- Acanthamoeba 현탁액의 잔류물을 신선한 식염수 또는 신선한 Page 식염수를 포함하는 새로운 세트의 시험관에 넣는다.
- 상기한 바와 같이 EDTA와 함께 하룻밤동안 배양된 Klebsiella를 세척하고 재현탁시키고, Acanthamoeba를 포함하는 각각의 적절한 시험관에 첨가한다.
- 시험관을 30 ℃에서 하룻밤동안 배양한다.
- 배양 후, 각 유니버살을 3000 rpm에서 10분동안 원심분리한다.
- 상청액을 따르고 펠렛을 재현탁시킨다.
- 각 희석액과 대조군 10 uL를 Klebsiella (EDTA와 함께 배양되지 않음) 론과 함께 비영양 한천 플레이트에 넣는다 (2회 반복). 각 플레이트 중앙 아래의 그루브를 절단하여 이동을 막고 각 말단에 시험될 희석액 10 uL를 넣는다.
- 흑색 마커팬으로 각 접종 위치를 표시한다.
- 플레이트를 30 ℃에서 배양한다.
- 각각의 접종 위치에서 시작하여, X10 배율 접안렌즈 광학 현미경을 사용하여 플레이트를 직접 가시화함으로써 Acanthamoeba의 증식을 체크한다.
Klebsiella와 함께 24시간 배양 후의 Acanthamoeba의 증식 (이전에 EDTA와 함께 인큐베이션됨)
EDTA의 농도 mg/mL Acanthamoeba의 증식
0 (Pages 식염수) +++
0 (Pages 식염수) --
20 (Pages 식염수) ++
20 (Pages 식염수) ++
40 (Pages 식염수0 ++
40 (Pages 식염수) -
0 (생리식염수) +++
0 (생리식염수) +++
20 (생리식염수) ++
20 (생리식염수) ++
40 (생리식염수) -
40 (생리식염수) -
Klebsiella와 함께 48시간 배양 후의 Acanthamoeba의 증식 (먼저 EDTA와 함께 인큐베이션됨)
EDTA의 농도 mg/mL Acanthamoeba의 증식
0 (Pages 식염수) +++
0 (Pages 식염수) +++
20 (Pages 식염수) +
20 (Pages 식염수) -
40 (Pages 식염수0 -
40 (Pages 식염수) -
0 (생리식염수) +++
0 (생리식염수) +++
20 (생리식염수) -
20 (생리식염수) -
40 (생리식염수) -
40 (생리식염수) -
이러한 결과는 먹이가 되는 박테리아 개체군을 본 발명의 살균 EDTA 조성물로 처리함으로써 Acanthamoeba 증식을 저지할 수 있고, Acanthamoeba 개체군을 실질적으로 제거할 수 있음을 보여준다. 테트라소듐 EDTA를 20 내지 40 mg/mL (2-4% w/v)의 농도로 갖는 살균 EDTA 조성물이 효과적이다. 이는 콘택트렌즈 및 치과/교정/치주 장치를 포함하는 다양한 의료 기구의 침지액 등의 용도 뿐 아니라, 담수 및 해수 저장 및 배과 시스템, 가열, 환기 및 공기 정화 장비, 가습기, 투석 장비 등에 있어서의 적용에 있어서의 본 발명의 살균 조성물의 유용성을 입증하는 것이다
실시예 5
테트라소듐 EDTA 조성물이 미생물의 실리콘 튜빙에 대한 부착 및 흡착을 방지할 수 있는지를 측정하는 실험을 행하였다. 미생물의 실리콘 튜빙에 대한 부착 및 흡착이 방지될 수 있으면, 생체막 (biofilm)의 형성이 감소될 수 있다. 사용된 실험 프로토콜과 얻어진 결과를 아래에 제시한다.
방법:
- 실리콘 튜빙 1 cm 섹션을 용융 왁스로 충전시켜 각각의 내강(endolumen)을 밀봉하고, 4℃에서 경화시킨다.
- 4개의 섹션을 30 mL 멸균 인산 완충 염수 (PBS)에 넣고 이를 대조군으로 한다. 8개의 섹션을 30 mL 4% 테트라소듐 EDTA에 넣는다.
- 30분 후, PBS로부터 섹션 4개와 4% 테트라소듐EDTA로부터의 섹션 4개를 핫 블록 상의 청정 컨테이너에 넣고, 건조시킨다.
- 나머지 섹션 4개를 30 mL의 멸균 PBS에 옮겨 헹군 다음, 이전처럼 공기 건조시킨다.
- 일단 건조되면, 12개의 섹션 모두를 105 cfu/mL의 혼합 미생물 (밤새 배양시킨 37℃에서 영양 브로쓰 중에서 밤새 배양한 Klebsiella pneumoniae와 CNS의 배양체)에 넣고 37℃에서 인큐베이션시킨다.
- 30분 후 유형별로 섹션 2개를 제거하고 2 X 30 mL 멸균 PBS로 헹군다. 전과 같이 공기 건조시킨다. 각각의 유형마다 별도의 세척 및 건조 용기를 이용하여 오염을 막는다.
- 각각의 섹션을 원심분리 튜브 중 1 mL PBS에 넣고 15분간 초음파 처리용 수조에서 초음파 처리한다.
- 각각의 튜브를 자동 플레이트 접종기 상에 이중으로 플레이팅 아웃시킨다. 50 uL 대수 희석.
- 1/10 희석된 각 튜브 두세트를 플레이팅 아웃시킨다.
- 37℃에서 밤새 플레이트를 인큐베이션시킨다. 자동화 플레이트 판독기 ProtoCOL을 이용하여 콜로니수를 측정한다. 6시간 동안 반복한다.
대조군과 EDTA 처리된 카테테르 섹션의 결과를 다음에 나타내었다.
카테테르 섹션의 종류 인큐베이션 시간 카테테르 섹션의 수 NEAT 중 콜로니 수 (cfu/mL) 1/10 중의 콜로니 수 (cfu/mL)
대조군 30분 1 240 220 0 0
대조군 30분 2 280 140 1 0
대조군 6시간 1 1480 1120 0 0
대조군 6시간 2 5200 5467 7800 5800
공기건조 EDTA 30분 1 240 400 1333 800
공기건조 EDTA 30분 2 267 720 0 0
공기건조 EDTA 6시간 1 1280 1120 16800 8800
공기건조 EDTA 6시간 2 2240 2340 21333 8800
헹궈진 EDTA 30분 1 267 379 0 0
헹궈진 EDTA 30분 2 1040 0 0 0
헹궈진 EDTA 6시간 1 1980 1740 9600 12800
헹궈진 EDTA 6시간 2 3600 3660 19000 8600
순수한 EDTA 용액에 대한 결과는 재생성이 더 높은 것으로 밝혀졌으며, 따라서, 이들에 대해 더욱 분석하였다. 섹션들을 1 mL 용액에 넣었으므로, mL 당 계수값은 섹션 당 계수값과 같다.
카테테르 섹션의 유형 30분 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션) 6시간 후의 평균 콜로니수 (cfu/섹션)
대조군 880 3317
공기건조된 EDTA 407 1745
헹궈진 EDTA 421 2745
카테테르 섹션의 유형 30분 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소 6시간 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소
공기건조된 EDTA 53.8% 47.4%
헹궈진 EDTA 52.2% 17.3%
Klebsiella + CNS를 이용하여 24시간 동안 반복하였다:
카테테르 섹션의 유형 30분 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션) 6시간 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션) 24시간 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션)
대조군 377 9205 105806
공기건조된 EDTA 273 3720 70370
헹궈진 EDTA 474 9499 77051
카테테르 섹션의 유형 30분 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소 6시간 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소 24시간 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소
공기건조된 EDTA 27.4% 59.6% 33.5%
헹궈진 EDTA +25.7% +31.9% 27.2%
+는 대조군으로부터의 평균 cfu/섹션의 증가를 나타낸다.
Psudomonas aeruginosa의 결과:
카테테르 섹션의 유형 30분 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션) 6시간 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션) 24시간 후의 평균 콜로니 수 (cfu/섹션)
대조군 6400 341994 1290000
공기건조된 EDTA 4108 30000 474494
헹궈진 EDTA 5200 153758 1150000
카테테르 섹션의 유형 30분 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소 6시간 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소 24시간 후의 대조군으로부터의 cfu/섹션의 평균 % 감소
공기건조된 EDTA 35.8 91.2 63.2
헹궈진 EDTA 18.8 55.0 10.9
이러한 결과들은 공기건조된 카테테르 섹션과 헹궈진 카테테르 섹션 두가지 모두에 있어서 적어도 단기간으로는 세균 개체수가 감소하였음을 입증하는 것이다.
실시예 6
테트라소듐 EDTA를 에탄올과 조합시킨 경우의 변경된 MBC 값
테트라소듐 EDTA 농도 (0, 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 4 및 8 mg/ml, w/v) 범위를 갖는 용액들을 물 및 에탄올 (최종 에탄올 농도가 물 중 0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 20 및 40%가 되도록 하는 양)과 함께 조성시켜 EDTA 용액 단독, 알코올 용액 단독 및 EDTA/알코올 용액의 효능을 테스트하였다. 테트라소듐 EDTA의 농축 원액을 증류수 중에 준비하고 적절한 에탄올 농도가 될 때까지 에탄올을 농축 원액 수용액에 첨가하였다.
방법:
- 37℃에서 영양 브로쓰 중에서 미생물들을 밤새 배양한다.
- 물 중 0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 20 및 40% 알코올 (v/v)을 함유하는 이소프로필 알코올 용매 중 0, 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 4 및 8 mg/ml의 테트라소듐 농도 (w/v)를 갖는 EDTA 용액을 이용하여 알코올 및 테트라소듐 EDTA의 원액을 이용하여 96 웰 플레이트에 그리드 패턴으로 충전시킨다.
- 각각의 웰은 각 희석물 150 uL과 1 x 108 cfu/mL 농도의 미생물을 50 uL 함유한다.
- 5분, 6시간 및 24시간의 기간으로, 96 핀 리드를 플레이트에 놓음으로써 (그리고 각각의 웰 내로) 각각의 웰은 배양한 다음, 각각의 웰 중에 300 uL의 신선한 영양 배지를 함유하는 96 웰 플레이트로 리드를 옮긴다. 37℃에서 밤새 배양한다. 각각의 접종물 플레이트를 인큐베이션 기간 동안 37℃에서 인큐베이션시킨다.
- 24시간 후의 각 웰의 탁도를 기록한다.
몇가지 미생물에 대한 결과를 다음 표에 나타내었다.
미생물 MBC 테트라소듐 EDTA (mg/mL) MBC 알코올 (%) MBC 테트라소듐 EDTA (mg/mL) + 알코올 (%)
E. coli 3 10 0.5 및 0.5
Proteus sp. 3 10 2 및 1
CNS (I) 8 10 2 및 1
Klebsiella sp. 8 10 1 및 1
Staphylococcus aureus 0.1 0.1 0.1 및 0.1
Peudomonas sp. 2 10 2 및 1
CNS (II) 8 10 0.5 및 0.5
물 중 테트라소듐 EDTA 용액은 에탄올 (단독) 용액보다, 테스트 미생물을 사멸시키는데 있어서 보다 효과적이었다. 알코올 용액 중 조합 테트라소듐 EDTA는 테스트 미생물을 최저 농도에서 사멸시켰다. 1% 알코올 용액 중 2 mg/ml (0.2 w/v) 테트라소듐 EDTA는 탁월한 결과를 제시하였으며 시험된 모든 미생물에 대해 살균 효과를 나타내었다. 이러한 살균 용액은 물 단독 또는 에탄올 단독 중의 테트라소듐 EDTA 용액에 비해 테트라소듐 EDTA 및 에탄올의 경우 더 낮은 농도에서 효과적이다. 뿐만 아니라, 이 살균 용액은 제조 및 사용시에도 경비면에서 보다 효과적이고 안전하며 편리하다. 따라서 본 발명의 국소용 살균 조성물은 혼합 수성 용매 및 에탄올 중의 EDTA 염을 포함한다.
실시예 7
에탄올 중의 테트라소듐 EDTA의 용해도 및 pH에 대한 효과
에탄올 중의 테트라소듐 EDTA의 용해도를 시험하고 알코올 용매 중 다양한 테트라소듐 용액의 pH를 측정하였다.
방법:
- 1.5 mL 크기의 에펜도르프 튜브 중 10-100 mg 범위로 테트라소듐 EDTA를 2회씩 칭량하였다. 74% 에탄올 1 mL를 각 튜브에 첨가하고 30초간 보텍싱하였다.
- 칭량된 테트라소듐 EDTA 이중 세트에, 살균 증류스 0.5 mL를 첨가하고 보텍스 혼합한 다음 74% 에탄올 0.5 mL를 첨가하였다.
- 각각의 테트라소듐 EDTA 튜브를 용해성이 관찰된 pH에 대해 시험하였다.
실험 결과 테트라소듐 EDTA는 74% 에탄올 용액 중에 완전히 불용성인 것으로 입증되었다. 이 결과는 테트라소듐이 10-100 mg/mL, w/v의 농도 범위로 증류수 중에 용해된 경우, 에탄올을 부가하여도 테트라소듐 EDTA이 용액 중에 유지됨을 부가적으로 입증해주었다. 따라서, 바람직한 기술은 먼저 수용액 중에 EDTA 염(들)을 용해시킨 다음, 에탄올 또는 EDTA 염(들)이 덜 용해되거나 불용성인 다른 용매를 부가하는 것이다. 이러한 방식으로 제조된 EDTA 염 용액들은 경시적으로 안정할 것으로 기대된다. 여러가지 용액에 대해 측정된 pH 값은 다음과 같았다:
74% 에탄올, 단독 pH 7.8
물 pH 7.1
+ 10 mg 테트라소듐 EDTA pH 9.0
+ 20 mg 테트라소듐 EDTA pH 10,8
+ 40 mg 테트라소듐 EDTA pH 11
+ 80 mg 테트라소듐 EDTA pH 11.15
+ 100 mg 테트라소듐 EDTA pH 11.25
실시예 8
테트라소듐 EDTA 용액에 미치는 121℃ 오토클라브 처리의 효과
본 발명자들은 사용전 테트라소듐 EDTA 용액을 멸균하는데 오토클라브 처리를 이용할 수 있는지를 결정하기 위하여 테트라소듐 EDTA 용액에 대한 오토클라브 처리의 효과를 시험하였다. 사용된 방법론과 그 결과를 다음에 나타내었다.
방법:
- 멸균수 중 0, 20, 80 및 100 mg/mL의 테트라소듐 EDTA를 두 세트 만들고 멸균시킨 다음 50℃ 용융 영양 한천에서 배양한다.
- 한 세트는 실온 (가열하지 않음)에 두고 다른 한 세트는 오토클라브시킨다 (가열한다).
- 다음날 모든 한천 보틀을 찜기에 넣고 40분간 용융시킨다.
확산 대역 측정:
- 코르크 뚫는 기구를 이용해서, 16개의 신선한 혈액 한천 플레이트에 2개의 구멍을 뚫는다.
- CNS의 0.5 McFarland 현탁액을 만든 다음 멸균 면봉을 이용하여 플레이트 상에 도말한다.
- 각각의 테트라소듐 용액 150 uL를 이중 천공된 구멍에 피펫팅하여 옮기고 37℃에서 밤새 인큐베이션시킨다.
- 다음날 확산 대역을 측정하고 결과를 기록한다.
대역 크기 (mm)로 측정한 결과를 다음에 제시한다. 대조군의 대역 크기를 농도에 대해 플로팅하여, 테스트 시료 중 실제 EDTA 농도를 측정하고 이를 다음에 제시하였다. 이러한 결과는 테트라소듐 EDTA 조성물 (멸균수 내건 한천 내건)의 오토클라브 처리는 테트라소듐 EDTA 조성물의 항미생물 활성에 실질적인 영향을 미치지 않는다는 것으로 증명하는 것이다.
대역 크기 (mm)
EDTA의 농도 mg/mL 멸균수 중의 EDTA (대조군) 오토클라브된 멸균수 중의 EDTA 한천 중의 EDTA 오토클라브된 한천 중의 EDTA
0 0 0 0 0 0 0 0 0
20 13.2 13.2 11.6 11.6 13.5 13.5 12.7 12.7
80 16.1 16.1 15.2 15.2 17.2 17.2 15.3 15.3
100 17.1 17.1 17.0 17.0 17.1 17.1 16.4 16.4
EDTA의 실제 농도
초기 EDTA의 농도 mg/mL 멸균수 중의 EDTA (대조군) 오토클라브된 멸균수 중의 EDTA 한천 중의 EDTA 오토클라브된 한천 중의 EDTA
0 0 0 0 0
20 20 16 26 19
80 80 60 101 62
100 100 98 100 83
실시예 9
121℃에서의 오토클라브 처리가 여러가지 EDTA 조성물에 미치는 영향
사용 전 여러가지 EDTA 용액을 멸균하는데 오토클라브 처리를 이용할 수 있는지를 결정하기 위해 본 발명자들은 여러가지 EDTA 조성물에 미치는 오토클라브 처리의 효과를 시험하였다. 사용된 방법론과 결과를 다음에 나타내었다.
방법:
한천 준비
- 영양 한천 용액 50 mL를 7 X 100 mL의 멸균 유리 보틀에 넣는다.
- 첫번째 보틀에는 EDTA 분말을 첨가하지 않는다 (0으로 표시)
- 두번째 보틀에는 EDTA 분말 2000 mg을 첨가한다 (40 mg/mL auto로 표시)
- 세번째 보틀에는 EDTA 분말 4000 mg을 첨가한다 (80 mg/mL auto로 표시)
- 네번째 보틀에는 EDTA 분말 5000 mg을 첨가한다 (100 mg/mL auto로 표시)
- 다섯번째, 여섯번재 및 일곱번째 보틀에는 EDTA를 첨가하지 않고 (그러나 40, 80, 100 및 100 mg/mL 오토클라브 비처리로 표시), 실온에서 방치한다.
- 시험할 EDTA 조성물 각가에 대해 위 처리를 실시하고, 모든 보틀을 121℃에서 20분간 오토클라브 처리한 다음 auto로 표시한다.
- 다음 날, 모든 보틀을 찜기에 넣고 한천을 붓기 위해 이를 용융시킨다.
- 일단 용융되면, 적절한 양의 EDTA를 오노클라브 비처리로 표시된 보틀에 넣기에 앞서 50℃로 냉각한다. 이렇게 해서 모든 보틀의 테스트 준비를 마친다.
확산 대역의 측정
- 코르크 뚫는 기구를 이용해서, 7개의 신선한 혈액 한천 플레이트에 2개의 구멍을 뚫는다.
- CNS의 0.5 McFarland 현탁액을 만든 다음 멸균 면봉을 이용하여 플레이트 상에 도말한다.
- 각각의 보틀로부터 150 uL를 2개의 별도 "천공된 구멍"에 피펫팅하여 옮기고 37℃에서 밤새 인큐베이션시킨다.
- 이 처리를 각각의 EDTA 조성물에 대해 실시한다.
- 다음날 확산 대역을 측정하고 결과를 기록한다. 두개의 구멍을 이용하여 대역 당 2회 측정하였다.
구리 EDTA 및 철 EDTA 용액은 어떠한 대역도 만들지 않았다. 따라서 이 용액에 대한 열처리 효과는 이 방법으로는 측정할 수 없다. 디암모늄 EDTA, 디포타슘 EDTA 및 마그네슘 EDTA 용액에 대하여 측정된 대역 크기를 다음에 제시한다. 대조군 (비열처리)의 대역 크기를 농도에 대해 플로팅하여 테스트 시료(열처리) 중 실제 EDTA 농도를 측정하고 그 결과를 다음에 제시하였다.
확산 크기 (mm)
EDTA의 농도 (mg/mL) 디암모늄 EDTA 비열처리 디암모늄 EDTA 열처리 디포타슘 EDTA 비열처리 디포타슘 EDTA 열처리 마그네슘 EDTA 비열처리 마그네슘 EDTA 열처리
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
40 18.3 18.3 18.3 18.3 17.9 17.9 17.9 17.9 16.2 16.2 16.2 16.2 15.5 15.5 15.5 15.5 6.8 6.8 6.8 6.8 10.6 10.6 10.6 10.6
80 19.7 19.7 19.7 19.7 19.7 19.7 19.7 19.7 18.9 18.9 18.9 18.9 18.3 18.3 18.3 18.3 10.0 10.0 10.0 10.0 10.8 10.8 10.8 10.8
100 20.0 20.0 20.0 20.0 20.6 20.6 20.6 20.6 18.2 18.2 18.2 18.2 20.0 20.0 20.0 20.0 8.3 8.3 8.3 8.3 11.8 11.8 11.8 11.8
오토클라브 처리된 EDTA의 실제값
EDTA의 농도 mg/mL 열처리된 디암모늄 EDTA 열처리된 디포타슘 EDTA 열처리된 마그네슘 EDTA
0 0 0 0
40 39 38 > 140
80 80 71 > 140
100 150 > 140 > 140
위의 결과는 오토클라브 처리가 대부분의 EDTA 염 조성물의 효능을 감소시키지 않았음을 입증해준다. 본 발명의 살균 조성물의 오토클라브 처리는 따라서 제조 후 실시하여 멸균 살균 조성물을 제공하는데 이용될 수 있다.
실시예 10
EDTA 염, 칼슘 클로라이드 및 소듐 시트레이트의 pH 값
여러가지 EDTA 염, 칼슘 클로라이드 및 소듐 시트레이트 용액의 pH 값을, 용매로서 증류수를 이용하여 특정 농도에서 측정하였다. 결과는 다음과 같다.
유리산 EDTA 10% pH 7.4
디암모늄 EDTA 10% pH 4.38
칼슘 소듐 EDTA 10% pH 6.68
디포타슘 EDTA 10% pH 4.5
구리 EDTA 10% pH 6.15
테트라소듐 EDTA 10% pH 11.6
디암모늄 EDTA 2% pH 11
칼슘 클로라이드 중화된 TS EDTA pH 7.3
칼슘 클로라이드, 1 molar pH 3.8
소듐 시트레이트 50%, 25% pH 8.5
실시예 11
EDTA 용액의 항응고 효과의 확인
EDTA 용액의 항응고 특성을 다음 방법론을 이용하여 입증하였다.
방법:
- pH 11.0-11.6으로 조정한 테트라소듐 또는 디소듐 EDTA 용액의 여러 농도 (0.5-100 mg/mL)의 100 ㎕ 분주액 (aliquots)을 플라스틱 뚜껑이 구비된 튜브에 넣었다.
- 건강한 지원자로부터의 신선한 혈액 900 ㎕를 EDTA 용액의 각 분주액에 첨가하고 일정 간격으로 혈액 튜브를 뒤집으면서 가볍게 혼합하였다.
그 결과 EDTA 용액이 없이 혈액을 함유하는 대조군 튜브는 응혈 시간이 10-23분인 것으로 나타났다. 디소듐 EDTA 용액을 함유하는 튜브들은 응혈 시간이 모두 5일이 넘었다. 1 mg/mL를 초과하는 농도로 테트라소듐 EDTA를 함유하는 튜브는 응혈 시간이 5일이 넘었다. 0.5 mg/mL의 농도로 테트라소듐 EDTA를 함유하는 튜브는 응혈 시간이 28분이었다. 따라서 테트라소듐 EDTA는 1 mg/ml (1% w/v)를 초과하는 농도에서 항응고 효과가 있다.
실시예 12
테트라소듐염 현탁액의 오스몰
물 및 여러 농도의 생리식염수 중의 테트라소듐 EDTA 용액의 적혈구 용해 및 오스몰을 표준 실험 기술을 이용하여 시험하였다. 적혈구 용해는 각 농도의 각 용액 2 ml에 EDTA 혈액 50 ul을 2시간 동안 첨가함으로써 시험하였다. 혈장 오스몰 범위는 279-295 m/오스몰이었다.
오스몰 (m/오스몰) 적혈구 용해
증류수 중 2% 테트라소듐 EDTA 142 ++
증류수 중 4% 테트라소듐 EDTA 277 +
생리식염수 중 2% 테트라소듐 EDTA 219 +/-
생리식염수 중 4% 테트라소듐 EDTA 588 -
실시예 13
인공 뇨결정 (AUC: Artificial Urine Crystals)의 용해에 미치는 세가지 EDTA 염의 효과
뇨카테테르와 관련한 한가지 문제점은 카테테르 표면에 뇨결정이 축적하는 경향이 있다는 것이다. 뇨결정의 침착은 미생물 콜로니화 및/또는 생체막 형성을 촉진시킬 수 있을 뿐만 아니라, 카테테르를 통한 흐름을 저하시킬 수도 있다. 따라서 뇨결정 형성을 감소시키는 뇨카테테르와 관련한 위생 조성물을 사용하는 것이 요망되고 있다. 인공 뇨결정의 용해에 미치는 세가지 EDTA 염용액의 효과를 다음의 방법을 이용하여 시험하였다.
재료:
25 ml 플라스틱 범용 컨테이너에 인공뇨와 우레아제를 넣고 45℃에서 7일간 인큐베이션시킨다.
- 디암모늄, 디포타슘 및 테트라소듐 EDTA 용액을 100 mg/ml 농도로 이용한다.
방법:
- 4000 rpm에서 2분간 인공뇨 결정을 원심분리한다.
- 상등액을 따라내고 물로 결정을 세척한 다음 원심분리한다.
- 결정을 물 1 ml에 재현탁하고 200 ul의 분주액을 4개의 범용 컨테이너에 붓는다.
- 100 mg/ml의 각각의 EDTA염 4 ml씩과 대조군으로서 물을 각각의 범용 컨테이너에 실온에서 첨가한다.
- 1시간, 2시간 및 3시간 후 대조군과 결정의 용해를 육안으로 비교 관찰한다.
결과를 다음에 나타내었다. 모든 EDTA 염 용액들은 수용액에 비해, 뇨결정 침착을 감소시켰다. EDTA 염 용액은 따라서 뇨카테테르에 사용하는데 적합하다.
용액 결정 침착
물 + AUC +++++
테트라소듐 EDTA + AUC ++
디암모늄 EDTA + AUC +
디포타슘 EDTA + AUC +/-
특허 문헌과 비특허 공개문헌을 비롯하여, 본 발명에서 인용된 모든 참조문헌들은 그 전체로서 본 발명에 통합된다.
전술한 설명을 통해, 본 발명을 특정의 바람직한 구체예에 대해 설명하고, 구체적인 설명을 위해 특정 상세를 제시하였지만, 당업자라면 본 발명은 부가적인 구체예로도 실시할 수 있음과 전술한 특정 설명 내용은 본 발명의 기본적인 정신에서 벗어남이 없이 변형 가능함을 이해할 것이다.

Claims (39)

  1. 한 가지 이상의 에틸렌 디아민 테트라아세트산 (EDTA) 염을 0.01% w/v 이상의 농도로 함유하고, 한 가지 이상의 용매를 함유하는 살균 용액으로서, 상기 용액은 pH가 8.0 이상이고, 광범위한 스펙트럼의 박테리아에 대하여 살균 활성을 갖는 것인, 살균 용액.
  2. 제1항에 있어서, 상기 용액은 pH가 8.5 내지 12.5인 용액.
  3. 제2항에 있어서, 상기 용액은 pH가 9.5 내지 11.5인 용액.
  4. 제3항에 있어서, 상기 용액은 pH가 10.5 내지 11.5인 용액.
  5. 제1항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 디소듐 EDTA, 트리소듐 EDTA, 테트라소듐 EDTA, 암모늄 EDTA, 디암모늄 EDTA, 포타슘 EDTA, 디포타슘 EDTA, 구리 디소듐 EDTA, 마그네슘 디소듐 EDTA, 철 소듐 EDTA, 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액.
  6. 제5항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 트리소듐 EDTA, 테트라소듐 EDTA, 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액.
  7. 제1항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염 농도가 0.2% (w/v) 내지 10.0% (w/v)인 용액.
  8. 제7항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염 농도가 0.2% (w/v) 내지 6.0% (w/v)인 용액.
  9. 제8항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염 농도가 0.2% (w/v) 내지 4.0% (w/v)인 용액.
  10. 제1항에 있어서, 상기 용매는 물, 식염수, 알코올 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액.
  11. 제10항에 있어서, 상기 용매는 물과 에탄올의 혼합물인 용액.
  12. 제11항에 있어서, 상기 용액은 에탄올을 0.1% 내지 10% (v/v)의 양으로 함유하는 것인 용액.
  13. 제1항에 있어서, 상기 용액은 플랑크톤 형태 및 고착 형태의 박테리아에 대하여 살균 활성을 갖는 것인 용액.
  14. 제1항에 있어서, 상기 용액은 다음으로 이루어진 군 중에서 선택된 한 가지 이상의 특성을 갖는 것인 용액:
    (a) 항응고 활성;
    (b) 진균 병원체에 대한 살진균 활성;
    (c) 원생동물 감염에 대한 억제 활성;
    (d) 아메바 감염에 대한 억제 활성;
    (e) 환자에 접촉시 적절한 부피 이상에서의 안전성 및 생체 적합성;
    (d) 환자의 혈류내의 적절한 부피 이상에서의 안전성 및 생체 적합성; 및
    (e) 공업적 물건 및 표면에 대한 친화성 및 안전성.
  15. 제1항에 있어서, 상기 용액은 멸균되고 발열원이 없는 것인 용액.
  16. 제1항에 따른 살균 용액의 건조 형태로서, 용매를 사용하여 재구성시 제1항의 용액을 형성하는 것을 특징으로 하는 건조 형태.
  17. 제1항에 따른 살균 용액의 제제로서, 표면 및 물건에 국부 적용하기에 적합한 것을 특징으로 하는 제제.
  18. 제1항에 따른 용액의 지속적 방출(time release) 제제로서, 연장된 기간동안 살균 활성을 제공하는 것을 특징으로 하는 제제.
  19. 용매와 0. 01% 내지 15% (w/v) 농도의 한 가지 이상의 소듐 EDTA 염을 함유하는 살균 용액으로서, 상기 용액은 pH가 9.0 이상이고, 광범위한 스펙트럼의 박테리아에 대하여 살균 활성을 갖는 것인, 살균 용액.
  20. 제15항에 있어서, 상기 용매는 물, 식염수, 알코올 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액.
  21. 농도 0.01% (w/v) 이상의 한 가지 이상의 에틸렌 디아민 테트라아세트산 (EDTA) 염 및 한 가지 이상의 용매로 필수적으로 구성된 살균 용액으로서, 상기 용액은 pH가 8.0 이상이고 넓은 스펙트럼의 박테리아에 대한 살균 활성을 갖는 것인, 살균 용액.
  22. 제20항에 있어서, 상기 용액은 pH가 8.5 내지 12.5인 용액.
  23. 제20항에 있어서, 상기 용액은 pH가 9.5 내지 11.5인 용액.
  24. 제20항에 있어서, 상기 용액은 pH가 10.5 내지 11.5인 용액.
  25. 제20항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 디소듐 EDTA, 트리소듐 EDTA, 테트라소듐 EDTA, 암모늄 EDTA, 디암모늄 EDTA, 포타슘 EDTA, 디포타슘 EDTA, 구리 디소듐 EDTA, 마그네슘 디소듐 EDTA, 철 소듐 EDTA, 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액.
  26. 제24항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 트리소듐 EDTA, 테트라소듐 EDTA, 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액
  27. 제20항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 농도가 0.02% (w/v) 내지 10.0% (w/v)인 것인 용액.
  28. 제26항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 농도가 0.02% (w/v) 내지 6.0% (w/v)인 것인 용액.
  29. 제27항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 EDTA 염은 농도가 0.02% (w/v) 내지 4.0% (w/v)인 것인 용액.
  30. 제20항에 있어서, 상기 용매는 물, 식염수, 알코올 및 이들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 용액.
  31. 제29항에 있어서, 상기 용매는 물과 에탄올의 혼합물인 용액.
  32. 제29항에 있어서, 상기 용액은 에탄올을 0.1 % 내지 10% (v/v)의 양으로 함유하는 것인 용액.
  33. 제20항에 있어서, 상기 용액은 플랑크톤 형태 및 고착 형태의 박테리아에 대하여 살균 활성을 갖는 것인 용액.
  34. 표면 또는 물건 상의 또는 내부에서의 한 가지 이상의 바람직하지 않은 미생물의 성장 및 증식을 억제하는 방법으로서, 상기 표면 또는 물건을 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 따른 용액에 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
  35. 제33항에 있어서, 상기 바람직하지 못한 미생물은 미생물 개체군, 진균 병원체, 원생동물 개체군 및 아메바 개체군으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 방법.
  36. 제34항에 있어서, 상기 바람직하지 못한 미생물은 Acanthamoeba인 방법.
  37. 제33항에 있어서, 상기 표면 또는 물건은 카테테르, 의료용 튜브 및 도관, 혈관내 장치, 이식된 의료용 장치, 의료용 및 수의학용 기구, 콘택트렌즈, 안구 이식물, 치과, 교정 및 치주 장치, 물 저장, 분배 및 처리 설비, 공업 장비, 및 식품 제조 및 가공 장비로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 방법.
  38. 바이오필름을 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 따른 살균 용액과 접촉시키는 것을 포함하는, 바이오필름의 성장 및 증식의 억제 방법.
  39. 상처 치료에 사용하기 위한 피복물로서, 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 따른 살균 용액이 주입되어 있는 것을 특징으로 하는 피복물.
KR1020057023375A 2003-06-04 2004-06-04 살균 조성물, 방법 및 시스템 KR101111453B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US47627403P 2003-06-04 2003-06-04
US60/476,274 2003-06-04
US10/659,413 2003-09-10
US10/659,413 US8541472B2 (en) 2001-12-05 2003-09-10 Antiseptic compositions, methods and systems
PCT/US2004/018009 WO2004108093A2 (en) 2003-06-04 2004-06-04 Antiseptic compositions, methods and systems

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20060064566A true KR20060064566A (ko) 2006-06-13
KR101111453B1 KR101111453B1 (ko) 2013-03-18

Family

ID=33514075

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020057023375A KR101111453B1 (ko) 2003-06-04 2004-06-04 살균 조성물, 방법 및 시스템

Country Status (22)

Country Link
US (7) US8541472B2 (ko)
EP (1) EP1628655B1 (ko)
JP (1) JP5042624B2 (ko)
KR (1) KR101111453B1 (ko)
CN (1) CN1816330B (ko)
AU (1) AU2004245106B2 (ko)
BG (1) BG109402A (ko)
BR (1) BRPI0411016A (ko)
CA (1) CA2550929C (ko)
CO (1) CO5700728A2 (ko)
CR (1) CR8112A (ko)
CZ (1) CZ307010B6 (ko)
DK (1) DK1628655T3 (ko)
EC (1) ECSP056235A (ko)
EG (1) EG25513A (ko)
ES (1) ES2565511T3 (ko)
HK (1) HK1094320A1 (ko)
HU (1) HUP0600027A3 (ko)
NO (1) NO20055722L (ko)
NZ (1) NZ544801A (ko)
PL (2) PL1628655T3 (ko)
WO (1) WO2004108093A2 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220053154A (ko) * 2020-10-22 2022-04-29 농업회사법인 휴림황칠(주) 무알콜 항균 황칠 살균제

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8541472B2 (en) * 2001-12-05 2013-09-24 Aseptica, Inc. Antiseptic compositions, methods and systems
US8100872B2 (en) 2002-10-23 2012-01-24 Tyco Healthcare Group Lp Medical dressing containing antimicrobial agent
US20070237812A1 (en) * 2006-04-11 2007-10-11 Tyco Healthcare Group Multi-layer wound dressings
ATE429209T1 (de) * 2005-02-09 2009-05-15 Safilens S R L Kontaktlinse, verfahren zu ihrer herstellung und packung zur aufbewahrung und pflege einer kontaktlinse
JP2007091666A (ja) * 2005-09-29 2007-04-12 Daikin Ind Ltd スライム抑制方法、ドレンアップ装置、空気調和機、水路及びスライム剥離剤
JP5138880B2 (ja) * 2005-09-30 2013-02-06 持田製薬株式会社 美白用組成物
GB0525504D0 (en) 2005-12-14 2006-01-25 Bristol Myers Squibb Co Antimicrobial composition
DK2254591T3 (da) * 2008-02-08 2017-11-06 Prothera Inc Inhibering eller behandling af gastrointestinal biofilm
GB2459126A (en) * 2008-04-10 2009-10-14 Peter Wilson Antimicrobial agent
US20100256576A1 (en) * 2009-04-07 2010-10-07 Tyco Healthcare Group Lp Disinfectant Compositions, Methods and Systems
US9248093B2 (en) 2009-06-11 2016-02-02 Becton, Dickinson And Company Catheter locking solution having antimicrobial and anticoagulation properties
US8778387B2 (en) * 2009-09-02 2014-07-15 Hyprotek, Inc. Antimicrobial medical dressings and protecting wounds and catheter sites
EP2525803B1 (en) 2010-01-22 2017-04-26 Hyprotek, Inc. Antimicrobial agentcomprising peroxide, alcohol and chelating agent
CN102834124A (zh) * 2010-01-28 2012-12-19 哈佛大学校长及研究员协会 防止微生物附着的结构
GB201020236D0 (en) 2010-11-30 2011-01-12 Convatec Technologies Inc A composition for detecting biofilms on viable tissues
US10617472B2 (en) 2012-02-06 2020-04-14 Hyprotek, Inc. Adhesive patch with antimicrobial composition
US20130302381A1 (en) * 2012-05-09 2013-11-14 Cook Medical Technologies Llc Implantable Medical Devices Including a Water-Insoluble Therapeutic Agent
GB201211702D0 (en) 2012-07-02 2012-08-15 Reckitt Benckiser Llc Sprayable aqueous alcoholic microbicidal compostions comprising zinc ions
GB201211688D0 (en) 2012-07-02 2012-08-15 Reckitt Benckiser Llc Aqueous alcoholic microbicidal compositions comprising zinc ions
GB201211691D0 (en) 2012-07-05 2012-08-15 Reckitt Benckiser Llc Sprayable aqueous alcoholic microbicidal compositions comprising zinc ions
GB201211701D0 (en) 2012-07-02 2012-08-15 Reckitt Benckiser Llc Aqueous alcoholic microbicidal compositions comprising zinc ions
US9707162B2 (en) 2012-11-30 2017-07-18 Reckitt & Colman (Overseas) Limited Microbicidal personal care compositions comprising metal ions
CA2895896A1 (en) 2012-12-20 2014-06-26 Convatec Technologies Inc. Processing of chemically modified cellulosic fibres
ES2951464T3 (es) * 2012-12-20 2023-10-23 Rajiv Bhushan Composiciones antimicrobianas
US20140309553A1 (en) * 2013-04-11 2014-10-16 Rarecyte, Inc. Kits and methods for separating a target analyte from a suspension
AU2014321319B2 (en) 2013-09-19 2019-12-19 The Gilla Company, Inc. Antimicrobial compositions
US9622483B2 (en) 2014-02-19 2017-04-18 Corning Incorporated Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same
US11039621B2 (en) 2014-02-19 2021-06-22 Corning Incorporated Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same
US11039620B2 (en) 2014-02-19 2021-06-22 Corning Incorporated Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same
DK3160234T3 (da) * 2014-06-27 2021-11-08 Kane Biotech Inc Sammensætning til anvendelse til forebyggelse og behandling af oftalmisk-, hånd- eller fodbiofilmvækst
GB201511058D0 (en) * 2015-06-23 2015-08-05 Lamellar Biomedical Ltd Compositions and methods for using lamellar bodies for therapeutic purposes
JP6820921B2 (ja) * 2015-11-05 2021-01-27 ボード オブ リージェンツ, ザ ユニバーシティ オブ テキサス システムBoard Of Regents, The University Of Texas System 安定性を増強させた抗菌溶液
ES2936820T3 (es) * 2016-02-12 2023-03-22 Medical Components Inc Solución de bloqueo de catéter y terapia de bloqueo de catéter
US20190021321A1 (en) 2016-03-07 2019-01-24 Dinesh AGGARWAL Broad spectrum antimicrobial & anticoagulant composition
GB201607814D0 (en) 2016-05-04 2016-06-15 5D Health Prot Group Ltd Anti-microbial compositions
WO2018057861A1 (en) * 2016-09-23 2018-03-29 Skirdle, Llc Disinfecting compositions having improved antimicrobial efficacy
CN110727086A (zh) * 2016-12-30 2020-01-24 玉晶光电(厦门)有限公司 光学成像镜头
KR102086135B1 (ko) 2017-05-29 2020-03-06 김민준 천연 가습기 살균 조성물 및 그의 제조방법
JP2019034921A (ja) * 2017-08-15 2019-03-07 基嗣 田島 殺菌・抗菌用組成物
JP7217054B2 (ja) * 2017-08-15 2023-02-02 基嗣 田島 殺菌・抗菌用組成物
US11045589B2 (en) 2017-09-22 2021-06-29 Becton, Dickinson And Company 4% trisodium citrate solution for use as a catheter lock solution
CN108210514A (zh) * 2018-02-26 2018-06-29 上海市第六人民医院 伤口冲洗液
CN109106975B (zh) * 2018-07-23 2020-05-19 西安交通大学 一种具有智能抗菌和长效生物分子释放功能的快速自修复凝胶的制备方法和应用
CN110402928A (zh) * 2019-08-08 2019-11-05 杭州博菲医疗器械有限公司 一种抑菌功能液及应用该抑菌功能液的导管组件
WO2021188827A1 (en) * 2020-03-18 2021-09-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Devices and methods for treating a fistula
EP4153494A1 (en) * 2020-05-21 2023-03-29 Coherus Biosciences, Inc. Systems and methods for producing sterile injection devices
AU2023225210A1 (en) * 2022-02-22 2024-08-15 Sterilecare Inc. Antimicrobial solutions comprising tetrasodium edta, ethanol, and chlorhexidine and disinfecting wipes comprising said solutions

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2474412A (en) 1947-09-16 1949-06-28 Frederick C Bersworth Soapless-germicidally active detergent
GB1279148A (en) * 1968-09-30 1972-06-28 Dow Chemical Co Cleaning composition
US3962109A (en) * 1974-12-16 1976-06-08 Nalco Chemical Company Automotive cleaner plus inhibitor
US4258056A (en) * 1978-12-18 1981-03-24 Economics Laboratory, Inc. Control of mastitis and compositions therefor
US4307109A (en) * 1980-05-08 1981-12-22 Abbott Laboratories Biocidal chelate
US4455250A (en) * 1981-01-12 1984-06-19 American Cyanamid Company Stable liquid hard surface cleanser composition containing DGH and a quaternary germicide
GB8420329D0 (en) 1984-08-10 1984-09-12 Procter & Gamble Liquid cleaner
JPS62153952A (ja) 1985-12-27 1987-07-08 Fuji Photo Film Co Ltd 黒白ハロゲン化銀写真材料の現像処理方法
US4847004A (en) * 1986-11-26 1989-07-11 Mcleod Harry L Aqueous cleaning solution containing chelating agents and surfactants
HU201247B (en) 1988-03-23 1990-10-28 Imre Bardossy Composition containing stqbilized hydrogen peroxide for cleaning, blood removing and disinfecting surgical instruments and devices
US5180749A (en) * 1989-08-22 1993-01-19 Sterling Winthrop, Inc. Antimicrobial composition
US5300296A (en) * 1989-11-06 1994-04-05 Frank J. Holly Antimicrobial agent for opthalmic formulations
US6197738B1 (en) * 1990-08-02 2001-03-06 Robert R. Regutti Nontoxic sanitizing cleanser based on organic acids and methods of using same
DE4028957C2 (de) 1990-09-12 1994-05-11 Oliver Bock Therapeutikum für den Mundbereich
JPH03135518A (ja) 1990-09-17 1991-06-10 Santen Aragan Kk ソフトコンタクトレンズ保存液調製用製剤
US5688516A (en) * 1992-11-12 1997-11-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Non-glycopeptide antimicrobial agents in combination with an anticoagulant, an antithrombotic or a chelating agent, and their uses in, for example, the preparation of medical devices
US5362754A (en) * 1992-11-12 1994-11-08 Univ. Of Tx Md Anderson Cancer Center M-EDTA pharmaceutical preparations and uses thereof
GB9405593D0 (en) 1994-03-22 1994-05-11 Zeneca Ltd Pharmaceutical compositions
US5731356A (en) * 1994-03-22 1998-03-24 Zeneca Limited Pharmaceutical compositions of propofol and edetate
AU703926B2 (en) * 1994-03-28 1999-04-01 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Composition for inactivating irritants in fluids
GB2292888A (en) 1994-09-02 1996-03-13 Bruce Philip Green Wide spectrum water soluble biocide for medical instruments based on potassium monoperoxysulphate, malic & sulphamic acids, EDTA sodium salt & a glycol ether
US5820607A (en) 1995-06-05 1998-10-13 Board Of Regents, University Of Texas Systems Multipurpose anti-microbial silastic sheath system for the prevention of device-related infections
US5910420A (en) * 1996-08-16 1999-06-08 Orion-Yhtyma Oy Orion Diagnostica Method and test kit for pretreatment of object surfaces
FI964147A (fi) 1996-10-15 1998-04-16 Upm Kymmene Oy Puun suojaaminen hyönteistuhoilta
US5877243A (en) 1997-05-05 1999-03-02 Icet, Inc. Encrustation and bacterial resistant coatings for medical applications
US6165484A (en) * 1997-08-26 2000-12-26 Wake Forest University EDTA and other chelators with or without antifungal antimicrobial agents for the prevention and treatment of fungal infections
WO1999010017A1 (en) 1997-08-26 1999-03-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Chelators in combination with biocides: treatment of microbially induced biofilm and corrosion
US6004539A (en) * 1997-09-18 1999-12-21 Longo, Jr.; James Joseph Antimicrobial polishing compound
JPH11137649A (ja) * 1997-11-10 1999-05-25 Tomey Technology Kk コンタクトレンズの洗浄消毒方法
FR2780283A1 (fr) 1998-06-30 1999-12-31 Rocher Yves Biolog Vegetale Composition cosmetique aqueuse sans conservateur contenant un compose diol en c3-c4 en association avec un agent sequestrant
US6166007A (en) * 1998-07-02 2000-12-26 Sodemann; Klaus Antimicrobial locks comprising taurinamide derivatives and carboxylic acids and/or salts thereof
US6323153B1 (en) 1998-07-15 2001-11-27 Falcon Lab Llc Method for the control of vegetation using herbicidal composition containing carboxylic or phoshonic acid salt
AU5804399A (en) * 1998-09-04 2000-03-27 Fahim Y. Ahmed Antimicrobial composition for handwash and a method of cleaning skin using the same
JP2002529545A (ja) * 1998-11-06 2002-09-10 ユニベルシテ ドゥ モントリオール バイオフィルムを除去するための改良型の殺菌性及び非殺菌性溶液
EP1128734A1 (en) 1998-11-19 2001-09-05 The Procter & Gamble Company Microorganism reduction methods and compositions for food
US6187768B1 (en) * 1999-06-01 2001-02-13 Becton, Dickinson And Company Kit for flushing medical devices and method of preparation
US6592564B2 (en) * 1999-07-23 2003-07-15 Vasca, Inc. Methods and kits for locking and disinfecting implanted catheters
US6685694B2 (en) 1999-07-23 2004-02-03 Vasca, Inc. Methods and kits for locking and disinfecting implanted catheters
US6679870B1 (en) * 1999-07-23 2004-01-20 Vasca, Inc. Methods and kits for locking and disinfecting implanted catheters
GB9927614D0 (en) * 1999-11-24 2000-01-19 Tecmark Limited Sterliant formulation
JP2001161811A (ja) * 1999-12-13 2001-06-19 Aisei:Kk 人工透析装置用洗浄剤
US6350251B1 (en) * 2000-01-18 2002-02-26 Biolink Corporation Biocidal locks
JP2003520809A (ja) * 2000-01-20 2003-07-08 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 抗細菌性組成物
US20020018732A1 (en) * 2000-04-21 2002-02-14 Hung William M. Preserving compositions containing chitosan and processes for making water soluble O-acetylated chitosan and chitosan
US6500861B1 (en) * 2000-08-23 2002-12-31 Michael D. Wider Antimicrobial composition and methods of use in the treatment of disease
JP5258139B2 (ja) 2000-11-08 2013-08-07 エフエックスエス・ベンチャーズ・エルエルシー ビタミンｂの形態を含有する改良した眼科用およびコンタクトレンズ用溶液
JP3680081B2 (ja) * 2000-11-16 2005-08-10 独立行政法人農業生物資源研究所 キレート剤を含むヘリコバクター・ピロリ菌用抗菌剤
US6583181B1 (en) 2000-11-22 2003-06-24 Lonza Inc. Antimicrobial quaternary ammonium compositions with reduced ocular irritation
US6821943B2 (en) 2001-03-13 2004-11-23 S. C. Johnson & Son, Inc. Hard surface antimicrobial cleaner with residual antimicrobial effect comprising an organosilane
JP2002360689A (ja) * 2001-06-13 2002-12-17 Clean Chemical Kk 人工透析装置の洗浄方法
JP4165754B2 (ja) * 2001-12-05 2008-10-15 タイコ・ヘルスケアー・グループ・エルピー 抗菌性システムおよび方法
US8541472B2 (en) * 2001-12-05 2013-09-24 Aseptica, Inc. Antiseptic compositions, methods and systems
US6887270B2 (en) * 2002-02-08 2005-05-03 Boston Scientific Scimed, Inc. Implantable or insertable medical device resistant to microbial growth and biofilm formation
AU2003225073A1 (en) 2002-04-18 2003-11-03 The University Of Iowa Research Foundation Methods of inhibiting and treating bacterial biofilms by metal chelators
US20060088574A1 (en) * 2004-10-25 2006-04-27 Manning Paul B Nutritional supplements
WO2008054192A1 (en) * 2006-11-02 2008-05-08 N.V. Nutricia Use of nutritional compositions for preventing disorders

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220053154A (ko) * 2020-10-22 2022-04-29 농업회사법인 휴림황칠(주) 무알콜 항균 황칠 살균제

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0600027A3 (en) 2008-01-28
US20040110841A1 (en) 2004-06-10
EG25513A (en) 2012-01-30
US10264786B2 (en) 2019-04-23
US20140194518A1 (en) 2014-07-10
US8911665B2 (en) 2014-12-16
BG109402A (bg) 2006-10-31
CZ307010B6 (cs) 2017-11-08
ES2565511T3 (es) 2016-04-05
US20160316747A1 (en) 2016-11-03
PL379212A1 (pl) 2006-08-07
NZ544801A (en) 2009-06-26
JP5042624B2 (ja) 2012-10-03
CR8112A (es) 2006-07-27
HUP0600027A2 (en) 2007-11-28
WO2004108093A3 (en) 2005-08-04
HK1094320A1 (en) 2007-03-30
CA2550929A1 (en) 2004-12-16
US20160030614A1 (en) 2016-02-04
AU2004245106A1 (en) 2004-12-16
ECSP056235A (es) 2006-10-10
DK1628655T3 (en) 2016-03-29
US8703053B2 (en) 2014-04-22
US8541472B2 (en) 2013-09-24
NO20055722L (no) 2006-03-06
BRPI0411016A (pt) 2006-07-04
CN1816330A (zh) 2006-08-09
US20140024719A1 (en) 2014-01-23
CO5700728A2 (es) 2006-11-30
US8828317B2 (en) 2014-09-09
NO20055722D0 (no) 2005-12-02
JP2006526664A (ja) 2006-11-24
US9155720B2 (en) 2015-10-13
US20150105465A1 (en) 2015-04-16
CZ2005820A3 (cs) 2007-01-31
WO2004108093A2 (en) 2004-12-16
KR101111453B1 (ko) 2013-03-18
CA2550929C (en) 2014-01-14
US9408933B2 (en) 2016-08-09
PL1628655T3 (pl) 2016-07-29
CN1816330B (zh) 2010-09-15
AU2004245106B2 (en) 2009-05-07
EP1628655A2 (en) 2006-03-01
EP1628655B1 (en) 2016-01-06
US20140194519A1 (en) 2014-07-10
EP1628655A4 (en) 2008-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101111453B1 (ko) 살균 조성물, 방법 및 시스템
JP4950131B2 (ja) 抗菌性システムおよび方法
JP5351174B2 (ja) 消毒剤組成物、方法およびシステム
JP2011509927A (ja) 消毒剤組成物、方法およびシステム
KR20220027799A (ko) 항미생물제 내성의 유도 없이 생물막을 치료하기 위한 조성물
MXPA05013038A (en) Antiseptic compositions, methods and systems

Legal Events

Date Code Title Description
N231 Notification of change of applicant
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160203

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170118

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180321

Year of fee payment: 7

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190111

Year of fee payment: 8

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20200121

Year of fee payment: 9